TW201705947A - 用於治療罹患癌症的個體之醫藥組合物 - Google Patents

Abstract

一種用於治療罹患癌症的個體之醫藥組合物，其至少包含：藥學有效量之新穎標靶物肝癌逆轉訊號物質、及其藥學上可接受之載劑、載體、稀釋劑或賦形劑；該醫藥組合物中之各成分的比例係依癌症之型態進行調整；其中該新穎標靶物肝癌逆轉訊號物質為自安卓奎諾爾(AQL)、安卓肉桂地菌素(ACA)、安卓奎諾爾 B(AQB)、安卓奎諾爾D(AQD)、去氫齒孔酸(DEA)、去氫硫色多孔菌酸(DSA)、樟芝酸A(ZAA)、樟芝酸 C(ZAC)、樟菇酸 K(ANK)、及樟菇酸 C(ANC)構成組群組中所選出之至少一種或其組合物。

Description

用於治療罹患癌症的個體之醫藥組合物

本發明係關於一種用於治療罹患癌症的個體之醫藥組合物；特別是關於一種由至少包含藥學有效量之新穎標靶物肝癌逆轉訊號物質、及其藥學上可接受之載劑、載體、稀釋劑或賦形劑所構成之用於治療罹患癌症的個體之醫藥組合物。

在台灣，近數十年來，罹患癌症或惡性腫瘤已成為國人十大死因之一。醫學上所稱「腫瘤」包括良性與惡性的腫瘤，通常指不正常的細胞增生形成累贅，甚至於侵犯周圍或遠處的細胞組織影響正常生理功能。常見的癌症包括肝癌、直腸癌、大腸癌、食管癌、胃癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、血癌與骨癌等；其中殺傷力最強的是肺癌、胃癌和肝癌，分別約占癌症死亡人數的18%、10%和9%。

各種惡性的腫瘤一般統稱為「癌症」，癌細胞的生長和分裂處於失控狀態，能侵入正常組織並侵犯周圍組織，經由體內循環系統、淋巴系統或腔內轉移至遠離其起源的部位生長，嚴重挑戰人類健康和生命安全。癌症的治療方法大致可分為外科手術、化學治療、放射線治療、導向治療、免疫治療、激素治療、冷凍治療、加溫治療、血管生成抑制劑療法、及中醫療法、中草藥劑治療等。

在各種的癌症治療方法中，手術、放療、化療為目前臨床治療的主要手段，根據病人癌症種類、位置及所處的時期而採用不同的療法。外科切除手術以摘除癌症發病部位之細胞組織為主；而放療、化療在殺傷腫瘤細胞的同時，對人體正常細胞也有損傷，副作用大且患者生活品質差、生存率低。然而，無論是採取外科切除手術、化學治療方法、或放射線治療手段，皆屬破壞人體細胞、組織甚至器官之不可逆方法。

隨著對細胞死亡現象、分子機理的探究成果，人們對於抗癌藥物的篩選已有了全新的認識，因而對癌症患者比較不會造成不可逆二次傷害之方法，例如，利用含有中草藥或其萃取物成分之藥劑，來對腫瘤細胞特定信號途徑或特定的癌細胞靶位點進行治療之手段，越來越受到人們的極大關注。舉例來說，在此等誘導腫瘤細胞凋亡之藥劑或醫藥組合物之中，添加含有例如由牛樟芝萃取而得的藥學活性有成物，近年來亦有快速增長的趨勢。

牛樟芝為一種多年生之具有療效的食藥菇類，其子實體無柄且為木栓質至木質，具有濃厚的樟樹香氣，形態多變，有板狀、鐘狀、馬蹄狀或塔狀，緊貼於木材表面，菇體表面孔狀，初生時鮮紅色，隨著生長逐變為乳白色、淡紅褐色、淡褐色或淡黃褐色，週邊常呈放射狀，並往四週擴展生長，呈半圓狀或不規則形。

牛樟芝的子實體生長於台灣屬於保育類的牛樟樹(Cinnamoum kanehirai Hay)之心材內壁，週邊向內彎曲，能分解木材之纖維素而造成木頭腐朽，為木頭腐朽菌。野生牛樟芝生長環境均屬於幽暗、潮濕且溫度較低之中海拔地區，特別是野生牛樟芝生長緩慢，因此產生子實體需要相當長的時間。由於牛樟樹為保育類樹種且分布數量極為稀少，再加上人為的盜採，使得野生牛樟芝數量相當稀少，使得牛樟芝價格昂貴，所以具有「森林中的紅寶石」之美稱。

牛樟芝(Antrodia camphorata，Taiwanofungus camphorates)又稱樟生薄孔菌、牛樟菇、樟芝、紅樟芝、血靈芝、樟內菇、或紅樟菰等，於分類學上屬於真菌界(Fungi)、擔子菌門(Basidiomycota)、擔子菌亞門(Basidiomycotina)、同擔子菌綱(Homobasidiomycetes)、無褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、薄孔菌屬(Antrodia) ，是台灣特有的一種真菌。。植物化學研究顯示，牛樟芝子實體包含多醣(30-50%)、三萜類(30%)、類固醇類、超氧化物歧化酶和氨基酸類。

在醫學上，自牛樟芝所分離出來的包括牛樟芝三萜類(triterpenoids)、多醣體(polysaccharides)、核苷(nucleic acids)、多肽類(polypeptides)、和植物固醇類(phytosterols)等等之活性成分，已被證實具有特定的醫藥功效，包括具有抑制膽固醇合成、抗癌、抗高血壓等等之藥學活性。例如，將牛樟芝子實體細磨成乾燥粉末或熬煮提煉後以口服方式服用時，具有解毒、抗發炎、抗腫瘤、抑制血管增生及治療肝臟疾病等活性。因而，牛樟芝除了當可做營養補充劑之外，由於具有醫療效果也時常被視為藥材、抗癌有效成分或健康改善劑來使用。

例如，已證實牛樟芝萃取物具有能夠顯著地抑制TNF-α激素的產生，並減少IκB的磷酸化，避免NF-κB 進入細胞核內，進而抑制更下游之iNOS及COX-2蛋白的表現、及降低NO-及PGE-2的生成等等之抗發炎活性。舉例來說，例如，牛樟芝萃取物對小鼠巨噬細胞（EOC13.31 細胞）顯示出具有能夠抑制TNF-α、iNOS和COX-2的表現、有效降低因LPS誘導之小鼠體內發炎反應進而達到抗發炎的效果。在牛樟芝萃取物中，經實驗證實安卓奎諾爾 B(Antroquinonol B，AQB)、4-乙醯基安卓奎諾爾 B(4-acetyl-Antroquinonol B，4-acetyl-AQB)、2,3-(亞甲基二氧)-6-甲基苯-1,4-二醇(2,3-(methylendioxy)-6- methylbenzene-1,4-diol)、及2,4-二甲氧基-6-甲基苯-1,3-二醇(2,4-Dimethoxy-6-methylbenzene-1,3-diol)等可有效降低使經LPS誘導小鼠巨噬細胞RAW264.7產生一氧化氮自由基之生成量的抗發炎活性成分。

除了上述之抗發炎效能外，牛樟芝抗癌研究方面已有不少的研究成果。例如，在醫學上已證實以牛樟芝的活性成分處理各種的癌細胞時，可以有效地活化粒線體上之Bax、抑制與其結抗之Bcl-2和Bcl-xL蛋白、能夠增加粒線體外膜的通透性而使鈣離子容易進入粒線體中，釋出Cytochrome C與Apaf-1結合並活化Caspase-9及下游之Caspase-3，進而有效地使各種癌細胞產生凋亡。

舉例來說，已知牛樟芝萃取物可促使肝腫瘤細胞（HepG2）產生細胞凋亡（apoptosis）、具有抑制肝腫瘤細胞（Hep-3B）中鈣蛋白酶(calpains)活性的效果，進而誘使細胞產生凋亡的現象；以及能夠明顯地抑制PLC/PRF/5肝癌細胞的生長及增加TIMP-1和TIMP-2的表現。又，也已證實牛樟芝子實體粉末可顯著降低大鼠之膽固醇和肝臟脂肪的形成、並抑制HMG Co-A、SREBT-1c、acetyl-CoAcarboxylase、FAS及Malic酵素基因表達。

其次，也已知道牛樟芝萃取物在50 μg/ml的濃度下可明顯抑制人類膀胱癌細胞（T24 細胞）的生長與Cdc2和CyclinB1蛋白的表現，能夠誘導人類口腔（OC2）細胞內ERK和JNK(P-38未表現)蛋白的磷酸化而促使細胞產生凋亡的現象；並且實驗結果顯示牛樟芝萃取物中之Zhankuic acid A活性成分具有可以促使人類血癌細胞HL60凋亡的效能。

又，也已知道自牛樟芝萃取物中之化合物Antrocin能夠抑制人類乳癌細胞（MCF-7 細胞）之存活率、能抑制Akt的磷酸化、並誘導Bax及Caspase-3的活化使細胞凋亡。

此外，亦有研究證實利用牛樟芝乙醇萃取物，能夠使得人類肺癌細胞（H441GL 細胞）的細胞週期停留在G0/G1期，並且能夠誘導細胞中Caspase-9及Caspase-3信號路徑的活化，進而導致細胞凋亡。

另外，牛樟芝中之三萜類能對人類結腸癌細胞（HT-29細胞、HCT116細胞、及SW480 細胞）顯示出最強的毒殺活性( IC50 =22.3~70.5 μg/ml )。除此之外，已證實以牛樟芝萃取物中之4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯并二唑(4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3- benzodioxole，SY-1) 處理癌細胞，在較低劑量SY-1的情況下，能夠使得人類直腸癌細胞(COLO 205)之細胞週期停留在G0/G1期，而在較高劑量的情況下，SY-1可誘發細胞程序性死亡，而且SY-1對正常的腸表皮細胞( FHC 細胞)並不具有影響。

除了抗發炎、抗癌效能外，亦證實牛樟芝萃取物中之多醣體成分，它能夠提高小鼠體內IL-10和IL-12的產生量、抑制CD4+ T細胞的增殖和Th2細胞之分化，對於治療哮喘具有優異的功效。另外，亦證實自牛樟芝分離出來的多醣體可以透過抑制血管內皮生長因數受體(vascular endothelial growth factor receptor，VEGF receptor)訊號傳導，而抑制週期素Dl (cyclin Dl)的表現，導致抑制血管新生。

雖然如上所述含有牛樟芝萃取物的抗癌劑或組合物之醫療效果已引起人們廣泛的注意，然而仍不能成為常規抗腫瘤劑或做為單一療法的癌症治療用藥；對於醫藥業界而言，尤其是仍不能清楚確切地得知之具體的活性成分或生物活性组成物為何，以致時常不能夠適當地用藥及充分發揮此等之醫療效能，因而需要一種具有令人滿意功效的治療或改善癌症用之藥物。

所以，亟待開發出一種能夠解決現行癌症治療技術之缺陷、且又能夠充分發揮優異的癌症醫療效果之組合物，特別是一種具有不同作用機制組合的癌症治療劑。

因而，有鑑於此，本發明人乃對於上述習用技術之問題點潛心研究的結果，令人驚奇地發現：將自牛樟芝萃取而得的倍半萜類化合物 (Sesquiterpenoids)、雙萜類化合物 (Diterpenoids )、 三萜類化合物 (Triterpenoids)等之活性成分加以組合使用於治療及/或預防不同癌症時，能夠提供遠遠地超越使用一般的抗癌劑之令人意想不到的優異效果，包括能夠降低調控致癌活性、使癌細胞不致增生甚至逆轉，進而達到治療和預防癌症及腫瘤轉移的效果等。

再者，亦發現此一以有效成分之組合而成的醫藥組合物，同時具有良好的生化、機械、物理、化學特性及體內傳輸性與藥效，可為使用者易於攝取、於短時間消化吸收，並且可做為治療或預防癌症之藥物或其佐劑，藉由施用於癌症之預防與治療時具有能夠抑制特定種類的癌細胞的功效，至此而完成本發明。

亦即，根據本發明之一觀點可以提供一種用於治療癌症之醫藥組合物，其至少包含：藥學有效量之新穎標靶物肝癌逆轉訊號物質、及其藥學上可接受之載劑、載體、稀釋劑或賦形劑；該醫藥組合物中之各成分的比例係依癌症之型態進行調整；其中該新穎標靶物肝癌逆轉訊號物質為自安卓奎諾爾(Antroquinonol，AQL)、安卓肉桂地菌素(Antrocinnamonin A，ACA)、安卓奎諾爾 B(Antroquinonol B，AQB)、安卓奎諾爾 D(Antroquinonol D，AQD)、去氫齒孔酸(Dehydroeburicoic Acid，DEA)、去氫硫色多孔菌酸(Dehydrosulphurenic Acid，DSA)、樟芝酸 A(Zhankuic Acid A，ZAA)、樟芝酸 C(Zhankuic Acid C，ZAC)、樟菇酸 K(Antcin K，ANK)、及樟菇酸 C(Antcin C，ANC)構成組群組中所選出之至少一種或其組合物。

其次，根據本發明之另一觀點可以提供一種如前述所記載之醫藥組合物，其中相對於該組合物中之三萜化合物的總量而言，安卓奎諾爾(AQL)、安卓肉桂地菌素(ACA)、安卓奎諾爾 B(AQB)與安卓奎諾爾 D(AQD)的含量總和為在約0.01重量%至約65.0重量%之範圍。

再者，根據本發明之另一觀點可以提供一種如前述所記載之醫藥組合物，其中相對於該組合物中之三萜化合物的合計總含量而言，去氫齒孔酸(DEA)與去氫硫色多孔菌酸(DSA)的含量之總和為在約0.01重量%至約55.0重量%之範圍。

另外，根據本發明之又一觀點還可以提供一種如前述所記載之醫藥組合物，其中相對於該組合物中之三萜化合物的合計總量而言，樟芝酸 A(ZAA)與樟芝酸 C(ZAC)的含量總和為在約0.01重量%至約55.0重量%之範圍。

又且，根據本發明之其他觀點亦可以提供一種如前述所記載之醫藥組合物，其中相對於該組合物中之三萜化合物的合計總量而言，樟菇酸 K(ANK)與樟菇酸 C(ANC)的含量總和為約0.01重量%至約65.0重量%之範圍。

更且，根據本發明之其他觀點還可以提供一種如前述所記載之醫藥組合物，其中該癌症為肝癌、直腸癌、大腸癌、食管癌、胃癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、血癌與骨癌等，較佳為適用於肝癌、肺癌、乳癌或血癌。

另外，根據本發明之其他觀點可以提供一種如前述所記載之醫藥組合物，其中該賦形劑之成分包含乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、玉米澱粉、小麥澱粉、稻米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠。

此外，根據本發明之其他觀點可以提供一種如前述所記載之醫藥組合物，其係更進一步包括自吸收促進劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝液、包覆劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、補充劑、填充劑、調味劑、保濕劑、潤滑劑、香料、防腐劑、推進劑、釋放劑、殺菌劑、甜味劑、增溶劑、濕潤劑及其混合物構成群組中所選出之至少一種的添加劑。

以下，針對本發明的實施態樣列舉不同的具體實施例而更加詳盡地敘述與說明，以便使本發明的精神與內容更為完備而易於瞭解；然而，本項技藝中具有通常知識者應當明瞭本發明當然不受限於此等實例而已，亦可利用其他相同或均等的功能與步驟順序來達成本發明。

首先，對於本說明書中所使用的特定用語或名詞進行描述性的說明。

除非本說明書另有定義以外，在本文中所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。

在本文中， 「預防(prophylaxis)」之用語係指對一種未來事件，包括在事前防止發生癌細胞生長與擴大、以及防止發生因手術或診斷程序致使癌細胞轉移的事件而實施之的防制手段。

在本文中，「治療(treatment或treating)」之用語係指對於具有某種醫療狀況、症狀、疾病、病症或其先期狀況的個體或患者，實施可達成藥學和/或生理效果的預防性、治癒性或緩和性之處置，藉以部分或完全減輕嚴重性、延遲發生進程、及/或抑制該醫療狀況之一或多個病徵、異常及/或疾病出現機率之行為。前述病徵、疾病、異常和/或醫療狀況可以是原位癌或轉移性癌。

在本文中，「有效量(an effective amount)」之用語係指對於癌細胞直接或間施用(administered、administering、或administration)之醫學藥物，在經過適當的給藥期間後，能夠達到減少癌細胞數之效果、或者治療或預防癌症之目的所施用之特定用量。

在本文中，前述之「醫學藥物」係指能透過局部和/或全身性作用而誘發所期待的藥學和/或生理反應之具有藥學上活性之物質，通常包括醫藥化合物(compound)、調配物(formulation)、組合物(composition)、藥劑(agent)、醫藥品(medicine or medicament)、或者藥學活性化合物的前驅藥(prodrug)、衍生物(derivative)、或類似物(analog) 等。

在本文中，「個體(subject)」或「患者(patient)」可彼此交替使用。該「個體」或「患者」分別指可接受所述化合物和/或方法治療的動物，包括但不限於例如包含狗、貓、馬、羊、豬、牛等之任何的哺乳類動物，以及人類、非人類的靈長類。除非另有具體說明以外，該「個體」或「患者」可包括雄性與雌性兩種性別。又，適合接受本發明之醫藥組合物和/或方法治療之個體或患者，較佳者為人類。

在本文中，對於用以界定本發明範圍的數值與參數，本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差，因而大多是以約略的數量值來表示，然而於具體實施例中則盡可能精確呈現的相關數值。在本文中，「約」通常視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定，一般係指代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，例如，該實際數值為在一特定數值或範圍的±10%、±5%、±1%、或±0.5%以內。

本揭示內容至少有一部分是基於單離自牛樟芝子實體或菌絲體之三萜化合物的新穎組合，具有可對抗癌細胞(包括具抗藥性的癌細胞)增生之特性，而發展出來的。因此，此三萜化合物的新穎組合是潛在可用來治療 或預防癌症的藥劑或可作為癌症藥物之佐劑。

因此，本揭示內容之第一態樣為提供一種可治療或預防癌症的醫藥組合物，其至少包含藥學上有效量之安卓奎諾爾 (Antroquinonol，AQL)、安卓肉桂地菌素 (Antrocinnamonin A，ACA)、安卓奎諾爾 B (Antroquinonol B，AQB)、安卓奎諾爾 D (Antroquinonol D，AQD)、去氫齒孔酸(Dehydroeburicoic Acid，DEA)、去氫硫色多孔菌酸 (Dehydrosulphurenic Acid，DSA)、樟芝酸 A (Zhankuic Acid A，ZAA)、樟芝酸 C (Zhankuic Acid C，ZAC)、樟菇酸 K (Antcin K，ANK)、及樟菇酸 C (Antcin C，ANC) 構成之藥學活性化合物，及其藥學上可接受之載劑、載體、稀釋劑或賦形劑；該醫藥組合物中之各成分的比例係依癌症之型態進行調整。

本發明之醫藥組合物中之藥性活性成分的取得來源並未特別加以限制，雖然可以從例如具有療效的通常食藥菇類中萃取而得；然而通常是由芝屬菌類中萃取分離而得的活性成分；較佳者是使用由在分類學上屬於真菌界(Fungi)、擔子菌門(Basidiomycota)、擔子菌亞門(Basidiomycotina)、同擔子菌綱(Homobasidiomycetes)、無褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、薄孔菌屬(Antrodia)之牛樟芝、樟生薄孔菌、牛樟菇、樟芝、紅樟芝、血靈芝、樟內菇、或紅樟菰等萃取分離而得。更佳者為使用由台灣山區特有產出之牛樟芝(Antrodia camphorata，Taiwanofungus camphorates) 屬菌類中萃取分離而得的活性成分。

植物化學研究顯示，台灣牛樟芝中所含的藥學活性成分主要包括倍半萜類化合物 (Sesquiterpenoids)、雙萜類化合物 (Diterpenoids )、 三萜類化合物 (Triterpenoids) 、固醇類化合物 (Steroids) 、五圓環結構之呋喃(Furan) 類或吡唑(Pyrrole) 類、木酚素類化合物 (Lignoids)、苯環類化合物 (Benzenoids)、超氧化物歧化酶和氨基酸類等；可於本發明醫藥組合物中使用來做為藥學上有效的活性成分之AQL、ACA、AQB、AQD、DEA、DSA、ZAA、ZAC、ANK、ANC等多半為存在於牛樟芝的子實體或菌絲體中，可藉由分離萃取方法而獲得。

具體而言，倍半萜類化合物通常包含例如Antrocin等。

雙萜類化合物通常包括19-hydroxylabda-8(17)-en- 16,15-olide、3β,19-dihydroxylabda-8(17),11E-dien-16,15-olide、13-epi- 3β,19-dihydroxylabda-8(17),11E-dien-16,15-olide、19-hydroxylabda- 8(17),13-dien-16,15-olide、14-deoxy-11, 1 2 - didehy droandrograph- olide、14-deoxyandrographolide、pinusolidic acid 等。

三萜類化合物通常包括CamphoratinB 、camphoratin A 、 Antcin K 、Antcin I (zhankuic acid B, 3α-hydroxy-4α-methylergost-8,24(28)-dien-7,11-dione-26-oic acid)、camphoratin E、antcin H (zhankuicacid C, 3α,12α-dihydroxy-4α-methylergost-8,24(28)-dien-7,11-dione-26-oic acid) 、methyl antcinate H (3α,12α-dihydroxy-7,11-dioxo-4α-methylergost-8,24(28)-dien- 26-oate)、zhankuic acid E、camphoratin C、 camphoratin H、camphoratin I、antcin A (1,4α-methylergost-8,4(8)-diene-3,11-dion-26-oic acid) 、 camphoratin J、methyl antcinate A (methyl 4α-methylergost-8,24(28)- dien-3,11-dion-26-oate)、antcin E (3,11-dioxo-4α-methylergost- 8,14,24(28)-trien-26-oic acid)、antcin C(7β-hydroxy-4α-methylergost-8,24(28)-diene-3, 11-dion-26-oic acid)、camphoratin G 、antcin F (3,11-dioxo-7β-hydroxy-4α-methylergost-8,14,24(28)- trien-26-oic acid)、camphoratin D、camphoratin F、methyl antcinate G (7α-acetoxy-3,11-dioxo-4α-methylergost-8,24(28)-dien-26-oate)、antcin B (zhankuicacid A, 4α-methylergost-8,24(28)-dien-3,7,11-trion-26-oic acid) 、antcin D (zhankuicacid F, 14-hydroxy-4α-methyl-3,7,11- trioxoergost-8,24(28)-dien-26-oic acid)、methyl antcinate B (methyl 4α-methylergost-8,24(28)-dien-3,7,11-trion-26-oate) 、 zhankuic acid D、eburicol (24-methylenedihydrolanosterol)、eburicoic acid (35),7 sulphurenic acid、versisponic acid D 、dehydroeburicoic acid、dehydrosulphurenic acid、15α-acetyldehydrosulphurenic acid、3β,15α-dihydroxylanosta-7,9(11),24-triene-21 oicacid 、epi-friedelinol 等。

固醇類化合物通常包括：β-Sitosterol、stigmasterol (44),16 ergosterol peroxide、ergosterol D、ergosterol 、β-sitostenone、ergosta-4,7,8(14),22-tetraen-3-one、ergosta-2,4,8(14),22-tetraen-3-one 等。

五圓環結構之呋喃(Furan) 類、或吡唑(Pyrrole) 類通常包括Antrocinnamomin C (3-isobutyl-4-(4-hydroxyphenyl) furan-2,5-dione) 、3-isobutyl-4-[4-(3-methyl-2-butenyloxy)phenyl]furan- 2,5-dione 、antrocinnamomin D (2-hydroxy-3-isobutyl-4-[4-(3-methylbut- 2-enyloxy)phenyl]-2H-furan-5-one)、cis-3-(4-hydroxyphenyl)-4-isobutyl- dihydrofuran-2,5-dione、dimethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-3-isobutyl- maleate、3-(4-hydroxyphenyl)-4-isobutyl-1H-pyrrole-2,5-dione、3-iso- butyl-4-[4-(3-methyl-2-butenyloxy)phenyl]-1Hpyrrole-2,5-dione (antrodin B, camphorataimideB)、trans-3-isobutyl-4-[4-(3-methyl-2- butenyloxy)phenyl]pyrrolidine-2,5-dione、antrocinnamomin B (3-isobutyl -4-(4-hydroxyphenyl)-1H-pyrrol-1-ole-2,5-dione)、3-isobutyl-4-[4-(3- methyl-2-butenyloxy)phenyl]-1H-pyrrol-1-ol-2,5-dione (antrodin C, camphorataimide C)、antrocinnamomin A(3-isobutyl-4-[4-(3-methyl- 2-butenyloxy)phenyl]-1H-pyrrol-1-acetoxyl-2,5-dione)、trans-1-hydroxy- 3-(4-hydroxyphenyl)-4-isobutylpyrrolidine-2,5-dione、3R,4S-1-hydroxy- 3-isobutyl-4-[4-(3-methyl-2-butenyloxy)phenyl]pyrrolidine-2,5-dione) 、antrodin D (camphorataimide D, 3R, 4R-1-hydroxy-3-isobutyl- 4-[4-(3-methyl-2-butenyloxy)phenyl]pyrrolidine-2,5-dione)、antrodioxolanone 等。

木酚素類化合物 (Lignoids) 通常包括：(+)-sesamin、 (-)-sesamin、4-hydroxysesamin、Aptosimon 等。

苯環類化合物 (Benzenoids) 通常包括：1,4-dimethoxy-2,3-methylenedioxy-5-methylbenzene 、methyl 2,5-di- methoxy-3,4-methylenedioxybenzoate、4,5-dimethoxy-2,3-methylene- dioxybenzoicacid、2,4,5-trimethoxybenzaldehyde、2,3-methylene- dioxy-6-methylbenzene-1,4-diol、2,4-dimethoxy-6-methylbenzene- 1,3-diol、benzocamphorin C、5-methylbenzo[1,3]-dioxole-4,7-dione 、2-methoxy-5-methyl[1,4]benzoquinone、2,3-dimethoxy-5-methyl[1,4] benzoquinone、isobutylphenol、 2,3,4,5-tetramethoxybenzoylchloride 、2,2,,5,5,-tetramethoxy-3,4,3,,4,-bis(methylenedioxy)-6,6,-dimethylbiphenyl 、benzocamphorin E、benzocamphorin D、antrocamphin A、antrocamphin B 、benzocamphorin A、 benzocamphorin B等。 其他類化合物通常包括：α-Tocospiro B、methyloleate、antroquinonol、 antroquinonol B、4-acetylantroquinonol B、 adenosine、cordycepin 等。

本發明醫藥組合物中之藥學活性成的萃取分離方法並未特別加以限制，例如，可以藉由習知的純化方法從牛樟芝的子實體或菌絲體中分離而得。無論原料是牛樟芝的子實體或是菌絲體，適合使用的萃取方法，一般包括非極性溶劑萃取法、高極性溶劑萃取法、低極性溶劑萃取法、高溫萃取法、低溫萃取法、超臨界萃取法或彼等之組合等。舉例來說，適合於本發明使用的溶劑，通常包括例如水、酒精等。又，適合於本發明使用的萃取溫度，通常並末特別加以限制，例如可以是在0℃以下，也可以是在0℃至40℃之低溫範圍，或者也可以是在50℃以上至150℃以下之高溫範圍內進行。

此外，在實施上述之萃取方法以後，還可以更進一步地實施例如濃縮、分離、純化或彼等之組合的各種分離純化方法；也可以是高於室溫的溫度進行萃取後，接著再對所得到之萃取物進行管柱層析；舉例來說，適合於本發明使用的分離純化方法，通常包括高效率液態層析(HPLC)法、逆相液態層析(Reverse Phase Liquid Chromatograpy)等。另外，還可以對於該牛樟芝萃取物再進行乾燥處理，直到獲得牛樟芝活性化合物之乾燥粉末為止。

其次，根據本發明之一技術觀點，在本發明醫藥組合物中，前述安卓奎諾爾(AQL)、安卓肉桂地菌素(ACA)、安卓奎諾爾 B(AQB)與安卓奎諾爾 D(AQD)之藥學活性化合物不一定要同時存在，也可以依需要而從AQL、ACA、AQB、AQD構成之群組中選取至少一種以上；即，在某些實施方式中，可以使用彼等之中的單一成分，也可以使用二種成分的組合、三種成分的組合、或四種成分的組合。

舉例來說，當在使用由AQL、ACA、AQB、AQD中選取之三種成分的情況，例如，可以使用AQL+AQB+AQD、AQL+ACA+AQD、AQL+ACA+AQB、或ACA+AQB+AQD；在使用二種成分的情況下；可以使用AQL+ACA、AQB+AQD、AQL +AQD、或ACA+AQB；而在使用單一成分的情況，例如，可以單獨使用AQL、ACA、AQB或AQD。

在本發明之某些較佳實施方式中，相對於本發明醫藥組合物之藥學活性化合物之總含量100重量份而言，該AQL、ACA、AQB、AQD的含量總和為在約0.01重量%至65.0重量%之範圍。

再者，根據本發明之一技術觀點，在本發明醫藥組合物中，該去氫齒孔酸(DEA)與該去氫硫色多孔菌酸(DSA)之藥學活性化合物不一定要同時存在，也可以依需要而單獨使用DEA、DSA中之任一種成分。例如，在某些實施方式中，可以僅使用DEA；而在某些實施方式中則僅使用DSA。

在本發明之某些較佳實施方式中，相對於本發明醫藥組合物的藥學活性化合物之總含量100重量份而言，該DEA、DSA的含量之總和為在約0.01重量%至55.0重量%之範圍。

另外，根據本發明之一技術觀點，在本發明醫藥組合物中，該樟芝酸 A(ZAA)與該樟芝酸 C(ZAC)之藥學活性化合物不一定要同時存在，也可以依需要而單獨使用ZAA、ZAC中之任一種成分。例如，在某些實施方式中，可以僅使用ZAA；而在某些實施方式中則僅使用ZAC。

在本發明之某些較佳實施方式中，相對於本發明醫藥組合物的藥學活性化合物之總含量100重量份而言，該ZAA、ZAC的含量總和為在約0.01重量%至55.0重量%之範圍。

此外，根據本發明之一技術觀點，在本發明醫藥組合物中，該樟菇酸 K(ANK)與該樟菇酸 C(ANC)之藥學活性化合物不一定要同時存在，也可以依需要而單獨使用ANK、ANC中之任一種成分。例如，在某些實施方式中，可以僅使用ANK；而在某些實施方式中則僅使用ANC。

在本發明之某些較佳實施方式中，相對於本發明醫藥組合物的藥學活性化合物之總含量100重量份而言，該ANK、ANC的含量總和為在約0.01重量%至65.0重量%之範圍。

若以醫藥品或醫藥組合物總重量為基準時， 本發明醫藥組合物的藥學活性化合物(即，AQL、ACA、AQB、AQD、DEA、DSA、ZAA、ZAC、ANK、ANC)之總含量，雖然是未特別加以限制，然而通常可以是在約0.01重量%至85.0重量%之範圍。

本發明所揭示之醫藥組合物適合使用於治療各種的癌症，舉例來說，例如，包括但不限於肝癌、大腸癌、食管癌、胃癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、骨癌、直腸癌、肝癌、乳癌、或血癌。較佳者為適用於治療肝癌、大腸癌、食管癌、胃癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、血癌或骨癌。

本發明所揭示之醫藥組合物，可根據眾所接受的藥學製程來製備而成。根據本發明之一實施態樣，本發明所揭示之醫藥組合物，可以經由任何適當的給藥途徑來施用。例如，經過口腔服用的膠囊、懸浮液或藥錠，或者是以不經過腸胃道方式來施用，例如，肌肉注射、靜脈血管注射、皮下注射或腹腔內注射等之系統性施用方式。另外，在某些實施方式中，本發明所揭示之醫藥組合物也可透過穿皮膜方式來施用，例如，局部皮膚塗抹、或者由例如支氣管內、鼻腔內、口腔內吸入、或者以鼻滴劑滴入；也可以是直腸內方式施用。

若以口服方式施用時，本發明所揭示之醫藥組合物可與賦形劑一起投與或在無賦形劑的情況下投與。又，也可以將本發明醫藥組合物配方成為內含各種輔劑、各種崩解劑、顆粒黏合劑或潤滑劑而形成固態劑型之藥錠。另外，在一實例中，也可以使用乳糖或高分子量聚乙二醇。此外，視情況需要而定，還可以進一步地用來改善任一藥物活性成分釋放速率的塗層或被覆層，例如腸衣塗層等。在其他的實例中，本發明之醫藥組合物也可以是被配方成為微脂體結構或具仿生間質系統結構，或者可被充填在軟或硬明膠膠囊內、或可被封裝在生物可分解之藥包內的顆粒。

又，在本發明中，藥學上可接受的賦型劑係指可和藥學製劑中其他成分相容且與生物體相容者，例如，囊封材料或諸如吸收促進劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝液、包覆劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、補充劑、填充劑、調味劑、保濕劑、潤滑劑、香料、防腐劑、推進劑、釋放劑、殺菌劑、甜味劑、增溶劑、濕潤劑及其混合物等之各種添加劑。

適合於本發明使用的輔劑，舉例來說，例如，可以使用微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸二鈣或甘胺酸。適合於本發明使用之崩解劑，舉例來說，例如，可以使用澱粉、藻酸或特定的矽酸鹽。適合於本發明使用的顆粒黏合劑，舉例來說，例如，可以使用聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明膠、或相思樹膠(acacia)。適合於本發明使用的潤滑劑，舉例來說，例如，可以使用硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉或滑石等。適合於本發明使用的賦形劑，舉例來說，例如，可以使用乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、玉米澱粉、小麥澱粉、稻米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠等。

在某些實施方式中，本發明醫藥組合物是被配方成為適合口服的液體劑型，例如，口服用懸浮液、乳化液、微乳化液、及/或特效藥液(elixirs)。在此液體劑型的情況下，本發明之醫藥組合物的活性成分可進一步地與各種甜味劑或風味劑、著色劑或染料一起配方，必要時還可加入乳化劑和/或懸浮劑、或者諸如水、酒精、丙二醇、甘油等稀釋劑、或維持pH值的緩衝液。

又，在其他實施方式中，將含有本發明醫藥組合物的液態配方製作成無菌注射溶液或懸浮液；例如，製作成適合於以靜脈內注射、肌肉內注射、皮下注射或腹膜內注射等方式施用的溶液。

適合使用於上述無菌注射溶液或懸浮液中之稀釋劑，舉例來說，例如，其可以包括但不限於1,3-丁二醇、甘露醇、水、林格氏溶液、等張性氯化鈉溶液；亦可以使用例如油酸等之脂肪酸、甘油酯衍生物、或者是例如橄欖油或菜籽油等之藥學可接受的天然油脂。

再者，在某些實施方式中，也可以更進一步地添加醇類、羧甲基纖維素分散劑、界面活性劑、乳化劑、或其他類似物。

此外，於有些實施方式中，也可以將含有本發明醫藥組合物之液體配方充填在軟膠囊內來使用。

另外，於其他實施方式中，也可以將本發明之上述醫藥品或醫藥組合物與惰性載體一起製成多種適用於局部皮膚表面施用的劑型，例如，包括溶液、乳液、乳霜、凝膠、軟膏、噴劑、皮膚貼布等。典型的惰性載體，舉例來說，例如，可以使用水、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙二醇、礦物油、硬脂酸醇、或能夠產生凝膠的物質。

此外，在一實施方式中，亦可將本發明上述醫藥品或醫藥組合物與藥學可接受的高分子輔劑一起製成多種適用於黏膜給藥(mucosal application)的劑型，例如經頰(buccal)和/或舌下(sublingual)藥物劑型。一般來說，上述的高分子輔劑包含親水性聚合物，舉例來說，例如，其可以使用包括但不限於丙烯酸聚合物 (acrylic acid polymers)、水解聚乙烯醇(hydrolyzed polyvinylalcohol)、聚乙烯氧化物(polyethylene oxides)、聚丙烯酸酯(polyacrylates)、乙烯聚合物 (vinyl polymers)、聚乙烯吡咯啶、葡萄糖(dextran)、瓜膠(guar gum)、果膠(pectins)、澱粉、或纖維素聚合物(cellulosic polymers)等。

在某些實施方式中，本發明所揭示之醫藥組合物可以做為另一種輔助性治療藥物來使用，藉以增進諸如外科手術、放射線治療或化學治療之主要癌症治療方法之治療效果。施用本發明所揭示之醫藥組合物的情況，可以單獨給藥或併同習知藥學可接受輔劑一起給藥，例如，可經由口服方式單獨、或與食物一起將本發明所揭示之醫藥組合物投予個體。

在某些實施方式中，本發明所述方法更包括在對該個體施用本發明醫藥組合物之前、同時或之後，額外對該個體施加外科手術、放射線治療或化學治療之類的其他主要癌症治療手段，以改善對該個體之癌症治療效果。

在將本發明醫藥組合物施用至一個患者或個體的一般情況下，相對於該患者或該個體之體重而言，通常的有效用量或總劑量為約0.01至約100.0毫克/公斤體重之範圍內。每天可施用至該個體之醫藥組合物的有效用量或總劑量為約0.01至約50.0毫克/公斤體重之範圍；此處所指的總劑量，可以是在一天內以單次施用；也可以是分成多次施用。  (實施例)

以下，藉由實施例來說明本發明之特定實施態樣，但本發明之內容範疇並不受限於此等實施例而已。

首先，於10公分培養盤內，以經Dulbecco氏改良過之Eagle氏培養基(Dulbecco's modified Eagle's medium，DMEM) 分別培育人類乳癌細胞株MCF-7、人類肝癌 (human hepatocarcinoma) 細胞 株HepG2、人類直腸癌細胞株HCT116； 以RPMI培養基分別培育人類結腸癌細胞株RKO、人類組織白血球細胞株U937、及人類前骨髓性白血球細胞株HL-60；接著在培養基中添加10%的胎牛血清(fetal calf serum，FCS)、100單位/ml之盤尼西林、100 ng/ml之鏈黴素(Invitrogen,Carlsbad，CA)、2mM L-穀氨酸和非必要胺基酸及丙酮酸鈉，並維持在37℃的潮溼環境下(5% CO2及95%空氣)，當各個細胞成長到達八分滿時，則進行繼代培養。

繼代培養方式為先吸去舊的培養液後，以3毫升的磷酸緩衝液(PBS)清洗培養細胞一次，然後在37℃下，以1毫升之胰蛋白酶/EDTA(0.05%/0.025%)溶液處理細胞5分鐘，使細胞脫離培養盤成懸浮狀態；接著在懸浮細胞中加入2毫升新鮮的培養液，以中和胰蛋白酶的活性。然後，將細胞打散使平均分布於細胞懸浮液中，留下適當比例的細胞數後，加入新培養液補至適當體積並混勻後，放入37℃培養箱內培養。

取約3,000個細胞，將之接種在平底96孔盤 中，以培養液補充每一培養孔內的培養液，使體積達180 L，接著將培養盤放入37℃之培養箱培養過夜。次日，於上述培養液中加入含不同濃度的藥學活性化合物之本發明醫藥組合物。各培養孔內最終體積為200 μL，放入37℃培養箱培養，於48小時後測定細胞活性。

藉由在405 nm波長下，測定受質磷酸對硝基苯酯(p-nitrophenyl phosphate，p-NPP)被活細胞中所含的大量ACP所轉換成對-硝基苯酚(p-nitrophenol，p-NP)的吸光值，即可以推算出細胞的活性。測定細胞活性時，先吸去培養液，以200 μL PBS清洗一次，加入100 μl的pH約5.5之分析用緩衝液(10 mM p-NPP、0.1 M醋酸鈉、0.1% Triton X-100)，於37℃反應30-40分鐘後，再加入10 μl的0.1 N之氫氧化鈉以終止反應，然後於波長405 nm測定視同細胞活性之吸光值，以未經藥物施用處理之空白組的細胞活性為1，計算出不同條件處理下的細胞活性比。

將自牛樟芝子實體或菌絲體中，根據前述之萃取分離方法分離或純化而得之各活性成分(即，AQL、ACA、AQB、AQD、DEA、DSA、ZAA、ZAC、ANK、ANC)，依據以下表1所示之組成比例予以均勻混合，而配製成能夠預防及/或治療特定癌症的本發明之醫藥組合物。   表1 本揭示內容之醫藥組合物配方 註： AQL：安卓奎諾爾(Antroquinonol) ACA：安卓肉桂地菌素(Antrocinnamonin A) AQB：安卓奎諾爾 B(Antroquinonol B) AQD：安卓奎諾爾 D(Antroquinonol D) DEA：去氫齒孔酸(Dehydroeburicoic Acid) DSA：去氫硫色多孔菌酸(Dehydrosulphurenic Acid) ZAA：樟芝酸 A(Zhankuic Acid A) ZAC：樟芝酸 C(Zhankuic Acid C) ANK：樟菇酸 K(Antcin K) ANC：樟菇酸 C(Antcin C)

分別依照上述的方式同樣地培養人類乳癌細胞株MCF-7、人類肝癌細胞株HepG2、人類直腸癌細胞株HCT116、人類結腸癌細胞株RKO、人類組織白血球細胞株U937、及人類前骨髓性白血球細胞株HL-60，並於其中分別施用本發明之醫藥組合物A、醫藥組合物B、醫藥組合物C，透過測定ACP活性來評估本發明之醫藥組合物A、B、C抑制各種癌細胞株活性的功效。

經由分析抑制癌細胞活性之試驗結果顯示，確認本發明之醫藥組合物A、B、C可以抑制包括人類乳癌細胞株MCF-7、人類肝癌細胞株HepG2、人類直腸癌細胞株HCT116、人類結腸癌細胞株RKO、人類組織白血球細胞株U937、及人類前骨髓性白血球細胞株HL-60等癌細胞的活性，其IC50(μg/ml)皆明顯優於先前技術所揭者。綜上所述，結果顯示本發明的醫藥組合物是潛在可用來治療癌症的藥物。

當可理解上述實施方式與實施例僅為例示，且熟習此技藝者可對齊進行各種修飾。上文提出之說明書、實施例與資料的目的在於使本說明書的結構完備，並作為實作本發明之例示。雖然本揭示內容已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本揭示內容，任何熟習此技藝者，在不脫離本揭示內容之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本揭示內容之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

在本文中引用的包括專利申請、公開、公告之各種專利文獻及非專利文獻，皆以全文引用完整方式納入本文列入參考，且不應該以任何方式解釋為用來限制本發明之創作精神與權利範圍。

無。

Claims (9)

1. 一種用於治療罹患癌症的個體之醫藥組合物，其至少包含：藥學有效量之新穎標靶物肝癌逆轉訊號物質、及其藥學上可接受之載劑、載體、稀釋劑或賦形劑；該醫藥組合物中之各成分的比例係依癌症之型態進行調整； 其中該新穎標靶物肝癌逆轉訊號物質為自安卓奎諾爾(AQL)、安卓肉桂地菌素(ACA)、安卓奎諾爾 B(AQB)、安卓奎諾爾 D(AQD)、去氫齒孔酸(DEA)、去氫硫色多孔菌酸(DSA)、樟芝酸 A(ZAA)、樟芝酸 C(ZAC)、樟菇酸 K(ANK)、及樟菇酸 C(ANC)構成組群組中所選出之至少一種或其組合物。
2. 如請求項1所記載之醫藥組合物，其中相對於該組合物中之三萜化合物的總量而言，安卓奎諾爾(AQL)、安卓肉桂地菌素(ACA)、安卓奎諾爾 B(AQB)與安卓奎諾爾 D(AQD)的含量總和為在約0.01重量%至約65.0重量%之範圍。
3. 如請求項1所記載之醫藥組合物，其中相對於該組合物中之三萜化合物的合計總含量而言，去氫齒孔酸(DEA)與去氫硫色多孔菌酸(DSA)的含量之總和為在約0.01重量%至約55.0重量%之範圍。
4. 如請求項1所記載之醫藥組合物，其中相對於該組合物中之三萜化合物的合計總量而言，樟芝酸 A(ZAA)與樟芝酸 C(ZAC)的含量總和為在約0.01重量%至約55.0重量%之範圍。
5. 如請求項1所記載之醫藥組合物，其中相對於該組合物中之三萜化合物的合計總量而言，樟菇酸 K(ANK)與樟菇酸 C(ANC)的含量總和為在約0.01重量%至約65.0重量%之範圍。
6. 如請求項1所記載之醫藥組合物，其中該癌症為肝癌、大腸癌、食管癌、胃癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、骨癌、直腸癌、肝癌、乳癌、或血癌。
7. 如請求項1所記載之醫藥組合物，其中該個體為人類。
8. 如請求項1所記載之醫藥組合物，其中該賦形劑之成分包含乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、玉米澱粉、小麥澱粉、稻米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠。
9. 如請求項1所記載之醫藥組合物，其係更進一步包括自吸收促進劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝液、包覆劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、補充劑、填充劑、調味劑、保濕劑、潤滑劑、香料、防腐劑、推進劑、釋放劑、殺菌劑、甜味劑、增溶劑、濕潤劑及其混合物構成群組中所選出之至少一種的添加劑。