TW202019457A - 新的肌肉因子及其用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供了具有肌肉因子活性的C1orf54多肽及其變體,以及用於治療、減輕或預防肌肉相關障礙之組成物及方法。
Description
本發明涉及染色體1可讀框54(C1orf54)多肽及其變體。本發明提供了具有肌肉因子(myokine)活性的人染色體1可讀框54(C1orf54)多肽及其變體。本發明提供了用於在療法中使用的人染色體1可讀框54(C1orf54)多肽及其變體。特別地,本發明提供了具有肌肉因子活性,用於治療、減輕或預防肌肉相關障礙的C1orf54多肽及其變體。
許多常見的急性和慢性病症與肌肉骨骼損傷有關。例如,患有手術後廢用性萎縮、下肢損傷、加護病室(ICU)肌病、或衰老相關性健康限制的患者通常經歷肌肉質量和功能的逐漸喪失。肌肉質量或強度的降低(通常與再生受損相結合)會產生不良後果,如嚴重的功能受限、摔倒的風險增加、殘疾和生活品質降低。肌肉骨骼損傷常見於我們現代社會跨越所有社會人口階層的所有年齡段的男性和女性,並影響全球數億人。肌肉骨骼損傷的患病率隨著年齡的增長而顯著增加,並且許多還受到流行的生活方式因素(如低身體活動)的影響。因此,該等病症代表了大量未滿足的醫療和社會經濟需求。當前的治療通常限於症狀的管理,而不是針對預防或治癒。
骨骼肌係具有高可塑性和對運動的高響應性的組織。衛星細胞(肌肉前驅細胞)通常在運動和受傷時被激活,並且在肌肉組織的重塑中起關鍵作用。運動尤其對於精神疾病、神經疾病、代謝性疾病、心血管疾病、肺部疾病、肌肉骨骼障礙和癌症來說係高效療法(Pedersen和Saltin(2015)Scand J Med Sci Sports[斯堪的納維亞運動醫學與科學雜誌]25增刊3,1-72)。據信,肌源分泌因子參與運動的有益效果的介導(Giudice和Taylor(2017)Curr Opin Pharmacol[藥理學研究現狀]34,49-55)。此類因子包括各種細胞介素和肽,它們可以發揮自分泌、旁分泌或內分泌作用,並且統稱為「肌肉因子」(Pedersen和Febbraio(2012)Nat Rev Endocrinol[自然評論:內分泌學]8,457-465)。對骨骼肌分泌蛋白質組的分析揭示了數百個響應於運動或收縮而分泌的肌肉因子。然而,並非所有肌肉因子對肌肉生長都有積極作用。例如,肌肉因子肌肉生長抑制素抑制肌肉生成並且是肌肉負調控因子(Elkina等人,(2011)J Cachexia Sarcopenia Muscle[惡病質、肌肉減少症與肌肉雜誌]2,143-151)。此外,對於受影響的患者,通常很難進行劇烈的身體活動。雖然已知的肌肉合成代謝劑會增加肌肉質量,隨後可導致增加的肌肉強度,但合成代謝劑可導致各種不希望的副作用:類固醇使用與高血壓有關(Urhausen A,Albers T,Kindermann W.Heart Br Card Soc.[心腦血管病學會]2004;90(5):496-501)、心臟的心室功能降低(Pope HG,Kanayama G,Athey A,Ryan E,Hudson JI,Baggish A.Am J Addict Am Acad Psychiatr Alcohol Addict.[美國成癮雜誌:美國精神病學會酒精成癮]2014;23(4):371-377)、心血管疾病如心臟病發作(Vanberg P,Atar D.Handb Exp Pharmacol.[實驗藥理學手冊]2010;(195):411-457)、動脈損傷(Baggish AL,Weiner RB,Kanayama G等人2017;135(21):1991-2002)以及中風(El Scheich T,Weber A-A,Klee D,Schweiger D,
Mayatepek E,Karenfort M.J Pediatr Endocrinol Metab JPEM.[兒科內分泌與代謝雜誌]2013;26(1-2):161-165)。此外,肌肉量的增加並不一定轉化為增加的肌肉強度(Hayashida I,Tanimoto Y,Takahashi Y,Kusabiraki T,Tamaki J.PLoS One.[公共科學圖書館]2014年11月3日;9(11):e111810)。因此,對提供基於肌肉因子的治療有強烈的醫療需求,該等治療模仿運動的效果,對肌肉強度有直接定性的影響。
在以下方面中描述了本揭露的某些實施方式:
1.一種分離的多肽,該分離的多肽由如下胺基酸序列組成,該胺基酸序列與選自SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的組的胺基酸序列具有至少95%胺基酸序列同一性,並且其中該多肽具有肌肉因子活性。
2.根據方面1所述之分離的多肽,其中在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸。
3.根據方面1所述之分離的多肽,其中該多肽由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的胺基酸序列組成。
4.一種C1orf54多肽或其變體,該C1orf54多肽或其變體用於在療法中使用。
5.一種C1orf54多肽或其變體,該C1orf54多肽或其變體用於作為藥物使用。
6.一種多肽,該多肽選自:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸,該多肽用於作為藥物使用。
7.一種多肽,該多肽選自:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸,該多肽用於在製造藥物中使用。
8.用於根據方面4-7中任一項所述使用的多肽,其中所述多肽具有肌肉因子活性。
9.根據方面4-8中任一項所述的多肽,該多肽用於作為治療受試者的肌肉相關障礙的藥物使用。
9.a.根據方面4-8中任一項所述的多肽,該多肽用於在製造治療受試者的肌肉相關障礙的藥物中使用。
10.一種用於在治療受試者的肌肉相關障礙中使用的多肽,其中所述治療包括向該受試者給予有效量的選自以下的多肽:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸;並且其中所述多肽具有肌肉因子活性。
11.一種藥物組成物,該藥物組成物包含
a.藥學有效量的至少一種選自以下的多肽:
i)由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
ii)包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
iii)由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;
iv)包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;和
v)包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸;並且
其中所述多肽具有肌肉因子活性;和
b.至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
12.根據方面11所述之藥物組成物,該藥物組成物用於在治療肌肉相關障礙中使用。
13.一種治療受試者的肌肉相關障礙之方法,其中所述方法包括向所述受試者給予有效量的選自以下的多肽:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸,
其中所述多肽具有肌肉因子活性。
14.用於根據方面9和10中任一項所述使用的多肽,其中所述肌肉相關障礙係選自以下或由以下引起的障礙:肌肉萎縮、骨科損傷、肌肉損傷、肌肉無力、心臟衰竭、化學療法、中風後遺症、繼發性肌肉喪失、肌肉減少症、肥胖或代謝症候群。
14.a.根據方面12所述之藥物組成物,其中所述肌肉相關障礙係選自以下或由以下引起的障礙:肌肉萎縮、骨科損傷、肌肉損傷、肌肉無力、心臟衰竭、化學療法、中風後遺症、繼發性肌肉喪失、肌肉減少症、肥胖或代謝症候群。
14.b.根據方面13所述之方法,其中所述肌肉相關障礙係選自以下或由以下引起的障礙:肌肉萎縮、骨科損傷、肌肉損傷、肌肉無力、心臟衰竭、化學療法、中風後遺症、繼發性肌肉喪失、肌肉減少症、肥胖或代謝症候群。
15.根據方面1-3中任一項所述之分離的多肽,其中所述肌肉因子活性包括肌肉功能增加活性。
15.a.用於根據方面8-10中任一項所述使用的分離的多肽,其中所述肌肉因子活性包括肌肉功能增加活性。
15.b.根據方面11-12中任一項所述之藥物組成物,其中所述肌肉因子活性包括肌肉功能增加活性。
15.c.根據方面13所述之方法,其中所述肌肉因子活性包括肌肉功能增加活性。
16.根據方面1-3中任一項所述之分離的多肽,其中所述肌肉因子活性包括肌肉強度增加活性。
16.a.用於根據方面8、9和10中任一項所述使用的多肽,其中所述肌肉因子活性包括肌肉強度增加活性。
16.b.根據方面11-12中任一項所述之藥物組成物,其中所述肌肉因子活性包括肌肉強度增加活性。
16.c.根據方面13所述之方法,其中所述肌肉因子活性包括肌肉強度增加活性。
17.根據方面1-3中任一項所述之分離的多肽,其中所述肌肉因子活性包括肌肉再生改善活性。
17a.用於根據方面8-10中任一項所述使用的多肽,其中所述肌肉因子活性包括肌肉再生改善活性。
17b.根據方面11-12中任一項所述之藥物組成物,其中所述肌肉因子活性包括肌肉再生改善活性。
17c.根據方面13所述之方法,其中所述肌肉因子活性包括肌肉再生改善活性。
18.根據方面4-6、10、12、14、14a、14b、15a、15b、16a、16b、17a和17b中任一項所述的多肽或藥物組成物,所述多肽或藥物組成物用於在治療受試者的肌肉相關障礙中使用,其中根據間歇給藥方案給予所述多肽,該間歇給藥方案包括至少兩個週期,每個週期包括(a)給藥期,在此期間將所述C1orf54多肽或其變體給予該受試者和(b)停藥期。
19.根據方面13、14c、15c、16c和17c中任一項所述的治療受試者的肌肉相關障礙的方法,其中所述方法包括向該受試者給予有效量的C1orf54多肽或其變體,其中根據間歇給藥方案給予所述多肽,該間歇給藥方案包括至少兩個週期,其中每個週期包括(a)給藥期,在此期間將所述C1orf54多肽或其變體給予該受試者和(b)停藥期。
20.一種治療受試者的肌肉相關障礙的方法,其中所述方法包括向該受試者給予有效量的選自以下的多肽:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸;並且
其中所述多肽具有肌肉因子活性,並且其中根據間歇給藥方案給予有效量的所述多肽,該間歇給藥方案包括至少兩個週期,其中每個週期包括(a)給藥期,在此期間將治療有效量的所述C1orf54多肽或其變體給予患者和之後(b)停藥期。
為了更容易地理解本發明,首先定義某些術語。另外的定義在整個詳細描述中陳述。
術語「包含(comprising)」意指「包括(including)」以及「組成(consisting)」,例如,「包含」X的組成物可以僅由X組成,或者可以包括另外的一些,例如X+Y。
本發明包括具有生物學活性的C1orf54多肽及其變體。如本文所用,術語「染色體1可讀框54(C1orf54)多肽」係指由染色體1可讀框54(C1orf54)基因編碼的多肽,特別較佳的是人染色體1可讀框54(C1orf54)(UniGene ID:141426,UniGene Hs.91283,NM_024579.3,NP_078855.2,Uniprot登錄號Q8WWF1(具有SEQ ID NO:1),其在本文中是指包含訊息肽的C1orf54多肽),較佳的是具有如SEQ ID NO:2中列出的胺基酸序列,其在本文中是指不含訊息肽的C1orf54多肽。
為了清楚和一致起見,在整個本申請和申請專利範圍中C1orf54蛋白中胺基酸殘基的編號係基於不含訊息肽(即SEQ ID NO:2)的C1orf54(Uniprot登錄號Q8WWF1)的野生型C1orf54蛋白序列編號。在本文中,該SEQ ID NO:2被稱為「全長序列」。
術語「C1orf54多肽」還包括本文揭露的C1orf54多肽的變體(例如,包含胺基酸SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的C1orf54多肽或其他截短的、融合的或突變的C1orf54多肽)。術語還單獨地以及共同地指每種多肽。例如,對含有治療疾病等的組成物的製備、純化、衍生、給予的描述單獨地或共同地涉及每種多肽。C1orf54多肽變體係與具有肌肉因子活性的C1orf54野生型序列相差至少一個胺基酸(例如缺失、取代或添加)的蛋白質,其中術語「野生型序列」係指在至少一種天然存在的生物體中可獲得的多肽或基因序列,或者係未被人類改變、突變或以其他方式操縱的多肽或基因序列。此類野生型序列可以從自然界分離,或者可以藉由重組或合成方法產生。
本文描述的C1orf54多肽可以從各種來源(如從人組織類型)分離,或藉由重組或合成方法製備。
如本文所用,術語「多肽」、「肽」和「蛋白質」可互換使用以描述胺基酸殘基的聚合物。術語「多肽」可以意指但決不限於重組全長、早熟和/或成熟多肽形式以及具有生物學活性的片段或剪接變體,或衍生自全長多肽的具有生物活性的重組製備的截短物。多肽的重組形式可以根據熟悉該項技術者熟知的標準方法和方案產生,包括例如在原核和/或真核細胞中表現重組蛋白,隨後進行一個或多個分離和純化步驟,和/或使用肽合成儀化學合成多肽或其部分。此外,術語「多肽」適用於胺基酸聚合物,其中一個或多個胺基酸殘基係相應天然存在的胺基酸的人工化學模擬物,以及適用於天然存在的胺基酸聚合物和非天然存在的胺基酸聚合物。
如本文所用,術語「分離的多肽」旨在指從其原始或天然環境(例如如果其天然存在,天然環境)中移出的多肽。例如,不分離存在於活動物中的天然存在的多核苷酸或多肽,而是分離藉由人為干預從天然系統中的一些或所有共存材料中分出的相同多核苷酸或多肽。此類多核苷酸可以是載體的一部分和/或此類多核苷酸或多肽可以是組成物的一部分,並且仍然是分離的,因為這種載體或組成物不是其天然存在的環境的一部分。
如本文所用,「保守修飾的變體」係指對肽、多肽或蛋白質序列的單獨取代、缺失或添加,它們改變、添加、取代和/或缺失編碼序列中的單個胺基酸或小百分比的胺基酸,其中所述改變導致胺基酸取代為化學上相似的胺基酸。提供功能相似的胺基酸的保守取代表係本領域已知的。此類保守修飾的變體係對本發明的多態變體、種間同源物和等位基因的補充,並且不排除該等多態變體、種間同源物和等位基因。具有相似側鏈的胺基酸殘基的家族已在本領域中進行了定義。該等家族包括具有鹼性側鏈(例如賴胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電荷的極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β分支側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)以及芳香族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)的胺基酸。因此,多肽或其變體中的胺基酸殘基可以較佳的是被來自相同側鏈家族的另一個胺基酸殘基替代。
術語「序列相似性」意指在最佳序列比對的相同位置處的胺基酸係相同的或相似的,較佳的是相同的。「相似的胺基酸」具有相似的特徵,如極性、溶解度、親水性、疏水性、電荷或大小。
關於如本文描述的C1orf54多肽和變體序列的「胺基酸序列同一性百分比(%)」定義為:在比對序列並且引入空位(如果需要的話)以實現最大
序列同一性百分比之後,並且不考慮任何保守取代作為序列同一性的一部分,候選序列中胺基酸殘基與具體的C1orf54多肽序列中的胺基酸殘基相同的百分比。用於確定胺基酸序列同一性百分比的目的的比對可以藉由本領域技術範圍內的各種方式實現,例如,使用公開可獲得的電腦軟體,如EMBOSS Needle、BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟悉該項技術者可以確定用於測量比對的適當參數,包括在所比較的序列的全長上實現最大比對所需的任何演算法。「胺基酸序列相似性百分比(%)」藉由用於確定胺基酸序列同一性%的相同計算確定,但除了計算中的相同胺基酸外還包括保守胺基酸取代。
在兩個或更多個核酸或多肽序列的上下文中,術語「相同」係指兩個或更多個具有相同序列的序列或子序列。
可以藉由基於胺基酸序列或結構相似性比對多肽序列來確定兩個或更多個多肽中的類似位置。例如,可以使用標準設定(較佳的是對於Align EMBOSS needle,矩陣:Blosum62,空位開放10.0,空位延伸0.5)在萬維網(例如ClustalW(www.ebi.ac.uk/clustalw)或Align(http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html))上獲得此模擬對工具。熟悉該項技術者理解,可能需要在任一序列中引入空位以產生令人滿意的比對。如果殘基以最佳序列比對進行比對,則將兩個或更多個C1orf54多肽或其變體中的殘基稱為「對應」。兩個多肽之間的「最佳序列比對」定義為:產生最大數量的比對的相同殘基的比對。
如本文揭露的,本發明涉及分離的C1orf54多肽,較佳的是人C1orf54多肽,該多肽由如下胺基酸序列組成,該胺基酸序列在使用最佳序列比對的蛋白質的整個長度上和/或在最佳序列比對的區域上與C1orf54多肽胺基酸序列具有至少約80%胺基酸序列相似性、可替代地至少約81%胺基酸序列相似性、可替代地至少約82%胺基酸序列相似性、可替代地至少約83%胺基酸序列相
似性、可替代地至少約84%胺基酸序列相似性、可替代地至少約85%胺基酸序列相似性、可替代地至少約86%胺基酸序列相似性、可替代地至少約87%胺基酸序列相似性、可替代地至少約88%胺基酸序列相似性、可替代地至少約89%胺基酸序列相似性、可替代地至少約90%胺基酸序列相似性、可替代地至少約91%胺基酸序列相似性、可替代地至少約92%胺基酸序列相似性、可替代地至少約93%胺基酸序列相似性、可替代地至少約94%胺基酸序列相似性、可替代地至少約95%胺基酸序列相似性、可替代地至少約96%胺基酸序列相似性、可替代地至少約97%胺基酸序列相似性、可替代地至少約98%胺基酸序列相似性、和可替代地至少約99%胺基酸序列相似性、較佳的是100%序列同一性,其中使用標準設定(較佳的是EMBOSS::needle(矩陣:Blosum62,空位開放10.0,空位延伸0.5))用本領域已知的工具(例如Align)可獲得最佳序列比對,其中該胺基酸序列在本文中如SEQ ID NO:2所示。
「C1orf54多肽變體」或「C1orf54變體」意指如本文所定義的生物學活性C1orf54多肽,該多肽在使用最佳序列比對的蛋白質的整個長度上和/或在最佳序列比對的區域上具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%胺基酸序列相似性,較佳的是100%序列同一性,其中使用標準設定(較佳的是EMBOSS::needle(矩陣:Blosum62,空位開放10.0,空位延伸0.5))用本領域已知的工具(例如Align)可獲得最佳序列比對,其中全長C1orf54多肽序列(例如SEQ ID NO:2)或全長C1orf54多肽序列的任何其他片段(例如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4)如本文中所描述。C1orf54變體也是包含訊息肽序列的C1orf54前驅蛋白,例如包含胺基酸SEQ ID NO:1的多肽。C1orf54變體也是包含C1orf54蛋白的融合蛋白,例如,包含與另一種異源多肽或胺基酸序列(例如免疫球蛋白Fc區、人血清白蛋白(HSA)多肽)融合的C1orf54蛋白的蛋白質,或包含與另一
部分(例如聚乙二醇(PEG))綴合的C1orf54蛋白的蛋白質,例如以增加C1orf54多肽或其變體的生物學(例如血清)半衰期。在一個實施方式中,此類C1orf54變體包含C1orf54多肽或其變體與標籤多肽的融合。所述標籤通常置於C1orf54多肽的胺基末端或羧基末端。C1orf54變體也是全長C1orf54多肽或C1orf54變體的截短,其中所述截短可位於多肽的N-末端或位於多肽的C-末端或位於多肽的N-末端和多肽的C-末端兩者。根據本發明,具有SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的多肽係如SEQ ID NO:2所示的全長C1orf54多肽的此類截短變體。變體還包括具有生物學活性,在1個、2個、3個、4個、5個或更多個胺基酸位置處含有胺基酸取代、修飾、添加和/或缺失的多肽,並且在使用最佳序列比對的片段的整個長度上和/或在最佳序列比對的區域上具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列相似性,較佳的是100%序列同一性,其中使用標準設定(較佳的是EMBOSS::needle(矩陣:Blosum62,空位開放10.0,空位延伸0.5))用本領域已知的工具(例如Align)可獲得最佳序列比對,其中該胺基酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。如本文描述的C1orf54變體保留其生物學活性,意思係此類蛋白質可被認為係如SEQ ID NO:2所示的全長C1orf54蛋白的功能等同物,即變體保留了生物學活性(例如,如本文描述的增加肌肉功能),或如本文所述,如在合適的生物系統(例如體外或體內)中評估的,變體超過了對於如SEQ ID NO:2所示的全長C1orf54多肽觀察到的生物學活性的至少一種。C1orf54變體也是分離的多肽,其包含胺基酸序列SEQ ID NO:5-9或SEQ ID NO:10-14中的任一個。
此外,關於C1orf54多肽的功能等同物被理解為包含至少一個天然或人工突變的C1orf54多肽或其變體。突變可以是一個或多個胺基酸的插入、缺失或取代,所述胺基酸不會減少C1orf54多肽的生物學活性。
在如上所述的融合蛋白的情況下,序列同一性或序列相似性應僅基於此類融合蛋白的C1orf54部分來定義,即,不衍生自C1orf54多肽或其變體的另外的胺基酸在這種比對中將不被考慮,即從比對評分的計算中排除。在如上所述的截短蛋白的情況下,序列同一性或序列相似性應僅基於截短的C1orf54多肽或其變體來定義。變體可以表現出與融合的或截短的C1orf54多肽變體(例如,與具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的C1orf54多肽變體)係至少80%、81%、82%、83%、84%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列。
用於比較的序列比對方法在本領域中是已知的。例如藉由Smith和Waterman,(1970)Adv.Appl.Math.[應用數學進展]2:482c的局部同源性演算法,藉由Needleman和Wunsch,(1970)J.Mol.Biol.[分子生物學期刊]48:443的同源性比對演算法,藉由Pearson和Lipman,(1988)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]85:2444的相似性方法研究,藉由該等演算法(威斯康辛州麥迪森的科學大道575號遺傳學電腦小組(Genetics Computer Group,575 Science Dr.,Madison,WI)的威斯康辛遺傳學套裝軟體中的GAP、BESTFIT、FASTA、和TFASTA)的電腦實現,或藉由手動比對和目測檢查(參見例如,Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology[分子生物學實驗指南],1995增刊),可以進行用於比較的序列的最佳比對。
用於序列比較的較佳的演算法係EMBOSS needle,其讀取兩個輸入序列並將其最佳全域序列比對寫入文檔。該程式使用尼德曼-翁施(Needleman-Wunsch)比對演算法以找到兩個序列沿其整個長度的最佳比對(包括空位)。EMBOSS needle的標準設定係BLOSUM62評分矩陣,其中空位開放罰分為10.0和空位延伸罰分為0.5。
C1orf54多肽係肌肉細胞用於與其生理環境相通的複雜系統的一部分,並因此被歸類為肌肉因子。
如本文所用,術語「肌肉因子」係指由肌細胞產生、表現和釋放的細胞介素、肽或多肽、蛋白多糖肽、生物活性脂質、第二信使等。
如本文所用,術語「肌肉因子活性」係指由肌肉因子或肌肉因子信號產生的對受試者、細胞或組織(例如,脂肪組織、腦、胰腺、腸道、肝臟、免疫細胞、骨骼、肝細胞和腫瘤細胞)的自分泌、旁分泌和/或內分泌作用。肌肉因子活性可以是抑制性的或刺激性的。此類「肌肉因子活性」可以導致肌肉肥大,增加的肌肉再生,增加的肌肉強度(力產生能力),原代人骨骼肌細胞的增殖,增加的肌肉神經支配,對細胞外基質重塑的影響,骨代謝的調節(例如骨質量、骨密度、骨生成、骨礦化、骨癒合),脂肪代謝的調節(例如增加的脂肪分解、降低的脂蛋白脂肪酶活性、增加的脂肪組織褐變、增加的生熱作用、降低的脂肪組織質量、增加的脂肪酸氧化、降低的循環和/或肝臟甘油三酯水平、減少的全身脂肪、減少的內臟脂肪),免疫細胞反應的調節,免疫調節過程的調控,炎症過程的調節,對免疫細胞的反應的調節,減少的炎症,能量消耗的刺激,全身代謝的調節,全身胰島素敏感性的調節,葡萄糖代謝的調控(例如增加的葡萄糖攝取、增加的糖原合成、增加的葡萄糖氧化、改善的葡萄糖耐量、改善的胰島素敏感性),胰腺β細胞活力的促進,α細胞增生,全身心血管適應(包括增加的心輸出量、提高的血容量),增加的血管生成(例如骨骼肌細胞的或骨骼肌細胞附近的血管化、毛細血管化、改善的氧氣供應和利用率、增加的血管修復過程、減少的動脈粥樣硬化形成、血壓的控制),心臟保護,改善的認知功能和記憶,減少的壓力和抑鬱,腦神經發生,癌症保護(例如藉由增加的細胞凋亡和免疫效應細胞的動員)和抗衰老作用。如本文所用,所述肌肉因子活性較佳的是導致肌肉功能的增加。
如本文所用,術語「肌肉功能的增加」或「增加的肌肉功能」或「肌肉功能增加活性」(等等)旨在指導致以下中的至少一個或多個的活性:i)肌肉強度的增加,ii)肌肉前驅細胞增殖的增加,iii)改善的肌肉再生活性或iv)增加的肌肉疲勞抗性。術語「增加(增加的)」或「改善的」係指如下條件:與第一時間點相比,在第二時間點在體內或體外測量的參數(例如肌肉強度、肌肉前驅細胞增殖、肌肉再生活性、衛星細胞增殖測定或肌肉疲勞抗性)更大。所述參數可以使用合適的體外和/或體內測定來評估,例如,如本文所述,例如,人成肌細胞體外增殖測定或小鼠衛星細胞體內增殖或評估肌肉強度的方法。
如本文所用,術語「肌肉強度」(等等)係指肌肉或肌肉群總和可以產生的最大力量。肌肉強度可以藉由各種方法(如握力、一次重複最大強度測試、肌肉耐力的時間依賴性測試、肌肉疲勞的時間依賴性測試、或肌肉耐力和疲勞的時間依賴性測試等)評估。肌肉強度可以藉由單個或多個關節以及呼吸和其他肌肉(例如肺功能測試)的動態(例如30秒坐椅站立測試、爬樓梯測試、膝關節屈曲/伸展)或靜態(例如手握測力法、等長膝關節伸展/屈曲)運動來評估。
如本文所用,在受試者中的術語「增加的肌肉強度」(等等)也旨在指與治療前相比肌肉強度和/或身體表現的增加,並且如治療至少2週後、至少4週、至少8週後、至少12週後、至少16週後、至少20週後、至少24週後、至少28週後、至少32週後、至少36週後、至少40週後、至少44週後、至少48週後、至少52週後、或更多週後所測量的。
身體表現可藉由簡易身體表現量表(SPPB)、步態速度測量、計時起立行走測試(TGUG)、爬樓梯力量測試(SCPT)、400m步行測試和/或6分鐘步行距離測試(6MWD)來評估。
如本文所用,術語「調控」用於描述功能的水平或活性大於、等於或小於在不存在本發明提供的藥劑時觀察到的功能的水平或活性。
如本文所用的術語「受試者」或「患者」旨在包括人和動物,所述人和動物能夠患有肌肉相關障礙或疾病或受肌肉相關障礙或疾病折磨,或者否則受益於肌肉功能的增加。受試者的實例包括哺乳動物,例如人、狗、乳牛、馬、豬、綿羊、山羊、貓、和轉基因非人動物。在一個實施方式中,該受試者係人,例如患有肌肉相關障礙、有患上肌肉相關障礙的風險、或潛在易於患上肌肉相關障礙的人。在較佳的實施方式中,該受試者係人受試者,例如患有肌肉相關障礙的人患者。在另一個實施方式中,該受試者係動物,例如根據本文揭露的方法(例如給予C1orf54)處理的乳牛或豬,以增加所述動物的瘦體重或肌肉功能。
如本文所用,如果此類受試者(患者)會在生物學上、醫學上或生活品質方面從這類治療中獲益,那麼該受試者係對治療「有需要的」。
如本文所用,術語「肌肉質量」係指如由肌肉重量、質量、面積或體積表示的肌肉或肌肉群的量或大小。肌肉質量也可以表示為總瘦體重、身體腔室(如腿)的瘦體重、或者腿或臂腔室的橫截面積。肌肉的體積或質量可以使用提供肌肉面積、體積或質量的任何已知或其他有效技術來確定,如雙能X射線吸收測定法(DXA)、生物阻抗分析(BIA)、電腦斷層攝影術(CT)掃描、超音波、磁共振成像(MRI)或每個無脂肪軟組織(TBK或PBK)的全身或部分體鉀。
如本文所用,術語「衛星細胞」旨在指小的單核幹細胞,該等小的單核幹細胞天然位於肌纖維的基底層下面,並且能夠自我更新並形成新的骨骼肌細胞(即肌原性)。衛星細胞最確定的標記係Pax7,它存在於出生後肌肉的所有衛星細胞中,並在增殖的成肌細胞中表現直到它們開始分化。
如本文所用,術語「肌肉的再生能力」、「肌肉再生活性」或「肌肉再生改善活性」(等等)旨在指肌肉細胞的再生長或修復過程,以增加、恢復或維持活的肌細胞或功能性肌細胞的總數並提供響應於損傷(如疾病或損傷後
的組織喪失)的受損肌纖維的更換。響應於該損傷,衛星細胞被激活並成為關鍵成肌細胞,然後該等成肌細胞開始增殖以擴大祖細胞的群體用於修復(參見例如,Kuang和Rudnicki(2008)Trends Mol Med[分子醫學動態]14,82-91)。最後,增殖的成肌細胞退出細胞週期並進行終末分化。它們彼此融合以形成復原肌纖維,替代受損和死亡的肌纖維。術語「肌肉的再生能力」或「肌肉再生活性」(等等)還包括衛星細胞介導的生長過程(重新進入細胞週期、增殖並融合到現有的肌肉纖維中或形成新的肌肉纖維),合胞體肌纖維生長或成肌細胞依賴性從頭肌纖維分化,由此肌纖維生長也可以是成肌細胞依賴性的,並且從頭肌細胞分化可以是衛星細胞依賴性的,由此肌纖維融合到現有的肌肉纖維中和/或增加再生肌纖維的大小和/或形成新的肌肉纖維,從而促進骨骼肌再生。
如本文所用,術語「肌肉相關障礙」旨在指導致肌肉功能障礙(例如,減少的肌肉強度或力量,減少的再生能力和/或減少的耐力)的疾病或障礙,使得肌肉無法在一個人維持正常的日常獨立所需的水平上發揮其功能。為了充分執行它們的生理任務,受試者可能受到損害。此類肌肉功能障礙可以導致身體殘疾、行動能力受損、功能獨立性的喪失、頻繁跌倒、害怕跌倒、有害跌倒、肌肉耗損、步態受損和不穩定、不良步態力學、脊柱側凸、跑步和跳躍困難、抬起物體困難、肌強直、眼瞼下垂、肌肉肥大、肌肉營養不良或萎縮、呼吸困難、無法行走、學習障礙、平衡不佳、難以從躺臥或坐姿起來、使用高爾斯氏方法(Gower's maneuver)進行站立,和/或減少的耐力。
如本文所用,術語「肌肉喪失」旨在指肌肉數量和品質惡化的情況。肌肉喪失的非限制性症狀可以是肌肉質量的喪失或減少、瘦肌肉的喪失或減少、肌肉重量的喪失或減少、肌肉周長的喪失或減少、肌肉功能的喪失或減少、肌肉強度的喪失或減少、行動能力的喪失或減少,或其任何組合。例如,肌肉喪失可以由衰老、疾病(例如癌症和肝疾病)、不活動、損傷(例如肝移植)或其
任何組合引起。如本文所用,術語「肌肉喪失」涵蓋肌肉老化的自然過程,以及先天性病變和獲得性病變。肌肉老化導致進行性骨骼肌喪失,並且包括但不限於肌肉減少症。術語「肌肉喪失」還涵蓋影響一種或多種骨骼肌的任何先天性或獲得性肌肉變性、無力、功能障礙和/或喪失。先天性病變包括但不限於肌病(例如杜興氏肌肉失養症(DMD))、貝氏肌營養不良、先天性肌營養不良、肢帶肌肉失養症(LGMD)、面肩肱型肌營養不良、強直性肌肉營養不良症、眼咽型肌營養不良、遠端型肌營養不良、和埃-德二氏肌營養不良(Emery-Dreifuss muscular dystrophy)。相反,影響一種或多種骨骼肌的獲得性病變不是遺傳性的,並且可以藉由炎症(例如炎症性肌病)、藥物(例如藥物誘導性肌病)、創傷或損傷(例如創傷誘導性肌病或手術誘導性肌病)、結締組織和肌肉缺血(例如貝格爾氏(Buerger)病)、癌症(例如癌症誘導性肌肉減少症)或甚至飲食(例如飲食誘導性肌病)誘導。在一些實施方式中,所揭露的組成物、用途、套組(kit)、方法和化合物減少、阻止或逆轉患者的肌肉喪失。
如本文所用,術語「繼發性肌肉喪失」旨在指由損傷、疾病或創傷引起的肌肉數量和品質惡化的情況。該等包括但不限於中風、機動車事故、嚴重燒傷、戰鬥傷、慢性阻塞性肺病(COPD)、糖尿病、癌症、與手術相關的活動、無法長時間移動肌肉和關節(例如臥床休息、石膏固定)和其他在體內產生負氮平衡的病症。長期以來,已經認識到大於10天臥床休息的廢用會導致骨骼肌、強度和患者功能的喪失,但現在也可以理解的是,短期廢用後(小於10天)已經發生了相當大的肌肉喪失和萎縮(Dirks等人,(2016)Diabetes[糖尿病]65,2862-2875,Wall等人,(2013)Ageing Res Rev[衰老研究評論]12,898-906)。因此,術語「繼發性肌肉喪失」涵蓋短期廢用以及長期廢用後發生的肌肉喪失。在一些實施方式中,所揭露的組成物、用途、套組、方法和化合物減少、阻止或逆轉患者的繼發性肌肉喪失。
如本文所用,術語「肌肉減少症」係指如肌肉減少症:歐洲的定義和診斷共識(Sarcopenia:European consensus on definition and diagnosis)(Cruz-Jentoft等人,(2010)Age Ageing[年齡與老齡化]39,412-423)和藉由肌肉減少症國際工作組(International Working Group on Sarcopenia)(Fielding等人,(2011)J Am Med Dir Assoc[美國醫學指導協會雜誌]12,249-256)定義的綜合症,其特徵在於在老年人中觀察到骨骼肌質量、強度和受損的功能能力的進行性和全身性喪失。此外,肌肉減少症用於描述與疾病、手術和其他病症(癌症(Collins等人,(2014)BMJ Open[BMJ開放獲取期刊];4:e003697.doi:10.1136/bmjopen-2013-003697)、硬化(Georgiou等人,(2018)Clin Nutr ESPEN.[ESPEN臨床營養]24:185-186)、慢性阻塞性肺病(Jones等人,(2015)Thorax.[胸腔]70:213-8)、外周動脈疾病(Addison等人,(2018)Arch Phys Med Rehabil.[物理醫學與康復檔案館]99(4):623-628)、中風後遺症(Ryan等人,(2017)Arch Phys Med Rehabil.[物理醫學與康復檔案館]98(3):495-499)和心臟衰竭(Saitoh等人,(2018)Expert Rev Cardiovasc Ther.[心血管病治療專家評論]16(2):133-142))相關的骨骼肌質量和功能的喪失,以及經歷器官移植(Meek和Madill(2017)Clin Nutr ESPEN.[ESPEN臨床營養]22:76-80)和從髖部骨折恢復(Landi等人,(2017)Osteoporos Int.[國際骨質疏鬆雜誌]28:1569-1576.doi:10.1007/s00198-017-3929-z)的那些患者的骨骼肌質量和功能的喪失。通常,肌肉減少症的診斷需要存在低肌肉質量以及低肌肉強度和低身體表現中的至少一種。術語「肌肉減少症」包括原發性肌肉減少症(年齡相關性肌肉減少症)和繼發性肌肉減少症,其中肌肉和功能喪失係另一種病症(包括如由臥床休息、不活動、靜坐的生活方式和去適應作用引起的活動相關性肌肉減少症;與心臟、肺、肝臟、腎和/或腦的晚期器官衰竭,炎症性疾病,惡性腫瘤或內分泌疾病相關的疾病相關性肌肉減少症以及由能量和/或蛋白質的飲食攝入不足(如吸收不良、胃腸道疾病或使用引起厭食症的藥物)引起的營養相
關性肌肉減少症)的結果。在一些實施方式中,所揭露的組成物、用途、套組、方法和化合物減少、阻止或逆轉患者的肌肉減少症。
如本文所用,術語「惡病質」係指如由特殊利益集團(Special Interest Groups,SIG)在「慢性耗損疾病中的惡病質-厭食症」和「老年病學中的營養」(Muscaritoli等人,(2010)Clin Nutr[臨床營養]29,154-159)中定義的耗損,其特徵在於由於骨骼肌喪失(伴有或不伴有脂肪組織的喪失)導致的進行性體重減輕、肌肉耗損/喪失和疲勞。惡病質通常與炎症,胰島素抗性,厭食症和由於嚴重慢性疾病(如癌症、慢性心臟衰竭、慢性心肌病、慢性腎衰竭、終末期腎病、慢性阻塞性肺病(COPD)、肝衰竭、肝硬化、獲得性免疫缺陷綜合症(AIDS)、嚴重燒傷和類風濕性關節炎)導致的肌肉蛋白質分解增加有關。在一些實施方式中,所揭露的組成物、用途、套組、方法和化合物減少、阻止或逆轉患者的惡病質。
如本文所用,術語「肌肉無力」包括在創傷後(如手術和急性或長期損傷、廢用(例如中風、或高水平的炎症或其他病症(該等病症導致由單個肌肉或肌肉群的更低力產生能力引起的關節周圍的力減小)後)觀察到的肌肉強度的喪失,而與收縮強度無關。手術後肌肉無力係指手術過程後一個或多個肌肉的強度的降低。無力可以是全身性的(即全身無力)或局限於具體區域(身體側面、肢體或肌肉)。創傷後肌肉無力的特徵在於創傷性發作(例如身體損傷、手術或中風)後一個或多個肌肉的強度的降低。在一些實施方式中,所揭露的組成物、用途、套組、方法和化合物減少、阻止或逆轉患者的肌肉無力。
如本文所用,術語「給予」旨在指將藥學活性成分(例如,如本文描述的C1orf54多肽或其變體)的劑量給予有需要的受試者的方法。
如本文所用,術語「藥學上可接受的」係指在合理醫學判斷的範圍內適合用於與受試者(例如,哺乳動物或人)的組織相接觸而無過度毒性、刺
激、過敏反應和其他問題或併發症,並且與合理的益處/風險比相稱的那些化合物、材料、組成物和/或劑型。
如本文所用,術語「藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑」或者「載體、稀釋劑或賦形劑」係指可用於製備或使用藥物組成物的物質,該等物質增強或穩定組成物或可用於促進組成物的製備。藥學上可接受的載體包括溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等等,並且包括例如,合適的稀釋劑、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑、緩衝劑、填充劑、冷凍保護劑、凍乾保護劑、鹽、藥物穩定劑、粘合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、潤濕劑、甜味劑、調味劑、染料及其組合,生理上相容的並且當向動物或人給予(視情況而定)時不會產生不良的、過敏的或其他不利反應的溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等等(參見,例如Remington The Science and Practice of Pharmacy[雷明頓:藥學科學與實踐],第22版,Pharmaceutical Press[藥物出版社],2013,第1049-1070頁)。除非任何常規的介質或藥劑與活性化合物不相容,否則考慮將其用於本文描述的組成物中。
如本文所用,術語「藥物組成物」係指呈適於給予至最合適其所希望活性的身體位置(例如全身給予)的形式的C1orf54多肽或其變體,以及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。術語「藥物組成物」旨在係指含有待給予至受試者(例如,哺乳動物或人),以便治療影響該受試者的特定疾病或病症的至少一種治療劑(較佳的是C1orf54多肽或其變體)的混合物或溶液。如果未另外指明,那麼該等以本身已知的方式進行製備,例如借助各種常規的混合、粉碎、直接壓片、製粒、糖包衣、溶解、凍乾方法或對熟悉該項技術者來說顯而易見的製造技術。應當理解,每種劑型的單獨劑量的單位含量本身不必構成有效量,因為必需的有效量可以藉由給予多個劑量單位達到。可以與載體材料組合以產生單一劑型的活性劑的量將根據所治療的受試者、以及特定的給予模式
而變化。可以與載體材料組合以產生單一劑型的活性劑的量通常為產生治療效果的組成物的量。通常,在百分之百的範圍內,該量範圍可以為與藥學上可接受的載體組合的從約0.01%至約99%的活性劑,從約0.1%至約70%,或從約1%至約30%的活性劑。
本發明的藥物組成物可以包括「治療有效量」或「有效量」的本文描述的C1orf54多肽或其變體。如本文所用,術語「有效量」、「有效劑量」、「藥學有效量」、「藥學有效劑量」、「治療有效量」或「治療有效劑量」(等等)可互換使用並且旨在指本文描述的C1orf54多肽或其變體的量/劑量,所述量/劑量在必要的劑量和必要的時間段內足以提供相對於肌肉相關疾病或障礙的臨床可觀察體征和症狀的基線可觀察到的或臨床顯著的改善,和/或足以預防、抑制發生、減輕、延遲、緩解、阻止、逆轉或治療與肌肉相關疾病或障礙有關的一種或多種症狀。有效量取決於疾病的類型、使用的組成物、給予途徑、所治療的哺乳動物的類型、所考慮的具體哺乳動物的身體特徵、同時用藥以及其他因素(如醫學領域的技術人員認識到的個體的疾病狀態、年齡、性別和體重)。治療有效量也是治療有益效果超過治療劑的任何毒性或有害作用的量。可以藉由細胞培養或實驗動物中的標準製藥程序來確定此類化合物的毒性和治療效果,例如,用於確定LD50(使50%的群體致死的劑量)和ED50(在50%的群體中治療有效的劑量)。在毒性和治療效果之間的劑量比為治療指數,它可以表示為比率LD50/ED50。表現出大的治療指數的化合物係較佳的。儘管可以使用表現出有毒副作用的化合物,但是應該小心設計將此類化合物靶向至受影響的組織的部位的遞送系統,從而將對未感染的細胞的潛在損傷最小化,並且由此減少副作用。從細胞培養測定和動物研究獲得的數據可以用於配製一系列的用於在人類中使用的劑量。較佳的是此類化合物的劑量處於包括ED50在內的有很小毒性或沒有毒性的循環濃度範圍內。所述劑量可根據所應用的劑型和所使用的給予途徑在
該範圍內變化。對於用於本發明方法的任何化合物,均可根據細胞培養測定初步估計治療有效劑量。劑量可以在動物模型中被配製以達到在細胞培養中確定的循環血漿濃度範圍,該範圍包括IC50(即,所述測試化合物完成半最大症狀的抑制的濃度)。此類資訊可用於更精確地確定在人中有用的劑量。可以例如藉由高效液相層析法來測量血漿中的水平。在另一個實施方式中,術語「治療有效量」係指本發明的C1orf54多肽或其變體的以下量,當給予至細胞、或組織、或非細胞生物材料、或介質時,所述量有效地至少部分充當細胞、組織或非細胞生物材料的肌肉因子。
如本文所用,關於疾病或障礙的術語「預防(prevent、preventing或prevention)」係指對處於發展病症(例如,具體疾病或障礙或其臨床症狀)風險中的受試者進行預防性治療,導致該受試者發展病症的可能性降低。在一些實施方式中,所揭露的組成物、用途、套組、方法和化合物用於患者的預防性治療。
如本文所用,關於肌肉相關障礙的術語「治療(treat、treating或treatment)」在一個實施方式中,係指減輕疾病或障礙(即,減慢或阻止或減少疾病或其至少一種臨床症狀的發展)。在另一個實施方式中,「治療(treat、treating或treatment)」係指緩解或減輕至少一種身體參數、包括不能被患者辨別的那些。在又另一個實施方式中,「治療(treat、treating或treatment)」係指在身體上(例如,可辨別的症狀的穩定化)、在生理上(例如,身體參數的穩定化)或二者調節疾病或障礙。在又另一個實施方式中,「治療(treat、treating或treatment)」係指延遲肌肉相關障礙的發作或發展或進展。
在本文描述的所有方法能夠以任何合適順序進行,除非本文另外指明或另外與上下文明顯相矛盾。本文提供的任何和所有實例或示例性語言(例
如「如」)的使用僅旨在更好地說明本發明,而不對另外要求保護的本發明範圍做出限制。
[圖1]:人C1orf54(UniProt ID Q8WWF1)(SEQ ID NO:1)與同源蛋白(按出現的順序分別為SEQ ID NO:46-68)的比對。於2015年8月18日從www.uniprot.org(The UniProt Consortium[UniProt協會](2017),Nucleic Acids Research[核酸研究],45(D1):D158-D169)或www.ensembl.org(Zerbino等人(2018)Nucleic Acids Research[核酸研究],46(D1):D754-D761)分別檢索序列,並使用MUSCLE演算法(Edgar(2004)Nucleic Acids Research[核酸研究],32(5):1792-1797)在Jalview(Waterhouse等人(2009)Bioinformatics[生物資訊學],25(9):1189-1191)中比對序列。
[圖2]:與靜坐小鼠相比,運動小鼠的股四頭肌中C1orf54 mRNA水平的增加。C1orf54 mRNA水平在運動後立即升高,並在停止運動後30、60和180分鐘保持升高。n=7-8隻小鼠/組。所有值均表示為平均值±SEM。使用limma-voom Bioconductor套裝程式對每百萬讀數計數進行差異分析。使用Benjamini和Hochberg多重檢驗校正來調整所有p值。與靜坐組的統計學顯著差異指示如下:**p<0.01,***p<0.001。FPKM=每百萬映射讀數每千鹼基轉錄物片段。
[圖3]:響應於單獨或組合的不同運動範例,來自年輕受試者的人骨骼肌中C1ORF54 mRNA水平的增加。顯示了來自年輕參與者組的每名受試者訓練前和訓練後的個體值。n=7-11名參與者/組。CT組中的一名受試者被排除在統計分析之外,因為沒有可獲得的訓練後的值。使用Benjamini和Hochberg多重檢驗校正來調整所有p值。與訓練前的統計學顯著差異指示如下:*p<0.05,**p<0.01。FPKM=每百萬映射讀數每千鹼基轉錄物片段,HIIT=高強度有氧間歇訓練,RT=阻力訓練,CT=組合運動訓練。
[圖4]:在用媒介物(PBS)或以指定劑量在媒介物中配製的分離的蛋白質(包含胺基酸序列SEQ ID NO:25)處理的小鼠的腓腸肌中Myod1 mRNA的變化。n=5隻小鼠/組。所有值均表示為平均值±SEM。藉由單因素方差分析(one-way ANOVA),隨後藉由費希爾(Fisher)LSD評估統計學顯著差異,並指示如下:*p<0.05。Mpk=每千克體重毫克。
[圖5]:用指定劑量的重組全長人C1orf54(SEQ ID NO:2,邁生物資源公司(My Biosources),參考MBS1284901)或媒介物處理6小時後,人成肌細胞中MYOD1 mRNA的劑量依賴性降低。值表示為平均值±SEM,n=每組4隻。藉由單因素方差分析和Tukey事後檢驗評估統計學顯著差異,並指示如下:與緩衝液對照相比,**p<0.01,***p<0.001;如圖中所示比較的# p<0.05,## p<0.01,### p<0.001。
[圖6A]:響應於用媒介物或1mg/kg C1orf54分離的蛋白質(包含胺基酸序列5EQ ID NO:25)處理的絕對肌力的增加。[圖6B]:響應於用媒介物或1mg/kg C1orf54分離的蛋白質(包含胺基酸序列SEQ ID NO:25)處理的比力的增加。藉由歸一化腓腸肌重量的絕對肌力來計算比肌力。對於圖A和B,n=9隻小鼠/組。所有值均表示為平均值±SEM。藉由多重非配對t檢驗比較評估統計學顯著差異,並指示如下:*p<0.05和**p<0.01。
[圖7]:用媒介物或C1orf54分離的蛋白質(包含胺基酸序列SEQ ID NO:25)處理後,小鼠腓腸肌中Pax7陽性衛星細胞的數量。值表示為平均值±SEM,n=9-10隻小鼠/組。藉由非配對t檢驗評估統計學顯著差異,並指示如下:**p<0.01。
[圖8]:在含有1% FBS的生長培養基中用1μg/mL重組全長人C1orf54蛋白(SEQ ID NO:2,邁生物資源公司,參考MBS1284901)(正方形)和溶劑對照(圓形)處理的原代人成肌細胞的生長曲線(以百分比鋪滿(confluence))。值表示為平均值±SEM,n=每組6隻。藉由多重非配對t檢驗比較評估統計學顯著差異,並指示如下:*p<0.05,**p<0.01和***p<0.001。
本發明部分地基於以下發現:C1orf54多肽或其變體具有肌肉因子活性。已經發現響應於運動,在受試者的骨骼肌中C1ORF54 mRNA的表現水平增加。
因此,本發明提供了其具有肌肉因子活性的C1orf54變體。本發明還提供了C1orf54多肽或其變體,所述C1orf54多肽或其變體用於作為藥物使用。本發明還提供了C1orf54多肽或其變體,所述C1orf54多肽或其變體用於在療法中使用或用於在製備藥物中使用。本發明還提供了包含C1orf54多肽或其變體的藥物組成物,該藥物組成物用於在治療、預防或減輕肌肉相關障礙中使用。因此,本發明提供了非常需要的具有肌肉因子活性的C1orf54多肽及其變體以及新型治療方法。
進一步提供了包含如本文描述的C1orf54多肽或其變體(例如呈液體或凍乾形式)的套組或包含如本文描述的C1orf54多肽或其變體的藥物組成物。
本發明進一步提供了治療、預防或減輕肌肉相關障礙的方法,所述方法包括向有需要的受試者給予有效量的具有肌肉因子活性的分離的C1orf54多肽或其變體。
在一個實施方式中,本發明提供了編碼如下胺基酸序列的多核苷酸分子,該胺基酸序列與選自SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列具有至少90%或至少95%序列同一性,其中所述胺基酸序列編碼具有肌肉因子活性的C1orf54變體。
還提供了產生重組多肽的方法,所述重組多肽的胺基酸序列與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列係至少80%、85%、90%、95%、97%、99%或100%相同的;或者由核酸編碼的胺基酸序列,所述核酸與SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18的多核苷酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、97%、99%或100%序列同一性,所述方法包括:a)提供與異源調控序列可操作地連接的核酸序列;和b)在允許多肽表現的條件下表現(a)的核酸,從而產生重組多肽。還提供了包含選自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18的多核苷酸的載體,所述多核苷酸編碼如上述方法中所述與異源啟動子可操作地連接的C1orf54多肽及其產生的變體(例如,包含胺基酸SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的C1orf54多肽及其變體)。還提供了包含一種或多種所述載體的分離的宿主細胞。還提供了用於根據上述方法產生C1orf 54多肽或其變體的方法,所述方法包括(a)培養包含一種或多種所述載體的宿主細胞;和(b)回收所述C1orf54多肽或其變體。
可替代地,提供了產生重組多肽的方法,所述重組多肽的胺基酸序列與SEQ ID NO:10-14的胺基酸序列係至少80%、85%、90%、95%、97%、99%或100%相同的;或者由核酸編碼的胺基酸序列,所述核酸與SEQ ID NO:19-23的多核苷酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、97%、99%或100%序列同一性,所述方法包括:a)提供與異源調控序列可操作地連接的核酸序列;和b)在允許多肽表現的條件下表現(a)的核酸,從而產生重組多肽。還提供了包含選自SEQ ID NO:19-23的多核苷酸的載體,所述多核苷酸編碼所述與異源啟動子可操作地連接的C1orf54多肽及其產生的變體(例如,包含胺基酸SEQ ID NO:10-14的C1orf54多肽及其變體)。還提供了包含一種或多種所述載體的分離的宿主細胞。還提供了用於根據上述方法產生C1orf 54多肽或其變體的方法,所述方法包
括(a)培養包含一種或多種所述載體的宿主細胞;和(b)回收所述C1orf54多肽或其變體。
其他研究者先前描述了編碼C1orf54的多核苷酸的選殖和分離(Gregory等人,(2006)Nature[自然]441,315-321,Hartley等人,(2000)Genome Res[基因組研究]10,1788-1795,Strausberg等人,(2002)Proc Natl Acad Sci U S A[美國國家科學院院刊]99,16899-16903)以及編碼的多肽被分泌的事實(WO 1998/42738、WO 1999/18127、EP 1104808)。
根據本發明,可以使用各種C1orf54多肽及其變體。本發明考慮使用具有肌肉因子活性的各種C1orf54多肽及其變體。在一些實施方式中,本發明提供了全長C1orf54多肽胺基酸序列或其變體的用途。在一些實施方式中,本發明提供了C1orf54多肽,所述C1orf54多肽包含保留肌肉因子活性的C1orf54序列或其變體的一部分(不是全長序列)。因此,在一些實施方式中,本發明的C1orf54多肽包含具有肌肉因子活性的人(例如SEQ ID NO:2)C1orf54蛋白序列的至少一個片段(例如至少60、至少65、至少70、至少75、至少80、至少85、至少90、至少95、至少100、至少105、至少110個連續胺基酸)。
在一些實施方式中,本發明的C1orf54蛋白包含天然小鼠(例如SEQ ID NO:24)、犬(例如SEQ ID NO:32)、牛(例如SEQ ID NO:33)或馬(例如SEQ ID NO:31)C1orf54多肽序列的至少一個片段(例如至少60、至少65、至少70、至少75、至少80、至少85、至少90、至少95、至少100、至少105、至少110個連續胺基酸)。
在一些實施方式中,本發明提供了缺少C末端序列的至少一部分(例如,從C末端缺少至少10、20、30、40、50個胺基酸,例如,10、20、30、40、50個胺基酸)的C1orf54多肽變體(包括但不限於SEQ ID NO:1-14中的任一個)。
在一些實施方式中,本發明提供了缺少N末端序列的至少一部分(例如,從N末端缺少至少10、20、30、40、50個胺基酸,例如,10、20、30、40、50個胺基酸)的C1orf54多肽變體(包括但不限於SEQ ID NO:1-14中的任一個)。
本發明的C1orf54多肽涵蓋天然存在的C1orf54多肽的變體和截短,以及本文所述的具有肌肉因子活性的C1orf54多肽變體的變體和截短。本發明涵蓋在本發明的方法中使用具有肌肉因子活性的天然存在的C1orf54多肽的C1orf54多肽變體和截短。具有肌肉因子活性的活性變體可以以任何數量的熟悉該項技術者已知的方式(例如,如本文所述的)進行鑒定。在一些實施方式中,可以建立活性蛋白質的胺基酸比對以鑒定那些不變的或包括保守胺基酸變化的位置。
因此,本發明的一個方面提供了由如下胺基酸序列組成的分離的多肽,該胺基酸序列與SEQ ID NO:3的胺基酸序列具有至少95%、至少97%或至少99%胺基酸序列同一性,其中該多肽具有肌肉因子活性。
本發明的另一個方面提供了由如下胺基酸序列組成的分離的多肽,該胺基酸序列與SEQ ID NO:4的胺基酸序列具有至少95%、至少97%或至少99%胺基酸序列同一性,其中該多肽具有肌肉因子活性。
在一個實施方式中,提供了分離的多肽,該分離的多肽包含選自SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的組的胺基酸序列或由其組成,並且其中在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸,並且其中該多肽具有肌肉因子活性。
在另一個實施方式中,本發明提供了由SEQ ID NO:3的胺基酸序列組成的分離的多肽,並且其中該多肽具有肌肉因子活性。
在另一個實施方式中,本發明提供了由SEQ ID NO:4的胺基酸序列組成的分離的多肽,並且其中該多肽具有肌肉因子活性。
本發明的C1orf54多肽還可包括非天然C1orf54蛋白側翼序列。例如,具有肌肉因子活性的C1orf54多肽的一部分可以與一個或多個異源胺基酸融合以形成融合蛋白。融合伴侶序列可包括但不限於胺基酸標籤,非L(例如D-)胺基酸或其他胺基酸模擬物以延長體內半衰期和/或蛋白酶抗性,靶向序列或其他序列,例如人免疫球蛋白Fc片段。在一個實施方式中,本發明提供了與一個或多個異源胺基酸、肽或蛋白質融合的C1orf54多肽,其中所述異源胺基酸、肽或融合蛋白伴侶可包括胺基酸標籤、體內半衰期延長劑、靶向序列、人免疫球蛋白Fc片段。
在另外的實施方式中,根據本發明的分離的C1orf54多肽(例如,由選自SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的組的胺基酸序列組成的分離的C1orf54多肽)具有肌肉因子活性,其中所述肌肉因子活性包括肌肉功能增加活性。
在另一個實施方式中,根據本發明的分離的C1orf54多肽(例如,由選自SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的組的胺基酸序列組成的分離的C1orf54多肽)具有肌肉因子活性,其中所述肌肉因子活性包括肌肉強度增加活性。
在又另一個實施方式中,根據本發明的分離的多肽(例如,由選自SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的組的胺基酸序列組成的分離的C1orf54多肽)具有肌肉因子活性,其中所述肌肉因子活性包括肌肉再生改善活性。
藥物組成物
本文提供了包含具有肌肉因子活性的分離的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的C1orf54多肽或其變體)的藥物組成物,該藥物組成物與藥學上可接受的載體、
賦形劑或稀釋劑一起配製。所述組成物可另外含有適用於治療醫學病症的一種或多種其他治療劑。
本文描述的藥物組成物可藉由本領域已知的各種方法給予。給予途徑和/或模式可以根據所希望的結果而變化。根據給予途徑,所述具有肌肉因子活性的C1orf54多肽或其變體可以包被在材料中以保護化合物免受酸和可能使化合物失活的其他自然條件的作用。因此,在另一個方面,本發明提供了如下組成物(例如藥物組成物),所述組成物含有本文揭露的C1orf54多肽或其變體以及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
因此,提供了如下藥物組成物,該藥物組成物包含藥學有效量的至少一種選自以下的多肽:
i.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
ii.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
iii.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列組成的多肽;
iv.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列的多肽;和
v.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸;並且
其中所述多肽具有肌肉因子活性;以及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
還提供了如下藥物組成物,該藥物組成物包含至少一種選自以下的多肽:
i.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
ii.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
iii.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列組成的多肽;
iv.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列的多肽;
v.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸;並且
其中所述多肽具有肌肉因子活性;以及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在另一個實施方式中,所述藥物組成物用於在治療肌肉相關障礙中使用。在一個實施方式中,所述肌肉因子活性包括肌肉功能增加活性。在一個實施方式中,所述肌肉功能增加活性藉由本文描述的測定確定。在另一個實施方式中,所述肌肉因子活性可包含肌肉強度增加活性。在另一個實施方式中,所述肌肉強度增加活性藉由本文描述的測定確定。在又另一個實施方式中,所述肌肉因子活性可包含肌肉再生改善活性。在又另一個實施方式中,所述肌肉再生改善活性藉由本文描述的測定確定。在另一個實施方式中,所述肌肉因子活性可包含肌肉強度增加活性和肌肉再生改善活性。在一個實施方式中,本文提供的藥物組成物用於在治療肌肉相關障礙中使用。在一個實施方式中,本文提供的藥物組成物用於在治療肌肉相關障礙中使用,所述肌肉相關障礙選自以下或由以下引起:肌肉萎縮、骨科損傷、肌肉損傷、肌肉無力、心臟衰竭、化學療法、和中風後遺症、繼發性肌肉喪失、肌肉減少症、惡病質、肥胖或代謝症候群。
在一個實施方式中,所述組成物與藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑一起配製。
調整劑量方案以提供最佳的所希望反應(例如,治療反應)。例如,如由治療情況的緊急狀態所指示的,可以給予單次推注,可以隨著時間的過去給予若干個分次劑量,或可以按比例地減少或增加劑量。如本文所用的劑量單位形式係指適合作為用於待被治療的受試者的單元劑量的物理上離散的單位;每個單位含有經計算與所要求的藥物載體聯合產生所希望的治療效果的預定量的活性化合物。本發明劑量單位形式的規格係藉由以下指定並且直接取決於以下:活性化合物的獨特特徵和有待實現的特定治療效果,以及在混配此類活性化合物用於治療個體的敏感性的領域中的固有限制。治療有效量的C1orf54多肽或其變體或者包含所述C1orf54多肽或其變體的藥物組成物在從約0.001至150mg/kg、或0.01至30mg/kg、且更通常為0.1至10mg/kg宿主體重的範圍內。技術人員知道鑒定合適的有效劑量,其將根據給予途徑(例如靜脈內給予或皮下給予)而變化。在一些全身給予方法中,調整劑量以達到1-1000μg/ml的C1orf54多肽或其變體的血漿濃度,並且在一些方法中達到25-500μg/ml。可替代地,所述組成物可以是持續釋放製劑,在這種情況下需要不太頻繁的給予。劑量和頻率根據患者中C1orf54多肽或其變體的半衰期而不同。給予的劑量和頻率可以根據治療係預防性還是治療性而變化。在預防性應用中,例如,在長時間段內以相對不頻繁的間隔給予相對較低的劑量。在治療性應用中,例如,有時需要以相對較短的間隔給予相對較高的劑量直至疾病進展減少或終止,或者直至患者顯示疾病症狀的部分或完全減輕。此後,可以向患者給予預防性方案。可以改變本文提供的藥物組成物中活性劑的實際劑量水平,以便獲得一定量的活性劑,所述活性劑的量有效地實現對於特定的患者、組成物和給予模式的所希望的治療反應,而對患者沒有毒性。所選擇的劑量水平將取決於各種藥物動力學因素,包括所採用的本發明特定組成物的活性、或給予途徑、給予時間、所採用的特定化合物的排泄速率、治療持續時間、與所採用的特定組成物組合的其他藥物、化合物和/或
材料、所治療患者的年齡、性別、體重、狀況、一般健康狀況和先前病史、以及醫學領域中已知的類似因素。示例性治療方案需要每天至少一次、每週至少一次、每兩週至少一次、每三週至少一次、每四週至少一次、每月至少一次、每3個月至少一次或每三到6個月至少一次給予。給予治療有效劑量的包含在本發明組成物中的C1orf54多肽或其變體可導致疾病症狀的嚴重程度降低,疾病無症狀期的頻率和持續時間增加,或預防由於疾病折磨引起的損害或殘疾,即增加肌肉強度和/或肌肉的再生能力。
患者將接受有效量的C1orf54多肽或其變體,即足以治療、減輕或預防所討論的肌肉相關障礙的量。治療效果還可包括身體症狀的減少。治療效果可以模仿運動的效果。劑量可以藉由單劑量方案或多劑量方案進行。劑量可以間歇性地進行。在間歇給藥期間,向患者給予治療有效劑量的如本文描述的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽),從而誘導如本文描述的C1orf54的生物學活性,隨後是不向所述患者給予C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中)的時期,這使得C1orf54的生物學活性與誘導狀態相比降低。在一個實施方式中,間歇給藥方案包括至少兩個週期,每個週期包括(a)給藥期,在此期間將治療有效量的如本文描述的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)給予患者和之後(b)停藥期。
可以使用本領域已知的各種方法中的一種或多種,藉由一種或多種給予途徑給予本發明的組成物。如熟悉該項技術者將理解的,給予途經和/或模式將根據所希望的結果而變化。本發明的治療蛋白的給予途徑包括靜脈內、肌內、皮內、腹膜內、皮下、局部遞送、脊柱或其它腸胃外給予途徑,例如藉由注
射或輸注。在一個實施方式中,靜脈內給予C1orf54多肽或其變體或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物。在另一個實施方式中,皮下給予C1orf54多肽或其變體或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物。在另一個實施方式中,肌內給予C1orf54多肽或其變體或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物。
本發明的用途和方法
C1orf54多肽或其變體(例如,如本文揭露的)或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物具有治療效用。例如,該等分子可以被給予至受試者,並且可以用於治療疾病、預防和/或延遲疾病症狀的發作。本發明提供了C1orf54多肽或其變體(例如,如本文揭露的)或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物用於在療法中使用或用於作為藥物使用。本發明進一步提供了C1orf54多肽或其變體(例如,如本文揭露的)或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物用於在治療病理性障礙(例如肌肉相關障礙)中使用。本發明進一步提供了C1orf54多肽或其變體(例如,如本文揭露的)或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物用於在製造治療病理性障礙(例如肌肉相關障礙)的藥物中使用。在一個實施方式中,本發明涉及C1orf54多肽或其變體(例如,如本文揭露的)或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物用於增加肌肉功能。在一個特定的實施方式中,所述肌肉功能包括增加的肌肉強度。在特定的實施方式中,本發明涉及C1orf54多肽或其變體(例如,如本文揭露的)或者包含所述C1orf54多肽或其變體的組成物用於在有需要的患者中增加肌肉強度。增加肌肉強度的需要可以由本文提及的病症中的一種(特別是由於肌肉相關障礙)引起,或者可以由本文未提及的病症(例如,病理性病症)引起,儘管如此其仍受益於增加的肌肉功能。在另一個實施方式中,所述肌肉功能包括改善的肌肉再生。在另一個實施方式中,所述肌肉功能包括增加的肌肉強度和改善的肌肉再生。
在一個方面,本發明提供了如本文描述的C1orf54多肽或其變體,所述C1orf54多肽或其變體用於在療法中使用。因此,本發明提供了選自以下的多肽:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸,
該多肽用於作為藥物使用。
在一個實施方式中,C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)具有肌肉因子活性。在另外的實施方式中,C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)用於在治療受試者的肌肉相關障礙中使用。
在另一個方面,本發明提供了如本文描述的C1orf54多肽或其變體,所述C1orf54多肽或其變體用於在製造藥物中使用。本發明提供了選自以下的多肽:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸,
該多肽用於在製造藥物中使用。
在一個實施方式中,用於在製造藥物中使用的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)具有肌肉因子活性。在另外的實施方式中,C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)用於在製造治療受試者的肌肉相關障礙的藥物中使用。
在另外的方面,本發明提供了用於在治療受試者的肌肉相關障礙中使用的多肽或其變體,其中所述治療包括向該受試者給予選自以下的多肽:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸;
並且其中所述多肽具有肌肉因子活性。
在另一個方面,本發明提供了用於在治療受試者的肌肉相關障礙中使用的多肽或其變體,其中所述治療包括向該受試者給予有效量的選自以下的多肽:
f.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
g.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
h.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列組成的多肽;或
i.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列的多肽;其中所述多肽具有肌肉因子活性。
本發明進一步提供了治療患有病理性障礙(例如肌肉相關障礙)的患者的方法,所述方法包括向所述患者給予治療有效量的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)或者包含所述C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)的藥物組成物。因此,本發明提供了治療肌肉相關障礙的方法,所述方法包括給予治療有效量的如本文描述具有肌肉因子活性的C1orf54多肽或其變體(例如具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽),由此所述肌肉因子活性包括肌肉功能增加活性。所述肌肉功能包括肌肉強度和/或肌肉再生。在特定的實施方式中,本發明涉及用於增加肌肉強度的方法。在另一個實施方式中,所述肌肉功能包括改善的肌肉再生。在另一個實施方式中,所述肌肉功能包括增加的肌肉強度和改善的肌肉再生。增加肌肉強度的需要可以由本文提及的病症中的一種(特別是由於肌肉相關障礙)引起,或者可以由本文未提及的病症(例如,病理性病症)引起,儘管如此其仍受益於增加的肌肉功能。
因此,本發明提供了治療肌肉相關障礙的方法,所述方法包括給予如本文描述的C1orf54多肽或其變體。本發明提供了治療受試者的肌肉相關障礙的方法,其中所述方法包括向該受試者給予治療有效量的選自以下的多肽:
a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;
b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;
c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列組成的多肽;
d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%同一性的胺基酸序列的多肽;和
e.包含胺基酸序列或由胺基酸序列組成的多肽,其中在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸;
並且其中所述多肽具有肌肉因子活性。
在以下部分中,描述了上述用途和方法的各個方面和實施方式,並且所有該等方面和實施方式可以組合在一起。技術人員認識到,以下頁面上揭露的教導都可以彼此組合,並且組合來自該等頁面各個部分的特徵的特定方面和實施方式將被認為係向技術人員充分揭露的。
本發明的分離的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)表現出肌肉因子活性,例如,如本文提供的體外和體內測試所指示,例如,如進行本發明的模式所述,並且因此指示用於療法或者體內或體外使用。尤其考慮的是受益於肌肉功能(如肌肉強度)增加和/或受益於改善的肌肉再生的疾病和障礙。
因此,本發明提供了如本文描述的C1orf54多肽及其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增加肌肉強度。
本發明還提供了如本文描述的C1orf54多肽及其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於作為增加肌肉強度的藥物使用。
此外,本發明提供了用於增加有需要的受試者的肌肉強度的方法,所述方法包括給予有效量的如本文描述的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)。
骨骼肌係具有高可塑性和對運動的高響應性的組織。衛星細胞(肌肉前驅細胞)通常在運動和受傷時被激活,並且在肌肉組織的重塑中起關鍵作用。MyoD係決定衛星細胞命運的關鍵轉錄因子,主要是藉由驅動衛星細胞進入分化。與野生型細胞相比,缺少MyoD的肌肉前驅細胞恢復了更多的幹細胞樣表型以及在注射到受損肌肉後具有顯著更高的效率的移植。此外,缺少MyoD的衛星細胞可在肌纖維的基底層下面檢測到,並在移植後顯示出增加的增殖和存活(Asakura等人,(2007)Proc Natl Acad Sci USA[美國國家科學院院刊]104,16552-16557)。因此,希望的是暫態降低MyoD。本發明的C1orf54多肽在體外(實例5,圖5)或體內(實例4,圖4)降低MyoD的水平。
因此,本文提供了具有肌肉因子活性的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增加有需要的受試者的肌肉功能的用途,所述用途包括向該受試者給予此類多肽或藥物組成物,其中給予所述多肽或藥物組
成物降低了MyoD的水平,從而促進了受試者中肌肉功能的增加、肌肉強度的適當增加和/或改善的肌肉再生。
在另一個實施方式中,提供了治療肌肉相關障礙的方法,所述方法包括給予治療有效量的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽),其中給予所述多肽降低了MyoD的水平,從而促進了受試者中肌肉功能的增加、肌肉強度的適當增加和/或改善的肌肉再生。
在一個實施方式中,如本文描述的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於刺激成肌細胞的增殖和/或用於增加衛星細胞的頻率或數量。所述用途可以是體內或體外用途,較佳的是體內用途。
因此,在一個實施方式中,本文提供了具有肌肉因子活性的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增加有需要的受試者的肌肉功能的用途,所述用途包括向該受試者給予所述多肽或藥物組成物,其中給予所述多肽或藥物組成物刺激了成肌細胞的增殖,從而促進了受試者中肌肉功能的增加、肌肉強度的適當增加和/或改善的肌肉再生。
在另外的實施方式中,本發明還提供了具有肌肉因子活性的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增加有需要的受試者的肌肉功能的用途,所述用途包括向該受試者給予所述多肽或藥物組成物,其中給予所述多肽或藥物組成物增加了受試者的骨骼肌幹細胞或衛星細胞的頻率或數量,從而促進了受試者中肌肉功能的增加、肌肉強度的適當增加和/或改善的肌肉再生。
在另一個實施方式中,本發明提供了治療肌肉相關障礙的方法,所述方法包括給予治療有效量的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽),其中給予所述多肽刺激了成肌細胞的增殖,從而促進了受試者中肌肉功能的增加、肌肉強度的適當增加和/或改善的肌肉再生。
在又另一個實施方式中,本發明提供了治療肌肉相關障礙的方法,所述方法包括給予治療有效量的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽),其中給予所述多肽增加了受試者的骨骼肌幹細胞或衛星細胞的頻率或數量,從而促進了受試者中肌肉功能的增加、肌肉強度的適當增加和/或改善的肌肉再生。
在一個實施方式中,本發明還提供了用於促進衛星細胞自我更新和/或分化的體外方法,所述方法包括如下步驟:向包含衛星細胞的分離的生物樣品給予有效量的分離的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)。在另外的實施方式中,提供了用於刺激衛星細胞增殖和/或分化為成肌細胞的方法,所述方法包括使所述細胞與一定量的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)接觸一段時間並在足以使所述衛星細胞增殖和/或分化成成肌細胞的條件下進行。在一個實施方式中,本發明還提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)的體外用途,用於促進成肌細胞生長。在一個實施方式中,提供了用於促進成肌細胞生長的體外方法,所述方法包括向包含成肌細胞的分離的生物樣品給予有效量的C1orf54多肽或其變體(例如包含
SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)。所述生物樣品可以是人骨骼肌源細胞(hSkMDC)。
在另一個實施方式中,本發明提供了用於鑒定促進衛星細胞自我更新和/或分化的藥劑或藥劑的組合的體外篩選方法,所述方法包括以下步驟:
a)使分離的衛星細胞與候選藥劑或候選藥劑的組合接觸;
b)評估所述細胞的細胞表型;
c)比較步驟b)中的細胞表型與不存在所述藥劑或藥劑的組合的情況下的衛星細胞的表型,和/或與分離的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)接觸的衛星細胞的表型。
根據較佳的實施方式,C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)用於在受肌肉相關障礙影響的受試者中使用。在另一個較佳的實施方式中,本發明提供了包含C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)的藥物組成物用於在受肌肉相關障礙影響的受試者中使用。在另一個較佳的實施方式中,提供了治療患有肌肉相關障礙的受試者的方法,所述方法包括給予治療有效劑量的如本文描述的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽)。
已經顯示大量肌肉相關障礙導致肌肉功能障礙。該等肌肉相關障礙包括但不限於一種或多種肌肉骨骼疾病或障礙,如所有原因引起的肌肉萎縮,包括遺傳性或隱性肌病(例如肌營養不良)和藥物誘導性肌病(例如由用糖皮質激素治療引起)的肌病,肌肉耗損疾病(如惡病質,其可以由潛在疾病(如獲得性免疫缺陷疾病[AIDS]、充血性心臟衰竭、類風濕性關節炎、癌症、慢性阻塞性肺病[COPD]、肝衰竭或肝硬化、燒傷、敗血症)引起),長期廢用(例如,由
於麻痹、神經損傷、昏迷、臥床休息和ICU住院引起),骨科損傷,肌肉損傷,手術(如關節置換手術)誘導的無力,化學療法,中風後遺症,橫紋肌溶解,年齡相關性肌肉萎縮或衰減病症(如可能是衰老導致的肌肉減少症),肥胖,代謝症候群,糖尿病,心血管損傷或疾病,內分泌紊亂或免疫紊亂。
在某些實施方式中,本發明提供了方法中的化合物和藥物組成物或者用於在治療肌肉相關障礙中使用的化合物和藥物組成物,所述肌肉相關障礙包括但不限於任何原因引起的肌肉萎縮、肌病、肌肉耗損疾病、長期廢用、骨科損傷、肌肉損傷、肌肉無力、化學療法、中風後遺症、慢性心臟衰竭、橫紋肌溶解、年齡相關性病症(例如肌肉減少症)、繼發性肌肉喪失、肥胖和/或代謝症候群。此類用途或方法包括向有需要的受試者給予有效量的具有肌肉因子活性的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)。
在一個實施方式中,肌肉相關障礙係肌肉耗損。肌肉耗損係通用術語,用於描述由各種疾病、障礙、其他病症或事件引起的骨骼肌組織的無意識喪失所標記的病症。造成肌肉耗損的原因有很多,包括肌病,藥物誘導性肌病,由於神經創傷或退行性、代謝性或炎症性神經病變導致的去神經支配,以及年齡相關性肌肉萎縮或衰減病症。
在一個實施方式中,肌肉萎縮係由肌病引起的,如肌強直;先天性肌病,包括線狀體肌病、多/微小軸空肌病和肌小管(中央核)肌病、良性先天性張力減退、中央軸空疾病(又稱為中央軸空肌病);線粒體肌病(例如卡恩斯-塞爾綜合症);家族性週期性麻痹;炎症性肌病;代謝性肌病,如由糖原或脂質貯積病引起;皮肌炎;多肌炎;包涵體肌炎(例如散發性包涵體肌炎和遺傳性包涵體肌病);骨化性肌炎;橫紋肌溶解和肌紅蛋白尿。肌病可以是由肌營養不良綜合徵引起的,如杜興氏肌肉失養症,貝氏肌營養不良,強直性肌肉營養不
良症,面肩肱型肌營養不良,埃-德二氏肌營養不良,眼咽型肌營養不良,肢帶肌肉失養症,先天性肌營養不良(例如分區蛋白缺陷型先天性肌營養不良、貝特萊姆型肌病(Bethlem myopathy)、Ullrich型先天性肌營養不良,福山型先天性肌營養不良),脊柱型肌營養不良,脊柱強直型肌營養不良,遠端型肌營養不良,肌聚糖病或遺傳性遠端型肌病。
在一個實施方式中,肌肉萎縮係藥物誘導性肌病,例如由於用糖皮質激素(如皮質醇、地塞米松、倍他米松、潑尼松、甲基強的松龍或潑尼松龍)治療引起的。
在一個實施方式中,肌肉萎縮係由於神經創傷或退行性、代謝性或炎症性神經病變導致的去神經支配的結果,包括神經肌肉疾病、障礙或損傷(例如運動神經元疾病,如肌萎縮性側索硬化、嬰兒脊柱型肌肉萎縮、青少年脊柱型肌肉萎縮、多灶性傳導阻滯的自身免疫性運動神經病),帕金森氏症,杭丁頓氏症,重症肌無力,中央核肌病(例如X連鎖肌小管肌病),自身免疫性神經退行性疾病(例如格-巴二氏綜合症(Guillain Barre Syndrome),慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病,蘭伯特-伊頓肌無力綜合症(Lambert-Eaton myasthenia syndrome)),克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)以及由於中風或脊椎損傷導致的麻痹。
在一個實施方式中,肌肉萎縮係年齡相關性肌肉萎縮或衰減病症,所述病症受益於肌肉功能的增加。可以治療的肌肉相關障礙的實例包括與衰老/老化相關的那些,包括但不限於肌肉減少症、皮膚萎縮、肌肉耗損、廢用型肌肉萎縮、動脈粥樣硬化、動脈硬化、肺氣腫、骨質疏鬆症、骨關節炎、免疫無活性、高血壓、失智、杭丁頓氏症、阿茲海默氏症、白內障、年齡相關性黃斑變性、癌症、中風、虛弱、腎功能受損和年齡相關性聽力喪失。
在本發明的一個實施方式中,肌肉相關障礙係由骨骼固定(例如由於創傷、臥床休息、自願不活動、非自願不活動、損傷),營養不足(例如禁食或饑餓),心肌病,心肌梗塞,心絞痛,癌症,HIV耗損綜合症,或內分泌紊亂(如甲狀腺或腎上腺或垂體腺障礙)引起的。
在一個實施方式中,肌肉相關障礙係代謝性障礙,包括II型糖尿病、糖尿病相關肌肉萎縮、代謝症候群/綜合症X/胰島素抗性綜合症、高血糖、肥胖和肥胖相關的肌肉減少症。
在一個實施方式中,肌肉相關障礙係急性肌肉耗損疾病,如嚴重和中度燒傷中所見,包括患有瘦體重喪失和/或肌肉耗損的成人和小兒燒傷或者患有敗血症和加護病室(ICU)獲得性無力的患者。
在一個實施方式中,肌肉相關障礙係可以由潛在疾病引起的惡病質,該等潛在疾病如獲得性免疫缺陷疾病[AIDS]、充血性心臟衰竭、類風濕性關節炎、癌症、慢性阻塞性肺病[COPD]、硬化、燒傷、敗血症、多發性硬化症、肺結核、人類免疫缺陷病毒、營養不良、帕金森氏症、氣腫、心臟衰竭、運動神經元疾病、囊性纖維化、失智、肌肉減少症、慢性阻塞性肺病(COPD)、腎臟疾病和腎衰竭。
在一個實施方式中,肌肉相關障礙係肢體(即腿或臂)、顱骨、脊柱、骨盆或關節(即膝蓋或髖部)的骨折。因此,在一個實施方式中,肌肉相關障礙係肱骨、橈骨、尺骨、腕骨、掌骨、鎖骨、肩胛骨、股骨、髖骨、髖骨、脛骨、腓骨、距骨、跟骨、跗骨、蹠骨、坐骨或回腸中的一個或多個的損傷或骨折。在另一個實施方式中,肌肉相關障礙係對以下關節的一個或多個進行手術:膝蓋、髖部、腳踝、肩膀、肘部、手腕。此類手術包括更換髖部、膝蓋、肩膀或一個或多個其他關節中的一個或多個。在一個實施方式中,本發明還提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4
的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於減輕強迫不活動(例如由手術引起的,例如髖關節或膝關節置換術)的肌肉耗損影響,所述用途包括向受試者給予本發明的多肽或藥物組成物,其中所述多肽或藥物組成物具有肌肉因子活性。在一個實施方式中,在預期的強制休息/不活動期之前,可以用C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)預治療患者。這樣的時期可以發生在患者住院(例如因為手術)時。不活動可以是局部的,如藉由石膏固定斷肢或關節,或藉由給予麻痹劑,或在髖關節手術或腿部手術後或在關節置換後。
根據本文描述的方法和用途的治療可以導致患有肌肉相關障礙或處於肌肉相關障礙風險中的受試者的肌肉耗損的減少。它還可以導致患有肌肉相關障礙或處於肌肉相關障礙風險中的受試者的肌肉耗損的延遲。它還可以導致患有肌肉相關障礙或處於肌肉相關障礙風險中的受試者的肌肉耗損的抑制。它還可以導致在患有肌肉相關障礙或處於肌肉相關障礙風險中的受試者中維持肌肉功能。它還可以在患有肌肉相關障礙或處於肌肉相關障礙風險中的受試者中增強功能恢復。在一個實施方式中,提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強中風後遺症的功能恢復。在一個實施方式中,提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於減少在中風後遺症患者中直至實現功能恢復的時間。在另一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在由於髖部骨折導致患有急性肌肉損傷和相關肌肉萎縮的受試者中的功能恢復。在另一個實
施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在大於70歲年齡的受試者中的功能恢復。在另一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在患有ICU肌病的受試者中的功能恢復。在另一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在患有周圍神經損傷的受試者中的功能恢復。在另一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在患有帶固定骨科損傷的受試者中的功能恢復。在另一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在患有肌肉無力和/或與COPD相關的功能障礙的受試者中的功能恢復。在另一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在患有肌肉無力和/或與心臟衰竭相關的功能障礙的受試者中的功能恢復。在另一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在患有肌肉無力和/或與化學療法相關的功能障礙的受試者中的功能恢復。在另一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在患有肌肉無力和/或與急性腎損傷(AKI)相關的功能障礙的受試者中的功能恢復。在另一
個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強在患有肌肉無力和/或與慢性腎損傷(CKI)相關的功能障礙的受試者中的功能恢復。
在另一個實施方式中,本發明還提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)用於增強健康受試者的肌肉功能,例如增加肌肉強度和/或改善肌肉再生和/或增加肌肉疲勞抗性。
其他可以從建議治療中受益的患者包括從需要重症監護或長期住院的急性或嚴重疾病中恢復的患者;從嚴重創傷(如機動車事故、中度或嚴重燒傷、戰鬥傷)中恢復的年輕人。由於肌肉喪失係大多數疾病(嚴重或長期)的常見併發症,預期增加的肌肉強度和/或改善的肌肉再生將加速恢復,並且無論該喪失的根本原因如何,將恢復到經歷肌肉喪失的患者的功能。
在一個實施方式中,本文提供了C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽,例如包含在藥物組成物中的多肽)在受試者受傷後立即預防暫時性或永久性殘疾,以預防繼發性肌肉喪失。
在一個實施方式中,用根據本發明的方法和用途的治療將改善受試者的身體表現。身體表現可藉由各種測試,包括但不限於簡易身體表現量表(SPPB)、步態速度測量、計時起立行走測試(TGUG)、爬樓梯力量測試(SCPT)、400m步行測試和/或6分鐘步行距離測試(6MWD)來評估。
如本文提及的6分鐘步行距離測試(6MWD)係指根據當前臨床實踐進行的標準身體鍛煉測試,例如,如醫學會(例如美國胸腔學會)提供的當前實踐指南所定義,例如,如ATS聲明:六分鐘步行測試指南[ATS Statement:
Guidelines for the Six-Minute Walk Test],Am J Respir Crit Care Med[美國呼吸與重症監護醫學雜誌]166卷.第111-117頁,2002中所述。
如本文提及的簡易身體表現量表(SPPB)係指藉由三個單獨測試(站立平衡,步行8英尺(2.44米)的時間,以及從椅子上起來並恢復到坐姿5次的時間)(PMID:8126356))的測量,為評估下肢身體表現狀況而進行的標準身體鍛煉測試。然後將這三個單獨測試組合成總表現分數,範圍從0到12個SPPB得分。
如本文提及的步態速度測量係指為評估受試者步行規定距離(8英尺(2.44米)與6米步行距離之間)的能力而進行的標準身體鍛煉測試。在較佳的實施方式中,藉由步行4米的距離來評估步態速度。步行需要強度、協調和平衡,從而對不同的器官系統(包括心血管系統、呼吸系統、神經系統和肌肉骨骼系統)提出要求。
如本文提及的計時起立行走測試(TUG)係指為評估受試者的行動能力而進行的標準身體鍛煉測試。它測量一個人從椅子上起來,步行三米,轉身,走回椅子,然後再次坐下的時間,並且需要靜態和動態強度二者。所述測試根目錄據醫學會(例如美國老年醫學會/英國老年醫學會(2011)J Am Geriatr Soc[美國老年醫學會雜誌]59,148-157)的建議進行。
如本文提及的爬樓梯力量測試(SCPT)係指用於評估受試者的下肢強度、力量和平衡的功能測試。已經針對不同的患者群體(如膝關節或髖關節置換(關節成形術))開發了許多測試變型。測試變型包括階梯數,單個階梯的高度(例如18cm或20cm),任務要求(僅上升或上升/下降組合),或測試是否按預定階梯數計時或在給定的時間段內記錄階梯計數,例如9階梯上升/下降、5階梯上升/下降、4階梯上升/下降、30秒測試、6階梯快速和自速。
在一個實施方式中,用根據本發明的方法和用途的治療將改善受試者的肌肉強度。肌肉強度可以藉由單個或多個關節以及呼吸和其他肌肉(例如肺功能測試)的動態(例如30秒坐椅站立測試、爬樓梯測試、膝關節屈曲/伸展)或靜態(例如手握測力法、等長膝關節伸展/屈曲)運動來評估。用於評估肌肉強度的其他常用測試包括自行車測功、對阻力訓練機的快速動態收縮和最大垂直跳躍。
如本文提及的30秒坐椅站立測試(Jones等人,(1999)Res Q Exerc Sport[鍛煉與運動研究季刊]70,113-119)係指為評估受試者的下肢強度和耐力而進行的標準身體鍛煉測試。它測量受試者從坐姿起來,到達完全站姿並在30秒內再次坐下的次數。它既需要下肢強度,也需要耐力。
如本文提及的手握測試係指為評估受試者的握力強度而進行的標準身體鍛煉測試。握力強度可以用握力計,例如Jamar握力計(美國拉斐特儀器公司(Lafayette Instrument Company,USA))進行評估。
如本文提及的膝關節屈曲/伸展測試係指為評估受試者股四頭肌(膝關節伸展)和/或腿筋(膝關節屈曲)的強度而進行的標準身體鍛煉測試。可以評估等長、等張或等速強度。
套組
本揭露還涵蓋用於治療肌肉相關障礙的套組。此類套組包含C1orf54多肽或其變體(例如C1orf54多肽或其變體,例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽(例如呈液體或凍乾形式))或者包含C1orf54多肽或其變體(例如,如本文描述的包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)的藥物組成物。另外,此類套組可以包含用於給予C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)的工具(例如自動注射器、注射器和小瓶、預填充的注射器、預填充筆)以及使用說明
書。該等套組可以含有用於治療肌肉相關障礙的另外的治療劑,例如用於與封閉的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)組合遞送。此類套組還可以包含用於給予C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)的說明書以治療患有肌肉相關障礙的患者。此類說明書可以提供用於與封閉的C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)一起使用的劑量、給予途徑和給藥方案。
短語「用於給予的工具」用於指示用於向患者系統地給予藥物的任何可用的工具,包括但不限於預填充的注射器、小瓶和注射器、注射筆、自動注射器、IV注射槽和注射袋、泵等。使用此類物品,患者可以自我給予藥物(即,在沒有醫師的幫助下給予藥物)或執業醫師可以給予藥物。本文揭露了用於治療患有肌肉相關障礙的患者的套組,所述套組包含C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽),以及用於向患者給予C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)的工具。
本文揭露了包含C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)的套組,或包含C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)的藥物組成物,以及如本文描述的藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑,其中所述套組另外地包含使用說明書和用於向有需要的受試者給予所述C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽),或所述包含所述C1orf54多肽或其變體(例如包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽)的藥物組成物的工具。
序列
進行本發明的模式
應理解,已經僅藉由實例的方式描述了本發明,並且可以在保持在本發明的範圍和精神內的同時進行修飾。
實例
實例1:C1orf54表現構建體
(1)表現構建體的設計
基於公共領域中可獲得的資訊(Zerbino等人,(2018)Nucleic Acids Research[核酸研究]46(D1):D754-D761;The UniProt Consortium[UniProt協會](2017),Nucleic Acids Research[核酸研究]45(D1):D158-D169)設計了用於重組表現的人和小鼠C1orf54構建體。
省略了推定的N末端訊息肽(殘基M1至G16)的全長成熟小鼠C1orf54殘基Q17至M148(UniProt ID Q8R2K8)或者與含有TEV切割位點的N末端MRGSHHHHHHENLYFQSG標籤(SEQ ID NO:34)融合(構建體1,參見表1關於構建體資訊),或者在N末端MG和C末端GSSGLNDIFEAQKIEWHEHHHHHH標籤(SEQ ID NO:35)之間融合(構建體2)。
省略了推定的N末端訊息肽(殘基M1至G16)的全長成熟人C1orf54殘基Q17至M131(UniProt ID Q8WWF1)(SEQ ID NO:2)或者與含有TEV切割位點的N末端MRGSHHHHHHENLYFQSG標籤(SEQ ID NO:34)融合(構建體3),或者在N末端MG和C末端GSSGLNDIFEAQKIEWHEHHHHHH標籤(SEQ ID NO:35)之間融合(構建體6),或者僅與N末端MS肽融合。
對於構建體4和5的設計,將人C1orf54與來自其他物種的同源序列比對(圖1)。於2015年8月18日從www.uniprot.org(The UniProt Consortium[UniProt協會](2017),Nucleic Acids Research[核酸研究],45(D1):D158-D169)或
www.ensembl.org(Zerbino等人(2018)Nucleic Acids Research[核酸研究],46(D1):D754-D761)分別檢索序列,並使用MUSCLE演算法(Edgar(2004)Nucleic Acids Research[核酸研究],32(5):1792-1797)在Jalview(Waterhouse等人(2009)Bioinformatics[生物資訊學],25(9):1189-1191)中比對序列。構建體4包含殘基D67至M131(SEQ ID NO:4),缺少高度保守和帶負電荷的N末端區域,而構建體5包含殘基Q17至P116(SEQ ID NO:3),缺少C末端疏水區域。構建體4和5二者都與含有TEV切割位點的N末端MRGSHHHHHHENLYFQSG標籤(SEQ ID NO:34)融合。
(2)構建體的選殖
小鼠C1Orf54的DNA序列購自GeneArt(賽默飛世爾公司(ThermoFisher)),包括對大腸桿菌中表現的優化。為了產生MRGS-His6-TEV-G-mC1Orf54(aa17-148)(構建體1),使用以下引物藉由PCR從在N末端添加有MRGS-His6-TEV-G的GeneArt構建體擴增插入物:正向引物:5'-GAAGGAGATATACATATGCGTGGTAGCCATCATCATCATCACCATGAAAATCTGTATTTTCAGAGCGGCCAAGAATATGATCACGAAGAAC-3'(SEQ ID NO:36)和
反向引物:5'-GTGGTGGTGGTGCTCGAGTGCGGCCGCTTATCACATAAAATGAACACCACCTTGC-3'(SEQ ID NO:37)。
藉由NdeI/NotI消化PCR產物,並將其連接到用相同限制酶處理的pET26b(+)表現載體中。對於構建體2,使用以下引物藉由PCR從相同模板擴增MG-mC1Orf54(aa17-148)插入物:正向引物:
5'-GTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGGGTCAAGAATATGATCACGA
A-3'(SEQ ID NO:38)和反向引物:5'-GGCTTCGAAGATGTCGTTCAGGCCAGAGGATCCCATAAAATGAACACCACC-3'(SEQ ID NO:39)。
藉由In-Fusion技術將DNA片段選殖到已經含有GSS-Avi-His6的pET26b(+)骨架中(並用適當的限制酶NdeI/BamHI處理)。
在人C1Orf54的情況下,在GeneArt處購買構建體6(MG-hsC1Orf(aa17-131)-GSS-Avi-His6)(包括在5'端的NdeI限制性位點和2個終止密碼子以及在3'端的NotI限制性位點)的基因合成之前,使用內部演算法優化了成熟部分的DNA序列在大腸桿菌中的表現。藉由Nde/NotI消化DNA片段,用於隨後連接到NdeI/NotI處理的pET26b(+)表現載體中。使用表2中列出的引物藉由PCR從先前的構建體6擴增構建體3-5和7。將所有4個插入物用NdeI/NotI消化並選殖到用於產生6號構建體的相同骨架中。
在每種情況下,將連接產物轉染到感受態DH5α大腸桿菌細胞中。選擇在LB/康黴素板上生長的若干個集落,並進行質粒DNA製備。之後藉由序列鑒定陽性殖株。
(3)構建體的表現
將表現質粒轉化到大腸桿菌菌株BL21-Gold(DE3)(安捷倫公司(Agilent))中。對於所有構建體,用過夜預培養物接種1升超級肉湯(Terrific Broth)培養基。在DASGIP生物反應器系統(埃普多夫公司(Eppendorf))中進行發酵。培養物在37℃下生長直至達到pH 7.01的觸發點。此時,藉由添加1mM IPTG誘導表現。對於構建體1、2、4和7,在37℃下繼續培養5小時。對於構建體3、5和6,將溫度降至20℃並繼續培養14小時。在培養階段結束時,藉由離心收穫培養物。將細胞沈澱物儲存在-20℃並遞送至純化用於進一步的下游處理。
(4)重組蛋白的分離
構建體1、2、3、4、6和7在大腸桿菌中的重組表現導致包涵體的形成。使用10ml緩衝液處理1g濕細胞沈澱物,將含有該等構建體之一的大腸桿菌細胞懸浮於0.1M Tris/HCl、0.1M NaCl、1mM EDTA、3mM L-甲硫胺酸、pH 7.0中,並且每100ml補充有1 cOmpleteTM蛋白酶抑制劑混合片劑(羅氏公司(Roche))。添加0.1mg/ml的雞蛋清溶菌酶,並將懸浮液在4℃下輕輕攪拌。30分鐘後,添加10mM MgCl2和10U/ml Benzonase®(默克公司(Merck)),並將懸浮液在4℃下再攪拌30min。使用APV 2000實驗室均化器(斯必克流體公司(SPX Flow))藉由高壓(在800巴和環境溫度下傳代2次)裂解細胞。將1/2體積的60mM EDTA、1.5M NaCl、5%(v/v)Triton X-100、pH 7.0添加到裂解物中,並在4℃下輕輕攪拌60min。藉由以10'000x g且在4℃下離心30min來沈澱包涵體。將沈澱物在4℃下用1體積的50mM Tris/HCl、20mM EDTA、0.6M NaCl、3mM L-甲硫胺酸、pH 7.0洗滌1次,並用1體積50mM Tris/HCl、0.3M NaCl、pH
7.0洗滌3次,並且在每個洗滌步驟後以10'000 x g且在4℃下離心30min。在進一步處理之前,將包涵體沈澱物儲存在-20℃。對於純化,將1g的IB溶解於20ml 6M GdmCl、10mM Tris、100mM單鹼性磷酸鹽、用NaOH調整至pH 8.0(緩衝液A1)、具有5mM DTT中,在環境溫度下過夜。藉由在環境溫度下以10'000 x g離心30min來澄清所得的變性蛋白溶液,之後進行無菌過濾。將溶液在7℃下載入到用緩衝液A1(包括5mM DTT)平衡的5ml HisTrap excelTM IMAC柱(GE醫療集團(GE Healthcare))上。用100ml 10mM Tris/HCl、30%異丙醇、pH 8.0,隨後用100ml緩衝液A1洗滌柱。用6M GdmCl、10mM Tris、100mM單鹼性磷酸鹽,在單個步驟中用HCl調整至pH 4.5(緩衝液A2)洗脫結合蛋白。收集1.8ml級分並藉由SDS-PAGE分析。合併含有目的蛋白的級分。為了使變性蛋白再折疊,然後將合併物以1:1的比率與2M L-Arg-HCl(補充有5mM DTT)混合,並用含有1mM DTT的PBS(pH 7.3)透析過夜。使用PEG 35,000(Brooks等人,(1962)Trans[轉化]2(4):216-264)將透析的樣品濃縮至所希望的濃度並無菌過濾。含有C末端標籤的構建體2和6藉由凝膠過濾或直接在變性IMAC後藉由如下文對酶促切割的構建體所述的RP-HPLC進行拋光。
構建體5被表現可溶於含有該構建體的大腸桿菌細胞的細胞溶質中,使用10ml緩衝液處理1g濕細胞沈澱物,將所述大腸桿菌細胞懸浮於50mM單鹼性磷酸鹽、500mM NaCl、20mM咪唑、用NaOH調整至pH 8(緩衝液A2)、每50ml補充有1 cOmpleteTM蛋白酶抑制劑混合片劑(羅氏公司(Roche))、30U/ml Benzonase®(默克公司(Merck))和10mM MgCl2中。使用APV 2000實驗室均化器(斯必克流體公司(SPX Flow))藉由高壓(在800巴和環境溫度下傳代2次)裂解細胞。將裂解物以10'000 x g且在4℃下離心30min。過濾上清液(0.22um),並將其載入到用緩衝液A2平衡的5ml HisTrap excelTM IMAC柱(GE醫療集團(GE Healthcare))上過夜。洗滌至A280基線信號後,藉由緩衝液A2中20
至500mM咪唑的線性梯度,經10個柱體積洗脫蛋白質。收集1.8ml級分並藉由SDS-PAGE分析。合併含有目的蛋白的級分,並用PBS(pH 7.3、1mM DTT)透析過夜,用於標籤的酶促切割。
對於構建體1、3、4和5,藉由向各自樣品(200U/mg)中添加AcTEVTM蛋白酶(賽默飛世爾科技公司(Thermo Fisher Scientific))來酶促切割N末端標籤,隨後在30℃下孵育3h。藉由MS證實了酶促切割。為了促進切割物與剩餘未切割的蛋白質和蛋白酶的分離,用具有5mM DTT的緩衝液A1透析樣品。將透析的蛋白質過濾並載入到用緩衝液A1(包括5mM DTT)平衡的5mL HisTrap excelTM IMAC柱(GE醫療集團(GE Healthcare))上,並且收集流通物。合併含有切割的蛋白質的級分,並用PBS(pH 7.3、1mM DTT)透析過夜,隨後使用PEG 35,000濃縮,或者以8ml/min且在50℃下載入到用25mM碳酸氫銨平衡的POROSTM 20 R1(賽默飛世爾科技公司(Thermo Fisher Scientific))、95 x 15mm(17ml)或250 x 20mm(78ml)、RP-HPLC柱上,並且用平衡緩衝液洗滌至A280基線信號後,以8ml/min且在50℃下用20個柱體積的0%至75%乙醇的線性梯度洗脫,或用75%乙醇的分步梯度洗脫。合併含有目的蛋白的級分並用PBS(pH 7.3)在4度下透析24h,並且最後無菌過濾。
將構建體7的包涵體溶解於6M尿素、20mM Tris/HCl、5mM EDTA、pH 8(緩衝液A3)、包括0.2M亞硫酸鈉中。將溶液以10,000 x g離心30min,無菌過濾,藉由如上所述的RP-HPLC純化,用PBS透析,並無菌過濾。
實例2:藉由齧齒動物的運動增加肌肉C1orf54 mRNA
方法:7-8週齡的雄性C57BL/6小鼠購自查理斯河實驗室(Charles River Laboratories)。使小鼠適應研究設備七天。將它們容納在25℃,12:12h光照/黑暗循環下,並飼餵含有18.2%蛋白質和3.0%脂肪(具有15.8MJ/kg的能量含
量)的標準實驗室飲食(Nafag,產品號3890,Kliba,巴塞爾,瑞士)。任意提供食物和水。
將靜坐的對照動物容納在兩組中。將經歷鍛煉的動物單獨容納並使其連續七天使用運動轉輪(小鼠低檔無線運動轉輪(Low-Profile Wireless Running Wheel for Mouse),醫療協會公司(Med Associates Inc),產品號:ENV-047)。在第8天,使來自可以使用運動轉輪組的小鼠另外地在跑步機(Panlab,Harvard Apparatus公司)上經歷單輪運動25分鐘,並且然後在具體時間點(即,立即在跑步機運動後30、60或180分鐘)用CO2對小鼠進行安樂死。來自靜坐對照組的動物在同一天被安樂死。將股四頭肌肌肉快速解剖並在液氮中快速冷凍。使用標準程序(TRIzol試劑(英傑公司(Invitrogen))和QIAcube技術(凱傑公司(Qiagen))從股四頭肌肌肉中提取總RNA。所有樣品均用DNA酶處理,並且用生物分析儀(生物分析儀2100,安捷倫公司(Agilent))測量RNA品質和量。使用核糖體RNA消竭方案產生文庫。使用億明達公司(Illumina)HiSeq2500股式配對端測序進行測序。使用星形將讀數映射到小鼠參考基因組版本mm10上,並使用基因水平參數使用特徵計數產生計數。報告的計數係FPKM(每百萬每Kb的片段)。
結果:我們採用了由自願轉輪運動和強迫跑步機運動組成的同時運動範例以發現新型運動誘導型因素,預計該等因素將被分泌並將C1orf54鑒定為迄今為止未表徵的因素:與靜坐小鼠相比,運動小鼠的股四頭肌中的C1orf54 mRNA水平增加。實際上,運動後立即在股四頭肌中檢測到C1orf54 mRNA的水平升高並持續至少3小時(圖2),這指示運動刺激肌肉中C1orf54 mRNA的產生。
實例3:運動後肌肉C1ORF54 mRNA在人中增加
方法:對公開可獲得的數據集(GSE97084)(具有來自經歷各種類型運動的人的股外側肌活檢組織的轉錄組學數據(Robinson等人,(2017)Cell Metab[細胞代謝]25,581-592)重新分析C1ORF54的表現水平。報告的計數係FPKM(每百萬每Kb的片段)。
結果:考慮到運動對小鼠中C1orf54 mRNA表現的影響,分析公開可獲得的數據集以評估運動是否以相似的方式調控人的C1ORF54。在參與者經歷不同運動範例的人運動研究(Robinson等人,(2017)Cell Metab[細胞代謝]25,581-592)中,在運動前和運動後對於每個研究年輕參與者分析股外側肌中的C1ORF54 mRNA水平。數據顯示,運動增加了人骨骼肌中的C1ORF54水平(圖3)。C1ORF54 mRNA的增加與運動方案的類型(如藉由Robinson等人,(2017)Cell Metab[細胞代謝]25,581-592描述的高強度有氧間歇訓練(HIIT)、阻力訓練(RT)和組合(CT)運動訓練)無關,並因此反映了對運動的一般反應。
實例4:C1orf54在體內調節Myod1的轉錄
方法:7-8週齡的雄性C57BL/6小鼠購自查理斯河實驗室(Charles River Laboratories)。使小鼠適應研究設備七天。將它們容納在25℃,12:12h光照/黑暗循環下,並飼餵含有18.2%蛋白質和3.0%脂肪(具有15.8MJ/kg的能量含量)的標準實驗室飲食(Nafag,產品號3890,Kliba,巴塞爾,瑞士)。任意提供食物和水。
小鼠接受單次腹膜內注射媒介物(PBS)或在媒介物中配製的具有SEQ ID NO:25的胺基酸序列的分離的多肽。注射後60分鐘,用CO 2 對小鼠進行安樂死,並且切下腓腸肌肌肉並在液氮中快速冷凍。根據製造商的說明書,使用TRIzo1試劑(英傑公司(Invitrogen))從腓腸肌肌肉中提取總RNA。使用高容量逆轉錄套組(應用生物系統公司(Applied Biosystems)),用1μg總RNA上的隨機六聚體進行逆轉錄。使用用於肌原性分化1(Myod1,Mm00440387_m1,應用生物系統公司(Applied Biosystems))的特異性TaqMan探針和兩個管家基因(Tbp,Mm00446971_m1,應用生物系統公司和Hprt,Mm03024075_m2,應用
生物系統公司),在C1000熱循環儀(CFX384即時系統,伯樂公司(Bio-Rad))上在384孔板中一式兩份進行即時PCR。應用自動設置來確定CT。使用其中使用2-△△CT的比較方法來確定相對表現。使用兩個管家基因(Tbp,Mm00446971_m1,應用生物系統公司和Hprt,Mm03024075_m2,應用生物系統公司)以便歸一化。所有結果表示為相比媒介物的倍數變化。
使用單因素方差分析(one-way ANOVA),隨後藉由費希爾(Fisher)最小顯著性差異(LSD)進行統計分析。當概率值<0.05時,差異被認為係顯著的。藉由GraphPad Prism版本7.03(圖板軟體有限公司,拉霍亞,加利福尼亞州(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA))進行統計分析。
結果:如與媒介物相比,C1orf54在單次腹膜內注射0.5或1mg/kg具有SEQ ID NO:25的胺基酸序列的分離的多肽後60分鐘降低了腓腸肌中Myod1的mRNA水平(圖4)。MyoD1係決定衛星細胞命運的關鍵轉錄因子,主要是藉由驅動衛星細胞進入分化。衛星細胞參與肌肉生長、維持、修復和再生(Wang和Rudnicki(2011)Nat Rev Mol Cell Biol[自然分子細胞生物學綜述]13,127-133)。與野生型細胞相比,缺少MyoD1的肌肉前驅細胞恢復了更多的幹細胞樣表型以及在注射到受損肌肉後具有顯著更高的效率的移植,並顯示存活率增加。此外,移植後可在肌纖維的基底層下面檢測到MyoD1陰性成肌細胞衍生的衛星細胞,這指示MyoD1陰性成肌細胞的自我更新特性(Asakura等人,(2007)Proc Natl Acad Sci USA[美國國家科學院院刊]104,16552-16557)。因此,C1orf54的活性藉由下調MyoD1影響肌原性分化,從而促進幹細胞樣表型。因此,C1orf54包含肌肉功能改善活性。
實例5:C1orf54在體外抑制人肌肉細胞中MYOD1的轉錄
方法:將原代人肌肉細胞(hSkMDC,批號P401061-51M,Cook MyoSite公司,匹茲堡,賓夕法尼亞州,美國)解凍並接種在含有肌強直無血清
生長培養基(COOK MK-2222)、生長補充物(COOK MK-2288)、20%胎牛血清(吉妮歐公司(Gibco),16000-044,批號1233705)、50μg/mL健他黴素(吉妮歐公司,15710-049)和10μg/mL胰島素(Amimed公司,5-79F00-G,批號K11988P)的生長培養基(GM)中的兩個T175組織培養瓶中。在37℃/5% CO2下生長5天後,用DPBS(吉妮歐公司,14190-144)沖洗細胞,用Accutase(吉妮歐公司,A11105-01)脫離並使用核計數器(chemometec公司)計數。將在0.2mL GM中的每孔40'000個細胞接種到24孔板中,每孔用0.5mL明膠(EmbryoMax 0.1%明膠溶液,密理博公司(Millipore)ES-006-B)包被,在室溫(RT)下保持30min。第二天,在37℃下,用125、250、500、1000ng/mL無標籤的重組人C1orf54蛋白aa17-131(SEQ ID NO:2;邁生物資源公司,MBS 1284901批號03095),溶劑對照(33μM Tris-HCl、3.3μM EDTA和0.07%甘油)處理細胞,或者不處理6h。隨後,裂解細胞並根據製造商的說明書(Zymo Research公司)使用Direct-zol套組提取總RNA。使用高容量cDNA檔案套組(應用生物系統公司4368813)合成cDNA,並使用TaqMan基因表現預混合物(應用生物系統公司4369016號)、TaqMan測定(Hs00159528_m1,應用生物系統公司)和ABI PRISM 7000序列檢測系統(應用生物系統公司)藉由定量PCR來確定MYOD1基因表現。使用其中使用2-△△CT的比較方法來確定相對表現。將基因表現歸一化為三個管家基因:GAPDH(4310884E,應用生物系統公司)、TBP(Hs00427620_m1,應用生物系統公司)和HPRT(Hs01003268_g1,應用生物系統公司)。
結果:在處理6h後,重組人C1orf54蛋白(aa17-131,SEQ ID NO:2)以劑量依賴性方式抑制原代人肌肉前驅細胞中的MYOD1基因表現(圖5)。最高使用劑量(1000ng/mL)導致MYOD1基因表現減少65.6%(圖5)。肌細胞生成素(晚期肌原性轉錄因子)不受C1orf54蛋白的顯著調控(數據未顯示)。缺少MyoD1的肌肉細胞顯示增殖增加(Sabourin等人,(1999)J Cell Biol[細胞與
生物化學]144,631-643)。因此,該等數據指示C1orf54阻止肌原性分化,同時促進肌肉前驅細胞的增殖。
實例6:C1orf54在體內增加肌力
方法:12週齡的雄性C57BL/6小鼠購自查理斯河實驗室(Charles River Laboratories)。使小鼠適應研究設備七天,將它們容納在25℃,12:12h光照/黑暗循環下,並飼餵含有18.2%蛋白質和3.0%脂肪(具有15.8MJ/kg的能量含量)的標準實驗室飲食(Nafag,產品號3890,Kliba,巴塞爾,瑞士)。任意提供食物和水。
適應後,將小鼠藉由體重隨機化,並藉由腹膜內注射媒介物(PBS)或1mg/kg在媒介物中配製的具有SEQ ID NO:25的胺基酸序列的分離的多肽,每隔三天進行處理。每隻小鼠總共接受三次注射(在第1、4和7天,其中第1天定義為動物接受注射的第一天)。在第9天,非侵入性地評估誘發的肌力。為此,將動物麻醉,腿部剃毛,並藉由經皮電極經由後腿的電刺激誘發肌肉收縮。將電極附連到股四頭肌和腳上。力記錄在連接到力感測器(KD45.5N)的自製踏板上,並允許在刺激時記錄腳的壓力。經由刺激器(刺激器ML180,AD儀器公司(ADInstruments))依次施加範圍為從10至120Hz的頻率,並在每個頻率記錄強直力(PowerLab,AD儀器公司)。
使用多重非配對t檢驗比較進行統計分析。當概率值<0.05時,差異被認為係顯著的。藉由GraphPad Prism版本7.03(圖板軟體有限公司,拉霍亞,加利福尼亞州(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA))進行所有統計分析。
結果:
在範圍為從10-70Hz(次最大力產生)的低刺激頻率下,用媒介物和1mg/kg C1orf54(具有SEQ ID NO:25的胺基酸序列的分離的多肽)處理的動物之間後肢的誘發力相似(圖6A)。相反,在範圍為從80-120Hz的更高刺激
頻率並且反映最大力產生下,與媒介物處理的動物相比,用C1orf54處理的小鼠展現出大約15%更高的絕對肌力。
藉由歸一化腓腸肌重量的絕對肌力來評估比力,這主要有助於監測到的收縮。與媒介物處理的動物相比,C1orf54在更高刺激頻率下的比誘發力大約高13%(圖6B)。這表明C1orf54多肽的間歇給予增加了肌肉強度。
實例7:C1orf54在體內增加Pax7陽性衛星細胞的數量
方法:12週齡的雄性C57BL/6小鼠購自查理斯河實驗室(Charles River Laboratories)。使小鼠適應研究設備七天,將它們容納在25℃,12:12h光照/黑暗循環下,並飼餵含有18.2%蛋白質和3.0%脂肪(具有15.8MJ/kg的能量含量)的標準實驗室飲食(Nafag,產品號3890,Kliba,巴塞爾,瑞士)。任意提供食物和水。
適應後,將小鼠藉由體重隨機化,並用腹膜內注射媒介物(PBS)或1mg/kg在媒介物中配製的具有SEQ ID NO:25的胺基酸序列的分離的多肽,每隔三天進行處理。每隻小鼠總共接受四次注射(在第1、4、7和10天,其中第1天定義為動物接受注射的第一天)。在第11天,用CO
2
對動物進行安樂死並快速切出腓腸肌肌肉,將其包埋在OCT(Tissue-Tek)中並在液氮冷卻的異戊烷中冷凍。
將冷凍的肌肉切成8μm的橫截面,將其在室溫下乾燥約2小時,並在-20℃下儲存在緊密密封在袋中的塑膠盒中。在染色當天,將載玻片從冰箱中取出,在室溫下乾燥30分鐘並用3%多聚甲醛固定10min。然後用Vector M.O.M封閉試劑(載體實驗室(Vector Laboratories),目錄號MKB-2213,稀釋1/100)和PBTX(含有0.2% Triton X100的PBS)中的10%山羊血清封閉切片30分鐘。為了檢測衛星細胞,將切片與針對Pax7(開發研究雜交瘤庫(Developmental Studies Hybridoma Bank,DSHB))的一級抗體在4℃下在封閉緩衝液中孵育過夜。由A.Kawakami在東京工業大學開發的Pax7雜交瘤獲得自DSHB(由NIH的NICHD創
建)並維持在愛荷華大學生物學系(愛荷華市,IA 52242)。在諾華公司(Novartis)從雜交瘤中純化小鼠抗體,並檢測雞Pax7的抗原胺基酸352-523。用PBTX洗滌若干次後,將切片在室溫下與PBTX中的10%山羊血清中的橋接抗體(大鼠抗小鼠IgG,賽洛特克公司(Serotec),目錄號MCA336,稀釋1/500)孵育3小時。隨後用PBTX洗滌樣品,並在室溫下用螢光標記的二級抗體(Alexa 594山羊抗大鼠,英傑公司,目錄號A11007,稀釋1/200)染色1小時。用PBTX洗滌後,用ProLong Gold抗褪色試劑與DAPI(英傑公司)封固樣品。計數對Pax7和DAPI都呈陽性的細胞。使用非配對t檢驗進行統計分析。當概率值<0.05時,差異被認為係顯著的。藉由GraphPad Prism版本7.03(圖板軟體有限公司,拉霍亞,加利福尼亞州(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA))進行統計分析。
結果:為了確定衛星細胞的數量,將肌肉切片進行Pax7染色,其代表了衛星細胞的完善的標記物(Kuang和Rudnicki(2008)Trends Mol Med[分子醫學動態]14,82-91)。衛星細胞參與肌肉生長、維持、修復和再生(Wang和Rudnicki(2011)Nat Rev Mol Cell Biol[自然分子細胞生物學綜述]13,127-133)。與媒介物處理相比,在第1、4、7和10天用1mg/kg C1orf54間歇性處理使腓腸肌中Pax7陽性衛星細胞的數量顯著增加了大約66%(圖7)。用C1orf54處理後衛星細胞數量的增加表明C1orf54促進骨骼肌的肌肉生長和再生能力。
實例8:C1orf54在體外促進人成肌細胞的增殖
方法:將原代人肌肉細胞(hSkMDC,批號P201076-19M,來自Cook MyoSite公司,匹茲堡,賓夕法尼亞州,美國)解凍並接種在含有肌強直無血清生長培養基(COOK MK-2222)、生長補充物(COOK MK-8888)、10%優級胎牛血清(密理博公司,S0613,批號15H095)、50μg/mL健他黴素(吉妮歐公司,15710-049)的生長培養基(GM)中的三個T175組織培養瓶中。在37℃/5% CO 2 下生長兩天後,用DPBS(吉妮歐公司,14190-144)沖洗細胞,用Accutase(A11105-
01)脫離並使用核計數器(ChemoMetec公司)計數。將在0.1mL GM中的每孔1'000個細胞接種到96孔板中,每孔用0.1mL明膠(EmbryoMax 0.1%明膠溶液,密理博公司ES-006-B)包被,在RT下保持30min。孵育過夜後,將細胞與不含FBS的GM一起孵育2.5h,隨後將培養基更換為含有1% FBS的GM孵育2.5h。隨後,用1000ng/mL無標籤的重組人C1orf54蛋白aa 17-131(SEQ ID NO:2;邁生物資源公司,MBS 1284901批號03095),C1orf54 MBS溶劑對照(53μM Tris-HCl、5.3μM EDTA和0.26%甘油)或1% PBS對照來處理細胞。使用IncuCyte FL活細胞分析系統(埃森生物科學有限公司(Essen BioScience,Ltd.)),藉由生命細胞成像(每4h每孔2個圖像)測量細胞生長鋪滿百分比(%)。
使用多重非配對t檢驗比較進行統計分析。藉由GraphPad Prism版本7.03(圖板軟體有限公司,拉霍亞,加利福尼亞州(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA))進行所有統計分析。
結果:與用C1orf54蛋白溶劑處理的對照細胞相比,重組人C1orf54蛋白(SEQ ID NO:2;aa17-131)在處理後2天開始清楚地且持續地增強人成肌細胞的生長,直到第6天實驗結束(圖8)。細胞在所有條件下都不斷生長,但速度不同。該等數據表明C1orf54刺激肌肉前驅細胞的生長。
<110> 諾華公司(NOVARTIS AG)
<120> 新的肌肉因子及其用途
<130> PATO58202A
<140> EP 18187131.0
<141> 2018-08-02
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<213> 大猩猩
<400> 48
<210> 49
<211> 131
<212> PRT
<213> 北白頰長臂猿
<400> 49
<210> 50
<211> 132
<212> PRT
<213> 獼猴
<400> 50
<210> 51
<211> 132
<212> PRT
<213> 東非狒狒
<400> 51
<210> 52
<211> 131
<212> PRT
<213> 綠猴
<400> 52
<210> 53
<211> 129
<212> PRT
<213> 蘇門答臘猩猩
<400> 53
<210> 54
<211> 131
<212> PRT
<213> 普通狨
<400> 54
<210> 55
<211> 132
<212> PRT
<213> 林鼬
<400> 55
<210> 56
<211> 131
<212> PRT
<213> 野豬
<400> 56
<210> 57
<211> 143
<212> PRT
<213> 家貓
<400> 57
<210> 58
<211> 132
<212> PRT
<213> 紋黃鼠
<400> 58
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<211> 143
<212> PRT
<213> 紋黃鼠
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<210> 60
<211> 144
<212> PRT
<213> 非洲草原象
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<211> 132
<212> PRT
<213> 大熊貓
<400> 61
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<212> PRT
<213> 綿羊
<400> 62
<210> 63
<211> 131
<212> PRT
<213> 歐洲普通牛
<400> 63
<210> 64
<211> 127
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<213> 穴兔
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<210> 65
<211> 144
<212> PRT
<213> 瑩鼠耳蝠
<400> 65
<210> 66
<211> 131
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<213> 豚鼠
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 67
<210> 68
<211> 152
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 68
Claims (17)
- 一種分離的多肽,該分離的多肽由如下胺基酸序列組成,該胺基酸序列與選自SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的組的胺基酸序列具有至少95%胺基酸序列同一性,並且其中該多肽具有肌肉因子活性。
- 如申請專利範圍第1項所述之分離的多肽,其中在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的序列內已經修飾、缺失、添加和/或取代了一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸。
- 如申請專利範圍第1項所述之分離的多肽,其中該多肽由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中任一個的胺基酸序列組成。
- 一種分離的C1orf54多肽或其變體,該分離的C1orf54多肽或其變體用於在療法中使用。
- 一種分離的C1orf54多肽或其變體,該分離的C1orf54多肽或其變體用於作為藥物使用。
- 一種多肽,該多肽選自:a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;和d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽,該多肽用於作為藥物使用。
- 一種多肽,該多肽選自:a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;和d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽,該多肽用於在製造藥物中使用。
- 用於如申請專利範圍第4-7項中任一項所述使用的多肽,其中所述多肽具有肌肉因子活性。
- 如申請專利範圍第4-6項中任一項所述之多肽,該多肽用於在治療受試者的肌肉相關障礙中使用。
- 一種用於在治療受試者的肌肉相關障礙中使用的多肽,其中所述治療包括向該受試者給予有效量的選自以下的多肽:a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;並且其中所述多肽具有肌肉因子活性。
- 一種藥物組成物,該藥物組成物包含a.藥學有效量的至少一種選自以下的多肽:i)由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;ii)包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;iii)由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;和iv)包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;並且其中所述多肽具有肌肉因子活性;和b.至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
- 如申請專利範圍第11項所述之藥物組成物,該藥物組成物用於在治療肌肉相關障礙中使用。
- 多肽在製造用於治療受試者的肌肉相關障礙之藥物中之用途,其中所述多肽選自:a.由胺基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4組成的多肽;b.包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的胺基酸序列的多肽;c.由與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列組成的多肽;d.包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少95%胺基酸序列同一性的胺基酸序列的多肽;並且其中所述多肽具有肌肉因子活性。
- 用於如申請專利範圍第10項所述使用的多肽、或如申請專利範圍第12項所述之藥物組成物、或如申請專利範圍第13項所述之用途,其中所述肌肉相關障礙係選自以下或由以下引起的障礙:肌肉萎縮、骨科損傷、肌肉損傷、肌肉無力、心臟衰竭、化學療法、中風後遺症、繼發性肌肉喪失、肌肉減少症、肥胖或代謝症候群。
- 如申請專利範圍第1-3項中任一項所述之分離的多肽、或用於如申請專利範圍第10項所述使用的多肽、或如申請專利範圍第11-12項中任一項所述之藥物組成物、或如申請專利範圍第13項所述之用途,其中所述肌肉因子活性包括肌肉功能增加活性。
- 如申請專利範圍第1-3項中任一項所述之分離的多肽、或用於如申請專利範圍第10項所述使用的多肽、或如申請專利範圍第11-12項中任一項所述之藥物組成物、或如申請專利範圍第13項所述之用途,其中所述肌肉因子活性包括肌肉強度增加活性。
- 如申請專利範圍第1-3項中任一項所述之分離的多肽、或用於如申請專利範圍第10項所述使用的多肽、或如申請專利範圍第11-12項中任一項所述之藥物組成物、或如申請專利範圍第13項所述之用途,其中所述肌肉因子活性包括肌肉再生改善活性。
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