TW201803893A - TATκ-CDKL5融合蛋白、其組成物、配製物及用途 - Google Patents

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伊莉莎貝塔 席亞尼
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Abstract

在此揭露了含有TATκ-CDKL5融合蛋白的組成物和配製物。還揭露了由含有TATκ-CDKL5 cDNA的載體產生TATκ-CDKL5融合蛋白之方法以及使用含有TATκ-CDKL5 cDNA的該等載體和該TATκ-CDKL5融合蛋白轉導細胞之方法。還揭露了TATκ-CDKL5融合蛋白用於治療CDKL5缺陷之用途，該用途藉由全身給予或靜脈內給予該融合蛋白來實現。

Description

TATκ-CDKL5融合蛋白、其組成物、配製物及用途
本案的揭示內容是關於TATκ-CDKL5融合蛋白、其組成物、配製物及用途。
細胞周期蛋白依賴型激酶樣5（CDKL5）突變/缺陷（也被稱為非典型雷特氏症候群）係衰竭性出生後神經障礙，該神經障礙在世界範圍內每出生17,000至38,000名女性出現1例。男性同樣受其影響，而發病率較低。此障礙不限於人種或種族起源。CDKL5突變/缺陷的症狀在從輕微到嚴重的範圍內，並且以早期癲癇發作、認知障礙、張力衰弱以及自調、睡眠和胃腸紊亂存在。疾病的症狀由功能性CDKL5蛋白缺陷引起。
個體中伴X染色體的CDKL5基因中的突變或CDKL5蛋白中的缺陷與非典型或先天性雷特氏症候群的發展有關聯。參見，Bertani等人，J. biol. Chem.[生物化學雜誌]，2006，281:32048-32056；Scala等人，J. Med. Gen.[醫學基因學雜誌]，2005，42:103-107；以及Kalscheuer等人，Am. J. Hum. Genet.[美國人類遺傳學雜誌] 2003，72:1401-1411。CDKL5基因位於X染色體上並且編碼為正常的腦發育和功能所必需的蛋白質。CDKL5蛋白係在神經元細胞中具有多效性的多功能蛋白質。例如，CDKL5可以充當激酶並且使MeCP2磷酸化。MeCP2係非典型性雷特氏症候群的靶標。受CDKL5突變或缺陷影響的女生典型地具有以下特徵：正常的出生前史；在圍產期易激惹和困倦；早發癲癇，其在5月齡之前發病；雷特氏樣特徵，包括頭生長減速、刻板症（stereotypies）、較差至喪失的自主手使用、和睡眠紊亂，及伴有眼神交流差的嚴重性精神發育遲緩，以及語言幾乎喪失。參見Bahi-Buisson和Bienvenu，2012，Mol. Syndromol.[分子合成學] 2:137-152。
對於CDKL5突變/缺陷的當前治療主要集中於處理症狀上。然而，目前不存在改善具有CDKL5突變或缺陷的受試者的神經結果的治療。因此，存在開發用於治療CDKL5突變和缺陷的療法之需要。
在此描述了具有CDKL5多肽序列和TATκ多肽序列的融合蛋白，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約50%至100%的序列一致性，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。在一些方面中，該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有至少98%、至少99%或至少99.5%的序列一致性。在一些方面中，該融合蛋白可以含有Igk-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。在另外的方面中，該融合蛋白可以含有報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。在其他方面中，該融合蛋白可以含有蛋白標籤多肽，其中該蛋白標籤多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。在一些方面中，與對照相比，該等融合蛋白可以增加受試者腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度。在其他方面中，與對照相比，該等融合蛋白可以減少受試者腦中的神經元細胞凋亡。在一些方面中，該融合蛋白可以具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
在此還提供了含有治療有效量的融合蛋白和藥學上可接受的載體的藥物配製物，該融合蛋白具有CDKL5多肽序列和TATκ多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約50%至100%的序列一致性，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。在一些方面中，該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有至少98%、至少99%或至少99.5%的序列一致性。在一些方面中，包含在該等藥物配製物中的該融合蛋白可以含有Igκ-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。在一些方面中，包含在該等藥物配製物中的該融合蛋白可以含有報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。在另外的方面中，包含在該等藥物配製物中的該融合蛋白可以具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。在另外的方面中，與對照相比，該治療有效量的該融合蛋白可以治療受試者的CDKL5缺陷、雷特氏症候群或雷特氏症候群變體中的一種或多種症狀。在另外的方面中，與對照相比，該治療有效量的該融合蛋白可以增加受試者腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度。在其他方面中，與對照相比，該治療有效量的該融合蛋白可以減少受試者腦中的神經元細胞凋亡。在另外的方面中，與對照相比，該治療有效量的該融合蛋白可以改善受試者的運動功能。在一些方面中，與對照相比，該治療有效量的該融合蛋白可以改善受試者的認知功能。在另外的方面中，與對照相比，該治療有效量的該融合蛋白可以增加受試者的視覺皮層中的神經活動。
在此提供了向對其有需要的受試者給予治療有效量的藥物配製物之方法，該藥物配製物含有一定量的融合蛋白和藥學上可接受的載體，其中該融合蛋白含有CDKL5多肽序列和TATκ多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約50%至100%的序列一致性，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。在一些方面中，對其有需要的受試者患有或疑似患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群或雷特氏症候群變體。在一些方面中，該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有至少98%、至少99%或至少99.5%的序列一致性。在給予治療有效量的藥物配製物的該方法的其他方面中，與對照相比，該治療有效量的該融合蛋白可以治療受試者的CDKL5缺陷、雷特氏症候群或雷特氏症候群變體中的一種或多種症狀。
本文還提供了融合蛋白用於治療CDKL5缺陷、雷特氏症候群或雷特氏症候群變體之用途，該用途藉由全身給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物來實現。在一些方面中，靜脈內給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物。
本文還提供了融合蛋白用於增加在患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群或雷特氏症候群變體的患者的視覺皮層中的神經活動之用途，該用途藉由全身給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物來實現。在一些方面中，靜脈內給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物。
本文還提供了融合蛋白用於增加在患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群或雷特氏症候群變體的患者的腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度之用途，該用途藉由全身給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物來實現。在一些方面中，靜脈內給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物。
本文還提供了融合蛋白用於減少在患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群或雷特氏症候群變體的患者的腦中的神經元細胞凋亡之用途，該用途藉由全身給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物來實現。在一些方面中，靜脈內給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物。
本文還提供了融合蛋白用於改善在患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群或雷特氏症候群變體的患者的運動功能之用途，該用途藉由全身給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物來實現。在一些方面中，靜脈內給予融合蛋白或包含融合蛋白的藥物配製物。
在此提供了TATκ-CDKL5融合蛋白組成物和配製物以及它們用於治療CDKL5介導的疾病和障礙，尤其是由於CDKL5突變和/或缺陷所導致的障礙和疾病之方法。在此還提供了用於產生TATκ-CDKL5融合蛋白組成物和配製物之方法。該等方法為CDKL5介導的神經障礙的研究提供了改進的實驗工具以及為罹患與CDKL5功能異常相關的障礙的患者提供改進的治療選擇。在此還提供了使用這樣的TATκ-CDKL5融合蛋白組成物和配製物用於治療CDKL5介導的疾病和障礙之方法。在此還提供了在患有CDKL5介導的疾病或障礙的患者中增加視覺皮層的神經活動之方法。在此還提供了在患有CDKL5介導的疾病或障礙的患者的腦中增加神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度之方法。在此還提供了減少患有CDKL5介導的疾病或障礙的患者的腦中的神經元細胞凋亡之方法。在此還提供了改善患有CDKL5介導的疾病或障礙的患者的運動功能之方法。 定義
如在此所用，當與數值變數結合使用時，“約”、“大約”等通常是指該變數的值並且是指該變數的在實驗誤差之內（例如在平均值的95%置信區間之內）或在指示值的+/-10%之內的所有值（無論哪個更大）。
如在此所用，“活性劑”或“活性成分”是指物質、化合物或分子，其具有生物活性或以其他方式對其所給予至的受試者誘導生物學或生理學效應。換句話說，“活性劑”或“活性成分”是指組成物中的一種或多種組分，該組成物的全部或部分作用歸因於該一種或多種組分。
如在此所用，“累加效應”是指在兩種或更多種分子、化合物、物質、因素或組成物之間出現的與它們的單獨效應的總和相等或相同的效應。
如在此所用，術語“兩親性的”是指將親水特性和親脂（疏水）特性相結合的分子。
如在此所用，“抗體”是指包含由二硫鍵互相連接的至少兩條重（H）鏈和兩條輕（L）鏈的醣蛋白、或其抗原結合部分。每條重鏈由重鏈可變區（在此縮寫為VH）和重鏈恒定區構成。每條輕鏈由輕鏈可變區和輕鏈恒定區構成。VH區和VL區保留了對抗原的結合特異性並且可以進一步細分為超變區，命名為互補決定區（CDR）。CDR散佈有更保守的區，命名為框架區（FR）。每個VH和VL由按以下順序從胺基末端排到羧基末端的三個CDR和四個框架區組成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合結構域。
如在此所用，“抗感染藥”是指可以殺傷傳染劑或抑制其傳播的化合物或分子。抗感染藥包括但不限於抗生素、抗細菌藥、抗真菌藥、抗病毒藥和抗原生動物藥。
如在此所用，“適配體”是指可以結合至具有高親和力和特異性的預選擇的靶標（包括蛋白質）上的單股DNA或RNA分子。其特異性和特徵不能藉由其一級序列直接確定，而是藉由其三級結構來確定。
如在此所用，術語“生物相容的”是指通常對受者係無毒性的並且對受者不產生任何明顯的不良作用的材料以及其任何代謝物或降解產物。一般而言，生物相容材料係當給予至患者時不引發明顯的炎性應答或免疫應答的材料。
如在此所用的“生物可降解的”通常是指將在生理條件下降解或腐蝕為能夠被受試者代謝、消除或排泄出的較小單元或化學物質的材料。降解時間係組成和形態的函數。降解時間可以是從數小時至數週。
如在此所用，術語“親水性的”是指具有易於與水相互作用的強極性基團的物質。
如在此所用，“cDNA”是指與細胞中的RNA轉錄物互補的DNA序列。cDNA係人造的分子。典型地，cDNA使用RNA轉錄物為範本藉由所謂的逆轉錄酶的酶在體外形成。
如在此所用，“CDKL5缺陷”是指蛋白質的生物學功能的任何缺陷。該缺陷可以產生自編碼蛋白質的DNA或DNA相關調節區中的任何DNA突變，或由於表觀遺傳DNA修飾的任何變化導致的蛋白質功能的任何變化，包括但不限於DNA甲基化或組蛋白修飾、CDKL5蛋白的二級、三級或四級結構的任何變化，或CDKL5蛋白相比於野生型或正常受試者執行其生物學功能的能力的任何變化。
如在此所用，“CDKL5突變”是指CDKL5蛋白質的編碼區的核苷酸序列中的任何變化。
如在此所用，“細胞”、“細胞系”和“細胞培養物”包括子代。還應當理解的是所有的子代的DNA含量可能不是精確相同的，這歸因於故意的或非故意的突變。包括了具有相同功能或生物學特性的變體子代，如在原始轉化細胞中所篩選的。
如在此所用，“組成物”是指活性劑與至少一種其他化合物或分子，惰性（例如可檢測試劑或標記）或活性的，諸如佐劑的組合。
如在此所用，“濃縮的”是指一分子，包括但不限於多核苷酸、肽、多肽、蛋白質、抗體或其片段，該分子可與其天然存在的對應物的區別在於分子的濃度或數目/體積大於其天然存在的對應物的分子的濃度或數目/體積。
如在此所用，“對照”係在實驗中用於比較目的並且被包含以最小化或辨別出除獨立變數之外的變數的影響的替代性受試者或樣品。
如在此所用，“化學治療劑（chemotherapeutic agent）”或“化學治療劑（chemotherapeutic）”是指用於預防或治療癌症的治療劑。
如在此所用，“培養”是指在其中細胞可以繁殖並且避免衰老成一群細胞的條件下維持細胞。“培養”還可以包括其中細胞還或可替代地分化的條件。
如在此所用，“去氧核糖核酸（DNA）”和“核糖核酸（RNA）”通常是指任何多核糖核苷酸或多去氧核糖核苷酸，其可以是未經修飾的RNA或DNA或經修飾的RNA或DNA。RNA可以是呈以下形式：tRNA（轉移RNA）、snRNA（小核RNA）、rRNA（核糖體RNA）、mRNA（傳訊RNA）、反義RNA、RNAi（RNA干擾構建體）、siRNA（短干擾RNA)或核酶。
如在此所用，“DNA分子”包括由DNA組成的核酸/多核苷酸。
如在此所用，“衍生物”是指與化合物具有相同或類似的核心結構但具有至少一種結構差異的任何化合物，該至少一種結構差異包括取代、缺失和/或添加一個或多個原子或官能基。術語“衍生物”不意指衍生物由母體化合物作為起始物料或中間體合成，但是可以是這樣的情形。術語“衍生物”可以包括前驅藥、或母體化合物的代謝物。衍生物包括這樣的化合物，其中母體化合物中的游離胺基基團已被衍生化以形成鹽酸胺鹽、對甲苯磺醯胺、苯醯氧基甲醯胺（benzoxycarboamides）、三級丁氧甲醯胺（t-butyloxycarboamides）、硫代胺基甲酸酯型衍生物、三氟乙醯胺（trifluoroacetylamides）、氯乙醯胺或甲醯胺。衍生物包括這樣的化合物，其中母體化合物中的羧基基團已被衍生化以形成甲基酯和乙基酯，或其他類型的酯或醯肼。衍生物包括這樣的化合物，其中母體化合物中的羥基基團已被衍生化以形成O-醯基或O-烷基衍生物。衍生物包括這樣的化合物，其中母體化合物中的供氫鍵基團被替換為另一種供氫鍵基因諸如OH、NH或SH。衍生物包括將母體化合物中的氫鍵受體基團替換為另一種氫鍵受體基團諸如酯、醚、酮、碳酸鹽、三級胺、亞胺、硫酮、碸、三級醯胺以及硫化物。“衍生物”還包括用飽和的或不飽和的環己烷或其他更複雜的例如含氮的環以及具有不同側基團的該等環的延伸物替換環戊烷環的延伸物。
如在此所用，“分化（differentiate）”或“分化（differentiation）”是指先質細胞或祖細胞（例如神經先驅細胞）分化為特定的細胞類型（例如神經元）所經由的過程。
如在此所用，“差異性表現”是指與由正常或對照細胞中的相同基因或調節區產生的RNA水平相比，差異性產生RNA，包括但不限於由基因組的基因或調節區轉錄的mRNA、tRNA、miRNA、siRNA、snRNA以及piRNA，或由基因編碼的蛋白質產物。在另一背景下，“差異性表現”還是指與正常或對照細胞相比，細胞或組織中的具有不同的時間和/或空間表現譜的核苷酸序列或蛋白質。
如在此所用，“稀釋的”是指一分子，包括但不限於多核苷酸、肽、多肽、蛋白質、抗體或其片段，該分子可與其天然存在的對應物的區別在於分子的濃度或數目/體積小於其天然存在的對應物的分子的濃度或數目/體積。
如在此所用，“劑量（dose）”、“單位劑量”或“劑量（dosage）”是指適合用於受試者的物理離散單位，各單位含有預定量的CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物和/或其藥物配製物，該預定量經計算以產生所希望的應答或與其給予相關聯的應答。
如在此所用，“有效量”係足以使細胞、組織、系統、動物或人類產生有益的或所希望的生物學、情緒、醫學或臨床應答的量。有效量可以一次或多次給予、施用或劑量來給予。該術語在其範圍之內還包括有效增強正常生理功能的量。
如在此所用，在細胞背景下的“擴增（expansion）”或“擴增的”是指由原始細胞群體增加特徵性的一種或多種細胞類型的數目，該等原始細胞群體可以是或可以不是相同的。用於擴增的原始細胞不一定與由擴增產生的細胞相同。例如，擴增的細胞可以藉由原始細胞群體的離體或體外生長和分化產生。
如在此所用，“表現”是指多核苷酸被轉錄為RNA轉錄物所經由的過程。在mRNA和其他翻譯的RNA種類的背景下，“表現”還是指轉錄的RNA隨後被翻譯為肽、多肽或蛋白質所經由的一種或多種過程。
如在此所用，“融合蛋白”是指由至少兩種不同的蛋白質或蛋白質片段的組合形成的蛋白質。融合蛋白係由重組DNA分子編碼的。因此，“CDKL5融合蛋白”是指具有可操作地連接至其他多肽序列上的人類CDKL5多肽或其變體的重組蛋白。
如在此所用，“基因”是指對應於DNA序列的遺傳單位，該遺傳單位佔據染色體上的特定位置並且含有生物體中的一個或多個特徵或一個或多個性狀的遺傳指令。
如在此所用，“綠色螢光蛋白”、“黃色螢光蛋白”、“紅色螢光蛋白”等及其縮寫包括但不限於此類蛋白質的所有形式，因為它們經常被修飾、被衍生並且通常是熟習該項技術者所已知的。例如，“綠色螢光蛋白”包括但不限於增強的綠色螢光蛋白（eGFP）、氧化還原敏感性GFP（roGFP）和所有顏色突變體。
如在此所用，“HEK 293T”係本領域的術語並且是指表現大T抗原的人胚胎腎（HEK）293細胞，並且是本領域中通常已知的且藉由供應商（例如美國組織典型培養物保藏中心（American Tissue Type Culture Collection））可商購獲得。
如在此所用，術語“疏水性的”是指缺乏對水的親和力；傾向於排斥而不吸收水以及不溶解於水中或不與水混合的物質。
如在此所用，“一致性”係兩種或更多種多肽序列之間的關係，如藉由比較序列所確定的。在本領域中，“一致性”還是指多肽之間的序列相關性程度，如藉由此類序列串之間的匹配所確定的。“一致性”可以容易地藉由已知方法計算，該等已知方法包括但不限於以下各項中所述的那些：Computational Molecular Biology [計算分子生物學]，Lesk, A. M. 編著，牛津大學出版社（Oxford University Press），紐約，1988；Biocomputing: Informatics and Genome Projects [生物計算：資訊學和基因組計畫]，Smith, D. W.編著，學術出版社（Academic Press），紐約，1993；Computer Analysis of Sequence Data [序列數據的電腦分析]，第I部分，Griffin, A. M. 和 Griffin, H. G .編著，新澤西州胡馬納出版社（Humana Press，New Jersey），1994；Sequence Analysis in Molecular Biology [分子生物學中的序列分析]，von Heinje, G.，學術出版社（Academic Press），1987；以及Sequence Analysis Primer [序列分析初級讀本]，Gribskov, M. 和 Devereux, J .編著，紐約州米斯托克頓出版社（M Stockton Press，New York），1991；以及Carillo, H. 和 Lipman, D .，SIAM J. Applied Math. [工業與應用數學學會應用數學雜誌] 1988，48: 1073。設計了用於確定一致性的較佳的方法，以得出測試序列之間的最大匹配。確定一致性的方法編纂在公眾可獲得的電腦程式中。可以藉由使用結合Needelman 和 Wunsch （J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌]，1970，48: 443-453）演算法（例如，NBLAST和XBLAST）的分析軟體（例如，遺傳計算組的序列分析套裝軟體（Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group），威斯康辛州麥迪森（Madison Wis.））來確定在兩個序列之間的百分比一致性。使用缺省參數來確定本揭露的多肽的一致性。
如在此所用，“免疫調節劑”是指一試劑，諸如治療劑，其能夠調控或調節一種或多種免疫功能或應答。
如在此所用，“誘導（induces）”、“誘導（inducing）”或“誘導的（induced）”是指啟動或刺激細胞內的過程或途徑，諸如胞吞作用、分泌和胞吐作用。
如在此所用，“分離的”意指與組分、細胞和其他物質分開的，其中多核苷酸、肽、多肽、蛋白質、抗體或其片段正常是天然結合在一起的。非天然存在的多核苷酸、肽、多肽、蛋白質、抗體或其片段不需要“分離”來使其與其天然存在的對應物相區分。
如在此所用，術語“親脂性的”是指對脂質具有親和力的化合物。
如在此所用，用於治療目的的“哺乳動物”是指被分類為哺乳動物的任何動物，包括人類、家養動物和農場動物、非人類靈長類動物，以及動物園動物、體育動物、或寵物動物，諸如但不限於狗、馬、貓和牛。
如在此所用，“基質”是指一材料，其中嵌入了一種或多種專門結構、分子或組成物。
如在此所用，術語“分子量”通常是指材料的質量或平均質量。在聚合物或低聚物的情況下，分子量可以是指本體聚合物的相對平均鏈長或相對鏈質量。在實踐中，聚合物和低聚物的分子量可以不同方式來估計或表徵，包括凝膠滲透層析法（GPC）或毛細管測黏法。GPC分子量係作為重量平均分子量（Mw）報告的，該重量平均分子量係與數目平均分子量（Mn）相對的。毛細管測黏法將分子量的估計值提供為使用一組特定的濃度、溫度和溶劑條件由稀釋的聚合物溶液確定的特性黏度。
如在此所用，“陰性對照”是指被設計成不產生影響或結果的“對照”，前提條件係所有的試劑功能正常並且實驗係正確進行的。與“陰性對照”可互換的其他術語包括“假處理（sham）”、“安慰劑（placebo）”和“模擬物（mock）”。
如在此所用，“核酸”和“多核苷酸”通常是指一條至少兩個鹼基-糖-磷酸鹽的組合串並且除此之外是指單股和雙股的DNA、係單股區與雙股區的混合物的DNA、單股和雙股的RNA、以及係單股區與雙股區的混合物的RNA、包含可以是單股或更典型地是雙股或單股區與雙股區的混合物的DNA和RNA的雜交分子。而且，在此所用的多核苷酸是指包含RNA或DNA或RNA和DNA兩者的三股區。在此類區中的股可以來自相同的分子或不同的分子。該等區可以包含一個或多個分子中的全部，但是更典型地僅包含一些分子的區。三螺旋區的分子中的一種常常是寡核苷酸。“多核苷酸”和“核酸”還涵蓋多核苷酸的此類化學修飾、酶修飾或代謝修飾形式，以及病毒和細胞（除了別的之外包括簡單細胞和複雜細胞）所特有的DNA和RNA的化學形式。例如，術語多核苷酸包括如以上所述的含有一個或多個修飾鹼基的DNA或RNA。因此，僅舉兩個實例，包含稀有鹼基（諸如肌苷）或修飾鹼基（諸如三苯甲基化的鹼基）的DNA或RNA係如該術語在此所用的多核苷酸。“多核苷酸”和“核酸”還包括PNA（肽核酸）、硫代磷酸以及天然核酸的磷酸主鏈的其他變體。天然核酸具有磷酸主鏈，人工核酸可以含有其他類型主鏈，但是含有相同的鹼基。因此，出於穩定性或其他原因而對主鏈進行了修飾的DNA或RNA係如該術語在此所意指的“核酸”或“多核苷酸”。
如在此所用，“核酸序列”和“寡核苷酸”還涵蓋如以上所定義的核酸和多核苷酸。如在此所用，“生物體”、“宿主”和“受試者”是指由至少一個細胞構成的任何活的實體。活的生物體可以簡單至例如單個分離的真核細胞或培養細胞或細胞系，或者複雜至哺乳動物，包括人類和動物（例如，脊椎動物、兩棲動物、魚、哺乳動物，例如貓、狗、馬、豬、牛、綿羊、齧齒動物、兔、松鼠、熊、靈長類動物（例如，黑猩猩、大猩猩和人類））。“受試者”還可以是細胞、細胞群體、組織、器官或生物體，較佳的是人類及其組分。如在此所用，“過表現的”或“過表現”是指與正常或對照細胞中的RNA或蛋白質產物的表現水平相比，由基因編碼的RNA或蛋白質產物的表現水平增加。
如在此所用，“可操作地連接”可以指明可用於表現核酸的編碼序列的調節序列以相對於編碼序列的適當位置位於核酸分子中以便實現編碼序列的表現。此相同定義有時適用於表現載體中的編碼序列和/或轉錄控制元件（例如，啟動子、增強子和終止元件）和/或選擇性標記的安排。
如在此所用，“患者”是指需要治療的生物體、宿主或受試者。
如在此所用，“肽”是指相對於蛋白質或多肽係短的至少2個胺基酸的鏈。
如在此所用，“藥物配製物”是指活性劑、化合物或成分與藥學上可接受的載體或賦形劑的組合，從而使該組成物適合於體外、體內或離體的診斷性、治療性或預防性用途。
如在此所用，“藥學上可接受的載體或賦形劑”是指可用於製備藥物配製物的載體或賦形劑，該載體或賦形劑通常是安全、無毒性的並且既不是生物學上也不是其他不合需要的，並且包括獸醫用途以及人類藥物用途可接受的載體或賦形劑。如說明書和申請專利範圍中所用的“藥學上可接受的載體或賦形劑”包括一種和多於一種的此載體或賦形劑兩者。
如在此所用，“藥學上可接受的鹽”是指任何酸或鹼加成鹽，其反離子對它們以鹽的藥物劑量所給予至的受試者沒有毒性。
如在此所用，如在此所用的“質粒”是指包含完整“複製子”的非染色體的雙股DNA序列，由此使得該質粒在宿主細胞中被複製。
如在此所用，“陽性對照”是指被設計成產生所希望的結果的“對照”，前提條件係所有的試劑功能正常並且實驗係正確進行的。
如在此所用，“預防性（preventative）”和“預防（prevent）”是指在疾病或病狀發生之前阻止或終止該疾病或病狀，即使未診斷出，或者在該疾病或病狀仍處於亞臨床階段時。
如在此所用，如在此所用的“蛋白質”是指由一條或多條胺基酸鏈以特定順序組成的大分子。術語蛋白質與“多肽”可互換地使用。該順序係藉由編碼該蛋白質的基因中的核苷酸的鹼基序列確定的。蛋白質係為身體的細胞、組織和器官的結構、功能和調節所需要的。每種蛋白質具有獨特的功能。
如在此所用，“純化的”或“純化”用於指相對於自然環境具有增加的純度的核酸序列、肽或多肽。
如在此所用，術語“重組體”通常是指非天然存在的核酸、核酸構建體或多肽。此類非天然存在的核酸可以包括已經被修飾（例如具有缺失、取代、翻轉、插入等）的天然核酸，和/或使用分子生物技術所接合的不同來源的核酸序列的組合（例如，編碼融合蛋白（例如，由兩種不同的蛋白質或蛋白質片段的組合形成的蛋白質或多肽）的核酸序列，編碼多肽的核酸與啟動子序列的組合，其中編碼序列和啟動子序列來自不同的來源或以其他方式典型地非天然地一起出現（例如核酸和組成型啟動子）等）。重組體還是指由重組核酸編碼的多肽。非天然存在的核酸或多肽包括藉由人而經修飾的核酸和多肽。
如在此所用，“雷特氏症候群變體”、“雷特氏症候群的變體”等是指雷特氏症候群的非典型形式，其與雷特氏症候群具有類似的臨床徵象但病因學未知。
如在此所用，“分開的”是指與原始來源或群體在物理上分割開的狀態，使得分開的化合物、試劑、粒子或分子可以不再被認為是原始來源或群體的一部分。
如在此所用，“特異性地結合”或“特異性結合”是指此類成對物種諸如酶/底物、受體/激動劑或拮抗劑、抗體/抗原、凝集素/碳水化物、寡DNA引物/DNA、酶或蛋白質/DNA，和/或RNA分子與其他核酸（DNA或RNA）或胺基酸之間存在的結合，該結合可以是由共價相互作用或非共價相互作用或共價相互作用和非共價相互作用的組合介導的。當兩種物種的相互作用產生非共價結合的複合物時，發生的結合典型地是靜電的、氫鍵的或親脂性相互作用的結果。因此，“特異性結合”發生在成對物種之間，其中兩者之間存在產生具有以下的特徵的結合複合物的相互作用：抗體/抗原、酶/底物、DNA/DNA、DNA/RNA、DNA/蛋白質、RNA/蛋白質、RNA/胺基酸、受體/底物相互作用。具體地，特異性結合的特徵在於對中的一個成員與結合成員的相應成員所屬於的化合物家族內的特定物種結合並且不與其他物種結合。因此，例如，抗體較佳的是結合蛋白質家族內的單一表位並且不結合其他表位。
如在此所用，“特異性結合配偶體”或“結合配偶體”係相比於所有其他分子或化合物，與第二化合物或分子的結合的親和力更高的化合物或分子。
如在此可互換所用，“受試者”、“個體”或“患者”是指脊椎動物生物體。
如在此所用，“基本上純的”意指目標物種係存在的佔優勢物種（即，在莫耳基礎上它比該組成物中的任何其他單獨物種更豐富），並且較佳的是基本上純化的級分係其中目標物種占存在的所有物種的約50%的組成物。一般地說，基本上純的組成物將包含組成物中存在的所有物種的大於約80%，更較佳的是大於約85%、90%、95%和99%。更較佳的是，目標物種被純化至必要的均質性（藉由常規的檢測方法不能在該組成物中檢測到污染物物種），其中該組成物主要由單一物種組成。
如在此所用，“基本上純的細胞群體”是指具有指定的細胞標記特徵和分化潛能的細胞群體，該細胞群體係組成總細胞群體的細胞的約50%、較佳的是約75%-80%、更較佳的是約85%-90%，並且最較佳的是約95%。因此，“基本上純的細胞群體”是指這樣的細胞群體：在所指定的測定條件下，該細胞群體含有少於約50%、較佳的是少於約20%-25%、更較佳的是少於約10%-15%，並且最較佳的是少於約5%的不展示出指定的標記特徵和分化潛能的細胞。
如在此可交換使用的術語“足夠的”和“有效的”是指實現一種或多種希望的結果所需要的量（例如，質量、體積、劑量、濃度和/或時間週期）。例如，治療有效量是指實現一種或多種治療性效果所需要的量。
如在此所用，“協同效應”、“協同作用”或“協同性”是指在兩種或更多種分子、化合物、物質、因素或組成物之間出現的大於或不同於它們的單獨效應的總和的效應。
如在此所用，“治療性的”是指治療、治癒和/或改善疾病、障礙、病狀或副作用，或者是指降低疾病、障礙、病狀或副作用的發展速率。該術語在其範圍之內還包括增強正常的生理功能、姑息治療以及疾病、障礙、病狀、副作用或其症狀的部分補救。該疾病或障礙可以是CDKL5缺陷和/或雷特氏症候群。
如在此所用，“治療有效量”是指在此所述的CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物、助劑或第二試劑將引發組織、系統、動物或人類的生物或醫學應答的量，該量係由研究者、獸醫、醫師或其他臨床醫師所尋求的。“治療有效量”包括當單獨給予或與第二試劑共同給予時，CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物的足以防止CDKL5缺陷和/或雷特氏症候群的一種或多種症狀的發展、將該一種或多種症狀減少或減輕至一定程度的量。“治療有效量”包括當單獨給予或與第二試劑共同給予時，與對照相比，CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物的足以增加受試者的腦的區中的神經元存活率、神經元數目、神經突生長、延長、樹突棘數目、和/或分支密度的量。“治療有效量”包括當單獨給予或與第二試劑共同給予時，與對照相比，CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物的足以增加受試者的學習能力的量。“治療有效量”包括當單獨給予或與第二試劑共同給予時，與對照相比，CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物的足以增加受試者的記憶能力的量。“治療有效量”包括當單獨給予或與第二試劑共同給予時，與對照相比，CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物的足以改善受試者的運動功能的量。“治療有效量”包括當單獨給予或與第二試劑共同給予時，CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物的足以將學習能力、記憶能力和/或運動功能恢復至基本上類似於野生型或正常水平的水平的量。“治療有效量”包括當單獨給予或與第二試劑共同給予時，CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物的足以將腦的區中的神經元數目、神經元存活率、神經突生長、神經突延長、樹突棘數目、神經突分支數目和/或神經突分支密度恢復至基本上類似於野生型或正常水平的水平的量。該治療有效量將根據以下各項變化：CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、其藥物配製物的確切化學結構、被治療的CDKL5缺陷、雷特氏症候群或其症狀、給予路徑、給予時間、排泄速率、藥物組合、治療醫師的判斷、劑型以及有待治療的受試者的年齡、重量、一般健康狀況、性別和/或飲食。
如在此所用，術語“治療（treating）”和“治療（treatment）”通常是指獲得所希望的藥理學和/或生理學效應。在預防或部分預防疾病、其症狀或病狀，諸如由CDKL5突變和/或缺陷、雷特氏症候群的CDKL5變體產生的疾病或障礙，或其他CDKL5介導的神經障礙方面，該效果可以是預防性的，和/或在部分或完全治癒疾病、病狀、症狀或歸因於該疾病、障礙或病狀的不良作用方面，該效果可以是預防性的。如在此所用，術語“治療”涵蓋哺乳動物，特別是人類的CDKL5介導的神經障礙的任何治療，並且包括：(a) 防止疾病在可能易受疾病但是還未被診斷為罹患疾病的受試者身上發生；(b) 抑制疾病，即，遏制它發展；或 (c) 減輕疾病，即，緩和或改善疾病和/或其症狀或病狀。如在此所用，術語“治療”是指治療性治療和預防性（prophylactic或preventative）措施兩者。需要治療的那些包括已經患有障礙的那些以及其中有待預防障礙的那些。
如在此所用，“有形的表現介質”是指物理上有形的介質並且不僅僅是抽象思維或無記錄的口頭語言。有形的表現介質包括但不限於纖維素或塑膠材料上的字或適合的設備諸如快閃記憶體或CD-ROM上存儲的數據。
如在此所用，“轉導的”是指將蛋白質直接引入到細胞中。
如在此所用，術語“轉染”是指將外源性和/或重組核酸序列引入到活細胞的細胞膜封閉空間的內部中，包括將核酸序列引入到細胞的胞液以及線粒體、細胞核或葉綠體的內部空間中。核酸可以呈裸DNA或RNA的形式，其可以與不同蛋白質或調節元件（例如，啟動子和/或信號元件）締合，或者核酸可以摻入到載體或染色體中。可以將核酸摻入病毒顆粒中。
如在此所用，“轉化”或“轉化的”是指將核酸（例如，DNA或RNA）引入細胞中，以此方式使得允許引入的核酸的編碼部分表現。
如在此所用，“低表現的”或“低表現”是指與正常或對照細胞中的RNA或蛋白質產物的表現水平相比，由基因編碼的RNA或蛋白質產物的表現水平降低。
如在此所用，“變體”是指不同於參考多肽但是保留了必要的特性的多肽。多肽的典型變體與另一個參考多肽在胺基酸序列上不同。一般來講，差異係受限的，使得參考多肽和變體的序列總體上是緊密類似的並且在許多區中是相同的。變體和參考多肽可以藉由一個或多個修飾（例如，取代、添加和/或缺失）而在胺基酸序列上不同。取代或插入的胺基酸殘基可以是或可以不是被遺傳密碼編碼的胺基酸殘基。多肽的變體可以是天然存在的諸如等位基因變體，或者可以是未知係天然存在的變體。“變體”包括功能和結構的變體。
如在此所用，術語“載體”用於指用於將外源性核酸序列引入到細胞中的媒介物。載體可以包括線性或環狀的DNA分子（例如質粒），該DNA分子包含編碼感興趣的多肽的區段，該區段被可操作地連接至在引入到宿主細胞或宿主細胞細胞器中後提供其轉錄和翻譯的另外區段上。此類另外的區段可以包括啟動子序列和終止子序列，並且還可以包括一個或多個複製起點、一種或多種選擇性標記、增強子、多腺苷酸化信號等。表現載體通常來源於酵母或細菌基因組或質粒DNA、或病毒DNA，或可以含有兩者的元件。
如在此所用，“野生型”係在自然界中出現的典型形式的生物體、變種、菌株、基因、蛋白質或特徵，與可能產生自選擇育種或使用轉基因的轉化的變體形式相區分。
除非在此另外定義，否則在此使用的所有技術性和科學性的術語具有與熟習該項技術者所普遍理解的相同含義。 討論 TAT κ -CDKL5 融合基因和蛋白質
在人類CDKL5中，前兩個報導的剪接變體在5'UTR方面不同，並產生相同的115 kDa蛋白質。該等剪接變體被稱為同功型I（含有在廣泛組織中轉錄的外顯子1），以及僅限於睾丸和胎兒腦中的同功型II（包括外顯子1a和1b）（Kalscher等人，2003，Am J Hum Genet [美國人類遺傳學雜誌]，72: 1401-11和Williamson等人，2012，Hum Genet [人類遺傳學]，131: 187-200）。所得到的CDKL5轉錄物產生分子量為115 kDa、具有1030個胺基酸的蛋白質（CDKL5115 ），並且主要在睾丸中表現。最近，已經鑒定出可變剪接事件，導致至少三種不同的人類蛋白質同功型。該等同功型之一的特徵在於改變的C-末端區域並且被稱為CDKL5107（Fichou等人，2011，J. Hum Genet[人類遺傳學雜誌]，56: 52-57，Williamson等人，2012，Hector等人，2016，PLoS One [公共科學圖書館雜誌]，11(6): e0157758）。CDKL5107係人和小鼠腦中主要的同功型。在所有人類組織中，CDKL5107係最豐富的轉錄物，其中組織表現CDKL5107比CDKL5115 多10倍至100倍或更多。具體地，在整個腦中存在CDKL5107 比CDKL5115 多37倍。睾丸係例外，CDKL5107 僅比CDKL5115 多2.5倍，這反映出了在該組織中CDKL5115 相對豐富。CDKL5的C末端（在兩種同功型中是不同的）在調節其亞細胞定位和細胞核中截短的蛋白質的積累中是重要的。（Bertani等人，2006，J Biol Chem [生物化學雜誌]，281: 32048-56和Rusconi等人，2008，J Biol Chem [生物化學雜誌]，283: 30101-11）。
已經檢查了CDKL5107同功型的細胞分佈，這揭示了與先前研究過的人類CDKL5115 蛋白質大部分重疊而不完全重疊的亞細胞定位和催化活性。體外數據表明CDKL5115 同功型的蛋白酶體降解由僅在該同功型中存在的在胺基酸904和1030之間的信號介導，而CDKL5107 更穩定，並且更不易於藉由蛋白酶體途徑降解。融合基因和蛋白質
在此揭露了重組cDNA序列，其編碼不同的含有修飾TAT（TATκ）序列的CDKL5融合蛋白。包含在融合蛋白中的CDKL5可以是CDKL5115 同功型。包含在融合蛋白中的CDKL5可以是CDKL5107 同功型。SEQ ID NO: 2對應於CDKL5115 同功型多肽，並且SEQ ID NO: 16對應於CDKL5107同功型多肽。在一個實施方式中，該融合蛋白含有可操作地連接至TATκ多肽上的人類CDKL5多肽。編碼CDKL5融合蛋白的cDNA序列可以具有根據在此所述的SEQ ID NO: 1、7、9、11、13，或其變體中的任一個的序列。CDKL5融合蛋白可以具有根據在此所述的SEQ ID NO: 8、10、12、14，或其變體中的任一個的多肽序列。
在一些實施方式中，人類CDKL5 cDNA序列可以根據SEQ ID NO: 1或15。在另外的實施方式中，人類CDKL5 cDNA可以與SEQ ID NO: 1或15具有約90%至約100%、80%至約90%、或約50%至約80%一致。在一些實施方式中，人類CDKL5 cDNA序列可以編碼根據SEQ ID NO: 2或16的胺基酸序列。在另外的實施方式中，人類CDKL5 cDNA序列可以編碼與SEQ ID NO: 2或16具有約90%至約100%、80%至約90%、或約50%至約80%一致的胺基酸序列。
在一些實施方式中，人類CDKL5 cDNA序列可以是與SEQ ID NO: 1中的12個連續核苷酸具有約90%至100%一致的至少12個連續核苷酸的片段。在一些實施方式中，人類CDKL5 cDNA序列可以是與SEQ ID NO: 1中的12個連續核苷酸具有約80%至90%一致的至少12個連續核苷酸的片段。在一些實施方式中，cDNA序列可以是與SEQ ID NO: 1中的12個連續核苷酸具有約50%至80%一致的至少12個連續核苷酸的片段。
在一些實施方式中，人類CDKL5 cDNA序列可以是與SEQ ID NO: 15中的12個連續核苷酸具有約90%至100%一致的至少12個連續核苷酸的片段。在一些實施方式中，人類CDKL5 cDNA序列可以是與SEQ ID NO: 15中的12個連續核苷酸具有約80%至90%一致的至少12個連續核苷酸的片段。在一些實施方式中，cDNA序列可以是與SEQ ID NO: 15中的12個連續核苷酸具有約50%至80%一致的至少12個連續核苷酸的片段。
CDKL5融合蛋白含有可操作地連接至人類CDKL5多肽上的修飾的反式作用啟動的轉錄（TAT）蛋白質轉導結構域（PTD）（TATκ）。TATκ可以具有根據SEQ ID NO: 3的cDNA序列和根據SEQ ID NO: 4的胺基酸序列。TATκ係修飾的TAT-PTD。未修飾的TAT-PTD介導肽和蛋白質到細胞中的轉導。然而，未修飾的TAT-PTD不允許TAT-PTD融合蛋白被細胞分泌。未修飾的TAT-PTD藉由弗林內切蛋白酶在位於未修飾TAT-PTD之內的弗林蛋白酶識別序列處從融合蛋白裂解出來。相反，TATκ被修飾使得其不含有弗林蛋白酶識別序列。因此，在此所述的含有TATκ的CDKL5融合蛋白可以其全長形式被真核細胞分泌。
在一些實施方式中，TATκ cDNA序列可以與SEQ ID NO: 3具有約90%至100%或約80%至約90%一致。在一些實施方式中，TATκ cDNA可以編碼與SEQ ID NO: 4具有約90%至100%或約80%至約90%一致的多肽序列。TATκ cDNA能夠可操作地連接至編碼CDKL5融合蛋白的cDNA。
CDKL5融合蛋白可以視情況含有Igκ-鏈前導序列以在由細胞產生過程中將多肽引向分泌途徑。在一些實施方式中，該Igκ-鏈前導序列可以被可操作地連接在人類CDKL5多肽的N-末端處。該Igκ-鏈前導序列可以具有根據在此所述的SEQ ID NO: 5或其變體的cDNA序列並且可以具有根據在此所述的SEQ ID NO: 6或其變體的胺基酸序列。Igκ鏈前導序列cDNA能夠可操作地連接至編碼CDKL5融合蛋白的cDNA。
在其他實施方式中，該Igκ-鏈前導序列cDNA可以與SEQ ID NO: 5具有約90%至100%、約80%至約90%、或約80%至90%一致。在一些實施方式中，該Igκ-鏈前導序列可以具有與SEQ ID NO: 6具有約90%至約100%、約80%至約90%、或約50%至約80%一致的胺基酸序列。
CDKL5融合蛋白可以視情況含有可操作地連接至CDKL5融合蛋白上的一個或多個蛋白標籤。該等標籤類型係允許融合蛋白的親和純化、溶解、層析分離和/或免疫檢測的胺基酸序列。適合的蛋白標籤包括但不限於幾丁質結合蛋白質（CBP）、麥芽糖結合蛋白（MBP）、谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）、聚(His)、硫氧還蛋白（thioredoxin）（TRX）、聚(NANP)、FLAG標籤（包括任何FLAG標籤變體，例如3x FLAG）、V5標籤、Myc標籤、HA標籤、S標籤、SBP標籤、Sf標籤1、Sof標籤3、Tc標籤、Xpress標籤、Strep標籤、Isopep標籤、Spy標籤、Ty標籤、生物素羧基載體蛋白（BCCP）以及Nus標籤。根據SEQ ID NO: 7、9或11、分別具有根據SEQ ID NO: 8、10或12的胺基酸序列的CDKL5融合蛋白cDNA展示了含有TATκ和Myc標籤和聚(HIS)標籤的CDKL5融合蛋白的非限制性實施方式。根據SEQ ID NO: 13、具有根據SEQ ID NO: 14的胺基酸序列的CDKL5融合蛋白cDNA展示了具有FLAG標籤的CDKL5融合蛋白的非限制性實施方式。
CDKL5融合蛋白可以視情況含有可操作地連接至CDKL5多肽上的一種或多種報告蛋白。適合的報告基因包括但不限於螢光蛋白（例如，綠色螢光蛋白（GFP）、紅色螢光蛋白（RFP）、黃色螢光蛋白（YFP）、藍色螢光蛋白（BFP）以及青色螢光蛋白（CFP））、β-半乳糖苷酶、螢光素酶（細菌、螢火蟲和海腎（renilla）螢光素酶）、抗生素耐性基因（例如氯黴素乙醯轉移酶、新黴素磷酸轉移酶和NPT-II）、β-葡萄糖醛酸酶（p-glucuronidase）以及鹼性磷酸酶。報告蛋白的包含（除了別的之外）允許融合蛋白和融合蛋白功能的直接和/或間接表徵，以及該蛋白質的親和純化。該報告蛋白可以被可操作地連接至人類CDKL5多肽的N-末端和/或C-末端上。在其他實施方式中，該報告蛋白可以被可操作地連接至CDKL5融合蛋白的N-末端和/或C-末端上。根據SEQ ID NO: 9或11並且分別具有根據SEQ ID NO: 10或12的胺基酸序列的CDKL5融合蛋白cDNA展示了含有螢光報告蛋白的CDKL5融合蛋白的非限制性實施方式。重組載體
CDKL5融合cDNA序列可以被摻入到適合的表現載體中。該表現載體可以含有用於促進CDKL5融合cDNA的表現的一種或多種調節序列或一種或多種其他序列。該表現載體可以含有用於促進CDKL5融合表現載體的複製的一種或多種調節序列或一種或多種其他序列。該表現載體可以適用於在細菌細胞中表現CDKL5融合蛋白。在其他實施方式中，該表現載體可以適用於在酵母細胞中表現CDKL5融合蛋白。在另外實施方式中，該表現載體可以適用於在植物細胞中表現CDKL5融合蛋白。在其他實施方式中，該表現載體可以適用於在哺乳動物細胞中表現CDKL5融合蛋白。在另一個實施方式中，該載體可以適用於在真菌細胞中表現CDKL5融合蛋白。在另外的實施方式，該載體可以適用於在昆蟲細胞中表現CDKL5融合蛋白。合適的表現載體對於熟習該項技術者而言通常是已知的。 TAT κ -CDKL5 蛋白質產生
在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白在細胞培養系統中體外產生。該細胞培養系統可以含有一種或多種細菌、酵母、昆蟲、真菌、植物或哺乳動物細胞。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白被一種或多種培養細胞分泌到細胞培養基中。在其他實施方式中，CDKL5融合蛋白被包含在一種或多種培養細胞的細胞質或細胞膜之內。
由此，轉向圖1，其示出了產生CDKL5融合蛋白的方法的一個實施方式，其中CDKL5融合蛋白由培養的細胞產生並且被分泌到周圍培養基中。該方法開始於使含有CDKL5融合蛋白cDNA序列的適合載體轉染或以其他方式遞送至培養物中的一種或多種細胞（6000）。然後使用通常已知的方法培養細胞（6010）以使得轉染的細胞由載體產生CDKL5融合蛋白並且將CDKL5融合蛋白分泌到周圍細胞培養基中。在其他實施方式中，可以使用熟習該項技術者通常已知的技術產生穩定轉染的細胞系，該細胞系表現一種或多種載體，該載體含有CDKL5融合蛋白cDNA。可以使用通常已知的方法來培養該等細胞（6010），以允許細胞產生CDKL5融合蛋白。
在適量時間之後，收集含有分泌的CDKL5融合蛋白的培養基（6020）。在一些實施方式中，將細胞培養從約12小時至約96小時。這時候，確定是否需要進一步從培養基中純化CDKL5融合蛋白（6030）。在一些實施方式中，含有CDKL5融合蛋白的培養基不進一步進行純化並且直接用於轉導一種或多種細胞（6050）。在其他實施方式中，進一步從培養基中純化CDKL5融合蛋白和/或將CDKL5融合蛋白濃縮在培養基中。在一些實施方式中，使用適合的方法純化和/或濃縮CDKL5融合蛋白。合適的方法包括但不限於溶劑分配鹽溶或鹽析、基於親和力的方法以及層析分離方法例如疏水相互作用、離子交換、混合模式、染料結合和尺寸排阻，如在以下文獻中所例證的：Kameshita等人（Biochemical and Biophysical Research Communications [生物化學和生物物理學研究通訊] 377，1162-1167（2008）），Sekiguchi等人（Archives of Biochemistry and Biophysics [生物化學和生物物理學集刊] 535，257-267（2013））和Katayama等人（Biochemistry [生物化學]，54，2975-2987（2015）），其藉由引用併入本文。
考慮到分泌性產生方法的理解，轉向圖2，其示出了產生CDKL5融合蛋白的方法的一個實施方式，其中CDKL5融合蛋白未被分泌到周圍的細胞培養基中。該方法開始於使含有CDKL5融合蛋白cDNA序列的適合載體轉染或以其他方式遞送至培養物中的一種或多種細胞（6000）。然後使用通常已知的方法培養細胞（6010）以使得轉染的細胞由載體產生CDKL5融合蛋白。在適量時間之後，使用標準方法裂解細胞（7000）。在一些實施方式中，在進行裂解之前，將細胞培養從12小時至96小時。
接著，確定CDKL5融合蛋白是否被整合在細胞膜或細胞質之內（7010）。如果CDKL5融合蛋白在細胞膜級分中，那麼收集細胞膜級分（7020）。在收集細胞膜級分之後（7020），使用適合的方法將CDKL5融合蛋白與膜級分分開（6040）以用於純化和/或濃縮CDKL5融合蛋白。
在其中CDKL5融合蛋白存在於細胞質中的實施方式中，收集含有CDKL5融合蛋白的上清液（7030）。在收集上清液之後（7030），確定是否應當進一步純化和/或濃縮CDKL5融合蛋白。如果確定應當進一步純化和/或濃縮CDKL5融合蛋白，那麼使用適合的方法純化和/或濃縮CDKL5融合蛋白（6040）。適合的方法包括但不限於親和純化、大小排阻分離以及層析分離方法。在其中確定不應當進一步從上清液中純化和/或濃縮CDKL5的其他實施方式中，含有CDKL5融合蛋白的上清液直接用於轉導細胞（6050）。 含有 TAT κ -CDKL5 融合蛋白的組成物和配製物
含有如在此所述的CDKL5融合蛋白的組成物和配製物也在本揭露的範圍之內。該組成物可以是含有可以根據在此所述的方法產生的CDKL5融合蛋白的培養基或上清液。
在此所述的CDKL5融合蛋白可以單獨地或作為諸如藥物配製物中的活性成分被提供給對其有需要的受試者。因此，還在此描述了含有一定量的CDKL5融合蛋白的藥物配製物。在一些實施方式中，該等藥物配製物含有治療有效量的CDKL5融合蛋白。在此所述的該等藥物配製物可以被給予至對其有需要的受試者。對其有需要的受試者可以患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群和/或其症狀。在其他實施方式中，該CDKL5融合蛋白可以被使用在用於治療或預防CDKL5缺陷、雷特氏症候群和/或其症狀的藥劑的製造中。藥學上可接受的載體和輔助成分以及試劑
含有治療有效量的在此所述的CDKL5融合蛋白的藥物配製物可以進一步包含藥學上可接受的載體。適合的藥學上可接受的載體包括但不限於水、鹽溶液、醇、阿拉伯樹膠、植物油、苯甲醇、聚乙二醇、明膠、碳水化物諸如乳糖、直鏈澱粉或澱粉、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、芳香油、脂肪酸酯、羥甲基纖維素、以及聚乙烯吡咯啶酮，它們不與活性組成物發生有害反應。
可以對該等藥物配製物進行滅菌並且必要時與助劑諸如潤滑劑、防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、用於影響滲透壓的鹽、緩衝劑、著色物質、芳香物質和/或芬芳物質等進行混合，該等助劑不與活性組成物發生有害反應。
除治療有效量的在此所述的CDKL5融合蛋白之外，該藥物配製物還可以包含有效量的輔助活性劑，包括但不限於抑制必要的腫瘤蛋白質和基因的翻譯或轉錄的DNA、RNA、胺基酸、肽、多肽、抗體、適配體、核糖核酸酶、核糖核酸酶的指導序列、激素、免疫調節劑、解熱藥、抗焦慮劑、抗精神病藥、鎮痛藥、鎮痙藥、抗炎藥、抗組胺藥、抗感染藥、以及化療藥物。
適合的激素包括但不限於胺基酸衍生的激素（例如，褪黑激素和甲狀腺素）、小肽激素和蛋白質激素（例如促甲狀腺激素釋放激素、抗利尿激素、類胰島素、生長激素、促黃體激素、促卵泡激素以及促甲狀腺激素）、類花生酸類（例如花生油酸、脂氧素和前列腺素）以及類固醇激素（例如雌二醇、睾酮、四氫睾酮皮質醇）。
適合的免疫調節劑包括但不限於喋呤、硫唑嘌呤、6-MP、環孢黴素（cyclosporine）、他克莫司（tacrolimus）、胺甲喋呤、介白素（例如IL-2、IL-7和IL-12）、細胞介素（例如干擾素（例如IFN-α 、 IFN-β 、 IFN-ε 、 IFN-κ 、 IFN-ω 和 IFN-γ ）、粒細胞集落刺激因子以及咪喹莫特（imiquimod））、趨化介素（例如CCL3、CCL26和CXCL7）、胞嘧啶磷酸鹽-鳥苷、寡去氧核苷酸、葡聚糖、抗體以及適配體）。
適合的解熱藥包括但不限於非甾體類抗炎藥（例如伊布洛芬、萘普生（naproxen）、酮洛芬（ketoprofen）以及尼美舒利（nimesulide））、阿司匹林和相關的水楊酸鹽（例如水楊酸膽鹼、水楊酸鎂和水楊酸鈉）、對乙醯胺基酚/醋氨酚、安乃近、萘丁美酮（nabumetone）、安替比林以及奎寧。
適合的抗焦慮劑包括但不限於苯二氮平類藥物（例如阿普唑侖（alprazolam）、溴西潘（bromazepam）、利眠寧（chlordiazepoxide）、氯硝西泮（clonazepam）、氯氮卓（clorazepate）、地西泮（diazepam）、氟西泮（flurazepam）、蘿拉西泮（lorazepam）、奧沙西泮（oxazepam）、替馬西泮（temazepam）、三唑侖（triazolam）和托非索泮（tofisopam））、5-羥色胺能抗抑鬱藥（例如選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑、三環抗抑鬱藥和單胺氧化酶抑制劑）、梅比卡（mebicar）、afobazole、selank、布羅曼坦（bromantane）、3-羥基-6-甲基-2-乙基鹽酸吡啶（emoxypine）、阿紮哌隆（azapirones）、巴比妥酸鹽（barbiturates）、羥𠯤（hydroxyzine）、普瑞巴林（pregabalin）、伐力多（validol）以及β阻斷劑。
適合的抗精神病藥包括但不限於苯哌利多（benperidol）、溴哌利多（bromoperidol）、氟哌利多（droperidol）、氟哌啶醇（haloperidol）、莫哌隆（moperone）、匹泮哌隆（pipaperone）、替米哌隆（timiperone）、氟司必林（fluspirilene）、五氟利多（penfluridol）、匹莫齊特（pimozide）、乙醯丙𠯤（acepromazine）、氯丙嗪（chlorpromazine）、氰美馬𠯤（cyamemazine）、dizyrazine、氟奮乃靜（fluphenazine）、左美丙𠯤（levomepromazine）、甲碸噠𠯤（mesoridazine）、培拉𠯤（perazine）、哌氰𠯤（pericyazine）、奮乃靜（perphenazine）、哌泊噻𠯤（pipotiazine）、丙氯拉𠯤（prochlorperazine）、普馬𠯤（promazine）、氯丙嗪（promethazine）、丙硫噴地（prothipendyl）、硫丙拉𠯤（thioproperazine）、甲硫達𠯤（thioridazine）、三氟拉𠯤（trifluoperazine）、三氟丙𠯤（triflupromazine）、氯普噻噸（chlorprothixene）、氯哌噻噸（clopenthixol）、氟哌噻噸（flupentixol）、替沃噻噸（tiotixene）、珠氯噻醇（zuclopenthixol）、氯噻平（clotiapine）、克塞平（loxapine）、丙硫噴地（prothipendyl）、卡匹帕明（carpipramine）、氯卡帕明（clocapramine）、嗎啉吲酮（molindone）、莫沙帕明（mosapramine）、舒必利（sulpiride）、維拉必利（veralipride）、胺磺必利（amisulpride）、阿莫沙平（amoxapine）、阿立哌唑（aripiprazole）、阿塞那平（asenapine）、氯氮平（clozapine）、布南色林（blonanserin）、伊潘立酮（iloperidone）、魯拉西酮（lurasidone）、美哌隆（melperone）、奈莫必利（nemonapride）、奧氮平（olanzaprine）、帕潘立酮（paliperidone）、哌羅匹隆（perospirone）、奎硫平（quetiapine）、瑞莫必利（remoxipride）、利培酮（risperidone）、舍吲哚（sertindole）、曲米帕明（trimipramine）、齊拉西酮（ziprasidone）、佐替平（zotepine）、alstonie、百分普那（befeprunox）、比託派汀（bitopertin）、依匹唑派（brexpiprazole）、大麻二酚（cannabidiol）、卡利拉𠯤（cariprazine）、匹莫范色林（pimavanserin）、pomaglumetad methionil、戊卡色林（vabicaserin）、呫諾美林（xanomeline）以及奇洛那平（and zicronapine）平。
適合的鎮痛藥包括但不限於對乙醯胺基酚/醋氨酚、非甾體類抗炎藥（例如伊布洛芬、萘普生、酮洛芬以及尼美舒利）、COX-2抑制劑（例如羅非考昔(rofecoxib）、塞來考昔（celecoxib）、和艾托考昔（etoricoxib））、類鴉片物質（例如嗎啡、可待因（codeine）、羥考酮（oxycodone）、氫可酮（hydrocodone）、雙氫嗎啡（dihydromorphine）、哌替啶（pethidine）、丁丙諾啡）（buprenorphine））、曲馬朵（tramadol）、去甲腎上腺素（norepinephrine）、flupiretine（flupiretine）、奈福泮（nefopam）、奧芬那君（orphenadrine）、普瑞巴林（pregabalin）、加巴噴丁（gabapentin）、環苯紮林（cyclobenzaprine）、東莨菪鹼（scopolamine）、美沙酮（methadone）、凱托米酮（ketobemidone）、哌腈米特（piritramide）和阿司匹林以及相關的水楊酸鹽（例如水楊酸膽鹼、水楊酸鎂和水楊酸鈉）。
適合的鎮痙藥包括但不限於美貝維林（mebeverine）、罌粟鹼（papverine）、環苯紮林（cyclobenzaprine）、卡立普多（carisoprodol）、奧芬那君（orphenadrine）、替紮尼定（tizanidine）、美他沙酮（metaxalone）、美索巴莫（methodcarbamol）、氯唑沙宗（chlorzoxazone）、巴氯芬（baclofen）以及丹曲林（dantrolene）。
適合的抗炎藥包括但不限於喋呤、非甾體類抗炎藥（例如伊布洛芬、萘普生、酮洛芬以及尼美舒利）、COX-2抑制劑（例如羅非考昔、塞來考昔和艾托考昔）以及免疫選擇性抗炎衍生物（例如下頜下腺肽-T及其衍生物）。
適合的抗組胺藥包括但不限於H1-受體拮抗劑（例如阿伐斯汀（ acrivastine）、氮卓斯汀（azelastine）、比拉斯汀（bilastine）、溴苯那敏（brompheniramine）、布克力𠯤（buclizine）、溴苯醇胺（bromodiphenhydramine）、卡比沙明（carbinoxamine）、西替利𠯤（cetirizine）、氯丙嗪（chlorpromazine）、賽克利𠯤（cyclizine）、氯苯那敏（chlorpheniramine）、克立馬丁（clemastine）、賽庚啶（cyproheptadine）、地洛他定（desloratadine）、右溴苯那敏（dexbromapheniramine）、右氯苯那敏（dexchlorpheniramine）、茶苯海明（dimenhydrinate）、二甲茚定（dimetindene）、苯海拉明（diphenhydramine）、抗敏安（doxylamine）、依巴斯汀（ebasine）、恩布拉敏（embramine）、非索非那定（fexofenadine）、羥𠯤（hydroxyzine）、左旋西替利𠯤（levocetirzine）、氯雷他定（loratadine）、美克洛𠯤（meclozine）、米氮平（mirtazapine）、奧洛他定（olopatadine）、奧芬那君（orphenadrine）、苯茚胺（phenindamine）、非尼拉敏（pheniramine）、苯托沙敏（phenyltoloxamine）、氯丙嗪（promethazine）、吡拉明（pyrilamine）、喹硫平（quetiapine）、盧帕他定（rupatadine）、曲吡那敏（tripelennamine）和曲普利啶（triprolidine））；H2-受體拮抗劑（例如西咪替丁（cimetidine）、法莫替丁（famotidine）、拉呋替丁（lafutidine）、尼紮替丁（nizatidine）、雷尼替丁（rafitidine）和羅沙替丁（roxatidine））；曲托喹啉（tritoqualine）；兒茶素；色甘酸鹽；奈多羅米（nedocromil）以及β2-腎上腺素能激動劑。
適合的抗感染藥包括但不限於抗阿米巴藥（amebicides）（例如硝唑尼特（nitazoxanide）、巴龍黴素（paromomycin）、甲硝唑（metronidazole）、替硝唑（tinidazole）、氯喹（chloroquine）、米替福新（miltefosine）、兩性黴素b（amphotericin b）和雙碘喹啉(iodoquinol)）；胺基糖苷類（例如巴龍黴素（paromomycin）、妥布黴素（tobramycin）、慶大黴素（gentamicin）、阿米卡星（amikacin）、卡那黴素（kanamycin）和新黴素(neomycin)）；驅腸蟲劑（例如噻嘧啶（pyrantel）、甲苯噠唑（mebendazole）、伊佛黴素（ivermectin）、吡喹酮（praziquantel）、阿苯噠唑（abendazole）、噻苯噠唑（thiabendazole）、奧沙尼喹）（oxamniquine））；抗真菌藥（例如唑類抗真菌藥（例如依曲康唑（itraconazole）、氟康唑（fluconazole）、泊沙康唑（posaconazole）、酮康唑（ketoconazole）、克黴唑（clotrimazole）、咪康唑（miconazole）、和伏立康唑（voriconazole））、棘白菌素類（例如卡泊芬淨（caspofungin）、阿尼芬淨（anidulafungin）、和米卡芬淨（micafungin)、）、灰（griseofulvin）、特比萘芬（terbinafine）、氟胞嘧啶（flucytosine）、以及多烯類（例如制真菌素和兩性黴素b））；抗瘧藥（例如乙胺嘧啶/磺胺多辛（pyrimethamine/sulfadoxine）、蒿甲醚/苯芴醇（artemether/lumefantrine）、阿托伐醌/氯胍（atovaquone/proquanil）、奎寧（quinine）、羥氯喹（hydroxychloroquine）、甲氟喹（mefloquine）、氯喹（chloroquine）、多西環素（doxycycline）、乙胺嘧啶）（pyrimethamine）、和鹵泛曲林（and halofantrine)）；抗癆劑（例如胺基水楊酸鹽（例如胺基水楊酸）、異菸肼/利福平（isoniazid/rifampin）、異菸肼/吡𠯤醯胺/利福平（isoniazid/pyrazinamide/rifampin）、貝達喹啉（bedaquiline）、異菸肼（isoniazid）、乙胺丁醇（ethambutol）、利福平（rifampin）、利福布汀（rifabutin）、利福噴汀（rifapentine）、卷麯黴素（capreomycin）和環絲胺酸（cycloserine））；抗病毒藥（例如金剛烷胺（amantadine）、金剛烷乙胺（rimantadine）、阿巴卡韋/拉米夫定（abacavir/lamivudine）、恩曲他濱/替諾福韋（emtricitabine/tenofovir）、考比泰特/埃替格韋/恩曲他濱/替諾福韋（cobicistat/elvitegravir/emtricitabine/tenofovir）、依法韋侖/恩曲他濱/替諾福韋（efavirenz/emtricitabine/tenofovir）、阿巴卡韋/拉米夫定/齊多夫定（avacavir/lamivudine/zidovudine）、拉米夫定/齊多夫定（lamivudine/zidovudine）、恩曲他濱/替諾福韋（emtricitabine/tenofovir）、恩曲他濱/羅匹那韋/利托那韋/替諾福韋（emtricitabine/opinavir/ritonavir/tenofovir）、干擾素α2v/利巴韋林（interferon alfa-2v/ribavirin）、聚乙二醇干擾素α-2b（peginterferon alfa-2b）、馬拉韋羅（maraviroc）、雷特格韋（raltegravir）、德羅格韋（dolutegravir）、恩夫韋地（enfuvirtide）、膦甲酸（foscarnet）、福米韋生（fomivirsen）、奧司他韋（oseltamivir）、紮那米韋（zanamivir）、奈韋拉平（nevirapine）、依法韋侖（efavirenz）、依曲韋林（etravirine）、利匹韋林（rilpivirine）、地拉韋啶（delaviridine）、奈韋拉平（nevirapine）、恩替卡韋（entecavir）、拉米夫定（lamivudine）、阿德福韋（adefovir）、索非布韋（sofosbuvir）、地達諾新（didanosine）、替諾福韋（tenofovir）、avacivr、齊多夫定（zidovudine）、司他夫定（stavudine）、恩曲他濱（emtricitabine）、紮西他濱（xalcitabine）、替比夫定（telbivudine）、西米普韋（simeprevir）、波西普韋（boceprevir）、特拉匹韋（telaprevir）、洛匹那韋/利托那韋（lopinavir/ritonavir）、弗沙那韋（fosamprenvir）、瑞納韋（dranuavir）、利托那韋（ritonavir）、替拉那韋（tipranavir）、阿紮那韋（atazanavir）、奈非那韋（nelfinavir）、安瑞那韋（amprenavir）、茚地那韋（indinavir）、沙喹那韋（sawuinavir）、利巴韋林（ribavirin）、伐昔洛韋（valcyclovir）、阿昔洛韋（acyclovir）、泛昔洛韋（famciclovir）和更昔洛韋（ganciclovir））；碳青黴烯類（例如多利培南（doripenem）、美羅培南（meropenem）、厄他培南（ertapenem）、和西司他丁/亞胺培南（cilastatin/imipenem)）；頭孢菌素類（例如頭孢羥胺苄（cefadroxil）、頭孢拉啶（cephradine）、頭孢唑啉（cefazolin）、頭孢胺苄（cephalexin）、頭孢吡肟（cefepime）、頭孢洛林（ceflaroline）、氯碳頭孢（loracarbef）、頭孢替坦（cefotetan）、頭孢呋辛（cefuroxime）、頭孢羅齊（cefprozil）、氯碳頭孢（loracarbef）、頭孢西丁（cefoxitin）、頭孢克洛（cefaclor）、頭孢布烯（ceftibuten）、頭孢曲松（ceftriaxone）、頭孢噻肟（cefotaxime）、頭孢泊肟（cefpodoxime）、頭孢地尼（cefdinir）、頭孢克肟（cefixime）、頭孢托侖（cefditoren）、頭孢唑肟（cefizoxime）和頭孢他啶（ceftazidime））；糖肽抗生素（例如萬古黴素（vancomycin）、達巴萬星（dalbavancin）、奧利萬星（oritavancin）和替拉萬星（telvancin））；甘胺環素類（例如替加環素）；抗麻風藥（例如氯法齊明和薩力多胺）；潔黴素及其衍生物（例如克林黴素（clindamycin）和潔黴素（lincomycin））；大環內酯類及其衍生物（例如泰利黴素（telithromycin）、非達黴素（fidaxomicin）、紅黴素（erthromycin）、阿奇黴素（azithromycin）、克拉黴素（clarithromycin）、地紅黴素（dirithromycin）、和醋竹桃黴素（troleandomycin)）；利奈唑胺（linezolid）；磺胺甲噁唑/甲氧苄胺嘧啶（sulfamethoxazole/trimethoprim）；利福昔明（rifaximin）；氯黴素（chloramphenicol）；磷黴素（fosfomycin）；甲硝唑（metronidazole）；胺曲南（aztreonam）；桿菌肽（bacitracin）；青黴素類（阿莫西林(amoxicillin）、胺比西林（ampicillin）、巴胺西林（bacampicillin）、羧苄西林（carbenicillin）、哌拉西林（piperacillin）、替凱西林（ticarcillin）、阿莫西林/克拉維酸（amoxicillin/clavulanate）、胺比西林/舒巴坦（ampicillin/sulbactam）、哌拉西林/三唑巴坦（piperacillin/tazobactam）、克拉維酸/替凱西林（clavulanate/ticarcillin）、青黴素、普魯卡因青黴素（procaine penicillin）、苯唑西林（oxaxillin）、雙氯西林（dicloxacillin）和萘夫西林（nafcillin））；喹諾酮類（例如洛美沙星（lomefloxacin）、諾氟沙星（norfloxacin）、氧氟沙星（ofloxacin）、qatifloxacin、莫西沙星（moxifloxacin）、環丙沙星（ciprofloxacin）、左氧氟沙星（levofloxacin）、吉米沙星（gemifloxacin）、莫西沙星（moxifloxacin）、西諾沙星（cinoxacin）、萘啶酸（nalidixic acid）、依諾沙星（enoxacin）、格雷沙星（grepafloxacin）、加替沙星（gatifloxacin）、曲伐沙星和司帕沙星（sparfloxacin）；磺醯胺類（例如磺胺甲噁唑/甲氧苄胺嘧啶（sulfamethoxazole/trimethoprim）、柳氮磺胺吡啶（sulfasalazine）和磺胺異噁唑（sulfasoxazole））；四環素類（例如多西環素（doxycycline）、地美環素（demeclocycline）、米諾環素（minocycline）、多西環素/水楊酸、多西環素/ω-3多不飽和脂肪酸和四環素）以及尿道抗感染藥（例如呋喃咀啶（nitrofurantoin）、烏洛托品（methenamine）、磷黴素（fosfomycin）、西諾沙星（cinoxacin）、萘啶酸（nalidixic acid）、甲氧苄胺嘧啶（trimethoprim）和亞甲基藍）。
適合的化學藥物包括但不限於紫杉醇、貝倫妥單抗維多汀（brentuximab vedotin）、多柔比星（doxorubicin）、5-FU（氟尿嘧啶）、依維莫司（everolimus）、培美曲塞（pemetrexed）、美法侖（melphalan）、帕米膦酸鈉（pamidronate）、阿那曲唑（anastrozole）、依西美坦（exemestane）、奈拉濱（nelarabine）、奧法木單抗（ofatumumab）、貝伐單抗（bevacizumab）、貝林司他（belinostat）、托西莫單抗（tositumomab）、卡莫司汀（carmustine）、博來黴素（bleomycin）、博舒替尼（bosutinib）、白消安（busulfan）、阿侖單抗（alemtuzumab）、伊立替康（irinotecan）、凡德他尼（vandetanib）、比卡魯胺（bicalutamide）、洛莫司汀（lomustine）、柔紅黴素（daunorubicin）、氯法拉濱（clofarabine）、卡博替尼（cabozantinib）、更生黴素（dactinomycin）、雷莫蘆單抗（ramucirumab）、阿糖孢苷（cytarabine）、癌得星（cytoxan）、環磷醯胺（cyclophosphamide）、地西他濱（decitabine）、地塞米松（dexamethasone）、多西他賽（docetaxel）、羥基脲（hydroxyurea）、胺烯咪胺（decarbazine）、亮丙瑞林（leuprolide）、表柔比星（epirubicin）、奧沙利鉑（oxaliplatin）、天冬醯胺酶（asparaginase）、雌莫司汀（estramustine）、西妥昔單抗（cetuximab）、維莫德吉（vismodegib）、天冬醯胺酶菊歐氏桿菌（asparginase Erwinia chrysanthemi）、胺磷汀（amifostine）、依託泊苷（etoposide）、氟他胺（flutamide）、托瑞米芬（toremifene）、氟維司群（fulvestrant）、來曲唑（letrozole）、地加瑞克（degarelix）、普拉曲沙（pralatrexate）、胺甲喋呤（methotrexate）、氟尿苷（floxuridine）、奧比妥珠單抗（obinutuzumab）、吉西他濱（gemcitabine）、阿法替尼（afatinib）、伊馬替尼甲磺酸（imatinib mesylatem）、卡莫司汀（carmustine）、艾瑞布林（eribulin）、曲妥珠單抗（trastuzumab）、六甲蜜胺（altretamine）、拓撲替康（topotecan）、帕納替尼（ponatinib）、伊達比星（idarubicin）、異環磷醯胺（ifosfamide）、依魯替尼（ibrutinib）、阿西替尼（axitinib）、干擾素α-2a（interferon alfa-2a）、吉非替尼（gefitinib）、羅米地辛（romidepsin）、伊沙匹隆（ixabepilone）、盧梭利替尼（ruxolitinib）、卡巴他塞（cabazitaxel）、阿多-曲妥珠單抗恩他新（ado-trastuzumab emtansine）、卡非佐米（carfilzomib）、苯丁酸氮芥（chlorambucil）、沙格司亭（sargramostim）、克拉屈濱（cladribine）、米托坦（mitotane）、長春新鹼（vincristine）、丙卡巴肼（procarbazine）、甲地孕酮（megestrol）、曲美替尼（trametinib）、美司鈉（mesna）、鍶-89氯化物（strontium-89 chloride）、氮芥（mechlorethamine）、絲裂黴素（mitomycin）、白消安（busulfan）、吉妥珠單抗奧佐米星（gemtuzumab ozogamicin）、長春瑞濱（vinorelbine）、非格司亭（filgrastim）、乙二醇化非格司亭（pegfilgrastim）、索拉非尼（sorafenib）、尼魯米特（nilutamide）、噴司他丁（pentostatin）、它莫西芬（tamoxifen）、米托蒽醌（mitoxantrone）、培門冬酶（pegaspargase）、地尼介白素-毒素連接物（denileukin diftitox）、阿利維A酸（alitretinoin）、卡鉑（carboplatin）、帕妥珠單抗（pertuzumab）、順鉑（cisplatin）、泊馬度胺（pomalidomide）、強的松（prednisone）、阿地介白素（aldesleukin）、巰嘌呤（mercaptopurine）、唑來磷酸（zoledronic acid）、來那度胺（lenalidomide）、利妥昔單抗（rituximab）、奧曲肽（octretide）、達沙替尼（dasatinib）、瑞格非尼（regorafenib）、組胺瑞林（histrelin）、舒尼替尼（sunitinib）、司妥昔單抗（siltuximab）、奧馬他辛（omacetaxine）、硫鳥嘌呤（硫鳥嘌呤）（thioguanine (tioguanine)）、達拉菲尼（dabrafenib）、埃羅替尼（erlotinib）、蓓薩羅丁（bexarotene）、替莫唑胺（temozolomide）、噻替派（thiotepa）、薩力多胺（thalidomide）、BCG（BCG）、西羅莫司（temsirolimus）、鹽酸苯達莫司汀（bendamustine hydrochloride）、曲普瑞林（triptorelin）、三氧化二砷（aresnic trioxide）、拉帕替尼（lapatinib）、戊柔比星（valrubicin）、帕尼單抗（panitumumab）、長春花鹼（vinblastine）、硼替佐米（bortezomib）、維A酸（tretinoin）、阿紮胞苷（azacitidine）、帕唑帕尼（pazopanib）、替尼泊苷（teniposide）、亞葉酸（leucovorin）、克裡唑蒂尼（crizotinib）、卡培他濱（capecitabine）、恩雜魯胺（enzalutamide）、伊匹單抗（ipilimumab）、戈舍瑞林（goserelin）、伏立諾他（vorinostat）、艾代拉利司（idelalisib）、色瑞替尼（ceritinib）、阿比特龍（abiraterone）、埃博黴素（epothilone）、他氟泊苷（tafluposide）、硫唑嘌呤（azathioprine）、去氧氟尿苷（doxifluridine）、長春地辛（vindesine）以及全反式維生素A酸 。CDKL5 融合蛋白和助劑的有效量
藥物配製物可以含有治療有效量的CDKL5融合蛋白，和視情況治療有效量的助劑。精確的劑量將依據受試者的年齡、體型、性別和病症，待治療的障礙的性質和嚴重程度等而變化；因此，精確的有效量不能提前指定並且將由護理人員確定。然而，CDKL5融合蛋白的治療有效量通常可以在從約1 µg/kg至約10 mg/kg的範圍內。在另外的實施方式中，CDKL5融合蛋白的治療有效量可以在從約1 ng/g體重至約0.1 mg/g體重的範圍內。CDKL5融合蛋白的治療有效量可以在從約1 pg至約10 g的範圍內。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白或含有此CDKL5融合蛋白的藥物組成物的治療有效量可以在約10 nL至約10 mL的範圍內。在其他實施方式中，CDKL5融合蛋白或藥物組成物的治療有效量為從約10 nL至約1 μL。
在一些實施方式中，治療有效量的範圍也可以在從約20至約50 ng/注射，例如針對腦室內注射而言。在其他實施方式中，治療有效量可以是約10微升/注射，諸如針對腦室內注射而言。在另外的實施方式中，治療有效量可以是約5 ng/µL，諸如針對腦室內注射而言。在又一另外的實施方式中，針對腦室內注射而言，治療有效量可以是約1.9 µg/kg體重。在其他實施方式中，對於腦室內注射，治療有效量可以為從約1至3 μg/kg體重。
在其他實施方式中，治療有效量可以是從約1至約2微克/注射，諸如針對全身性給予的注射而言。在一些實施方式中，治療有效量可以是約5 ng/µL，諸如針對全身性注射而言。對於一些實施方式，治療有效量可以是從約1至約1.5 µg/5 g體重。
在一個或多個實施方式中，全身給予係靜脈內給予。靜脈內配製物可以藉由直接靜脈內注射（靜脈內推注）給予，或者可以藉由添加到適當的輸注溶液（例如0.9%氯化鈉注射液或其他相容的輸注溶液）中輸注來給予。最常使用的IV輸注系統由填充有IV液體的袋子、滴注器、用於控制流量的輥夾（可變阻力控制器）和與IV導管連接的管組成。該系統中升高的IV袋充當壓力源，輥夾充當用戶控制的阻力器，並且IV導管充當固定的阻力器。
最常見的是，IV流體流動的速率由觀察到液體通過滴注器滴落的速率來確定。腸胃外溶液的重力輸注藉由如下方式來實現：將溶液容器懸掛在患者上方幾英尺，並且經由包括滴注器和柔性輸送管的一次性靜脈內給藥裝置將溶液容器連接到穿刺部位。
在其中除CDKL5融合蛋白之外藥物配製物中還含有輔助活性劑的實施方式中，輔助活性劑的治療有效量將根據輔助活性劑而變化。在一些實施方式中，輔助活性劑的有效量在從0.001微克至約1毫克的範圍內。在其他實施方式中，輔助活性劑的有效量在從約0.01 IU至約10000 IU的範圍內。在另外的實施方式中，輔助活性劑的有效量在從0.001 mL至約1 mL的範圍內。在又其他實施方式中，輔助活性劑的有效量在總藥物配製物的從約1% w/w至約50% w/w的範圍內。在另外的實施方式中，輔助活性劑的有效量在總藥物配製物的從約1% v/v至約50% v/v的範圍內。在再其他實施方式中，輔助活性劑的有效量在總藥物配製物的從約1% w/v至約50% w/v的範圍內。劑型
在一些實施方式中，在此所述的藥物配製物可以呈劑型形式。劑型可以適於藉由任何適當路徑的給予。適當路徑包括但不限於口服（包括頰內和舌下）、直腸、硬膜外、顱內、眼內、吸入、鼻內、局部（包括頰內、舌下或經皮）、陰道、尿道內、腸胃外、顱內、皮下、肌內、靜脈內、腹膜內、皮內、骨內、心內、關節內、海綿竇內（intracavernous）、鞘內、玻璃體內（intravireal）、腦內和腦室內以及皮內。此類配製物可以藉由本領域已知的任何方法來製備。
適於口服給予的劑型可以是離散的劑量單位諸如膠囊、藥丸或片劑、粉劑或顆粒、呈水性或非水性液體的溶液或懸浮液；可食的泡沫劑或氣泡體（whips），或呈水包油液體乳液或油包水液體乳液形式。在一些實施方式中，適於口服給予的藥物配製物還包含調味、防腐、著色或有助於分散藥物配製物的一種或多種試劑。被製備用於口服給予的劑型還可以呈可以作為泡沫、噴霧或液體溶液來遞送的液體溶液形式。在一些實施方式中，口服劑型可以含有約1 ng至1000 g的藥物配製物，該藥物配製物含有治療有效量或其適當部分的CDKL5融合蛋白或含有CDKL5融合蛋白的組成物。可以向對其有需要的受試者給予口服劑型。
在適當的情況下，在此所述的劑型可以進行微膠囊化。還可以製備劑型來延長或持續任何成分的釋放。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白係釋放得以延緩的成分。在其他實施方式中，視情況包含的輔助成分的釋放被延緩。用於延緩成分的釋放的適合方法包括但不限於用聚合物、蠟、凝膠等將成分包衣或包埋在材料中。緩釋劑量配製物可以如標準參考文獻諸如以下各項中所述來製備：“Pharmaceutical dosage form tablets [藥物劑型片劑]”，Liberman等人（紐約，馬塞爾•德克爾公司（Marcel Dekker, Inc.），1989）；“Remington - The science and practice of pharmacy[雷明頓-藥物科學與實踐]”，第20版，馬里蘭州巴爾的摩市利平科特威廉姆斯和威爾金斯出版社（Lippincott Williams & Wilkins），2000；以及“Pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems[藥物劑型和藥物遞送系統]”，第6版，Ansel等人（賓夕法尼亞州米提亞（Media, PA）：威廉姆斯和威爾金斯出版社（Williams and Wilkins），1995）。該等參考文獻提供了關於用於製備片劑和膠囊以及片劑和藥丸、膠囊和顆粒的緩釋劑型的賦形劑、材料、設備和方法的資訊。緩釋可以是在從約一小時至約3小時或更長的任一時候。
適合的包衣材料的實例包括但不限於纖維素聚合物，諸如鄰苯二甲酸乙酸纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素以及乙酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素；聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯、丙烯酸聚合物和共聚物，以及以商品名EUDRAGIT®（羅姆藥廠（Rohm Pharma），魏特爾斯塔特（Westerstadt），德國）商購獲得的甲基丙酸烯樹脂、玉米素、紫膠以及多糖類。
在存在或不存在水不溶性/水溶性非聚合物賦形劑的情況下，可以用不同比率的水溶性聚合物、水不溶性聚合物和/或pH依賴性聚合物形成包衣以產生所希望的釋放曲線。包衣在劑型（基質或簡單的）上進行，該劑型包括但不限於片劑（用或不用包衣珠壓縮）、膠囊（具有或不具有包衣珠）、珠劑、粒子組成物，被配製為但不限於懸浮液形式或配製為噴撒劑型的“原樣成分”。
適於局部給予的劑型可以配製為軟膏、乳膏、懸浮液、洗劑、粉劑、溶液、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣霧劑或油劑。在一些實施方式中，對於眼睛或其他外部組織，例如口或皮膚的治療，藥物配製物作為局部軟膏或乳膏來施用。當配製在軟膏中時，CDKL5融合蛋白、輔助活性成分和/或其藥學上可接受的鹽可以與石蠟或水可混溶性軟膏基質一起配製。在其他實施方式中，活性成分可以與水包油乳膏基質或油包水基質一起配製在乳膏中。適於口中的局部給予的劑型包括錠劑、軟錠劑以及漱口劑。
適於鼻給予或吸入給予的劑型包括氣霧劑、溶液、混懸滴劑、凝膠或乾燥粉末。在一些實施方式中，適於吸入的劑型中的CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、輔助活性成分和/或其藥學上可接受的鹽呈減小了粒徑的形式，該形式係藉由微粉化獲得或可獲得的。在一些實施方式中，大小減小（例如微粉化）的化合物或其鹽或溶劑化物的粒徑係由如藉由本領域已知的適當方法所測量的約0.5至約10微米的D50值限定的。適於吸入給予的劑型還包括細粒粉塵或薄霧。其中載體或賦形劑係用於作為鼻噴霧劑或滴劑給予的液體的適合劑型包括活性成分的水性或油性溶液/懸浮液，其可以藉由不同類型的計量加壓噴霧器、霧化器或吹入器產生。
在一些實施方式中，劑型係適於吸入給予的氣霧劑配製物。在該等實施方式中的一些中，氣霧劑配製物含有CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物和/或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的水性或非水性溶劑的溶液或細懸浮液。氣霧劑配製物可以滅菌形式的單劑量或多劑量提供於密封容器中。對於該等實施方式中的一些，密封容器係單劑量或多劑量的鼻或配備有計量閥門（例如計量吸入器）的氣霧劑分配器，一旦容器中的內容物被耗盡即可將它丟棄。
在氣霧劑劑型包含在氣霧劑分配器中的情況下，分配器含有處於壓力下的適合推進劑，諸如壓縮空氣、二氧化碳或有機推進劑（包括但不限於氫氟烴）。其他實施方式中的氣霧劑配製物劑型包含在泵霧化器中。加壓的氣霧劑配製物也可以含有CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物或其藥物配製物的溶液或懸浮液。在另外的實施方式中，氣霧劑配製物還含有被摻入以改善配製物的例如穩定性和/或味覺和/或微粒子質量特徵（量和/或分佈圖）的共溶劑和/或改性劑。氣霧劑配製物的給予可以是每日一次或每日數次，例如每日2次、3次、4次或8次，其中每次遞送1個、2個或3個劑量。
對於適合和/或適於吸入給予的一些劑型，藥物配製物係可吸入的乾燥粉末配製物。除CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、輔助活性成分和/或其藥學上可接受的鹽之外，此類劑型可以含有粉末基質諸如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇和/或澱粉。在該等實施方式的一些中，CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物、輔助活性成分和/或其藥學上可接受的鹽係呈減小了粒徑的形式。在另外的實施方式中，性能改性劑係諸如L-亮胺酸或另一種胺基酸、八醋酸纖維二糖酯和/或硬脂酸的金屬鹽諸如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣。
在一些實施方式中，氣霧劑配製物被安排使得每次計量的氣霧劑劑量含有預定量的活性成分，諸如在此所述的CDKL5融合蛋白或含有CDKL5融合蛋白的組成物中的一種或多種。
適於陰道給予的劑型可以作為陰道栓劑、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧配製物提供。適於直腸給予的劑型包括栓劑或灌腸劑。
適於腸胃外給予和/或適於任何注射類型（例如靜脈內、腹膜內、皮下、肌內、皮內、骨內、硬膜外、心內、關節內、海綿竇內、鞘內、玻璃體內、腦內和腦室內）的劑型可以包括水性和/或非水性無菌注射溶液，該等溶液可以含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、使該組成物與受試者的血液等滲的溶質，以及水性和非水性無菌懸浮液，該等懸浮液可以包括懸浮劑和增稠劑。適於腸胃外給予的劑型可以提供於單一單位劑量或多單位劑量容器中，包括但不限於密封的安瓿或小瓶。可以將該等劑量凍乾並且重懸於無菌載體中以在給予之前重構劑量。在一些實施方式中，可以由無菌粉劑、顆粒和片劑製備臨時的注射溶液和懸浮液。
適於眼部給予的劑型可以包括水性和/或非水性無菌溶液，該等溶液可以視情況適於注射，並且該等溶液可以視情況含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、使該組成物與受試者的眼部或眼部中含有的或眼部周圍的流體等滲的溶質，以及水性和非水性無菌懸浮液，該等懸浮液可以包括懸浮劑和增稠劑。
對於一些實施方式，劑型含有預定量的CDKL5融合蛋白或含有CDKL5融合蛋白的組成物/單位劑量。在一個實施方式中，CDKL5融合蛋白或含有CDKL5融合蛋白的組成物的預定量係CDKL5融合蛋白或含有CDKL5融合蛋白的組成物的用於治療或預防CDKL5缺陷、雷特氏症候群和/或其症狀的治療有效量。在其它實施方式中，CDKL5融合蛋白或含有CDKL5融合蛋白的組成物的預定量可以是活性成分的治療有效量的適當部分。因此，此類單位劑量可以每日給予一次或多於一次。此類藥物配製物可以藉由本領域熟知的任何方法來製備。 使用 TAT κ -CDKL5 組成物和配製物來治療神經障礙
在此所述的CDKL5融合蛋白和其藥物配製物可以用於治療和/或預防受試者的疾病、障礙、綜合症或其症狀。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白和其藥物配製物可以用於治療和/或預防CDKL5缺陷、雷特氏症候群、雷特氏症候群的變體和/或其症狀。在一些實施方式中，受試者患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群、雷特氏症候群的變體和/或其症狀。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白及其藥物配製物可以用於增加患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群、雷特氏症候群的變體和/或其症狀的患者中視覺皮層的神經活動。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白及其藥物配製物可以用於增加患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群、雷特氏症候群的變體和/或其症狀的患者的腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白及其藥物配製物可以用於減少患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群、雷特氏症候群的變體和/或其症狀的患者的腦中神經元細胞凋亡。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白及其藥物配製物可以用於改善患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群、雷特氏症候群的變體和/或其症狀的患者的運動功能。
一定量的在此所述的CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物可以每天、每週、每月或每年向對其有需要的受試者給予一次或多次。在一些實施方式中，給予的量可以是CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物的治療有效量。例如，CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物可以日劑量來給予。此量可以單劑量/天給出。在其他實施方式中，日劑量可以是經多劑量/天來給予，其中各劑量含有待給予的總日劑量的一部分（亞劑量）。在一些實施方式中，每天遞送的劑量的量係2個、3個、4個、5個或6個。在另外的實施方式中，化合物、配製物或其鹽每週給予一次或多次，諸如每週1次、2次、3次、4次、5次或6次。在其他實施方式中，CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物可以每月給予一次或多次，諸如每月1次至5次。在再另外的實施方式中，CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物可以每年給予一次或多次，諸如每年1次至11次。
CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物可以藉由任何方便的路徑與第二試劑共同給予。第二試劑係單獨於CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物的化合物和/或配製物。第二試劑可以與CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物同時給予。第二試劑可以與CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物依序給予。第二試劑可以與CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物具有累加或協同效應。適合的第二試劑包括但不限於抑制必要的腫瘤蛋白質和基因的翻譯和轉錄的DNA、RNA、胺基酸、肽、多肽、抗體、適配體、核糖核酸酶、核糖核酸酶的指導序列、激素、免疫調節劑、解熱藥、抗焦慮劑、抗精神病藥、鎮痛藥、鎮痙藥、抗炎藥、抗組胺藥、抗感染藥、以及化療藥物。在一些實施方式中，第二試劑係DCA。
適合的激素包括但不限於胺基酸衍生的激素（例如，褪黑激素和甲狀腺素）、小肽激素和蛋白質激素（例如促甲狀腺激素釋放激素、抗利尿激素、類胰島素、生長激素、促黃體激素、促卵泡激素以及促甲狀腺激素）、類花生酸類（例如花生油酸、脂氧素和前列腺素）以及類固醇激素（例如雌二醇、睾酮、四氫睾酮皮質醇）。
適合的免疫調節劑包括但不限於喋呤、硫唑嘌呤、6-MP、環孢黴素、他克莫司、胺甲喋呤、介白素（例如IL-2、IL-7和IL-12）、細胞介素（例如干擾素（例如IFN-α 、 IFN-β 、 IFN-ε 、 IFN-κ 、 IFN-ω 和 IFN-γ ）、粒細胞集落刺激因子以及咪喹莫特）、趨化介素（例如CCL3、CCL26和CXCL7）、胞嘧啶磷酸鹽-鳥苷、寡去氧核苷酸、葡聚糖、抗體以及適配體）。
適合的解熱藥包括但不限於非甾體類抗炎藥（例如伊布洛芬、萘普生、酮洛芬以及尼美舒利）、阿司匹林和相關的水楊酸鹽（例如水楊酸膽鹼、水楊酸鎂和水楊酸鈉）、對乙醯胺基酚/醋氨酚、安乃近、萘丁美酮、安替比林以及奎寧。
適合的抗焦慮劑包括但不限於苯二氮平類藥物（例如阿普唑侖、溴西潘、利眠寧、氯硝西泮、氯氮卓、地西泮、氟西泮、蘿拉西泮、奧沙西泮、替馬西泮、三唑侖和托非索泮）、5-羥色胺能抗抑鬱藥（例如選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑、三環抗抑鬱藥和單胺氧化酶抑制劑）、梅比卡、afobazole、selank、布羅曼坦、3-羥基-6-甲基-2-乙基鹽酸吡啶、阿紮哌隆、巴比妥酸鹽、羥𠯤、普瑞巴林、伐力多以及β阻斷劑。
適合的抗精神病藥包括但不限於苯哌利多、溴哌利多、氟哌利多、氟哌啶醇、莫哌隆、匹泮哌隆、替米哌隆、氟司必林、五氟利多、匹莫齊特、乙醯丙𠯤、氯丙嗪、氰美馬𠯤、dizyrazine、氟奮乃靜、左美丙𠯤、甲碸噠𠯤、培拉𠯤、哌氰𠯤、奮乃靜、哌泊噻𠯤、丙氯拉𠯤、普馬𠯤、異丙𠯤、丙硫噴地、硫丙拉𠯤、甲硫達𠯤、三氟拉𠯤、三氟丙𠯤、氯普噻噸、氯哌噻噸、氟哌噻噸、替沃噻噸、珠氯噻醇、氯噻平、克塞平、丙硫噴地、卡匹帕明、氯卡帕明、嗎啉吲酮、莫沙帕明、舒必利、維拉必利、胺磺必利、阿莫沙平、阿立哌唑、阿塞那平、氯氮平、布南色林、伊潘立酮、魯拉西酮、美哌隆、奈莫必利、奧氮平、帕潘立酮、哌羅匹隆、奎硫平、瑞莫必利、利培酮、舍吲哚、曲米帕明、齊拉西酮、佐替平、alstonie、百分普那、比託派汀、依匹唑派、大麻二酚、卡利拉𠯤、匹莫范色林、pomaglumetad methionil、戊卡色林、呫諾美林以及奇洛那平。
適合的鎮痛藥包括但不限於對乙醯胺基酚/醋氨酚、非甾體類抗炎藥（例如伊布洛芬、萘普生、酮洛芬以及尼美舒利）、COX-2抑制劑（例如羅非考昔、塞來考昔和艾托考昔）、類鴉片物質（例如嗎啡、可待因、羥考酮、氫可酮、雙氫嗎啡、哌替啶、丁丙諾啡）、曲馬朵、去甲腎上腺素、flupiretine、奈福泮、奧芬那君、普瑞巴林、加巴噴丁、環苯紮林、東莨菪鹼、美沙酮、凱托米酮、哌腈米特和阿司匹林以及相關的水楊酸鹽（例如水楊酸膽鹼、水楊酸鎂和水楊酸鈉）。
適合的鎮痙藥包括但不限於美貝維林、罌粟鹼、環苯紮林、卡立普多、奧芬那君、替紮尼定、美他沙酮、美索巴莫、氯唑沙宗、巴氯芬、丹曲林、巴氯芬、替紮尼定以及丹曲林。
適合的抗炎藥包括但不限於喋呤、非甾體類抗炎藥（例如伊布洛芬、萘普生、酮洛芬以及尼美舒利）、COX-2抑制劑（例如羅非考昔、塞來考昔和艾托考昔）以及免疫選擇性抗炎衍生物（例如下頜下腺肽-T及其衍生物）。
適合的抗組胺藥包括但不限於H1 -受體拮抗劑（例如阿伐斯汀、氮卓斯汀、比拉斯汀、溴苯那敏、布克力𠯤、溴苯醇胺、卡比沙明、西替利𠯤、氯丙嗪、賽克利𠯤、氯苯那敏、克立馬丁、賽庚啶、地洛他定、右溴苯那敏、右氯苯那敏、茶苯海明、二甲茚定、苯海拉明、抗敏安、依巴斯汀、恩布拉敏、非索非那定、羥𠯤、左旋西替利𠯤、氯雷他定、美克洛𠯤、米氮平、奧洛他定、奧芬那君、苯茚胺、非尼拉敏、苯托沙敏、異丙𠯤、吡拉明、喹硫平、盧帕他定、曲吡那敏和曲普利啶）；H2 -受體拮抗劑（例如西咪替丁、法莫替丁、拉呋替丁、尼紮替丁、雷尼替丁和羅沙替丁）；曲托喹啉；兒茶素；色甘酸鹽；奈多羅米以及β2-腎上腺素能激動劑。
適合的抗感染藥包括但不限於抗阿米巴藥（例如硝唑尼特、巴龍黴素、甲硝唑、替硝唑、氯喹、米替福新、兩性黴素b和雙碘喹啉）；胺基糖苷類（例如巴龍黴素、妥布黴素、慶大黴素、阿米卡星、卡那黴素和新黴素）；驅腸蟲劑（例如噻嘧啶、甲苯噠唑、伊佛黴素、吡喹酮、阿苯噠唑、噻苯噠唑、奧沙尼喹）；抗真菌藥（例如唑類抗真菌藥（例如依曲康唑、氟康唑、泊沙康唑、酮康唑、克黴唑、咪康唑和伏立康唑）、棘白菌素類（例如卡泊芬淨、阿尼芬淨和米卡芬淨）、灰黃黴素、特比萘芬、氟胞嘧啶、以及多烯類（例如制真菌素和兩性黴素b））；抗瘧藥（例如乙胺嘧啶/磺胺多辛、蒿甲醚/苯芴醇、阿托伐醌/氯胍、奎寧、羥氯喹、甲氟喹、氯喹、多西環素、乙胺嘧啶和鹵泛曲林）；抗癆劑（例如胺基水楊酸鹽（例如胺基水楊酸）、異煙肼/利福平、異煙肼/吡𠯤醯胺/利福平、貝達喹啉、異煙肼、乙胺丁醇、利福平、利福布汀、利福噴汀、卷麯黴素和環絲胺酸）；抗病毒藥（例如金剛烷胺、金剛烷乙胺、阿巴卡韋/拉米夫定、恩曲他濱/替諾福韋、考比泰特/埃替格韋/恩曲他濱/替諾福韋、依法韋侖/恩曲他濱/替諾福韋、阿巴卡韋/拉米夫定/齊多夫定、拉米夫定/齊多夫定、恩曲他濱/替諾福韋、恩曲他濱/羅匹那韋/利托那韋/替諾福韋、干擾素α2v/利巴韋林、聚乙二醇干擾素α-2b、馬拉韋羅、雷特格韋、德羅格韋、恩夫韋地、膦甲酸、福米韋生、奧司他韋、紮那米韋、奈韋拉平、依法韋侖、依曲韋林、利匹韋林、地拉韋啶、奈韋拉平、恩替卡韋、拉米夫定、阿德福韋、索非布韋、地達諾新、替諾福韋、avacivr、齊多夫定、司他夫定、恩曲他濱、紮西他濱、替比夫定、西米普韋、波西普韋、特拉匹韋、洛匹那韋/利托那韋、弗沙那韋、瑞納韋、利托那韋、替拉那韋、阿紮那韋、奈非那韋、安瑞那韋、茚地那韋、沙喹那韋、利巴韋林、伐昔洛韋、阿昔洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋和纈更昔洛韋）；碳青黴烯類（例如多利培南、美羅培南、厄他培南和西司他丁/亞胺培南）；頭孢菌素類（例如頭孢羥胺苄、頭孢拉啶、頭孢唑啉、頭孢胺苄、頭孢吡肟、頭孢洛林、氯碳頭孢、頭孢替坦、頭孢呋辛、頭孢羅齊、氯碳頭孢、頭孢西丁、頭孢克洛、頭孢布烯、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢地尼、頭孢克肟、頭孢托侖、頭孢唑肟和頭孢他啶）；糖肽抗生素（例如萬古黴素、達巴萬星、奧利萬星和替拉萬星）；甘胺環素類（例如替加環素）；抗麻風藥（例如氯法齊明和薩力多胺）；潔黴素及其衍生物（例如克林黴素和潔黴素）；大環內酯類及其衍生物（例如泰利黴素、非達黴素、紅黴素、阿奇黴素、克拉黴素、地紅黴素和醋竹桃黴素）；利奈唑胺；磺胺甲噁唑/甲氧苄胺嘧啶；利福昔明；氯黴素；磷黴素；甲硝唑；胺曲南；桿菌肽；青黴素類（阿莫西林、胺比西林、巴胺西林、羧苄西林、哌拉西林、替凱西林、阿莫西林/克拉維酸、胺比西林/舒巴坦、哌拉西林/三唑巴坦、克拉維酸/替凱西林、青黴素、普魯卡因青黴素、苯唑西林、雙氯西林和萘夫西林）；喹諾酮類（例如洛美沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、qatifloxacin、莫西沙星、環丙沙星、左氧氟沙星、吉米沙星、莫西沙星、西諾沙星、萘啶酸、依諾沙星、格雷沙星、加替沙星、曲伐沙星和司帕沙星）；磺醯胺類（例如磺胺甲噁唑/甲氧苄胺嘧啶、柳氮磺胺吡啶和磺胺異噁唑）；四環素類（例如多西環素、地美環素、米諾環素、多西環素/水楊酸、多西環素/ω-3多不飽和脂肪酸和四環素）以及尿道抗感染藥（例如呋喃咀啶、烏洛托品、磷黴素、西諾沙星、萘啶酸、甲氧苄胺嘧啶和亞甲基藍）。
適合的化學藥物包括但不限於紫杉醇、貝倫妥單抗維多汀、多柔比星、5-FU（氟尿嘧啶）、依維莫司、培美曲塞、美法侖、帕米膦酸鈉、阿那曲唑、依西美坦、奈拉濱、奧法木單抗、貝伐單抗、貝林司他、托西莫單抗、卡莫司汀、博來黴素、博舒替尼、白消安、阿侖單抗、伊立替康、凡德他尼、比卡魯胺、洛莫司汀、柔紅黴素、氯法拉濱、卡博替尼、更生黴素、雷莫蘆單抗、阿糖孢苷、癌得星、環磷醯胺、地西他濱、地塞米松、多西他賽、羥基脲、胺烯咪胺、亮丙瑞林、表柔比星、奧沙利鉑、天冬醯胺酶、雌莫司汀、西妥昔單抗、維莫德吉、天冬醯胺酶菊歐氏桿菌、胺磷汀、依託泊苷、氟他胺、托瑞米芬、氟維司群、來曲唑、地加瑞克、普拉曲沙、胺甲喋呤、氟尿苷、奧比妥珠單抗、吉西他濱、阿法替尼、伊馬替尼甲磺酸、卡莫司汀、艾瑞布林、曲妥珠單抗、六甲蜜胺、拓撲替康、帕納替尼、伊達比星、異環磷醯胺、依魯替尼、阿西替尼、干擾素α-2a、吉非替尼、羅米地辛、伊沙匹隆、盧梭利替尼、卡巴他塞、阿多-曲妥珠單抗恩他新、卡非佐米、苯丁酸氮芥、沙格司亭、克拉屈濱、米托坦、長春新鹼、丙卡巴肼、甲地孕酮、曲美替尼、美司鈉、鍶-89氯化物、氮芥、絲裂黴素、白消安、吉妥珠單抗奧佐米星、長春瑞濱、非格司亭、乙二醇化非格司亭、索拉非尼、尼魯米特、噴司他丁、它莫西芬、米托蒽醌、培門冬酶、地尼介白素-毒素連接物、阿利維A酸、卡鉑、帕妥珠單抗、順鉑、泊馬度胺、強的松、阿地介白素、巰嘌呤、唑來磷酸、來那度胺、利妥昔單抗、奧曲肽、達沙替尼、瑞格非尼、組胺瑞林、舒尼替尼、司妥昔單抗、奧馬他辛、硫鳥嘌呤（硫鳥嘌呤）、達拉菲尼、埃羅替尼、蓓薩羅丁、替莫唑胺、噻替派、薩力多胺、BCG、西羅莫司、鹽酸苯達莫司汀、曲普瑞林、三氧化二砷、拉帕替尼、戊柔比星、帕尼單抗、長春花鹼、硼替佐米、維A酸、阿紮胞苷、帕唑帕尼、替尼泊苷、亞葉酸、克裡唑蒂尼、卡培他濱、恩雜魯胺、伊匹單抗、戈舍瑞林、伏立諾他、艾代拉利司、色瑞替尼、阿比特龍、埃博黴素、他氟泊苷、硫唑嘌呤、去氧氟尿苷、長春地辛以及全反式維生素A酸 。
在其中CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物與第二試劑同時地共同給予的實施方式中，CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物可以在與第二試劑基本上相同的時間下向受試者給予。如在此背景下所用，“基本上相同的時間”是指CDKL5融合蛋白、組成物及其藥物配製物與第二試劑的給予，其中CDKL5融合蛋白、組成物或其藥物配製物與第二試劑的給予之間的時間段處於0與10分鐘之間。
在其中CDKL5融合蛋白、組成物或其藥物配製物與第二試劑依序地共同給予的實施方式中，可以首先給予CDKL5融合蛋白、組成物或其藥物配製物，並且然後在一段時間之後給予第二試劑。在其中CDKL5融合蛋白、組成物或其藥物配製物與第二試劑依序地共同給予的其他實施方式中，可以首先給予第二試劑，並且然後在一段時間之後給予CDKL5融合蛋白、組成物或其藥物配製物。在任何實施方式中，CDKL5融合蛋白、組成物或其藥物配製物與第二試劑的給予之間的時間段可以在從10分鐘至約96小時之間。在一些實施方式中，時間段可以是約10分鐘、約30分鐘、約1小時、約2小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時或約12小時。可以根據需要在治療週期過程內重複依序給予。
可被給予的CDKL5融合蛋白、組成物、其藥物配製物的量在此其他地方進行描述。第二試劑的量將根據第二試劑變化。第二試劑的量可以是治療有效量。在一些實施方式中，第二試劑的有效量在從0.001微克至約1毫克的範圍內。在其他實施方式中，第二試劑的量在從約0.01 IU至約10000 IU的範圍內。在另外的實施方式中，第二試劑的量在從0.001 mL至約1 mL的範圍內。在又其他實施方式中，第二試劑的量在總藥物配製物的從約1% w/w至約50% w/w的範圍內。在另外的實施方式中，第二試劑的量在總藥物配製物的從約1% v/v至約50% v/v的範圍內。在再其他實施方式中，第二試劑的量在總的第二試劑組成物或藥物配製物的從約1% w/v至約50% w/v的範圍內。
在一些實施方式中，含有CDKL5融合蛋白的組成物或配製物經由注射給予至患者。適合的注射方法包括但不限於靜脈內、腹膜內、皮下、肌內、皮內、骨內、硬膜外、心內、關節內、海綿竇內、鞘內、玻璃體內、腦內和腦室內注射。含有CDKL5融合蛋白的組成物或配製物的其他適合的給予方法包括但不限於局部、經皮、經鼻或經口遞送。在一些實施方式中，CDKL5融合蛋白的劑量在從約0.01 µg/g體重至約10 mg/g體重的範圍內。
在其他實施方式中，CDKL5融合蛋白可以經由細胞療法遞送至需要治療的患者。出於這種考慮，將注意力轉向圖3，該圖3示出了經由自體細胞遞送CDKL5融合蛋白的方法的一個實施方式。該方法藉由體外培養細胞（8000）開始。較佳的是，細胞係自體細胞。在一個實施方式中，自體細胞係神經元或神經元先質細胞，諸如神經幹細胞。在一些實施方式中，自體細胞係來源於誘導性多能幹細胞的神經元。在其他實施方式中，自體細胞係來源於臍帶血幹細胞的神經元。
接著，用純化的CDKL5融合蛋白轉導培養細胞（8010）。在其他實施方式中，藉由將培養細胞暴露於如先前所述的含有CDKL5融合蛋白的培養基來轉導培養細胞。在另外的實施方式中，用含有CDKL5融合蛋白cDNA的適合載體轉染培養細胞。然後將細胞培養適量時間以使得CDKL5融合蛋白表現（8020）。在一些實施方式中，將細胞培養約6小時至約96小時。細胞培養之後，將一種或多種轉導細胞給予至患者。
在一個實施方式中，使用外科技術將轉導的自體神經元遞送至腦。在一些實施方式中，經由注射將一種或多種轉導細胞給予至患者。在一些實施方式中，配製物中包含一種或多種轉導細胞。在一個實施方式中，含有一種或多種轉導細胞的配製物還包含藥學上可接受的載體和/或活性劑。在一些實施方式中，經由注射或使用外科技術將含有一種或多種轉導細胞的配製物給予至患者。 含有 CDKL5 融合蛋白和其配製物的套組
在此所述的CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物和其藥物配製物可以作為組合套組（kit）提供。如在此所用，術語“組合套組”或“成套套組”是指在此所述的CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物和其藥物配製物以及用於包裝、出售、市售、遞送和/或給予包含於其中的元件組合或單一元件諸如活性成分的另外元件。此類另外的元件包括但不限於包裝、注射器、泡包裝、瓶子等。當同時給予包含在套組中的一種或多種組分（例如活性劑）時，組合套組可以含有在單一藥物配製物（例如，片劑）中或在分開的藥物配製物中的活性劑。
組合套組可以含有在分開組成物或藥物配製物中的各試劑、組成物、藥物配製物或其組分。分開的組成物或藥物配製物可以包含在套組內的單一包裝中或分開的包裝中。在一些實施方式中還提供了緩衝劑、稀釋劑、增溶試劑、細胞培養基以及其他試劑。該等另外的組分可以包含在套組內的單一包裝中或分開的包裝中。
在一些實施方式中，組合套組還包括印刷在有形表現介質上或以其他方式包含在該有形表現介質中的說明書。說明書可以提供關於包含於其中的CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物和其藥物配製物，和/或其他助劑和/或第二試劑的含量的資訊、關於包含於其中的CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物和其藥物配製物，和/或其他助劑和/或第二試劑的含量的安全資訊、關於包含於其中的CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物和其藥物配製物，和/或其他助劑和/或第二試劑的劑量、使用適應症和/或一個或多個推薦的治療方案的資訊。在一些實施方式中，說明書可以提供用於向患有CDKL5缺陷、雷特氏症候群和/或其症狀的受試者給予CDKL5融合蛋白、含有CDKL5融合蛋白的組成物和其藥物配製物，和/或其他助劑和/或第二試劑的說明。
無需進一步解釋，據信熟習該項技術者可以基於在此的說明最大程度地利用本揭露。強調的是，本揭露的實施方式，尤其是任何“較佳的”實施方式僅僅是實施的可能性實例，僅僅是為了清楚地理解本揭露的原理而闡述的。在實質上不背離本揭露的精神和原理的情況下可以對本揭露的一個或多個所揭露實施方式進行許多變化和修改。所有此類修改和變化都在本揭露的範圍之內。
在本說明書中引用的所有公開物和專利案藉由引用結合在此，就好像每個單獨的公開物或專利被確切地並單獨地指示為藉由引用結合，並且藉由引用結合在此從而結合引用的公開物揭露和描述該等方法和/或材料。任何公開物的引用內容係針對在提交日之前的揭露，並且不應理解為承認因為先前揭露而本揭露不能獲得比該等公開物更早的申請日。此外，所提供的公開日期可能與實際的公開日期不同，實際的公開日期可能需要單獨地確認。
如將對於熟習該項技術者清楚的是，在閱讀本揭露時，在此描述和展示的單獨實施方式中的每一個具有離散的組成部分和特徵，該等組成部分和特徵可以在不偏離本揭露的範圍或精神的情況下易於與任何其他一些實施方式的特徵分離或組合。可以按照所敘述的事件的順序或按照邏輯上可行的任何其他順序來進行任何敘述的方法。
除非另外指明，否則本揭露的實施方式將採用分子生物學、微生物學、奈米技術學、有機化學、生物化學、植物學等的技術，該等技術係在本領域的技術之內。此類技術在文獻中得到充分解釋。實例
提出以下實例來為熟習該項技術者提供如何執行方法和使用在此揭露且要求保護的組成物和化合物的完整的揭露內容和說明。以下實例僅被視為說明性的而不以任何方式來限定本揭露的其餘部分。已經做出努力來確保關於數位（例如量、溫度等）的精確性，但一些誤差和偏差也應當考慮。除非另外指明，否則份數係重量份，溫度係以°C計並且壓力係在大氣壓下或接近大氣壓。標準溫度和壓力被定義為20°C和1個大氣壓。 實例 1 ： TAT κ -CDKL5115 和 TAT κ -CDKL5107 融合蛋白的生產和純化。
為了產生可遞送的TAT-CDKL5融合蛋白，使用了合成的TATκ-PTD，其中TAT結構域中的弗林蛋白酶識別序列的突變實現了重組蛋白的分泌。觀察到分泌的蛋白成功被靶細胞攝取。將含有人類CDKL5115 或CDKL5107 的TATκ-CDKL5115 或TATκ-CDKL5107 融合基因轉殖到表現質粒pSecTag2（生命技術公司（Life Technologies））中。此質粒被設計成能夠實現基因在哺乳動物宿主中的表現和靶蛋白的高表現水平。將表現自pSecTag2的蛋白質在N-末端處融合至鼠類Igκ鏈前導序列上，以用於培養基中的蛋白質分泌。用eGFP蛋白標記TATκ-CDKL5融合蛋白以允許使用抗-GFP抗體進行西方墨點分析。為了促進蛋白質純化，將TATκ-CDKL5融合蛋白配置為在TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 基因的C-末端區域包括myc-標籤、6xHis標籤和/或FLAG標籤。使用標準質粒遞送方法，用TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 表現質粒轉染HEK 293T細胞。在轉染之後，使細胞在無血清培養基（高葡萄糖的杜氏改良伊格爾培養基（Dulbecco's Modified Eagle Medium））中生長。48小時之後，收集培養基，使用Amicon超離心過濾器（50 kDa截留）對該培養基進行滲濾和濃縮。此方法允許緩衝液交換和分泌蛋白的富集。
圖4A和圖4B展示了來自轉染的HEK 293T細胞中的TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白表現的西方墨點分析結果。圖4A展示了來自轉染的HEK 293T細胞的細胞勻漿中的TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白表現。圖4B展示了來自轉染的HEK 293T細胞的濃縮的（20X）細胞培養基中的TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白累積。儘管在圖4A-4B中未示出，用TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白獲得了相似的結果。 實例 2 ： TATκ-CDKL5115 激酶活性的驗證。
為了純化TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白，在TATκ-eGFP-CDKL5115 基因的C-末端區域添加了myc-標籤和6xHis標籤。在Ni-NTA樹脂上從培養基中純化TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白。已顯示，CDKL5激酶具有高的自身磷酸化活性。如圖5A和圖5B（其示出了來自體外激酶活性測定的結果）中所示，純化的TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白保留了其自身磷酸化活性。這證明了純化的融合蛋白保留了其激酶活性。 實例 3 ： HEK 293T 細胞對 TAT κ -CDKL5115 的內化。
為了評價TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白的轉導效率，將HEK 293T細胞與純化/濃縮的融合蛋白一起孵育。簡言之，如實例1中所述來產生並純化TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白。將HEK 293T細胞在含有融合蛋白的濃縮培養基中孵育。在不同的孵育時間之後，將細胞裂解並且將總的蛋白質提取物藉由SDS-PAGE分離並轉移至硝化纖維膜以用於免疫印漬術，從而對TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白進行定量。如圖6中所示，在僅孵育約30分鐘之後，TATκ-eGFP-CDKL5115 被細胞內化。平行處理了其他培養物並且進行固定、用抗-GFP特異性抗體進行免疫染色以視覺化轉導的TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白。如圖7A-7B中所展示的，TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白被有效地易位到細胞中。靶細胞中的內化藉由共聚焦顯微鏡（圖8）來證實。將SH-SY5Y神經母細胞瘤細胞在含有融合蛋白的濃縮培養基中孵育30分鐘。圖8示出了TATκ-eGFP-CDKL5115 轉導的SH-SY5Y細胞的一系列共聚焦圖像（1-12）的圖像，從而證明了TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白被靶細胞內化並且位於SH-SY5Y細胞的細胞核和細胞質兩者中（圖8）。 實例 4 ： TAT κ -CDKL5115 誘導分化並且抑制 SHSY5Y 神經母細胞瘤細胞系的增殖
儘管CDKL5對於中樞神經系統具有明顯的重要性，但是此激酶的生物學功能大部分仍是未知的。CDKL5蛋白質影響了神經細胞的增殖和分化兩者（參見例如Valli等人，2012，Biochim Biophys Acta. [生物化學與生物物理學學報]，1819: 1173-1185，以及Rizzi等人，2011，Brain Res.[腦研究]，1415: 23-33）。神經母細胞瘤細胞與正常神經元享有若干個特徵，並且因此被認為是用於研究神經元細胞的生物化學特性和功能特性的良好體外模型，特別是當它們在用試劑諸如視黃酸（RA）處理後而被誘導分化時（參見例如，Singh，2007，Brain Res.[腦研究]，1154，第8-21頁；Melino，1997，J. Neurooncol.[神經腫瘤雜誌]，31，第65-83頁）。出於該等原因，採用神經母細胞瘤細胞來體外研究CDKL5功能。
與實例3中所述的處理類似，用純化的TATκ-eGFP-CDKL5處理SH-SY5Y細胞。在此，將SH-SY5Y細胞與含有純化的TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白的濃縮培養基一起孵育約24小時。使用Hoecsht核染色將細胞增殖評價為有絲分裂指數（細胞中發生有絲分裂的群體的數目與細胞的總數目之間的比率）。藉由檢查神經突生長（其係神經元分化的標誌）來評價分化。對於神經突生長的分析，在存在或不存在促分化劑RA的情況下使細胞另外生長1-2天。使用圖像分析系統測量神經突增生。
與對照相比，CDKL5表現的誘導（藉由TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白）對細胞增殖產生強的抑制（例如圖9A-9B和圖10），同時不增加凋亡性細胞死亡（數據未示出）。此外，如圖11A-11B和圖12中所示，TATκ-eGFP-CDKL5115 促進了神經母細胞瘤細胞分化，如藉由SH-SY5Y細胞的神經突增生所指明的。該等結果證明TATκ-eGFP-CDKL5115 在體外神經元模型中是具有功能性的。 實例 5 ： CDKL5-KO 小鼠模型的表徵
最近在義大利蒙特羅頓多（Monterotondo，Italy）由Cornelius Gross博士領導的組藉由EMBL創建了CDKL5敲除小鼠模型（Amendola，2014，PLoS One [公共科學圖書館雜誌]，9(5): e91613）。為了建立CDKL5-缺失功能對新生神經元的樹突發育的影響，檢查了來源於CDKL5 KO小鼠的新生海馬顆粒細胞的樹突形態。用雙皮層蛋白（DCX）的免疫組織化學分析新生神經元的樹突形態，利用了在神經突延長階段過程中此蛋白質在成熟神經元的細胞質中的表現。如圖13A-13B中所示，與CDKL5野生型（+/Y）對應物（圖13A）相比，CDKL5 KO小鼠（-/Y）的DCX陽性細胞表現出具有高度不成熟型式的樹突樹（圖13B）。高度不成熟型式可以由很少的分支和延長表明。CDKL5的不存在使得DCX陽性細胞數目減少（圖13B），這係由於凋亡性細胞死亡增加（數據未示出），觀察到該增加影響了有絲分裂期後的不成熟的顆粒神經元（DCX陽性細胞）（Fuchs，2014，Neurobiol Dis.[疾病神經生物學]，70，第53-68頁）。該等數據表明CDKL5藉由影響神經先質存活和新生神經元的成熟而對出生後神經發生具有基礎性作用。觀察到來自CDKL5敲除小鼠的室下區（subventricolar zone，SVZ）的神經元先質細胞（NPC）的培養物表現出體內觀察到的小腦顆粒細胞先質中的相同缺陷。換句話說，在來源於雌性野生型小鼠（+/+）的神經元先質細胞的培養物中，存在比來源於純合子的CDKL5 KO雌性小鼠（-/-）的神經元先質細胞的培養物中更多的神經元（β-微管蛋白III陽性細胞，紅色細胞）（圖14A和圖14B）。這表明CDKL5的缺失降低了有絲分裂期後的神經元的存活率。對β-微管蛋白III陽性細胞中神經突增生的評估證明與雌性野生型（+/+）神經元相比，由Cdkl5敲除NPC產生的神經元分化較少（圖14A和圖14B）。該等結果表明來自CDKL5敲除小鼠的有絲分裂期後的NPC不僅在細胞存活方面而且在神經元成熟方面都具有本征缺陷。 實例 6 ： TAT κ -CDKL5115 蛋白恢復來源於 CDKL5 KO 小鼠的神經元細胞先質的神經突發育。
用TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP處理來自雌性純合子的CDKL5 KO（-/-）小鼠和野生型（+/+）小鼠的神經元先質細胞培養物。藉由測量分化的神經元（對β-微管蛋白III呈陽性）的總神經突長度來評價。藉由使用圖像分析系統Image Pro Plus（媒體控制公司（Media Cybernetics），銀泉（Silver Spring），馬里蘭州20910，美國）進行了神經突長度的評價。藉由用總神經突長度除以區中所計數的細胞數目來計算平均神經突長度/細胞。如圖15A-15C和圖16中所示，CDKL5的不存在使得新神經元的成熟減少並且用TATκ-eGFP-CDKL5115 的處理恢復了神經突發育。對於圖15A-16，從新生（2日齡）小鼠的室下區（SVZ）分離細胞。對於分化分析，將體外三次傳代後獲得的神經球解離，並以20,000個細胞/孔的密度將其塗板在塗有15 μg/ml聚-1-鳥胺酸（西格瑪公司（Sigma））的蓋波片上。使細胞生長2天，然後從第3天轉移到分化培養基（無EGF和FGF，加1%胎牛血清）上持續7天。在緩衝液與DMEM-F12交換後，每天以最終10x濃度給予TATκ-CDKL5115 融合蛋白，避免培養基完全變化。每3天，將一半的培養基用新鮮的分化培養基補充。 實例 7 ： TAT κ -CDKL5115 向小鼠腦中的遞送。
用單劑量的使用TATκ-eGFP-CDKL5115 、TATκ-eGFP轉染的HEK 293T細胞的培養基或來自未轉染的細胞（媒介物）的培養基皮下注射七日齡小鼠幼崽（單劑量對應於約200 µl的200x濃縮培養基；其含有約1 μg-1.5 μg的融合蛋白）。在48小時之後收集來自轉染的培養基並且用Amicon超離心過濾器（50 kDa截留）對該培養基進行滲濾和濃縮。給予處理後4小時，將小鼠處死。將腦儲存在固定劑中24小時，沿著中線切割並且在於磷酸鹽緩衝液中的20%的蔗糖中再保存24小時。將半球冷凍並且儲存在-80°C下。用冷凍切片機將右半球切割為30 µm厚的冠狀切片。在自由漂浮的切片上進行免疫組織化學。藉由使用抗-GFP抗體和TSA擴增套組的免疫組織化學來評價腦中的TATκ-eGFP-CDKL5115 和TATκ-eGFP的定位。圖像在感覺運動皮層和小腦的水平處獲取。使用4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）複染細胞。展示出TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白在小鼠的感覺運動皮層和小腦中的存在的代表性圖像分別顯示在圖17A-17F和圖18A-18D中。考慮到TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白係皮下給予的，該等數據證明TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白有效地轉運跨過血腦障壁並且進入腦細胞中。 實例 8 ：在體內 TAT κ -CDKL5115 融合蛋白對神經元成熟、存活和連通性的影響
使用TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP，將成年小鼠（4-6月齡）腦室內注射（圖19）連續5天（參見例如圖20的實驗計畫表）。簡言之，用氯胺酮（100 mg/kg-125 mg/kg）和甲苯噻𠯤（10 mg/kg-12.5 mg/kg）麻醉小鼠。將插管（0.31 mm直徑，腦灌注套組III；Alzet，庫栢蒂諾（Cupertino），加利福尼亞州（CA））立體定位地植入到側腦室中（A/P-0.4 mm尾部，M/L 1.0 mm，D/V-2.0 mm；圖19）。植入後七天，藉由使用連接至機動化的奈米注射器（以0.5 μl/min的速率）的漢密爾頓氏注射器用10 μl（約50 ng）的於PBS中的TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP對小鼠連續5天進行灌注。最後注射後四小時，將動物處死，並且使用DCX的免疫組織化學分析新生海馬顆粒細胞的樹突形態。圖21A-21C和圖22A-22C證明與野生型對應物的DCX陽性神經元相比，雄性CDKL5 KO小鼠的DCX陽性神經元具有更短的突起（process）（圖21A-21B和圖22A-22B）。觀察到連續五天腦室內給予TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白將CDKL5敲除雄性小鼠（圖22C）中的神經突長度和分支數目增加到類似於野生型（圖22A）的水平。圖23A-23B示出了以下各項的新生顆粒細胞的重構樹突樹的實例：野生型（+/Y）（圖23A）、CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）（圖23B）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白處理的CDKL5敲除雄性小鼠。
DCX陽性細胞的樹突大小的定量證明與野生型雄性小鼠（圖24A和圖24B）相比，CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）具有更短的樹突長度（圖24A）和減少的區段數目（圖24B）。在TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的CDKL5敲除雄性小鼠中，兩個參數都存在增加，與野生型雄性小鼠相比甚至變得更大（圖24A-24B）。藉由分別評價每個樹突級來檢查TATκ-eGFP-CDKL5115 處理對樹突構造的細節的影響。CDKL5 KO小鼠的顯著特徵係不存在更高級的分支（圖25A-25B；紅色箭頭）。雖然野生型雄性小鼠具有高達10級的分支，但是CDKL5敲除雄性小鼠缺乏8-10級的分支（圖25A，箭頭）。此外，CDKL5敲除雄性小鼠顯示出減小的5-8級的分支長度（圖25A）和減小的6-8級的分支數目（圖25B）。一起考慮，該等數據表明在CDKL5 KO雄性小鼠中，新生顆粒細胞的樹突樹具有發育障礙並且此缺陷係歸因於中級分支數目和長度的減小以及更高級分支的缺乏。觀察到所有該等缺陷被TATκ-eGFP-CDKL5115 處理完全挽救（圖25A至25B）。
為了評價TATκ-eGFP-CDKL5115 處理對凋亡性細胞死亡的影響，我們計數了海馬齒狀回中的表現裂解的半胱天冬酶-3的凋亡細胞的數目（圖26）。裂解的半胱天冬酶-3細胞的定量顯示TATκ-eGFP-CDKL5115 處理完全使CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）中的凋亡性細胞死亡正常化（圖26）。觀察到CDKL5敲除雄性小鼠在海馬齒狀回中具有比野生型雄性小鼠更少的有絲分裂期後的神經元（DCX陽性細胞）（圖27）。TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的CDKL5敲除小鼠經歷有絲分裂期後的神經元數目的增加，從而變得類似於野生型雄性小鼠的有絲分裂期後的神經元數目（圖27）。這表明特徵化CDKL5敲除小鼠的有絲分裂期後的不成熟顆粒細胞的死亡增加被TATκ-eGFP-CDKL5115 處理挽救。一起考慮，該等數據證明CDKL5敲除小鼠中的用TATκ-eGFP-CDKL5115 進行的處理增加了海馬體中新生細胞的神經突長度和存活率，這表明注射的TATκ-CDKL5從側腦室擴散到海馬體並且恢復了有絲分裂期後的顆粒細胞的成熟和存活。
不受任何一個理論束縛，連通性的降低可能是與特徵化CDKL5 KO小鼠的新生顆粒細胞的樹突發育障礙相對應的。突觸泡蛋白（SYN；也稱為p38）係為突觸前末梢的特異性標記的突觸泡醣蛋白。在此，在CDKL5敲除雄性小鼠中觀察到海馬體分子層中的SYN的光密度比野生型雄性小鼠中的明顯更低（圖28和圖30A），這表明CDKL5 KO雄性小鼠的齒狀回中具有較少的突觸連接。圖28A-28C示出了展示出來自以下各項的齒狀回（DG）分子層的、處理用於突觸泡蛋白（SYN）免疫螢光的腦切片的代表性圖像：野生型雄性小鼠（+/Y）（圖28A）、CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）（圖28B）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射處理的CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）（圖28C）。將來自動物的DG的30-mm厚的冠狀切片的六分之一進行處理以用於免疫組織化學。在冷凍腦的自由漂浮切片上進行免疫組織化學。對於突觸泡蛋白免疫組織化學，在4°C下將切片與小鼠單株抗-SYN（SY38）抗體（1 : 1000，MAB 5258，密理博生物科學（Millipore Bioscience）研究試劑）一起孵育48小時並且與Cy3軛合的抗-小鼠IgG第二抗體（1 : 200；傑克森免疫研究公司（Jackson Immunoresearch）一起孵育2小時。藉由免疫組織化學染色的切片的光密度測定法來確定免疫反應性（IR）的強度。使用配備有尼康（Nikon）數碼照相機DXM1200（ATI系統公司（ATI system））的尼康Eclipse E600顯微鏡捕獲螢光圖像。使用Nis-元素軟體3.21.03（尼康）進行分子層和皮層的光密度分析。對於每個圖像，藉由分析圖像區域中不含有IR的圖元強度的分佈來估計強度閾值。然後減去此值以計算每個取樣區域的IR。此值以對照CDKL5野生型雄性小鼠的光密度的百分比給出（平均值 + 標準誤差）。
與野生型對應物相比，CDKL5 KO小鼠的皮層錐形神經元的樹突分枝明顯減少（Amendola，2014，PLoS One [公共科學圖書館雜誌]，9(5): e91613）。在新皮層的III層中觀察到類似較低的SYN免疫反應性水平（圖30B）。在用TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的CDKL5 KO雄性小鼠中，該等缺陷被完全挽救（圖28和圖30A和圖30B），這表明使用TATκ-eGFP-CDKL5115 的處理對樹突結構的正面影響與對神經元的輸入的恢復係並行發生的。 實例 9 ：在體內 TAT κ -CDKL5115 融合蛋白對 P-AKT 的影響
AKT係與多個細胞途徑相關聯的中樞傳訊激酶。磷酸化AKT（P-AKT）在CDKL5敲除動物、CDKL5缺陷和雷特氏症候群中明顯減少。圖29A-29C示出了展示出來自以下各項的齒狀回（DG）分子層的、處理用於P-AKT免疫螢光的腦切片的代表性圖像：野生型雄性小鼠（+/Y）（圖29A）、CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）（圖29B）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射處理的CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）（圖29C）。對於磷酸-AKT免疫組織化學，在4°C下將切片與小鼠單株抗-磷酸-AKT-Ser473抗體（1 : 1000，細胞傳訊技術公司（Cell Signaling Technology））一起孵育24小時並且與Cy3軛合的抗-小鼠IgG第二抗體（1 : 200；傑克森免疫研究公司（Jackson Immunoresearch）一起孵育2小時。藉由免疫組織化學染色的切片的光密度測定法來確定免疫反應性（IR）的強度。使用配備有尼康（Nikon）數碼照相機DXM1200（ATI系統公司（ATI system））的尼康Eclipse E600顯微鏡捕獲螢光圖像。
觀察到，在CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）中DG分子層中（圖31A）和皮層的V層（圖31B）中的P-AKT的光密度比+/Y小鼠中的明顯更低。在用TATκ-eGFP-CDKL5115 連續五天腦室內注射的CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）中，該等缺陷被完全挽救（圖31A和圖31B），證明CDKL5敲除小鼠中用TATκ-eGFP-CDKL5115 處理恢復了AKT活性。 實例 10 ：在體內 TAT κ -CDKL5115 融合蛋白對成熟神經元的樹突構造的影響
分析了處理對成熟神經元樹突構造的影響。為此，檢查位於顆粒細胞層的中間部分的高基體染色的顆粒神經元。雖然與野生型雄性小鼠相比，CDKL5 KO雄性小鼠顯示出較短的樹突分支長度，但是藉由用TATκ-eGFP-CDKL5115 處理完全挽救了該等缺陷（圖32）。在處理的（-/Y）和（+/Y）小鼠兩者中，與未處理的（+/Y）小鼠相比，總樹突長度變得更大。該等結果表明，藉由用TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白處理，恢復了在CDKL5 KO雄性小鼠中觀察到的成熟顆粒神經元的受損樹突構造。
在高基體染色的切片中，對顆粒細胞的棘進行計數，並在分子層的內部一半和外部一半的樹突段上測量棘密度。未處理的CDKL5 KO成年雄性小鼠與野生型小鼠相比顯示出較低的棘密度，而用TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白處理完全恢復密度，消除了在敲除與野生型情況之間的差異。代表性圖像顯示在圖33中，並且可以在圖34右邊的長條圖中觀察到相對量化。
一起考慮，該等數據表明，使用TATκ-eGFP-CDKL5115 處理藉由恢復突觸泡蛋白表現和藉由校正樹突棘數目和成熟來完全恢復CDKL5 KO雄性小鼠中的連通性。 實例 11 ： TAT κ -CDKL5115 融合蛋白對學習能力和記憶能力的影響
與野生型小鼠相比，雄性CDKL5敲除小鼠表現出學習缺失和記憶缺失（參見例如圖36和圖37A-37B）。
為了檢查記憶能力和學習能力，將CDKL5敲除雄性小鼠每日給予腦室內注射TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白，持續10天（參見例如圖35的實驗計畫表）。在10天注射完結的兩天休息期之後，所有組中的小鼠接受莫氏水迷津（MWM）測試（圖36）。MWM測定發現和回憶浸入水中隱藏平臺的位置的能力。在MWM任務中，訓練小鼠尋找圓形水池中的隱藏逃跑平臺。該裝置由具有透明圓形逃跑平臺（10 cm2 ）的大型圓形水箱（1.00 m直徑，50 cm高度）組成。將水池基本上分為四個均等象限，將該等象限鑒別為東北、西北、東南和西南。用22°C溫度下的自來水填充水箱直至高於平臺頂部0.5 cm，並且使用乳使水變得不透明。將平臺以固定位置（在西北象限的中間）置於水箱中。將水池置於大房間中，該房間具有許多內部的（四方形、三角形、圓形和星形）和外部的迷津視覺提示。訓練之後，對每個小鼠測試兩個階段，每個階段每天4次，連續進行5天，其中階段間的間隔為40分鐘（採集階段）。將錄影照相機置於水池中央上方並且連接至視頻跟蹤系統（Ethovision 3.1；諾達思資訊技術公司（Noldus Information Technology B.V.），瓦赫寧恩（Wageningen），荷蘭）。從以下出發點開始、面向水池壁釋放小鼠：北、東、南或西並且允許小鼠尋找平臺高達60秒。如果小鼠找不到平臺，則將它漸漸地引導至平臺並且使它在那兒逗留15秒。將查找隱藏平臺的潛伏時間作為學習的量度。所有實驗階段在上午9:00與下午3:00之間進行。
這個測試的結果展示在圖36中。圖36示出了展示出以下各項中的如經由莫氏水迷津測試（Morris Water Maze test）確定的學習期的定量的圖：野生型雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）。野生型小鼠到第二天學會了查找平臺，但是在CDKL5 KO小鼠中沒有檢測出明顯的學習。用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白處理的CDKL5 KO雄性小鼠在第四天開始恢復學習能力，並且在第5天連續改善。
使用被動回避測試進一步檢查響應於TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白處理的記憶能力和學習能力。在連續10天的治療和兩天的休息時間之後，不同組的小鼠接受了被動回避測試（圖37）。該實驗利用了具有兩個腔室（光明和黑暗）的測試籠子。在第一天（條件作用期），動物被置於光明腔室中並且本能地移動到黑暗腔室中，在該黑暗腔室中，它們遭受單一的不良事件（足部電擊）。對於被動回避測試，我們使用了被滑動門分成兩個區室的傾斜底板箱（47 × 18 × 26 cm）和結合減震器（烏戈巴斯勒公司（Ugo Basile），義大利（Italy））的控制單元。用於巴甫洛夫條件作用的此經典儀器利用了小鼠從照明區域逃跑到黑暗區域的傾向（避暗實驗（step-through）方法）。在第一天，將小鼠分別放置到照明區室中。在60秒適應期之後，打開腔室之間的連接門。一般來說，小鼠快速地步過門並且進入黑暗區室，因為小鼠更喜歡在黑暗中。在進入黑暗區室之後，小鼠接受短暫的足部電擊（0.7 mA，持續3秒）並且在15秒的潛伏時間之後將其從腔室中移出。如果小鼠在光明區室中逗留試驗的持續時間（358 s），則關閉門並且將小鼠從光明區室中移出。在各個小鼠的測試之間，用70%乙醇清潔腔室。在24小時的保留期之後，將小鼠放回到光明區室中並且所測得的它們重新進入黑暗區室所花費的時間（潛伏時間）高達358秒。
圖37A-37B展示了來自被動回避測試的結果。圖37A表明對於所有組，進入黑暗腔室的潛伏時間係類似的。在第二天（測試期）（圖37B），將動物再次置於光明腔室。藉由進入黑暗腔室的潛伏時間來測定對不良事件的記憶。CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）在完成此任務方面嚴重受損，如藉由與GDKL5雄性野生型小鼠（+/Y）相比進入黑暗區室的潛伏期減少所證明的。與野生型小鼠相比，TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的GDKL5敲除雄性小鼠表現出類似的潛伏時間。
總之，數據證明TATκ-eGFP-CDKL5115 可以使CDKL5敲除雄性小鼠的學習能力和記憶能力增加且恢復至與它們相對應的未處理的野生型小鼠中觀察的類似水平。 實例 12 ： TAT κ -CDKL5115 融合蛋白對運動功能的影響
CDKL5敲除雄性小鼠在被懸掛時表現出延長的肢抱攏（參見例如圖38A-38B）。
為了檢查TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白對運動功能的影響，向小鼠每日給予TATκ-eGFP-CDKL5115 的腦室內注射，連續進行10天（圖38）。完成給藥方案後10天，抓住尾巴，將動物懸掛在空中（圖38A和圖38B）。將所有小鼠懸掛約2分鐘並且測量肢抱攏的總時間。將來自此實驗的結果展示在圖38A-38B中。
圖38A-38B示出了展示出如藉由抱攏測試確定的運動能力的定量的圖，其中測量了在2分鐘間隔期間中以下各項的肢抱攏所用的時間總量：野生型雄性小鼠（+/Y）、CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）和根據圖35中的注射時間表用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）。總之，數據證明用TATκ-eGFP-CDKL5115 的處理改善了CDKL5 KO雄性小鼠的運動功能。
測量了野生型（+/Y）雄性小鼠和用TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白注射5（+/Y）或10（-/Y）天的CDKL5 KO（-/Y）雄性小鼠的體重並且將結果展示在圖39中。在注射期過程中沒有觀察到體重的明顯變化，這表明不存在由TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白給予導致的任何副作用。
圖40A-40F中顯示了在未經處理的動物和用TATκ-eGFP-CDKL5115 藉由腦室內注射處理5天或10天的動物中同種異體移植炎症因子1（AIF-1）染色的比較。數據顯示，處理不會引起小膠質細胞的啟動，這表明對延長的TATκ-eGFP-CDKL5115 處理沒有炎症性反應。 實例 13 ： TAT κ -CDKL5 同功型的 表現與活性比較。
已經描述了CDKL5基因的可變剪接同功型（Kilstrup-Nielsen，2012）。原始CDKL5轉錄物產生1030個胺基酸的蛋白質（CDKL5115 ；115 kDa）。雖然CDKL5115 係第一個表徵的CDKL5同功型，但是最近鑒定的107 kDa同功型已被證明含有改變的C-末端區域，並被認為與腦功能有關（CDKL5107 ）（Williamson等人，2012）。如上所述，可以使用任何合適的同功型（例如本文別處所述的變體）形成CDKL5融合蛋白。對於本實例，使用本文別處描述的類似方法，藉由將CDKL5115 同功型（SEQ ID NO: 2）或CDKL5107 同功型（SEQ ID NO: 16）可操作地連接到TATκ來形成CDKL5融合蛋白。
為了比較兩種CDKL5同功型（115和107）的產生和活性水平，在HEK 293T細胞中暫態表現或穩定表現TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 。觀察到從培養基中TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白的回收率高於TATκ-eGFP-CDKL5115 的回收率（圖41）。
觀察到兩種CDKL5同功型具有類似的細胞內穩定性。圖42A-42B示出了展示了在HEK 293T細胞（圖42A）和SKNBE細胞（圖42B）中表現的TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白的細胞內穩定性之圖。用TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 轉染HEK 293T和SKNBE細胞。24小時後，將細胞與環己醯亞胺（Chx；50 μg/ml）一起孵育指定的時間（3小時、6小時或8小時）。藉由CDKL5免疫印漬術檢測異位表現的CDKL5。
重要的是，在功能水平上，我們發現兩種同功型具有可比的生理學活性。與TATκ-CDKL5115 和TATκ-eGFP-CDKL5115 平行測試TATκ-eGFP-CDKL5115 的體外活性。在接種後那天，用純化的TATκ-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5115 和TATκ-eGFP（作為對照）處理SH-SY5Y細胞。具體地，將細胞與含有濃縮的/純化的蛋白質的濃縮培養基一起孵育約24小時。使用Hoechst核染色，將細胞增殖評估為有絲分裂指數（使用有絲分裂的群體中的細胞數與總細胞數之間的比率）。如圖52所示，我們證明了兩種CDKL5同功型在抑制增殖方面對SH-SY5Y神經母細胞瘤細胞具有相同的作用。我們測試了與沒有eGFP的TATκ-CDKL5115 蛋白平行的TATκ-eGFP-CDKL5115 的體外活性。如圖52所示，我們證明了兩種蛋白質在抑制增殖方面對SH-SY5Y神經母細胞瘤細胞具有相同的作用，這表明eGFP標籤不改變CDKL5活性。 實例 14 ： TAT κ -CDKL5 蛋白具有與天然 CDKL5 相同的亞細胞定位，並恢復來源於 CDKL5 KO 小鼠的海馬神經元的神經突發育。
已經顯示在海馬神經元中，CDKL5主要具有在突觸後區室富集的細胞質定位。我們發現在該等神經元中，內化的TATκ-eGFP-CDKL5107 主要位於細胞質中，並且特別是在樹突水平上，它特異性地定位於樹突棘（圖45A-45D）。共聚焦圖像顯示TATk-eGFP-CDKL5與突觸前（突觸泡蛋白；SYN，圖60A-60C）和突觸後（PSD-95；圖46A-46D）共定位。這表明外源蛋白位於天然CDKL5的相同亞細胞位點。
為了確定TATκ-eGFP-CDKL5107 是否保留了CDKL5的生理學活性，使來自CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）的海馬神經元培養物在TATκ-eGFP-CDKL5107 （添加到培養基中）存在下生長8日。在該等神經元中，CDKL5的缺失導致神經元成熟的降低，如藉由樹突長度減小（圖47）、突觸連接的數目（圖48）和棘密度（圖61）所示。用TATκ-eGFP-CDKL5處理恢復神經突發育（圖47-48和61），表明融合蛋白保留了CDKL5的生理學活性。 實例 15 ： TAT κ -CDKL5107 融合蛋白對行為的影響。
圖49A-49B示出了描繪用於行為測試的CDKL5融合蛋白的治療時間表和給予途徑的草圖。如上所述，雄性CDKL5野生型小鼠（+/Y）接受了用TATκ-eGFP（n = 6）進行的處理，而用TATκ-eGFP（n = 6）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 6）處理了CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）。治療期由以下各項組成：連續5天的單次每日注射（10 μl注射，約50 ng/注射）、隨後是兩天休息期、然後是單次注射另外的5天。在12天的時間內進行了總共10次注射。
圖50示出了展示在如圖49A-49B中所述接受TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白之後來自莫氏水迷津測試的結果之圖。在處理期和兩天休息期之後，小鼠接受了莫氏水迷津測試（MWM）測試。該測定發現和回憶浸入水中隱藏平臺的位置的能力。測試小鼠學習5天（學習期）的能力，並在第6天進行探針測試（第4頁）。TATκ-eGFP處理的野生型（+/Y）雄性小鼠在第三天習得找到平臺，但在用TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性小鼠中沒有檢測到顯著的學習，表明學習能力缺失。TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠在第3天開始恢復學習能力，並在第4天和第5天達到與WT類似的表現。值表示平均值 　 SE。與野生型情況相比，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.01；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO（-/Y）情況相比，# p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖51A-51C示出了展示來自測量（圖51A）進入前一個平臺象限的潛伏期、（圖51B）進入前一個平臺象限的頻率、（圖51C）在前一個平臺象限中花費的時間百分比的空間記憶之圖。在TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性小鼠中，所有參數的性能嚴重受損。TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠顯示出所有參數的統計學顯著的改善，圖A、B和C。值表示平均值 　 SE。與野生型情況相比，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.01，*** p ＜ 0.001；與TATκ-eGFP處理的Cdkl5 KO -/Y情況相比，# p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖52A-52B示出了使用被動回避（PA）測試展示處理對學習和記憶的影響之圖。在處理期和兩天的休息期後，小鼠接受了被動回避（PA）測試。該實驗利用了具有兩個腔室（光明和黑暗）的測試籠子。在第一天，動物被置於光明腔室中並且本能地移動到黑暗腔室中，在該黑暗腔室中，它們遭受單一的不良事件（足部電擊）。圖52A表明對於所有組，進入黑暗腔室的潛伏時間係類似的。在第二天（測試期），將動物再次置於光明腔室。藉由進入黑暗腔室的潛伏時間來測定對不良事件的記憶，並將其呈現在圖52B中。TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性（-/Y）小鼠在此任務中嚴重受損，如藉由與野生型雄性（+/Y）小鼠相比進入黑暗區室的潛伏期減少所證明的。與野生型小鼠相比，TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠表現出類似的潛伏時間（圖52B）。與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性小鼠相比，該等差異係統計學顯著的。與野生型雄性情況相比，** p ＜ 0.01；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO -/Y情況相比，# p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖53A-53B示出了（圖53A）用於評估處理對學習和記憶的影響的Y迷津的草圖和（圖53B）展示來自Y迷津測試的結果之圖。在處理期和兩天休息期之後，小鼠接受了Y迷津測試。Y迷津自發交替用於測量小鼠探索新環境的意願，並且表示海馬體依賴性空間參考記憶。將每隻小鼠放置在面向迷津中心的一個臂部的遠端部分。三個臂部中的每一個都是34 cm x 5 cm x 10 cm的高度，臂部之間互成120°角，並且由灰色不透明的塑膠製成。在引入迷津後，允許動物自由探索三個臂部8分鐘。在多次臂部進入的過程中，受試者應當顯示進入最近訪問的臂部的傾向。臂部進入被定義為全部四隻爪子存在於一個臂部中。將自發交替的百分比定義為：（總交替/總臂部進入-2）x 100。一個交替被定義為三個不同臂部的連續進入。與TATκ-eGFP處理的野生型雄性（+/Y）小鼠相比，TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性（-/Y）小鼠在這項任務中受損，如藉由自發交替百分比的降低所證明的。用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠顯示出與用TATκ-eGFP處理的WT相似的性能。與野生型雄性情況相比，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.01；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性情況相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖54A-54B示出了展示在用於評價處理對運動功能的影響的後肢抱攏測試中抱攏（右小鼠）與不抱攏（左小鼠）的圖（圖54A）和圖像（圖54B）。在治療期後，抓住尾巴，將動物懸掛在空中。將所有小鼠懸掛2分鐘並且測量後肢抱攏的總時間。上圖報告了後肢抱攏的時間占總懸掛時間的百分比。與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性（-/Y）小鼠相比，用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理導致抱攏時間的統計學顯著降低。值表示平均值 　 SE。與野生型情況相比，*** p ＜ 0.001；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性情況相比，## p ＜ 0.001（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖55A和55B顯示了展示在非REM（NREM）（圖55A）和REM（圖55B）睡眠期間藉由呼吸暫停的次數測量的CDKL5 KO（-/Y）雄性小鼠的呼吸紊亂之圖。用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理導致在CDKL5 KO雄性小鼠中非REM（NREM）（圖55A）和REM（圖55B）睡眠期間呼吸暫停的次數急劇減少。
測量了雄性野生型（+/Y）小鼠和用TATκ-eGFP-CDKL5107 蛋白注射10（-/Y）天的CDKL5 KO（-/Y）小鼠的體重並且將結果展示在圖59中。在注射期期間中沒有觀察到體重的顯著變化，這表明不存在由TATκ-eGFP-CDKL5蛋白給予導致的任何副作用。 實例 16 ： TAT κ -CDKL5107 體內處理對神經元成熟和存活的長效應。
需要在患者的整個壽命期間繼續進行蛋白質替代療法。鑒於人類未來治療方案可能降低注射頻率的想法，我們評估了治療停止後存留的積極作用。
圖56A-56D示出了新生顆粒細胞的圖（圖56A）和重構樹突樹（圖56B-56D），展示了用TATκ-eGFP-CDK5107 融合蛋白處理的作用。在治療期完成後12天，用免疫組織化學方法對DCX分析顆粒細胞樹突形態，該DCX係神經突延伸期期間（神經元出生後1至4週）存在於細胞質中的蛋白質。圖A表示用TATκ-eGFP處理的雄性野生型（+/Y）（WT）和雄性CDKL5 KO（-/Y）小鼠以及用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的雄性CDKL5 KO（-/Y）小鼠的平均總樹突長度。圖56B、56C和56D分別示出了以下各項的新生顆粒細胞的重構樹突樹的實例：用TATκ-eGFP處理的雄性野生型（+/Y）小鼠、用TATκ-eGFP處理的雄性CDKL5 KO（-/Y）小鼠以及用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO（-/Y）小鼠。數據表明用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理導致形態學變化，其從給藥停止的時間持續至少12天。值表示平均值 　 SE。與野生型情況相比，** p ＜ 0.01；與TATκ-eGFP處理的（-/Y）情況相比，# p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖57展示了在野生型（WT）雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）、和用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠的海馬體（齒狀回）中DCX陽性細胞數目的定量。治療期由以下各項組成：每日一次腦室內注射5天、隨後是兩天休息期、然後是另外的持續5天的每日一次注射。在最後一次注射後10天將動物處死。數據表示為細胞數目/μm，與+/Y + TATκ-eGFP樣品中的細胞數目/µm相比，** p ＜ 0.01；與-/Y + TATκ-eGFP樣品中的細胞數目/µm相比，##p ＜ 0.001（在ANOVA後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。數據表明，用TATκ-eGFP-CDKL5處理對DCX陽性細胞的數目的積極影響在處理完成後10天仍保留。
圖58展示了在野生型（WT）雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）、和用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠的海馬體（齒狀回）中裂解的半胱天冬酶-3陽性細胞的總數目的定量。治療期由以下各項組成：每日一次腦室內注射5天、隨後是兩天休息期、然後是另外的持續5天的每日一次注射。在最後一次注射後10天將動物處死。 實例 17 ：全身給予 TAT κ -CDKL5107 蛋白對神經元發育和行為的影響。
圖62示出了CDKL5融合蛋白的全身給予的治療時間表。為了模擬每日人類劑量給予，我們使用了一創新的輸注方法，該方法基於用可重新填裝的容器在皮膚下植入的可程式設計泵。將泵連接到植入頸動脈的插管上。該系統允許我們每天應用兩次輸注方案（早上和晚上），持續10天的時間。使用TATκ-eGFP（20 μl + 20 μl）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （20 μl + 20 μl），每天兩次輸注雄性CDKL5 KO（-/Y）小鼠，持續10天。兩次輸注的時間為上午9-10點和晚上9-10點。該處理時間表用於生成圖63A-72所示的數據。在圖65-68和70-72中，值表示為平均值 ± SE。與未處理的CDKL5 +/Y情況相比，* p＜ 0.05；** p ＜ 0.01；*** p ＜ 0.001；與未處理的CDKL5 -/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
如圖17A-17F所示，CDKL5融合蛋白115同功型在全身給予時可以穿過血腦障壁。圖63A-63B展示了用TATκ-eGFP-CDKL5107 全身性處理對新生顆粒細胞成熟的影響。最後注射後一小時，將動物處死，並且使用DCX的免疫組織化學分析新生海馬顆粒細胞的樹突形態。圖63A-63B展示了處理的雄性CDKL5敲除小鼠的DCX陽性神經元具有比未處理的雄性CDKL5 KO小鼠更長的過程。圖64顯示在用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的小鼠中，睡眠期間的呼吸暫停顯著降低，表明處理的積極效果。
圖65示出了未處理的CDKL5 +/Y（n = 5）和CDKL5 -/Y（n = 5）小鼠以及用TATκ-eGFP（n = 6）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 6）處理的CDKL5 -/Y小鼠的新生（雙皮質素-陽性）顆粒細胞的總樹突長度。圖66示出了未處理的CDKL5 +/Y（n = 5）和CDKL5 -/Y（n = 5）小鼠以及用TATκ-eGFP（n = 4）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 5）處理的CDKL5 -/Y小鼠的高基體染色的顆粒細胞的總樹突長度。從圖65和圖66中可以看出，與未處理的CDKL5 +/Y小鼠相比，全身給予CDKL5融合蛋白顯著增加了樹突長度。
圖67示出了未處理的CDKL5 +/Y（n = 24）和CDKL5 -/Y（n = 11）小鼠以及用TATκ-eGFP（n = 6）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 5）處理的CDKL5 -/Y小鼠的挖掘發作次數。從圖67中可以看出，與未處理的CDKL5 +/Y小鼠相比，全身給予CDKL5融合蛋白顯著增加了挖掘發作次數。
圖68示出了未處理的CDKL5 +/Y（n = 6）和CDKL5 -/Y（n = 20）小鼠以及用TATκ-eGFP（n = 6）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 5）處理的CDKL5 -/Y小鼠的窩品質。從圖68中可以看出，與未處理的CDKL5 +/Y小鼠相比，全身給予CDKL5融合蛋白顯著增加了窩品質。
圖69示出了在用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的一隻CDKL5 -/Y小鼠中在不同時間點收集的視覺皮層中的神經活動的代表性圖像。在圖69中，較暗的圖像顯示更高水平的神經活動，較亮的圖像顯示較低水平的神經活動。從圖69中可以看出，用TATκ-eGFP處理的小鼠在視覺皮層中具有非常少的神經活動，然而用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的小鼠在整個10天的處理期間恢復了視覺活動，並且在清除期間保留了視覺活動。
圖70示出了用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 -/Y小鼠中處理之前和處理6天和10天之後測量的視覺上誘發的反應的平均幅度。在處理停止（清除）後6-10天，用另外的測量評估作用的持續性。作為參考，在圖案化區域中顯示未處理的野生型反應幅度隨時間的95%置信區間。誤差條表示平均值的標準誤差。雙因子ANOVA（對因子時間的重複測量）揭示了時間X處理相互作用（p ＜ 0.05）；事後Holm-Sidak的多重比較測試：* p ＜ 0.05，**p ＜ 0.01。從圖70中可以看出，與用TATκ-eGFP處理的CDKL5 +/Y小鼠相比，全身給予CDKL5融合蛋白6天和10天顯著降低視覺上誘發的反應的平均幅度。這種趨勢甚至在處理停止後繼續。
圖71示出了來自以下各項的初級視覺皮層（V1）錐體神經元（第2/3層）的樹突棘密度：未處理的CDKL5 +/Y（n = 5）和CDKL5 -/Y（n = 5）小鼠，以及用TATκ-eGFP（n = 4）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 5）處理且在處理結束時（短期）處死或用TATκ-eGFP（n = 3）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 3）處理且在處理停止後10天（長期）處死的CDKL5 -/Y小鼠。從圖71中可以看出，與未處理的CDKL5 +/Y小鼠相比，全身給予CDKL5融合蛋白顯著增加了樹突棘密度。這種趨勢甚至在處理停止後繼續。
圖72示出了在以下各項的初級視覺皮層（V1）中展現PSD-95免疫反應性的的螢光斑點數目/μm2 ：未處理的CDKL5 +/Y（n = 3）和CDKL5 -/Y（n = 3）小鼠，以及用TATκ-eGFP（n = 4）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 6）處理且在處理結束時（短期）處死或用TATκ-eGFP（n = 4）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 4）處理且在處理停止後10天（長期）處死的CDKL5 -/Y小鼠。從圖72中可以看出，與未處理的CDKL5 +/Y小鼠相比，全身給予CDKL5融合蛋白顯著增加PSD-95螢光斑點數目/μm2 。這種趨勢甚至在處理停止後繼續。
該等數據支持全身（例如，靜脈內）給予CDKL5融合蛋白用於治療CDKL5缺陷、增加樹突長度、增加視覺皮質中的神經活動、以及改善行為。 序列表
SEQ ID NO: 1 CDKL5 115同功型cDNA（缺乏起始子甲硫胺酸的ATG起始密碼子） aagattcctaacattggtaatgtgatgaataaatttgagatccttggggttgtaggtgaaggagcctatggagttgtacttaaatgcagacacaaggaaacacatgaaattgtggcgatcaagaaattcaaggacagtgaagaaaatgaagaagtcaaagaaacgactttacgagagcttaaaatgcttcggactctcaagcaggaaaacattgtggagttgaaggaagcatttcgtcggaggggaaagttgtacttggtgtttgagtatgttgaaaaaaatatgctcgaattgctggaagaaatgccaaatggagttccacctgagaaagtaaaaagctacatctatcagctaatcaaggctattcactggtgccataagaatgatattgtccatcgagatataaaaccagaaaatctcttaatcagccacaatgatgtcctaaaactgtgtgactttggttttgctcgtaatctgtcagaaggcaataatgctaattacacagagtacgttgccaccagatggtatcggtccccagaactcttacttggcgctccctatggaaagtccgtggacatgtggtcggtgggctgtattcttggggagcttagcgatggacagcctttatttcctggagaaagtgaaattgaccaactttttactattcagaaggtgctaggaccacttccatctgagcagatgaagcttttctacagtaatcctcgcttccatgggctccggtttccagctgttaaccatcctcagtccttggaaagaagataccttggaattttgaatagtgttctacttgacctaatgaagaatttactgaagttggacccagctgacagatacttgacagaacagtgtttgaatcaccctacatttcaaacccagagacttctggatcgttctccttcaaggtcagcaaaaagaaaaccttaccatgtggaaagcagcacattgtctaatagaaaccaagccggcaaaagtactgctttgcagtctcaccacagatctaacagcaaggacatccagaacctgagtgtaggcctgccccgggctgacgaaggtctccctgccaatgaaagcttcctaaatggaaaccttgctggagctagtcttagtccactgcacaccaaaacctaccaagcaagcagccagcctgggtctaccagcaaagatctcaccaacaacaacataccacaccttcttagcccaaaagaagccaagtcaaaaacagagtttgattttaatattgacccaaagccttcagaaggcccagggacaaagtacctcaagtcaaacagcagatctcagcagaaccgccactcattcatggaaagctctcaaagcaaagctgggacactgcagcccaatgaaaagcagagtcggcatagctatattgacacaattccccagtcctctaggagtccctcctacaggaccaaggccaaaagccatggggcactgagtgactccaagtctgtgagcaacctttctgaagccagggcccaaattgcggagcccagtaccagtaggtacttcccatctagctgcttagacttgaattctcccaccagcccaacccccaccagacacagtgacacgagaactttgctcagcccttctggaagaaataaccgaaatgagggaacgctggactcacgtcgaaccacaaccagacattctaagacgatggaggaattgaagctgccggagcacatggacagtagccattcccattcactgtctgcacctcacgaatctttttcttatggactgggctacaccagccccttttcttcccagcaacgtcctcataggcattctatgtatgtgacccgtgacaaagtgagagccaagggcttggatggaagcttgagcatagggcaagggatggcagctagagccaacagcctgcaactcttgtcaccccagcctggagaacagctccctccagagatgactgtggcaagatcttcggtcaaagagacctccagagaaggcacctcttccttccatacacgccagaagtctgagggtggagtgtatcatgacccacactctgatgatggcacagcccccaaagaaaatagacacctatacaatgatcctgtgccaaggagagttggtagcttttacagagtgccatctccacgtccagacaattctttccatgaaaataatgtgtcaactagagtttcttctctaccatcagagagcagttctggaaccaaccactcaaaaagacaaccagcattcgatccatggaaaagtcctgaaaatattagtcattcagagcaactcaaggaaaaagagaagcaaggatttttcaggtcaatgaaaaagaaaaagaagaaatctcaaacagtacccaattccgacagccctgatcttctgacgttgcagaaatccattcattctgctagcactccaagcagcagaccaaaggagtggcgccccgagaagatctcagatctgcagacccaaagccagccattaaaatcactgcgcaagttgttacatctctcttcggcctcaaatcacccggcttcctcagatccccgcttccagcccttaacagctcaacaaaccaaaaattccttctcagaaattcggattcaccccctgagccaggcctctggcgggagcagcaacatccggcaggaacccgcaccgaagggcaggccagccctccagctgccagacggtggatgtgatggcagaagacagagacaccattctggaccccaagatagacgcttcatgttaaggacgacagaacaacaaggagaatacttctgctgtggtgacccaaagaagcctcacactccgtgcgtcccaaaccgagcccttcatcgtccaatctccagtcctgctccctatccagtactccaggtccgaggcacttccatgtgcccgacactccaggtccgaggcactgatgctttcagctgcccaacccagcaatccgggttctctttcttcgtgagacacgttatgagggaagccctgattcacagggcccaggtaaaccaagctgcgctcctgacataccatgagaatgcggcactgacgggcaag
SEQ ID NO: 2 CDKL5同功型115多肽（缺乏起始子甲硫胺酸） KIPNIGNVMNKFEILGVVGEGAYGVVLKCRHKETHEIVAIKKFKDSEENEEVKETTLRELKMLRTLKQENIVELKEAFRRRGKLYLVFEYVEKNMLELLEEMPNGVPPEKVKSYIYQLIKAIHWCHKNDIVHRDIKPENLLISHNDVLKLCDFGFARNLSEGNNANYTEYVATRWYRSPELLLGAPYGKSVDMWSVGCILGELSDGQPLFPGESEIDQLFTIQKVLGPLPSEQMKLFYSNPRFHGLRFPAVNHPQSLERRYLGILNSVLLDLMKNLLKLDPADRYLTEQCLNHPTFQTQRLLDRSPSRSAKRKPYHVESSTLSNRNQAGKSTALQSHHRSNSKDIQNLSVGLPRADEGLPANESFLNGNLAGASLSPLHTKTYQASSQPGSTSKDLTNNNIPHLLSPKEAKSKTEFDFNIDPKPSEGPGTKYLKSNSRSQQNRHSFMESSQSKAGTLQPNEKQSRHSYIDTIPQSSRSPSYRTKAKSHGALSDSKSVSNLSEARAQIAEPSTSRYFPSSCLDLNSPTSPTPTRHSDTRTLLSPSGRNNRNEGTLDSRRTTTRHSKTMEELKLPEHMDSSHSHSLSAPHESFSYGLGYTSPFSSQQRPHRHSMYVTRDKVRAKGLDGSLSIGQGMAARANSLQLLSPQPGEQLPPEMTVARSSVKETSREGTSSFHTRQKSEGGVYHDPHSDDGTAPKENRHLYNDPVPRRVGSFYRVPSPRPDNSFHENNVSTRVSSLPSESSSGTNHSKRQPAFDPWKSPENISHSEQLKEKEKQGFFRSMKKKKKKSQTVPNSDSPDLLTLQKSIHSASTPSSRPKEWRPEKISDLQTQSQPLKSLRKLLHLSSASNHPASSDPRFQPLTAQQTKNSFSEIRIHPLSQASGGSSNIRQEPAPKGRPALQLPDGGCDGRRQRHHSGPQDRRFMLRTTEQQGEYFCCGDPKKPHTPCVPNRALHRPISSPAPYPVLQVRGTSMCPTLQVRGTDAFSCPTQQSGFSFFVRHVMREALIHRAQVNQAALLTYHENAALTGK
SEQ ID NO: 3 TATκ多核苷酸序列 Tacgccagaaaggccgccaggcaggccagggca
SEQ ID NO: 4 TATκ多肽序列 YARKAARQARA
SEQ ID NO: 5 Igκ-鏈前導多核苷酸序列 Atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggt
SEQ ID NO: 6 Igκ鏈前導多肽 METDTLLLWVLLLWVPGSTG
SEQ ID NO: 7 CDKL5 115同功型融合蛋白（Igκ-TATκ-CDKL5(115)-MYC-HIS）多核苷酸 atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccaggcgcgcgcgccgtacgaagcttgcggcctacgccagaaaggccgccaggcaggccagggcaccggtgaagattcctaacattggtaatgtgatgaataaatttgagatccttggggttgtaggtgaaggagcctatggagttgtacttaaatgcagacacaaggaaacacatgaaattgtggcgatcaagaaattcaaggacagtgaagaaaatgaagaagtcaaagaaacgactttacgagagcttaaaatgcttcggactctcaagcaggaaaacattgtggagttgaaggaagcatttcgtcggaggggaaagttgtacttggtgtttgagtatgttgaaaaaaatatgctcgaattgctggaagaaatgccaaatggagttccacctgagaaagtaaaaagctacatctatcagctaatcaaggctattcactggtgccataagaatgatattgtccatcgagatataaaaccagaaaatctcttaatcagccacaatgatgtcctaaaactgtgtgactttggttttgctcgtaatctgtcagaaggcaataatgctaattacacagagtacgttgccaccagatggtatcggtccccagaactcttacttggcgctccctatggaaagtccgtggacatgtggtcggtgggctgtattcttggggagcttagcgatggacagcctttatttcctggagaaagtgaaattgaccaactttttactattcagaaggtgctaggaccacttccatctgagcagatgaagcttttctacagtaatcctcgcttccatgggctccggtttccagctgttaaccatcctcagtccttggaaagaagataccttggaattttgaatagtgttctacttgacctaatgaagaatttactgaagttggacccagctgacagatacttgacagaacagtgtttgaatcaccctacatttcaaacccagagacttctggatcgttctccttcaaggtcagcaaaaagaaaaccttaccatgtggaaagcagcacattgtctaatagaaaccaagccggcaaaagtactgctttgcagtctcaccacagatctaacagcaaggacatccagaacctgagtgtaggcctgccccgggctgacgaaggtctccctgccaatgaaagcttcctaaatggaaaccttgctggagctagtcttagtccactgcacaccaaaacctaccaagcaagcagccagcctgggtctaccagcaaagatctcaccaacaacaacataccacaccttcttagcccaaaagaagccaagtcaaaaacagagtttgattttaatattgacccaaagccttcagaaggcccagggacaaagtacctcaagtcaaacagcagatctcagcagaaccgccactcattcatggaaagctctcaaagcaaagctgggacactgcagcccaatgaaaagcagagtcggcatagctatattgacacaattccccagtcctctaggagtccctcctacaggaccaaggccaaaagccatggggcactgagtgactccaagtctgtgagcaacctttctgaagccagggcccaaattgcggagcccagtaccagtaggtacttcccatctagctgcttagacttgaattctcccaccagcccaacccccaccagacacagtgacacgagaactttgctcagcccttctggaagaaataaccgaaatgagggaacgctggactcacgtcgaaccacaaccagacattctaagacgatggaggaattgaagctgccggagcacatggacagtagccattcccattcactgtctgcacctcacgaatctttttcttatggactgggctacaccagccccttttcttcccagcaacgtcctcataggcattctatgtatgtgacccgtgacaaagtgagagccaagggcttggatggaagcttgagcatagggcaagggatggcagctagagccaacagcctgcaactcttgtcaccccagcctggagaacagctccctccagagatgactgtggcaagatcttcggtcaaagagacctccagagaaggcacctcttccttccatacacgccagaagtctgagggtggagtgtatcatgacccacactctgatgatggcacagcccccaaagaaaatagacacctatacaatgatcctgtgccaaggagagttggtagcttttacagagtgccatctccacgtccagacaattctttccatgaaaataatgtgtcaactagagtttcttctctaccatcagagagcagttctggaaccaaccactcaaaaagacaaccagcattcgatccatggaaaagtcctgaaaatattagtcattcagagcaactcaaggaaaaagagaagcaaggatttttcaggtcaatgaaaaagaaaaagaagaaatctcaaacagtacccaattccgacagccctgatcttctgacgttgcagaaatccattcattctgctagcactccaagcagcagaccaaaggagtggcgccccgagaagatctcagatctgcagacccaaagccagccattaaaatcactgcgcaagttgttacatctctcttcggcctcaaatcacccggcttcctcagatccccgcttccagcccttaacagctcaacaaaccaaaaattccttctcagaaattcggattcaccccctgagccaggcctctggcgggagcagcaacatccggcaggaacccgcaccgaagggcaggccagccctccagctgccagacggtggatgtgatggcagaagacagagacaccattctggaccccaagatagacgcttcatgttaaggacgacagaacaacaaggagaatacttctgctgtggtgacccaaagaagcctcacactccgtgcgtcccaaaccgagcccttcatcgtccaatctccagtcctgctccctatccagtactccaggtccgaggcacttccatgtgcccgacactccaggtccgaggcactgatgctttcagctgcccaacccagcaatccgggttctctttcttcgtgagacacgttatgagggaagccctgattcacagggcccaggtaaaccaagctgcgctcctgacataccatgagaatgcggcactgacgggcaagtccgctcgaggagggcccgaacaaaaactcatctcagaagaggatctgaatagcgccgtcgaccatcatcatcatcatcattga
SEQ ID NO: 8 CDKL5 115同功型融合蛋白（Igκ-TATκ-CDKL5(115)-MYC-HIS）多肽 METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPARRARRTKLAAYARKAARQARAPVKIPNIGNVMNKFEILGVVGEGAYGVVLKCRHKETHEIVAIKKFKDSEENEEVKETTLRELKMLRTLKQENIVELKEAFRRRGKLYLVFEYVEKNMLELLEEMPNGVPPEKVKSYIYQLIKAIHWCHKNDIVHRDIKPENLLISHNDVLKLCDFGFARNLSEGNNANYTEYVATRWYRSPELLLGAPYGKSVDMWSVGCILGELSDGQPLFPGESEIDQLFTIQKVLGPLPSEQMKLFYSNPRFHGLRFPAVNHPQSLERRYLGILNSVLLDLMKNLLKLDPADRYLTEQCLNHPTFQTQRLLDRSPSRSAKRKPYHVESSTLSNRNQAGKSTALQSHHRSNSKDIQNLSVGLPRADEGLPANESFLNGNLAGASLSPLHTKTYQASSQPGSTSKDLTNNNIPHLLSPKEAKSKTEFDFNIDPKPSEGPGTKYLKSNSRSQQNRHSFMESSQSKAGTLQPNEKQSRHSYIDTIPQSSRSPSYRTKAKSHGALSDSKSVSNLSEARAQIAEPSTSRYFPSSCLDLNSPTSPTPTRHSDTRTLLSPSGRNNRNEGTLDSRRTTTRHSKTMEELKLPEHMDSSHSHSLSAPHESFSYGLGYTSPFSSQQRPHRHSMYVTRDKVRAKGLDGSLSIGQGMAARANSLQLLSPQPGEQLPPEMTVARSSVKETSREGTSSFHTRQKSEGGVYHDPHSDDGTAPKENRHLYNDPVPRRVGSFYRVPSPRPDNSFHENNVSTRVSSLPSESSSGTNHSKRQPAFDPWKSPENISHSEQLKEKEKQGFFRSMKKKKKKSQTVPNSDSPDLLTLQKSIHSASTPSSRPKEWRPEKISDLQTQSQPLKSLRKLLHLSSASNHPASSDPRFQPLTAQQTKNSFSEIRIHPLSQASGGSSNIRQEPAPKGRPALQLPDGGCDGRRQRHHSGPQDRRFMLRTTEQQGEYFCCGDPKKPHTPCVPNRALHRPISSPAPYPVLQVRGTSMCPTLQVRGTDAFSCPTQQSGFSFFVRHVMREALIHRAQVNQAALLTYHENAALTGKSARGGPEQKLISEEDLNSAVDHHHHHH
SEQ ID NO: 9 CDKL5 115同功型融合蛋白（Igk-TATκ-eGFP-CDKL5(115)-MYC-HIS）多核苷酸。底線表示起始子甲硫胺酸的密碼子。 gctagccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccaggcgcgcgcgccgtacgaagcttgcggcctacgccagaaaggccgccaggcaggccagggcaccggtcgccaccatggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtccggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggtgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtccggactcagatctcgagcgaagattcctaacattggtaatgtgatgaataaatttgagatccttggggttgtaggtgaaggagcctatggagttgtacttaaatgcagacacaaggaaacacatgaaattgtggcgatcaagaaattcaaggacagtgaagaaaatgaagaagtcaaagaaacgactttacgagagcttaaaatgcttcggactctcaagcaggaaaacattgtggagttgaaggaagcatttcgtcggaggggaaagttgtacttggtgtttgagtatgttgaaaaaaatatgctcgaattgctggaagaaatgccaaatggagttccacctgagaaagtaaaaagctacatctatcagctaatcaaggctattcactggtgccataagaatgatattgtccatcgagatataaaaccagaaaatctcttaatcagccacaatgatgtcctaaaactgtgtgactttggttttgctcgtaatctgtcagaaggcaataatgctaattacacagagtacgttgccaccagatggtatcggtccccagaactcttacttggcgctccctatggaaagtccgtggacatgtggtcggtgggctgtattcttggggagcttagcgatggacagcctttatttcctggagaaagtgaaattgaccaactttttactattcagaaggtgctaggaccacttccatctgagcagatgaagcttttctacagtaatcctcgcttccatgggctccggtttccagctgttaaccatcctcagtccttggaaagaagataccttggaattttgaatagtgttctacttgacctaatgaagaatttactgaagttggacccagctgacagatacttgacagaacagtgtttgaatcaccctacatttcaaacccagagacttctggatcgttctccttcaaggtcagcaaaaagaaaaccttaccatgtggaaagcagcacattgtctaatagaaaccaagccggcaaaagtactgctttgcagtctcaccacagatctaacagcaaggacatccagaacctgagtgtaggcctgccccgggctgacgaaggtctccctgccaatgaaagcttcctaaatggaaaccttgctggagctagtcttagtccactgcacaccaaaacctaccaagcaagcagccagcctgggtctaccagcaaagatctcaccaacaacaacataccacaccttcttagcccaaaagaagccaagtcaaaaacagagtttgattttaatattgacccaaagccttcagaaggcccagggacaaagtacctcaagtcaaacagcagatctcagcagaaccgccactcattcatggaaagctctcaaagcaaagctgggacactgcagcccaatgaaaagcagagtcggcatagctatattgacacaattccccagtcctctaggagtccctcctacaggaccaaggccaaaagccatggggcactgagtgactccaagtctgtgagcaacctttctgaagccagggcccaaattgcggagcccagtaccagtaggtacttcccatctagctgcttagacttgaattctcccaccagcccaacccccaccagacacagtgacacgagaactttgctcagcccttctggaagaaataaccgaaatgagggaacgctggactcacgtcgaaccacaaccagacattctaagacgatggaggaattgaagctgccggagcacatggacagtagccattcccattcactgtctgcacctcacgaatctttttcttatggactgggctacaccagccccttttcttcccagcaacgtcctcataggcattctatgtatgtgacccgtgacaaagtgagagccaagggcttggatggaagcttgagcatagggcaagggatggcagctagagccaacagcctgcaactcttgtcaccccagcctggagaacagctccctccagagatgactgtggcaagatcttcggtcaaagagacctccagagaaggcacctcttccttccatacacgccagaagtctgagggtggagtgtatcatgacccacactctgatgatggcacagcccccaaagaaaatagacacctatacaatgatcctgtgccaaggagagttggtagcttttacagagtgccatctccacgtccagacaattctttccatgaaaataatgtgtcaactagagtttcttctctaccatcagagagcagttctggaaccaaccactcaaaaagacaaccagcattcgatccatggaaaagtcctgaaaatattagtcattcagagcaactcaaggaaaaagagaagcaaggatttttcaggtcaatgaaaaagaaaaagaagaaatctcaaacagtacccaattccgacagccctgatcttctgacgttgcagaaatccattcattctgctagcactccaagcagcagaccaaaggagtggcgccccgagaagatctcagatctgcagacccaaagccagccattaaaatcactgcgcaagttgttacatctctcttcggcctcaaatcacccggcttcctcagatccccgcttccagcccttaacagctcaacaaaccaaaaattccttctcagaaattcggattcaccccctgagccaggcctctggcgggagcagcaacatccggcaggaacccgcaccgaagggcaggccagccctccagctgccagacggtggatgtgatggcagaagacagagacaccattctggaccccaagatagacgcttcatgttaaggacgacagaacaacaaggagaatacttctgctgtggtgacccaaagaagcctcacactccgtgcgtcccaaaccgagcccttcatcgtccaatctccagtcctgctccctatccagtactccaggtccgaggcacttccatgtgcccgacactccaggtccgaggcactgatgctttcagctgcccaacccagcaatccgggttctctttcttcgtgagacacgttatgagggaagccctgattcacagggcccaggtaaaccaagctgcgctcctgacataccatgagaatgcggcactgacgggcaagtccgctcgaggagggcccgaacaaaaactcatctcagaagaggatctgaatagcgccgtcgaccatcatcatcatcatcattga
SEQ ID NO: 10 CDKL5 115同功型融合蛋白（Igκ-TATκ-eGFP-CDKL5(115)-MYC-HIS）多肽。從SEQ ID NO: 9的核苷酸11（起始子甲硫胺酸）翻譯。 METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPARRARRTKLAAYARKAARQARAPVATMVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYKSGLRSRAKIPNIGNVMNKFEILGVVGEGAYGVVLKCRHKETHEIVAIKKFKDSEENEEVKETTLRELKMLRTLKQENIVELKEAFRRRGKLYLVFEYVEKNMLELLEEMPNGVPPEKVKSYIYQLIKAIHWCHKNDIVHRDIKPENLLISHNDVLKLCDFGFARNLSEGNNANYTEYVATRWYRSPELLLGAPYGKSVDMWSVGCILGELSDGQPLFPGESEIDQLFTIQKVLGPLPSEQMKLFYSNPRFHGLRFPAVNHPQSLERRYLGILNSVLLDLMKNLLKLDPADRYLTEQCLNHPTFQTQRLLDRSPSRSAKRKPYHVESSTLSNRNQAGKSTALQSHHRSNSKDIQNLSVGLPRADEGLPANESFLNGNLAGASLSPLHTKTYQASSQPGSTSKDLTNNNIPHLLSPKEAKSKTEFDFNIDPKPSEGPGTKYLKSNSRSQQNRHSFMESSQSKAGTLQPNEKQSRHSYIDTIPQSSRSPSYRTKAKSHGALSDSKSVSNLSEARAQIAEPSTSRYFPSSCLDLNSPTSPTPTRHSDTRTLLSPSGRNNRNEGTLDSRRTTTRHSKTMEELKLPEHMDSSHSHSLSAPHESFSYGLGYTSPFSSQQRPHRHSMYVTRDKVRAKGLDGSLSIGQGMAARANSLQLLSPQPGEQLPPEMTVARSSVKETSREGTSSFHTRQKSEGGVYHDPHSDDGTAPKENRHLYNDPVPRRVGSFYRVPSPRPDNSFHENNVSTRVSSLPSESSSGTNHSKRQPAFDPWKSPENISHSEQLKEKEKQGFFRSMKKKKKKSQTVPNSDSPDLLTLQKSIHSASTPSSRPKEWRPEKISDLQTQSQPLKSLRKLLHLSSASNHPASSDPRFQPLTAQQTKNSFSEIRIHPLSQASGGSSNIRQEPAPKGRPALQLPDGGCDGRRQRHHSGPQDRRFMLRTTEQQGEYFCCGDPKKPHTPCVPNRALHRPISSPAPYPVLQVRGTSMCPTLQVRGTDAFSCPTQQSGFSFFVRHVMREALIHRAQVNQAALLTYHENAALTGKSARGGPEQKLISEEDLNSAVDHHHHHH
SEQ ID NO: 11 CDKL5 107同功型融合蛋白（Igκ-TATκ-eGFP-CDKL5(107)-MYC-HIS）多核苷酸 atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccaggcgcgcgcgccgtacgaagcttgcggcctacgccagaaaggccgccaggcaggccagggcaccggtcgccaccatggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtccggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggtgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtccggactcagatctcgagcgaagattcctaacattggtaatgtgatgaataaatttgagatccttggggttgtaggtgaaggagcctatggagttgtacttaaatgcagacacaaggaaacacatgaaattgtggcgatcaagaaattcaaggacagtgaagaaaatgaagaagtcaaagaaacgactttacgagagcttaaaatgcttcggactctcaagcaggaaaacattgtggagttgaaggaagcatttcgtcggaggggaaagttgtacttggtgtttgagtatgttgaaaaaaatatgctcgaattgctggaagaaatgccaaatggagttccacctgagaaagtaaaaagctacatctatcagctaatcaaggctattcactggtgccataagaatgatattgtccatcgagatataaaaccagaaaatctcttaatcagccacaatgatgtcctaaaactgtgtgactttggttttgctcgtaatctgtcagaaggcaataatgctaattacacagagtacgttgccaccagatggtatcggtccccagaactcttacttggcgctccctatggaaagtccgtggacatgtggtcggtgggctgtattcttggggagcttagcgatggacagcctttatttcctggagaaagtgaaattgaccaactttttactattcagaaggtgctaggaccacttccatctgagcagatgaagcttttctacagtaatcctcgcttccatgggctccggtttccagctgttaaccatcctcagtccttggaaagaagataccttggaattttgaatagtgttctacttgacctaatgaagaatttactgaagttggacccagctgacagatacttgacagaacagtgtttgaatcaccctacatttcaaacccagagacttctggatcgttctccttcaaggtcagcaaaaagaaaaccttaccatgtggaaagcagcacattgtctaatagaaaccaagccggcaaaagtactgctttgcagtctcaccacagatctaacagcaaggacatccagaacctgagtgtaggcctgccccgggctgacgaaggtctccctgccaatgaaagcttcctaaatggaaaccttgctggagctagtcttagtccactgcacaccaaaacctaccaagcaagcagccagcctgggtctaccagcaaagatctcaccaacaacaacataccacaccttcttagcccaaaagaagccaagtcaaaaacagagtttgattttaatattgacccaaagccttcagaaggcccagggacaaagtacctcaagtcaaacagcagatctcagcagaaccgccactcattcatggaaagctctcaaagcaaagctgggacactgcagcccaatgaaaagcagagtcggcatagctatattgacacaattccccagtcctctaggagtccctcctacaggaccaaggccaaaagccatggggcactgagtgactccaagtctgtgagcaacctttctgaagccagggcccaaattgcggagcccagtaccagtaggtacttcccatctagctgcttagacttgaattctcccaccagcccaacccccaccagacacagtgacacgagaactttgctcagcccttctggaagaaataaccgaaatgagggaacgctggactcacgtcgaaccacaaccagacattctaagacgatggaggaattgaagctgccggagcacatggacagtagccattcccattcactgtctgcacctcacgaatctttttcttatggactgggctacaccagccccttttcttcccagcaacgtcctcataggcattctatgtatgtgacccgtgacaaagtgagagccaagggcttggatggaagcttgagcatagggcaagggatggcagctagagccaacagcctgcaactcttgtcaccccagcctggagaacagctccctccagagatgactgtggcaagatcttcggtcaaagagacctccagagaaggcacctcttccttccatacacgccagaagtctgagggtggagtgtatcatgacccacactctgatgatggcacagcccccaaagaaaatagacacctatacaatgatcctgtgccaaggagagttggtagcttttacagagtgccatctccacgtccagacaattctttccatgaaaataatgtgtcaactagagtttcttctctaccatcagagagcagttctggaaccaaccactcaaaaagacaaccagcattcgatccatggaaaagtcctgaaaatattagtcattcagagcaactcaaggaaaaagagaagcaaggatttttcaggtcaatgaaaaagaaaaagaagaaatctcaaacagtacccaattccgacagccctgatcttctgacgttgcagaaatccattcattctgctagcactccaagcagcagaccaaaggagtggcgccccgagaagatctcagatctgcagacccaaagccagccattaaaatcactgcgcaagttgttacatctctcttcggcctcaaatcacccggcttcctcagatccccgcttccagcccttaacagctcaacaaaccaaaaattccttctcagaaattcggattcaccccctgagccaggcctctggcgggagcagcaacatccggcaggaacccgcaccgaagggcaggccagccctccagctgccaggtcagatggatcctggttggcatgtgtcctctgtgaccaggagtgccacagagggcccttcctactctgaacagctgggtgccaaaagtgggccaaatgggcacccctataacagaacaaatcgctcacgaatgccaaatctgaatgatttaaaagagacagccttgtccgctcgaggagggcccgaacaaaaactcatctcagaagaggatctgaatagcgccgtcgaccatcatcatcatcatcattga
SEQ ID NO: 12 CDKL5 107同功型融合蛋白（Igκ-TATκ-eGFP-CDKL5(107)-MYC-HIS）多肽 METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPARRARRTKLAAYARKAARQARAPVATMVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYKSGLRSRAKIPNIGNVMNKFEILGVVGEGAYGVVLKCRHKETHEIVAIKKFKDSEENEEVKETTLRELKMLRTLKQENIVELKEAFRRRGKLYLVFEYVEKNMLELLEEMPNGVPPEKVKSYIYQLIKAIHWCHKNDIVHRDIKPENLLISHNDVLKLCDFGFARNLSEGNNANYTEYVATRWYRSPELLLGAPYGKSVDMWSVGCILGELSDGQPLFPGESEIDQLFTIQKVLGPLPSEQMKLFYSNPRFHGLRFPAVNHPQSLERRYLGILNSVLLDLMKNLLKLDPADRYLTEQCLNHPTFQTQRLLDRSPSRSAKRKPYHVESSTLSNRNQAGKSTALQSHHRSNSKDIQNLSVGLPRADEGLPANESFLNGNLAGASLSPLHTKTYQASSQPGSTSKDLTNNNIPHLLSPKEAKSKTEFDFNIDPKPSEGPGTKYLKSNSRSQQNRHSFMESSQSKAGTLQPNEKQSRHSYIDTIPQSSRSPSYRTKAKSHGALSDSKSVSNLSEARAQIAEPSTSRYFPSSCLDLNSPTSPTPTRHSDTRTLLSPSGRNNRNEGTLDSRRTTTRHSKTMEELKLPEHMDSSHSHSLSAPHESFSYGLGYTSPFSSQQRPHRHSMYVTRDKVRAKGLDGSLSIGQGMAARANSLQLLSPQPGEQLPPEMTVARSSVKETSREGTSSFHTRQKSEGGVYHDPHSDDGTAPKENRHLYNDPVPRRVGSFYRVPSPRPDNSFHENNVSTRVSSLPSESSSGTNHSKRQPAFDPWKSPENISHSEQLKEKEKQGFFRSMKKKKKKSQTVPNSDSPDLLTLQKSIHSASTPSSRPKEWRPEKISDLQTQSQPLKSLRKLLHLSSASNHPASSDPRFQPLTAQQTKNSFSEIRIHPLSQASGGSSNIRQEPAPKGRPALQLPGQMDPGWHVSSVTRSATEGPSYSEQLGAKSGPNGHPYNRTNRSRMPNLNDLKETALSARGGPEQKLISEEDLNSAVDHHHHHH
SEQ ID NO: 13 CDKL5 107同功型融合蛋白（Igk-TATκ-CDKL5(107)-3XFLAG）多核苷酸。底線表示起始子甲硫胺酸的密碼子。 gctagccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccaggcgcgcgcgccgtacgaagcttgcggcctacgccagaaaggccgccaggcaggccagggcaccggtgaagattcctaacattggtaatgtgatgaataaatttgagatccttggggttgtaggtgaaggagcctatggagttgtacttaaatgcagacacaaggaaacacatgaaattgtggcgatcaagaaattcaaggacagtgaagaaaatgaagaagtcaaagaaacgactttacgagagcttaaaatgcttcggactctcaagcaggaaaacattgtggagttgaaggaagcatttcgtcggaggggaaagttgtacttggtgtttgagtatgttgaaaaaaatatgctcgaattgctggaagaaatgccaaatggagttccacctgagaaagtaaaaagctacatctatcagctaatcaaggctattcactggtgccataagaatgatattgtccatcgagatataaaaccagaaaatctcttaatcagccacaatgatgtcctaaaactgtgtgactttggttttgctcgtaatctgtcagaaggcaataatgctaattacacagagtacgttgccaccagatggtatcggtccccagaactcttacttggcgctccctatggaaagtccgtggacatgtggtcggtgggctgtattcttggggagcttagcgatggacagcctttatttcctggagaaagtgaaattgaccaactttttactattcagaaggtgctaggaccacttccatctgagcagatgaagcttttctacagtaatcctcgcttccatgggctccggtttccagctgttaaccatcctcagtccttggaaagaagataccttggaattttgaatagtgttctacttgacctaatgaagaatttactgaagttggacccagctgacagatacttgacagaacagtgtttgaatcaccctacatttcaaacccagagacttctggatcgttctccttcaaggtcagcaaaaagaaaaccttaccatgtggaaagcagcacattgtctaatagaaaccaagccggcaaaagtactgctttgcagtctcaccacagatctaacagcaaggacatccagaacctgagtgtaggcctgccccgggctgacgaaggtctccctgccaatgaaagcttcctaaatggaaaccttgctggagctagtcttagtccactgcacaccaaaacctaccaagcaagcagccagcctgggtctaccagcaaagatctcaccaacaacaacataccacaccttcttagcccaaaagaagccaagtcaaaaacagagtttgattttaatattgacccaaagccttcagaaggcccagggacaaagtacctcaagtcaaacagcagatctcagcagaaccgccactcattcatggaaagctctcaaagcaaagctgggacactgcagcccaatgaaaagcagagtcggcatagctatattgacacaattccccagtcctctaggagtccctcctacaggaccaaggccaaaagccatggggcactgagtgactccaagtctgtgagcaacctttctgaagccagggcccaaattgcggagcccagtaccagtaggtacttcccatctagctgcttagacttgaattctcccaccagcccaacccccaccagacacagtgacacgagaactttgctcagcccttctggaagaaataaccgaaatgagggaacgctggactcacgtcgaaccacaaccagacattctaagacgatggaggaattgaagctgccggagcacatggacagtagccattcccattcactgtctgcacctcacgaatctttttcttatggactgggctacaccagccccttttcttcccagcaacgtcctcataggcattctatgtatgtgacccgtgacaaagtgagagccaagggcttggatggaagcttgagcatagggcaagggatggcagctagagccaacagcctgcaactcttgtcaccccagcctggagaacagctccctccagagatgactgtggcaagatcttcggtcaaagagacctccagagaaggcacctcttccttccatacacgccagaagtctgagggtggagtgtatcatgacccacactctgatgatggcacagcccccaaagaaaatagacacctatacaatgatcctgtgccaaggagagttggtagcttttacagagtgccatctccacgtccagacaattctttccatgaaaataatgtgtcaactagagtttcttctctaccatcagagagcagttctggaaccaaccactcaaaaagacaaccagcattcgatccatggaaaagtcctgaaaatattagtcattcagagcaactcaaggaaaaagagaagcaaggatttttcaggtcaatgaaaaagaaaaagaagaaatctcaaacagtacccaattccgacagccctgatcttctgacgttgcagaaatccattcattctgctagcactccaagcagcagaccaaaggagtggcgccccgagaagatctcagatctgcagacccaaagccagccattaaaatcactgcgcaagttgttacatctctcttcggcctcaaatcacccggcttcctcagatccccgcttccagcccttaacagctcaacaaaccaaaaattccttctcagaaattcggattcaccccctgagccaggcctctggcgggagcagcaacatccggcaggaacccgcaccgaagggcaggccagccctccagctgccaggtcagatggatcctggttggcatgtgtcctctgtgaccaggagtgccacagagggcccttcctactctgaacagctgggtgccaaaagtgggccaaatgggcacccctataacagaacaaatcgctcacgaatgccaaatctgaatgatttaaaagagacagccttgtctagaggatcccgggctgactacaaagaccatgacggtgattataaagatcatgacatcgactacaaggatgacgatgacaagtag
SEQ ID NO: 14 CDKL5 107同功型融合蛋白（Igκ-TATκ-CDKL5(107)-3XFLAG）多核苷 KLAAYARKAARQARAPVKIPNIGNVMNKFEILGVVGEGAYGVVLKCRHKETHEIVAIKKFKDSEENEEVKETTLRELKMLRTLKQENIVELKEAFRRRGKLYLVFEYVEKNMLELLEEMPNGVPPEKVKSYIYQLIKAIHWCHKNDIVHRDIKPENLLISHNDVLKLCDFGFARNLSEGNNANYTEYVATRWYRSPELLLGAPYGKSVDMWSVGCILGELSDGQPLFPGESEIDQLFTIQKVLGPLPSEQMKLFYSNPRFHGLRFPAVNHPQSLERRYLGILNSVLLDLMKNLLKLDPADRYLTEQCLNHPTFQTQRLLDRSPSRSAKRKPYHVESSTLSNRNQAGKSTALQSHHRSNSKDIQNLSVGLPRADEGLPANESFLNGNLAGASLSPLHTKTYQASSQPGSTSKDLTNNNIPHLLSPKEAKSKTEFDFNIDPKPSEGPGTKYLKSNSRSQQNRHSFMESSQSKAGTLQPNEKQSRHSYIDTIPQSSRSPSYRTKAKSHGALSDSKSVSNLSEARAQIAEPSTSRYFPSSCLDLNSPTSPTPTRHSDTRTLLSPSGRNNRNEGTLDSRRTTTRHSKTMEELKLPEHMDSSHSHSLSAPHESFSYGLGYTSPFSSQQRPHRHSMYVTRDKVRAKGLDGSLSIGQGMAARANSLQLLSPQPGEQLPPEMTVARSSVKETSREGTSSFHTRQKSEGGVYHDPHSDDGTAPKENRHLYNDPVPRRVGSFYRVPSPRPDNSFHENNVSTRVSSLPSESSSGTNHSKRQPAFDPWKSPENISHSEQLKEKEKQGFFRSMKKKKKKSQTVPNSDSPDLLTLQKSIHSASTPSSRPKEWRPEKISDLQTQSQPLKSLRKLLHLSSASNHPASSDPRFQPLTAQQTKNSFSEIRIHPLSQASGGSSNIRQEPAPKGRPALQLPGQMDPGWHVSSVTRSATEGPSYSEQLGAKSGPNGHPYNRTNRSRMPNLNDLKETALSRGSRADYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK
SEQ ID NO: 15 CDKL5 107同功型多核苷酸。序列缺乏起始子甲硫胺酸的密碼子。 aagattcctaacattggtaatgtgatgaataaatttgagatccttggggttgtaggtgaaggagcctatggagttgtacttaaatgcagacacaaggaaacacatgaaattgtggcgatcaagaaattcaaggacagtgaagaaaatgaagaagtcaaagaaacgactttacgagagcttaaaatgcttcggactctcaagcaggaaaacattgtggagttgaaggaagcatttcgtcggaggggaaagttgtacttggtgtttgagtatgttgaaaaaaatatgctcgaattgctggaagaaatgccaaatggagttccacctgagaaagtaaaaagctacatctatcagctaatcaaggctattcactggtgccataagaatgatattgtccatcgagatataaaaccagaaaatctcttaatcagccacaatgatgtcctaaaactgtgtgactttggttttgctcgtaatctgtcagaaggcaataatgctaattacacagagtacgttgccaccagatggtatcggtccccagaactcttacttggcgctccctatggaaagtccgtggacatgtggtcggtgggctgtattcttggggagcttagcgatggacagcctttatttcctggagaaagtgaaattgaccaactttttactattcagaaggtgctaggaccacttccatctgagcagatgaagcttttctacagtaatcctcgcttccatgggctccggtttccagctgttaaccatcctcagtccttggaaagaagataccttggaattttgaatagtgttctacttgacctaatgaagaatttactgaagttggacccagctgacagatacttgacagaacagtgtttgaatcaccctacatttcaaacccagagacttctggatcgttctccttcaaggtcagcaaaaagaaaaccttaccatgtggaaagcagcacattgtctaatagaaaccaagccggcaaaagtactgctttgcagtctcaccacagatctaacagcaaggacatccagaacctgagtgtaggcctgccccgggctgacgaaggtctccctgccaatgaaagcttcctaaatggaaaccttgctggagctagtcttagtccactgcacaccaaaacctaccaagcaagcagccagcctgggtctaccagcaaagatctcaccaacaacaacataccacaccttcttagcccaaaagaagccaagtcaaaaacagagtttgattttaatattgacccaaagccttcagaaggcccagggacaaagtacctcaagtcaaacagcagatctcagcagaaccgccactcattcatggaaagctctcaaagcaaagctgggacactgcagcccaatgaaaagcagagtcggcatagctatattgacacaattccccagtcctctaggagtccctcctacaggaccaaggccaaaagccatggggcactgagtgactccaagtctgtgagcaacctttctgaagccagggcccaaattgcggagcccagtaccagtaggtacttcccatctagctgcttagacttgaattctcccaccagcccaacccccaccagacacagtgacacgagaactttgctcagcccttctggaagaaataaccgaaatgagggaacgctggactcacgtcgaaccacaaccagacattctaagacgatggaggaattgaagctgccggagcacatggacagtagccattcccattcactgtctgcacctcacgaatctttttcttatggactgggctacaccagccccttttcttcccagcaacgtcctcataggcattctatgtatgtgacccgtgacaaagtgagagccaagggcttggatggaagcttgagcatagggcaagggatggcagctagagccaacagcctgcaactcttgtcaccccagcctggagaacagctccctccagagatgactgtggcaagatcttcggtcaaagagacctccagagaaggcacctcttccttccatacacgccagaagtctgagggtggagtgtatcatgacccacactctgatgatggcacagcccccaaagaaaatagacacctatacaatgatcctgtgccaaggagagttggtagcttttacagagtgccatctccacgtccagacaattctttccatgaaaataatgtgtcaactagagtttcttctctaccatcagagagcagttctggaaccaaccactcaaaaagacaaccagcattcgatccatggaaaagtcctgaaaatattagtcattcagagcaactcaaggaaaaagagaagcaaggatttttcaggtcaatgaaaaagaaaaagaagaaatctcaaacagtacccaattccgacagccctgatcttctgacgttgcagaaatccattcattctgctagcactccaagcagcagaccaaaggagtggcgccccgagaagatctcagatctgcagacccaaagccagccattaaaatcactgcgcaagttgttacatctctcttcggcctcaaatcacccggcttcctcagatccccgcttccagcccttaacagctcaacaaaccaaaaattccttctcagaaattcggattcaccccctgagccaggcctctggcgggagcagcaacatccggcaggaacccgcaccgaagggcaggccagccctccagctgccaggtcagatggatcctggttggcatgtgtcctctgtgaccaggagtgccacagagggcccttcctactctgaacagctgggtgccaaaagtgggccaaatgggcacccctataacagaacaaatcgctcacgaatgccaaatctgaatgatttaaaagagacagccttg
SEQ ID NO: 16 CDKL5 107同功型多肽。序列缺乏起始子甲硫胺酸。 KIPNIGNVMNKFEILGVVGEGAYGVVLKCRHKETHEIVAIKKFKDSEENEEVKETTLRELKMLRTLKQENIVELKEAFRRRGKLYLVFEYVEKNMLELLEEMPNGVPPEKVKSYIYQLIKAIHWCHKNDIVHRDIKPENLLISHNDVLKLCDFGFARNLSEGNNANYTEYVATRWYRSPELLLGAPYGKSVDMWSVGCILGELSDGQPLFPGESEIDQLFTIQKVLGPLPSEQMKLFYSNPRFHGLRFPAVNHPQSLERRYLGILNSVLLDLMKNLLKLDPADRYLTEQCLNHPTFQTQRLLDRSPSRSAKRKPYHVESSTLSNRNQAGKSTALQSHHRSNSKDIQNLSVGLPRADEGLPANESFLNGNLAGASLSPLHTKTYQASSQPGSTSKDLTNNNIPHLLSPKEAKSKTEFDFNIDPKPSEGPGTKYLKSNSRSQQNRHSFMESSQSKAGTLQPNEKQSRHSYIDTIPQSSRSPSYRTKAKSHGALSDSKSVSNLSEARAQIAEPSTSRYFPSSCLDLNSPTSPTPTRHSDTRTLLSPSGRNNRNEGTLDSRRTTTRHSKTMEELKLPEHMDSSHSHSLSAPHESFSYGLGYTSPFSSQQRPHRHSMYVTRDKVRAKGLDGSLSIGQGMAARANSLQLLSPQPGEQLPPEMTVARSSVKETSREGTSSFHTRQKSEGGVYHDPHSDDGTAPKENRHLYNDPVPRRVGSFYRVPSPRPDNSFHENNVSTRVSSLPSESSSGTNHSKRQPAFDPWKSPENISHSEQLKEKEKQGFFRSMKKKKKKSQTVPNSDSPDLLTLQKSIHSASTPSSRPKEWRPEKISDLQTQSQPLKSLRKLLHLSSASNHPASSDPRFQPLTAQQTKNSFSEIRIHPLSQASGGSSNIRQEPAPKGRPALQLPGQMDPGWHVSSVTRSATEGPSYSEQLGAKSGPNGHPYNRTNRSRMPNLNDLKETAL
6000‧‧‧步驟
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圖1示出了產生CDKL5融合蛋白的方法的一個實施方式，其中該CDKL5融合蛋白由培養的細胞產生並且被分泌到周圍培養基中。
圖2示出了產生CDKL5融合蛋白的方法的一個實施方式，其中該CDKL5融合蛋白未被分泌到周圍的細胞培養基中。
圖3示出了經由轉導或轉染（未具體示出）自體細胞向受試者遞送CDKL5融合蛋白的方法的一個實施方式。
圖4A和圖4B展示了來自轉染的HEK 293T細胞中的TATκ-CDKL5115 蛋白表現的西方墨點分析結果。用eGFP蛋白標記TATκ-CDKL5115 融合蛋白以允許使用抗-GFP抗體進行西方墨點分析。圖4A展示了來自轉染的HEK 293T細胞的細胞提取物中的TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白表現。圖4B展示了從20X濃縮細胞培養基對來自TATκ-eGFP-CDKL5115 轉染的HEK 293T細胞的TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白進行的純化。
圖5A和圖5B展示了來自激酶活性測定的結果（圖5A），證明了TAT-eGFP-CDKL5115 融合蛋白保留了CDKL5自身磷酸化活性。在Ni-NTA樹脂上從培養基中純化TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白。
圖6示出了孵育時間對HEK 293T細胞中的TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白的一個實施方式的轉導效率的影響。
圖7A和圖7B示出了TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的HEK 293T細胞中的CDKL5的定位（圖7B）。圖7A和圖7B展示了與對照（圖7A）（左圖）相比用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白進行HEK 293T細胞轉導的效率。使用抗-GFP抗體進行免疫檢測並且用DAPI複染細胞。白色箭頭指示轉導的HEK 293T細胞。
圖8係展示了來自共聚焦顯微鏡的一系列12張圖像（1-12）的圖像，這12張圖像展示出用純化的TATκ-eGFP-CDKL5115 蛋白處理30分鐘進入SH-SY5Y細胞中的TATκ-eGFP-CDKL5115 轉導。Z堆疊大小係0.4 µm。圖8展示了用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白進行SH-SY5Y細胞轉導的效率。
圖9A和圖9B展示了神經母細胞瘤細胞（SH-SY5Y）中轉導的CDKL5對細胞增殖的影響。與TATκ-eGFP（對照）處理的細胞（圖9A）相比，觀察到TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的細胞（圖9B）具有減少的增殖。白色箭頭指示有絲分裂的細胞核。
圖10示出了展示用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白處理的SH-SY5Y細胞的有絲分裂指數之圖。y-軸示出了有絲分裂細胞/總細胞，表現為% TATκ-eGFP。數據示出為平均值 ± S.E.。*** P ＜ 0.001（t檢驗）。
圖11A-11B係展示了TATκ-eGFP處理的（對照）SH-SY5Y細胞（圖11A）和TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的SH-SY5Y細胞（圖11B）的代表性相位差圖像的圖像。與對照細胞相比，觀察到TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的SH-SY5Y細胞中的神經突生長更大。
圖12示出了展示出用TATκ-eGFP融合蛋白（對照）或TATκ-eGFP-CDKL5115 處理的SH-SY5Y細胞的神經突增生的定量之圖。數據示出為平均值 ± S.E。* P ＜ 0.05（t檢驗）。y-軸以微米示出了神經突（neuritic）長度/細胞。
圖13A-13B示出了展示出如藉由在45日齡的雄性CDKL5野生型（+/Y）（圖13A）和CDKL5敲除（KO）雄性小鼠（-/Y）（圖13B）（它們為半合子型）中的雙皮質素（doublecortin）（DCX）的免疫組織化學所示的新生海馬顆粒細胞的樹突形態和數目的圖像。比例尺 = 50 mm。縮寫：GR，顆粒層；H，門。
圖14A-14B示出了分化的神經元先質細胞（NPC）的雙螢光圖像，展示出與雌性野生型（+/+）（圖14A）神經元培養物相比，來源於2日齡的純合子的雌性CDKL5敲除小鼠（-/-）（圖14B）的神經元培養物中的新神經元（紅色細胞）的產生和成熟減少。具有神經元表型的細胞對β-微管蛋白III（紅色）具有免疫陽性，並且具有星形細胞表型的細胞對GFAP（綠色）具有免疫陽性。使用Hoechst染料（藍色）對細胞核進行染色。比例尺 = 25 μm。
圖15A-15C示出了從來源於用TATκ-eGFP（圖15B）或TATκ-eGFP-CDKL5115 （圖15C）轉導的2日齡的純合子的CDKL5敲除小鼠（-/-）的細胞產生的神經元先質培養物（圖15B和15C），以及來自野生型小鼠（+/+）的神經元先質培養物（圖15A）的代表性圖像。比例尺 = 20 μm。
圖16示出了展示出在來源於新生的（2日齡）野生型雌性（+/+）和純合子的CDKL5 KO（-/-）小鼠的神經元先質培養物中如藉由分化的神經元（對β-微管蛋白III呈陽性的神經元）的總神經突長度所測量的對神經成熟的定量之圖。用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5115 處理培養和分化的細胞。值表示平均值 ± SE。與野生型情況相比，** p ＜ 0.01；與未處理的KO樣品相比，#p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖17A-17F示出了展示出用濃縮培養基（媒介物）（圖17A和圖17D）、TATκ-eGFP（圖17B和圖17E）以及TATκ-eGFP-CDKL5115 （圖17C和圖17F）全身性處理（單一皮下注射）的小鼠（出生後第7天）腦中的CDKL5的免疫檢測的圖像。注射後4小時收集樣品。圖17D-17F分別示出了圖17A-17C中的虛線框的放大圖。藉由使用抗-eGFP抗體（紅色）的免疫組織化學來評價腦中的TATκ-eGFP-CDKL5115 和TATκ-GFP的定位。圖像在感覺運動皮層的水平處獲取。比例尺 = 60 μm（較低放大倍數）和20 μm（較高放大倍數）。
圖18A-18D示出了展示出如圖17A-17F那樣用培養基（媒介物）（圖18A和圖18B）和TATκ-eGFP-CDKL5115 （圖18C和圖18D）全身性處理的小鼠（出生後第7天）腦中的TATκ-eGFP-CDKL5115 的免疫檢測的小腦切片的圖像。注射後4小時收集樣品。藉由使用抗-GFP抗體的免疫組織化學來評價腦中的TATκ-eGFP-CDKL5115 的定位（圖18A-18B）。用DAPI固定載玻片以染色細胞核（圖18B-18C）。縮寫：EGL，外顆粒層；IGL，內顆粒層；ML，分子層；PL，浦肯野（Purkinje）層。比例尺 = 60 μm。
圖19展示了對於TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白向小鼠的腦室內給予的插管的放置。
圖20示出了描繪出用於圖21-34中說明的研究的植入物和融合蛋白注射時間表的草圖。小鼠在植入時為4-6月齡。
圖21A-21C示出了DCX免疫染色的海馬齒狀回切片的圖像，證明了與雄性野生型小鼠（+/Y）（分別為圖21B和圖21A）相比，CDKL5敲除雄性小鼠（-/Y）中新生顆粒細胞的神經突長度和數目減少。觀察到連續五天腦室內給予TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白將雄性CDKL5敲除小鼠（圖21C）中的新生顆粒細胞的神經突長度和數目增加到類似於野生型（圖21A）的水平。比例尺 = 70 μm。
圖22A-22C示出了圖21中的齒狀回的顆粒層的水平下的圖像的放大圖。比例尺 = 25 μm。
圖23A-23C示出了以下各項的新生顆粒細胞的重構樹突樹的實例：CDKL5野生型（WT）雄性小鼠（在本文中也稱為CDKL5 +/Y或+/Y）（圖23A）、CDKL5敲除（KO）雄性小鼠（在本文中也稱為CDKL5 -/Y或-/Y）（圖23B）、和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5115 ）（圖23C）。
圖24A-24B示出了展示出以下各項的齒狀回新生顆粒細胞（DCX陽性細胞）的平均總樹突長度（圖24A）和樹突段的平均數目（圖24B）的定量的圖：CDKL5 WT雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）。值表示平均值 　 SE。與+/Y相比，** p ＜ 0.01；*** p ＜ 0.001；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖25A-25B示出了展示出以下各項的齒狀回新生顆粒細胞的不同級的分支的平均長度（圖25A）和平均數量（圖25B）的定量的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）。值表示平均值 　 SE。與+/Y相比，* p ＜ 0.05；** p ＜ 0.01；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖26示出了展示出以下各項中的凋亡細胞（半胱天冬酶-3陽性細胞）的定量的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）。值表示平均值 　 SE。與+/Y相比，* P ＜ 0.05；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖27示出了展示出以下各項的DG中的DCX陽性細胞的數目的定量的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）。數據表示為細胞數目/mm2。與+/Y相比，* p ＜ 0.05；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖28A-28C示出了展示出來自以下各項的齒狀回（DG）分子層的、處理用於突觸泡蛋白（SYN）免疫螢光的腦切片的代表性圖像：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）（圖28A）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）（圖28B）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）（圖28C）。比例尺 = 80 μm。縮寫：GR，顆粒層；Mol，分子層。
圖29A-29C示出了展示出來自以下各項的齒狀回（DG）分子層的、處理用於磷酸-AKT（P-AKT）免疫螢光的腦切片的代表性圖像：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）（圖29A）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）（圖29B）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）（圖29C）。比例尺 = 80 μm。縮寫：GR，顆粒層；Mol，分子層。
圖30A-30B示出了展示出以下各項中的海馬體的分子層（圖30A）和皮層的III層（圖30B）中的突觸泡蛋白（SYN）光密度的定量的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TAT-eGFP-CDKL5）。數據給出為相對於野生型小鼠的分子層或皮層的相應區的倍數差異。值表示平均值 ± SD。與+/Y相比，**p ＜ 0.01；***p ＜ 0.001；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖31A-31B示出了展示出以下各項中的海馬體的分子層（圖31A）和皮層的V層（圖31B）中的Ser437磷酸化-AKT（PAKT）光密度的定量的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5）。數據給出為相對於野生型小鼠的分子層或皮層的相應區的倍數差異。值表示平均值 ± SD。與+/Y相比，**p ＜ 0.01；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.01（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖32示出了展示出以下各項中的高基體染色的顆粒細胞樹突平均總樹突長度的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）和用媒介物或TATκ-eGFP-CDKL5115 經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）。在海馬切片的右側方案示出了不同的層和CA1錐體細胞和顆粒細胞的位置。齒狀回（DG）的分子層（Mol）含有顆粒細胞樹突。值表示平均值 　 SE。與+/Y相比，**p ＜ 0.01；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖33示出了以下各項的顆粒細胞的高基體染色的樹突狀分支的圖像：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）和用媒介物或TATκ-eGFP-CDKL5115 經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）。
圖34示出了展示了以下各項的顆粒細胞的樹突棘數目的定量的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）和用媒介物或TATκ-eGFP-CDKL5115 經由每天一次、連續5天給予的腦室內注射進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）。值表示平均值 　 SE。與+/Y相比，** p ＜ 0.01；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖35示出了描繪出用於圖36-38中說明的行為研究的植入物和融合蛋白注射時間表的草圖。小鼠在植入時為4-6月齡。
圖36示出了展示出以下各項中的如經由莫氏水迷津測試（Morris Water Maze test）確定的學習期的定量的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y；n = 8）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y；n = 8）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5；n = 6）。值表示平均值 ± SE。與未處理的野生型情況相比，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01，並且與未處理的CDKL5敲除情況相比#P ＜ 0.01，如在ANOVA之後用Fisher LSD檢驗的。
圖37A-37B示出了展示出以下各項中如藉由被動回避測試確定的記憶能力的圖：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y；n = 8）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y；n = 8）和用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5；n = 6）。圖示出了在行為程序的第一天（圖37A）時和第二天（圖37B）時進入黑暗隔區的潛伏時間。值表示平均值 ± SE。與未處理的野生型情況相比*** P ＜ 0.001，並且與未處理的CDKL5敲除小鼠相比# P ＜ 0.01，如在ANOVA之後用Fisher LSD檢驗的。
圖38A-38B示出了展示出如藉由抱攏測試確定的運動能力的定量的圖，其中測量了在2分鐘間隔期間中以下各項的肢抱攏所用的時間總量：CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y；n = 8）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y；n = 8）和根據圖35中的注射時間表用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白進行處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-CDKL5；n = 8）。值表示平均值 ± SD。與+/Y相比，***p ＜ 0.001；與-/Y樣品相比，# p ＜ 0.001（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖39展示了根據圖20（+/Y；n = 8）或圖35（-/Y；n = 6）的治療時間表用TATκ-eGFP-CDKL5115 融合蛋白進行處理的CDKL5野生型雄性（+/Y）和CDKL5敲除雄性（-/Y）小鼠的體重（以克計）。在插管植入之後，使小鼠恢復7天。
圖40A-40F展示了在未經處理的動物和用TATκ-eGFP-CDKL5115 藉由腦室內注射處理5天或10天的動物中同種異體移植炎症因子1（AIF-1）染色的比較。接受注射的小鼠為4-6月齡。
圖41示出了展示在DMEM中培養的HEK 293T細胞中分泌（泳道1-4）和表現（泳道5-8）TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白的西方墨點以及比較TATκ-eGFP-CDKL5115 和TATκ-eGFP-CDKL5107 的表現和分泌模式的圖像。從HEK 293T細胞或來自暫態轉染的培養的HEK 293T細胞的培養基產生提取物。將約15 μg的HEK 293T細胞的總蛋白質提取物載入到凝膠上，載入20 μL的40x濃縮的DMEM培養基以顯示蛋白質分泌。箭頭表示相應的CDKL5融合蛋白。
圖42A-42B示出了展示了CDKL5融合蛋白在HEK 293T（圖42A）和神經母細胞瘤細胞（圖42B）中的穩定性之圖。用含有編碼TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 的多核苷酸的質粒轉染HEK 293T或神經母細胞瘤細胞。24小時後，將細胞與環己醯亞胺（Chx；50 μg/ml）一起孵育持續指定的時間（3小時、6小時或8小時）。藉由CDKL5免疫印漬術來檢測異位表現的CDKL5。
圖43示出了在HEK 293T細胞中展示TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 的蛋白質穩定性的西方墨點的圖像。用TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 轉染HEK 293T細胞。24小時後，將細胞與環己醯亞胺（Chx；50 μg/ml）一起孵育持續指定的時間（3小時和6小時）。
圖44示出了比較TATκ-eGFP-CDKL5115 、TATκ-CDKL5115 和TATκ-eGFP-CDKL5107 對神經母細胞瘤細胞增殖的影響之圖。用TATκ-eGFP、TATκ-eGFP-CDKL5115 、TATκ-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理SH-SY5Y細胞。轉染24小時後，將有絲分裂指數評估為有絲分裂細胞數目比總細胞數目，表現為% TATκ-eGFP。注意，與TATκ-eGFP處理的對照細胞相比，兩種CDKL5同功型顯示對SH-SY5Y有絲分裂相似的抑制活性。值表示平均值 　 SEM。與TATκ-eGFP處理的細胞相比，*** p ＜ 0.001（t檢驗）。
圖45A-45D示出了CDKL5在TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的海馬神經元培養物中的定位。圖45A和45C展示了TATκ-eGFP對照蛋白的轉導效率和亞細胞定位。圖45B和45D展示了TATκ-eGFP-CDKL5107 蛋白的轉導效率和亞細胞定位。使用抗-GFP抗體進行免疫檢測並且用DAPI複染細胞。較高的放大倍數顯示樹突段的放大。
圖46A-46C示出了用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的海馬神經元的樹突段的藉由雷射共聚焦顯微鏡的圖像。圖像示出了TATκ-eGFP-CDKL5107 蛋白與突觸後蛋白質（PSD-95）的共定位。使用抗-GFP抗體進行eGFP-CDKL5免疫檢測（圖45A）。
圖47示出了展示用TATκ-eGFP、TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白處理後CDKL5 KO（-/Y）海馬神經元的樹突長度之圖。值表示平均值 　 SEM。與CDKL5野生型（+/Y）神經元相比，*** p ＜ 0.001；與-/Y神經元相比，# p ＜ 0.05（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖48示出了展示了用TATκ-eGFP、TATκ-eGFP-CDKL5115 或TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白處理後CDKL5 KO（-/Y）海馬神經元的海馬神經元突觸泡蛋白斑點的數目之圖。值表示平均值 　 SEM。與CDKL5野生型（+/Y）神經元相比，*** p ＜ 0.001；與-/Y神經元相比，# p ＜ 0.05（ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖49A-49B示出了描繪CDKL5融合蛋白的治療時間表和給予途徑的草圖。如上所述，雄性CDKL5野生型（CDKL5 +/Y；+/Y）小鼠接受了用TATκ-eGFP（n = 6）進行的處理，而用TATκ-eGFP（n = 6）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 6）處理了KO（CDKL5 -/Y；-/Y）小鼠。治療期由以下各項組成：連續5天的單次每日注射（10 μl注射，約50 ng/注射）、隨後是兩天休息期、然後是單次注射另外的5天。在12天的時間內進行了總共10次注射。小鼠在植入時為4-6月齡。在圖49A-49B中使用的治療時間表、給予途徑和小鼠的年齡適用於圖51-59。
圖50示出了展示在如圖49A-49B中所述接受TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白之後來自莫氏水迷津測試的結果之圖。值表示平均值 　 SE。與用TATκ-eGFP處理的CDKL5野生型小鼠（+/Y）（+/Y + TATκ-eGFP）相比，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.01；與用TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO小鼠（-/Y）（-/Y + TATκ-eGFP）相比，# p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖51A-51C示出了展示來自測量（圖51A）進入前一個平臺象限的潛伏期、（圖51B）進入前一個平臺象限的頻率、（圖51C）在前一個平臺象限中花費的時間百分比的空間記憶之圖。在TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO小鼠（-/Y + TATκ-eGFP）中，所有參數的性能嚴重受損。TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5107 ）顯示出所有參數的統計學顯著的改善，圖51A、51B和51C。值表示平均值 　 SE。與CDKL5野生型小鼠相比，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.01，*** p ＜ 0.001；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO小鼠相比，# p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖52A-52B示出了使用被動回避（PA）測試展示處理對學習和記憶的影響之圖。在處理期和兩天的休息期後，小鼠接受了被動回避（PA）測試。該實驗利用了具有兩個腔室（光明和黑暗）的測試籠子。在第一天，動物被置於光明腔室中並且本能地移動到黑暗腔室中，在該黑暗腔室中，它們遭受單一的不良事件（足部電擊）。圖52A表明對於所有組，進入黑暗腔室的潛伏時間係類似的。在第二天（測試期），將動物再次置於光明腔室。藉由進入黑暗腔室的潛伏時間來測定對不良事件的記憶，並將其呈現在圖52B中。TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP）在此任務中嚴重受損，如藉由與使用TATκ-eGFP處理的CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y + TATκ-eGFP）相比進入黑暗區室的潛伏期減少所證明的。與野生型雄性小鼠相比，TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5107 ）顯示相似的潛伏時間（圖52B）。與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP）相比，該等差異係統計學顯著的。與CDKL5野生型雄性情況相比，** p ＜ 0.01；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO雄性情況相比，# p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖53A-53B示出了（圖53A）用於評估處理對學習和記憶的影響的Y迷津的草圖和（圖53B）展示來自Y迷津測試的結果之圖。用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5107 ）顯示出與用TATκ-eGFP處理的CDKL5野生型小鼠（+/Y + TATκ-eGFP）相似的性能。與野生型情況相比，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.01；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO情況（-/Y + TATκ-eGFP）相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖54A-54B示出了展示在用於評價處理對運動功能的影響的後肢抱攏測試中抱攏（右小鼠）與不抱攏（左小鼠）的圖（圖54A）和圖像（圖54B）。與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO（-/Y + TATκ-eGFP）相比，用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理CDKL5 KO小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5107 ）導致抱攏時間統計學顯著降低。值表示平均值 　 SE。與野生型情況（+/Y + TATκ-eGFP）相比，*** p ＜ 0.001；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO相比，## p ＜ 0.001（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖55A和55B示出了展示在處理的（TATκ-eGFP-CDKL5107 ）和未處理的（+TATκ-eGFP）CDKL5野生型（+/Y）或CDKL5 KO（-/Y）小鼠中呼吸紊亂的圖，如藉由非快速眼動（NREM）（圖55A）和快速眼動（REM）（圖55B）睡眠期間呼吸暫停的次數進行測量的。使用全身體積描記法來測量呼吸暫停。與野生型情況相比，* p ＜ 0.01；** p ＜ 0.01；與CDKL5 KO -/Y情況相比，# p ＜ 0.01（t檢驗）。
圖56A-56D示出了新生顆粒細胞的圖（圖56A）和重構樹突樹（圖56B-56D），展示了用TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白（+ TATκ-eGFP-CDKL5107 ）或TATκ-eGFP（+TATκ-eGFP）處理對CDKL5野生型（+/Y）或CDKL5 KO（-/Y）小鼠的影響。值表示平均值 　 SE。與野生型情況相比，** p ＜ 0.01；與TATκ-eGFP處理的CDKL5 KO情況相比，# p ＜ 0.01（在ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖57展示了在用TATκ-eGFP處理的CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）（+/Y + TATκ-eGFP）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）（-/Y + TATκ-eGFP）、和用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5107 ）的海馬體（齒狀回）中DCX陽性細胞數目的定量。治療期由以下各項組成：每日一次腦室內注射持續5天、隨後是兩天休息期、然後是另外的5次注射。在最後一次注射後10天將動物處死。數據表示為細胞數目/mm。與+/Y相比，** p ＜ 0.01；與CDKL5 KO樣品相比，##p ＜ 0.001（在ANOVA後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。數據表明，用TATκ-eGFP-CDKL5處理對DCX陽性細胞的數目的積極影響在處理完成後10天仍保留。
圖58展示了在用TATκ-eGFP處理的CDKL5野生型雄性小鼠（+/Y）（+/Y + TATκ-eGFP）、CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y）（-/Y + TATκ-eGFP）、和用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO雄性小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5107 ）的海馬體（齒狀回）中裂解半胱天冬酶3陽性細胞的總數目的定量。治療方案係每日一次腦室內注射給予5天，隨後是兩天休息期，然後是另外的5次注射。在最後一次注射後10天將動物處死。
圖59示出了展示經由每日一次腦室內注射用TATκ-eGFP（+TATκ-eGFP）處理的CDKL5 KO（-/Y）和CDKL5野生型（+/Y）小鼠或用TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 KO（-/Y）小鼠（-/Y + TATκ-eGFP-CDKL5107 ）的體重之圖。在插管植入後7天允許小鼠恢復，並在最後一次注射後10天將小鼠處死。
圖60A-60C示出了用TATκ-eGFP-CDKL5107 轉導的海馬神經元的樹突段的藉由雷射共聚焦顯微鏡的圖像。圖像示出了TATκ-eGFP-CDKL5107 蛋白與突觸前蛋白質（突觸泡蛋白；SYN）的共定位。使用抗-GFP抗體進行eGFP-CDKL5免疫檢測（圖64A）。圖60A-60C使用如關於圖45所述的方案產生。
圖61示出了展示用TATκ-eGFP（+ TATκ-eGFP）、TATκ-eGFP-CDKL5115 （+TATκ-eGFP-CDKL5115 ）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （+ TATκ-eGFP-CDKL5107 ）融合蛋白處理後，在高基體染色切片中CDKL5野生型（+/Y）或CDKL5 KO（-/Y）海馬神經元的樹突棘數目之圖。值表示平均值 　 SEM。與野生型（+/Y）神經元相比，** p ＜ 0.01；與CDKL5（-/Y）神經元相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行龐費洛尼（Bonferroni）檢驗）。
圖62示出了CDKL5融合蛋白的全身給予的治療時間表。為了模擬每日人類劑量給予，我們使用了如下輸注方法，該方法基於用可重新填裝的容器在皮膚下植入的可程式設計泵。用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理CDKL5 -/Y小鼠。通過插管將蛋白質直接注射到頸內動脈。該系統允許我們每天應用兩次輸注方案（早上和晚上；20μl注射，約50 ng/注射），持續10天的時間。小鼠在植入時為4-6月齡。關於圖62描述的治療時間表和小鼠年齡適用於圖63A-72。
圖63A-63B示出了對DCX免疫染色的海馬齒狀回片段的圖像。連續10天向4-6月齡的小鼠全身給予TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白，觀察到CDKL5 KO雄性小鼠的神經突長度增加和新生顆粒細胞數目增加（圖63B）。
圖64示出了展示如藉由在NREM睡眠期間呼吸暫停的次數測量的，用TATκ-eGFP-CDKL5107 融合蛋白對4-6月齡的小鼠進行全身處理對呼吸紊亂的影響之圖。
圖65係顯示未處理的CDKL5 +/Y和CDKL5 -/Y小鼠以及用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 -/Y小鼠的新生（雙皮質素-陽性）顆粒細胞的平均總樹突長度之圖。值表示為平均值 ± SE。與未處理的CDKL5 +/Y情況相比，** p ＜ 0.01；*** p ＜ 0.001；與未處理的CDKL5 -/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖66係顯示未處理的CDKL5 +/Y和CDKL5 -/Y小鼠以及用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 -/Y小鼠的高基體染色的顆粒細胞的平均總樹突長度之圖。值表示為平均值 ± SE。與未處理的CDKL5 +/Y情況相比，** p ＜ 0.01；*** p ＜ 0.001；與未處理的CDKL5 -/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖67係顯示未處理的CDKL5 +/Y和CDKL5 -/Y小鼠以及用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 -/Y小鼠的挖掘發作次數之圖。值表示為平均值 ± SE。與未處理的CDKL5 +/Y情況相比，** p ＜ 0.01；與未處理的CDKL5 -/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖68係顯示未處理的CDKL5 +/Y和CDKL5 -/Y小鼠以及用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 -/Y小鼠的窩品質之圖。值表示為平均值 ± SE。與未處理的CDKL5 +/Y情況相比，** p ＜ 0.01；與未處理的CDKL5 -/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖69係在用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的一隻CDKL5 -/Y小鼠中在不同時間點收集的視覺皮層中的神經活動的一系列代表性圖像。
圖70係顯示用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理的CDKL5 -/Y小鼠中處理之前和處理6天和10天之後測量的視覺上誘發的反應的平均幅度之圖。在處理停止（清除）後6-10天，用另外的測量評估作用的持續性。作為參考，在圖案化區域中顯示未處理的野生型反應幅度隨時間的95%置信區間。誤差條表示平均值的標準誤差。雙因子ANOVA（對因子時間的重複測量）揭示了時間X處理相互作用（p ＜ 0.05）；事後Holm-Sidak的多重比較測試：* p ＜ 0.05，**p ＜ 0.01。
圖71係顯示來自以下各項的初級視覺皮層（V1）錐體神經元（第2/3層）的樹突棘密度的圖：未處理的CDKL5 +/Y和CDKL5 -/Y小鼠，以及用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 5）處理且在處理結束時（短期）處死或用TATκ-eGFP或TATκ-eGFP-CDKL5107 處理且在處理停止後10天（長期）處死的CDKL5 -/Y小鼠。值表示為平均值 ± SE。與未處理的CDKL5 +/Y情況相比，* p＜ 0.05；** p ＜ 0.01；*** p ＜ 0.001；與未處理的CDKL5 -/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
圖72係顯示在以下各項的初級視覺皮層（V1）中展現PSD-95免疫反應性的的螢光斑點數目/μm2 的圖：未處理的CDKL5 +/Y（n = 3）和CDKL5 -/Y（n = 3）小鼠，以及用TATκ-eGFP（n = 4）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 6）處理且在處理結束時（短期）處死或用TATκ-eGFP（n = 4）或TATκ-eGFP-CDKL5107 （n = 4）處理且在處理停止後10天（長期）處死的CDKL5 -/Y小鼠。值表示為平均值 ± SE。與未處理的CDKL5 +/Y情況相比，** p ＜ 0.01；與未處理的CDKL5 -/Y樣品相比，# p ＜ 0.05（在ANOVA之後進行Fisher LSD檢驗）。
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Claims (56)

  1. 一種用於在治療CDKL5缺陷或雷特氏症候群變體中使用的融合蛋白，其中該融合蛋白係全身給予的並且該融合蛋白包含： CDKL5多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約98%至100%的序列一致性；以及 TATκ多肽序列，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  2. 如請求項1所述使用的融合蛋白，進一步包含Igk-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  3. 如請求項1或2所述使用的融合蛋白，進一步包含報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  4. 如請求項1-3中任一項所述使用的融合蛋白，進一步包含蛋白標籤多肽，其中該蛋白標籤多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  5. 如請求項1-4中任一項所述使用的融合蛋白，其中該融合蛋白具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
  6. 如請求項1-5中任一項所述使用的融合蛋白，其中與對照相比，該融合蛋白增加受試者的腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度。
  7. 如請求項1-6中任一項所述使用的融合蛋白，其中與對照相比，該融合蛋白減少受試者的腦中的神經元細胞凋亡。
  8. 如請求項1-7中任一項所述使用的融合蛋白，其中該融合蛋白經靜脈內給予。
  9. 一種用於在治療CDKL5缺陷或雷特氏症候群變體中使用的藥物配製物，其中該藥物配製物包含藥學上可接受的載體和有效量的如請求項1-8中任一項所述使用的融合蛋白。
  10. 一種用於在增加患有CDKL5缺陷的患者的視覺皮層中的神經活動中使用的融合蛋白，其中該融合蛋白係全身給予的並且該融合蛋白包含： CDKL5多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約98%至100%的序列一致性；以及 TATκ多肽序列，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  11. 如請求項10所述使用的融合蛋白，進一步包含Igk-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  12. 如請求項10或11所述使用的融合蛋白，進一步包含報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  13. 如請求項10-12中任一項所述使用的融合蛋白，進一步包含蛋白標籤多肽，其中該蛋白標籤多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  14. 如請求項10-13中任一項所述使用的融合蛋白，其中該融合蛋白具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
  15. 如請求項10-14中任一項所述使用的融合蛋白，其中與對照相比，該融合蛋白增加受試者的腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度。
  16. 如請求項10-15中任一項所述使用的融合蛋白，其中與對照相比，該融合蛋白減少受試者的腦中的神經元細胞凋亡。
  17. 如請求項10-16中任一項所述使用的融合蛋白，其中該融合蛋白經靜脈內給予。
  18. 一種用於在增加患有CDKL5缺陷或雷特氏症候群變體的患者的視覺皮層中的神經活動中使用的藥物配製物，其中該藥物配製物包含藥學上可接受的載體和有效量的如請求項10-17中任一項所述使用的融合蛋白。
  19. 一種治療CDKL5缺陷或雷特氏症候群變體之方法，該方法包括向對其有需要的患者全身給予融合蛋白，該融合蛋白包含： CDKL5多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約98%至100%的序列一致性；以及 TATκ多肽序列，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  20. 如請求項19所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含Igk-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  21. 如請求項19或請求項20所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  22. 如請求項19-21中任一項所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含蛋白標籤多肽，其中該蛋白標籤多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  23. 如請求項19-22中任一項所述之方法，其中該融合蛋白具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
  24. 如請求項19-23中任一項所述之方法，其中與對照相比，全身給予該融合蛋白增加受試者的腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度。
  25. 如請求項19-24中任一項所述之方法，其中與對照相比，全身給予該融合蛋白減少受試者的腦中的神經元細胞凋亡。
  26. 如請求項19-25中任一項所述之方法，其中該融合蛋白經靜脈內給予。
  27. 一種增加患有CDKL5缺陷或雷特氏症候群變體的患者的視覺皮層中的神經活動之方法，該方法包括向對其有需要的患者全身給予融合蛋白，該融合蛋白包含： CDKL5多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約98%至100%的序列一致性；以及 TATκ多肽序列，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  28. 如請求項27所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含Igk-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  29. 如請求項27或請求項28所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  30. 如請求項27-29中任一項所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含蛋白標籤多肽，其中該蛋白標籤多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  31. 如請求項27-30中任一項所述之方法，其中該融合蛋白具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
  32. 如請求項27-31中任一項所述之方法，其中與對照相比，全身給予該融合蛋白增加受試者的腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度。
  33. 如請求項27-32中任一項所述之方法，其中與對照相比，全身給予該融合蛋白減少受試者的腦中的神經元細胞凋亡。
  34. 如請求項27-33中任一項所述之方法，其中該融合蛋白經靜脈內給予。
  35. 一種增加患有CDKL5缺陷或雷特氏症候群變體的患者的腦中的神經突生長、延長、樹突棘數目、分支數目或分支密度之方法，該方法包括向對其有需要的患者全身給予融合蛋白，該融合蛋白包含： CDKL5多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約98%至100%的序列一致性；以及 TATκ多肽序列，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  36. 如請求項35所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含Igk-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  37. 如請求項35或請求項36所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  38. 如請求項35-37中任一項所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含蛋白標籤多肽，其中該蛋白標籤多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  39. 如請求項35-38中任一項所述之方法，其中該融合蛋白具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
  40. 如請求項35-39中任一項所述之方法，其中該融合蛋白經靜脈內給予。
  41. 一種降低患有CDKL5缺陷或雷特氏症候群變體的患者的腦中的神經元細胞凋亡之方法，該方法包括向對其有需要的患者全身給予融合蛋白，該融合蛋白包含： CDKL5多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約98%至100%的序列一致性；以及 TATκ多肽序列，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  42. 如請求項40所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含Igk-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  43. 如請求項40或請求項41所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  44. 如請求項40-42中任一項所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含蛋白標籤多肽，其中該蛋白標籤多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  45. 如請求項40-43中任一項所述之方法，其中該融合蛋白具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
  46. 如請求項40-44中任一項所述之方法，其中該融合蛋白經靜脈內給予。
  47. 一種改善患有CDKL5缺陷或雷特氏症候群變體的患者的運動功能之方法，該方法包括向對其有需要的患者全身給予融合蛋白，該融合蛋白包含： CDKL5多肽序列，其中該CDKL5多肽序列與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 16具有約98%至100%的序列一致性；以及 TATκ多肽序列，其中該TATκ多肽序列與SEQ ID NO: 4具有約90%至約100%的序列一致性，其中該TATκ多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  48. 如請求項46所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含Igk-鏈前導序列多肽，其中該Igk-鏈前導序列被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  49. 如請求項46或請求項47所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含報告蛋白多肽，其中該報告蛋白多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  50. 如請求項46-48中任一項所述之方法，其中該融合蛋白進一步包含蛋白標籤多肽，其中該蛋白標籤多肽被可操作地連接至該CDKL5多肽上。
  51. 如請求項46-49中任一項所述之方法，其中該融合蛋白具有根據SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
  52. 如請求項46-50中任一項所述之方法，其中該融合蛋白經靜脈內給予。
  53. 一種如在此實質上描述的多核苷酸。
  54. 一種如在此實質上描述的多肽。
  55. 一種如在此實質上描述的載體。
  56. 一種如在此實質上描述的藥物配製物。
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