TW201628509A

TW201628509A - 含有肽成分之營養增補劑和彼之用途

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Publication number: TW201628509A
Application number: TW104133880A
Authority: TW
Inventors: 艾瑞克凡圖; 麥利克舒馬克; 加布利爾格羅斯; 泰爾斯蘭伯斯; 彼得韋林加; 羅柏特克里曼
Original assignee: 美強生營養品美國控股公司
Priority date: 2014-11-06
Filing date: 2015-10-15
Publication date: 2016-08-16
Also published as: WO2016073126A1; AU2015343607A1; US10933114B2; BR112017008776A2; MX2017005776A; CA2962133A1; AR102545A1; CN107073071A; EP3214953A1; US11077166B2; US20210244787A9; US10251928B2; US20190224273A1; US20160129071A1; SG11201702035WA; US20190240283A1; PH12017500740A1

Abstract

本發明關於包括肽成分之營養增補劑。該營養增補劑另包括長鏈多不飽和脂肪酸來源及鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG)。本發明另關於藉由提供本發明所揭示之營養增補劑予目標個體(其包括小兒個體)以防備免於肥胖症及彼之相關代謝失調及發炎疾病之方法。

Description

含有肽成分之營養增補劑和彼之用途

本發明關於用於預防或防備免於肥胖症、第2型糖尿病、心血管疾病、肝脂肪變性(hepatosteatosis)、認知及/或腎功能障礙的發展之營養增補劑，該營養增補劑包括肽成分；包括二十二碳六烯酸(“DHA”)和二十碳四烯酸(“ARA”)的長鏈多不飽和脂肪酸(“LCPUFA”)之來源；及鼠李醣乳酸桿菌GG(“LGG”)。

在一些實施態樣中，在本文中所揭示之營養增補劑可減少包括代謝症候群的主要風險因子，包括減少體脂肪質量(body fat mass)、膽固醇、胰島素抗性、及血管和慢性發炎。本文中所述之營養增補劑係適用於投與至成人及小兒個體。

此外，本發明提供用於減少代謝症候群主要風險因子之方法，該方法包含提供包括肽成分、LCPUFA、及LGG之營養增補劑予目標個體。進一步在本文中所揭示者係用於藉由提供本文中所述之包括肽成分、LCPUFA、及LGG之營養增補劑予目標個體以防備免於肥胖症及彼之相關失調之方法。

肥胖症係代謝症候群的特點且為常與包括第2型糖尿病之慢性疾病發展相關聯的主要全球健康問題。兒童肥胖症在過去二十多年來已大幅增加，且代謝症候群併發症、心血管、肌肉/骨骼及內分泌併發症會在幼兒期開始。又，孩童的非酒精性脂肪肝疾病及認知障礙(cognitive impairment)的發生率有上升。咸認為低度/慢性發炎的增加係疾病發展的驅動力。

因此，有用的是，提供能夠保護個體免於肥胖症、代謝失調、及相關慢性發炎疾病的營養增補劑或醫療食品。特定言之，有用的是，在出生早期予以保護而免於肥胖症及相關代謝失調，以減少或預防成人代謝疾病。

因此，本發明提供包括肽成分之營養增補劑，該肽成分包含經選擇之如本文所述之個別肽。在一些實施態樣中，該肽成分包含該下列肽：SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60、及SEQ ID NO 63。在一些實施態樣中，該肽成分包含至少10個選自表1之另外的肽。

在一些實施態樣中，該肽成分可包括含有至少5個選自表1的肽及至少3個選自表2之另外的肽之肽成分。又在其他實施態樣中，該肽成分可包含至少10個選自表1之另外的肽。

未受限於任何特定理論，咸信當個體攝取如本文所述之肽成分、LCPUFA來源、及LGG之組合時，可具有對脂聯素(adiponectin)量、體重、脂肪沈積(fat deposit)、腎及肝功能、血漿的與代謝症候群相關的風險因子之量、脂肪細胞(adipocyte)功能、及認知之有利效果。再者，本發明包括藉由提供包括如本文中所揭示之包括該肽成分、LCPUFA來源、及LGG之營養增補劑以保護而免於肥胖症、心血管疾病、及其他代謝失調和併發症之方法。

簡言之，本發明在一實施態樣中係關於一種包含肽成分之營養增補劑，該肽成分包括下列肽：SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60、及SEQ ID NO 63。在一些實施態樣中，該肽成分可包含至少10個選自表1之另外的肽。

在一些實施態樣中，該肽成分可包含至少5個選自表1之肽及至少3個選自表2之肽。又在其他實施態樣中，該肽成分可包含至少10個選自表1之另外的肽。

在一些實施態樣中，該營養增補劑包括肽成分，其中5%至100%的該肽成分包含來自表1和/或表2的經選擇之肽，且5%至100%的該肽成分包含存在於經水解之蛋白質來源(諸如經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、及彼等之組合)中之肽。

本發明之營養增補劑可進一步包含LCPUFA、LGG、及彼等之組合之來源。在一些實施態樣中，該營養增補劑可提供於或併以小兒營養組成物、嬰兒配方、營養添加物、或成人營養組成物中。

在一些實施態樣中，本發明係關於藉由提供包括如本文中所揭示之包括該肽成分、LCPUFA來源、及LGG之營養增補劑以保護而免於肥胖症之方法。進一步地，本發明提供用於減少目標個體的體重、總體脂肪質量、和/或皮下脂肪質量之方法，該方法包括提供如本文中所揭示之包括肽成分、LCPUFA來源、及LGG之營養增補劑。

在一些實施態樣中，本發明提供用於促進適當腎和/或肝功能之方法，該方法包括提供如本文中所揭示之包括肽成分、LCPUFA來源、及LGG之營養增補劑。

在一些實施態樣中，本發明提供用於減少血漿的代謝症候群風險因子之量之方法，該方法包括提供如本文中所揭示之包括肽成分、LCPUFA來源、及LGG之營養增補劑。在一些實施態樣中，提供在本文中所揭示之營養增補劑強烈地減少膽固醇及血漿三酸甘油酯量、空腹胰島素量、全身性及血管發炎、C-肽量、GIP量、及瘦素(leptin)量。

在一些實施態樣中，本發明提供用於誘發白色脂肪生成(white adipogenesis)和/或促進功能性脂肪形成之方法，該方法包括提供如本文中所揭示之包括肽成分、LCPUFA來源、及LGG之營養增補劑。

在一些實施態樣中，本發明係關於藉由提供在本文中所揭示之營養增補劑而於目標個體中減少和/或預防代謝紊亂及減少代謝疾病風險因子之膳食管理。

又在一些實施態樣中，本發明提供藉由提供如本文中所揭示之包括肽成分、LCPUFA來源、及LGG之營養增補劑而保護以免於認知退化(cognitive degeneration)、腦發炎、和/或預防認知障礙之方法。

未受限於任何特定理論，如本文所述之該肽成分、LCPUFA、及LGG之組合可提供未於個別投與各化合物所觀察到之加乘性(synergistic)和/或相加性(additive)健康效益。舉例而言，該肽成分、LCPUFA、及LGG之組合可提供有關針對肥胖症及代謝風險因子之加乘性效果。所揭示之營養組成物能提供相加性及/或加乘性有益健康效果。

應了解的是，上述之一般說明及下列之詳細說明兩者均呈現本發明之實施態樣，且意欲提供用於了解本案所請之發明的本質及特性之概覽或架構。該說明作為解釋所請標的物的原理及操作。熟悉本技術領域者於閱讀下列揭示，將清楚明瞭本揭露的其他及進一步特徵及優點。

圖1A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週期間之體重。

圖1B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後之增重。

圖1C描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠之食物攝入量(g/日/小鼠)。

圖2A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週期間之空腹血糖。

圖2B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後之空腹血糖。

圖2C描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週期間之空腹血漿胰島素。

圖2D描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後之空腹血漿胰島素。

圖2E描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週期間之HOMA-IR。

圖3A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週期間之空腹血漿膽固醇。

圖3B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後之空腹血漿膽固醇。

圖3C描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週期間之空腹血漿三酸甘油酯。

圖3D描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後之空腹血漿三酸甘油酯。

圖4A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週期間之總體脂肪。

圖4B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週期間之去脂體質量(lean body mass)。

圖5A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後犧牲時之肝組織重量。

圖5B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後犧牲時之鼠蹊脂肪組織重量。

圖5C描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後犧牲時之副睪脂肪組織重量。

圖5D描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠；飼以HFD且僅增補ARA及DHA的小鼠；飼以HFD且僅增補LGG的小鼠；及飼以HFD且僅增補肽成分的小鼠於21週後犧牲時之腸繫膜脂肪組織重量。

圖6A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分(fraction)之肽成分的小鼠於21週期間之體重。

圖6B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週後之增重。

圖7A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週期間之空腹血糖。

圖7B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週期間之空腹血漿胰島素。

圖8A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週期間之空腹血漿膽固醇。

圖8B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週期間之空腹血漿三酸甘油酯。

圖9A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週期間之總體脂肪。

圖9B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週期間之去脂體質量。

圖10A描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週後犧牲時(t=第21週)之肝組織重量。

圖10B描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週後犧牲時(t=第21週)之鼠蹊脂肪組織重量。

圖10C描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週後犧牲時(t=第21週)之副睪脂肪組織重量。

圖10D描繪飼以高脂肪膳食(HFD)(對照組)的小鼠；飼以HFD且增補肽成分的小鼠；及飼以HFD且增補>500Da級分之肽成分的小鼠於21週後犧牲時(t=第21週)之腸繫膜脂肪組織重量。

圖11A描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食(gavage)的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之體重。

圖11B描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之食物攝入。

圖12A描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食(gavage)的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之空腹血糖。

圖12B描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食(gavage)的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之空腹血漿胰島素。

圖13A描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食(gavage)的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之血糖。

圖13B描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之血漿胰島素。

圖14A描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之空腹血漿膽固醇。

圖14B描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之空腹血漿三酸甘油酯。

圖15A描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之空腹血漿血清類澱粉蛋白A。

圖15B描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之空腹血漿VCAM-1。

圖16A描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之白蛋白脲(albuminurea)。

圖16B描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之循環ALAT。

圖16C描繪飼以低脂肪膳食(LFD)的小鼠；飼以HFD的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠之肝內空泡形成(vacuolation)。

圖17描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠在21週時之總體脂肪及去脂體質量。

圖18描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週後犧牲時(t=第21週)之來自肝、副睪脂肪、腸繫膜脂肪及鼠蹊脂肪之組織重量。

圖19A描繪飼以HFD的小鼠；飼以低脂肪膳食(“LFD”)的小鼠；飼以HFD+PBS胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠於21週期間之副睪脂肪、腸繫膜脂肪、及鼠蹊脂肪中的皇冠樣(crown-like)結構數目。

圖19B呈現來自HFD+PBS胃管灌食對照組小鼠的具有皇冠樣結構之副睪脂肪橫切面的代表性顯微照相。

圖19C呈現來自NHLL小鼠(飼以肽成分、LGG、ARA及DHA(NHLL))的副睪脂肪橫切面的代表性顯微照相。

圖20描繪飼以低脂肪膳食(LFD)的小鼠；飼以高脂肪膳食(HFD)的小鼠；飼以HFD+胃管灌食的小鼠；及飼以HFD且增補肽成分、LGG、ARA、及DHA(NHLL)的小鼠之一個腦半球之qPCR數據。

發明詳細說明

現將詳細參照本發明之實施態樣，在下文會說明一或多個實施例。各實施例係提供用來解釋本發明之營養增補劑，而非限定本發明。事實上，熟習本技術領域者將清楚瞭解可在未悖離本發明之範圍下對本發明之教示作各種修飾或變異。例如，經描繪或描述作為一個實施態樣的一部分之特徵，可與另一實施態樣併用，以產生又另一實施態樣。

因此，本發明意欲將這類修飾及變異包含在後附之申請專利範圍及其等效物的範圍內。本發明之其他目的、特徵、及態樣揭示於下列詳細說明中，或可從下列詳細說明中清楚明白。本發明所屬技術領域中具有通常知識者可了解本討論內容僅說明例示性實施態樣，且不欲作為限制本發明之較廣態樣。

本發明大體上關於包含肽成分之營養增補劑。在一些實施態樣中，該肽成分可包含下列肽：SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60、及SEQ ID NO 63。在一些實施態樣中，該肽成分可包含至少10個揭示於表1中之另外的肽。

當包括該肽成分、LCPUFA、及LGG之該營養增補劑經投與至個體時，彼具有對代謝、發炎反應、及認知之有利功效。舉例而言，在一些實施態樣中，該營養增補劑減少總膽固醇量。在某些實施態樣中，該營養增補劑減少三酸甘油酯。

“營養組成物”意指滿足至少一部分個體營養素需求之物質或配方品。用語“營養”、“營養配方”、“腸道營養”、及“營養增補劑”係用作為本發明整體之營養組成物的非限定性實例。再者，“營養組成物”可指液體、粉末、凝膠、糊劑、固體、濃縮物、懸浮、或即用形式之腸道配方、口服配方、嬰兒用配方、小兒個體用配方、孩童用配方、成長乳、和/或成人用配方。

用語“腸道(的)”意指可透過胃腸或消化道或於胃腸或消化道內投遞的。“腸道投與”包括口服餵食、胃內餵食、經由幽門(transpyloric)投與、或任何其他投與至消化道中。“投與”較“腸道投與”廣義，且包括非經腸道投與或任何物質攝入個體體內的其他投與途徑。

用語“醫療食品”係指經調配或意欲用於疾病或失調之膳食管理之經腸組成物(enteral composition)。醫療食品可為用於口服攝入或經管餵食(胃管)之食物，可標示為用於有不同營養需求之特定醫療失調、疾病或病況之膳食管理，且可意欲在醫療監督下使用。

如本文中所使用，用語“肽”描述直鏈胺基酸分子鏈，其包括單鏈分子或彼等之片段。本文中所述之肽可包括約2個總胺基酸至約50個總胺基酸。在一些實施態樣中，肽可包括約2個總胺基酸至約75個胺基酸。又在一些實施態樣中，肽可包括約2個胺基酸至約100個胺基酸。進一步地，在一些實施態樣中，該肽成分可包括具有至少2個總胺基酸及不多於50個總胺基酸之肽。肽可另形成寡聚物或由至少二個相同或相異分子組成之多聚體。

用語“肽”亦可指天然經修飾之肽，其中該修飾係例如藉由本技術領域中已熟知之醣苷化、乙醯化、磷酸化及類似修飾而產生。在一些實施態樣中，該肽成分係有別於亦在本文中所揭示之蛋白質來源。進一步，肽可例如經重組、半合成、合成製造，或獲自天然來源，諸如包括但不限於酪蛋白之蛋白質的水解，所有均根據本技術領域中已知之方法。又，此等胺基酸和/或肽鍵業經功能性類似物所置換的肽之擬肽物(peptidomimetic)亦涵蓋於用語“肽”。此等功能性類似物可包括但不限於所有已知的20個基因所編碼之胺基酸以外的胺基酸，諸如硒半胱胺酸。

用語“肽成分(peptide component)”係指至少一個個別肽、複數個個別肽、及彼等之組合。舉例而言，在一些實施態樣中，該肽成分可包含來自經大量水解酪蛋白的經選擇之肽。在某些實施態樣中，該肽成分可包含由胺基酸序列所辨識之胺基酸序列、選自經水解之蛋白質(包括經大量水解之蛋白質及經部分水解之蛋白質、及彼等之組合)之特定肽。

用語“水解度”係指肽鍵藉由水解方法斷裂的程度。舉例而言，本發明之蛋白質等效來源在一些實施態樣中可包含具有不大於40%水解度之蛋白質。

用語“經部分水解”意指具有大於0%但小於50%的水解度。

用語“經大量水解”意指具有大於或等於50%的水解度。

用語“莫耳質量分布(molar mass distribution)”當用於指涉經水解之蛋白質或蛋白質水解產物時，係有關該蛋白質水解產物中存在的各肽之莫耳質量。舉例而言，具有莫耳質量分布大於500道耳頓之蛋白質水解產物意指包括於蛋白質水解產物中的各肽具有至少500道耳頓之莫耳質量。因此，在一些實施態樣中，揭示於表1及表2之肽係源自具有莫耳質量分布大於500道耳頓之蛋白質水解產物。為製造具有莫耳質量分布大於500道耳頓之蛋白質水解產物，蛋白質水解產物可予以用於移除具有莫耳質量小於500道耳頓的肽、胺基酸、和/或其他蛋白質物質的某些過濾程序或任何其他本技術領域中已知之程序。為本發明之目的，可使用任何本技術領域中已知之方法以製造具有莫耳質量分布大於500道耳頓之蛋白質水解產物。

用語“蛋白質等效(物)(protein equivalent)”或“蛋白質等效來源”包括任何蛋白質來源，諸如大豆、蛋、乳清、或酪蛋白，和非蛋白質來源，諸如肽或胺基酸。進一步，該蛋白質等效來源可為任何本技術領域中所使用者，例如脫脂奶、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、經水解之蛋白質、胺基酸等等。可用於實施本發明之牛乳蛋白來源包括但不限於乳蛋白粉末、乳蛋白濃縮物、乳蛋白分離物、脫脂奶固體、脫脂奶、脫脂奶粉、乳清蛋白、乳清蛋白分離物、乳清蛋白濃縮物、甜乳清、酸乳清、酪蛋白、酸酪蛋白、酪蛋白鹽(例如酪蛋白鈉、酪蛋白鈣鈉、酪蛋白鈣)、大豆蛋白、及任何彼等之組合。該蛋白質等效來源在一些實施態樣中可包含經水解之蛋白質，該經水解之蛋白質包括經部分水解之蛋白質及經大量水解之蛋白質。該蛋白質等效來源在一些實施態樣中可包括完整蛋白質。

用語“蛋白質等效來源”亦涵蓋游離胺基酸。在一些實施態樣中，該些胺基酸可包含但不限於組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、半胱胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、色胺酸、纈胺酸、丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、脯胺酸、絲胺酸、肉鹼、牛磺酸、及彼等之混合物。在一些實施態樣中，該些胺基酸可為支鏈胺基酸。在某些其他實施態樣中，小胺基酸肽可被包含作為該營養增補劑之蛋白質組分。此等小胺基酸胜肽可為天然存在或經合成者。

“小兒個體”意指年齡小於13歲的人。在一些實施態樣中，小兒個體係指介於出生及8歲之間的人個體。在其他實施態樣中，小兒個體係指介於1及6歲之間的人個體。在又進一步之實施態樣中，小兒個體係指介於6及12歲之間的人個體。術語“小兒個體”如下所述可係指嬰兒(早產或足月產)及/或孩童。

“嬰兒”意指年齡範圍在出生至不大於一歲的人個體，且包括矯正年齡(corrected age)為0至12個月的嬰兒。短語“矯正年齡”意指嬰兒的出生後年齡(chronological age)扣除嬰兒未成熟出生的時間數。因此，若嬰兒足月出生，矯正年齡係嬰兒的歲數。嬰兒一詞包括低出生體重嬰兒、極低出生體重嬰兒、及早產嬰兒。“早產”意指在第37週妊娠結束之前出生的嬰兒。“足月產”意指在第37週妊娠結束之後出生的嬰兒。

“孩童”意指年齡範圍在12個月至約13歲的個體。在一些實施態樣中，孩童係年齡介於1及12歲之間的個體。在其他實施態樣中，用語“孩童”係指介於一歲及約六歲、或介於約七歲及約12歲的個體。在其他實施態樣中，用語“孩童”係指任何介於12個月及約13歲之間的年齡範圍。

“孩童營養產品”係指滿足至少一部分孩童營養需求之組成物。成長乳係孩童營養產品的實例。

“嬰兒配方”意指滿足至少一部分嬰兒營養需求之組成物。在美國，嬰兒配方的內容物係由美國聯邦法規第21篇第100、106、及107節所列之聯邦法規所規定。這些法規定義巨量營養素、維生素、礦物質、及其他成分量，以致力於模擬人乳的營養及其他性質。

用語“成長乳”係指意欲被用作為多樣性膳食的一部分的廣泛範疇之營養組成物，以便支持年齡介於約1及約6歲的孩童之正常生長及發育。

“營養完整的”意指可作為唯一之營養來源的組成物，該組成物可基本上提供所有每日需要量之維生素、礦物質及/或微量元素，加上蛋白質、碳水化合物和脂質。事實上，“營養完整的”描述提供支持個體正常生長及發育所需之適量的碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質和能源的營養組成物。

因此，對早產嬰兒“營養完整”之營養組成物將定義為定性且定量地提供早產嬰兒成長所需之適量的碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質、和能源。

對足月產嬰兒“營養完整”之營養組成物將定義為定性且定量地提供足月產嬰兒成長所需之適量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質、和能量。

對孩童“營養完整”之營養組成物將定義為定性且定量地提供孩童成長所需之適量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質、和能量。

如應用於營養素，用語“必需”係指任何無法由身體合成足以用於正常生長及維持健康的量而因此必須由膳食供應之營養素。用語“條件性必需”如應用於營養素則意指該營養素在發生身體無法獲得適量前驅物化合物以供內源性合成時的條件下必須藉由膳食來供應。

“益生素”意指一種非可消化性食品成分，其藉由選擇性刺激消化道中可改善宿主健康的一種或有限種細菌之生長及/或活性而對宿主具有益影響。

“益生菌”意指對宿主健康賦予至少一種有益效果之具有低或無致病性的微生物。

用語“(經)去活化(之)益生菌(inactivated probiotic)”意指所指涉之益生菌有機體的代謝活性或繁殖能力已被降低或破壞之益生菌。然而，該“去活化益生菌”於細胞層級下仍留存至少一部分其生物醣蛋白及DNA/RNA結構。如本文中所使用，該用語“去活化”與“非存活性”同義。更特定言之，去活化益生菌的非限定性實例為經去活化之鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG)(“LGG”)或“經去活化之LGG”。

除非另有指明，否則本文所使用之所有百分比、份數及比例係按總配方品(formulation)之重量計。

本發明之營養增補劑可為實質上不含任何本文中所述之隨意或經選擇成分，惟該剩餘其他的營養增補劑仍含有所有本文中所述之所需成分或特徵。在此前後文、及除非另有指明之下，用語“實質上不含”意指該經選擇之組成物可含有少於功能性含量的隨意成分，典型上少於0.1重量%、且亦包括零重量百分比的此種隨意或經選擇成分。

本發明所有指涉為單數特性或限制，應包括對應之複數特性或限制，反之亦然，除非另有指明或明確暗示與所指涉之前後文相反。

如本文中所使用之所有方法或程序步驟的組合可以以任何順序執行，除非另有指明或明確暗示與所指涉之前後文相反。

本發明之方法、增補劑、和組成物(包括彼之組分)可包含本文中所述之實施態樣的必要要素和限制、以及本文中所述之任何另外或隨意之成分、組分或限制或其他可用於營養增補劑者，或由彼等所組成或實質上由彼等所組成。

如本文中所使用，用語“約”應解讀為指涉經指定作為任何範圍的終點的兩個數值。任何對範圍之引用應被認為係提供對該範圍內之任何次集合的支持。

在一些實施態樣中，用於併入該營養增補劑之經選擇之成分可來自適合的非人有機體。事實上，在本文中所揭示之經選擇之成分可藉由已熟知之方法而合成製造、純化、修飾、和/或經營養強化。事實上，併入該營養增補劑之成分及添加劑可係人造且具有某些不會於自然界中存在物質觀察到的特性。在一些實施態樣中，在本文中所揭示之成分及營養素可具有某些有別於任何天然存在物質之物理和/或化學特性。

肥胖症係一種過量身體脂肪累積至造成對健康不良影響的程度之醫療病況。舉例而言，肥胖症可導致預期壽命(life expectancy)減少、心臟疾病、第2型糖尿病、阻塞型睡眠呼吸中止(obstructive sleep apnea)、非酒精性脂肪肝、及認知障礙。專家假設肥胖症係全球主要可預防性死因之一，且在成人及孩童盛行率有增加。

代謝症候群係通常描述一群提高某些疾病及健康問題(例如心臟疾病、糖尿病及中風)風險的風險因子之用語。通常，某些代謝及心血管疾病風險隨許多風險因子而增加。其他代謝風險因子包括胰島素抗性，其可增加代謝症候群風險。

因此，本發明大體上關於包含肽成分之營養增補劑，該肽成分包含SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 63、及彼等之組合。在一些實施態樣中，該肽成分可包含揭示於表1中之另外的肽。舉例而言，該組成物可包括至少10個揭示於表1中之另外的肽。在一些實施態樣中，20%至80%的該肽成分可包括來自表1和/或表2的經選擇之蛋白質，且20%至80%的該肽成分包含經部分水解之蛋白質、經大量水解之蛋白質、及彼等之組合。在一些實施態樣中，用語“另外(additional)”意指選擇與經列舉者不同之肽。

在另一實施態樣中，20%至80%之該肽成分包含至少3個選自選自由下列所組成的群組之肽：SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60、及SEQ ID NO 63；及至少5個選自表1之另外的肽；且其中20%至80%之該肽成分包含經部分水解之蛋白質、經大量水解之蛋白質、或彼等之組合。

下列表1列出可包括於營養增補劑之肽成分中的特定胺基酸序列。

下列表2列出可包括和/或包含在本文中所揭示之肽成分的來自表1之胺基酸序列次群組。

在一些實施態樣中，列於表1及2中的肽可由獲自牛乳蛋白(包括但不限於牛酪蛋白及牛乳清)之蛋白質等效來源而提供。在一些實施態樣中，該蛋白質等效來源包含經水解之牛酪蛋白或經水解之牛乳清。因此，在一些實施態樣中，列於表1及表2中之肽可由酪蛋白水解產物而提供。此等肽可藉由水解而獲得或可藉由熟習人士已知方法而試管內合成。利用蛋白解酶水解之方法之非限制性實例係揭示於Rangavajla等人的美國專利第7,618,669號，該案以引用方式全部併入本文中。然而，於實施本發明中，可使用其他水解方法。

在一些實施態樣中，該肽成分可包含約5%至約100%的列於表1及2中之經選擇之肽。又在一些實施態樣中，該肽成分可包含約10%至約90%的列於表1及2中之經選擇之肽。在一些實施態樣中，該肽成分可包含約15%至約80%的列於表1及2中之經選擇之肽。在一些實施態樣中，該肽成分可包含約25%至約65%的列於表1及2中之經選擇之肽。

在一些實施態樣中，該肽成分可包括存在於經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、及彼等之組合中之肽。在一些實施態樣中，該肽成分可包含約5%至約100%的來自於經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、或彼等之組合之肽。在一些實施態樣中，該肽成分可包含約10%至約90%的來自於經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、或彼等之組合之肽。在一些實施態樣中，該肽成分可包含約15%至約80%的來自於經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、或彼等之組合之肽。在一些實施態樣中，該肽成分可包含約25%至約65%的來自於經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、或彼等之組合之肽。在一些實施態樣中，該經大量水解之蛋白質係經大量水解之酪蛋白。在一些實施態樣中，該經部分水解之蛋白質係酪蛋白。

在一些實施態樣中，該肽成分包含經水解之蛋白質，該經水解之蛋白質包括經部分水解之蛋白質及經大量水解之蛋白質。在其他實施態樣中，該肽成分包含具有莫耳質量分布大於500道耳頓的肽之經水解之蛋白質。在某些實施態樣中，該經水解之蛋白質包含具有莫耳質量分布範圍在約100道耳頓至約3,000道耳頓內之肽。又在一些實施態樣中，該經水解之蛋白質可包含具有莫耳質量分布範圍在約500道耳頓至約2,500道耳頓內之肽。

在一些實施態樣中，該肽成分包含具有小於40%水解度的經部分水解之蛋白質。又在其他實施態樣中，該肽成分可包含具有小於25%、或小於15%水解度的經部分水解之蛋白質。

在一些實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以取決於目標個體而提供每日特定量。舉例而言，在一些實施態樣中，該肽成分可經調配以提供目標個體約5克/日至約每日15克。在某些實施態樣中，該肽成分可經調配以提供目標個體係嬰兒(0與1歲之間)約 5克/日至約每日15克。在一些實施態樣中，該肽成分係經調配以提供目標個體約7克/日至約11克/日。又在其他實施態樣中，該肽成分可經調配以提供約8克/日至約10克/日。

在該目標個體係年齡介於1至3歲之間的孩童之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約10克/日至約20克/日之量。又在一些該目標個體係年齡介於1至3歲之間的孩童之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約13克/日至約18克/日之量。

在該目標個體係年齡介於4至8歲之間的孩童之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約10克/日至約25克/日之量。又在一些該目標個體係年齡介於4至8歲之間的孩童之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約13克/日至約19克/日之量。

在該目標個體係年齡介於9至13歲之間之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約15克/日至約40克/日之量。又在一些該個體係年齡介於1至3歲之間之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約20克/日至約35克/日之量。

在該目標個體係年齡介於14至18歲之間之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約30克/日至約60克/日之量。又在一些該目標個體係年齡介於14至18歲之間之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約35克/日至約52克/日之量。

在該目標個體係年齡超過18歲之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約45克/日至約65克/日之量。又在一些該目標個體係年齡超過18歲之實施態樣中，該肽成分可經調配於該營養增補劑中，以提供約50克/日至約60克/日之量。

在一些實施態樣中，該肽成分可提供該目標個體唯一蛋白質營養來源。在一些實施態樣中，該營養增補劑係經調配而使10至35%的總每日熱量係自該肽成分所提供。在一些實施態樣中，該肽成分可經調配以提供約5%至約15%的總每日熱量。

在一些實施態樣中，該營養增補劑可包括該肽成分的量係約0.2g/100kcal至約5.6g/100kcal。在其他實施態樣中，該肽成分可以約1g/100kcal至約4g/100kcal的量存在於該營養增補劑中。又在其他實施態樣中，該肽成分可以約2g/100kcal至約3g/100kcal的量存在於該營養增補劑中。

在一些實施態樣中，該肽成分可包括於營養增補劑或組成物中作為唯一蛋白質物質來源。又在其他實施態樣中，該肽成分可包括於另包含完整蛋白質、胺基酸、及彼等之組合之營養增補劑或組成物中。

在某些實施態樣中，該營養增補劑可包括蛋白質等效來源。在某些實施態樣中，該蛋白質等效來源可包含本文中所述之肽成分。在一些實施態樣中，該蛋白質等效來源可包含游離胺基酸。在某些其他實施態樣中，小胺基酸肽可包括於該蛋白質等效來源中。此等小胺基酸肽可為天然存在或經合成者。該營養增補劑中的游離胺基酸量可介於約1g/100kcal至約5g/100kcal之間不等。

在一些實施態樣中，該蛋白質等效來源可包括經水解之蛋白質。舉例而言，在一些實施態樣中，該蛋白質等效來源可包括如本文所述之肽成分，且另包含經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、及彼等之組合。在一些實施態樣中，約5%至約95%的該蛋白質等效來源可包含本文中所述之肽成分，且約5%至約95%的該蛋白質等效來源可包含經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、胺基酸、及/或彼等之組合。在一些實施態樣中，約20%至約80%的該蛋白質等效來源可包含本文中所述之肽成分，且約20%至約80%的該蛋白質等效來源可包含經大量水解之蛋白質、經部分水解之蛋白質、胺基酸、及/或彼等之組合。

在一些實施態樣中，該營養增補劑包含每100kcal介於約1g與約7g之間的蛋白質等效來源。在其他實施態樣中，該營養增補劑包含每100kcal介於約3.5g與約4.5g之間的蛋白質等效來源。

在一些實施態樣中，於該肽成分係提供作為蛋白質等效來源的一部分時，該蛋白質等效來源可以約 0.2g/100kcal至約5.6g/100kcal的量存在於該營養增補劑中。在一些其他實施態樣中，於該肽成分係提供作為蛋白質等效來源的一部分時，該蛋白質等效來源可以約1g/100kcal至約4g/100kcal的量存在於該營養增補劑中。又在其他實施態樣中，於該肽成分係提供作為蛋白質等效來源的一部分時，該蛋白質等效來源可以約2g/100kcal至約3g/100kcal的量存在於該營養增補劑中。

本發明之營養增補劑亦可含有長鏈多不飽和脂肪酸(“LCPUFA”)來源。適合的LCPUFA包括但不限於DHA；二十碳五烯酸(“EPA”)；ARA；n-6路徑中的亞麻油酸(18：2 n-6)、γ-次亞麻油酸(18：3 n-6)、升二-γ-次亞麻油酸(dihomo-γ-linolenic)(20：3 n-6)；α-次亞麻油酸(18：3 n-3)；十八碳四烯酸(18：4 n-3)；二十碳四烯酸(20：4 n-3)；二十碳五烯酸(20：5 n-3)；及二十二碳五烯酸(22：6 n-3)。

LCPUFA在該營養增補劑中的量係至少約5mg/100kcal，且可為約5mg/100kcal至約100mg/100kcal不等，更佳為約10mg/100kcal至約50mg/100kcal不等。

LCPUFA的來源包括乳製品，像是蛋及乳脂；海洋油，諸如鱈、鯡、沙丁、鮪、及許多其他魚類；某些動物油、豬油、牛脂；以及微生物油，諸如真菌及藻類油，或來自任何其他經過或未經營養強化之資源，該些可獲得LCPUFA及使用於營養增補劑者。該LCPUFA可為藉由本技術領域中已知、目的為在此等混合物中富集LCPUFA及LCPUFA衍生物或前驅物的分離技術獲得之複合混合物的一部分。

該LCPUFA可以下列形式提供於該營養增補劑中：游離脂肪酸的酯類；單、二、及三甘油酯；磷酸甘油酯，包括卵磷脂；及/或彼等之混合物。另外，LCPUFA可以磷脂質、特別是磷脂醯膽鹼的形式提供於該營養增補劑中。

在一實施態樣中，該營養增補劑包含DHA及ARA兩者。在此實施態樣中，ARA：DHA的重量比可係介於約1：3與約9：1之間。在一特定實施態樣中，ARA：DHA的重量比係約1：2至約4：1。

在一些實施態樣中，DHA係以至少約17mg/100kcal、且可約5mg/100kcal至約75mg/100kcal不等而有利地存在於該營養增補劑中。在一些實施態樣中，DHA以約10mg/100kcal至約50mg/100kcal存在。

該營養增補劑可使用本技術領域中已知的標準技術以包含含有DHA及/或ARA的油。若利用時，該DHA及/或ARA來源可為任何本技術領域中已知之來源，諸如海洋油、魚油、單細胞油、蛋黃脂質、以及腦脂質。在一些實施態樣中，該DHA及ARA源自單細胞Martek油、DHASCO^®及ARASCO^®、或彼等之變異。該DHA及ARA可為天然形式，惟該LCPUFA來源的剩餘部分不會導致對目標個體的任何實質不利效果。或者，該DHA及 ARA可以經精製形式使用。

在一實施態樣中，DHA及ARA的來源為單細胞油，如美國專利第5,374,567；5,550,156；及5,397,591號所教示者，彼等之揭露以引用方式全部併入本文中。然而，本發明不限於僅此等油。

又，特別是該營養增補劑併入嬰兒配方時，該營養增補劑可包含一些營養組分為較人乳高量。舉例而言，該營養增補劑可包含比人乳多量的DHA。該營養增補劑的經增強之DHA量可補償存有的營養性DHA缺乏。

該營養增補劑亦包括鼠李醣乳酸桿菌GG(LGG)(ATCC號53101)。在一些實施態樣中，該營養增補劑亦可含有一或多種另外的益生菌。在此實施態樣中，可接受任何本技術領域中已知益生菌。在一特定實施態樣中，該益生菌可選自另一乳酸桿菌(Lactobacillus)菌種、雙叉桿菌(Bifidobacterium)菌種、長雙叉桿菌(Bifidobacterium longum)BB536(BL999,ATCC：BAA-999)、長雙叉桿菌AH1206(NCIMB：41382)、短雙叉桿菌(Bifidobacterium breve)AH1205(NCIMB：41387)、嬰兒雙叉桿菌(Bifidobacterium infantis)35624(NCIMB：41003)、及動物雙叉桿菌乳亞種(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)BB-12(DSM No.10140)或彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，該益生菌於該營養增補劑中的量可係每100kcal為約1×10⁴至約1.5×10¹⁰cfu的益生菌，更佳為每100kcal約1×10⁶至約1×10⁹cfu的益生菌。在某些其他實施態樣中，該益生菌的量可為約1×10⁷cfu/100kcal至約1×10⁸cfu/100kcal的益生菌不等。

在一些實施態樣中，該益生菌可經調配於該營養增補劑中以提供目標個體每日約0.1×10⁹至約1.7×10⁹cfu。在一些實施態樣中，該益生菌可經調配於該營養增補劑中以提供目標個體每日約0.4×10⁹至約1×10⁹cfu。又在其他實施態樣中，該益生菌可經調配於該營養增補劑中以提供目標個體每日約0.6×10⁹至約0.8×10⁹cfu。

在一實施態樣中，該益生菌可為存活性或非存活性。如本文中所使用，用語“存活性”係指活微生物。用語“非存活性”或“非存活性益生菌”意指非活益生菌微生物、它們的細胞組成及/或彼等之代謝物。此等非存活性益生菌可已經熱殺除或其他去活化，但它們留存有利影響宿主健康的能力。可用於本發明之益生菌可為天然存在、合成或透過基因操作有機體所開發，不論此種來源為現在己知或後來所開發者。

令人驚訝地，當本文中所述之肽成分連同LGG、ARA及DHA增補來測試時，觀察到肥胖症及第2型糖尿病實驗動物模式的增重減少。此外，本文中所述之肽成分與LGG、ARA及DHA投與展現對身體質量組成的有益效果。舉例而言，觀察到整體脂肪質量的減少、較低空腹胰島素量及較低膽固醇量。

因此，在一些實施態樣中，該營養增補劑包括肽成分、LGG、及至少一種選自ARA、DHA、及彼等之組合之長鏈多不飽和脂肪酸。未受限於任何特定理論，咸信這些要素之組合提供加乘性健康效益，諸如促進脂肪減少及降低膽固醇及三酸甘油酯量。

再者，在一些實施態樣中，可使用包括該肽成分、LCPUFA、及LGG之營養增補劑於肥胖症之膳食管理，以減少存有的肥胖症及代謝病況、減少存有的代謝風險因子、和/或防止另外的代謝病況。此外，在本文中所揭示之包括該肽成分之營養增補劑可提供予目標個體，以減輕現有肥胖症風險因子及潛在代謝病況和/或使該目標個體管理持續的代謝風險因子。在一些實施態樣中，包括該肽成分、LCPUFA、及LGG之營養增補劑可提供予目標個體，以幫助管理及促進代謝疾病風險因子減少。

本發明之包括該肽成分、LCPUFA、及LGG之營養增補劑該可以每日一或多劑來投與。任何口服可接受之劑型可涵蓋於本發明。此等劑型的實例包括但不限於九劑、錠劑、膠囊、軟凝膠、液體、液體濃縮物、粉末、酏劑、溶液、懸浮液、乳液、菱形含錠(lozenge)、珠粒、藥包、及其組合。

在一些實施態樣中，包括該肽成分、LCPUFA、及LGG之營養增補劑可加至較完整之營養產品。在此實施態樣中，該營養產品可含有另外之脂肪、蛋白質、及碳水化合來源或組分，且可使用以增補膳食或可用作為唯一營養來源。

此外，該營養增補劑可藉由任何本技術領域中已熟知之方法加入或併入該營養組成物。在一些實施態樣中，在本文中所揭示之營養增補劑可被加至營養組成物以增補該營養組成物。舉例而言，在一個實施態樣中，本發明之營養增補劑可被加至商業上可獲得之嬰兒配方。舉例而言，Enfalac、Enfamil®、Enfamil® Premature Formula、Enfamil® with Iron、Enfamil® LIPIL®、Lactofree®、Nutramigen®、Pregestimil®、以及ProSobee®(可獲自Mead Johnson & Company,Evansville,IN,U.S.A.)可以細菌代謝物連同益生菌及/或益生素組成物來增補，並用於實施本發明。

在一些實施態樣中，該營養增補劑包含至少一種碳水化合物來源。該碳水化合物來源可為任何本技術領域中所使用者，例如乳糖、葡萄糖、果糖、玉米糖漿固體、麥芽糊精、蔗糖、澱粉、稻米糖漿固體等等。該營養增補劑中的碳水化合物組分量典型上可介於約5g/100kcal與約25g/100kcal之間不等。在一些實施態樣中，該碳水化合物的量係介於約6g/100kcal及約22g/100kcal之間。在其他實施態樣中，該碳水化合物的量係介於約12g/100kcal及約14g/100kcal之間。在一些實施態樣中，玉米糖漿固體係較佳者。再者，為包含於該營養增補劑中，經水解、經部分水解、及/或經大量水解碳水化合物可為理想者，此乃彼等之易消化性所致。特定言之，經水解之碳水化合物較不可能含有致過敏抗原決定區 (epitope)。

適用於本文中之碳水化合物原料的非限制實例包括源自糯性或非糯性形式之玉米、樹薯、稻米、或馬鈴薯的經水解或完整、天然、或經化學修飾之澱粉。適合的碳水化合物之非限制實例包括各種經水解之澱粉，像是經水解之玉米澱粉、麥芽糊精、麥芽糖、玉米糖漿、葡萄糖、玉米糖漿固體、葡萄糖、及各種其他葡萄糖聚合物，及彼等之組合。其他適合的碳水化合物之非限制實例包括該些常稱為蔗糖、乳糖、果糖、高果糖玉米糖漿、不能消化之寡醣類者，例如寡果糖、及彼等之組合。

該營養增補劑亦可包含脂肪或脂質來源。用於本揭露之營養增補劑之營養組成物的適合脂肪或脂質來源可為任何本技術領域中所已知或使用者，其包括但不限於動物來源，例如乳脂肪、奶油、奶油脂肪、蛋黃脂質；海洋來源，諸如魚油、海洋生物油、單細胞油；蔬菜和植物油，諸如玉米油、加拿大菜籽油(canola oil)、葵花油、大豆油、棕櫚液態油(palm olein oil)、椰子油、高油酸葵花油、月見草油、菜籽油、橄欖油、亞麻仁(亞麻籽)油、棉籽油、高油酸紅花油、棕櫚油硬脂(palm stearin)、棕櫚仁油、小麥胚芽油；中鏈三酸甘油酯油和脂肪酸之乳劑和酯類；以及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，該營養增補劑包括約1.3g/100kcal至約7.2g/100kcal之間的脂肪或脂質來源。在其他實施態樣中，該脂肪或脂質來源可以約2.5g/100 kcal至約6.0g/100kcal的量存在。又在其他實施態樣中，該脂肪或脂質來源可以約3.0g/100kcal至約4.0g/100kcal的量存在於該營養增補劑中。

在某些實施態樣中，該營養增補劑亦可含有一或多種益生素(亦稱為益生素來源)。益生素可刺激經攝入之益生菌微生物的生長及/或活性、選擇性減少腸中可見之病原體、以及有利影響腸的短鏈脂肪酸數據(profile)。此等益生素可為天然存在、合成、或透過基因操作生物體和/或植物開發，不論此種新來源為現在己知或後來所開發者。可用於本發明之益生素可包括寡醣、多醣、以及其他含有果糖、木糖、大豆、半乳糖、葡萄糖及甘露糖之益生素。

更特定言之，可用於本揭露之益生素可包括聚右旋糖、聚右旋糖粉末、乳果糖(lactulose)、乳果寡糖(lactosucrose)、棉子糖、葡萄糖寡糖、菊糖、果糖寡糖、異麥芽糖寡糖、大豆寡糖、乳果寡糖、木糖寡糖、幾丁寡糖(chito-oligosaccharide)、甘露糖寡糖、阿拉伯糖寡糖、唾液酸寡糖、海藻糖寡糖、半乳糖寡糖、及龍膽寡糖(gentio-oligosaccharide)。

在一些實施態樣中，在該營養增補劑中所存在的益生素總量可為約0.1g/100kcal至約1g/100kcal。在某些實施態樣中，在該營養增補劑中所存在的益生素總量可為約0.3g/100kcal至約0.7g/100kcal。

再者，該營養增補劑可包含益生素組分，該益生素組分包含聚右旋糖(“PDX”)及/或半乳糖寡糖(“GOS”)。在一些實施態樣中，該益生素組分包含至少20%的GOS、PDX、或彼等之混合。若PDX用於該益生素組成物中，在一實施態樣中，PDX於該營養增補劑中的量可為約0.1g/100kcal至約1g/100kcal的範圍內。在另一實施態樣中，該聚右旋糖的量係約0.2g/100kcal至約0.6g/100kcal的範圍內。且又於其他實施態樣中，PDX於該營養增補劑中的量可為約0.1mg/100kcal至約0.5mg/100kcal。

若GOS用於該益生素組成物中，在一實施態樣中，GOS於該營養增補劑中的量可為約0.1g/100kcal至約1g/100kcal。在另一實施態樣中，該GOS於該營養增補劑中的量可為約0.2g/100kcal至約0.5g/100kcal。在其他實施態樣中，該GOS於該營養增補劑中的量可為約0.1mg/100kcal至約1.0mg/100kcal或約0.1mg/100kcal至約0.5mg/100kcal。

在一些實施態樣中，本發明之營養增補劑可包含來自益生菌批式培養法的指數生長末期之培養物上清液(之後，稱為“培養物上清液”)；在特定實施態樣中，該益生菌係LGG且可經併入作為LGG組分。批式培養培養物上清液(其亦可稱為“已使用培養基(spent medium)”)可具有保護抵抗病原體感染，包括阪崎氏克羅諾斯桿菌(C.sakazakii)之感染。特定言之，該經收得的培養物上清液可防止阪崎氏克羅諾斯桿菌侵入諸如腦之器官，且減少與阪崎氏克羅諾斯桿菌相關的死亡。

在一些實施態樣中，該營養增補劑包含來自益生菌批式培養法的指數生長末期之培養物上清液，以用於治療或預防病原體感染。在某些實施態樣中，該益生菌係LGG，且該病原體係阪崎氏克羅諾斯桿菌。

不欲受限於理論，咸信該培養物上清液活性可認定為來自經發現在LGG的批式培養之指數生長(或“對數”)期晚期所釋放至培養基中的組分混合物(包括蛋白質物質，且可能包括(胞外)多醣原料)。該培養物上清液之化學組成咸信為多種各種分子量之胺基酸、寡肽及多肽、及蛋白質之混合物。該培養物上清液可另包含多醣結構和/或核苷酸。在一些實施態樣中，該培養物上清液屬即全部、即未經級分之培養物上清液。進一步地，在一些實施態樣中，該培養物上清液屬即全部、即未經級分之培養物上清液。

在一些實施態樣中，根據本發明和/或彼之實施態樣的組成物可藉由包含下列之步驟的方法而獲得：(a)將諸如LGG之益生菌於適合培養基中使用批式法予以培養；(b)於培養步驟的指數生長期末期收獲培養物上清液，該指數生長期末期係依批式培養法的遲滯期及停滯期之間的時間之後半期界定；(c)自該上清液隨意地移除低分子量組成分，以留存分子量組成分超過5千道耳頓(kDa)或甚而超過6kDa者；(d)自該培養物上清液移除液體含量，以獲得該組成物。

除了上述者之外，應注意的是，該乳酸桿菌(包括LGG)之批式培養係熟習本技術領域者可獲得之一般通常知識。由此，這些方法在此不需另外闡釋。本發明之培養物上清液可藉由任何已知將培養物上清液與細菌培養物分離的技術而收得。此等技術係本技術領域中已熟知者，且包括例如離心、過濾、沈降等等。

在一些實施態樣中，該營養增補劑可包含生物功能肽。未受限於任何特定理論，咸信這些生物功能肽與包括肽成分、LCPUFA、及LGG的營養增補劑之組合，可提供加乘性健康效益。這些加乘性益處可影響體重發展、脂質代謝、胰島素抗性或其他肥胖症或發炎相當結果指標。

該揭示之營養增補劑可以任何本技術領域中已知的形式提供，例如粉末、凝膠、懸浮液、糊劑、固體、液體、液體濃縮物、可配製重組之粉末化乳取代物、或即用產品。在某些實施態樣中，該營養增補劑可加至或併入孩童營養產品、嬰兒配方、人乳強化營養品、成長乳、或任何其他經設計以供嬰兒或小兒個體之用的營養組成物。本發明之營養增補劑可例如包括於任何經口攝入、健康促進物質，包括例如食品、飲料、錠劑、膠囊及粉末。再者，本發明之營養增補劑可經標準化至特定熱量含量，其可提供作為即用產品，或其可以濃縮形式提供。在一些實施態樣中，該營養增補劑係粉末形式，具有範圍在5μm至1500μm、更佳為範圍在10μm至300μm的粒徑。

若該營養增補劑係即用產品形式，該營養增補劑的重量滲透濃度(osmolality)可介於約100及約1100mOsm/kg水、更典型為約200至約700mOsm/kg水。

在某些實施態樣中，該營養增補劑係低致敏性。在其他實施態樣中，該營養增補劑係符合猶太律法食物(kosher)和/或清真食物(halal)。在又進一步之實施態樣中，該營養增補劑含有非基因改造成分。在一實施態樣中，該營養增補劑品係不含蔗糖。該營養增補劑亦可不含乳糖。在其他實施態樣中，該營養增補劑不含任何中鏈三酸甘油酯油。在一些實施態樣中，未有角叉菜膠存在於該增補劑中。在其他實施態樣中，該營養增補劑不含所有膠類。

本發明之營養增補劑不限於包含特別列於本文中之營養素的組成物。任何營養素可投遞作為該增補劑一部分以供符合個體內營養需求和/或以便最佳化個體內營養狀態之目的。

再者，在一些實施態樣中，該營養增補劑可隨意地包括許多蛋白質、肽、胺基酸、脂肪酸、益生菌、及/或彼等之代謝副產物、益生素、碳水化合物、及任何可提供個體許多營養及生理益處的其他營養素或其他化合物。另，本揭露之營養增補劑可包含風味劑、風味增強劑、甜味劑、色素、維生素、礦物質、治療成分、功能性食物成分、食物成分、加工成分、或彼等之組合。

在一些實施態樣中，本發明之營養增補劑可被加至成長乳。成長乳係意欲針對超過1歲的孩童(典型上為1至3歲、4至6歲、或1至6歲)的經營養強化之以乳為底質的飲料。它們並非醫療食品，且並非意欲作為處理特定營養缺乏的正餐替代物或補充物。相反地，成長乳係經設計欲作為多樣性膳食的互補物，以提供孩童達到持續、每日攝入所有必需維生素及礦物質、巨量營養素和額外功能性膳食組分(諸如具有據信可促進健康性質非必需營養素)的額外保障。

根據本揭露之營養增補劑的精確組成可依市場而異，其取決於當地法規及所關注之族群的膳食攝入資訊。在一些實施態樣中，根據本發明之營養增補劑由例如全乳或脫脂乳之乳蛋白來源組成，且外加糖及甜味劑以達到所欲之感官性質，以及外加維生素及礦物質。脂肪組成物典型上係源自乳原料。總蛋白質可為調整標的以符合人乳、牛乳、或較低值之總蛋白質。總碳水化合物係通常為調整標的以盡可能提供極少的外加糖(例如蔗糖或果糖)，以達到可接受之口味。典型上，加入維生素A、鈣、及維生素D至符合地區性牛乳貢獻之營養素的量。抑或是，在一些實施態樣中，可加入維生素及礦物質至提供約膳食營養素參考攝取量(DRI)的20%或每份供應量的每日營養素攝取量基準值(DV)的20%之量。又，營養素值可依市場而異，取決於經確認之所關注族群的營養需求、原料貢獻及地區性法規。

一或多種維生素和/或礦物質亦可以足以供應個體每日營養需求的量加至該營養增補劑中。本發明所屬技術領域中具有通常知識者應可了解，維生素及礦物質需求會例如依孩童的年齡而各異。例如，嬰兒可具有與年齡介於一歲及十三歲之間的孩童不同的維生素及礦物質需求。因此，本實施態樣不意欲將該營養增補劑限制於特定年齡群，而意欲提供可接受之維生素及礦物質需求範圍。

在提供用於孩童之營養增補劑之實施態樣中，該營養增補劑可隨意地包括但不限於下列維生素或彼等之衍生物之一或多者：維生素B₁(噻胺、噻胺焦磷酸酯、TPP、三磷酸噻胺(thiamin triphosphate)、TTP、噻胺鹽酸鹽、噻胺硝酸鹽)；維生素B₂(核黃素、黃素單核苷酸、FMN、黃素腺嘌呤二核苷酸、FAD、乳黃素、卵核黃素)；維生素B₃(菸鹼酸(niacin)、菸鹼酸(nicotinic acid)、菸鹼醯胺(nicotinamide)、菸鹼醯胺(niacinamide)、菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸、NAD、菸鹼酸單核苷酸、NicMN、吡啶-3-甲酸)、維生素B₃-前驅物色胺酸；維生素B₆(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺、吡哆醇鹽酸鹽)、泛酸(泛酸酯(pantothenate)、泛醇(panthenol))、葉酸鹽(葉酸、葉酸素(folacin)、喋醯麩胺酸)；維生素B₁₂(鈷胺素、甲基鈷胺素、去氧腺苷鈷胺素、氰基鈷胺素、羥基鈷胺素、腺苷鈷胺素(adenosylcobalamin))；生物素；維生素C(抗壞血酸)；維生素A(視網醇、乙酸視網酯(retinyl acetate)、棕櫚酸視網酯(retinyl palmitate)、與其他長鏈脂肪酸之視網酯類、視網醛、視網酸、視網醇酯類)；維生素D(鈣化醇、膽鈣化醇、維生素D₃、1,25,-二羥基維生素D)；維生素E(α-生育酚、α-生育酚乙酸酯、α-生育酚琥珀酯、α-生育酚菸鹼酸酯、α-生育酚)；維生素K(維生素K₁、葉醌、萘醌、維生素K₂、甲萘醌-7、維生素K₃、甲萘醌-4、2-甲萘-1,4-二酮、甲萘醌-8、甲萘醌-8H、甲萘醌-9、甲萘醌-9H、甲萘醌-10、甲萘醌-11、甲萘醌-12、甲萘醌-13)；膽鹼；肌醇；β-胡蘿蔔素、及任何彼等之組合。

在提供具有併入本發明之營養增補劑的孩童營養產品之實施態樣中，諸如成長乳，該孩童營養產品可隨意地包括但不限於下列礦物質或彼等之衍生物的一或多者：硼、鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣、氯化鈣、乳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、氯化物、鉻、氯化鉻、吡啶甲酸鉻、銅、硫酸銅、葡萄糖酸銅、硫酸銅(II)、氟化物、鐵、羰鐵、三價鐵、反丁烯二酸亞鐵、正磷酸鐵、鐵研磨物(iron trituration)、多醣鐵、碘化物、碘、鎂、碳酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂、硬脂酸鎂、硫酸鎂、錳、鉬、磷、鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鉀、乙酸鉀、硒、硫、鈉、琥珀酸辛酯磺酸鈉(docusate sodium)、氯化鈉、硒酸鈉、鉬酸鈉、鋅、氧化鋅、硫酸鋅、及彼等之混合物。非限制性例示性的礦物質化合物衍生物包括任何礦物質化合物的鹽類、鹼鹽、酯類及螯合物。

礦物質可以例如磷酸鈣、甘油磷酸鈣、檸檬酸鈉、氯化鉀、磷酸鉀、磷酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硫酸銅(II)、硫酸錳、及亞硒酸鈉的鹽類形式加至成長乳或其他孩童營養組成物。另外之維生素及礦物質可如本技術領域中已知者加入。

在一實施態樣中，孩童營養組成物每份維生素A、C及E、鋅、鐵、碘、硒及膽鹼可含有介於任何特定國家最大膳食建議量的約10及約50%之間、或介於多個國家平均膳食建議量的約10及約50%之間。在另一實施態樣中，孩童營養組成物每份維生素B群可供應任何特定國家最大膳食建議量的約10至30%、或多個國家平均膳食建議量的約10至30%。在又另一實施態樣中，該孩童營養產品中的維生素D、鈣、鎂、磷、及鉀量可與乳中的平均量相當。在其他實施態樣中，該孩童營養組成物中的其他營養素每份可占任何特定國家最大膳食建議量的約20%、或多個國家平均膳食建議量的約20%。

本發明之營養增補劑可隨意地包括一或多個下列調味劑，其包括但不限於：調味萃取物、揮發性油、可可或巧克力調味劑、花生醬調味劑、餅乾碎、香草或任何市售可得之調味劑。可用的調味劑實例包括但不限於純大茴香精、仿香蕉精、仿櫻桃精、巧克力精、純檸檬精、純橘子精、純薄荷精、蜂蜜、仿鳳梨精、仿蘭姆精(imitation rum extract)、仿草莓精、葡萄和/或葡萄子精、蘋果精、山桑精、或仿香草精；或揮發性油，例如蜂草油(balm oil)、月桂油、香柑油、雪松木油、櫻桃油、肉桂油、丁香油或薄荷油；花生醬、巧克力調味劑、香草餅乾碎、奶油糖、太妃糖、及彼等之混合物。調味劑含量可取決於使用之調味劑而有極大差別。調味劑的種類及含量可依本技術領域中已知者選擇。

本發明之營養增補劑可隨意地包括一或多種乳化劑，其可為成品的安定性而加入。適合的乳化劑實例包括但不限於卵磷脂(例如來自蛋或大豆或任何其他植物及動物來源)、α-乳白蛋白和/或單及二甘油酯、及彼等之混合物。其他乳化劑係熟悉本技術者明顯易知者，且選擇適合的乳化劑部分取決於配方品及成品。

本發明之營養增補劑可隨意地包括一或多種防腐劑，其亦可加入以延長產品保存期限。適合的防腐劑包括但不限於己二烯酸鉀、己二烯酸鈉、苄酸鉀、苄酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉鈣、及彼等之混合物。

本發明之營養增補劑可隨意地包括一或多種安定劑。適合用於實施本發明之營養組成物的安定劑包括但不限於阿拉伯膠、印度膠、刺梧桐膠、黃蓍膠、瓊脂、富塞蘭藻膠、瓜爾膠、結冷膠、刺槐豆膠、果膠、低甲氧果膠、明膠、微晶型纖維素、CMC(羧甲基纖維素鈉)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、DATEM(單及二甘油酯之二乙醯酒石酸酯類)、聚葡糖、角叉菜膠、CITREM、及彼等之混合物。

本發明另提供一種藉由提供目標個體如本文中所揭示之包含肽成分、LCPFUA、及LGG的營養增補劑以促進和/或維持健康體重之方法。

另提供的是藉由提供目標個體包括肽成分、LGG、及LCPUFA的營養增補劑以預防或保護目標個體免於肥胖症、第2型糖尿病、心血管疾病、肝脂肪變性、認知障礙、和/或腎功能之方法。此外，提供的是藉由提供目標個體包括肽成分、LGG、及LCPUFA的營養增補劑以減少目標個體代謝症候群主要風險之方法。

在一些實施態樣中，當提供或投與該目標個體在本文中所揭示之營養增補劑時，該目標個體可經歷體脂肪質量、膽固醇、胰島素抗性、及血管和慢性發炎、及彼等之組合的減少。投與在本文中所揭示之營養增補劑可提供下列健康效益：較低體重，儘管類似食物攝入亦然；較低空腹胰島素；較低血漿膽固醇；較低血漿三酸甘油酯；較低血清類澱粉蛋白A(“SAA”；全身性發炎標記)；較低微白蛋白尿(microalcuminurea)；較低腸繫膜脂肪；較低鼠蹊脂肪；較低副睪脂肪；較低肝質量；較低循環ALT量；及彼等之組合。未受限於任何特定理論，投與包括該肽成分、LGG及LCPUFA之組合的營養增補劑可提供加乘性(synergistic)和/或相加性(additive)健康效益。

進一步地，本發明可係關於具有潛在代謝風險因子或肥胖之目標個體的膳食管理方法。舉例而言，在本文中提供的是用於代謝風險因子之膳食管理之方法，該方法包含提供目標個體在本文中所揭示之營養增補劑。又進一步地，在本文中所提供之一些實施態樣係藉由提供目標個體包含該肽成分、LGG、ARA、及DHA的營養增補劑以減少目標個體疾病風險因子之方法。

此外，在本文中提供的是經由提供目標個體包括肽成分、LGG、及LCPUFA的營養增補劑以在目標個體中改善認知和/或防備免於認知障礙之方法。投與包括該肽成分、LGG、及LCPUFA之營養增補劑可有益地影響腦功能，包括提供受調控之腦發炎、血腦障壁、及腦功能相關之基因表現的量。進一步地，在本文中所提供的是藉由提供如本文中所揭示之包含該肽成分、LCPUFA、及LGG的營養增補劑以增加目標個體大腦衍生神經滋養因子(BDNF)基因表現之方法。進一步，在本文中所揭示的是藉由提供該目標個體在本文中所揭示之營養增補劑以在目標個體中促進神經元存活和/或促進新神經元生長及分化之方法。在一些實施態樣中，本發明係關於藉由提供目標個體在本文中所揭示之營養增補劑以在目標個體中增強突觸形成及促進長期記憶之方法。

在某些實施態樣中，本發明係關於藉由提供目標個體包含肽成分、LGG、及LCPUFA的營養增補劑而促進目標個體的腦內血管壁中血管完整性。又在一些實施態樣中，本發明係關於藉由提供目標個體包含肽成分、LGG、及LCPUFA的營養增補劑以在目標個體中減少腦發炎之方法。

在一些實施態樣中，該目標個體可為小兒個體。進一步地，在一個實施態樣中，所提供予小兒個體之營養增補劑可併入嬰兒配方或成長乳。在本文中所列且加至嬰兒配方之營養增補劑可包括肽成分、LCPUFA、及LGG，各者係選自特定來源及濃縮物，各者可經調整以最大化健康效益。在此方法的另一實施態樣中，在本文中所揭示之營養增補劑可加至成長乳。

在當該營養增補劑係經加至嬰兒配方時之實施態樣中，該組成物可有利地保護而免於肥胖症、第2型糖尿病、心血管疾病、肝脂肪變性、認知障礙、及腎功能的發展。更特定言之，在一些實施態樣中，攝取上述嬰兒配方之嬰兒在一些實施態樣中可經歷這些有益效果至兒童期及至成人期。同樣地，當該營養增補劑係經加至成長乳中時，攝入該成長乳之孩童可經歷這些有益效果至成人期和兒童期間。

使用如下列表3中所總結之研究設計來進行研究。簡言之，這些小鼠接受21週、於12週大(此經認定相當於人的青少年期)開始的高脂肪膳食(45Kcal%來自豬油)加上或減去肽成分、LCPUFA、及LGG之組合。該高脂肪膳食及具有該肽成分、LCPUFA、及LGG之受測膳食兩者均係等熱量。對照組膳食(低脂肪，10%kcal來自脂肪)作為參考組。

第一項研究，在下列表3中標示為研究1，比較接受高脂肪膳食的小鼠對接受高脂肪膳食增補肽成分、LCPUFA、及LGG之組合的小鼠。而第二研究，在下列表3中標示為研究2，檢驗對個別成分對小鼠之效果。

進一步結果證實所有組之間的食物攝入相當，且各研究期間相當。

實施例1

實施例1說明於飼以HFD並增補肽成分、LCPUFA、及LGG的LDLr基因剔除小鼠中評估代謝及心血管風險因子的實驗程序。

所使用之小鼠係LDLr基因剔除小鼠，其表型表現代謝症候群特徵的主要風險因子且為人病特點。實驗的進行以遵守Netherlands Law on Animal Experiments所規定之法條及規定，且經動物實驗委員會同意(DEC；許可號3486)。

使用自TNO之育種單位獲得的六十七隻雄性LDLr-/-小鼠(在實驗起始時為11至18週大)。實驗期間，於TNO Gaubius Building Leiden的傳統潔淨(clean- conventional)動物房中(相對濕度50-60%，溫度~21℃，光周期7am至7pm)，動物養於macrolon籠中(每籠3至5隻小鼠)。供以小鼠食物及經酸化自來水(任食)。小鼠以標準實驗室飼料(Ssniff R/M diet V1530,Uden,The Netherlands)餵飼，直至研究起始前為止。

實驗設定

實驗設定示於表4。在t=0時，小鼠依血糖(主要配對參數)及體重(次要配對參數)配至實驗組。對照組接受以豬油為基底的高脂肪膳食(HFD，45kcal%來自豬油；diet D12451 Research Diets,New Brunswick,USA)，其含有23.7% w/w蛋白質、41.4% w/w碳水化合物及23.6% w/w脂肪。

該膳食規格係提供於下列表5。

第一處理組別接受HFD+肽成分。所有來自HFD之酪蛋白均以肽成分置換，且隨之調整碳水化合物。

第二處理分組接受HFD+LCPUFA(0.079% w/w二十二碳六烯酸(DHA)及0.158% w/w二十碳四烯酸(ARA)。豬油濃度稍微減少(0.07% w/w)以補償所加入之ARA/DHA。

第三處理分組接受HFD且藉由每週胃管灌食三次(星期一、星期三、及星期五)鼠李醣乳酸桿菌GG(LGG)來處理。

第四分組(在本報告中縮寫為‘NHLL’)接受HFD加上肽成分、DHA、ARA、及LGG之組合處理。此分組作為參考對照，以驗證研究1中所發現之效果(包括在本文中作為實施例3者)。同樣地，在此分組中，所有來自HFD之酪蛋白均以肽成分置換，且隨之調整碳水化合物。LGG係藉由胃管灌食而提供。豬油濃度稍微減少(0.07% w/w)以補償所加入之ARA/DHA。

第五處理分組接受HFD加上大於500Da級分的肽成分。所有來自HFD之酪蛋白係以此肽級分置換。所有膳食組成物係經調整為等熱量。

測量

血液樣本於第0、3、6、9、15及21週時於空腹5小時後取得。血糖係使用手持式血糖儀立即測量。血漿膽固醇及血漿三酸甘油酯量係於新鮮EDTA-血漿立刻檢定。剩餘血漿儲存在-80℃，以供分析胰島素及ALAT，且供可能的其他另外後續追蹤分析。糞便樣本係收集第0、9、及21週時於48小時期間在籠中的量。此外，個別糞便樣本係在第21週時收集以進行個別糞便分析。

總體脂肪及去脂體質量係於第0、9、15、及21週藉由EchoMRI非侵入性評估。小鼠係置於約束管中，接著插入EchoMRI約30秒的期間。在此期間，計算並記錄總體脂肪及去脂體質量，且將小鼠自該裝置移出。

小鼠於第21週犧牲(未空腹)。於犧牲後，分離出下列樣本：

‧藉由心穿刺取得血清樣本

‧心，包括主動脈根部(aortic root)(供動脈粥樣硬化分析)

‧主動脈弓(aortic arch)(胸)，於-80℃

‧總肝重量，2片左葉(sinister lobe)及尾葉(caudate lobe)，置於-80℃，中葉(medial lobe)置於福馬林中

‧脂肪組織

○皮下(鼠蹊)：重量，右邊置於-80℃，左邊置於福馬林中

○副睪：重量，右邊置於-80℃，左邊置於福馬林中

○內臟(網膜(omental))：重量，部分置於-80℃，部分置於福馬林中

○棕色脂肪組織重量，部分置於-80℃，部分置於福馬林中

‧胰臟置於-80℃

‧脾(置於福馬林中)

‧腎(右邊置於-80℃，左邊置於福馬林中)

‧迴腸(盲腸前最後8cm)置於-80℃

‧結腸(包括糞便)置於-80℃

‧眼：左邊置入Davidson福馬林，右邊置於-80℃

‧腦(右邊置於-80℃，左邊置於4%的聚甲醛(paraformaldehyde))中

血糖係使用手持式血糖儀立即測量。總血漿膽固醇及三酸甘油酯量係分別使用套組No.11489437及11488872(Roche Diagnostics,Almere,The Netherlands)測量。胰島素的血漿中含量(超靈敏小鼠胰島素ELISA,Merdocia,Uppsala,Sweden)係由ELISA判定。

體重結果

二十一週的HFD餵食產生48.2±6.3g的平均體重，此相對於起始(t=0)係體重增加約18g。為參考對照，飼料對照組小鼠增重約10g。相較於HFD，NHLL組的體重(42.1±4.8g)係顯著較低。經NHLL處理小鼠增重約12g(相對於t=0)。LCPUFA組的體重(50.2±5.4g)係與HFD相當。相較於HFD，LGG組的體重(45.8±5.3g)係些微、但未顯著性較低。肽成分組(44.3±5.0g)與幾乎與NHLL相當，雖然相對於HFD未達到統計顯著性，而相較於HFD，體重增加(14.7±3.3g)係臨界顯著較低(P=0.05)。參見圖1A及1B。

食物攝入於所有組之間係相同的，且隨時間仍相同。最高平均食物攝入係HFD組的2.9±0.2g/小鼠/日，最低平均食物攝入係HFD+肽成分組的2.7±0.2g/小鼠/日。(參見圖1C)

血糖、血漿胰島素及HOMA-IR結果

在HFD組中，於整個研究期間，血糖仍相對穩定(平均7.8mM)，雖然在t=第9週的量相較於其他時間點些微較低。此血糖暫時性下降在其他組未有，且HFD對照組及HFD+NHLL、HFD+LGG、及HFD+肽組產生顯著差異。(參見圖2A及2B)。

在該HFD對照組，空腹血漿胰島素量中度地增加(直至第9週)，並接著明顯且緩緩地隨時間在第21週達到16.4±9.1ng/mL。參見圖2C及2D。胰島素量的增加在NHLL組較慢，且在第21週(8.2±4.3ng/mL)，相較於HFD，量顯著較低。參見圖2C及2D。相對於各別組分，該肽成分組相較於HFD組，在第15週亦顯示較低胰島素量，但該胰島素降低效果在第21週並未達到顯著性。胰島素量在HFD+LCPUFA組及HFD+LGG組係與HFD對照組相當。

HOMA-IR(圖2E)係胰島素抗性之量值且自空腹葡萄糖及空腹胰島素計算，顯示胰島素量的極類似型態。此暗示了NHLL組及肽成分組係胰島素阻抗性較HFD對照組低。因此，該個別組分組合(由NHLL組所代表)的結果產生對空腹胰島素及HOMA-IR最顯著之效果。此效果係一致且特徵在於動物間的個體間變異小。又，該效果無法歸因於NHLL之特定組分，且由此似是組分組合之淨效果。

血漿膽固醇及三酸甘油酯

在HFD組中，血漿膽固醇隨時間緩緩地增加(參見圖3A)，在第21週達到24.3±13.7mM。參見圖3B。相較於HFD對照組，NHLL組顯示明顯較低的血漿膽固醇量，且在整個研究中幾乎仍在基期(baseline)量，且與飼料餵飼小鼠之血漿值(未納入目前研究)相當。在第21週，NHLL組的膽固醇量係11.1±3.3mM。肽成分組的血漿膽固醇量係與NHLL組相當，且在整個研究中仍維持低量，在第21週的平均量為11.9±3.1mM。NHLL的其他二個組分，LCPUFA及LGG，對血漿膽固醇不具有明顯效果，且與HFD相當。

在HFD對照組中，血漿三酸甘油酯亦隨時間緩緩地增加(圖3C)，在第21週達到3.5±3.0mM。參見圖3D。NHLL組的血漿三酸甘油酯量於全部研究期間仍在基期量，從第9週直至第21週(1.1±0.6mM)具有顯著較低量。為供比較，飼料小鼠的三酸甘油酯典型上隨時間些微增加至約2.5mM。肽成分組中的量亦仍維持在基期量，且當與HFD對照組比較時，在所有分析之時間點均顯著較低(在第21週1.5±1.0mM)。LCPUFA餵食對血漿三酸甘油酯不具效果，且血漿濃度與HFD相當。相較於HFD對照，LGG組的三酸甘油酯量係些微、但未顯著較低，在第21週達到2.0±1.0mM。

綜合觀之，儘管相對高的HFD攝取，經NHLL處理之小鼠顯示極低的總膽固醇及血漿三酸甘油酯量，暗示小腸食物攝入減少或更多能量(脂質)藉由代謝活性器官吸收並利用。這些效果似是主要由NHLL中的肽成分所驅動。

肝功能標記ALAT

ALAT量係於基期、第9週及第21週時以經匯集之血漿測量。基期的量低(11U/L)。在HFD組，於HFD餵食，於第9週，ALAT量增加至58U/L，且於第21週進一步增加至187U/L。為供比較，飼料餵飼小鼠之ALAT量在第21週達到約52U/L的量(來自其他研究之數據)。NHLL組僅顯示中度的ALAT增加(在第9週為45U/L，且在第21週為54U/L)。肽成分組的ALAT量與NHLL極為相同(在第9週為45U/L，且在第21週為67U/L)。LCPUFA處理於第9週暫時地增加ALAT至106U/L，隨後在第21週些微下降達到81U/L，當與HFD對照組比較則明顯較低。同樣地，相較於HFD組，經LGG處理小鼠的ALAT量較低(第9週為66U/L，且第21週為 124U/L)。

體組成分析

體組成係使用EchoMRI來非侵入式分析。HFD餵飼對照組小鼠顯示明顯總體脂肪增加，從t=0的3.5±1.7g至第21週的18.4±5.7g。參見圖4A。在NHLL組，於第21週的絕對總體脂肪值傾向較低(14.4±3.4g)。相較於HFD對照組，NHLL組的總體脂肪的增加(以變化量δ表示)明顯較少。LCPUFA組的總體脂肪些微但未顯著高於HFD組，且總體脂肪的增加量δ未有顯著不同。LGG及肽成分組未觀察到對總體脂肪的效果。

在HFD組中，於HFD餵飼期間，去脂質量些微增加(δ：3.5±1.1g)(參見圖4B)，自第9週起有最明顯的增加。此去脂質量的增加於所有處理組較不明顯，且在NHLL及肽成分組的情況中顯著較低。

於犧牲時之組織重量

膳食處理21週後，犧牲小鼠。將組織分離並稱重。參見圖5A至5D。相較於HFD組，NHLL及LGG組的肝重量傾向較低，且兩者治療減少小鼠之間的變異。相反地，LCPUFA及肽成分對肝重量不具有效果(參見圖5A)且顯示與HFD對照組類似的變異。

將三種脂肪組織蓄積(depot)收集並稱重。相較於HFD組，NHLL組的鼠蹊脂肪蓄積顯著較低且在肽成分組中傾向較低。針對腸繫膜脂肪蓄積，觀察到類似模式(但NHLL及Nutramigen水解產物組未有顯著性)。肽成分組的副睪脂肪蓄積顯著較高，暗示在此蓄積較優先之脂肪儲存可解釋在其他蓄積所觀察到之效果。LCPUFA及LGG組的脂肪組織重量與HFD組的相當。由於NHLL組並未顯示脂肪的重新分布(副睪脂肪質量未增加)，所以並不清楚動物如何處理所攝取的能量，且數據暗示組合處理(肽成分、LCPUFA及LGG)可依單一組分無法達成之方式調整總代謝/能量處理。參見圖5B、5C、及5D。

實施例2

實施例2說明於飼以HFD並增補>500Da肽級分的肽成分之LDLr基因剔除小鼠中評估代謝及心血管風險因子的實驗程序。實施例2使用如實施例1中利用之相同實驗程序及方法學。

體重及食物攝入

肽級分組的體重在t=3週時顯示體重開始下降(圖6A)。在此適應後，體重仍穩定，直至研究結束為止。在所有時間點，相較於HFD，體重顯著較低。惟，在6週時食物攝入增加(圖6B)，肽組與HFD對照組之間的食物攝入未有差異。當相較於該肽成分群組時，>500Da肽級分組的食物攝入在t=6、9及15週時較高。這些數據暗示小鼠在第一週需要適應新膳食，且後續達到體重及食物攝入維持穩定的恆定狀態。

血糖及血漿胰島素

>500Da肽級分組的空腹血糖值自8.0±0.9mM的基期量下降至5.1±0.5mM(在空腹葡萄糖的正常範圍內)，且仍維持低且穩定直到研究結束(圖7A)。相較於HFD，在所有時間點係顯著較低，且當相較於肽成分組時亦然。

又，當飼以>500Da肽級分組膳食時(在第3週時為0.3±0.4ng/ml)，且於整個研究期間仍維持低值。相較於HFD及肽成分組，在所有時間點時，胰島素降低效果非常明顯且顯著(圖7B)。這些胰島素的低量暗示高胰島素敏感度。這些量與健康的以飼料(chow)餵飼小鼠相當。

血漿膽固醇及三酸甘油酯

在>500Da肽級分組中，血漿膽固醇量於第3週顯示些微暫時增加，接著下降(圖8A)。自第9週開始，相較於HFD，血漿膽固醇量顯著較低。在肽級分群組中，血漿三酸甘油酯仍相對穩定，且相較於肽成分並無不同(圖8B)。自第9週開始，相較於HFD，血漿三酸甘油酯量顯著較低。

體組成分析

由於體重在初始時的下降，決定另加上 EchoMRI測量，以更緊密監測小鼠。相較於基期，體脂肪些微下降(-1.0±1.8g)，而HFD及肽成分群組總體脂肪明顯且大大地增加。相較於其他組，在所有分析時間點時，>500Da肽級分組的體脂肪值顯著較低。應注意的是，在>500Da肽級分處理組中所觀察到的體重初始下降主要可歸因於去脂質量的減少(-3.9±1.2g)。去脂質量進一步些許下降，且在研究結束時達到19.1±1.5g，即相較於基期減少5.6±2.6g。相較於HFD及肽成分組，去脂質量值顯著較低。(參見圖9A及9B)。

肝功能標記ALAT

ALAT量係以經匯集之血漿測量。於整個研究期間，維持低量(第9週為37U/L，第21週為30U/L)，且ALAT量因此明顯低於HFD對照組(第9週為58U/L，第21週為187U/L)且些微低於肽成分組(第9週為45U/L，第21週為67U/L)。

於犧牲時之組織重量

膳食處理21週後，犧牲小鼠。將組織分離並稱重(圖10A、10B、10C及10D)。根據低體重水平，相較於HFD及肽成分組，>500Da肽級分組的所有器官(肝、鼠蹊脂肪、副睪脂肪及腸繫膜脂肪)重量明顯且顯著較低。這些數據與去脂飼料(lean chow)餵飼小鼠相當。

實施例3

使用在TNO之育種單位獲得的六十四隻雄性LDLr-/-小鼠。實驗期間，於TNO Gabius Building Leiden的傳統潔淨動物房中(相對濕度50-60%，溫度~21℃，光周期7am至7pm)，動物養於macrolon籠中(每籠3至5隻小鼠)。供以小鼠食物及經酸化自來水(任食)。小鼠以標準實驗室飼料(Ssniff R/M diet V1530,Uden,The Netherlands)餵飼，直至研究起始前為止。

實驗設定

在t=0時，小鼠依血糖(主要配對參數)及體重(次要配對參數)配至實驗組。表6顯示實驗設定的概覽。

一組對照組飼以低脂肪對照膳食(LFD；diet 12450B,research Diets,New Brunswick,USA)，其含有19.2% w/w蛋白質、67.3% w/w碳水化合物及4.3% w/w脂肪。另一對照組飼以以豬油為基底的高脂肪膳食(HFD；diet D12451 Research Diets,New Brunswick,USA)，其含有23.7% w/w蛋白質、41.4% w/w碳水化合物及23.6% w/w脂肪。第三組飼以HFD為基礎的膳食，其含有本發明之產物肽成分、LCPUFA(二十二碳六烯酸(DHA)及二十碳四烯酸(ARA))，且小鼠接受口服胃管灌食鼠李醣乳酸桿菌GG(LGG)。此組縮寫為NHLL。所有來自HFD的酪蛋白均以肽成分(批碼0019072)和代表部分之碳水化合物置換。又，0.079% w/w DHA及0.158% w/w ARA以LCPUFA調合物形式加至該膳食(批碼0033636)。膳食組成示於表7。小鼠每週三次(週一、週三及週五)以口服胃管灌食予以LGG(1x10⁹CFU(批號FR010587)，於200μL的PBS中)處理。包含胃管灌食對照組(HFD_PBS胃管灌食)，以對照胃管灌食處理之效果。這些小鼠飼以HFD，且每週三次(週一、週三及週五)以PGS胃管灌食200μL處理。

測量

監測隨時間之體重(個別)及食物攝入(各籠)，且血液樣本於第0、3、6、9、12、15、18、及21週時於空腹5h後取得。血糖係使用手持式血糖儀立即測量。剩餘血漿儲存在-80℃，以供另外分析。單次尿液(spot urine)及糞便樣本於第0、9、15、及21週時獲得且儲存於-80℃。

接受膳食21週後，總體脂肪及去脂體質量係以EchoMRI而非侵入性評估。小鼠係置於約束管中，接著插入Echo MRI約30s的期間。在此期間，計算並記錄總體脂肪及去脂體質量，且將小鼠自該裝置移出。

小鼠於第21週犧牲(未空腹)。於犧牲後，分離出下列樣本以供未來分析：

‧藉由心穿刺取得血清樣本

‧心，包括主動脈根部，供動脈粥樣硬化分析

‧主動脈弓(急凍)

‧總肝重量(一部分急凍，一部分經福馬林固定)

‧脂肪組織(鼠蹊、網膜及副睪)重量(各蓄積的一部分急凍，各蓄積的一部分經福馬林固定)

‧胰臟(急凍)

‧腎(一個腎急凍，一個腎經福馬林固定)

‧結腸(急凍)

‧肌肉(急凍)

‧腦(一部分固定於4%聚甲醛，一部分急凍)

血液及尿液樣本分析

血糖係使用手持式血糖儀立即測量。總血漿膽固醇及三酸甘油酯量係分別使用套組No.11489437及11488872(Roche Diagnostics,Almere,The Netherlands)測量。胰島素(超靈敏小鼠胰島素ELISA,Merdocia,Uppsala,Sweden)、可溶性血管細胞黏附分子1(sVCAM-1；R&D Systems)、瘦素(R&D Systems)、脂聯素(R&D Systems)及血清類澱粉蛋白A(SAA；Biosource)的血漿中含量係由ELISA判定。

代謝性荷爾蒙濃度係藉由多重分析(Multiplex analysis)來判定。該‘Millipore代謝性荷爾蒙多重套組’(MMHMAG-44K)係用以分析C-肽、GIP、胰島素、瘦素、胰多肽、PYY及阻抗素(resistin)。珠粒於LiquiChip 200(Qiagen,Hombrechtikon,Switzerland)上讀取，且數據藉由Luminex100 IS Software五參數曲線擬合來分析。由於太多瘦素數據點超出範圍，所以瘦素分析係重覆ELISA(如上述)。

為評估腎小球障壁功能，尿白蛋白(Exocell Inc.Philadelphia,PA,USA)及肌酸酐(creatinine)濃度判定(Bethyl Laboratories Inc.Montgomery,TX,USA)係依製造商說明書進行。

在第20週，葡萄糖耐受測試(glucose tolerance test)係以每組n=8隻小鼠(隨機選擇)進行。空腹5小時後，以1g/kg體重的葡萄糖注射小鼠(IP)，且血糖及血漿胰島素於注射後0、5、15、30、60、及120min測量。

脂肪組織分析

針對所有三種脂肪組織蓄積(鼠蹊、網膜及副睪)，橫切面係自石蠟包埋樣本製備並以蘇木色素-玫瑰紅-番紅花(hematoxylin-phloxine-saffron)染色。自各小鼠及各脂肪蓄積處，評估三個橫切面的皇冠樣結構之存在。各橫切面的分析表面面積係580.000μm²，因此分析面積總共為1.74mm²。

統計分析

使用SPSS Version20以用於數據的統計評估。使用因子為時間及膳食的二因子重複量數ANOVA(two-way repeated measures ANOVA)，以分析膳食、時間及交互作用效果。使用針對個別時間點的單因子ANOVA，以分析特定時間點的組間差異。使用LDS事後檢定以比較各組。針對無母數比較，進行Mann-WhitneyU檢定。

LFD組中一隻小鼠及NHLL組中一隻小鼠由於為統計及生物離群值而自數據組及所有分析排除。P<0.05係認定具顯著性。所有數據以平均±SEM呈現。

一般健康

依目視檢查及每日監測小鼠，所有小鼠行為正常且顯示健康良好。於研究期間，HFD組中有一隻小鼠由於門齒過度生長而排除。此特定小鼠的數據未用於分析。

體重及食物攝入結果

二十一週的HFD餵食，相對於起始時(t=0)，產生約25g的體重增重，而飼以LFD的小鼠僅增重約10g。HFD+PBS胃管灌食對照組的體重與HFD對照組相當。參見圖11A。顯著地，飼以NHLL的小鼠之體重並未增加且仍與飼以LFD的小鼠一樣低。

HFD及HFD+PBS胃管灌食對照組在第一週均顯示較高食物攝入量。在實驗剩餘期間，食物攝入相對穩定且二組對照組之間相當。NHLL組在第一週並未顯示食物攝入的高峰。在所有其他時間點，相較於胃管灌食對照組，食物攝入提高(圖11B)。整個研究期間的食物攝入的統計分析，相較於胃管灌食對照組，顯現NHLL組的食物攝入顯著增加。綜合這些數據，顯示經處理該營養調合物處理之動物，可維持低體重(與經LFD小鼠相當)，儘管食物攝取類似或增加亦然。

血糖及血漿胰島素

相對於起始量，HFD餵飼產生空腹血糖的增加(平均6.5mM)，此效果在第3週已變得具顯著性。相反地，LFD組的空腹血糖隨時間仍維持低且穩定。參見圖12A。HFD+PBS胃管灌食對照組顯示空腹血糖的增加，此與HFD對照組相當。雖然NHLL組中的血糖在數個時間點時，量顯著低於HFD+PBS胃管灌食對照組，但NHLL組中的血糖亦增加。

在HFD及HFD+PBS胃管灌食對照組中，血漿空腹胰島素量亦隨時間緩緩地增加(圖12B)。胰島素的提升於組間相當，且在實驗的後半(第10週開始)非常明顯。NHLL組的胰島素量仍維持低量(基期)直至第15週。第18及21週有些微增加，但在LFD組中有觀察到類似增加。NHLL及HFD+PBS胃管灌食對照組之間的差異於整個實驗係顯著的。

總的言之，這些數據顯示飼以HFD的小鼠(兩者均為對照組)在空腹葡萄糖中耐受中度的增加(期間達至第10週)。之後，空腹胰島素量大大地增加，以維持葡萄糖在可耐受量。整個研究期間，以NHLL處理的小鼠顯示低胰島素量，顯示胰島素分泌的增加並非一定，儘管這些動物攝取比彼等之對照組更多的HFD。因此，經NHLL處理動物需要少量胰島素以維持彼等之葡萄糖在耐受範圍內。

葡萄糖耐受測試

在20週時，在每組n=8隻小鼠中進行葡萄糖耐受測試(NHLL組為n=7，因為一隻離群值小鼠自整個數據集排除)。在所有組中，口服葡萄糖注射導致血糖快速增加，在15與30min之間達到高峰量(圖13A)。LFD組的高峰量係最低的，且在經HFD處理組較高。HFD對照組及HFD+PBS胃管灌食對照組顯示在研究期間(2h)內中度葡萄糖廓清，且NHLL組具有最慢葡萄糖廓清，暗示葡萄糖耐受測試期間的胰島素差異。

與先前測量一致，葡萄糖注射之前及相對於HFD及HFD+PBS胃管灌食對照組，LFD及NHLL組的胰島素量低。雖然HFD及HFD+PBS對照組顯示對口服葡萄糖負荷響應的胰島素之明顯增加，但NHLL組並未顯示此種胰島素響應。至於LFD組(代表最健康的對照組)，NHLL組仍維持低胰島素量，且於整個12min取樣期間仍相當於基期量。(圖13B)。

因此，二組HFD對照組顯示GTT期間葡萄糖廓清減弱的典型及明顯胰島素響應，而經LFD處理組缺少此胰島素響應且廓清亦緩慢。未有胰島素響應，顯示耐受暫時的葡萄糖增加。類似LFD組，經NHLL處理動物亦無胰島素增加的響應。應注意的是，這些動物已飼以HFD共20週，且彼等之代謝極可能完全適應利用脂質作為能量來源。兩者的結果(缺少胰島素響應及彼等的代謝適應)，經NHLL處理小鼠廓清葡萄糖極慢。並不清楚為何經NHLL處理小鼠耐受高量葡萄糖且為何葡萄糖未更快地廓清。可能的解釋可為經NHLL處理小鼠已最佳化適應調整彼等之代謝，使彼等獲得足夠的能量以供最佳運作。因此，組織不需能量(葡萄糖)以供燃料或儲存之用。

血漿膽固醇及三酸甘油酯

在HFD及HFD+PBS胃管灌食對照組中，血漿膽固醇隨時間緩緩地增加(圖14A)。LFD組中的血漿膽固醇增加直至約第9週，且於剩餘研究期間仍維持穩定。相較於所有其他組，NHLL組顯示明顯較低的血漿膽固醇量。統計評估顯示NHLL組的膽固醇量甚至低於LFD對照組。

在HFD對照組中，血漿三酸甘油酯亦隨時間緩緩地增加(圖14B)。在t=6週時，觀察到暫時性高峰。在HFD+PBS胃管灌食對照組中，血漿三酸甘油酯與HFD組係約略相當且並未顯著不同(二因子ANOVA中的因子組)。重要的是，在NHLL組中，於整個研究期間，血漿三酸甘油酯仍維持低量。

綜合觀之，儘管相對高的HFD攝取，經NHLL處理之小鼠顯示極低的總膽固醇及血漿三酸甘油酯量，暗示小腸食物攝入減少或更多能量(脂質)藉由代謝活性器官吸收並利用。

全身性及血管發炎

全身性發炎標記SAA顯示在基期有大的變異(圖15A)。儘管觀察到大的變異，NHLL組顯示持續的低SAA量，而所有對照組在大多數的分析時間點均具有較高 SAA量。在期中時(at=9週)及在研究結束時(t=21週)，相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，NHLL組的SAA量顯著較低，顯示NHLL預防經HFD誘發之慢性發炎的發展(“低度代謝性發炎(low-grade metabolic inflammation)”)。

VCAM-1量係血管活化的標記，在所有組均隨時間而增加，且係膳食方案非依賴性。(圖15B)。二因子ANOVA顯示相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，NHLL未有顯著不同。VCAM-1隨時間增加可能與從飼料為基底的維持膳食(動物自出生即維持食用者)轉換至實驗含脂肪膳食相關。

在終點時的多重分析

21週的實驗膳食餵飼後之血漿樣本藉由多重技術來分析以定量體液因子及細胞介素。多重分析數據示於下列表8。整體而言，相對於LFD組，HFD餵飼本身導致C-肽、GIP、阻抗素及瘦素的增加，而IL-6下降，且MCP-1、PP、PYY、TNF-α幾乎無調變。

依表8：GIP：葡萄糖依賴性促胰島素多肽 (Glucose-dependent Insulinotropic Polypeptide)；MCP-1：單核球趨化蛋白-1(Monocyte Chemotactic Protein-1)；PP：胰多肽；PYY：肽YY；TNF-α：腫瘤壞死因子α。LFD：低脂肪膳食；HFD：高脂肪膳食；NHLL：肽成分、ARA、DHA、及LGG。* P<0.05；** P<0.01，相較於胃管灌食對照組。$ P=0.07，相較於胃管灌食對照組；#因為藉由多重分析所測之瘦素量在範圍之外，所以呈現由ELISA分析之瘦素數據。

相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，NHLL組的C-肽、GIP及瘦素係顯著較低。相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，脂聯素量係在顯著提高邊界。對C-肽(其與胰島素共同分泌但更穩定)係符合NHLL對胰島素的效果。在NHLL組所觀察到之瘦素量的減少及較高量的脂聯素與低體重符合，且暗示對脂肪過多(adiposity)及胰島素敏感性的效果。相較於胃管灌食對照組，NHLL組的MCP-1及TNF-α傾向較高(不具顯著性)。其他荷爾蒙及細胞介素未有顯著不同。

所觀察到HFD及HFD+PBS胃管灌食對照組之間少數參數(C-肽、PP)差異可能為重覆胃管灌食注射所致。

白蛋白脲及ALAT

為評估對腎功能的效果，分析尿中的白蛋白排泄。參見圖16A。在HFD及HFD+PBS胃管灌食對照組中，白蛋白脲隨時間快速且明顯地增加。相反地，NHLL組的白蛋白脲仍維持低量直至第15週，並接著在第21週略有增加。相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，NHLL組直至第15週維持低量，顯示蛋白尿的發展受NHLL阻滯。為評估肝功能，接著分析循環ALAT量(圖16B)。雖然所有對照組顯示ALAT量隨時間有明顯增加，顯示肝損害，但NHLL組的ALAT量於整個研究期間仍維持低量且與LFD對照組相當。當相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，於所有分析時間點時，NHLL組的ALAT量顯著較低。

此外，相較於飼以HFD小鼠，NHLL組的肝之空泡形成(肝脂肪變性的特徵)明顯減少(參見圖16C)。

於犧牲時之體組成分析及組織重量

在21週時的總體組成係使用EchoMRI來非侵入式分析(參見圖17)。體重差異可主要由總體脂肪差異來解釋。相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，NHLL組的小鼠少39%體脂肪且少10%去脂體質量。這些數據與對血漿瘦素效果符合。

膳食處理21週後，犧牲小鼠。將組織分離並稱重(圖18)。相較於LFD組，二組HFD對照組的肝重量明顯增加。相較於HFD+PBS胃管灌食對照組動物及LFD對照組動物，NHLL組的動物之肝重量顯著減少。

將三種脂肪組織蓄積稱重。NHLL與 HFD+PBS胃管灌食對照組之間的副睪脂肪蓄積相當。另一方面，相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，腸繫膜及鼠蹊脂肪蓄積大大地減少(分別為-52%及-54%)且與LFD組相當。

脂肪組織發炎

因為NHLL對肥胖症及脂肪過多以及與CVD及IR/T2D相關的脂肪組織衍生因子具有顯著效果，因此評估脂肪組織的狀況。為評估脂肪組織發炎狀態，定量經界定尺寸面積中的皇冠樣結構外觀。(圖19A)。皇冠狀結構係巨噬細胞環繞死亡脂肪細胞或其殘留物的巨噬細胞團簇，且代表發炎脂肪組織特點。

HFD及HFD+PBS胃管灌食對照組的副睪脂肪組織發展出可觀的皇冠樣結構數目，而經NHLL處理小鼠在此蓄積中幾乎未顯示任何皇冠樣結構。在其他較不易發展發炎的脂肪組織蓄積(腸繫膜及鼠蹊)中，在HFD及HFD+PBS胃管灌食對照組中，僅觀察到少數皇冠樣結構。又，相較於HFD+PBS胃管灌食對照組，在該蓄積中，觀察到NHLL組的皇冠樣結構明顯減少。代表性顯微照相示於圖19B及19C。

如上述，儘管食物攝入增加，NHLL組小鼠中的身體脂肪過多大大地減少。此可顯示對腸道中的能量攝取及能量消耗的效果。NHLL組小鼠中，較低的循環血漿脂質、發炎因子、及脂肪組織發炎減少和阻滯微白蛋白尿顯示發展心血管代謝(cardiometabolic)疾病及血管併發症的風險減少。

又，可注意的是，實施例3的結果係類似於實施例1及2中所評估者，顯示包括肽成分、LCPUFA、及LGG之營養增補劑用於對抗HFD所誘發之心血管代謝風險因子的強度。

實施例4

實施例4描述對如實施例3所指之LDLr-/-小鼠的效果，以及經由研究數種腦發炎、血腦障壁、及腦功能相關基因的基因表現量，描述對腦部影響的效果。實施例4使用如實施例3中利用之相同實驗程序及方法學。

根據如實施例3所收得之腦組織樣本係用於實施例4中。使用右半球樣本以供RNA分離、cDNA合成及qPCR。結果以管家基因(house-keeping gene)GAPDH及HPRT來校正，如下列表9所示。

在HFD背景中，在NHLL增補下，大腦衍生神經滋養因子(BDNF)基因表現明顯增加。BDNF係神經生成之標記。BDNF於神經元存活、新神經元及突觸的生長及分化中扮演一角色，且對於長期記憶係重要的。(參見圖20)

進行葡萄糖轉運蛋白1(GLUT-1)免疫組織化學，以經由腦內的血管壁內的GLUT-1蛋白質數目而闡明血管完整性。在每μm2的GLUT-1陽性血管數及覆蓋面積百分比發現有顯著效果。以NHLL介入減少海馬迴、齒狀迴(DG)、及海馬角區(cornu ammonis area)1(CA1)中的GLUT-1陽性血管的量此效果暗示此介入可影響腦血管，更特定地，減少GLUT-1陽性血管的量。

以離子化鈣結合轉接分子-1(ionized calcium binding adapter molecule-1)抗體(IBA-1，其辨識活化微膠細胞)顯示發炎程序。以二種方式定量IBA-1免疫組織化學：每μm2的陽性IBA-1微膠細胞之計數及陽性IBA-1微膠細胞所覆蓋的面積之百分比。在兩種定量中，均顯現明顯介入效果。相較於LFD組，HFD組顯現IBA-1陽性微膠細胞的數目及百分比增加，此顯示HFD誘發發炎等級增加，而NHLL增補抵消至某種程度。

配方實施例

表10提供包括來自表1的5個肽及選自表2的3個肽之肽成分例示性實施態樣，其可包含本文中所述之肽成分。

表11提供包括來自表1的5個肽、選自表2的3個肽、及來自表1另外的10個肽之肽成分例示性實施態樣，其可包含本文中所述之肽成分。

表12提供根據本發明之包括蛋白質等效來源之營養組成物的例示性實施態樣，並說明每100kcal份量所包括之各成分之量。

所有本說明書中所引用之參考文獻、包括但不限於所有論文、刊物、專利、專利申請、發表、文字、報導、文稿、小冊、書籍、網路文章、期刊文章、定期性刊物等等，在此係以引用方式將它們全部併入本說明書。本文中之參考文獻的討論僅欲用於總結該些參考文獻作者之主張，並未承認任何參考文獻構成先前技術。申請人保留挑戰引用之參考文獻之準確性和相關性的權利。

雖然已使用特定用語、裝置及方法說明本發明之實施態樣，但此說明僅為描述目的之用。所使用文字為說明文字而非限制性文字。應了解，在未悖離於下列申請專利範圍所述之本發明精神及範疇下，本發明所屬技術領域中具有通常知識者可進行更改及變動。此外，應了解，各種實施態樣可全部或部分相互取代。舉例而言，雖然已例示用於製造依據該些方法所製成的市售無菌液體營養增補物的方法，但其他使用亦被涵蓋。因此，後附申請專利範圍之精神及範疇不應受限於本文中所含的形式之描述。

<110> 美強生營養品美國控股公司

<120> 含有肽成分之營養增補劑和彼之用途

<140> TW 104133880

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<150> US 14/535,241

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Claims

一種營養增補劑，其包含：(i)長鏈多不飽和脂肪酸來源；(ii)鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG)；及(iii)蛋白質等效來源，其中a)20%至80%之該蛋白質等效來源包括肽成分，該肽成分包含SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60及SEQ ID NO 63；且b)20%至80%之該蛋白質等效來源包含完整蛋白質、經部分水解之蛋白質、或彼等之組合。
如請求項1之營養增補劑，其中該肽成分係以約0.2g/100kcal至約5.6g/100kcal的量存在。
如請求項1之營養增補劑，其中該肽成分另包含至少10個選自表1之另外的肽。
如請求項1之營養增補劑，其中該蛋白質等效來源包含具有小於40%水解度的經部分水解之蛋白質。
如請求項1之營養增補劑，其另包含至少一種長鏈多不飽和脂肪酸。
如請求項5之營養增補劑，其中該至少一種長鏈多不飽和脂肪酸係選自由二十二碳六烯酸及二十碳四烯酸所組成的群組。
如請求項1之營養增補劑，其另包含來自益生菌批式培養法的指數生長末期之培養物上清液，藉以用於治療或預防病原體感染。
如請求項1之營養增補劑，其另包含益生菌。
如請求項1之營養增補劑，其另包含益生素(prebiotic)。
如請求項1之營養增補劑，其中當該營養增補劑經投與至個體時，該營養增補劑促進健康重量、促進健康體脂肪質量、降低血漿膽固醇量、降低血漿三酸甘油酯、或彼等之任何組合。
一種營養增補劑，其包含：(i)長鏈多不飽和脂肪酸來源；(ii)鼠李醣乳酸桿菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG)；及(iii)蛋白質等效來源；其中a)20%至80%之該蛋白質等效來源包括肽成分，該肽成分包含至少5個選自表1之肽及至少3個選自表2之另外的肽；且b)20%至80%之該蛋白質等效來源包含經部分水解之蛋白質。
如請求項11之營養增補劑，其包含至少10個選自表1之另外的肽。
如請求項11之營養增補劑，其中該蛋白質等效來源包含酪蛋白水解產物，該酪蛋白水解產物具有大於500道耳頓之莫耳質量分布。
如請求項11之營養增補劑，其中該蛋白質等效來源包含具有小於40%水解度的經部分水解之蛋白質。
如請求項11之營養增補劑，其另包含益生素。
如請求項11之營養增補劑，其另包含來自益生菌批式培養法的指數生長末期之培養物上清液，藉以用於治療或預防病原體感染。
一種藉由提供營養增補劑以防備免於肥胖症之方法，該營養增補劑包含：長鏈多不飽和脂肪酸來源；鼠李醣乳酸桿菌GG；及蛋白質等效來源，其中20%至80%之該蛋白質等效來源包括肽成分，該肽成分包含SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60及SEQ ID NO 63；且，其中20%至80%之該蛋白質等效來源包含經部分水解之蛋白質、經大量水解之蛋白質、或彼等之組合。
如請求項17之方法，其中該肽成分另包含至少10個選自表1之另外的肽。
如請求項17之方法，其中該蛋白質等效來源包含具有小於40%水解度的經部分水解之蛋白質。
如請求項17之方法，其中該長鏈多不飽和脂肪酸來源包含二十二碳六烯酸、二十碳四烯酸及彼等之組合。