相關申請案之交叉參考
本申請案依據35 U.S.C. § 119(e)主張2017年3月14日提出申請之美國臨時申請案第62/471,300號之權益，該美國臨時申請案之全部內容以引用方式併入本文中。
定義
下列闡述陳述實例性方法、參數及諸如此類。然而，應認識到，該闡述並不意欲限制本發明範圍，而是經提供以闡述實例性實施例。 並非位於兩個字母或符號之間之短劃線(「-」)係用於指示取代基之附接點。舉例而言，-C(O)NH
2
係經由碳原子進行附接。位於化學基團開頭或末尾之短劃線係出於便利性；可使用或不使用一或多個短劃線來繪示化學基團且並不損失其常用含義。結構中之穿過線繪製之波浪線指示基團之附接點。除非在化學上或在結構上需要，否則書寫或命名化學基團之順序並不指示或暗示方向性。 本文中之所提及「約」某一值或參數包含(且闡述)與該值或參數本身有關之實施例。在某些實施例中，術語「約」包含指示量± 10%。在某些實施例中，術語「約」包含指示量± 5%。在某些其他實施例中，術語「約」包含指示量± 1%。同樣，術語「約X」包含闡述「X」。同樣，除非上下文另外明確指示，否則單數形式「一(a)」及「該(the)」包含複數個指示物。因此，舉例而言，所提及「化合物」包含複數種該化合物，且所提及「分析」包含提及一或多種分析及熟習此項技術者已知之其等效形式。 本文所給出之任何式或結構亦意欲代表化合物之未經標記之形式以及經同位素標記之形式。經同位素標記之化合物具有由本文所給出之式繪示之結構，只是一或多個原子經具有所選原子質量或質量數之原子代替。可納入本發明化合物中之同位素之實例包含氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，例如(但不限於)
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H (氘、D)、
3
H (氚)、
11
C、
13
C、
14
C、
15
N、
18
F、
31
P、
32
P、
35
S、
36
Cl及
125
I。多種經同位素標記之本發明化合物，例如納入放射性同位素(例如
3
H、
13
C及
14
C)之彼等。該等經同位素標記之化合物可用於代謝研究、反應動力學研究、檢測或成像技術(例如正電子發射斷層掃描術(PET)或單光子發射電腦化斷層掃描術(SPECT)，包含藥物或基質組織分佈分析)或患者之放射性治療。 本發明亦包含1至n個附接至碳原子之氫由氘代替之式(I)化合物之「氘化類似物」，其中n係分子中氫之數量。該等化合物展現增加之代謝抗性且由此可在投與哺乳動物、尤其人類時用於延長任何式(I)化合物之半衰期。例如參見Foster, 「Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism」, Trends Pharmacol. Sci. 5(12):524-527 (1984)。該等化合物係藉由業內所熟知之方式、例如藉由採用一或多個氫已由氘代替之起始材料來合成。 本發明之經氘標記或取代之治療性化合物可具有經改良之與分佈、代謝及排泄(ADME)相關之DMPK (藥物代謝及藥物動力學)性質。使用較重同位素(例如氘)取代可因更強代謝穩定性而提供某些治療優點，例如活體內半衰期延長、劑量需求降低及/或治療指數改良。經
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F標記之化合物可用於PET或SPECT研究。經同位素標記之本發明化合物及其前藥通常可藉由實施在反應圖中或在下文所闡述實例及製備中所揭示之程序藉由使用易於獲得之經同位素標記之試劑代替未經同位素標記之試劑來製備。應理解，氘在此背景中可視為式(I)化合物中之取代基。 此一較重同位素(特定而言氘)之濃度可定義為同位素富集係數。在本發明化合物中，未明確指定為具體同位素之任何原子意欲代表該原子之任何穩定同位素。除非另外陳述，否則在將一個位置明確指定為「H」或「氫」時，該位置應理解為具有其天然豐度同位素組成之氫。因此，在本發明化合物中，明確指定為氘(D)之任何原子意欲代表氘。式(I)化合物能夠形成如本文所闡述之鹽。提供本文所闡述化合物之醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、互變異構體形式、多晶型及前藥。「醫藥上可接受」或「生理學上可接受」係指可用於製備適用於獸醫或人類醫藥應用之醫藥組合物之化合物、鹽、組合物、劑型及其他材料。 鹽可為任何酸或鹼能夠與式(I)化合物所形成之鹽。其可(例如)選自醫藥上可接受之鹽或合成有用的鹽。術語給定化合物之「醫藥上可接受之鹽」係指保留給定化合物之生物有效性及性質且為生物上或其他方面合意之鹽。「醫藥上可接受之鹽」或「生理學上可接受之鹽」包含(例如)與無機酸形成之鹽及與有機酸形成之鹽。另外，若本文所闡述之化合物係以酸加成鹽形式獲得，則可藉由鹼化酸式鹽之溶液來獲得游離鹼。與之相反，若產物係游離鹼，則根據用於自鹼化合物製備酸加成鹽之習用程序，可藉由將游離鹼溶於適宜有機溶劑中且使用酸處理溶液來產生加成鹽、尤其醫藥上可接受之加成鹽。熟習此項技術者將瞭解可用於製備醫藥上可接受之無毒加成鹽之各種合成方法。可自無機酸及有機酸來製備醫藥上可接受之酸加成鹽。衍生自無機酸之鹽包含使用鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及諸如此類所形成之鹽。衍生自有機酸之鹽包含使用乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苯乙醇酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯-磺酸、水楊酸之鹽及諸如此類。同樣，醫藥上可接受之鹼加成鹽可自無機鹼及有機鹼製得。衍生自無機鹼之鹽包含(僅舉例而言)鈉、鉀、鋰、銨、鈣及鎂之鹽。衍生自有機鹼之鹽包含(但不限於)諸如以下等一級、二級及三級胺之鹽：烷基胺(亦即NH
2
(烷基))、二烷基胺(亦即HN(烷基)
2
)、三烷基胺(亦即N(烷基)
3
)、經取代烷基胺(亦即NH
2
(經取代烷基))、二(經取代烷基)胺(亦即HN(經取代烷基)
2
)、三(經取代烷基)胺(亦即N(經取代烷基)
3
)、烯基胺(亦即NH
2
(烯基))、二烯基胺(亦即HN(烯基)
2
)、三烯基胺(亦即N(烯基)
3
)、經取代烯基胺(亦即NH
2
(經取代烯基))、二(經取代烯基)胺(亦即HN(經取代烯基)
2
)、三(經取代烯基)胺(亦即N(經取代烯基)
3
、單-、二-或三環烷基胺(亦即NH
2
(環烷基)、HN(環烷基)
2
、N(環烷基)
3
)、單-、二-或三芳基胺(亦即NH
2
(芳基)、HN(芳基)
2
、N(芳基)
3
)或混合胺等。適宜胺之具體實例包含(僅舉例而言)異丙胺、三甲胺、二乙胺、三(異丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲基胺基乙醇、六氫吡嗪、六氫吡啶、嗎啉、N-乙基六氫吡啶及諸如此類。 如本文中所使用，「醫藥上可接受之載劑」或「醫藥上可接受之賦形劑」包含任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑及諸如此類。業內已知用於醫藥活性物質之該等介質及試劑之使用。除任何與活性成分不相容之習用介質或試劑外，亦涵蓋其於治療組合物中之使用。亦可將其他活性成分納入組合物中。 術語「治療有效量」係指在以一或多個劑量投與需要治療之患者(尤其人類)時足以實現如下文所定義治療之式(I)化合物之量。治療有效量將端視以下因素有所變化：患者、所治療疾病、患者之體重及/或年齡、疾病嚴重程度或如由合格處方醫師或照護者所確定之投與方式。 術語「治療(treatment或treating)」意指投與式(I)化合物或醫藥上可接受之鹽以用於以下目的：(i)延遲疾病發作，亦即使得疾病之臨床症狀不發生或延遲其發生；(ii)抑制疾病，亦即阻止臨床症狀之發生；及/或(iii)減輕疾病，亦即使得臨床症狀消退或減小其嚴重程度。
方法
本文揭示治療及/或預防有需要之患者之肝病之方法，其包括向患者投與治療有效量之式(I)化合物。可藉由血液中之升高酶濃度之存在來檢測活動性肝病之存在。具體而言，已知高於臨床上接受之正常範圍之丙胺酸胺基轉移酶(ALT)及天門冬胺酸胺基轉移酶(AST)之血液濃度可指示進行性肝損害。在醫學治療的同時，通常在臨床上監測肝病患者之ALT及AST之血液濃度以量測肝病進展。升高之ALT及AST減小至可接受正常範圍內可視為反映患者進行性肝損害之嚴重程度有所減小之臨床證據。 在某些實施例中，肝病係慢性肝病。慢性肝病涉及肝實質之進展性破壞及再生，從而引起纖維化及肝硬化。一般而言，慢性肝病可由以下因素引起：病毒(例如B型肝炎、C型肝炎、巨細胞病毒(CMV)或艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein Barr Virus，EBV))、毒性藥劑或藥物(例如酒精、胺甲喋呤(methotrexate)或呋喃妥因(nitrofurantoin))、代謝疾病(例如非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、血色素沈積症或威爾森氏病(Wilson's Disease))、自體免疫疾病(例如自體免疫慢性肝炎、原發性膽管膽管炎(先前稱為原發性膽管肝硬化)或原發性硬化性膽管炎)或其他病因(例如右心臟衰竭)。 在一實施例中，本文提供減小肝硬化程度之方法。在一實施例中，肝硬化之病理學特徵在於損失正常微觀小葉架構以及纖維化及結節性再生。量測肝硬化程度之方法在業內已眾所周知。在一實施例中，肝硬化程度減小約5%至約100%。在一實施例中，個體中之肝硬化程度減小至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或約100%。 在某些實施例中，肝病係代謝肝病。在一實施例中，肝病係非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。NAFLD與胰島素抗性及代謝症候群(肥胖症、混合型高脂血症、糖尿病(II型)及高血壓)有關。NAFLD可視為涵蓋諸多疾病活動性，且隨著脂肪累積於肝中(肝皮脂腺病)而開始。 已展示，肥胖症及胰島素抗性很可能在NAFLD之疾病過程中發揮強大作用。除不良飲食外，NAFLD亦具有若干其他已知病因。舉例而言，NAFLD可由某些藥劑引起，該等藥劑係(例如)胺碘達隆(amiodarone)、抗病毒藥(例如核苷類似物)、阿司匹林(aspirin) (罕見地，可作為兒童之雷依氏症候群(Reye's syndrome)之一部分)、皮質類固醇、胺甲喋呤、他莫昔芬(tamoxifen)或四環素(tetracycline)。NAFLD亦已藉助高果糖玉米糖漿的存在而與軟飲料之消耗有關，此可導致脂肪在腹部中之沈積增加，儘管蔗糖之消耗亦展示類似效應(很可能係由於其分解成果糖)。亦已知基因學發揮一定作用，此乃因已鑑別出關於此易感性之兩種基因突變。 若不予治療，則NAFLD可發展成非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，後者係NAFLD之最極端形式且係皮脂腺病與發炎及纖維化之組合狀態。NASH可視為肝硬化之主要病因。因此，本文提供治療及/或預防有需要之患者之非酒精性脂肪性肝炎(NASH)之方法，其包括向患者投與治療有效量之式(I)化合物。 本文亦提供治療及/或預防有需要之患者之肝纖維化之方法，其包括向患者投與治療有效量之式(I)化合物。肝纖維化係細胞外基質蛋白(包含膠原)之過度累積，其發生於大部分類型之慢性肝病中。在某些實施例中，晚期肝纖維化會產生肝硬化及肝衰竭。量測肝組織學(例如纖維化程度、小葉肝炎及門靜脈周圍橋接壞死之變化)之方法在業內已眾所周知。在一實施例中，如本文所闡述之治療可自基線改良患者之纖維化，例如自F4改良至F3、自F3改良至F2或自F2改良至F1。在一實施例中，在24週日治療後，患者之纖維化評分改良一或多個等級。在一實施例中，提供治療有需要之患者之肝纖維化之方法，其中患者之肝纖維化階段係F3，該方法包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。在一實施例中，提供治療有需要之患者之肝纖維化之方法，其中患者之肝纖維化階段係F3，該方法包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑與治療有效量之ACC抑制劑之組合。在一實施例中，提供治療有需要之患者之肝纖維化之方法，其中患者之肝纖維化階段係F4，該方法包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。在另一實施例中，提供治療有需要之患者之肝纖維化之方法，其中患者之肝纖維化階段係F4，該方法包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑與治療有效量之ACC抑制劑之組合。 在其他實施例中，提供治療有需要之患者之NASH之方法，其中患者之肝纖維化階段係F3，該方法包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。在其他實施例中，提供治療有需要之患者之NASH之方法，其中患者之肝纖維化階段係F4，該方法包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。 肝疾病可分為4個階段：F0指示無纖維化；F1指示輕度纖維化；F2指示中等纖維化；F3指示嚴重纖維化；且F4指示肝硬化。如本文中所使用，「纖維化評分」係指如由Kleiner等人(Hepatology, Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease (2005), 41: 1313-1321)所闡述之纖維化評分系統。 在一實施例中，肝纖維化(其係形成纖維性組織、纖維樣或纖維性退化)之程度減小約90%以上。在一實施例中，纖維化(其係形成纖維性組織、纖維樣或纖維性退化)之程度減小至少約90%、至少約80%、至少約70%、至少約60%、至少約50%、至少約40%、至少約30%、至少約20%、至少約10%、至少約5%或至少約2%。 在一實施例中，本文所提供之化合物可減小肝中之纖維生成程度。肝纖維生成係使得在肝中沈積過量細胞外基質組分(稱為纖維化)之過程。其可觀察於諸如以下等諸多病狀中：B型及C型慢性病毒肝炎、酒精性肝病、藥物誘導性肝病、血色素沈積症、自體免疫肝炎、威爾森氏病、原發性膽管膽管炎(先前稱為原發性膽管肝硬化)、硬化性膽管炎、肝血吸蟲病及其他病狀。在一實施例中，纖維生成程度減小約90%以上。在一實施例中，纖維生成程度減小至少約90%、至少約80%、至少約70%、至少約60%、至少約50%、至少40%、至少約30%、至少約20%、至少約10%、至少約5%或至少約2%。 在其他實施例中，本文提供治療及/或預防有需要之患者之原發性硬化性膽管炎(PSC)之方法，其包括向患者投與治療有效量之式(I)化合物。 本文亦揭示治療或預防需要治療之患者之心血管病症之方法，其包括投與治療有效量之式(I)化合物。心血管疾病係指諸如以下等疾病中之任一者或一者以上：心臟衰竭(包含充血性心臟衰竭、舒張性心臟衰竭、收縮性心臟衰竭、射血分數保留型心臟衰竭)、急性心臟衰竭、缺血、復發性缺血、心肌梗塞、心律不整、心絞痛(包含運動誘導型心絞痛、變異性心絞痛、穩定型心絞痛、不穩定型心絞痛)、急性冠狀動脈症候群、糖尿病、間歇性跛行及特發性肺纖維化。 本文亦提供治療及/或預防有需要之患者之肺血管疾病之方法，其包括向患者投與治療有效量之式(I)化合物或其鹽、共晶體溶、劑合物或水合物。在某些實施例中，肺血管疾病係肺動脈高血壓(PAH)。在一些實施例中，患者經診斷患有第1、1’、1’’、2、3、4或5類肺高血壓。 本文提供治療及/或預防有需要之患者之右心室功能障礙之方法，其包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。 本文亦提供治療、預防及/或逆轉有需要之患者之肺動脈狹窄或限制之方法，其包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。另外，本文提供減小或正規化有需要之患者中之高平均肺動脈壓(mPAP)及/或高肺血管阻力之方法，其包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。在一實施例中，可藉由本文所闡述之方法將＞ 25 mmHg之靜態下高mPAP減小至靜態下正常範圍內之值。在一些實施例中，可藉由本文所闡述之方法將＞ 25 mmHg之靜態下高mPAP減小至靜態下之約22 mmHg、20 mmHg、18 mmHg、16 mmHg或14 mmHg。在某些實施例中，藉由右心導管檢查(RHC)來測定mPAP。 本文提供改良或減少有需要之患者之PAH症狀之方法，其包括投與治療有效量之ASK1抑制劑。在一些實施例中，PAH症狀包含且不限於氣絕或呼吸短促(呼吸困難)、疲勞、頭昏、昏厥(暈厥)、踝及腿腫脹(水腫)、胸痛、右心臟衰竭及/或功能障礙。在某些實施例中，可藉由以下各項來測定改良：肺血管阻力(PVR)自基線之變化、心臟指數(CI) (例如平均肺動脈壓(mPAP)、平均右心房壓(mRAP)、混合靜脈氧飽和度(SvO2)及右心室心臟功率)自基線之變化、症狀及功能之臨床量度(包含(但不限於)非最大強度運動(6分鐘步行測試(6MWT))、6MWT之後之心率恢復率(HRR)、Borg呼吸困難指數、WHO功能種類、N-末端腦利鈉肽前體及/或藉由SF-36
®
健康調查測得之生活品質)自基線之變化。在其他實施例中，藉由右心導管檢查來測定PVR。在其他實施例中，藉由超音波心動描記術或心臟血液動力學數據來測定心臟功能。 另外，本文提供減小有需要之患者之肺血管系統或動脈之重塑之方法，其包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。 另外，本文提供治療及/或預防有需要之患者之右心室故障或右心室功能障礙之方法，其包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。在一實施例中，可藉由心臟成像(例如超音波心動描記術及心臟MRI)來檢測或監測右心室故障或功能障礙。 本文提供改良及/或減小有需要之患者PVR、肺壓力、肺血管重塑、血管功能、不適應性RV肥大及/或RV功能之方法，其包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。 本申請案提供有關於需要之患者之療法或治療，其中該患者已經或懷疑患有肺血管疾病(例如肺高血壓或肺動脈高血壓)。在一實施例中，患者經歷一或多種選自氣絕或呼吸短促(呼吸困難)、疲勞、頭昏、昏厥(暈厥)、踝及腿腫脹(水腫)或胸痛(例如心絞痛)之症狀。患者可處於各個臨床或治療階段，包含未接受對肺高血壓或肺動脈高血壓之任何先前治療之患者、已接受用於肺高血壓或肺動脈高血壓之先前療法或藥物並保持症狀性之患者及當前接受用於肺高血壓或肺動脈高血壓之其他療法或藥物之患者。舉例而言，患者可能已同時接受本申請案之療法(例如ASK1抑制劑或其醫藥組合物)及其他PAH藥物。 在任一前述闡述中，可藉由以下各項來測定藉由本文所闡述方法達成之治療、預防、減小、逆轉及/或改良：肺血管阻力(PVR)自基線之變化、心臟指數(CI) (例如平均肺動脈壓(mPAP)、平均右心房壓(mRAP)、混合靜脈氧飽和度(SvO2)及右心室心臟功率)自基線之變化、症狀及功能之臨床量度(包含(但不限於)非最大強度運動(6分鐘步行測試(6MWT))、6MWT之後之心率恢復率(HRR)、呼吸困難指數、WHO功能種類、N-末端腦利鈉肽前體及/或藉由SF-36
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健康調查測得之生活品質)自基線之變化。在其他實施例中，藉由右心導管檢查來測定PVR。在其他實施例中，藉由超音波心動描記術或心臟血液動力學數據來測定心臟功能。基線係指自任何治療之前之個體所測定或量測之值、數量或讀數。舉例而言，基線係來自使用本文所闡述方法治療之前之患者、來自健康個體、來自個體組或來自適宜導則之值、數量或讀數。在一實施例中，基線係來自使用方法本文所闡述治療之前之患者之值、數量或讀數。可藉由任何適宜方法來測定或量測基線值或數量。 如本文中所使用，術語「右心室(RV)功能障礙」、「右心室功能障礙」、「右心臟衰竭」或其變體係指右心室或右心臟不能實施正常功能(例如將血液泵送出心臟並進入肺中以補充氧及/或維持足夠血流以滿足身體需要)。可藉由心臟成像(包含超音波心動描記術及心臟MRI)來測定或檢測RV功能障礙，該心臟成像表徵結構變化(心肌肥大，隨後係進展性收縮性功能障礙及心室舒張)及/或功能變化(縮短分數減小、填充壓增加、右心室射血分數減小及心輸出量降低)。亦可使用其他常用方法來測定或檢測RV功能障礙。同樣，「促進」或「刺激」係指一或多種因素可導致或有助於活性、疾病、病症或病狀發生進展。舉例而言，促進或有助於PAH用於闡述一或多種因素可導致或有助於發生PAH之進展或發生。 本文亦揭示治療或預防腎病症(例如慢性腎病或糖尿病性腎病)之方法。本文所用之術語「慢性腎病」係指隨時間(通常數月或甚至數年)進展性損失腎功能。慢性腎病(CKD)係藉由可勝任照護者使用熟習此項技術者已知之適當資訊、測試或標記物來診斷。慢性腎病包含隱性腎病。本文所用之術語「糖尿病性腎病」係指由糖尿病引起、由糖尿病加重或與糖尿病共存之腎病。其係發生於大約30%之糖尿病患者中之慢性腎病形式。其可定義為存在白蛋白尿及/或受損腎功能之糖尿病(亦即腎小球濾過率減小(
參見
de B, I等人， Temporal trends in the prevalence of diabetic kidney disease in the United States.
JAMA
2011 Jun. 22；305(24):2532-2539)。 在替代實施例中，可使用式(I)化合物或其鹽來預防移植排斥或降低其可能性。 在其他實施例中，藉由投與式(I)化合物或其鹽來治療發炎性疾病(例如類風濕性關節炎)。 在某些實施例中，藉由投與式(I)化合物或其鹽來治療全身性紅斑狼瘡。 在其他實施例中，藉由投與式(I)化合物或其鹽來治療神經病變(例如HIV相關神經病變)。 本文亦提供改良有需要之患者中與氧化應力有關之病理學後果或結果之方法，其包括向患者投與治療有效量之ASK1抑制劑。
組合
在一實施例中，將式(I)化合物與選自以下之其他活性劑進行組合： ACE抑制劑、乙醯基CoA羧基酶抑制劑、腺苷A3受體激動劑、脂連素受體激動劑、AKT蛋白質激酶抑制劑、AMP活化蛋白激酶(AMPK)抑制劑、澱粉素受體激動劑、血管緊張素II AT-1受體拮抗劑、自分泌運動因子抑制劑、生物活性脂質、降鈣素激動劑、卡斯蛋白酶(Caspase)抑制劑、卡斯蛋白酶-3刺激劑、細胞自溶酶B抑制劑、細胞自溶酶K抑制劑、細胞自溶酶S抑制劑、微囊蛋白1抑制劑、CCR2趨化介素拮抗劑、CCR3趨化介素拮抗劑、CCR5趨化介素拮抗劑、氯離子通道刺激劑、CNR1抑制劑、細胞週期蛋白D1抑制劑、細胞色素 P450 7A1抑制劑、DGAT2基因抑制劑、二肽基肽酶IV抑制劑、嗜伊紅趨化因子(Eotaxin)配體抑制劑、細胞外基質蛋白調節劑、類法呢醇X受體激動劑、FGF1受體激動劑、FGF-19配體、半乳糖凝集素-3抑制劑、升糖素受體激動劑、升糖素樣肽1激動劑、G蛋白質偶合膽汁酸受體1激動劑、刺蝟蛋白(Hedgehog，Hh)調節劑、C型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制劑、HMG CoA還原酶抑制劑、IL-10激動劑、IL-17拮抗劑、廻腸鈉-膽汁酸協同轉運蛋白抑制劑、胰島素敏化劑、β3或β1整聯蛋白、介白素-1受體相關激酶4 (IRAK4)、Jak2酪胺酸激酶抑制劑、Klotho β刺激劑、5-脂氧合酶抑制劑、脂蛋白脂肪酶抑制劑、LPL基因刺激劑、溶血磷脂酸-1受體拮抗劑、離胺醯基氧化酶同系物2抑制劑、基質金屬蛋白酶(MMP) MEKK-5蛋白質激酶抑制劑、膜銅胺氧化酶(VAP-1)抑制劑、甲硫胺酸胺基肽酶-2抑制劑、甲基CpG結合蛋白2調節劑、粒線體解偶合劑、髓磷脂鹼性蛋白刺激劑、NACHT LRR PYD結構域蛋白3 (NLRP3)抑制劑、NAD依賴性去乙醯酶沉默調節蛋白刺激劑、NADPH氧化酶1抑制劑、NADPH氧化酶4抑制劑、菸鹼酸受體1激動劑、P2Y13嘌呤受體刺激劑、PDE 3抑制劑、PDE 4抑制劑、PDE 5抑制劑、PDGF受體β調節劑、磷脂酶C抑制劑、PPAR α激動劑、PPAR δ激動劑、PPAR γ激動劑、PPAR γ調節劑、蛋白酶活化受體-2拮抗劑、蛋白質激酶調節劑、Rho相關蛋白質激酶2抑制劑、鈉葡萄糖轉運蛋白-2抑制劑、SREBP轉錄因子抑制劑、STAT-1抑制劑、硬脂醯基CoA去飽和酶-1抑制劑、細胞介素信號傳導-1刺激因子阻抑劑、細胞介素信號傳導-3刺激因子阻抑劑、轉變生長因子β1 (TGF-β1)、甲狀腺激素受體β激動劑、TLR-4拮抗劑、轉麩醯胺酸酶抑制劑、酪胺酸激酶受體調節劑、未指定GPCR調節劑、未指定核激素受體調節劑、WNT調節劑、YAP/TAZ調節劑。具體實例包含A-4250、AC-3174、乙醯基水楊酸、AK-20、替帕阿立泊集(alipogene tiparvovec)、阿拉克爾(aramchol)、ARI-3037MO、阿托伐他汀(atorvastatin)、AZ化合物(NASH/NAFLD)、柏替木單抗(bertilimumab)、無水甜菜鹼、BI-1467335、BMS-986036、BMT-053011、BOT-191、CAT-2003、西克維羅(cenicriviroc)、CER-209、CF-102、CNX-014、CNX-023、CNX-024、CNX-025、考柔斯同(cobiprostone)、考來維侖(colesevelam)、達帕格嗪(dapagliflozin)、氘化吡格列酮(pioglitazone) R-對映異構體2,4-二硝基苯酚、DRX-065、DS-102、雙重作用之升糖素樣肽1受體/升糖素受體共激動劑、DUR-928、EDP-305、艾拉菲布軟諾(elafibranor)、艾麗卡桑(emricasan)、依那普利(enalapril)、埃格列淨(ertugliflozin)、GKT-831、GNF-5120、GR-MD-02、GS-4997、GS-9674、氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、二十碳五烯酸乙酯、IMM-124-E、INT-767、IONIS-DGAT2Rx、伊格列淨(ipragliflozin)、厄貝沙坦(Irbesarta) +丙帕鍺(propagermanium)、IVA-337、JKB-121、KB-GE-001、KBP-042、KD-025、白胺酸+二甲雙胍(metformin) +西地那非(sildenafil)、利拉列汀(linagliptin)、利拉魯肽(liraglutide)、LJN-452、MBX-8025、MDV-4463、巰乙胺(mercaptamine)、MGL-3196、MGL-3745、MSDC-0602K、那瑪珠單抗(namacizumab)、NC-101、NDI-010976、ND-L02-s0201、NGM-282、NGM-313、NGM-386、NGM-395、去甲熊去氧膽酸、O-304、奧貝膽酸(obeticholic acid)、奧利索西(olesoxime)、PAT-505、PAT-048、聚乙二醇化伊洛白介素(peg-ilodecakin)、吡格列酮、Px-102、PXS-4728A、PZ-235、RDX-009程式、依碳酸瑞格列淨(remogliflozin etabonate)、RG-125、沙羅格列紮(saroglitazar)、索馬魯肽(semaglutide)、司妥佐單抗(simtuzumab)、索利黴素(solithromycin)、索塔洛斤(sotagliflozin)、TCM-606F、TEV-45478、替布卡特(tipelukast) (MN-001)、TRX-318、UD-009、熊去氧膽酸、VBY-376、VBY-825、VK-2809、水合沃利西巴鉀乙醇合物(volixibat potassium ethanolate hydrate) (SHP-626)、VVP-100X、WAV-301及ZGN-83。 在本文所揭示之方法及醫藥組合物之某些實施例中，將FXR激動劑與式(I)化合物或其鹽及/或形式一起投與或調配。在一實施例中，FXR激動劑係具有式(III)結構之化合物：
(III)；或其醫藥上可接受之鹽、共晶體、溶劑合物或水合物。 在其他實施例中，FXR激動劑係具有式(IV)結構之化合物：
(IV)；或其醫藥上可接受之鹽、共晶體、溶劑合物或水合物。 可使用熟習此項技術者已知之方法(例如闡述於美國公開案第9,139,539號中者)來合成及表徵式(III)及式(IV)之化合物。 在另一實施例中，將式(I)化合物或其鹽、共晶體、溶劑合物或水合物與ACC抑制劑進行組合。在一實施例中，ACC抑制劑係式(V)化合物：
(V)；或其醫藥上可接受之鹽、共晶體、溶劑合物或水合物。 可受益於ASK1抑制劑與其他治療劑之組合治療之心血管相關疾病或病狀包含(但不限於)限制、心絞痛(包含穩定型心絞痛、不穩定型心絞痛(UA)、運動誘導型心絞痛、變異性心絞痛)、心律不整、間歇性跛行、心肌梗塞(包含非STE心肌梗塞(NSTEMI))、心臟衰竭(包含充血性(或慢性)心臟衰竭、急性心臟衰竭)或復發性缺血。 適於治療心血管相關疾病或病狀之治療劑包含抗心絞痛劑、心臟衰竭劑、抗血栓劑、抗心律不整劑劑、抗高血壓劑及降脂劑。 共投與ASK1抑制劑與適於治療心血管相關病狀之治療劑使得可增強患者當前正接受之標準護理療法。 抗心絞痛劑包含β-阻斷劑、鈣通道阻斷劑及硝酸酯。β阻斷劑藉由減小心臟之工作負荷以降低心率並減少劇烈心臟收縮來減小心臟之氧需求。β-阻斷劑之實例包含醋丁洛爾(acebutolol) (Sectral)、阿替洛爾(atenolol) (Tenormin)、倍他洛爾(betaxolol) (Kerlone)、比索洛爾(bisoprolol)/氫氯噻嗪(Ziac)、比索洛爾(Zebeta)、卡替洛爾(carteolol) (Cartrol)、艾司洛爾(esmolol) (Brevibloc)、拉貝洛爾(labetalol) (Normodyne、Trandate)、美托洛爾(metoprolol) (Lopressor、Toprol XL)、納多洛爾(nadolol) (Corgard)、普萘洛爾(propranolol) (Inderal)、索他洛爾(sotalol) (Betapace)及噻嗎洛爾(timolol) (Blocadren)。 硝酸酯使動脈及靜脈發生擴張，由此增加冠狀動脈血流且降低血壓。硝酸酯之實例包含硝基甘油、硝酸酯貼劑、異山梨醇二硝酸酯及異山梨醇-5-單硝酸酯。 鈣通道阻斷劑可防止鈣正流入心臟及血管之細胞中以使血管鬆弛，由此增加心臟中血液及氧之供應。鈣通道阻斷劑之實例包含胺氯地平(amlodipine) (Norvasc、Lotrel)、苄普地爾(bepridil) (Vascor)、地爾硫卓(diltiazem) (Cardizem、Tiazac)、非洛地平(felodipine) (Plendil)、硝苯地平(nifedipine) (Adalat、Procardia)、尼莫地平(nimodipine) (Nimotop)、尼索地平(nisoldipine) (Sular)、維拉帕米(verapamil) (Calan、Isoptin、Verelan)及尼卡地平(nicardipine)。 用於治療心臟衰竭之藥劑包含利尿劑、ACE抑制劑、血管舒張劑及強心苷。利尿劑消除組織及循環中之過量流體，由此減輕許多心臟衰竭症狀。利尿劑之實例包含氫氯噻嗪、美托拉宗(metolazone) (Zaroxolyn)、呋塞米(furosemide) (Lasix)、布美他尼(bumetanide) (Bumex)、螺內酯(spironolactone) (Aldactone)及依普利酮(eplerenone) (Inspra)。 血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑藉由擴展血管且降低抗血流性來減小心臟之工作負荷。ACE抑制劑之實例包含貝那普利(benazepril) (Lotensin)、卡托普利(captopril) (Capoten)、依那普利(Vasotec)、福辛普利(fosinopril) (Monopril)、賴諾普利(lisinopril) (Prinivil、Zestril)、莫昔普利(moexipril) (Univasc)、培哚普利(perindopril) (Aceon)、喹那普利(quinapril) (Accupril)、雷米普利(ramipril) (Altace)及群多普利(trandolapril) (Mavik)。 血管舒張劑藉由使血管鬆弛及擴張來減小對血管之壓力。血管舒張劑之實例包含肼屈嗪(hydralazine)、二氮嗪(diazoxide)、哌唑嗪(prazosin)、可尼丁(clonidine)及甲基多巴(methyldopa)。ACE抑制劑、硝酸酯、鉀通道活化劑及鈣通道阻斷劑亦用作血管舒張劑。 強心苷係增加心臟收縮力之化合物。該等化合物會強化心臟之泵送能力且改良不規則心跳活性。強心苷之實例包含毛地黃(digitalis)、地高辛(digoxin)及洋地黃毒苷(digitoxin)。 抗血栓劑抑制血液之凝血能力。存在以下三大類抗血栓劑，即血小板抑制劑、抗凝血劑及溶血栓劑。血小板抑制劑抑制血小板之凝血活性，由此減少動脈中之凝血。血小板抑制劑之實例包含乙醯水楊酸(阿司匹林)、噻氯匹定(ticlopidine)、氯吡格雷(clopidogrel) (plavix)、雙嘧達莫(dipyridamole)、西洛他唑(cilostazol)、潘生丁(persantine)、磺吡酮(sulfinpyrazone)、雙嘧達莫、吲哚美辛(indomethacin)及醣蛋白llb/llla抑制劑(例如阿昔單抗(abciximab)、替羅非班(tirofiban)及依替巴肽(eptifibatide) (Integrelin))。β阻斷劑及鈣通道阻斷劑亦具有血小板抑制效應。 抗凝血劑預防血塊長大且防止形成新血塊。抗凝血劑之實例包含比伐盧定(bivalirudin) (Angiomax)、華法林(warfarin) (Coumadin)、未經分級分離之肝素、低分子量肝素、磺達肝素(danaparoid)、來匹盧定(lepirudin)及阿加曲班(argatroban)。 溶血栓劑用於破壞現有血塊。溶血栓劑之實例包含鏈激酶(streptokinase)、尿激酶及替奈普酶(tenecteplase) (TNK)及組織纖維蛋白溶酶原活化劑(t-PA)。 使用抗心律不整劑來治療心率及心律之病症。抗心律不整劑之實例包含胺碘達隆、奎寧定(quinidine)、普魯卡因胺(procainamide)、利多卡因(lidocaine)及普羅帕非酮(propafenone)。亦使用強心苷及β阻斷劑作為抗心律不整劑。 使用抗高血壓劑來治療高血壓，高血壓係血壓持續高於正常值之病狀。高血壓與心血管疾病之許多態樣(包含充血性心臟衰竭、動脈粥樣硬化及血塊形成)有關。 抗高血壓劑之實例包含：α1-腎上腺素能拮抗劑，例如哌唑嗪(Minipress)、甲磺酸多沙唑嗪(doxazosin mesylate) (Cardura)、哌唑嗪鹽酸鹽(Minipress)、哌唑嗪、泊利噻嗪(polythiazide) (Minizide)及特拉唑嗪鹽酸鹽(terazosin hydrochloride) (Hytrin)；β-腎上腺素能拮抗劑，例如普萘洛爾(Inderal)、納多洛爾(Corgard)、噻嗎洛爾(Blocadren)、美托洛爾(Lopressor)及吲哚洛爾(pindolol) (Visken)；中樞α-腎上腺素受體激動劑，例如可尼丁鹽酸鹽(Catapres)、可尼丁鹽酸鹽與氯噻酮(chlorthalidone) (Clorpres、Combipres)、乙酸胍那苄(guanabenz Acetate) (Wytensin)、胍法辛鹽酸鹽(guanfacine hydrochloride) (Tenex)、甲基多巴(Aldomet)、甲基多巴與氫氯噻嗪(Aldoclor)、甲基多巴與氫氯噻嗪(Aldoril)；組合α/β-腎上腺素能拮抗劑，例如拉貝洛爾(Normodyne、Trandate)、卡維地洛(Carvedilol) (Coreg)；腎上腺素能神經元阻斷劑，例如胍乙啶(guanethidine) (Ismelin)、利血平(reserpine) (Serpasil)；作用於中樞神經系統之抗高血壓劑，例如可尼丁(Catapres)、甲基多巴(Aldomet)、胍那苄(guanabenz) (Wytensin)；抗血管緊張素II藥劑；ACE抑制劑，例如培哚普利(Aceon)、卡托普利(Capoten)、依那普利(Vasotec)、賴諾普利(Prinivil、Zestril)；血管緊張素-II受體拮抗劑，例如坎地沙坦(Candesartan) (Atacand)、依普羅沙坦(Eprosartan) (Teveten)、厄貝沙坦(Irbesartan) (Avapro)、氯沙坦(Losartan) (Cozaar)、替米沙坦(Telmisartan) (Micardis)、纈沙坦(Valsartan) (Diovan)；鈣通道阻斷劑，例如維拉帕米(Calan、Isoptin)、地爾硫卓(Cardizem)、硝苯地平(Adalat、Procardia)；利尿劑；直接血管舒張劑，例如硝普鹽(nitroprusside) (Nipride)、二氮嗪(Hyperstat IV)、肼屈嗪(Apresoline)、米諾地爾(minoxidil) (Loniten)、維拉帕米；及鉀通道活化劑，例如阿普卡林(aprikalim)、比嗎卡林(bimakalim)、色滿卡林(cromakalim)、依馬卡林(emakalim)、尼可地爾(nicorandil)及吡那地爾(pinacidil)。 使用降脂劑來降低存在於血液中之膽固醇或脂肪醣之量。降脂劑之實例包含：苯紮貝特(bezafibrate) (Bezalip)、環丙貝特(ciprofibrate) (Modalim)；及他汀(statin)，例如阿托伐他汀(Lipitor)、氟伐他汀(fluvastatin) (Lescol)、洛伐他汀(lovastatin) (Mevacor、Altocor)、美伐他汀(mevastatin)、匹伐他汀(pitavastatin) (Livalo、Pitava)、普伐他汀(pravastatin) (Lipostat)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin) (Crestor)及斯伐他汀(simvastatin) (Zocor)。 在本發明中，需要ASK1抑制劑之個體通常患有繼發性醫學病狀，例如代謝病症、肺病症、周邊血管病症或胃腸道病症中之一或多者。該等患者可受益於包括向患者投與本發明化合物與至少一種治療劑之組合之組合療法之治療。 肺病症係指與肺相關之任何疾病或病狀。肺病症之實例包含(但不限於)氣喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、支氣管炎及肺氣腫。 用於治療肺病症之治療劑之實例包含支氣管擴張劑(包含β2激動劑及抗膽鹼藥)、皮質類固醇及電解質補充劑。用於治療肺病症之治療劑之具體實例包含腎上腺素(epinephrine)、特布他林(terbutaline) (Brethaire、Bricanyl)、沙丁胺醇(albuterol) (Proventil)、沙美特羅(salmeterol) (Serevent、Serevent Diskus)、茶鹼(theophylline)、異丙托溴銨(ipratropium bromide) (Atrovent)、噻托溴銨(tiotropium) (Spiriva)、甲基普賴蘇濃(methylprednisolone) (Solu-Medrol、Medrol)、鎂及鉀。 代謝病症之實例包含(但不限於)糖尿病(包含I型及II型糖尿病)、代謝症候群、血脂異常、肥胖症、葡萄糖耐受不良、高血壓、血清膽固醇升高及三甘油酯升高。 用於治療代謝病症之治療劑之實例包含抗高血壓劑及降脂劑。用於治療代謝病症之其他治療劑包含胰島素、磺醯脲、雙胍、α-葡醣苷酶抑制劑及腸促胰液素模擬物。 周邊血管病症係與位於心臟及腦外部之血管(動脈及靜脈)相關之病症，包含(例如)周邊動脈疾病(PAD)，該病狀發生於向內部器官、臂及腿供應血液之動脈因動脈粥樣硬化而變得完全或部分地被阻斷時。 胃腸道病症係指與胃腸道有關之疾病及病狀。胃腸道病症之實例包含胃食道返流病(GERD)、發炎性腸病(IBD)、胃腸炎、胃炎及消化性潰瘍病及胰臟炎。 用於治療胃腸道病症之治療劑之實例包含：質子幫浦抑制劑，例如泮托拉唑(pantoprazole) (Protonix)、蘭索拉唑(lansoprazole) (Prevacid)、伊索拉唑(esomeprazole) (Nexium)、奧美拉唑(omeprazole) (Prilosec)、雷貝拉唑(rabeprazole)；H2阻斷劑，例如希美替定(cimetidine) (Tagamet)、雷尼替定(ranitidine) (Zantac)、法莫替定(famotidine) (Pepcid)、尼紮替定(nizatidine) (Axid)；前列腺素，例如米索前列醇(misoprostol) (Cytotec)；硫糖鋁(sucralfate)；及抗酸劑(antacid)。 在一實施例中，可組合使用如本文所揭示之式(I)化合物或其鹽、共晶體、溶劑合物或水合物與一或多種用於及/或經研發以治療胃腸道病症之其他治療劑。在一實施例中，可組合使用本文所揭示之式(I)化合物或其鹽、共晶體、溶劑合物或水合物與一或多種用於及/或經研發以治療發炎性病症(例如IBD)之其他治療劑。在該等實施例中，一或多種其他治療劑可為α4β7抑制劑、類固醇、MMP-9抗體、S1P1激動劑、TNF生物試劑或其任一組合。 在一些實施例中，一或多種其他治療劑可為α4β7整聯蛋白抑制劑或抑制α4β7整聯蛋白之表現及/或活性之藥劑。抑制劑可為小分子或生物試劑。舉例而言，α4β7整聯蛋白抑制劑可為那他珠單抗(natalizumab)或維多珠單抗(vedolizumab)。 在一些實施例中，一或多種其他治療劑可為類固醇，包含(但不限於)皮質類固醇。可藉由各種途徑來投與皮質類固醇，該等途徑包含經靜脈內(亦即甲基普賴蘇濃、氫化可的松(hydrocortisone))、經口(亦即普賴松(prednisone)、普賴蘇濃(prednisolone)、布地奈德(budesonide)、地塞米松(dexamethasone))或經局部(亦即灌腸、栓劑或發泡體製劑)。 在一些實施例中，一或多種其他治療劑可為MMP9抑制劑或抑制MMP9之表現及/或活性之藥劑。MMP9之代表性蛋白質序列係基因庫登錄號NP_004985。抑制劑可為小分子或生物試劑。舉例而言，Gu等人，The Journal of Neuroscience, 25(27): 6401-6408 (2005)揭示特定MMP9抑制劑SB-3CT (CAS 292605-14-2)。另外，亦證實，siRNA、反義RNA及抗體可抑制MMP9之表現或活性且屬本發明範圍內。在一實施例中，MMP9抑制劑係單株抗MMP9抗體。在一些實施例中，一或多種其他治療劑包含MMP9抑制劑及核苷類似物(例如吉西他濱(gemcitabine))。 在一些實施例中，一或多種其他治療劑可為神經鞘胺醇1-磷酸鹽受體(SlPl)抑制劑或抑制SlPl之表現及/或活性之藥劑。抑制劑可為小分子或生物試劑。舉例而言，SlPl抑制劑可為RPC1063。 在一些實施例中，一或多種其他治療劑可為TNF抑制劑或抑制TNF之表現及/或活性之藥劑。抑制劑可為小分子或生物試劑。舉例而言，TNF抑制劑可為戈利木單抗(golimumab)。 在一些實施例中，使用及/或研發一或多種其他治療劑以治療潰瘍性結腸炎(UC)及/或克羅恩氏病(Crohn disease，CD)。藥劑可為生物試劑或小分子。在一些實施例中，藥劑係SlPl、IL-6、CX3CL1 、DHODH、＜χ4、β7、JAK、TNF、CB、IL-12/IL-23、CCL20、TLR9、MAdCAM、CCR9、CXCL10、Smad7、PDE4、MC、VLA-1、GC、GATA-3、嗜伊紅趨化因子、FFA2、LIGHT、FMS、MMP9、CD40、類固醇、5-ASA、Immunomod、STAT3及/或EP4之調節劑(例如激動劑或拮抗劑)。在一些實施例中，JAK抑制劑係非戈替尼(filgotinib)。 用於及/或經研發以治療潰瘍性結腸炎(UC)之藥劑之非限制性實例包含GSK3050002 (CCL20調節劑，GSK)、GS-5745 (MMP9調節劑，Gilead)、AVX-470 (TNF調節劑，Avaxia)、柏替木單抗(嗜伊紅趨化因子E調節劑，Immune Pharma)、西姆潑尼(Simponi) (TNF調節劑，Johnson & Johnson及Merck)、RX-10001 (Resolvyx)、IBD-98 (5-ASA調節劑，Holy Stone)、SP-333 (GC調節劑，Synergy)、KAG-308 (EP4調節劑，Kaken)、SB012 (GATA-3調節劑，Sterna)、AJM300 (＜x4調節劑，Ajinomoto)、BL-7040 (TLR9調節劑，BiolineRx)、TAK-114 (SAT3調節劑，Takeda)、CyCol (Sigmoid)、GWP-42003 (CB調節劑，GW Pharma)、ASP3291 (MC調節劑，Drais)、GLPG0974 (FFA2調節劑，Galapagos)、奧紮莫德(Ozanimod) (S1P1調節劑，Receptos)、ASP015K (JAK調節劑，Astellas)、阿普斯特(Apremilast) (PDE4調節劑，Celgene)、左恩那莎(Zoenasa) (Altheus)、卡帕洛克(Kappaproct) (TLR9調節劑，InDex)、磷脂醯膽鹼(Dr Falk/Lipid Tx)、托法替尼(Tofacitinib) (JAk調節劑，Pfizer)、科爾蒙特(Cortment) (類固醇調節劑，Ferring)、尤溪裡斯(Uceris) (類固醇調節劑，Salix)及5-ASA調節劑(例如Delzicol (Actavis)、Canasa (Aptalis)、Asacol (Actavis)、Pentasa (Shire/Ferring)、Lialda (Shire)、Mezavant (Shire)、Apriso (Salix)、Colazal (Salix)、Giazo (Salix)及Salofalk (Dr Falk))。用於及/或經研發以治療克羅恩氏病(CD)之藥劑之非限制性實例包含FFP102 (CD40調節劑，Fast Forward)、E6011 (CX3CL1調節劑，Eisai)、PF-06480605 (Pfizer)、QBECO SSI (Immunomod調節劑，Qu Biologies)、PDA-001 (Celgene)、BI 655066 (IL-12/IL-23調節劑，Boehringer)、TNFa人體細胞因子(kinoid) (TNF調節劑，Neovacs)、AMG 139/MEDI-2070 (IL-12/IL-23調節劑，AstraZeneca)、PF-04236921 (IL-6調節劑，Pfizer)、替薩布瑞(Tysabri) (β7調節劑，由美國之Biogen Idee出售)、西姆齊亞(Cimzia) (由美國之UCB出售)、JNJ-40346527 (FMS調節劑，J&J)、SGX-203 (類固醇調節劑，Solgenix)、CyCron (Sigmoid)、CCX507 (CCR9調節劑，ChemoCentryx)、MT1303 (S1P1調節劑，Mitsubishi)、6-MP (Teva)、ABT-494 (JAk調節劑，Abbvie)、托法替尼(JAk調節劑，Pfizer)、TRK-170 (β7調節劑，Toray)、蒙戈絲恩(Mongersen) (Smad7調節劑，Celgene)、RHB-104 (Redhill)、力法西敏(Rifaxmin) EIR (Salix)、布登法克(Budenofalk) (Dr Falk)及恩托科特(Entocort) (AstraZeneca)。 用於及/或經研發以治療潰瘍性結腸炎(UC)及克羅恩氏病(CD)之藥劑之非限制性實例包含PF-06410293 (Pfizer)、SAN-300 (VLA-1調節劑，Salix)、SAR252067 (LIGHT調節劑，Sanofi)、PF-00547659 (MAdCAM調節劑，Pfizer)、依德魯單抗(Eldelumab) (Smad7調節劑，BMS)、AMG 181/MEDI-7183 (β7調節劑，Amgen/AstraZeneca)、艾羅珠單抗(Etrolizumab) (β7調節劑，Roche)、優特克單抗(Ustekinumab) (IL-12/IL-23調節劑，J&J)、萊梅卡德(Remicade) (TNF調節劑，J&J及Merck)、恩特維沃(Entyvio) (β7調節劑，Takeda)、胡美拉(Humira) (TNF調節劑，Abbvie)、英夫利昔單抗(Infliximab) (Celtrion)、PF-06651600 (Pfizer)、GSK2982772 (GSK)、GLPG1205 (FFA2調節劑，Galapagos)、AG014 (Intrexon)及維多慕斯(Vidofludimus) (DHODH調節劑，4SC)。 在一些實施例中，一或多種其他治療劑可為JAK抑制劑，尤其係JAK-1選擇性抑制劑。抑制劑可為小分子或生物試劑。舉例而言，JAK抑制劑可為非戈替尼、GLPG0634 (JAK調節劑，Galapagos)。 呈現急性冠狀動脈疾病事件之患者可展現適用於投與係抗生素、止痛藥、抗抑鬱劑及抗抑鬱劑之治療劑或藥劑與雷諾嗪(ranolazine)之組合之病狀。 抗生素係殺死微生物(包含細菌及真菌)或停止其生長之治療劑。抗生素劑之實例包含：β-內醯胺抗生素，包含青黴素(penicillin) (阿莫西林(amoxicillin))；頭孢菌素(cephalosporin)，例如頭孢唑林(cefazolin)、頭孢呋辛(cefuroxime)、孢羥胺苄(cefadroxil) (Duricef)、頭孢胺苄(cephalexin) (Keflex)、頭孢雷定(cephradine) (Velosef)、頭孢克洛(cefaclor) (Ceclor)、頭孢呋辛酯(cefuroxime axtel) (Ceftin)、頭孢丙烯(cefprozil) (Cefzil)、羅拉卡巴夫(loracarbef) (Lorabid)、頭孢克肟(cefixime) (Suprax)、頭孢泊肟酯(cefpodoxime proxetil) (Vantin)、頭孢布烯(ceftibuten) (Cedax)、頭孢地尼(cefdinir) (Omnicef)、頭孢曲松(ceftriaxone) (Rocephin)、碳青黴烯(carbapenem)及單醯胺菌素(monobactam)；四環素類(tetracyclines)，例如四環素；大環內酯抗生素，例如紅黴素(erythromycin)；胺基醣苷，例如慶大黴素(gentamicin)、妥布黴素(tobramycin)、阿米卡星(amikacin)；喹諾酮，例如環丙沙星(ciprofloxacin)；環狀肽，例如萬古黴素(vancomycin)、鏈陽菌素(streptogramin)、多黏菌素(polymyxin)；林可醯胺(lincosamide)，例如克林達黴素(clindamycin)；噁唑啶酮，例如利奈唑胺(linezolid)；及磺胺抗生素，例如磺胺異噁唑(sulfisoxazole)。 止痛藥係用於減輕疼痛之治療劑。止痛藥之實例包含類鴉片(opiate)及嗎啡樣劑(morphinomimetics)，例如芬太尼(fentanyl)及嗎啡；對乙醯胺基酚(paracetamol)；NSAID及COX-2抑制劑。 抗抑鬱劑及抗焦慮劑包含彼等用於治療焦慮病症、抑鬱之藥劑及用作鎮靜劑及安定藥者。抗抑鬱劑及抗焦慮劑之實例包含：苯并二氮呯，例如地西泮(diazepam)、氯羥去甲安定(lorazepam)及咪達唑侖(midazolam)；苯并二氮呯；巴比妥酸鹽(barbiturate)；格魯米特(glutethimide)；氯醛(chloral)水合物；甲丙胺酯(meprobamate)；舍曲林(sertraline) (Zoloft、Lustral、Apo-Sertral、Asentra、Gladem、Serlift、Stimuloton)；依地普侖(escitalopram) (Lexapro、Cipralex)；氟西汀(fluoxetine) (Prozac、Sarafem、Fluctin、Fontex、Prodep、Fludep、Lovan)；萬拉法辛(venlafaxine) (Effexor XR、Efexor)；西酞普蘭(citalopram) (Celexa、Cipramil、Talohexane)；帕羅西汀(paroxetine) (Paxil、Seroxat、Aropax)；曲唑酮(trazodone) (Desyrel)；阿米替林(amitriptyline) (Elavil)；及安非他酮(bupropion) (Wellbutrin、Zyban)。 治療心-腎疾病(例如慢性腎病)之患者可適用於組合藥物治療。舉例而言，可組合本發明化合物與以下中之一或多者：血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑，例如依那普利、卡托普利、雷米普利、賴諾普利及喹那普利；或血管緊張素II受體阻斷劑(ARB)，例如氯沙坦、奧美沙坦(olmesartan)及厄貝沙坦；或抗高血壓劑劑，例如胺氯地平、硝苯地平及洛地平。組合之益處可為增加組分之效能及/或減小其副效應，此乃因可將該組分之劑量調滴以減小其副效應，同時因式(I)或其鹽、共晶體、溶劑合物或水合物之效能可增大其效能而受益。 呈現可使用ASK1抑制劑(例如式(I)化合物)治療之慢性腎病之患者亦可展現受益於共投與(如由合格照護者所引導)係抗生素、止痛劑、抗抑鬱劑及/或抗焦慮劑之治療劑或藥劑與式(I)化合物之組合之病狀。組合治療可同時投與或在一定間隔內依序投與(如由合格照護者所引導)，或經由呈遞固定劑量(將所有活性成分組合至單一劑型(例如錠劑)中)兩種或更多種活性劑來投與。 藉由投與ASK1抑制劑來治療急性心血管疾病事件之冠狀動脈患者通常展現受益於其他治療劑之治療之疾病或病狀。該等疾病或病狀可為心血管性質或可與肺病症、代謝病症、胃腸道病症及諸如此類相關。另外，藉由投與ASK1抑制劑來治療急性心血管疾病事件之一些冠狀動脈患者展現可受益於使用係抗生素、止痛藥及/或抗抑鬱劑及抗焦慮劑之治療劑之治療之病狀。
醫藥組合物
儘管可單獨投與活性成分，但可較佳地以醫藥調配物(組合物)形式來呈現。用於獸醫及人類應用之本發明調配物包括至少一種如上文所定義之活性成分以及一或多種可接受之載劑及視情況其他治療成分。載劑必須在與調配物之其他成分相容及在生理上對其接受者無害之意義上「可接受」。 調配物包含適用於前述投與途徑者。調配物可便捷地以單位劑型來呈遞且可藉由製藥業內熟知之任何方法來製備。技術及調配物通常參見Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)。該等方法包含使活性成分與構成一或多種輔助成分之惰性成分(例如載劑、醫藥賦形劑等)混合之步驟。一般而言，調配物係藉由使活性成分與液體載劑或精細固體載劑或二者均勻且充分混合，然後(視需要)使產物成形來製備。 在某些實施例中，適於經口投與之調配物呈現為離散單元，例如膠囊、扁囊劑或錠劑，其各自含有預定量之活性成分。 在某些實施例中，醫藥調配物包含一或多種本發明化合物以及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑及視情況其他治療劑。含有活性成分之醫藥調配物可呈適用於預期投與方法之任何形式。在用於(例如)口服使用時，可製備錠劑、口含錠、菱形錠劑、水性或油性懸浮液、可分散粉劑或粒劑、乳液、硬質或軟質膠囊、糖漿或酏劑。可根據業內已知用於製造醫藥組合物之任何方法來製備意欲口服使用之組合物，且該等組合物可含有一或多種試劑(包含甜味劑、矯味劑、著色劑及防腐劑)以提供適口製劑。含有活性成分與適於製造錠劑之醫藥上可接受之無毒賦形劑之混合物之錠劑係可接受的。該等賦形劑可為(例如)惰性稀釋劑，例如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、單水合乳糖、交聯羧甲基纖維素鈉、聚維酮(povidone)、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑及崩解劑，例如玉米澱粉或海藻酸；黏合劑，例如纖維素、微晶纖維素、澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。錠劑可無包衣或可藉由已知技術(包含微囊封)包衣以延遲在胃腸道中之崩解及吸收並由此提供持續較長時間之作用。舉例而言，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯等延時材料可單獨或與蠟一起採用。 活性成分與惰性成分組合以產生劑型之量可隨所治療主體及特定投與模式而變。舉例而言，在一些實施例中，用於經口投與人類之劑型含有大約1 mg至1000 mg活性材料，該活性材料與適當及便利量之載劑材料(例如惰性成分或賦形劑材料)調配至一起。在某些實施例中，載劑材料佔總組合物之約5%至約95% (重量:重量)。在一些實施例中，本文所闡述之醫藥組合物含有約1 mg至約800 mg、約1 mg至600 mg、約1 mg至400 mg、約1 mg至200 mg、約1 mg至約100 mg或約1 mg至約50 mg式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽、共晶體、溶劑合物或水合物。在一些實施例中，本文所闡述之醫藥組合物含有不超過約400 mg式(I)化合物。在一些實施例中，本文所闡述之醫藥組合物含有約100 mg式(I)化合物或其鹽、共晶體、溶劑合物或水合物。 應理解，除上文所特定提及之成分外，本文所揭示之調配物亦可包含業內關於所論述調配物類型之其他習用試劑，舉例而言，適於經口投與者可包含矯味劑。 另外提供包括至少一種如上文所定義之活性成分以及獸醫學載劑之獸醫學組合物。 獸醫學載劑係可用於投與組合物之目的之材料且可為固體、液體或氣態材料，該等材料另外為惰性或可接受用於獸醫學技術中並與活性成分相容。該等獸醫學組合物可經口、非經腸或藉由任何其他期望途徑來投與。 活性成分之有效劑量至少取決於所治療病狀之性質、毒性、化合物是否預防使用(較低劑量)、遞送方法及醫藥調配物，且將由臨床醫師使用習用劑量遞增研究來確定。
投與途徑
藉由適用於逆治療病狀之任何途徑來投與一或多種式(I)化合物(在本文中稱為活性成分)或其醫藥上可接受之鹽、共晶體、溶劑合物或水合物,。適宜途徑包含口服、直腸、鼻、局部(包含經頰及舌下)、陰道及非經腸(包含皮下、肌內、靜脈內、真皮內、鞘內及硬膜外)及諸如此類。應瞭解，較佳途徑可隨(例如)接受者之情況而變。 本發明化合物之一優點在於，其經口生物可利用且可經口投用。因此，在一實施例中，本文所闡述之醫藥組合物係口服劑型。在某些實施例中，本文所闡述之醫藥組合物係口服固體劑型。 在一實施例中，式(I) (呈游離鹼形式)之口服日劑量介於約0.5 mg與約100 mg之間(作為日劑量)。在較佳實施例中，劑量為約1 mg/天、約2 mg/天、約3 mg/天、約4 mg/天、約5 mg/天、約6 mg/天、約7 mg/天、約8 mg/天、約9 mg/天、約10 mg/天、約11 mg/天、約12 mg/天、約13 mg/天、約14 mg/天、約15 mg/天、約16 mg/天、約17 mg/天、約18 mg/天、約19 mg/天、約20 mg/天、約25 mg/天、約30 mg/天或約35 mg/天。在另一實施例中，式(I)游離鹼之日劑量小於約18 mg/天。
實例
本發明包含下列實例以顯示本發明之特定實施例。熟習此項技術者應瞭解，下列實例中揭示之技術代表在實踐本發明中運行良好之技術，且由此可認為構成其實踐之特定方式。然而，熟習此項技術者借助於本揭示內容應瞭解，可對所揭示特定實施例作出多種改變且仍獲得相同或類似結果，此並不背離本發明之精神及範圍。 藉由XRPD、DSC及TGA分析其結晶形式及鹽。通常使用PANalytical X’Pert RO MPD繞射儀在下列設置下來收集XRPD圖案：5kB, 40mA, Kα1=1.5406 A，掃描範圍：2-40 °2θ，步長：0.0167 °2θ。所有°2θ值皆±0.2°2θ。在配備有50位置自動採樣儀之TA Instruments Q2000系統上收集DSC溫度記錄圖。使用經驗證銦來校準能量及溫度。通常，將於具針孔鋁盤中之1 - 5 mg每一試樣以10℃/min自25℃加熱至250℃或更高。在整個量測中於試樣上維持50 mL/min下之乾燥氮吹掃。在TA Instruments Q5000或Q500上收集TGA溫度記錄圖。通常，將於開放鋁盤中之1 - 5 mg每一試樣以10℃/min自25℃加熱至250℃或更高。DSC值可變化至多約3%或約2%或約1%。
縮寫及首字母縮寫之列表 一般反應圖 1 ： 可藉由使化合物(6)與適宜氯化試劑(包含(但不限於)草醯氯或亞硫醯氯)進行反應以產生相應醯氯來製備式(I)化合物。熟習此項技術者已知適宜試劑。隨後在醯氯與化合物(12)之間形成醯胺鍵以得到式(I)化合物。熟習此項技術者已知促進醯胺鍵形成之適宜試劑。
反應反應圖 I ：
5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽(6)之製備
步驟 1 - 5- 胺基 -2- 氟 -4- 甲基苯甲腈 - 化合物 (2) 之製備
將5-溴-4-氟-2-甲基苯胺(1) (20g, 98 mmol)溶於無水1-甲基-2-吡咯啶酮(10 mL)中，且添加氰化銅(I) (17.6g, 196 mmol)。將反應液加熱至約180℃保持約3小時，冷卻至室溫，且添加水(300 mL)及濃氫氧化銨(300 mL)。將混合物攪拌約30分鐘，然後使用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取。藉由硫酸鈉乾燥合併之萃取物，且在減壓下去除溶劑。使用己烷(2 × 100 mL)洗滌油性殘餘物，且將固體溶於二氯甲烷中並加載於矽膠管柱上。使用於己烷中之0至25%乙酸乙酯之梯度洗脫以提供5-胺基-2-氟-4-甲基苯甲腈。LC/MS (m/z:151 M
+1
)。
步驟 2 - 5-(2- 環丙基 -2- 側氧基乙基胺基 )-2- 氟 -4- 甲基苯甲腈 - 化合物 (3) 之製備
在氮下，將5-胺基-2-氟-4-甲基苯甲腈(80mmol)溶於無水N,N-二甲基甲醯胺(160 mL)中，且在攪拌下添加固體形式之碳酸鉀(96 mmol)及碘化鉀(88mmol)。將反應液在室溫下攪拌5分鐘且然後添加溴甲基環丙基酮(180 mmol)。將反應混合物加熱至60℃保持3小時，且然後在減壓下去除溶劑。將殘餘物溶於乙酸乙酯(400 mL)中並使用400 mL水洗滌。藉由硫酸鎂乾燥有機層，且在減壓下去除溶劑。將殘餘物再溶於最少量乙酸乙酯中，且添加己烷以使溶液得到3:1己烷:乙酸乙酯(以體積計)。自溶液沈澱出產物且藉由過濾收集以提供5-(2-環丙基-2-側氧基乙基胺基)-2-氟-4-甲基苯甲腈。LC/MS (m/z : 233, M
+1
)
步驟 3 - 5-(4- 環丙基 -2- 巰基 -1H- 咪唑 -1- 基 )-2- 氟 -4- 甲基苯甲腈 - 化合物 (4) 之製備
將5-(2-環丙基-2-側氧基乙基胺基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(14.19g, 61.2mmol)溶於冰乙酸(300 mL)中。然後在攪拌中添加固體形式之硫氰酸鉀(11.9g, 122.4mmol)，並將反應液加熱至約110℃保持約4小時，此時在減壓下去除溶劑。將殘餘物吸收二氯甲烷(200 mL)中並使用200 mL水洗滌。使用(2 × 200 mL)額外二氯甲烷萃取水性萃取物，合併有機萃取物並藉由硫酸鎂乾燥。在減壓下去除溶劑，將油性殘餘物再溶於乙酸乙酯(50 ml)中，且添加150 mL己烷。形成深色層且向燒瓶中添加攪拌棒。劇烈攪拌以沉墜出桃色固體產物。藉由過濾收集產物以產生5-(4-環丙基-2-巰基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲腈。分析型LC/MS (m/z : 274, M
+1
)。
步驟 4 - 5-(4- 環丙基 -1H- 咪唑 -1- 基 )-2- 氟 -4- 甲基苯甲腈 - 化合物 (5) 之製備
在500 mL三頸圓底燒瓶中置入乙酸(96 mL)、水(19 mL)，且然後置入過氧化氫(30%, 7.47 mL, 65.88 mmol)。將混合物在攪拌及氮下加熱至約45℃，同時監測內部溫度。然後經約30分鐘以小份添加固體形式之5-(4-環丙基-2-巰基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(6.00g, 21.96 mmol)，同時維持內部溫度低於約55℃。在完成添加硫基咪唑時，將反應液在約45℃之溫度下攪拌約30分鐘，然後冷卻至室溫，且緩慢添加20% wt/wt亞硫酸鈉於水(6 mL)中之溶液。將混合物攪拌30分鐘且然後在減壓下去除溶劑。將殘餘物懸浮於250 mL水中且添加4N氫氧化銨水溶液以pH達到約10。使用二氯甲烷(3 × 200 mL)萃取混合物，合併有機物，藉由硫酸鈉乾燥，且在減壓下去除溶劑。將殘餘物溶於20 mL乙酸乙酯中，且在攪拌下添加80 mL己烷。傾析掉溶劑且留下油性殘餘物。重複此過程且獲得黏性油狀物形式之產物5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲腈。分析型LC/MS (m/z : 242, M
+1
)。
步驟 5 - 5-(4- 環丙基 -1H- 咪唑 -1- 基 )-2- 氟 -4- 甲基苯甲酸鹽酸鹽 (6) 之製備
將5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(11.21g, 46.50mmol)置於裝配有回流冷凝器之圓底燒瓶中，並懸浮於38%鹽酸(200 mL)中。將混合物加熱至約100℃保持約4.5小時，且然後冷卻至室溫。在減壓下去除溶劑以得到粉紅色固體，向其中添加100 mL乙酸乙酯。藉由過濾收集固體產物並使用3 ×100 mL乙酸乙酯洗滌。向固體產物中添加100 mL於二氯甲烷中之10%甲醇，攪拌混合物，並收集濾液。再使用2 × 100 mL部分之於二氯甲烷中之10%甲醇重複此過程。合併濾液且在減壓下去除溶劑以提供粗製5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽。並不進一步實施純化。分析型LC/MS (m/z : 261, M
+1
)。
反應圖 II ： 步驟 1 - 6-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 吡啶甲酸甲酯 (8) 之製備
在約0℃下，向6-胺基吡啶甲酸甲酯(70 g, 460.53 mmol, 1.0當量)及NaHCO
3
(96.71 g, 1151.32 mmol, 2.5當量)於丙酮/H
2
O (500ml/250ml)中之溶液中逐滴添加CbzCl (98.54 mL, 690.79 mmol, 1.5當量)。將混合物升溫至室溫並在室溫下攪拌過夜。TLC展示反應已完成。添加水(1500ml)且將混合物攪拌約20 min。然後過濾以提供期望產物。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 8.20-8.22 (1H, m), 7.75-7.84 (3H, m), 7.34-7.39 (5H, m), 5.23 (2H, s), 3.98 (3H, s)。
步驟 2 - (6-( 肼羰基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 (9) 之製備
向(6-(肼羰基)吡啶-2-基)胺基甲酸苄基酯(121 g, 423.08 mmol, 1.0當量)於MeOH (500ml)中之溶液中添加H
2
NNH
2 .
H
2
O (31.73 g, 634.62 mmol, 1.5當量)。將混合物回流過夜。TLC展示反應已完成。在冷卻至室溫之後，固體發生沈澱。將混合物在冰-水中攪拌約0.5 h並過濾以提供白色固體形式之期望產物。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 8.66 (1H, s), 8.13-8.16 (1H, m), 7.84-7.86 (2H, m), 7.36-7.43 (6H, m), 5.24 (2H, s), 4.04 (2H, d,
J
= 4.4 Hz)。
步驟 3 - (E)-(6-(2-(( 二甲基胺基 ) 亞甲基 ) 肼 -1- 羰基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 (10) 之製備
將(6-(肼羰基)吡啶-2-基)胺基甲酸苄基酯(170.2 g, 595.10 mmol, 1.0當量)於DMF-DMA (350ml)中之混合物在氬下回流45 min。TLC展示反應已完成。將混合物冷卻至室溫並濃縮以得到固體。使用乙酸乙酯洗滌以得到184.2 g淺黃色固體形式之期望化合物。[M+H] = 342。
步驟 4 - (S)-(6-(4-(1- 氟丙 -2- 基 )-4H-1,2,4- 三唑 -3- 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 (11) 之製備
向(E)-(6-(2-((二甲基胺基)亞甲基)肼-1-羰基)吡啶-2-基)胺基甲酸苄基酯(160 g, 469.21 mmol, 1.0當量)於MeCN/AcOH (800ml/200ml)中之溶液中添加(S)-1-氟丙烷-2-胺鹽酸鹽(106.04 g, 938.42 mmol, 2.0當量)。將混合物在氬下回流過夜。TLC及LCMS展示反應已完成。濃縮混合物並藉由添加NaHCO
3
溶液來調節至pH=8。過濾混合物以提供固體形式之粗產物。添加乙酸乙酯(400ml)並在回流下攪拌1 h。在冷卻至室溫之後，過濾以提供純產物。然後將濾液濃縮成粗產物。添加乙酸乙酯(100ml)並在室溫下攪拌10 min。固體發生沈澱並回流約0.5 h。過濾混合物以提供產物。[M+H] = 356。
步驟 5 - (S)-6-(4-(1- 氟丙 -2- 基 )-4H-1,2,4- 三唑 -3- 基 ) 吡啶 -2- 胺 (12) 之製備
向(S)-(6-(4-(1-氟丙-2-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)胺基甲酸苄基酯(46.2 g, 130.14 mmol, 1.0當量)於MeOH (450ml)中之溶液添加Pd/C (3.17 g, 10%)。將混合物在室溫及H
2
下攪拌過夜。TLC展示反應已完成，且過濾。濃縮濾液並藉由管柱藉由管柱(MeOH: DCM=1:100-1:70)純化以得到白色固體。藉由PE及EA (EA:PE=1:50)洗滌固體以提供期望產物。[M+H]=222,
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 (1H, s), 7.66 (1H, d,
J
= 7.6 Hz), 7.59 (1H, t,
J
= 7.8 Hz), 6.57 (1H, d,
J
= 8.0 Hz), 5.83-5.91 (1H, m), 4.74 (1H, d,
J
= 3.8 Hz), 4.63 (1H, d,
J
= 3 Hz), 4.46 (1H, s), 1.64 (3H, d, J = 7.2 Hz)。
反應圖 III ： (S)-5-(4- 環丙基 -1H- 咪唑 -1- 基 )-2- 氟 -N-(6-(4-(1- 氟丙 -2- 基 )-4H-1,2,4- 三唑 -3- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-4- 甲基苯甲醯胺 - 式 (I) 之製備
在室溫下，將5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽(1.0當量)懸浮於二氯甲烷中且添加DMF (0.1當量)。然後在攪拌及氮下緩慢添加草醯氯(1.1當量)。將混合物在室溫下攪拌約5 hr，且在減壓下將溶劑濃縮至大約一半體積，且添加二氯甲烷(2090 mL)。將溶液冷卻至約5℃且緩慢添加二異丙基乙基胺。將混合物升溫至15℃且添加(S)-6-(4-(1-氟丙-2-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-胺(1.1當量)。將混合物在環境溫度下攪拌17小時且添加去水檸檬酸三鈉(1當量)之溶液。添加1N NaOH且將混合物攪拌約10 min。分離各層且使用水洗滌有機層並在減壓下濃縮。將固體懸浮於EtOH (1000 mL)中並加熱至回流。冷卻混合物，在環境溫度下攪拌約3.5 hr，並過濾。使用EtOH沖洗固體以提供(S)-5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-N-(6-(4-(1-氟丙-2-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-4-甲基苯甲醯胺。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ 10.93 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.17 (dd,
J
= 8.3, 0.9 Hz, 1H), 8.04 (t,
J
= 8.0 Hz, 1H), 7.93 (dd,
J
= 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.70 (d,
J
= 1.4 Hz, 1H), 7.65 (d,
J
= 6.5 Hz, 1H), 7.50 (d,
J
= 10.7 Hz, 1H), 7.18 (d,
J
= 1.4 Hz, 1H), 6.04-5.89 (m, 1H), 4.78-4.71 (m, 1H), 4.67-4.59 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.88-1.81 (m, 1H), 1.51 (d,
J
= 6.9 Hz, 3H), 0.82-0.78 (m, 2H), 0.71-0.68 (m, 2H)。LCMS-ESI
+
(
m/z
): [M+H]
+
計算值：464.20；實驗值：464.21。
(S)-5-(4- 環丙基 -1H- 咪唑 -1- 基 )-2- 氟 -N-(6-(4-(1- 氟丙 -2- 基 )-4H-1,2,4- 三唑 -3- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-4- 甲基苯甲醯胺 - 式 (I) 之製備
合併5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽(1.0當量)與二氯甲烷(10 L/kg)及N,N-二甲基甲醯胺(0.1當量)。以控制氣體逸出之速率向所得混合物中裝填草醯氯(1.1當量)。在約35℃下加熱反應混合物直至反應完成為止。將反應混合物濃縮至5 L/kg且然後裝填二氯甲烷(10 L/kg)。將反應混合物冷卻至約0℃且然後裝填N,N-二異丙基乙基胺(0.6當量)，隨後緩慢裝填(S)-6-(4-(1-氟丙-2-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-胺(12) (1.1當量)。將反應混合物升溫至約22℃並維持直至反應完成為止。將反應液濃縮至5 L/kg且然後向此反應液中裝填1-甲基-2-吡咯啶酮(10 L/kg)。將反應液濃縮至10 L/kg，隨後將溫度調節至約65℃。裝填檸檬酸(0.5當量)及水(10 L/kg)之溶液並維持溫度高於約55℃。使用50 wt%氫氧化鈉水溶液將pH調節至約6。將內容物在約65℃下加熱約1 h且然後將反應混合物冷卻至約20℃。藉由過濾分離產物，使用水(2 × 5 L/kg)洗滌，並乾燥以提供式(I)化合物。
(S)-5-(4- 環丙基 -1H- 咪唑 -1- 基 )-2- 氟 -N-(6-(4-(1- 氟丙 -2- 基 )-4H-1,2,4- 三唑 -3- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-4- 甲基苯甲醯胺 - 式 (I) 之製備 2
將5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽(1.0當量)於1-甲基-2-吡咯啶酮(10 L/kg)中之混合物冷卻至約5℃。向此混合物中裝填亞硫醯氯(1.1當量)，隨後裝填(S)-6-(4-(1-氟丙-2-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-胺(12) (1.0當量)。將此反應混合物維持於約25℃直至反應完成為止且然後加熱至約70℃。在獨立反應器皿中，合併氫氧化鈉(3.5當量)、檸檬酸鈉(0.5當量)及水(10 L/kg)。然後將所得溶液裝填至反應混合物中。使用50 wt%氫氧化鈉水溶液將pH調節至約6。在約70℃下加熱所得混合物且然後冷卻至約5℃。藉由過濾分離產物，使用水(2 × 5 L/kgkg)洗滌，並乾燥以提供式(I)化合物。
式 (I) 化合物游離鹼形式 I 之製備
使用下列程序使式(I)游離鹼形式I自反應混合物結晶：將1.0當量草醯氯添加至化合物(6)中且將混合物在約35℃下攪動。然後將溶液蒸餾至乾燥，且添加15體積DCM。然後添加0.7當量DIPEA，隨後添加1.1當量化合物(12)。在約22℃下攪動混合物。然後將10體積NMP裝填至反應器中且將DCM蒸餾至15 wt%之濃度。然後在約22℃下向反應器中添加１當量溶於2體積水中之檸檬酸鈉。然後添加3體積1N NaOH溶液及5體積水。然後使溶液陳化過夜。然後過濾所得漿液，並使用5體積水及2體積甲醇沖洗。然後使所得固體在約50℃下乾燥。式(I)游離鹼形式I之XRPD圖案呈現於
圖 1
中。該圖案含有下列特徵峰：(1) 8.7、10.2及18.1 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 15.8、17.3及23.5 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 15.2、18.5及24.9 °2θ ± 0.2°2θ。
圖 2
係式(I)游離鹼形式I之DSC溫度記錄圖。存在始於約223℃之熔融轉變。
圖 3
係式(I)化合物游離鹼形式I之TGA溫度記錄圖。在25℃與220℃之間損失0.9%重量。
表 1 ： 式 (I) 游離鹼形式 I XRPD 峰表 式 (I) 化合物游離鹼形式 II 之製備
使用下列程序使式(I)游離鹼形式II自反應混合物結晶：將1.0當量草醯氯添加至化合物(6)中且將混合物在約35℃下攪動。然後將溶液蒸餾至5體積，且添加10體積DCM。添加0.6當量DIPEA，隨後添加1.1當量化合物(12)。在約22℃下攪動混合物且將DCM蒸餾至乾燥。然後添加10體積NMP。然後將反應器內容物加熱至約70℃且以使溶液內部溫度保持高於約58℃之速率添加0.5當量檸檬酸鈉、1.5當量NaOH及水之溶液。然後使混合物在約65℃下保持約1 h，並經3 h冷卻至約20℃。然後過濾所得漿液並使用2×5體積水沖洗。然後乾燥固體。 亦可藉由將式(I)游離鹼形式I在各種溶劑(包含乙醇)中製成漿液來獲得式(I)游離鹼形式II。
圖 4
展示式(I)游離鹼形式II之XRPD圖案。其含有下列特徵峰：(1) 8.7、10.0及17.0°2θ ± 0.2°2θ；(2) 13.9、21.3及22.8 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 24.0、28.0及29.1 °2θ ± 0.2°2θ。
圖 5
係式(I)游離鹼形式II之DSC溫度記錄圖。其展示始於約208℃之熔融吸熱。
圖 6
係式(I)游離鹼形式II之TGA溫度記錄圖。在加熱至200℃後，固體損失約1%之重量。
表 2 ： 式 I 游離鹼形式 II XRPD 峰表 反應圖 IV ： (S)-5-(4- 環丙基 -1H- 咪唑 -1- 基 )-2- 氟 -N-(6-(4-(1- 氟丙 -2- 基 )-4H-1,2,4- 三唑 -3- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-4- 甲基苯甲醯胺琥珀酸鹽之製備
合併琥珀酸(1.0當量)、甲醇(1.1 L/kg)及乙腈(9.9 L/kg)之溶液與(S)-5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-N-(6-(4-(1-氟丙-2-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-4-甲基苯甲醯胺(1.0當量)。將所得混合物加熱至約80℃且然後冷卻至約5℃。藉由過濾分離產物，使用乙腈(2 × 3 L/kg)洗滌，並乾燥以提供呈琥珀酸鹽形式之式(I)化合物。
式 (I) 琥珀酸鹽形式 I 之製備
首先藉由將約40 mg式(I)游離鹼形式II與１當量琥珀酸(約11 mg)一起在0.2 mL乙腈中製成漿液來獲得式(I)琥珀酸鹽形式I。使用攪拌棒將漿液在約22℃下攪拌大約16小時。然後離心少量漿液且在約50℃下於真空烘箱中乾燥之後獲得固體之XRPD圖案。琥珀酸鹽形式I之XRPD圖案呈現於
圖 7
中。該圖案含有下列特徵峰：(1) 7.5、20.9及24.9 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 15.4、22.4及31.1 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 14.9、23.2及25.4 °2θ ± 0.2°2θ。
圖 8
展示式(I)琥珀酸鹽形式I之DSC溫度記錄圖。固體具有大約159℃之起始熔點。
圖 9
展示式(I)琥珀酸鹽形式I之TGA溫度記錄圖。固體在環境溫度與大約160℃之間損失約0.6%重量。
表 3 ： 式 (I) 琥珀酸鹽形式 I XRPD 峰表 式 (I) 琥珀酸鹽形式 II 之製備
式(I)琥珀酸鹽形式II係甲醇溶劑合物。其首先係藉由將式(I)琥珀酸鹽形式I在約22℃下於純甲醇中經大約16小時製成漿液來獲得。然後將漿液離心且獲得在約50℃下乾燥之固體之XRPD圖案。式(I)琥珀酸鹽形式II係甲醇溶劑合物。 其亦藉由以下方式來獲得：將式(I)琥珀酸鹽形式I在由4.7%水及95.3%甲醇構成之溶劑混合物中製成漿液，以及藉由將式(I)琥珀酸鹽形式I在由20%乙腈及80%甲醇構成之溶劑混合物中製成漿液。
圖 10
展示式(I)琥珀酸鹽形式II之XRPD圖案。下列峰係此圖案之特徵：(1) 9.8、11.7、23.3 °2θ；(2) 15.9、21.5、32.0 °2θ；(3) 16.3、20.8、24.8 °2θ。
圖 11
展示式(I)琥珀酸鹽形式II之DSC溫度記錄圖。其展示一個始於約100℃之吸熱事件，隨後展示兩個始於約159℃及約162℃之連續吸熱事件。
圖 12
係式(I)琥珀酸鹽形式II之TGA溫度記錄圖。在約100℃及200℃下分別存在4.6%重量及9.2%重量之兩個重量損失。
表 4 ： 式 (I) 琥珀酸鹽形式 II XRPD 峰表 式 (I) HCl 形式 I 之製備
首先藉由將1當量濃HCl添加至47 mg懸浮於乙腈中之式(I)游離鹼形式II中來製備式(I) HCl形式I。將所得溶液在大約22℃下攪拌約16 h。 式(I) HCl 形式I之XRPD圖案呈現於
圖 13
中。其含有下列代表性峰：(1) 9.3、21.2、26.2 °2θ；(2) 20.9、24.7、27.6 °2θ；(3) 23.8、24.3、26.6 °2θ。
圖 14
係式(I) HCl形式I之DSC溫度記錄圖。在約152℃下發生熔化/去水。
圖 15
係式(I) HCl形式I之TGA溫度記錄圖。存在兩個重量損失，第一個損失約4.2%重量且發生於約30℃與140℃之間。第二個損失約1.7%重量且發生於約140℃與200℃之間。
表 5 ： 式 (I) HCl 形式 I XRPD 峰表 式 (I) HCl 形式 II 之製備
首先藉由將式(I) HCl形式I及材料A (約1:1 w/w)之混合物在大約22℃下於10:90水:乙腈(v/v)中經16 h製成漿液來製備式(I) HCl形式II。在16h之後，離心XRPD且收集風乾之固體。 亦藉由以下方式來製備式(I) HCl形式II：將式(I) HCl形式I在10:90水:乙腈(v/v)中製成漿液，離心並在約50℃下於真空烘箱中乾燥。
圖 16
展示式(I) HCl形式II之XRPD圖案。其含有下列特徵峰：(1) 8.3、12.0及26.0 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 19.3、21.7及24.0°2θ ± 0.2°2θ；(3) 9.8、15.4及28.9 °2θ ± 0.2°2θ。
圖 33
係式(I) HCl形式II之DSC溫度記錄圖，其中存在兩個始於約135℃及約205℃之吸熱事件。
表 6 ： 式 (I) HCl 形式 II XRPD 峰表 式 (I) HCl 形式 III 之製備
首先藉由將1當量1M HCl/二噁烷添加至式懸浮於乙腈中之式(I)游離鹼形式II中來製備式(I) HCl材料A。將所得溶液在大約22℃下攪拌約16 h且收集經離心且乾燥之固體之XRPD。
圖 17
展示式(I) HCl形式III之XRPD圖案。其含有下列特徵峰：(1) 6.6、12.9及19.7 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 20.4、23.4及24.8 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 18.1、25.4及26.7 °2θ ± 0.2°2θ。
圖 18
係式(I)-HCl形式III之DSC溫度記錄圖。未看到明顯熱事件。
表 7 ： 式 (I) HCl 形式 III XRPD 峰表 式 (I) L- 蘋果酸鹽之製備
首先藉由將約40 mg式(I)游離鹼形式II與1當量L-蘋果酸(約12 mg)一起在約22℃下於0.2 mL乙腈中經大約16 h製成漿液來獲得式(I) L-蘋果酸鹽。然後離心漿液且收集乾燥固體之XRPD圖案。
圖 19
展示式(I) L-蘋果酸鹽之XRPD圖案。其含有下列特徵峰：(1) 7.2、21.9及24.5 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 10.9、16.6及19.7°2θ ± 0.2°2θ；(3) 8.2、22.8及27.3 °2θ ± 0.2°2θ。
圖 20
展示式(I) L-蘋果酸鹽之DSC溫度記錄圖。存在兩個吸熱事件，第一個位於約23℃下，且第二個(熔融吸熱)位於約110℃下。
圖 21
展示式(I) L-蘋果酸鹽之TGA溫度記錄圖。在加熱至約150℃時，固體損失約2.5%之重量。
表 8 ： 式 (I) L- 蘋果酸鹽 XRPD 峰表 式 (I) 磷酸鹽材料 A 之製備
藉由將約37 mg式(I)游離鹼形式II在0.2 mL乙腈中製成漿液並添加1當量14.8 M磷酸來獲得式(I)磷酸鹽材料A。在大約22℃下攪拌16 h之後，旋轉蒸發溶液且添加0.2 mL IPA。將此溶液攪拌10天。獲得漿液且收集經離心且乾燥之固體之XRPD。 式(I)磷酸鹽材料A之XRPD圖案展示於
圖 22
中，其具有下列特徵峰：(1) 6.9、8.0及21.2 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 22.8、25.3及26.0 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 19.8、20.6、23.2 °2θ ± 0.2°2θ。
表 9 ：式 (I) 磷酸鹽材料 A XRPD 峰表
藉由以下方式來獲得式(I)磷酸鹽材料B：將約1 mg式(I)磷酸鹽材料A置於鋁盤上且使其經受動態蒸氣吸附(DVS)儀器內部之下列相對濕度條件：在25℃及10% RH下平衡20 min，斜升至90% RH並保持30 min。在DVS循環之後收集固體之XRPD圖案。
圖 23
展示式(I)磷酸鹽材料B之XRPD圖案。其含有下列特徵峰：(1) 13.4、23.5及24.3 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 21.7、25.1及25.8 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 17.0、18.6及22.5 °2θ ± 0.2°2θ。
表 10 ： 式 (I) 磷酸鹽材料 B XRPD 峰表 式 (I) 硫酸鹽之製備
首先藉由將1當量98%硫酸添加至38 mg於0.2 mL乙腈中之式(I)游離鹼形式II中來獲得式(I)硫酸鹽。將溶液在大約22℃下攪拌約16 h，然後旋轉蒸發。添加0.2 mL IPA且將溶液攪拌約16 h。然後離心漿液且獲得在約50℃下於真空烘箱中乾燥之固體之XRPD。 式(I)硫酸鹽之XRPD圖案呈現於
圖 24
中。其具有下列特徵峰：(1) 7.2、13.5及21.5 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 16.9、20.5及25.3 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 18.2、20.6及27.2 °2θ ± 0.2°2θ。
圖 25
展示式(I)硫酸鹽之DSC溫度記錄圖。固體在大約210℃下熔化。
圖 26
係式(I)硫酸鹽之TGA溫度記錄圖。其在約225℃下展示約1.8%之重量損失。
表 11 ：式 (I) 硫酸鹽峰表 式 (I) 檸檬酸鹽材料 A 及材料 B 之製備
藉由將約42 mg式(I)游離鹼形式II及1當量檸檬酸(約18 mg)在約22℃下於0.2 mL乙腈中經大約16 h製成漿液來獲得式(I)檸檬酸鹽。獲得經離心濕潤固體之XRPD圖案。
圖 27
展示式(I)檸檬酸鹽材料A之XRPD圖案。該圖案具有下列特徵峰：(1) 5.6、9.1、16.7 °2θ ± 0.2°2θ；(2)12.2、21.0、23.0 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 18.7、24.9、25.8 °2θ ± 0.2 °2θ。藉由在約50℃下於真空烘箱中乾燥式(I)檸檬酸鹽材料A來獲得式(I)檸檬酸鹽材料B。式(I)檸檬酸鹽材料B之XRPD圖案展示於
圖 28
中。其具有下列特徵峰：(1) 5.6、8.6及9.1 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 12.2、23.2及23.9 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 16.8、18.5及21.1 °2θ ± 0.2°2θ。
圖 29
展示式(I)檸檬酸鹽材料B之DSC溫度記錄圖。存在兩個始於約54℃及約122℃之熱事件。
表 12a ：式 (I) 檸檬酸鹽材料 A 峰表 表 12b ：式 (I) 檸檬酸鹽材料 B XRPD 峰表 式 (I) 戊二酸鹽之製備
首先藉由將55.1 mg式(I)游離鹼形式II及1當量戊二酸(大約17 mg)在大約22℃下於0.2 mL乙腈中一起攪拌約16 h來製備式(I)戊二酸鹽。
圖 30
係式(I)戊二酸鹽之XRPD圖案。其含有下列特徵峰：(1) 6.7、8.0及12.1 °2θ ± 0.2°2θ；(2)14.6、20.9及21.8 °2θ ± 0.2°2θ；(3)17.9、19.3及26.2°2θ ± 0.2°2θ。
圖 31
係式(I)戊二酸鹽之DSC溫度記錄圖。起始熔點約為150℃。
表 13 ：式 (I) 戊二酸鹽峰表 形式 (I) 甲烷磺酸鹽之製備
首先藉由將1當量甲烷磺酸添加至53.5 mg在約22℃下於0.2 mL丙酮中製成漿液之式(I)游離鹼形式II來製備式(I)甲烷磺酸鹽。離心漿液且在約50℃下於真空烘箱中乾燥固體。
圖 32
係式(I)甲烷磺酸鹽之XRPD圖案。其含有下列特徵峰：(1) 8.4、19.1及21.2 °2θ ± 0.2°2θ；(2) 17.2、19.7及20.2 °2θ ± 0.2°2θ；(3) 12.8、21.8及25.2 °2θ ± 0.2°2θ。
表 14 ：峰表：形式 (I) 甲烷磺酸鹽 實例 1 ： ASK1 ( 調節細胞凋亡信號之激酶 1) TR-FRET 激酶分析 ( 生物化學 IC50
)
使用HTRF檢測量測ASK1激酶對生物素化肽受質之磷酸化程度。此係來自Cisbio之基於HTRF® KinEASE™-STK手冊之競爭性、時間解析螢光共振能量轉移(TR-FRET)免疫分析。將式(I)化合物、1 μM STK3肽受質、4 nM ASK1激酶與10 mM MOP緩衝液(pH.7.0，含有10 mM乙酸鎂、0.025% NP‑40、1 mM DTT、0.05% BSA及1.5%甘油)一起培育約30分鐘，然後添加100 μM ATP以開始激酶反應並培育3 hr。添加經1× Eu
3+
穴狀化合物緩衝液(含有10 mM EDTA及125 nM鏈黴抗生物素蛋白(Streptavidin) XL665)標記之肽抗體以停止反應且使用來自PerkinElmer之Envision 2103 Multilabeled讀數儀檢測磷酸化肽受質。在615 nm (穴狀化合物)及665 nm (XL665)下量測螢光且計算每一孔之665 nm/615 nm比率。所得TR-FRET濃度(665 nm/615 nm比率)與磷酸化程度成正比。在該等分析條件下，肽受質之磷酸化程度與時間及酶濃度成線性。分析系統產生關於K
m
及特異性酶活性之一致結果。對於抑制實驗(IC
50
值)而言，使用恆定濃度之ATP、肽及若干固定濃度之抑制劑來實施活動。使用星形孢菌素(Staurosporine) (非限制性激酶抑制劑)作為陽性對照。將所有酶活性數據報告為一式四份測定之平均值。式(I)化合物以2.4 nM之IC
50
抑制ASK1。
實例 2 ： ASK1 細胞及全血功效
為進一步表徵式(I)化合物之細胞功效，在HK-2人類腎近端小管上皮細胞及新生大鼠心室肌細胞(NRVM)中評估p38及JNK MAP激酶之金諾芬(auranofin)誘導之ASK1活化(Thr845自身磷酸化)及下游活化。在靜止細胞中，ASK1由還原形式之抗氧化劑蛋白硫氧還蛋白結合並予以抑制。金諾芬藉由引起硫氧還蛋白氧化、硫氧還蛋白/ASK1複合物解離及ASK1自身磷酸化及活化來激發ASK1路徑。經活化ASK1磷酸化且活化下游MAPKK (包含MAPKK3、4、6及7)，後者繼而磷酸化p38及JNK。隨後分別增加p38及JNK受質ATF2及c-Jun之磷酸化；且增加各種已知ATF2/cJun/AP1靶基因(包含趨化介素CXCL1/KC)之表現。所有該等金諾芬誘導之信號傳導事件皆由ASK1抑制劑阻斷，從而證實ASK1可在金諾芬刺激後驅使一系列信號傳導事件。使用磷酸化p38作為測定無血清環境中之ASK1活性之代用標記物，在HK-2中測得式(I)化合物之EC
50
為9.2 nM。在NRVM中，式(I)化合物以6.4 nM之平均EC
50
抑制金諾芬誘導之磷酸化p38。 在人類全血中實施CXCL1分析並量測測試化合物在金諾芬刺激ASK1路徑之後抑制CXCL1細胞介素之產生之能力。式(I)化合物以80.8 nM之平均EC
50
抑制全血中之金諾芬誘導之CXCL1產生。 總而言之，在多個使用或不使用於培養基中之人類全血之細胞分析中，式(I)化合物抑制ASK1活性。式(I)化合物抑制內源性ASK1下游靶(例如phos-p38)及CXCL-1產生。
實例 3 ： Kd 之測定
激酶分析 在源自BL21菌株之大腸桿菌(
E. coli
)宿主中製備激酶標記之T7噬菌體菌株。使大腸桿菌生長至對數期且使用T7噬菌體感染並在32℃下振盪培育直至溶解。將溶解產物離心且過濾以去除細胞碎屑。在HEK-293細胞中產生其餘激酶且隨後經DNA標記以供qPCR檢測。在室溫下使用生物素化小分子配體將鏈黴抗生物素蛋白塗覆之磁性珠粒處理約30分鐘以產生親和樹脂以供激酶分析。 將結合配體之珠粒使用過量生物素封阻並使用封阻緩衝液(SeaBlock (Pierce)、1% (牛血清白蛋白)、0.05% Tween 20、1 mM DTT (二硫蘇糖醇))洗滌以去除未結合配體並減少非特異性結合。通過在1×結合緩衝液(20% SeaBlock、0.17x PBS、0.05% Tween 20、6 mM DTT)中組合激酶、配體化親和珠粒及測試化合物來彙集結合反應液。所有反應皆係在聚苯乙烯96孔板中以0.135 mL之最終體積來實施。在室溫下將分析板振盪培育1小時且使用洗滌緩衝液(1× PBS、0.05% Tween 20)洗滌親和珠粒。然後將珠粒再懸浮於洗脫緩衝液(1x PBS、0.05% Tween 20、0.5 μM未生物素化親和配體)中且在室溫下振盪培育約30分鐘。藉由qPCR量測洗脫液中之激酶濃度。 利用標準劑量-反應曲線使用希爾方程式(Hill equation)來計算結合常數(Kd)。 結果 式(I)化合物展現0.17 nM之K
d
。此數據表明，式(I)化合物在不存在ATP下強力結合至ASK1受體。
實例 4 ： 經冷凍保藏之人類微粒體中之 CYP 調介之代謝
為研究CYP調介之代謝之機制，將化合物(1 μM)與人類肝微粒體以及NADPH輔因子以2、12、25、45及65分鐘時間點一起培育。在各個時間點收集試樣且藉由添加10% MeOH、90%乙腈、0.1%甲酸及50 nM內部標準物來停止反應。使用LC/MS/MS分析每一試樣中之化合物濃度。藉由使用單相指數方程式擬合濃度-時間數據來測定化合物在肝細胞懸浮液中之消失半衰期。亦按比例放大數據以表示固有肝清除及/或總肝清除。 未觀察到式(I)化合物之顯著代謝，而觀察到母體N-(6-(4-(第三丁基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲醯胺、5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-N-(6-(4-(環丙基甲基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氟-4-甲基苯甲醯胺及N-(6-(4-苄基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲醯胺經由N-去烷基化發生明顯損失。
實例 5 ： 式 (I) 在食蟹猴中之藥物動力學 食蟹猴
將式(I)化合物以0.50 mg/mL調配於5%右旋糖中以用於靜脈內輸注。每一投藥組係由3隻雄性食蟹猴組成。在投藥時，動物重約4.4 kg。使動物在劑量投與之前禁食過夜且在投藥之後禁食最多4 hr。對於靜脈內輸注組而言，藉由靜脈內輸注經30 min來投與測試物品。根據每一動物之體重來調節輸注速率以遞送1 mg/kg之劑量。在投藥之後於指定時間點自每一動物獲取連續靜脈血樣(各自大約0.3 mL) (參見關於時間點之附錄I)。將血樣收集於含有EDTA-K2作為抗凝血劑之Vacutainer
TM
管中且立即置於濕冰上，隨後離心血漿。使用LC/MS/MS方法量測血漿中之式(I)化合物之濃度。終末t
1/2
約為9.8 h且平均滯留時間(MRT)約為9.4 h。5-(4-環丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-N-(6-(4-異丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-4-甲基苯甲醯胺之終末t
1/2
約為3.16 h。
實例 6 ：動力學溶解性研究
將所需量之固體式(I)化合物(游離鹼或鹽形式)添加至配備有攪拌棒之反應器皿中。然後將緩衝液添加至攪拌器皿中且開啟反應計時器。在離散時間點(5、10、20、30、60及120分鐘)獲取溶液試樣並經由GHP acrodisc過濾器(0.45 um)過濾。使用65/35 v/v H
2
O 0.1% TFA/ACN稀釋劑以1:1稀釋所得濾液且藉由UPLC量化式(I)化合物之量並與參考標準進行比較。在攪拌20小時之後，獲取最終試樣以分析每一鹽形式之平衡濃度。收集來自反應器皿之剩餘固體並藉由X射線粉末繞射分析以測定最終固體形式。
圖 34
及
圖 35
中之數據展示，式(I)化合物之鹽相對於游離鹼具有改良之動力學溶解性。
實例 7 ： 穩定性研究
製備式(I)之三種鹽(琥珀酸鹽形式I、HCl形式I及蘋果酸鹽形式I)之結晶批次且將每一者置於開放容器中之40℃/75% RH穩定性室中保持一個月。一個月後，針對外觀、藉由HPLC之分析及雜質、水含量且藉由X射線粉末繞射(XRPD)對試樣進行測試(表15)。HCl形式I係化學及物理穩定的，然而，其吸收大量水。蘋果酸鹽較不穩定並在儲存於40℃/75% RH下一個月之後解離回游離鹼。琥珀酸鹽形式I在開放條件下於物理及化學上穩定且並無吸濕性。
表 15.
結晶琥珀酸鹽形式I在機械應力下亦較為穩定。晶體具有板式形態且由此與針式形態相比對流動施加較小風險。然後使用研缽及研杵將粉末碾磨1分鐘及5分鐘並藉由X射線粉末繞射(XRPD)分析。在2000 psi下於Carver壓機上實施壓縮。然後藉由光顯微術表徵形態(表16)。
表 16. 實例 8 ：藥物 - 藥物相互作用
下列數據證實，式(I)鹽減小了使用游離鹼所觀察到之酸阻抑效應。表17對調配為游離鹼(形式II，呈錠劑形式)之式(I)及調配為粉末裝膠囊(PIC) (以式(I):預膠化澱粉(PGS)之1:2比率)之式(I)鹽進行比較。將錠劑以6 mg固定劑量投與經五肽胃泌素(pentagastrin)或法莫替丁預治療之雄性比格狗中。式(I)游離鹼展示，在投用於經法莫替丁預治療之狗中時，血漿暴露約降低12倍，從而表明式(I)游離鹼在用於治療使用酸阻抑劑(例如法莫替丁或奧美拉唑)之患者時具有顯著藥物-藥物相互作用。然而，式(I)鹽消除了此效應且展示五肽胃泌素預治療與法莫替丁預治療之間相差約2倍。
表 17.