TW201920248A - 多聚體ｔ細胞調節多肽及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供T細胞調節多聚體多肽，其包含對同源共免疫調節多肽展現降低之結合親和力的免疫調節多肽。T細胞調節多聚體多肽適用於調節T細胞之活性及調節個體之免疫反應。

Description

多聚體Ｔ細胞調節多肽及其使用方法
本發明係有關於多聚體T細胞調節多肽及其使用方法。
適應性免疫反應涉及藉由主要組織相容性複合體(MHC；在人類中亦稱為人類白血球抗原(HLA)複合體)嚙合T細胞表面上存在之T細胞受體(TCR)與抗原呈現細胞(APC)表面上非共價呈現之小肽抗原。此嚙合表示免疫系統之靶向機制且對於T細胞調節(活化或抑制)及效應功能而言為必需之分子相互作用。在抗原決定基特異性細胞靶向後，藉由嚙合APC上發現之共刺激蛋白與T細胞上之對應共刺激蛋白來活化所靶向之T細胞。需要兩個信號，亦即抗原決定基/TCR結合及APC共刺激蛋白與T細胞共刺激蛋白嚙合，來驅動T細胞特異性及活化或抑制。TCR對指定抗原決定基具有特異性；然而，共刺激蛋白不具抗原決定基特異性，而是一般表現於所有T細胞上或大T細胞子集上。
本發明提供T細胞調節多聚體多肽(TMMP)，其包含對同源共免疫調節多肽展現降低之結合親和力的免疫調節多肽。TMMP適用於調節T細胞之活性及調節個體之免疫反應。
交叉引用
本申請案主張2017年9月7日申請之美國臨時專利申請案第62/555,499號之權益，該申請案係以引用之方式整體併入本文中。

定義
本文中可互換使用之術語「聚核苷酸」及「核酸」係指任何長度之多聚體形式之核苷酸(核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸)。因而，此術語包括但不限於單鏈、雙鏈或多鏈DNA或RNA、基因組DNA、cDNA、DNA-RNA雜合體或者包含嘌呤及嘧啶鹼基或其他天然、經化學或生物化學修飾、非天然或經衍生化之核苷酸鹼基的聚合物。
術語「肽」、「多肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用，且係指任何長度之多聚體形式之胺基酸，其可包括編碼及非編碼胺基酸、經化學或生物化學修飾或衍生化之胺基酸，及具有經修飾之肽骨架的多肽。
聚核苷酸或多肽與另一聚核苷酸或多肽具有某一百分比「序列一致性」意謂當比對時該百分比之鹼基或胺基酸相同並且當比較兩個序列時處於相同的相對位置。可用眾多不同的方式測定序列一致性。為了測定序列一致性，可使用經全球資訊網在諸多網站，包括ncbi.nlm.nili.gov/BLAST、ebi.ac.uk/Tools/msa/tcoffee/、
ebi.ac.uk/Tools/msa/muscle/、mafft.cbrc.jp/alignment/software/獲得之各種便利方法及電腦程式(例如BLAST、T-COFFEE、MUSCLE、MAFFT等)對序列進行比對。參見例如Altschul等人(1990), J. Mol. Bioi. 215:403-10。
術語「保守胺基酸取代」係指蛋白質中具有類似側鏈之胺基酸殘基的可互換性。舉例而言，具有脂族側鏈之胺基酸群組由甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸組成；具有脂族-羥基側鏈之胺基酸群組由絲胺酸及蘇胺酸組成；具有含醯胺側鏈之胺基酸群組由天冬醯胺酸及麩醯胺酸組成；具有芳族側鏈之胺基酸群組由苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸組成；具有鹼性側鏈之胺基酸群組由離胺酸、精胺酸及組胺酸組成；具有酸性側鏈之胺基酸群組由麩胺酸及天冬胺酸組成；且具有含硫側鏈之胺基酸群組由半胱胺酸及甲硫胺酸組成。例示性保守胺基酸取代群組為：纈胺酸-白胺酸-異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸-甘胺酸及天冬醯胺酸-麩醯胺酸。
如本文中所使用之術語「免疫學突觸」或「免疫突觸」一般係指適應性免疫反應之兩個相互作用之免疫細胞之間的天然界面，包括例如抗原呈現細胞(APC)或靶細胞與效應細胞(例如，淋巴細胞、效應T細胞、天然殺手細胞及其類似細胞)之間的界面。APC與T細胞之間的免疫學突觸一般由T細胞抗原受體與主要組織相容性複合體分子之相互作用引發，例如，如Bromley等人, Annu Rev Immunol. 2001; 19:375-96中所描述，該文獻之揭示內容係以引用之方式整體併入本文中。
「T細胞」包括表現CD3之免疫細胞之所有類型，包括T輔助細胞(CD4+ 細胞)、細胞毒性T細胞(CD8+ 細胞)、T調控細胞(Treg)及NK-T細胞。
如本文中所使用之術語「免疫調節多肽」(亦稱為「共刺激多肽」)包括抗原呈現細胞(APC) (例如樹突狀細胞、B細胞及其類似細胞)上之多肽，該多肽特異性地結合T細胞上之同源共免疫調節多肽，從而提供連同由例如TCR/CD3複合體與肽所負載之主要組織相容性複合體(MHC)多肽結合所提供之第一信號一起介導T細胞反應之信號，包括但不限於增殖、活化、分化及其類似信號。免疫調節多肽可包括但不限於CD7、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、PD-L1、PD-L2、4-1BBL、OX40L、Fas配位體(FasL)、誘導性共刺激配位體(ICOS-L)、細胞間黏附分子(ICAM)、CD30L、CD40、CD70、CD83、HLA-G、MICA、MICB、HVEM、淋巴細胞毒素β受體、3/TR6、ILT3、ILT4、HVEM、結合Toll配位體受體之促效劑或抗體及特異性地與B7-H3結合之配位體。
如以上所指出，「免疫調節多肽」(本文中亦稱為「MOD」)特異性地結合T細胞上之同源共免疫調節多肽。
本發明之T細胞調節多聚體多肽之「免疫調節結構域」(「MOD」)結合同源共免疫調節多肽，該同源共免疫調節多肽可呈現於靶T細胞上。
如本文中所使用之「異源」分別意謂並非在天然核酸或蛋白質中發現之核苷酸或多肽。
如本文中所使用之「重組」意謂特定核酸(DNA或RNA)為對獲得與天然系統中發現之內源核酸不同的具有結構性編碼或非編碼序列之構築體的選殖、限制、聚合酶鏈反應(PCR)及/或連接步驟進行各種組合的產物。可由cDNA片段或由一系列合成寡核苷酸來組裝編碼多肽之DNA序列，以提供能夠由細胞或無細胞轉錄及轉譯系統中所含有之重組轉錄單元加以表現之合成核酸。
術語「重組表現載體」或「DNA構築體」在本文中可互換用於指包含載體及一個插入物之DNA分子。通常出於表現及/或增殖插入物之目的或為了構築其他重組核苷酸序列而產生重組表現載體。插入物可能或可能未可操作地連接至啟動子序列，且可能或可能未可操作地連接至DNA調控序列。
如本文中所使用，術語「親和力」係指兩種試劑(例如，抗體及抗原)之可逆結合的平衡常數且表示為解離常數(KD )。親和力可比抗體對無關胺基酸序列之親和力高出至少1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍或至少1,000倍或更多倍。抗體對靶蛋白質之親和力可為例如約100奈莫耳(nM)至約0.1 nM、約100 nM至約1皮莫耳(pM)或約100 nM至約1飛莫耳(fM)或更高。如本文中所使用，術語「親合力」係指兩種或更多種劑之複合體在稀釋之後對解離之抗性。就抗體及/或抗原結合片段而言，術語「免疫反應性」及「優先結合」在本文中可互換使用。
如本文中所使用之術語「結合」(例如，參考T細胞調節多聚體多肽與多肽(例如，T細胞上之T細胞受體)之結合)係指兩個分子之間的非共價相互作用。非共價結合係指兩個分子之間由於例如靜電相互作用、疏水性相互作用、離子相互作用及/或氫鍵相互作用，包括諸如鹽橋及水橋之相互作用而直接締合。非共價結合相互作用一般以小於10-6 M、小於10-7 M、小於10-8 M、小於10-9 M、小於10-10 M、小於10-11 M、小於10-12 M、小於10-13 M、小於10-14 M或小於10-15 M之解離常數(KD )為特徵。「親和力」係指非共價結合之強度，增加之結合親和力與較低之KD 相關。「特異性結合」一般係指以至少約10-7 M或更大，例如5×10-7 M、10-8 M、5×10-8 M、10-9 M及更大之親和力結合。「非特異性結合」一般係指以低於約10-7 M之親和力結合(例如配位體與除其指定結合位點或受體以外之部分的結合) (例如，以10-6 M、10-5 M、10-4 M之親和力結合)。然而，在一些情況下，例如，TCR與肽/MHC複合體之間的結合，「特異性結合」可處於1 μM至100 μM或100 μM至1 mM之範圍內。如本文中所使用之「共價結合」或「共價鍵」係指兩個不同的分子之間形成一或多個共價化學鍵。
術語「處理」及其類似術語在本文中一般用於意謂獲得所要藥理學及/或生理學效應。該效應就完全或部分預防疾病或其症狀而言可為預防性的，及/或就部分或完全治癒疾病及/或可歸因於該疾病之不利效應而言可為治療性的。如本文中所使用之「處理」涵蓋對哺乳動物之疾病或症狀之任何處理，且包括：(a)預防可能易患該疾病或症狀但尚未診斷為患有該疾病或症狀之個體出現該疾病或症狀；(b)抑制該疾病或症狀，亦即，阻遏其發展；或(c)減輕該疾病，亦即，使該疾病消退。治療劑可在疾病或損傷發作之前、期間或之後投與。尤其關注持續性疾病之處理，其中該處理穩定或減輕患者之不良臨床症狀。理想地，在受影響之組織的功能完全喪失之前進行此種處理。理想地，將在疾病之有症狀階段期間且在一些情況下在疾病之有症狀階段之後投與標的療法。
術語「個人」、「個體」、「宿主」及「患者」在本文中可互換使用，並且係指需要診斷、處理或治療的任何哺乳動物個體。哺乳動物包括例如人類、非人類靈長類動物、囓齒動物(例如大鼠；小鼠)、兔類動物(例如兔)、有蹄類動物(例如牛、綿羊、豬、馬、山羊及其類似動物)等。
在進一步描述本發明之前，應理解本發明不限於所描述之特定實施例，因而固然可變化。亦應理解，本文中所使用之術語僅出於描述特定實施例之目的，而不意欲具有限制性，此係因為本發明之範疇將僅受所附申請專利範圍限制。
在提供值之範圍時，應理解，除非上下文另外清楚指出，否則介於該範圍之上限與下限之間的各居中值(達至下限單位之十分之一)及該所陳述範圍中之任何其他所陳述值或居中值均涵蓋在本發明內。此等較小範圍之上限及下限可獨立地包括於該等較小範圍內，且亦涵蓋在本發明內，受所陳述之範圍內的任何明確排除之界限限制。在所陳述之範圍包括上限及下限之一或兩者時，排除彼等所包括之界限中之任一者或兩者的範圍亦包括在本發明中。
除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域之熟習此項技術者通常所理解之含義相同的含義。儘管與本文中所描述者類似或等效之任何方法及材料亦可用於實踐或檢驗本發明，但現描述較佳方法及材料。本文中所提及之所有出版物均以引用之方式併入本文中，以便結合所引用之出版物來揭示並描述該等方法及/或材料。
必須指出，除非上下文另外清楚地指出，否則如本文中及所附申請專利範圍中所使用，單數形式「一」及「該」包括複數參考物。因而，舉例而言，提及「多聚體T細胞調節多肽」包括複數個此類多肽，且提及「該免疫調節多肽」包括提及熟習此項技術者已知的一或多個免疫調節多肽及其等效物，以此類推。此外應指出，可撰寫申請專利範圍以排除任何可選要素。因而，此陳述意欲充當結合申請專利範圍要素之敍述來使用諸如「僅僅」、「僅」及其類似術語之排他性術語或使用「負」限制的前提基礎。
應瞭解，獨立的實施例之內容中出於清楚性之目的而描述的某些本發明特徵亦可組合提供於單一實施例中。相反，單個實施例之內容中出於簡便性之目的而描述的各種本發明特徵亦可單獨或以任何適合之子組合形式提供。關於本發明之實施例之所有組合均明確由本發明涵蓋且揭示於本文中，就如同逐一地且明確地揭示各個及每個組合。另外，其各種實施例及要素之所有子組合亦明確由本發明涵蓋且揭示於本文中，就如同在本文中逐一地且明確地揭示各個及每個此種子組合。
本文中所論述之出版物僅由於其在本申請案之申請日期之前揭示而得以提供。在本文中不應被視為承認本發明由於先前發明而無權先於此種出版物。此外，所提供之公開日期可能與實際公開日期不同，由此可能需要獨立地加以證實。
本發明提供包含對同源共免疫調節多肽展現降低之結合親和力的免疫調節多肽的T細胞調節多聚體多肽。T細胞調節多聚體多肽適用於調節T細胞之活性及調節個體之免疫反應。

T 細胞調節多聚體多肽
本發明提供一種T細胞調節多聚體多肽(TMMP)，其包含：a)第一多肽；及b)第二多肽，其中該多聚體多肽包含抗原決定基、第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽、第二MHC多肽、一或多個免疫調節多肽及視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架。本發明提供一種TMMP，其中該多聚體多肽為異源二聚體，該異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽包含第一MHC多肽；及b)第二多肽，該第二多肽包含第二MHC多肽，其中該第一多肽或該第二多肽包含抗原決定基；其中該第一多肽及/或該第二多肽包含一或多個可能相同或不同的免疫調節多肽；及視情況存在之Ig Fc多肽或非Ig支架。本發明之TMMP在本文中亦稱為「本發明之多聚體多肽」或「synTac」。
本發明提供一種TMMP，其包含異源二聚體多肽，該異源二聚體多肽包含：a)第一多肽，該第一多肽包含：i)肽抗原決定基；及ii)第一MHC多肽；b)第二多肽，該第二多肽包含第二MHC多肽；及c)至少一個免疫調節多肽，其中該第一多肽及/或該第二多肽包含至少一個(亦即，一或多個)免疫調節多肽。視情況，該第一多肽或該第二多肽包含Ig Fc多肽或非Ig支架。該一或多個免疫調節多肽中之至少一個為對同源共免疫調節多肽展現與相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽。本發明之TMMP中所存在之抗原決定基以至少100 μM (例如，至少10 μM、至少1 μM、至少100 nM、至少10 nM或至少1 nM)之親和力結合至T細胞上之T細胞受體(TCR)。本發明之TMMP結合第一T細胞之親和力比該TMMP結合第二T細胞之親和力高出至少25%，其中該第一T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽及以至少100 μM之親和力結合該抗原決定基之TCR，且其中該第二T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽但不在其表面上表現以至少100 μM (例如，至少10 μM、至少1 μM、至少100 nM、至少10 nM或至少1 nM)之親和力結合該抗原決定基之TCR。
本發明提供一種TMMP，其中該多聚體多肽為：
A) 異源二聚體，該異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽包含第一MHC多肽；及b)第二多肽，該第二多肽包含第二MHC多肽，其中該第一多肽或該第二多肽包含抗原決定基；其中該第一多肽及/或該第二多肽包含一或多個可能相同或不同的免疫調節多肽，且其中該一或多個免疫調節多肽中之至少一個可為野生型免疫調節多肽或野生型免疫調節多肽之變異體，其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代；且其中該第一多肽或該第二多肽視情況包含Ig Fc多肽或非Ig支架；或者
B) 異源二聚體，該異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽包含第一MHC多肽；及b)第二多肽，該第二多肽包含第二MHC多肽，其中該第一多肽或該第二多肽包含抗原決定基；其中該第一多肽及/或該第二多肽包含一或多個可能相同或不同的免疫調節多肽，
其中該一或多個免疫調節多肽中之至少一個可為野生型免疫調節多肽之變異體，其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代，
其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個為對同源共免疫調節多肽展現與相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽，且其中該抗原決定基以至少10-7 M之親和力結合至T細胞上之TCR，使得：i)該TMMP多肽結合第一T細胞之親和力比該TMMP結合第二T細胞之親和力高出至少25%，其中該第一T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽及以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR，且其中該第二T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽但不在其表面表現以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR；及/或ii)當藉由生物層干涉術加以量測時，對照TMMP對同源共免疫調節多肽之結合親和力與該TMMP對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率處於1.5:1至106 :1之範圍內，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽，該TMMP包含該野生型免疫調節多肽之變異體；且其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代；且
其中該第一多肽或該第二多肽視情況包含Ig Fc多肽或非Ig支架；或者
C) 異源二聚體，該異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽自N末端至C末端依序包含：i)抗原決定基；ii)第一MHC多肽；以及b)第二多肽，該第二多肽自N末端至C末端依序包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架，其中該多聚體多肽包含一或多個可能相同或不同的免疫調節結構域，其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個係：A)處於該第一多肽之C末端；B)處於該第二多肽之N末端；C)處於該第二多肽之C末端；或D)處於該第一多肽之C末端以及處於該第二多肽之N末端，且其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個可為野生型免疫調節結構域或野生型免疫調節結構域之變異體，其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代；且
視情況其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個為對同源共免疫調節多肽展現與相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽，且其中該抗原決定基以至少10-7 M之親和力結合至T細胞上之TCR，使得：i)該TMMP結合第一T細胞之親和力比該TMMP結合第二T細胞之親和力高出至少25%，其中該第一T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽及以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR，且其中該第二T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽但不在其表面表現以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR；及/或ii)當藉由生物層干涉術加以量測時，對照TMMP對同源共免疫調節多肽之結合親和力與該TMMP對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率處於1.5:1至106 :1之範圍內，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽，該TMMP包含該野生型免疫調節多肽之變異體；且其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代。
本發明提供一種TMMP，其包含：a)第一多肽，該第一多肽自N末端至C末端依序包含：i)抗原決定基；ii)第一MHC多肽；及b)第二多肽，該第二多肽自N末端至C末端依序包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況存在之Ig Fc多肽或非Ig支架。本發明之TMMP包含一或多個免疫調節多肽，其中該一或多個免疫調節多肽中之至少一個係：A)處於該第一多肽之C末端；B)處於該第二多肽之N末端；C)處於該第二多肽之C末端；或D)處於該第一多肽之C末端以及處於該第二多肽之N末端。該一或多個免疫調節多肽中之至少一個為對同源共免疫調節多肽展現與相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽。本發明之TMMP中所存在之抗原決定基以至少100 μM (例如，至少10 μM、至少1 μM、至少100 nM、至少10 nM或至少1 nM)之親和力結合至T細胞上之T細胞受體(TCR)。本發明之TMMP結合第一T細胞之親和力比該TMMP結合第二T細胞之親和力高出至少25%，其中該第一T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽及以至少100 μM之親和力結合該抗原決定基之TCR，且其中該第二T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽但不在其表面上表現以至少100 μM (例如，至少10 μM、至少1 μM、至少100 nM、至少10 nM或至少1 nM)之親和力結合該抗原決定基之TCR。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之抗原決定基以約10-4 M至約5×10-4 M、約5×10-4 M至約10-5 M、約10-5 M至5×10-5 M、約5×10-5 M至10-6 M、約10-6 M至約5×10-6 M、約5×10-6 M至約10-7 M、約10-7 M至約5×10-7 M、約5×10-7 M至約10-8 M或約10-8 M至約10-9 M之親和力結合至T細胞上之TCR。以另一方式表述，在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之抗原決定基以約1 nM至約5 nM、約5 nM至約10 nM、約10 nM至約50 nM、約50 nM至約100 nM、約0.1 μM至約0.5 μM、約0.5 μM至約1 μM、約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之親和力結合至T細胞上之TCR。
本發明之TMMP中所存在之免疫調節多肽結合其同源共免疫調節多肽之親和力比相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力低至少10%、低至少15%、低至少20%、低至少25%、低至少30%、低至少35%、低至少40%、低至少45%、低至少50%、低至少55%、低至少60%、低至少65%、低至少70%、低至少75%、低至少80%、低至少85%、低至少90%、低至少95%或低至少95%。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽具有1 nM至100 nM或100 nM至100 μM之結合親和力。舉例而言，在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽具有約100 nM至150 nM、約150 nM至約200 nM、約200 nM至約250 nM、約250 nM至約300 nM、約300 nM至約350 nM、約350 nM至約400 nM、約400 nM至約500 nM、約500 nM至約600 nM、約600 nM至約700 nM、約700 nM至約800 nM、約800 nM至約900 nM、約900 nM至約1 μM、至約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約15 μM、約15 μM至約20 μM、約20 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之結合親和力。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽具有約1 nM至約5 nM、約5 nM至約10 nM、約10 nM至約50 nM、約50 nM至約100 nM之結合親和力。
免疫調節多肽對其同源共免疫調節多肽之降低之親和力與抗原決定基對TCR之親和力的組合提供本發明之TMMP之增強之選擇性。舉例而言，相較於與呈現以下各項之第二T細胞的結合：i)對除TMMP中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基具特異性的TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽，本發明之TMMP選擇性地結合至呈現以下兩者之第一T細胞：i)對TMMP中所存在之抗原決定基具特異性的TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的Co-免疫調節多肽。舉例而言，本發明之TMMP結合第一T細胞之親和力比其結合第二T細胞之親和力高出至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少2倍、至少2.5倍、至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少50倍、至少100倍或超過100倍。
在一些情況下，本發明之T細胞調節多肽在投與有需要之個體時誘導抗原決定基特異性T細胞反應及非抗原決定基特異性T細胞反應。換言之，在一些情況下，本發明之T細胞調節多肽在投與有需要之個體時藉由調節呈現以下兩者之第一T細胞的活性而誘導抗原決定基特異性T細胞反應：i)對TMMP中所存在之抗原決定基具特異性的TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽；且藉由調節呈現以下各項之第二T細胞的活性來誘導非抗原決定基特異性T細胞反應：i)對除TMMP中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基具特異性的TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽。抗原決定基特異性T細胞反應與非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1或至少100:1。抗原決定基特異性T細胞反應與抗原決定基非特異性T細胞反應之比率為約2:1至約5:1、約5:1至約10:1、約10:1至約15:1、約15:1至約20:1、約20:1至約25:1、約25:1至約50:1或約50:1至約100:1，或超過100:1。「調節」T細胞之「活性」可包括以下一或多項：i)活化細胞毒性(例如CD8+ ) T細胞；ii)誘導細胞毒性(例如CD8+ ) T細胞之細胞毒性活性；iii)誘導細胞毒性(例如CD8+ ) T細胞之細胞毒素(例如，穿孔素；顆粒酶；顆粒溶素)之產生及釋放；iv)抑制自體反應性T細胞之活性；及其類似操作。
免疫調節多肽對其同源共免疫調節多肽之降低之親和力與抗原決定基對TCR之親和力的組合提供本發明之TMMP之增強之選擇性。因而，舉例而言，本發明之TMMP相較於其結合至呈現以下之第二T細胞之親合力：i)對除TMMP中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基具特異性之TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽，以較高親合力結合至呈現以下兩者之第一T細胞：i)對TMMP中所存在之抗原決定基具特異性之TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽。
可藉由生物層干涉術(BLI)使用經純化之免疫調節多肽及經純化之同源共免疫調節多肽來測定免疫調節多肽與其同源共免疫調節多肽之間的結合親和力。可藉由BLI使用經純化之TMMP及同源共免疫調節多肽來測定TMMP與其同源共免疫調節多肽之間的結合親和力。BLI方法對熟習此項技術者為熟知的。參見例如Lad等人 (2015)J. Biomol. Screen . 20(4):498-507；以及Shah及Duncan (2014)J. Vis. Exp. 18:e51383。
可使用Octet RED 96 (Pal FortéBio)儀器或類似儀器如下進行BLI分析。將TMMP (例如本發明之TMMP或對照TMMP (其中對照TMMP包含野生型免疫調節多肽))固定至不溶性載體(「生物感測器」)上。經固定之TMMP為「標靶」。可藉由將捕獲抗體固定至不溶性載體上來實現固定，其中該捕獲抗體固定該TMMP。舉例而言，可藉由將抗Fc (例如，抗人類IgG Fc)抗體固定至不溶性載體上來實現固定，其中經固定抗Fc抗體結合至並且固定該TMMP (其中該TMMP包含IgFc多肽)。將共免疫調節多肽以若干不同的濃度施加至經固定之TMMP，並且記錄儀器之反應。在包含25 mM HEPES pH 6.8、5%聚(乙二醇) 6000、50 mM KCl、0.1%牛血清白蛋白及0.02% Tween 20非離子清潔劑之液體介質中進行分析。在30℃下進行共免疫調節多肽與經固定之TMMP之結合。作為結合親和力之陽性對照，可使用抗I類MHC單株抗體。舉例而言，可使用抗I類HLA單株抗體W6/32 (美國典型菌種保藏中心第HB-95號；Parham等人, (1979)J. Immunol . 123:342)，其具有7 nM之KD 。可使用抗I類MHC單株抗體之連續稀釋來產生標準曲線。共免疫調節多肽或抗I類MHC mAb為「分析物」。BLI分析自兩個表面反射之白光的干涉圖案：i)經固定之多肽(「標靶」)；及ii)內部參考層。與生物感測器尖端結合之分子(「分析物」；例如，共免疫調節多肽；抗HLA抗體)的數目的變化引起干涉圖案變化；可即時量測此干涉圖案變化。描述標靶/分析物相互作用之親和力的兩個動力學術語為締合常數(k a )及解離常數(k d )。此兩個術語之比率(k d /a )得到親和力常數KD 。
在多孔平板中進行BLI分析。為了進行該分析，定義平板佈局，定義分析步驟，且在Octet Data Acquisition軟體中給生物感測器賦值。使生物感測器組合件水化。使經水化之生物感測器組合件及分析板在Octet儀器上平衡10分鐘。一旦獲取資料，便將所獲取之資料加載至Octet Data Analysis軟體中。在處理窗口中藉由規定參考扣除、y軸比對、步驟間修正及Savitzky-Golay過濾之方法來處理資料。在分析窗口中藉由規定欲分析之步驟(締合及解離)、選擇曲線擬合模型(1:1)、擬合方法(全域)及相關窗口(以秒計)來分析資料。評估擬合品質。各資料跡線(分析物濃度)之KD 值若在3倍範圍內則可取平均值。KD 誤差值應在親和力常數值之一個數量級內；R2 值應在0.95以上。參見例如Abdiche等人(2008)J. Anal. Biochem. 377:209。
除非本文中另外陳述，否則使用如以上所描述之BLI來測定本發明之TMMP對同源共免疫調節多肽之親和力或對照TMMP (其中對照TMMP包含野生型免疫調節多肽)對同源共免疫調節多肽之親和力。
在一些情況下，當藉由BLI (如以上所描述)加以量測時，i)對照TMMP (其中該對照包含野生型免疫調節多肽)對同源共免疫調節多肽之結合親和力與ii)包含野生型免疫調節多肽之變異體的本發明TMMP對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率為至少1.5:1、至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少102 :1、至少5×102 :1、至少103 :1、至少5×103 :1、至少104 :1、至少105 :1或至少106 :1。在一些情況下，當藉由BLI加以量測時，i)對照TMMP (其中該對照包含野生型免疫調節多肽)對同源共免疫調節多肽之結合親和力與ii)包含野生型免疫調節多肽之變異體的本發明TMMP對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率處於1.5:1至106 :1，例如1.5:1至10:1、10:1至50:1、50:1至102 :1、102 :1至103 :1、103 :1至104 :1、104 :1至105 :1或105 :1至106 :1之範圍內。
作為一個實例，在對照TMMP包含野生型IL-2多肽時，且在本發明之TMMP包含變異IL-2多肽(相對於野生型IL-2多肽之胺基酸序列包含1至10個胺基酸取代)作為免疫調節多肽時，當藉由BLI加以量測時，i)本發明之TMMP之結合親和力與ii)對照TMMP對IL-2受體(亦即，同源共免疫調節多肽)之結合親和力的比率為至少1.5:1、至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少102 :1、至少5×102 :1、至少103 :1、至少5×103 :1、至少104 :1、至少105 :1或至少106 :1。在一些情況下，在對照TMMP包含野生型IL-2多肽時，且在本發明之TMMP包含變異IL-2多肽(相對於野生型IL-2多肽之胺基酸序列包含1至10個胺基酸取代)作為免疫調節多肽時，當藉由BLI加以量測時，i)本發明之TMMP之結合親和力與ii)對照TMMP對IL-2受體(亦即，同源共免疫調節多肽)之結合親和力的比率處於1.5:1至106 :1，例如1.5:1至10:1、10:1至50:1、50:1至102 :1、102 :1至103 :1、103 :1至104 :1、104 :1至105 :1或105 :1至106 :1之範圍內。
作為另一實例，在對照TMMP包含野生型PD-L1多肽時，且在本發明之TMMP包含變異PD-L1多肽(相對於野生型PD-L1多肽之胺基酸序列包含1至10個胺基酸取代)作為免疫調節多肽時，當藉由BLI加以量測時，i)本發明之TMMP之結合親和力與ii)對照TMMP對PD-1(亦即，同源共免疫調節多肽)之結合親和力的比率為至少1.5:1、至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少102 :1、至少5×102 :1、至少103 :1、至少5×103 :1、至少104 :1、至少105 :1或至少106 :1。
作為另一實例，在對照TMMP包含野生型CD80多肽時，且在本發明之TMMP包含變異CD80多肽(相對於野生型CD80多肽之胺基酸序列包含1至10個胺基酸取代)作為免疫調節多肽時，當藉由BLI加以量測時，i)本發明之TMMP之結合親和力與ii)對照TMMP對CTLA4 (亦即，同源共免疫調節多肽)之結合親和力的比率為至少1.5:1、至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少102 :1、至少5×102 :1、至少103 :1、至少5×103 :1、至少104 :1、至少105 :1或至少106 :1。
作為另一實例，在對照TMMP包含野生型CD80多肽時，且在本發明之TMMP包含變異CD80多肽(相對於野生型CD80多肽之胺基酸序列包含1至10個胺基酸取代)作為免疫調節多肽時，當藉由BLI加以量測時，i)本發明之TMMP之結合親和力與ii)對照TMMP對CD28 (亦即，同源共免疫調節多肽)之結合親和力的比率為至少1.5:1、至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少102 :1、至少5×102 :1、至少103 :1、至少5×103 :1、至少104 :1、至少105 :1或至少106 :1。
作為另一實例，在對照TMMP包含野生型4-1BBL多肽時，且在本發明之TMMP包含變異4-1BBL多肽(相對於野生型4-1BBL多肽之胺基酸序列包含1至10個胺基酸取代)作為免疫調節多肽時，當藉由BLI加以量測時，i)本發明之TMMP之結合親和力與ii)對照TMMP對4-1BB (亦即，同源共免疫調節多肽)之結合親和力的比率為至少1.5:1、至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少102 :1、至少5×102 :1、至少103 :1、至少5×103 :1、至少104 :1、至少105 :1或至少106 :1。
作為另一實例，在對照TMMP包含野生型CD86多肽時，且在本發明之TMMP包含變異CD86多肽(相對於野生型CD86多肽之胺基酸序列包含1至10個胺基酸取代)作為免疫調節多肽時，當藉由BLI加以量測時，i)本發明之TMMP之結合親和力與ii)對照TMMP對CD28 (亦即，同源共免疫調節多肽)之結合親和力的比率為至少1.5:1、至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少102 :1、至少5×102 :1、至少103 :1、至少5×103 :1、至少104 :1、至少105 :1或至少106 :1。
可用以下方式量測本發明之TMMP對靶T細胞之結合親和力：A)使本發明之TMMP與在其表面上表現以下各物之靶T細胞接觸：i)結合親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合該抗原決定基之T細胞受體，其中該TMMP包含抗原決定基標籤，以使該TMMP結合至該靶T細胞；B)使靶T細胞結合之TMMP與結合至該抗原決定基標籤之經螢光標記之結合劑(例如，經螢光標記之抗體)接觸，從而產生TMMP/靶T細胞/結合劑複合體；C)使用流式細胞術來量測該TMMP/靶T細胞/結合劑複合體之平均螢光強度(MFI)。抗原決定基標籤可為例如FLAG標籤、血球凝集素標籤、c-myc標籤、聚(組胺酸)標籤等。在TMMP庫成員之濃度範圍內量測之MFI提供親和力之量度。在TMMP庫成員之濃度範圍內量測之MFI提供TMMP之半最大有效濃度(EC50 )。在一些情況下，本發明之TMMP對靶T細胞之EC50 處於nM範圍內；且該TMMP對對照T細胞(其中對照T細胞在其表面上表現：i)結合親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)不結合至該TMMP中所存在之抗原決定基的T細胞受體)之EC50 處於μM範圍內。在一些情況下，本發明之TMMP對對照T細胞之EC50 與該TMMP對靶T細胞之EC50 的比率為至少1.5:1、至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1、至少100:1、至少500:1、至少102 :1、至少5×102 :1、至少103 :1、至少5×103 :1、至少104 :1、至少105 :1或至少106 :1。本發明之TMMP對對照T細胞之EC50 與該TMMP對靶T細胞之EC50 的比率為TMMP之選擇性的表現。
在一些情況下，當如前一段中所描述進行量測時，相較於TMMP庫成員與包含以下之對照T細胞的結合：i)結合親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合至除TMMP庫成員中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基的T細胞受體，本發明之TMMP對靶T細胞展現選擇性結合。

二聚之多聚T細胞調節多肽
本發明之多聚體T細胞調節多肽可二聚；亦即，本發明提供一種包含本發明之多聚體T細胞調節多肽之二聚體的多聚體多肽。因而，本發明提供一種多聚體T細胞調節多肽，其包含：A)第一異源二聚體，該第一異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽包含：i)肽抗原決定基；及ii)第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；以及b)第二多肽，該第二多肽包含i)第二MHC多肽，其中該第一異源二聚體包含一或多個免疫調節多肽；及B)第二異源二聚體，該第二異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽包含：i)肽抗原決定基；及ii)第一MHC多肽；以及b)第二多肽，該第二多肽包含i)第二MHC多肽，其中該第二異源二聚體包含一或多個免疫調節多肽，且其中該第一異源二聚體及該第二異源二聚體彼此共價連接。在一些情況下，該兩個多聚體T細胞調節多肽在胺基酸序列方面彼此相同。在一些情況下，該第一異源二聚體及該第二異源二聚體經由該第一異源二聚體之第二多肽之C末端區域及該第二異源二聚體之第二多肽之C末端區域彼此共價連接。在一些情況下，該第一異源二聚體及該第二異源二聚體經由該第一異源二聚體之第二多肽之C末端胺基酸及該第二異源二聚體之第二多肽之C末端區域彼此共價連接；舉例而言，在一些情況下，該第一異源二聚體之第二多肽之C末端胺基酸及該第二異源二聚體之第二多肽之C末端區域直接或經由連接子彼此連接。該連接子可為肽連接子。該肽連接子可具有1個胺基酸至200個胺基酸之長度(例如，1個胺基酸(aa)至5 aa、5 aa至10 aa、10 aa至25 aa、25 aa至50 aa、50 aa至100 aa、100 aa至150 aa或150 aa至200 aa)。在一些情況下，該第一異源二聚體之肽抗原決定基及該第二異源二聚體之肽抗原決定基包含相同的胺基酸序列。在一些情況下，該第一異源二聚體及該第二異源二聚體之第一MHC多肽為I類MHC β2微球蛋白，且其中該第一異源二聚體及該第二異源二聚體之第二MHC多肽為I類MHC重鏈。在一些情況下，該第一異源二聚體之免疫調節多肽及該第二異源二聚體之免疫調節多肽包含相同的胺基酸序列。在一些情況下，該第一異源二聚體之免疫調節多肽及該第二異源二聚體之免疫調節多肽為與相應親本野生型免疫調節多肽相比包含1至10個胺基酸取代之變異免疫調節多肽，且其中該1至10個胺基酸取代引起該變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力降低。在一些情況下，該第一異源二聚體之免疫調節多肽及該第二異源二聚體之免疫調節多肽皆選自由以下各項組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1(CD339)、TGFβ、CD70及ICAM。以下描述適合MHC多肽、免疫調節多肽及肽抗原決定基之實例。

MHC 多肽
如以上所指出，多聚體多肽包括MHC多肽。出於本發明之目的，術語「主要組織相容性複合體(MHC)多肽」意欲包括不同物種之MHC多肽，包括人類MHC (亦稱為人類白血球抗原(HLA))多肽、囓齒動物(例如，小鼠、大鼠等) MHC多肽及其他哺乳動物物種(例如，兔類動物、非人類靈長類動物、犬科動物、貓科動物、有蹄類動物(例如，馬、牛、綿羊、山羊等)及其類似物種之MHC多肽。術語「MHC多肽」意欲包括I類MHC多肽(例如，β-2微球蛋白及I類MHC重鏈)及II類MHC多肽(例如，II類MHC α多肽及II類MHC β多肽)。
如以上所指出，在多聚體多肽之一些實施例中，該第一MHC多肽及該第二MHC多肽為I類MHC多肽；例如，在一些情況下，該第一MHC多肽為I類MHC β2微球蛋白(β2M)多肽，且該第二MHC多肽為I類MHC重鏈(H鏈)。在其他情況下，該第一MHC多肽及該第二MHC多肽為II類MHC多肽；例如，在一些情況下，該第一MHC多肽為II類MHC α鏈多肽，且該第二MHC多肽為II類MHC β鏈多肽。在其他情況下，該第一多肽為II類MHC β鏈多肽，且該第二MHC多肽為II類MHC α鏈多肽。
在一些情況下，多聚體多肽之MHC多肽為人類MHC多肽，其中人類MHC多肽亦稱為「人類白血球抗原」(「HLA」)多肽。在一些情況下，多聚體多肽之MHC多肽為I類HLA多肽，例如β2微球蛋白多肽或I類HLA重鏈多肽。I類HLA重鏈多肽包括HLA-A重鏈多肽、HLA-B重鏈多肽、HLA-C重鏈多肽、HLA-E重鏈多肽、HLA-F重鏈多肽及HLA-G重鏈多肽。在一些情況下，多聚體多肽之MHC多肽為II類HLA多肽，例如，II類HLA α鏈或II類HLA β鏈。II類MHC多肽包括II類MHC DP α及β多肽、DM α及β多肽、DOA α及β多肽、DOB α及β多肽、DQ α及β多肽以及DR α及β多肽。
圖 8 提供十一個無前導序列或跨膜結構域之成熟I類MHC重鏈肽序列之比對。所比對之序列為人類HLA-A、HLA-B及HLA-C、小鼠H2K蛋白序列、三個HLA-A變異體(變異體1、變異體2C及變異體2CP)及3個人類HLA-A變異體(HLA-A*1101、HLA-A*2402及HLA-A*3303)。該比對中指示可插入半胱胺酸殘基以形成二硫鍵從而在不存在已結合之抗原決定基肽的情況下使MHC-β2M複合物穩定之位置(成熟蛋白質之84及139)。該比對中亦顯示(該成熟多肽之)可由半胱胺酸殘基取代，從而可與β2M形成鏈內二硫鍵之位置236(例如，在aa 12處)。箭頭呈現於彼等位置中之每一者的上方並且將該等殘基加粗。該比對中所示之第七個HLA-A序列(變異體2c)顯示在位置84、139及236處經C殘基取代之變異體2之序列。殘基84、139及236兩側之方框顯示彼六組五個殘基之任一側上可藉由獨立地選自(i)任何天然存在之胺基酸或(ii)除脯胺酸或甘胺酸以外之任何天然存在之胺基酸的1至5個胺基酸加以置換的諸組五個胺基酸，表示為aac1 (用於「胺基酸聚簇1」)、aac2 (用於「胺基酸聚簇2」)、aac3 (用於「胺基酸聚簇3」)、aac4 (用於「胺基酸聚簇4」)、aac5 (用於「胺基酸聚簇5」)及aac6 (用於「胺基酸聚簇6」)。
在一些情況下：i) aa1 (胺基酸聚簇1)可為胺基酸序列GTLRG (SEQ ID NO:219)或者有一或兩個胺基酸缺失或經其他天然存在之胺基酸取代(例如，L置換為I、V、A或F)之該序列；ii) aa2 (胺基酸聚簇2)可為胺基酸序列YNQSE (SEQ ID NO:220)或者有一或兩個胺基酸缺失或經其他天然存在之胺基酸取代(例如，N置換為Q，Q置換為N，及/或E置換為D)之該序列；iii) aa3 (胺基酸聚簇3)可為胺基酸序列TAADM (SEQ ID NO:221)或者有一或兩個胺基酸缺失或經其他天然存在之胺基酸取代(例如，T置換為S，A置換為G，D置換為E，及/或M置換為L、V或I)之該序列；iv) aa4 (胺基酸聚簇4)可為胺基酸序列AQTTK (SEQ ID NO:222)或者有一或兩個胺基酸缺失或經其他天然存在之胺基酸取代(例如，A置換為G，Q置換為N，或T置換為S，及或K置換為R或Q)之該序列；v) aa5 (胺基酸聚簇5)可為胺基酸序列VETRP (SEQ ID NO:223)或者有一或兩個胺基酸缺失或經其他天然存在之胺基酸取代(例如，V置換為I或L，E置換為D，T置換為S，及/或R置換為K)之該序列；及/或vi) aa6 (胺基酸聚簇6)可為胺基酸序列GDGTF (SEQ ID NO:224)或者有一或兩個胺基酸缺失或經其他天然存在之胺基酸取代(例如，D置換為E，T置換為S，或F置換為L、W或Y)之該序列。
表1提供可併入本發明之TMMP中之HLA重鏈之實例。


HLA-A
舉例而言，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與以下人類HLA-A重鏈胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:53)。

HLA-A (Y84A; A236C)
在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含Y84A及A236C取代。舉例而言，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含與以下人類HLA-A重鏈(Y84A; A236C)胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRG A YNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP C GDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:225)，其中胺基酸84為Ala且胺基酸236為Cys。在一些情況下，Cys-236與包含R12C取代之變異β2M多肽之Cys-12形成鏈間二硫鍵。

HLA-A (Y84C; A139C)
在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含Y84C及A139C取代。舉例而言，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含與以下人類HLA-A重鏈(Y84C; A139C)胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRG C YNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADM C AQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:226)，其中胺基酸84為Cys且胺基酸139為Cys。在一些情況下，Cys-84與Cys-139形成鏈內二硫鍵。

HLA-A A11 (HLA-A*1101)
作為一個非限制性實例，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與以下人類HLA-A A11重鏈胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDQETRNVKAQSQTDRVDLGTLRGYYNQSEDGSHTIQIMYGCDVGPDGRFLRGYRQDAYDGKDYIALNEDLRSWTAADMAAQITKRKWEAAHAAEQQRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDPPKTHMTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWE (SEQ ID NO:227)。此種I類MHC重鏈在亞洲群體，包括具有亞洲血統之個體群體中可能為顯性的。

HLA-A A11 (Y84A; A236C)
作為一個非限制性實例，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽為包含Y84A及A236C取代之HLA-A A11等位基因。舉例而言，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含與以下人類HLA-A A11重鏈(Y84A; A236C)胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDQETRNVKAQSQTDRVDLGTLRG A YNQSEDGSHTIQIMYGCDVGPDGRFLRGYRQDAYDGKDYIALNEDLRSWTAADMAAQITKRKWEAAHAAEQQRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDPPKTHMTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP C GDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWE (SEQ ID NO:228)，其中胺基酸84為Ala且胺基酸236為Cys。在一些情況下，Cys-236與包含R12C取代之變異β2M多肽之Cys-12形成鏈間二硫鍵。

HLA-A24 (HLA-A*2402)
作為一個非限制性實例，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與以下人類HLA-A24重鏈胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
GSHSMRYFSTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDEETGKVKAHSQTDRENLRIALRYYNQSEAGSHTLQMMFGCDVGSDGRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQITKRKWEAAHVAEQQRAYLEGTCVDGLRRYLENGKETLQRTDPPKTHMTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQPTVPIVGIIAGLVLLGAVITGAVVAAVMWRRNSSDRKGGSYSQAASSDSAQGSDVSLTACKV (SEQ ID NO:240)。此種I類MHC重鏈在亞洲群體，包括具有亞洲血統之個體群體中可能為顯性的。在一些情況下，胺基酸84為Ala。在一些情況下，胺基酸84為Cys。在一些情況下，胺基酸236為Cys。在一些情況下，胺基酸84為Ala且胺基酸236為Cys。在一些情況下，胺基酸84為Cys且胺基酸236為Cys。

HLA-A33 (HLA-A*3303)
作為一個非限制性實例，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與以下人類HLA-A33重鏈胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
GSHSMRYFTTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDRNTRNVKAHSQIDRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTIQMMYGCDVGSDGRFLRGYQQDAYDGKDYIALNEDLRSWTAADMAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDPPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWASVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQPTIPIVGIIAGLVLFGAVFAGAVVAAVRWRRKSSDRKGGSYSQAASSDSAQGSDMSLTACKV (SEQ ID NO:241)。此種I類MHC重鏈在亞洲群體，包括具有亞洲血統之個體群體中可能為顯性的。在一些情況下，胺基酸84為Ala。在一些情況下，胺基酸84為Cys。在一些情況下，胺基酸236為Cys。在一些情況下，胺基酸84為Ala且胺基酸236為Cys。在一些情況下，胺基酸84為Cys且胺基酸236為Cys。

HLA-B
作為另一實例，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與以下人類HLA-B重鏈胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRNTQIYKAQAQTDRESLRNLRGYYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHDQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQRRAYLEGECVEWLRRYLENGKDKLERADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:229)。

HLA-B (Y84A; A236C)
作為一個非限制性實例，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽為包含Y84A及A236C取代之HLA-B 多肽。舉例而言，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含與以下人類HLA-B重鏈(Y84A; A236C)胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRNTQIYKAQAQTDRESLRNLRG A YNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHDQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQRRAYLEGECVEWLRRYLENGKDKLERADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP C GDRTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:230)，其中胺基酸84為Ala且胺基酸236為Cys。在一些情況下，Cys-236與包含R12C取代之變異β2M多肽之Cys-12形成鏈間二硫鍵。

HLA-B (Y84C; A139C)
在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含Y84C及A139C取代。舉例而言，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含與以下人類HLA-B重鏈(Y84C; A139C)胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
GSHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRNTQIYKAQAQTDRESLRNLRG C YNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHDQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAADT C AQITQRKWEAAREAEQRRAYLEGECVEWLRRYLENGKDKLERADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:231)，其中胺基酸84為Cys且胺基酸139為Cys。在一些情況下，Cys-84與Cys-139形成鏈內二硫鍵。

HLA-C
作為另一實例，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與以下人類HLA-C重鏈胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：CSHSMRYFDTAVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPRGEPRAPWVEQEGPEYWDRETQNYKRQAQADRVSLRNLRGYYNQSEDGSHTLQRMYGCDLGPDGRLLRGYDQSAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKLEAARAAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRAEPPKTHVTHHPLSDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHMQHEGLQEPLTLSWEP (SEQ ID NO:232)。

HLA-C (Y84A; A236C)
作為一個非限制性實例，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽為包含Y84A及A236C取代之HLA-C多肽。舉例而言，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含與以下人類HLA-C重鏈(Y84A; A236C)胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：CSHSMRYFDTAVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPRGEPRAPWVEQEGPEYWDRETQNYKRQAQADRVSLRNLRG A YNQSEDGSHTLQRMYGCDLGPDGRLLRGYDQSAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKLEAARAAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRAEPPKTHVTHHPLSDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP C GDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHMQHEGLQEPLTLSWEP (SEQ ID NO:233)，其中胺基酸84為Ala且胺基酸236為Cys。在一些情況下，Cys-236與包含R12C取代之變異β2M多肽之Cys-12形成鏈間二硫鍵。

HLA-C (Y84C; A139C)
在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含Y84C及A139C取代。舉例而言，在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含與以下人類HLA-C重鏈(Y84C; A139C)胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
CSHSMRYFDTAVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPRGEPRAPWVEQEGPEYWDRETQNYKRQAQADRVSLRNLRG C YNQSEDGSHTLQRMYGCDLGPDGRLLRGYDQSAYDGKDYIALNEDLRSWTAADT C AQITQRKLEAARAAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRAEPPKTHVTHHPLSDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHMQHEGLQEPLTLSWEP (SEQ ID NO:234)，其中胺基酸84為Cys且胺基酸139為Cys。在一些情況下，Cys-84與Cys-139形成鏈內二硫鍵。
多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與圖5A至圖5K中所描繪之胺基酸序列之一具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。
舉例而言，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與圖3A中所描繪之人類HLA-A重鏈多肽之胺基酸序列之胺基酸25-365具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。
作為另一實例，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與圖3B中所描繪之人類HLA-B重鏈多肽之胺基酸序列之胺基酸25-362具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。
作為另一實例，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與圖3C中所描繪之人類HLA-C重鏈多肽之胺基酸序列之胺基酸25-362具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。
作為另一實例，多聚體多肽之I類MHC重鏈多肽可包含與以下胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列：
GPHSLRYFVTAVSRPGLGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDADNPRFEPRAPWMEQEGPEYWEEQTQRAKSDEQWFRVSLRTAQRYYNQSKGGSHTFQRMFGCDVGSDWRLLRGYQQFAYDGRDYIALNEDLKTWTAADTAALITRRKWEQAGDAEYYRAYLEGECVEWLRRYLELGNETLLRTDSPKAHVTYHPRSQVDVTLRCWALGFYPADITLTWQLNGEDLTQDMELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPLGKEQNYTCHVHHKGLPEPLTLRW (SEQ ID NO:54)。
多聚體多肽之β2微球蛋白(β2M)多肽可為人類β2M多肽、非人類靈長類動物β2M多肽、鼠類β2M多肽及其類似物。在一些情況下，β2M多肽包含與圖4中所描繪之β2M胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。在一些情況下，β2M多肽包含與圖4中所描繪之β2M胺基酸序列之胺基酸21至119具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。
在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含以下胺基酸序列： GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDL(aa1){C}(aa2)AGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSW(aa3){C}(aa4)HKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:238)，其中指示為{C}之半胱胺酸殘基形成處於α1螺旋與α2-1螺旋之間的二硫鍵。在以上序列中，「aa1」為「胺基酸聚簇1」；「aa2」為「胺基酸聚簇2」；「aa3」為「胺基酸聚簇3」；且「aa4」為「胺基酸聚簇4」；參見例如圖8。「胺基酸聚簇」為如圖8中所描繪之5個連續胺基酸之聚簇。
在一些情況下，適合之β2M多肽包含以下胺基酸序列：
IQRTPKIQVY SCHPAENGKS NFLNCYVSGF
HPSDIEVDLLKNGERIEKVE HSDLSFSKDW SFYLLYYTEF TPTEKDEYAC RVNHVTLSQP KIVKWDRDM (SEQ ID NO:56)；且該I類HLA重鏈多肽包含以下胺基酸序列：
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDL(aa1){C}(aa2)AGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSW(aa3){C}(aa4))HKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTEL(aa5)(C)(aa6)QKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:239)，其中指示為{C}之半胱胺酸殘基形成處於α1螺旋與α2-1螺旋之間的二硫鍵，且該(C)殘基與處於位置12處之β2M多肽半胱胺酸形成二硫鍵。在以上序列中，「aa1」為「胺基酸聚簇1」；「aa2」為「胺基酸聚簇2」；「aa3」為「胺基酸聚簇3」；「aa4」為「胺基酸聚簇4」；「aa5」為「胺基酸聚簇5」；且「aa6」為「胺基酸聚簇6」；參見例如圖8。aa1、aa2、aa3、aa4、aa5及aa6在每次出現時為且獨立地選擇為1至5個胺基酸殘基，其中該等胺基酸殘基係i)獨立地選自任何天然存在之(例如，編碼)胺基酸或ii)除脯胺酸或甘胺酸以外之任何天然存在之胺基酸。
在一些情況下，MHC多肽相對於參考MHC多肽包含單一胺基酸取代(其中參考MHC多肽可為野生型MHC多肽)，其中該單一胺基酸取代以半胱胺酸(Cys)殘基取代胺基酸。此種半胱胺酸殘基當存在於本發明之多聚體多肽之第一多肽之MHC多肽中時可與本發明之多聚體多肽之第二多肽鏈中所存在之半胱胺酸殘基形成二硫鍵。
在一些情況下，多聚體多肽之第一多肽中之第一MHC多肽及/或多聚體多肽之第二多肽中之第二MHC多肽包括以半胱胺酸取代胺基酸之胺基酸取代，其中第一MHC多肽中之經取代之半胱胺酸與第二MHC多肽中之半胱胺酸形成二硫鍵，其中第一MHC多肽中之半胱胺酸與第二MHC多肽中之經取代之半胱胺酸形成二硫鍵，或其中第一MHC多肽中之經取代之半胱胺酸與第二MHC多肽中之經取代之半胱胺酸形成二硫鍵。
舉例而言，在一些情況下，HLA β2微球蛋白及I類HLA重鏈中之以下殘基配對之一經半胱胺酸取代(其中殘基編號為成熟多肽之彼等殘基編號)：1) β2M殘基12、I類HLA重鏈殘基236；2) β2M殘基12、I類HLA重鏈殘基237；3) β2M殘基8、I類HLA重鏈殘基234；4) β2M殘基10、I類HLA重鏈殘基235；5) β2M殘基24、I類HLA重鏈殘基236；6) β2M殘基28、I類HLA重鏈殘基232；7) β2M殘基98、I類HLA重鏈殘基192；8) β2M殘基99、I類HLA重鏈殘基234；9) β2M殘基3、I類HLA重鏈殘基120；10) β2M殘基31、I類HLA重鏈殘基96；11) β2M殘基53、I類HLA重鏈殘基35；12) β2M殘基60、I類HLA重鏈殘基96；13) β2M殘基60、I類HLA重鏈殘基122；14) β2M殘基63、I類HLA重鏈殘基27；15) β2M殘基Arg3、I類HLA重鏈殘基Gly120；16) β2M殘基His31、I類HLA重鏈殘基Gln96；17) β2M殘基Asp53、I類HLA重鏈殘基Arg35；18) β2M殘基Trp60、I類HLA重鏈殘基Gln96；19) β2M殘基Trp60、I類HLA重鏈殘基Asp122；20) β2M殘基Tyr63、I類HLA重鏈殘基Tyr27；21) β2M殘基Lys6、I類HLA重鏈殘基Glu232；22) β2M殘基Gln8、I類HLA重鏈殘基Arg234；23) β2M殘基Tyr10、I類HLA重鏈殘基Pro235；24) β2M殘基Ser11、I類HLA重鏈殘基Gln242；25) β2M殘基Asn24、I類HLA重鏈殘基Ala236；26) β2M殘基Ser28、I類HLA重鏈殘基Glu232；27) β2M殘基Asp98、I類HLA重鏈殘基His192；及28) β2M殘基Met99、I類HLA重鏈殘基Arg234。I類MHC/HLA重鏈之胺基酸編號參考無信號肽之成熟I類MHC/HLA重鏈。舉例而言，在圖3A中所描繪之包括信號肽之胺基酸序列中，Gly120為Gly144；Gln96為Gln120；等等。在一些情況下，β2M多肽包含R12C取代，且I類HLA重鏈包含A236C取代；在此類情況下，二硫鍵形成在β2M多肽之Cys-12與I類HLA重鏈之Cys-236之間。舉例而言，在一些情況下，成熟HLA-A胺基酸序列之殘基236 (亦即，圖3A中所描繪之胺基酸序列之殘基260)經Cys取代。在一些情況下，成熟HLA-B胺基酸序列之殘基236 (亦即，圖3B中所描繪之胺基酸序列之殘基260)經Cys取代。在一些情況下，成熟HLA-C胺基酸序列之殘基236 (亦即，圖3C中所描繪之胺基酸序列之殘基260)經Cys取代。在一些情況下，圖4中所描繪之胺基酸序列之殘基32 (對應於成熟β2M之Arg-12)經Cys取代。
在一些情況下，β2M多肽包含以下胺基酸序列：IQRTPKIQVY S R HPAENGKS NFLNCYVSGF
HPSDIEVDLLKNGERIEKVE HSDLSFSKDW SFYLLYYTEF TPTEKDEYAC RVNHVTLSQP KIVKWDRDM (SEQ ID NO:55). IN SOME CASES, A Β2M POLYPEPTIDE COMPRISES THE AMINO ACID SEQUENCE: IQRTPKIQVY S C HPAENGKS NFLNCYVSGF HPSDIEVDLLKNGERIEKVE HSDLSFSKDW SFYLLYYTEF TPTEKDEYAC RVNHVTLSQP KIVKWDRDM (SEQ ID NO:56)。
在一些情況下，I類HLA重鏈多肽包含以下胺基酸序列：
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP A GDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:53)。
在一些情況下，I類HLA重鏈多肽包含以下胺基酸序列：
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP C GDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:57)。
在一些情況下，I類HLA重鏈多肽包含以下胺基酸序列：
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRG A YNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP C GDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWE (SEQ ID NO:58)。
在一些情況下，該β2M多肽包含以下胺基酸序列：
IQRTPKIQVY S C HPAENGKS NFLNCYVSGF
HPSDIEVDLLKNGERIEKVE HSDLSFSKDW SFYLLYYTEF
TPTEKDEYAC RVNHVTLSQP KIVKWDRDM (SEQ ID NO:56)；且本發明之多聚體多肽之I類HLA重鏈多肽包含以下胺基酸序列：
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRP C GDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP (SEQ ID NO:57)，其中該多聚體多肽中加下劃線且呈粗體形式之Cys殘基彼此形成二硫鍵。
在一些情況下，該β2M多肽包含以下胺基酸序列：
IQRTPKIQVYS C HPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDM (SEQ ID NO:56)。
在一些情況下，本發明之TMMP之第一多肽及第二多肽經由以下與彼此二硫鍵連接：i)連接第一多肽鏈中之肽抗原決定基及β2M多肽之連接子中所存在的Cys殘基；及ii)第二多肽鏈中之I類MHC重鏈中所存在之Cys殘基。在一些情況下，I類MHC重鏈中所存在之Cys殘基為作為Y84C取代引入之Cys。在一些情況下，連接第一多肽鏈中之肽抗原決定基及β2M多肽之連接子為GCGGS(G4 S)n (SEQ ID NO:235)，其中n為1、2、3、4、5、6、7、8或9。舉例而言，在一些情況下，該連接子包含胺基酸序列GCGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:236)。作為另一實例，該連接子包含胺基酸序列GCGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:237)。多聚體多肽之二硫鍵連接之第一多肽及第二多肽之實例示意性地描繪於圖7A至圖7D中。

支架多肽
TMMP可包含Fc多肽，或可包含另一適合之支架多肽。
適合之支架多肽包括基於抗體之支架多肽及非基於抗體之支架。非基於抗體之支架包括例如白蛋白、XTEN (延伸重組)多肽、轉鐵蛋白、Fc受體多肽、彈性蛋白樣多肽(參見例如Hassouneh等人(2012)Methods Enzymol. 502:215；例如，包含五肽重複單元(Val-Pro-Gly-X-Gly；SEQ ID NO:59)之多肽，其中X為除脯胺酸以外之任何胺基酸)、白蛋白結合多肽、蠶絲樣多肽(參見例如Valluzzi等人(2002)Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 357:165)、蠶絲-彈性蛋白樣多肽(SELP；參見例如Megeed等人(2002)Adv Drug Deliv Rev . 54:1075)及其類似物。適合之XTEN多肽包括例如以下文獻中所揭示之彼等XTEN多肽：WO 2009/023270、WO 2010/091122、WO 2007/103515、US 2010/0189682及US 2009/0092582；亦參見Schellenberger等人(2009)Nat Biotechnol . 27:1186)。適合之白蛋白多肽包括例如人血清白蛋白。
在一些情況下，適合之支架多肽將為半衰期延長多肽。因而，在一些情況下，適合之支架多肽使多聚體多肽之活體內半衰期(例如，血清半衰期)與缺乏該支架多肽之對照多聚體多肽相比有所增加。舉例而言，在一些情況下，支架多肽使多聚體多肽之活體內半衰期(例如，血清半衰期)與缺乏該支架多肽之對照多聚體多肽相比增加至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約50%、至少約2倍、至少約2.5倍、至少約5倍、至少約10倍、至少約25倍、至少約50倍、至少約100倍或超過100倍。舉例而言，在一些情況下，Fc多肽使多聚體多肽之活體內半衰期(例如，血清半衰期)與缺乏該Fc多肽之對照多聚體多肽相比增加至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約50%、至少約2倍、至少約2.5倍、至少約5倍、至少約10倍、至少約25倍、至少約50倍、至少約100倍或超過100倍。

Fc多肽
在一些情況下，多聚體多肽之第一多肽鏈及/或第二多肽鏈包含Fc多肽。多聚體多肽之Fc多肽可為人類IgG1 Fc、人類IgG2 Fc、人類IgG3 Fc、人類IgG4 Fc等。在一些情況下，Fc多肽包含與圖2A至圖2G中所描繪之Fc區之胺基酸序列具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。在一些情況下，Fc區包含與圖2A中所描繪之人類IgG1 Fc多肽具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。在一些情況下，Fc區包含與圖2A中所描繪之人類IgG1 Fc多肽具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列；且包含N77取代；例如，Fc多肽包含N77A取代。在一些情況下，Fc多肽包含與圖2A中所描繪之人類IgG2 Fc多肽具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列；例如，Fc多肽包含與圖2A中所描繪之人類IgG2 Fc多肽之胺基酸99-325具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。在一些情況下，Fc多肽包含與圖2A中所描繪之人類IgG3 Fc多肽具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列；例如，Fc多肽包含與圖2A中所描繪之人類IgG3 Fc多肽之胺基酸19-246具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。在一些情況下，Fc多肽包含與圖2B中所描繪之人類IgM Fc多肽具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列；例如，Fc多肽包含與圖2B中所描繪之人類IgM Fc多肽之胺基酸1-276具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。在一些情況下，Fc多肽包含與圖2C中所描繪之人類IgA Fc多肽具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列；例如，Fc多肽包含與圖2C中所描繪之人類IgA Fc多肽之胺基酸1-234具有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或100%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。
在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2A中所描繪之胺基酸序列(人類IgG1 Fc)。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2A中所描繪之胺基酸序列(人類IgG1 Fc)，但用除天冬醯胺酸以外之胺基酸取代N297。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2C中所描繪之胺基酸序列(包含N297A取代之人類IgG1 Fc)。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2A中所描繪之胺基酸序列(人類IgG1 Fc)，但用除白胺酸以外之胺基酸取代L234。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2A中所描繪之胺基酸序列(人類IgG1 Fc)，但用除白胺酸以外之胺基酸取代L235。
在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2E中所描繪之胺基酸序列。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2F中所描繪之胺基酸序列。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2G中所描繪之胺基酸序列(包含L234A取代及L235A取代之人類IgG1 Fc)。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2A中所描繪之胺基酸序列(人類IgG1 Fc)，但用除脯胺酸以外之胺基酸取代P331；在一些情況下，該取代為P331S取代。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2A中所描繪之胺基酸序列(人類IgG1 Fc)，但用除白胺酸以外之胺基酸在L234及L235處進行取代。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2A中所描繪之胺基酸序列(人類IgG1 Fc)，但用除白胺酸以外之胺基酸在L234及L235處進行取代，且用除脯胺酸以外之胺基酸取代P331。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽包含圖2B中所描繪之胺基酸序列(包含L234F、L235E及P331S取代之人類IgG1 Fc)。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之Fc多肽為包含L234A及L235A取代之IgG1 Fc多肽。

連接子
本發明之TMMP可包括一或多個連接子，其中該一或多個連接子係處於以下一或多者之間：i) I類或II類MHC多肽與Ig Fc多肽，其中此種連接子在本文中稱為「L1」；ii)免疫調節多肽與I類或II類MHC多肽，其中此種連接子在本文中稱為「L2」；iii)第一免疫調節多肽與第二免疫調節多肽，其中此種連接子在本文中稱為「L3」；iv)肽抗原(「抗原決定基」)與I類或II類MHC多肽；v) I類或II類MHC多肽及二聚多肽(例如，二聚配對之第一成員或第二成員)；及vi)二聚多肽(例如，二聚配對之第一成員或第二成員)及IgFc多肽。
適合之連接子(亦稱為「間隔子」)可容易地選擇，且可具有眾多適合長度中之任一種，諸如1個胺基酸至25個胺基酸、3個胺基酸至20個胺基酸、2個胺基酸至15個胺基酸、3個胺基酸至12個胺基酸，包括4個胺基酸至10個胺基酸、5個胺基酸至9個胺基酸、6個胺基酸至8個胺基酸或7個胺基酸至8個胺基酸。適合之連接子的長度可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸。在一些情況下，連接子具有25個胺基酸至50個胺基酸之長度，例如25至30、30至35、35至40、40至45或45至50個胺基酸之長度。
例示性連接子包括甘胺酸聚合物(G)n 、甘胺酸-絲胺酸聚合物(包括例如(GS)n 、(GSGGS)n (SEQ ID NO:60)及(GGGS)n (SEQ ID NO:61)，其中n為至少一之整數)、甘胺酸-丙胺酸聚合物、丙胺酸-絲胺酸聚合物及此項技術中已知的其他可撓性連接子。可使用甘胺酸及甘胺酸-絲胺酸聚合物；Gly及Ser兩者相對未經結構化，且因此可充當介於諸多組分之間的中性繫鏈。可使用甘胺酸聚合物；甘胺酸可觸及甚至顯著多於丙胺酸之φ-ψ空間，且所受約束比具有較長側鏈之殘基少得多(參見Scheraga,Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992))。例示性連接子可包含諸多胺基酸序列，包括但不限於GGSG (SEQ ID NO:62)、GGSGG (SEQ ID NO:63)、GSGSG (SEQ ID NO:64)、GSGGG (SEQ ID NO:65)、GGGSG (SEQ ID NO:66)、GSSSG (SEQ ID NO:67)及其類似胺基酸序列。例示性連接子可包括例如Gly(Ser4 )n (SEQ ID NO:251)，其中n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GSSSS)n (SEQ ID NO:68)，其中n為4。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GSSSS)n (SEQ ID NO:68)，其中n為5。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為1。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為2。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為3。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為4。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為5。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為6。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為7；在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為8；在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為9；在一些情況下，連接子包含胺基酸序列(GGGGS)n (SEQ ID NO:69)，其中n為10。在一些情況下，連接子包含胺基酸序列AAAGG (SEQ ID NO:70)。
在一些情況下，本發明之多聚體多肽之第一多肽中所存在之連接子多肽包括可與本發明之多聚體多肽之第二多肽中所存在之半胱胺酸殘基形成二硫鍵的半胱胺酸殘基。在一些情況下，舉例而言，適合之連接子包含胺基酸序列G C GASGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:71)。作為另一實例，適合之連接子可包含胺基酸序列GCGGS(G4S)n (SEQ ID NO:235)，其中n為1、2、3、4、5、6、7、8或9。舉例而言，在一些情況下，該連接子包含胺基酸序列GCGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:236)。作為另一實例，該連接子包含胺基酸序列GCGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:237)。

抗原決定基
多聚體多肽中所存在之抗原決定基可具有約4個胺基酸至約25個胺基酸之長度，例如該抗原決定基可具有4個胺基酸(aa)至10 aa、10 aa至15 aa、15 aa至20 aa或20 aa至25 aa之長度。舉例而言，本發明之多聚體多肽中所存在之抗原決定基可具有4個胺基酸(aa)、5 aa、6 aa、7、aa、8 aa、9 aa、10 aa、11 aa、12 aa、13 aa、14 aa、15 aa、16 aa、17 aa、18 aa、19 aa、20 aa、21 aa、22 aa、23 aa、24 aa或25 aa之長度。在一些情況下，多聚體多肽中所存在之抗原決定基具有5個胺基酸至10個胺基酸，例如5 aa、6 aa、7 aa、8 aa、9 aa或10 aa之長度。
多聚體多肽中所存在之抗原決定基為T細胞特異性地結合之肽，亦即，該抗原決定基由抗原決定基特異性T細胞特異性地結合。抗原決定基特異性T細胞結合具有參考胺基酸序列之抗原決定基，但實質上不結合與參考胺基酸序列不同的抗原決定基。舉例而言，抗原決定基特異性T細胞結合具有參考胺基酸序列之抗原決定基，且結合與參考胺基酸序列不同的抗原決定基，若果真如此，則親和力低於10-6 M、低於10-5 M或低於10-4 M。抗原決定基特異性T細胞可以至少10-7 M、至少10-8 M、至少10-9 M或至少10-10 M之親和力結合其具有特異性之抗原決定基。
適合之抗原決定基包括但不限於癌症相關抗原中所存在之抗原決定基。癌症相關抗原在此項技術中為已知的；參見例如Cheever等人(2009)Clin. Cancer Res. 15:5323。癌症相關抗原包括但不限於α葉酸受體；碳酸酐酶IX (CAIX)；CD19；CD20；CD22；CD30；CD33；CD44v7/8；癌胚抗原(CEA)；上皮醣蛋白-2 (EGP-2)；上皮醣蛋白-40 (EGP-40)；葉酸結合蛋白(FBP)；胎兒乙醯膽鹼受體；神經節苷脂抗原GD2；Her2/neu；IL-13R-a2；κ輕鏈；LeY；L1細胞黏附分子；黑素瘤相關抗原(MAGE)；MAGE-A1；間皮素；MUC1；NKG2D配位體；癌胚抗原(h5T4)；前列腺幹細胞抗原(PSCA)；前列腺特異性膜抗原(PSMA)；腫瘤相關醣蛋白-72 (TAG-72)；血管內皮生長因子受體-2 (VEGF-R2)。參見例如Vigneron等人(2013)Cancer Immunity 13:15；及Vigneron (2015)BioMed Res. Int’l 論文編號948501；及表皮生長因子受體(EGFR) vIII多肽(參見例如Wong等人(1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:2965；及Miao等人(2014)PLoSOne 9:e94281)。在一些情況下，抗原決定基為人類乳頭狀瘤病毒E7抗原之抗原決定基；參見例如Ramos等人(2013)J. Immunother . 36:66。
在一些情況下，適合之肽抗原決定基為以下各物之約4個胺基酸至約20個胺基酸(例如，4個胺基酸(aa)、5 aa、6 aa、7 aa、8 aa、9 aa、10 aa、11 aa、12 aa、13 aa、14 aa、15 aa、16 aa、17 aa、18 aa、19 aa或20 aa)之長度的肽片段：MUC1多肽、人類乳頭狀瘤病毒(HPV) E6多肽、LMP2多肽、HPV E7多肽、表皮生長因子受體(EGFR) vIII多肽、HER-2/neu多肽、黑素瘤抗原家族A3 (MAGE A3)多肽、p53多肽、突變p53多肽、NY-ESO-1多肽、葉酸水解酶(前列腺特異性膜抗原；PSMA)多肽、癌胚抗原(CEA)多肽、T細胞識別之黑素瘤抗原(melanA/MART1)多肽、Ras多肽、gp100多肽、蛋白酶3 (PR1)多肽、bcr-abl多肽、酪胺酸酶多肽、存活素多肽、前列腺特異性抗原(PSA)多肽、hTERT多肽、肉瘤易位斷裂點多肽、滑膜肉瘤X (SSX)斷裂點多肽、EphA2多肽、酸性磷酸酶、前列腺(PAP)多肽、黑素瘤細胞凋亡抑制劑(ML-IAP)多肽、α-胎蛋白(AFP)多肽、上皮細胞黏附分子(EpCAM)多肽、ERG (TMPRSS2 ETS融合物)多肽、NA17多肽、配對框-3 (PAX3)多肽、退行性淋巴瘤激酶(ALK)多肽、雄激素受體多肽、週期素B1多肽、N-myc原癌基因(MYCN)多肽、Ras同系物基因家族成員C (RhoC)多肽、酪胺酸酶相關蛋白-2 (TRP-2)多肽、間皮素多肽、前列腺幹細胞抗原(PSCA)多肽、黑素瘤相關抗原-1 (MAGE A1)多肽、細胞色素P450 1B1 (CYP1B1)多肽、胎盤特異性蛋白1 (PLAC1)多肽、BORIS多肽(亦稱為CCCTC結合因子或CTCF)、ETV6-AML多肽、乳癌抗原NY-BR-1多肽(亦稱為含錨蛋白重複結構域之蛋白30A)、G蛋白信號傳導調節劑(RGS5)多肽、T細胞識別之鱗狀細胞癌抗原(SART3)多肽、碳酸酐酶IX多肽、配對框-5 (PAX5)多肽、OY-TES1 (睾丸抗原；亦稱為精子頂體蛋白結合蛋白)多肽、精液蛋白17多肽、淋巴細胞特異性蛋白-酪胺酸激酶(LCK)多肽、高分子量黑素瘤相關抗原(HMW-MAA)、A-激酶錨定蛋白-4 (AKAP-4)、滑膜肉瘤X斷裂點2 (SSX2)多肽、X抗原家族成員1 (XAGE1)多肽、B7同系物3 (B7H3；亦稱為CD276)多肽、豆莢蛋白多肽(LGMN1；亦稱為天冬醯胺醯內肽酶)、具有Ig及EGF同源性結構域之酪胺酸激酶-2 (Tie-2；亦稱為血管生成素-1受體)多肽、P抗原家族成員4 (PAGE4)多肽、血管內皮生長因子受體2 (VEGF2)多肽、MAD-CT-1多肽、纖維母細胞活化蛋白(FAP)多肽、血小板衍生生長因子受體β (PDGFβ)多肽、MAD-CT-2多肽、Fos相關抗原-1 (FOSL)多肽或威爾姆斯瘤-1 (WT-1)多肽。
癌症相關抗原之胺基酸序列在此項技術中為已知的；參見例如MUC1 (GenBank CAA56734)；LMP2 (GenBank CAA47024)；HPV E6 (GenBank AAD33252)；HPV E7 (GenBank AHG99480)；EGFRvIII (GenBank NP_001333870)；HER-2/neu (GenBank AAI67147)；MAGE-A3 (GenBank AAH11744)；p53 (GenBank BAC16799)；NY-ESO-1 (GenBank CAA05908)；PSMA (GenBank AAH25672)；CEA (GenBank AAA51967)；melan/MART1 (GenBank NP_005502)；Ras (GenBank NP_001123914)；gp100 (GenBank AAC60634)；bcr-abl (GenBank AAB60388)；酪胺酸酶(GenBank AAB60319)；存活蛋白(GenBank AAC51660)；PSA (GenBank CAD54617)；hTERT (GenBank BAC11010)；SSX (GenBank NP_001265620)；Eph2A (GenBank NP_004422)；PAP (GenBank AAH16344)；ML-IAP (GenBank AAH14475)；AFP (GenBank NP_001125)；EpCAM (GenBank NP_002345)；ERG (TMPRSS2 ETS融合物) (GenBank ACA81385)；PAX3 (GenBank AAI01301)；ALK (GenBank NP_004295)；雄性素受體(GenBank NP_000035)；週期素B1 (GenBank CAO99273)；MYCN (GenBank NP_001280157)；RhoC (GenBank AAH52808)；TRP-2 (GenBank AAC60627)；間皮素(GenBank AAH09272)；PSCA (GenBank AAH65183)；MAGE A1 (GenBank NP_004979)；CYP1B1 (GenBank AAM50512)；PLAC1 (GenBank AAG22596)；BORIS (GenBank NP_001255969)；ETV6 (GenBank NP_001978)；NY-BR1 (GenBank NP_443723)；SART3 (GenBank NP_055521)；碳酸酐酶IX (GenBank EAW58359)；PAX5 (GenBank NP_057953)；OY-TES1 (GenBank NP_115878)；精液蛋白17 (GenBank AAK20878)；LCK (GenBank NP_001036236)；HMW-MAA (GenBank NP_001888)；AKAP-4 (GenBank NP_003877)；SSX2 (GenBank CAA60111)；XAGE1 (GenBank NP_001091073；XP_001125834；XP_001125856；及XP_001125872)；B7H3 (GenBank NP_001019907；XP_947368；XP_950958；XP_950960；XP_950962；XP_950963；XP_950965；及XP_950967)；LGMN1 (GenBank NP_001008530)；TIE-2 (GenBank NP_000450)；PAGE4 (GenBank NP_001305806)；VEGFR2 (GenBank NP_002244)；MAD-CT-1 (GenBank NP_005893 NP_056215)；FAP (GenBank NP_004451)；PDGFβ (GenBank NP_002600)；MAD-CT-2 GenBank NP_001138574)；FOSL (GenBank NP_005429)；及WT-1 (GenBank NP_000369)。此等多肽亦論述於例如以下文獻中：Cheever等人(2009)Clin. Cancer Res. 15:5323，及其中引用之參考文獻；Wagner等人(2003)J. Cell. Sci. 116:1653；Matsui等人(1990)Oncogene 5:249；Zhang等人(1996)Nature 383:168。
在一些情況下，該抗原決定基為HPV16E7/82-90 (LLMGTLGIV；SEQ ID NO:72)。在一些情況下，該抗原決定基為HPV16E7/86-93 (TLGIVCPI；SEQ ID NO:73)。在一些情況下，該抗原決定基為HPV16E7/11-20 (YMLDLQPETT；SEQ ID NO:74)。在一些情況下，該抗原決定基為HPV16E7/11-19 (YMLDLQPET；SEQ ID NO:75)。關於其他適合之HPV抗原決定基，參見例如Ressing等人, ((1995)J. Immunol. 154:5934)。

免疫調節多肽
對共免疫調節結構域展現降低之親和力的適合免疫調節結構域相對於野生型免疫調節結構域可有1個胺基酸(aa)至20 aa不同。舉例而言，在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽相對於相應野生型免疫調節多肽在胺基酸序列方面有1 aa、2 aa、3 aa、4 aa、5 aa、6 aa、7 aa、8 aa、9 aa或10 aa不同。作為另一實例，在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽相對於相應野生型免疫調節多肽在胺基酸序列方面有11 aa、12 aa、13 aa、14 aa、15 aa、16 aa、17 aa、18 aa、19 aa或20 aa不同。舉例而言，在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如野生型)免疫調節多肽相比包括1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括單一胺基酸取代。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括2個胺基酸取代(例如，不超過2個胺基酸取代)。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括3個胺基酸取代(例如，不超過3個胺基酸取代)。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括4個胺基酸取代(例如，不超過4個胺基酸取代)。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括5個胺基酸取代(例如，不超過5個胺基酸取代)。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括6個胺基酸取代(例如，不超過6個胺基酸取代)。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括7個胺基酸取代(例如，不超過7個胺基酸取代)。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括8個胺基酸取代(例如，不超過8個胺基酸取代)。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括9個胺基酸取代(例如，不超過9個胺基酸取代)。在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括10個胺基酸取代(例如，不超過10個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括11個胺基酸取代(例如，不超過11個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括12個胺基酸取代(例如，不超過12個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括13個胺基酸取代(例如，不超過13個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括14個胺基酸取代(例如，不超過14個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括15個胺基酸取代(例如，不超過15個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括16個胺基酸取代(例如，不超過16個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括17個胺基酸取代(例如，不超過17個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括18個胺基酸取代(例如，不超過18個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括19個胺基酸取代(例如，不超過19個胺基酸取代)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽與相應參考(例如，野生型)免疫調節多肽相比包括20個胺基酸取代(例如，不超過20個胺基酸取代)。
如以上所論述，適合包括在本發明之TMMP中之變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽展現與相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力。
例示性免疫調節多肽與同源共免疫調節多肽配對包括但不限於：
a) 4-1BBL (免疫調節多肽)與4-1BB (同源共免疫調節多肽)；
b) PD-L1 (免疫調節多肽)與PD1 (同源共免疫調節多肽)；
c) IL-2 (免疫調節多肽)與IL-2受體(同源共免疫調節多肽)；
d) CD80 (免疫調節多肽)與CD86 (同源共免疫調節多肽)；
e) CD86 (免疫調節多肽)與CD28 (同源共免疫調節多肽)；
f) OX40L (CD252) (免疫調節多肽)與OX40 (CD134) (同源共免疫調節多肽)；
g) Fas配位體(免疫調節多肽)與Fas (同源共免疫調節多肽)；
h) ICOS-L (免疫調節多肽)與ICOS (同源共免疫調節多肽)；
i) ICAM (免疫調節多肽)與LFA-1 (同源共免疫調節多肽)；
j) CD30L (免疫調節多肽)與CD30 (同源共免疫調節多肽)；
k) CD40 (免疫調節多肽)與CD40L (同源共免疫調節多肽)；
l) CD83 (免疫調節多肽)與CD83L (同源共免疫調節多肽)；
m) HVEM (CD270) (免疫調節多肽)與CD160 (同源共免疫調節多肽)；
n) JAG1 (CD339) (免疫調節多肽)與Notch (同源共免疫調節多肽)；
o) JAG1 (免疫調節多肽)與CD46 (同源共免疫調節多肽)；
p) CD80 (免疫調節多肽)與CTLA4 (同源共免疫調節多肽)；
q) CD86 (免疫調節多肽)與CTLA4 (同源共免疫調節多肽)；及
r) CD70 (免疫調節多肽)與CD27 (同源共免疫調節多肽)。
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽具有100 nM至100 μM之結合親和力。舉例而言，在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽多肽對同源共免疫調節多肽具有約100 nM至150 nM、約150 nM至約200 nM、約200 nM至約250 nM、約250 nM至約300 nM、約300 nM至約350 nM、約350 nM至約400 nM、約400 nM至約500 nM、約500 nM至約600 nM、約600 nM至約700 nM、約700 nM至約800 nM、約800 nM至約900 nM、約900 nM至約1 μM、至約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約15 μM、約15 μM至約20 μM、約20 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之結合親和力。
本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽展現降低之親和力。類似地，包含變異免疫調節多肽之本發明之TMMP對同源共免疫調節多肽展現降低之親和力。因而，舉例而言，包含變異免疫調節多肽之本發明之TMMP對同源共免疫調節多肽具有100 nM至100 μM之結合親和力。舉例而言，在一些情況下，包含變異免疫調節多肽多肽之本發明之TMMP對同源共免疫調節多肽具有約100 nM至150 nM、約150 nM至約200 nM、約200 nM至約250 nM、約250 nM至約300 nM、約300 nM至約350 nM、約350 nM至約400 nM、約400 nM至約500 nM、約500 nM至約600 nM、約600 nM至約700 nM、約700 nM至約800 nM、約800 nM至約900 nM、約900 nM至約1 μM、至約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約15 μM、約15 μM至約20 μM、約20 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之結合親和力。

PD-L1變異體
作為一個非限制性實例，在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽為變異PD-L1多肽。野生型PD-L1結合PD1。
野生型人類PD-L1多肽可包含以下胺基酸序列：MRIFAVFIFM TYWHLLNAFT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPGNI LNVSIKICLT LSPST (SEQ ID NO:1)。
野生型人類PD-L1胞外域可包含以下胺基酸 序列：FT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL
AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPGNI LNVSIKI (SEQ ID NO:2)。
野生型PD-1多肽可包含以下胺基酸序列：PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL (SEQ ID NO:3)。在一些情況下，在本發明之TMMP包含變異PD-L1多肽時，「同源共免疫調節多肽」為包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的PD-1多肽。
在一些情況下，變異PD-L1多肽對PD-1 (例如，包含SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列的PD-1多肽)展現與包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列的PD-L1多肽之結合親和力相比有所降低之結合親和力。舉例而言，在一些情況下，本發明之變異PD-L1多肽結合PD-1 (例如，包含SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列的PD-1多肽)之結合親和力比包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列的PD-L1多肽的結合親和力低至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、低至少50%、低至少55%、低至少60%、低至少65%、低至少70%、低至少75%、低至少80%、低至少85%、低至少90%、低至少95%或低95%以上。
在一些情況下，變異PD-L1多肽對PD-1具有1 nM至1 mM之結合親和力。在一些情況下，本發明之變異PD-L1多肽對PD-1具有100 nM至100 μM之結合親和力。作為另一實例，在一些情況下，變異PD-L1多肽對PD1 (例如，包含SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列的PD1多肽)具有約100 nM至150 nM、約150 nM至約200 nM、約200 nM至約250 nM、約250 nM至約300 nM、約300 nM至約350 nM、約350 nM至約400 nM、約400 nM至約500 nM、約500 nM至約600 nM、約600 nM至約700 nM、約700 nM至約800 nM、約800 nM至約900 nM、約900 nM至約1 μM、至約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約15 μM、約15 μM至約20 μM、約20 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之結合親和力。
在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有單一胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有2至10個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有2個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有3個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有4個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有5個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有6個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有7個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有8個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有9個胺基酸取代。在一些情況下，變異PD-L1多肽與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示之PD-L1胺基酸序列相比具有10個胺基酸取代。
適合之PD-L1變異體包括包含與以下胺基酸序列具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列的多肽： 　　FT VTVPK X LYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL
AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPGNI LNVSIKI (SEQ ID NO:76)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala。在一些情況下，X為Arg。
適合之PD-L1變異體包括包含與以下胺基酸序列具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列的多肽：
FT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL
AAL X VYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPGNI LNVSIKI (SEQ ID NO:77)，其中X為除Ile以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Asp。
適合之PD-L1變異體包括包含與以下胺基酸序列具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列的多肽：
FT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL
AALIVYWEME DKNIIQFVHG E X DLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPGNI LNVSIKI (SEQ ID NO:78)，其中X為除Glu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Arg。

CD80變異體
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽為變異CD80多肽。野生型CD80結合至CD28。野生型CD80結合至CD86。
人類CD80之胞外域之野生型胺基酸序列可如下：
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK
KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:4)。
野生型CD28胺基酸序列可如下：
MLRLLLALNL FPSIQVTGNK ILVKQSPMLV AYDNAVNLSC KYSYNLFSRE FRASLHKGLD SAVEVCVVYG NYSQQLQVYS KTGFNCDGKL GNESVTFYLQ NLYVNQTDIY FCKIEVMYPP PYLDNEKSNG TIIHVKGKHL CPSPLFPGPS KPFWVLVVVG GVLACYSLLV TVAFIIFWVR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS (SEQ ID NO:5)。在一些情況下，在本發明之TMMP包含變異CD80多肽時，「同源共免疫調節多肽」為包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列的CD28多肽。
野生型CD28胺基酸序列可如下：
MLRLLLALNL FPSIQVTGNK ILVKQSPMLV AYDNAVNLSW KHLCPSPLFP GPSKPFWVLV VVGGVLACYS LLVTVAFIIF WVRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRS (SEQ ID NO:6)
野生型CD28胺基酸序列可如下：
MLRLLLALNL FPSIQVTGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR S (SEQ ID NO:7)。
在一些情況下，變異CD80多肽對CD28展現與包含SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列之CD80多肽對CD28之結合親和力相比有所降低之結合親和力。舉例而言，在一些情況下，變異CD80多肽結合CD28之結合親和力比包含SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列之CD80多肽對CD28 (例如，包含SEQ ID NO:5、6或7之一中所示之胺基酸序列的CD28多肽)之結合親和力低至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、低至少50%、低至少55%、低至少60%、低至少65%、低至少70%、低至少75%、低至少80%、低至少85%、低至少90%、低至少95%或低95%以上。
在一些情況下，變異CD80多肽對CD28具有100 nM至100 μM之結合親和力。作為另一實例，在一些情況下，本發明之變異CD80多肽對CD28 (例如，包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7中所示之胺基酸序列的CD28多肽)具有約100 nM至150 nM、約150 nM至約200 nM、約200 nM至約250 nM、約250 nM至約300 nM、約300 nM至約350 nM、約350 nM至約400 nM、約400 nM至約500 nM、約500 nM至約600 nM、約600 nM至約700 nM、約700 nM至約800 nM、約800 nM至約900 nM、約900 nM至約1 μM、至約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約15 μM、約15 μM至約20 μM、約20 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之結合親和力。
在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有單一胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有2至10個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有2個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有3個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有4個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有5個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有6個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有7個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有8個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有9個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD80多肽與SEQ ID NO:4中所示之CD80胺基酸序列相比具有10個胺基酸取代。
適合之CD80變異體包括包含與以下胺基酸序列中之任一者具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列的多肽：
VIHVTK EVKEVATLSC GH X VSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:79)，其中X為除Asn以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDIT X NLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:80)，其中X為除Asn以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS X VILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:81)，其中X為除Ile以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVL X YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:82)，其中X為除Lys以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS X DPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:83)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS Q X PETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:84)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEE X A QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:85)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRI X WQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:86)，其中X為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYW X KEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:87)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK K X VLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:88)，其中X為除Met以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KM X LTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:89)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MN X WPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:90)，其中X為除Ile以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPE X KNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:91)，其中X為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIF X ITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:92)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA D X PTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:93)，其中X為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTV X QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:94)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；及
VIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPT X SISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DN (SEQ ID NO:95)，其中X為除Pro以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala。

CD86變異體
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽為變異CD86多肽。野生型CD86結合至CD28。在一些情況下，在本發明之TMMP包含變異CD86多肽之情況下，「同源共免疫調節多肽」為包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列的CD28多肽。
野生型人類CD86之完全胞外域之胺基酸序列可如下：
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYM N RTSF D SDS W TLRLHNLQIKDKGLYQCIIH H KKPTGMIRIHQMNSELSVL ANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:8)。
野生型人類CD86之IgV結構域之胺基酸序列可如下：
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYM N RTSF D SDS W TLRLHNLQIKDKGLYQCIIH H KKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:9)。
在一些情況下，變異CD86多肽對CD28展現與包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中所示之胺基酸序列的CD86多肽對CD28之結合親和力相比有所降低之結合親和力。舉例而言，在一些情況下，變異CD86多肽結合CD28之結合親和力比包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中所示之胺基酸序列的CD86多肽對CD28 (例如，包含SEQ ID NO:5、6或7之一中所示之胺基酸序列的CD28多肽)之結合親和力低至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、低至少50%、低至少55%、低至少60%、低至少65%、低至少70%、低至少75%、低至少80%、低至少85%、低至少90%、低至少95%或低95%以上。
在一些情況下，變異CD86多肽對CD28具有100 nM至100 μM之結合親和力。作為另一實例，在一些情況下，本發明之變異CD86多肽對CD28 (例如，包含SEQ ID NO:5、6或7之一中所示之胺基酸序列的CD28多肽)具有約100 nM至150 nM、約150 nM至約200 nM、約200 nM至約250 nM、約250 nM至約300 nM、約300 nM至約350 nM、約350 nM至約400 nM、約400 nM至約500 nM、約500 nM至約600 nM、約600 nM至約700 nM、約700 nM至約800 nM、約800 nM至約900 nM、約900 nM至約1 μM、至約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約15 μM、約15 μM至約20 μM、約20 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之結合親和力。
在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有單一胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有2至10個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有2個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有3個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有4個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有5個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有6個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有7個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有8個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有9個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:8中所示之CD86胺基酸序列相比具有10個胺基酸取代。
在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有單一胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有2至10個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有2個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有3個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有4個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有5個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有6個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有7個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有8個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有9個胺基酸取代。在一些情況下，變異CD86多肽與SEQ ID NO:9中所示之CD86胺基酸序列相比具有10個胺基酸取代。
適合之CD86變異體包括包含與以下胺基酸序列中之任一者具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列的多肽：
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYM X RTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:96)，其中X為除Asn以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSF X SDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:97)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDS X TLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:98)，其中X為除Trp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIH X KKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:99)，其中X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYM X RTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:100)，其中X為除Asn以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSF X SDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:101)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDS X TLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:102)，其中X為除Trp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIH X KKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:103)，其中X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENL X LNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:104)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENL X LNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:105)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFW X DQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:106)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFW X DQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:107)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVV X WQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:108)，其中X為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVV X WQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:109)，其中X為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWT X RLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:110)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSFDSDSWT X RLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:111)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSK X MNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:112)，其中X為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSK X MNRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:113)，其中X為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYM X RTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIH X KKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:114)，其中第一個X為除Asn以外之任何胺基酸，且第二個X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，該第一個X及該第二個X皆為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYM X RTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIH X KKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:115)，其中第一個X為除Asn以外之任何胺基酸，且第二個X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，該第一個X及該第二個X皆為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSF X1 SDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIH X2 KKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:116)，其中X1 為除Asp以外之任何胺基酸，且X2 為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala且X2 為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMNRTSF X1 SDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIH X2 KKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:117)，其中第一個X為除Asn以外之任何胺基酸，且第二個X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，該第一個X及該第二個X皆為Ala；
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYM X1 RTSF X2 SDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIH X3 KKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIP (SEQ ID NO:118)，其中X1 為除Asn以外之任何胺基酸，X2 為除Asp以外之任何胺基酸，且X3 為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala，X2 為Ala，且X3 為Ala；及
APLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYM X1 RTSF X2 SDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIH X3 KKPTGMIRIHQMNSELSVL (SEQ ID NO:119)，其中X1 為除Asn以外之任何胺基酸，X2 為除Asp以外之任何胺基酸，且X3 為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala，X2 為Ala，且X3 為Ala。

4-1BBL變異體
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽為變異4-1BBL多肽。野生型4-1BBL結合至4-1BB (CD137)。
野生型4-1BBL胺基酸序列可如下：MEYASDASLD PEAPWPPAPR ARACRVLPWA LVAGLLLLLL LAAACAVFL A CPWAVSGARA SPGSAASPRL REGPELSPDD PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:10)。
在一些情況下，變異4-1BBL多肽為人類4-1BBL之腫瘤壞死因子(TNF)同源性結構域(THD)之變異體。
人類4-1BBL之THD之野生型胺基酸序列可例如為如下之SEQ ID NO:11-13之一： 　　PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:11)；
D PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:12)；
D PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPA (SEQ ID NO:13)。
野生型4-1BB胺基酸序列可如下：MGNSCYNIVA TLLLVLNFER TRSLQDPCSN CPAGTFCDNN RNQICSPCPP NSFSSAGGQR TCDICRQCKG VFRTRKECSS TSNAECDCTP GFHCLGAGCS MCEQDCKQGQ ELTKKGCKDC CFGTFNDQKR GICRPWTNCS LDGKSVLVNG TKERDVVCGP SPADLSPGAS SVTPPAPARE PGHSPQIISF FLALTSTALL FLLFFLTLRF SVVKRGRKKL LYIFKQPFMR PVQTTQEEDG CSCRFPEEEE GGCEL (SEQ ID NO:14)。在一些情況下，在本發明之TMMP包含變異4-1BBL多肽時，「同源共免疫調節多肽」為包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的4-1BB多肽。
在一些情況下，變異4-1BBL多肽對4-1BB展現與包含SEQ ID NO:10-13之一中所示之胺基酸序列的4-1BBL多肽的結合親和力相比有所降低之結合親和力。舉例而言，在一些情況下，本發明之變異4-1BBL多肽以當在相同條件下分析時比包含SEQ ID NO:10-13之一中所示之胺基酸序列的4-1BBL多肽對4-1BB多肽(例如，包含SEQ ID NO:14中所示之胺基酸序列的4-1BB多肽)之結合親和力低至少10%、低至少15%、低至少20%、至少25%、低至少30%、低至少35%、低至少40%、低至少45%、低至少50%、低至少55%、低至少60%、低至少65%、低至少70%、低至少75%、低至少80%、低至少85%、低至少90%、低至少95%或低95%以上之結合親和力結合4-1BB。
在一些情況下，變異4-1BBL多肽對4-1BB具有100 nM至100 μM之結合親和力。作為另一實例，在一些情況下，變異4-1BBL多肽對4-1BB (例如，包含SEQ ID NO:14中所示之胺基酸序列的4-1BB多肽)具有約100 nM至150 nM、約150 nM至約200 nM、約200 nM至約250 nM、約250 nM至約300 nM、約300 nM至約350 nM、約350 nM至約400 nM、約400 nM至約500 nM、約500 nM至約600 nM、約600 nM至約700 nM、約700 nM至約800 nM、約800 nM至約900 nM、約900 nM至約1 μM、至約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約15 μM、約15 μM至約20 μM、約20 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之結合親和力。
在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有單一胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有2至10個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有2個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有3個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有4個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有5個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有6個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有7個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有8個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有9個胺基酸取代。在一些情況下，變異4-1BBL多肽與SEQ ID NO:10-13之一中所示之4-1BBL胺基酸序列相比具有10個胺基酸取代。
適合之4-1BBL變異體包括包含與以下胺基酸序列中之任一者具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列的多肽：
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSY X EDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:120)，其中X為除Lys以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAW X LTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:121)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG X FAQLVAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:122)，其中X為除Met以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG M X AQLVAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:123)，其中X為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFA X LVAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:124)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQ X VAQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:125)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQL X AQNV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:126)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVA X NV LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:127)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQ X V LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:128)，其中X為除Asn以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQN X LLIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:129)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV X LIDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:130)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV L X IDGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:131)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LL X DGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:132)，其中X為除Ile以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLI X GPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:133)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLID X PLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:134)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGG X LSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:135)，其中X為除Pro以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGP X SWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:136)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPL X WY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:137)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLS X Y
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:138)，其中X為除Trp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSW X
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:139)，其中X為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
X DPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:140)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
S X PGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:141)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SD X GLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:142)，其中X為除Pro以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDP X LAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:143)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPG X AGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:144)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLA X VSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:145)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAG X SL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:146)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGV X L TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:147)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVS X TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:148)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL X GGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:149)，其中X為除Thr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL T X GLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:150)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TG X LSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:151)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGG X SYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:152)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGL X YKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:153)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLS X KEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:154)，其中X為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYK X DT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:155)，其中X為除Glu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKE X T KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:156)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKED X KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:157)，其中X為除Thr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT X ELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:158)，其中X為除Lys以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT K X LVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:159)，其中X為除Glu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYV X FQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:160)，其中X為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVF X QLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:161)，其中X為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFF X LELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:162)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQ X ELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:163)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQL X LR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:164)，其中X為除Glu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLE X R RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:165)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLEL X RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:166)，其中X為除Arg以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR X VVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:167)，其中X為除Arg以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR R X VAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:168)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RV X AGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:169)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVA X EGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:170)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAG X GSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:171)，其中X為除Glu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGE X SGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:172)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEG X GS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:173)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTV X LPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:174)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVD X PPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:175)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDL X PASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:176)，其中X為除Pro以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPA X S EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:177)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPAS X EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:178)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS X ARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:179)，其中X為除Glu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EA X NSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:180)，其中X為除Arg以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EAR X SAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:181)，其中X為除Asn以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARN X AFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:182)，其中X為除Ser以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSA X GFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:183)，其中X為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAG X RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:184)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ X LGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:185)，其中X為除Arg以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ R X GVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:186)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RL X VHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:187)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLG X HLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:188)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGV X LHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:189)，其中X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVH X HTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:190)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHL X TEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:191)，其中X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLH X EA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:192)，其中X為除Thr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHT X A RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:193)，其中X為除Glu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA X ARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:194)，其中X為除Arg以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RA X HAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:195)，其中X為除Arg以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RAR X AWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:196)，其中X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHA X QLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:197)，其中X為除Trp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQ X TQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:198)，其中X為除Leu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQL X Q GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:199)，其中X為除Thr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLT X GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:200)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ X ATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:201)，其中X為除Gly以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GA X VLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:202)，其中X為除Thr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；及
PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIGGPLSWY
SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GAT X LGLFRV TPEIPAGLPS PRSE (SEQ ID NO:203)，其中X為除Val以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala。
IL-2變異體
在一些情況下，本發明之TMMP中所存在之變異免疫調節多肽為變異IL-2多肽。野生型IL-2結合至IL-2受體(IL-2R)，亦即，包含IL-2Rα、IL-2Rβ及IL-2Rγ之異源三聚多肽。
野生型IL-2胺基酸序列可如下：
APTSSSTKKT QLQL EH LLL D LQMILNGINN YKNPKLTRML T F KF Y MPKKA TELKHLQCLEEELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE
TATIVEFLNRWITFC Q SIIS TLT (SEQ ID NO:15)。
野生型IL2結合至細胞表面上之IL2受體(IL2R)。在一些情況下，IL2受體為包含α鏈(IL-2Rα；亦稱為CD25)、β鏈(IL-2Rβ；亦稱為CD122)及γ鏈(IL-2Rγ；亦稱為CD132)之異源三聚多肽。人類IL-2Rα、IL2Rβ及IL-2Rγ之胺基酸序列可如下。
人類IL-2Rα：ELCDDDPPE IPHATFKAMA
YKEGTMLNCE CKRGFRRIKS GSLYMLCTGN SSHSSWDNQC QCTSSATRNT TKQVTPQPEE QKERKTTEMQ SPMQPVDQAS LPGHCREPPP WENEATERIY HFVVGQMVYY QCVQGYRALH RGPAESVCKM THGKTRWTQP QLICTGEMET SQFPGEEKPQ ASPEGRPESE TSCLVTTTDF QIQTEMAATM ETSIFTTEYQ VAVAGCVFLL ISVLLLSGLT WQRRQRKSRR TI (SEQ ID NO:16)。
人類IL-2Rβ：VNG TSQFTCFYNS RANISCVWSQ DGALQDTSCQ VHAWPDRRRW NQTCELLPVS QASWACNLIL GAPDSQKLTT VDIVTLRVLC REGVRWRVMA IQDFKPFENL RLMAPISLQV VHVETHRCNI SWEISQASHY FERHLEFEAR TLSPGHTWEE APLLTLKQKQ EWICLETLTP DTQYEFQVRV KPLQGEFTTW SPWSQPLAFR TKPAALGKDT IPWLGHLLVG LSGAFGFIIL VYLLINCRNT GPWLKKVLKC NTPDPSKFFS QLSSEHGGDV QKWLSSPFPS SSFSPGGLAP EISPLEVLER DKVTQLLLQQ DKVPEPASLS SNHSLTSCFT NQGYFFFHLP DALEIEACQV YFTYDPYSEE DPDEGVAGAP TGSSPQPLQP LSGEDDAYCT FPSRDDLLLF SPSLLGGPSP PSTAPGGSGA GEERMPPSLQ ERVPRDWDPQ PLGPPTPGVP DLVDFQPPPE LVLREAGEEV PDAGPREGVS FPWSRPPGQG EFRALNARLP LNTDAYLSLQ ELQGQDPTHL V (SEQ ID NO:17)。
人類IL-2Rγ：LNTTILTP NGNEDTTADF
FLTTMPTDSL SVSTLPLPEV QCFVFNVEYM NCTWNSSSEP QPTNLTLHYW YKNSDNDKVQ KCSHYLFSEE ITSGCQLQKK EIHLYQTFVV QLQDPREPRR QATQMLKLQN LVIPWAPENL TLHKLSESQL ELNWNNRFLN HCLEHLVQYR TDWDHSWTEQ SVDYRHKFSL PSVDGQKRYT FRVRSRFNPL CGSAQHWSEW SHPIHWGSNT SKENPFLFAL EAVVISVGSM GLIISLLCVY FWLERTMPRI PTLKNLEDLV TEYHGNFSAW SGVSKGLAES LQPDYSERLC LVSEIPPKGG ALGEGPGASP CNQHSPYWAP PCYTLKPET (SEQ ID NO:18)。
在一些情況下，在本發明之TMMP包含變異IL-2多肽時，「同源共免疫調節多肽」為包含含有SEQ ID NO:16、17及18之胺基酸序列的多肽的IL-2R。
在一些情況下，變異IL-2多肽對IL-2R展現與包含SEQ ID NO:15中所示之胺基酸序列的IL-2多肽的結合親和力相比有所降低之結合親和力。舉例而言，在一些情況下，本發明之變異IL-2多肽以當在相同條件下分析時比包含SEQ ID NO:15中所示之胺基酸序列的IL-2多肽對IL-2R (例如，包含含有SEQ ID NO:16-18中所示之胺基酸序列的多肽的IL-2R)之結合親和力低至少10%、低至少15%、低至少20%、至少25%、低至少30%、低至少35%、低至少40%、低至少45%、低至少50%、低至少55%、低至少60%、低至少65%、低至少70%、低至少75%、低至少80%、低至少85%、低至少90%、低至少95%或低95%以上之結合親和力結合IL-2R。
在一些情況下，變異IL-2多肽對IL-2R具有100 nM至100 μM之結合親和力。作為另一實例，在一些情況下，變異IL-2多肽對IL-2R (例如，包含含有SEQ ID NO:16-18中所示之胺基酸序列的多肽的IL-2R)具有約100 nM至150 nM、約150 nM至約200 nM、約200 nM至約250 nM、約250 nM至約300 nM、約300 nM至約350 nM、約350 nM至約400 nM、約400 nM至約500 nM、約500 nM至約600 nM、約600 nM至約700 nM、約700 nM至約800 nM、約800 nM至約900 nM、約900 nM至約1 μM、至約1 μM至約5 μM、約5 μM至約10 μM、約10 μM至約15 μM、約15 μM至約20 μM、約20 μM至約25 μM、約25 μM至約50 μM、約50 μM至約75 μM或約75 μM至約100 μM之結合親和力。
在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有單一胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有2至10個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有2個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有3個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有4個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有5個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有6個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有7個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有8個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有9個胺基酸取代。在一些情況下，變異IL-2多肽與SEQ ID NO:15中所示之IL-2胺基酸序列相比具有10個胺基酸取代。
適合之IL-2變異體包括包含與以下胺基酸序列中之任一者具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%胺基酸序列一致性之胺基酸序列的多肽：
APTSSSTKKT QLQLEHLLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML T X KFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:19)，其中X為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APTSSSTKKT QLQLEHLLL X LQMILNGINN YKNPKLTRML TFKFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:20)，其中X為除Asp以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APTSSSTKKT QLQL X HLLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML TFKFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:21)，其中X為除Glu以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APTSSSTKKT QLQLE X LLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML TFKFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:22)，其中X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APTSSSTKKT QLQLE X LLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML TFKFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:22)，其中X為除His以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala。在一些情況下，X為Arg。在一些情況下，X為Asn。在一些情況下，X為Asp。在一些情況下，X為Cys。在一些情況下，X為Glu。在一些情況下，X為Gln。在一些情況下，X為Gly。在一些情況下，X為Ile。在一些情況下，X為Lys。在一些情況下，X為Leu。在一些情況下，X為Met。在一些情況下，X為Phe。在一些情況下，X為Pro。在一些情況下，X為Ser。在一些情況下，X為Thr。在一些情況下，X為Tyr。在一些情況下，X為Trp。在一些情況下，X為Val；
APTSSSTKKT QLQLEHLLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML TFKF X MPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:23)，其中X為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APTSSSTKKT QLQLEHLLLD LQMILNGINN YKNPKLTRML TFKFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFC X SIIS TLT (SEQ ID NO:24)，其中X為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X為Ala；
APTSSSTKKT QLQLE X1 LLLD LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X2 KFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:25)，其中X1 為除His以外之任何胺基酸，且其中X2 為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala且X2 為Ala；
APTSSSTKKT QLQLEHLLL X1 LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X2 KFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:26)，其中X1 為除Asp以外之任何胺基酸，且其中X2 為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala且X2 為Ala；
APTSSSTKKT QLQL X1 HLLL X2 LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X3 KFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT(SEQ ID NO:27)，其中X1 為除Glu以外之任何胺基酸；其中X2 為除Asp以外之任何胺基酸；且其中X3 為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X3 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala；X2 為Ala；且X3 為Ala；
APTSSSTKKT QLQLE X1 LLL X2 LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X3 KFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT(SEQ ID NO:28)，其中X1 為除His以外之任何胺基酸；其中X2 為除Asp以外之任何胺基酸；且其中X3 為除Phe以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X3 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala；X2 為Ala；且X3 為Ala；
APTSSSTKKT QLQLEHLLL X1 LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X2 KFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFC X3 SIIS TLT (SEQ ID NO:29)，其中X1 為除Asp以外之任何胺基酸；其中X2 為除Phe以外之任何胺基酸；且其中X3 為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X3 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala；X2 為Ala；且X3 為Ala；
APTSSSTKKT QLQLEHLLL X1 LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X2 KF X3 MPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:30)，其中X1 為除Asp以外之任何胺基酸；其中X2 為除Phe以外之任何胺基酸；且其中X3 為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X3 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala；X2 為Ala；且X3 為Ala；
APTSSSTKKT QLQLE X1 LLL X2 LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X3 KF X4 MPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT (SEQ ID NO:31)，其中X1 為除His以外之任何胺基酸；其中X2 為除Asp以外之任何胺基酸；其中X3 為除Phe以外之任何胺基酸；且其中X4 為除Tyr以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X3 為Ala。在一些情況下，X4 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala；X2 為Ala；X3 為Ala；且X4 為Ala；
APTSSSTKKT QLQLEHLLL X1 LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X2 KF X3 MPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFC X4 SIIS TLT (SEQ ID NO:32)，其中X1 為除Asp以外之任何胺基酸；其中X2 為除Phe以外之任何胺基酸；其中X3 為除Tyr以外之任何胺基酸；且其中X4 為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X3 為Ala。在一些情況下，X4 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala；X2 為Ala；X3 為Ala；且X4 為Ala；
APTSSSTKKT QLQLE X1 LLL X2 LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X3 KF X4 MPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFC X5 SIIS TLT (SEQ ID NO:33)，其中X1 為除His以外之任何胺基酸；其中X2 為除Asp以外之任何胺基酸；其中X3 為除Phe以外之任何胺基酸；其中X4 為除Tyr以外之任何胺基酸；且其中X5 為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X3 為Ala。在一些情況下，X4 為Ala。在一些情況下，X5 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala；X2 為Ala；X3 為Ala；X4 為Ala；且X5 為Ala；及
APTSSSTKKT QLQLE X1 LLLD LQMILNGINN
YKNPKLTRML T X2 KFYMPKKA TELKHLQCLE EELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFC X3 SIIS TLT (SEQ ID NO:34)，其中X1 為除His以外之任何胺基酸；其中X2 為除Phe以外之任何胺基酸；且其中X3 為除Gln以外之任何胺基酸。在一些情況下，X1 為Ala。在一些情況下，X2 為Ala。在一些情況下，X3 為Ala。在一些情況下，X1 為Ala；X2 為Ala；且X3 為Ala。

額外多肽
本發明之多聚體多肽之多肽鏈可包括除以上所描述之彼等多肽以外的一或多個多肽。適合之額外多肽包括抗原決定基標籤及親和力結構域。一或多個額外多肽可包括在多聚體多肽之多肽鏈的N末端、多聚體多肽之多肽鏈的C末端或在多聚體多肽之多肽鏈內部。

抗原決定基標籤
適合之抗原決定基標籤包括但不限於血球凝集素(HA；例如，YPYDVPDYA (SEQ ID NO:35)；FLAG (例如，DYKDDDDK (SEQ ID NO:36)；c-myc (例如，EQKLISEEDL；SEQ ID NO:37)及其類似物。

親和力結構域
親和力結構域包括可與結合搭配物，例如，諸如固定於可用於鑑定或純化之固體載體上的結合搭配物相互作用的肽序列。編碼多個連續單一胺基酸，諸如組胺酸之DNA序列當與所表現之蛋白質融合時可用於藉由與樹脂管柱，諸如瓊脂糖鎳之高親和力結合對重組蛋白質進行一步式純化。例示性親和力結構域包括His5 (HHHHH) (SEQ ID NO:38)、HisX6 (HHHHHH) (SEQ ID NO:39)、C-myc (EQKLISEEDL) (SEQ ID NO:37)、Flag (DYKDDDDK) (SEQ ID NO:36)、StrepTag (WSHPQFEK) (SEQ ID NO:40)、血球凝集素(例如，HA標籤(YPYDVPDYA) (SEQ ID NO:35)、谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)、硫氧還原蛋白、纖維素結合結構域、RYIRS (SEQ ID NO:41)、Phe-His-His-Thr (SEQ ID NO:42)、幾丁質結合結構域、S肽、T7肽、SH2結構域、C端RNA標籤、WEAAAREACCRECCARA (SEQ ID NO:43)、金屬結合結構域(例如，鋅結合結構域或鈣結合結構域，諸如來自鈣結合蛋白，例如鈣調蛋白、肌鈣蛋白C、鈣調磷酸酶B、肌蛋白輕鏈、恢復蛋白、S-調控蛋白、視錐蛋白、VILIP、神經鈣蛋白、海馬鈣蛋白、頻率蛋白(frequenin)、鈣牽蛋白、鈣蛋白酶大次單元、S100蛋白、小白蛋白、鈣結合蛋白D9K、鈣結合蛋白D28K及鈣網膜蛋白之彼等鈣結合結構域)、內含肽、生物素、鏈黴親和素、MyoD、Id、白胺酸拉鏈序列及麥芽糖結合蛋白。

藥物結合物
本發明之多聚體多肽之多肽鏈可包含連接(例如，共價附接)至該多肽鏈之小分子藥物。舉例而言，在本發明之多聚體多肽包含Fc多肽時，該Fc多肽可包含共價連接之小分子藥物。在一些情況下，該小分子藥物為癌症化學治療劑，例如，細胞毒性劑。本發明之多聚體多肽之多肽鏈可包含連接(例如，共價附接)至該多肽鏈之細胞毒性劑。舉例而言，在本發明之多聚體多肽包含Fc多肽時，該Fc多肽可包含共價連接之細胞毒性劑。細胞毒性劑包括前藥。
藥物(例如，癌症化學治療劑)可直接或間接地連接至本發明之多聚體多肽之多肽鏈。舉例而言，在本發明之多聚體多肽包含Fc多肽時，藥物(例如，癌症化學治療劑)可直接或間接地連接至該Fc多肽。直接連接可包括直接連接至胺基酸側鏈。間接連接可為經由連接子連接。藥物(例如，癌症化學治療劑)可經由硫醚鍵、醯胺鍵、胺基甲酸酯鍵、二硫鍵或醚鍵而連接至本發明之多聚體多肽之多肽鏈(例如，Fc多肽)。
連接子包括可裂解連接子及非可裂解連接子。在一些情況下，連接子為蛋白酶可裂解連接子。適合之連接子包括例如肽(例如，2至10個胺基酸之長度；例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸之長度)、烷基鏈、聚(乙二醇)、二硫基、硫醚基、酸不穩定基團、光不穩定基團、肽酶不穩定基團及酯酶不穩定基團。適合連接子之非限制性實例為：i) N-琥珀醯亞胺基-[(N-馬來醯亞胺基丙醯胺基)-四乙二醇]酯(NHS-PEG4-馬來醯亞胺)；ii) 4-(2-吡啶基二硫)丁酸N-琥珀醯亞胺基酯(SPDB)；4-(2-吡啶基二硫)2-磺基丁酸N-琥珀醯亞胺酯(磺基-SPDB)；4-(2-吡啶基二硫)戊酸N-琥珀醯亞胺酯(SPP)；4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸N-琥珀醯亞胺酯) (LC-SMCC)；κ-馬來醯亞胺基十一酸N-琥珀醯亞胺酯(KMUA)；γ-馬來醯亞胺丁酸N-琥珀醯亞胺酯(GMBS)；ε-馬來醯亞胺基己酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(EMCS)；間馬來醯亞胺苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)；N-(α-馬來醯亞胺基乙醯氧基)-琥珀醯亞胺酯(AMAS)；6-(β-馬來醯亞胺基丙醯胺)己酸琥珀醯亞胺酯(SMPH)；4-(對馬來醯亞胺基苯基)丁酸N-琥珀醯亞胺酯(SMPB)；異氰酸N-(對馬來醯亞胺基苯基)酯(PMPI)；4-(2-吡啶基硫)戊酸N-琥珀醯亞胺酯(SPP)；(4-碘基-乙醯基胺基苯甲酸N-琥珀醯亞胺酯(SIAB)；6-馬來醯亞胺基己醯基(MC)；馬來醯亞胺基丙醯基(MP)；對胺基苯甲氧基羰基(PAB)；4-(馬來醯亞胺基甲基)環己烷甲酸N-琥珀醯亞胺酯(SMCC)；4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧基-(6-醯胺基已酸N-琥珀醯亞胺酯)、SMCC之「長鏈」類似物(LC-SMCC)；3-馬來醯亞胺基丙酸N-琥珀醯亞胺酯(BMPS)；碘乙酸N-琥珀醯亞胺酯(SIA)；溴乙酸N-琥珀醯亞胺酯(SBA)；及3-(溴乙醯胺基)丙酸N-琥珀醯亞胺酯(SBAP)。
可用諸如4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、磺基-SMCC、馬來醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、磺基-MBS或碘乙酸琥珀醯亞胺酯之交聯試劑，如文獻中所描述對多肽(例如，Fc多肽)進行修飾，以引入1至10個反應基團。隨後使經修飾之Fc多肽與含硫醇之細胞毒性劑反應以產生結合物。
舉例而言，在本發明之多聚體多肽包含Fc多肽時，包含Fc多肽之多肽鏈可具有式(A)-(L)-(C)，其中(A)為包含Fc多肽之多肽鏈；其中(L)若存在則為連接子；且其中(C)為細胞毒性劑。(L)若存在則連接(A)與(C)。在一些情況下，包含Fc多肽之多肽鏈可包含多於一個細胞毒性劑(例如，2、3、4或5或多於5個細胞毒性劑)。
適合之藥物包括例如雷帕黴素(rapamycin)。適合之藥物包括例如類視黃醇，諸如全反式視黃酸(ATRA)；維生素D3；維生素D3類似物；及其類似物。如以上所指出，在一些情況下，藥物為細胞毒性劑。細胞毒性劑為此項技術中已知的。適合之細胞毒性劑可為引起細胞死亡或誘導細胞死亡或以某種方式降低細胞活力之任何化合物，且包括例如類美登素(maytansinoid)及類美登素類似物、苯并二氮呯、類紫杉醇、CC-1065及CC-1065類似物、倍癌黴素(duocarmycin)及倍癌黴素類似物、烯二炔(諸如卡奇黴素(calicheamicin))、尾海兔素(dolastatin)及尾海兔素類似物(包括奧瑞斯他汀(auristatins))、茅屋黴素(tomaymycin)衍生物、來普黴素(leptomycin)衍生物、胺甲蝶呤(methotrexate)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、道諾黴素(daunorubicin)、阿黴素(doxorubicin)、長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C、氮芥苯丁酸及嗎啉基阿黴素。
舉例而言，在一些情況下，細胞毒性劑為抑制真核生物細胞中之微管形成的化合物。此種劑包括例如類美登素、苯并二氮呯、類紫杉醇、CC-1065、倍癌黴素、倍癌黴素類似物、卡奇黴素、尾海兔素、尾海兔素類似物、奧瑞斯他汀、茅屋黴素及來普黴素或上述任一者之前藥。類美登素化合物包括例如N(2')-脫乙醯基-N(2')-(3-巰基-1-側氧基丙基)-美登素(DM1)；N(2')-脫乙醯基-N(2')-(4-巰基-1-側氧基戊基)-美登素(DM3)；及N(2')-脫乙醯基-N2-(4-巰基-4-甲基-1-側氧基戊基)-美登素(DM4)。苯并二氮呯包括例如吲哚啉并苯并二氮呯及噁唑啉并苯并二氮呯。
細胞毒性劑包括紫杉醇；細胞分裂抑素B；短桿菌肽D；溴化乙錠；吐根鹼(emetine)；絲裂黴素(mitomycin)；伊妥普賽(etoposide)；替尼泊苷(tenoposide)；長春新鹼；長春花鹼；秋水仙鹼(colchicin)；阿黴素；道諾黴素；二羥基炭疽菌素二酮；美登素或其類似物或衍生物；奧瑞斯他汀或其功能肽類似物或衍生物；尾海兔素10或15或其類似物；伊立替康(irinotecan)或其類似物；米托蒽醌(mitoxantrone)；光神黴素(mithramycin)；放線菌素D；1-去氫睾酮；糖皮質素；普魯卡因(procaine)；丁卡因(tetracaine)；利多卡因(lidocaine)；普萘洛爾(propranolol)；嘌呤黴素(puromycin)；卡奇黴素或其類似物或衍生物；抗代謝物；6-巰基嘌呤；6-硫鳥嘌呤；阿糖胞苷；氟達拉濱(fludarabin)；5-氟尿嘧啶；達卡巴嗪(decarbazine)；羥基脲；天冬醯胺酶；吉西他濱(gemcitabine)；克拉屈濱(cladribine)；烷基化劑；鉑衍生物；倍癌黴素A；倍癌黴素SA；拉奇黴素(rachelmycin) (CC-1065)或其類似物或衍生物；抗生素；吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮呯(PDB)；白喉毒素；篦麻毒素；霍亂毒素；類志賀(Shiga)毒素；LT毒素；C3毒素；志賀毒素；百日咳毒素；破傷風毒素；大豆鮑曼-比爾克蛋白酶抑制劑(Bowman-Birk protease inhibitor)；假單胞菌外毒素；蘆苔素(alorin)；肥皂草素；蒴蓮根毒素；甘丙胺肽；相思子毒素A鏈；蒴蓮根毒素A鏈；α-帚麴菌素；油桐(Aleurites fordii )蛋白；石竹素蛋白；美國商陸(Phytolacca americana )蛋白；苦瓜抑制劑；麻瘋樹毒素；巴豆毒素；肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑；白樹毒素；米托黴素；侷限麴菌素；酚黴素；伊諾黴素毒素；核糖核酸酶(RNase)；去氧核糖核酸酶I (DNase I)；葡萄球菌腸毒素A；美洲商陸抗病毒蛋白；白喉毒素；及假單胞菌內毒素。

產生多聚體 T 細胞調節多肽之方法
本發明提供一種獲得包含一或多個對同源共免疫調節多肽展現相較於相應親本野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力而言較低之親和力的變異免疫調節多肽的TMMP的方法，該方法包括：A)產生包括多個成員之TMMP庫，其中各成員包含：a)第一多肽，該第一多肽包含：i)抗原決定基；及ii)第一主要MHC多肽；及b)第二多肽，該第二多肽包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況存在之Ig Fc多肽或非Ig支架，其中各成員在該第一多肽、該第二多肽或該第一多肽與該第二多肽兩者上包含不同的變異免疫調節多肽；B)測定該庫之各成員對同源共免疫調節多肽之親和力；及C)選擇對同源共免疫調節多肽展現降低之親和力的成員。在一些情況下，藉由生物層干涉術(BLI)使用經純化之TMMP庫成員及同源共免疫調節多肽來測定親和力。BLI方法對熟習此項技術者為熟知的。BLI分析如以上所描述。參見例如Lad等人(2015) J. Biomol. Screen. 20(4): 498-507；以及Shah及Duncan (2014)J. Vis. Exp. 18:e51383。
本發明提供一種獲得對T細胞展現選擇性結合之TMMP的方法，該方法包括：A) 產生包含多個成員之TMMP庫，其中各成員包含：a)第一多肽，該第一多肽包含i)抗原決定基；及ii)第一MHC多肽；以及b)第二多肽，該第二多肽包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架，其中各成員在該第一多肽、該第二多肽或該第一多肽與該第二多肽兩者上包含不同的變異免疫調節多肽，其中該變異免疫調節多肽相對於親本野生型免疫調節多肽在胺基酸序列方面有1個胺基酸至10個胺基酸不同；B)使TMMP庫成員與靶T細胞接觸，該靶T細胞在其表面上表現：i)結合該親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合該抗原決定基之T細胞受體，其中該TMMP庫成員包含抗原決定基標籤，使得該TMMP庫成員結合至該靶T細胞；C)使該結合至靶T細胞之TMMP庫成員與結合至該抗原決定基標籤之經螢光標記之結合劑接觸，從而產生TMMP庫成員/靶T細胞/結合劑複合物；D)使用流式細胞術量測TMMP庫成員/靶T細胞/結合劑複合物之平均螢光強度(MFI)，其中在TMMP庫成員之濃度範圍內量測之MFI提供親和力及表觀親合力之量度；及E)選擇與TMMP庫成員與對照T細胞之結合相比選擇性地結合靶T細胞之TMMP庫成員，其包含：i)結合親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合至除TMMP庫成員中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基的T細胞受體。在一些情況下，將鑑定為選擇性地結合至靶T細胞之TMMP庫成員自庫中分離。
在一些情況下，親本野生型免疫調節多肽及同源共免疫調節多肽配對係選自：
IL-2與IL-2受體；
4-1BBL與4-1BB；
PD-L1與PD-1；
CD70與CD27；
TGFβ與TGFβ受體；
CD80與CD28；
CD86與CD28；
OX40L與OX40；
FasL與Fas；
ICOS-L與ICOS；
ICAM與LFA-1；
JAG1與Notch；
JAG1與CD46；
CD80與CTLA4；及
CD86與CTLA4。
本發明提供一種獲得包含一或多個對同源共免疫調節多肽展現與相應親本野生型免疫調節多肽對共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽的TMMP的方法，該方法包括自包括複數個成員之TMMP庫中選擇對同源共免疫調節多肽展現降低之親和力的成員，其中該複數個成員包含：a)第一多肽，該第一多肽包含：i)抗原決定基；及ii)第一MHC多肽；以及b)第二多肽，該第二多肽包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況存在之Ig Fc多肽或非Ig支架，其中該庫之成員包含該第一多肽、該第二多肽或該第一多肽與該第二多肽兩者中所存在之複數個變異免疫調節多肽。在一些情況下，選擇步驟包括使用生物層干涉術測定TMMP庫成員與同源共免疫調節多肽之間的結合親和力。在一些情況下，TMMP如以上所描述。
在一些情況下，該方法進一步包括：a)使所選TMMP庫成員與靶T細胞接觸，該靶T細胞在其表面上表現：i)結合親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合至該抗原決定基之T細胞受體，其中該TMMP庫成員包含抗原決定基標籤，使得該TMMP庫成員結合至該靶T細胞；b)使結合至該靶T細胞之所選TMMP庫成員與結合至該抗原決定基標籤之經螢光標記之結合劑接觸，從而產生所選TMMP庫成員/靶T細胞/結合劑複合物；及c)使用流式細胞術量測所選TMMP庫成員/靶T細胞/結合劑複合物之平均螢光強度(MFI)，其中在所選TMMP庫成員之濃度範圍內量測之MFI提供親和力及表觀親合力之量度。與TMMP庫成員與對照T細胞之結合相比選擇性地結合靶T細胞且包含以下各物之所選TMMP庫成員：i)結合親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合至除TMMP庫成員中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基的T細胞受體，鑑定為選擇性地結合至該靶T細胞。在一些情況下，結合劑為對抗原決定基標籤具特異性之抗體。在一些情況下，變異免疫調節多肽與相應親本野生型免疫調節多肽相比包含1至20個胺基酸取代(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代)。在一些情況下，TMMP包含兩個變異免疫調節多肽。在一些情況下，該兩個變異免疫調節多肽包含相同的胺基酸序列。在一些情況下，第一多肽包含該兩個變異免疫調節多肽之一，且其中第二多肽包含該兩個變異免疫調節多肽中之第二個。在一些情況下，該兩個變異免疫調節多肽處於TMMP之同一多肽鏈上。在一些情況下，該兩個變異免疫調節多肽處於TMMP之第一多肽上。在一些情況下，該兩個變異免疫調節多肽處於TMMP之第二多肽上。
在一些情況下，該方法進一步包括自該庫中分離所選TMMP庫成員。在一些情況下，該方法進一步包括提供包含編碼所選TMMP庫成員之核苷酸序列的核酸。在一些情況下，該核酸存在於重組表現載體中。在一些情況下，該核苷酸序列可操作地連接至在真核生物細胞中具有功能性之轉錄控制元件。在一些情況下，該方法進一步包括將該核酸引入真核生物宿主細胞中，及在液體培養基中培養該細胞以便合成所編碼之TMMP。在一些情況下，該方法進一步包括自該細胞或自包含該細胞之液體培養基中分離所合成之所選TMMP庫成員。在一些情況下，所選TMMP庫成員包含Ig Fc多肽。在一些情況下，該方法進一步包括使藥物與Ig Fc多肽結合。在一些情況下，該藥物為選自類美登素、苯并二氮呯、類紫杉醇、CC-1065、倍癌黴素、倍癌黴素類似物、卡奇黴素、尾海兔素、尾海兔素類似物、奧瑞斯他汀、茅屋黴素及來普黴素或上述任一者之前藥的細胞毒性劑。在一些情況下，該藥物為類視黃醇。在一些情況下，親本野生型免疫調節多肽與同源共免疫調節多肽係選自：IL-2與IL-2受體；4-1BBL與4-1BB；PD-L1與PD-1；CD70與CD27；；TGFβ與TGFβ受體；CD80與CD28；CD86與CD28；OX40L與OX40；FasL與Fas；ICOS-L與ICOS；ICAM與LFA-1；JAG1與Notch；JAG1與CD46；CD80與CTLA4；及CD86與CTLA4。
本發明提供一種獲得包含一或多個對同源共免疫調節多肽展現與相應親本野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽的TMMP的方法，該方法包括：A)提供包括複數個成員之TMMP庫，其中該複數個成員包含：a)第一多肽，該第一多肽包含：i)抗原決定基；及ii)第一MHC多肽；及b)第二多肽，該第二多肽包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況Ig Fc多肽或非Ig支架，其中該庫之成員包含該第一多肽、該第二多肽或該第一多肽與該第二多肽兩者中所存在之複數個變異免疫調節多肽；及B)自該庫中選擇對同源共免疫調節多肽展現降低之親和力的成員。在一些情況下，選擇步驟包括使用生物層干涉術測定TMMP庫成員與同源共免疫調節多肽之間的結合親和力。在一些情況下，該TMMP如以上所描述。
在一些情況下，該方法進一步包括：a)使所選TMMP庫成員與靶T細胞接觸，該靶T細胞在其表面上表現：i)結合親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合至該抗原決定基之T細胞受體，其中該TMMP庫成員包含抗原決定基標籤，使得該TMMP庫成員結合至靶T細胞；b)使結合至該靶T細胞之所選TMMP庫成員與結合至該抗原決定基標籤之經螢光標記之結合劑接觸，從而產生所選TMMP庫成員/靶T細胞/結合劑複合物；及c)使用流式細胞術量測所選TMMP庫成員/靶T細胞/結合劑複合物之平均螢光強度(MFI)，其中在所選TMMP庫成員之濃度範圍內量測之MFI提供親和力及表觀親合力之量度。與TMMP庫成員與對照T細胞之結合相比選擇性地結合該靶T細胞且包含以下各物之所選TMMP庫成員：i)結合親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合至除TMMP庫成員中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基的T細胞受體，鑑定為選擇性地結合至靶T細胞。在一些情況下，該結合劑為對抗原決定基標籤具特異性之抗體。在一些情況下，該變異免疫調節多肽與相應親本野生型免疫調節多肽相比包含1至20個胺基酸取代(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代)。在一些情況下，該TMMP包含兩個變異免疫調節多肽。在一些情況下，該兩個變異免疫調節多肽包含相同的胺基酸序列。在一些情況下，該第一多肽包含該兩個變異免疫調節多肽之一，且其中該第二多肽包含該兩個變異免疫調節多肽中之第二個。在一些情況下，該兩個變異免疫調節多肽處於該TMMP之同一多肽鏈上。在一些情況下，該兩個變異免疫調節多肽處於該TMMP之第一多肽上。在一些情況下，該兩個變異免疫調節多肽處於該TMMP之第二多肽上。
在一些情況下，該方法進一步包括自該庫中分離所選TMMP庫成員。在一些情況下，該方法進一步包括提供包含編碼所選TMMP庫成員之核苷酸序列的核酸。在一些情況下，該核酸存在於重組表現載體中。在一些情況下，該核苷酸序列可操作地連接至在真核生物細胞中具有功能性之轉錄控制元件。在一些情況下，該方法進一步包括將該核酸引入真核生物宿主細胞中，及在液體培養基中培養該細胞以便合成所編碼之所選TMMP庫成員。在一些情況下，該方法進一步包括自該細胞或自包含該細胞之液體培養基中分離所合成之所選TMMP庫成員。在一些情況下，所選TMMP庫成員包含Ig Fc多肽。在一些情況下，該方法進一步包括使藥物與Ig Fc多肽結合。在一些情況下，該藥物為選自類美登素、苯并二氮呯、類紫杉醇、CC-1065、倍癌黴素、倍癌黴素類似物、卡奇黴素、尾海兔素、尾海兔素類似物、奧瑞斯他汀、茅屋黴素及來普黴素或上述任一者之前藥的細胞毒性劑。在一些情況下，該藥物為類視黃醇。在一些情況下，親本野生型免疫調節多肽與同源免疫調節多肽係選自IL-2與IL-2受體；4-1BBL與4-1BB；PD-L1與PD-1；TGFβ與TGFβ受體；CD80與CD28；CD86與CD28；OX40L與OX40；FasL與Fas；ICOS-L與ICOS；CD70與CD27；ICAM與LFA-1；JAG1與Notch；JAG1與CD46；CD80與CTLA4；及CD86與CTLA4。

核酸
本發明提供一種包含編碼本發明之TMMP之核苷酸序列的核酸。本發明提供一種包含編碼本發明之TMMP之核苷酸序列的核酸。
本發明提供包含編碼本發明之多聚體多肽之核苷酸序列的核酸。在一些情況下，本發明之多聚體多肽之個別多肽鏈係於獨立的核酸中編碼。在一些情況下，本發明之多聚體多肽之所有多肽鏈均於單一核酸中編碼。在一些情況下，第一核酸包含編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽的核苷酸序列；且第二核酸包含編碼本發明之多聚體多肽之第二多肽的核苷酸序列。在一些情況下，單一核酸包含編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽及本發明之多聚體多肽之第二多肽的核苷酸序列。

編碼多聚體多肽之個別多肽鏈的獨立的核酸
本發明提供包含編碼本發明之多聚體多肽之核苷酸序列的核酸。如以上所指出，在一些情況下，本發明之多聚體多肽之個別多肽鏈係於獨立的核酸中編碼。在一些情況下，編碼本發明之多聚體多肽之獨立的多肽鏈之核苷酸序列可操作地連接至轉錄控制元件，例如，啟動子，諸如在真核生物細胞中具有功能性之啟動子，其中該啟動子可為組成性啟動子或誘導性啟動子。
本發明提供第一核酸及第二核酸，其中該第一核酸包含編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽的核苷酸序列，其中該第一多肽自N末端至C末端依序包含：a)抗原決定基(例如，T細胞抗原決定基)；b)第一MHC多肽；及c) 免疫調節多肽(例如，如以上所描述之降低親和力變異體)；且其中該第二核酸包含編碼本發明之多聚體多肽之第二多肽的核苷酸序列，其中該第二多肽自N末端至C末端依序包含：a)第二MHC多肽；及b) Ig Fc多肽。適合之T細胞抗原決定基、MHC多肽、免疫調節多肽及Ig Fc多肽如以上所描述。在一些情況下，編碼該第一多肽及該第二多肽之核苷酸序列可操作地連接至轉錄控制元件。在一些情況下，轉錄控制元件為在真核生物細胞中具有功能性之啟動子。在一些情況下，核酸存在於獨立的表現載體中。
本發明提供第一核酸及第二核酸，其中該第一核酸包含編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽的核苷酸序列，其中該第一多肽自N末端至C末端依序包含：a)抗原決定基(例如，T細胞抗原決定基)；及b)第一MHC多肽；且其中該第二核酸包含編碼本發明之多聚體多肽之第二多肽的核苷酸序列，其中該第二多肽自N末端至C末端依序包含：a)免疫調節多肽(例如，如以上所描述之降低親和力變異體)；b)第二MHC多肽；及c) Ig Fc多肽。適合之T細胞抗原決定基、MHC多肽、免疫調節多肽及Ig Fc多肽如以上所描述。在一些情況下，編碼第一多肽及第二多肽之核苷酸序列可操作地連接至轉錄控制元件。在一些情況下，轉錄控制元件為在真核生物細胞中具有功能性之啟動子。在一些情況下，核酸存在於獨立的表現載體中。

編碼多聚體多肽中所存在之兩個或更多個多肽之核酸
本發明提供一種包含編碼本發明之多聚體多肽之至少第一多肽及第二多肽之核苷酸序列的核酸。在一些情況下，在本發明之多聚體多肽包括第一多肽、第二多肽及第三多肽時，核酸包括編碼該第一多肽、第二多肽及第三多肽之核苷酸序列。在一些情況下，編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽及第二多肽之核苷酸序列包括插入編碼第一多肽之核苷酸序列與編碼第二多肽之核苷酸序列之間的蛋白水解可裂解連接子。在一些情況下，編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽及第二多肽之核苷酸序列包括插入編碼第一多肽之核苷酸序列與編碼第二多肽之核苷酸序列之間的內部核糖體進入位點(IRES)。在一些情況下，編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽及第二多肽之核苷酸序列包括插入編碼第一多肽之核苷酸序列與編碼第二多肽之核苷酸序列之間的核糖體跳躍信號(或順式作用水解酶元件，CHYSEL)。核酸之實例如以下所描述，其中蛋白水解可裂解連接子提供於編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽及第二多肽之核苷酸序列之間；在此等實施例中之任一者中，可使用IRES或核糖體跳躍信號來替代編碼蛋白水解可裂解連接子之核苷酸序列。
在一些情況下，第一核酸(例如，重組表現載體、mRNA、病毒RNA等)包含編碼本發明之多聚體多肽之第一多肽鏈的核苷酸序列；且第二核酸(例如，重組表現載體、mRNA、病毒RNA等)包含編碼本發明之多聚體多肽之第二多肽鏈的核苷酸序列。在一些情況下，編碼第一多肽之核苷酸序列及編碼第二多肽之第二核苷酸序列各自可操作地連接至轉錄控制元件，例如，啟動子，諸如在真核生物細胞中具有功能性之啟動子，其中該啟動子可為組成性啟動子或誘導性啟動子。
本發明提供包含編碼重組多肽之核苷酸序列的核酸，其中該重組多肽自N末端至C末端依序包含：a)抗原決定基(例如，T細胞抗原決定基)；b)第一MHC多肽；c)免疫調節多肽(例如，如以上所描述之降低親和力變異體)；d)蛋白水解可裂解連接子；e)第二MHC多肽；及f)免疫球蛋白(Ig) Fc多肽。本發明提供包含編碼重組多肽之核苷酸序列的核酸，其中該重組多肽自N末端至C末端依序包含：a)第一前導肽；b)該抗原決定基；c)該第一MHC多肽；d)該免疫調節多肽(例如，如以上所描述之降低親和力變異體)；e)該蛋白水解可裂解連接子；f)第二前導肽；g)第二MHC多肽；及h)該Ig Fc多肽。本發明提供包含編碼重組多肽之核苷酸序列的核酸，其中該重組多肽自N末端至C末端依序包含：a)抗原決定基；b)第一MHC多肽；c)蛋白水解可裂解連接子；d)免疫調節多肽(例如，如以上所描述之降低親和力變異體)；e)第二MHC多肽；及f) Ig Fc多肽。在一些情況下，該第一前導肽及該第二前導肽為β2-M前導肽。在一些情況下，核苷酸序列可操作地連接至轉錄控制元件。在一些情況下，轉錄控制元件為在真核生物細胞中具有功能性之啟動子。
適合之MHC多肽如以上所描述。在一些情況下，該第一MHC多肽為β2-微球蛋白多肽；且其中該第二MHC多肽為I類MHC重鏈多肽。在一些情況下，該β2-微球蛋白多肽包含與圖4中所描繪之β2M胺基酸序列具有至少85%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽為HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F、HLA-G、HLA-K或HLA-L重鏈。在一些情況下，該I類MHC重鏈多肽包含與圖3A至圖3C中之任一者中所描繪之胺基酸序列具有至少85%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。在一些情況下，該第一MHC多肽為II類MHC α鏈多肽；且其中該第二MHC多肽為II類MHC β鏈多肽。
適合之Fc多肽如以上所描述。在一些情況下，Ig Fc多肽為IgG1 Fc多肽、IgG2 Fc多肽、IgG3 Fc多肽、IgG4 Fc多肽、IgA Fc多肽或IgM Fc多肽。在一些情況下，Ig Fc多肽包含與圖2A至圖2G中所描繪之胺基酸序列具有至少85%胺基酸序列一致性的胺基酸序列。
適合之免疫調節多肽如以上所描述。
適合之蛋白水解可裂解連接子如以上所描述。在一些情況下，該蛋白水解可裂解連接子包含選自以下之胺基酸序列：a) LEVLFQGP (SEQ ID NO:44)；b) ENLYTQS (SEQ ID NO:45)；c) DDDDK (SEQ ID NO:46)；d) LVPR (SEQ ID NO:47)；及e) GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID NO:48)。
在一些情況下，處於該抗原決定基與該第一MHC多肽之間的連接子包含第一Cys殘基，且該第二MHC多肽包含胺基酸取代以提供第二Cys殘基，使得該第一Cys殘基及該第二Cys殘基在該連接子與該第二MHC多肽之間提供二硫鍵連接。在一些情況下，第一MHC多肽包含胺基酸取代以提供第一Cys殘基，且第二MHC多肽包含胺基酸取代以提供第二Cys殘基，使得該第一Cys殘基及該第二Cys殘基在該第一MHC多肽與該第二MHC多肽之間提供二硫鍵連接。

重組表現載體
本發明提供包含本發明之核酸的重組表現載體。在一些情況下，重組表現載體為非病毒載體。在一些情況下，重組表現載體為病毒構築體，例如重組腺相關病毒構築體(參見例如美國專利第7,078,387號)、重組腺病毒構築體、重組慢病毒構築體、重組反轉錄病毒構築體、非整合病毒載體等。
適合之表現載體包括但不限於病毒載體(例如基於牛痘病毒之病毒載體；基於脊髓灰質炎病毒之病毒載體；基於腺病毒之病毒載體(參見例如Li等人, Invest Opthalmol Vis Sci 35:2543 2549, 1994；Borras等人, Gene Ther 6:515 524, 1999；Li及Davidson, PNAS 92:7700 7704, 1995；Sakamoto等人, H Gene Ther 5:1088 1097, 1999；WO 94/12649、WO 93/03769；WO 93/19191；WO 94/28938；WO 95/11984及WO 95/00655)；基於腺相關病毒之病毒載體(參見例如Ali等人, Hum Gene Ther 9:81 86, 1998；Flannery等人, PNAS 94:6916 6921, 1997；Bennett等人, Invest Opthalmol Vis Sci 38:2857 2863, 1997；Jomary等人, Gene Ther 4:683 690, 1997；Rolling等人, Hum Gene Ther 10:641 648, 1999；Ali等人, Hum Mol Genet 5:591 594, 1996；Srivastava, WO 93/09239；Samulski等人, J. Vir. (1989) 63:3822-3828；Mendelson等人, Virol. (1988) 166:154-165；及Flotte等人, PNAS (1993) 90:10613-10617)；基於SV40之病毒載體；基於單純疱疹病毒之病毒載體；基於人類免疫缺乏病毒之病毒載體(參見例如Miyoshi等人, PNAS 94:10319 23, 1997；Takahashi等人, J Virol 73:7812 7816, 1999)；反轉錄病毒載體(例如鼠類白血病病毒、脾臟壞死病毒及來源於諸如勞氏肉瘤病毒、哈維氏肉瘤病毒、禽白血病病毒、慢病毒、人類免疫缺乏病毒、骨髓增殖性肉瘤病毒及乳腺瘤病毒之反轉錄病毒的載體)；及其類似物。
眾多適合之表現載體對熟習此項技術者為已知的，且許多可得自市面。提供以下載體以例如用於真核生物宿主細胞：pXT1、pSG5 (Stratagene)、pSVK3、pBPV、pMSG及pSVLSV40 (Pharmacia)。然而，可使用任何其他載體，只要其與宿主細胞相容即可。
視所利用之宿主/載體系統而定，眾多適合之轉錄及轉譯控制元件，包括組成性啟動子及誘導性啟動子、轉錄增強子元件、轉錄終止子等中之任一者均可用於表現載體(參見例如Bitter等人(1987)Methods in Enzymology , 153:516-544)。
在一些情況下，編碼DNA靶向性RNA及/或定點修飾多肽之核苷酸序列可操作地連接至控制元件，例如轉錄控制元件，諸如啟動子。轉錄控制元件可在真核生物細胞(例如哺乳動物細胞)或原核生物細胞(例如細菌細胞或古細菌細胞)中具有功能性。在一些情況下，編碼DNA靶向性RNA及/或定點修飾多肽之核苷酸序列可操作地連接至多個控制元件，從而允許在原核生物細胞及真核生物細胞中表現編碼DNA靶向性RNA及/或定點修飾多肽之核苷酸序列。
適合之真核生物啟動子(在真核生物細胞中具有功能性之啟動子)的非限制性實例包括來自巨細胞病毒(CMV)立即早期、單純疱疹病毒(HSV)胸苷激酶、早期及晚期SV40、反轉錄病毒之長末端重複單元(LTR)及小鼠金屬硫蛋白-I之彼等啟動子。適當載體及啟動子之選擇完全在一般熟習此項技術者之能力範圍內。表現載體亦可含有用於轉譯起始之核糖體結合位點，及轉錄終止子。表現載體亦可包括適用於增強表現之序列。

經基因修飾之宿主細胞
本發明提供一種經基因修飾之宿主細胞，其中該宿主細胞經本發明之核酸加以基因修飾。
適合之宿主細胞包括真核生物細胞，諸如酵母細胞、昆蟲細胞及哺乳動物細胞。在一些情況下，宿主細胞為哺乳動物細胞株之細胞。適合之哺乳動物細胞株包括人類細胞株、非人類靈長類動物細胞株、囓齒動物(例如小鼠、大鼠)細胞株及其類似物。適合之哺乳動物細胞株包括但不限於HeLa細胞(例如，美國典型菌種保藏中心(ATCC)編號CCL-2)、CHO細胞(例如ATCC編號CRL9618、CCL61、CRL9096)、293細胞(例如，ATCC編號CRL-1573)、Vero細胞、NIH 3T3細胞(例如，ATCC編號CRL-1658)、Huh-7細胞、BHK細胞(例如，ATCC編號CCL10)、PC12細胞(ATCC編號CRL1721)、COS細胞、COS-7細胞(ATCC編號CRL1651)、RAT1細胞、小鼠L細胞(ATCC編號CCLI.3)、人類胚胎腎(HEK)細胞(ATCC編號CRL1573)、HLHepG2細胞及其類似物。
在一些情況下，宿主細胞為已經基因修飾以使其不合成內源MHC β2-M之哺乳動物細胞。
在一些情況下，宿主細胞為已經基因修飾以使其不合成內源I類MHC重鏈之哺乳動物細胞。

組合物
本發明提供包含本發明之TMMP (synTac)之組合物，包括醫藥組合物。本發明提供包含本發明之多聚體多肽之組合物，包括醫藥組合物。本發明提供包含本發明之核酸或重組表現載體之組合物，包括醫藥組合物。

包含多聚體多肽之組合物
本發明之組合物可包含本發明之多聚體多肽以及以下一或多者：鹽，例如NaCl、MgCl2 、KCl、MgSO4 等；緩衝液，例如Tris緩衝液、N-(2-羥乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸) (HEPES)、2-(N-嗎啉基)乙磺酸(MES)、2-(N-嗎啉基)乙磺酸鈉鹽(MES)、3-(N-嗎啉基)丙磺酸(MOPS)、N-參[羥甲基]甲基-3-胺基丙磺酸(TAPS)等；增溶劑；清潔劑，例如非離子洗滌劑，諸如Tween-20等；蛋白酶抑制劑；甘油；及其類似物。
該組合物可包含醫藥學上可接受之賦形劑，其中多種為此項技術中已知的且已知無需在本文中詳細論述。醫藥學上可接受之賦形劑已詳盡描述於多種出版物中，包括例如「Remington: The Science and Practice of Pharmacy」, 第19版(1995)或最新版本, Mack Publishing Co；A. Gennaro (2000) 「Remington: The Science and Practice of Pharmacy」, 第20版, Lippincott, Williams, & Wilkins；Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (1999) H.C. Ansel等人編, 第7版, Lippincott, Williams, & Wilkins；及Handbook of Pharmaceutical Excipients (2000) A.H. Kibbe等人編, 第3版, Amer. Pharmaceutical Assoc。
醫藥組合物可包含本發明之多聚體多肽及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些情況下，標的醫藥組合物將適合於投與個體，例如，將為無菌的。舉例而言，在一些情況下，標的醫藥組合物將適合於投與人類個體，例如，其中該組合物為無菌的且不含可偵測之熱原質及/或其他毒素。
蛋白質組合物可包含其他組分，諸如醫藥級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、鎂、碳酸鹽及其類似物。該等組合物在需要接近生理條件時可含有醫藥學上可接受之輔助物質，諸如pH值調節及緩衝劑、毒性調節劑及其類似物，例如乙酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、乳酸鈉、鹽酸鹽、硫酸鹽、溶劑合物(例如，混合離子鹽、水、有機物)、水合物(例如，水)及其類似物。
舉例而言，組合物可包括水溶液、粉劑形式、顆粒、錠劑、丸劑、栓劑、膠囊、懸浮液、噴霧劑及其類似物。可根據以下所描述之各種投與途徑來調配組合物。
在本發明之多聚體多肽作為可注射劑直接投與組織中(例如，經皮下、腹膜內、肌肉內及/或靜脈內)時，可將調配物提供為即用劑型、或為非水性形式(例如可復原型儲存穩定粉劑)或水性形式，諸如由醫藥學上可接受之載劑及賦形劑構成之液體。亦可提供含蛋白質之調配物以便在投與後增強標的蛋白質之血清半衰期。舉例而言，可將蛋白質提供於脂質體調配物中，製備為膠體，或用於延長血清半衰期之其他習知技術。多種方法可用於製備脂質體，如例如Szoka等人, 1980Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9:467、美國專利第4,235,871號、第4,501,728號及第4,837,028號中所描述。該等製劑亦可呈控制釋放或緩慢釋放形式提供。
適用於非經腸投與之調配物的其他實例包括等滲無菌注射溶液、抗氧化劑、抑細菌劑及致使調配物與預定受體之血液等滲的溶質、懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑及防腐劑。舉例而言，標的醫藥組合物可存在於容器，例如無菌容器，諸如注射器中。調配物可存在於單位劑量或多劑量密封容器中，諸如安瓿及小瓶，且可儲存在冷凍乾燥(凍乾)條件下，從而僅需要在臨使用前添加無菌液體賦形劑，例如注射用水。可由無菌粉劑、顆粒劑及錠劑來製備臨時注射溶液及懸浮液。
調配物中之本發明多聚體多肽之濃度可廣泛變化(例如，以重量計低於約0.1%，通常為或至少為約2%至高達20%至50%或更高)，且通常將主要基於流體體積、黏度及基於患者之因素，根據所選特定投與模式及患者之需要加以選擇。
本發明提供一種包含本發明組合物，例如液體組合物之容器。容器可為例如注射器、安瓿及其類似物。在一些情況下，容器為無菌的。在一些情況下，容器及組合物兩者皆為無菌的。
本發明提供包含本發明之TMMP之組合物，包括醫藥組合物。組合物可包含：a)本發明之TMMP；及b)如以上針對多聚體多肽所描述之賦形劑。在一些情況下，賦形劑為醫藥學上可接受之賦形劑。
在一些情況下，本發明之T細胞多聚體多肽存在於液體組合物中。因而，本發明提供包含本發明之T細胞多聚體多肽之組合物(例如，液體組合物，包括醫藥組合物)。在一些情況下，本發明之組合物包含：a)本發明之T細胞多聚體多肽；及b)生理鹽水(例如，0.9% NaCl)。在一些情況下，組合物為無菌的。在一些情況下，組合物適合於投與人類個體，例如在組合物為無菌的且不含可偵測之熱原質及/或其他毒素時。因而，本發明提供一種組合物，其包含：a)本發明之T細胞多聚體多肽；及b)生理鹽水(例如，0.9% NaCl)，其中該組合物為無菌的且不含可偵測之熱原質及/或其他毒素。

包含核酸或重組表現載體之組合物
本發明提供包含本發明之核酸或重組表現載體之組合物，例如醫藥組合物。多種醫藥學上可接受之賦形劑為此項技術中已知的且無需在本文中詳細論述。醫藥學上可接受之賦形劑已詳盡描述於多種出版物中，包括例如A. Gennaro (2000) 「Remington: The Science and Practice of Pharmacy」, 第20版, Lippincott, Williams, & Wilkins；Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (1999) H. C. Ansel等人編, 第7版, Lippincott, Williams, & Wilkins；及Handbook of Pharmaceutical Excipients (2000) A. H. Kibbe等人編, 第3版, Amer. Pharmaceutical Assoc。
本發明之組合物可包括：a)包含編碼TMMP之核苷酸序列的一或多種核酸或者一或多種重組表現載體；及b)以下各物中之一或多種：緩衝劑、表面活性劑、抗氧化劑、親水性聚合物、糊精、螯合劑、懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑、抑菌劑、潤濕劑及防腐劑。適合之緩衝劑包括但不限於諸如N,N-雙(2-羥乙基)-2-胺基乙磺酸(BES)、雙(2-羥乙基)胺基-參(羥甲基)甲烷(BIS-Tris)、N-(2-羥乙基)哌嗪-N'3-丙磺酸(EPPS或HEPPS)、甘胺醯甘胺酸、N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)、3-(N-嗎啉基)丙磺酸(MOPS)、哌嗪-N,N'-雙(2-乙烷-磺酸) (PIPES)、碳酸氫鈉、3-(N-參(羥甲基)-甲基-胺基)-2-羥基-丙磺酸) TAPSO、(N-參(羥甲基)甲基-2-胺基乙磺酸(TES)、N-參(羥甲基)甲基-甘胺酸(Tricine)、參(羥甲基)-胺基甲烷(Tris)等)。適合之鹽包括例如NaCl、MgCl2 、KCl、MgSO4 等。
本發明之醫藥調配物可包括約0.001%至約90% (w/w)之量的本發明之核酸或重組表現載體。以下在描述調配物時，「標的核酸或重組表現載體」應理解為包括本發明之核酸或重組表現載體。舉例而言，在一些情況下，標的調配物包含本發明之核酸或重組表現載體。
標的核酸或重組表現載體可與其他化合物或化合物混合物混合、囊封、結合或以其他方式締合；此種化合物可包括例如脂質體或受體靶向性分子。標的核酸或重組表現載體可與一或多種有助於攝取、分佈及/或吸收之組分組合於調配物中。
標的核酸或重組表現載體組合物可調配成許多可能劑型中之任一種，諸如但不限於錠劑、膠囊劑、凝膠膠囊劑、液體糖漿、軟凝膠劑、栓劑及灌腸劑。標的核酸或重組表現載體組合物亦可調配為處於水性、非水性或混合性介質中之懸浮液。水性懸浮液可更含有增加懸浮液之黏度的物質，包括例如羧甲基纖維素鈉鹽、山梨糖醇及/或聚葡萄糖。懸浮液亦可含有穩定劑。
包含標的核酸或重組表現載體之調配物可為脂質體調配物。如本文中所使用，術語「脂質體」意謂由排列在一或多個球形雙層中之兩親脂質構成的囊泡。脂質體為具有由親脂性材料形成之膜及含有欲遞送之組合物之水性內部的單層或多層囊泡。陽離子脂質體為可與帶負電DNA分子相互作用以形式穩定複合體之帶正電脂質體。據信pH值敏感性脂質體或帶負電脂質體俘獲DNA而非與其複合。陽離子脂質體及非陽離子脂質體皆可用於遞送標的核酸或重組表現載體。
脂質體亦包括「空間穩定型」脂質體，如本文中所使用，該術語係指包含一或多種當併入脂質體中時引起循環壽命相對於缺乏此種特化脂質之脂質體有所增加之特化脂質的脂質體。空間穩定型脂質體之實例為脂質體之囊泡形成脂質部分之一部分包含一或多種醣脂或用一或多種親水性聚合物，諸如聚乙二醇(PEG)部分加以衍生化的彼等脂質體。美國專利第6,287,860號中進一步描述脂質體及其用途，該專利係以引用之方式整體併入本文中。
本發明之調配物及組合物亦可包括表面活性劑。表面活性劑在藥物產品、調配物及乳液中之用途為此項技術中熟知的。美國專利第6,287,860號中進一步描述表面活性劑及其用途。
在一個實施例中，包括各種滲透增強劑，以實現核酸之有效遞送。除輔助非親脂性藥物擴散越過細胞膜以外，滲透增強劑亦增強親脂性藥物之滲透性。滲透增強劑可分類為屬於五個大類之一，亦即，表面活性劑、脂肪酸、膽汁鹽、螯合劑及非螯合性非表面活性劑。美國專利第6,287,860號中進一步描述滲透增強劑及其用途，該專利係以引用之方式整體併入本文中。
用於經口投與之組合物及調配物包括粉劑或顆粒劑、微粒、奈米粒子、水或非水性介質中之懸浮液或溶液、膠囊、凝膠膠囊、扁囊、錠劑或微型錠劑。可能需要增稠劑、調味劑、稀釋劑、乳化劑、分散助劑或黏合劑。適合之經口調配物包括投與標的反義核酸連同一或多種滲透增強劑、表面活性劑及螯合劑之彼等經口調配物。適合之表面活性劑包括但不限於脂肪酸及/或其酯或鹽、膽汁酸及/或其鹽。美國專利第6,287,860號中進一步描述適合之膽汁酸/鹽及脂肪酸及其用途。滲透增強劑之組合，例如脂肪酸/鹽與膽汁酸/鹽之組合亦為適合的。例示性適合組合為月桂酸、羊脂酸及UDCA之鈉鹽。其他滲透增強劑包括但不限於聚氧化乙烯-9-月桂醚及聚氧化乙烯-20-鯨蠟醚。適合之滲透增強劑亦包括丙二醇、二甲亞碸、三乙醇胺、N,N-二甲基乙醯胺、N,N-二甲基甲醯胺、2-吡咯啶酮及其衍生物、四氫呋喃醇及AZONE™。

調T細胞活性之方法
本發明提供一種選擇性地調節抗原決定基特異性T細胞之活性的方法，該方法包括使T細胞與本發明之多聚體多肽接觸，其中T細胞與本發明之多聚體多肽接觸選擇性地調節抗原決定基特異性T細胞之活性。在一些情況下，該接觸發生在活體外。在一些情況下，該接觸發生在活體內。在一些情況下，該接觸發生在擬體內。
在一些情況下，例如，在靶T細胞為CD8+ T細胞時，多聚體多肽包含I類MHC多肽(例如，β2-微球蛋白及I類MHC重鏈)。在一些情況下，例如，在靶T細胞為CD4+ T細胞時，多聚體多肽包含II類MHC多肽(例如，II類MHC α鏈；II類MHC β鏈)。
在本發明之多聚體多肽包括作為活化多肽之免疫調節多肽時，T細胞與多聚體多肽接觸使抗原決定基特異性T細胞活化。在一些情況下，抗原決定基特異性T細胞為對癌細胞上存在之抗原決定基具有特異性之T細胞，且抗原決定基特異性T細胞與多聚體多肽接觸增加T細胞對癌細胞之細胞毒性活性。在一些情況下，抗原決定基特異性T細胞為對癌細胞上存在之抗原決定基具有特異性之T細胞，且抗原決定基特異性T細胞與多聚體多肽接觸增加抗原決定基特異性T細胞之數目。
在一些情況下，抗原決定基特異性T細胞為對病毒感染細胞上存在之抗原決定基具有特異性之T細胞，且抗原決定基特異性T細胞與多聚體多肽接觸增加T細胞對病毒感染細胞之細胞毒性活性。在一些情況下，抗原決定基特異性T細胞為對病毒感染細胞上存在之抗原決定基具有特異性之T細胞，且抗原決定基特異性T細胞與多聚體多肽接觸增加抗原決定基特異性T細胞之數目。
在本發明之多聚體多肽包括作為抑制多肽之免疫調節多肽時，T細胞與多聚體接觸抑制抗原決定基特異性T細胞。在一些情況下，抗原決定基特異性T細胞為對自體抗原中所存在之抗原決定基具有特異性之自體反應性T細胞，且該接觸減少自體反應性T細胞之數目。

治療方法
本發明提供一種治療個體之方法，該方法包括向該個體投與對治療該個體有效之量的本發明之TMMP或者一或多種編碼該TMMP之核酸。亦提供本發明之TMMP以供用於治療人類或動物體之方法中。在一些情況下，本發明之治療方法包括向有需要之個體投與一或多種包含編碼本發明之多聚體多肽之核苷酸序列的重組表現載體。在一些情況下，本發明之治療方法包括向有需要之個體投與一或多種包含編碼本發明之TMMP之核苷酸序列的mRNA分子。在一些情況下，本發明之治療方法包括向有需要之個體投與本發明之TMMP。可治療之病狀包括例如癌症及自體免疫病症，如以下所描述。
在一些情況下，本發明之TMMP在投與有需要之個體時誘導抗原決定基特異性T細胞反應及抗原決定基非特異性T細胞反應。換言之，在一些情況下，本發明之TMMP在投與有需要之個體時藉由調節呈現以下兩者之第一T細胞之活性而誘導抗原決定基特異性T細胞反應：i)對TMMP中所存在之抗原決定基具特異性之TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽；且藉由調節呈現以下之第二T細胞之活性而誘導抗原決定基非特異性T細胞反應：i)對除TMMP中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基具特異性之TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽。抗原決定基特異性T細胞反應與非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少2:1、至少5:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少50:1或至少100:1。抗原決定基特異性T細胞反應與抗原決定基非特異性T細胞反應之比率為約2:1至約5:1、約5:1至約10:1、約10:1至約15:1、約15:1至約20:1、約20:1至約25:1、約25:1至約50:1或約50:1至約100:1，或超過100:1。「調節」T細胞之「活性」可包括以下一或多項：i)活化細胞毒性(例如CD8+ ) T細胞；ii)誘導細胞毒性(例如CD8+ ) T細胞之細胞毒性活性；iii)誘導細胞毒性(例如CD8+ ) T細胞之細胞毒素(例如，穿孔素；顆粒酶；顆粒溶素)之產生及釋放；iv)抑制自體反應性T細胞之活性；及其類似操作。
免疫調節多肽對其同源共免疫調節多肽之降低之親和力與抗原決定基對TCR之親和力的組合提供本發明之TMMP之增強之選擇性。因而，舉例而言，本發明之TMMP相較於其結合至呈現以下之第二T細胞的親合力：i)對除TMMP中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基具特異性之TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽，以較高親合力結合至呈現以下兩者之第一T細胞：i)對TMMP中所存在之抗原決定基具特異性之TCR；及ii)結合至TMMP中所存在之免疫調節多肽的共免疫調節多肽。
本發明提供一種選擇性地調節個體之抗原決定基特異性T細胞之活性的方法，該方法包括向該個體投與有效量之本發明之多聚體多肽或者一或多種包含編碼該多聚體多肽之核苷酸序列的核酸(例如，表現載體、mRNA等)，其中該多聚體多肽選擇性地調節個體之抗原決定基特異性T細胞之活性。選擇性地調節抗原決定基特異性T細胞之活性可治療個體之疾病或病症。因而，本發明提供一種治療方法，其包括向有需要之個體投與有效量之本發明之多聚體多肽。
在一些情況下，該免疫調節多肽為活化多肽，且該多聚體多肽活化抗原決定基特異性T細胞。在一些情況下，該抗原決定基為癌症相關抗原決定基，且該多聚體多肽增加對該癌症相關抗原決定基具特異性之T細胞的活性。
本發明提供一種治療個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與有效量之本發明之多聚體多肽或者一或多種包含編碼該多聚體多肽之核苷酸序列的核酸(例如，表現載體、mRNA等)，其中該多聚體多肽包含作為癌症抗原決定基之T細胞抗原決定基，且其中該多聚體多肽包含刺激性免疫調節多肽。在一些情況下，多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之癌細胞數目減少的量。舉例而言，在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之癌細胞數目與該個體在投與該多聚體多肽之前或者在不投與該多聚體多肽之情況下的癌細胞數目相比減少至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的量。在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之癌細胞數目減至不可偵測之水準的量。
在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之腫瘤質量減少之量。舉例而言，在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體(存在腫瘤之個體)時使該個體之腫瘤質量與該個體在投與該多聚體多肽之前或者在不投與該多聚體多肽之情況下的腫瘤質量相比減少至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的量。在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體(存在腫瘤之個體)時使該個體之腫瘤體積減小的量。舉例而言，在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體(存在腫瘤之個體)時使該個體之腫瘤體積與該個體在投與該多聚體多肽之前或者在不投與該多聚體多肽之情況下的腫瘤體積相比減小至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的量。在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之存活時間增加的量。舉例而言，在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之存活時間與該個體在不投與該多聚體多肽之情況下的預期存活時間相比增加至少1個月、至少2個月、至少3個月、3個月至6個月、6個月至1年、1年至2年、2年至5年、5年至10年或超過10年之量。
在一些情況下，抗原決定基特異性T細胞為對病毒感染細胞上存在之抗原決定基具特異性之T細胞，且抗原決定基特異性T細胞與該多聚體多肽接觸增加T細胞對病毒感染細胞之細胞毒性活性。在一些情況下，抗原決定基特異性T細胞為對病毒感染細胞上存在之抗原決定基具有特異性之T細胞，且抗原決定基特異性T細胞與該多聚體多肽接觸增加抗原決定基特異性T細胞之數目。
因而，本發明提供一種治療個體之病毒感染的方法，該方法包括向該個體投與有效量之本發明之多聚體多肽或者一或多種包含編碼該多聚體多肽之核苷酸序列的核酸，其中該多聚體多肽包含作為病毒抗原決定基之T細胞抗原決定基，且其中該多聚體多肽包含刺激性免疫調節多肽。在一些情況下，多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之病毒感染細胞數目減少的量。舉例而言，在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之病毒感染細胞數目與該個體在投與該多聚體多肽之前或在不投與該多聚體多肽之情況下的病毒感染細胞數目相比減少至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的量。在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之病毒感染細胞數目減少的量。
因而，本發明提供一種治療個體之感染的方法，該方法包括向該個體投與有效量之本發明之TMMP或者一或多種包含編碼該多聚體多肽之核苷酸序列的核酸，其中該多聚體多肽包含作為病原體相關抗原決定基之T細胞抗原決定基，且其中該多聚體多肽包含刺激性免疫調節多肽。在一些情況下，本發明之TMMP之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之病原體數目減少的量。舉例而言，在一些情況下，本發明之TMMP之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之病原體數目與該個體在投與該多聚體多肽之前或者在不投與該多聚體多肽之情況下的病原體數目相比減少至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的量。在一些情況下，本發明之多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之病原體數目減至不可偵測之水準的量。病原體包括病毒、細菌、原生動物及其類似物。
在一些情況下，該免疫調節多肽為抑制性多肽，且該該多聚體多肽抑制抗原決定基特異性T細胞之活性。在一些情況下，該抗原決定基為自體抗原決定基，且該該多聚體多肽選擇性地抑制對自體抗原決定基具有特異性之T細胞的活性。
本發明提供一種治療個體之自體免疫病症的方法，該方法包括向該個體投與有效量之本發明之多聚體多肽，其中該多聚體多肽包含呈自體抗原決定基形式之T細胞抗原決定基，且其中該多聚體多肽包含抑制性免疫調節多肽。在一些情況下，本發明之TMMP之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使自體反應性T細胞數目與該個體在投與該多聚體多肽之前及/或在不投與該TMMP之情況下的自體反應性T細胞數目相比減少至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的量。在一些情況下，多聚體多肽之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時使該個體之Th2細胞因子產生減少的量。在一些情況下，本發明之TMMP之「有效量」為當以一或多個劑量投與有需要之個體時改善該個體之與自體免疫疾病相關之一或多種症狀的量。
如以上所指出，在一些情況下，在進行標的治療方法時，將本發明之TMMP作為多聚體多肽本身投與有需要之個體。在其他情況下，在進行標的治療方法時，向有需要之個體投與一或多種包含編碼本發明之TMMP之核苷酸序列的核酸。因而，在其他情況下，向有需要之個體投與一或多種本發明之核酸，例如，一或多種本發明之重組表現載體。

調配物
適合之調配物如以上所描述，其中適合之調配物包括醫藥學上可接受之賦形劑。在一些情況下，適合之調配物包含：a)本發明之T細胞調節多聚體多肽；及b)醫藥學上可接受之賦形劑。在一些情況下，適合之調配物包含：a)包含編碼本發明之多聚體多肽之核苷酸序列的核酸；及b)醫藥學上可接受之賦形劑；在一些情況下，該核酸為mRNA。在一些情況下，適合之調配物包含：a)包含編碼本發明之TMMP之第一多肽的核苷酸序列的第一核酸；b)包含編碼本發明之多聚體多肽之第二多肽的核苷酸序列的第二核酸；及c)醫藥學上可接受之賦形劑。在一些情況下，適合之調配物包含：a)包含編碼本發明之TMMP之核苷酸序列的重組表現載體；及b)醫藥學上可接受之賦形劑。在一些情況下，適合之調配物包含：a)包含編碼本發明之TMMP之第一多肽的核苷酸序列的第一重組表現載體；b)包含編碼本發明之TMMP之第二多肽的核苷酸序列的第二重組表現載體；及c)醫藥學上可接受之賦形劑。
適合之醫藥學上可接受之賦形劑如以上所描述。

劑量
主治醫師或其他合格醫務人員可基於各種臨床因素來確定適合之劑量。如醫學領域中所熟知，任一患者之劑量均視許多因素而定，包括患者之體型、體表面積、年齡、欲投與之特定多肽或核酸、患者之性別、時間及投與途徑、總體健康狀況及並行投與之其他藥物。本發明之多聚體多肽可以介於每劑量1 ng/kg體重與20 mg/kg體重之間，例如介於0.1 mg/kg體重至10 mg/kg體重之間，例如介於0.5 mg/kg體重至5 mg/kg體重之間的量投與；然而，預想在此例示性範圍以下或以上之劑量，尤其在考慮上述因素之情況下。若方案為連續輸注，則其亦可處於每公斤體重每分鐘1 μg至10 mg之範圍內。本發明之多聚體多肽可以約1 mg/kg體重至50 mg/kg體重，例如約1 mg/kg體重至約5 mg/kg體重、約5 mg/kg體重至約10 mg/kg體重、約10 mg/kg體重至約15 mg/kg體重、約15 mg/kg體重至約20 mg/kg體重、約20 mg/kg體重至約25 mg/kg體重、約25 mg/kg體重至約30 mg/kg體重、約30 mg/kg體重至約35 mg/kg體重、約35 mg/kg體重至約40 mg/kg體重或約40 mg/kg體重至約50 mg/kg體重之量投與。
在一些情況下，本發明之多聚體多肽之適合劑量為每公斤體重0.01 μg至100 g、每公斤體重0.1 μg至10 g、每公斤體重1 μg至1 g、每公斤體重10 μg至100 mg、每公斤體重100 μg至10 mg或每公斤體重100 μg至1 mg。熟習此項技術者可基於所投與之劑在體液或組織中之所量測滯留時間及濃度而容易地估計重複給藥速率。在成功治療後，可能需要患者進行維持療法以防止疾病狀態復發，其中以介於每公斤體重0.01 μg至100 g、每公斤體重0.1 μg至10 g、每公斤體重1 μg至1 g、每公斤體重10 μg至100 mg、每公斤體重100 μg至10 mg或每公斤體重100 μg至1 mg之範圍內的維持劑量投與本發明之多聚體多肽。
熟習此項技術者將容易瞭解，劑量水準可隨特定多聚體多肽、症狀之嚴重程度及個體對副作用之易感性而變化。熟習此項技術者可藉由多種手段容易地確定指定化合物之較佳劑量。
在一些情況下，投與多劑量之本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體之投與頻率可視多種因素中之任一種，例如症狀嚴重程度等而變化。舉例而言，在一些情況下，每月一次、每月兩次、每月三次、每隔一週(qow)、每週一次(qw)、每週兩次(biw)、每週三次(tiw)、每週四次、每週五次、每週六次、每隔一天(qod)、每天(qd)、每天兩次(qid)或每天三次(tid)投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。
本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體之投與持續時間，例如，投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體之時段可視多種因素中之任一種，例如患者反應等而變化。舉例而言，本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體可在介於約一天至約一週、約兩週至約四週、約一個月至約兩個月、約兩個月至約四個月、約四個月至約六個月、約六個月至約八個月、約八個月至約1年、約1年至約2年或約2年至約4年或更久範圍內之時段內投與。

投與途徑
使用適於藥物遞送之任何可利用方法及途徑，包括活體內及擬體內方法以及全身性及局部化投與途徑向個體投與活性劑(本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體)。
習知醫藥學上可接受之投與途徑包括腫瘤內、腫瘤周圍、肌肉內、淋巴內、氣管內、顱內、皮下、皮內、局部施用、靜脈內、動脈內、直腸、經鼻、經口以及其他經腸及非經腸投與途徑。投與途徑可在需要時加以組合或視多聚體多肽及/或所要效應加以調節。本發明之多聚體多肽或本發明之核酸或重組表現載體可呈單次劑量形式或呈多次劑量形式投與。
在一些情況下，經靜脈內投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。在一些情況下，經肌肉內投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。在一些情況下，經淋巴內投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。在一些情況下，局部投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。在一些情況下，經腫瘤內投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。在一些情況下，經腫瘤周圍投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。在一些情況下，經顱內投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。在一些情況下，經皮下投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。
在一些情況下，經靜脈內投與本發明之多聚體多肽。在一些情況下，經肌肉內投與本發明之多聚體多肽。在一些情況下，局部投與本發明之多聚體多肽。在一些情況下，經腫瘤內投與本發明之多聚體多肽。在一些情況下，經腫瘤周圍投與本發明之多聚體多肽。在一些情況下，經顱內投與本發明之多聚體多肽。在一些情況下，經皮下投與本發明之多聚體多肽。在一些情況下，經淋巴內投與多聚體多肽。
可使用適於遞送習知藥物之任何可利用習知方法及途徑，包括全身性或局部化途徑向宿主投與本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體。一般而言，設想用於本發明方法中之投與途徑包括但未必限於經腸、非經腸及吸入途徑。
除吸入投與以外之非經腸投與途徑包括但未必限於局部、經皮、皮下、肌肉內、眶內、囊內、脊柱內、胸骨內、腫瘤內、淋巴內、腫瘤周圍及靜脈內途徑，亦即，除經由消化道以外之任何投與途徑。可進行非經腸投與以實現本發明之多聚體多肽、本發明之核酸或本發明之重組表現載體之全身或局部遞送。在需要全身遞送時，投與典型地涉及醫藥製劑之侵襲性投與或全身吸收局部或經黏膜投與。

適於治療之個體
適於用本發明方法進行治療之個體包括患有癌症之個體，包括已診斷為患有癌症之個體、已進行癌症治療但未能響應治療之個體及已進行癌症治療且起初對治療有反應但隨後對治療無反應之個體。適於用本發明方法進行治療之個體包括存在感染(例如，存在諸如細菌、病毒、原生動物等病原體之感染)之個體，包括已診斷為存在感染之個體及已進行感染治療但未能響應治療之個體。適於用本發明方法進行治療之個體包括存在細菌感染之個體，包括已診斷為存在細菌感染之個體及已進行細菌感染治療但未能響應治療之個體。適於用本發明方法進行治療之個體包括存在病毒感染之個體，包括已診斷為存在病毒感染之個體及已進行病毒感染治療但未能響應治療之個體。適於用本發明方法進行治療之個體包括患有自體免疫疾病之個體，包括已診斷為患有自體免疫疾病之個體及已進行自體免疫疾病治療但未能響應治療之個體。

本發明之非限制性態樣之實例
以上所描述之本發明主題內容之態樣(包括實施例)在單獨或與一或多個其他態樣或實施例組合時可能為有益的。在不限制以上描述之情況下，以下提供本發明之編號1至134之某些非限制性態樣。如熟習此項技術者在閱讀本發明後將顯而易知，可使用逐一編號之態樣中的每一個或與先前或隨後逐一編號之態樣中之任一個組合。此意欲支持所有此種態樣組合而不限於以下明確提供之態樣組合。
態樣1. 一種T細胞調節多聚體多肽，其中該多聚體多肽為：
A) 異源二聚體，該異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽包含第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；及b)第二多肽，該第二多肽包含第二MHC多肽，其中該第一多肽或該第二多肽包含抗原決定基；其中該第一多肽及/或該第二多肽包含一或多個可能相同或不同的免疫調節多肽，且其中該一或多個免疫調節多肽中之至少一個可為野生型免疫調節多肽或野生型免疫調節多肽之變異體，其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代；且其中該第一多肽或該第二多肽視情況包含免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架；或者
B) 異源二聚體，該異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽包含第一MHC多肽；及b)第二多肽，該第二多肽包含第二MHC多肽，其中該第一多肽或該第二多肽包含抗原決定基；其中該第一多肽及/或該第二多肽包含一或多個可能相同或不同的免疫調節多肽，
其中該一或多個免疫調節多肽中之至少一個可為野生型免疫調節多肽之變異體，其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代，
其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個為對同源共免疫調節多肽展現與相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽，且其中該抗原決定基以至少10-7 M之親和力結合至T細胞上之T細胞受體(TCR)，使得：i)該T細胞調節多聚體多肽結合第一T細胞之親和力比該T細胞調節多聚體多肽結合第二T細胞之親和力高出至少25%，其中該第一T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽及以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR，且其中該第二T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽但不在其表面表現以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR；及/或ii)當藉由生物層干涉術加以量測時，對照T細胞調節多聚體多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力與包含該野生型免疫調節多肽之變異體之該T細胞調節多聚體多肽對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率處於1.5:1至106 :1之範圍內，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽；且其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代；且
其中該第一多肽或該第二多肽視情況包含Ig Fc多肽或非Ig支架；或者
C) 異源二聚體，該異源二聚體包含：a)第一多肽，該第一多肽自N末端至C末端依序包含：i)抗原決定基；ii)第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；以及b)第二多肽，該第二多肽自N末端至C末端依序包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架，其中該多聚體多肽包含一或多個可能相同或不同的免疫調節結構域，其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個係：A)處於該第一多肽之C末端；B)處於該第二多肽之N末端；C)處於該第二多肽之C末端；或D)處於該第一多肽之C末端以及處於該第二多肽之N末端，且其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個可為野生型免疫調節結構域或野生型免疫調節結構域之變異體，其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代；且
視情況其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個為對同源共免疫調節多肽展現與相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽，且其中該抗原決定基以至少10-7 M之親和力結合至T細胞上之T細胞受體(TCR)，使得：i)該T細胞調節多聚體多肽結合第一T細胞之親和力比該T細胞調節多聚體多肽結合第二T細胞之親和力高出至少25%，其中該第一T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽及以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR，且其中該第二T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽但不在其表面表現以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR；及/或ii)當藉由生物層干涉術加以量測時，對照T細胞調節多聚體多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力與包含該野生型免疫調節多肽之變異體之該T細胞調節多聚體多肽對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率處於1.5:1至106 :1之範圍內，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽；且其中該變異免疫調節多肽與相應野生型免疫調節多肽之胺基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代。
態樣2. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中該T細胞調節多聚體多肽結合該第一T細胞之親和力比其結合該第二T細胞之親和力高出至少50%。
態樣3. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中該T細胞調節多聚體多肽結合該第一T細胞之親和力比其結合該第二T細胞之親和力高出至少2倍。
態樣4. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中該T細胞調節多聚體多肽結合該第一T細胞之親和力比其結合該第二T細胞之親和力高出至少5倍。
態樣5. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中該T細胞調節多聚體多肽結合該第一T細胞之親和力比其結合該第二T細胞之親和力高出至少10倍。
態樣6. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中該變異免疫調節多肽以約10-4 M至約10-7 M之親和力結合該共免疫調節多肽。
態樣7. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中該變異免疫調節多肽以約10-4 M至約10-6 M之親和力結合該共免疫調節多肽。
態樣8. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中該變異免疫調節多肽以約10-4 M至約10-5 M之親和力結合該共免疫調節多肽。
態樣9. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中當藉由生物層干涉術加以量測時，對照T細胞調節多聚體多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力與包含該野生型免疫調節多肽之變異體之該T細胞調節多聚體多肽對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率為至少10:1，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽。
態樣10. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中當藉由生物層干涉術加以量測時，對照T細胞調節多聚體多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力與包含該野生型免疫調節多肽之變異體之該T細胞調節多聚體多肽對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率為至少50:1，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽。
態樣11. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中當藉由生物層干涉術加以量測時，對照T細胞調節多聚體多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力與包含該野生型免疫調節多肽之變異體之本發明之T細胞調節多聚體多肽對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率為至少102 :1，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽。
態樣12. 如態樣1之T細胞調節多聚體多肽，其中當藉由生物層干涉術加以量測時，對照T細胞調節多聚體多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力與包含該野生型免疫調節多肽之變異體之本發明之T細胞調節多聚體多肽對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率為至少103 :1，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽。
態樣13. 如態樣1至態樣12中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該第二多肽包含Ig Fc多肽。
態樣14. 如態樣13之T細胞調節多聚體多肽，其中該IgFc多肽為IgG1 Fc多肽。
態樣15. 如態樣14之T細胞調節多聚體多肽，其中該IgG1 Fc多肽包含一或多個選自N297A、L234A、L235A、L234F、L235E及P331S之胺基酸取代。
態樣16. 如態樣14之T細胞調節多聚體多肽，其中該IgG1 Fc多肽包含L234A及L235A取代。
態樣17. 如態樣1至態樣16中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一多肽包含處於該抗原決定基與該第一MHC多肽之間的肽連接子。
態樣18. 如態樣17之T細胞調節多聚體多肽，其中該連接子具有20個胺基酸至40個胺基酸之長度。
態樣19. 如態樣17之T細胞調節多聚體多肽，其中該連接子為式(GGGGS)n之肽，其中n為1、2、3、4、5、6、7或8。
態樣20. 如態樣1至態樣19中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一多肽包含處於該變異免疫調節多肽與該第二MHC多肽之間的肽連接子。
態樣21. 如態樣18之T細胞調節多聚體多肽，其中該連接子具有20個胺基酸至40個胺基酸之長度。
態樣22. 如態樣20之T細胞調節多聚體多肽，其中該連接子為式(GGGGS)n之肽，其中n為1、2、3、4、5、6、7或8。
態樣23. 如態樣1至態樣22中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其包含該變異免疫調節多肽之兩個或更多個複本。
態樣24. 如態樣23之T細胞調節多聚體多肽，其中該變異免疫調節多肽之該兩個或更多個複本包含相同的胺基酸序列。
態樣25. 如態樣23或態樣24之T細胞調節多聚體多肽，其包含處於該等複本之間的肽連接子。
態樣26. 如態樣25之T細胞調節多聚體多肽，其中該連接子具有20個胺基酸至40個胺基酸之長度。
態樣27. 如態樣25之T細胞調節多聚體多肽，其中該連接子為式(GGGGS)n之肽，其中n為1、2、3、4、5、6、7或8。
態樣28. 如態樣1至態樣27中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該變異免疫調節多肽相對於相應野生型免疫調節多肽包含1至10個胺基酸取代。
態樣29. 如態樣28之T細胞調節多聚體多肽，其中該野生型免疫調節多肽係選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM。
態樣30. 如態樣1至態樣29中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一MHC多肽為β2-微球蛋白多肽；且其中該第二MHC多肽為I類MHC重鏈多肽。
態樣31. 如態樣30之T細胞調節多聚體多肽，其中該β2-微球蛋白多肽包含與圖4中所示之胺基酸序列之一具有至少85%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。
態樣32. 如態樣30之T細胞調節多聚體多肽，其中該I類MHC重鏈多肽為HLA-A、HLA-B或HLA-C重鏈。
態樣33. 如態樣32之T細胞調節多聚體多肽，其中該I類MHC重鏈多肽包含與圖3A至圖3C之一中所示之胺基酸序列具有至少85%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。
態樣34. 如態樣1至態樣29中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一MHC多肽為II類MHC α鏈多肽；且其中該第二MHC多肽為II類MHC β鏈多肽。
態樣35. 如態樣1至態樣34中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中多聚體多肽包含Fc多肽，且其中該Ig Fc多肽為IgG1 Fc多肽、IgG2 Fc多肽、IgG3 Fc多肽、IgG4 Fc多肽、IgA Fc多肽或IgM Fc多肽。
態樣36. 如態樣26之T細胞調節多聚體多肽，其中該Ig Fc多肽包含與圖2A至圖2D之一中所描繪之胺基酸序列具有至少85%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。
態樣37. 如態樣35或態樣36之T細胞調節多聚體多肽，其中該第二多肽包含處於第二MHC多肽與該Fc多肽之間的肽連接子。
態樣38. 如態樣37之T細胞調節多聚體多肽，其中該連接子具有20個胺基酸至4個胺基酸之長度。
態樣39. 如態樣37之T細胞調節多聚體多肽，其中該連接子為式(GGGGS)n之肽，其中n為1、2、3、4、5、6、7或8。
態樣40. 如態樣1至態樣39中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一多肽與該第二多肽非共價締合。
態樣41. 如態樣1至態樣39中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一多肽與該第二多肽彼此共價連接。
態樣42. 如態樣41之T細胞調節多聚體多肽，其中該共價連接係經由二硫鍵。
態樣43. 如態樣42之T細胞調節多聚體多肽，其中該二硫鍵連接該第一MHC多肽中之半胱胺酸殘基與該第二MHC多肽中之半胱胺酸殘基。
態樣44. 如態樣1至態樣43中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該抗原決定基為癌症抗原決定基。
態樣45. 如態樣44之T細胞調節多聚體多肽，其中該癌症抗原決定基為以下各物之約4個胺基酸(aa)、5 aa、6 aa、7 aa、8 aa、9 aa、10 aa、11 aa、12 aa、13 aa、14 aa、15 aa、16 aa、17 aa、18 aa、19 aa或20 aa長度之肽片段：MUC1多肽、人類乳頭狀瘤病毒(HPV) E6多肽、LMP2多肽、HPV E7多肽、表皮生長因子受體(EGFR) vIII多肽、HER-2/neu多肽、黑素瘤抗原家族A3 (MAGE A3)多肽、p53多肽、突變p53多肽、NY-ESO-1多肽、葉酸水解酶(前列腺特異性膜抗原；PSMA)多肽、癌胚抗原(CEA)多肽、T細胞識別之黑素瘤抗原(melanA/MART1)多肽、Ras多肽、gp100多肽、蛋白酶3 (PR1)多肽、bcr-abl多肽、酪胺酸酶多肽、存活素多肽、前列腺特異性抗原(PSA)多肽、hTERT多肽、肉瘤易位斷裂點多肽、滑膜肉瘤X (SSX)斷裂點多肽、EphA2多肽、酸性磷酸酶、前列腺(PAP)多肽、黑素瘤細胞凋亡抑制劑(ML-IAP)多肽、α-胎蛋白(AFP)多肽、上皮細胞黏附分子(EpCAM)多肽、ERG (TMPRSS2 ETS融合物)多肽、NA17多肽、配對框-3 (PAX3)多肽、退行性淋巴瘤激酶(ALK)多肽、雄激素受體多肽、週期素B1多肽、N-myc原癌基因(MYCN)多肽、Ras同系物基因家族成員C (RhoC)多肽、酪胺酸酶相關蛋白-2 (TRP-2)多肽、間皮素多肽、前列腺幹細胞抗原(PSCA)多肽、黑素瘤相關抗原-1 (MAGE A1)多肽、細胞色素P450 1B1 (CYP1B1)多肽、胎盤特異性蛋白1 (PLAC1)多肽、BORIS多肽(亦稱為CCCTC結合因子或CTCF)、ETV6-AML多肽、乳癌抗原NY-BR-1多肽(亦稱為含錨蛋白重複結構域之蛋白30A)、G蛋白信號傳導調節劑(RGS5)多肽、T細胞識別之鱗狀細胞癌抗原(SART3)多肽、碳酸酐酶IX多肽、配對框-5 (PAX5)多肽、OY-TES1 (睾丸抗原；亦稱為精子頂體蛋白結合蛋白)多肽、精液蛋白17多肽、淋巴細胞特異性蛋白-酪胺酸激酶(LCK)多肽、高分子量黑素瘤相關抗原(HMW-MAA)、A-激酶錨定蛋白-4 (AKAP-4)、滑膜肉瘤X斷裂點2 (SSX2)多肽、X抗原家族成員1 (XAGE1)多肽、B7同系物3 (B7H3；亦稱為CD276)多肽、豆莢蛋白多肽(LGMN1；亦稱為天冬醯胺醯內肽酶)、具有Ig及EGF同源性結構域之酪胺酸激酶-2 (Tie-2；亦稱為血管生成素-1受體)多肽、P抗原家族成員4 (PAGE4)多肽、血管內皮生長因子受體2 (VEGF2)多肽、MAD-CT-1多肽、纖維母細胞活化蛋白(FAP)多肽、血小板衍生生長因子受體β (PDGFβ)多肽、MAD-CT-2多肽、Fos相關抗原-1 (FOSL)多肽或威爾姆斯瘤-1 (WT-1)多肽。
態樣46. 如態樣1至態樣45中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一多肽及該第二多肽之一包含Ig Fc多肽，其中藥物係結合至該Ig Fc多肽。
態樣47. 如態樣46之T細胞調節多聚體多肽，其中該藥物為選自類美登素、苯并二氮呯、類紫杉醇、CC-1065、倍癌黴素、倍癌黴素類似物、卡奇黴素、尾海兔素、尾海兔素類似物、奧瑞斯他汀、茅屋黴素及來普黴素或上述任一者之前藥的細胞毒性劑。
態樣48. 如態樣46之T細胞調節多聚體多肽，其中該藥物為類視黃醇。
態樣49. 如態樣1至態樣48中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該結合親和力係藉由生物層干涉術來測定。
態樣50. 一種調節個體之免疫反應的方法，該方法包括向該個體投與有效量之如態樣1至態樣49中任一者之T細胞調節多聚體多肽，其中該投與誘導抗原決定基特異性T細胞反應及非抗原決定基特異性T細胞反應，其中該抗原決定基特異性T細胞反應與該非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少2:1。
態樣51. 如態樣50之方法，其中該抗原決定基特異性T細胞反應與該非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少5:1。
態樣52. 如態樣50之方法，其中該抗原決定基特異性T細胞反應與該非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少10:1。
態樣53. 如態樣50之方法，其中該抗原決定基特異性T細胞反應與該非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少25:1。
態樣54. 如態樣50之方法，其中該抗原決定基特異性T細胞反應與該非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少50:1。
態樣55. 如態樣50之方法，其中該抗原決定基特異性T細胞反應與該非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少100:1。
態樣56. 如態樣50至態樣55中任一者之方法，其中該個體為人類。
態樣57. 如態樣50至態樣56中任一者之方法，其中該調節包括增強對癌細胞之細胞毒性T細胞反應。
態樣58. 如態樣50至態樣57中任一者之方法，其中該調節包括減弱對自體抗原之T細胞反應。
態樣59. 如態樣50至態樣58中任一者之方法，其中該投與係經靜脈內、經皮下、經肌肉內、經全身、經淋巴內、在治療部位遠端、經局部或者在治療部位處或附近進行。
態樣60. 如態樣50至態樣59中任一者之方法，其中該非抗原決定基特異性T細胞反應比由包含相應野生型免疫調節多肽之對照T細胞調節多聚體多肽誘導之非抗原決定基特異性T細胞反應弱。
態樣61. 一種治療個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與有效量之如態樣1至態樣49中任一者之T細胞調節多聚體多肽。
態樣62. 一或多種核酸，其包含編碼如態樣1至態樣49中任一者之T細胞調節多聚體多肽之該第一多肽及該第二多肽的核苷酸序列。
態樣63. 如態樣62之一或多種核酸，其中該第一多肽係由第一核苷酸序列編碼，該第二多肽係由第二核苷酸序列編碼，且其中該第一核苷酸序列及該第二核苷酸序列存在於單一核酸中。
態樣64. 如態樣62之一或多種核酸，其中該第一多肽係由第一核酸中所存在之第一核苷酸序列編碼，該第二多肽係由第二核酸中所存在之第二核苷酸序列編碼。
態樣65. 如態樣63之一或多種核酸，其中該第一核苷酸序列及該第二核苷酸序列可操作地連接至轉錄控制元件。
態樣66. 如態樣64之一或多種核酸，其中該第一核苷酸序列可操作地連接至轉錄控制元件且該第二核苷酸序列可操作地連接至轉錄控制元件。
態樣67. 如態樣63之一或多種核酸，其中該單一核酸存在於重組表現載體中。
態樣68. 如態樣67之一或多種核酸，其中該第一核酸存在於第一重組表現載體中，且該第二核酸存在於第二重組表現載體中。
態樣69. 一種組合物，其包含：a)如態樣1至態樣49中任一者之T細胞調節多聚體多肽；及b)醫藥學上可接受之賦形劑。
態樣70. 一種組合物，其包含：a)如態樣62至態樣68中任一者之一或多種核酸；及b)醫藥學上可接受之賦形劑。
態樣71. 一種組合物，其包含：a)如態樣1至態樣49中任一者之T細胞調節多聚體多肽；及b)生理鹽水。
態樣72. 如態樣71之組合物，其中該生理鹽水為0.9% NaCl。
態樣73. 如態樣71或態樣72之組合物，其中該組合物為無菌的。
態樣74. 一種獲得包含一或多個變異免疫調節多肽之T細胞調節多聚體多肽的方法，該一或多個變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽展現與相應親本野生型免疫調節多肽對該共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力，該方法包括自包括複數個成員之T細胞調節多聚體多肽庫中選擇對該同源共免疫調節多肽展現降低之親和力的成員，其中該複數個成員包括：a)第一多肽，該第一多肽包含：i)抗原決定基；及ii)第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；以及b)第二多肽，該第二多肽包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架，其中該庫之該等成員包括該第一多肽、該第二多肽或該第一多肽及該第二多肽兩者中所存在之複數個變異免疫調節多肽。
態樣75. 一種獲得包含一或多個變異免疫調節多肽之T細胞調節多聚體多肽的方法，該一或多個變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽展現與相應親本野生型免疫調節多肽對該共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力，該方法包括：A)提供包括複數個成員之T細胞調節多聚體多肽庫，其中該複數個成員包括：a)第一多肽，該第一多肽包含：i)抗原決定基；及ii)第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；以及b)第二多肽，該第二多肽包含：i)第二MHC多肽；及ii)視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架，其中該庫之該等成員包括該第一多肽、該第二多肽或該第一多肽及該第二多肽兩者中所存在之複數個變異免疫調節多肽；及B)自該庫中選擇對該同源共免疫調節多肽展現降低之親和力的成員。
態樣76. 如態樣74或態樣75之方法，其中該選擇包括使用生物層干涉術測定T細胞調節多聚體多肽庫成員與該同源共免疫調節多肽之間的結合親和力。
態樣77. 如態樣74至態樣76中任一者之方法，其中該T細胞調節多聚體多肽如態樣1至態樣49中之任一者中所定義。
態樣78. 如態樣74至態樣77中任一者之方法，其進一步包括：a)使該所選T細胞調節多聚體多肽庫成員與在其表面上表現以下各物之靶T細胞接觸：i)結合該親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合至該抗原決定基之T細胞受體，其中該T細胞調節多聚體多肽庫成員包含抗原決定基標籤，使得該T細胞調節多聚體多肽庫成員結合至該靶T細胞；b)使結合至該靶T細胞之該所選T細胞調節多聚體多肽庫成員與結合至該抗原決定基標籤之經螢光標記之結合劑接觸，從而產生所選T細胞調節多聚體多肽庫成員/靶T細胞/結合劑複合物；及c)使用流式細胞術來量測該所選T細胞調節多聚體多肽庫成員/靶T細胞/結合劑複合物之平均螢光強度(MFI)，其中在該所選T細胞調節多聚體多肽庫成員之濃度範圍內量測之該MFI提供親和力及表觀親合力之量度；與該T細胞調節多聚體多肽庫成員與對照T細胞之結合相比選擇性地結合靶T細胞且包含以下各物之所選 T細胞調節多聚體多肽庫成員：i)結合該親本野生型免疫調節多肽之同源共免疫調節多肽；及ii)結合至除該T細胞調節多聚體多肽庫成員中所存在之抗原決定基以外的抗原決定基的T細胞受體，鑑定為選擇性地結合至該靶T細胞。
態樣79. 如態樣78之方法，其中該結合劑為對該抗原決定基標籤具特異性之抗體。
態樣80. 如態樣74至態樣79中任一者之方法，其中該變異免疫調節多肽相較於該相應親本野生型免疫調節多肽包含1至20個胺基酸取代。
態樣81. 如態樣74至態樣80中任一者之方法，其中該T細胞調節多聚體多肽包含兩個變異免疫調節多肽。
態樣82. 如態樣81之方法，其中該兩個變異免疫調節多肽包含相同的胺基酸序列。
態樣83. 如態樣81或態樣82之方法，其中該第一多肽包含該兩個變異免疫調節多肽之一，且其中該第二多肽包含該兩個變異免疫調節多肽中之第二個。
態樣84. 如態樣81或態樣82之方法，其中該兩個變異免疫調節多肽處於該T細胞調節多聚體多肽之同一多肽鏈上。
態樣85. 如態樣84之方法，其中該兩個變異免疫調節多肽處於該T細胞調節多聚體多肽之該第一多肽上。
態樣86. 如態樣84之方法，其中該兩個變異免疫調節多肽處於該T細胞調節多聚體多肽之該第二多肽上。
態樣87. 如態樣74至態樣86中任一者之方法，其進一步包括自該庫中分離該所選T細胞調節多聚體多肽庫成員。
態樣88. 如態樣74至態樣87中任一者之方法，其進一步包括提供包含編碼該所選T細胞調節多聚體多肽庫成員之核苷酸序列的核酸。
態樣89. 如態樣88之方法，其中該核酸存在於重組表現載體中。
態樣90. 如態樣88或態樣89之方法，其中該核苷酸序列可操作地連接至在真核生物細胞中具有功能性之轉錄控制元件。
態樣91. 如態樣88至態樣90中任一者之方法，其進一步包括將該核酸引入至真核生物宿主細胞中，並且在液體培養基中培養該細胞以便在該細胞中合成所編碼之該所選T細胞調節多聚體多肽庫成員。
態樣92. 如態樣91之方法，其進一步包括自該細胞或自包含該細胞之液體培養基分離所合成之該所選T細胞調節多聚體多肽細胞成員。
態樣93. 如態樣74至態樣92中任一者之方法，其中該所選T細胞調節多聚體多肽庫成員包含Ig Fc多肽。
態樣94. 如態樣93之方法，其進一步包括使藥物與該Ig Fc多肽結合。
態樣95. 如態樣94之方法，其中該藥物為選自類美登素、苯并二氮呯、類紫杉醇、CC-1065、倍癌黴素、倍癌黴素類似物、卡奇黴素、尾海兔素、尾海兔素類似物、奧瑞斯他汀、茅屋黴素及來普黴素或上述任一者之前藥的細胞毒性劑。
態樣96. 如態樣94之方法，其中該藥物為類視黃醇。
態樣97. 如態樣74至態樣96中任一者之方法，其中該親本野生型免疫調節多肽與該同源免疫調節多肽係選自：IL-2與IL-2受體；4-1BBL與4-1BB；PD-L1與PD-1；FasL與Fas；TGFβ與TGFβ受體；CD80與CD28；CD86與CD28；OX40L與OX40；CD70與CD27；ICOS-L與ICOS；ICAM與LFA-1；JAG1與Notch；JAG1與CD46；CD80與CTLA4;及CD86與CTLA4。
態樣98. 一種多聚體T細胞調節多肽，其包含：A)根據態樣1至態樣49中任一者之第一多聚體多肽異源二聚體，及B)根據態樣1至態樣49中任一者之第二多聚體多肽異源二聚體，且其中該第一異源二聚體與該第二異源二聚體彼此共價連接。
態樣99. 如態樣98之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體與該第二異源二聚體經由該第一異源二聚體之該第二多肽之C末端區域及該第二異源二聚體之該第二多肽之C末端區域彼此共價連接。
態樣100. 如態樣98或態樣99之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之肽抗原決定基及該第二異源二聚體之肽抗原決定基包含相同的胺基酸序列。
態樣101. 如態樣98至態樣100中任一者之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體及該第二異源二聚體之該第一MHC多肽為I類MHC β2-微球蛋白，且其中該第一異源二聚體及該第二異源二聚體之該第二MHC多肽為I類MHC重鏈。
態樣102. 如態樣98至態樣101中任一者之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽及該第二異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽包含相同的胺基酸序列或包含不同的胺基酸序列。
態樣103. 如態樣98至態樣102中任一者之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽及該第二異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽為與相應親本野生型免疫調節多肽相比包含1至10個胺基酸取代之變異免疫調節多肽，且其中該1至10個胺基酸取代引起該變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力降低。
態樣104. 如態樣98至態樣103中任一者之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽及該第二異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽係選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70、ICAM；IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體；及其組合。
態樣105. 如態樣104之多聚體T細胞調節多肽，其中該親本野生型免疫調節多肽與該同源免疫調節多肽係選自：IL-2與IL-2受體；4-1BBL與4-1BB；PD-L1與PD-1；FasL與Fas；TGFβ與TGFβ受體；CD80與CD28；CD86與CD28；OX40L與OX40；CD70與CD27；ICOS-L與ICOS；ICAM與LFA-1；JAG1與Notch；JAG1與CD46；CD80與CTLA4；及CD86與CTLA4。
態樣106. 如態樣98至態樣105中任一者之多聚體T細胞調節多肽，其中該肽抗原決定基為癌症抗原決定基。
態樣107. 如態樣106之多聚體T細胞調節多肽，其中該癌症抗原決定基為以下各物之約4個胺基酸(aa)、5 aa、6 aa、7 aa、8 aa、9 aa、10 aa、11 aa、12 aa、13 aa、14 aa、15 aa、16 aa、17 aa、18 aa、19 aa或20 aa長度之肽片段：MUC1多肽、人類乳頭狀瘤病毒(HPV) E6多肽、LMP2多肽、HPV E7多肽、表皮生長因子受體(EGFR) vIII多肽、HER-2/neu多肽、黑素瘤抗原家族A3 (MAGE A3)多肽、p53多肽、突變p53多肽、NY-ESO-1多肽、葉酸水解酶(前列腺特異性膜抗原；PSMA)多肽、癌胚抗原(CEA)多肽、T細胞識別之黑素瘤抗原(melanA/MART1)多肽、Ras多肽、gp100多肽、蛋白酶3 (PR1)多肽、bcr-abl多肽、酪胺酸酶多肽、存活素多肽、前列腺特異性抗原(PSA)多肽、hTERT多肽、肉瘤易位斷裂點多肽、滑膜肉瘤X (SSX)斷裂點多肽、EphA2多肽、酸性磷酸酶、前列腺(PAP)多肽、黑素瘤細胞凋亡抑制劑(ML-IAP)多肽、α-胎蛋白(AFP)多肽、上皮細胞黏附分子(EpCAM)多肽、ERG (TMPRSS2 ETS融合物)多肽、NA17多肽、配對框-3 (PAX3)多肽、退行性淋巴瘤激酶(ALK)多肽、雄激素受體多肽、週期素B1多肽、N-myc原癌基因(MYCN)多肽、Ras同系物基因家族成員C (RhoC)多肽、酪胺酸酶相關蛋白-2 (TRP-2)多肽、間皮素多肽、前列腺幹細胞抗原(PSCA)多肽、黑素瘤相關抗原-1 (MAGE A1)多肽、細胞色素P450 1B1 (CYP1B1)多肽、胎盤特異性蛋白1 (PLAC1)多肽、BORIS多肽(亦稱為CCCTC結合因子或CTCF)、ETV6-AML多肽、乳癌抗原NY-BR-1多肽(亦稱為含錨蛋白重複結構域之蛋白30A)、G蛋白信號傳導調節劑(RGS5)多肽、T細胞識別之鱗狀細胞癌抗原(SART3)多肽、碳酸酐酶IX多肽、配對框-5 (PAX5)多肽、OY-TES1 (睾丸抗原；亦稱為精子頂體蛋白結合蛋白)多肽、精液蛋白17多肽、淋巴細胞特異性蛋白-酪胺酸激酶(LCK)多肽、高分子量黑素瘤相關抗原(HMW-MAA)、A-激酶錨定蛋白-4 (AKAP-4)、滑膜肉瘤X斷裂點2 (SSX2)多肽、X抗原家族成員1 (XAGE1)多肽、B7同系物3 (B7H3；亦稱為CD276)多肽、豆莢蛋白多肽(LGMN1；亦稱為天冬醯胺醯內肽酶)、具有Ig及EGF同源性結構域之酪胺酸激酶-2 (Tie-2；亦稱為血管生成素-1受體)多肽、P抗原家族成員4 (PAGE4)多肽、血管內皮生長因子受體2 (VEGF2)多肽、MAD-CT-1多肽、纖維母細胞活化蛋白(FAP)多肽、血小板衍生生長因子受體β (PDGFβ)多肽、MAD-CT-2多肽、Fos相關抗原-1 (FOSL)多肽或威爾姆斯瘤-1 (WT1)多肽。
態樣108. 一種將共刺激(亦即，免疫調節)多肽選擇性地遞送至靶T細胞之方法，該方法包括使混合T細胞群體與如態樣1至態樣49及態樣98至態樣107中任一者之多聚體多肽接觸，其中該混合T細胞群體包含該靶T細胞及非靶T細胞，其中該靶T細胞對該多聚體多肽內所存在之該抗原決定基具特異性，且其中該接觸將該多聚體多肽內所存在之該一或多個共刺激多肽遞送至該靶T細胞。
態樣109. 如態樣108之方法，其中該T細胞群體在活體外。
態樣110. 如態樣108之方法，其中該T細胞群體在個體之活體內。
態樣111. 如態樣110之方法，其包括向該個體投與該多聚體多肽。
態樣112. 如態樣108至態樣111中任一者之方法，其中該靶T細胞為調控T細胞。
態樣113. 如態樣108至態樣111中任一者之方法，其中該靶T細胞為細胞毒性T細胞。
態樣114. 如態樣108之方法，其中該混合T細胞群體為獲自個體之活體外混合T細胞群體，且其中該接觸引起該靶T細胞之活化及/或增殖，從而產生活化及/或增殖之靶T細胞群體。
態樣115. 如態樣114之方法，其進一步包括向該個體投與該活化及/或增殖之靶T細胞群體。
態樣116. 一種在獲自個體之混合T細胞群體中偵測結合相關抗原決定基之靶T細胞之存在的方法，該方法包括：a)在活體外使該混合T細胞群體與如態樣1至態樣49及態樣98至態樣107中任一者之多聚體多肽接觸，其中該多聚體多肽包含該相關抗原決定基；及b)偵測T細胞響應於該接觸之活化及/或增殖，其中活化及/或增殖之T細胞指示該靶T細胞之存在。
態樣117. 如態樣108至態樣115中任一者之方法，其中該第一異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽係選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70、ICAM；IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體；及其組合；且
該第二異源二聚體之該一或多個共刺激多肽係選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70、ICAM；IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體，及其組合。
態樣118. 如態樣117之方法，其中該第一異源二聚體之該一或多個共刺激多肽係選自由以下組成之群：IL-2、IL-2變異體及其組合，且該第二異源二聚體之該一或多個共刺激多肽係選自由以下組成之群：IL-2、IL-2變異體及其組合。
態樣119. 如態樣117之方法，其中該第一異源二聚體之該一或多個共刺激多肽係選自由以下組成之群：4-1BBL、4-1BBL變異體及其組合，且該第二異源二聚體之該一或多個共刺激多肽係選自由以下組成之群：4-1BBL、4-1BBL變異體及其組合。
態樣120. 如態樣117之方法，其中該第一異源二聚體之該一或多個共刺激多肽係選自由以下組成之群：CD80、CD80變異體及其組合，且該第二異源二聚體之該一或多個共刺激多肽係選自由以下組成之群：CD80、CD80變異體及其組合。
態樣121. 如態樣117之方法，其中該第一異源二聚體包含至少兩個共刺激多肽，該至少兩個共刺激多肽係各自獨立地選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM，以及IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體，且
其中該第二異源二聚體包含至少兩個共刺激多肽，該至少兩個共刺激多肽係各自獨立地選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM，以及IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體。
態樣122. 如態樣121之方法，其中該第一異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：IL-2及IL-2變異體，且其中該第二異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：IL-2及IL-2變異體。
態樣123. 如態樣121之方法，其中該第一異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：4-1BBL及4-1BBL變異體，且其中該第二異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：4-1BBL及4-1BBL變異體。
態樣124. 如態樣121之方法，其中該第一異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：CD80及CD80變異體，且其中該第二異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：CD80及CD80變異體。
態樣125. 如態樣121之方法，其中該第一異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之至少一者為CD80或CD80變異體，且該第一異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之至少一者為4-1BBL或4-1BBL變異體，且
其中該第二異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之至少一者為CD80或CD80變異體，且該第二異源二聚體之該至少兩個共刺激多肽中之至少一者為4-1BBL或4-1BBL變異體。
態樣126. 如態樣98至態樣107中任一者之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該一或多個免疫調節(亦即，共刺激)多肽係選自由以下各項組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM；IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體；及其組合，且
其中該第二異源二聚體之該一或多個免疫調節(亦即，共刺激)多肽係選自由以下各項組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM；IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體；及其組合。
態樣127. 如態樣126之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽係選自由以下各項組成之群：IL-2、IL-2變異體及其組合，且該第二異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽係選自由以下各項組成之群：IL-2、IL-2變異體及其組合。
態樣128. 如態樣126之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽係選自由以下各項組成之群：4-1BBL、4-1BBL變異體及其組合，且該第二異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽係選自由以下各項組成之群：4-1BBL、4-1BBL變異體變異體及其組合。
態樣129. 如態樣126之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽係選自由以下組成之群：CD80、CD80變異體及其組合，且該第二異源二聚體之該一或多個免疫調節多肽係選自由以下組成之群：CD80、CD80變異體變異體及其組合。
態樣130. 如態樣126之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體包含至少兩個免疫調節多肽，該至少兩個免疫調節多肽係各自獨立地選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM；以及IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體，且
其中該第二異源二聚體包含至少兩個免疫調節多肽，該至少兩個免疫調節多肽係各自獨立地選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM；以及IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM之變異體。
態樣131. 如態樣130之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：IL-2及IL-2變異體，且其中該第二異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：IL-2及IL-2變異體。
態樣132. 如態樣130之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：4-1BBL及4-1BBL變異體，且其中該第二異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：4-1BBL及4-1BBL變異體。
態樣133. 如態樣130之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：CD80及CD80變異體，且其中該第二異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之每一者係獨立地選自由以下組成之群：CD80及CD80變異體。
態樣134. 如態樣130之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之至少一者為CD80或CD80變異體且其中該第一異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之至少一者為4-1BBL或4-1BBL變異體，並且其中該第二異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之至少一者為CD80或CD80變異體且該第二異源二聚體之該至少兩個免疫調節多肽中之至少一者為4-1BBL或4-1BBL變異體。
儘管已參考本發明之特定實施例描述本發明，但熟習此項技術者應理解，可進行各種變化且可在不背離本發明之精神及範疇的情況下取代等效方案。另外，可進行眾多修改以使特定情形、材料、物質組成、方法、一或多個方法步驟適於本發明之目標、精神及範疇。所有此種修改均意欲處於所附申請專利範圍之範疇內。
圖 1 藉由本發明之T細胞調節多聚體多肽來描繪抗原決定基特異性T細胞相對於非抗原決定基特異性T細胞優先活化。
圖 2A 至圖 2G 提供免疫球蛋白Fc多肽之胺基酸序列。
圖 3A 、圖 3B 及圖 3C 提供I類人類白血球抗原(HLA)重鏈多肽之胺基酸序列。信號序列加下劃線。
圖 4 提供來自智人(NP_004039.1；SEQ ID NO:49)、黑猩猩(NP_001009066.1；SEQ ID NO:49)、恆河猴(NP_001040602.1；SEQ ID NO:50)、歐洲牛(NP_776318.1；SEQ ID NO:51)及小家鼠(NP_033865.2；SEQ ID NO:52)之β2微球蛋白(β2M)前驅物(亦即，包括前導序列)之多胺基酸序列比對。胺基酸1-20為信號肽。
圖 5A 至圖 5K 提供適合HLA重鏈之實例的胺基酸序列。
圖 6A 至圖 6D 為本發明之各種T細胞調節多聚體多肽之示意性描繪。
圖 7A 至圖 7D 為本發明之各種二硫鍵連接之T細胞調節多聚體多肽之示意性描繪。
圖 8 提供十一個無前導序列或跨膜結構域之成熟I類MHC重鏈肽序列之比對。

Claims (21)

  1. 一種T細胞調節多聚體多肽，其包含： a) 第一多肽，該第一多肽自N末端至C末端依序包含： i) 抗原決定基； ii) 第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；以及 b) 第二多肽，該第二多肽自N末端至C末端依序包含： i) 第二MHC多肽；及 ii) 視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架， 其中該多聚體多肽包含一或多個免疫調節結構域，其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個係： A) 處於該第一多肽之C末端； B) 處於該第二多肽之N末端； C) 處於該第二多肽之C末端；或 D) 處於該第一多肽之C末端以及處於該第二多肽之N末端， 其中該一或多個免疫調節結構域中之至少一個為對同源共免疫調節多肽展現與相應野生型免疫調節多肽對該同源共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力的變異免疫調節多肽， 且其中該抗原決定基以至少10-7 M之親和力結合至T細胞上之T細胞受體(TCR)， 使得： i) 該T細胞調節多聚體多肽與第一T細胞結合之親和力比該T細胞調節多聚體多肽與第二T細胞結合之親和力高出至少25%， 其中該第一T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽及以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR，且 其中該第二T細胞在其表面上表現該同源共免疫調節多肽但不在其表面表現以至少10-7 M之親和力結合該抗原決定基之TCR；及/或 ii) 當藉由生物層干涉術加以量測時，對照T細胞調節多聚體多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力與包含該野生型免疫調節多肽之變異體之該T細胞調節多聚體多肽對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率處於1.5:1至106 :1之範圍內，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽。
  2. 如申請專利範圍第1項之T細胞調節多聚體多肽，其中： a) 該T細胞調節多聚體多肽與該第一T細胞結合之親和力比其結合該第二T細胞之親和力高出至少50%、至少2倍、至少5倍或至少10倍；及/或 b) 該變異免疫調節多肽以約10-4 M至約10-7 M、約10-4 M至約10-6 M、約10-4 M至約10-5 M之親和力結合該共免疫調節多肽；及/或 c) 其中當藉由生物層干涉術加以量測時，對照T細胞調節多聚體多肽對同源共免疫調節多肽之結合親和力與包含該野生型免疫調節多肽之變異體之該T細胞調節多聚體多肽對該同源共免疫調節多肽之結合親和力的比率為至少10:1、至少50:1、至少102 :1或至少103 :1，其中該對照物包含野生型免疫調節多肽。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項之T細胞調節多聚體多肽，其中該第二多肽包含Ig Fc多肽，視情況其中該Ig Fc多肽、視情況其中IgG1 Fc多肽包含選自N297A、L234A、L235A、L234F、L235E及P331S之一或多個胺基酸取代。
  4. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一多肽包含處於該抗原決定基與該第一MHC多肽之間的肽連接子及/或其中該第一多肽包含處於該變異免疫調節多肽與該第二MHC多肽之間的肽連接子。
  5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其包含該變異免疫調節多肽之兩個或更多個複本。
  6. 如申請專利範圍第1項至第5項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其中該野生型免疫調節多肽係選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM。
  7. 如申請專利範圍第1項至第6項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其中： a) 該第一MHC多肽為β2-微球蛋白多肽；且其中該第二MHC多肽為I類MHC重鏈多肽；或 b) 該第一MHC多肽為II類MHC α鏈多肽；且其中該第二MHC多肽為II類MHC β鏈多肽。
  8. 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其中多聚體多肽包含Fc多肽，且其中該Ig Fc多肽為IgG1 Fc多肽、IgG2 Fc多肽、IgG3 Fc多肽、IgG4 Fc多肽、IgA Fc多肽或IgM Fc多肽。
  9. 如申請專利範圍第1項至第8項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其中： a) 該第一多肽與該第二多肽非共價締合；或 b) 該第一多肽與該第二多肽彼此共價連接，視情況其中該共價連接係經由二硫鍵。
  10. 如申請專利範圍第1項至第9項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其中該抗原決定基為癌症抗原決定基。
  11. 如申請專利範圍第1項至第10項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其中該第一多肽及該第二多肽之一包含Ig Fc多肽，其中藥物係結合至該Ig Fc多肽。
  12. 如申請專利範圍第1項至第11項中任一項之T細胞調節多聚體多肽，其中該結合親和力係藉由生物層干涉術來測定。
  13. 一種多聚體T細胞調節多肽，其包含： A) 第一異源二聚體，該第一異源二聚體包含： a) 第一多肽，該第一多肽包含： i) 肽抗原決定基；及 ii) 第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；以及 b) 第二多肽，該第二多肽包含： i) 第二MHC多肽， 其中該第一異源二聚體包含一或多個免疫調節多肽；及 B) 第二異源二聚體，該第二異源二聚體包含： a) 第一多肽，該第一多肽包含： i) 肽抗原決定基；及 ii) 第一MHC多肽；以及 b) 第二多肽，該第二多肽包含： i) 第二MHC多肽， 其中該第二異源二聚體包含一或多個免疫調節多肽，且 其中該第一異源二聚體與該第二異源二聚體彼此共價連接。
  14. 如申請專利範圍第13項之多聚體T細胞調節多肽，其中該第一異源二聚體之該免疫調節多肽及該第二異源二聚體之該免疫調節多肽皆選自由以下組成之群：IL-2、4-1BBL、PD-L1、CD80、CD86、ICOS-L、OX-40L、FasL、JAG1、TGFβ、CD70及ICAM。
  15. 一或多種核酸，其包含編碼如申請專利範圍第1項至第14項中任一項之T細胞調節多聚體多肽之該第一多肽及該第二多肽的核苷酸序列。
  16. 一種組合物，其包含： a1) 如申請專利範圍第1項至第14項中任一項之T細胞調節多聚體多肽；及 b1) 醫藥學上可接受之賦形劑；或 a2) 如申請專利範圍第15項之一或多種核酸；及 b2) 醫藥學上可接受之賦形劑。
  17. 一種調節個體之免疫反應的方法，該方法包括向該個體投與有效量之如申請專利範圍第1項至第14項中任一項之T細胞調節多聚體多肽， 其中該投與誘導抗原決定基特異性T細胞反應及非抗原決定基特異性T細胞反應， 其中該抗原決定基特異性T細胞反應與該非抗原決定基特異性T細胞反應之比率為至少2:1。
  18. 一種將共刺激多肽選擇性地遞送至靶T細胞之方法，該方法包括使混合T細胞群體與如申請專利範圍第1項至第14項中任一項之多聚體多肽接觸，其中該混合T細胞群體包含該靶T細胞及非靶T細胞， 其中該靶T細胞對該多聚體多肽內所存在之該抗原決定基具特異性，且 其中該接觸將該多聚體多肽內所存在之該共刺激多肽遞送至該靶T細胞。
  19. 一種在獲自個體之混合T細胞群體中偵測結合相關抗原決定基之靶T細胞之存在的方法，該方法包括： a) 在活體外使該混合T細胞群體與如申請專利範圍第1項至第14項中任一項之多聚體多肽接觸，其中該多聚體多肽包含該相關抗原決定基；及 b) 偵測響應於該接觸之T細胞活化及/或增殖，其中活化及/或增殖之T細胞指示該靶T細胞之存在。
  20. 一種獲得包含一或多個變異免疫調節多肽之T細胞調節多聚體多肽的方法，該一或多個變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽展現與相應親本野生型免疫調節多肽對該共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力，該方法包括自包括複數個成員之T細胞調節多聚體多肽庫中選擇對該同源共免疫調節多肽展現降低之親和力的成員，其中該複數個成員包括： a) 第一多肽，該第一多肽包含： i) 抗原決定基；及 ii) 第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；以及 b) 第二多肽，該第二多肽包含： i) 第二MHC多肽；及 ii) 視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架， 其中該庫之該等成員包括該第一多肽、該第二多肽或該第一多肽及該第二多肽兩者中所存在之複數個變異免疫調節多肽。
  21. 一種獲得包含一或多個變異免疫調節多肽之T細胞調節多聚體多肽的方法，該一或多個變異免疫調節多肽對同源共免疫調節多肽展現與相應親本野生型免疫調節多肽對該共免疫調節多肽之親和力相比有所降低之親和力，該方法包括： A) 提供包括複數個成員之T細胞調節多聚體多肽庫，其中該複數個成員包括： a) 第一多肽，該第一多肽包含： i) 抗原決定基；及 ii) 第一主要組織相容性複合體(MHC)多肽；以及 b) 第二多肽，該第二多肽包含： i) 第二MHC多肽；及 ii) 視情況存在之免疫球蛋白(Ig) Fc多肽或非Ig支架， 其中該庫之該等成員包括該第一多肽、該第二多肽或該第一多肽及該第二多肽兩者中所存在之複數個變異免疫調節多肽；及 B) 自該庫中選擇對該同源共免疫調節多肽展現降低之親和力的成員。
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