TW201929872A - 玻尿酸調配物 - Google Patents

Abstract

本揭示闡述玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之穩定化組合物，及使用或產生該等組合物有關之方法。

Description

玻尿酸調配物

玻尿酸(hyaluronic acid或hyaluronan)係廣泛分佈於所有脊椎動物(包括人類)之結締組織、上皮組織及神經組織中之陰離子、非硫酸化醣胺聚醣。玻尿酸充當身體部分(例如滑液、關節軟骨及皮膚)中之重要成分。舉例而言，玻尿酸係滑液之組分，且可增加滑液之黏度。因此，據信玻尿酸係重要潤滑組分。

據信，眼睛、皮膚及關節軟骨之某些疾病或病症係由玻尿酸之含量減少所引起。因此，可使用玻尿酸製劑來增強體內玻尿酸之含量，藉此治療此一疾病或病症。

端視於其來源及製備，玻尿酸在人體內之半衰期可為不到一天至若干天。已知諸如交聯玻尿酸等方法能夠使玻尿酸調配物在活體內穩定。然而，與非交聯玻尿酸相比，交聯玻尿酸可具有諸如合成困難或複雜或黏彈性性質較差等缺點。因此，業內需要具有改良穩定性之新穎玻尿酸組合物及與該等調配物有關之使用及產生方法。

在一態樣中，本申請案揭示玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之水性組合物。在一些實施例中，本文所揭示之水性組合物能夠在不使用交聯玻尿酸之情形下達成活體內醫藥使用之足夠穩定性。

本文提供水性組合物，其包含：玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽；抗氧化劑；及醣類。在某些情況下，該等水性組合物包含約0.1 mg/mL至約100 mg/mL (例如10 mg/mL)之玻尿酸。

適宜抗氧化劑包括抗壞血酸、檸檬酸、偏亞硫酸氫鹽(例如偏亞硫酸氫鈉)、生育酚、丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、沒食子酸丙酯、單醣(例如甘露糖)、糖醇(例如甘露醇)、胺基酸(例如組胺酸、甲硫胺酸、半胱胺酸)、肽(例如包含2-5個胺基酸之彼等肽，例如麩胱甘肽)及其醫藥上可接受之鹽。舉例而言，抗氧化劑可為組胺酸或甲硫胺酸或其醫藥上可接受之鹽。

適當醣類包括海藻酸、卡拉膠(carrageenan)、羧甲基纖維素、幾丁聚醣、明膠、阿拉伯樹膠、瓜爾膠(guar gum)、甘露醇、山梨醇、蔗糖、黃原膠、聚乙二醇及其醫藥上可接受之鹽。舉例而言，醣類可為海藻酸鈉。

本揭示內容之水性組合物之實例包含：約10 mg/mL玻尿酸；約20 mg/mL海藻酸鈉；約1 mg/mL組胺酸；磷酸鹽緩衝劑；及張力劑。水溶液可具有約6.5至約7.5之pH。

本揭示內容之水性組合物之另一實例包含：約10 mg/mL玻尿酸；約20 mg/mL海藻酸鈉；約2 mg/mL甲硫胺酸；磷酸鹽緩衝劑；及張力劑。水溶液可具有約6.5至約7.5之pH。

本文亦提供治療展現降低之玻尿酸含量之疾病或病狀(例如骨關節炎)之方法。此等方法可包含藉由關節內注射向患者投與本揭示內容之水性組合物。

4.1. 定義

如本文所使用，以下術語意欲具有以下含義：

「約」係指近似值。舉例而言，「約」可包括所列舉值± 10%之值。

「胺基酸」可包括α胺基酸中之任一者，例如丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、高半胱胺酸、高絲胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、苯基甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、鳥胺酸、甲硫胺酸、正白胺酸、正纈胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸以及其醫藥上可接受之鹽。在其他實施例中，「胺基酸」亦包括或限於非天然胺基酸，例如非天然α胺基酸；β胺基酸，例如β-丙胺酸、β-苯丙胺酸、3-胺基丁酸、3-胺基異丁酸、3-胺基-3-甲基丙酸；及γ胺基酸。本文所涵蓋之非天然胺基酸之實例包括經修飾之天然胺基酸，例如天然胺基酸之同系物(例如高半胱胺酸，其在側鏈中包括另一亞甲基)、天然胺基酸之N-取代變體(例如N-甲基變體)、環取代之天然胺基酸(例如環取代之苯丙胺酸及酪胺酸衍生物)及二聚體胺基酸(例如半胱胺酸及羊毛硫胺酸)。非天然胺基酸之實例包括鹵化胺基酸，例如4-氟苯丙胺酸、3,5-二氟苯丙胺酸；環狀胺基酸，例如2-胺基環庚烷甲酸、3-胺基二環[2.2.1]庚烷-2-甲酸及3-嗎啉乙酸；及雜環胺基酸，例如β-2-噻吩基丙胺酸及β-(4-噻唑基)-丙胺酸。胺基酸通常具有L立體化學，但亦可使用外消旋(DL)或D胺基酸立體化學。

「抗氧化劑」係指抑制及/或防止另一分子氧化(例如，自身氧化)之分子。抗氧化劑可係水溶性的，例如抗壞血酸、麩胱甘肽、硫辛酸、尿酸，或脂溶性的，例如胡蘿蔔素、生育酚、泛醇。適宜抗氧化劑包括抗壞血酸、組胺酸、偏亞硫酸氫鹽、甘露糖、甘露醇、丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、生育酚、沒食子酸丙酯、山梨醇及其醫藥上可接受之鹽以及前述中任一者之組合。

「患者」係指哺乳動物，例如人類、黑猩猩、食蟹獼猴、馬、狗、貓及兔。

「肽」係指具有2至10個胺基酸(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)之鏈中之任一者，其可以直鏈或具支鏈方式連接，及其醫藥上可接受之鹽。

「醫藥上可接受之鹽」係指相對無毒之無機及有機酸加成鹽。該等鹽可在化合物之最終分離及純化期間原位製備，或藉由使經純化之化合物以其游離鹼或游離酸形式與適宜有機或無機酸或鹼單獨混合(例如反應)並分離由此形成之鹽來製備。酸性化合物之代表性鹽包括鹼金屬鹽，例如鈉鹽及鉀鹽；鹼土金屬鹽，例如鎂鹽或鈣鹽；及四級銨鹽，例如四甲基銨、肉鹼、膽鹼、參(羥基甲基)胺基甲烷。鹼性化合物之代表性鹽包括溴化物、氯化物、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基磺酸鹽及胺基酸鹽及諸如此類。例如，參見Berge等人，1977, 「Pharmaceutical Salts,」 J. Pharm. Sci. 66: 1-19。

「醣類」係指糖醇，例如甘露醇、山梨醇及木糖醇；二醇，例如乙二醇及丙二醇；二醣，例如蔗糖；及多醣，例如瓜爾膠、阿拉伯樹膠、黃原膠(例如黃原膠75、黃原膠180)、幾丁聚醣、卡拉膠(例如卡拉膠109、卡拉膠209、卡拉膠NF)、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、明膠及聚乙二醇(PEG)及其醫藥上可接受之鹽。

除非本文中另有定義，否則結合本揭示內容使用之科學及技術術語應具有熟習此項技術者通常所理解之含義。
4.2. 水性組合物

本揭示內容概言之闡述玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之組合物。此等組合物通常展現經改良之穩定性且可用於醫藥目的，例如用於注射至患者(例如，人類患者)中以治療疾病或病狀。

在一態樣中，本文闡述水性組合物，其包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽；抗氧化劑；及醣類。在一些實施例中，該組合物係溶液，例如自由流動之溶液。在一些實施例中，該組合物係其中全部或實質上全部(例如大於約90重量%、93重量%、95重量%、97重量%或99重量%)之固體組分均溶解之溶液。

在一些實施例中，本文所闡述之水性組合物係中性或近似中性的，其pH容許在患者(例如，人類患者)中使用醫藥。在一些實施例中，該水性組合物之pH為約6.5至約7.5，例如約6.8至約7.2、約6.9至約7.3、約6.7至約7.4、約6.5、6.6、6.7、6.8或6.9至約7.1、7.2、7.3、7.4或7.5，例如約6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5。
4.3. 玻尿酸或醫藥上可接受之鹽

本揭示內容中所使用之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽通常係高度純化的。在一些實施例中，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之分子量為約8,000道耳頓(Dalton)至約6,000,000道耳頓，例如約8,000道耳頓；10,000道耳頓；100,000道耳頓；250,000道耳頓；500,000道耳頓；1,000,000道耳頓；1,500,000道耳頓；2,000,000道耳頓；或2,400,000道耳頓至約3,000,000道耳頓；3,600,000道耳頓；4,000,000道耳頓；4,500,000道耳頓；5,000,000道耳頓；5,500,000道耳頓；或6,000,000道耳頓。在某些實施例中，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之分子量為約2,400,000道耳頓至約3,600,000道耳頓。玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽可係交聯或非交聯的，但在某些實施例中係非交聯的。當交聯時，玻尿酸之交聯度(「CrD」，定義於(例如) Wende等人，Carbohydrate Polymers 、10 (157), 1525-1530 (2017)中)可為約0.5%至約6%，例如約0.5%至約1.5%、約1%至約2%、約1%至約3%、約2%至約3%、約4%至約6%、約0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%或3.5%至約4%、4.5%、5%、5.5%或6%。交聯度可藉由業內已知之許多方法來測定，例如核磁共振(NMR)或具有多角度光散射之粒徑篩析層析(SEC-MALS)。

在一些實施例中，醫藥上可接受之鹽係選自鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、四甲基銨鹽、肉鹼鹽、膽鹼鹽及參(羥基甲基)胺基甲烷鹽。在某些實施例中，醫藥上可接受之鹽係鈉鹽。

玻尿酸廣泛存在於脊椎動物及一些細菌中。因此，本揭示內容中所使用之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽可來源於多種動物來源中之任一者。在一些實施例中，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽係源自雞，例如自雞冠產生。在一些實施例中，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽係源自細菌，例如藉由鏈球菌發酵。

通常，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之濃度容許可(例如)經由注射器注射之自由流動水性組合物用於醫藥用途。在一些實施例中，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽係以約0.01重量%至約10重量%之範圍存在，例如約0.5重量%至約5重量%、約0.8重量%至約1.2重量%、約0.5重量%至約2重量%、約0.1重量%至約3重量%、約0.2重量%至約2重量%、約0.5重量%至約1.5重量%，例如約0.01重量%、0.02重量%、0.05重量%、0.1重量%、0.2重量%、0.5重量%、1重量%、1.5重量%、2重量%、2.5重量%、3重量%、4重量%、5重量%、6重量%、7重量%、8重量%、9重量%或10重量%。在一些實施例中，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽係以約0.1 mg/mL至約100 mg/mL之範圍存在，例如約5 mg/mL至約50 mg/mL、約8 mg/mL至約12 mg/mL、約2 mg/mL至約20 mg/mL、約5 mg/mL至約20 mg/mL、約1 mg/mL至約30 mg/mL、約5 mg/mL至約15 mg/mL，例如約0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL、15 mg/mL、20 mg/mL、25 mg/mL、30 mg/mL、40 mg/mL、50 mg/mL、60 mg/mL、70 mg/mL、80 mg/mL、90 mg/mL或100 mg/mL。

在一些實施例中，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之水性組合物之黏度容許藉由注射投與。在一些實施例中，在約1000 sec^-1 之剪切速率下，該組合物之黏度係在約10 cPa至約400 cPa範圍內，例如約10 cPa、20 cPa、30 cPa、50 cPa、70 cPa、90 cPa或100 cPa至約150 cPa、200 cPa、250 cPa、300 cPa、350 cPa或400 cPa，例如約10 cPa、20 cPa、30 cPa、50 cPa、70 cPa、90 cPa、100 cPa、150 cPa、200 cPa、250 cPa、300 cPa、350 cPa或400 cPa (視情況+/- 5%、10%、20%或25%)。在一些實施例中，在約0.1 sec^-1 之剪切速率下，該組合物之黏度係在約8,000 cPa至約18,000 cPa範圍內，例如約8,000 cPa；8,500 cPa；9,000 cPa；9,500 cPa；10,000 cPa；10,500 cPa；11,000 cPa；11,500 cPa；或12,000 cPa至約14,000 cPa；14,500 cPa；15,000 cPa；15,500 cPa；16,000 cPa；16,500 cPa；17,000 cPa；17,500 cPa；或18,000 cPa，例如約9,000 cPa；9,500 cPa；10,000 cPa；10,500 cPa；11,000 cPa；11,500 cPa；12,000 cPa；13,000 cPa；13,500 cPa；14,000 cPa；14,500 cPa；15,000 cPa；15,500 cPa；16,000 cPa；或16,500 cPa (視情況+/- 5%、10%、20%或25%)。

為維持可注射投與可接受之黏度，在一些實施例中，在抗氧化劑及醣類存在下，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之水性組合物之黏度與不含抗氧化劑及醣類之相當玻尿酸組合物之黏度類似。因此，與不含抗氧化劑及醣類但在其他方面包含相同成分之參照玻尿酸組合物相比，本揭示內容之此一水性組合物不具有顯著增加之黏度。

因此，在一些實施例中，包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽、抗氧化劑及醣類之水性組合物之黏度係在不含抗氧化劑及醣類之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽的參照組合物之黏度的約50%內，例如在約50%、40%、30%、25%、20%、15%、10%或5%內。在一些實施例中，包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽、抗氧化劑及醣類之水性組合物之黏度為不含抗氧化劑及醣類之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽的參照組合物之黏度的約0.5至約1.5倍，例如約0.5倍、0.6倍、0.7倍、0.75倍、0.8倍、0.85倍、0.9倍或0.95倍至約1.05倍、1.1倍、1.15倍、1.2倍、1.25倍、1.3倍、1.4倍或1.5倍，例如約0.5倍、0.6倍、0.7倍、0.75倍、0.8倍、0.85倍、0.9倍、0.95倍、1倍、1.05倍、1.1倍、1.15倍、1.2倍、1.25倍、1.3倍、1.4倍或1.5倍。在一些實施例中，包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽、抗氧化劑及醣類之水性組合物之黏度較不含抗氧化劑及醣類之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽的參照組合物之黏度高不超過約50%，例如不超過約50%、40%、30%、25%、20%、15%、10%或5%。在一些實施例中，包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽、抗氧化劑及醣類之水性組合物之黏度為不含抗氧化劑及醣類之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽的參照組合物之黏度的不超過約1.5倍，例如不超過約1.05倍、1.1倍、1.15倍、1.2倍、1.25倍、1.3倍、1.4倍或1.5倍。

在一些實施例中，包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽、抗氧化劑及醣類之水性組合物在經受剪切力時(例如在利用注射器注射時經歷)展現黏度變化(例如至少約5%、10%、25%、50%、75%、100%或200%之變化)。舉例而言，在一些實施例中，該水性組合物在經受剪切力時展現黏度降低(例如降低至少約5%、10%、25%、50%、75%、100%或200%)。在其他實施例中，該水性組合物在經受剪切力時展現黏度增加(例如增加至少約5%、10%、25%或50%)。在某些實施例中，黏度變化(例如降低或增加)與醣類(例如海藻酸鈉)之存在無關。舉例而言，醣類之存在不影響黏度變化(例如降低或增加)之量，即黏度變化(例如降低或增加)與醣類無關。在其他實施例中，該水性組合物在經受剪切力時展現黏度之極小變化或無變化(例如約0.5%、1%、2%、5%、7%或10%或更小之變化，例如增加或降低)。

在某些實施例中，基於醣胺聚醣之治療劑通常可用於本文所闡述之組合物中，即本發明組合物不限於玻尿酸及其醫藥上可接受之鹽。除玻尿酸以外，預期用於本文中之其他醣胺聚醣包括例如肝素、軟骨素及硫酸角蛋白。
4.4. 抗氧化劑

抗氧化劑可改良玻尿酸或其醫藥上可接受鹽之水溶液的穩定性。在一些實施例中，抗氧化劑係選自抗壞血酸、檸檬酸、偏亞硫酸氫鹽(例如偏亞硫酸氫鈉)、生育酚(包括鹽，例如生育酚乙酸鹽；衍化形式，例如生育酚丙二醇及其鹽，例如生育酚丙二醇琥珀酸鹽)、丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、沒食子酸丙酯、甘露糖、甘露醇、胺基酸、肽及其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，抗氧化劑係選自沒食子酸丙酯、組胺酸、甲硫胺酸、生育酚及其醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，抗氧化劑係胺基酸，例如組胺酸，或含硫醇之胺基酸(例如半胱胺酸或甲硫胺酸)，或該等胺基酸中任一者之醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，抗氧化劑係肽，例如由2至5個胺基酸(例如2個、3個、4個或5個胺基酸)組成之肽。在某些實施例中，肽含有一或多個具有硫醇基團之胺基酸殘基，例如包括一或多個甲硫胺酸或半胱胺酸殘基之肽，例如麩胱甘肽。在某些實施例中，抗氧化劑係羥基化苯化合物，例如BHA、BHT、生育酚或沒食子酸丙酯。在某些實施例中，抗氧化劑係組胺酸或其醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，抗氧化劑係甲硫胺酸或其醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，抗氧化劑係生育酚。在一些實施例中，抗氧化劑包含以上所提及抗氧化劑中之任一者之組合，例如BHA及BHT之組合。

通常，抗氧化劑係以足以改良玻尿酸或其醫藥鹽之穩定性之量存在於水性調配物中，而容許自由流動水溶液可例如經由注射器注射用於醫藥用途。在一些實施例中，抗氧化劑係以約0.01重量%至約10重量%之範圍存在，例如約0.01重量%至約1重量%、約0.01重量%至約5重量%、約0.02重量%至約2重量%、約0.1重量%至約2重量%或約0.1重量%至約0.5重量%，例如約0.01重量%、0.02重量%、0.05重量%、0.1重量%、0.2重量%、0.5重量%、0.8重量%、1重量%或1.2重量%至約1.5重量%、1.8重量%、2重量%、3重量%、4重量%、5重量%、6重量%、7重量%或8重量%，包括約0.01重量%、0.02重量%、0.05重量%、0.1重量%、0.2重量%、0.5重量%、0.8重量%、1重量%、1.2重量%、1.5重量%、1.8重量%、2重量%、3重量%、4重量%、5重量%、6重量%、7重量%、8重量%或10重量%。在某些實施例中，抗氧化劑係沒食子酸丙酯，其係以約0.01%至約0.1重量%之範圍存在。

在一些實施例中，抗氧化劑係以約0.1 mg/mL至約100 mg/mL之範圍存在，例如約0.1 mg/mL至約5 mg/mL、約0.1 mg/mL至約10 mg/mL、約0.1 mg/mL至約50 mg/mL、約0.2 mg/mL至約20 mg/mL、約1 mg/mL至約20 mg/mL或約1 mg/mL至約5 mg/mL，例如約0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL或2 mg/mL至約2.5 mg/mL、5 mg/mL、8 mg/mL、10 mg/mL、12 mg/mL、15 mg/mL、18 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL、40 mg/mL、50 mg/mL、60 mg/mL、70 mg/mL、80 mg/mL或100 mg/mL，包括約0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL、8 mg/mL、10 mg/mL、12 mg/mL、15 mg/mL、18 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL、40 mg/mL、50 mg/mL、60 mg/mL、70 mg/mL、80 mg/mL或100 mg/mL。

在某些實施例中，抗氧化劑係組胺酸或其醫藥上可接受之鹽，其係以約0.01重量%至約5重量%之範圍存在，例如約0.01重量%、0.02重量%、0.05重量%、0.07重量%、0.1重量%、0.2重量%、0.4重量%或0.5重量%至約0.8重量%、1重量%、1.5重量%、2重量%、3重量%或5重量%，例如約0.1重量%至約0.5重量%。在某些實施例中，當抗氧化劑係組胺酸或其醫藥上可接受之鹽時，抗氧化劑係以約0.1 mg/mL至約50 mg/mL之範圍存在，例如約0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL或1 mg/mL至約5 mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL或30 mg/mL。進一步作為實例，在一些實施例中，組胺酸係以約0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL或4 mg/mL之量存在。

在某些實施例中，抗氧化劑係甲硫胺酸或其醫藥上可接受之鹽，其係以約0.01重量%至約5重量%之範圍存在，例如約0.01重量%、0.02重量%、0.05重量%、0.07重量%、0.1重量%、0.2重量%或0.5重量%至約0.8重量%、1重量%、1.5重量%、2重量%、3重量%或5重量%，例如約0.1重量%至約0.5重量%。在某些實施例中，當抗氧化劑係甲硫胺酸或其醫藥上可接受之鹽時，抗氧化劑係以約0.1 mg/mL至約50 mg/mL之範圍存在，例如約0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL或1 mg/mL至約5 mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL或30 mg/mL。進一步作為實例，在一些實施例中，甲硫胺酸係以約1 mg/mL、2 mg/mL或4 mg/mL之量存在。
4.5. 醣類

醣類可改良玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之水溶液的穩定性。在一些實施例中，醣類係選自海藻酸、卡拉膠、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、幾丁聚醣、明膠、阿拉伯樹膠、瓜爾膠、甘露醇、山梨醇、蔗糖、黃原膠、聚乙二醇及其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，醣類係選自海藻酸、卡拉膠、羧甲基纖維素、幾丁聚醣、明膠、阿拉伯樹膠、瓜爾膠、甘露醇、山梨醇、蔗糖、黃原膠、聚乙二醇及其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，醣類係選自海藻酸、卡拉膠、羧甲基纖維素、黃原膠及其醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，醣類係海藻酸或其醫藥上可接受之鹽，例如海藻酸鈉。在某些實施例中，醣類係卡拉膠。在某些實施例中，醣類係羧甲基纖維素鈉。在某些實施例中，醣類係黃原膠。

通常，醣類係在容許可(例如)經由注射器注射之自由流動水溶液用於治療性治療有需要之患者的同時以足以改良玻尿酸或其醫藥鹽之穩定性之量存在於水性調配物中。在一些實施例中，醣類係以約0.005重量%至約5重量%之範圍存在，例如約0.01重量%、0.02重量%、0.05重量%、0.1重量%、0.2重量%、0.5重量%或1重量%至約2重量%、3重量%或5重量%，例如約0.01重量%至約5重量%、約0.01重量%至約2重量%、約0.01重量%至約1重量%、約0.01重量%至約0.5重量%、約0.01重量%至約0.1重量%、約0.01重量%至約0.05重量%、約0.05重量%至約5重量%、約0.05重量%至約2重量%、約0.05重量%至約1重量%、約0.05重量%至約0.5重量%、約0.05重量%至約0.1重量%、約0.1重量%至約5重量%、約0.1重量%至約2重量%、約0.1重量%至約1重量%、約0.1重量%至約0.5重量%、約0.2重量%至約5重量%、約0.2重量%至約2重量%、約0.2重量%至約1重量%或約0.2重量%至約0.5重量%。在某些實施例中，醣類係羥丙基甲基纖維素(HPMC)，其係以約0.01重量%至約1重量%之範圍存在。在某些實施例中，醣類係羥丙基纖維素(HPC)，其係以約0.01重量%至約1重量%之範圍存在。在某些實施例中，醣類係卡拉膠，其係以約0.01重量%至約1重量%之範圍存在。在某些實施例中，醣類係羧甲基纖維素鈉，其係以約0.1重量%至約1重量%之範圍存在。在某些實施例中，醣類係黃原膠，其係以約0.1重量%至約1重量%之範圍存在。

在一些實施例中，醣類係以約0.05 mg/mL至約50 mg/mL之範圍存在，例如約0.1 mg/mL至約50 mg/mL、約0.1 mg/mL至約20 mg/mL、約0.1 mg/mL至約10 mg/mL、約0.1 mg/mL至約5 mg/mL、約0.1 mg/mL至約1 mg/mL、約0.1 mg/mL至約0.5 mg/mL、約0.5 mg/mL至約50 mg/mL、約0.5 mg/mL至約20 mg/mL、約0.5 mg/mL至約10 mg/mL、約0.5 mg/mL至約5 mg/mL、約0.5 mg/mL至約1 mg/mL、約1 mg/mL至約50 mg/mL、約1 mg/mL至約20 mg/mL、約1 mg/mL至約10 mg/mL、約1 mg/mL至約5 mg/mL、約2 mg/mL至約50 mg/mL、約2 mg/mL至約20 mg/mL、約2 mg/mL至約10 mg/mL或約2 mg/mL至約5 mg/mL。在某些實施例中，醣類係卡拉膠，其係以約0.1 mg/mL至約10 mg/mL之範圍存在。在某些實施例中，醣類係羧甲基纖維素鈉，其係以至少約1 mg/mL存在，例如以約1 mg/mL至約10 mg/mL之範圍存在。在某些實施例中，醣類係黃原膠，其係以至少約1 mg/mL存在，例如以約1 mg/mL至約10 mg/mL之範圍存在。

在某些實施例中，海藻酸鈉可用作足以穩定水性玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之醣類。海藻酸鈉可以約0.02重量%至約5重量%之範圍存在，例如約0.02重量%、0.05重量%、0.1重量%、0.2重量%或0.5重量%至約0.7重量%、1重量%、1.5重量%、2重量%、3重量%或5重量%。在一些實施例中，海藻酸鈉係以約0.2 mg/mL至約50 mg/mL之範圍存在，例如約0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL或3 mg/mL至約5 mg/mL、7 mg/mL、10 mg/mL、15 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL或50 mg/mL，包括約0.2 mg/mL至約20 mg/mL、約0.2 mg/mL至約10 mg/mL、約0.5 mg/mL至約50 mg/mL、約0.5 mg/mL至約20 mg/mL、約0.5 mg/mL至約10 mg/mL或約1 mg/mL至約10 mg/mL。在某些實施例中，海藻酸鈉係以約0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL、12 mg/mL、15 mg/mL、17 mg/mL、20 mg/mL、23 mg/mL、25 mg/mL、30 mg/mL、35 mg/mL、40 mg/mL或50 mg/mL之量存在。

在一些實施例中，黏度較低之海藻酸鈉更有效地穩定玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，海藻酸鈉之黏度不超過約10 mPa-sec、20 mPa-sec、30 mPa-sec、40 mPa-sec或50 mPa-sec，特定而言不超過約20 mPa-sec。在某些實施例中，海藻酸鈉之黏度係在約1 mPa-sec至約200 mPa-sec範圍內，例如約1 mPa-sec至約175 mPa-sec、約1 mPa-sec至約150 mPa-sec、約1 mPa-sec至約125 mPa-sec、約1 mPa-sec至約100 mPa-sec、約1 mPa-sec至約75 mPa-sec或約1 mPa-sec至約50 mPa-sec。

在一些實施例中，平均分子量較低之海藻酸鈉更有效地穩定玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，海藻酸鈉之分子量不超過約200,000道耳頓，例如不超過約175,000道耳頓、150,000道耳頓、100,000道耳頓、75,000道耳頓或50,000道耳頓，特定而言不超過約75,000 Da。在某些實施例中，海藻酸鈉之分子量為約1,000道耳頓至約200,000道耳頓，例如約1,000 Da至約150,000 Da或約1,000 Da至約75,000 Da，例如約5,000 Da至約75,000 Da、約10,000 Da至約75,000 Da、約15,000 Da至約75,000 Da、約20,000 Da至約75,000 Da、約25,000 Da至約75,000 Da、約30,000 Da至約75,000 Da、約40,000 Da至約75,000 Da或約50,000 Da至約75,000 Da。

海藻酸鈉中單體成分之百分比可影響其穩定玻尿酸之能力。在一些實施例中，與古羅糖醛酸(guluronate)單體(G)相比具有更高甘露糖醛酸單體(M)含量之海藻酸鈉更有效地穩定玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，海藻酸鈉包含不超過約1.5:1之G對M比率，例如不超過約1:1，例如約0.5:1至約1.5:1，例如約0.5:1至約1:1、約0.6:1至約1:1、約0.7:1至約1:1、約0.8:1至約1:1、約0.8:1至約1.1:1或約0.8:1至約1.2:1。在某些實施例中，海藻酸鈉包含約1:1、0.9:1、0.8:1、0.7:1、0.6:1或0.5:1之G對M比率。

海藻酸鈉製劑為業內所已知，且特定製劑可商業購得。例示性海藻酸鈉製劑包括來自褐藻之超純海藻酸鈉FEMA Number 2015 (Sigma-Aldrich)及Pronova^TM UP超純海藻酸鈉(Novamatrix®，來自DuPont)。舉例而言，如下表A中所示，市售Pronova^TM UP超純海藻酸鈉系列提供在以下方面有所變化之若干種製劑：黏度(低，例如＜20 mPa-sec；中等，例如20-200 mPa-sec；或高，例如＞200 mPa-sec)、分子量(低，例如＜75,000 Da；中等，例如75,000-200,000 Da；或高，例如＞200,000 Da)及古羅糖醛酸與甘露糖醛酸單體之相對比率(較低，例如≤ 50%古羅糖醛酸單體；或較高，例如≥ 60%古羅糖醛酸單體)。在某些實施例中，海藻酸鈉係Pronova^TM UP VLVM。

表A：Pronova^TM UP海藻酸鈉之例示性物理化學性質

在一些實施例中，玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽對抗氧化劑及/或醣類之特定比率在本文所揭示組合物內提供更大之穩定性。在一些實施例中，水性組合物包含約2:1至約50:1之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽對抗氧化劑之比率，例如約2:1、4:1、5:1、6:1或8:1至約12:1、15:1、20:1、25:1、30:1、40:1或50:1，例如約2:1、4:1、5:1、6:1、8:1、10:1、12:1、15:1、20:1、25:1、30:1、40:1或50:1。在一些實施例中，水性組合物包含約1:5至約2:1之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽對醣類之比率，例如約1:5、1:4或1:3至約1:1或2:1，例如約1:5、1:4、1:3、1:2、1:1.5、1:1、1.5:1或2:1。在一些實施例中，水性組合物包含約1:50至約1:4之抗氧化劑對醣類之比率，例如約1:50、1:40或1:30至約1:8、1:6、1:5或1:4，例如約1:50、1:40、1:30、1:20、1:15、1:10、1:8、1:6、1:5或1:4。
4.6. 賦形劑

本文所揭示之水性組合物可除水以外包括一或多種醫藥上可接受之賦形劑。此等賦形劑之實例包括緩衝溶液及張力劑。

適於注射之醫藥上可接受之緩衝劑為業內所已知。可用於本揭示內容之水性組合物中之緩衝劑包括包含以下之彼等：馬來酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、碳酸鹽或磷酸鹽。在一些實施例中，水性組合物包含磷酸鹽緩衝劑。在某些實施例中，緩衝劑(例如磷酸鹽緩衝劑)係以提供上文所論述之期望pH值或範圍之量用於本發明組合物中。

對於張力劑而言，實例包括離子張力劑，例如鹵化物鹽(包括氯化鈣、溴化鉀、氯化鉀、氯化鋰、碘化鈉、溴化鈉及氯化鈉)、EDTA、檸檬酸及檸檬酸鈉。張力劑進一步包括非離子張力劑，例如甘油、甘露醇、山梨醇、丙二醇、右旋糖及尿素。在特定實施例中，張力劑係氯化鈉。
4.7. 具體實施例

在具體實施例中，本文所闡述之水性組合物包含約10 mg/mL玻尿酸鈉；約20 mg/mL海藻酸鈉；約1 mg/mL組胺酸；磷酸鹽緩衝劑，例如約0.18 mg/mL磷酸鹽緩衝劑；及張力劑，例如約7.5 mg/mL氯化鈉；其中該組合物之pH為約6.5至約7.5。在另一具體實施例中，本文所闡述之水性組合物包含約10 mg/mL玻尿酸鈉；約20 mg/mL海藻酸鈉；約2 mg/mL甲硫胺酸；磷酸鹽緩衝劑，例如約0.18 mg/mL磷酸鹽緩衝劑；及張力劑，例如約7.5 mg/mL氯化鈉；其中該組合物之pH為約6.5至約7.5。

在某些態樣中，以上具體實施例中之海藻酸鈉具有≤ 1之G/M比率。在其他此等態樣中，以上具體實施例中之海藻酸鈉之分子量不超過約75,000道耳頓。
4.8. 測試降解條件

降解條件可用於測定與等量之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之標準組合物相比，包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之本揭示內容之水性組合物抵抗降解之能力。降解條件可包含氧化條件，例如藉由使所揭示之組合物經受活性含氧物(例如過氧化氫)，或酶條件，例如藉由使所揭示之組合物經受生理相關酶(例如玻尿酸酶)。

可藉由許多物理方法來評價玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之穩定性。在一些實施例中，活體外測試可用作活體內玻尿酸穩定性之替代者。活體外量測諸如組合物中玻尿酸分子之黏度、分子量或粒徑等物理量度之變化(例如降低)可用於測定組合物之相對穩定性。舉例而言，活體外黏度之降低可用於測定特定而言因應於氧化壓力及/或酶壓力之玻尿酸組合物穩定性。可藉由多種方法(例如，藉由流變儀或黏度計)來量測組合物之黏度。

在一些實施例中，在經受氧化壓力條件之後，包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之水性組合物與等量之不包含抗氧化劑及/或醣類之比較玻尿酸組合物相比黏度高至少約10%，例如高至少約15%、20%、30%、40%、50%或60%，例如高約10%至約90%，例如高約10%至約80%、約10%至約70%、約10%至約60%、約10%至約50%、約10%至約40%、約10%至約30%。氧化壓力條件包括業內已知之用於對玻尿酸水性組合物之穩定性建模之彼等條件。在一個實施例中，氧化壓力條件包含使水性組合物與一定量之氧化劑(例如活性含氧物，例如過氧化氫(例如約0.016%之過氧化氫))在室溫下培育1小時。

在一些實施例中，在經受酶壓力條件之後，包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之水性組合物與等量之不包含抗氧化劑或醣類之比較玻尿酸組合物相比黏度高至少約10%，例如至少約15%、20%、30%、40%、50%或60%，例如高約10%至約90%，例如高約10%至約80%、約10%至約70%、約10%至約60%、約10%至約50%、約10%至約40%、約10%至約30%。酶壓力條件包括業內已知之用於對玻尿酸水性組合物之活體內穩定性建模之彼等條件。在一個實施例中，酶壓力條件包含使水性組合物與一定量之生理相關酶(例如玻尿酸酶，例如約0.001 mg/mL玻尿酸酶)一起在室溫下培育1小時。
4.9. 使用方法

本文揭示治療展現玻尿酸含量降低之疾病或病狀之方法，其包含向有需要之患者投與治療有效量之本文所闡述之水性組合物，該水性組合物例如包含：玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽、抗氧化劑及醣類。

業內已知玻尿酸用於治療關節病狀、眼部病狀及皮膚病狀。因此，在一些實施例中，疾病或病症係關節病狀。在一些實施例中，疾病或病狀係骨關節炎。在一些實施例中，疾病或病狀係眼部病狀。在一些實施例中，疾病或病狀係皮膚病狀。

在一些實施例中，患者係人類患者。

在某些實施例中，本文所闡述之治療方法涉及投與一或多個單位劑量之本文所闡述之水性組合物。單位劑量可包括約0.25 mL至25 mL量之本文所闡述之水性組合物，例如約0.25 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL或4 mL至約5 mL、7 mL、10 mL、15 mL、20 mL或25 mL，包括約0.25 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、7 mL、10 mL、15 mL、20 mL或25 mL。

在一些實施例中，該方法包含向患者關節內注射本文所闡述水性組合物中之一或多者。向患者中之注射部位可包括患者之膝、踝、足、肘、腕、手、肩或頸部。

本文所闡述之治療方法可根據治療方案來實施，且可涉及單次注射方案；半週一次、一週一次或兩週一次注射；半月一次、一月一次、兩月一次注射；或半年一次或一年一次注射。在一些實施例中，該等治療方法包含涉及以定期間隔投與多個單位劑量之治療方案，例如一週內兩個劑量(半週一個)、兩週內兩個劑量(每週一個)、四週內兩個劑量(每兩週一個)、三週內三個劑量(每週一個)、六週內三個劑量(每兩週一個)、四週內四個劑量(每週一個)、八週內四個劑量(每兩週一個)，特定而言三週內三個劑量(每週一個)。
5. 實例

突出本文所闡述玻尿酸或醫藥上可接受之鹽之實施例之某些特徵及性質的以下實例係出於說明而非限制之目的提供。

本文所闡述實例中所使用之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之比較水性組合物包含在磷酸鹽緩衝鹽水中之1%非交聯玻尿酸鈉。
實例1：降解量測方法

以下降解量測使用玻尿酸黏度之損失作為量度以評價玻尿酸或醫藥上可接受之鹽在壓力條件下之穩定性。
5.1. 氧化降解

以1:5將包含10 mg/mL玻尿酸之水性組合物樣品稀釋至約2 mg/mL玻尿酸之測試溶液。將過氧化氫(25 μL 10%溶液)添加至16 mL測試組合物，且藉由渦旋使混合物旋轉30秒。此後立即於具有杯及擺錘(Cup & Bob)幾何學之Malvern Kinexus Pro+流變儀(Malvern Instruments Ltd., Malvern, Worcestershire, United Kingdom)中量測測試混合物黏度(分析溫度= 25℃；剪切速率= 25 sec^-1 持續1小時；報告結果以mPa-sec計)。
5.2. 酶降解

以1:5將包含10 mg/mL玻尿酸之水性組合物樣品稀釋至約2 mg/mL玻尿酸之測試溶液。將玻尿酸酶(32 μL 0.5 mg/mL溶液)添加至16 mL測試組合物，且藉由渦旋使混合物旋轉30秒。此後立即於具有杯及擺錘幾何學之Malvern Kinexus Pro+流變儀(Malvern Instruments Ltd., Malvern, Worcestershire, United Kingdom)中量測測試混合物黏度(分析溫度= 25℃；剪切速率= 25 sec^-1 持續1小時；報告結果以mPa-sec計)。
實例2：抗氧化劑之篩選

篩選抗氧化劑以確定展現出最高之防止玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽氧化降解能力之彼等抗氧化劑。

圖1顯示抗氧化劑篩選之結果。抗氧化劑濃度係基於如下之FDA非活性成分資料庫導引。
根據部分5.1中所闡述之實驗方案，在過氧化氫存在下評估包含抗氧化劑抗壞血酸、組胺酸、偏亞硫酸氫鈉、甘露糖、甘露醇、丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、BHA及BHT之組合(「BHA + BHT」)、生育酚、沒食子酸丙酯(「propyl gallate、P gallate」)或山梨醇之調配物。如圖表所展示，玻尿酸組合物之穩定性端視於所選擇之抗氧化劑而廣泛變化，其中組胺酸、生育酚及沒食子酸丙酯在測試條件下展現最高之抗氧化效應。

對圖1中所示結果之匯總亦可參見下表1。

表1：具有可變抗氧化劑之玻尿酸組合物穩定化
穩定化% = (具有H₂ O₂ 下之黏度)/(無H₂ O₂ 下之黏度) × 100

儘管表1中顯示有希望之篩選結果，但當根據部分5.2中所闡述之實驗方案在酶玻尿酸酶存在下評估玻尿酸或醫藥上可接受之鹽及抗氧化劑之組合物時，觀察到降解。圖2繪示玻尿酸酶對包含抗氧化劑組胺酸、BHA、BHT、生育酚或沒食子酸丙酯之玻尿酸調配物黏度之效應。在每一組合物中，在1小時過程內觀察到黏度之顯著損失。
實例3：所選抗氧化劑之濃度依賴性

進一步評估實例2中所述篩選實驗中表現最佳之抗氧化劑以確定所觀察到其對玻尿酸或醫藥上可接受鹽之組合物的穩定性效應之任何濃度依賴性。在部分5.1中所述之氧化降解條件下，在玻尿酸組合物中以低、中等或高濃度評估組胺酸、沒食子酸丙酯及生育酚。氧化壓力測試之結果示於圖3A-3C中。

組胺酸在所評估之三種抗氧化劑中表現最佳。圖3A顯示，在玻尿酸調配物中濃度0.1%、0.2%或0.4%之組胺酸保留玻尿酸組合物黏度。雖然0.02%或0.10%沒食子酸丙酯亦有效地保留組合物黏度，但在0.20%之較高含量沒食子酸丙酯，顯著玻尿酸黏度損失(圖3B)。另外，在所有濃度之所評估生育酚(0.04%、0.07%或0.10%)，玻尿酸組合物黏度保留，但黏度有些減弱(圖3C)，此在包含組胺酸之組合物中未觀察到。
實例4：胺基酸抗氧化劑之評估

由於實例3中包含組胺酸之組合物的實驗具有有希望結果，因此評估其他胺基酸及肽對玻尿酸組合物之穩定化效應。在部分5.1中所述之氧化降解條件下，於玻尿酸組合物中評估抗氧化劑半胱胺酸、麩胱甘肽或甲硫胺酸。圖4顯示甲硫胺酸保留玻尿酸組合物黏度，而半胱胺酸或麩胱甘肽不能產生穩定化組合物。

進一步評估甲硫胺酸對玻尿酸或醫藥上可接受鹽之組合物的穩定性效應之任何濃度依賴性。圖5顯示，在部分5.1中所述之氧化降解條件下，在所測試之所有濃度(1 mg/mL、2 mg/mL或4 mg/mL)，甲硫胺酸均能夠保留玻尿酸組合物黏度。
實例5：醣類之篩選

由於實例2至4中所述抗氧化劑實驗之結果，選擇組胺酸或甲硫胺酸作為抗氧化劑以用於進一步玻尿酸組合物評估。然而，如圖2中所繪示，僅添加抗氧化劑可能不足以穩定活體內玻尿酸組合物。因此，針對酶降解(例如玻尿酸酶降解)，評估醣類對玻尿酸組合物之穩定化效應。

在部分5.2中所闡述之酶降解條件下，篩選不同醣類(包括糖醇(例如甘露醇)、二醣(例如蔗糖)及源自醣類或糖醇之聚合物(例如海藻酸鈉、PEG、阿拉伯樹膠、黃原膠、卡拉膠))針對黏度之玻尿酸酶降解之有效性。如圖6中所示，醣類海藻酸鈉、卡拉膠109、黃原膠75及黃原膠180各自有效地保留玻尿酸組合物之黏度。包含卡拉膠209、卡拉膠NF或羧甲基纖維素鈉之組合物亦保留黏度，但在該等實驗中黏度略微減弱。相比之下，當經受活體外酶壓力條件時，包含PEG、阿拉伯樹膠、明膠、瓜爾膠、甘露醇或蔗糖之玻尿酸組合物在0.5小時內未有效地保留黏度。
實例6：所選醣類之濃度依賴性

進一步評估在實例5中所闡述之篩選實驗中表現最佳之醣類以確定所觀察到之其對玻尿酸或醫藥上可接受之鹽之組合物的穩定性效應之任何濃度依賴性。

在部分5.2中所闡述之酶降解條件下，測試包含卡拉膠、海藻酸鈉、羧甲基纖維素鈉或黃原膠75之玻尿酸組合物之保留黏度之能力。如圖7A-7D中所繪示，卡拉膠NF (0.5 mg/mL、1 mg/mL或5 mg/mL) (圖7A)及海藻酸鈉(1 mg/mL、5 mg/mL或10 mg/mL) (圖7B)不顯示對所測試濃度之濃度依賴性，而羧甲基纖維素鈉(1 mg/mL、5 mg/mL或10 mg/mL) (圖7C)及黃原膠75 (0.5 mg/mL、1 mg/mL或5 mg/mL) (圖7D)顯示在較低之測試濃度下黏度降低。
實例7：針對黏度之海藻酸鈉含量最佳化

由於在實例5及6中所闡述之實驗中海藻酸鈉具有正性結果，因此篩選不同濃度之海藻酸鈉以針對黏度進行最佳化。由於經確定在玻尿酸組合物中較高含量之海藻酸鈉提供更大之穩定性，因此較高之海藻酸鈉濃度較佳用於維持玻尿酸黏度。然而，利用不同海藻酸鈉濃度評估總體組合物黏度以確保跨越剪切速率之玻尿酸組合物之黏度與活體內投與(例如，經由注射器之關節內投與)相容。

圖8繪示包含不同濃度海藻酸鈉之玻尿酸組合物相對於剪切速率之黏度。自結果中，選擇20 mg/mL海藻酸鈉用於在進一步組合物測試中進行評估。
實例8：Pronova^TM 海藻酸鈉製劑之評估

由於本揭示內容闡述如藉由黏度保留所量測之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之穩定化組合物，因此評估不同海藻酸鈉製劑以確定海藻酸鈉之物理化學性質是否影響其玻尿酸組合物穩定化能力。

海藻酸鈉可自多種不同商業來源(例如Sigma-Aldrich)獲得。將Pronova^TM UP超純海藻酸鈉系列(Novamatrix®，來自DuPont)中之不同海藻酸鈉製劑作為醣類評估。市售Pronova^TM UP超純海藻酸鈉在以下方面有所變化：黏度(低，例如＜20 mPa-sec；中等，例如20-200 mPa-sec；或高，例如＞200 mPa-sec)、分子量(低，例如＜75,000 Da；中等，例如75,000-200,000 Da；或高，例如＞200,000 Da)及古羅糖醛酸與甘露糖醛酸單體之相對比率(較低，例如≤ 50%古羅糖醛酸單體；或較高，例如≥ 60%古羅糖醛酸單體)。該等不同物理化學性質產生玻尿酸組合物之不同黏度，如下表2中所繪示。

表2：包含不同海藻酸鈉製劑之例示性玻尿酸組合物之黏度量測*
*玻尿酸組合物：10 mg/mL玻尿酸、7.5 mg/mL氯化鈉、0.56 mg/mL磷酸氫二鈉十二水合物、0.05 mg/mL磷酸二氫鈉二水合物、1 mg/mL L-組胺酸、20 mg/mL海藻酸鈉(如所指示)、注射用水。

測試玻尿酸組合物中之不同海藻酸鈉製劑在部分5.2中所闡述之酶降解條件下保留黏度之能力。穩定性結果繪示於圖9中，其顯示在部分5.2中所闡述之酶降解條件下0.5小時後，與不包含海藻酸鈉之對照玻尿酸組合物相比，包含海藻酸鈉之所有製劑均展現較高程度之玻尿酸調配物黏度。在所測試之包含Pronova^TM 海藻酸鈉之玻尿酸組合物中，VLVM製劑最有效地保留黏度，其次為LVM及LVG及VLVG，其表現相似。

如圖10A中所繪示，包含Pronova^TM UP VLVM海藻酸鈉之玻尿酸組合物在5 mg/mL、10 mg/mL或20 mg/mL之濃度下展現高程度之穩定性。濃度之詳細比較(圖10B)顯示，在部分5.2酶壓力條件下，在20 mg/mL下，玻尿酸組合物可較5 mg/mL或10 mg/mL Pronova^TM UP VLVM海藻酸鈉展現略高之穩定性。
實例9：張力最佳化

篩選氯化鈉濃度以確定與關節內液大致等滲之玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之組合物。下表3匯總張力最佳化研究之結果。評估每一濃度之氯化鈉之兩種製劑，其中將樣品之滲透重量莫耳濃度量測三次。針對稀釋度校正滲透重量莫耳濃度，且藉由跨越該兩個樣品之所有量測值之平均值來計算平均滲透重量莫耳濃度。因此，選擇6.5 mg/mL至7.5 mg/mL氯化鈉作為鹽濃度用於其他調配物中。

表3：10 mg/mL包含不同氯化鈉濃度之玻尿酸組合物之張力量測值
實例10：包含抗氧化劑及醣類之例示性玻尿酸組合物之評估

如實例2中所說明，雖然包含抗氧化劑(例如組胺酸或甲硫胺酸)之玻尿酸組合物展現較高之針對氧化壓力條件之穩定性，但僅包含抗氧化劑之此等組合物在酶壓力條件下仍展現顯著之黏度損失。因此，評估包含抗氧化劑及醣類二者之例示性玻尿酸組合物針對氧化及酶降解壓力二者之穩定性。

包含玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽之本揭示內容之例示性組合物：
*視需要使用注射用水以將每一組合物稀釋至指示濃度。

使每一組合物(原型A或原型B)經受部分5.1中之氧化壓力條件或部分5.2中所闡述之酶壓力條件。將該等組合物在每一條件下各自測試兩次。原型A之結果匯總於圖11中且原型B之結果匯總於圖12中。

與不存在過氧化氫之玻尿酸組合物相比，原型A針對部分5.1中所闡述之氧化條件展現良好穩定性，在1小時後展現99.3%黏度(圖11)。與不存在過氧化氫之玻尿酸組合物相比，原型A針對部分5.2中所闡述之酶條件展現良好穩定性，在1小時後展現79.0%黏度。

與不存在玻尿酸酶之玻尿酸組合物相比，原型B針對部分5.1中所闡述之氧化條件展現良好穩定性，在1小時後展現98%黏度(圖12)。與不存在玻尿酸酶之玻尿酸組合物相比，原型B針對部分5.2中所闡述之酶條件展現良好穩定性，在1小時後展現89.7%黏度。

與對照玻尿酸組合物相比，組合物原型A及原型B中之每一者均展現較高之針對氧化或酶壓力之穩定性。對照組合物包含與原型A或原型B相同濃度之玻尿酸、磷酸鹽及氯化鈉，但不含抗氧化劑或海藻酸鈉。如圖13中所示，與不存在過氧化氫之玻尿酸組合物相比，對照組合物針對部分5.1中所闡述之氧化條件在1小時後展現41.4%黏度。與不存在玻尿酸酶之玻尿酸組合物相比，對照組合物針對部分5.2中所闡述之酶條件在1小時後展現41.6%黏度。
實例11：長期黏度及pH測試

將組合物原型A及原型B填充至注射器中至10 mL BD透明玻璃注射器中之5 mL體積以代表即用型注射組合物。放置柱塞擋止器以最小化進入注射器中之空氣。未對組合物進行滅菌且在非無菌條件下實施注射器之填充。所使用之注射器及柱塞擋止器列示於表4中。

表4.

對原型A及原型B進行長期黏度量測以監測HA聚合物鏈經由化學或生物活性所致之任何縮短、破壞或完全化學降解，從而導致黏度降低。將樣品在三種條件下儲存於注射器中：5℃、25℃/60%相對濕度(RH)及40℃/75% RH。使用流變儀不經稀釋「原樣」測試穩定性樣品，且使用圓錐-平板幾何學(40 mm平板直徑及2度圓錐角)在0.1 s^-1 及1000 s^-1 之剪切速率下收集黏度數據。

圖14A-14B及圖14C-14D分別顯示組合物原型A及原型B在該三種不同儲存條件下之長期黏度。

結果顯示，跨越長達6個月之所有時間點，兩種組合物隨溫度增加在0.1 s^-1 剪切速率下均具有黏度降低之預期趨勢。早在2週開始，兩種組合物在40℃/75% RH條件下均經歷穩定性之降低。在25℃/60% RH下長達6個月時間點，原型B似乎較原型A更穩定，然而，在0.1 s^-1 下之所有結果中，25℃/60% RH低於5℃，此指示具有一定降解。跨越長達6個月之所有時間點，在5℃下原型B似乎較原型A更穩定。

在於水中稀釋(1:1)之後，電位測定組合物原型A及原型B之長期pH。

圖15A及15B顯示組合物原型A及原型B之長期pH。

對於原型A及原型B二者，所有pH量測值均係在7.1至7.7範圍內且在6個月內展現降低(≤ 0.4)。在40℃/75% RH下之降低更明顯。
實例12：活體內評價

在注射至齧齒類動物之膝關節中時實施雙足平衡分析以評估組合物原型B之臨床前效能。

選擇雄性Lewis大鼠(250-275 g，9週)用於活體內評價，且使其適應動物群落一週，且在一週適應之後處置四次，每次五分鐘。在此過程期間，使動物適應測試架三次。在一週調理之後，利用組合物原型B、於PBS中之1% HA、於PBS中之1.5% HA或對照媒劑(PBS)藉由關節內注射或經口特拉嗎竇處理在第1天及第7天、第14天及第21天給予右後膝內側半月板撕裂之齧齒類動物。亦向具有假手術之大鼠投與對照媒劑(PBS)，以計及切口創傷。

右肢(發炎/患病)與左肢(對側對照)之間後爪重量分佈之變化可用作關節不適之指標。採用雙足平衡測試儀(Linton Instrumentation, Norfolk, UK)用於測定後爪重量分佈。參見Boye, S.E.等人，Osteoarthritis and Cartilage , 11(11): 821-830。

放置大鼠使其後爪在測力板之中心且其上身在經改進之約束管內部，且使大鼠適應該管30秒。在記錄數據之前，必須使大鼠站直且不靠在管之側面，且可輕輕操縱以鼓勵適當姿勢。一旦動物達成適當姿勢，則藉由按下「enter」按鍵進行讀數且對若干隻大鼠一式三份重複該過程。記錄左肢及及右肢之結果。

圖16A及16B顯示使用表5中所描述之組合物之雙足平衡測試之結果。

表5. 活體內測試調配物

實施鄧尼特測試(Dunnett Test)以分析與對照S5相比，在雙足平衡測試中所獲得之結果是否對於調配物S1至S4具有統計學顯著性。鄧尼特測試之結果報告於表6中。

表6. 鄧尼特測試

表6顯示與對照S5相比，注射調配物S1 (原型B)之雙足平衡測試結果具有統計學顯著性(p值≤ 0.05)。
實例13：組織病理學分析

實施組織病理學檢查以評價組織學評分，且亦分析HA調配物在注射至大鼠右膝關節中之後之滯留時間。30天後獲得經處理膝關節之組織切片，且在顯微鏡下以16×放大率檢查。

圖17A及17B顯示分別經PBS (0.5 mg/大鼠)及原型B (0.5 mg/大鼠)處理之膝關節之顯微照片。

在圖17B中，仍可在滑膜上觀察到原型B，此顯示滯留時間大於30天。

本申請案中所引用之所有出版物、專利、專利申請案及其他文件均係出於所有目的以全文引用的方式併入本文中，其併入程度如同出於所有目的將每一個別出版物、專利、專利申請案或其他文件個別地指明以引用的方式併入一般。

儘管已說明並闡述各個具體實施例，但應瞭解，可在不背離本發明之精神及範圍之情形作出各種改變。

圖1顯示在0.016%過氧化氫存在下、在不同抗氧化劑(即抗壞血酸、組胺酸、偏亞硫酸氫鈉(「NaMBS」)、甘露糖、甘露醇、丁基羥基茴香醚(「BHA」)、二丁基羥基甲苯(「BHT」)、丁基羥基茴香醚及二丁基羥基甲苯(「BHA + BHT」)、生育酚、沒食子酸丙酯(「propyl gallate、P Gallate」)或山梨醇)存在下，2 mg/mL玻尿酸測試組合物隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)。對照組合物為不含抗氧化劑或過氧化氫之2 mg/mL玻尿酸(pH 6.5-7.5)。圖例：實心圓圈=抗壞血酸；陰影三角形=組胺酸；陰影菱形=偏亞硫酸氫鈉；短劃線=甘露糖；空心圓圈=甘露醇；空心三角形= BHA；空心圓圈= BHT；實心正方形= BHA + BHT；陰影圓圈=生育酚；空心正方形=沒食子酸丙酯；長劃線=山梨醇。

圖2顯示在0.001 mg/mL玻尿酸酶存在下、在不同抗氧化劑(即組胺酸、BHA、BHT、生育酚或沒食子酸丙酯)存在下，2 mg/mL玻尿酸測試組合物在25 sec^-1 之剪切速率下及pH 6.5-7.5下隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(以cPa計)(y軸)。對照組合物為不含抗氧化劑或玻尿酸酶之2 mg/mL玻尿酸(pH 6.5-7.5)；對照(受壓)顯示在0.001 mg/mL玻尿酸酶存在下對照溶液之行為。圖例：陰影圓圈=對照；實心菱形=對照(受壓)；空心正方形=組胺酸；短劃線= BHA；空心三角形= BHT；加號=生育酚；實心圓圈=沒食子酸丙酯。

圖3A-3C顯示在0.016%過氧化氫及低、中等或高濃度之不同抗氧化劑存在下，2 mg/mL玻尿酸測試組合物在25 sec^-1 之剪切速率下隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%，相對於對照)(y軸)：圖3A顯示與未受壓之對照(實心正方形)相比，包含低(0.1%，空心圓圈)、中等(「mid」，0.2%，陰影三角形)或高(0.4%，空心菱形)濃度之抗氧化劑組胺酸之玻尿酸測試組合物隨時間而變之黏度；圖3B顯示與未受壓之對照(實心正方形)相比，包含低(0.04%，空心圓圈)、中等(「mid」，0.07%，陰影三角形)或高(0.1%，空心菱形)濃度之抗氧化劑生育酚之玻尿酸測試組合物隨時間而變之黏度；圖3C顯示與未受壓之對照(實心正方形)相比，包含低(0.02%，空心圓圈)、中等(「mid」，0.1%，陰影三角形)或高(0.2%，空心菱形)濃度之沒食子酸丙酯之玻尿酸測試組合物隨時間而變之黏度。

圖4顯示在0.016%過氧化氫及2 mg/mL抗氧化劑半胱胺酸(實心正方形)、麩胱甘肽(空心圓圈)或甲硫胺酸(陰影三角形)存在下，2 mg/mL玻尿酸測試組合物隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)。對照組合物為不含過氧化氫或抗氧化劑之2 mg/mL水性玻尿酸。

圖5顯示在0.016%過氧化氫及不同濃度之抗氧化劑甲硫胺酸(1 mg/mL (實心正方形)、2 mg/mL (空心圓圈)或4 mg/mL (陰影三角形))存在下，2 mg/mL玻尿酸測試組合物隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)。對照組合物為不含過氧化氫或抗氧化劑之2 mg/mL水性玻尿酸。

圖6顯示在0.001 mg/mL玻尿酸酶及不同醣類(即聚乙二醇(PEG) (實線、實心圓圈)、海藻酸鈉(「海藻酸鹽」) (點線、點三角形)、阿拉伯樹膠(「阿拉伯」) (實線、虛線正方形)、卡拉膠109 (虛線、實心三角形)、卡拉膠209 (實線、實心正方形)、卡拉膠NF (實線、陰影菱形)、羧甲基纖維素鈉(「CMC」)(虛線、虛線圓圈)、明膠(實線、星號)、瓜爾膠(實線、實心菱形)、甘露醇(點線、實心圓圈)、蔗糖(實線、陰影圓圈)、黃原膠180 (「Xanthan 180」) (虛線、陰影圓圈)或黃原膠75 (「Xanthan 75」) (實線、陰影圓圈))存在下，2 mg/mL玻尿酸測試組合物隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(「正規化」，即相對於對照之%)(y軸)。

圖7A-7D顯示在0.001 mg/mL玻尿酸酶及不同濃度之醣類存在下，2 mg/mL玻尿酸組合物隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)：圖7A顯示包含0.5 mg/mL (陰影三角形)、1 mg/mL (空心圓圈)或5 mg/mL (實心正方形)卡拉膠NF之組合物隨時間而變之黏度；圖7B顯示包含1 mg/mL (陰影三角形)、5 mg/mL (空心圓圈)或10 mg/mL (實心正方形)海藻酸鈉之調配物隨時間而變之黏度；圖7C顯示包含1 mg/mL (陰影三角形)、5 mg/mL (空心圓圈)或10 mg/mL (實心正方形)羧甲基纖維素鈉之組合物隨時間而變之黏度；圖7D顯示包含0.5 mg/mL (陰影三角形)、1 mg/mL (空心圓圈)或5 mg/mL (實心正方形)黃原膠75之組合物隨時間而變之黏度。

圖8顯示包含0 (「對照」，實線、實心圓圈)、1 mg/mL (點線、點菱形)、5 mg/mL (點線、空心正方形)、10 mg/mL (實線、實心三角形)或20 mg/mL (實線、實心正方形)之不同海藻酸鈉濃度之2 mg/mL玻尿酸測試組合物之黏度(mPa-sec)(y軸)對剪切速率(sec^-1 )(x軸)。

圖9顯示在0.001 mg/mL玻尿酸酶及具有不同物理化學輪廓之海藻酸鈉存在下，2 mg/mL玻尿酸測試組合物隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)。所測試之海藻酸鈉製劑：「LVG」 = Pronova^TM UP LVG (實心正方形)；「VLVG」 = Pronova^TM UP VLVG (空心圓圈)；「LVM」 = Pronova^TM UP LVM (陰影三角形)；「VLVM」 = Pronova^TM UP VLVM (空心菱形)；不含海藻酸鈉之對照(短劃線)。

圖10A顯示包含5 mg/mL (實心正方形)、10 mg/mL (空心圓圈)或20 mg/mL (陰影三角形) Pronova^TM UP VLVM海藻酸鈉之例示性玻尿酸組合物隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)。

圖10B係圖10A之展開視圖，其進一步圖解說明來自所測試玻尿酸組合物之結果。

圖11顯示例示性玻尿酸組合物原型A在經受0.016%過氧化氫或0.001 mg/mL玻尿酸酶時隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)。將組合物在過氧化氫存在下測試兩次(「氧化1」，陰影三角形；「氧化2」，空心菱形)，且在玻尿酸酶存在下測試兩次(「酶1」，實心正方形；「酶2」，空心圓圈)。

圖12顯示例示性玻尿酸組合物原型B在經受0.016%過氧化氫或0.001 mg/mL玻尿酸酶時隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)。將組合物在過氧化氫存在下測試兩次(「氧化1」，陰影三角形；「氧化2」，空心菱形)，且在玻尿酸酶存在下測試兩次(「酶1」，實心正方形；「酶2」，空心圓圈)。

圖13顯示不包含抗氧化劑或醣類之比較玻尿酸組合物在經受0.016%過氧化氫或0.001 mg/mL玻尿酸酶時隨時間(sec)(x軸)而變之黏度(%)(相對於對照)(y軸)。將組合物在過氧化氫存在下測試兩次(「氧化1」，陰影三角形；「氧化2」，空心菱形)，且在玻尿酸酶存在下測試兩次(「酶1」，實心正方形；「酶2」，空心圓圈)。

圖14A顯示在5℃ (14.1)、25℃/60% RH (14.2)及40℃/75% RH (14.3)下，組合物原型A在0.1 s^-1 下之長期黏度(mPa-sec)(y軸)隨時間(月)(x軸)而變之結果。

圖14B顯示在5℃ (14.1)、25℃/60% RH (14.2)及40℃/75% RH (14.3)下，組合物原型A在1000 s^-1 下之長期黏度(mPa-sec)(y軸)隨時間(月)(x軸)而變之結果。

圖14C顯示在5℃ (14.4)、25℃/60% RH (14.5)及40℃/75% RH (14.6)下，組合物原型B在0.1 s^-1 下之長期黏度(mPa-sec)(y軸)隨時間(月)(x軸)而變之結果。

圖14D顯示在5℃ (14.4)、25℃/60% RH (14.5)及40℃/75% RH (14.6)下，組合物原型B在1000 s^-1 下之長期黏度(mPa-sec)(y軸)隨時間(月)(x軸)而變之結果。

圖15A顯示在5℃ (15.1)、25℃/60% RH (15.2)及40℃/75% RH (15.3)下，原型A之長期pH (y軸)隨時間(月)(x軸)而變之結果。

圖15B顯示在5℃ (15.4)、25℃/60% RH (15.5)及40℃/75% RH (15.6)下，原型B之長期pH (y軸)隨時間(月)(x軸)而變之結果。

圖16A顯示雙足平衡測試(incapacitance test)之結果，其使用組合物原型B (S1)、於PBS中之1% HA (S2)、於PBS中之1.5% HA (S3)、特拉嗎竇(Tramadol)(S4)、對照(S5)及假手術(S6)隨時間(研究天數)(x軸)而變之平均值±SE承重差(左-右)(y軸)量測。

圖16B顯示雙足平衡AUC計算，其使用組合物原型B (S1)、於PBS中之1% HA (S2)、於PBS中之1.5% HA (S3)、特拉嗎竇(S4)、對照(S5)及假手術(S6)治療組(x軸)之平均值±SE承重差(g)*天數(y軸)量測。

圖17A係經PBS (0.5 mg/大鼠)治療之大鼠右膝關節在30天滯留時間後之16×放大率顯微照片，其顯示股骨外側髁(L)、股骨內側髁(M)、正常橫向滑膜(箭)及正常十字插入(箭頭)。

圖17B係經原型B (0.5 mg/大鼠)處理之大鼠右膝關節在30天滯留時間後之16×放大率顯微照片，其顯示股骨外側髁(L)、股骨內側髁(M)、滑膜邊緣之原型B (箭)及十字插入處骨凹陷中之原型B (箭頭)。

Claims (64)

1. 一種水性組合物，其包含： 玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽； 抗氧化劑；及 醣類。
2. 如請求項1之組合物，其中溶液之pH為約6.5至約7.5。
3. 如請求項1或2之組合物，其中該醫藥上可接受之鹽包含鈉鹽。
4. 如請求項1至3中任一項之組合物，其中該玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽係以約0.1重量%至約10重量%之範圍內存在。
5. 如請求項1至4中任一項之組合物，其中該玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽係以約1重量%存在。
6. 如請求項1至5中任一項之組合物，其中該玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽係以約1 mg/mL至約100 mg/mL之範圍內存在。
7. 如請求項1至6中任一項之組合物，其中該玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽係以約10 mg/mL存在。
8. 如請求項1至7中任一項之組合物，其中該抗氧化劑係選自抗壞血酸、檸檬酸、偏亞硫酸氫鹽、生育酚、丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、沒食子酸丙酯、甘露糖、甘露醇、胺基酸、肽及其醫藥上可接受之鹽。
9. 如請求項1至8中任一項之組合物，其中該抗氧化劑係胺基酸或其醫藥上可接受之鹽。
10. 如請求項9之組合物，其中該胺基酸係選自組胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸及其醫藥上可接受之鹽。
11. 如請求項1至8中任一項之組合物，其中該抗氧化劑係肽。
12. 如請求項11之組合物，其中該肽係由2至5個胺基酸組成。
13. 如請求項12之組合物，其中該肽係麩胱甘肽或其醫藥上可接受之鹽。
14. 如請求項1至7中任一項之組合物，其中該抗氧化劑係選自沒食子酸丙酯、組胺酸、甲硫胺酸、生育酚及其醫藥上可接受之鹽。
15. 如請求項14之組合物，其中該抗氧化劑係沒食子酸丙酯。
16. 如請求項15之組合物，其中該沒食子酸丙酯係以約0.01重量%至約0.1重量%之範圍內存在。
17. 如請求項14之組合物，其中該抗氧化劑係組胺酸或其醫藥上可接受之鹽。
18. 如請求項17之組合物，其中該組胺酸或其醫藥上可接受之鹽係以約0.01重量%至約5重量%之範圍內存在。
19. 如請求項18之組合物，其中該組胺酸或其醫藥上可接受之鹽係以約0.05重量%至約0.5重量%之範圍內存在。
20. 如請求項17之組合物，其中該組胺酸或其醫藥上可接受之鹽係以約0.5 mg/mL至約5 mg/mL之範圍內存在。
21. 如請求項14之組合物，其中該抗氧化劑係甲硫胺酸或其醫藥上可接受之鹽。
22. 如請求項21之組合物，其中該甲硫胺酸或其醫藥上可接受之鹽係以約0.01重量%至約5重量%之範圍內存在。
23. 如請求項22之組合物，其中該甲硫胺酸或其醫藥上可接受之鹽係以約0.1重量%至約0.5重量%之範圍內存在。
24. 如請求項21之組合物，其中該甲硫胺酸或其醫藥上可接受之鹽係以約1 mg/mL至約5 mg/mL之範圍內存在。
25. 如請求項14之組合物，其中該抗氧化劑係生育酚。
26. 如請求項1至7中任一項之組合物，其中該抗氧化劑係以約0.01重量%至約1重量%之範圍存在。
27. 如請求項1至7中任一項之組合物，其中該抗氧化劑係以約0.1 mg/ mL至約10 mg/mL之範圍內存在。
28. 如請求項1至7中任一項之組合物，其中該抗氧化劑係以約2 mg/mL存在。
29. 如請求項1至28中任一項之組合物，其中該醣類係選自海藻酸、卡拉膠(carrageenan)、羧甲基纖維素、幾丁聚醣、明膠、阿拉伯樹膠、瓜爾膠(guar gum)、甘露醇、山梨醇、蔗糖、黃原膠、聚乙二醇及其醫藥上可接受之鹽。
30. 如請求項29之組合物，其中該醣類係選自海藻酸、卡拉膠、羧甲基纖維素、黃原膠及其醫藥上可接受之鹽。
31. 如請求項1至30中任一項之組合物，其中該醣類係以約0.01重量%至約5重量%之範圍內存在。
32. 如請求項1至30中任一項之組合物，其中該醣類係以約0.1 mg/mL至約50 mg/mL之範圍內存在。
33. 如請求項32之組合物，其中該醣類係以約1 mg/mL至約50 mg/mL之範圍內存在。
34. 如請求項1至30中任一項之組合物，其中該醣類係卡拉膠。
35. 如請求項34之組合物，其中該卡拉膠係以約0.01重量%至約1重量%之範圍內存在。
36. 如請求項34之組合物，其中該卡拉膠係以約0.1 mg/mL至約10 mg/ mL之範圍內存在。
37. 如請求項1至30中任一項之組合物，其中該醣類係羧甲基纖維素鈉。
38. 如請求項37之組合物，其中該羧甲基纖維素鈉係以至少約1 mg/mL存在。
39. 如請求項37之組合物，其中該羧甲基纖維素鈉係以約0.1重量%至約2重量%之範圍內存在。
40. 如請求項37之組合物，其中該羧甲基纖維素鈉係以約1 mg/mL至約20 mg/mL之範圍內存在。
41. 如請求項1至30中任一項之組合物，其中該醣類係黃原膠。
42. 如請求項41之組合物，其中該黃原膠係以約0.1重量%至約1重量%之範圍內存在。
43. 如請求項41之組合物，其中該黃原膠係以至少約1 mg/mL存在。
44. 如請求項41之組合物，其中該黃原膠係以約1 mg/mL至約10 mg/mL之範圍內存在。
45. 如請求項1至30中任一項之組合物，其中該醣類係海藻酸鈉。
46. 如請求項45之組合物，其中該海藻酸鈉係以約0.02重量%至約5重量%之範圍內存在。
47. 如請求項45之組合物，其中該海藻酸鈉係以約0.2 mg/mL至約50 mg/mL之範圍內存在。
48. 如請求項47之組合物，其中該海藻酸鈉係以約10 mg/mL至約30 mg/mL之範圍內存在。
49. 如請求項45之組合物，其中該海藻酸鈉具有在約1 mPa-sec至約200 mPa-sec範圍內之黏度。
50. 如請求項44之組合物，其中該海藻酸鈉具有不超過約20 mPa-sec之黏度。
51. 如請求項45之組合物，其中該海藻酸鈉具有在約1,000道耳頓(Dalton)至約200,000道耳頓範圍內之分子量。
52. 如請求項45之組合物，其中該海藻酸鈉具有不超過約75,000道耳頓之分子量。
53. 如請求項45之組合物，其中該海藻酸鈉包含古羅糖醛酸(guluronate)對甘露糖醛酸單體之比率小於約1.5:1。
54. 如請求項45之組合物，其中該海藻酸鈉包含古羅糖醛酸對甘露糖醛酸單體之比率不超過約1:1。
55. 如請求項1至54中任一項之組合物，其中該組合物在約1000 sec^-1 之剪切速率下具有在約10 cPa至約400 cPa範圍內之黏度。
56. 如請求項1至54中任一項之組合物，其中該組合物在約1000 sec^-1 之剪切速率下具有約200 cPa之黏度。
57. 一種水性組合物，其包含： 約5 mg/mL至約15 mg/mL玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽； 約10 mg/mL至約30 mg/mL海藻酸鈉； 約0.5 mg/mL至約5 mg/mL組胺酸； 磷酸鹽緩衝劑；及 張力劑； 其中溶液之pH為約6.5至約7.5。
58. 如請求項57之組合物，其中該海藻酸鈉包含古羅糖醛酸對甘露糖醛酸單體之比率小於約1:1，且具有不超過約20 mPa-sec之黏度。
59. 一種水性組合物，其包含： 約5 mg/mL至約15 mg/mL玻尿酸或其醫藥上可接受之鹽； 約10 mg/mL至約30 mg/mL海藻酸鈉； 約0.5 mg/mL至約5 mg/mL甲硫胺酸； 磷酸鹽緩衝劑；及 張力劑； 其中溶液之pH為約6.5至約7.5。
60. 如請求項59之組合物，其中該海藻酸鈉包含古羅糖醛酸對甘露糖醛酸單體之比率小於約1:1，且具有不超過約20 mPa-sec之黏度。
61. 如請求項1至60中任一項之組合物，其在經受氧化壓力條件之後，與等量之不包含抗氧化劑或醣類之比較玻尿酸組合物相比黏度高至少約10%； 其中氧化壓力條件包含使該組合物在室溫經受約0.02%過氧化氫約1小時。
62. 如請求項1至60中任一項之組合物，其在經受酶壓力條件之後，與等量之不包含抗氧化劑或醣類之比較玻尿酸組合物相比黏度高至少約10%； 其中酶壓力條件包含使該組合物在室溫經受約0.001 mg/mL玻尿酸酶約1小時。
63. 一種治療骨關節炎之方法，該方法包含向有需要之人類患者投與治療有效量之如請求項1至62中任一項之水性組合物。
64. 如請求項63之方法，其中該方法包含向該患者關節內注射該組合物。