TW201704230A

TW201704230A - 化合物

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Publication number: TW201704230A
Application number: TW105106561A
Authority: TW
Inventors: 約翰亞歷山大布朗恩; 飛利浦Ｇ杭佛瑞; 凱瑟琳路易絲瓊斯; 克利斯多佛羅蘭德瓦勒威
Original assignee: 葛蘭素史密斯克藍智慧財產權有限公司
Priority date: 2015-03-05
Filing date: 2016-03-03
Publication date: 2017-02-01
Also published as: WO2016139292A1; GB201503720D0; AR103844A1; UY36574A

Abstract

本發明係關於式(I)化合物，其係5-[1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-5-(嗎啉-4-基)-IH-1,3-苯并二唑-2-基]-1,3-二甲基-1,2-二氫吡啶-2-酮： □或其鹽，具體而言其醫藥上可接受之鹽。該式(I)化合物已鑑別為BET抑制劑，且因此具有用於療法中、例如用於治療自體免疫及發炎性疾病(例如類風濕性關節炎)及癌症中之潛能。

Description

化合物

本發明係關於化合物、其製備方法、含有其之醫藥組合物，且係關於其於治療各種病症(具體而言發炎及自體免疫疾病及癌症)中之用途。

真核有機體之基因組在細胞核內高度有序。雙股DNA之長鏈纏繞於組蛋白之八聚體(最通常包含兩個拷貝之組蛋白H2A、H2B、H3及H4)周圍以形成核小體。隨後此基本單元藉由核小體之聚集及摺疊進一步壓縮而形成高凝聚染色質結構。多種不同凝聚狀態係可能的，且此結構之緊密度在細胞週期期間變化，在細胞分裂過程期間最密實。染色質結構在基因轉錄調節中起關鍵作用，但高凝聚染色質不能有效進行轉錄調節。染色質結構受一系列組蛋白(尤其組蛋白H3及H4)之轉譯後修飾控制，且該等修飾最通常位於延伸出核心核小體結構之組蛋白尾部內。該等修飾包括乙醯基化、甲基化、磷酸化、泛素化、SUMO蛋白質修飾化。該等外遺傳標記係由特定酶書寫及擦除，該等酶將標籤放置於組蛋白尾部內之特定殘基上，藉此形成外遺傳密碼，其隨後由細胞解譯以允許調節基因表現。

組蛋白乙醯基化最通常與基因轉錄相關，此乃因該修飾藉由改變靜電使DNA與組蛋白八聚體之相互作用鬆弛。除此物理變化外，特定蛋白質識別並結合至組蛋白內之乙醯基化離胺酸殘基以讀取外遺傳密碼。溴結構域係蛋白質內之較小(約110個胺基酸)之不同結構域，該等蛋白質在組蛋白背景中通常但非排他地結合至乙醯基化離胺酸殘基。已知存在約50種蛋白質之家族含有溴結構域，且其在細胞內具有多種功能。

含有溴結構域之蛋白質之BET家族包含4種蛋白質(BRD2、BRD3、BRD4及BRDT)，其含有能夠結合至兩個緊密靠近之乙醯基化離胺酸殘基的串聯溴結構域，從而增加相互作用之特異性。自每一BET蛋白質之N末端編號，串聯溴結構域通常係經標記之結合結構域1(BD1)及結合結構域2(BD2)(Chung等人，J Med.Chem,.2011,54,3827-3838)。

抑制BET蛋白質與乙醯化離胺酸殘基結合具有改善若干疾病之進展之潛能，該等疾病包括但不限於癌症(Dawson M.A.等人，Nature,2011：478(7370)：529-33；Wyce,A.等人，Oncotarget.2013：4(12)：2419-29)、敗血症(Nicodeme E.等人，Nature,2010：468(7327)：1119-23)、自體免疫及發炎性疾病(例如類風濕性關節炎及多發性硬化)(Mele D.A.等人，Journal of Experimental Medicine,2013：210(11)：2181-90)、心臟衰竭(Anand P.等人，Cell,2013：154(3)：569-82)及肺纖維化(TangX.等人，Molecular Pharmacology,2013：83(1)：.283-293)。

業內需要抑制溴結構域之活性之化合物，具體而言抑制BET家族含有溴結構域之蛋白質與乙醯化離胺酸殘基結合之化合物。具體而言，需要具有超過已知BET抑制劑之改良特性之化合物。

在第一態樣中，本發明提供式(I)之5-[1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-5-(嗎啉-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]-1,3-二甲基-1,2-二氫吡啶-2-酮：

或其鹽。

在本發明之第二態樣中，提供包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組合物。

在本發明之第三態樣中，提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中，具體而言用於治療適用BET抑制劑之疾病或病況。

在本發明之第四態樣中，提供治療適用BET抑制劑之疾病或病況之方法，該方法包含向有需要之個體投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。

在本發明之第五態樣中，提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療適用BET抑制劑之疾病或病況的藥劑。

在又一態樣中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療自體免疫及/或發炎性疾病之藥劑。

在又一態樣中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療類風濕性關節炎之藥劑。

可適用BET抑制劑之疾病及病況可包括自體免疫及/或發炎性疾病(例如類風濕性關節炎)或癌症。在一個實施例中，可適用BET抑制劑之疾病及病況可包括自體免疫及/或發炎性疾病(例如類風濕性關節炎)。

定義

如本文所用術語「溴結構域」係指結合乙醯化離胺酸殘基之進化上及結構上保守之模組(約110個胺基酸長)，例如彼等於組織蛋白之N末端尾部上者。其係發現作為遠較大之含有溴結構域之蛋白質(BCP)之部分的蛋白質結構域，其中之許多具有調節基因轉錄及/或染色質重塑之作用。人類基因體編碼至少57個溴結構域。

如本文所用術語「BET」係指含有溴結構域之蛋白質之溴結構域及額外末端結構域家族，其包括BRD2、BRD3、BRD4及BRDT。

如本文所用術語「BET抑制劑」係指能夠抑制一或多種BET家族含有溴結構域之蛋白質(例如BRD2、BRD3、BRD4或BRDT)與(例如)乙醯化離胺酸殘基結合的化合物。

如本文所用術語「醫藥上可接受之鹽」係指保留式(I)化合物之期望生物活性且展現最小不期望毒物學效應之鹽。該等醫藥上可接受之鹽可在化合物之最終分離及純化期間原位製得或藉由使純化化合物以其游離酸或鹼形式分別與適宜鹼或酸反應製得。此外，式(I)化合物之醫藥上可接受之鹽可在游離酸或鹼形式之進一步處理期間製得，例如在製造成醫藥調配物期間原位製得。

如本文所用術語「治療」係指病況之預防、改善或穩定指定病況、減少或消除病況之症狀、減緩或消除病況之進展及預防或延遲先前患病患者或個體之病況復發。

如本文所用術語「治療有效量」係指式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽將在動物或人體中引發期望生物反應之量。

如本文所用術語「個體」係指動物或人體。

應理解，本文中提及「本發明化合物」時意指呈游離鹼或呈鹽(例如醫藥上可接受之鹽)之式(I)化合物。

本發明之說明

本發明提供化合物或其鹽，其係BET抑制劑且因此可用於治療(例如)自體免疫及發炎性疾病及癌症。此外，化合物或其鹽可顯示超過已知BET抑制劑改良之特性，改良之處在於其可具有(例如)以下性質中之一或多者：(i)有效的BET抑制活性；(ii)相對於除BET家族蛋白質外之其他已知含有溴結構域之蛋白質的選擇性；(iii)相對於一或多個其他BET家族成員針對特定BET家族成員之選擇性；(iv)針對給定BET家族成員針對一個結合結構域(即BD1相對於BD2)之選擇性；(v)改良之可研發性(例如期望溶解特性、藥物動力學及藥效學)；或(vi)降低之副作用特性。

或其鹽。

應瞭解，本發明涵蓋呈游離鹼及呈其鹽(例如呈其醫藥上可接受之鹽)之式(I)化合物。在本發明之一個實施例中，式(I)化合物呈游離鹼形式。

式(I)化合物之鹽包括醫藥上及非醫藥上可接受之鹽。非醫藥上可接受之鹽可用於製備式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。

式(I)化合物之鹽由於其在醫藥中之潛在用途期望地在醫藥上可接受。關於適宜鹽之綜述，參見Berge等人，J.Pharm.Sci.,66：1-19(1977)。通常，醫藥上可接受之鹽可易於藉由使用期望酸或鹼(若適當)製得。所得鹽可自溶液沈澱並藉由過濾收集或可藉由蒸發溶劑回收。在本發明之一個實施例中，式(I)化合物呈醫藥上可接受之鹽形式。

醫藥上可接受之酸加成鹽可藉由用適宜無機或有機酸處理式(I)化合物來形成。代表性醫藥上可接受之酸加成鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硝酸鹽、甲基硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、胺基磺酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、羥基乙酸鹽、苯基乙酸鹽、丙酸鹽、丁酸鹽、異丁酸鹽、戊酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙烯酸鹽、富馬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、柳酸鹽、對胺基柳酸鹽、乙醇酸鹽、乳酸鹽、庚酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸酯、鄰-乙醯氧基苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、萘酸鹽、羥基萘酸鹽、扁桃酸鹽、鞣酸鹽、甲酸鹽、硬脂酸鹽、抗壞血酸鹽、棕櫚酸鹽、油酸鹽、丙酮酸鹽、巴莫酸鹽、丙二酸鹽、月桂酸鹽、戊二酸鹽、麩胺酸鹽、依託酸鹽(estolate)、甲烷磺酸鹽(甲磺酸鹽)、乙烷磺酸鹽(乙磺酸鹽)、2-羥基乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽(benzenesulfonate或besylate)、對胺基苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽(p-toluenesulfonate或tosylate)及萘-2-磺酸鹽。

式(I)化合物之醫藥上可接受之鹽可具有(例如)改良之穩定性或溶解性，從而促進開發作為醫藥。

本發明之範疇內包括所有可能之化學計量及非化學計量形式之式(I)化合物之鹽。

應瞭解，許多有機化合物可與溶劑形成複合物，該等化合物於該等溶劑中反應或自其沈澱或結晶。該等複合物稱作「溶劑合物」。舉例而言，具有水之複合物稱作「水合物」。具有高沸點之溶劑及/或具有形成氫鍵之高傾向之溶劑(例如水、乙醇、異丙醇及N-甲基吡咯啶酮)可用於形成溶劑合物。鑑別溶劑化之方法包括(但不限於)NMR及微量分析。式(I)化合物或其鹽可形成一或多種溶劑合物。

式(I)化合物或其鹽可呈結晶或非晶形形式，其各自包括於本發明之範疇內。式(I)化合物或其鹽之熱力學最穩定之結晶型尤其令人感興趣。

可使用多種習用分析技術表徵並區分式(I)化合物或其鹽之結晶型，該等技術包括(但不限於)X射線粉末繞射(XRPD)、紅外光譜(IR)、拉曼(Raman)光譜、差示掃描量熱法(DSC)、熱重分析(TGA)及固態核磁共振(ssNMR)。

在一個實施例中，提供5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮之結晶固態形式。

在又一實施例中，提供5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮之結晶固態形式，其特徵在於在表1中所示之2θ值下具有顯著繞射峰之X射線粉末繞射(XRPD)圖案。

在又一實施例中，本發明係關於5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮之結晶固態形式，其特徵在於X射線粉末繞射圖案具有於8.2、8.6、11.0、12.5、13.0、14.0、16.3、17.1、18.5、22.0、23.7及26.7(形式1)之2θ值± 0.10° 2θ實驗誤差下之繞射峰。

本發明亦包括式(I)化合物或其鹽之所有適宜之同位素變化形式。式(I)化合物或其鹽之同位素變化形式定義為至少一個原子由具有相同原子序但原子質量不同於通常在自然界中發現之原子質量的原子替代者。可納入本發明化合物中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、氟及氯之同位素，例如分別²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F及³⁶Cl。式(I)化合物或其鹽之某些同位素變化形式(例如彼等納入放射性同位素(例如³H或¹⁴C)者)可用於藥物及/或受質組織分佈研究中。含氚即³H及碳-14即¹⁴C同位素因其易於製備及可檢測性而尤佳。此外，用諸如氘(即²H)等同位素進行取代因具有更強之代謝穩定性從而可提供某些治療優點，例如活體內半衰期延長或劑量需要減少，且因此可在一些情況下較佳。式(I)化合物或其鹽之同位素變化形式通常可藉由習用程序、例如藉由闡釋性方法或藉由下文實例中所述之製備使用適宜試劑之適當同位素變化形式來製得。

用途之說明

已知式(I)化合物係BET抑制劑，且因此此化合物或其醫藥上可接受之鹽可具有治療效用，其用於治療與全身性或組織發炎、對感染或低氧之發炎反應、細胞活化及增殖、脂質代謝、纖維化相關之多種疾病或病況，及用於預防及治療病毒感染。在一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽能夠抑制每一BET家族含有溴結構域之蛋白質(例如BRD2、BRD3、BRD4及BRDT)與乙醯化離胺酸殘基結合。在又一實施例中，式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽能夠抑制BRD4與其同源乙醯化離胺酸殘基結合。

式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽可具有使得尤其適於進展成發展為新療法之特性，此乃因其具有以下特徵中之一或多者：i.有效的BET家族(BRD2、BRD3、BRD4及BRDT)抑制活性； ii.相對於除BET家族蛋白質外之其他已知含有溴結構域之蛋白質的選擇性；iii.有效的抗發炎效應，如藉由(例如)TNP-KLH誘導之IgG1產生及LPS誘導之IL-6產生之臨床前小鼠模型中生成之活體內效能數據所證明；iv.安氏測試(Ames test)中之陰性結果；v.於生物相關FaSSIF培養基中之高溶解性(即大於1mg/mL)；vi.預測人類中之高經口生物利用度之臨床前物質中之藥物動力學特性(基於經口生物利用度(大鼠94%及狗101%)之臨床前數據，預計人類中之經口生物利用度較高)；vii.預測每日一次低經口劑量(即小於50mg/天，例如5mg/天、10mg/天、15mg/天、20mg/天、25mg/天、30mg/天、35mg/天、40mg/天、45mg/天)之藥物動力學及藥效學特性。

BET抑制劑可用於治療多種急性或慢性自體免疫及發炎病況，例如類風濕性關節炎、骨關節炎、急性痛風、牛皮癬、全身性紅斑狼瘡、肺動脈高血壓(PAH)、多發性硬化、發炎性腸病(克隆氏病(Crohn’s disease)及潰瘍性結腸炎)、哮喘、慢性阻塞性氣道疾病、肺炎、心肌炎、心包炎、肌炎、濕疹、皮炎(包括異位性皮炎)、禿髮、白斑病、大皰性皮膚病、腎炎、血管炎、高膽固醇血症、動脈粥樣硬化、阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)、抑鬱症、薛格連氏症候群(Sjögren’s syndrome)、涎腺炎、視網膜中央靜脈阻塞、視網膜分枝靜脈阻塞、歐文-加斯症候群(Irvine-Gass syndrome)(白內障後及手術後)、色素性視網膜炎、扁平部炎、鳥槍彈樣視網膜脈絡膜病變、視網膜前膜、囊性黃斑水腫、旁中心凹毛細管擴張、牽引性黃斑部病變、玻璃體黃斑牽引症候群、視網膜剝離、視神經視網膜炎、特發性黃斑水腫、視網膜炎、乾眼病(乾燥性角膜結膜炎)、春季角膜結膜炎、異位性角膜結膜炎、葡萄膜炎(例如前葡萄膜炎、全葡萄膜炎、後葡萄膜炎、葡萄膜炎相關性黃斑水腫)、鞏膜炎、糖尿病性視網膜病變、糖尿病性黃斑水腫、年齡相關性黃斑營養不良、肝炎、胰臟炎、原發性膽汁性肝硬化、硬化性膽管炎、艾迪生氏症(Addison’s disease)、垂體炎、甲狀腺炎、I型糖尿病、巨細胞性動脈炎、腎炎(包括狼瘡腎炎)、器官受損之血管炎(例如腎小球腎炎)、血管炎(包括巨細胞性動脈炎)、韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)、結節性多動脈炎、貝切特氏病(Behcet's disease)、川崎氏病(Kawasaki disease)、高安氏動脈炎(Takayasu’s Arteritis)、壞疽性膿皮病、器官受損之血管炎及移植器官急性排斥。BET抑制劑用於治療類風濕性關節炎之用途尤其令人感興趣。

在一個實施例中，急性或慢性自體免疫及/或發炎病況係經由調節APO-A1之脂質代謝病症，例如高膽固醇血症、動脈粥樣硬化及阿茲海默氏病。

在另一實施例中，急性或慢性自體免疫及/或發炎病況係呼吸病症，例如氣喘或慢性阻塞性氣道疾病。

在另一實施例中，急性或慢性自體免疫及/或發炎病況係全身性發炎病症，例如類風濕性關節炎、骨關節炎、急性痛風、牛皮癬、全身性紅斑狼瘡、多發性硬化或發炎性腸病(克隆氏病及潰瘍性結腸炎)。

在另一實施例中，急性或慢性自體免疫及/或發炎病況係多發性硬化。

在又一實施例中，急性或慢性自體免疫及/或發炎病況係I型糖尿病。

BET抑制劑可用於治療疾病或病況，該疾病或病況涉及對細菌、病毒、真菌、寄生蟲或其毒素感染之發炎反應，例如敗血症、急性敗血症、敗血症症候群、敗血性休克、內毒素血症、全身性發炎反應症候群(SIRS)、多器官功能障礙症候群、中毒性休克症候群、急性肺損傷、ARDS(成人呼吸窘迫症候群)、急性腎衰竭、猛爆性肝炎、燒傷、急性胰臟炎、手術後症候群、結節病、赫克斯海默反應(Herxheimer reactions)、腦炎、脊髓炎、腦膜炎、瘧疾及與病毒感染相關之SIRS(例如流感、帶狀皰疹、單純皰疹及冠狀病毒)。在一個實施例中，涉及對細菌、病毒、真菌、寄生蟲或其毒素感染之發炎反應之疾病或病況係急性敗血症。

BET抑制劑可用於治療與缺血-再灌注損傷相關之病況，例如心肌梗塞、腦血管缺血(中風)、急性冠狀動脈症候群、腎再灌注損傷、器官移植、冠狀動脈旁路移植、心-肺旁路程序、肺、腎、肝、胃腸或周邊肢栓塞。

BET抑制劑可用於治療纖維變性病況，例如特發性肺纖維化、腎纖維化、術後狹窄、瘢痕瘤瘢痕形成、硬皮病(包括硬斑病)、心臟纖維化及囊性纖維化。

BET抑制劑可用於治療病毒感染，例如單純皰疹感染及再活化、冷皰、帶狀皰疹感染及再活化、水痘、帶狀皰疹、人類乳頭瘤病毒(HPV)、人類免疫缺失病毒(HIV)、子宮頸贅瘤形成、腺病毒感染(包括急性呼吸性疾病)、痘病毒感染(例如牛痘及天花)及非洲豬瘟病毒。在一個實施例中，病毒感染係皮膚或子宮頸上皮之HPV感染。在另一實施例中，病毒感染係潛伏HIV感染。

BET抑制劑可用於治療癌症，其包括血液癌(例如白血病、淋巴瘤及多發性骨髓瘤)、上皮癌(包括肺癌、乳癌及結腸癌)、中線癌、間質、肝、腎及神經腫瘤。

BET抑制劑可用於治療一或多種選自以下之癌症：腦癌(神經膠質瘤)、神經膠母細胞瘤、班-佐症候群(Barnnayan-Zonana syndrome)、考登病(Cowden disease)、Lhermitte-Duclos病、乳癌、發炎乳癌、結腸直腸癌、維爾姆斯氏腫瘤(Wilm's tumor)、尤因氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、橫紋肌肉瘤、室管膜瘤、髓母細胞瘤、結腸癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、肉瘤癌、骨肉瘤、骨巨細胞腫瘤、甲狀腺癌、淋巴母細胞性T細胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴球性白血病、毛細胞性白血病、急性淋巴母細胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性嗜中性球性白血病、急性淋巴母細胞性T細胞白血病、漿細胞瘤、免疫母細胞大細胞白血病、外套細胞白血病、多發性骨髓瘤、成巨核細胞白血病、急性成巨核細胞白血病、前髓細胞性白血病、混合性白血病、紅白血病、惡性淋巴瘤、何傑金氏淋巴瘤(Hodgkins lymphoma)、非何傑金氏淋巴瘤、淋巴母細胞性T細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、濾泡淋巴瘤、神經母細胞瘤、膀胱癌、尿道上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、腎癌、間皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽癌、頰癌、口腔癌、GIST(胃腸道間質瘤)、NUT-中線癌及睪丸癌。

在一個實施例中，癌症係白血病，例如選自以下之白血病：急性單核球性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴球性白血病及混合性白血病(MLL)。在另一實施例中，癌症係NUT-中線癌。在另一實施例中，癌症係多發性骨髓瘤。在另一實施例中，癌症係肺癌，例如小細胞肺癌(SCLC)。在另一實施例中，癌症係神經母細胞瘤。在另一實施例中，癌症係伯基特氏淋巴瘤。在另一實施例中，癌症係子宮頸癌。在另一實施例中，癌症係食管癌。在另一實施例中，癌症係卵巢癌。在另一實施例中，癌症係乳癌。在另一實施例中，癌症係結腸直腸癌。

在一個實施例中，適用BET抑制劑之疾病或病況選自與全身性發炎反應症候群相關之疾病，例如敗血症、燒傷、胰臟炎、嚴重創傷、出血及缺血。在此實施例中，可在診斷時投與BET抑制劑以降低以下之發病率：SIRS、休克發作、多器官功能障礙症候群，其包括急性肺損傷、ARDS、急性腎、肝、心臟或胃腸損傷及死亡之發作。在另一實施例中，可在與高風險之敗血症、出血、廣泛組織損傷、SIRS或MODS(多器官功能障礙症候群)相關之手術或其他程序之前投與BET抑制劑。在特定實施例中，適用BET抑制劑之疾病或病況係敗血症、敗血症症候群、敗血性休克及內毒素血症。在另一實施例中，BET抑制劑適用於治療急性或慢性胰臟炎。在另一實施例中，BET抑制劑適用於治療燒傷。

在又一態樣中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。

本在又一態樣中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療適用BET抑制劑之疾病或病況。

在又一態樣中，本發明亦提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療自體免疫及/或發炎性疾病及癌症。

在又一態樣中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療類風濕性關節炎。

在本發明之又一態樣中，提供治療適用BET抑制劑之疾病或病況的方法，該方法包含向有需要之個體投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。

在又一態樣中，本發明係關於自體免疫及/或發炎性疾病之治療方法，其包含向有需要之個體投與安全且治療有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一個實施例中，個體係人類個體。

在再一態樣中，本發明係關於治療類風濕性關節炎之方法，其包含向有需要之個體投與安全且治療有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。

醫藥組合物/投與途徑/劑量

儘管可呈粗化學品形式投與式(I)化合物以及其醫藥上可接受之鹽用於療法中，但通常呈遞呈醫藥組合物形式之活性成份。

在又一態樣中，提供醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之賦形劑。在又一態樣中，提供醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之賦形劑。

賦形劑必須為醫藥上可接受的且與組合物之其他成份相容。根據本發明之另一態樣，亦提供用於製備醫藥組合物之方法，其包括混合式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種醫藥上可接受之賦形劑。醫藥組合物可用於治療本文所述疾病中之任一者。

由於式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽意欲用於醫藥組合物中，故應容易地理解，其較佳各自以實質上純形式(例如至少85%純、尤其至少98%純(針對重量基以重量%表示))提供。

醫藥組合物可以每單位劑量含有預定量之活性成份的單位劑型呈遞。較佳單位劑量組合物係彼等含有活性成份之日劑量或分劑量或其適當份數者。因此，該等單位劑量可每天投與一次以上。

醫藥組合物可適於藉由任何適當途徑投與，例如藉由經口(包括經頰或舌下)、直腸、吸入、鼻內、局部(包括經頰、舌下或經皮)、眼睛(包括局部、眼內、結膜下、鞏膜上、特農囊下)、陰道或非經腸(包括皮下、肌內、靜脈內或皮內)途徑。該等組合物可藉由藥學技術內已知之任一方法(例如藉由使活性成份與賦形劑結合)來製得。

在一個態樣中，醫藥組合物適於經口投與。適於經口投與之醫藥組合物可以如下形式呈遞：離散單元，例如膠囊或錠劑；粉劑或顆粒；存於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；可食用發泡體或發泡物質；或水包油型液體乳液或油包水型液體乳液。

適於納入錠劑或膠囊中之粉劑可藉由將式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽減小至適宜微細大小(例如藉由微粉化)並與相似製備之醫藥賦形劑(例如可食用碳水化合物，例如澱粉或甘露醇)混合製得。亦可存在(例如)矯味劑、防腐劑、分散劑及著色劑。

膠囊可藉由製備如上述粉末混合物並填充成型明膠外殼來製得。可在填充操作之前向粉末混合物中添加助流劑及潤滑劑(例如膠質氧化矽、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇)。亦可添加崩解劑或增溶劑(例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉)以在攝入膠囊時改良藥劑之可用性。

此外，若期望或需要，亦可向混合物中納入適宜黏合劑、助流劑、潤滑劑、甜味劑、矯味劑、崩解劑及著色劑。適宜黏合劑包括澱粉、明膠、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然及合成膠(例如阿拉伯膠、磺蓍膠或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟及諸如此類。用於該等劑型中之潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉及諸如此類。崩解劑包括澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠及諸如此類。錠劑係藉由(例如)製備粉末混合物、製粒或擊壓、添加潤滑劑及崩解劑及壓製成錠劑來調配。粉末混合物係藉由混合適宜粉碎之化合物與上述稀釋劑或鹼、及視情況黏合劑(例如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、或聚乙烯吡咯啶酮)、溶液阻滯劑(例如石蠟)、再吸收加速劑(例如四級鹽)及/或吸收劑(例如膨潤土、高嶺土(kaolin)或磷酸氫鈣)製得。粉末混合物可藉由用黏合劑(例如糖漿、澱粉膏糊、阿卡迪亞(acadia)黏液或纖維素或聚合物材料之溶液)潤濕並加壓穿過網篩來製粒。作為製粒之替代方案，可使粉末混合物通過錠劑機且結果係使成形不佳之團塊破碎製成顆粒。可借助添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉或礦物油對顆粒進行潤滑以防止黏至錠劑形成模具。然後將經潤滑混合物壓製成錠劑。亦可將式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與自由流動惰性賦形劑組合並直接壓製成錠劑而不經歷製粒或擊壓步驟。亦可提供由蟲膠之密封殼、糖或聚合物材料之塗層及蠟之拋光塗層組成的透明或不透明保護塗層。可向該等塗層中添加染料以區分不同單位劑量。

諸如溶液、糖漿及酏劑等口服液可製成劑量單元形式，以使給定量含有預定量之化合物。糖漿可藉由將化合物溶解於經適宜調味之水溶液中製得，而酏劑係經由使用無毒性醇媒劑製得。懸浮液可藉由將化合物分散於無毒性媒劑中調配。亦可添加增溶劑及乳化劑(諸如乙氧基化異硬脂基醇及聚氧化乙烯山梨醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(諸如薄荷油或天然甜味劑或糖精或其他人造甜味劑及諸如此類)。

用於經口投與之組合物可經設計以提供改良釋放曲線，以便維持或以其他方式控制治療活性劑之釋放。

若適當，供經口投與之劑量單位組合物可經微囊化。可藉由(例如)在聚合物、蠟或諸如此類中塗佈或包埋顆粒材料來製備組合物以延長或延緩釋放。

可將用於經鼻或吸入投與之醫藥組合物方便地調配為氣溶膠、溶液、懸浮液、凝膠或乾粉。對於適宜及/或適於吸入投與之組合物，式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽較佳呈藉由(例如)微粉化獲得之粒徑減小形式。大小減小(例如微粉化)化合物或鹽之較佳粒徑限定於D50值為約0.5微米至約10微米(例如如使用雷射繞射所量測)。

用於吸入投與之醫藥組合物可為乾粉組合物或氣溶膠調配物，該氣溶膠調配物包含活性物質於醫藥上可接受之水性或非水性溶劑中之溶液或微細懸浮液。乾粉組合物可包含粉末基質，例如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇或澱粉、式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽(較佳呈粒徑減小形式，例如呈微粉化形式)、及視情況性能改質劑(例如L-白胺酸或另一胺基酸)及/或硬脂酸之金屬鹽(例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣)。較佳地，乾粉吸入組合物包含乳糖(例如乳糖單水合物)及式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之乾粉摻合物。

在一個實施例中，適於吸入投與之乾粉組合物可納入複數個提供於藥劑包上的密封劑量容器中，該(等)藥劑包安裝於適宜吸入裝置內部。容器可一次一個地可破裂、可剝離或可以其他方式打開且乾粉組合物之劑量係藉由在吸入裝置之管口上吸入投與，如業內所知。藥劑包可採用多種不同形式，例如盤形或長形條帶。代表性吸入裝置係DISKHALER^TM吸入器裝置、DISKUS^TM吸入裝置及ELLIPTA^TM吸入裝置，其由GlaxoSmithKline銷售。DISKUS^TM吸入裝置闡述於(例如)GB 2242134A中，且ELLIPTA^TM吸入裝置闡述於(例如)WO 03/061743 A1、WO 2007/012871 A1及/或WO2007/068896中。

適於非經腸投與之醫藥組合物包括水性及非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及可使組合物與預期受體之血液等滲的溶質；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。該等組合物可以單位劑量或多劑量容器(例如，密封安瓿及小瓶)呈遞且可儲存於冷凍乾燥(凍乾)條件下，僅需在即將使用前添加無菌液體載劑(例如，注射用水)。臨時配製注射溶液及懸浮液可由無菌粉末、顆粒及錠劑製得。

適於局部投與之醫藥組合物可調配為軟膏、乳膏、懸浮液、乳液、洗液、粉劑、溶液、膏糊、凝膠、發泡體、噴霧、氣溶膠或油。該等醫藥組合物可包括習用添加劑，其包括(但不限於)防腐劑、有助於藥物滲透之溶劑、共溶劑、潤膚劑、推進劑、黏度改良劑(膠凝劑)、表面活性劑及載劑。

對於眼或其他外部組織(例如口腔及皮膚)之治療而言，組合物較佳以局部軟膏、乳膏、凝膠、噴霧或發泡體形式施加。活性成份在調配於軟膏中時可與石蠟或水混溶性軟膏基質一起使用。或者，活性成份可於乳膏中與水包油型乳膏基質或油包水型基質調配在一起。適於局部投與眼之醫藥組合物包括滴眼劑，其中活性成份溶解或懸浮於適宜載劑、尤其水性溶劑中。

式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之治療有效量將取決於多個因素，包括(例如)個體之年齡及體重、需要治療之精確病況及其嚴重程度、調配物之性質及投與途徑，且最終將由會診醫師或獸醫斷定。在醫藥組合物中，每一劑量單位可含有0.01mg至1000mg、更佳0.5mg至100mg式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，以游離鹼形式計算。在又一實施例中，每一劑量單位可含有0.5mg至50mg(例如5mg至20mg，例如5mg、10mg、15mg或20mg)式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，以游離鹼形式計算。在又一實施例中，劑量係每日一次以上(例如每日兩次)、每日一次或較不頻繁(例如每週一次或每月一次)投與。在又一實施例中，式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽係每日一次投與。在再一實施例中，式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽係每日一次以10mg之劑量投與。在再一實施例中，式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽係每日一次以20mg之劑量投與。

式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽可單獨使用或與其他治療劑組合使用。因此，本發明之組合療法包含投與至少一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及使用至少一種另一治療活性劑。式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及其他治療活性劑可以單一醫藥組合物形式一起投與或分開投與，且在分開投與時，此可同時發生或以任何次序依序發生。

在又一態樣中，提供醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽以及一或多種其他治療活性劑及視情況一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。

在又一態樣中，提供醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽以及一或多種其他治療活性劑及視情況一或多種醫藥上可接受之賦形劑。

彼等熟習此項技術者應明瞭，若適當，其他治療成份可以鹽形式、例如以鹼金屬或胺鹽形式或以酸加成鹽或鹽形式或以溶劑合物(例如水合物)形式使用，以使治療成份之活性及/或穩定性及/或物理特徵(例如溶解性)最佳化。亦應明瞭，若適當，治療成份可以光學純形式使用。

上文提及之組合可方便地以醫藥組合物形式呈遞且因此包含如上文所定義組合以及一或多種醫藥上可接受之賦形劑的醫藥組合物代表本發明之又一態樣。

實例製備 縮寫

CV 管柱體積

DCM 二氯甲烷

DMSO 二甲亞碸

g 克

h 小時

EtOAc 乙酸乙酯

HPLC 高效液相層析

L 升

LCMS 液相層析-質譜

MeOH 甲醇

min 分鐘

mg 毫克

MHz 兆赫

mL 毫升

mM 毫莫耳濃度

nm 奈米

nL 奈升

ppm 百萬份數

THF 四氫呋喃

t_RET 滯留時間

μm 微米

實驗細節 LCMS 系統A：

管柱：Acquity BEH C18(50mm×2.1mm,1.7μm)

流速：0.6mL/min

溫度：35℃

UV檢測範圍：190nm至400nm

質譜：記錄於使用交替掃描正及負模式電噴霧離子化之質譜儀上

移動相：A：水中之0.1%甲酸B：乙腈中之0.1%甲酸

系統B：

管柱：Acquity UPLC CSH C18(50mm×2.1mm,1.7μm)

流速：1mL/min

溫度：40℃

UV檢測範圍：210nm至350nm

移動相：A：水中之10mM碳酸氫銨，用氨溶液調節至pH10 B：乙腈

¹ H NMR

¹H NMR譜係於DMSO-d ₆中記錄於具有冷凍探針之Bruker AVII+600MHz上，且參照0.00ppm下之TMS。

XRPD

在PANalytical X’Pert Pro粉末繞射儀(PW3040/60型)上使用X’Celerator檢測器獲取數據。獲取條件係：輻射：Cu Kα，發生器電壓：40kV，發生器電流：45mA，起始角度：2.0° 2θ，終止角度： 40.0° 2θ，步長：0.0167° 2θ，時間/步：31.75秒。藉由將數毫克試樣放置於矽晶圓(零背景板)上從而形成粉末薄層來準備試樣。實例1(5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮)之特徵性XRPD角及d-間距記錄於表1中。每一峰分配之誤差幅度約為±0.1° 2θ。峰強度可由於較佳定向因不同試樣而不同。使用PANalytical Highscore Plus軟體來量測峰位置。

中間體製備 中間體1：1,5-二甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醛

向5-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醛(購自(例如)Matrix Scientific或Milestone Pharmtech)(50g,365mmol)於丙酮(2000mL)中之攪拌混合物中添加碳酸鉀(151g,1094mmol)，之後添加碘甲烷 (68.4mL,1094mmol)並於室溫下攪拌72h。過濾反應混合物並用丙酮(500mL)洗滌殘餘物並在減壓下蒸發濾液，從而得到黃色固體狀批料1(35g)。

如以下製備第二批料。向5-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醛(50g,365mmol)於丙酮(2000mL)中之攪拌混合物中添加碳酸鉀(151g,1094mmol)，之後添加碘甲烷(68.4mL,1094mmol)並於室溫下攪拌16h。過濾反應混合物並用DCM(2L)中之10% MeOH洗滌殘餘物並在減壓下蒸發濾液，從而得到黃色固體(65g)。藉由管柱層析使用60-120矽膠純化粗產物，將化合物於DCM中之5% MeOH下洗脫並在減壓下蒸發，從而得到淺黃色固體狀批料2(40g)。組合批料1及批料2並藉由管柱層析藉由使用60-120矽膠純化並於DCM中之5% MeOH下洗脫。在減壓下蒸發各部分以得到固體物質，將其懸浮於二乙醚(500mL)中並攪拌30min，隨後過濾並乾燥，從而得到淺黃色固體狀標題化合物(52g,44%總產率)。LCMS(系統A)：t_RET=1.15min；MH⁺ 152。

中間體2：4-溴-N-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-2-硝基苯胺

將4-溴-1-氟-2-硝基苯(購自例如Aldrich)(50g,227mmol)及1,3-二甲氧基丙-2-胺(購自例如Aldrich)(32.5g,273mmol)溶解於乙腈(300mL)中並添加碳酸鉀(47.1g,341mmol)，隨後將混合物於80℃下攪拌6h，隨後使混合物冷卻並於室溫下靜置週末。將混合物用水(500mL)稀釋且用EtOAc(2×500mL)萃取。將有機層用水(300mL)及鹽水(300mL)洗滌，乾燥並在真空中蒸發，從而產生橙色固體狀標題化合物(70g,220mmol,97%產率)。LCMS(系統B)：t_RET=1.25min；MH⁺ 319,321。

中間體3：5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

在加熱下將4-溴-N-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-2-硝基苯胺(中間體2,69g,216mmol)溶解於乙醇(400mL)中，且在冷卻時結晶出起始材料。向懸浮液中添加1,5-二甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醛(對於實例製備，參見中間體1，35.9g，238mmol)，之後添加水(200mL)及二硫亞磺酸鈉(94g,540mmol)並將混合物於90℃下加熱18h。將混合物蒸發至其初始體積之大約一半，隨後用水(200mL)稀釋並用DCM(2×300mL)萃取。將合併之有機物用鹽水洗滌，隨後乾燥並在真空中蒸發，且將所得黃色固體與EtOAc(200mL)一起研磨並藉由過濾收集固體並用醚(200mL)洗滌並在真空下乾燥，從而產生標題化合物(批料1，31g，34%產率)。LCMS(系統B)：t_RET=1.00min；MH⁺ 420,422。

在真空中蒸發濾液並將殘餘物溶解於DCM(100mL)中並裝載至750g二氧化矽管柱上，隨後用0-10% MeOH/DCM洗脫並在真空中蒸發含有產物之部分，從而產生黃色固體。將此固體溶解於EtOAc(150mL)中且隨後冷卻並靜置過夜。藉由過濾收集所得固體並用醚(2×100mL)洗滌產物，攪拌產物/醚混合物以確保良好研磨，且隨後乾燥產物，從而產生極淺黃色固體狀標題化合物(批料2，20g，47.6mmol，22%產率)。LCMS(系統B)：t_RET=1.00min；MH⁺ 420,422。

式(I)化合物之製備 實例1：5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

在氮下在圓底燒瓶中組合5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮(對於實例製備，參見中間體3，29.5g，70.2mmol)、2'-(二環己基膦基)-N,N-二甲基-[1,1'-聯苯]-2-胺(購自(例如)Aldrich)(1.381g,3.51mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(購自(例如)Aldrich)(1.285g,1.404mmol)、嗎啉(12.23mL,140mmol)及2-甲基四氫呋喃(購自(例如)Aldrich)(150mL)，隨後添加第三丁醇鈉(2M，於THF中，105mL，211mmol)並將混合物於80℃下加熱2h。將反應混合物用鹽水(200mL)稀釋並用EtOAc(2×200mL)萃取。將合併之有機物乾燥並在真空中蒸發，從而產生褐色膠，隨後將其與EtOAc(200mL)一起研磨且隨後用醚(100mL)稀釋，從而產生米色微細沈澱。藉由過濾收集此沈澱並用醚洗滌，從而產生標題化合物(批料1，21.2g，71%產率)。LCMS(系統B)：t_RET=0.80min；MH⁺ 427。

在真空中蒸發濾液，從而產生褐色膠。將此膠溶解於DCM(30mL)中並裝載於340g二氧化矽管柱上，隨後用0-10% MeOH/DCM洗脫並在真空中蒸發含有產物之部分。將所得固體與醚(100mL)一起研磨並藉由過濾收集，從而產生標題化合物(批料2,6.5g,22%產率)。LCMS(系統B)：t_RET=0.80min；MH⁺ 427。

在氮下在圓底燒瓶中組合5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮(中間體3，33.2g，79mmol)、2'-(二環己基膦基)-N,N-二甲基-[1,1'-聯苯]-2-胺(Aldrich)(1.554g,3.95mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(購自(例如)Aldrich)(1.447g,1.580mmol)、嗎啉(13.76mL,158mmol)及2-甲基四氫呋喃(150mL)，隨後添加第三丁醇鈉(2M，於THF中，118mL，237mmol)並將混合物於80℃下加熱2h。將反應混合物用鹽水(200mL)稀釋並用EtOAc(2×200mL)萃取。將合併之有機物乾燥並在真空中蒸發，從而產生褐色膠，隨後將其與EtOAc(200mL)一起研磨且隨後用醚(100mL)稀釋，從而產生米色微細沈澱。藉由過濾收集此沈澱並用醚洗滌，從而產生標題化合物(批料3，31.4g，93%產率)。LCMS(系統B)：t_RET=0.80min；MH⁺ 427。

在氮下在圓底燒瓶中組合5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮(中間體3，20g，47.6mmol)、2'-(二環己基膦基)-N,N-二甲基-[1,1'-聯苯]-2-胺(Aldrich)(0.936g,2.379mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(購自(例如)Aldrich)(0.871g,0.952mmol)、嗎啉(8.29mL,95mmol)及2-甲基四氫呋喃(購自(例如)Aldrich)(150mL)，隨後添加第三丁醇鈉(2M，於THF中，71.4mL，143mmol)並將混合物於80℃下加熱2h。將反應混合物用鹽水(200mL)稀釋並用EtOAc(2×300mL)萃取。將合併之有機物乾燥並在真空中蒸發，從而產生褐色膠。將此膠與批料1、2及3組合並溶解於DCM(200mL)中，隨後裝載至750g二氧化矽管柱上並用EtOAc(5 CV)、隨後0-25% EtOH/EtOAc(20 CV)之梯度洗脫。在真空中蒸發含有產物之部分，從而產生淺黃色固體。將此固體溶解於DCM(500mL)中並添加Silicycle硫脲二氧化矽樹脂(40g)，隨後將混合物於室溫下攪拌1h。過濾懸浮液並在真空中蒸發濾液，隨後將所得泡沫狀物與醚(300mL)一起研磨且藉由過濾收集所得固體，從而產生(60g)淺黃色固體。將此固體懸浮於EtOAc(400mL)中並在攪拌下加熱回流1h，隨後使混合物冷卻2h，隨後使用冰浴進一步冷卻並攪拌1h。過濾懸浮液並將固體用醚(200mL)洗滌，從而產生幾乎無色之固體狀標題化合物(49.8g，59%總產率)。LCMS(系統B)：t_RET=0.81min；MH⁺ 427。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ：8.00(d,J=2.5Hz,1H),7.65(m,1H),7.63(d,J=9.0Hz,1H),7.10(d,J=2.5Hz,1H),6.96(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),4.77(tt,J=9.0,4.5Hz,1H),3.97(dd,J=10.5,9.0Hz,2H),3.76-3.78(m, 4H),3.75(dd,J=10.5,4.5Hz,2H),3.53(s,3H),3.16(s,6H),3.07-3.10(m,4H),2.08(s,3H)。

生物數據 時間解析螢光共振能量傳遞(TR-FRET)分析

使用時間解析螢光共振能量傳遞結合分析評價結合。此利用蛋白質之N末端處之6 His純化標籤作為經銪螯合物(PerkinElmer AD0111)標記之抗6 His抗體之表位，從而容許銪結合至用作供體螢光團之蛋白質。溴結構域BRD2、BRD3、BRD4及BRDT之小分子高親和力黏合劑經Alexa Fluor647(參考化合物X)標記且此用作FRET對中之受體。

參考化合物X：4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮呯-4-基)乙醯胺基)戊基)胺基)-6-側氧基己基)-2-((2E,4E)-5-(3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺丁基)-3H-吲哚-1-鎓-2-基)戊-2,4-二烯-1-亞基)-3-甲基-5-磺基吲哚啉-1-基)丁烷-1-磺酸鹽)

向N-(5-胺基戊基)-2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮呯-4-基)乙醯胺(對於製備，參見參考化合物J，WO2011/054848A1，1.7mg，3.53μmol)於DMF(40μl)中之溶液中添加AlexaFluor647-ONSu(2.16mg,1.966μmol)亦於DMF(100μ1)中之溶液。將混合物用DIPEA(1μl,5.73μmol)鹼化並在渦旋混合器上攪動過夜。將反應混合物蒸發至乾燥。將固體溶解於乙腈/水/乙酸(5/4/1,<1ml)中，過濾並施加至Phenomenex Jupiter C18製備型管柱並用以下梯度洗脫：(A=水中之0.1%三氟乙酸，B=0.1% TFA/90%乙腈/10%水)：流速=10ml/min.，AU=20/10(214nm)：5-35%,t=0min：B=5%；t=10min：B=5%；t=100min：B=35%；t=115min：B=100%(Sep.梯度：0.33%/min)

在範圍26-28%B內洗脫主要組份，但似乎由兩個峰組成。藉由分析型HPLC(Spherisorb ODS2，經60min 1%至35%)分析應含有「兩個」組份之中間部分(F1.26)：於28%B下洗脫單一組份。

合併部分F1.25/26及27並蒸發至乾燥。利用DMF轉移，蒸發至乾燥，與無水醚一起研磨且於<0.2毫巴下將藍色固體乾燥過夜：1.54mg。

分析型HPLC(Sphersisorb ODS2，經60min 1%至35%B)：MSM10520-1：[M+H]⁺(觀察值)：661.8/-，此與M-29一致。此對於1320.984的計算質量而言相當於[(M+2H)/2]⁺，其係M-29。此係利用Alexa Fluor 647染料之標準事件且代表在質譜儀之條件下兩個亞甲基之理論損失。

分析原理：在不存在競爭化合物下，銪之激發引起供體於λ618nm下發射，其激發Alexa標記之溴結構域結合化合物，從而產生於λ647nM下可量測之增加能量傳遞。在可結合該等蛋白質之足夠濃度之化合物存在下，相互作用受破壞，從而導致螢光共振能量傳遞之可量化下降。

使用突變蛋白質評價式(I)化合物與溴結構域BRD2、BRD3、BRD4及BRDT之結合以檢測與溴結構域上之結合結構域1(BD1)或結合結構域2(BD2)之差示結合。乙醯基離胺酸結合袋之該等單一殘基突變大大降低氟配體(參考化合物X)對突變結構域之親和力(對於非突變結構域>1000倍選擇性)。因此，在最終分析條件下，不可檢測氟配體與突變結構域之結合且隨後分析適於測定化合物與單一非突變溴結構域之結合。

蛋白質產生：使重組人類溴結構域[(BRD2(1-473)(Y113A)及(Y386A)、BRD3(1-435)(Y73A)及(Y348A)BRD4(1-477)(Y97A)及(Y390A)及BRDT(1-397)(Y66A)及(Y309A)]在N末端具有6-His標籤之大腸桿菌細胞中(對於BRD2/3/4在pET15b載體中且對於BRDT在pET28a載體中)表現。將His標記之溴結構域丸粒重新懸浮於50mM HEPES(pH7.5)、300mM NaCl、10mM咪唑及1μl/ml蛋白酶抑制劑混合劑中並使用超音波處理自大腸桿菌細胞萃取並使用鎳瓊脂糖高性能管柱純化，洗滌蛋白質且隨後用具有緩衝劑50mM HEPES(pH7.5)、150mM NaCl、500mM咪唑之0-500mM咪唑之線性梯度經20個管柱體積洗脫。藉由Superdex 200製備級尺寸排除管柱完成最終純化。將純化蛋白質於-80℃下儲存於20mM HEPES pH 7.5及100mM NaCl中。藉由肽質量指紋分析確認蛋白質身份並藉由質譜確認預測之分子量。

溴結構域BRD2、3、4及T、BD1+BD2突變體分析之方案：將所有分析組份溶解於50mM HEPES pH7.4、150mM NaCl、5%甘油、1mM DTT及1mM CHAPS之緩衝液組合物中。溴結構域蛋白質之最終濃度係10nM且Alexa Fluor647配體係於Kd下。預先混合該等組份並向Greiner 384孔黑色低體積微量滴定板中之含有50nl不同濃度之測試化合物或DMSO媒劑(最終為0.5% DMSO)的所有孔中添加5μl此反應混合物並於rt下在黑暗中培育30分鐘。向所有孔中添加5μl含有1.5nM最終濃度之抗6His銪螯合物之檢測混合物且進一步黑暗培育至少30分鐘。隨後在Envision板讀數器上對板進行讀數(λex=317nm，供體λem=615nm；受體λem=665nm；Dichroic LANCE雙重)。於兩個發射波長下進行時間解析螢光強度量測並計算受體/供體之比並用於數據分析。所有數據經正規化至在每一板上平均具有16個高對照孔(抑制劑對照-WO 2011/054846A1之實例11)及16個低(DMSO)對照孔。隨後應用以下形式之四參數曲線擬合：y=a+((b-a)/(1+(10^x/10^c)^d)

其中「a」係最小值，「b」係希爾斜率(Hill s1ope)，「c」係pIC₅₀且「d」係最大值。

結果：發現實例1在BRD4 BD1分析中具有7.9之平均pIC₅₀(n=21)且在BRD4 BD2分析中具有6.6之平均pIC₅₀(n=23)。發現實例1在BRD2 BD1分析中具有7.6之平均pIC₅₀(n=4)且在BRD2 BD2分析中具有6.3之平均pIC₅₀(n=4)。發現實例1在BRD3 BD1分析中具有7.9之平均pIC₅₀(n=4)且在BRD3 BD2分析中具有7.0之平均pIC₅₀(n=4)。發現實例1在BRDT BD1分析中具有6.9之平均pIC₅₀(n=8)且在BRDT BD2分析中具有6.1之平均pIC₅₀(n=8)。

LPS誘導之自人類全血之MCP-1產生的量測

藉由類鐸受體之激動劑(例如細菌脂多糖(LPS))之單核細胞之活化可產生關鍵發炎介體(包括MCP-1)。廣泛認為該等途徑對大量自體免疫及發炎病症之病理生理至關重要。

將血液採集於含有肝素鈉(Leo Pharmaceuticals)之管中(10單位肝素/mL血液)。製備含有0.5μL於100% DMSO中之測試試樣(化合物)的96孔化合物板(由於供體可變性，兩個重複)。將130μL全血分配至96孔化合物板之每一孔中並於37℃、5% CO₂下培育30min。向化合物板之每一孔中添加10μL於PBS中製得之脂多糖(來自傷寒沙門桿菌(Salmonella typhosa)；L6386)(200ng/mL最終分析濃度)。隨後於37℃、5% CO₂下將板放置於加濕原代細胞培育箱中放置18-24小時。向含有血液之化合物板之所有孔中添加140μL PBS。隨後將板密封並以2500rpm(r.t)離心10min。將20μL細胞上清液放置於經人類MCP-1捕獲抗體預塗佈之96孔MSD板中。將板密封並在600rpm下之振盪器上放置1.5小時(r.t)。向MSD板之每一孔中添加20μL經MSD SULFO-TAG^TM試劑標記之抗人類MCP-1抗體(將50X儲積液用稀釋劑100以1：50稀釋，最終分析濃度係1μg/mL)。隨後將板重新密封並振盪1小時(r.t)，之後用PBS Tween 0.05%洗滌3次。隨後向每一孔中添加150μL 2X MSD讀取緩衝液T(將儲存液4X MSD讀取緩衝液T用去離子水50：50稀釋)且在MSD Sector成像儀6000上對板進行讀數。自數據生成每一化合物之濃度反應曲線且計算IC₅₀值。

結果：發現實例1具有7.6之平均pIC₅₀(n=12)，此展示實例1抑制關鍵發炎介體MCP-1之產生。

LPS誘導之自人類全血之IL-6產生的量測

藉由類鐸受體之激動劑(例如細菌脂多糖(LPS))之單核細胞之活化可產生關鍵發炎介體(包括IL-6)。廣泛認為該等途徑對大量自體免疫及發炎病症之病理生理至關重要。

將血液採集於含有肝素鈉(Leo Pharmaceuticals)之管中(10單位肝素/mL血液)。製備含有1μL於100% DMSO中之測試試樣(化合物)的96孔化合物板(由於供體可變性兩個重複)。將130μL全血分配至96孔化合物板之每一孔中並於37℃、5% CO₂下培育30min。向化合物板之每一孔中添加10μL於具有1% BSA之PBS中製得之脂多糖(來自傷寒沙門桿菌；L6386)(200ng/mL最終分析濃度)。隨後於37℃、5% CO₂下將板放置於加濕原代細胞培育箱中放置22小時(+/- 2hr)。向含有血液之化合物板之所有孔中添加140μL PBS且將板密封並在板振盪器上以600rpm振盪2分鐘。。隨後將板以2500rpm(r.t)離心10min。使用Bomec NX機器人移出100μL細胞上清液。在板振盪器(600rpm r.t)上將經人類IL-6捕獲抗體預塗佈之MSD板用MSD稀釋劑2封阻30分鐘。將上清液在PBS中以1：40稀釋並向96孔MSD IL-6板中添加25ul。將板密封並在600rpm下之振盪器上放置1.5小時(r.t)。向MSD板之每一孔中添加20μL經MSD SULFO-TAG^TM試劑標記之抗人類IL-6抗體(將50X儲存液用稀釋劑3以1：50稀釋，最終分析濃度係1μg/mL)。隨後將板重新密封並振盪1小時(r.t)，之後用PBS Tween 0.05%洗滌3次。隨後向每一孔中添加150μL 2X MSD讀取緩衝液T(將儲存液4X MSD讀取緩衝液T用去離子水50：50稀釋)且在MSD Sector成像儀6000上對板進行讀數。自數據生成每一化合物之濃度反應曲線且計算IC₅₀值。

結果：發現實例1具有7.7之平均pIC₅₀(n=6)，此展示實例1抑制關鍵發炎介體IL-6之產生。

溶解性

化合物於水性緩衝液及生理培養基中之溶解性係重要的可研發性考慮因素。在多種眾所周知之相關培養基中於0.5h、4h及24h時間點時測試實例1且其展現高溶解性，即在所有研究條件下溶解性>0.82mg/mL(表2)。

安氏測試

安氏測試係用於評價特定化合物之誘變潛能之廣泛使用且眾所周知之生物分析。因此，其係用於評估化合物之致癌性潛能之簡單確立技術。分析中之陽性測試指示化合物可誘變且因此可用作致癌物。因此，陰性測試係欲選擇用於進一步發展為潛在療法之化合物所需的性質之一。發現實例1(以50、150、500、1500、2500及5000μg/mL之濃度測試)在S9-mix(購自(例如)Moltox)存在及不存在下對沙門桿菌屬之四個菌株(沙門氏鼠傷寒桿菌TA1535、TA1537、TA98、TA100)及大腸桿菌之一個菌株(大腸桿菌WP2uvrA(pKM101))呈安氏陰性。

選擇性

實例1相對於除BET家族外之其他已知含溴結構域之蛋白質具有選擇性。藉由BROMOScan^TM(DiscoverX^TM)評估選擇性。BROMOScan^TM係基於KINOMEscan^TM技術且係穩健且高度靈敏性定量結合平臺，其可施用至選擇性剖析以幫助鑑別有效之選擇性小分子溴結構域抑制劑。

分析方法

1.組合分析組份

˙大腸桿菌表現之經DNA標籤標記之溴結構域用於qPCR讀出

˙固定於固體載體上之已知結合配體

˙測試化合物或溶劑對照

2.平衡

3.洗滌固體載體以移除未結合溴結構域

4.定量捕獲於固體載體上之溴結構域(qPCR)

5.比較測試化合物及溶劑對照試樣中之所捕獲溴結構域含量

分析原理

結合溴結構域活性位點且直接(空間上)或間接(別位上)防止溴結構域結合至固定配體之化合物將減少捕獲於固體載體上之蛋白質之量(組A及B)。相反，不結合溴結構域之測試分子對捕獲於固體載體上之溴結構域無效應(組C)。藉由使用檢測相關DNA標記之定量、精確且超靈敏qPCR方法藉由量測測試對對照試樣中捕獲之溴結構域之量鑑別篩選「擊中物(hit)」。以相似方式，藉由量測固體載體上捕獲之隨測試化合物濃度變化之溴結構域之量計算測試化合物之解離常數(Kd)-溴結構域相互作用。KINOMEscan ^TM及BROMOscan ^TM使用相同分析技術。對於此分析技術之詳細說明，參見Fabian,M.A.等人A small molecule-kinase interaction map for clinical kinase inhibitors.Nat.Biotechnol. 23,329-336(2005)。

結果：實例1顯示相對於所評估含有所有溴結構域之蛋白質具有選擇性(ATAD2A、ATAD2B、BAZ2A、BAZ2B、BRD1、BRD2(1)、BRD2(2)、BRD3(1)、BRD3(2)、BRD4(1)、BRD4(2)、BRD7、BRD8(1)、BRD8(2)、BRD9、BRDT(1)、BRDT(2)、BRPF1、BRPF3、CECR2、CREBBP、EP300、FALZ、GCN5L2、PBRM1(2)、PBRM1(5)、PCAF、SMARCA2、SMARCA4、TAF1(2)、TAF1L(2)、 TRIM24(PHD,Bromo.)、TRIM33(PHD,Bromo.)及WDR9(2))。實例1相對於所測試含有所有溴結構域之蛋白質具有3150倍選擇性，只是CREBBP(19倍)及EP300(25倍)除外。此外，實例1相對於CECR2具有4000倍選擇性且相對於TAF1 BD2具有10000倍選擇性。

脂多糖(LPS)誘導之介白素-6(IL-6)產生小鼠分析

分析實例1抑制小鼠中脂多糖(LPS)誘導之介白素-6(IL-6)產生的能力。雄性CD1小鼠(Charles River Laboratories，5隻/組)在經口投與化合物(於1%(w/v)甲基纖維素中，aq 400)後接受LPS(100μg/kg，L3192大腸桿菌0127：B8)靜脈內攻擊0.5小時。在LPS投與後直至3小時經由尾部靜脈或在5小時經由心臟穿刺(終末試樣)採集連續血樣且將自血樣收穫之血清於-80℃下冷凍。在分析當天，將血清解凍至室溫，用分析稀釋劑1：50稀釋且使用來自Meso Scale Discovery(MSD,Gaithersburg,Maryland)之單點細胞介素分析板(K152QXD)量測IL-6之含量。根據製造商之方案(MSD)檢測IL-6之含量且在SECTOR成像儀6000(MSD)上讀數。使用6.3版WinNonlin Phoenix生成平均IL-6 Cmax及AUC_0-t值且計算與相應媒劑處理組相比用化合物處理後之平均Cmax及AUC_0-t IL-6減少%。藉由方差分析(ANOVA)、之後使用5.04版Graphpad Prism(Graphpad軟體，San Diego,CA)進行Dunnett多重比較t-測試計算顯著性水準。統計學差異測定為*P<0.05，**P<0.01。結果示於表3中。

三硝基苯酚-鑰孔帽貝血藍蛋白(TNP-KLH)誘導之免疫球蛋白-1(IgG1)產生小鼠分析

分析實例1抑制小鼠中三硝基苯酚-鑰孔帽貝血藍蛋白(TNP-KLH)誘導之免疫球蛋白-1(IgG1)產生的能力。雄性CD1小鼠(Charles River Laboratories，8隻/組)在14天投藥時段中每天一次(QD)或每24小時一次(QOD)接受化合物(於1%(w/v)甲基纖維素中，aq 400)之單一經口投與。在研究第1天，在經口投與化合物後0.5小時，每一小鼠接受TNP-KLH(100ug/kg，T-5060-25，批號021562-06)之單一濃注腹膜內(ip)投與。在第1、4、7、9及11天經由尾部靜脈或在第14天經由心臟穿刺(終末試樣)在經口化合物投與後0.5小時採集連續血樣且將自血樣收穫之血清於-80℃下冷凍。在分析當天，將血清解凍至室溫且使用TNP ELISA(內部研發)量測IgG1之含量並在SpectraMax 190分光光度計(Molecular Devices,CA)上讀數。生成平均IgG1值且計算與相應媒劑處理組相比用化合物處理後第14天之平均IgG1減少%。藉由方差分析(ANOVA)、之後使用5.04版Graphpad Prism(Graphpad軟體，San Diego,CA)進行Dunnett多重比較t-測試計算顯著性水準。統計學差異測定為**P<0.01。結果示於表4中。

活體外代謝穩定性

對於每一物種(CD-1小鼠、Wistar Han大鼠、Beagle狗及人類；由BioreclamationIVT供應)在彙集之冷凍保藏之原代肝細胞中測定實例1(0.5μM)之活體外代謝穩定性。對於每一物種(CD-1小鼠、Han Wistar大鼠、Beagle狗及人類；由BioreclamationIVT供應)在彙集之冷凍保藏之原代肝細胞中測定實例1(0.5μM)之代謝穩定性。在使用之前將冷凍保藏之肝細胞儲存於液氮中。

於37℃下預培育補充有2mML-麩醯胺酸及25mM HEPES之WilliamsE培養基(Sigma Aldrich)及測試化合物(最終基質濃度為3μM；最終DMSO濃度為0.25%)，之後添加冷凍保藏之肝細胞之懸浮液(於補充有2mM L-麩醯胺酸及25mM HEPES之Williams E培養基中最終細胞密度0.5×10⁶個活細胞/mL)以起始反應。最終培育體積係500μL。對於每一物種包括兩種對照化合物。於適當時間點藉由將50μL培育物轉移至100μL含有甲醇之內標準品停止反應。將終止板於4℃下以2500rpm離心30min以使蛋白質沈澱。在蛋白質沈澱後，將試樣上清液在至多4種化合物之盒中組合且使用Cyprotex泛型LC-MS/MS條件進行分析。兩種陽性對照化合物之數據經測定在接受範圍內，從而使得分析能夠滿足Cyprotex驗收準則。藉由峰面積比對時間之非線性回歸分析使用Excel中之LINEST功能以測定一階消除速率常數(k)來計算固有清除率，隨後自該一階消除速率常數衍生半衰期(t_1/2；分鐘)、固有清除率(mL/min/g肝)及成比例之固有清除率(成比例之CLint；mL/min/kg)。為使肝細胞清除率成比例，使用人類、大鼠及小鼠中1.2×10⁸個細胞/克肝及狗中1.7×10⁸個細胞/克肝之肝細胞產率。

結果：在NADPH存在下，實例1在小鼠、大鼠、狗及人類肝細胞中係代謝穩定的(低於量化之分析下限)，此指示在各物種中之低轉換(表5)。

在臨床前物種中評估實例1之藥物動力學

所有動物研究皆經倫理審核且根據Animals(Scientific Procedures)Act 1986及GSK Policy on the Care,Welfare and Treatment of Laboratory Animals實施。對於所有研究，溫度及濕度分別標稱維持於21℃±2℃及55%±10%下。對於靜脈內投與，將實例1以0.2mg/mL(大鼠)及0.1mg/mL(狗)之濃度調配於DMSO以及鹽水中之10%(w/v)Kleptose^TM(2：98)中。使用約0.2μm注射器過濾器單元過濾劑量。實例1係以1h iv輸注形式以5mL/kg/h投與以分別在大鼠及狗中達成1mg/kg及0.5mg/kg之靶劑量。對於經口投與，將實例1以0.6mg/mL(小鼠及大鼠)及0.3mg/mL(狗)之濃度調配於1%(w/v)甲基纖維素(400cp)(水性)中。實例1係以5mL/kg投與以達成3mg/kg(小鼠及大鼠)及1.5mg/kg(狗)之靶劑量。齧齒類動物之飲食係5LF2 Eurodent飲食14%(PMI Labdiet,Richmond,Indiana)且對於狗係Harlan Teklad 2021C(HarlanTeklad,Madison,WI)。飲食或水中無可干擾研究結果之濃度之已知雜質。

大鼠藥物動力學研究

在麻醉下於GSK處手術製備雄性Wistar Han大鼠(247-271g，由Charles River UK有限公司供應)，在股靜脈(對於藥物投與)及頸靜脈(對於血液取樣)中具有植入套管。每一大鼠分別接受杜芙西林(Duphacillin)(100mg/kg s.c.)及卡洛芬(Carprofen)(7.5mg/kg s.c.)作為術前抗生素及鎮痛藥。在投藥之前使每一大鼠自手術恢復至少2天。大鼠始終可自由獲得食物及水。在3個投藥場合中執行大鼠PK研究作為交叉設計，其中劑量投與之間最小4天。在投藥第1天，n=3雄性大鼠各自接受測試化合物之1h靜脈內輸注。在投藥第2天，相同的三隻大鼠各自接受測試化合物之經口投與，該測試化合物以0.6mg/mL之濃度懸浮於1%(w/v)水性甲基纖維素中且以5mL/kg藉由管飼投與以達成3mg/kg之目標劑量。在投藥第3天，相同的三隻大鼠各自接受測試化合物之經口投與，該測試化合物以6.0mg/mL之濃度懸浮於1%(w/v)水性甲基纖維素中且以5mL/kg藉由管飼投與以達成30mg/kg之目標劑量。在劑量投與後，在投藥開始後直至26h經由頸靜脈套管採集連續血樣(約60μL)。

狗藥物動力學研究

在每一劑量投與之前使一隻健康之實驗室飼養之雄性Beagle狗(12.71kg，由Harlan Laboratories,UK供應)禁食過夜且在投藥開始後約4h餵養。狗始終可自由獲得水。在兩個投藥場合執行狗研究作為交叉設計，其中劑量投與之間間隔6天。在投藥第1天，n=1隻雄性狗經由隱靜脈之暫時套管插入接受實例1之1h靜脈內輸注。在投藥第2天，同一狗接受實例1之經口投與，該實例1以0.3mg/mL之濃度懸浮於1%(w/v)水性甲基纖維素中且以5mL/kg藉由管飼投與以達成1.5mg/kg之靶劑量。將臨時套管插入頭部靜脈中，自投藥前直至投藥開始後2h自該頭部靜脈採集連續血樣(約150μL)。2h後，取試樣，經由頸靜脈之直接靜脈穿刺取剩餘試樣。

小鼠藥物動力學研究

使用三隻雄性CD1小鼠(26.3-28.9g，由Charles River UK有限公司供應)。每一小鼠接受實例1之經口投與，該實例1以0.6mg/mL之濃度懸浮於1%(w/v)水性甲基纖維素400中且以5mL/kg藉由管飼投與以達成3mg/kg之靶劑量。在劑量投與後，在投藥開始後直至24h經由尾部靜脈之直接靜脈穿刺採集連續血樣(約20μL)。

對於所有PK研究，在適當時程中在投與後將連續血樣採集至含有EDTA鉀作為抗凝劑(大鼠及狗)之管中並次等分至微電子管中或直接採集至微電子管(小鼠)中。隨後用相等體積之純化水稀釋等份血樣。在藉由LC-MS/MS分析之前於-20℃下儲存試樣。

血樣分析

使用具有300μL含乙腈之分析內標準品之蛋白質沈澱萃取稀釋血樣。藉由使用熱輔助電噴射界面以正離子模式反相LC MS/MS分析上清液之等份試樣。針對對照血液中製備之校正標準品分析試樣且分析滿足室內良好科學實踐驗收準則。

大鼠及狗尿液試樣分析

將尿液試樣(大鼠：25μL，狗：50μL)與相等體積之50：50乙腈：水混合，之後與300μL含乙腈之分析內標準品混合。針對對照尿液中製備之校正標準品分析試樣且分析滿足室內良好科學實踐驗收準則。

自藥物動力學研究之藥物動力學數據分析

藥物動力學參數係自血液濃度時間曲線使用利用WinNonlin Phoenix 6.3(Pharsight,Mountain View,CA)之非分室分析來獲得。外推AUCt-∞值係AUC∞之10%。

結果：在雄性CD-1小鼠、雄性Wistar Han大鼠及雄性Beagle狗中在靜脈內(iv輸注)及/或經口投與實例1後評價實例1之藥物動力學。在iv投與後，實例1在大鼠及狗中具有低總血液清除率(分別18mL/min/kg及2mL/min/kg)及中等分佈體積(分別2.3L/kg及0.9L/kg)。在大鼠及狗二者中觀察實例1之腎清除率，其中27%及26%之投與劑量分別回收為尿液中之母體藥物。計算終末半衰期分別在大鼠及狗中於3.8h及5.3h下中等。在以懸浮液形式向大鼠及狗中經口投與實例1 後，吸收快速，且Tmax為0.5-1h，在大鼠(3mg/kg)中伴有95%之高經口生物利用度且在狗(1.5mg/kg)中為101%。在大鼠中以30mg/kg經口投與引起暴露增加及93%之高生物利用度。在以懸浮液形式以3mg/kg向小鼠經口投與實例1後，觀察全身暴露，且於相同劑量量(3mg/kg)下曲線下面積(AUC)類似於大鼠中所觀察者。

Claims

一種式(I)化合物，其係5-[1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-5-(嗎啉-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]-1,3-二甲基-1,2-二氫吡啶-2-酮，其具有式(I)：或其鹽。
如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1之化合物，其呈游離鹼形式。
如請求項3之化合物，其呈結晶固態形式，其中X射線粉末繞射圖案具有於8.2、8.6、11.0、12.5、13.0、14.0、16.3、17.1、18.5、22.0、23.7及26.7之2θ值(±0.10° 2θ實驗誤差)下之繞射峰。
如請求項2至4中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。
如請求項2至4中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療適用BET抑制劑之疾病或病況。
如請求項6供使用之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該疾病或病況係自體免疫及/或發炎性疾病。
如請求項6供使用之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該疾病或病況係類風濕性關節炎。
一種醫藥組合物，其包含如請求項2至4中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之賦形劑。
如請求項9之醫藥組合物，其進一步包含一或多種其他治療活性劑。
一種如請求項2至4中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療適用BET抑制劑之疾病或病況的藥劑。
如請求項11之用途，其中適用BET抑制劑之該疾病或病況係自體免疫及/或發炎性疾病。
如請求項11之用途，其中適用BET抑制劑之該疾病或病況係類風濕性關節炎。
一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療自體免疫及/或發炎性疾病之藥劑。
如請求項14之用途，其中該疾病係類風濕性關節炎。