TW201726179A

TW201726179A - 純化方法

Info

Publication number: TW201726179A
Application number: TW106100137A
Authority: TW
Inventors: 珍歐森法蘭維克; 歐拉Ｂ萊恩
Original assignee: 拜耳公司
Priority date: 2016-01-05
Filing date: 2017-01-04
Publication date: 2017-08-01
Also published as: EP3400084A1; WO2017118593A1; CN108601992A; UY37064A; GB201600161D0; CA3010196A1; JP2019509327A; AR107297A1; US10729794B2; US20190001005A1

Abstract

本發明提供一種用於自包含227Th及223Ra之混合物純化227Th的方法，該方法包含： i) 製備包含溶解於第一水性緩衝液中之227Th離子及223Ra離子之混合物的第一溶液； ii) 將該第一溶液裝載至諸如強陽離子交換樹脂之分離材料上； iii) 自該分離材料溶離227Th，由此產生包含227Th之第二溶液； iv) 視情況使用第一水性洗滌介質沖洗該分離材料；本發明另外提供一種用於形成放射性藥物之包含錯合該經純化227Th的方法、醫藥產品及其在治療諸如癌症之疾病中之用途及一種用於產生此種產品之套組。

Description

純化方法

本發明係關於用於醫藥用途之釷-227 (²²⁷ Th)的純化。特定而言，本發明係關於在用於醫藥學上投與至人類個體之前不久純化釷-227之方法。

特定細胞殺滅可為成功治療哺乳動物個體中之各種疾病所必需的。其之典型實例為治療惡性疾病，諸如肉瘤及癌瘤。然而，選擇性消除某些細胞類型亦可在許多其他疾病(尤其免疫疾病、增生性疾病及/或其他贅生性疾病)之治療中起重要作用。選擇性治療之最常見方法當前為手術、化學療法及外照射。然而，靶向內放射性核種療法為具有將高細胞毒性放射遞送至非所需細胞類型之潛力的有前景的及發展中的領域。當前經授權適用於人體之放射性藥物之最常見形式採用β發射之放射性核種及/或γ發射之放射性核種。然而，近來對在治療中使用α發射放射性核種的興趣激增，此係因為其對於更特定細胞殺滅的潛力。一個α發射之核種(特定而言，鐳-223 (²²³ Ra))經證實非常有效，尤其對於與骨及骨表面相關聯之疾病的治療。亦主動地研究額外的α發射體且備受關注之一個同位素為α發射體釷-227。生理環境中之典型α發射體之放射範圍通常小於100微米，僅等於幾個細胞直徑。此使得此等核較適用於治療腫瘤(包括微小轉移灶)，此係因為極少之輻射能量將超出靶細胞且因此可將對周圍健康組織之損害降至最低(參見Feinendegen等人，Radiat Res 148:195-201 (1997))。對比而言，β粒子在水中具有1 mm或更大之範圍(參見Wilbur，Antibody Immunocon Radiopharm 4: 85-96 (1991))。與β粒子、γ射線及X射線相比，α粒子放射之能量較高，通常為5 MeV至8 MeV，或為β粒子之能量的5倍至10倍及γ射線之能量的20倍或更多倍。因此，在極短距離內之大量能量之此沈積相較於γ放射及β放射給予a放射格外高的線形能量轉移(LET)、較高的相對生物學功效(RBE)及較低氧增強比(OER) (參見Hall，「Radiobiology for the radiologist」，第五版，Lippincott Williams及Wilkins，Philadelphia PA，USA，2000)。此等屬性解釋α-發射的放射性核種之非凡細胞毒性且亦對在內部投與同位素的情況下所需之純度水準施加嚴格需求。在任何污染物亦可為α發射體之情況下尤其如此，此係由於此等可潛在地保留在體內且造成顯著損害。放射性化學純度應合理地高且具有非靶向放射性核種之污染應降至最低，尤其在污染物為α發射體的情況下。自²²⁷ Ac起之放射性衰變鏈產生²²⁷ Th且隨後導致²²³ Ra及其他放射性同位素。此鏈中之前三個同位素展示如下。表展示²²⁷ Th之元素、分子量(Mw)、衰變模式(模式)及半衰期(以年(y)或天(d)為單位)及在其之前及之後的同位素。製備²²⁷ Th可自²²⁷ Ac開始，²²⁷ Ac自身僅在鈾礦石中發現微量，其為源自²³⁵ U之天然衰變鏈之部分。一公噸鈾礦含有約十分之一公克錒，且因此儘管²²⁷ Ac為天然存在的，但其更通常地係藉由核反應堆中之²²⁶ Ra之中子輻照製造。自此說明可看出，相對於自上述衰變鏈製備²²⁷ Th以用於醫藥學用途，²²⁷ Ac (具有超過20年之半衰期)為非常危險的潛在污染物。然而，即使移除²²⁷ Ac或將其降至安全水準，²²⁷ Th將繼續衰變至具有剛好低於19天的半衰期之²²³ Ra。由於²²³ Ra為鹼土金屬，其將不會輕易地由針對釷或其他錒系元素設計之配位體配位。此²²³ Ra隨後在達至穩定²⁰⁷ Pb之前形成包括4α衰變及2β衰變的潛在不可控(非靶向)衰變鏈之開端。此等係說明於下表中：自以上兩個衰變表顯而易見，²²³ Ra不可自²²⁷ Th之任何製備完全消除，此係因為後者將恆定地衰變且產生前者。然而，明顯地係在²²³ Ra核達至穩定同位素之前，超過25 MeV之輻射能量將自投與至患者之每一²²³ Ra核之衰變釋放。由於兩個元素之不同化學性質，此²²³ Ra將不藉由經設計以將²²⁷ Th傳送至其作用部位之螯合及特異性結合之系統來結合及靶向亦為可能的。因此，出於靶細胞殺滅的目的，最大化治療效果且使副作用降到最低，重要的為在投與之前控制任何²²⁷ Th製劑中之²²³ Ra的水準。自²²³ Ra分離²²⁷ Th可在放射學實驗室中迅速且便利地進行。然而，此將不會有效地實現所需結果，此係因為隨後必須將所得經純化²²⁷ Th傳送至投與部位。鑒於以上，提供一種自污染物²²³ Ra純化²²⁷ Th的方法將為相當大的優勢，該方法可在利用將不需要大量訓練及經驗進行之簡單方法的投與時或投與之前不久在照護點處或其附近進行。若可自安全及處理角度避免使用強力無機酸及/或強鹼，則其將為一優勢。若所使用之試劑適用於直接用於最終藥品中，則此尤其適用。若較小體積可用於易化處理且減小受污染廢料之體積，則其亦將為一優勢。若此方法可藉由可視情況呈套組形式供用於此類共同製備的一組簡單試劑及裝置項來實施，則將為又一優勢。²²⁷ Th之預先已知製劑通常用於實驗室用途及/或未關於醫藥學標準測試純度。舉例而言，在WO2004/091668中，²²⁷ Th藉由來自單個管柱之陰離子交換製備且在不驗證純度之情況下用於實驗目的。在針對²²⁷ Th之大部分製備型方法中，分離之主要目的為移除長期存活的²²⁷ Ac母同位素。方法未針對在先前自²²⁷ Ac純化之²²⁷ Th樣本中內生之²²³ Ra的移除經預先設計或優化。

本發明人現已確認，快速及簡單的純化程序可用於使用單一陽離子交換純化步驟自²²⁷ Th之製劑移除²²³ Ra。以此方式，可製造極高放射性化學純度之²²⁷ Th溶液，同時在方法中提供多個所需優勢。在一第一態樣中，本發明因此提供一種用於自包含²²⁷ Th及²²³ Ra之混合物純化²²⁷ Th的方法，該方法包含： i) 製備包含溶解於第一水性緩衝液中之²²⁷ Th離子及²²³ Ra離子之混合物的第一溶液； ii) 將該第一溶液裝載至分離材料上(例如，強陽離子交換樹脂)； iii) 自分離材料溶離²²⁷ Th，由此產生包含²²⁷ Th之第二溶液； iv) 視情況使用第一水性洗滌介質沖洗該分離材料；通常將按以上所給次序進行步驟i)至步驟iv)，儘管可在所列步驟期間或之間明顯地進行其他步驟及製程。製程視情況將亦包括以下其他步驟中之至少一者，各自通常在以上步驟i)至步驟iv)之後進行： v) 分析該第二溶液之該²²⁷ Th含量； vi) 自該第二溶液蒸發該液體； vii) 自該第二溶液中所含之該²²⁷ Th之至少一部分形成至少一種放射性藥物； viii) 滅菌(例如，無菌過濾)該放射性藥物。步驟vii)形成尤佳額外步驟。在另一態樣中，本發明提供包含每1MBq²²⁷ Th少於50KBq²²³ Ra，較佳地每1MBq²²⁷ Th少於 10KBq²²³ Ra的²²⁷ Th之溶液或其他樣本。此種溶液視情況藉由本文中描述之方法中之任一者形成或可藉由本文中描述之方法中之任一者形成，且較佳地藉由本文中描述之較佳方法形成或可藉由本文中描述之較佳方法形成。對應地，本發明之方法較佳地用於形成包含每1MBq²²⁷ Th少於50KBq²²³ Ra，較佳每1MBq²²⁷ Th少於10KBq²²³ Ra的²²⁷ Th之溶液。亦提供對應藥物製劑，其可為無菌的且可包含至少一種錯合劑(尤其²²⁷ Th)、至少一種靶向劑(例如，共軛至該錯合劑)及視情況至少一種醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。在另一態樣中，本發明亦提供包含²²⁷ Th及²²³ Ra之混合物、第一水性緩衝液及分離材料(例如，陽離子交換樹脂)的套組(通常用於進行本發明之方法的套組)。²²⁷ Th及²²³ Ra之混合物(如同本發明之其他態樣中之第一溶液)將通常亦包含其他²²³ Ra子體產品。此種混合物可為在儲存及傳送期間經純化或部分經純化²²⁷ Th之放射性衰變之結果。

必須常規地以極高純度標準製造所有類型之藥物且(例如，純度及無菌之)標準具有極高可信度。向個體之主體投與α-發射的放射性核種需要所有此等考量，但另外添加對較高放射性化學純度之需求。自長期存活的前體同位素之純化為放射性化學純度之一個關鍵態樣，但此可通常在可利用錯合物方法及處理程序之專業放射性化學實驗室或工廠中完成。然而，在所感興趣的放射性核種衰變成其他放射性同位素之情況下，進一步程度之放射性化學純化可為必要的。放射性子體同位素之產生可顯著地造成內放射性核種療法之毒性且可為劑量限制性的。在²²⁷ Th之情況下，子體同位素為鐳、鹼土金屬，同時母體為錒系之過渡金屬。此意謂可適用於結合釷之任何螯合或錯合將很可能不在化學上適用於保留子體鐳。作為在極高速下射出α粒子之後保留動量的結果，α衰變另外將非常顯著的「反衝」能量施加至子體核上。此反衝攜載比共價鍵或配位相互作用高許多倍的能量且將必然將子體核分流出初始母同位素之即時環境外。由於存在²²³ Ra及藉由²²⁷ Th衰變活體內產生之其子體為潛在地劑量限制性的，重要的為不將(顯著)額外的、不必要的²²³ Ra投與至個體以進一步限制²²⁷ Th之可接受治療劑量或增大副作用。鑒於²²³ Ra不可避免地向內生長成²²⁷ Th樣本及期望儘可能合理地減少遞送至個體之彼²²³ Ra而研發出本發明。由於²²³ Ra最初將以每小時總活性之約0.2%之速率生長，在投與之前，方法應進行不超過幾個小時以便最小化不必要劑量。類似地，若可在製備之2小時至4小時內使用²²⁷ Th，則方法應較佳地提供相對於²²³ Ra具有約99% (例如，95%至99.9%)放射性化學純度之²²⁷ Th。更高純度可為低效的及/或不顯著的，此係因為在使用之前向內生長將破壞任何更嚴格純化方法之益處，而更低純度(比如小於90%放射性化學純度或小於95%放射性化學純度)為非所要的，此係因為²²³ Ra之劑量(且因此毒性)可經合理地進一步限制，同時允許實際的投與時間。在一個實施例中，用於本發明之²²⁷ Th及²²³ Ra之混合物將不含不在自²²⁷ Th開始之衰變鏈中之大量放射性同位素。特定而言，適用於本發明之任何態樣的²²⁷ Th及²²³ Ra之混合物將較佳地包含每100 MBq²²⁷ Th少於20 Bq²²⁷ Ac，較佳地每100 MBq²²⁷ Th 少於5 Bq²²⁷ Ac。本發明提供一種用於製造在適合用於內放射性核種療法之純度水準下的²²⁷ Th的方法。在下文指示系統之多個較佳特徵，其中之每一者可與技術上可行的任何其他特徵組合使用，除非另外明確地指示。本發明之方法及所有對應實施例將較佳地在適用於患者投與之標度上進行。若此標度可為單次治療性劑量或可適用於多個個體，則各自接收劑量。通常，該方法將在適用於在1小時至5小時內投與之標度下使用，諸如²²³ Ra之約1個至10個典型劑量。單次劑量純化形成一個較佳實施例。明顯地，典型劑量將取決於施用，但預期典型劑量可為自0.5 MBq至100 MBq，較佳1 MBq至25 MBq，最佳約1.2 MBq至10 MBq。將進行合併劑量純化，其中可能使用至多20個典型劑量，較佳地至多10個典型劑量或至多5個典型劑量。因此，可用至多200 MBq，較佳至多100 MBq進行純化且視需要在純化之後劃分成分離劑量。本發明之方法之步驟i)與包含²²⁷ Th及²²³ Ra (且通常將亦包含²²³ Ra子體同位素，參見上文列表之彼等)之溶液有關。此種混合物將本質上藉由²²⁷ Th之樣本之漸次性衰變而形成，但對於在本發明中之使用亦將較佳地具有以下特徵中之一或多者，單獨地或以任何可行的組合： a)²²⁷ Th放射能可為至少0.5 MBq (例如0.5 MBq至200 MBq)，較佳至少0.5 MBq，更佳至少1.2 MBq； b) 溶液可形成於第一水性緩衝溶液中； c) 溶液可具有不大於50 ml (例如，0.5 ml至10 ml或0.5 ml至5 ml)，較佳不大於10 ml或5 ml，更佳不大於3 ml的體積。 d) 第一水性緩衝溶液可呈在3與6.5之間，較佳在3.5與6之間且尤其在3.8與5.8之間的pH。 e) 可使用濃度為0.01 M至0.2 M (諸如0.03 M至0.05 M或0.1 M至0.2 M)的第一水性緩衝溶液。 f) 第一水性緩衝溶液可包含至少一種有機酸緩衝液，基本上由該至少一種有機酸緩衝液組成或由其組成。 g) 第一水性緩衝溶液可包含選自檸檬酸鹽緩衝液、乙酸鹽緩衝液及其混合物的至少一種有機酸緩衝液，基本上由該至少一種有機酸緩衝液組成或由其組成。 h) 第一水性緩衝溶液可視情況另外包含至少一種自由基清除劑及/或至少一種螯合劑(尤其非緩衝螯合劑)。其中許多為此項技術中已知的且包括pABA (清除劑)及EDTA (螯合劑)。 i) 第一水性緩衝溶液可視情況另外包含包括鹽類(諸如NaCl)之其他添加劑。本發明之方法之步驟ii)與將第一溶液裝載至分離材料上(例如陽離子交換樹脂)有關。本文中所提及之此步驟及實體可具有以下較佳特徵，單獨地或呈任何可行的組合形式，及視情況呈與如本文所描述之其他步驟之任何特徵的任何可行組合形式： a) 分離材料可為陽離子交換樹脂或羥基磷灰石，較佳為強陽離子交換樹脂。 b) 樹脂(例如，強陽離子交換樹脂)可為基於二氧化矽之樹脂； c) 陽離子交換樹脂可包含一或多個酸官能基； d) 陽離子交換樹脂可包含至少一種酸部分且較佳至少一個羧酸部分或磺酸部分，諸如烷基磺酸樹脂(諸如丙基磺酸(PSA)樹脂)； e) 樹脂(例如，強陽離子交換樹脂)可具有5 mm至500 mm，較佳10 mm至200 mm之平均粒度。 f) 分離材料(例如，陽離子交換樹脂)可以管柱之形式使用。 g) (例如，當封裝於管柱中時)所使用之分離材料(例如，樹脂)之量可為100 mg或更低(例如，2 mg至50 mg)，較佳10 mg至50 mg。 h) 可在用第一溶液裝載之前藉由用一或多個體積之水性介質洗滌來預調節分離材料(例如，樹脂)。通常，緩衝溶液且更佳第一水性緩衝液將用於預處理。本發明之方法之步驟iii)與自該分離材料(例如，強陽離子交換樹脂)溶離²²⁷ Th以由此產生包含²²⁷ Th之第二溶液有關。本文中所提及之此步驟及實體可具有以下較佳特徵，單獨地或呈任何可行的組合形式，及視情況呈與如本文所描述之其他步驟之任何特徵的任何可行組合形式： a) 可藉助於溶離劑溶液或藉助於「乾燥」溶離來進行溶離，諸如藉由在重力下、在離心力下或在來自上方的氣體壓力下及/或來自下方的真空下溶離； b) 其中溶離係藉助於溶離劑溶液，此可為水性緩衝溶液，諸如本文所描述之彼等中之任一者，包括有機酸緩衝溶液； c) 可藉由「乾燥」方式進行溶離，較佳在重力或離心力下進行溶離，諸如以離心自旋。 d) 藉由離心力溶離可處於為在10秒至10分鐘，較佳20秒至5分鐘之時間段內呈重力之至少1000倍、較佳至少2000倍或至少10000倍的「相對離心力」(RCF) (例如，為1000 g至50000 g之rcf)；本發明之方法之步驟iv)與使用第一水性洗滌介質沖洗該分離材料(例如，強陽離子交換樹脂)之視情況選用之步驟有關。本文中所提及之此步驟及實體可具有以下較佳特徵，單獨地或呈任何可行的組合形式，及視情況呈與如本文所描述之其他步驟之任何特徵的任何可行組合形式： a) 第一水性洗滌介質可為水，諸如蒸餾水、去離子水或用於注射之水，或可為緩衝液，諸如如本文所描述之有機酸緩衝液； b) 第一水性洗滌介質可包含與第一緩衝溶液相同的緩衝液； c) 可省略視情況選用之洗滌步驟； d) 視情況選用之洗滌步驟可包含在如本文中所描述之「乾燥」溶離之後將第一介質添加至樹脂且隨後「乾燥」溶離該洗滌介質，諸如藉由重力或離心； e) 在洗滌步驟中溶離之溶液可與包含²²⁷ Th之第二溶液組合。在本發明之方法之步驟iv)之後，通常將分離材料(例如，樹脂)處理為放射性廢料。由於所需之樹脂之量通常相當小(例如，小於50 mg)，故此不存在主要棄置問題。然而，若需要再次使用樹脂或恢復²²³ Ra以供分析或任何其他原因，則可使用任何適合的介質溶離²²³ Ra。用於此類恢復之適合媒介包括緩衝溶液，諸如本文所描述之彼等及水性無機酸，諸如HCl及H₂ SO₄ 。若將再次使用樹脂，則其將通常在再次使用之前藉由若干體積之第一緩衝溶液再生。本發明之方法可包含多個視情況選用之步驟，只要技術上可能，其中之每一者可獨立地存在或不存在。本發明之方法之步驟v)與視情況分析第二溶液之²²⁷ Th含量有關。本文中所提及之此步驟及實體可具有以下較佳特徵，單獨地或呈任何可行的組合形式，及視情況呈與如本文所描述之其他步驟之任何特徵的任何可行組合形式： a) 可藉由γ檢測/光譜分析來分析²²⁷ Th，諸如藉由使用鍺半導體檢測器(高純度鍺檢測器-HPGe)； b)²²⁷ Th含量可相較於所需藥物劑量且經稀釋至標準濃度，或撤回以供投與之適當劑量。本發明之方法之步驟vi)與自該第二溶液蒸發液體之視情況選用之步驟有關。此步驟可為所需的，其中最終醫藥組合物具有較小體積。通常，第一水性緩衝液將經選擇以使得其與標記反應(如本文所描述)相容且為生理上可耐受的(亦即，適用於以所使用之濃度及量注射)。以此方式，將較佳地避免濃度步驟vi)。在必要之情況下，可包括此步驟且本文中所提及之實體可具有以下較佳特徵，單獨地或呈任何可行組合形式，且視情況呈與如本文所描述之其他步驟之任何特徵的任何可行組合形式： a) 蒸發可在減壓(例如，1 mbar至500 mbar)下進行。 b) 蒸發可在高溫(例如，50℃至200℃，較佳80℃至110℃)下進行；本發明之方法之步驟vii)與自藉助於步驟i)至iv)純化之²²⁷ Th之至少一部分形成至少一種放射性藥物之視情況選用的步驟有關。本文中所提及之此步驟及實體可具有以下較佳特徵，單獨地或呈任何可行的組合形式，及視情況呈與如本文所描述之其他步驟之任何特徵的任何可行組合形式。此外，本文中所指示之放射性藥物之所有特徵形成本發明之藥物態樣的較佳特徵，尤其在藉由本發明之方法形成藥物或可藉由本發明之方法形成藥物的情況下： a) 來自該第二樣本(藉助於步驟i)至步驟iv)純化)的²²⁷ Th之部分可為1 MBq至100 MBq，較佳1 MBq至10 MBq。 b) 放射性藥物可包含至少一種錯合劑。 c) 錯合劑可包含八齒配位體。 d) 錯合劑可包含諸如羥基吡啶酮(HOPO)配位體的羥基吡啶酮，較佳八齒3,2-羥基吡啶酮(3,2-HOPO)。 e) 放射性藥物可包含靶向部分。 f) 靶向部分可為抗體、抗體構築體、抗體片段(例如，FAB或F(AB)'2片段或包含至少一個抗原結合區之任何片段)或此類片段之構築體。 g) 靶向部分可為受體或受體結合劑(例如，激素、維生素、葉酸或葉酸類似物)、雙膦酸或奈米粒子。 h) 靶向部分可具有對至少一種疾病相關抗原(諸如「分化簇」(CD)細胞表面分子(例如，CD22、CD33、CD34、CD44、CD45、CD166等))之特異性。 i) 可藉由共價連接體將靶向部分連接至配位體部分，由此形成靶向共軛物。 j) 形成方法可包含用靶向共軛物培育該第二樣本中所含之²²⁷ Th之部分。此類培育可在低於50℃，較佳地10℃至40℃，諸如20℃至30℃之溫度下進行。此類培育可持續少於2小時，諸如1分鐘至60分鐘(例如，1分鐘至15分鐘)，較佳15分鐘至45分鐘之時間。 k) 可添加醫藥載劑、稀釋劑、緩衝液、鹽類、防腐劑等，由此形成可注射放射性藥物。 l) 可將來自該第二溶液之錯合²²⁷ Th稀釋至基於在步驟v)中獲得之活性量測值的標準活性，視情況校正製備與投與之間的時間。在本發明之各種態樣中形成之放射性藥物或可在本發明之各種態樣中形成之放射性藥物可用於治療任何適合的疾病，諸如贅生性或增生性疾病(例如，癌瘤、肉瘤、黑素瘤、淋巴瘤或白血病)。醫藥調配物本身及用於此之用途以及治療個體之對應方法形成本發明之其他態樣。此個體將通常對其有需要，諸如患有贅生性或增生性疾病(例如，本文所描述之彼等)的個體。本發明將進一步提供將放射性藥物投與至個體(例如，對其有需要的一者)的方法，該方法包含藉由步驟i)至iv)、vii)及視情況步驟v)、vi)及/或viii)中之任一者形成該放射性藥物及向該個體投與該放射性藥物(例如，藉由靜脈內注射或直接地投與至特定組織或部位)。本發明之方法之步驟viii)為包含無菌過濾溶液或藥物(尤其形成於步驟vii)中之彼)的視情況選用之步驟。本文中所提及之此步驟及實體可具有以下較佳特徵，單獨地或呈任何可行的組合形式，及視情況呈與如本文所描述之其他步驟之任何特徵的任何可行組合形式： a) 可經由適合膜(諸如0.22 mm (或更小)膜)進行過濾。 b) 可藉由經由適合針筒過濾器沖洗進行過濾。除了以上步驟以外，本發明之方法及所有對應態樣可包含額外步驟：(例如)出於醫藥學目的驗證²²⁷ Th之純度；交換抗衡離子；濃縮或稀釋溶液或控制諸如pH及離子強度的因素。此等步驟中之每一者因此在本發明之各種態樣中形成視情況選用但較佳的額外步驟。較佳地，本發明之方法提供錯合²²⁷ Th產品之高產率。此不僅因為期望避免損耗或貴重產品，且亦因為所有損耗的放射性材料形成隨後必須進行安全處理之放射性廢料。因此，在一個實施例中，在步驟iv)中溶離步驟ii)中裝載之至少50% (例如，50%至90%或50%至98%)之²²⁷ Th。此將較佳為至少70%，更佳至少80%且最佳至少85%的產率。在本發明之對應態樣中，存在另外提供之醫藥組合物，其包含²²⁷ Th及視情況至少一種醫藥學上可接受之稀釋劑此種醫藥組合物可包含視情況藉由本發明之方法形成或可藉由本發明之方法形成的本文中所指示純度之²²⁷ Th。包括注射用水、pH調節劑及緩衝液、鹽類(例如，NaCl)及其他合適材料的適合載劑及稀釋劑將為熟習此項技術者所熟知。醫藥組合物將包含如文中所描述之²²⁷ Th，通常作為離子，諸如Th⁴ ⁺ 離子。此類組合物可包含本發明之²²⁷ Th之簡單鹽，但將更佳地包含具有至少一種配位體的本發明之²²⁷ Th之錯合物，諸如八齒3,2-羥基吡啶酮(3,2-HOPO)配位體。適合配位體揭示於WO2011/098611中，其以引用之方式併入本文中，尤其參考本文中所揭示之式I至式IX，其表示典型適合之HOPO配位體。此類配位體可用於其自身中或共軛至至少一種靶向部分，諸如抗體。抗體、抗體構築體、抗體之片段(例如，FAB或F(AB)'2片段或包含至少一個抗原結合區之任何片段)、片段之構築體(例如，單鏈抗體)或其混合物為尤佳的。本發明之醫藥組合物可因此包含錯合至3,2-羥基吡啶酮(3,2-HOPO)配位體之共軛物的如本文所揭示之藥物純度之²²⁷ Th的Th⁴ ⁺ 離子及至少一種抗體、抗體片段或抗體構築體以及視情況選用之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑。本文中關於醫藥組合物描述之實施例將亦在切實可行之情況下形成對應方法之實施例，且反之亦然。如本文所使用，術語「包含」給予開放涵義以使得額外組分可視情況存在(因此揭示「開放」及「封閉」形式)。對比而言，術語「由...組成」僅給予封閉涵義，使得(對於有效的、可量測及/或絕對程度)僅所指示之彼等物質 (包括視需要任何視情況選用之物質)將存在。對應地，描述為「基本上由…組成」之混合物或物質將基本上由經設定組分組成以使得任何額外組分不會對基本行為有任何顯著程度的影響。舉例而言，此類混合物可含有小於5% (例如，0%至5%)之其他組分，較佳地小於1%且更佳小於0.25%之其他組分。類似地，在術語為「大體上」、「大約(around)」、「約(about)」或「大致(approximately)」給定值之情況下，此允許給定精確值且分別允許較小可變性，尤其在此不影響所描述屬性之物質的情況下。此類可變性可為(例如) ±5% (例如，±0.001%至5%)，較佳±1%，更佳±0.25%。以下圖例應用於本申請案之對應圖式：圖 3 -純化衰變²²⁷ Th及製備靶向釷共軛物(TTC)；藉由在微自旋管柱上純化自經緩衝調配物螯合²²³ Ra，接著在共軛物(具有螯合劑之抗體)上標記經純化²²⁷ Th。圖 4 -不同檸檬酸鹽緩衝液濃度及pH對在(a) 15.0 mg及(b) 30.0 mg之PSA樹脂上攝取²²³ Ra (呈百分比)的影響。圖 5 -不同PSA樹脂質量及緩衝液pH對在來自a)不具有添加劑pABA/EDTA及b)具有pABA/EDTA添加劑之乙酸鹽緩衝液的PSA上攝取²²⁷ Th的影響。實例材料乙酸鈉三水合物(≥99.0%)、檸檬酸三鈉二水合物(≥99.0%)、4-胺基苯甲酸鈉鹽(pABA，≥99%)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA，符合USP測試規範)及氫氧化鈉(98.0%至100.5%)購自Sigma-Aldrich (Oslo，Norway)。金屬游離水(TraceSELECT)購自FLUKA (Buchs，Switzerland)。氯化鈉(供分析)、氫氯酸(發煙，37%，供分析)及乙酸(冰，100%無水以供分析)購自Merck Millipore (Darmstadt，Germany)。檸檬酸單水合物(分析型反應劑)購自VWR (West Chester，USA)。基於二氧化矽之PSA (丙基磺酸)陽離子交換樹脂購自Macherey Nagel (Düren，Germany)。NAP5管柱購自GE Healthcare Bio-Sciences AB (Uppsala，Sweden)。微自旋管柱購自Thermo Scientific Pierce (產品編號89879 (Rockford，USA))。共軛物為內部產品且由含5 mg/ml曲妥珠單抗(trastuzumab)之檸檬酸鈉緩衝液0.10 M pH 5.5及0.90% (w/w)氯化鈉組成。共軛物由附接至曲妥珠單抗抗體之內部螯合劑製成。來自Herceptin®的曲妥珠單抗(150.0 mg粉末，用於供輸注之濃縮溶液)為Roche Registration Limited (Welwyn Garden City，Great Britain)之商標。可用的放射能來源為含經衰變²²⁷ Th (作為釷(IV))之0.05 M氫氯酸及金屬游離水(內部產品)。使²²⁷ Th衰變大致為19天之一個半衰期直至²²³ Ra (作為鐳(II))之數量累積至²²⁷ Th與²²³ Ra接近1:1的比率。實例1- 製備經緩衝調配物儲備檸檬酸鹽緩衝液(0.10 M pH 4.0、0.10 M pH 5.5、0.05 M pH 5.0及0.07 M pH 4.8)及儲備乙酸鹽緩衝液(0.10 M pH 4.0、0.10 M pH 6.0、0.10 M pH 5.5、0.07 M pH 4.8及0.10 M pH 5.0)在金屬游離水中經製備且必要時進一步經稀釋。隨後將pABA (2.0 mg/ml)及EDTA (2.0 mM) 添加至所選調配物。此外，向經選擇經檸檬酸鹽緩衝調配物添加氯化鈉(0.45%或0.90% (w/w))以調整離子強度。所使用之所有賦形劑包括於來自FDA的適用於靜脈內注射之經批准之藥品的非活性成分清單中。來自Mettler Toledo (Oslo，Norway)的經校準sevenMulti pH計(pHmeter)用於在環境溫度下量測儲備液及最終調配物之pH。實例2 用PSA陽離子交換樹脂製備微自旋管柱將1500.00 mg PSA二氧化矽樹脂懸浮於15.00 ml金屬游離水中。在渦流混合器上搖晃懸浮液以在將適當體積轉移至微自旋管柱之前確保均勻性以分別得到15.0 mg、22.5 mg及30.0 mg之樹脂量。隨後使管柱藉由艾本德(Eppendorf)舒適型恆溫混合器(Hamburg，Germany)以10000 rcf自旋1分鐘從而移除水。用300 µl之相應經緩衝調配物調節管柱。藉由在恆溫混合器上以10000 rcf自旋1分鐘移除過量體積，得到乾燥管柱(對於DOE樣本及中心點n=2)。實例3-純化將600 µl之相應經緩衝調配物與含大致400 kBq²²⁷ Th及400 kBq²²³ Ra之0.05 M氫氯酸(亦即，含1 µl至5 µl經衰變²²⁷ Th之氫氯酸，取決於放射性濃度)混合。隨後將體積之一半添加至每一管柱(n=2)。隨後在恆溫混合器上以10000 rcf使管柱自旋1分鐘，使管柱乾燥。將溶離液收集在管柱下方之艾本德試管中。實例4-放射性分析在計算管柱與溶離液之間的放射性核種之分佈之前，量測在實例3之分離方法之後的陽離子交換管柱上及溶離液中之²²³ Ra及²²⁷ Th之量。使用來自Ortec (Oak Ridge，TN)的來自高純度鍺(HPGe)-檢測器GEM(15)的HPGe光譜。此檢測器識別且量化具有範圍介於大約30 keV至1400 keV的γ能量的放射性核種。將藉由HPGe檢測器分析之所有樣本放入相同位置且計數1 min。此方法可用於在製備放射性藥物之前分析溶離液中之放射性同位素濃度以確保標準活性且驗證放射性化學(放射性同位素)純度。實例5 用經純化²²⁷ Th標記曲妥珠單抗共軛物將350 µl之相應經緩衝調配物與含大致1000 kBq²²⁷ Th及1000 kBq²²³ Ra之0.05 M氫氯酸(亦即，含1 µl至5 µl經衰變²²⁷ Th之氫氯酸，取決於放射性濃度)混合。隨後將體積之一半添加至微自旋管柱(n=2)。隨後在恆溫混合器上以10000 rcf使管柱自旋1分鐘，使管柱在管柱下方之艾本德試管中經溶離液乾燥。在計算溶離液中之²²⁷ Th之量以進一步用於標記共軛物之前，用高純度鍺(HPGe)-檢測器GEM(15)量測陽離子交換管柱上及溶離液中之²²⁷ Th及²²³ Ra之量。使曲妥珠單抗-螯合劑共軛物(5.00 mg/ml)之經冷凍樣本平衡至環境溫度。隨後將160 µl之共軛物轉移至艾本德試管且與來自微自旋管柱之含160 µl溶離液之經選擇經檸檬酸鹽緩衝調配物(大致500 kBq²²⁷ Th)混合。經測試之調配物為0.10 M檸檬酸鹽緩衝液pH 5.5及含有pABA+EDTA之等效經緩衝調配物(n=2)。隨後在恆溫混合器上搖晃樣本30分鐘(22℃，750 rpm，10 s週期)。實例6-驗證標記反應放射性藥物之放射性化學純度(RCP)為(在此情況下)以結合形式存在之²²⁷ Th (TTC)與呈其非結合形式(游離放射性核種)之²²⁷ Th之間的關係。藉由將200 µl之相應經標記共軛樣本(TTC)添加至NAP5管柱及遵循藉由製造商給定之管柱之標準程序來計算RCP，借助HPGe-檢測器光譜來分析在NAP5管柱(尺寸排外層析法)上及溶離液中攝取之²²⁷ Th之量(n=2)。根據Bayer AS標準，成功標記反應將產生用於TTC (Monoclonal Antibody and Peptide-Targeted Radiotherapy of Cancer，Wiley，2010)之高於90%的放射性化學純度。用經純化衰變²²⁷ Th標記曲妥珠單抗共軛物在對含有0.10 M檸檬酸鹽緩衝液pH 5.5的調配物及亦含有pABA+EDTA的等效調配物兩者的要求內(n=2 (表6))。實例7-分離優化實驗之設計(DOE)經設計以研究且優化關於在矽膠/PSA微自旋管柱上自²²⁷ Th分離²²³ Ra的條件。對於每一緩衝液(檸檬酸鹽及乙酸鹽)，研究以下變量：表 1 使用實例1至實例6中所指示之分離方法研究DoE變量中之每一者。結果展示於圖4及圖5中，其說明各種參數對在PSA樹脂上攝取放射性同位素的影響。最優分離條件被認為是：表2 *根據經合併SD及反應表面，不確定性經預期在具有pABA/EDTA的情況下比在不具有pABA/EDTA的情況下更低

現將進一步藉由參考以下非限制性實例及附圖說明本發明，其中：圖1 展示²²⁷ Th隨時間推移之衰變及90天內之²²³ Ra及子體同位素之對應向內生長。圖2 展示²²⁷ Th經由²²³ Ra至穩定²⁰⁷ Pb之放射性衰變鏈。圖3 展示在投與之前不久進行以便自向內生長²²³ Ra分離²²⁷ Th且將經純化²²⁷ Th錯合至抗體/配位體共軛物的純化及標記步驟。圖4 展示緩衝液濃度(M) (y軸)及pH (x軸)對自15.0 mg樹脂(a)及30.0 mg樹脂(b)下之經檸檬酸鹽緩衝之調配物攝取²²³ Ra的影響。圖5 展示pH (x軸)及樹脂量(mg) (y軸)對自不具有添加劑(a)及具有pABA及EDTA (b)之經乙酸鹽緩衝調配物攝取²²⁷ Th的影響。

Claims

一種用於自包含²²⁷ Th及²²³ Ra之混合物純化²²⁷ Th的方法，該方法包含： i) 製備包含溶解於第一水性緩衝液中之²²⁷ Th離子及²²³ Ra離子之混合物的第一溶液； ii) 將該第一溶液裝載至分離材料上； iii) 自該分離材料溶離²²⁷ Th，由此產生包含²²⁷ Th之第二溶液； iv) 視情況使用第一水性洗滌介質沖洗該分離材料。
如請求項1之方法，其進一步包含以下視情況選用之步驟中之至少一者： v) 分析該第二溶液之該²²⁷ Th含量； vi) 自該第二溶液蒸發該液體； vii) 自該第二溶液中所含之該²²⁷ Th之至少一部分形成至少一種放射性藥物； viii) 無菌過濾該放射性藥物。
如任一前述請求項之方法，其中該第一水性緩衝溶液的pH在3與6.5之間。
如任一前述請求項之方法，其中該第一水性緩衝溶液包含選自檸檬酸鹽緩衝液、乙酸鹽緩衝液及其混合物的至少一種有機酸緩衝液。
如任一前述請求項之方法，其中該第一水性緩衝溶液進一步包含至少一種自由基清除劑及/或至少一種螯合劑。
如任一前述請求項之方法，其中該分離材料為強陽離子交換樹脂，較佳為基於二氧化矽之樹脂。
如任一前述請求項之方法，其中該分離材料為包含至少一個CH₂ -SO₃ H部分之陽離子交換樹脂。
如任一前述請求項之方法，其中該溶離係藉由「乾燥」方式進行，較佳地在重力或離心力下或在來自上方的氣體壓力及/或來自下方的真空下進行。
如請求項8之方法，其中溶離係藉由在為重力之至少5000倍之「相對離心力」(RCF)下之離心力進行。
如請求項8或請求項9之方法，其中溶離係藉由離心力持續10秒至10分鐘之時間段。
如任一前述請求項之方法，其不包含任何額外的洗滌步驟。
如請求項1至10中任一項之方法，其包含用水性洗滌介質洗滌該分離材料。
如任一前述請求項之方法，其另外包含藉由γ檢測或γ光譜分析諸如藉由使用鍺半導體檢測器來分析該第二溶液之該²²⁷ Th含量。
如任一前述請求項之方法，其另外包含自包含²²⁷ Th之該第二溶液中所含之該²²⁷ Th之至少一部分形成至少一種放射性藥物。
如請求項14之方法，其中該部分係在0.1 MBq²²⁷ Th與100 MBq²²⁷ Th之間。
如請求項14或請求項15之方法，其中該放射性藥物係由該²²⁷ Th部分及至少一種八齒錯合劑形成。
如請求項16之方法，其中將該八齒錯合劑共軛至選自抗體、抗體構築體、抗體片段或抗體片段之構築體以及奈米粒子及雙膦酸鹽的靶向部分。
如請求項14至17中任一項之方法，其中該放射性藥物及/或靶向部分對選自「分化簇」(CD)細胞表面標記物之至少一種靶向物具有特異性。
如請求項14至18中任一項之方法，其中該形成包含用包含連接至靶向部分之錯合劑的靶向共軛物培育該第二樣本中所含有之該²²⁷ Th部分，其中該培育在低於50℃之溫度下進行。
如請求項19之方法，其中將該培育進行少於2小時之時間。
如請求項20之方法，其中該培育在該第一水性緩衝液中進行。
一種²²⁷ Th，其包含每1 MBq²²⁷ Th少於50 KBq²²³ Ra。
如請求項22之²²⁷ Th，其藉由如請求項1至21中任一項之方法形成或可藉由如請求項1至21中任一項之方法形成。
一種醫藥組合物，其包含如請求項22至23中任一項之²²⁷ Th及視情況至少一種醫藥學上可接受之稀釋劑。
一種套組，其包含²²⁷ Th及²²³ Ra之混合物、第一水性緩衝溶液及強陽離子交換樹脂。
如請求項25之套組，其另外包含以下視情況選用之物件中之至少一者：至少一個無菌過濾器；至少一個耐熱性容器；至少一個加熱器件；至少一種²²⁷ Th錯合劑。