TW201942130A - 結合至ssea4的單株抗體及其用途 - Google Patents
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Abstract
一種經分離的單株抗體或抗原-結合片段,其專一性結合至階段特異性胚胎抗原4。該單株抗體或抗原-結合片段包含一具有序列辨識編號:33或序列辨識編號:40的序列之重鏈CDR1、一具有序列辨識編號:34或序列辨識編號:39的序列之重鏈CDR2、一具有序列辨識編號:35或序列辨識編號:41的序列之重鏈CDR3、一具有序列辨識編號:36或序列辨識編號:42的序列之輕鏈CDR1、一具有序列辨識編號:37或序列辨識編號:43的序列之輕鏈CDR2,以及一具有序列辨識編號:38或序列辨識編號:44的序列之輕鏈CDR3。亦揭示的是一種抗-腫瘤的方法,其是藉由對一具有表現階段特異性胚胎抗原4的腫瘤之個體投予上面的單株抗體或抗原-結合片段來施行。進一步提供的是編碼上面序列的核酸以及含有該等核酸的重組型細胞。
Description
本發明係有關於結合至SSEA4的單株抗體及其用途。
發明背景
針對癌症的免疫療法之目的是去提高病患自身對抗腫瘤的免疫反應的強度。免疫療法會刺激對抗癌細胞的免疫系統的特定成分之活性,或者可對抗由癌細胞所產生之抑制免疫反應的訊號。
例如,已發展出專一性結合至在癌細胞表面上的腫瘤關聯性抗原(TAAs)(例如,蛋白質抗原以及醣類抗原)的抗體來作為癌症疫苗,其導致抗體依賴型細胞毒殺作用、抗體依賴型吞噬作用、補體依賴型細胞溶解,以及直接的細胞生長抑制作用和/或細胞毒性作用。
已發展出對抗許多醣類TAAs(例如,Globo H、階段特異性胚胎抗原3,以及階段特異性胚胎抗原4)之單株抗體為基礎的抗癌疫苗。然而,為了促進更有效地殺死癌細胞並且對於癌症復發提供持久的抗性,需要對醣類TAA具有高親和力之改良的單株抗體來作為抗癌疫苗。
發明概要
為了滿足上述需求,提供一種經分離的單株抗體或其抗原-結合片段,其專一性結合至階段特異性胚胎抗原4(SSEA4)。該單株抗體或抗原-結合片段包含一具有序列辨識編號:33或序列辨識編號:40的序列之重鏈CDR1、一具有序列辨識編號:34或序列辨識編號:39的序列之重鏈CDR2、一具有序列辨識編號:35或序列辨識編號:41的序列之重鏈CDR3、一具有序列辨識編號:36或序列辨識編號:42的序列之輕鏈CDR1、一具有序列辨識編號:37或序列辨識編號:43的序列之輕鏈CDR2,以及一具有序列辨識編號:38或序列辨識編號:44的序列之輕鏈CDR3。
落入本發明的範疇之經分離的單株抗體包含一選自於下列的重鏈序列:序列辨識編號:2、序列辨識編號:6、序列辨識編號:10、序列辨識編號:12、序列辨識編號:14、序列辨識編號:22、序列辨識編號:24以及序列辨識編號:26;以及一選自於下列的輕鏈序列:序列辨識編號:4、序列辨識編號:8、序列辨識編號:16、序列辨識編號:18、序列辨識編號:20、序列辨識編號:28、序列辨識編號:30以及序列辨識編號:32。
亦提供的是一種用來治療一腫瘤的方法,其中在該腫瘤中的細胞表現SSEA4。該方法是藉由投予一有效量之上述單株抗體或抗原-結合片段來施行。
另外揭示的是一種編碼上述單株抗體或其抗原-結合片段核酸建構物,以及一種含有該核酸建構物的重組型細胞。該重組型細胞表現一專一性結合至SSEA4的單株抗體或其抗原-結合片段。
本發明的許多具體例的細節已描述於下面的說明與圖式中。透過說明且亦透過檢附的申請專利範圍,本發明的其他特徵、目的以及優點將會是明顯的。最後,此處所引用的文獻以其整體併入作為參考資料。
較佳實施例之詳細說明
如上所述,提供一種具有所指定的CDR區之單株抗體或抗原-結合片段(例如,單鏈Fv),其專一性結合至階段特異性胚胎抗原4(SSEA4)。在一個示範性單株抗體或抗原-結合片段中,重鏈CDR1(H-CDR1)具有序列辨識編號:33的序列,重鏈CDR2(H-CDR2)具有序列辨識編號:34的序列,重鏈CDR3(H-CDR3)具有序列辨識編號:35的序列,輕鏈CDR1(L-CDR1)具有序列辨識編號:42的序列,輕鏈CDR2(L-CDR2)具有序列辨識編號:43的序列,以及輕鏈CDR3(L-CDR3)具有序列辨識編號:44的序列。
具有與在前面段落中相同的CDR區的單株抗體之實例具有下列重鏈序列與輕鏈序列的組合:(i)序列辨識編號:14的重鏈序列與序列辨識編號:28的輕鏈序列、(ii)序列辨識編號:14的重鏈序列與序列辨識編號:30的輕鏈序列、(iii)序列辨識編號:14的重鏈序列與序列辨識編號:32的輕鏈序列、(iv)序列辨識編號:2的重鏈序列與序列辨識編號:4的輕鏈序列,以及(v)序列辨識編號:6的重鏈序列與序列辨識編號:8的輕鏈序列。
一編碼該單株抗體或結合片段的核酸建構物包含編碼上面所列出的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3、L-CDR1、L-CDR2以及L-CDR3區的序列。在一個實例中,該核酸建構物編碼序列辨識編號:33、序列辨識編號:34、序列辨識編號:35、序列辨識編號:42、序列辨識編號:43以及序列辨識編號:44的胺基酸。
在另一個方面,該核酸建構物編碼一具有上述重鏈與輕鏈序列的單株抗體。這類核酸建構物的具體例分別包含下列序列組合中的一者:(i)序列辨識編號:13與序列辨識編號:27、(ii)序列辨識編號:13與序列辨識編號:29、(iii)序列辨識編號:13與序列辨識編號:31、(iv)序列辨識編號:1與序列辨識編號:3,以及(v)序列辨識編號:5與序列辨識編號:7。
此外,提供一種重組型細胞,其含有任何上述核酸建構物,並且表現一專一性結合至SSEA4的單株抗體或結合片段。一特定的重組型細胞表現一具有下列CDR序列的單株抗體或結合片段:序列辨識編號:33、序列辨識編號:34、序列辨識編號:35、序列辨識編號:42、序列辨識編號:43,以及序列辨識編號:44。這類重組型細胞的一個實例表現一具有序列辨識編號:14的重鏈序列與序列辨識編號:28的輕鏈序列之單株抗體。
上述用於治療腫瘤的方法可藉由投予本申請案中所揭示的任何單株抗體來施行。在一個實例中,該單株抗體包含序列辨識編號:33、序列辨識編號:34、序列辨識編號:35、序列辨識編號:42、序列辨識編號:43,以及序列辨識編號:44。該單株抗體可具有序列辨識編號:14的重鏈序列與序列辨識編號:28的輕鏈序列。
該腫瘤治療方法可有效治療乳癌、結腸癌、腸胃道癌、腎癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、直腸癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、膀胱癌、皮膚癌、鼻咽癌、食道癌、口腔癌、頭頸部癌、骨癌、軟骨癌、肌肉癌、淋巴結癌、骨髓癌,以及腦癌。
相信的是,不用進一步詳細闡述,熟習此技藝者可基於此處的揭示內容,將此揭示內容應用至最完整的程度。因此,無論如何下列具體例要被解釋為僅是其餘揭示內容的說明而非限制。此處所引用的所有刊物與專利文件以其整體併入此處作為參考資料。
實施例
實施例1 :融合瘤生產
實施例
實施例1 :融合瘤生產
抗SSEA4的鼠單株抗體是使用標準操作程序來生產。簡言之,對小鼠一起注射以融合至牛血清蛋白的SSEA4(BSA-SSEA4)與佐劑每兩週一次直到10週。在血液樣本中的抗-SSEA4抗體效價是藉由酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)使用具有結合的BSA-SSEA4的ELISA培養盤在標準條件下來進行分析。
由BSA-SSEA4 ELISA所得到之具有最高效價的小鼠血液樣本亦是藉由ELISA並使用表現SSEA4的人類胰腺癌(HPAC)細胞來進行測試。
使用標準技術將具有最高抗體效價的脾細胞從兩隻小鼠中分離出來並且與骨髓瘤細胞進行融合以形成融合瘤。生產高效價的抗-SSEA4抗體的融合瘤是使用標準的次選殖操作程序與ELISA分析並使用BSA-SSEA4與HPAC細胞來進行鑑定。生產結合至HPAC以及不表現SSEA4的人類骨髓瘤細胞株A375這兩者的抗體之融合瘤則不再進一步追蹤。
結合至細胞表面的SSEA4之抗體是藉由使HPAC細胞與A375細胞培育以融合瘤上清液,繼而培育以螢光標記的二次抗體,並使用螢光-活化的細胞分選分析來進行確認。挑選出兩個單株抗體[被稱為鼠單株抗體1(muMAb1)與鼠單株抗體2(muMAb2)]來供進一步分析。這些單株抗體皆結合至BSA-SSEA4與HPAC細胞並且不結合至A375細胞。
同型分析顯示muMAb1是一IgG1κ抗體,而muMAb2是一IgG3κ抗體。
融合瘤上清液中的單株抗體濃度以及對SSEA4的結合親合力是如下面兩個部分中所述來進行測定。muMAb1的Kd
值是0.22nM,而muMAb2的Kd
值是0.08nM。
實施例2 :藉由ELISA 來進行之抗體濃度的測定
實施例2 :藉由ELISA 來進行之抗體濃度的測定
培養基樣本中的muMAb抗體濃度是藉由ELISA並使用下面塗覆於ELISA培養盤上的一次抗體來進行測定。針對MAbs,將ELISA培養盤塗覆以呈1µg/ml、100µl/井的AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)(Jackson ImmunoResearch #115-005-062)過夜。在培育以連續稀釋的融合瘤上清液或得自於瞬時轉染的培養基樣本(參見下面)之後,將井徹底清洗並且藉由添加以1:8,000稀釋的Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)(Jackson ImmunoResearch # 115-035-062)與所偵測的抗體進行結合。在徹底清洗後,添加ABTS Peroxidase Substrate(1 Component)(KPL #50-66-06)並且測量各井在405nm下的吸光值。
針對人源化mAbs(參見下面),將ELISA培養盤塗覆以1µg/ml、100µl/井之Fcγ片段專一性的AffiniPure F(ab')₂ Fragment Goat Anti-Human IgG(Jackson ImmunoResearch # 109-006-098)過夜。結合的人源化抗體的偵測是如同上面針對鼠抗體所述使用1:10,000稀釋之Fcγ片段專一性的Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG(Jackson ImmunoResearch # 109-035-008)來進行。
實施例3 :藉由ELISA 來進行之抗體親合力的測定
實施例3 :藉由ELISA 來進行之抗體親合力的測定
針對抗原結合親和力的測定是使用下面試劑組來進行標準的ELISA操作程序。將ELISA培養盤塗覆以1:1000稀釋的BSA-SSEA4。將連續稀釋的融合瘤上清液的樣本或瞬時轉染的樣本添加至各井中,繼而徹底清洗。使用下列二次抗體來偵測結合至培養盤上的抗原之muMAbs與huMAbs:針對muMAb1,1:2,500稀釋之Fcγ Subclass 1專一性的AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(Jackson ImmunoResearch #115-005-205),針對muMAb2,1:2,500稀釋之Fcγ Subclass 3專一性的AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(Jackson ImmunoResearch #115-005-209),針對所有人源化抗體,1:2,500稀釋之AffiniPure Goat Anti-Human IgG (H+L)(Jackson ImmunoResearch #109-005-088)。
培養盤-結合的二次抗體是使用1:6,000稀釋之Peroxidase AffiniPure Bovine Anti-Goat IgG(H+L)(Jackson ImmunoResearch #805-035-180)並如上所述來進行偵測與顯色。
實施例4 :抗體基因的選殖
實施例4 :抗體基因的選殖
VH與VL抗體序列是選殖自融合瘤如下。總RNA是使用TRIZOL試劑(Invitrogen, cat #15596-026)並按造製造商的指示而分離自大約5-7x106
個融合瘤細胞。第一股cDNA合成是使用Maxima Universal First Strand cDNA合成套組(Thermo Fisher cat. #K1661)以及6µg的總RNA與下列的基因專一性引子來進行:鼠IgG1 VH:TATGCAAGGCTTACAACCACA(序列辨識編號:45)、鼠IgG3 VH:GGGGGTACTGGGCTTGGGTAT(序列辨識編號:46),以及鼠γ VL:CTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGAC(序列辨識編號:47)。
隨著第一股cDNA合成,一聚A序列(poly A sequence)藉由末端轉移酶附接至各個第一股cDNA的5’端。令所得到之5’端加尾的cDNA產物進行兩輪的PCR擴增反應。第一輪PCR反應是使用Herculase II DNA聚合酶(Agilent Technologies cat #600679)以及下列引子來進行:5’ GTGACTCGAGTCGACATCGATTTTTTTTTTTTTTTTT(序列辨識編號:48)、針對鼠IgG1 VH的3’引子:CTTCCGGAATTCCTCAATTTTCTTGTCCACCTTGGTGC(序列辨識編號:49)、針對鼠IgG3 VH的3’引子:CTTCCGGAATTCCTCGATTCTCTTGATCAACTCAGTCT(序列辨識編號:50),以及針對鼠γ VL的3’引子:CTTCCGGAATTCCTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAATGGG (序列辨識編號:51)。
第一輪PCR產物的一部分(1/20)是使用Phusion High Fidelity DNA聚合酶(Fisher Scientific cat #F530L)以及下列引子而在第二輪PCR中進一步擴增:5’ GTGACTCGAGTCGACATCGATTTTTTTTTTTTTTTTT(序列辨識編號:48)、針對鼠IgG1 VH的3’引子:ATTAAGTCGACATAGACAGATGGGGGTGTCGTTTTGGC(序列辨識編號:52)、針對鼠IgG3 VH的3’引子:ATTAAGTCGACAGGGACCAAGGGATAGACAGATGG(序列辨識編號:53),以及針對鼠γ VL的3’引子:CTACCTCGAGGGATACAGTTGGTGCAGCATC(序列辨識編號:54)。
所得到的PCR產物是使用一對限制酵素來進行消化:針對VH PCR片段為ClaI/SalI,而針對VL PCR片段為ClaI/XhoI,並且使用標準重組DNA操作程序而被插入至選殖載體中。為了鑑定全長的VH/VL選殖株,將含有插入物之選殖株以適當大小範圍來進行定序。
實施例5 :全長的鼠抗體表現載體之構築
實施例5 :全長的鼠抗體表現載體之構築
全長的鼠IgG重鏈與輕鏈表現質體是如下來進行構築。
第一股cDNA合成是藉由反轉錄酶(RT)並使用Maxima Universal First Strand cDNA合成套組(Thermo Fisher cat #K1661)與來自上面所鑑定之含有全長的VH與VL序列的融合瘤之6µg總RNA來進行。在個別的RT反應中採用一寡dT引子(oligo dT primer)與隨機六聚物引子(random hexamer primers)。將該寡dT與隨機六聚物引子作為引子的RT產物合併,並且透過使用Phusion High Fidelity DNA聚合酶(Fisher Scientific cat #F530L)與下列引子對之一輪的PCR擴增反應,以用來作為muMAb1與muMAb2的全長cDNA的來源,而該等引子對是使用上面所得到的序列資訊來進行設計。針對muMAb1與muMAb2 γ輕鏈,5’引子CAGTCCGCGGCCACCATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTC(序列辨識編號:55),3’引子AGGAAGATCTAACACTCATTCCTGTTGAAGC(序列辨識編號:56)。針對muMAb1鼠IgG1重鏈,5’引子CAGTCCGCGGCCACCATGGCTGTCCTGGTGCTGTT(序列辨識編號:57),3’引子CTGGACAGGGATCCAGAGTTCCA(序列辨識編號:58)。針對muMAb2鼠IgG3重鏈,5’引子CAGTCCGCGG CCACCATGGCTGTCCTGGTGCTGTT(序列辨識編號:57),3’引子CATGAGATCTCATTTACCAGGGGAGCGAGA(序列辨識編號:59)。
將所擴增的muMAb1與muMAb2鼠γ輕鏈序列以及muMAb2鼠IgG3重鏈序列以SacII/BglII限制片段的形式直接選殖至一哺乳動物表現質體中。該muMAb1鼠IgG1重鏈擴增產物呈現於基因編碼序列的5’端,正好穿過對應於大約CH1區中央的內部BamHI位址。以一SacII/BamHI限制片段的形式將它選殖至先前所構築之全長鼠IgG1重鏈表現質體中。所有的選殖株是藉由定序來進行驗證。
對應於muMAb1與muMAb2的胺基酸序列之序列辨識編號顯示於下面表1中。
表1. 全長的重鏈與輕鏈單株抗體序列
實施例6 :人源化
表1. 全長的重鏈與輕鏈單株抗體序列
實施例6 :人源化
為了使muMAb1與muMAb2人源化,與鼠抗體序列之間具有最高同源度的人類免疫球蛋白生殖腺序列是藉由將鼠序列與人類免疫球蛋白基因資料庫進行比對來鑑定。結果顯示與muMAb1以及muMAb2的重鏈這兩者最相近的人類生殖腺序列是huIGHV4-59x01,而與muMAb1以及muMAb2這兩者最相近的輕鏈是huIGKV3-11x01。
為了使muMAb1與muMAb2人源化,使CDR區移植至人類序列以分別產生huMAb1與huMAb2。對應於huMAb1與huMAb2重鏈與輕鏈的胺基酸序列之序列辨識編號顯示於上面表1中。
在huMAb1與huMAb2序列中的突變是在電腦模擬(in silico
)下來設計成最大程度的人源化並且提供CDR環的結構性支持。在重鏈與輕鏈序列中的胺基酸改變與其位置顯示於下面表2-5以及圖1A、1B、2A與2B中。
表2. 在huMAb1重鏈序列中的突變
表3. 在huMAb1輕鏈序列中的突變
表4. 在huMAb2重鏈序列中的突變
表5. 在huMAb2輕鏈序列中的突變
表2. 在huMAb1重鏈序列中的突變
表3. 在huMAb1輕鏈序列中的突變
表4. 在huMAb2重鏈序列中的突變
表5. 在huMAb2輕鏈序列中的突變
對應於由突變的全長重鏈與輕鏈基因所編碼的胺基酸序列之序列辨識編號顯示於上面表1中。
上述抗體的所有CDR序列之序列辨識編號顯示於下面表6中。
表6. 對應於CDR區的序列辨識編號
a
huMAb1 H1與huMAb2 H1這兩者包括HCDR2中的正向突變
實施例7 :人源化抗體表現載體的構築
表6. 對應於CDR區的序列辨識編號
實施例7 :人源化抗體表現載體的構築
全長人源化重鏈與輕鏈表現質體的構築是使用標準的重組DNA技術來進行。將片段適當地選殖至一含有下列的建構物中:(i)全長的人類IgG1重鏈,其帶有導入的緘默突變以產生一NheI限制位址於CH1區的起始處,以及(ii)全長的人類κ輕鏈,其帶有導入的緘默突變以產生一BsiWI限制位址於CL恆定區的起始處。
使用標準技術來合成具有以上面所討論的突變變異型為基礎的序列之DNA片段並且選殖至適當的表現載體中。
實施例8 :透過瞬時轉染於293T 細胞中來生產重組型抗體
實施例8 :透過瞬時轉染於293T 細胞中來生產重組型抗體
將人類293T胚胎腎臟上皮細胞株維持於補充有10%之熱失活的胎牛血清、2mM L-麩醯胺酸以及青黴素/鏈黴素(GIBCO cat #15140)的DMEM(HyClone cat #SH30243.02)中。透過聚(乙烯亞胺)(PEI)媒介的轉染將表現建構物導入細胞中。簡言之,一DNA混合物是藉由將重鏈與輕鏈表現質體以1:1的比例合併來製備。接而以1.5:1之PEI對DNA的比例來形成PEI/DNA錯合物,並且在培育歷時20分鐘之後,添加至所培育的細胞中。在轉染兩天之後,將培養基移除並且置換以新鮮的培養基。在轉染之後的第五天收取上清液來進行分析。
重組型抗體的大規模生產是藉由將重鏈與輕鏈表現質體轉染至如上所述的人類293T細胞中來進行。在三天之後,收取經轉染的細胞並接種至搖瓶中之補充有6mM L-麩醯胺酸的無血清培養基(HyClone CDM4HEK293 cat #SH3085802)。監控細胞生長與抗體生產並且在細胞可活性降到50%以下時收取培養上清液來供抗體純化。
不同組合的重鏈與輕鏈之表現是藉由共轉染如上所述之重鏈與輕鏈的表現質體來進行。這些重組型抗體的親和力顯示於下面表7中。
表7. 重組型抗體的結合親合力一覽
a
指數是藉由使用muMAb1以及muMAb2的平均Kd
(0.18)來將Kd
進行標準化而得到。
b 未偵測到結合
c 未測定
表7. 重組型抗體的結合親合力一覽
b 未偵測到結合
c 未測定
兩個重組型人源化抗體(亦即huMAb3與huMAb4)的結合親合力亦是藉由使用標準操作程序的表面電漿共振分析來進行測定。huMAb3的Kd
值是介於50nM與90nM之間。huMAb4的Kd
值是大約0.4µM。
無論藉由ELISA或藉由表面電漿共振,結果皆顯示huMAb3對於SSEA4具有高親和力。
其他具體例
其他具體例
在本說明書中所揭示的所有特徵可以任何的組合來結合。在此說明書中所揭示的各個特徵可置換為提供相同、等效或相似目的之替代特徵。除非另外明確指出,所揭示的各個特徵僅為同類系列的等效或相似特徵的一個實例。
透過上面說明,熟習此技藝者可輕易地確定本發明的必要特徵,並且可在沒有背離其精神與範疇下作出本發明的各種不同的變化與修飾而使其適合於各種不同的使用與情況。因此,其他具體例亦落在下列申請專利範圍的範疇內。
下面說明是針對隨文檢附的圖式,其中:
圖1A是生殖腺人類IGHV4-59x01重鏈可變區(huIGHV4-59x01:序列辨識編號:60)與抗-SSEA4鼠單株抗體1(muMAb1 H;序列辨識編號:2的殘基20-138)以及人類單株抗體1序列(huMAb1 H,序列辨識編號:10的殘基20-138;huMAb1 H1,序列辨識編號:12的殘基20-138;huMAb1 H2,序列辨識編號:14的殘基20-138)所對應的胺基酸序列之胺基酸序列比對,在此圖以及其他的所有圖中,CDR區被框在方框中;
圖1B是生殖腺人類IGKV3-11x01輕鏈可變區(huIGKV3-11x01;序列辨識編號:61)與抗-SSEA4鼠單株抗體1(muMAb1 L;序列辨識編號:4的殘基23-128)以及人類單株抗體1序列(huMAb1 L,序列辨識編號:16的殘基23-128;huMAb1 L1,序列辨識編號:18的殘基23-128;huMAb1 L2,序列辨識編號:20的殘基23-128)所對應的胺基酸序列之胺基酸序列比對;
圖2A是生殖腺人類IGHV4-59x01重鏈可變區(huIGHV4-59x01:序列辨識編號:60)與抗-SSEA4鼠單株抗體2(muMAb2 H;序列辨識編號:6的殘基20-139)以及人類單株抗體2序列(huMAb2 H,序列辨識編號:22的殘基20-139;huMAb2 H1,序列辨識編號:24的殘基20-139;huMAb2 H2,序列辨識編號:26的殘基20-139) 所對應的胺基酸序列之胺基酸序列比對;以及
圖2B是生殖腺人類IGKV3-11x01輕鏈可變區與抗-SSEA4鼠單株抗體2(muMAb2 L;序列辨識編號:8的殘基23-128)以及人類單株抗體2序列(huMAb2 L,序列辨識編號:28的殘基23-128;huMAb2 L1,序列辨識編號:30的殘基23-128;huMAb2 L2,序列辨識編號:32的殘基23-128)所對應的胺基酸序列之胺基酸序列比對。
Claims (20)
- 一種經分離的單株抗體或其抗原-結合片段,其包含一具有序列辨識編號:33或序列辨識編號:40的序列之重鏈CDR1(H-CDR1)、一具有序列辨識編號:34或序列辨識編號:39的序列之重鏈CDR2(H-CDR2)、一具有序列辨識編號:35或序列辨識編號:41的序列之重鏈CDR3(H-CDR3)、一具有序列辨識編號:36或序列辨識編號:42的序列之輕鏈CDR1(L-CDR1)、一具有序列辨識編號:37或序列辨識編號:43的序列之輕鏈CDR2(L-CDR2)以及一具有序列辨識編號:38或序列辨識編號:44的序列之輕鏈CDR3(L-CDR3), 其中該單株抗體或抗原-結合片段專一性結合至階段特異性胚胎抗原4。
- 如請求項1之經分離的單株抗體或抗原-結合片段,其中該H-CDR1具有序列辨識編號:33的序列,該H-CDR2具有序列辨識編號:34的序列,該H-CDR3具有序列辨識編號:35的序列,該L-CDR1具有序列辨識編號:42的序列,該L-CDR2具有序列辨識編號:43的序列,以及該L-CDR3具有序列辨識編號:44的序列。
- 一種經分離的單株抗體,其包含一選自於由下列所構成之群組中的重鏈序列:序列辨識編號:2、序列辨識編號:6、序列辨識編號:10、序列辨識編號:12、序列辨識編號:14、序列辨識編號:22、序列辨識編號:24以及序列辨識編號:26;以及一選自於由下列所構成之群組中的輕鏈序列:序列辨識編號:4、序列辨識編號:8、序列辨識編號:16、序列辨識編號:18、序列辨識編號:20、序列辨識編號:28、序列辨識編號:30以及序列辨識編號:32,其中該單株抗體專一性結合至階段特異性胚胎抗原4。
- 如請求項3之經分離的單株抗體,其中該重鏈序列是序列辨識編號:14,以及該輕鏈序列是序列辨識編號:28。
- 如請求項3之經分離的單株抗體,其中該重鏈序列是序列辨識編號:14,以及該輕鏈序列是序列辨識編號:30。
- 如請求項3之經分離的單株抗體,其中該重鏈序列是序列辨識編號:14,以及該輕鏈序列是序列辨識編號:32。
- 如請求項3之經分離的單株抗體,其中該重鏈序列是序列辨識編號:2,以及該輕鏈序列是序列辨識編號:4。
- 如請求項3之經分離的單株抗體,其中該重鏈序列是序列辨識編號:6,以及該輕鏈序列是序列辨識編號:8。
- 一種核酸建構物,其編碼請求項1的單株抗體或其抗原-結合片段。
- 如請求項9之核酸建構物,其中該H-CDR1具有序列辨識編號:33的序列,該H-CDR2具有序列辨識編號:34的序列,該H-CDR3具有序列辨識編號:35的序列,該L-CDR1具有序列辨識編號:42的序列,該L-CDR2具有序列辨識編號:43的序列,以及該L-CDR3具有序列辨識編號:44的序列。
- 一種核酸建構物,其編碼請求項3之單株抗體。
- 如請求項11之核酸建構物,其中該重鏈序列是序列辨識編號:14,以及該輕鏈序列是序列辨識編號:28。
- 一種重組型細胞,其包含請求項9之核酸建構物,其中該細胞表現一專一性結合至階段特異性胚胎抗原4的單株抗體。
- 請求項13之重組型細胞,其中該H-CDR1具有序列辨識編號:33的序列,該H-CDR2具有序列辨識編號:34的序列,該H-CDR3具有序列辨識編號:35的序列,該L-CDR1具有序列辨識編號:42的序列,該L-CDR2具有序列辨識編號:43的序列,以及該L-CDR3具有序列辨識編號:44的序列。
- 一種重組型細胞,其包含請求項11的核酸建構物,其中該細胞表現一專一性結合至階段特異性胚胎抗原4的單株抗體。
- 如請求項15之核酸,其中該重鏈序列是序列辨識編號:14,以及該輕鏈序列是序列辨識編號:28。
- 一種用於治療一腫瘤的方法,該方法包含識別出一帶有一腫瘤的個體以及對該個體投予一有效量之請求項1的單株抗體,其中在該腫瘤中的細胞表現階段特異性胚胎抗原4(“SSEA4”)。
- 如請求項17的方法,其中該H-CDR1具有序列辨識編號:33的序列,該H-CDR2具有序列辨識編號:34的序列,該H-CDR3具有序列辨識編號:35的序列,該L-CDR1具有序列辨識編號:42的序列,該L-CDR2具有序列辨識編號:43的序列,以及該L-CDR3具有序列辨識編號:44的序列。
- 一種用於治療一腫瘤的方法,該方法包含識別出一具有一腫瘤的個體以及對該個體投予一有效量之請求項3的單株抗體,其中在該腫瘤中的細胞表現階段特異性胚胎抗原4。
- 如請求項19之方法,其中該重鏈序列是序列辨識編號:14,以及該輕鏈序列是序列辨識編號:28。
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