TW202038981A

TW202038981A - 治療失智症的組合物及方法

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Publication number: TW202038981A
Application number: TW108143478A
Authority: TW
Inventors: 郁彬吳; 羅吉孟; 梁惠如; 林佩欣; 蔡惠珍
Original assignee: 薩摩亞商吉亞生技控股股份有限公司
Priority date: 2018-11-28
Filing date: 2019-11-28
Publication date: 2020-11-01
Also published as: EP3886862A4; CN113453689A; EP3886862A1; AU2019387473A1; US20200164010A1; JP2022511785A; WO2020113146A1

Abstract

本發明提供一種以一樟芝子實體的萃取物或其活性成分治療失智症，特別是阿茲海默症，之方法。並提供該樟芝萃取物或其活性成分在製備用於治療失智症，特別是阿茲海默症的藥物中之用途。

Description

治療失智症的組合物及方法

本申請案係依據35 U.S.C. §119，主張於2018年11月28日提申之美國暫時專利申請號62/722,211的權益，其揭示內容在此併入本案以作為參考資料。

本發明涉及治療失智症的方法。

阿茲海默症（Alzheimer’s disease，AD）的特徵是漸進的認知能力下降、神經纖維纏結、類澱粉蛋白斑塊、神經發炎，以及成人神經生成能力下降(1-3)。類澱粉蛋白β （Amyloid β，Aβ）是由類澱粉蛋白前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）加工形成的胜肽，被認為是阿茲海默症（AD）病理學的主要起始因子之一。類澱粉蛋白假說認為阿茲海默症（AD）是由於Aβ的產生及清除之間的不平衡所引起的(1)，導致中樞神經系統（Central Nervous System，CNS）中單體、寡聚以及不溶性原纖維形式的Aβ數量增加，隨後誘導Aβ斑塊形成、神經發炎，以及氧化壓力(4)。

越來越多的證據顯示，成人海馬迴神經生成在認知功能中扮演主要的角色(5)。已發現類澱粉蛋白前體蛋白（APP）代謝產物，包括寡聚Aβ、可溶性APPα （sAPP）α以及APP細胞內結構域（APP intracellular domain，AICD），可調節影響成人海馬迴神經生成的人類神經幹細胞的特性(6,7)。另一方面，活化的神經膠質細胞產生的促發炎細胞激素如IL-1β、TNF-γ，以及IL-6也可能調節成人海馬迴神經生成的過程(8-10)。

APPswe/PS1dE9小鼠模型（APP/PS1），共表現瑞典突變的人類APP695以及人類突變的早老素1（presenilin 1，PS1），其中外顯子9被刪除(11)，表現出類似阿茲海默症（AD）的病理與行為變化，包括在腦中累積的類澱粉蛋白斑塊、膽鹼系統退化，以及探索行為與空間記憶受損(12)。早在3到5個月大時，APP/PS1小鼠中的Aβ產生及斑塊形成就增加了(13)，在6個月大時觀察到空間學習與記憶力的下降(14-15)。此外，在3至6個月大的APP/PS1小鼠中也發現神經生成受損(16)。

仍需要開發無副作用且低毒性的用於治療阿茲海默症（AD）的藥物。

本發明之一目的為提供一種治療失智症的方法，該方法包含對一有此需要的個體投予一樟芝子實體的萃取物作為一活性成分。

於另一目的中，本發明提供一種一樟芝子實體萃取物用於製備治療失智症之藥物的用途。

具體而言，該樟芝子實體的萃取物為皿培式的樟芝子實體的萃取物，以下稱為ARH003，或椴木培養的樟芝子實體的萃取物，以下稱為ARH004。

於本發明之一實施例中，該樟芝子實體的萃取物係透過以水或一有機溶劑萃取樟芝子實體所製備。

於本發明之一特定實施例中，該樟芝子實體的萃取物包含一或多種化合物作為活性成分，其係選自由下列所組成之群組：

(I)，

(II)，其中R₁ 為O、α-OH，或β-H；R₂ 為H或OH；R₃ 為O、α-H、β-OAc或H₂ ；R₄ 為H或OH；R₅ 為H或OH；R₆ 為COOH或COO(CH₂ )n-CH₃ ；n為一0至3的整數；R₇ 為H、OH或OAc；R₈ 為CH₃ 或COOH；虛線表示一單鍵或一雙鍵。

於本發明的某些特定實施例中，該化合物係選自由下列所組成之群組：具有以下結構之去氫齒孔酸（dehydroeburicoic acid）：

；具有以下結構之去氫硫色多孔菌酸［dehydrosulphurenic acid，亦稱為去氫磺尿酸（dehydrosulfurenic acid）］：

；具有以下結構之15α-乙醯去氫硫色多孔菌酸（15α-acetyldehydrosulphurenic acid）：

；以及具有以下結構之樟芝酸K （antcin K）：

。

另一方面，本發明提供一種治療失智症的方法，該方法包含對一有此需要的個體投予一或多種上述活性化合物。

本發明亦提供上述化合物用於製備治療失智症之藥物的用途。

於本發明之一具體實施例中，該失智症為阿茲海默症（AD）。

於另一方面，本發明提供一種抑制Aβ斑塊形成以及神經膠質細胞活化的方法，該方法包含對一有此需要的個體投予上述樟芝子實體的萃取物。

另外，本發明提供一種樟芝子實體萃取物用於製備抑制Aβ斑塊形成以及神經膠質細胞活化之藥物的用途。

於另一方面，本發明提供一種抑制Aβ斑塊形成以及神經膠質細胞活化的方法，該方法包含對一有此需要的個體投予一或多種上述化合物。

另外，本發明提供一種上述化合物在製備用於抑制Aβ斑塊形成以及神經膠質細胞活化的藥物中之用途。

於另一方面，本發明提供一種用於改善記憶力的方法，包含對一有此需要的個體投予該樟芝子實體的萃取物。

另外，本發明提供一種上述化合物用於製備改善記憶力之藥物的用途。

於本發明中，根據本發明之萃取物或化合物提供治療失智症、改善記憶力缺損，及/或改善記憶力的功效。

應當理解的是，以上之一般描述與以下之詳細描述皆僅為示例性及說明性的，並非限制本發明。

除非另有定義，否則本文使用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員通常理解的相同含義。

本發明提供一種治療失智症的方法，包含對一有此需要的個體投予一樟芝子實體的萃取物作為一活性成分。

樟芝（Antrodia camphorate ，AC）在台灣被稱為「牛樟芝」或「牛樟菇」，為一種台灣特有的菇類(17)。樟芝（AC）早在1773年之前就已廣泛用於民俗醫學，治療肌腱及肌肉扭曲、驚恐的精神狀態、流感以及感冒、頭痛、發燒，以及許多內在相關的疾病(18)。已發現樟芝（AC）的不同萃取物及化合物具有多種生物學活性，包括保護神經(19, 20)、保護肝臟、抗高血壓、抗高血脂、抗遺傳毒性、抗血管生成、抗微生物、抗癌、抗發炎、抗氧化、抗病毒，以及免疫調節活性(21、22)。

具體而言，樟芝子實體的萃取物為皿培式的樟芝子實體的萃取物（ARH003）或椴木培養的樟芝子實體的萃取物（ARH004）。

於本發明中，該組合物被證明對治療失智症特別是阿茲海默症（AD）有效。

因此，本發明提供一種該萃取物用於製備治療失智症，特別是阿茲海默症（AD）之藥物的用途，特別是皿培式的樟芝子實體的萃取物，亦即ARH003，及/或ARH004。

於本發明中，該萃取物ARH003/ARH004包含一或多種化合物作為活性成分，該化合物係選自由下列所組成之群組：

（去氫松二酸，dehydrotumolosaeure），

（去氫土莫酸，dehydrotumulosic acid），

（3-表-去氫土莫酸，3-epi-dehydrotumulosic acid），

（去氫硫色多孔菌酸，dehydrosulphurenic acid），

（去氫松二酸-甲酯，dehydrotumolosaeure-methylester），

［(20ξ)-3β,15α,16α-三羥基-24-甲基羊毛脂-7,9(11),24(241)-三烯-21-油酸；15α-羥基去氫土莫酸，(20ξ)-3β,15α,16α-trihydroxy-24-methyllanosta-7,9(11),24(241)-trien-21-oic acid; 15α-hydroxydehydrotumulosic acid］，

［甲基25-羥基-3-表去氫土莫鹽（甲基），methyl 25-hydroxy-3-epidehydrotumulosate(methyl）］，

（去氫茯苓酸，dehydropachymic acid），

（15α-乙醯去氫磺尿酸，15α-acetyldehydrosulfurenic acid），

（15α-乙醯去氫硫色多孔菌酸，15α-acetyldehydrosulphurenic acid），

［(29-羥基去氫茯苓酸；(3β,16β)-3-(乙醯氧基)-16,29-二羥基-24-甲基亞胺基-7,9(11)-二烯-21-油酸，29-hydroxydehydropachymic acid；(3β,16β)-3-(acetyloxy)-16,29-dihydroxy-24-methylidenelanosta-7,9(11)-dien-21-oic acid］，以及

（去氫齒孔酸，dehydroeburicoic acid），

（樟芝酸A，antcin A），

（樟芝酸B，antcin B），

（樟芝酸C，antcin C），

（樟芝酸H，antcin H），

（樟芝酸K，antcin K），以及

（4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯並二噁唑，4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole）。

於本發明之較佳具體實施例中，該活性化合物為：具有以下結構之去氫齒孔酸：

；具有以下結構之去氫硫色多孔菌酸（亦稱為去氫磺尿酸）

；具有以下結構之15α-乙醯去氫硫色多孔菌酸

；或具有以下結構之樟芝酸K

。

據此，本發明提供一種治療失智症的方法，該方法包含對一有此需要的個體投予一有效量的上述活性化合物。

如本文所用，「治療有效量」乙詞係指，相較於沒有接受該量的相應個體，在治療、治癒、預防或改善一疾病、障礙，或副作用，或降低一疾病或障礙的進展速度方面有作用的一藥劑的量。該術語在其範圍內還包括有效增強正常生理功能的量。

為了用於治療，將該治療有效量的該化合物配製為用於投予的一醫藥組合物。因此，本發明進一步提供一醫藥組合物，其包含一治療有效量的ARH003及/或ARH004以及一或多種醫藥上可接受的載劑。

本文所用之「醫藥上可接受的載劑」乙詞係指與製劑的其他成分相容且對要與醫藥組合物一起投予的個體無害的可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑。根據醫藥製劑的要求，本領域中通常已知或使用的任何載劑、稀釋劑或賦形劑均可用於本發明。根據本發明，該醫藥組合物可適於透過任何適當的途徑投予，包括但不限於口服、直腸、鼻部、局部、陰道，或腸胃外途徑。於本發明之一特定實施例中，將醫藥組合物配製為用於口服投予。這樣的製劑可透過藥學領域中已知的任何方法來製備。

透過以下實施例進一步說明本發明，提供這些實施例係為說明而非限制。

實施例

材料與方法

1. 材料

BrdU、甲酸以及硫黃素S係購自Sigma-Aldrich公司（聖路易斯市，密蘇里州，美國）。一般化學品購自Sigma-Aldrich公司（聖路易斯市，密蘇里州，美國）或Merck公司（達姆施塔特市，德國）。

2. 樟芝子實體之萃取（ARH003與ARH004之製備）

ARH003係自皿培式的樟芝子實體（300 g）中製備，且ARH004係自椴木培養的樟芝（ARH004）製備。將子實體與95%乙醇熱回流。真空濃縮乙醇溶液，得到一褐色萃取物（60 g）。

3. 管理與投予

國家中醫藥研究所的實驗動物照護及使用委員會所核准的動物規程（IACUC編號：106-417-4）。所有涉及動物及其照護的實驗程序均按照美國國家衛生研究院（National Institutes of Health，NIH）出版的「實驗動物之照護及使用指導手冊」進行。APP/PS1購自Jackson實驗室（編號005864）。繁殖性別比為一籠中一隻雄性配有兩隻雌性。使用野生型同窩小鼠以及阿茲海默症（AD）轉基因雌性C57BL/6J小鼠進行實驗。將動物圈養在控制室溫（24 ± 1^o C）與濕度（55-65%），且為12:12小時（07:00-19:00）的日夜週期的環境下。所有動物實驗程序均根據「實驗動物之照護暨使用指導手冊」（NIH出版）進行。APP/PS1購自Jackson實驗室（編號005864）。使用雌性轉基因小鼠以及雄性野生型同窩小鼠進行育種。將動物圈養在溫度（24 ± 1^o C）與濕度(55-65%）的環境下。日夜週期為12:12小時（07:00-19:00）。提供所有小鼠市售的囓齒動物正常飼料及隨意飲水。為了研究治療效果，三個月大的雄性與雌性APP/PS1小鼠均經口管餵飼載劑（雄性與雌性的n值分別為7與8）或ARH003或ARH004（100 mg/kg/天，雄性與雌性的n值分別為7與10）持續4個月。

4. 組織處理

麻醉後的小鼠透過經心鹽水灌注而犧牲。取出小鼠大腦，在4^o C下浸入4%甲醛中整夜，然後冷凍保護。然後將腦組織切成30 μm厚。在每個大腦中，大約橫跨前囪-1.58至-1.82的三個切片用於染色及分析。

5. Amylo-Glo染色

如製造商（Biosensis公司，非百敦，南澳大利亞）所述，使用Amylo-Glo進行原纖維類澱粉蛋白的染色。

6. 免疫組織化學

如先前所述進行免疫組織化學(39)。簡言之，將切片在含1%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、3%正常驢血清，以及0.3% Triton X-100的磷酸鹽緩衝液（phosphate buffered saline，PBS）中阻隔1小時。然後，在含有1% BSA、1%正常驢血清、0.3% Triton X-100，以及一級抗體，包括抗Aβ_1-16 的小鼠單株抗體（AB10，Millipore公司，MAB5208，2757889），以及抗神經膠質纖維酸性蛋白的小鼠單株抗體（glial fibrillary acidic protein，GFAP，Millipore公司，MAB5804，1990686）；以及抗離子鈣結合轉接分子1（ionized calcium-binding adaptor molecule-1，Iba-1）山羊多株抗體（abcam公司，ab5076，GR268568-3）的PBS中於4°C下作用整夜。然後將切片在含有Hoechst33258 （Invitrogen公司，2 μg/ml），異硫氰酸螢光素或若丹明紅X （rhodamine red X，RRX）偶聯的驢抗小鼠IgG、RRX偶聯的驢抗兔IgG，或Alexa Fluor 647偶聯的驢抗山羊IgG（Jackson ImmunoResearch公司，705-605-147）的抗體稀釋緩衝液中，於室溫下作用2小時。以含有0.01% Triton X-100的PBS洗滌後，將切片埋入Aqua Poly/Mount （Polyscience公司，沃靈頓市，賓州，美國），以使用Zeiss LSM 780共聚焦顯微鏡（耶拿市，德國）進行顯微鏡分析。代表性的共聚焦圖像為最大投影的10 μm深度。使用ImageJ軟體進行類澱粉蛋白斑的定量。透過AB10反應性或ThS陽性面積與總面積之比計算類澱粉蛋白斑負荷。

7. 挖掘試驗與築巢試驗

口管餵飼投予70天後，如先前所述(46)對小鼠進行挖掘試驗，並作了些微修改。簡言之，在第70天在小組籠中進行練習，並在第77天及第80天進行兩次單獨測試。將小鼠飼養在鋪有薄墊的新籠子中，然後於次日16:00將裝有230 g飼料顆粒的圓筒放入籠子內。最後，在2小時及隔夜後將圓筒中剩餘的飼料顆粒稱重。在第二次單獨測試中挖掘飼料顆粒的2小時測量顯示為結果。

挖掘試驗後一天，按照先前的描述進行築巢試驗(35)。簡言之，在夜間週期之前的1小時，將兩個小巢（5 g）放入籠中，然後在過夜後測定其築巢得分以及未切碎的小巢重量。使用六等級量表(40)對巢穴結構進行評分。分數0表示小巢未被破壞；1，小巢被破壞，但築巢材料尚未被收集到籠子中的築巢位置；2，平窩；3，杯窩；4，不完整的圓頂，以及5，完整的封閉圓頂。

8. 莫里斯水迷宮試驗

經過90天的處理後，如先前所述(41, 42)進行莫里斯水迷宮（MWM）試驗，並作了些微修改，以評估空間記憶的表現。簡言之，水迷宮裝置由直徑為120 cm，深40 cm的圓形水池組成，並以水（溫度22-24^o C）填至20 cm的高度以覆蓋平台（直徑10 cm）。透過添加無毒白色塗料，將平台浸沒在渾濁水面以下1 cm處。針對描述性數據的收集，將水池劃分為四個相等的象限。使用電腦視訊影像分析系統（Ethovision，Noldus Information Technology公司，美國）以記錄迷宮白色背景中黑老鼠的游泳路徑。

進行空間記憶試驗以研究小鼠的空間記憶表現。將所有小鼠在莫里斯水迷宮（MWM）中訓練6天。該平台始終放置在西南象限的中心。每天以四次試驗訓練每隻小鼠找到該平台，試驗間隔為20分鐘。在每個試驗中，根據半隨機時間表，將小鼠輕輕地放入面向池壁的水中的三個固定位置之一。如果小鼠在60秒內未成功，則協助其到該平台上。每次試驗結束時，無論是否找到平台，皆允許小鼠在平台上停留30秒。在每個試驗都測量找到平台的逃脫時間，且取四個試驗的平均值。

進行空間探針試驗，其中評估記憶的程度(43)。在目標象限中花費的時間表示在訓練期間學習後獲得的記憶程度。在為期6天的獲取訓練之後的隔天，評估90秒探針試驗（一次試驗沒有平台）。將小鼠從起始位置放到池中，該位置與前平台象限相反。記錄90秒內小鼠越過平台先前位置的次數以及在前平台象限中花費的時間。檢視在莫里斯水迷宮（MWM）的探針試驗版本中，在中心區域與外圍區域中花費的時間百分比。外圍區域定義為池壁與距離該池壁10 cm的圓之間的區域。

9. 統計分析

結果表示為平均值 ± 平均值的標準差（standard error of the mean，SEM），並使用GraphPad Prism 5軟體進行統計分析處理。透過不成對的雙尾學生氏t檢定或單因子變異數分析（one-way analysis of variance，ANOVA）以及事後Bonferroni氏的多重比較檢定來分析參數數據。使用Kruskal-Wallis ANOVA以及事後Dunnett氏多重比較檢定分析非參數數據，包括莫里斯水迷宮（MWM）試驗中平台的穿越時間、挖掘試驗中飼料顆粒的數量以及築巢試驗中的築巢得分。

實施例 1

使用 HPLC 色層分析法對 ARH003 與 ARH004 進行分子定性

本研究中使用的樟芝子實體為皿培式的（ARH003），與在肉桂木上培育的樟芝子實體具有很高的植物相似性指數（Chung等人，2016年）。為了證實這種相似性，以HPLC色層分析法比較皿培式的樟芝（ARH003）與椴木培養的樟芝（ARH004）的成分（圖1）。

實施例 2

ARH003 減少了 APP/PS1 小鼠大腦中 Aβ斑塊 負荷

在6個月大的APP/PS1小鼠中可見斑塊是眾所周知的(23)。因此，以3個月大的APP/PS1雄性或雌性小鼠口服載劑或100 mg/kg/天的ARH003，持續4個月，以研究ARH003對Aβ斑塊沉積以及神經膠質細胞活化的影響。在投予ARH003期間檢查了體重變化，且在投予的最後一個月中，ARH003在雄性小鼠中顯著增加了體重，但是在雌性小鼠中則無顯著增加（圖2）。

實施例 3

ARH003 減少了 APP/PS1 小鼠大腦中具有神經膠質簇的斑塊數量。

我們評估了ARH003對具有神經膠質簇的斑塊數量的影響。為了確定APP/PS1轉基因小鼠大腦中具有神經膠質簇的斑塊，分別透過Amylo-glo染色以及Iba-1-與GFAP免疫染色檢查Aβ斑塊、小神經膠質細胞，以及星狀神經膠細胞。我們發現在以ARH003處理後，具有神經膠質簇的斑塊數量減少了（圖3A-3E）。

實施例 4

ARH003 恢復 APP/PS1 小鼠下降的認知能力

挖掘與築巢行為涉及廣泛的大腦區域網絡，以前已被用於評估阿茲海默症（AD）轉基因小鼠的ADL技能。在本研究中，口服投予三個月大的APP/PS1轉基因小鼠ARH003（100 mg/kg/天），持續114天。然後分別在口服後第84天及第86天開始挖掘與築巢的任務（圖4A）。APP/PS1小鼠表現出自發的挖掘行為缺陷，並且透過投予ARH003可明顯恢復。APP/PS1小鼠還表現出築巢行為的缺陷，該築巢行為由築巢得分以及未切碎的小巢所評估。投予ARH003可明顯恢復受損的築巢行為（圖4B）。

在莫里斯水迷宮（MWM）任務中，APP/PS1小鼠在訓練階段表現出更長的逃脫時間以找到隱藏的平台，這表示APP/PS1小鼠在7個月大時表現出空間學習障礙。透過ARH003的治療，這種明顯的缺損得到了顯著的恢復（圖5A-5B）。雙向重複測量ANOVA分析證實了各組之間與找到該平台的逃脫時間訓練天數之間的相互作用。在訓練天數、小組之間，以及個體上皆存在顯著差異。在Bonferroni後測中，在訓練的第3天到第6天，載劑組與ARH003組之間存在顯著差異。

在探針試驗中，APP/PS1小鼠顯示出到目標區域探視的等待時間以及目標區域內的穿越時間的減少（圖6A-6C），而不會影響擺動速度（數據未顯示）。再次地，透過ARH003的治療，該缺損得以顯著恢復。

無

當結合附圖閱讀時，將更好地理解前述發明內容以及以下對本發明之詳細描述。為了說明本發明，於圖式中顯示了目前較佳的具體實施例。

於圖式中：

圖1所示分別為樟芝的皿培式的子實體（ARH003）以及椴木培養的子實體（ARH004）的主要成分的結構之代表性化學指紋圖；其中，將皿培式的子實體（ARH003）或椴木培養的子實體（ARH004）的乙醇（95%）萃取物轉移至HPLC分析中，並在UV 220 nm波長下記錄曲線。ARH003 （上圖）以及ARH004 （下圖）的HPLC層析圖如圖1所示。

圖2所示為具有不同性別及投予方式（載劑或ARH003）的APP/PS1小鼠的體重（g）測量值。APP/PS1雄性（M）或雌性（F）小鼠（3個月大）口服投予載劑（Veh）或100 mg/kg/天 ARH003 （A） 4個月。每天在ARH003投予期間檢查體重變化，在雄性小鼠投予的最後一個月ARH003顯著增加體重，而雌性小鼠則無。Veh組與ARH003組之間的顯著差異由*表示，p >0.05。

圖3A所示為amylo-glo（白色或藍色）、Iba-1（紅色），以及GFAP （綠色）的代表性螢光圖像。口服投予APP/PS1轉基因小鼠載劑以及ARH003 4個月，然後以amylo-glo對類澱粉斑塊進行染色，並分別以Iba-1與GFAP抗體對小神經膠質細胞與星狀神經膠細胞進行免疫染色。比例尺：1 mm。

圖3B所示為典型斑塊的放大率。比例尺：50 μm。

圖3C所示為在投予4個月後，比較未投予ARH003（載劑組，Veh）以及投予ARH003 （ARH003組）的腦半球中amylo-glo染色的斑塊的數目。結果為平均值 ± S.E.M。Veh組與ARH003組之間的顯著差異由*表示，p >0.05。

圖3D所示為在投予4個月後，比較未投予ARH003（Veh組）以及投予ARH003（ARH003組）的斑塊周圍的活化星狀神經膠細胞的數目。以GFAP抗體對星狀神經膠細胞進行免疫染色。結果為平均值 ± S.E.M。

圖3E所示為在投予4個月後，比較未投予ARH003 （Veh組）以及投予ARH003 (ARH003組）的斑塊周圍的活化小神經膠質細胞的數目。以Iba-1抗體對小神經膠質細胞進行免疫染色。結果為平均值 ± S.E.M。Veh組與ARH003組之間的顯著差異以***表示，p >0.001。

圖4A所示為2小時與16小時挖掘任務的結果。口服投予APP/PS1轉基因小鼠載劑（Veh組）或ARH003 （n分別為17及15）。在投予後第84天進行挖掘任務。結果為平均值 ± S.E.M。Veh組與ARH003組之間的顯著差異由**表示，p > 0.01；***，p >0.001。

圖4B所示為築巢任務的築巢得分與築巢任務中未切碎的小巢的比較。口服投予APP/PS1轉基因小鼠載劑（Veh組）或ARH003（n分別為17及15）。在投予後第86天進行築巢任務。結果為平均值 ± S.E.M。Veh組與ARH003組之間的顯著差異由**表示，p >0.01；***，p >0.001。

圖5A所示為在第一次及最後一次試驗的隱藏平台測試中的代表性游泳路徑。口服投予APP/PS1轉基因小鼠載劑（Veh組）或ARH003 （n分別為17及14）。進行莫里斯水迷宮試驗。

圖5B所示為訓練階段中逃脫時間的比較。口服投予APP/PS1轉基因小鼠載劑（Veh組）或ARH003 （n分別為17及14）。進行莫里斯水迷宮試驗（Morris water maze，MWM）。結果為平均值 ± S.E.M。Veh組與ARH003組之間的顯著差異以*表示，p >0.01；**，p >0.01；***，p >0.001。

圖6A所示為探針試驗中的代表性游泳路徑。口服投予APP/PS1轉基因小鼠載劑（Veh組）或ARH003（n分別為17及14）。進行莫里斯水迷宮試驗。

圖6B所示為比較到目標區域探視的等待時間。口服投予APP/PS1轉基因小鼠載劑（Veh組）或ARH003（n分別為17及14）。進行莫里斯水迷宮試驗。結果為平均值 ± S.E.M。Veh組與ARH003組之間的顯著差異以***表示，p >0.001。

圖6C所示為比較前平台的穿越時間。口服投予APP/PS1轉基因小鼠載劑（Veh組）或ARH003 （n分別為17及14）。進行莫里斯水迷宮試驗。結果為平均值 ± S.E.M。

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Claims

一種樟芝子實體萃取物用於製備失智症之藥物的用途。
如請求項1之用途，其中該樟芝子實體的萃取物為一皿培式的樟芝子實體的萃取物。
如請求項1之用途，其中該樟芝子實體的萃取物為一椴木培養的樟芝子實體的萃取物。
如請求項1之用途，其中該樟芝子實體的萃取物係透過以水或一有機溶劑萃取樟芝子實體而製備的。
如請求項4之用途，其中該有機溶劑為乙醇。
一種如請求項1之一化合物用於製備失智症之藥物的用途，其中該化合物係選自由下列所組成之群組：
(I)，以及
(II)，其中R₁ 為O、α-OH，或β-H；R₂ 為H或OH；R₃ 為O、α-H、β-OAc或H₂ ；R₄ 為H或OH；R₅ 為H或OH；R₆ 為COOH或COO(CH₂ )n-CH₃ ；R₇ 為H、OH或OAc；R₈ 為CH₃ 或COOH；虛線表示一單鍵或一雙鍵；n為一0至3的整數。
一種如請求項1之一化合物用於製備失智症之藥物的用途，其中該化合物係選自由下列所組成之群組：具有以下結構之去氫齒孔酸（dehydroeburicoic acid）：
；具有以下結構之去氫硫色多孔菌酸［（dehydrosulphurenic acid，亦稱為去氫磺尿酸（dehydrosulfurenic acid）］：
；具有以下結構之15α-乙醯去氫硫色多孔菌酸（15α-acetyldehydrosulphurenic acid）：
；以及具有以下結構之樟芝酸K（antcin K）：
。
如請求項1至7中任一項之用途，其中該失智症為阿茲海默症（Alzheimer’s disease，AD）。
如請求項1至5中任一項之用途，其中該萃取物有效抑制Aβ斑塊沉積以及神經膠質細胞活化。
如請求項1至5中任一項之用途，其中該萃取物有效改善記憶缺失。
如請求項6或7之用途，其中該化合物可有效抑制Aβ斑塊沉積以及神經膠質細胞活化。
如請求項6或7之用途，其中該化合物有效改善記憶缺失。