TW201835566A

TW201835566A - 咖啡豆中之16-o-甲基咖啡醇的分析方法

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Publication number: TW201835566A
Application number: TW106109702A
Authority: TW
Inventors: 曹麗君; 曾俊茂
Original assignee: 統一企業股份有限公司
Priority date: 2017-03-23
Filing date: 2017-03-23
Publication date: 2018-10-01
Also published as: TWI638997B

Abstract

本發明提供之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其利用將待測咖啡豆置於微波消化器中利用甲醇鈉溶劑進行皂化及形成脂肪酸鈉鹽，再利用飽和食鹽水及正己烷去除皂化物，將含有16-O-甲基咖啡醇的待測物，移轉至有機層，得到純淨的16-O-甲基咖啡醇，再將其輸送入高效能液相層析儀中進行層析分離以及圖譜檢測，最後藉由該檢測結果計算得知該待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的含量，並依此判定該待測咖啡豆的混豆情形。本發明提供之分析方法有效提升咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的檢測效率，幫助公正地辨別咖啡豆的品質。

Description

咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法

本發明涉及咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，尤指一種利用微波消化器對咖啡豆同時進行抽油及皂化，經由溶劑萃取技術，再以高效能液相層析儀對咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇進行檢測分析的方法。

目前市場上咖啡豆的主要供應來源係來自兩個不同品種的咖啡豆：阿拉比卡豆(Coffee Arabica)以及加納福拉豆(Coffee Canephora)，其中加納福拉豆即為俗稱的羅布斯塔豆(Coffee Robusta)。一般來說，因為阿拉比卡豆具有獨特的香氣以及風味，因此其相較於羅布斯塔豆昂貴許多。

未加工前的阿拉比卡豆和羅布斯塔豆很容易被辨識出來，阿拉比卡豆的外型大且長，而羅布斯塔豆的外觀則是小而圓。但一旦咖啡豆經加工研磨成粉末後即失去前述外觀特徵，因此只能由咖啡豆的香氣進行辨別。但即使是一位經驗老道的咖啡品嘗師也幾乎無法辨別出阿拉比卡豆之粉末中是否摻雜有少量的羅布斯塔豆之粉末，因此採用人工香氣辨別的方式顯然是無法真實地對咖啡豆的品質做出公正的評價。

直到1980年代，一項研究發現16-O-甲基咖啡醇(16-O-methylcafestol，16-OMC)是羅布斯塔豆種中特有的標誌物，且羅布斯塔豆中所含有的16-O-甲基咖啡醇其經過研磨以及烘焙加工程序後，其16-O-甲基咖啡醇的含量均不會受到影響。因此，藉由檢測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的含量即可以推知混合咖啡豆中之羅布斯塔豆的摻雜情形。

由於16-O-甲基咖啡醇係屬於雙萜類，其屬於脂類，不溶於水，因此分析混合咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的含量時需先自混合咖啡豆中提取咖啡油脂，才能對16-O-甲基咖啡醇進行定量分析。然現有技術之油脂提取方式包括有諸如：索氏萃取(Soxhelt extraction process)、超臨界萃取、快速溶劑萃取以及微波萃取等方法，但前述現有技術之提取方法均具有使用提取溶劑量大、提取溶劑危險性高、提取效率低、樣品回收率低、提取時間長以及提取步驟繁雜等缺點。因此，如何提升咖啡豆中之油脂提取的效率、避免或降低危險性高之提取溶劑的使用、簡化油脂提取的步驟，以縮短咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析時間、提升檢測效率，一直是咖啡相關產業積極研究的重點之一。

有鑑於現有技術所面臨之咖啡豆中的16-O-甲基咖啡醇的油脂提取效率不佳、提取溶劑使用量大、分析時間過長等問題，本發明之目的在於提升咖啡豆中的16-O-甲基咖啡醇的油脂提取效率，藉由簡化複雜的油脂提取步驟，縮短咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析時間，使得混合咖啡豆中之羅布斯塔豆的摻雜比例可以快速被鑑定出來，藉此幫助咖啡業者可以快速得知其所購買之咖啡豆是否存在過度摻雜較便宜的羅布斯塔豆之魚目混珠的問題。

為達成前述目的，本發明提供一種咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中該方法包括：先提供一待測咖啡豆，接著將該待測咖啡豆置於微波消化器中藉由一鹼性有機溶液進行油脂提取，以得到一提取液，進而形成一皂化層及一非皂化層，並且將16-O-甲基咖啡醇自該非皂化層中提取出來，以得到一16-O-甲基咖啡醇待測樣品。最後再將該16-O-甲基咖啡醇待測樣品輸送入高效能液相層析儀中，以對該16-O-甲基咖啡醇待測樣品進行層析分離以及圖譜檢測。

本發明利用微波消化器促進咖啡豆的油脂提取步驟，幫助含有16-O-甲基咖啡醇的咖啡豆油脂可以快速被提取出來，改善現有技術之油脂提取方式提取時間長且提取效率不佳而導致延長整體檢測分析咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇之時間的問題，藉此提升咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的檢測分析效率，縮短檢測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇含量的所需時間，幫助檢測者可以藉由檢測結果得知待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的含量，進而推算出待測咖啡豆中之羅布斯塔豆以及阿拉比卡豆的混合情形，以提供真實且可信任的數據證明該待測咖啡豆的品質。

較佳的，該分析方法包括於該16-O-甲基咖啡醇待測樣品測定之前先進行一標準品的測定步驟，該標準品的測定步驟包括：先提供一標準品樣品，該標準品樣品含有已知濃度的16-O-甲基咖啡醇，接著將該標準品樣品輸送入高效能液相層析儀中，以對該標準品樣品進行層析分離以及圖譜檢測。最後根據圖譜檢測所得到的已知濃度的16-O-甲基咖啡醇的波峰面積計算該16-O-甲基咖啡醇待測樣品中之16-O-甲基咖啡醇的含量。此技術手段利用先對含有已知濃度之16-O-甲基咖啡醇的標準品進行檢測，並將該標準品檢測所得之波峰面積作為標準含量，即該標準品的波峰面積代表該已知濃度的16-O-甲基咖啡醇，再藉由前述待測咖啡豆檢測所得之波峰面積計算其與標準品的波峰面積的比值，再由該比值乘以該已知濃度，即可得出待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的含量。

較佳的，該分析方法係在微波消化器中以重量百分濃度為2%至5%的甲醇鈉溶劑作為皂化溶劑，對該待測咖啡豆進行油脂提取及形成脂肪酸鈉鹽，分析過程中不需要額外抽油步驟，即可自咖啡豆中得到咖啡油脂，與甲醇鈉進行反應，無需先對咖啡豆抽油後再行皂化步驟，節省了抽油的時間。相較於現有技術諸如：索氏萃取、超臨界萃取、快速溶劑萃取或是微波萃取等油脂提取方式一般常使用乙醚等危險性較高且易於因溶劑摻混而造成爆炸的溶劑作為提取液進行油脂萃取，本案所提供之分析方法僅需使用安全性較高、狀態較為穩定的低濃度甲醇鈉溶劑作為皂化溶劑，即可以完成咖啡豆之油脂提取及形成脂肪酸鈉鹽，藉此大為提升咖啡豆之檢測分析過程中的安全性。

更佳的，該待測咖啡豆的重量為0.5克至1.5克，該甲醇鈉溶劑的使用體積為3毫升至7毫升，該微波消化器的運作功率為800瓦。此技術手段利用少量的皂化溶劑-甲醇鈉搭配功率為800瓦的微波消化器的運作，即可以快速、有效率地完成咖啡豆之油脂皂化及形成脂肪酸鈉鹽的步驟，不但大為降低提取溶劑的使用量，同時亦提升了油脂提取及皂化的速度，大幅縮短了自咖啡豆中抽油後，再針對油脂皂化步驟所需耗費的時間。

較佳的，該提取液中添加有正己烷與飽和食鹽水，其中該正己烷的體積為5毫升至15毫升，該飽和食鹽水的體積為15毫升至25毫升。此技術手段乃利用正己烷自皂化的水層中萃取至有機層，同時飽和食鹽水具有水洗及分層效果。

更佳的，於該提取液以離心機離心分離以形成該皂化層及該非皂化層，其中該皂化層為一水層，該非皂化層為一溶劑層，該離心的轉速條件為3000 rpm至4000 rpm，該離心的時間為10分鐘至20分鐘。此技術手段利用離心的方式促進皂化層與非皂化層的分離，使得提取液中的16-O-甲基咖啡醇可以完全被溶於該非皂化層中，進而藉由後續非皂化層的收集而被分離出來。

又更佳的，前述離心分離完成後收集該溶劑層，再將該溶劑層移至梨形濃縮燒瓶中，並且設定一濃縮機的水浴溫度為55°C至65°C，再以水浴濃縮至乾，再加入1 ml至5 ml的氰甲烷溶液定量，並經具有0.4微米至0.5微米大小之孔徑的濾膜過濾後，完成該16-O-甲基咖啡醇待測樣品的製備。此技術手段利用水浴濃縮至乾將溶劑層中的易揮發物質排除，藉此濃縮溶劑層中的16-O-甲基咖啡醇，再藉由加入甲醇將未揮發的16-O-甲基咖啡醇添加至一定量，並經由過濾步驟將其餘雜質濾除，以避免雜質諸如：咖啡渣干擾後續16-O-甲基咖啡醇待測樣品的檢測。

以下，將藉由下列具體實施例說明本發明之實施方式，熟習此技藝者可經由本說明書之內容輕易地了解本發明所能達成之優點與功效，並且於不悖離本發明之精神下進行各種修飾與變更，以施行或應用本發明之內容。

本發明首先將一具有濃度為20 ppm之16-O-甲基咖啡醇的標準品樣品輸送入高效能液相層析儀中進行層析分離以及圖譜檢測，該高效能液相層析儀中所使用的層析管柱為LiChrospher® 100 RP-18 (5 µm)管柱，該高效能液相層析儀中所使用的移動相為體積百分濃度為60%的氰甲烷水溶液，並且將該高效能液相層析儀的流速設定為1.0 ml/min。

該16-O-甲基咖啡醇的標準品樣品的分析檢測結果如圖1所示，其中該橫軸為層析分離的沖提時間(Minutes)、該縱軸為偵測訊號的強度(AU)，其於14.674分鐘時該高效能液相層析儀得到16-O-甲基咖啡醇的圖譜吸收波峰，該波形經積分計算出來的面積為88304，該積分計算出來的面積即代表該16-O-甲基咖啡醇的標準品樣品中之16-O-甲基咖啡醇的標準含量。

經由前述建立完成之16-O-甲基咖啡醇的含量推算標準後，以下將進一步對未知濃度的待測樣品進行檢測。

第一種混合比例之待測咖啡豆的檢測

首先，稱取重量為1克的待測咖啡豆，其中該待測咖啡豆包含有重量百分比為0.5%之羅布斯塔豆以及重量百分比為99.5%之阿拉比卡豆。

接著，於該待測咖啡豆中加入一重量百分濃度為2.5%、體積為5毫升的甲醇鈉溶劑作為皂化溶劑，以對該待測咖啡豆進行油脂提取及形成脂肪酸鈉鹽。再將該待測咖啡豆以及該皂化溶劑置入密閉式微波消化器中加速其油脂反應，該密閉式微波消化器的功率設定為800瓦，並且於該待測咖啡豆以及該皂化溶劑置入後5分鐘內將該密閉式微波消化器內的溫度升高至100°C，且該密閉式微波消化器內的溫度維持在100°C約10分鐘，即可得到一提取液。

接著，將該提取液自該密閉式微波消化器內取出，並且於該提取液中添加10毫升的正己烷以及20毫升的飽和食鹽水，使得該提取液上下層分離形成一皂化層及一非皂化層，其中該皂化層為水層，該非皂化層即為正己烷層。

此外，為促使該皂化層以及該非皂化層分離地更加完全，進一步以離心機離心分離該皂化層以及該非皂化層，該離心機的轉速條件設定為3500 rpm，離心時間為15分鐘，待離心完成後收集該非皂化層(正己烷層)。

再將該非皂化層置入梨形濃縮燒瓶中以溫度為55°C的水浴濃縮至乾，並且加入1毫升氰甲烷定量，再經孔徑大小為0.45微米的濾膜過濾後，即完成第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品的製備。

接著取20微升的該第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品輸送入高效能液相層析儀中進行層析分離以及圖譜檢測，該高效能液相層析儀中所使用的層析管柱為LiChrospher® 100 RP-18 (5 µm)管柱，該高效能液相層析儀中所使用的移動相為體積百分濃度為60%的氰甲烷水溶液，並且將該高效能液相層析儀的流速設定為1.0 ml/min。

該第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品的分析檢測結果如圖2所示，其中該橫軸為層析分離的沖提時間、該縱軸為偵測訊號的強度。由於高效能液相層析儀中所使用的層析管柱、移動相、流速設定以及沖提方式均與16-O-甲基咖啡醇的標準品樣品檢測時的條件相同，因此可以確定該高效能液相層析圖譜於14.544分鐘時得到的波峰即代表該第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中之16-O-甲基咖啡醇的波峰。該圖2於14.544分鐘時所得到之第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇的吸收波形經積分計算出來的面積為49733、50637、45851，該積分計算出來的面積即代表該第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇的測得含量。

進一步藉由該波形經積分計算出來的面積與前述標準品中16-O-甲基咖啡醇的標準含量推算標準進行比對後，即可計算得出第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中之16-O-甲基咖啡醇的含量。

最後，將前述第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品以高效能液相層析儀重複進行三次的檢測實驗，分別計算得到該第一種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇含量分別為11.85 ppm、12 ppm以及11.01 ppm，其平均值為11.62 ppm，其變異係數(Cv)為4.58%，請參酌下表1所示。

此外，經由理論得知重量為1克的阿拉比卡豆中應含有1.32 ppm的16-O-甲基咖啡醇，而重量為1克的羅布斯塔豆中應含有1785.7 ppm的16-O-甲基咖啡醇。因此，第一種混合比例之待測咖啡豆的16-O-甲基咖啡醇的含量理論值應為10.2419 ppm，故可以由前述重複進行三次的檢測實驗所得到之平均值除以該第一種混合比例之待測咖啡豆的16-O-甲基咖啡醇的理論值，即可計算得出本發明之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法的回收率為113.5%。

第二種混合比例之待測咖啡豆的檢測

首先，稱取重量為1克的待測咖啡豆，其中該待測咖啡豆包含有重量百分比為0.2%之羅布斯塔豆以及重量百分比為99.8%之阿拉比卡豆。

該第二種混合比例之待測咖啡豆的油脂提取步驟、提取液的皂化分離步驟以及第二種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品的分析檢測步驟均與前述相同。

該第二種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品的分析檢測結果如圖3所示，其中該橫軸為層析分離的沖提時間、該縱軸為偵測訊號的強度。由於高效能液相層析儀中所使用的層析管柱、移動相、流速設定以及沖提方式均與16-O-甲基咖啡醇的標準品樣品檢測時的條件相同，因此可以確定該高效能液相層析圖譜於14.577分鐘時得到的波峰即代表第二種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中之16-O-甲基咖啡醇的波峰。該圖3於14.577分鐘時所得到之第二種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇的吸收波形經積分計算出來的面積為16540、16183、17530，該積分計算出來的面積即代表第二種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇的測得含量。

進一步藉由該波形經積分計算出來的面積與前述標準品中16-O-甲基咖啡醇的標準含量推算標準進行比對後，即可計算得出該第二種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中之16-O-甲基咖啡醇的含量。

最後，將前述第二種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品以高效能液相層析儀重複進行三次的檢測實驗，分別計算得到該第二種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇含量分別為4.77 ppm、4.7 ppm以及4.98 ppm，其平均值約略為4.82 ppm，其變異係數(Cv)為3.11%，請參酌下表1所示。

此外，經計算得知第二種混合比例之待測咖啡豆的16-O-甲基咖啡醇的含量理論值應為4.89 ppm，故可以由前述重複進行三次的檢測實驗所得到之平均值除以該第二種混合比例之待測咖啡豆的16-O-甲基咖啡醇的理論值，即可計算得出本發明之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法的回收率為98.57%。

第三種混合比例之待測咖啡豆的檢測

首先，稱取重量為1克的待測咖啡豆，其中該待測咖啡豆包含有重量百分比為0.1%之羅布斯塔豆以及重量百分比為99.9%之阿拉比卡豆。

該第三種混合比例之待測咖啡豆的油脂提取步驟、提取液的皂化分離步驟以及第三種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品的分析檢測步驟均與前述相同。

第三種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品的分析檢測結果如圖4所示，其中該橫軸為層析分離的沖提時間、該縱軸為偵測訊號的強度。由於高效能液相層析儀中所使用的層析管柱、移動相、流速設定以及沖提方式均與16-O-甲基咖啡醇的標準品樣品檢測時的條件相同，因此可以確定該高效能液相層析圖譜於14.603分鐘時得到的波峰即代表第三種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中之16-O-甲基咖啡醇的波峰。該圖4於14.603分鐘時所得到之第三種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇的吸收波形經積分計算出來的面積為11250、11937，該積分計算出來的面積即代表該第三種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇的測得含量。

進一步藉由該波形經積分計算出來的面積與前述標準品中16-O-甲基咖啡醇的標準含量推算標準進行比對後，即可計算得出該第三種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中之16-O-甲基咖啡醇的含量。

最後，將前述第三種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品以高效能液相層析儀重複進行二次的檢測實驗，分別計算得到該第三種混合比例之16-O-甲基咖啡醇待測樣品中的16-O-甲基咖啡醇含量分別為2.92 ppm以及2.96 ppm，其平均值為2.94 ppm，請參酌下表1所示。

此外，經計算得知第三種混合比例之待測咖啡豆的16-O-甲基咖啡醇的含量理論值應為3.10 ppm，故可以由前述重複進行二次的檢測實驗所得到之平均值除以該第三種混合比例之待測咖啡豆的16-O-甲基咖啡醇的理論值，即可計算得出本發明之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法的回收率為94.84%。表1：第一種至第三種混合比例之待測咖啡豆的檢測結果。

綜上所述，本發明之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法不但可以準確地檢測計算出待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的含量，且就算是待測咖啡豆中僅含有重量百分比為0.1%之羅布斯塔豆，其16-O-甲基咖啡醇的含量仍然可以被檢測出來，並且本發明之分析方法僅需使用少量且安全的甲醇鈉溶劑搭配微波消化器的使用即可以快速地完成待測咖啡豆之油脂提取及形成脂肪酸鈉鹽步驟，並進一步製成16-O-甲基咖啡醇待測樣品，對待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇進行檢測，因此本發明之分析方法相較於現有技術利用諸如：索氏萃取、超臨界萃取、快速溶劑萃取或是微波萃取等油脂提取方式進行咖啡豆的油脂萃取，本發明同時具有提取溶劑安全性高、使用量少、回收率佳、提取時間短且提取效率高以及步驟簡便等優勢，使得待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的含量可以在2小時內得到結果，有效提升咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析效率，並且可以快速得知待測咖啡豆中之羅布斯塔豆以及阿拉比卡豆的混合比例，幫助咖啡業者可以快速得知其所購買或使用之咖啡豆是否存在過度摻雜便宜的羅布斯塔豆而降低其咖啡品質的問題。

無

圖1係利用高效能液相層析儀對16-O-甲基咖啡醇的標準品進行層析分離以及圖譜檢測所得之高效能液相層析檢測圖譜。圖2係利用本發明之分析方法對混合有0.5%之羅布斯塔豆以及99.5%之阿拉比卡豆的待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇進行層析分離以及圖譜檢測所得之高效能液相層析檢測圖譜。圖3係利用本發明之分析方法對混合有0.2%之羅布斯塔豆以及99.8%之阿拉比卡豆的待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇進行層析分離以及圖譜檢測所得之高效能液相層析檢測圖譜。圖4係利用本發明之分析方法對混合有0.1%之羅布斯塔豆以及99.9%之阿拉比卡豆的待測咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇進行層析分離以及圖譜檢測所得之高效能液相層析檢測圖譜。

Claims

一種咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中該方法包括：提供一待測咖啡豆；將該待測咖啡豆置於微波消化器中並且以一鹼性有機溶液進行油脂提取，以得到一提取液，其中該提取液形成有一皂化層及一非皂化層；將16-O-甲基咖啡醇自該非皂化層中萃取出來，以得到一16-O-甲基咖啡醇待測樣品；以及將該16-O-甲基咖啡醇待測樣品輸送入高效能液相層析儀中，以對該16-O-甲基咖啡醇待測樣品進行層析分離以及圖譜檢測。
如請求項1所述之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中該方法包括：於該16-O-甲基咖啡醇待測樣品測定之前先進行一標準品的測定步驟；該標準品的測定步驟包括：提供一標準品樣品，該標準品樣品含有已知濃度的16-O-甲基咖啡醇；將該標準品樣品輸送入高效能液相層析儀中，以對該標準品樣品進行層析分離以及圖譜檢測；根據圖譜檢測所得到的已知濃度的16-O-甲基咖啡醇的波峰面積計算該16-O-甲基咖啡醇待測樣品中之16-O-甲基咖啡醇的含量。
如請求項1或2所述之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中該分析方法包括：在微波消化器中以重量百分濃度為2%至5%的甲醇鈉溶劑作為皂化溶劑，對該待測咖啡豆進行油脂提取及形成脂肪酸鈉鹽。
如請求項3所述之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中該待測咖啡豆的重量為0.5克至1.5克，該甲醇鈉溶劑的使用體積為3毫升至7毫升，該微波消化器的運作功率為800瓦。
如請求項4所述之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中該鹼性有機溶液為重量百分濃度為2%至5%的甲醇鈉溶劑。
如請求項5所述之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中該提取液中添加有正己烷與飽和食鹽水，該正己烷的體積為5毫升至15毫升，該飽和食鹽水的體積為15毫升至25毫升。
如請求項1所述之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中於該提取液中添加該鹼性有機溶液後再以離心機離心分離以形成該皂化層及該非皂化層，其中該皂化層為一水層，該非皂化層為一溶劑層。
如請求項7所述之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中該離心的轉速條件為3000 rpm至4000rpm。
如請求項7所述之咖啡豆中之16-O-甲基咖啡醇的分析方法，其中前述離心分離完成後收集該溶劑層，再將該溶劑層移至梨形濃縮燒瓶中，並且設定一濃縮機的水浴溫度為55°C至65°C，再以水浴濃縮至乾，再加入1 ml至5 ml的氰甲烷溶液定量，並經具有0.4微米至0.5微米大小之孔徑的濾膜過濾後，完成該16-O-甲基咖啡醇待測樣品的製備。