TW201628611A - 甲基鹽黴素於豬飼料中之抗病毒效果 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於用於改善哺乳豬之病毒感染之組合物。該組合物含有聚醚離子載體甲基鹽黴素，且係以經口可接受形式供應至該等哺乳豬。使用豬流行性腹瀉病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus；PEDV)攻擊哺乳豬後，該組合物可有效降低病毒排出及腹瀉之嚴重性。

Description

甲基鹽黴素於豬飼料中之抗病毒效果
本發明係關於含有甲基鹽黴素之組合物及使用甲基鹽黴素來治療哺乳豬之豬流行性腹瀉病毒感染之方法。
本發明係關於治療與豬流行性腹瀉病毒(PEDV)感染相關症狀之領域。PEDV係冠狀病毒，其會造成經感染仔豬高達100%之死亡率，但在較大豬中則具有有限的死亡率。在美國每天超過10,000隻仔豬死於PEDV。因此，PEDV對於豬肉產品之價格及可獲得性具有顯著經濟影響。
目前在美國有兩種PEDV疫苗出售。兩種疫苗均已批准用於懷孕母豬，其可藉助母豬乳汁中之抗體提供給哺乳仔豬被動免疫力。然而，該等疫苗之效能尚有待證明，疫苗必須藉助注射個別地投與母豬，且當仔豬之腸道終止對大分子吸收後，母源性抗體之含量便開始下降。
甲基鹽黴素係藉由鏈黴菌(Streptomyces spp)所產生之聚醚離子載體，且可自利迪鏈黴菌(S.lydicus)及紅色粒狀鏈黴菌(S.granuloruber)之培養物純化。甲基鹽黴素已經許多國家之管理機構批准用以增加生長肥育豬中之增重。已顯示，當甲基鹽黴素添加至感染導致登革熱之黃病毒之經培養人類細胞時，其會阻斷該病毒之複製(Low等人，Antiviral Therapy 16：1203-18,2011)。然而，已報導，當與飼料一起投與時，當甲基鹽黴素以約83mg/kg飼料之濃度供應時，至少在泰妙 菌素(tiamulin)之存在下，其對哺乳豬係有毒的。
需要針對PEDV之新治療，尤其係為離乳後的豬(例如哺乳豬)提供保護之療法。可同時經口投與許多動物之療法亦係有利的。此乃因已顯示PEDV係藉由氣膠化病毒傳播，故減少病毒自經感染豬排出之療法可促進遏止由此病毒所引起之疾病。
因此，本發明提供治療PEDV感染之哺乳豬之方法，其包含將甲基鹽黴素與經口可接受之載劑一起投與該豬。經口可接受之載劑係選自包含動物飼料、除動物飼料之外之液體組合物及除動物飼料之外之固體組合物之群。此方法中所用甲基鹽黴素之濃度係選自約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg或約60mg/kg經口可接受之載劑之群。本發明亦提供治療PEDV感染之哺乳豬之方法，其包含將甲基鹽黴素與經口可接受之載劑一起投與該豬，其中經口可接受之載劑係選自包含動物飼料、除動物飼料之外之液體組合物及除動物飼料之外之固體組合物之群，且其中甲基鹽黴素之濃度選自約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg及約60mg/kg經口可接受之載劑之群。
本發明亦提供治療PEDV感染之哺乳豬之方法，其包含將甲基鹽黴素與動物飼料一起投與該豬，其中甲基鹽黴素之濃度可係約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg或約60mg/kg經口可接受之載劑。本發明亦提供治療PEDV感染之哺乳豬之方法，其包含將甲基鹽黴素與動物飼料一起投與該豬，其中甲基鹽黴素之濃度係約60mg/kg經口可接受之載劑。
此外，本發明提供用於治療哺乳豬之PEDV感染之甲基鹽黴素。甲基鹽黴素可與經口可接受之載劑一起作為組合物供應至哺乳豬，該經口可接受之載劑係例如(但不限於)動物飼料、除動物飼料之外之液體組合物或除動物飼料之外之固體組合物。此組合物中之甲基鹽黴素之濃度可係約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg或約60mg/kg經口 可接受之載劑。本發明亦提供用於治療哺乳豬之PEDV感染之甲基鹽黴素，其中甲基鹽黴素係與動物飼料一起投與，且甲基鹽黴素之濃度係約30mg/kg至約60mg/kg動物飼料。本發明亦提供用於治療哺乳豬之PEDV感染之甲基鹽黴素，其中甲基鹽黴素係與動物飼料一起投與且甲基鹽黴素之濃度係約60mg/kg動物飼料。
此外，本發明提供與經口可接受之載劑一起用於治療哺乳豬之PEDV感染之甲基鹽黴素，其中該經口可接受之載劑包含動物飼料、除動物飼料之外之液體組合物或除動物飼料之外之固體組合物，且其中甲基鹽黴素之濃度係約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg或約60mg/kg經口可接受之載劑。此外，本發明亦提供與動物飼料一起用於治療哺乳豬之PEDV感染之甲基鹽黴素，其中甲基鹽黴素之濃度係約30mg/kg至約60mg/kg動物飼料。此外，本發明亦提供與動物飼料一起用於治療哺乳豬中之PEDV感染之甲基鹽黴素，其中甲基鹽黴素之濃度係約60mg/kg動物飼料。
此外，本發明提供甲基鹽黴素在製備用於治療哺乳豬之PEDV感染之藥劑中之用途。該藥劑係包含甲基鹽黴素與經口可接受之載劑之組合物，該經口可接受之載劑係例如(但不限於)動物飼料、除動物飼料之外之液體組合物或除動物飼料之外之固體組合物。此組合物中之甲基鹽黴素之濃度係約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg或約60mg/kg經口可接受之載劑。此外，本發明提供甲基鹽黴素在製備用於治療哺乳豬之PEDV感染之藥劑中之用途，其中該藥劑係甲基鹽黴素與動物飼料且甲基鹽黴素之濃度係約30mg/kg至約60mg/kg動物飼料。此外，本發明提供甲基鹽黴素在製備用於治療哺乳豬中之PEDV感染之藥劑中之用途，其中該藥劑係甲基鹽黴素與動物飼料且甲基鹽黴素之濃度係約60mg/kg動物飼料。
此外，本發明提供為哺乳豬提供抗病毒效果之組合物，其中組 合物包含一定濃度之甲基鹽黴素及經口可接受之載劑。經口可接受之載劑可包含動物飼料、除動物飼料之外之液體組合物或除動物飼料之外之固體組合物。上述組合物中之甲基鹽黴素之濃度係約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg或約60mg/kg組合物。此外，本發明提供為哺乳豬提供抗病毒效果之組合物，其中組合物包含一定濃度之甲基鹽黴素與動物飼料，其中甲基鹽黴素之濃度係約30mg/kg至約60mg/kg動物飼料。此外，本發明提供為哺乳豬提供抗病毒效果之組合物，其中組合物包含一定濃度之甲基鹽黴素與動物飼料，其中甲基鹽黴素之濃度係約60mg/kg動物飼料。
此外，本發明提供包含一定濃度之甲基鹽黴素及經口可接受之載劑之組合物，該組合物為哺乳豬提供抗病毒效果，其中經口可接受之載劑係選自動物飼料、除動物飼料之外之液體組合物及除動物飼料之外之固體組合物之群，且其中甲基鹽黴素之濃度係約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg及約60mg/kg經口可接受之載劑。
甲基鹽黴素及製備與使用甲基鹽黴素作為對抗革蘭氏陽性菌(gram-positive bacteria)、厭氧細菌及真菌之有用治療劑、作為抗球蟲劑及作為增加反芻動物中飼料利用率之藥劑之方法詳述於美國專利第4,038,384號(公開於1977年7月26日)、美國專利第4,309,504號(公開於1982年1月5日)及美國專利第4,342,829號(公開於1982年8月3日)中。亦參見Berg等人，J.Antibiot.31：1-6(1978)及「Narasin,a new polyether antibiotic：discovery and fermentation studies」，第38章，第471-485頁，第18卷，Developments in Industrial Microbiology[微生物學會之出版物(1977)]。
如本文所用，術語「治療」(「treating」、「to treat」或 「treatment」)包括遏止、減緩、終止、減少、改善或逆轉現有症狀、病症、病狀或疾病之進展或嚴重性。治療可以預防或治療方式施加。
如本文所用，「哺乳豬」係已離乳但尚非生長肥育豬之豬。豬之離乳通常發生在約三週齡(約21日齡)時，但可早在一週齡(約七日齡)且晚至六週齡(約42日齡)時發生。離乳豬不再僅依賴於母豬之乳汁為食，而是消耗固體飼料組合物。
如本文所用，「生長肥育豬」係至少約50磅體重或約十週齡之豬。術語「生長肥育」(「growing-finishing」、「grow-finish」及「grower-finisher」)係同義的。術語「豬」包括豬(Sus)屬之任何成員。
如本文所用，「動物飼料」包括材料之營養價值由家畜消耗之可食用材料。動物飼料包括飼料日糧(例如，滿足動物之營養需求之組合物)且亦包括未必滿足動物之營養需求之組合物。
在實施例中，組合物包含甲基鹽黴素之經口可接受之載劑。「經口可接受之載劑」包括適於經口投與之任何生理上可接受之載劑。經口可接受之載劑包括(但不限於)適用於動物飼料產品及/或用於經口投與動物之動物飼料組合物、水性組合物及液體及固體組合物。適宜載劑為業內已知，且包括彼等闡述於美國專利6,780,628中者。
以下試驗性實例說明使用甲基鹽黴素可減少哺乳豬中病毒排出或改善病毒感染之症狀。本發明並不限於此特定說明性實例或任何較佳實施例，且本發明可應用於其他病毒之治療，該等病毒係例如豬繁殖與呼吸症候群(PRRS)病毒、豬環狀病毒(PCV)或豬冠狀病毒。
實例1
實驗設計
使81隻離乳階段(21.8 +/- 0.6天)無PEDV感染之商業雜交仔豬 (Wilson’s Prairie View農場，Burlington,WI)運至現場，且6隻作為預攻擊期(第-7天至第0天)期間之潛在替代動物。第0天，在即將進行PEDV攻擊之前移開6隻仔豬，使得15個圍欄含有5隻仔豬/圍欄(n=75)動物。每個治療組有5個圍欄。為使一批內之警哨仔豬平衡，總共使用39隻一種性別之仔豬及36隻另一性別之仔豬。估計每個治療組使用5個圍欄(25隻仔豬)以檢測治療組之間在生長性能及病毒排出之發生率方面之顯著差異(P<0.10)。
將75隻仔豬隨機指派至三個治療組中一者：對照(無離子載體)、甲基鹽黴素(30mg/kg)及甲基鹽黴素(60mg/kg)。在第0天暴露於PEDV之前，使其適應其環境並每天餵食持續七天。攻擊後治療持續達14天。三個治療組之豬經口投與4×104TCID50/mL PEDV分離物PEDV/USA/NC/2013/49469(College of Veterinary Medicine,Iowa State University)。每天監測仔豬臨床參數，腹瀉、抑鬱及瘦消之臨床分數、食物消耗速率、及體重變化速率中之變化，並每天取病毒拭子以測定病毒排出。
統計學方法
病毒排出值係藉由SAS(SAS,Cary,NC)之RMANOVA及PROC MIXED程序評估。用於分析之其他變量包括生長性能數據(平均每日增重或ADG；平均每日採食量或ADFI；及飼料效率(每單位所消耗飼料之單位體重增加)或G：F)、腹瀉之發病率及嚴重性、抑鬱及瘦消分數及腸組織學分數及免疫組織化學。生長性能結果之分析使用廣義線性混合模型及SAS之PROC MIXED程序來實施。
分數數據(腹瀉、抑鬱及瘦消)之發生率及嚴重性係藉由每天之頻率及平均分數來匯總。
飼糧調配物
飼糧調配物係於Provimi(Lewisburg,OH)製造並以粉料形式餵 食。藉由Minnesota Valley Testing實驗室(New Ulm,MN)分析飼糧之組成，且發現營養分析值類似於所調配含量。甲基鹽黴素含量係藉由Covance實驗室(Greenfield,IN)分析並發現其含量係0mg/kg、29.8mg/kg及64.1mg/kg，其分別類似於0mg/kg、30mg/kg及60mg/kg之所調配含量。
在試驗性飼糧中未檢測到萊克多巴胺(ractopamine)(最後一次餵食之藥物)。
生長性能
甲基鹽黴素納入含量對平均體重(BW)、平均每日增重(ADG)、平均每日採食量(ADFI)、飼料效率(G：F)及飼料轉換率(F：G)之效果示於表1中。
與對照(0mg/kg)相比，餵食30mg/kg及60mg/kg甲基鹽黴素在數值上使總體ADG(分別7.7%及7.7%)及G：F(分別7.9%及5.9%)增加。
與對照相比，在第0天至第5天時期中餵食30mg/kg及60mg/kg甲基鹽黴素使ADG增加(分別58.3%及100%)(P<0.10)(表1)，但在第-7天至第0天時期中餵食60mg/kg甲基鹽黴素使得ADG減小(18.8%)(P<0.10)。另外，與0mg/kg甲基鹽黴素相比，在第0天至第5天時期中餵食60mg/kg而非30mg/kg甲基鹽黴素，使G：F增加(78.7%)(P<0.10)。在第5天至第14天時期中，對於ADG、ADFI、G：F或F：G並無統計學差異。甲基鹽黴素含量對總體(第0天至第14天)生長性能無效果(P>0.10)。
臨床得分
表2指示用於量測腹瀉、抑鬱及瘦消之評分系統。表3比較飼糧包括0mg/kg、30mg/kg或60mg/kg甲基鹽黴素之哺乳豬中腹瀉、抑鬱及瘦消之平均分數。
歷經14天時期所量測腹瀉分數之平均值隨著甲基鹽黴素含量增加而在數值上減小(對於0mg/kg、30mg/kg及60mg/kg分別為1.49、1.45及1.37)。腹瀉嚴重性隨著甲基鹽黴素含量增加而減小(對於0mg/kg、30mg/kg及60mg/kg分別為3.16、2.72及2.48；表3)。
歷經14天時期所量測抑鬱分數之平均值並不受甲基鹽黴素含量之影響，然而，注意到動物中所觀察之抑鬱之低發病率(對於0mg/kg、30mg/kg及60mg/kg甲基鹽黴素分別為5、4及3隻動物)。抑鬱之嚴重性隨著甲基鹽黴素含量增加而下降，但此係基於相對較少展現該病狀之動物(表3)。
甲基鹽黴素含量對於經14天時期所量測之瘦消分數之平均值或 嚴重性之效果較小(表3)。
1嚴重性：經14天時期針對每一隻豬所觀察之最差分數之平均值。
病毒排出
比較甲基鹽黴素含量(0mg/kg、30mg/kg、60mg/kg)對哺乳豬之每日內病毒排出之效果(表4)及排出PEDV之哺乳豬的百分比(表5)之效果。自研究之第0天至第14天每天自所有測試的豬收集糞拭子。每一試樣標記有豬鑑別、圍欄號及試樣日期。所有試樣在收集之時冷凍並儲存直至需要分析為止。僅發送自第0天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天及第14天收集之糞拭子試樣用於分析。將糞拭子試樣發送至愛荷華州獸醫診斷實驗室(Iowa State Veterinary Diagnostic Laboratory,ISVDL)並使用即時RT-PCR分 析以測定PEDV之病毒排出。
當與對照相比時，在研究之第2天及第3天餵食30mg/kg甲基鹽黴素之豬具有較低(P<0.10)病毒排出，並直至研究之第7天始終具有數值上較低病毒排出。在研究之第2天、第3天、第4天、第5天及第6天餵食60mg/kg甲基鹽黴素之豬具有較低(P<0.10)病毒排出，並在研究 之第7天及第8天具有數值上較低的病毒排出(表4)。
甲基鹽黴素含量對排出PEDV之豬的百分比無效果(P>0.10)，但隨著甲基鹽黴素含量增加排出之持續時間通常減小。
組織學
分析甲基鹽黴素納入含量對腸組織學分數及免疫組織化學之效果。隨著甲基鹽黴素含量自0mg/kg、30mg/kg、60mg/kg增加，組織學分數自2減少至0，而免疫組織化學分數僅在60mg/kg含量下減少(自3至2)，但差異並不顯著(P>0.05)。

Claims (5)

  1. 一種甲基鹽黴素之用途，其用於製造供治療哺乳豬之豬流行性腹瀉病毒(PEDV)感染之藥劑。
  2. 如請求項1之用途，其中該藥劑進一步包含經口可接受之載劑。
  3. 如請求項2之用途，其中該經口可接受之載劑係選自包含動物飼料、除動物飼料之外之液體組合物及除動物飼料之外之固體組合物之群。
  4. 如請求項1或2之用途，其中甲基鹽黴素之濃度係選自約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg及約60mg/kg之組合物之群。
  5. 一種甲基鹽黴素之用途，其用於製造供治療哺乳豬之豬流行性腹瀉病毒(PEDV)感染之藥劑，其中該藥劑係與動物飼料一起投與，其中甲基鹽黴素係以約60mg/kg該動物飼料之濃度存在。
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