CN116744958A - 骨关节炎疼痛的治疗 - Google Patents

Abstract

本发明涉及骨关节炎疼痛或与骨关节炎相关的疼痛的治疗，尤其涉及用于治疗骨关节炎疼痛的LINK_TSG6多肽。骨关节炎由关节中软骨退化引起，并且特征在于疼痛和受影响的关节的活动性丧失。骨关节炎疼痛由多种因素引起，包括骨髓病变、关节下骨磨损、滑膜炎、积液和通常不敏感组织的神经支配。LINK_TSG6是包含人TSG‑6的LINK模块的短重组肽。

Description

骨关节炎疼痛的治疗

本申请要求于2021年1月20日提交的GB 2100761.2的优先权，该专利的内容和元素出于所有目的以引用方式并入本文。

技术领域

本发明涉及骨关节炎疼痛的治疗，并且具体地但并非排他性地，涉及用LINK_TSG6多肽治疗骨关节炎疼痛。

背景技术

骨关节炎(OA)是世界范围内最常见的关节炎形式。它是由关节中软骨退化引起的长期慢性疾病，并且特征在于疼痛和受影响的关节(例如，膝部、臀部和手部)的活动性丧失。世界卫生组织(WHO)估计，年龄超过60岁的男性中有9.6％和女性中有18％患有症状性OA，其中80％将具有运动限制，而25％不能进行其主要的日常生命活动。多种因素可促进OA的发展，这些因素包括年龄、性别、肥胖、缺乏运动、遗传因素、骨密度、先前的关节损伤或创伤，或关节疾病诸如痛风性关节炎或类风湿性关节炎。由于人口老化以及相关因素诸如肥胖的增加，OA患病率正在增加。

尚不存在用于OA的疾病改善疗法，并且目前的治疗只限于缓解疼痛和外科干预，主要是关节置换。OA患者在很小的年纪进行关节置换，需要更多的通常具有不良结果并需要疼痛管理的修复手术。

用于OA的现有疼痛治疗剂包括对乙酰氨基酚(扑热息痛)、鸦片镇痛剂(止痛药)(包括可待因和非甾体抗炎药(NSAID))。所有这些治疗剂都具有局限性或副作用。对乙酰氨基酚可引起肝损伤，并且不适合那些患有现有的肝脏病症的患者。虽然麻醉性镇痛剂在治疗中度至重度OA疼痛方面是有效的，但它们可产生包括眩晕和恶心的副作用，并且可能是易上瘾的。NSAID除了提供疼痛缓解外，还可以减轻由OA引起的肿胀和炎症，然而服用NSAID会增加GI问题和心脏病发作、中风和心力衰竭的风险，因此，如Altman和Barthel(Drugs，2011年；第71卷第10期：第1259-1279页)中所综述的，通常推荐的处方是以最低有效剂量口服NSAID达最短的时间量。

用于OA疼痛的局部治疗剂包括通过引起可逆的神经变性来治疗疼痛的辣椒素乳膏。然而，辣椒素在治疗早期可引起显著的疼痛，这可导致治疗中止；综述发现，1,556名受试者中，54％的局部用辣椒素治疗的患者出现不良反应(与15％的用安慰剂治疗的患者相比)，并且13％的用辣椒素治疗的患者因这些作用而中止治疗(Altman和Barthel，Drugs.，2011年，第71卷第10期：第1259-1279页)。此外，存在由于神经损伤而产生副作用的风险，特别是对于糖尿病患者。

类固醇注射剂可用于通过减轻肿胀和炎症来治疗OA疼痛。这些治疗剂可关节内施用(施用到关节内)，然而，一些证据表明，关节内类固醇注射剂可引起副作用，诸如加速OA进展和骨质流失(Kompel等人，Radiology.，2019年，第293卷第3期：第656-663页)。

因此，需要用于减轻骨关节炎疼痛的新治疗剂。

Yang等人，2020年(J Neuroinflammation，第17卷第1期：第154页)描述了鞘内注射的骨髓干细胞(BMSC)的使用，这些骨髓干细胞分泌TSG-6并缓解由大鼠的慢性压迫性损伤引起的神经病理性疼痛。本研究还表明，鞘内注射外源性TSG-6会减弱CCI诱导的神经病理性疼痛。

本发明已根据上述考虑来设计。

发明内容

本公开涉及用于治疗骨关节炎疼痛的LINK_TSG6多肽。如本文所用，缩写OA是指骨关节炎，并且OA疼痛是指骨关节炎疼痛或与骨关节炎相关的疼痛。

如实施例中所示，LINK_TSG6能够以剂量依赖性方式减轻骨关节炎疼痛。当以高和低两种剂量以及以每月和每周两种给药方案皮下和关节内施用时，LINK_TSG6都有效减轻骨关节炎疼痛。

LINK_TSG6的施用在OA和OA疼痛的部分内侧半月板切除模型中减轻OA疼痛，如通过受损关节屈曲引起的“直接疼痛”减轻、热敏感性和机械敏感性改善以及承重改善所示。

LINK_TSG6的镇痛作用在同侧肢体(即，手术操作侧)观察到，但也在对侧(即，身体的与手术操作肢体相对的侧)观察到。这表明，LINK_TSG6具有镇痛特性，并且可用于直接施用于受影响的骨关节炎关节和更远的部位。此外，LINK_TSG6可适用于治疗牵涉性疼痛，诸如远离骨关节炎关节的位置的疼痛，以及适用于关节的骨关节炎导致的直接疼痛。

在第一方面，本公开提供了用于医学，特别是用于治疗骨关节炎疼痛的LINK_TSG6。还描述了OA疼痛的治疗方法，该方法包括施用LINK_TSG6，以及LINK_TSG6在制备用于治疗骨关节炎疼痛的药物中的用途。治疗可针对有此需要的受试者。

在优选的方面，LINK_TSG6经皮下或关节内施用。治疗可以是每周一次或更不频繁，诸如每月一次。在一些方面，治疗涉及每月10mg至150mg、每月20mg至140mg、每月30mg至130mg、每月40mg至120mg或每月50mg至110mg的皮下施用。在一些方面，治疗涉及每月约50mg、每月约60mg、每月约70mg、每月约80mg、每月约90mg或每月约100mg的LINK_TSG6皮下施用。在其他方面，治疗包括每月关节内施用2mg至30mg、3mg至28mg、4mg至25mg、5mg至23mg、6mg至20mg或10mg和20mg之间的LINK_TSG6。

在本文所述的一些方面，治疗可包括关节内施用至少3mg、至少5mg、至少10mg、至少20mg、至少30mg、至少40mg、至少50mg、至少60mg、至少70mg、至少80mg、至少90mg、至少100mg、至少110mg、至少120mg、至少130mg、至少140mg、至少150mg、至少160mg、至少170mg或至少180mg LINK_TSG6。

在一些方面，将LINK_TSG6施用到骨关节炎关节中。在一些情况下，将其远离骨关节炎关节施用。在一些情况下，患者或受试者可具有多个骨关节炎关节，并且将LINK_TSG6施用到这些骨关节炎关节中的一个关节中。在一些情况下，将LINK_TSG6施用到这些骨关节炎关节中的几个关节中。

在一些情况下，LINK_TSG6用于治疗直接疼痛。也就是说，LINK_TSG6用于治疗关节中由该关节的骨关节炎引起的疼痛。LINK_TSG6可另选地或另外地用于治疗牵涉性疼痛。牵涉性疼痛是指在骨关节炎部位以外的位置感知到的疼痛。

在一些方面，LINK_TSG6每7天施用一次、每10天施用一次、每14天施用一次、每21天施用一次、每30天施用一次、每45天施用一次、每60天施用一次、每90天施用一次或少于每90天施用一次。镇痛(疼痛缓解)效果可持续5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天或更多天。

在本文公开的一些方面，LINK_TSG6多肽包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9的氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成。在一些方面，LINK_TSG6多肽包含与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成。

在另一个方面，本公开提供了被配制用于皮下施用的包含LINK_TSG6的组合物。每剂量的该组合物可包含至少50mg、至少60mg、至少70mg、至少80mg、至少90mg或至少100mg的LINK_TSG6。

在另一个方面，本公开提供了被配制用于关节内施用的包含LINK_TSG6的组合物。该组合物可包含至少1mg/ml、至少2mg/ml、至少3mg/ml、至少4mg/ml、至少5mg/ml、至少6mg/ml、约7mg/ml、约8mg/ml、约9mg/ml、约10mg/ml、约11mg/ml、约12mg/ml、约13mg/ml、约14mg/ml、约15mg/ml、约16mg/ml、约17mg/ml、约18mg/ml、约19mg/ml、约20mg/ml或大于20mg/ml的LINK_TSG6。

本发明包括所描述的方面和优选特征的组合，除非这种组合是明显不允许的或明确避免的。

附图说明

现在将参照附图讨论说明本发明原理的实施方案和实验，其中：

图1.与本公开相关的序列。

图2.Link_TSG6减轻直接OA关节疼痛。通过皮下(s.c.)施用A.(1次/周，上图；每剂量高剂量55μg，低剂量13.75μg)或B.(1次/月，下图；每剂量高剂量220μg，低剂量55μg)的Link_TSG6治疗剂以剂量依赖性方式减轻OA的小鼠部分内侧半月板切除(pMx)模型中与膝关节屈曲有关的疼痛，如通过发声评估的。使用单因素ANOVA和Tukey事后检验确定显著性：与对应的溶媒对照相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图3.Link_TSG6降低了热敏感性。A.通过1次/周皮下(s.c.)施用的Link_TSG6治疗剂使用OA的小鼠部分内侧半月板切除(pMx)模型降低同侧(手术操作的)爪子(上图)中的牵涉性热敏感性(通过对冷(10℃)刺激的缩爪潜伏期评估的)。在对侧爪子(下图)中显著的镇痛作用也很明显。B.1次/月s.c.施用的Link_TSG6治疗剂会降低OA的小鼠pMx模型的同侧爪子(上图)中的牵涉性热敏感性。在对侧爪子(下图)中显著的镇痛作用也很明显。使用单因素ANOVA和Tukey事后检验确定显著性：与对应的溶媒对照相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图4.Link_TSG6降低了机械敏感性。A.通过1次/周皮下(s.c.)施用的Link_TSG6治疗剂使用OA的小鼠部分内侧半月板切除(pMx)模型降低同侧(手术操作的)爪子(上图)中的牵涉性机械敏感性(通过缩爪阈值测量)。在对侧爪子(下图)中显著的镇痛作用也很明显。B.使用OA的小鼠pMx模型，1次/月施用的Link_TSG6治疗剂会降低同侧爪子(上图)中的牵涉性机械敏感性。在对侧爪子(下图)中显著的镇痛作用也很明显。使用单因素ANOVA和Tukey事后检验确定显著性：与对应的溶媒对照相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图5.Link_TSG6改善了承重。A.Link_TSG6治疗剂(1次/周)以剂量依赖性方式改善了当使用皮下(s.c.)施用(上图)或关节内(i.a.)施用(下图)时OA的小鼠pMx模型中的承重(通过双通道重量平均测量的)。B.Link_TSG6治疗剂(1次/月)以剂量依赖性方式改善了当使用皮下(s.c.)施用(上图)或关节内(i.a.)施用(下图)时OA的小鼠pMx模型中的承重。使用单因素ANOVA和Tukey事后检验确定显著性：与对应的溶媒对照相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图6.Link_TSG6减轻了ACLTpMMx大鼠中的触觉异常性疼痛。通过ACLT和pMMx(30％)在雄性Lewis大鼠的右膝中诱导OA。在手术后第7天、第14天和第21天i.a.施用Link_TSG6治疗剂(40g)或溶媒。28天后，通过测定应用于(A)未操作的对照腿部和(B)操作的腿部的后爪上的von Frey毛发的收缩阈值来评估触觉异常性疼痛。平均值±SD由水平条表示(n＝15)。通过单因素ANOVA，使用Tukey事后检验来分析数据；相对于溶媒对照，*p<0.05，***p<0.001，****p<0.0001。

具体实施方式

现在将参照附图讨论本发明的方面和实施方案。其他方面和实施方案对于本领域的技术人员将显而易见。本文中提及的所有文件均以引用方式并入本文。

TSG-6(肿瘤坏死因子刺激基因-6)

TSG-6是由两个模块化结构域组成的分泌蛋白。TSG-6在成人组织中通常不是组成型表达的，而是响应于炎症介质被诱导。在炎症期间，TSG-6是组织的内源性保护剂。间充质干细胞/基质细胞(MSC)的许多免疫调节和组织保护作用是由它们分泌TSG-6介导的。

已经表明，重组全长TSG-6蛋白在多种疾病模型诸如动脉粥样硬化、心肌梗死、增生性瘢痕、结肠炎、自身免疫性糖尿病、类风湿性关节炎、创伤性脑损伤或急性肺损伤中具有抗炎和组织保护作用。

全长TSG-6难以制备，不溶解且易于聚集。如本文所公开的，这些缺点与LINK_TSG6无关，LINK_TSG6是包含人TSG-6的LINK模块的短重组肽。该短多肽比全长TSG-6更容易制备，并且在溶液中高度可溶和稳定。

虽然在一些组织中组成型表达，但无论在什么地方有炎症，TSG-6通常都上调。TSG-6在大多数情况下表现出抗炎和组织保护特性，但已经暗示有时在疾病病理中，例如在肺中起作用。尽管TSG-6由范围广泛的细胞类型产生，但已发现它是由间充质干细胞/基质细胞(MSC)响应于炎症信号产生的，并且它介导这些细胞的许多免疫调节和修复活性，这已导致大量关于这种引起兴趣的分子在多种疾病模型中的治疗效果的出版物。

TSG-6是相对小的蛋白质，分子量仅为约35kDa-38kDa，主要由两个模块化结构域(Link和CUB_C)组成。考虑到TSG-6的大小，它具有惊人的大量活性，包括免疫和基质细胞功能的调节及其对胞外基质形成、力学和重塑的贡献。TSG-6调节基质组织，并控制基质分子与细胞表面受体和胞外信号传导因子(例如，趋化因子)结合的能力可能构成其多样的功能库。就这一点而言，TSG-6与大量的配体诸如糖胺聚糖(GAG)、蛋白聚糖(PG)核心蛋白和其他基质组分相互作用，并直接结合多种趋化因子和骨形态发生蛋白(BMP)。TSG-6的一种特别不寻常的功能是其作为酶的作用，该酶催化非硫酸化GAG透明质酸(HA)被来自蛋白聚糖的内α-抑制剂(IαI)家族的所谓重链(HC)共价修饰。该过程由全长TSG-6蛋白介导，但不由仅含有TSG-6片段的LINK_TSG6多肽介导，会导致HC·HA复合物的形成，并且对于哺乳动物排卵和受精至关重要，并且也发生在许多其他情况(例如炎症)中，其中HC·HA提供组织保护或有助于病理过程。

TSG-6表达的部位和环境、其结构和配体结合特性，以及这些因素一起如何在分子水平上支持其多样的生物学和治疗潜力综述于Day和Mi lner(Matrix Biology(2019年)，第78-79卷：第60-83页)。

本文公开的LINK_TSG6多肽包含人或哺乳动物TSG-6的Link模块。在一些实施方案中，TSG-6多肽包含根据SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5的氨基酸序列，或基本上由其组成。Link模块对应于SEQ ID NO:2和5中的残基37-128，如SEQ ID NO:7所示。

Link模块负责透明质酸(HA)结合活性、硫酸软骨素结合活性、聚集蛋白聚糖结合活性、内α-抑制剂(IαI)结合活性、重链(HC)1结合活性、HC2结合活性、HC3结合活性、双库尼茨结合活性、多能蛋白聚糖结合活性、硫酸皮肤素结合活性、正五聚蛋白-3结合活性、血小板反应蛋白-1结合活性、血小板反应蛋白-2结合活性、纤连蛋白结合活性、硫酸肝素/乙酰肝素结合活性、TSG-6的RANKL结合活性、骨形态发生蛋白(BMP)-2结合活性、BMP-4结合活性、BMP-5结合活性、BMP-6结合活性、BMP-7结合活性、BMP-13结合活性、BMP-14结合活性、CXCL4结合活性、CXCL6结合活性、CXCL8结合活性、CXCL11结合活性、CXCL12结合活性、CCL2结合活性、CCL5结合活性、CCL7结合活性、CCL19结合活性、CCL21结合活性或CCL27结合活性。

LINK_TSG6可以是表现出以下结合活性中的一者或多者的TSG-6的片段：透明质酸(HA)结合活性、硫酸软骨素结合活性、聚集蛋白聚糖结合活性、内α-抑制剂(IαI)结合活性、重链(HC)1结合活性、HC2结合活性、HC3结合活性、双库尼茨结合活性、多能蛋白聚糖结合活性、硫酸皮肤素结合活性、正五聚蛋白-3结合活性、血小板反应蛋白-1结合活性、血小板反应蛋白-2结合活性、纤连蛋白结合活性、硫酸肝素/乙酰肝素结合活性、RANKL结合活性、骨形态发生蛋白(BMP)-2结合活性、BMP-4结合活性、BMP-5结合活性、BMP-6结合活性、BMP-7结合活性、BMP-13结合活性、BMP-14结合活性、CXCL4结合活性、CXCL6结合活性、CXCL8结合活性、CXCL11结合活性、CXCL12结合活性、CCL2结合活性、CCL5结合活性、CCL7结合活性、CCL19结合活性、CCL21结合活性或CCL27结合活性。

US2015/0057229描述了LINK_TSG6在抑制软骨退变中的用途。

TSG-6的LINK结构域(LINK_TSG6)可以是全长TSG-6N-末端至CUB_C结构域的区域。因此，LINK_TSG6蛋白可缺少全部或部分的CUB_C结构域。在优选的方面，LINK_TSG6多肽可包含CUB_C结构域的N-末端区域。

LINK结构域可包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9的氨基酸序列。LINK_TSG6多肽包含(i)SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9的氨基酸序列或(ii)与SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。

LINK_TSG6优选地是包含以下或由以下组成的多肽：(i)SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列，或(ii)与SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性中的一者的氨基酸序列。

在一些情况下，LINK_TSG6由SEQ ID NO:9的氨基酸序列、任选地在C-末端、N-末端处或在C-末端和N-末端中的每一者处的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个附加的氨基酸组成。在一些情况下，LINK_TSG6由SEQ ID NO:7的氨基酸序列、任选地在C-末端、N-末端处或在C-末端和N-末端中的每一者处的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个附加的氨基酸组成。

因此，LINK_TSG6多肽可包含：

(a)SEQ ID NO:7的氨基酸序列；

(b)其与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少50％同一性并且具有RANKL结合活性的变体；或

(c)(a)或(b)的具有CXCL4结合活性、CXCL6结合活性、CXCL8结合活性、CXCL11结合活性、CXCL12结合活性、CCL2结合活性、CCL5结合活性、CCL7结合活性、CCL19结合活性、CCL21结合活性或CCL27结合活性的片段。

LINK_TSG6多肽可由SEQ ID NO:7所示的序列组成或基本上由其组成。

SEQ ID NO:9示出了包含TSG-6的Link模块(LINK_TSG6)的重组多肽。因此，本发明所用的TSG-6多肽优选地包含：

(a)SEQ ID NO:9的氨基酸序列；

(b)其与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少50％同一性并且具有RANKL结合活性的变体；或

(c)(a)或(b)的具有CXCL4结合活性、CXCL6结合活性、CXCL8结合活性、CXCL11结合活性、CXCL12结合活性、CCL2结合活性、CCL5结合活性、CCL7结合活性、CCL19结合活性、CCL21结合活性或CCL27结合活性的片段。

LINK_TSG6多肽优选地由SEQ ID NO:9所示的序列组成或基本上由其组成。

氨基酸同一性可使用任何合适的算法计算。例如，UWGCG软件包提供了BESTFIT程序，该程序可用于计算同源性(例如按其默认设置使用)(Devereux等人(1984年)，NucleicAcids Research，第12卷：第387-395页)。PILEUP和BLAST算法可用于计算同源性或排列序列(诸如鉴定等同或相应的序列(通常按其默认设置)，例如如Altschul(1993年)，J.Mol.Evol.，第36卷，第290-300页；Altschul等人(1990年)，J.MoI.Biol.，第215卷，第403-410页)中所述。

进行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。该算法包括首先通过鉴定查询序列中长度为W的短字来鉴定高得分序列对(HSP)，当与数据库序列中相同长度的字进行比对时，该短字匹配或满足一些正值阈值得分T。T被称为邻近字得分阈值(Altschul等人，同上)。这些初始邻近字命中用作启动搜索的种子以寻找含有它们的HSP。只要累积比对得分可增加，字命中就沿每个序列在两个方向上扩展。当出现以下情况时，停止字命中在每个方向上的扩展：累积比对得分从其最大获得值下降数量X；由于一个或多个负得分残基比对的累积，累积得分变为零或更低；或者到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLAST程序默认使用字长(W)为11，BLOSUM62得分矩阵(参见Henikoff和Henikoff(1992年)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第89卷：第10915-10919页)算法(B)为50，期望值(E)为10，M＝5，N＝4来比较两条链。

BLAST算法对两个序列之间的相似性进行统计分析；参见，例如，Karl in和Altschul(1993年)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第90卷：第5873-5787页。BLAST算法提供的一种相似性量度是最小和概率(P(N))，其提供了两个聚核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果在第一序列与第二序列的比较中最小和概率小于约1，优选地小于约0.1，更优选地小于约0.01，最优选地小于约0.001，则认为该序列与另一序列相似。

变体序列通常相差至少1个、2个、5个、10个、20个、30个、50个或更多个突变(其可以是氨基酸的取代、缺失或插入)。例如，可以进行1个至50个、2个至30个、3个至20个或5个至10个氨基酸取代、缺失或插入。经修饰的多肽通常可优选地以剂量依赖性方式保留CXCL4结合活性、CXCL6结合活性、CXCL8结合活性、CXCL11结合活性、CXCL12结合活性、CCL2结合活性、CCL5结合活性、CCL7结合活性、CCL19结合活性、CCL21结合活性或CCL27结合活性。取代优选是保守取代，例如根据下表。第二列中同一区块中的氨基酸和优选第三列中同一行中的氨基酸可以彼此取代：

用于本发明的LINK_TSG6多肽的长度通常为至少10个，例如至少15个、20个、25个、30个、40个、50个、60个、70个、80个、90个或更多个氨基酸，且长度为至多100个、150个、200个或250个氨基酸，只要其保留TSG-6的CXCL4结合活性、CXCL6结合活性、CXCL8结合活性、CXCL11结合活性、CXCL12结合活性、CCL2结合活性、CCL5结合活性、CCL7结合活性、CCL19结合活性、CCL21结合活性或CCL27结合活性即可。优选地，多肽包含SEQ ID NO:7所示的序列。SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9的氨基酸序列的片段优选地含有在Mahoney等人(2001年)，J.Biol.Chem.，第276卷，第22764-22771页和Blundell等人(2003年)，J.Biol.Chem.，第278卷：第49261-49270页中显示对透明质酸结合至关重要的残基。SEQ ID NO:2或5的氨基酸序列的片段优选含有SEQ ID NO:2或5的残基Lys-46和/或Tyr-47和/或Tyr-94和/或Phe-105和/或Tyr-113。最优选地，SEQ IDNO:2或5的片段含有SEQ ID NO:2或5的残基Lys-46、Tyr-47、Tyr-94、Phe-105和Tyr-113中的每一者。

SEQ ID NO:7的氨基酸序列的片段可用于本发明。此类片段优选含有SEQ ID NO:7的残基Lys-10和/或Tyr-11和/或Tyr-58和/或Phe-69和/或Tyr-77。最优选地，SEQ ID NO:7的片段含有SEQ ID NO:7的残基Lys-10、Tyr-11、Tyr-58、Phe-69和Tyr-77中的每一者。

SEQ ID NO:9的氨基酸序列的片段优选含有SEQ ID NO:9的残基Lys-11和/或Tyr-12和/或Tyr-59和/或Phe-70和/或Tyr-78。最优选地，SEQ ID NO:9的片段含有SEQ ID NO:9的残基Lys-11、Tyr-12、Tyr-59、Phe-70和Tyr-78中的每一者。本发明中所用的TSG-6多肽可被化学修饰，例如被翻译后修饰。例如，它们可被糖基化、磷酸化或包含经修饰的氨基酸残基。它们可通过添加组氨酸残基以有助于它们的纯化或通过添加跨膜序列以促进插入到细胞膜中来修饰。此类经修饰的多肽落在本文所用的术语“多肽”的范围内。

适用于确定TSG-6多肽结合HA、硫酸软骨素、聚集蛋白聚糖、内α-抑制剂(IαI)、重链(HC)1、HC2、HC3、双库尼茨、多能蛋白聚糖、硫酸皮肤素、正五聚蛋白-3、血小板反应蛋白-1、血小板反应蛋白-2、硫酸肝素/乙酰肝素、纤连蛋白、RANKL、骨形态发生蛋白(BMP)-2、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-13、BMP-14、CXCL4、CXCL6、CXCL8、CXCL11、CXCL12、CCL2、CCL5、CCL7、CCL19、CCL21和CCL27的能力的测定法是本领域众所周知的(Getting等人(2002年)，J.Biol.Chem.，第277卷，第51068-51076页；Mahoney等人，(2005年)，J.Biol.Chem.，第280卷，第27044-27055页；Salustri等人，(2004年)，Development，第131卷，第1577-1586页；Parkar等人，(1997年)，FEBS Lett.，第410卷，第413-417页；Parkar等人，(1998年)，FEBS Lett.，第428卷，第171-176页；Mahoney等人，(2001年)，J.Biol.Chem.，第276卷，第22764-22771页；Nentwich等人，(2002年)，J.Biol Chem.，第211卷，第15354-15362页；Kuznetsova等人，(2005年)，J.Biol.Chem.，第280卷，第30899-30908页；Dyer等人，(2014年)，J.Immunol，第192卷，第2177-2185页；Dyer等人，(2016年)，J.Biol.Chem.，第291卷，第12627-12640页；Mahoney等人，(2008年)，J.Biol.Chem，第283卷，第25952-25962页；Marson等人，(2009年)，Glycobiology，第19卷，第1537-1546页；Kuznetsova等人，(2006年)，J.Cell Sci.，第119卷，第4499-4509页；Kuznetsova等人，(2008年)，Matrix Biology，第27卷，第201-210页)；以及Day和Mi lner，(2019年)，Matrix Biology.，第78-79卷，第60-83页。

用于本发明的TSG-6多肽可处于基本上分离的形式。应当理解，多肽可以与不干扰多肽的预期目的的载体或稀释剂混合，并仍然被认为是基本上分离的。用于本发明的多肽也可处于基本上纯化的形式，在这种情况下，它通常包括制剂中的多肽，其中制剂中超过50重量％，例如超过80重量％、90重量％、95重量％或99重量％的多肽是本发明的多肽。

用于本发明的LINK_TSG6多肽可以是天然或非天然存在的多肽。多肽可以从任何合适的表达TSG-6多肽的生物体中分离。TSG-6多肽可以从人或另一种合适的哺乳动物诸如灵长类动物、大鼠或小鼠中分离。另选地，TSG-6多肽可以从鱼或两栖动物中分离。也可将用于本发明的多肽制备为此类分离多肽的片段。

此外，LINK_TSG6多肽也可合成或通过重组方法制备。例如，重组LINK_TSG6多肽可通过以下方式产生：用包含核苷酸序列的表达载体转染培养中的细胞，该核苷酸序列编码与合适的控制序列可操作地连接的多肽；培养这些细胞；提取和纯化由这些细胞产生的LINK_TSG6多肽。用于重组产生多肽的方法是本领域众所周知的(例如，Sambrook等人，2001年，《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning:a laboratory manual)，第3版，美国冷泉港实验室出版社)。优选地，LINK_TSG6多肽在细菌诸如大肠杆菌(E.coli)中制备。

可修饰用于本发明的LINK_TSG6多肽的氨基酸序列以包括非天然存在的氨基酸或增加化合物的稳定性。当通过合成方法产生多肽时，可在生产过程中引入此类氨基酸。也可以在合成或重组产生多肽后再修饰该多肽。

在一些方面，本文所用的LINK_TSG6多肽不包含在融合蛋白中。即，LINK_TSG6不与另一肽或多肽融合。在一些情况下，LINK_TSG6不是具有生长因子诸如IGF-1的融合蛋白。

用于本发明的LINK_TSG6多肽也可使用D-氨基酸产生。在此类情况下，氨基酸将沿C至N取向以相反顺序连接。这在本领域中是用于产生此类多肽的常规方法。

许多侧链修饰是本领域已知的，并且可对LINK_TSG6多肽的侧链进行修饰，条件是该多肽保留减轻骨关节炎疼痛的能力。

骨关节炎

本公开涉及骨关节炎疼痛的治疗。骨关节炎疼痛是与骨关节炎相关的疼痛。骨关节炎疼痛可以由骨关节炎引起。换句话说，骨关节炎可导致患者的关节变得疼痛和僵硬。

骨关节炎(OA)是世界范围内最常见的关节炎形式。它是由关节中软骨退化引起的长期慢性疾病，并且特征在于疼痛和受影响的关节的活动性丧失。几乎任何关节都可能受到骨关节炎的影响，但是该病症最经常引起膝部、臀部以及手部和腕部的小关节中的问题。例如，手部和腕部的关节可以是手指和拇指的关节(指间关节)、手指或拇指底部的关节(掌指关节)、手部(腕掌)或腕部的底部(舟骨-大多骨-小多骨关节、腕骨间关节和中腕/桡腕关节)。可能受影响的其他关节包括脊柱关节、肩关节、肘关节、踝关节(包括距小腿关节、距下关节和胫腓关节)和脚部的小关节(例如掌指关节、近端指间关节和远端指骨关节)。

OA可基于症状的描述(包括所经历的任何疼痛的位置和模式)来诊断。这可包括因运动或当日时间而恶化的关节疼痛的病史。症状的描述还可包括僵硬，特别是在早晨起床并经历受限的关节运动之后。诊断也可考虑OA的任何家族史。

OA通常通过身体检查，即检查症状诸如关节压痛、僵硬和关节运动受限、步态改变、关节运动时的咔嚓声或捻发音、骨肿胀或畸形关节诸如Heberden和Bouchard结节、关节不稳定、支持关节的肌肉积液过多或无力来诊断。

在一些情况下，OA诊断可包括使用受影响关节的X射线来鉴定症状，这些症状包括相邻骨之间的关节间隙变窄、关节中钙沉积和骨刺形成(在关节中骨接合处出现的生长)。在某些情况下，磁共振成像(MRI)也可用于OA诊断。MRI可对包括软骨和骨髓的软组织成像，并且可显示出骨髓病变和软骨损坏。

OA严重程度通常以“期”为特征。OA进展的4期为1期—极轻度、2期—轻度、3期—中度或4期—重度。0期表示“正常”的膝部健康状况(没有关节损害或已知损伤的迹象)。OA不以均匀的速率发展。OA可在数周、数月、数年或数十年后恶化。OA的进展取决于许多因素，包括年龄、遗传、总体健康状况和活动水平、体重/BMI和受影响的关节的使用程度。在许多情况下，疼痛水平与关节中的结构变化有关。然而，一些患者会经历慢性疼痛而不出现实质性的结构改变，诸如软骨损耗。

患有1期(极轻度)OA的患者将发生轻微的结构变化，并且通常经历很少疼痛或不经历疼痛。在1期，在受影响的关节中可能出现少量的骨刺生长。

患有2期(轻度)OA的患者可能经历僵硬、不适，并且在一些情况下可能在受影响的关节中经历疼痛。久坐、在早晨或在锻炼后，僵硬和不适可能加剧。可能通过X射线检测到明显的骨刺，并且软骨可能开始损坏。2期OA可能需要缓解疼痛的治疗或其他治疗，诸如锻炼方案、减肥或穿戴关节支撑件或支架。

当受影响的关节中的软骨受到明显侵蚀时，出现3期(中度)OA。关节中的骨之间的间隙可能变窄，并且骨刺可能在关节中的骨之间形成或继续发展。关节可能看起来畸形或弯曲。关节可能发炎，并且3期OA的患者在日常活动诸如行走、跑步、跪坐或伸展受影响的关节期间可能经历频繁的疼痛和不适。在久坐之后或在早晨，僵硬和不适可能会增加。患者可能设法缓解疼痛。

4期(重度)OA患者经历最高水平的OA。4期的特征可在于很少软骨甚至没有软骨，并且骨之间的关节间隙大幅减小。关节中的滑液可能减少，并且当移动受影响的关节时，摩擦、疼痛和不适增加。然而，在一些情况下，关节中的滑液因水肿而增加。骨刺生长很可能成倍增加。关节可能看起来畸形或弯曲。4期OA的疼痛通常更强烈，并且可被描述为慢性疼痛，即严重且极度痛苦的疼痛，4期OA疼痛也会使日常活动诸如行走和爬楼梯受到挑战。

骨关节炎疼痛

OA疼痛是与OA相关的疼痛。OA疼痛可以被框定在生物心理学框架中，其中生物因素、心理因素和社会因素都起作用。化学介质被释放到发炎的关节中，敏化初级传入神经，使得通常无害的运动(诸如身体活动增加、高跟鞋或天气变化)现在引起疼痛反应。这是异常性疼痛(响应于正常的非疼痛刺激的疼痛感觉)的神经生理学基础。随着时间的推移，增加的神经元活动可通过被称为“发条(wind-up)”的过程引起中枢神经系统的可塑性变化，在此过程中，脊髓中的二级神经元增加其放电率，使得增强了疼痛信息向体感皮层的传递。

这种中枢敏化现象会加剧疼痛感，甚至可能导致远离发炎关节的身体区域产生疼痛反应(即牵涉性疼痛)。

OA疼痛的结构决定因素可能涉及多种途径。OA疼痛不太可能直接由受损的软骨产生，因为关节软骨是无神经的(没有神经组织)并且是无血管的(没有血管)。相反，关节中的其他症状来源包括软骨下骨、骨膜、关节周围韧带、关节周围肌肉痉挛、滑膜和关节囊，它们都富含神经，并且是OA中伤害性感受的来源。OA疼痛可能与结构性原因有关，诸如骨髓病变、关节下骨磨损、滑膜炎(滑膜炎症)和积液(过多的滑液积聚在膝关节内或膝关节周围)。这种结构性原因可使用MRI来检测。Lo等人的先前工作发现，骨髓病变和积液与骨关节炎疼痛有很强的相关性(Lo等人，Arthritis&Rheumatism.，2008年，第56卷第9期：第S790页。摘要)。

在某些情况下，OA关节疼痛可能是由于神经的可塑性。例如，患有OA的患者的通常无神经的组织诸如软骨可能会受到神经支配，这意味着通常不敏感的软骨可能成为疼痛的来源。

可能诱发症状的体质因素包括自我效能、疼痛灾难化和关节炎的社会背景(例如社会支持、疼痛交流)，所有这些都是理解疼痛体验的重要考虑因素。

OA疼痛可被描述为疼痛，并且在移动受影响的关节后可能会更严重。在某些情况下，OA疼痛在一天结束时会更严重。吃了某些食物后，OA疼痛可能会增加或减轻。OA疼痛并不总是与OA分期相关，在某些情况下，患者可能会因少量的关节损伤而感到剧烈疼痛。中度和重度OA引起的疼痛可对生活质量产生严重影响。OA疼痛可导致睡眠障碍，进而导致疲劳和抑郁。在某些情况下，每天不同的OA疼痛可能会导致更多的睡眠障碍，因为更难预测和适应疼痛。睡眠不良可能会增加对OA疼痛的敏感性。在某些情况下，OA患者可能会发现参加慢性疼痛支持小组是有益的。

骨关节炎疼痛通常会随着时间的推移而恶化，然而在一些情况下疼痛会来来去去，并不总是以线性方式恶化。中度至重度疼痛期之后可能会有改善期。有时OA疼痛可能在一年中的不同时间更严重，或者对天气敏感。这可能是由于气压和环境温度的影响(McAlindon等人，2007年，AmJMed.，第120卷第5期：第429-434页)。在一些情况下，骨关节炎疼痛在秋季和冬季更严重，或者在更高的气压或更冷的环境温度期间与更大的疼痛相关。在某些情况下，对感染区域使用热敷袋或冷敷袋可暂时减轻OA疼痛。

缓解OA疼痛对关节置换术后的手术结果也可能很重要。例如，膝关节置换术(膝关节置换手术)的疼痛结果可能会受到术前疼痛感知的影响。在一些情况下，术前疼痛灾难化(认为疼痛会变得更严重，并且对此无能为力)是手术后疼痛结果不良的预测因素(Riddle等人，2010年，Clin Orthop Relat Res.，第468卷第3期：第798-806页)。

骨关节炎疼痛与神经病理性疼痛不同。神经病理性疼痛是由影响体感神经系统的损伤或疾病引起的疼痛，并且可能与称为感觉迟钝的异常感觉或来自正常非疼痛刺激的疼痛(异常性疼痛)有关。它可能具有连续和/或偶发(阵发性)成分。相比之下，骨关节炎疼痛是伤害性疼痛。伤害性疼痛是由神经系统向大脑报告的疼痛，而不是源于神经系统本身。

在本文公开的某些方面，骨关节炎疼痛不是神经病理性疼痛，或者不是具有神经性成分的骨关节炎疼痛。在本文公开的某些方面，患者没有神经病理性疼痛。在某些情况下，OA疼痛是或包括牵涉性疼痛。牵涉性疼痛可以是远离骨关节炎关节的身体区域的疼痛。

OA疼痛可使用西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)和医学结果研究简表36(SF-36)量表来测量。

WOMAC是将OA疼痛细分为以下5个方面的问卷：行走、爬楼梯、床上、坐着或躺着，以及直立时。除了疼痛之外，WOMAC还包括关于僵硬的2个方面的问题：第一次醒后、当天晚些时候；以及在完成下楼梯、上楼梯、坐起、站立、弯曲关节、行走、上下车、购物、穿袜子、脱袜子、从床上起来、躺在床上、进出浴室、坐下、上下厕所、家务繁重、家务轻等活动时，对17个方面进行“身体功能”的评估。测试问题以0-4等级评分，对应于：无(0)、轻度(1)、中度(2)、重度(3)和极度(4)。将每个分量表的评分相加，可能的疼痛评分范围为0-20，僵硬评分范围为0-8，身体功能评分范围为0-68。通常，所有三个分量表的评分总和得出96分的总WOMAC评分，其中较高的评分表示疼痛、僵硬和有限的身体功能。WOMAC疼痛评分的降低或WOMAC总评分的降低可表明OA疼痛的治疗已成功。

SF-36包括关于患者在过去4周内身体疼痛的程度(等级为1-6，1-无、2-非常轻微、3-轻度、4-中度、5-重度、6-非常严重)和疼痛对正常工作(包括外出工作和家务)的干扰程度(其中1-根本不、2-一点、3-中度、4-相当多和5-极度)的问题。问题还可包括患者的健康是否限制了他们的活动，诸如跑步、举起物体、参加运动、推动真空吸尘器、爬楼梯、弯曲关节、跪下或弯腰、步行不同距离或洗澡或自己穿衣(对于每项活动：1–限制很多、2–限制很少或3–完全不限制)。

OA疼痛的定性方面可使用量表诸如简式麦吉尔疼痛问卷(MPQ-SF)来评估。MPQ-SF包括“感觉分量表”和“情感分量表”。感觉分量表描述符可包括例如：悸动、抽痛、刺痛、锐痛、绞痛、啃咬、灼热、疼痛、沉重、触痛、头剧痛。情感分量表可包括描述符诸如“疲惫不堪”、令人作呕、恐惧和“惩罚残酷”。疼痛的每个描述或方面使用0-无、1-轻度、2-中度或3-重度的等级评分。

在某些情况下，OA疼痛可用问卷调查来衡量，诸如间歇性和持续性骨关节炎疼痛测量(ICOAP)(https://www.oarsi.org/research/outcome-measures)。ICOAP将持续的OA疼痛与“来来去去的疼痛”分开衡量。持续的OA疼痛可通过以下问题来衡量，这些问题可能包括疼痛的强度、疼痛对睡眠的影响程度、疼痛对整体生活质量的影响程度、疼痛造成的沮丧或烦恼、或心烦意乱和担忧的程度。每个方面被评分为0-根本不、1-轻度、2-中度、3-重度或4-极度。不频繁的OA疼痛或OA“来来去去的疼痛”也可通过强度、频率(0-从不、1-很少、2-有时、3-经常、4-非常经常)、对睡眠的影响、对生活质量的影响、OA疼痛引起的沮丧或烦恼、或心烦意乱和担忧的程度来衡量。除频率外的每个方面被评分为0-根本不、1-轻度、2-中度、3-重度或4-极度。这些变量可例如在过去的几天或过去的一周内测量。在一些情况下，它们可在超过一周的时间段内测量。

患者

本文公开的方法可包括评估受试者或患者的OA和骨关节炎疼痛迹象的步骤。患者可能患有骨关节炎。换句话说，患者可能先前已经收到骨关节炎的诊断。患者可能先前已接受针对骨关节炎疼痛的治疗，例如，患者可能先前已接受对乙酰氨基酚(扑热息痛)、NSAID或鸦片/类鸦片止痛药以治疗骨关节炎疼痛。在一些情况下，患者不会遭受其他类型的疼痛。例如，患者不患有或未遭受神经病理性疼痛。

患者可以是男性或女性。患者可以处于任何年龄。例如，患者可以是至少20岁、25岁、30岁、35岁、40岁、45岁、50岁、55岁、60岁、65岁、70岁、75岁、80岁、85岁、90岁、95岁、100岁或以上。

待治疗的受试者可以是任何动物或人。受试者优选地是哺乳动物，更优选地是人。受试者可以是非人哺乳动物，诸如狗、猫、马或牛。受试者可以是男性或女性。在一些情况下，非人哺乳动物的骨关节炎疼痛的特征可在于行为变化，诸如跛脚走路、咬或撕咬、触摸时发声或游戏减少。受试者可以是患者。治疗用途可用于人或动物(兽医用途)。受试者或患者可以是需要治疗OA疼痛的受试者或患者。受试者或患者患有或疑似患有骨关节炎。受试者或患者的疼痛是或疑似是骨关节炎疼痛。换句话说，患者或受试者经历的疼痛由受试者/患者中的骨关节炎引起或怀疑由其引起。受试者/患者可具有一个或多个骨关节炎关节(即，在具有一种或多种骨关节炎症状的两块或多块骨之间形成的连接)。受试者或患者可具有骨关节炎的临床诊断。受试者/患者可患有I期、II期、III期或IV期骨关节炎。最可能的是，受试者/患者患有I I期、II I期或IV期骨关节炎。受试者或患者可以被自我诊断为患有骨关节炎。

治疗方法

本文公开了治疗或预防骨关节炎疼痛的方法。治疗骨关节炎疼痛可导致或旨在导致OA疼痛的减轻或消除。这些方法可涉及减轻疼痛的严重程度；疼痛的频率；OA疼痛对睡眠的影响；疼痛对生活质量的影响；疼痛引起挫折或烦恼、忧虑或烦恼的程度；当行走、站立、蹲坐、使用楼梯、履行家庭职责、穿衣或沐浴时疼痛的减轻中的一者或多者。治疗可导致OA疼痛的完全或部分消退。治疗可导致疼痛症状的部分或完全减轻，诸如在施用后至少一天、在施用后至少两天、在施用后至少三天、在施用后至少四天、在施用后至少五天、在施用后至少六天、在施用后至少七天、在施用后超过一周、在施用后超过10天、在施用后超过两周、在施用后超过三周或在施用后一个月或更长时间症状的部分或完全减轻。在施用后至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天可以出现症状的部分或完全减轻。优选地，在施用后至少一周内出现症状的部分或完全减轻。

治疗后，患者的WOMAC疼痛得分可能在5个方面中的一个或多个方面有所下降，WOMAC疼痛得分可能在WOMAC疼痛得分的2个或更多个方面、3个或更多个方面、4个或更多个方面或所有5个方面有所下降。在一些情况下，一个或多个方面的评分可降低多于1分，或多于2分、3分或4分。例如，治疗可导致WOMAC评分的至少一个方面降低至少1分，或WOMAC评分的至少2个方面在每个方面降低至少1分，或WOMAC评分的至少3个方面在每个方面降低至少1分，或WOMAC评分的至少4个方面在每个方面降低至少1分，或WOMAC评分的所有5个方面在每个方面降低至少1分。治疗可导致WOMAC评分的至少一个方面降低至少2分，或WOMAC评分的至少2个方面在一个方面降低至少2分，或WOMAC评分的至少3个方面在一个方面降低至少2分，或WOMAC评分的至少4个方面在一个方面降低至少2分，或WOMAC评分的所有5个方面在一个方面降低至少2分。

治疗可导致WOMAC疼痛评分降至0分。

患者的96分的总WOMAC评分可降低，例如WOMAC总评分降低至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、95分或完全降至0分。

在一些情况下，治疗后患者的SF-36疼痛评分可能会降低一分或多分，例如他们在过去4周内或自从治疗以来所经历的疼痛程度的评分降低。这可以是降低1、2、3、4或5分。患者还可能经历SF-36量表中关于疼痛对正常工作干扰程度的一分或多分降低。在一些情况下，降低可以是2、3或4分。降低可以是针对疼痛的两个方面(即，患者经历的疼痛程度以及疼痛对正常工作干扰程度)记录的一分或多分的降低。

治疗后，如使用MPQ-SF所评估的，患者可能在OA疼痛的定性方面有所改善。改善可量化为“感觉分量表”11个方面中的一个或多个方面的评分降低。改善可在感觉分量表的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或所有11个方面。在一些情况下，一个或多个方面的评分可降低一分或多分、2分或更多分、或3分。在一些情况下，改善可以是在“情感分量表”的4个方面中的一个或多个方面的评分降低。改善可在感觉分量表的1、2、3或所有4个方面。感觉分量表和情感分量表的一个或多个方面可能有所改善。

治疗后，患者可能经历间歇性和/或持续性疼痛的改善，如使用ICOAP所测量的。改善可量化为持续性疼痛的一个或多个方面的评分降低。在一些情况下，改善是持续性疼痛的2个或更多个方面、3个或更多个方面、4个或更多个方面的评分降低，或持续性疼痛的所有方面的评分降低。评分可能降低超过1分，诸如降低2、3或4分。可能的是，一个或多个方面或总的持续性疼痛评分可降至0分。患者也可能经历间歇性疼痛的改善，诸如频率或强度评分的降低。在一些情况下，改善可以是间歇性疼痛的2个或更多个方面、3个或更多个方面、4个或更多个方面、5个或更多个方面的评分降低，或间歇性疼痛的所有方面的评分降低。评分可能降低超过1分，诸如降低2、3或4分。可能的是，一个或多个方面或总的间歇性疼痛评分可降至0分。

在治疗后，患者可能使用另一种临床上适当的疼痛强度、频率或对日常活动和行为或精神健康影响的测量而具有降低的疼痛评分。

施用途径

本文所述方法可涉及通过任何途径施用LINK_TSG6，诸如关节内、局部、肠胃外、全身、静脉内、动脉内、肌内、鞘内、眼内、皮下、口服或可包括注射的经皮施用途径。

在优选的方面，治疗涉及皮下或关节内施用。

在一些情况下，治疗涉及将LINK_TSG6施用到远离骨关节炎疼痛部位的部位。远处部位可以是远离骨关节炎疼痛部位的任何合适部位。该远处部位通常是适于皮下施用的部位。在一些情况下，LINK_TSG6可皮下施用到腹部、手臂、大腿、臀部或髋部。例如，手臂的上外部区域、大腿的前侧和外侧、臀部的上外部区域或上髋部。该远处部位可以是与骨关节炎疼痛部位在同一肢体中的部位，例如靠近骨的与骨关节炎关节相对的端部。例如，当该部位或骨关节炎疼痛是患有骨关节炎的膝关节时，LINK_TSG6可在与骨关节炎性膝盖相同的腿中靠近股骨、大腿或髋部的顶部施用。在一些情况下，该远处部位是对侧部位(即，骨关节炎疼痛部位的身体另一侧上的部位)，例如与包含患有骨关节炎疼痛的膝盖的腿相对的腿。在一些情况下，该远处部位是与骨关节炎疼痛部位不同的肢体，诸如手臂或腹部。

在一些情况下，治疗涉及关节内(i.a.)施用LINK_TSG6。i.a.施用可涉及施用于骨关节炎关节。i.a.施用可涉及施用于多个骨关节炎关节。例如，i.a.施用于一个或两个膝关节或髋关节，或施用于多种不同类型的关节，诸如施用于一个或多个膝关节和施用于一个或多个髋关节。施用于两个膝关节可发生在基本上相同的时间点，诸如在与医生的同一预约期间。施用可涉及超声或荧光透视引导的注射。在一些情况下，关节内施用不包括施用包含LINK_TSG6的融合蛋白或施用LINK_TSG6核酸以在关节中表达。

在本文所述的一些方面，该施用不是鞘内的。

施用可以是每周一次。该周优选是日历周(即，平均每7天施用一次)。施用可以是每月一次(每个日历月一次，或平均每30天施用一次)。在一些优选的情况下，施用是每月一次(平均每30天施用1次)。在一些情况下，治疗包括以低于每周一次的频率施用LINK_TSG6，诸如每两周一次、每三周一次或每月一次。如本文所用，术语“平均值”是指数学平均值。

在一些情况下，平均每5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天给予一次施用。优选地，平均每7、14、21或30天给予一次施用。在一些情况下，平均每30天给予一次施用。

受试者骨关节炎疼痛的评价可在施用治疗有效量的LINK_TSG6之前、期间或之后的任何时间点进行。

剂量

优选以“治疗有效量”施用，这足以显示对个体的益处。实际施用量、施用的速率和疗程将取决于所治疗疾病的性质和严重程度。治疗处方，例如剂量决定等，在全科医生和其他医生的责任范围内，并且通常考虑待治疗的疾病、个体患者的状况、递送部位、施用方法和医生已知的其他因素。上述技术和方案的示例可见于《雷明顿药物科学》(Remington’sPharmaceutical Sciences)，第20版，2000年，利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司。

如本文所公开的，当以高剂量和低剂量皮下或关节内施用时，LINK_TSG6可有效减轻骨关节炎疼痛。

基于鼠剂量确定人等效剂量(HED)的几种方法是本领域已知的，并且可用于确定适用于本文所述的方法、治疗和组合物的剂量。

在某些方面，特别是对于皮下施用，可基于小鼠和人的体表面积比较来按比例调整用于人施用的剂量。另选地，特别是对于关节内施用，可基于比较体重和药物浓度或基于“虚拟空间”考虑来按比例调整剂量。特别地，参见Nair和Jacob(Journal of basic andclinical pharmacy.，2016年，第7卷第2期，第27-31页)，W02015085706A和Emami等人，2018年，这些文献的内容均全文并入本文。

因此，在一些方面，治疗涉及每月3mg至180mg、每月10mg至150mg、每月20mg至140mg、每月30mg至130mg、每月40mg至120mg或每月50mg至110mg的施用。在一些方面，治疗涉及每月约50mg、每月约60mg、每月约70mg、每月约80mg、每月约90mg或每月约100mg的LINK_TSG6皮下施用。

在本文所述的一些方面，治疗涉及每月3mg至180mg、每月10mg至150mg、每月20mg至140mg、每月30mg至130mg、每月40mg至120mg或每月50mg至110mg的皮下施用。在一些方面，治疗涉及每月约2mg、每月约3mg、每月约4mg、每月约5mg、每月约10mg、每月约20mg、每月约30mg、每月约40mg、每月约50mg、每月约60mg、每月约70mg、每月约80mg、每月约90mg或每月约100mg的LINK_TSG6的皮下施用。

考虑到许多OA患者超重或肥胖，可能需要更高的剂量。此外，少于每月一次的给药频率(诸如每8周1次剂量)可能需要更高的剂量。

对于关节内施用，可基于W02015085706A中描述的方法基于小鼠和人的比较体重来按比例调整剂量。

在一些方面，治疗涉及每周施用0.5mg至15mg、1mg至14mg、2mg至13mg、3mg至12g、4mg至11mg、5mg至10mg、6mg至9mg或约8mg LINK_TSG6。

在一些方面，该治疗可包括施用0.5mg至50mg、0.5mg至45mg、1mg至40mg、2mg至35mg、5mg至30mg、10mg至20mg LINK_TSG6。例如，每周至少0.5mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg或45mg LINK_TSG6。

制剂

根据本发明各方面的药物和药物组合物可被配制用于通过多种途径施用，包括但不限于皮下、关节内、肠胃外、静脉内、动脉内、肌内、口服和鼻内。药物和组合物可被配制成流体或固体形式。流体制剂可被配制用于通过注射施用到人或动物身体的选定区域。例如，流体制剂可被配制用于通过皮下注射施用到腹部。

优选地，根据本发明各方面的药物和药物组合物被配制用于皮下或关节内施用。在一些情况下，LINK_TSG6与已知可用于治疗OA的一种或多种其他药剂一起配制。例如，LINK_TSG6的关节内制剂可另外包含皮质类固醇、透明质酸或富含血小板的血浆中的一种或多种(参见Ayhan E.等人，(2014年)，World J Orthop.，第5卷第3期：第351-361页。doi:10.5312/wjo.v5.i3.351)。

药物组合物可使用由被认为安全有效的材料组成的药学上可接受的“载体”来制备。“药学上可接受的”是指“通常被认为是安全的”分子实体和组合物，例如，当施用于人时，其是生理上可耐受的并且通常不产生过敏或类似的不良反应，例如胃部不适、味觉丧失或改变(味觉缺失)等。在一些实施方案中，该术语是指由美国联邦或州政府的监管机构批准的分子实体和组合物，如《联邦食品、药品和化妆品法》第204(s)和409节的GRAS列表，须经FDA或类似列表、美国药典或其他普遍认可的用于动物、更特别是用于人的药典的上市前审查和批准。

术语“载体”是指稀释剂、粘合剂、润滑剂和崩解剂。本领域技术人员熟悉此类药物载体和使用此类载体配混药物组合物的方法。

本文提供的药物组合物可包含一种或多种赋形剂，例如溶剂、增溶剂、悬浮剂、缓冲剂、等渗剂、抗氧化剂或抗微生物防腐剂。当使用时，组合物的赋形剂不会不利地影响活性成分(即组合物中使用的LINK_TSG6)的稳定性、生物利用度、安全性和/或功效。因此，技术人员将理解，提供了在剂型的任何组分之间没有不相容性的组合物。赋形剂可选自缓冲剂、增溶剂、张度剂、螯合剂、抗氧化剂、抗微生物剂和防腐剂。

在前面的描述中、或者在下面的权利要求中、或者在附图中公开，并且以其特定形式或根据用于执行所公开功能的手段、或用于获得所公开结果的方法或过程来表达的特征，可视情况单独地或以这些特征的任意组合用于以其不同形式实现本发明。

虽然已经结合上文所述的示例性实施方案描述了本发明，但是当给出本公开时，许多等同的修改和变型对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，上述本发明的示例性实施方案被认为是说明性的而非限制性的。在不脱离本发明的实质和范围的情况下，可对所描述的实施方案进行各种改变。

为了避免任何疑问，本文提供的任何理论解释都是为了提高读者的理解。本发明人不希望受这些理论解释中的任一者的束缚。

本文所用的任何章节标题仅用于组织目的，并且不应被解释为限制所描述的主题。

贯穿本说明书，包括随后的权利要求书，除非上下文另有要求，否则词语“包括”及其变型形式诸如“包含”和“含有”将被理解为暗示包括所陈述的整数或步骤或者整数或步骤的组，但不排除任何其他整数或步骤或者整数或步骤的组。

应该注意的是，除非上下文清楚地指明，否则说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代物。范围可在本文中表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表示这样的范围时，另一个实施方案包括从一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应当理解，特定值形成另一个实施方案。与数值相关的术语“约”是可选的，并且是指例如+/-10％。

实施例

实施例1：小鼠pMx模型

为了测试Link_TSG6是否减轻直接由OA引起的直接疼痛，在10周龄C57BL/6雄性小鼠的一个后膝关节中进行部分内侧半月板切除(pMx)(Knights、Gentry和Bevan，2012 -292，Pain，第153卷，第281页)，以产生进行性退行性关节疾病和伴随的诱发疼痛行为。在全身麻醉下，将腿保持在伸展位置，使用手术刀切开内侧髌旁皮肤切口(约3mm)并进行关节切开术。侧副韧带保持完整，并且髌骨不移位。借助于光学显微镜和成角度的23号针，使内侧半月板脱离其与胫骨平台边缘的连接，并除去大约一半的内侧半月板(约1mm的组织)。用伤口闭合夹闭合皮肤切口。假手术动物进行相同的皮肤切开和关节切开术，但半月板保持完整。Link_TSG6从手术后1周开始，以高(220μg s.c./月；40μgi.a./月)或低(55μg s.c./月；10μg i.a./月)剂量通过皮下(s.c.；在颈背处)或关节内(i.a.)注射1次/周或1次/月(在PBS中；“溶媒”)施用，持续12周。使用相同的途径和频率将溶媒施用给对照组。所有组包括10只小鼠。

在12周的治疗期间，每周评估疼痛反应(膝关节屈曲、爪子的相关机械/热敏感性和手术腿的承重)。使用单因素ANOVA以及Tukey事后检验来分析数据(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。

实施例2：Link_TSG6减轻直接OA关节疼痛。

膝关节屈曲用于评估关节炎或假手术膝关节的直接疼痛。用一只手轻轻地束缚住小鼠。在小鼠大腿处于固定位置的情况下，研究者用拇指和食指使小鼠膝关节在其整个运动范围内被动地弯曲和伸展10次。记录每个肢体的可听发声次数。

如图2所示，皮下施用Link_TSG6(高剂量1次/月)将小鼠pMx模型中的直接OA关节疼痛(通过关节炎膝盖屈曲时的发声进行评估)降低至假手术水平。1次/周的低剂量和高剂量也具有显著的治疗效果。

实施例3：Link_TSG6降低了热敏感性

冷敏感性用于通过(Gentry，Stoakley等人，(2010年)Mol Pain，第6卷：第4页)中描述的方法并使用市售冷板(Ugo Basile；意大利米兰)来评估爪子的牵涉性疼痛。使用表面温度探头使设定温度与实际表面温度相关联，根据预定的校准数据设定冷板。在测试之前，使冷板在设定温度下稳定5分钟。缩爪潜伏期通过设置在10℃的冷板测定。轻轻地束缚住动物，依次将每只后爪置于冷板的表面上。终点被视为爪子的缩回，并记录为同侧(手术腿)或对侧(未手术腿)爪子的缩回潜伏期(以秒为单位)。每个爪子的最大截止时间为30秒。

皮下Link_TSG6处理以剂量依赖性方式降低了小鼠pMx模型中的热敏感性(通过对冷(10℃)刺激的缩爪阈值进行评估)，其中1次/周(图3A)和1次/月(图3B)处理对同侧(外科手术的)爪子产生了类似的效果。此处热敏感性降至低于假手术水平，表明Link_TSG6具有镇痛作用，至少部分通过CNS起作用。与此一致，在1次/周(图3A)和1次/月(图3B)处理中，对侧爪子的显著镇痛作用也很明显。

实施例4：Link_TSG6降低了机械敏感性

通过使用压痛仪(型号7200，Ugo Basile；意大利米兰)并采用圆顶形探头和150克的截止值测量对后爪背侧表面施加的增加压力刺激的缩爪阈值(Randall和Selitto(1957年)，Arch.Int.Pharmacodyn.CXI(4):409-419)来评价机械痛觉过敏，作为爪子的牵涉性疼痛的指标。测量同侧和对侧爪子的缩爪阈值(以克为单位)。

皮下Link_TSG6处理以剂量依赖性方式降低了机械敏感性(通过对机械压力的缩爪阈值进行评估)，其中1次/周(图4A)和1次/月(图4B)处理对同侧(外科手术的)爪子产生了类似的效果。此处机械敏感性降至低于假手术水平，表明Link_TSG6具有镇痛作用，至少部分通过CNS起作用。与此一致，在1次/周(图3A)和1次/月(图3B)处理中，对侧爪子的显著镇痛作用也很明显。

实施例5：Link_TSG6以剂量依赖性方式改善了承重

用双通道重量平均器(Linton Instrumentation；英国兰诺福克郡迪斯镇)测量同侧后肢与对侧后肢所承受的体重差异。将小鼠单独置于有机玻璃室中，该室被设计成迫使它们用后肢站立，每只肢体都放在单独的传感器垫上。传感器垫记录3秒期间内每只爪子上的动物体重分布。在进行测量之前，允许动物适应设备至少两次。结果表示为承重差异(对侧减去同侧)，以克为单位。

Link_TSG6(1次/周)剂量依赖性地改善“关节炎”(手术)腿的承重(直接和牵涉性疼痛效果的组合)(图5A)。使用皮下(上图)和关节内递送(下图)观察到这种效果。Link_TSG6对承重的剂量依赖性效果也在1次/月施用中观察到(图5B)，其中高剂量(s.c.)在整个12周研究期间维持承重差异接近假手术水平，并且高剂量的关节内施用也介导了在稍后的时间点达到假手术水平的显著效果。

实施例6：Link_TSG6抑制了ACLTpMMx模型中的触觉异常性疼痛

我们研究了Link_TSG6处理的动物关节损伤的减轻是否与OA症状的影响有关。ACLTpMMx大鼠(12周龄，雄性Lewis大鼠，OA由前交叉韧带横切和部分(30％)内侧半月板切除诱发)用Link_TSG6(40μg/周，i.a.)处理，并且在4周时间点，在手术去稳定(右)和非手术对照(左)腿的爪子中评估接触诱发的疼痛(触觉异常性疼痛)，作为继发性痛觉过敏的指标。未手术腿的缩爪反应(在Link_TSG6处理存在或不存在的情况下)与假手术对照动物的缩爪反应基本上相同(图6A)。然而，在ACLTpMMx手术的腿(溶媒处理)中，对点状机械刺激的敏感性显著增加。关节内注射Link_TSG6显著降低了该反应(图6B)。关节损伤面积和触觉异常性疼痛程度之间没有相关性(数据未显示)。这与人OA一致，其中很大一部分具有广泛放射损伤的个体不会感到疼痛。

实施例7：将小鼠关节内给药剂量外推至人的方法

本领域已提出了几种方法用于将小鼠关节内剂量外推至人。特别地，W02015085706描述了基于比较体重和药物浓度的方法，并且Emami等人，(2018年，Int JToxicol.，第37卷第1期：第4-27页)描述了基于虚拟空间考虑的方法。

7.1基于比较体重的剂量

使用基于比较体重的方法计算等效人剂量，如W02015085706中所述。根据不同物种的新陈代谢、体型和体重之间的既定关系，可从动物给药外推人给药。因此，可以使用体重的3/4次方的比率，使用以下公式将剂量从一种物种扩大到另一种物种：

如W02015085706A所述，典型的人可被认为是70kg。我们研究中使用的小鼠可被认为每只重约20g。

使用上述公式并基于这些体重，每月关节内低剂量10μg/月可相当于每人每月约4.56mg：

基于这些体重，每月关节内高剂量40μg/月可对应于每人每月约18.2mg：

基于这些计算，低剂量可以是每人每周1.14mg，或者高剂量可以是每人每周4.55mg。较低频率的给药诸如每8周1次可能需要较高的剂量。

用于人的典型注射体积可被认为是2ml-10ml(参见W02015085706A)。因此，我们如下计算在人受试者中可能有效的典型药物浓度：

对于2ml注射：低剂量(每月)＝2.28mg/ml；高剂量(每月)＝9.11mg/ml

对于10ml注射：低剂量(每月)＝0.46mg/ml；高剂量(每月)＝1.82mg/ml

对于2ml注射：低剂量(每周)＝0.57mg/ml；高剂量(每周)＝2.28mg/ml

对于10ml注射：低剂量(每周)＝0.114mg/ml；高剂量(每周)＝0.46mg/ml

我们已经进行了70kg的计算，但是考虑到许多OA患者超重或肥胖，可能需要更高的剂量。因此，我们计算了基于其他体重：60kg、80kg、90kg、100kg、110kg和120kg来按比例调整的剂量，以产生一定范围的值。

示例性的每月剂量按如下人体重计算：60kg(低剂量4.05mg；高剂量16.21mg)；80kg(低5.03mg；高20.12mg)；90kg(低5.50mg；高21.98mg)；100kg(低5.95mg；高23.78mg)；110kg(低6.39mg；高25.55mg)和120kg(低6.82mg；高27.27mg)。

因此，基于我们的小鼠低剂量和高剂量数据以及人的体重外推，每月剂量范围可以是4.05mg-27.27mg。基于我们的小鼠低剂量和高剂量数据以及人的体重外推，每周剂量范围可以是1.01mg-13.64mg。频率低于1次/月给药将允许外推更高的剂量。

7.2基于“虚拟空间”考虑的剂量。

使用虚拟空间方法(基于Emami等人，Int J Toxicol.，2018年；第37卷第1期：第4-27页。doi:10.1177/1091581817741840)计算关节内施用的人等效剂量。虚拟空间方法考虑了小鼠和人之间关节内空间大小的差异，并按比例调整剂量，以使相应关节空间内的药物浓度相似。2018年Emami等人在图7给出了描述这种按比例调整剂量方法的假设示例。

基于虚拟空间考虑计算等效剂量是基于以下假设：施用部位(诸如关节中的关节内空间)是虚拟的充满流体的室，药物产品被引入该室并扩散到其中，达到稳态浓度，在该稳态浓度下，药物在最终从该区域清除之前停留一段时间。因此，估计小鼠OA模型中虚拟空间的大小，然后按比例调整成将施用药物的虚拟空间，即OA患者关节中的虚拟空间。由于我们不知道在滑液(在小鼠或人中)中Link_TSG6的稳态浓度，我们使用注射时的浓度从小鼠剂量按比例调整到人的剂量，并且假定清除动力学和稳态值在这两个物种中是相同的。

为了估计小鼠模型中的虚拟空间，小鼠滑液体积被认为是3μl-5μl(基于Xu等人，(2017年)，Bone Res.，第5卷：第17012页)。OA患者中人滑液体积被认为在0.56ml和71.71ml之间(中值3.05ml)(取自Kraus等人，(2007年)，Osteoarthritis&Cartilage.，第15卷，第1217-1220页)。因此，为了进行说明性计算，我们假定OA患者的小鼠SF体积可为4μl，人SF体积可为3ml。对于我们的pMx研究，我们每次注射将5μl注射到小鼠膝关节中。我们基于2ml-10ml注射体积计算了可被认为通常用于人的等效剂量(参见W02015085706A专利文本)。

7.2.1每月剂量

如果我们假定在我们小鼠中的滑液体积(SF)为4μl SF，我们向其施用5μl注射液，则总体积为9μl。我们的低关节内剂量为10μg/月，施用至9μl的总体积，即1.11mg/ml。高关节内为40μg/月，以9μl总体积施用，即4.44mg/ml。

如上所述，已知OA患者的SF体积在0.56ml和71.71ml之间变化(中值3.05ml)。取大约3ml SF的中值，2ml注射将得到5ml的总体积，这意味着对于1.11mg/ml浓度的剂量，将需要2.78mg/ml的2ml注射液(5.56mg)，或对于人体中的等效低剂量，将需要1.44mg/ml的10ml注射液(14.4mg)。

对于相当于4.44mg/ml的较高剂量，将需要11.1mg/ml的2ml注射液或5.77mg/ml的10ml注射液(即2ml中22.2mg或10ml中57.7mg)。

对于不同体积的人SF，可以相应地按比例调整。我们还计算了2ml和10ml注射体积的不同人SF体积的剂量范围。

7.2.2每周剂量

如果我们假定在我们小鼠中的滑液体积(SF)为4μl SF，我们向其施用5μl注射液，则总体积为9μl。我们的低关节内剂量为2.5μg/周，施用至9μl的总体积，即0.28mg/ml。高关节内为10μg/月，以9μl总体积施用，即1.11mg/ml。

应用上文6.2.1概述的方法，如下计算人的等效每周剂量：

7.2.3剂量范围

因此，基于我们的小鼠低剂量和高剂量数据，SF体积为1ml-30ml(注射体积为2ml或10ml)的等效剂量范围可以是每月3.34mg-177.6mg。因此，基于我们的小鼠低剂量和高剂量数据，SF体积为1ml-30ml(并且注射体积为2ml或10ml)的每周剂量范围可以是0.84mg-44.4mg。频率低于1次/月给药将允许外推更高的剂量。

参考文献

上面引用了许多出版物，以便更充分地描述和公开本发明以及本发明所属领域的现有技术。下面提供了这些参考文献的完整引用。这些参考文献中每一篇的全部内容均并入本文。

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对于标准分子生物学技术，参见Sambrook,J.、Russel,D.W.《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning:a laboratory manual)第3版，2001年，纽约冷泉港，冷泉港实验室出版社。

序列表

<110> 曼彻斯特大学

A·戴

C·米尔纳

<120> 骨关节炎疼痛的治疗

<130> 008169138

<150> GB 2100761.2

<151> 2021-01-20

<160> 10

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列(Artifical sequence)

<220>

<223> 人TSG-6

<400> 1

cagtcacatt tcagccactg ctctgagaat ttgtgagcag cccctaacag gctgttactt 60

cactacaact gacgatatga tcatcttaat ttacttattt ctcttgctat gggaagacac 120

tcaaggatgg ggattcaagg atggaatttt tcataactcc atatggcttg aacgagcagc 180

cggtgtgtac cacagagaag cacggtctgg caaatacaag ctcacctacg cagaagctaa 240

ggcggtgtgt gaatttgaag gcggccatct cgcaacttac aagcagctag aggcagccag 300

aaaaattgga tttcatgtct gtgctgctgg atggatggct aagggcagag ttggataccc 360

cattgtgaag ccagggccca actgtggatt tggaaaaact ggcattattg attatggaat 420

ccgtctcaat aggagtgaaa gatgggatgc ctattgctac aacccacacg caaaggagtg 480

tggtggcgtc tttacagatc caaagcaaat ttttaaatct ccaggcttcc caaatgagta 540

cgaagataac caaatctgct actggcacat tagactcaag tatggtcagc gtattcacct 600

gagtttttta gattttgacc ttgaagatga cccaggttgc ttggctgatt atgttgaaat 660

atatgacagt tacgatgatg tccatggctt tgtgggaaga tactgtggag atgagcttcc 720

agatgacatc atcagtacag gaaatgtcat gaccttgaag tttctaagtg atgcttcagt 780

gacagctgga ggtttccaaa tcaaatatgt tgcaatggat cctgtatcca aatccagtca 840

aggaaaaaat acaagtacta cttctactgg aaataaaaac tttttagctg gaagatttag 900

ccacttataa aaaaaaaaaa aaggatgatc aaaacacaca gtgtttatgt tggaatcttt 960

tggaactcct ttgatctcac tgttattatt aacatttatt tattattttt ctaaatgtga 1020

aagcaataca taatttaggg aaaattggaa aatataggaa actttaaacg agaaaatgaa 1080

acctctcata atcccactgc atagaaataa caagcgttaa cattttcata tttttttctt 1140

tcagtcattt ttctatttgt ggtatatgta tatatgtacc tatatgtatt tgcatttgaa 1200

attttggaat cctgctctat gtacagtttt gtattatact ttttaaatct tgaactttat 1260

aaacattttc tgaaatcatt gattattcta caaaaacatg attttaaaca gctgtaaaat 1320

attctatgat atgaatgttt tatgcattat ttaagcctgt ctctattgtt ggaatttcag 1380

gtcattttca taaatattgt tgcaataaat atccttgaac acaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1440

<210> 2

<211> 277

<212> PRT

<213> 人工序列(Artifical sequence)

<220>

<223> 人TSG-6

<400> 2

Met Ile Ile Leu Ile Tyr Leu Phe Leu Leu Leu Trp Glu Asp Thr Gln

1 5 10 15

Gly Trp Gly Phe Lys Asp Gly Ile Phe His Asn Ser Ile Trp Leu Glu

20 25 30

Arg Ala Ala Gly Val Tyr His Arg Glu Ala Arg Ser Gly Lys Tyr Lys

35 40 45

Leu Thr Tyr Ala Glu Ala Lys Ala Val Cys Glu Phe Glu Gly Gly His

50 55 60

Leu Ala Thr Tyr Lys Gln Leu Glu Ala Ala Arg Lys Ile Gly Phe His

65 70 75 80

Val Cys Ala Ala Gly Trp Met Ala Lys Gly Arg Val Gly Tyr Pro Ile

85 90 95

Val Lys Pro Gly Pro Asn Cys Gly Phe Gly Lys Thr Gly Ile Ile Asp

100 105 110

Tyr Gly Ile Arg Leu Asn Arg Ser Glu Arg Trp Asp Ala Tyr Cys Tyr

115 120 125

Asn Pro His Ala Lys Glu Cys Gly Gly Val Phe Thr Asp Pro Lys Gln

130 135 140

Ile Phe Lys Ser Pro Gly Phe Pro Asn Glu Tyr Glu Asp Asn Gln Ile

145 150 155 160

Cys Tyr Trp His Ile Arg Leu Lys Tyr Gly Gln Arg Ile His Leu Ser

165 170 175

Phe Leu Asp Phe Asp Leu Glu Asp Asp Pro Gly Cys Leu Ala Asp Tyr

180 185 190

Val Glu Ile Tyr Asp Ser Tyr Asp Asp Val His Gly Phe Val Gly Arg

195 200 205

Tyr Cys Gly Asp Glu Leu Pro Asp Asp Ile Ile Ser Thr Gly Asn Val

210 215 220

Met Thr Leu Lys Phe Leu Ser Asp Ala Ser Val Thr Ala Gly Gly Phe

225 230 235 240

Gln Ile Lys Tyr Val Ala Met Asp Pro Val Ser Lys Ser Ser Gln Gly

245 250 255

Lys Asn Thr Ser Thr Thr Ser Thr Gly Asn Lys Asn Phe Leu Ala Gly

260 265 270

Arg Phe Ser His Leu

275

<210> 3

<211> 260

<212> PRT

<213> 人工序列(Artifical sequence)

<220>

<223> 人TSG-6

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Trp Gly Phe Lys Asp Gly Ile Phe His Asn Ser Ile Trp Leu Glu Arg

1 5 10 15

Ala Ala Gly Val Tyr His Arg Glu Ala Arg Ser Gly Lys Tyr Lys Leu

20 25 30

Thr Tyr Ala Glu Ala Lys Ala Val Cys Glu Phe Glu Gly Gly His Leu

35 40 45

Ala Thr Tyr Lys Gln Leu Glu Ala Ala Arg Lys Ile Gly Phe His Val

50 55 60

Cys Ala Ala Gly Trp Met Ala Lys Gly Arg Val Gly Tyr Pro Ile Val

65 70 75 80

Lys Pro Gly Pro Asn Cys Gly Phe Gly Lys Thr Gly Ile Ile Asp Tyr

85 90 95

Gly Ile Arg Leu Asn Arg Ser Glu Arg Trp Asp Ala Tyr Cys Tyr Asn

100 105 110

Pro His Ala Lys Glu Cys Gly Gly Val Phe Thr Asp Pro Lys Gln Ile

115 120 125

Phe Lys Ser Pro Gly Phe Pro Asn Glu Tyr Glu Asp Asn Gln Ile Cys

130 135 140

Tyr Trp His Ile Arg Leu Lys Tyr Gly Gln Arg Ile His Leu Ser Phe

145 150 155 160

Leu Asp Phe Asp Leu Glu Asp Asp Pro Gly Cys Leu Ala Asp Tyr Val

165 170 175

Glu Ile Tyr Asp Ser Tyr Asp Asp Val His Gly Phe Val Gly Arg Tyr

180 185 190

Cys Gly Asp Glu Leu Pro Asp Asp Ile Ile Ser Thr Gly Asn Val Met

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Thr Leu Lys Phe Leu Ser Asp Ala Ser Val Thr Ala Gly Gly Phe Gln

210 215 220

Ile Lys Tyr Val Ala Met Asp Pro Val Ser Lys Ser Ser Gln Gly Lys

225 230 235 240

Asn Thr Ser Thr Thr Ser Thr Gly Asn Lys Asn Phe Leu Ala Gly Arg

245 250 255

Phe Ser His Leu

260

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<213> 人工序列(Artifical sequence)

<220>

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tcaaggatgg ggattcaagg atggaatttt tcataactcc atatggcttg aacgagcagc 180

cggtgtgtac cacagagaag cacggtctgg caaatacaag ctcacctacg cagaagctaa 240

ggcggtgtgt gaatttgaag gcggccatct cgcaacttac aagcagctag aggcagccag 300

aaaaattgga tttcatgtct gtgctgctgg atggatggct aagggcagag ttggataccc 360

cattgtgaag ccagggccca actgtggatt tggaaaaact ggcattattg attatggaat 420

ccgtctcaat aggagtgaaa gatgggatgc ctattgctac aacccacacg caaaggagtg 480

tggtggcgtc tttacagatc caaagcggat ttttaaatct ccaggcttcc caaatgagta 540

cgaagataac caaatctgct actggcacat tagactcaag tatggtcagc gtattcacct 600

gagtttttta gattttgacc ttgaagatga cccaggttgc ttggctgatt atgttgaaat 660

atatgacagt tacgatgatg tccatggctt tgtgggaaga tactgtggag atgagcttcc 720

agatgacatc atcagtacag gaaatgtcat gaccttgaag tttctaagtg atgcttcagt 780

gacagctgga ggtttccaaa tcaaatatgt tgcaatggat cctgtatcca aatccagtca 840

aggaaaaaat acaagtacta cttctactgg aaataaaaac tttttagctg gaagatttag 900

ccacttataa aaaaaaaaaa aaggatgatc aaaacacaca gtgtttatgt tggaatcttt 960

tggaactcct ttgatctcac tgttattatt aacatttatt tattattttt ctaaatgtga 1020

aagcaataca taatttaggg aaaattggaa aatataggaa actttaaacg agaaaatgaa 1080

acctctcata atcccactgc atagaaataa caagcgttaa cattttcata tttttttctt 1140

tcagtcattt ttctatttgt ggtatatgta tatatgtacc tatatgtatt tgcatttgaa 1200

attttggaat cctgctctat gtacagtttt gtattatact ttttaaatct tgaactttat 1260

aaacattttc tgaaatcatt gattattcta caaaaacatg attttaaaca gctgtaaaat 1320

attctatgat atgaatgttt tatgcattat ttaagcctgt ctctattgtt ggaatttcag 1380

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artifical sequence)

<220>

<223> 人TSG-6

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Leu Thr Tyr Ala Glu Ala Lys Ala Val Cys Glu Phe Glu Gly Gly His

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Leu Ala Thr Tyr Lys Gln Leu Glu Ala Ala Arg Lys Ile Gly Phe His

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Val Cys Ala Ala Gly Trp Met Ala Lys Gly Arg Val Gly Tyr Pro Ile

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Val Lys Pro Gly Pro Asn Cys Gly Phe Gly Lys Thr Gly Ile Ile Asp

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Tyr Gly Ile Arg Leu Asn Arg Ser Glu Arg Trp Asp Ala Tyr Cys Tyr

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Asn Pro His Ala Lys Glu Cys Gly Gly Val Phe Thr Asp Pro Lys Arg

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Ile Phe Lys Ser Pro Gly Phe Pro Asn Glu Tyr Glu Asp Asn Gln Ile

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Cys Tyr Trp His Ile Arg Leu Lys Tyr Gly Gln Arg Ile His Leu Ser

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Phe Leu Asp Phe Asp Leu Glu Asp Asp Pro Gly Cys Leu Ala Asp Tyr

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Tyr Cys Gly Asp Glu Leu Pro Asp Asp Ile Ile Ser Thr Gly Asn Val

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Met Thr Leu Lys Phe Leu Ser Asp Ala Ser Val Thr Ala Gly Gly Phe

225 230 235 240

Gln Ile Lys Tyr Val Ala Met Asp Pro Val Ser Lys Ser Ser Gln Gly

245 250 255

Lys Asn Thr Ser Thr Thr Ser Thr Gly Asn Lys Asn Phe Leu Ala Gly

260 265 270

Arg Phe Ser His Leu

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<210> 6

<211> 260

<212> PRT

<213> 人工序列(Artifical sequence)

<220>

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Trp Gly Phe Lys Asp Gly Ile Phe His Asn Ser Ile Trp Leu Glu Arg

1 5 10 15

Ala Ala Gly Val Tyr His Arg Glu Ala Arg Ser Gly Lys Tyr Lys Leu

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Ala Thr Tyr Lys Gln Leu Glu Ala Ala Arg Lys Ile Gly Phe His Val

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Ala Lys

<210> 10

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<213> 人工序列(Artifical sequence)

<220>

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Met Gly Val Tyr His Arg Glu Ala Arg Ser Gly Lys Tyr Lys Leu Thr

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Ile Arg Leu Asn Arg Ser Glu Arg Trp Asp Ala Tyr Cys Tyr Asn Pro

85 90 95

His Ala Lys

Claims (12)

1.LINK_TSG6，用于在有此需要的患者中治疗骨关节炎疼痛的方法。

2.根据权利要求1所述使用的LINK_TSG6，其中所述LINK_TSG6皮下或关节内施用。

3.根据权利要求1或2所述使用的LINK_TSG6，其中所述LINK_TSG6每周一次或更低频率施用。

4.根据前述权利要求中任一项所述使用的LINK_TSG6，其中所述骨关节炎疼痛是牵涉性疼痛。

5.根据权利要求3所述使用的LINK_TSG6，其中所述LINK_TSG6每7天施用一次、每10天施用一次、每14天施用一次、每21天施用一次、每30天施用一次、每45天施用一次、每60天施用一次、每90天施用一次或每90天施用少于一次。

6.根据前述权利要求中任一项所述使用的LINK_TSG6多肽，其中所述LINK_TSG6多肽包含(i)SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9的氨基酸序列或(ii)与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，或由其组成或基本上由其组成。

7.一种包含LINK_TSG6的组合物，其中所述组合物被配制用于皮下施用。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述组合物每剂量包含10mg至150mg LINK_TSG6。

9.一种包含LINK_TSG6的组合物，其中所述组合物被配制用于关节内施用。

10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述组合物每剂量包含1mg至180mg LINK_TSG6。

11.一种治疗方法，所述方法包括向需要缓解骨关节炎疼痛的患者施用LINK_TSG6。

12.LINK_TSG6在制备用于治疗骨关节炎疼痛的药物中的用途。