TW201702257A - 新穎之化合物與含此新穎化合物之奧特阿羅刺盤孢菌的發酵產物、含其之醫藥組成物與保健食品、其用途以及新穎之奧特阿羅刺盤孢菌 - Google Patents

新穎之化合物與含此新穎化合物之奧特阿羅刺盤孢菌的發酵產物、含其之醫藥組成物與保健食品、其用途以及新穎之奧特阿羅刺盤孢菌 Download PDF

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Abstract

本發明提供一種式(I)化合物或其鹽， □ 其中，R1為一糖基或氫，R2為一取代或未經取代之C1-C10烷基，而R3與R4係獨立地擇自由下列所組成之群組：氫、鹵素與一取代或未經取代之C1-C10烷基。

Description

新穎之化合物與含此新穎化合物之奧特阿羅刺盤孢 菌的發酵產物、含其之醫藥組成物與保健食品、其用途以及新穎之奧特阿羅刺盤孢菌
本發明係關於一種新穎之化合物，且特別關於一種具免疫調節功效之新穎化合物。又，本發明係關於一種奧特阿羅刺盤孢菌(Colletotrichum aotearoa)之醱酵產物，其含有上述新穎化合物。
內生菌(endophyte)是一類生長於植物組織內，不具有明顯生活週期，也不使宿主植物表現出明顯感染症状的微生物。內生菌植物微生態系統是自然界組成的一重要部分。在過去20年，約有一半的藥物來源於天然產物或天然的先導化合物(lead compound)，因此從天然物中篩選生物活性成分是發展新藥的有效途徑之一。
在越來越多有關內生菌的研究報導中發現，內生菌種類及數量龐大，分布的宿主植物也涵蓋廣泛，其代謝途徑及二次代謝產物也會因宿主植物或微生物所處環境的不同，而有豐富 的多樣性，這也成為天然藥物研究豐富的潛在資源。
目前有關內生菌藥用活性物質的報導包括了，在1993年由Stierle等人首次從太平洋紫杉(Taxus brevifolia)靭皮部分離出內生菌(Taxomyces andreanae)，其二次代謝產物含有紫杉醇和紫杉烷類化合物，而紫杉醇(taxol)也已廣泛被報導對於卵巢癌、乳癌等一些癌症有其療效；在抗生素方面，Li等人從三尖杉、南方紅豆杉和香榧中分離到一些內生真菌能產生一種或多種植物病原真菌的抑制劑；在抗降血糖方面，Zhang和Salituro從非洲剛果熱帶植物分離得到的內生菌(Pseudomassaria sp.)所產之二次代謝產物中分離出一種似胰島素的小分子化合物，在大鼠模型口服實驗中，能明顯降低血糖濃度。
發炎為人體正常防禦反應，以對抗外來病原菌之保護機制。當急性發炎反應產生，會活化巨噬細胞，嗜中性細胞與內皮細胞，並釋放大量發炎介質而發生局部和全身性作用，而受到內毒素刺激的巨嗜細胞(macrophage)，可產生IL-1、IL-6、TNF-α、TNF-γ、NO、CP-10及PGE2等細胞激素與化學激素(chemokines)，並具有吞噬能力(phagocytosis)，而這些激素在發炎中扮演極重要角色。其中包括IL-1β、IL-6、TNF-α為促發發炎細胞激素(pro-inflammatory cytokine)，而PGE2及白三烯(leukotriene)為脂質媒介物與發炎造成的發燒和血壓降低有關。
而NO是由一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)產生，而NOS具有三類異構酶存在人體中，分別表現在神經、內皮、巨噬三種細胞中，其中iNOS(inducible NOS)為存在多種細胞中並可被誘導大量表現的酶，當巨嗜細胞被活化時可引發 大量iNOS的表現，因而產生大量NO，達到對外來病原之傷害，當這些激素適量表現時，可促進免疫反應，減低感染的擴大。反之，過量或持續生成可能會造成組織傷害，因此抗發炎藥物逐漸引起重視。
故，目前亟需一種獲自天然產物的免疫調節組成物。
本發明提供一種式(I)化合物或其鹽， 其中，R1為一糖基或氫，R2為一取代或未經取代之C1-C10烷基，而R3與R4係獨立地擇自由下列所組成之群組：氫、鹵素與一取代或未經取代之C1-C10烷基。
本發明也提供一種免疫調節醫藥組成物或保健食品，包括：前述之式(I)化合物或其鹽；以及一藥學上可接受之載體或鹽類，其中該免疫調節醫藥組成物或保健食品具有一免疫調節之功效。
本發明還提供一種前述之式(I)化合物或其鹽用於製備免疫調節藥物或保健食品之用途。
本發明另提供一種奧特阿羅刺盤孢菌 (Colletotrichum aotearoa)之醱酵產物，其中該奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物的形成方法，包括：將該奧特阿羅刺盤孢菌以一培養基進行一醱酵培養，以形成一醱酵液，其中於該培養基成分包括，包括：玉米澱粉；玉米浸液(corn steep liquor)；酵母萃取物；以及海鹽。
本發明更提供另一種免疫調節醫藥組成物或保健食品，包括：前述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物；以及一藥學上可接受之載體或鹽類，其中該免疫調節醫藥組成物或保健食品具有一免疫調節之功效。
本發明還提供一種前述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物用於製備免疫調節藥物或保健食品之用途。
又，本發明也提供一種新穎之奧特阿羅刺盤孢菌，其於在2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)，寄存編號為BCRC 930177。
為了讓本發明之上述和其他目的、特徵、和優點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例，並配合所附圖示，作詳細說明如下：
第1圖顯示本發明一實施例之化合物1的HMBCs(H→C),COSY(粗體線)與NOESY(HH)的二維關聯性。
在本發明之第一實施態樣中，本發明提供一種新穎 之化合物或其鹽。
上述之新穎化合物具有如式(I)所示之分子式：
於式(I)中，R1可包括一糖基或氫，但不限於此，又R2可包括，但不限於一取代或未經取代之C1-C10烷基，而R3與R4則可獨立地包括氫、鹵素、一取代或未經取代之C1-C10烷基，但不限於此。
在一實施例中，於上述式(I)之化合物中，R1可為一糖基。上述糖基的例子可包括，鼠李糖基(rhamnosyl)、異鼠李糖基(quinovosyl)、海藻糖基(fucosyl)等，但不限於此。在一特定實施例中，於上述式(I)之化合物中，R1可為鼠李糖基，且上述鼠李糖基可為α鼠李糖基。
又，在一實施例中，於上述式(I)之化合物中，R2可為取代或未經取代之C1-C10烷基。上述取代或未經取代之C1-C10烷基可為，例如，一甲基、一乙烷基、一丙烷基、一丁基或一戊烷基等，但不限於此。在一特定實施例中，R2為一未經取代之戊烷基。
此外，前述R3與R4所可獨立地包括之鹵素的例子包括，氟、氯、溴或碘。在一實施例中，於上述式(I)之化合物中， R3與R4可獨立地為取代或未經取代之C1-C10烷基。而上述取代或未經取代之C1-C10烷基的例子，可包括，但不限於，一甲基、一乙烷基、一丙烷基、一丁基或一戊烷基等。在一特定實施例中，於上述式(I)之化合物中，R3與R4皆為一甲基。
再者，上述式(I)之化合物的例子也可包括，一以式(II)表示之化合物，但不限於此： 其中R1為α鼠李糖基。
本發明之新穎化合物，可具有一免疫調節之功效。上述免疫調節之功效可包括，但不限於抗發炎等。在一實施例中，本發明之新穎化合物具有抗發炎之功效。
又，本發明之新穎化合物具有抑制免疫細胞產生NO的功效，且不具有細胞毒性。
在本發明之一第二實施態樣中，本發明也提供一種免疫調節醫藥組成物或保健食品，其可包括任何前述本發明新穎之式(I)化合物與一藥學上可接受之載體或鹽類，但不限於此。
上述本發明之免疫調節醫藥組成物或保健食品具有一免疫調節之功效，而上述免疫調節之功效可包括抗發炎等，但不限於此。在一實施例中，本發明之上述免疫調節醫藥組成物或 保健食品具有抗發炎之功效。
此外，本發明之上述免疫調節醫藥組成物或保健食品具有抑制免疫細胞產生NO的功效，且不具有細胞毒性。
在本發明一第三實施態樣中，本發明還提供一種任何前述本發明新穎之式(I)化合物或其鹽用於製備具免疫調節之功效的藥物或保健食品。上述免疫調節之功效可包括抗發炎等，但不限於此。
在本發明一第四實施態樣中，本發明更提供一種奧特阿羅刺盤孢菌(Colletotrichum aotearoa)之醱酵產物，其中形成上述奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物的方法，可包括，但不限於，將奧特阿羅刺盤孢菌以一培養基進行一醱酵培養，以形成一醱酵液，以獲得所述奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物。
又，在一實施例中，前述培養奧特阿羅刺盤孢菌之培養基的成分，可包括玉米澱粉、玉米浸液(corn steep liquor)、酵母萃取物與海鹽，但不限於此。而於此實施例中，在前述培養基中，玉米澱粉的含量可為約27g/L-33g/L，玉米浸液的含量可為約9g/L-11g/L，酵母萃取物的含量可為約4.5g/L-5.5g/L，而海鹽含量可為約1.8g/L-2.2g/L，但不限於此。
此外，對奧特阿羅刺盤孢菌所進行之醱酵培養的溫度可為約22-28℃，但不限於此。在一實施例中，對奧特阿羅刺盤孢菌所進行之醱酵培養的溫度可為約25℃。
另外，對奧特阿羅刺盤孢菌所進行之醱酵培養的時間可為約12-16天，但不限於此。在一實施例中，對奧特阿羅刺盤孢菌所進行之醱酵培養的時間可為約14天。
又，在另一實施例中，前述形成上述奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物的方法，在形成上述醱酵液之後，還可更包括下列步驟，但不限於此。
首先將前述醱酵液以一丁醇進行萃取，以獲得一丁醇萃取液。
接著，將所獲得之丁醇萃取液以一乙酸乙酯水溶液進行萃取，以獲得一乙酸乙酯層與一水層。
然後，保留乙酸乙酯層，以獲得所需之醱酵產物。
前述所有奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物之實施例中所採用的奧特阿羅刺盤孢菌的例子可包括，在2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)之奧特阿羅刺盤孢菌，其寄存編號為BCRC 930177(其也為在2015年6月12日寄存於德國微生物及細胞保存中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)之奧特阿羅刺盤孢菌，寄存編號為DSM 32067)等，但不限於此。在一實施例中，前述奧特阿羅刺盤孢菌為在2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)之奧特阿羅刺盤孢菌，其寄存編號為BCRC 930177。
上述本發明之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物，可具有一免疫調節之功效。上述免疫調節之功效可包括，但不限於抗發炎等。在一實施例中，本發明之奧特阿羅刺盤抱菌之醱酵產物具有抗發炎之功效。
又，本發明之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物具有抑制免疫細胞產生NO及/或IL-6的功效，且不具有細胞毒性。
在本發明一第五實施態樣中，本發明提供另一種免疫調節醫藥組成物或保健食品，其可包括任何前述本發明奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物與一藥學上可接受之載體或鹽類，但不限於此。
上述本發明之免疫調節醫藥組成物或保健食品具有一免疫調節之功效，而上述免疫調節之功效可包括抗發炎等，但不限於此。在一實施例中，本發明之上述免疫調節醫藥組成物或保健食品具有抗發炎之功效。
此外，本發明之上述免疫調節醫藥組成物或保健食品具有抑制免疫細胞產生NO及/或IL-6的功效，且不具有細胞毒性。
在本發明一第六實施態樣中，本發明還提供一種任何前述本發明奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物用於製備具免疫調節之功效的藥物或保健食品。上述免疫調節之功效可包括抗發炎等，但不限於此。
此外，在本發明一第七實施態樣中，本發明還提供一種新穎之奧特阿羅刺盤孢菌(Colletotrichum aotearoa)，其於在2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)，寄存編號為BCRC 930177，其也於2015年6月12日寄存於德國微生物及細胞保存中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)，寄存編號為 DSM 32067。
再者，於前述所有本發明之醫藥組成物中，所述藥學上可接受之載體可包括，但不限於溶劑、分散媒(dispersion medium)、套膜(coating)、抗菌與抗真菌試劑與一等滲透壓與吸收延遲(absorption delaying)試劑等與藥學投予相容者。對於不同的給藥方式，可利用一般方法將醫藥組合物配製成劑型(dosage form)。
又，於前述所有本發明之醫藥組成物中，所上述藥學上可接受之鹽類可包括，但不限於鹽類包括無機陽離子，例如，鹼金屬鹽類，如鈉、鉀或胺鹽，鹼土金族鹽類，如鎂、鈣鹽，含二價或四價陽離子之鹽類，如鋅、鋁或鋯鹽。此外，也可是為有機鹽類，如二環己胺鹽類、甲基-D-葡糖胺，胺基酸鹽類，如精胺酸、離胺酸、組織胺酸、麩胺酸醯胺。
本發明所製備出藥物給藥可以口服、非口服、經由吸入噴霧(inhalation spray)或藉由植入貯存器(implanted reservoir)的方式。非口服可包括皮下(subcutaneous)、皮內(intracutaneous)、靜脈內(intravenous)、肌肉內(intramuscular)、關節內(intraarticular)、動脈(intraarterial)、滑囊(腔)內(intrasynovial)、胸骨內(intrasternal)、蜘蛛膜下腔(intrathecal)、疾病部位內(intralesional)注射以及灌注技術。
口服成分的形式可包括，但不限定於，藥錠、膠囊、乳劑(emulsions)、水性懸浮液(aqueous suspensions)、分散液(dispersions)與溶液。
本發明之醫藥組合物可投予至植物或動物等。上述 可包括魚類、禽類、哺乳動物等，但不限於此。哺乳動物的例子可包括，但不限於，貓、狗、牛、馬、豬、人類等。在一實施例中，醫藥組合物可投予至人類。
實施例
A. 材料與方法
1. NO與IL-6產生的測定
從中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)獲得小鼠巨噬細胞株(macrophage cell line)(RAW 264.7)(BCRC 60001)。將細胞在37℃，以添加10%胎牛血清(Gibco)、4.5g/L葡萄糖、4mM麩醯胺酸(glutamine)、盤尼西林(100units/mL)與鏈黴素(streptomycin)(100μg/mL)之DMEM培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)，於5% CO2培養箱中之一潮濕大氣中進行培養。
將細胞在1μg/mL脂多醣(lipopolysaccharide,LPS)(Sigma-Aldrich)存在下，以10、25、50μM之天然產物處理20小時。
經由Griess試劑分析(T.M.Dawson,V.L.Dawson,The Neuroscientist,1995,1,7-18)在培養基上清液中之NO濃度測定為亞硝酸鹽(nitrite)，一NO之主要穩定產物，而使用MTT分析來測定細胞存活率(cell viabilities)(D.A.Scudiero,R.H.Shoemaker,K.D.Paull,A.Monks,S.Tierney,T.H.Nofziger,M.J.Currens,D.Seniff,M.R.Boyd,Cancer Res.,1988,48,4827-4833)。以小鼠IL-6 ELISA Ready-SET-Go ELISA kit (eBiosciencee)，根據製造商建議，在細胞培養基上清液中測定IL-6產生的程度，並以微量盤式分析儀(microplate reader)(μ-Quant,Bio-Tek Instruments Inc.)來定量。
2. 微生物材料醱酵
金石榴(Bredia oldhamii Hook.f.)的葉子為在2009年於台灣，屏東縣，牡丹鄉牡丹池山，且由台灣高雄醫學大學陳益昇教授所鑑定。存證標本(Voucher specimen)(no.Chen 5695)寄存於高雄醫學大學，藥學院，藥學系的標本室。
真菌菌株分離自金石榴葉。以rDNA-內轉錄間隔(internal transcribed spacer,ITS)區之序列進行分析，藉由使用BLAST(nucleotide sequence comparison program)來搜尋NCBI之GenBank資料庫，發現此菌株與奧特阿羅刺盤孢菌No.KC297063.1之ITS序列片段具有100%之相似度，因此將此菌鑑定為奧特阿羅刺盤孢菌(Colletotrichum aotearoa)。將此菌株於2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)，寄存編號為BCRC 930177，且也將此菌株於2015年6月12日寄存於德國微生物及細胞保存中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)，寄存編號為DSM 32067。
將在9-cm Petri培養盤中之麥芽抽出物洋菜(malt extract agar,MEA)上之奧特阿羅刺盤孢菌菌株的兩週大菌落裁剪放入培養瓶中與100ml蒸餾水混合30秒以製備用於液態醱酵(liquid fermentation)之真菌接種物(inoculum)。將10mL的真菌接 種物添加至包含150mL液體培養基(成分：玉米澱粉，30g；玉米浸液(corn steep liquor)，10g；酵母萃取物，5g；海鹽，2g，於1公升蒸餾水中，pH 6)的各個500-mL培養瓶中，並在以100轉/分鐘之速率的迴旋式震盪器(rotary shaker)上，以25℃，無光照培養兩週。獲得共14.0L之真菌醱酵液，且之後將其過濾以移除真菌菌絲(fungal mycelium)。
3. 萃取與純化
將奧特阿羅刺盤孢菌的液態醱酵物(14.0L)以丁醇(Butanol,BuOH)進行萃取，以獲得一丁醇萃取物(16.4g)。將此丁醇萃取物以乙酸乙酯-水(AcOEt-H2O)(1：1；2L×3)分劃，以產生一乙酸乙酯溶解片段(AcOEt-soluble fraction)(4.5g)(於10μg/mL之濃度，達約95%抑制NO與IL-6的產生)與一水溶解片段(H2O-soluble fraction)(10.2g)。
將活性乙酸乙酯溶解片段(4.5g)以CH2Cl2-MeOH(100：1)為主要洗提液(eluent)，進行矽膠管柱層析(column chromatography,CC)，並以MeOH來梯度增加洗提液極性，以產生19個片段(fractions)(分別為片段1至片段19)。接著，進一步將片段14以H2O-丙酮(acetone)(2：1)為洗提液，進行RP-18矽膠管柱層析，而產生14個片段(片段14-1至片段14-14)。再來，將片段14-10(132mg)以CH2Cl2-AcOEt(1：3)為洗提液，進行矽膠管柱層析，再產生4個片段(片段14-10-1至片段14-10-4)。然後，將片段14-10-3進一步以CH2Cl2-AcOEt(1：3)為洗提液來進行矽膠管柱層析，以產生化合物1。
4. 化合物鑑定
(1)一般實驗步驟
將熔點(Melting points)以一Yanaco微熔點儀器(micromelting point apparatus)測量且未進行修正。
使用一Jasco P-1020數位旋光儀(digital polarimeter)於CHCl3中，來測量旋光性(optical rotations)。
經由Jasco UV-240光譜儀(spectrophotometer)於MeOH中，獲得紫外光(UV)光譜。以一Perkin-Elmer 2000 FT-IR光譜儀(spectrometer)來記錄紅外光(IR)光譜(neat或KBr)。以分別於600MHz(1H)與150MHz(13C)操作的一Varian VNMRS-600光譜儀，以ppm(δ)的化學位移(with chemical shifts)，使用TMS為一內標準品(internal standard)，來記錄包括COSY、NOESY、ROESY、TOCSY、HMBC與HSQC試驗的NMR光譜。低解析度(low-resolution)ESIMS為獲自一API 3000質譜儀(Applied Biosystems)，而高解析度(high-resolution)ESIMS為獲自一Bruker Daltonics APEX II 30e質譜儀。經由具有直接進樣系統(direct inlet system)的一Quattro GC/MS光譜儀來記錄低解析度EIMS，而HREIMS光譜為獲自一Finnigan/Thermo Quest MAT 95XL質譜儀。
矽膠(70-230與230-400網目(mesh)；Merck)與球型(Spherical)C18 100Å反相(reversed-phase)矽膠(RP-18；顆粒尺寸20-40μm；Silicycle)被用於管柱層析(column chromatography,CC)，而矽膠60 F254(Merck)與RP-18 F254S(Merck)被用於TLC與預備的(preparative)TLC。於本實施例中使用中壓液相層析(medium-pressure liquid chromatography)。
化合物1被獲得為具有=-134.4(c=0.23,MeOH) 之一光學活性(optically active)帶白色粉末。使用ESI-MS與HR-ESI-MS來建立化合物1之分子式為C22H34O7，其暗示六個不飽和度(degrees of unsaturation)。其之IR光譜指出羥基(hydroxy groups)(3362cm-1)與一芳香環(aromatic ring)(1586,1452cm-1)的存在。UV吸收(λmax 207與279nm)與在鹼性溶液中之一紅移(bathochromic shift)的顯現，建議一酚異色滿(phenolic isochroman)骨架的存在。
1H-NMR光譜(表1)顯示一正戊基(n-pentyl group)於[δ(H)0.94(t,J=7.2,CH3(13)),1.38(br.s,CH2CH2(11,12)),1.46(m,H-C(10b)),1.59(m,H-C(10a)),1.64(m,CH2(9))；δ(C)14.4(C(13)),23.7(C(12)),33.1(C(11)),26.4(C(10)),37.2(C(9))]、兩個甲基附於苯環(benzene ring)於[δ(H)2.08(s,CH3(14)),2.16(s,CH3(15))；δ(C)11.6(C(14)),10.6(C(15))]、一個非等價亞甲基質子(non-equivalent methylene protons)於[δ(H)2.38(dd,J=16.2,10.8,H-C(3β)),2.64(dd,J=16.2,3.0,H-C(3α))；δ(C)33.6(C(3))]、一個接氧次甲基(oxymethine)於[δ(H)3.57(m,H-C(2)；δ(C)76.4(C(2)))、一個非等價甲醛基(non-equivalent oxymethylene)[δ(H)4.61,4.93(各1H，各d,J=14.4,CH2(8)；δ(C)66.5(C(8)))，且也攜帶一個α-鼠李糖基(α-rhamnosyl)部分(moiety)[δ(H)1.32(d,J=6.6,CH3(6')),3.49(t,J=9.6,H-C(4')),3.83(dd,J=9.6,3.3,H-C(3')),4.01(dd,J=9.6,6.6,H-C(5')),4.16(dd,J=3.3,1.8,H-C(2')),4.80(d,J=1.8,H-C(1'))；δ(C)18.1(C(6')),71.7(C(5')),72.4(C(4')),72.3(C3')],72.5(C2')],106.1(C(1))]。根據變旋(anomeric)H-原子(δ(H)4.80) 的小耦合常數(small coupling constant)(J=1.8)，醣苷鍵(glycosidic bond)為α-方向(α-oriented)。
1H-、13C-NMR(表1)與DEPT光譜顯示訊號，其針對四個一級碳(primary carbons)[δ(C)10.6(C(15)),11.6(C(14)),14.4(C(13)),18.1(C(6'))]、六個二級碳(secondary carbons)(一個攜帶O)[δ(C)66.5(C(8)),37.2(C(9)),33.6(C(3)),33.1(C(11)),26.4(C(10)),23.7(C(12))]、六個次甲基(methines)(一個半缩醛(hemiacetal))[δ(C)106.1(C(1'),76.4(C(2)),72.5(C(2')),73.4(C(4')),72.3(C(3')),71.7(C(5')))，與六個四級碳(quaternary carbons)[δ(C)153.3(C(5)),152.3(C(7)),131.9(C(3a)),120.6(C(7a)),120.5(C(4)),117.1(C(6))]根據1H-、13C-NMR與DEPT光譜，其指出化合物1之結構具有一經完全取代的苯環。
COSY光譜(第1圖)顯示關於化合物1之正戊基與α-鼠李糖基部分的關聯性。而HMBC光譜(第1圖)顯示從CH2(3)至C(2)、C(4)、C(9)、C(3a)、C(7a)及從CH2(8)至C(2),C(7)、C(3a)、C(7a)的關鍵關聯性，以從CH2(3)至C(9)與從H-C(2)至C(10)來建立化合物1的骨架，以確認正戊基部分附於C(2)，且從H-C(1')至C(7)來確認鼠李糖基部分是以α-方向O-連結(linkage)連接至C(7)。因 此，化合物1為一異色滿苷(isochroman glycoside)。
根據NOESY試驗的基礎，來提出化合物1的相對組態(relative configuration)。從Hβ-C(8)和Hβ-C(3)與Hβ-C(2)之準-1-3-二軸交互作用(quasi-1,3-diaxial interactions))的觀察，推測於C(2)之正戊基的α-方向。
根據上方光譜證據的基礎，化合物1的結構被闡明為rel-(2S)-4,6-二甲基-2-戊基-7-O-α-鼠李糖基異色滿-5-醇(rel-(2S)-4,6-dimethyl-2-pentyl-7-O-α-rhamnosylisochroman-5-ol)，命名為colletobredin A，其結構式如下方所示。
B. 實驗結果
經分離之化合物1的抗發炎活性，經由檢驗其對於在小鼠巨噬細胞株(RAW 264.7)中之脂多醣-誘導之誘導型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)依賴-NO之產生的抑制功效(表2)。
化合物1顯示具有74.7μM之IC50值的NO抑制活性。此外，於本實施例之RT-PCR分析指出LPS處理增加iNOS mRNA表現程度，而化合物1以濃度依賴方式(concentration-dependent manner)抑制此增加。又，化合物1在100μM以下的濃度，也並未 顯示任何對於RAW 264.7細胞之細胞毒性。
雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
【生物材料寄存】
國內寄存資訊【請依寄存機構、日期、號碼順序註記】
中華民國食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)
2015/7/8
BCRC 930177
國外寄存資訊【請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記】
德國微生物及細胞保存中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)
2015/6/12
DSM 32067

Claims (36)

  1. 一種式(I)化合物或其鹽， 其中，R1為一糖基或氫，R2為一取代或未經取代之C1-C10烷基，而R3與R4係獨立地擇自由下列所組成之群組：氫、鹵素與一取代或未經取代之C1-C10烷基。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之式(I)化合物或其鹽，其中R1為該糖基。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之式(I)化合物或其鹽，其中該糖基包括鼠李糖基(rhamnosyl)、異鼠李糖基(quinovosyl)或海藻糖基(fucosyl)。
  4. 如申請專利範圍第2項所述之式(I)化合物或其鹽，其中該糖基為鼠李糖基。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之式(I)化合物或其鹽，R2為一未經取代之戊烷基。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之式(I)化合物或其鹽，其中 R3與R4皆為甲基。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之式(I)化合物或其鹽，其中該式(I)化合物如以下式(II)所示： 其中R1為α鼠李糖基。
  8. 一種免疫調節醫藥組成物或保健食品，包括：如申請專利範圍第1項所述之式(I)化合物或其鹽；以及一藥學上可接受之載體或鹽類，其中該免疫調節醫藥組成物或保健食品具有一免疫調節之功效。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之免疫調節醫藥組成物或保健食品，其中該免疫調節之功效包括抗發炎。
  10. 如申請專利範圍第8項所述之免疫調節醫藥組成物或保健食品，其中R1為該糖基。
  11. 如申請專利範圍第10項所述之免疫調節醫藥組成物或保健食品，其中該糖基包括鼠李糖基、異鼠李糖基或海藻糖基。
  12. 如申請專利範圍第10項所述之免疫調節醫藥組成物 或保健食品，其中該糖基為鼠李糖基。
  13. 如申請專利範圍第8項所述之免疫調節醫藥組成物或保健食品，R2為一未經取代之戊烷基。
  14. 如申請專利範圍第8項所述之免疫調節醫藥組成物或保健食品，其中R3與R4皆為甲基。
  15. 如申請專利範圍第8項所述之免疫調節醫藥組成物或保健食品，其中該式(I)化合物如以下式(II)所示： 其中R1為α鼠李糖基。
  16. 一種如申請專利範圍第1項所述之式(I)化合物或其鹽用於製備具免疫調節之功效的藥物或保健食品之用途。
  17. 如申請專利範圍第16項所述之用途，其中該免疫調節之功效包括抗發炎。
  18. 如申請專利範圍第16項所述之用途，其中R1為該糖基。
  19. 如申請專利範圍第18項所述之用途，其中該糖基包括鼠李糖基、異鼠李糖基或海藻糖基。
  20. 如申請專利範圍第18項所述之用途，其中該糖基為鼠 李糖基。
  21. 如申請專利範圍第16項所述之用途，R2為一未經取代之戊烷基。
  22. 如申請專利範圍第16項所述之用途，其中R3與R4皆為甲基。
  23. 如申請專利範圍第16項所述之用途，其中該式(I)化合物如以下式(II)所示： 其中R1為α鼠李糖基。
  24. 一種奧特阿羅刺盤抱菌(Colletotrichum aotearoa)之醱酵產物，其中該奧特阿羅刺盤抱菌之醱酵產物的形成方法，包括：將該奧特阿羅刺盤孢菌以一培養基進行一醱酵培養，以形成一醱酵液，其中於該培養基成分包括，包括：玉米澱粉；玉米浸液(corn steep liquor)；酵母萃取物；以及 海鹽。
  25. 如申請專利範圍第24項所述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物，其中該玉米澱粉的含量為約27g/L-33g/L，該玉米浸液的含量為約9g/L-11g/L，該酵母萃取物的含量為約4.5g/L-5.5g/L，而該海鹽含量為約1.8g/L-2.2g/L。
  26. 如申請專利範圍第24項所述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物，其中該醱酵培養之溫度為約22-28℃。
  27. 如申請專利範圍第24項所述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物，其中該醱酵培養之培養時間為約12-16天。
  28. 如申請專利範圍第24項所述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物，其中該奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物的形成方法，更包括：將醱酵液以一丁醇進行萃取，以獲得一丁醇萃取液；將該丁醇萃取液以一乙酸乙酯水溶液進行萃取，以獲得一乙酸乙酯層與一水層；以及保留該乙酸乙酯層。
  29. 如申請專利範圍第24項所述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物，其中該奧特阿羅刺盤孢菌為在2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)之奧特阿羅刺盤孢菌，其寄存編號為BCRC 930177。
  30. 一種免疫調節醫藥組成物或保健食品，包括： 如申請專利範圍第24項所述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物；以及一藥學上可接受之載體或鹽類，其中該免疫調節醫藥組成物或保健食品具有一免疫調節之功效。
  31. 如申請專利範圍第30項所述之免疫調節醫藥組成物或保健食品，其中該奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物的形成方法，更包括：將醱酵液以一丁醇進行萃取，以獲得一丁醇萃取液；將該丁醇萃取液以一乙酸乙酯水溶液進行萃取，以獲得一乙酸乙酯層與一水層；以及保留該乙酸乙酯層。
  32. 如申請專利範圍第30項所述之免疫調節醫藥組成物或保健食品，其中該奧特阿羅刺盤孢菌為在2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心之奧特阿羅刺盤孢菌，其寄存編號為BCRC 930177。
  33. 一種如申請專利範圍第24項所述之奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物用於製備具免疫調節之功效的藥物或保健食品的用途。
  34. 如申請專利範圍第33項所述之用途，其中該奧特阿羅刺盤孢菌之醱酵產物的形成方法，更包括：將醱酵液以一丁醇進行萃取，以獲得一丁醇萃取液； 將該丁醇萃取液以一乙酸乙酯水溶液進行萃取，以獲得一乙酸乙酯層與一水層；以及保留該乙酸乙酯層。
  35. 如申請專利範圍第33項所述之用途，其中該奧特阿羅刺盤孢菌為在2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心之奧特阿羅刺盤孢菌，其寄存編號為BCRC 930177。
  36. 一種新穎之奧特阿羅刺盤孢菌(Colletotrichum aotearoa)，其於在2015年7月8日寄存於中華民國財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)，其寄存編號為BCRC 930177。
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