TW201729824A - 用於促進腸道屏障功能並減緩內臟疼痛之營養組成物 - Google Patents

Abstract

本發明關於用於小兒個體以i)促進腸道再生、ii)促進腸道成熟及/或適應、iii)支持腸道屏障抗性及/或iv)保護腸道屏障功能之方法，該等方法包含投予該小兒個體包含有效量之可溶性調介物製劑之組成物，該可溶性調介物製劑係源自諸如鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG)(LGG)之益生菌批式培養製程的指數生長末期。本發明之方法有利地提供LGG可溶性調介物的腸道保護益處而不引入活細菌培養物至具有腸道屏障功能受損之個體。在一些實施態樣中，該小兒個體患有腸道屏障功能受損及/或短腸症候群。在其他實施態樣中，本發明關於減輕小兒個體內臟疼痛之方法，該等方法包含投予該小兒個體組成物，該組成物包含有效量之來自諸如LGG之益生菌批式培養製程的指數生長末期的可溶性調介物製劑。

Description

用於促進腸道屏障功能並減緩內臟疼痛之營養組成物

本發明大抵關於用於患有腸道屏障功能障礙及/或不成熟的腸道屏障功能及/或短腸症候群(short bowel syndrome)的嬰兒及幼童以促進腸道再生、促進腸道成熟、支持腸道屏障抗性及/或保護腸道屏障功能之組成物及方法。本發明亦關於用於減輕內臟疼痛症狀及知覺之組成物及方法。更具言之，本發明關於包含來自益生菌批式培養製程的指數生長末期之培養物上清液之組成物及投予彼等之方法。

腸道屏障功能

腸屏障(intestinal barrier)提供保護以防腸腔中潛在有害物質，同時允許營養素之吸收。數種機制涉及腸道屏障功能，例如腸形態結構、全身性及局部發炎、腸細菌移位(bacterial translocation)、及腸道抗性。在腸發炎、感染、過敏性敏感化(allergic sensitization)還 有許多自體免疫疾病過程期間，腸道屏障完整性可能受到危及或破損。更特定言之，這些機制在早產及/或低出生體重嬰兒中可能受損，受累於感染、先天性腸畸形(congenital intestinal malformation)、壞死性腸炎(necrotizing enterocolitis)(NEC)及短腸症候群(SBS)。

感染(諸如輪狀病毒)，及由例如腹瀉疾病所致之絨毛萎縮，可導致腸屏障性質改變。腸道屏障功能受損會造成絨毛高度(villous height)減少及腺窩深度(crypt depth)增加。SBS定義為當功能性腸道塊(gut mass)減少至低於食物及液體適當消化及吸收的必需量而導致臨床營養缺乏且需要腸胃外營養(PN)支持之吸收不良狀態。有些孩童出生即有先天性短腸，而有些孩童手術而後天罹患短腸，例如壞死性腸炎之手術治療。SBS係新生兒、嬰兒及幼童腸衰竭主要原因，在未成熟嬰兒的盛行率高。腸細菌過度生長及細菌移位係SBS的主要併發症，且係由腸道屏障功能破損所致。

如動物及臨床研究所示，腸道屏障功能受損的嬰兒之腸細菌過度生長及移位腸道屏障功能，不僅是涉及腸道衍生感染之因子，亦會進一步損害復原過程。其亦會損害腸道再生、成熟、分化、及上皮功能運作。前述之損害可導致吸收不良。腸的腸道微生物叢亦有助於健康及完整腸道屏障，此乃由於彼等之代謝、營養性、及免疫調節性質所致。

益生菌(probiotic)可有助於因上述原因中之任一者而患有腸道屏障功能受損之小兒病患。然而，投予存活性細菌至具有腸防禦受損及不成熟的腸道屏障之小兒個體、且特別係早產嬰兒，可能由於菌血症風險而不可行。又，從存活性益生菌物質所分泌之可溶性因子可涉及一些益生菌細菌之有益效果。因此，有針對可提供益生菌益處而不引入存活性細菌至罹患腸道屏障功能受損/不成熟(諸如SBS或NEC)的小兒個體之腸道中的組成物之需求。

小兒個體之內臟疼痛失調

出生後早期通常係緊迫低反應時期，在此時期，有極度的神經元生長及髓鞘形成期。在此關鍵階段(critical window)之緊迫性發作，諸如食物不耐症、過敏或非過敏性發炎、絞痛、發炎性腸疾(inflammatory bowel syndrome)、及感染，可具有自早期生命開始之長遠持久效果。此等效果包括內臟過度敏感及腸微生物相(intestinal microbiota)多樣性減少。益生菌可有助於減少內臟過度敏感，但對於益生菌可溶性調介物的效果之資訊仍付之闕如。因此，有針對用於減少嬰兒及孩童、且特別係具有高內臟敏感性之小兒群體的內臟疼痛之組成物及方法之需求。

發明說明

簡言之，本發明關於用於小兒個體以i)促進腸道再生、ii)促進腸道成熟及/或適應、iv)支持腸道屏障抗性及/或v)保護腸道屏障功能之方法，該等方法包含投予該小兒個體包含有效量之可溶性調介物製劑之組成物，該可溶性調介物製劑係來自益生菌批式培養製程的指數生長末期。在某些實施態樣中，該益生菌係鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus rhamnosusGG)(LGG)。本發明之方法有利地提供類似存活益生菌(諸如LGG)之腸道保護益處而不引入活細菌培養物至患有腸道屏障功能受損之個體。在一些實施態樣中，該小兒個體患有腸道屏障功能受損及/或短腸症候群及/或NEC。在更具體之實施態樣中，該小兒個體係嬰兒或未成熟嬰兒。

本發明亦提供包含來自益生菌批式培養製程的指數生長末期的可溶性調介物製劑之組成物。在某些實施態樣中，該組成物係用於嬰兒以i)促進腸道再生、ii)促進腸道成熟及/或適應、iii)促進腸道屏障適應、iv)支持腸道屏障抗性及/或v)保護腸道屏障功能之嬰兒配方，該嬰兒配方包含：達至約7g/100Kcal之脂肪或脂質；達至約5g/100Kcal之蛋白質來源；達至約22g/100kcal之碳水化合物來源；及來自益生菌批式培養製程的指數生長末期之可溶性調介物製劑。在更具體之實施態樣中，該益生菌係LGG。

在其他實施態樣中，本發明關於用於減輕小 兒個體內臟疼痛之方法，該等方法包含投予該小兒個體包含有效量之來自益生菌批式培養製程的指數生長末期的可溶性調介物製劑之組成物。在某些實施態樣中，該益生菌係鼠李醣乳酸桿菌GG(LGG)。在一些實施態樣中，該小兒個體患有由於內臟疼痛症狀所致之內臟敏感性增加、胃腸疼痛或不適或由發炎性腸疾(IBS)產生之絞痛、膳食不耐症或過敏(諸如牛乳過敏)。

又在其他實施態樣中，本發明提供包含來自益生菌批式培養製程的指數生長末期的可溶性調介物製劑之組成物，該等組成物係用於減輕小兒個體內臟疼痛，該等組成物包含達至約7g/100Kcal之脂肪或脂質；達至約5g/100Kcal之蛋白質來源；達至約22g/100kcal之碳水化合物來源；及來自益生菌批式培養製程的指數生長末期的可溶性調介物製劑。在更具體之實施態樣中，該益生菌係LGG。

應了解的是，上述之一般說明及下列之詳細說明兩者均呈現本發明之實施態樣，且意欲提供用於了解本案所請之發明的本質及特性之概覽或架構。該說明作為解釋所請標的物的原理及操作。熟習本技術領域者於閱讀下列揭示，將清楚明瞭本發明的其他及進一步特徵及優點。

圖1A至F係使用SBS模式，六組實驗組各 組之迴腸樣本影像，證實對大鼠腸形態之效果(以LGG可溶性調介物製劑A、可溶性調介物製劑B、細菌培養基、存活性LGG、對照SBS、及假手術(sham)處理)。該等影像證實這六組處理組之間的絨毛高度及腺窩深度之差異。

圖2A至D係六組處理組之間的緊密型連結(tight junction)蛋白質平均表現之圖(2A：緊連蛋白(occludin)；2B：ZO-1；2C：密連蛋白(claudin)-1；2D：密連蛋白-4)。六組處理組係1：假手術；2：SBS；3：SBS+可溶性調介物製劑A；4：SBS+可溶性調介物製劑B；5：SBS+BCM；6：SBS+LGG。

圖3A至D係描繪六組實驗組腸屏障穿透性及抗性測量之圖(2A：血清FD-40量；2B：血清內毒素量；2C：血清GLP-2及2D：迴腸內容物之sIgA量)。六組實驗組包括1：假手術；2：SBS組；3：SBS+可溶性調介物製劑A；4：SBS+可溶性調介物製劑B；5：SBS+BCM；6：SBS+LGG。數值係平均值±sd。具有不同上標之平均值係具統計顯著性(P<0.05)。

圖4A至C係證實飲水補充劑及幼年緊迫(early life stress)不影響(4A)體重增加；(4B)食物攝入；或(4C)液體攝入之圖。(NS-未分離；MS-與母親分離)。

圖5係顯示可溶性調介物製劑(可溶性調介物製劑B)減緩由生命早期緊迫所誘發之內臟疼痛過度敏 感之圖。數值係平均值±sd，(*)p=34相對於NS-水；(#)p=0.03相對於MS-水。

下列之一或多個實施例將作為本發明之實施態樣的詳細參考。各實施例係提供用來解釋本發明之營養組成物，而非限定本發明。事實上，熟習本技術領域者將清楚瞭解可在未悖離本發明之範圍下對本發明之教示作各種修飾或變異。例如，經描繪或描述作為一個實施態樣的一部分之特徵，可與另一實施態樣併用，以產生又另一實施態樣。

因此，本發明意欲將這類修飾及變異包含在後附之申請專利範圍及其等效物的範圍內。本發明之其他目的、特徵、及態樣揭示於下列詳細說明中，或可從下列詳細說明中清楚明白。所屬技術領域中具有通常知識者可了解本討論內容僅說明例示性實施態樣，且不欲作為限制本發明之較廣態樣。

本發明大抵關於用於小兒個體以i)促進腸道再生、ii)促進腸道成熟及/或適應、iii)支持腸道抗性及/或iv)保護腸道屏障功能之方法，該等方法包含投予包含來自益生菌批式培養製程的指數生長末期的培養物上清液之組成物。本發明進一步關於包含來自益生菌(諸如LGG)批式培養製程的指數生長末期的培養物上清液、且更具言之為可溶性調介物製劑之組成物，該組成物係用於 小兒個體以i)促進腸道再生、ii)促進腸道成熟及/或適應、iii)支持腸道屏障抗性及/或iv)保護腸道屏障功能。

在其他實施態樣中，本發明提供用於減輕小兒個體內臟疼痛之方法，該等方法包含投予該小兒個體包含有效量之來自益生菌批式培養製程的指數生長末期的培養物上清液之組成物。在某些實施態樣中，該益生菌係LGG。在一些實施態樣中，該小兒個體患有內臟敏感性增加，受累於復發性胃腸疼痛、絞痛、發炎性腸疾(IBS)、膳食不耐症或過敏(諸如牛乳過敏)。

“營養組成物”意指滿足至少一部分個體營養素需求之物質或配方品。用語“營養”、“營養配方”、“腸道營養”、及“營養補充物”係用作為本發明整體之營養組成物的非限定性實例。再者，“營養組成物”可指液體、粉末、凝膠、糊劑、固體、濃縮物、懸浮液、或即用形式之腸道配方、口服配方、嬰兒用配方、小兒個體用配方、孩童用配方、成長乳、和/或成人用配方。

用語“腸道(的)(enteral)”意指可透過胃腸或消化道或於胃腸或消化道內投遞的。“腸道投與”包括口服餵食、胃內餵食、經由幽門(transpyloric)投與、或任何其他投與至消化道中。“投與”較“腸道投與”廣義，且包括非經腸道投與或任何物質攝入個體體內的其他投與途徑。

“小兒個體”意指年齡不大於13歲的人。在一 些實施態樣中，小兒個體係指介於出生及8歲之間的人個體。在其他實施態樣中，小兒個體係指介於1及6歲之間的人個體。在又進一步之實施態樣中，小兒個體係指介於6及12歲之間的人個體。術語“小兒個體”如下所述可係指嬰兒(早產或足月產)及/或孩童。

“嬰兒”意指年齡範圍在出生至不大於一歲的人個體，且包括矯正年齡(corrected age)為0至12個月的嬰兒。短語“矯正年齡”意指嬰兒的出生後年齡(chronological age)扣除嬰兒未成熟出生的時間數。因此，若嬰兒足月出生，矯正年齡係嬰兒的歲數。嬰兒一詞包括低出生體重嬰兒、極低出生體重嬰兒、超低出生體重嬰兒(extremely low birth weight infant)及早產嬰兒。“早產”意指在第37週妊娠結束之前出生的嬰兒。“晚期早產(late preterm)”意指第34週與第36週妊娠之間出生的嬰兒。“足月產”意指在第37週妊娠結束之後出生的嬰兒。“低出生體重嬰兒”意指出生體重低於2500克(約5 lbs又8盎司)的嬰兒。“非常低出生體重嬰兒(very low birth weight infant)”意指出生體重低於1500克(約3 lbs又4盎司)的嬰兒。“極低出生體重嬰兒(extremely low birth weight infant)”意指出生體重低於1000克(約2 lbs又3盎司)的嬰兒。

“孩童”意指年齡範圍在12個月至約13歲的個體。在一些實施態樣中，孩童係年齡介於1與12歲之間的個體。在其他實施態樣中，用語“孩童”係指介於一歲與 約六歲、或介於約七歲與約12歲的個體。在其他實施態樣中，用語“孩童”係指任何介於12個月與約13歲之間的年齡範圍。

“孩童營養產品”係指滿足至少一部分孩童營養需求之組成物。成長乳係孩童營養產品的實例。

用語“水解度”係指肽鍵藉由水解方法斷裂的程度。

用語“經部分水解”意指具有大於0%但小於50%的水解度。

用語“經大量水解”意指具有大於或等於50%的水解度。

“嬰兒配方”意指滿足至少一部分嬰兒營養需求之組成物。在美國，嬰兒配方的內容物係由美國聯邦法規第21篇第100、106、及107節所列之聯邦法規所規定。這些法規定義巨量營養素、維生素、礦物質、及其他成分量，以致力於模擬人乳的營養及其他性質。

用語“成長乳”係指意欲被用作為多樣性膳食的一部分的廣泛範疇之營養組成物，以便支持年齡介於約1與約6歲的孩童之正常生長及發育。

“以乳為底質的”意指包含至少一種已從哺乳動物之乳腺提取出或萃取出之組分。在一些實施態樣中，以乳為底質之營養組成物包含源自圈養有蹄類動物、反芻動物、或其他哺乳動物、或彼等之任何組合的乳品組分。再者，在一些實施態樣中，以乳為底質意指包含牛酪蛋白、 乳清、乳糖、或彼等之任何組合。此外，“以乳為底質之營養組成物”可指包含本技術領域中已知之任何源自乳品或以乳為底質之產品的任何組成物。

“營養完整的”意指可作為唯一之營養來源的組成物，該組成物可基本上提供所有每日需要量之維生素、礦物質及/或微量元素，加上蛋白質、碳水化合物和脂質。事實上，“營養完整的”描述提供支持個體正常生長及發育所需之適量的碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質和能源的營養組成物。

因此，對早產嬰兒“營養完整”之營養組成物將定義為定性且定量地提供早產嬰兒成長所需之適量的碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質、和能源。

對足月產嬰兒“營養完整”之營養組成物將定義為定性且定量地提供足月產嬰兒成長所需之適量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質、和能量。

對孩童“營養完整”之營養組成物將定義為定性且定量地提供孩童成長所需之適量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質、和能量。

如應用於營養素，用語“必需”係指任何無法由身體合成足以用於正常生長及維持健康的量而因此必須 由膳食供應之營養素。用語“條件性必需”如應用於營養素則意指該營養素在發生身體無法獲得適量前驅物化合物以供內源性合成時的條件下必須藉由膳食來供應。

“益生素(prebiotic)”意指一種非可消化性食品成分，其藉由選擇性刺激消化道中可改善宿主健康的一種或有限種細菌之生長及/或活性而對宿主具有益影響。

如本文中所使用，“來自非人來源之乳鐵蛋白”意指藉由人乳以外來源所製造或獲自人乳以外來源的乳鐵蛋白。舉例而言，用於本發明之乳鐵蛋白包括藉由基改生物所製造之人乳鐵蛋白和非人乳鐵蛋白。如本文中所使用，用語“有機體”係指任何持續之生命系統，諸如動物、植物、真菌、或微生物。例示性非人來源之乳鐵蛋白包括牛乳鐵蛋白。

如本文中所使用，“非人乳鐵蛋白”意指具有不同於人乳鐵蛋白之胺基酸序列的胺基酸序列之乳鐵蛋白。

除非另有指明，否則本文所使用之所有百分比、份數及比例係按總配方品(formulation)之重量計。

所有經指明為"每日"投予之量可在24小時一段時間期間投予一個單位劑量、單一供應量或二或更多個劑量或供應量而投遞。

本發明之營養組成物可為實質上不含任何本文中所述之隨意或經選擇成分，惟該剩餘其他的營養組成物仍含有所有本文中所述之所需成分或特徵。在此前後 文、及除非另有指明之下，用語“實質上不含”意指該經選擇之組成物可含有少於功能性含量的隨意成分，典型上少於0.1重量%、且亦包括零重量百分比的此種隨意或經選擇成分。

本發明所有指涉為單數特性或限制，應包括對應之複數特性或限制，反之亦然，除非另有指明或明確暗示與所指涉之前後文相反。

本文所使用之所有方法或處理步驟的組合可以以任何順序執行，除非另有指明或明確暗示與所指涉之前後文相反。

本發明之方法和組成物(包括彼之組分)可包含本文中所述之實施態樣的必要要素和限制、以及本文中所述之任何另外或隨意之成分、組分或限制或其他可用於營養組成物者，或由彼等所組成或實質上由彼等所組成。

如本文中所使用，用語“約”應解讀為指涉經指定作為任何範圍的終點的兩個數值。任何對範圍之引用應被認為係提供對該範圍內之任何次集合的支持。

“益生菌(probiotic)”意指對宿主健康賦予有益效果之具有低或無致病性的微生物。用語“去活化益生菌(inactivated probiotic)”意指所指涉之益生菌的代謝活性或繁殖能力已被降低或破壞之益生菌。然而，該“去活化益生菌”於細胞層級下仍留存彼之細胞結構或其他與細胞相關結構，例如胞外多醣及至少一部分彼之生物醣蛋 白及DNA/RNA結構。如本文中所使用，該用語“去活化”與“非存活性(non-viable)”同義。

任何本技術領域中已知益生菌均可使用。在一具體實施態樣中，該益生菌可選自任何乳酸桿菌(Lactobacillus)菌種、鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG)(LGG)(ATCC號碼53103)、雙叉桿菌(Bifidobacterium)菌種、長雙叉桿菌(Bifidobacterium longum)BB536(BL999,ATCC：BAA-999)、長雙叉桿菌AH1206(NCIMB：41382)、短雙叉桿菌(Bifidobacterium breve)AH1205(NCIMB：41387)、嬰兒雙叉桿菌(Bifidobacterium infantis)35624(NCIMB：41003)、及動物雙叉桿菌乳亞種(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)BB-12(DSM No.10140)或任何彼等之組合。

在具體實施態樣中，該益生菌係鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus G.G.，菌株ATCC 53103)。LGG係自健康人個體糞便樣本所單離之細菌。其被廣泛認知為一種益生菌。彼揭示於Gorbach等人的美國專利第5,032,399號，該案以引用方式全部併入本文中。LGG對大部分抗生素不具抗性，在酸及膽汁中安定存在、且喜貼附於人腸道的黏膜細胞。其在大部分個體中存留1至3天且在30%的個體中存留達至7天。除了其菌叢拓殖(colonization)能力之外，LGG亦有益影響黏膜免疫反應。LGG寄存於寄存機構美國菌種保存中心(ATCC)，登錄號ATCC 53103。

雖不欲受限於理論，但咸信來自益生菌、且在具體實施態樣中為LGG之批式培養的培養物上清液，促進腸道屏障功能，在具有腸道屏障功能受損之個體特別如此。進一步地，咸信對腸道屏障功能之有益效果可認定為來自在LGG的批式培養之指數生長(或“對數”)期晚期所釋放至培養基中的組分混合物(包括蛋白質物質，且可能包括(胞外)多醣物質)。該組成物在之後將稱為“可溶性調介物製劑(soluble mediator preparation)”。

在其他實施態樣中，咸信該可溶性調介物製劑可能產生可測量之小兒族群由於內臟疼痛失調(復發性腹痛、IBS、或絞痛)所致之或由於膳食不耐症及牛乳過敏所致之內臟過度敏感及腹部不適的降低。在進一步實施態樣中，咸信該可溶性調介物製劑可能產生學習能力的增加及改善記憶。

本發明之可溶性調介物製劑可如下文所述之而製備。又，LGG可溶性調介物製劑之製備係描述於US 20130251829及US 20110217402，彼等之各者全部係以引用方式併入。細菌的批式培養中的所認定之階段為熟悉本技術者已知者。有“遲滯(lag)”期、“對數(log)”(“對數(logarithmic)”或“指數”)期、“停滯(stationary)”期、及“死亡”(或“對數下降”)期。在活細菌存在期間的所有時期，細菌代謝來自培養基的營養素，並分泌(發出、釋放)物質至培養基中。在生長階段的給定時間點之分泌物質組成大致上係不可預測。

本發明進一步關於用於製備益生菌可溶性調介物製劑之方法。在一較佳實施態樣中，根據本發明及/或彼之實施態樣之組成物可藉由包含下列之步驟的方法而獲得：(a)將諸如LGG之益生菌於適合培養基中經使用批式法予以培養；(b)於培養步驟的指數生長末期收獲培養物上清液，該指數生長期末期係依批式培養法的遲滯期與停滯期之間的後半期界定；(c)隨意地自該上清液移除低分子量組成分以留存分子量超過5至6千道耳頓(kDa)之組成分；(d)使用0.22μm無菌過濾移除任何剩餘細胞以提供可溶性調介物製劑；(e)自該可溶性調介物製劑移除液態物以獲得該組成物。

在某些實施態樣中，經分泌之物質係自指數期末期收穫。該指數期末期發生在指數期中期之後的時間(指數期中期係指數期期間的半數時間，因此指涉指數期末期係介於遲滯期及停滯期之間的後半時間)。特定言之，用語“指數期末期”用於本文中，係指涉介於LGG批式培養法的遲滯期及停滯期之間的後四分之一部分時間。在本發明之一較佳實施態樣及彼之實施態樣中，收穫該培養物上清液係在指數期期間的75%至85%之時間點，且最佳係在指數期中經過約5/6的時間收穫。

用語“培養(cultivation或culturing)”係指微生物(在此情況中係LGG)在適當培養基之上或之中的繁殖。此培養基可為各種各樣，且具體為液體培養液(liquid broth)，如本技術領域中所慣用者。較佳的培養 液例如係MRS培養液，其大致上用於培養乳酸桿菌。MRS培養液大致上包含聚山梨糖醇酯、醋酸鹽、鎂及錳，彼等已知作為供乳酸桿菌之用的特殊生長因子，還有作為豐富營養素基底。典型組成物包含(量的單位係g/升)：來自酪蛋白之腖，10.0；肉萃取物(meat extract)，8.0；酵母萃取物(yeast extract)，4.0；D(+)-葡萄糖，20.0；磷酸氫二鉀，2.0；Tween® 80，1.0；檸檬酸三銨，2.0；醋酸鈉，5.0；硫酸鎂，0.2；硫酸錳，0.04。

在某些實施態樣中，該培養物上清液係併入嬰兒配方或其他營養組成物中。經分泌之細菌產物之收穫帶來有關無法輕易地將培養基非所欲之組分去除之問題。這特別地關於供相對虛弱個體之用的營養產品，諸如嬰兒配方或臨床營養。若來自培養物上清液之特定組分先經分離、純化、並接著施加於營養產品中，即不會引起此問題。然而，理想的是利用較完整之培養物上清液。這將提供較佳地反映益生菌(例如LGG)天然作用之組成物。

因此，在此等配方中，理想的是確保自LGG培養所收穫之組成物不含非所欲、或並非通常可接受之組分(如會存於培養基中者)。關於常存在於MRS培養液中之聚山梨糖醇酯，用於培養細菌之培養基會包括乳化用非離子性界面活性劑，例如以聚乙氧基化山梨醇酐(polyethoxylated sorbitan)及油酸為基礎者(典型上可獲得者如Tween®聚山梨糖醇酯類，諸如Tween® 80)。雖然這些界面活性劑常見於食品中，例如冰淇淋，且大致 上被認為係安全的，但它們並非在所有管轄區域均認定為適宜者，或甚至並非可接受用於供相對虛弱個體之用的營養產品(諸如嬰兒配方或臨床營養)中。

因此，在一些實施態樣中，本發明之較佳培養基不具有聚山梨糖醇酯類，諸如Tween 80。在本發明之一較佳實施態樣或彼之多個實施態樣中，該培養基可包含選自油酸、亞麻籽油、橄欖油、菜籽油、葵花子油或彼等之混合物之油質成份。將理解的是，若聚山梨糖醇酯界面活性劑的存在係基本上或完全地予以避免，該油質成份之完整益處係予達成。

更具言之，在某些實施態樣中，MRS培養基係不具有聚山梨糖醇酯類。亦較佳的是培養基除了前述油類的一或多者以外，尚包含腖(典型為0至10g/L，特別為0.1至10g/L)、肉萃取物(典型為0至8g/L，特別為0.1至8g/L)、酵母萃取物(典型為4-50g/L),D(+)葡萄糖(典型為20-70g/L)、磷酸氫二鉀(典型為2-4g/L)、三水合醋酸鈉(典型為4-5g/L)、檸檬酸三銨(典型為2-4g/L)、七水合硫酸鎂(典型為0.2-0.4g/L)及/或四水合硫酸錳(II)(典型為0.05-0.08g/L)。

該培養大致上係在20℃至45℃、更具言之在35℃至40℃、且更具言之在37℃之溫度下進行。在一些實施態樣中，該培養物具有中性pH，諸如介於pH 5與pH 7之間、較佳的是pH 6之pH。。

在一些實施態樣中，於培養期間的收獲培養物上清液之時間點，即前述之指數期末期，可基於OD600nm及葡萄糖濃度而判定。OD600係指在600nm之光學密度，其係已知的直接相關於培養基中細菌濃度之密度測量。

該培養物上清液可藉由任何已知用於自細菌培養物分離培養物上清液之技術而收穫。此等技術係本技術領域中已知者，且包括例如離心、過濾、沈降、及類似者。在一些實施態樣中，係使用0.22μm無菌過濾而自該培養物上清液移除LGG細胞。由此所獲得之益生菌可溶性調介物製劑可立即使用或儲存以供未來使用。在後者之情況中，該製劑通常將予冷藏、冷凍或凍乾。該製劑可依所欲而經濃縮或稀釋。

咸信該可溶性調介物製劑含有各種分子量之胺基酸、寡肽及多肽、及蛋白質之混合物。進一步地，咸信該組成物含有多醣結構及/或核苷酸類。

在一些實施態樣中，本發明之可溶性調介物製劑排除較低分子量組分，大致上低於6kDa，或甚至低於5kDa。在這些及其他實施態樣中，該可溶性調介物製劑不包括乳酸及/或乳酸鹽類。這些較低分子量組分可例如藉由過濾或管柱層析而移除。在一些實施態樣中，該培養物上清液可予以5kDa膜來超過濾以留存超過5kDa之組成分。在其他實施態樣中，係使用管柱層析將該培養物上清液去鹽以留存超過6kDa之組成分。

本發明之可溶性調介物製劑可以各種方式來調配以供投予小兒個體。例如，該可溶性調介物製劑可用以諸如像是併入膠囊供口服，或併入液體營養組成物，諸如飲品，或於進一步使用前可經加工。此加工通常涉及自該上清液的大致上液體連續相分離化合物。這較佳的是藉由乾燥方法而完成，諸如噴霧乾燥或冷凍乾燥(凍乾)。在該噴霧乾燥法之一較佳實施態樣中，在噴霧乾燥前將加入載體材料，例如麥芽糊精DE29。

益生菌細菌可溶性調介物製劑，諸如本發明之LGG可溶性調介物製劑，藉由促進腸道屏障再生、腸道屏障成熟及/或適應、腸道屏障抗性及/或腸道屏障功能，有利地具有腸道屏障增強活性。該LGG可溶性調介物製劑可因此具體地有助於治療具有腸道屏障功能受損(諸如短腸症候群或NEC)之個體、具體為小兒個體。該可溶性調介物製劑可具體地有助於具有腸道屏障功能受損及/或短腸症候群之嬰兒及未成熟嬰兒。

益生菌細菌可溶性調介物製劑、諸如本發明之LGG可溶性調介物製劑，亦有利地減少經歷胃腸疼痛、食物不耐症、過敏或非過敏性發炎、絞痛、IBS、及感染之個體、具體為小兒個體的內臟疼痛敏感性。

為使本發明之可溶性調介物製劑發揮彼之對腸道屏障或內臟疼痛敏感性之有益效果，應待需要彼之個體消化。可溶性調介物製劑之投予形式並非關鍵。在一些實施態樣中，該組成物係經由錠劑、丸劑、包囊、囊片 (caplet)、明膠膠囊(gel cap)、膠囊、油滴劑、或密封小袋(sachet)投予個體。在另一實施態樣中，該組成物係經包囊(encapsulate)於蔗糖、脂肪、或多醣中。

在其他實施態樣中，該可溶性調介物製劑係經併入營養組成物中，諸如孩童的營養產品，諸如較大嬰兒配方(follow-on formula)、成長乳、飲料、酸酪乳(yogurt)、果汁、以水果為基底之飲品、可嚼錠、餅乾、脆餅、或奶粉。在其他實施態樣中，該產品可係嬰兒的營養產品，諸如嬰兒配方或人乳強化營養品(human milk fortifier)。當該可溶性調介物製劑係經併入營養組成物中時，在一些實施態樣中，其於併入前係經噴霧乾燥或冷凍乾燥。

本發明之LGG可溶性調介物製劑，不論以分開之劑型或經由營養產品加入，大致上將以促進腸道再生、促進腸道成熟及/或適應、改善腸道屏障抗性及/或保護腸道屏障功能的有效量投予。該有效量較佳的是等效於每kg體重每日1×10⁴至約1×10¹²活益生菌細菌的細胞等效物，且更佳的是每kg體重每日10⁸至10⁹細胞等效物。在其他實施態樣中，該細胞等效物的量於每100Kcal可為約1×10⁴至約1.5×10¹⁰益生菌細胞等效物不等。在一些實施態樣中，該益生菌細胞等效物的量於每100Kcal營養組成物可為約1×10⁶至約1×10⁹益生菌細胞等效物。在某些其他實施態樣中，該益生菌細胞等效物的量於每100Kcal營養組成物可為約1×10⁷至約1×10⁸益生菌細胞等效 物不等。細胞等效物係基於在分離上清液以供進一步加工前LGG培養時間終點之LGG細胞數的數量。

在一實施態樣中，培養物上清液可藉由包含下列之步驟的方法而獲得：(a)將諸如LGG之益生菌於適合培養基中使用批式法予以培養；(b)於培養步驟的指數生長期末期收獲培養物上清液，該指數生長期末期係依批式培養法的遲滯期及停滯期之間的時間之後半期界定；(c)自該上清液隨意地移除低分子量組成分，以留存分子量組成分超過5-6千道耳頓(kDa)者；(d)使用0.22μm無菌過濾移除細胞；(e)自該可溶性調介物製劑移除液態物，以獲得該組成物。

該LGG可溶性調介物製劑亦可與乳鐵蛋白投予。乳鐵蛋白係約80kD的單鏈多肽，該多肽取決於物種含有1至4個聚醣。不同物種的乳鐵蛋白3-D結構非常類似，但並非相同。各乳鐵蛋白包含二個同源的葉(lobe)部，稱為N端葉部及C端葉部，分別指的是該分子的N端及C端部分。各葉部進一步由二個次葉部或結構域組成，該二個次葉部或結構域形成間隙，在該間隙處鐵離子(Fe³⁺)在與碳酸(氫)根陰離子協同性配位下被緊密結合。這些結構域分別被稱為N1、N2、C1、及C2。乳鐵蛋白的N端具有強陽離子胜肽區域，其負責許多重要結合特性。乳鐵蛋白具有極高的等電點(~pI 9)，且其陽離子性質在其防禦抵抗細菌、病毒、以及真菌病原體的能力中扮演主要角色。在乳鐵蛋白的N端區域內有數簇陽離子胺 基酸殘基調介乳鐵蛋白抵抗廣泛範圍的微生物之生物活性。例如，人乳鐵蛋白的N端殘基1-47(牛乳鐵蛋白為1-48)對乳鐵蛋白的鐵非依賴性(iron-independent)生物活性係關鍵者。在人乳鐵蛋白中，殘基2至5(RRRR)(SEQ.ID No.1)及28至31(RKVR)(SEQ.ID No.2)為對乳鐵蛋白抗微生物活性特別關鍵之N端中的富含精胺酸的陽離子結構域。N端中類似區域可見於牛乳鐵蛋白(殘基17至42；FKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAFA)(SEQ ID No.3)。

如於“Perspectives on Interactions Between Lactoferrin and Bacteria”(BIOCHEMISTRY AND CELL BIOLOGY,pp 275-281(2006))中所述，雖然通常具有相對高的等電點，在內葉部的末端區域帶有正電荷胺基酸，但來自不同宿主物種之乳鐵蛋白在胺基酸序列可各異。用於本發明之適合的非人乳鐵蛋白包括但不限於與人乳鐵蛋白胺基酸序列具有至少48%相似度者。例如，牛乳鐵蛋白(“bLF”)具有與人乳鐵蛋白的胺基酸組成約70%序列相似度之胺基酸組成。在一些實施態樣中，該非人乳鐵蛋白具有與人乳鐵蛋白至少55%相似度，且在一些實施態樣中至少65%相似度。用於本發明之可接受的非人乳鐵蛋白包括而未限於bLF、豬乳鐵蛋白、馬乳鐵蛋白、水牛乳鐵蛋白、山羊乳鐵蛋白、鼠乳鐵蛋白、及駱駝乳鐵蛋白。在具體實施態樣中，該乳鐵蛋白係bLF。

在一個實施態樣中，乳鐵蛋白係以約10 mg/100Kcal至約200mg/100Kcal之範圍的量存在於該營養組成物中。在某些實施態樣中，該乳鐵蛋白係以約15mg/100Kcal至約100mg/150Kcal之範圍的量存在。在仍另一實施態樣中，特別係該營養組成物係嬰兒配方時，該乳鐵蛋白係以約60mg/100Kcal至約150mg/100Kcal或約60mg/100Kcal至約100mg/100Kcal之範圍的量存在於該營養組成物中。

在某些實施態樣中所使用的bLF可為任何從全乳及/或具有低體細胞數的乳所分離之bLF，其中“低體細胞數”係指體細胞數低於200,000個細胞/mL。作為實例，適合的bLF可獲自Tatua Co-operative Dairy Co.Ltd.(Morrinsville,New Zealand)；FrieslandCampina Domo(Amersfoort,Netherlands)；或Fonterra Co-Operative Group Limited(Auckland,New Zealand)。

用於本發明之乳鐵蛋白可例如為自非人動物乳所分離或藉由基改生物所製造。舉例而言，在美國專利第4,791,193號(其全部以引用方式併入本文中)中，Okonogi等人揭示用於製造高純度牛乳鐵蛋白之方法。通常，該方法如所揭示者包括三個步驟。生乳原料首先與弱酸陽離子交換劑接觸以吸附乳鐵蛋白，接著第二步驟，進行洗滌以移除未經吸附之物質。接著脫附步驟，此時移走乳鐵蛋白以製造經純化之牛乳鐵蛋白。其他方法可包括如美國專利第7,368,141、5,849,885、5,919,913、以及5,861,491號中所述之步驟，彼等之揭露全部均以引用方 式併入。

在某些實施態樣中，用於本發明之乳鐵蛋白可藉由用於自乳來源分離蛋白質的膨脹床吸附(“EBA”)程序而提供。EBA有時亦被稱為經穩定化流體床吸附(stabilized fluid bed adsorption)，係用於自乳來源分離例如乳鐵蛋白之乳蛋白的程序，包含建立包含微粒基質的膨脹床吸附管柱、將乳來源施加至該基質、以及以包含約0.3至約2.0M之氯化鈉的沖提緩衝液自該基質沖提乳鐵蛋白。雖然在特定實施態樣中，該乳來源係牛乳來源，但任何哺乳動物乳來源均可使用於該程序中。在一些實施態樣中，該乳來源包含全乳、低脂乳、脫脂乳、乳清、酪蛋白、或彼等之混合物。在一些實施態樣中，該方法包含建立包含微粒基質之膨脹床吸附管柱、將乳來源施加至該基質、以及以約0.3至約2.0M之氯化鈉自該基質沖提乳鐵蛋白的步驟。在其他實施態樣中，該乳鐵蛋白係以約0.5至約1.0M之氯化鈉沖提，而在進一步實施態樣中，該乳鐵蛋白係以約0.7至約0.9M之氯化鈉沖提。

該膨脹床吸附管柱可係任何本技術領域中已知者，諸如美國專利第7,812,138、6,620,326、及6,977,046中所述者，該些專利之揭露以引用方式併入本文中。在一些實施態樣中，乳來源係以膨脹模式施加於該管柱，且該沖提係以膨脹模式或填充模式進行。在特定實施態樣中，該沖提係以膨脹模式進行。舉例而言，在膨脹模式中的膨脹比可為約1至約3、或約1.3至約1.7。EBA 技術進一步描述於國際公開申請案第WO 92/00799、WO 02/18237、WO 97/17132號，彼等全部以引用方式併入。

本發明之營養組成物亦含有DHA。在一些實施態樣中，DHA係以約5mg/100Kcal至約75mg/100Kcal、更佳係約10mg/100Kcal至約50mg/100Kcal之範圍的量存在。DHA可自任何LCPUFA來源而提供。在該等組成物之某些實施態樣中，其他適合的LCPUFA包括但不限於α-亞麻油酸、γ-亞麻油酸、亞麻油酸、次亞麻油酸、二十碳五烯酸(EPA)及二十碳四烯酸(ARA)。

在一實施態樣中，特別是若該營養組成物係嬰兒配方，該營養組成物係補充以DHA及ARA二者。在此實施態樣中，ARA：DHA的重量比可為介於約1：3及約9：1之間。在一特定實施態樣中，ARA：DHA的比係約1：2至約4：1。

該營養組成物可使用本技術領域中已知的標準技術以含有DHA及/或ARA的油來補充。舉例而言，DHA及ARA可藉由替換通常會存在於該組成物中的油(例如高油酸葵花子油)之等同量來加至該組成物中。作為另一實例，含有DHA及ARA的油可藉由替換通常會存在於該組成物中而未有DHA及ARA的其餘整體脂肪摻合物之等同量來加至該組成物中。

若存在時，該DHA及ARA來源可為任何本技術領域中已知之來源，諸如海洋油、魚油、單細胞油、蛋黃脂質、以及腦脂質。在一些實施態樣中，該DHA及 ARA源自單細胞Martek油、DHASCO^®及ARASCO^®、或彼等之變異。該DHA及ARA可為天然形式，惟該LCPUFA來源的剩餘部分不會導致對嬰兒的任何實質不利效果。或者，該DHA及ARA可以經精製形式使用。

在一實施態樣中，DHA及ARA的來源為單細胞油，如美國專利第5,374,567；5,550,156；及5,397,591號所教示者，彼等之揭露以引用方式全部併入本文中。然而，本發明不限於僅此等油。

在某些實施態樣中，該營養組成物亦可含有一或多種益生素(亦稱為益生素組分)。益生素發揮健康效益可包括但不限於選擇性刺激一或有限數量之有益腸道細菌的生長及/或活性、刺激經攝食之益生菌微生物的生長及/或活性、選擇性減少腸道病原體、以及對腸道短鏈脂肪酸分布數據變化(profile)較佳影響。此等益生素可為天然存在、合成、或透過基因操作有機體和/或植物而開發，不論此種新來源為現在己知或後來所開發者。可用於本發明之益生素可包括寡醣、多醣、以及其他含有果糖、木糖、大豆、半乳糖、葡萄糖及甘露糖之益生素。

更特定言之，可用於本發明之益生素可包括聚右旋糖、聚右旋糖粉末、乳糖、乳果糖(lactulose)、乳果寡糖(lactosucrose)、棉子糖、葡萄糖寡糖、菊糖、果糖寡糖、異麥芽糖寡糖、大豆寡醣、乳果寡糖、木糖寡糖、幾丁寡糖(chito-oligosaccharide)、甘露糖寡糖、阿拉伯糖寡糖、唾液酸寡糖、海藻糖寡糖、半乳糖寡糖、及 龍膽寡醣(gentio-oligosaccharides)。

在一實施態樣中，在該營養組成物中所存在的益生素總量可為每L組成物約1.0g至約10.0g(1.0g/L to about 10.0g/L of the composition)。更佳的是，在該營養組成物中所存在的益生素總量可為每L組成物約2.0g至約8.0g。在一些實施態樣中，在該營養組成物中所存在的益生素總量可為約0.1g/100Kcal至約1g/100Kcal。在某些實施態樣中，在該營養組成物中所存在的益生素總量可為約0.3g/100Kcal至約0.7g/100Kcal。再者，該營養組成物可包含PDX之益生素組分。在一些實施態樣中，該益生素組分包含至少20% w/w的PDX、GOS或彼等之混合。

在一實施態樣中，PDX於該營養組成物中的量可為約0.1g/100Kcal至約1g/100Kcal的範圍內。在另一實施態樣中，該聚右旋糖的量係約0.2g/100Kcal至約0.6g/100Kcal的範圍內。又在其他實施態樣中，PDX於該營養組成物中的量可為約0.1g/100kcal至約0.5g/100kcal。

在一些實施態樣中，該益生素組分亦包含GOS。在一實施態樣中，GOS於該營養組成物中的量可為約0.1g/100Kcal至約1.0g/100Kcal。在另一實施態樣中，該GOS於該營養組成物中的量可為約0.2g/100Kcal至約0.5g/100Kcal。在又另一實施態樣中，GOS於該營養組成物中的量可為約0.1g/100kcal至約0.5g/100 kcal。

進一步地，咸信PDX及GOS對經由腸道-腦-免疫軸之腦發育具有有益效果，且因此，當存在時，加乘性作用以增強腦發育，且具體言之，增強神經元成熟。

本發明之營養組成物可包含至少一蛋白質來源。該蛋白質來源可為任何本技術領域中所使用者，例如脫脂奶、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、經水解之蛋白質、胺基酸等等。可用於實施本發明之牛乳蛋白來源包括但不限於乳蛋白粉末、乳蛋白濃縮物、乳蛋白分離物、脫脂奶固體、脫脂奶、脫脂奶粉、乳清蛋白、乳清蛋白分離物、乳清蛋白濃縮物、甜乳清、酸乳清、酪蛋白、酸酪蛋白、酪蛋白鹽(例如酪蛋白鈉、酪蛋白鈣鈉、酪蛋白鈣)及任何彼等之組合。

在一些實施態樣中，該營養組成物的蛋白質係以完整蛋白質提供。在其他實施態樣中，該蛋白質係經以完整蛋白質及經水解之蛋白質之組合提供。在某些實施態樣中，該蛋白質可經部分水解或經大量水解。又在其他實施態樣中，該蛋白質來源包含胺基酸。在又另一實施態樣中，該蛋白質來源可以含麩醯胺酸胜肽補充。

在另一實施態樣中，該蛋白質組分包含經大量水解之蛋白質。在仍另一實施態樣中，該營養組成物的蛋白質組分基本上由經大量水解之蛋白質組成，以便食物過敏的發生減至最小。在又另一實施態樣中，該蛋白質來源可以含麩醯胺酸胜肽補充。

有些人展現對完整蛋白質過敏或敏感，即全蛋白質(whole protein)，諸如在完整之牛乳蛋白或完整大豆蛋白分離物為底質之配方者。這些帶有蛋白質過敏或敏感的人中，許多人能夠耐受經水解之蛋白質。水解產物配方(亦稱為半元素配方(semi-elemental formula))含有業經水解或分解成短胜肽片段及胺基酸之蛋白質，且因此更容易地被消化。在帶有蛋白質敏感或過敏的人之中，免疫系統相關之過敏或敏感常導致皮膚、呼吸或胃腸症狀，諸如嘔吐及腹瀉。對完整蛋白質配方呈現反應的人常不會對水解蛋白質配方有反應，此因他們的免疫系統不會將經水解之蛋白質辨識為造成他們症狀之完整蛋白質所致。

因此，在一些實施態樣中，該營養組成物的蛋白質組分包含經部分或經大量水解之蛋白質，例如來自牛乳之蛋白質。為減少過敏反應、不耐症、以及敏感作用，該經水解之蛋白質可以酵素處理，以分解一些或大部分造成不良症狀的蛋白質。再者，蛋白質可藉由任何本技術領域中已知方法來水解。

用語“蛋白質水解產物”或“經水解之蛋白質”在本文中係交替使用，且係指經水解之蛋白質，其中水解度可為約20%至約80%、或約30%至約80%、或甚至為約40%至約60%水解度係肽鍵藉由水解方法斷裂的程度。蛋白質水解度係為特徵分析該營養組成物的經水解之蛋白質組分目的，熟悉配方技術領域者係容易地藉由定量所選擇 的調合物之蛋白質組分的胺基氮對總氮比率(AN/TN)而判定。該胺基氮組分係藉由USP用於測定胺基氮含量的滴定法而定量，而總氮組分係藉由凱耳達法(Kjeldahl method)而測定，彼等皆熟悉分析化學技術者所熟知之方法。

當蛋白質中的肽鍵藉由酵素水解而斷裂時，每一個經斷裂的肽鍵釋出一個胺基，造成胺基氮增加。應注意的是即使未經水解之蛋白質亦含有一些曝露之胺基。相較於形成經水解之蛋白質的未經水解之蛋白質，經水解之蛋白質亦具有不同分子量分布。經水解之蛋白質的功能及營養性質會為不同尺寸之胜肽所影響。分子量輪廓通常以列出特定分子量(單位係道耳頓)級分的範圍(例如2,000至5,000道耳頓、大於5000道耳頓)的重量百分比而提供。

如先前所述，對全蛋白質或完整蛋白質呈現敏感的人可受益於食用含有經水解之蛋白質的營養配方。此等敏感者可特別受益於食用低致敏性配方。

在一些實施態樣中，本發明之營養組成物係實質上不含完整蛋白質(除了外加之乳鐵蛋白)。在此上下文中，術語“實質上不含”意指在本文中的較佳實施態樣包含足夠低濃度的完整蛋白質，由此使該配方為低致敏性。依照本發明之營養組成物實質上不含完整蛋白質且因此為低致敏性的程度，係藉由2000年8月美國兒科學會政策聲明所判定，其中低致敏性配方係界定為：當於前瞻 性隨機化、雙盲、安慰劑對照試驗中時，具有95%信賴度，於適當臨床研究，證實不會引起90%經確認對牛乳過敏的嬰兒或孩童反應。

針對具有食物過敏及/或乳蛋白過敏之小兒個體(諸如嬰兒)的另一替代，係基於胺基酸的不含蛋白質之營養組成物。胺基酸係蛋白質之基本結構性建構單元。藉由完全預消化蛋白質而將蛋白質分解至基本化學結構，可獲得以胺基酸為底質之配方為最低致敏性配方。

在一具體實施態樣中，該營養組成物不含蛋白質且含有游離胺基酸作為蛋白質等效來源(除了乳鐵蛋白之外)。在此實施態樣中，該些胺基酸可包含但不限於組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、半胱胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、色胺酸、纈胺酸、丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、脯胺酸、絲胺酸、肉鹼、牛磺酸、及彼等之混合物。在一些實施態樣中，該些胺基酸可為支鏈胺基酸。在其他實施態樣中，小胺基酸胜肽可被包含作為該營養組成物之蛋白質組分。此等小胺基酸胜肽可為天然存在或經合成者。該營養組成物中的游離胺基酸量可介於約1至約5g/100Kcal之間不等。在一實施態樣中，100%的游離胺基酸具有低於500道耳頓的分子量。在此實施態樣中，該營養配方品可為低致敏性。

在該營養組成物的一具體實施態樣中，該蛋白質來源的乳清：酪蛋白比例類似於在人乳中所觀察到的 比例。在一實施態樣中，該蛋白質來源包含約40%至約85%乳清蛋白以及約15%至約60%酪蛋白。

在一些實施態樣中，該營養組成物包含每100Kcal介於約1g與約7g之間的蛋白質及/或蛋白質等效來源。在其他實施態樣中，該營養組成物包含每100Kcal介於約3.5g與約4.5g之間的蛋白質或蛋白質等效物。

本發明之營養組成物可包含天然或經改質之澱粉，例如像是糯玉米澱粉(waxy corn starch)、糯稻米澱粉、玉米澱粉、稻米澱粉、馬鈴薯澱粉、樹薯澱粉、小麥澱粉或彼等之任何混合物。大致上，普通玉米澱粉包含約25%的直鏈澱粉，而糯玉米澱粉幾乎完全是由分枝澱粉組成。同時，馬鈴薯澱粉通常包含約20%的直鏈澱粉，稻米澱粉包含直鏈澱粉：分枝澱粉比例約20：80，且糯稻米澱粉包含僅約2%直鏈澱粉。進一步，樹薯澱粉通常包含約15%至約18%的直鏈澱粉，且小麥澱粉具有約25%的直鏈澱粉含量。

在一些實施態樣中，該營養組成物包含糊化和/或預糊化糯玉米澱粉。在其他實施態樣中，該營養組成物包含糊化和/或預糊化樹薯澱粉。亦可使用其他糊化或預糊化澱粉，諸如稻米澱粉或馬鈴薯澱粉。

此外，在一些實施態樣中，本發明之營養組成物包含至少一果膠來源。該果膠來源可包含本技術領域中已知任何種類或等級之果膠。在一些實施態樣中，該果膠具有少於50%之酯化度且經分類為低甲基化(“LM”) 果膠。在一些實施態樣中，該果膠具有大於或等於50%之酯化度且經分類為高酯或高甲基化(“HM”)果膠。又在其他實施態樣中，該果膠係極低(“VL”)果膠，其具有少於約15%之酯化度。進一步，本揭露之營養組成物可包含LM果膠、HM果膠、VL果膠、或彼等之任何混合物。該營養組成物可包括可溶於水之果膠。且，如本技術領域中已知者，果膠溶液之溶解度和黏度係和分子量、酯化程度、果膠製劑之濃度和pH及相對離子的存在相關。

用於本文中之果膠典型上具有8,000道耳頓或更大之波峰分子量。本發明之果膠具有介於8,000及約500,000之間、更佳為介於約10,000及約200,000之間、且最佳為介於約15,000及約100,000道耳頓之間的較佳波峰分子量。在一些實施態樣中，本發明之果膠可為經水解之果膠。在某些實施態樣中，該營養組成物包含經水解之果膠，其具有的分子量小於完整或未經修飾之果膠的分子量。本發明之水解果膠可藉由任何本技術領域中已知之手段方法製備以減少分子量。該手段方法的實例為化學水解、酵素水解及機械剪切力。減少分子量之較佳手段方法為在升溫下藉由鹼或中性水解。在一些實施態樣中，該營養組成物包含經部分水解之果膠。在某些實施態樣中，該經部分水解之果膠具有的分子量小於完整或未經改質之果膠的分子量，但大於3,300道耳頓。

在一些實施態樣中，該營養組成物包含達至約20%w/w的澱粉及果膠之混合物。在一些實施態樣中， 該營養組成物包含達至約19%的澱粉及達至約1%的果膠。在其他實施態樣中，該營養組成物包含約達至約15%的澱粉及達至約5%的果膠。又在其他實施態樣中，該營養組成物包含達至約18%的澱粉及達至約2%的果膠。在一些實施態樣中，該營養組成物包含介於約0.05% w/w與約20% w/w之間的澱粉及果膠之混合物。其他實施態樣包括介於約0.05%與約19% w/w之間的澱粉及介於約0.05%與約1% w/w之間的果膠。進一步，該營養組成物可包含約0.05%與約15% w/w之間的澱粉及約0.05%與約5% w/w之間的果膠。

在一些實施態樣中，該營養組成物包含至少一種另外之碳水化合物，即，除了上述澱粉組分以外的所提供之碳水化合物組分。另外之碳水化合物來源可為任何本技術領域中所使用者，例如乳糖、葡萄糖、果糖、玉米糖漿固體、麥芽糊精、蔗糖、澱粉、稻米糖漿固體、及類似者。該營養組成物中的另外之碳水化合物組分量典型上可介於約5g與約25g/100Kcal之間不等。在一些實施態樣中，該碳水化合物的量係介於約6g及約22g/100Kcal之間。在其他實施態樣中，該碳水化合物的量係介於約12g及約14g/100Kcal之間。在一些實施態樣中，玉米糖漿固體係較佳者。再者，為包含於該營養組成物中，經水解、經部分水解、及/或經大量水解碳水化合物可為理想者，此乃彼等之易消化性所致。特定言之，經水解之碳水化合物較不可能含有致過敏抗原決定區(epitope)。

適用於本文中之碳水化合物原料的非限制實例包括源自糯性或非糯性形式之玉米、樹薯、稻米或馬鈴薯的經水解或完整、天然、或經化學修飾之澱粉。適合的碳水化合物之非限制實例包括各種經水解之澱粉，像是經水解之玉米澱粉、麥芽糊精、麥芽糖、玉米糖漿、葡萄糖、玉米糖漿固體、葡萄糖、及各種其他葡萄糖聚合物，及彼等之組合。其他適合的碳水化合物之非限制實例包括該些常提及之蔗糖、乳糖、果糖、高果糖玉米糖漿、不能消化之寡醣類者，例如寡果糖、及彼等之組合。

本組成物之具體實施態樣包括乳糖作為碳水化合物來源。在一個具體實施態樣中，該營養組成物的另外之碳水化合物組分包含100%乳糖。在另一實施態樣中，該另外之碳水化合物組分包含介於約0%與60%之間的乳糖。在另一實施態樣中，該另外之碳水化合物組分包含介於約15%與55%之間的乳糖。在又另一實施態樣中，該另外之碳水化合物組分包含介於約20%與30%之間的乳糖。在這些實施態樣中，剩餘的碳水化合物來源可為任何本技術領域中已知之碳水化合物。在一實施態樣中，該碳水化合物組分包含約25%的乳糖及約75%的玉米糖漿固體。

在一些實施態樣中，該營養組成物包含唾液酸。唾液酸為超過50個成員之9碳糖家族，它們均為神經胺酸(neuroaminic acid)衍生物。人體中可見之主要唾液酸家族係來自N-乙醯基神經胺酸次家族。唾液酸可見 於乳中，諸如牛及山羊。在哺乳動物中，相較於其他身體細胞膜，神經元細胞膜具有最高濃度的唾液酸。唾液酸殘基亦為神經節苷脂之組分。

若包括在該營養組成物中，唾液酸可以約0.5mg/100Kcals至約45mg/100Kcal的量存在。在一些實施態樣中，唾液酸可以約5mg/100Kcals至約30mg/100Kcals的量存在。又在其他實施態樣中，唾液酸可以約10mg/100Kcals至約25mg/100Kcals的量存在。

該營養組成物可包含ß-葡聚糖來源。葡聚糖為多醣，特別為葡萄糖的聚合物，其為天然存在且可於細菌、酵母菌、真菌、及植物的細胞壁中發現。貝他(β)葡聚糖(β-葡聚糖)本身為多樣的葡萄糖聚合物次集合，是經由β類型糖苷鍵連接在一起以形成複合碳水化合物的葡萄糖單體鏈形成。

β-1,3-葡聚糖為例如從酵母菌、蕈類、細菌、藻類、或穀類所純化之碳水化合物聚合物。(Stone BA,Clarke AE.Chemistry and Biology of(1-3)-Beta-Glucans.London：Portland Press Ltd；1993。)β-1,3-葡聚糖的化學結構取決於β-1,3-葡聚糖來源。再者，各種物化參數，諸如溶解度、一級結構、分子量、及分枝，與β-1,3-葡聚糖生物活性有關。(Yadomae T.,Structure and biological activities of fungal beta-1,3-glucans.Yakugaku Zasshi.2000；120：413-431。)

β-1,3-葡聚糖係天然存在的多醣，其具有或不 具有可見於各種植物、酵母菌、真菌及細菌的細胞壁中之β-1,6-葡萄糖側鏈。β-1,3；1,6-葡聚糖係包含具有(1,3)連接葡萄糖單元並具有接附在(1,6)位置的側鏈者。β-1,3；1,6葡聚糖係具有結構共同性的不同類葡萄糖聚合物，包括β-1,3鍵連接的直鏈葡萄糖單元骨架並具有自該骨架延伸的β-1,6-連接之葡萄糖分支。雖然此為目前所述之β-葡聚糖種類的基本結構，但可有某些變異體存在。例如，某些酵母菌β-葡聚糖具有另外自β(1,6)分支延伸之β(1,3)分枝區域，其將它們各個結構加上進一步複雜性。

源自焙用酵母菌(釀酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae))的β-葡聚糖係由位置1及3連接的D-葡萄糖分子鏈並具有接附在位置1及6的葡萄糖側鏈所組成。源自酵母菌之β-葡聚糖係不可溶、纖維狀的複糖，具有帶β-1,3骨架的葡萄糖單元直鏈的一般結構並散佈著通常為6至8個葡萄糖單元長的β-1,6側鏈。更特定言之，源自焙用酵母菌的β-葡聚糖係聚-(1,6)-β-D-葡萄哌喃糖苷基-(1,3)-β-D-葡萄哌喃糖。

又，β-葡聚糖耐受性佳且不會在小兒個體產生或造成過量氣體、腹部膨脹(abdominal distension)、氣脹(bloating)、或腹瀉。將β-葡聚糖加入供小兒個體之用的營養組成物(諸如嬰兒配方、成長乳、或其他孩童營養產品)將藉由增加對入侵病原體的抵抗力而改善個體的免疫反應且因此維持或改善整體健康。

本發明之營養組成物包括β-葡聚糖。在一些實施態樣中，該β-葡聚糖係β-1,3；1,6-葡聚糖。在一些實施態樣中，該β-1,3；1,6-葡聚糖係源自焙用酵母菌。該營養組成物可包含全葡聚糖粒子β-葡聚糖、微粒β-葡聚糖、PGG-葡聚糖(聚-1,6-β-D-葡萄哌喃糖苷基-1,3-β-D-葡萄哌喃糖)或彼等之任何混合物。

在一些實施態樣中，該β-葡聚糖存在於該組成物中的量係在介於每100g的組成物為約0.010與約0.080g之間。在其他實施態樣中，該營養組成物包含每供應量介於約10與約30mg之間的β-葡聚糖。在另一實施態樣中，該營養組成物包含每8 fl.oz.(236.6mL)供應量介於約5與約30mg之間的β-葡聚糖。在其他實施態樣中，該營養組成物包含β-葡聚糖的量足以提供每日約15mg與約90mg之間的β-葡聚糖。該營養組成物可以多個劑量而投遞，以達到整日投遞至個體的標的量之β-葡聚糖。在一些實施態樣中，β-葡聚糖在該營養組成物中的量係介於每100Kcal約3mg與約17mg之間。在另一實施態樣中，該β-葡聚糖的量係介於每100Kcal約6mg與約17mg之間。

業經發現，肌醇之營養補充提供可行且有效方法以劑量依賴性方式促進寡樹突細胞存活及增生，使寡樹突細胞前驅細胞數量的持續性增加。具有肌醇之營養補充提供發育性髓鞘形成增強之益處，由此轉譯成對於腦發育之功能性益處。有鑑於功能性髓鞘形成之重要性，肌醇 之營養補充藉由增強腦發育及健康而有益於小兒個體。又，肌醇之甜味就對小兒消費者嗜口性而言。提供進一步優勢。

如上述，在某些實施態樣中，肌醇以至少約4mg/100Kcal的量存在於本發明之營養組成物中；在其他實施態樣中，肌醇應以不大於約70mg/100Kcal的量存在。又在其他實施態樣中，該營養組成物包含約5mg/100Kcal至約65mg/100Kcal的量之肌醇。在一進一步實施態樣中，肌醇以7mg/100Kcal至約50mg/100Kcal的量存在於該營養組成物中。又，肌醇可以外源性肌醇或固有肌醇存在。在實施態樣中，肌醇大部份(即至少40%)係外源性肌醇。在某些實施態樣中，外源性肌醇對固有肌醇之比例係至少50：50；在其他實施態樣中，外源性肌醇對固有肌醇之比例係至少60：40。

一或多種維生素及/或礦物質亦可以足以供應個體每日營養需求的量加至該營養組成物中。本發明所屬技術領域中具有通常知識者應可了解，維生素及礦物質需求會例如依孩童的年齡而各異。例如，嬰兒可具有與年齡介於一歲及十三歲之間的孩童不同的維生素及礦物質需求。因此，本實施態樣不意欲將該營養組成物限制於特定年齡群，而意欲提供可接受之維生素及礦物質需求範圍。

該營養組成物可隨意地包括但不限於下列維生素或彼等之衍生物之一或多者：維生素B₁(噻胺、噻胺焦磷酸酯、TPP、噻胺三磷酸酯(thiamin triphosphate)、 TTP、噻胺鹽酸鹽、噻胺硝酸鹽)；維生素B₂(核黃素、黃素單核苷酸、FMN、黃素腺嘌呤二核苷酸、FAD、乳黃素、卵核黃素)；維生素B₃(菸鹼酸(niacin)、菸鹼酸(nicotinic acid)、菸鹼醯胺(nicotinamide)、菸鹼醯胺(niacinamide)、菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸、NAD、菸鹼酸單核苷酸、NicMN、吡啶-3-甲酸)、維生素B₃-前驅物色胺酸；維生素B₆(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺、吡哆醇鹽酸鹽)；泛酸(泛酸酯(pantothenate)、泛醇(panthenol))；葉酸鹽(葉酸、葉酸素(folacin)、喋醯麩胺酸)；維生素B₁₂(鈷胺素、甲基鈷胺素、去氧腺苷鈷胺素、氰基鈷胺素、羥基鈷胺素、腺苷鈷胺素(adenosylcobalamin))；生物素；維生素C(抗壞血酸)；維生素A(視網醇、醋酸視網酯(retinyl acetate)、棕櫚酸視網酯(retinyl palmitate)、與其他長鏈脂肪酸之視網酯類、視網醛、視網酸、視網醇酯類)；維生素D(鈣化醇、膽鈣化醇、維生素D₃、1,25,-二羥基維生素D)；維生素E(α-生育酚、α-生育酚醋酸酯、α-生育酚琥珀酯、α-生育酚菸鹼酸酯、α-生育酚)；維生素K(維生素K₁、葉醌、萘醌、維生素K₂、甲萘醌-7(menaquinone-7)、維生素K₃、甲萘醌-4、2-甲萘-1,4-二酮(menadione)、甲萘醌-8、甲萘醌-8H、甲萘醌-9、甲萘醌-9H、甲萘醌-10、甲萘醌-11、甲萘醌-12、甲萘醌-13)；膽鹼；肌醇；β-胡蘿蔔素、及任何彼等之組合。

又，該營養組成物可隨意地包括但不限於下 列礦物質或彼等之衍生物的一或多者：硼、鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣、氯化鈣、乳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、氯化物、鉻、氯化鉻、吡啶甲酸鉻、銅、硫酸銅、葡萄糖酸銅、硫酸銅(II)、氟化物、鐵、羰鐵、三價鐵、反丁烯二酸亞鐵、正磷酸鐵、鐵研磨物(iron trituration)、多醣鐵、碘化物、碘、鎂、碳酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂、硬脂酸鎂、硫酸鎂、錳、鉬、磷、鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鉀、乙酸鉀、硒、硫、鈉、琥珀酸辛酯磺酸鈉(docusate sodium)、氯化鈉、硒酸鈉、鉬酸鈉、鋅、氧化鋅、硫酸鋅、及彼等之混合物。非限制性例示性的礦物質化合物衍生物包括任何礦物質化合物的鹽類、鹼鹽、酯類及螯合物。

礦物質可以諸如磷酸鈣、甘油磷酸鈣、檸檬酸鈉、氯化鉀、磷酸鉀、磷酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硫酸銅(II)、硫酸錳、及亞硒酸鈉的鹽類形式加至營養組成物。另外之維生素及礦物質可如本技術領域中已知者加入。

在一實施態樣中，該營養組成物每份維生素A、C及E、鋅、鐵、碘、硒及膽鹼可含有介於任何特定國家最大膳食建議量的約10及約50%之間、或介於多個國家平均膳食建議量的約10及約50%之間。在另一實施態樣中，孩童營養組成物每份維生素B群可供應任何特定國家最大膳食建議量的約10至30%、或多個國家平均膳食建議量的約10至30%。在又另一實施態樣中，該孩童 營養產品中的維生素D、鈣、鎂、磷、及鉀量可與乳中的平均量相當。在其他實施態樣中，該孩童營養組成物中的其他營養素每份可占任何特定國家最大膳食建議量的約20%、或多個國家平均膳食建議量的約20%。

本發明之營養組成物可隨意地包括一或多個下列調味劑，其包括但不限於：調味萃取物、揮發性油、可可或巧克力調味劑、花生醬調味劑、餅乾碎、香草或任何市售可得之調味劑。可用的調味劑實例包括但不限於純大茴香精、仿香蕉精、仿櫻桃精、巧克力精、純檸檬精、純橘子精、純薄荷精、蜂蜜、仿鳳梨精、仿蘭姆精(imitation rum extract)、仿草莓精、或仿香草精；或揮發性油，例如蜂草油(balm oil)、月桂油、香柑油、雪松木油、櫻桃油、肉桂油、丁香油、或薄荷油；花生醬、巧克力調味劑、香草餅乾碎、奶油糖、太妃糖、及彼等之混合物。調味劑含量可取決於使用之調味劑而有極大差別。調味劑的種類及含量可依本技術領域中已知者選擇。

本發明之營養組成物可隨意地包括一或多種乳化劑，其可為成品的安定性而加入。適合的乳化劑實例包括但不限於卵磷脂(例如來自蛋或大豆)、α-乳白蛋白及/或單甘油酯及二甘油酯、及彼等之混合物。其他乳化劑係熟悉本技術者明顯易知者，且選擇適合的乳化劑部分取決於配方品及成品。

本發明之營養組成物可隨意地包括一或多種防腐劑，其亦可加入以延長產品保存期限。適合的防腐劑 包括但不限於己二烯酸鉀、己二烯酸鈉、苄酸鉀、苄酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉鈣、及彼等之混合物。

本發明之營養組成物可隨意地包括一或多種安定劑。適合用於實施本發明之營養組成物的安定劑包括但不限於阿拉伯膠、印度膠、刺梧桐膠、黃蓍膠、瓊脂、富塞蘭藻膠、瓜爾膠、結冷膠、刺槐豆膠、果膠、低甲氧果膠、明膠、微晶型纖維素、CMC(羧甲基纖維素鈉)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、DATEM(單甘油酯及二甘油酯之二乙醯酒石酸酯類)、聚葡糖、角叉菜膠、及彼等之混合物。

該揭示之營養組成物可以任何本技術領域中已知的形式提供，例如粉末、凝膠、懸浮液、糊劑、固體、液體、液體濃縮物、可配製重組之粉末化乳取代物、或即用產品。在某些實施態樣中，該營養組成物可包含營養補充物、孩童營養產品、嬰兒配方、人乳強化營養品、成長乳、或任何其他經設計以供嬰兒或小兒個體之用的營養組成物。本發明之營養組成物包括例如經口攝入、健康促進物質，包括例如食品、飲料、錠劑、膠囊及粉末。再者，本發明之營養組成物可經標準化至特定熱量含量，其可提供作為即用產品，或其可以濃縮形式提供。在一些實施態樣中，該營養組成物係粉末形式，具有範圍在5μm至1500μm、更佳為範圍在10μm至300μm的粒徑。

若該營養組成物係即用產品形式，該營養組成物的重量滲透濃度(osmolality)可介於約100與約 1100mOsm/kg水之間、更典型為約200至約700mOsm/kg水。

用於本發明之營養組成物的適合脂肪或脂質來源可為任何本技術領域中所已知或使用者，其包括但不限於動物來源，例如乳脂肪、奶油、奶油脂肪、蛋黃脂質；海洋來源，諸如魚油、海洋生物油、單細胞油；蔬菜和植物油，諸如玉米油、加拿大菜籽油(canola oil)、葵花油、大豆油、棕櫚液態油(palm olein oil)、椰子油、高油酸葵花油、月見草油、菜籽油、橄欖油、亞麻仁(亞麻籽)油、棉籽油、高油酸紅花油、棕櫚油硬脂(palm stearin)、棕櫚仁油、小麥胚芽油；中鏈三酸甘油酯油和脂肪酸之乳劑和酯類；以及彼等之任何組合。

本發明之營養組成物可提供最小、部分、或全部營養支持。該等組成物可為營養補充物或正餐替代物。該等組成物可以、但不必須是營養完整。在一實施態樣中，本發明之營養組成物係營養完整且含有適合種類及量的脂質、碳水化合物、蛋白質、維生素、及礦物質。脂質或脂肪量典型上可約1至約7g/100Kcal不等。蛋白質量典型上可約1至約7g/100Kcal不等。碳水化合物量典型上可約6至約22g/100Kcal不等。

在一實施態樣中，本發明之營養組成物包含有效量的膽鹼。膽鹼係供細胞正常功能之用的必需營養素。膽鹼為膜磷脂質的前驅物，且膽鹼加速乙醯膽鹼(一種涉及記憶儲存之神經傳遞物)的合成及釋放。再者，雖 然未欲受限於此或任何其他理論，咸信膳食膽鹼及二十二碳六烯酸(DHA)在人個體中加乘性作用，以促進磷脂醯膽鹼的生合成，且由此協助促進突觸新生。此外，膽鹼及DHA可展現促進樹突棘(dendritic spine)形成的加乘性效果，此為維持已建立之突觸連接是重要的。在一些實施態樣中，本發明之營養組成物包括有效量的膽鹼，其係介於每8 fl.oz.(236.6mL)供應量約20mg膽鹼至每8 fl.oz.(236.6mL)供應量約100mg之間。

再者，在一些實施態樣中，該營養組成物係營養完整，含有適合種類及量的脂質、碳水化合物、蛋白質、維生素、及礦物質，以作為個體的唯一營養來源。事實上，該營養組成物可隨意地包括許多蛋白質、胜肽、胺基酸、脂肪酸、益生菌、及/或彼等之代謝副產物、益生素、碳水化合物、及任何可提供個體許多營養及生理益處的其他營養素或其他化合物。另，本揭露之營養組成物可包含風味劑、風味增強劑、甜味劑、色素、維生素、礦物質、治療成分、功能性食物成分、食物成分、加工成分、或彼等之組合。

該LGG可溶性調介物製劑或包含該LGG可溶性調介物製劑之營養組成物可直接排至個體之腸道中。在一些實施態樣中，該營養組成物係直接導至腸中。在一些實施態樣中，該組成物可經調配以在醫師監督下經腸道食用或投與或且可意欲供諸如腹瀉疾病(celiac disease)及/或食物過敏之疾病或病況的特定膳食管理之用，該疾 病或病況之不同營養需求，基於所認可之科學原理，藉由醫學評估而建立。

本發明之營養組成物不限於包含特別列於本文中之營養素的組成物。任何營養素可投遞作為該組成物一部分以供符合個體內營養需求和/或以便最佳化個體內營養狀態之目的。

在一些實施態樣中，該營養組成物可以從嬰兒出生投遞直到符合足月產的時間為止。在一些實施態樣中，該營養組成物可以投遞予嬰兒直到至少約三個月矯正年齡為止。在另一實施態樣中，只要有必要達成足夠腸道屏障功能時，即可將該營養組成物投遞予個體。在又另一實施態樣中，該營養組成物可以從嬰兒出生投遞直到至少約六個月矯正年齡為止。在又另一實施態樣中，該營養組成物可以從嬰兒出生投遞直到至少約一年矯正年齡為止。

再者，本發明之營養組成物可經標準化至特定熱量含量，其可提供作為即用產品，或其可以濃縮形式提供。

在一些實施態樣中，本發明之營養組成物係成長乳。成長乳係意欲針對超過1歲的孩童(典型上為1至3歲、4至6歲、或1至6歲)的經營養強化之以乳為底質的飲料。它們並非醫療食品，且並非意欲作為處理特定營養缺乏的正餐替代物或補充物。相反地，成長乳係經設計欲作為多樣性膳食的互補物，以提供孩童達到持續、每日攝入所有必需維生素及礦物質、巨量營養素和額外功 能性膳食組分(諸如具有據信可促進健康性質非必需營養素)的額外保障。

根據本發明之營養組成物的精確組成可依市場而異，其取決於當地法規及所關注之族群的膳食攝入資訊。在一些實施態樣中，根據本發明之營養組成物由例如全乳或脫脂乳之乳蛋白來源組成，且外加糖及甜味劑以達到所欲之感官性質，以及外加維生素及礦物質。脂肪組成物典型上係源自乳原料。總蛋白質可為調整標的以符合人乳、牛乳、或較低值之總蛋白質。總碳水化合物係通常為調整標的以盡可能提供極少的外加糖(例如蔗糖或果糖)，以達到可接受之口味。典型上，加入維生素A、鈣、及維生素D至符合地區性牛乳貢獻之營養素的量。抑或是，在一些實施態樣中，可加入維生素及礦物質至提供約膳食營養素參考攝取量(DRI)的20%或每份供應量的每日營養素攝取量基準值(DV)的20%之量。又，營養素值可依市場而異，取決於經確認之所關注族群的營養需求、原料貢獻及地區性法規。

在某些實施態樣中，該營養組成物係低致敏性。在其他實施態樣中，該營養組成物係符合猶太律法食物(kosher)。在又進一步之實施態樣中，該營養組成物係非基改產品。在一實施態樣中，該營養配方品係不含蔗糖。該營養組成物亦可不含乳糖。在其他實施態樣中，該營養組成物不含任何中鏈三酸甘油酯油。在一些實施態樣中，未有角叉菜膠存在於該組成物中。在其他實施態樣 中，該營養組成物不含所有膠類。

在一些實施態樣中，本發明係關於用於諸如嬰兒或孩童之小兒個體之分階性營養餵養方案，該方案包括複數個根據本發明之不同營養組成物。各營養組成物包含經水解之蛋白質、至少一種預糊化澱粉、及至少一種果膠。在某些實施態樣中，該餵養方案之營養組成物亦可包括長鏈多不飽和脂肪酸來源、至少一種益生素、鐵來源、β-葡聚糖來源、維生素或礦物質、黃體素、玉米黃質、或任何在下文中所述之其他成分。本文中所述之營養組成物可每日一次而投予或在整個日程經由數次投予。

實施例係提供以說明本發明之營養組成物的一些實施態樣，但不應被被解讀作為對本發明之任何限定。其他在本文中之申請專利範圍內之實施態樣，熟習本技術領域者於考量本說明書或該營養組成物的實施或揭示在本文中之方法，將可清楚了解。擬將本說明書及實施例係認定為僅作例示之用，本發明範疇及精神係依實施例後的申請專利範圍所定之。

實施例 實施例1：針對腸道屏障功能之SBS模式 動物

四十八隻5至6週齡雄性史-道二氏(SD)大鼠，重量約150g至200g，係自National Rodent Laboratory Animal Center,Shanghai Branch(Shanghai,China)獲 得。在實驗起始前，在光-暗周期12h下，於恆溫(22±2℃)下，將大鼠養飼於個別籠中且使之適應新環境3至5日，任食水及飼料(chow)(M01-F,Shanghai Slac Laboratory Animal Co.LTD)。

實驗操作程序(protocol)係依照Shanghai Experimental Animal Society,China之準則。

實驗設計

將四十八隻大鼠隨機分成下列6組實驗組，各組8隻大鼠：假手術組(大鼠經歷腸橫斷(bowel transection)加上再吻合術(re-anastomosis))；SBS組(大鼠經歷大量小腸截除(massive small bowel resection)，加上每日藉由胃管灌食1mL水)；SBS+LEG可溶性調介物製劑A組(大鼠經歷大量小腸截除，加上補充以藉由管柱層析去鹽之LGG可溶性調介物)；SBS+LEG可溶性調介物製劑B組(大鼠經歷大量小腸截除，加上補充以藉由管超過濾去鹽之LGG可溶性調介物)；SBS+BCM組(大鼠經歷大量小腸截除，加上補充以未經調整之細菌培養基，其處理等同LGG可溶性調介物製劑B)；及SBS+LGG組(大鼠經歷大量小腸截除，加上補充以存活性LGG)。

可溶性調介物製劑A或B係於水中以等同劑量每日5×10⁸CFU LGG下藉由胃管灌食給予。活LGG係於1mL溫水中自第2日至第14日在5×108CFU/d的劑量 下於每日早晨藉由胃內管灌食(intragastric gavage)給予各大鼠。細菌培養基(BCM)係經稀釋且以與可溶性調介物製劑相同方式來胃管灌食。假手術及SBS大鼠兩者均每日與1mL的水以胃管灌食。所有大鼠均為實驗室飼料(lab chow)及水任食。監測大鼠15日，並於第15日犧牲大鼠。各大鼠的體重係每週測量兩次。

手術步驟

大鼠於實驗前經禁食12小時，但可自由飲水。所有手術步驟係於腹膜內注射戊巴比妥鈉(30mg/mL)麻醉下進行，戊巴比妥鈉的注射係以33至40mg/kg體重之劑量投予。以無菌技術，使用中線切開術將腹部打開。假手術係藉由在接近迴盲腸交界5cm處簡單橫斷迴腸並再吻合來進行。經截除手術之動物經歷自Treitz氏韌帶遠端5cm處至接近迴盲瓣10cm處75%至80%小腸截除。所有吻合術係使用5-0 vicryl縫線的間斷縫合來進行。閉合腹部前，以腹膜內注射2mL溫0.9%鹽水復甦(resuscitate)大鼠。復原後，大鼠禁水整夜，之後恢復規律膳食。所有大鼠於第15日均藉由腹膜內注射戊巴比妥(75mg/kg)予以犧牲。

2.4 形態及適應評估

黏膜結構將小段腸道樣品先以冰冷生理食鹽水潤洗，接著立即以10%的中性經緩衝之福馬林 (pH=7.2)固定。於固定72小時後，將該組織包埋於石蠟中於定位邊緣(oriented edge)上，並切成5-μm厚切片，以供蘇木素及伊紅染色。絨毛高度及腺窩深度係使用分析系統沿縱切面判定。絨毛高度及腺窩深度係於各樣本內以10個垂直向絨毛及腺窩來測量。使用目鏡測微計，絨毛高度係自腺窩開口至絨毛頂處判定，而腺窩深度係自腺窩基底處至其開口判定。

上皮細胞增生及細胞凋亡。

使用原位細胞死亡偵測套組(Roche Applied Science,Mannheim,Germany)進行終端去氧核苷酸轉移酶調介之生物素化dUTP鏈裂末端標記(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated biotinylated dUTP nick end labeling)(TUNEL)染色以分析腸道上皮細胞的細胞凋亡。細胞凋亡以每根絨毛上皮細胞的細胞凋亡標記陽性的數目來表示。腸道上皮細胞增生係藉由免疫組織染色增生細胞核抗原(PCNA)來評估。增生指標係以各切片中每個腺窩的增生細胞核抗原陽性細胞數目來表示。血清GLP-2量係藉由酵素免疫分析套組來測量(Millipore,USA)。

全身性及局部發炎

1ml的來自下大靜脈之血液以3000rpm離心10min。使用鱟變形細胞溶胞產物(LAL)測試(Chinese horseshoe crab reagent Corp,Xiamen,China)來偵測血清內毒素量，其以EU/ml表示。使用ELISA套組(R&D and Antibodies online)來偵測血清TNF-α及IL-6量，其以pg/ml表示。在將管腔內容物自迴腸移除後，將100mg迴腸樣本首先於1mL PBS中均質化，並接著2,000rpm離心20min。進一步收集上清液，以供使用ELISA套組的細胞介素測試。

腸細菌移位

在將動物犧牲後，將腸繫膜淋巴結(MLN)、肝及脾樣本均質化，並接著1,000rpm離心10min。進一步收集上清液，接以使用QIAmp DNA套組作基因組抽取。使用PCR偵測大腸桿菌，所使用的是針對大腸桿菌β-半乳糖苷酶側區的序列專一性引子。(引子：F：F5'-CTTTGCCTGGTTTCCGGCACCAGA A-3'；R：F5'-AACCACCGCACGATAGAGATTCGGG-3')。

腸屏障功能

腸穿透性：使用螢光異硫氰酸鹽-聚葡糖-40,000道耳頓(FD-40)(Sigma-Aldrich,USA)以評估腸穿透性。在第15日，將大鼠胃管灌食以含5mg FD-40的1mL水。在胃管灌食後6h，自上腸繫膜靜脈收集1ml的血液，並1,000rpm離心3min。以等體積PBS稀釋血漿樣本，並(二重複)注入96孔盤。以螢光分光光度 計(490nm激發及520nm發射)測量FD-40濃度。

腸內容物的sIgA量

收集自近端迴腸10cm內至末端迴腸的腸內容物。稱0.2g的樣本並於1mL PBS中震盪並在2,000rpm、4℃下離心20min。接著，收集上清液，並藉由ELISA、根據套組實驗操作程序(Alpco,USA)測定。

緊密型連結表現

收集各隻動物的遠端迴腸、以冰冷生理食鹽水沖洗、並沿腸繫膜緣打開。四個已知調控腸屏障功能的重要緊密型連結蛋白質之表現係使用西方印漬來檢驗。緊連蛋白、ZO-1、密連蛋白-1及密連蛋白-4的蛋白質色帶強度係使用Image J軟體來定量，且使用經與肌動蛋白標準化的相對表現量。

統計分析

數據以平均±SD呈現。不同營養素的主要效果係藉由單因子ANOVA或Mann-Whitney U檢定來評估。組間差異係藉由使用最低顯著差異(LSD)檢定(Fisher's protected least significant difference test)來測定。Mann-Whitney U檢定係應用於無母數(non-parametric)數據。使用Windows用的統計軟體SPSS版本17.0(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)來分析，且p <0.05定義為具統計顯著性。

體重改變

所有大鼠自本試驗開始具有類似體重。於腸截除後的7天及14天時間點，相較於假手術組，在所有五組SBS大鼠均觀察到較低體重。在五組SBS組中，在第14日時間點，相較於SBS組，所有的介入組逆轉體重減少。SBS-可溶性調介物製劑B及SBS-BCM動物的體重明顯高於其他SBS大鼠。又，相較於SBS對照組，處理組證實顯著較低的體重減少。

形態及適應評估

迴腸的絨毛高度及腺窩深度：相較於假手術大鼠，所有SBS動物均具有較大的絨毛高度及腺窩深度(小腸截除後的適應反應)。腸形態係示於圖1。

在各組間未偵測到細胞凋亡細胞計數的差異。至於增生，如每個腺窩的PCNA陽性細胞計數所示，相較於假手術組，所有SBS組傾向具有較高值，但顯著差異僅在假手術組與SBS-可溶性調介物製劑B組之間有偵測到。

腸生長因子-GLP2量

在所有大量腸截除組中，SBS-可溶性調介物製劑B及SBS-BCM大鼠顯示GLP-2量較SBS組有提高(P<0.05)。參見圖3A。

全身性及局部發炎 血清內毒素

相較於假手術組，血清內毒素量在所有大量 腸截除組中均顯著提高(P<0.05)。相較於SBS組，所有介入組均顯示較低內毒素量(P<0.05)。參見圖3B。

細胞介素量：在六組處理組中的細胞介素量係總結於表4中。相較於假手術組，發炎細胞介素在所有大量腸截除組中均顯著提高(P<0.05)。LGG可溶性調介物A及B顯著降低細胞介素量。

腸細菌移位

相較於SBS組，各介入組顯示顯著減少腸細菌移位至鄰近器官，如表5中所示。

腸屏障功能

腸穿透性：相較於假手術組，血清FD-40(螢光異硫氰酸鹽-聚葡糖-40,000道耳頓)量在所有大量 腸截除組中均顯著提高(P<0.05)。相較於SBS組，所有介入組均顯示腸穿透性改善。參見圖3C。

腸屏障抗性功能：腸內容物的sIgA：相較於SBS組，所有介入組的sIgA量均顯著提高(P<0.05)。相較於SBS-LGG組，SBS-可溶性調介物製劑B顯示較高的sIgA量(P<0.05)。參見圖3D。

結果總結

相較於SBS組，在大量腸截除後的腸道補充LGG可溶性調介物製劑，幫助減少細菌移位、改善腸適應反應、腸屏障抗性及腸屏障功能。

當相較於SBS組時，SBS-可溶性調介物製劑A及SBS-可溶性調介物製劑B兩者均顯示較佳體重增加、適應、較低發炎性細胞介素量及腸穿透性，以及較低的細菌移位。在大部分指標中，兩組均顯示類似改善，相較於可溶性調介物製劑A，可溶性調介物製劑B顯示較佳的緊密型連結蛋白質量之維持。在一些指標中，相較於LGG，LGG可溶性調介物製劑兩組均顯示較佳結果。

實施例2：內臟疼痛研究 動物

雄性及雌性史-道二氏(SD)大鼠係購自Harlan UK。這些大鼠係於Preclinical Research Facility,Bioscience Institute,University College Cork中配對，且 之後的後代係用於下列實驗中。將所得之母鼠及窩仔圈養於大育種籠中(於溫濕控房內，12h光照、12h黑暗的周期(0700-1900h光照)。所有實驗均依照European Directive 2010/63/EEC、2012年S.I No 543規定來進行，且經University College Cork的Animal Experimentation Ethics Committee核准。

實驗設計

母鼠幼鼠分離(maternal separation)實驗操作程序於出生時開始(PND0)，將窩仔隨機指派以經歷母鼠幼鼠分離或仍為未分離的對照組。

PND0：儘量使幼鼠不受母鼠及幼鼠干擾。在此時，儘量將照顧處理維持最低。

PND2：經指派至MS的窩仔自主要群聚房移至鄰近房間。母鼠先自飼養本籠(home cage)移走並置入較小的保定籠(holding cage)。之後，將來自相同窩仔的幼鼠輕和地置入小籠中。母鼠移回至飼養本籠及主要群聚房而無幼鼠。有幼鼠的籠仍在相鄰房，不讓來自母鼠的聲音傳至幼鼠，反之亦然。所有房間均維持在相同溫度(21°±2℃)，且光照條件與主要群聚房相同，且置於加熱墊組上，30-33℃歷時3h。在3h分離後，再將母鼠置於相鄰房，稍置於保定籠，待幼鼠回到原來飼養本籠。接著立即將母鼠置回。

除了每週一次的清潔，未分離窩仔留在母鼠 的飼養本籠不予干擾。此母鼠幼鼠分離程序從PND2進行至PND12(含)。分離時期於每日相同時間進行。

PND21離乳：依性別將雄性及雌性後代分組。MS及未分離NS雄性大鼠用於補充劑實驗。此於2個連續定群(cohort)中完成。針對各定群，將48隻大鼠依處理來隨機分組圈養，每種處理有2籠，且每籠3隻大鼠，且無同窩幼鼠圈養在一起。補充劑組係描述於表1中。在PND21幼鼠自母鼠離乳，膳食及水補充即開始。二組LGG可溶性調介物製劑(A及B)或作為參照標準的未經調整之細菌培養基(BCM)係補充至飲水。在整個研究直至PND85為止，可溶性調介物製劑係經補充至飲水以給予等同範圍係1.3×10⁸至4.3×10⁸存活性LGG/動物/日之劑量。在PND 79評估內臟過度敏感性。每週測量體重，每週測量水攝入，以及測量餵食攝入(3次/週)。

內臟敏感性評估

藉由直腸擴張(colorectal distension)來進行評估。動物禁食24h，並接著予以輕度麻醉。將帶有連接導管的6cm聚乙烯氣球插入遠端結腸的近肛門1cm處。以膠帶將導管固定至尾巴以避免位移。在開始直腸擴張前，讓動物自麻醉回復至少15分鐘。

使用客製化恆壓器以控制直腸擴張期間的空氣充氣及壓力。所使用之擴張範例(distension paradigm)係自0至80mmHg上升擴張(ascending phasic distension)。受 訓過之觀察員記分各隻大鼠之閾值，或當注意到第一次疼痛行為時的壓力。處理組總結係提供於下列表6中：

生長與攝入

所有大鼠均顯示初期或終期身體無差異。早期生命條件(NS或MS)或飲水補充對體重增加、食物攝入或流體攝入無效果(圖4A至4C)。

內臟疼痛

在大鼠，當相較於NS動物時，藉由母幼分離所誘發之幼年緊迫降低成年期所進行的直腸擴張的疼痛感知閾值(p=0.034)。此係藉由可溶性調介物製劑B而減緩，顯示當相較於MS大鼠飲水無任何補充，對直腸擴張疼痛閾值提高(p=0.03)(圖5)。

實施例3：LGG可溶性調介物製劑的製備

於首次LGG批式發酵(200L)期間，於3個時間點(指數期中期、指數期末期及停滯期)收集10L 的樣本，以供判定OD600及CFU與另外處理程序。藉由離心將生質物自懸浮液移除。將來自彼等3個取樣點的上清液收集並冰凍於-20℃，分別標示MEG、LEG、SEG。基於生物活性分析，指數期生長末期(LEG)所收集的培養後培養基(spent culture medium)展現最高的細胞介素誘發。指數期生長末期取樣對應近約15小時發酵時間。發酵亦藉由對應OD值及發酵期間鹼攝取以維持pH來監測。

表7中所述之培養基產生高量生質物。

針對供相對虛弱個體之用的營養產品，諸如嬰兒配方，Tween 80的存在不被認為係所欲者或可接受者。因此，判定的是，Tween 80是否可省去或由更天然油或脂肪酸作為界面活性劑所置換。Growth of LGG生長於未有 Tween 80的培養基相當於生長於具有Tween的培養基。置換的油均未誘發較佳生長。因此，結論為Tween 80可自培養基移除，且用於所有進一步發酵之培養基不再含有Tween 80。

第二次200L批式發酵係以類似方式進行而未加入Tween 80(2)。約30L的已使用培養基(spent medium)樣本係於指數生長期末期時在生質物移除後來收集。將已使用培養基去鹽、無菌過濾(0.2μm)、及凍乾。藉由去鹽，移除於發酵期間所製造之乳酸；此步驟業經納入以能夠評估乳酸以外的細菌代謝物效果且避免乾燥材料期間的困難。微過濾(=無菌過濾)確保不存在任何完整細菌細胞。凍乾(=冷凍乾燥)係自液體獲得乾燥材料之選擇。

去鹽緩衝液及方法之選擇

去鹽程序係藉由2種不同方法來進行：管柱層析(CG)或超過濾(UF)。一開始，醋酸鈉緩衝液係用於兩者程序(2)。低分子量分子(CG係<6kDa，UF係<5kDa)，包括乳酸，係藉由去鹽而移除。分別收集>6kDa及>5kDa級分以供進一步評估。從CG管柱流出的經去鹽之液體(>6kDa)標示為可溶性調介物製劑A。來自UF之阻留物(retentate)標示為可溶性調介物製劑B。

然而，經判定，終產物中的殘餘醋酸鈉係非所欲者。此包括來自培養基或程序助劑(諸如用於去鹽程 序之緩衝液)的殘餘醋酸鈉。為避免最終製劑存在醋酸鈉，建議替代緩衝液以供去鹽程序之用，即檸檬酸鉀。於標準體外分析測試從二種使用不同緩衝液的不同去鹽實驗流程所獲得之培養上清液，以獲得程序改變對生物活性上的影響之初步洞見。結果顯示自CG(可溶性調介物製劑A)及UF(可溶性調介物製劑B)所獲得製劑，有相當的細胞介素產生。從技術觀點，針對放大生產(upscaled production)，可溶性調介物製劑B係較佳於可溶性調介物製劑，此乃管柱層析係非常困難應用於大量材料所致。然而，為獲得對生物活性的較佳了解，目前儘可能兩種可溶性調介物製劑係納入臨床前生物活性評估。實驗室規模下所製備的去鹽培養物上清液於使用於非臨床分析前係藉由凍乾(冷凍乾燥)而乾燥。

雖然已使用特定術語、裝置及方法說明本發明之較佳實施態樣，但此說明僅為描述目的之用。所使用文字為說明文字而非限制性文字。應了解，在未悖離於下列申請專利範圍所述之本發明精神及範疇下，本發明所屬技術領域中具有通常知識者可進行更改及變動。此外，應了解，各種實施態樣可全部或部分相互取代。因此，後附申請專利範圍之精神及範疇不應受限於本文中所含的較佳形式之描述。

<110> 美強生營養品美國控股公司(Mead Johnson Nutrition Company)

<120> 用於促進腸道屏障功能並減緩內臟疼痛之營養組成物

<130> MJE00434NP

<140> TW105133902

<141> 2016-10-20

<150> US14/934,559

<151> 2015-11-06

<160> 3

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 4

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

<210> 2

<211> 4

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

<210> 3

<211> 26

<212> PRT

<213> 家牛

<400> 3

Claims (30)

1. 一種對有需要之小兒個體用於i)促進腸道屏障再生、ii)促進腸道屏障成熟及/或適應、iii)支持腸道屏障抗性及/或iv)保護腸道屏障功能之非治療性方法，該方法包含：投予該小兒個體組成物，該組成物包含有效量的來自益生菌批式培養製程的指數生長末期之可溶性調介物製劑。
2. 如請求項1之方法，其中該益生菌係鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG)(LGG)。
3. 如請求項2之方法，其中該小兒個體患有腸道屏障功能受損或腸道完整性損失。
4. 如請求項2之方法，其中該小兒個體患有短腸症候群或壞死性腸炎。
5. 如請求項2之方法，其中該小兒個體係嬰兒。
6. 如請求項5之方法，其中該小兒個體係早產嬰兒。
7. 如請求項2之方法，其中該可溶性調介物製劑係藉由下述製造：(a)將LGG於適合培養基中經使用批式法予以培養；(b)於培養步驟的指數生長末期收獲培養物上清液，該指數生長末期係依批式培養法的遲滯期與停滯期之間的後半期界定；(c)隨意地自該上清液移除低分子量組成分以留存分子量超過5或6kDa之組成分；(d)藉由0.2μm無菌過濾移除任何剩餘細胞以提供可溶 性調介物製劑；(e)自該可溶性調介物製劑移除液態物以獲得該組成物。
8. 如請求項7之方法，其中步驟(b)另包含藉由無菌過濾移除細菌細胞。
9. 如請求項7之方法，其中該指數生長末期係依批式培養法的遲滯期與停滯期之間的後四分之一部分界定。
10. 如請求項7之方法，其中該批式培養係於不具有聚山梨糖醇酯類之培養基中進行。
11. 如請求項9之方法，其中該培養基含有選自油酸、亞麻籽油、橄欖油、菜籽油、葵花子油或彼等之混合物的成分。
12. 如請求項7之方法，其中該批式培養係在pH 5至7進行。
13. 如請求項2之方法，其中該組成物係小兒營養組成物。
14. 如請求項2之方法，其中該有效量等同每公斤體重每日約1×10⁴至約1×10¹²活益生菌細菌的細胞等效物。
15. 一種用於嬰兒以i)促進腸道屏障再生、ii)促進腸道屏障成熟、iii)支持腸道屏障抗性及/或iv)保護腸道屏障功能之嬰兒配方，該嬰兒配方包含：達至約7g/100Kcal的脂肪或脂質；達至約5g/100Kcal的蛋白質來源或蛋白質等效物來源；達至約22g/100kcal的碳水化合物來源；及 可溶性調介物製劑，其來自鼠李醣乳酸桿菌GG(LGG)批式培養製程的指數生長末期。
16. 如請求項15之嬰兒配方，其中該嬰兒配方另包含約0.1g/100kcal至約1g/100kcal的益生素組成物，其中該益生素組成物包含聚右旋糖、半乳糖寡糖或彼等之組合。
17. 如請求項16之嬰兒配方，其中聚右旋糖及半乳糖寡糖類占該益生素組成物的至少約20%。
18. 如請求項15之嬰兒配方，其另包含二十碳四烯酸(ARA)，其中該ARA與二十二碳六烯酸(DHA)係以約1：3至9：1的範圍之重量比存在。
19. 如請求項15之嬰兒配方，其另包含乳鐵蛋白。
20. 一種來自益生菌批式培養製程的指數生長末期之可溶性調介物製劑於供製備用於減輕小兒個體內臟疼痛敏感性的營養組成物之用途。
21. 如請求項20之用途，其中該益生菌係鼠李醣乳酸桿菌GG(LGG)。
22. 如請求項20之用途，其中該小兒個體係嬰兒。
23. 如請求項20之用途，其中該小兒個體係早產嬰兒。
24. 如請求項20之用途，其中該可溶性調介物製劑係藉由下述製造：(a)將LGG於適合培養基中經使用批式法予以培養；(b)於培養步驟的指數生長末期收獲培養物上清液，該指數生長末期係依批式培養法的遲滯期與 停滯期之間的後半期界定；(c)隨意地自該上清液移除低分子量組成分以留存分子量超過5或6kDa之組成分；(d)藉由0.2μm無菌過濾移除任何剩餘細胞；(e)自該可溶性調介物製劑移除液態物以獲得該組成物。
25. 如請求項24之用途，其中該指數生長末期係依批式培養法的遲滯期與停滯期之間的後四分之一部分界定。
26. 如請求項24之用途，其中該批式培養係於不具有聚山梨糖醇酯類之培養基中進行。
27. 如請求項24之用途，其中該培養基含有選自油酸、亞麻籽油、橄欖油、菜籽油、葵花子油或彼等之混合物的成分。
28. 如請求項24之用途，其中該批式培養係在pH 5至7進行。
29. 如請求項20之用途，其中該營養組成物係小兒營養組成物。
30. 如請求項20之用途，其中該營養組成物包含有效量的每公斤體重每日約1×10⁴至約1×10¹²活益生菌細菌的細胞等效物。