TW201805431A

TW201805431A - 診斷神經退化性疾病之方法及其引子對

Info

Publication number: TW201805431A
Application number: TW106120908A
Authority: TW
Inventors: 賴德仁; 林志立; 李欣樺
Original assignee: 中山醫學大學
Priority date: 2016-08-02
Filing date: 2017-06-22
Publication date: 2018-02-16
Also published as: TWI649425B

Abstract

本發明係揭露一種診斷神經退化性疾病之方法，其包含測定一檢體中LARP7基因上miR-302叢集之表現，其中，其特徵在於，設計一引子對，用以間接地檢測該檢體中miR-302叢集之表現，而該引子對分別黏合於LARP7基因上外顯子9與外顯子10，並且，所得產物中包含miR-302叢集剪接位點。

Description

診斷神經退化性疾病之方法及其引子對

本發明係有關一種疾病之檢測方法，特別係指一種診斷神經退化性疾病之方法。具體來說，本發明係藉由間接測定內生性miRNA之表現，以評估個體是否罹患阿茲海默症等神經性退化疾病。

按，通常成熟miRNA長度為20-24核苷酸，與常規PCR反應中之引子長度相近，因此，常規PCR無法實現對miRNA的檢測。為能偵測miRNA之表現量，目前已經有數種分析方法被建立，舉例來說，定量檢測技術包含有：

1.基於直接雜交之檢測技術，如北方墨點法、mirVana miRNA檢測法（Ambion公司）和微陣列等。該等方法之優點是高通量，一次可以同時檢測多個miRNA之表達情況，而缺點在於技術層次較高、成本較大，還存在同一miRNA不同家族成員之間相互錯配雜交的錯誤訊號，且不適合表達量較低之miRNA檢測。

2.結合PCR與探針之定量檢測技術，如莖環（stem-loop）、Key-like及連接分析等。這類型之定量檢測技術需要使用miRNA特性之探針，因此，優點在於特異性強，常常能區別同一miRNA家族之不同型態，而缺點則在於探針之設計與合成需借助特定公司，故方便性與特異性很難得到統一之解決。

3.基於PCR與螢光染劑如SYBR green之定量檢測技術，如polyA聚合酶加尾法、Multiplexed RT法和miR-Q法等。此類型相對於上述兩類型來說，靈敏度較高，操作流程相對於簡單，惟，囿於miRNA之抽取和hairpin結構技術之克服與費用的考量，以致於難以普遍地被利用。

因此，目前雖然已有研究揭露出藉由偵測樣本內miRNA表現量，達到判斷或是診斷疾病之功效，然而基於習知miRNA定量檢測技術之缺失，導致至今仍未有快速且有效偵測樣本內miRNA表現之方法，因而無法提供作為診斷疾病之用。

本發明之主要目的係在於提供一種診斷神經退化性疾病之方法，其係藉由間接地檢測內生性miR-302叢集之表現，達到判斷或是評估個體罹患神經退化性疾病之功效。

本發明之另一目的係在於提供一種治療神經退化性疾病之組合物，其係包含有miR-302促進劑及至少一藥學上可接受之載劑，以增加細胞內miR-302之表現量，而舉例來說，miR-302促進劑係得為miR-302前驅物。

為能達成上述目的，本發明之一實施例係在於提供一種用以診斷或檢測神經退化性疾病之引子對，其係黏合於LARP7基因上外顯子9與外顯子10，並且，所得產物中包含miR-302叢集剪接位點，而能用以檢測LARP7基因上miR-302叢集之表現，其中，各該引子之設計條件係包含有：G/C%約為30～80％、Tm值為58-60℃、長度約20個鹼基、以及3’端前5個序列不能超過2個C+G，且不包含有連續4個以上G。

舉例來說，該引子對之序列係編碼為SEQ ID No.3及SEQ ID No.4、SEQ ID No.5及SEQ ID No.6、SEQ ID No.7及SEQ ID No.8、SEQ ID No.9及SEQ ID No.10、或SEQ ID No.11及SEQ ID No.12。

於本發明之另一實施例中係揭露一種診斷神經退化性疾病之方法，其包含測定一檢體中LARP7基因上miR-302叢集之表現，其中，其特徵在於，設計一引子對，用以間接地檢測該檢體中miR-302叢集之表現，而該引子對分別黏合於LARP7基因上外顯子9與外顯子10，並且，所得產物中包含miR-302叢集剪接位點。

較佳地，miR-302叢集係包含miR-302a、miR-302b、miR-302c、miR-302d及miR-367。

較佳地，該神經退化性疾病係為阿茲海默症。

較佳地，設計該引子對之條件包含有：G/C%約為30～80％、Tm值為58-60℃、各該引子之序列係不包含有連續4個以上G、各該引子長度約20個鹼基以及各該引子3’端前5個序列不能超過2個C+G。

較佳地，該產物大小介於50～150個核苷酸，又以約100個核苷酸為佳。

較佳地，該引子對之正向引子係編碼為SEQ ID No.1之序列或其進行一個或多個鹼基之取代、刪除、添加所衍生之同源性序列，並反向引子係編碼為SEQ ID No.2之序列或其進行一個或多個鹼基之取代、刪除、添加所衍生之同源性序列。

於一實施例中，該引子對係包含編碼為SEQ ID No.1之正向引子及編碼為SEQ ID No.2之反向引子。

於另一實施例中，該引子對之正向引子之序列係與SEQ ID No.1所示序列具有高於90％之相似度，並反向引子之序列係與SEQ ID No.2所示序列具有高於90％之相似度。

於其他實施例中，該引子對之序列係編碼為SEQ ID No.3及SEQ ID No.4、SEQ ID No.5及SEQ ID No.6、SEQ ID No.7及SEQ ID No.8、SEQ ID No.9及SEQ ID No.10、或SEQ ID No.11及SEQ ID No.12。

更進一步來說，該診斷神經退化性疾病之方法係包含下列步驟：

A.取得一待測檢體。

B.以該對引子偵測LARP7基因上miR-302叢集（cluster）之表現。

判斷該檢體提供者是否罹患疾病，當步驟b中於該待測樣本中所測得之數值低於一預定數值時，代表結果為陽性。

又，於本發明之另一實施例中係揭露一種以miR-302促進劑製備治療或/及預防神經性退化疾病之醫藥組合物之用途。而藉由投予有效量之該醫藥組合物至一個體，能夠保護其神經細胞避免受到類澱粉蛋白（amyloid β，Aβ）引起之氧化壓力或神經毒性而受損，進而達到預防或/及治療如阿茲海默症之神經性退化疾病之功效。

本發明所揭LARP7（La ribonucleoprotein domain family member 7）基因係位於人類第4號染色體上。

本發明所揭miR-302叢集（cluster）於個體內係扮演調控老化之重要功能，其係位於人類第4號染色體4q25之位點上，源自於LARP7基因外顯子9與外顯子10中間之內含子，包含有miR-302a、miR-302b、miR-302c、miR-302d四種亞型及miR-367，如第一圖及第二圖所示，其中，miR-302a、miR-302b、miR-302c、miR-302d及miR-367之序列係如SEQ ID No.3~ SEQ ID No.7所示。

請參閱第三圖，當LARP7之premature mRNA進行內含子片段剪接時，位於外顯子9與外顯子10中間之內含子之premature miR-302叢集同樣地被剪接並且釋放出來，之後premature miR-302叢集再進行修飾而產生miR-302叢集，而外顯子9與外顯子10則會被接合起來，此接合處係為本發明設計引子對之位置。

更進一步來說，藉由所設計出之該引子對，結合本發明所屬技術領域且具通常知識者所周知之定量檢測方法，如即時定量PCR，使該引子對黏合於LARP7之外顯子9與外顯子10，而會得到包含有miR-302叢集剪接位點之產物，而能達到間接地檢測待測樣本中miR-302叢集之表現之功效，進而據以判斷樣本提供者之罹病情況或風險。

以下，將茲舉若干實例並搭配圖式做更進一步說明如后。

實例一：設計引子對

首先我們從NCBI下載LARP7 cDNA序列，再確認miR-302叢集剪接後之位點，設定引子對之設計參數與條件，包含有：PCR產物大小約100 核苷酸左右、G/C %約為30-80 % 、避免有重複序列出現，尤其避免4個以上G的出現、Tm值約設定在58-60℃、引子長度約為20鹼基、引子3’端之前五個序列裡不能超過2個C+G等。此外，該引子對須能夾出miR-302叢集之剪接位點。將設計出之引子對藉由NCBI Blast線上軟體確認其專一選擇LARP7之產物大小，並且，確認該引子對不會產生髮夾結構（hairpin）、二級結構、以及正向引子與反向引子不會彼此互黏。

據此，得到引子對係為SEQ ID No.1及SEQ ID No.2（第1對引子對）、SEQ ID No.3及SEQ ID No.4（第2對引子對）、SEQ ID No.5及SEQ ID No.6（第3對引子對）、SEQ ID No.7及SEQ ID No.8（第4對引子對）、SEQ ID No.9及SEQ ID No.10（第5對引子對）、SEQ ID No.11及SEQ ID No.12（第6對引子對），換言之，於本實例中係設計6對不同之引子對。。

實例二：抽取細胞總RNA

將細胞加入1 mL RNA 反應試劑和300 μL 氯仿，接著離心，再使用不同濃度之酒精釋出總RNA，使用高通量cDNA反轉錄套組將總RNA轉成cDNA。而高通量cDNA反轉錄套組之詳細使用流程為本發明所述技術領域且具通常知識者所周知技術，故於此不加以贅言。

實例三：即時定量PCR

本實例及以下實例係以使用ABI 7300 序列檢測系統進行mRNA之定量。目標mRNA基因之PCR擴增使用power SYBR green PCR master mix （Biosystems）螢光即時測定。根據以下溫度及數值進行實驗：95°C/10分鐘、40 循環為95°C/15 秒、60°C/1 分鐘，解離階段為95°C/15秒、, 60°C/15秒和95°C/15秒；並且，所使用之引子對係如下表一所示。

表一：即時定量PCR使用之引子對

實例四：製備AcGFP-LVX- miR-302細胞

將神經母細胞瘤之SK-N-MC細胞培養於37°C和5% CO₂ 之培養箱中，培養基為MEM培養基，其內添加10％胎牛血清、100unit/ml盤尼西林、100μg/ml鏈黴素和2mML-谷氨酰胺。取由Clontech’s pLVX-AcGFP質體修飾而成之pLVX-miR-302 載體，藉由脂質體2000試劑（Invitrogen）將之轉染至SK-N-MC細胞，以獲得一過度表現miR-302之細胞，並且藉由能夠同時表現綠螢光之AcGFP螢光蛋白偵測該過度表現miR-302之細胞（下稱AcGFP-LVX- miR-302細胞）。

以螢光顯微鏡觀察AcGFP-LVX- miR-302細胞與轉染空白載體之SK-N-MC細胞，並且，以即時定量PCR檢測細胞內miR-302之表現，結果如第四圖及第五圖所示。由此可知，AcGFP-LVX- miR-302細胞組確實能夠表現miR-302。

實例五：細胞試驗

以Aβ（2.5μm）處理AcGFP-LVX- miR-302細胞24小時後，使用RNeasy mini 套組（Qiagen, Crawley, UK）抽取各該試驗細胞之總RNA，並且以如實例三所示之方法以第1對至第6對引子對之任一對檢測各該細胞內LARP7 mRNA之表現，結果如第六圖A至F所示。

由第六圖之結果可知，於阿茲海默症病程中Aβ所引起之神經毒性確實會影響到內生性miR-302叢集之表現，因此，藉由本發明所揭方法間接地得知內生性miR-302叢集之表現，可以提供作為判斷或是評估阿茲海默症罹病之根據。

此外，將本發明所揭引子對與市售miR302a 引子對（OriGene Technologies- MIR302a (Human) qSTAR miRNA primer pairs, Catalog Number: HP300288）以本實例之方式進行檢測效率之比較，結果如第六圖G所示，顯示本發明所揭引子對確實具有與市售引子對相似，甚而較佳之檢測效率。

實例六：人體試驗

首先，先加以說明者，本實例係通過中山醫學大學附設醫院臨床試驗中心第一人體試驗委員會審核（CSMUH No: CS 13233）。

於本實例中，罹患阿茲海默症之受試者係符合精神疾病診斷與統計手冊(第四版)之診斷標準，且須完成完成簡易智能量表（Mini-Mental State Examination, MMSE）和認知功能障礙篩檢量表（cognitive abilities screening instrument, CASI）。罹患阿茲海默症之受試者及健康受試者之基本資料係如下表二所示。蒐集阿茲海默症受試者及健康受試者之周邊血液白血球（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs），並且以實例三所述即時定量PCR檢測各該檢體內LARP7 mRNA之表現量，結果如第七圖所示。

由第七圖可知阿茲海默症受試者之LARP7 mRNA表現量係低於健康受試者，顯示miR-302 叢集之表現量因阿茲海默症發生降低。是以，由此結果可得知，miR-302 叢集確實可以作為診斷或治療神經退化性疾病之指標，亦即本發明所揭診斷神經退化性疾病之方法係能間接地檢測檢體內miR-302 叢集之表現量，並可藉由檢測結果達到診斷或評估檢體提供者罹病與否。

表二：受試者之基本資料

實例七：miR-302能夠保護神經細胞

分別以Aβ（2.5μm）處理AcGFP-LVX- miR-302細胞與轉染空白載體之SK-N-MC細胞24小時，分析經不同處理之細胞存活率及細胞凋亡之情形，結果如第八圖及第九圖所示。

再以西方墨點法測量各該細胞內蛋白質之表現量，包含有：與胰島素訊息相關蛋白：pSer³⁰⁷ -IRS-1（tyrosine phosphorylation of IRS-1）及其下游目標：pSer⁴⁷³ -Akt，以及p-Ser⁹ -GSK3、Tau、Nrf2、HO-1、tBID、Bcl-2，結果如第十圖至第十三圖所示。

由第八圖及第九圖之結果可知，miR-302之表現量增加係能夠保護細胞受損、降低細胞凋亡，達到增加細胞存活率之功效。又，請參閱第十圖及第十一圖，由於先前文獻中有指出恢復神經細胞對於胰島素之敏感性，能夠活化Akt，以抑制Aβ所誘導之細胞凋亡，因此可知，miR-302表現量增加能夠恢復神經胰島素敏感性、預防Aβ所引起之神經毒性，並且藉由刺激Akt訊息而增加p-Ser⁹ -GSK3表現量，以具有抑制tau蛋白磷酸化之功效。

請再參閱第十二圖，顯示以Aβ處理之細胞，會使細胞之Nrf2及HO-1表現量降低，但是，當細胞能夠大量表現miR-302時，則可使細胞之Nrf2及HO-1表現量增加。而基於先前文獻指出PI3K/Akt係能提昇HO-1表現及具Nrf2轉錄依賴性，並且，Nrf2為氧化還原敏感性之轉錄因子，能夠藉由正調控抗氧化反應元素而抗活性氧損傷，由此可知，miR-302能夠藉由PI3K/Akt途徑調控Nrf2及HO-1表現，避免細胞受到Aβ誘導之氧化壓力之損傷。另請參閱第十三圖，Aβ係會增加tBID之表現及降低Bcl-2之表現，使細胞走向凋亡，而當細胞能夠miR-302時，則可使tBID之表現降低，並且提昇Bcl-2之表現。

由上述結果可知，miR-302能夠藉由活化及/或恢復Akt/GSK3訊息途徑達到保護神經以及抑制Aβ所引起之氧化壓力，並且，藉由正調控Nrf2之活性抑制細胞凋亡。因此，增加細胞內miR-302之表現量係能夠達到保護神經細胞受損之功效。

無

第一圖係為本發明所揭miR-302叢集之成員及其序列。第二圖係為本發明所揭miR-302叢集之示意圖。第三圖係為本發明之一實施例之示意圖。第四圖係為SK-N-MC細胞及AcGFP-LVX- miR-302細胞以顯微鏡觀察之結果，其中，右邊為SK-N-MC細胞，左邊為AcGFP-LVX- miR-302細胞。第五圖係為SK-N-MC細胞及AcGFP-LVX- miR-302細胞內miR-302之表現結果。第六圖A係顯示AcGFP-LVX- miR-302細胞內miR-302經Aβ處理24小時及未經Aβ處理者，以第1對引子對檢測其內miR-302之表現結果。第六圖B係顯示AcGFP-LVX- miR-302細胞內miR-302經Aβ處理24小時及未經Aβ處理者，以第2對引子對檢測其內miR-302之表現結果。第六圖C係顯示AcGFP-LVX- miR-302細胞內miR-302經Aβ處理24小時及未經Aβ處理者，以第3對引子對檢測其內miR-302之表現結果。第六圖D係顯示AcGFP-LVX- miR-302細胞內miR-302經Aβ處理24小時及未經Aβ處理者，以第4對引子對檢測其內miR-302之表現結果。第六圖E係顯示AcGFP-LVX- miR-302細胞內miR-302經Aβ處理24小時及未經Aβ處理者，以第5對引子對檢測其內miR-302之表現結果。第六圖F係顯示AcGFP-LVX- miR-302細胞內miR-302經Aβ處理24小時及未經Aβ處理者，以第6對引子對檢測其內miR-302之表現結果。第六圖G係顯示AcGFP-LVX- miR-302細胞內miR-302經Aβ處理24小時及未經Aβ處理者，以本發明所揭引子對及市售引子對檢測其內miR-302之表現結果。第七圖係顯示健康受試者及阿茲海默症受試者所提供檢體內LARP7 mRNA表現量。第八圖係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後之細胞存活率。第九圖A係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後之細胞凋亡情形。第九圖B係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後之細胞凋亡比例。第十圖A係以西方墨點法分析AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，其內胰島素訊息相關蛋白及其下游目標蛋白表現之結果。第十圖B係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內pSer³⁰⁷ -IRS之表現量。第十圖C係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內p-tyrosine之表現量。第十圖D係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內pSer⁴⁷³ -Akt之表現量。第十一圖A係以西方墨點法分析AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內p-Ser⁹ -GSK3及pThr²³¹ -Tau表現之結果。第十一圖B係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內p-Ser⁹ -GSK3之表現量。第十一圖C係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內pThr²³¹ -Tau之表現量。第十二圖A係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，以西方墨點法分析細胞內Nrf2及HO-1之表現結果。第十二圖B係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內Nrf2之表現量。第十二圖C係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內HO-1之表現量。第十三圖A係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，以西方墨點法分析細胞內tBID及Bcl-2之表現結果。第十三圖B係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內tBID之表現量。第十三圖C係為AcGFP-LVX- miR-302細胞與SK-N-MC細胞經不同處理後，細胞內Bcl-2之表現量。

＜110＞中山醫學大學＜120＞診斷神經退化性疾病之方法及其引子對＜130＞ TW105124517 ＜150＞ TW105124517 ＜151＞ 2016-08-02 ＜160＞ 14 ＜170＞ PatentIn version 3.5 ＜210＞ 1 ＜211＞ 24 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 1 agagtgctat caaagagcga atgg 24 ＜210＞ 2 ＜211＞ 24 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 2 tgaggtactc cactgtctgt ttcc 24 ＜210＞ 3 ＜211＞ 28 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 3 tactgaagag gaaaaggata ctggagat 28 ＜210＞ 4 ＜211＞ 22 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 4 aaatccatcc attcgctctt tg 22 ＜210＞ 5 ＜211＞ 22 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 5 caaagagcga atggatggat tt 22 ＜210＞ 6 ＜211＞ 24 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 6 tgaggtactc cactgtctgt ttcc 24 ＜210＞ 7 ＜211＞ 23 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 7 gtgctatcaa agagcgaatg gat 23 ＜210＞ 8 ＜211＞ 24 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 8 ctccactgtc tgtttccatt tctg 24 ＜210＞ 9 ＜211＞ 21 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 9 agagcgaatg gatggatttg a 21 ＜210＞ 10 ＜211＞ 24 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 10 ctccactgtc tgtttccatt tctg 24 ＜210＞ 11 ＜211＞ 22 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 11 aagagcgaat ggatggattt ga 22 ＜210＞ 12 ＜211＞ 24 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 12 tccactgtct gtttccattt ctga 24 ＜210＞ 13 ＜211＞ 24 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 13 tggtatcgtg gaaggactca tgac 24 ＜210＞ 14 ＜211＞ 24 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞＜223＞ Artificial Sequence ＜400＞ 14 atgccagtga gcttcccgtt cagc 24

Claims

一種診斷神經退化性疾病之方法，其包含測定一檢體中LARP7基因上miR-302叢集之表現；其中：其特徵在於，設計一引子對，其分別黏合於LARP7基因上外顯子9與外顯子10，並且，所得產物中包含miR-302叢集剪接位點。
依據申請專利範圍第1項所述診斷神經退化性疾病之方法，其中miR-302叢集係包含miR-302a、miR-302b、miR-302c、miR-302d及miR-367。
依據申請專利範圍第1項所述診斷神經退化性疾病之方法，其中該神經退化性疾病係為阿茲海默症。
依據申請專利範圍第1項所述診斷神經退化性疾病之方法，其包含下列步驟： a. 取得一待測檢體； b. 以該對引子偵測LARP7基因上miR-302叢集之表現； c. 判斷該檢體提供者是否罹患疾病，當步驟b中於該待測樣本中所測得之數值低於一預定數值時，代表結果為陽性。
依據申請專利範圍第1項所述診斷神經退化性疾病之方法，其中設計各該引子之條件包含有： G/C%約為30～80％； Tm值為58-60℃；各該引子之序列係不包含有連續4個以上G；各該引子長度約20個鹼基；以及各該引子3’端前5個序列不能超過2個C+G。
依據申請專利範圍第1項所述診斷神經退化性疾病之方法，其中該產物大小介於50～150個核苷酸。
依據申請專利範圍第1項所述診斷神經退化性疾病之方法，其中該引子對之編碼係選自由SEQ ID No.1及SEQ ID No.2、SEQ ID No.3及SEQ ID No.4、SEQ ID No.5及SEQ ID No.6、SEQ ID No.7及SEQ ID No.8、SEQ ID No.9及SEQ ID No.10以及SEQ ID No.11及SEQ ID No.12所組成之群。
一種用以診斷神經退化性疾病之引子對，其係黏合於LARP7基因上外顯子9與外顯子10，並且，所得產物中包含miR-302叢集剪接位點，其中，各該引子係具有下列條件：G/C%約為30～80％、Tm值為58-60℃、長度約20個鹼基、以及3’端前5個序列不能超過2個C+G，且不包含有連續4個以上G。
依據申請專利範圍第8項所述用以診斷神經退化性疾病之引子對，其中，該引子對之編碼係選自由SEQ ID No.1及SEQ ID No.2、SEQ ID No.3及SEQ ID No.4、SEQ ID No.5及SEQ ID No.6、SEQ ID No.7及SEQ ID No.8、SEQ ID No.9及SEQ ID No.10以及SEQ ID No.11及SEQ ID No.12所組成之群。
一種以miR-302促進劑製備治療或/及預防神經性退化疾病之醫藥組合物之用途。