TW201609192A - 血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑及變性抑制方法 - Google Patents

血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑及變性抑制方法 Download PDF

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Abstract

提供一種血清或血漿中低密度脂蛋白(LDL)因冷凍乾燥所致的變性抑制劑、血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法、及可正確測量LDL中成分之標準品。 一種含有甲硫胺酸作為有效成分的血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑；一種血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法，其特徵為於血清或血漿中添加甲硫胺酸後，將血清或血漿冷凍乾燥；一種血清或血漿中之LDL中之成分定量用標準品，其特徵為含有經冷凍乾燥的血清或血漿中之LDL、及甲硫胺酸，且該LDL中之成分之含量經定值。

Description

血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑及變性抑制方法
本發明係關於血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑、血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法、血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分定量用的標準品、血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分定量用的標準品之製造方法、血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分之定量方法、及血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分之定量用套組。
血清及血漿係與尿同樣地，經常用於臨床檢查。血清及血漿中含有高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、超低密度脂蛋白(VLDL)等之脂蛋白，於各脂蛋白中含有膽固醇、中性脂肪、磷脂質等之成分。已知LDL係構成成分中含有載脂蛋白B(Apo-B)的脂蛋白，容易受到氧化等之變性(參照專利文獻1)。
於實際之臨床檢查，經常測量脂蛋白中的成分的HDL中之膽固醇(以下，記載為HDL-C)或LDL中之膽固醇(以下，記載為LDL-C)等。其中，LDL-C係被用於作為動脈硬化之指標。於脂蛋白中之成分之測量，自血清或血漿之不伴隨脂蛋白之分離的均質法係被專門使用。 於利用均質法的脂蛋白中之成分之測量，使用該成分之濃度經定值的標準品。標準品係用於製作呈現該成分之濃度與對於該成分的測量值(例如，吸光度)之間之關係的校正曲線。於使用標準品而製作的校正曲線，對照使用實際檢體測量所獲得的測量值，而決定檢體中之成分之濃度。
標準品中，除了成為測量對象的成分係單獨以一定濃度或一定含量被含有的純品型式的標準品之外，成為測量對象的檢體中之成分與其他成分一起以已知濃度或已知含量被含有的血清型式之標準品亦為已知。
就標準品之形態而言，有液狀之標準品及冷凍乾燥狀態之標準品。為任一者之狀態之標準品皆有必要安定地保持、保存於標準品中所含之成為測量對象的成分。尤其，冷凍乾燥狀態之標準品的情形，於其製造，包含將成為標準品之原材料的血清或血漿加以冷凍乾燥的步驟。如前述，LDL係容易遭受變性的脂蛋白，由於冷凍乾燥，變性會進行，但於冷凍乾燥條件為不均一的情形，LDL之變性程度變得不均一，起因於此變性程度之不均一度，有校正曲線於每一製品會相異、無法正確測量的問題。迄今，已報告使用海藻糖(trehalose)作為冷凍及冷凍乾燥時之LDL之變性防止劑的方法(參照專利文獻2)，但於使用時，以水性媒質溶解之際，有黏性會變高等之問題。又，已報告含有糖類、高分子物質、或親水性有機溶媒作為有效成分的血漿等之活體試料用之冷凍保護劑(參照專利文獻3)。又，已報告含有甲硫胺 酸作為抗氧化劑的脂質測量試藥(參照專利文獻4)。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]WO2003/006989小冊
[專利文獻2]日本特開平11-124394號公報
[專利文獻3]日本特開2008-203269號公報
[專利文獻4]日本特開2004-089191號公報
本發明之目的係提供血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑、及血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法。又，本發明之目的係提供使LDL中之成分可正確測量的標準品。
本發明者們為了解決本課題而不斷專研的結果，發現所謂於血清或血漿中添加甲硫胺酸後，將血清或血漿冷凍乾燥，藉此冷凍乾燥所致的LDL之變性被抑制的見識而完成本發明。即，本發明係關於以下之[1]~[11]。
[1]一種血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑，其含有甲硫胺酸作為有效成分。
[2]一種血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法，其特徵為於血清或血漿中添加甲硫胺酸後，將血清或血漿冷凍乾燥。
[3]一種血清或血漿中LDL中之成分定量用標準品，其特徵為含有經冷凍乾燥的血清或血漿中之LDL、及甲硫胺酸，且該LDL中之成分之含量經定值。
[4]如[3]記載之標準品，其係藉由包含以下之步驟的方法而製造： (1)於血清或血漿中添加甲硫胺酸的步驟； (2)將步驟(1)所獲得的混合物冷凍乾燥的步驟；及 (3)將步驟(2)所獲得的冷凍乾燥物中所含的LDL中之成分之含量，使用已知量之該成分而定值的步驟。
[5]如[3]或[4]記載之標準品，其中LDL中之成分係膽固醇。
[6]一種血清或血漿中LDL中之成分定量用的標準品之製造方法，其特徵為包含以下之步驟：(1)於血清或血漿中添加甲硫胺酸的步驟；(2)將步驟(1)所獲得的混合物冷凍乾燥的步驟；及(3)將步驟(2)所獲得的冷凍乾燥物中所含的LDL中之成分的含量，使用已知量之該成分而定值的步驟。
[7]如[6]記載之製造方法，其中LDL中之成分係膽固醇。
[8]一種血清或血漿中LDL中之成分之定量方法，其特徵為包含以下之步驟：(1)使用血清或血漿中LDL中之成分之測量試藥，而測量該成分的步驟；(2)使用如[3]或[4]記載之標準品、及步驟(1)之測量試藥，而製作表示該成分之濃度與對於該成分的測量值 之間之關係的校正曲線的步驟；及(3)自步驟(1)所獲得的測量值、及步驟(2)所製作的校正曲線，而決定血清或血漿中該成分之濃度的步驟。
[9]如[8]記載之定量方法，其中LDL中之成分係膽固醇。
[10]一種血清或血漿中LDL中之成分之定量用套組，其特徵為含有血清或血漿中LDL中之成分之測量試藥、及如[3]或[4]記載之標準品。
[11]如[10]記載之套組，其中LDL中之成分係膽固醇。
依據本發明，可提供血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑、血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法、及使LDL中之成分可正確測量的標準品。
[實施發明之形態]
(LDL之變性抑制劑及甲硫胺酸)
本發明之LDL之變性抑制劑係抑制血清或血漿中之LDL因冷凍乾燥所致的變性者，含有甲硫胺酸作為有效成分。就本發明中之甲硫胺酸而言，只要可抑制血清或血漿中之LDL因冷凍乾燥所致的變性即可，並未特別限制，可為L-甲硫胺酸、D-甲硫胺酸、DL-甲硫胺酸之任一者。
就本發明之LDL之變性抑制劑所含的甲硫胺酸之含量而言，只要為可抑制血清或血漿中之LDL因冷凍乾燥所致的變性的含量即可，並未特別限制，通常於血清或血漿100mL中添加本發明之LDL之變性抑制劑時，係成為0.025~5g的含量，成為0.5~1g的含量為較佳。
(血清及血漿)
本發明中的血清及血漿只要為由自人類或動物採取而獲得的全血所調製的血清及血漿，則可為任一者，由自人類採取而獲得的全血所調製的血清及血漿為較佳。血清可藉由下列方法而調製：將使用不含抗凝固劑的採血管而採取的全血離心分離的方法；使其自然沉降的方法等。血漿可藉由下列方法而調製：將藉由置入抗凝固劑的採血管所採取的全血離心分離的方法；使其自然沉降的方法等。就抗凝固劑而言，可列舉例如乙二胺四乙酸(EDTA)2鉀鹽、肝素、氟化鈉、檸檬酸鈉等。就動物而言，例如可列舉例如猴、大猩猩、紅毛猩猩、黑猩猩、狒狒等之靈長類等。
[低密度脂蛋白(LDL)]
就本發明中的LDL而言，可為被分類為比重為1.006~1.063的廣義LDL、被分類為比重為1.019~1.063的狹義LDL之任一者。廣義之LDL中亦包含被分類為比重為1.006~1.019的中間密度脂蛋白(IDL)。
(LDL中之成分)
就本發明中的LDL中之成分而言，例如可列舉膽固醇、中性脂肪等，較佳為膽固醇。
(冷凍乾燥)
於本發明，冷凍乾燥係以於該領域使用的通常意義而使用，意指將試料冷凍，直接於冷凍狀態下減壓，自試料去除水分進行乾燥。冷凍乾燥之條件並未特別限制，但通常於-80~35℃，較佳為-80~30℃之溫度，以0.667~1333Pa，較佳為13.1~133.3Pa之壓力，進行6~120小時，更佳為12~120小時。冷凍乾燥品之水分含量通常為10重量%以下，較佳為1重量%以下。
(LDL之因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法)
本發明之血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法，其特徵為於血清或血漿中添加甲硫胺酸後，將血清或血漿加以冷凍乾燥。具體而言，本發明之血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法係包含以下之步驟的方法。
(1)於血清或血漿中添加甲硫胺酸的步驟；及(2)將步驟(1)所獲得的混合物冷凍乾燥的步驟。
於本發明之變性抑制方法，於血清或血漿添加的甲硫胺酸之量，只要為可抑制血清或血漿中LDL因冷凍乾燥所致的變性的量即可，並未特別限制，通常血清或血漿每100mL，係0.025~5g，0.5~1g為較佳。
於血清或血漿中添加甲硫胺酸之際，甲硫胺酸可以甲硫胺酸水溶液之狀態添加。於甲硫胺酸水溶液之調製，可使用去離子水、蒸餾水、緩衝液等之水性媒質。就調製緩衝液用之緩衝劑而言，例如可列舉後述之緩衝劑等。甲硫胺酸水溶液之pH只要為將甲硫胺酸水溶 液添加於血清或血漿後，血清或血漿中之脂蛋白不會沉澱的pH，則可為任一pH，pH6~9為較佳。
(標準品)
本發明之血清或血漿中LDL中的成分定量用標準品，係含有經冷凍乾燥的血清或血漿中之LDL、及甲硫胺酸，且該成分之含量經定值的標準品。又，本發明之標準品不僅可作為血清或血漿中LDL中之成分定量用的標準品，亦可使用作為血清或血漿中LDL中成分定量中的精密度管理物質。
又，本發明之標準品因係冷凍乾燥狀態，於校正曲線製作等，係溶解於已知量之水性媒質而使用。就用以溶解冷凍乾燥狀態之標準品之水性媒質而言，只要為使本發明之LDL中之成分的定量方法成為可能的水性媒質即可，並未特別限制，例如可列舉去離子水、蒸餾水、緩衝液等。就用以調製緩衝液之緩衝劑而言，例如可列舉後述之緩衝劑等。
(標準品之製造方法)
本發明之標準品之製造方法包含以下之步驟。
(1)於血清或血漿中添加甲硫胺酸的步驟；(2)將步驟(1)所獲得的混合物冷凍乾燥的步驟；及(3)將步驟(2)所獲得的冷凍乾燥物中所含的LDL之成分之含量，使用已知量之該成分而定值的步驟。
於本發明之標準品之製造方法，被添加於血清或血漿的甲硫胺酸之量只要為可抑制血清或血漿中之LDL因冷凍乾燥所致的變性的量即可，並未特別限制， 通常每100mL血清或血漿，為0.025~5g，0.5~1g為較佳。
標準品之製造方法之一態樣記載如下。
將血清或血漿冷卻至2~8℃，於其中添加甲硫胺酸水溶液。將含有此血清或血漿的水溶液之pH以約1mol/L之氫氧化鈉或約1mol/L之鹽酸溶液調整為pH6~9後，將此經pH調整的水溶液使用0.2~0.4微米左右之過濾膜過濾。將獲得的溶液分注於冷凍乾燥用之小瓶，半封蓋。將分注於小瓶的溶液於-30℃以下之低溫使其冷凍後，於133.3Pa之真空條件下使其冷凍乾燥，一邊緩緩加溫一邊最終地於0~20℃作乾燥，而製作冷凍乾燥狀態之標準品。
(標準品之定值)
於本發明，標準品之定值係指將被製造的標準品中所含之應測量的LDL中之成分的含量，使用含有已知量之該成分的標準血清而決定。其中，含有已知量之該成分的標準血清係指例如藉由美國衛生及公共服務部疾病控制與預防中心(CDC)之基準分析法等之非利用均質法的方法，而該成分之含量被決定的血清。將使用此標準血清及製造的標準品作為檢體，藉由使用實際的自動分析裝置的均質法進行測量，比較含有已知量之該成分的標準血清之測量值(例如，吸光度)與被製造的標準品之測量值(例如，吸光度)，而決定被製造的標準品中之該成分之含量。被製造的標準品係於檢查施設作為標準血清而被用於檢體之測量值之決定。
(標準品中甲硫胺酸之含量)
本發明之標準品所含的甲硫胺酸之含量只要為標準品中之LDL可安定地被保持、標準品中之LDL中之成分可被正確地測量的含量即可，並未特別限制，通常，相對於血清或血漿100mL，為0.025~5g，0.5~1g為較佳。
(添加物)
於本發明之標準品，因應必要，可含有緩衝劑、金屬離子、鹽類、界面活性劑、防腐劑、糖化合物等之添加物。就緩衝劑而言，例如可列舉乳酸緩衝劑、檸檬酸緩衝劑、乙酸緩衝劑、琥珀酸緩衝劑、酞酸緩衝劑、磷酸緩衝劑、三乙醇胺緩衝劑、二乙醇胺緩衝劑、離胺酸緩衝劑、巴比妥緩衝劑(barbiturate buffer)、咪唑緩衝劑、蘋果酸緩衝劑、草酸緩衝劑、甘胺酸緩衝劑、硼酸緩衝劑、碳酸緩衝劑、甘胺酸緩衝劑、古德緩衝劑(Good's buffer)等。就古德緩衝劑而言，例如可列舉2-啉基乙烷磺酸(MES)、雙(2-羥乙基)亞胺基參(羥甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-(2-乙醯胺)亞胺基二乙酸(ADA)、哌-N,N’-雙(2-乙烷磺酸)(PIPES)、N-(2-乙醯胺)-2-胺基乙烷磺酸(ACES)、3-啉基-2-羥基丙烷磺酸(MOPSO)、N,N-雙(2-羥乙基)-2-胺基乙烷磺酸(BES)、3-啉基丙烷磺酸(MOPS)、N-[參(羥甲基)甲基]-2-胺基乙烷磺酸(TES)、2-[4-(2-羥乙基)-1-哌基]乙烷磺酸(HEPES)、3-[N,N-雙(2-羥乙基)胺基]-2-羥基丙烷磺酸(DIPSO)、N-[參(羥甲基)甲基]-2-羥基-3-胺基丙烷磺酸(TAPSO)、哌-N,N’-雙(2-羥基丙烷磺酸)(POPSO)、3-[4-(2-羥乙基)-1-哌基 ]-2-羥基丙烷磺酸(HEPPSO)、3-[4-(2-羥乙基)-1-哌基]丙烷磺酸[(H)EPPS]、N-[參(羥甲基)甲基]甘胺酸(Tricine)、N,N-雙(2-羥乙基)甘胺酸(Bicine)、N-參(羥甲基)甲基-3-胺基丙烷磺酸(TAPS)、N-環己基-2-胺基乙烷磺酸(CHES)、N-環己基-3-胺基-2-羥基丙烷磺酸(CAPSO)、N-環己基-3-胺基丙烷磺酸(CAPS)等。
就金屬離子而言，例如可列舉鎂離子、鈣離子、錳離子、鋅離子等。就鹽類而言，例如可列舉氯化鈉、氯化鉀等。就界面活性劑而言，例如可列舉非離子性界面活性劑、陽離子性界面活性劑、陰離子性界面活性劑、兩性界面活性劑等。就防腐劑而言，例如可列舉疊氮化鈉、鏈黴素(streptomycin)、建它黴素(gentamicin)等之抗生素、Bio ACE、Proclin 300(商標)、Proxel GXL(商標)等。
就上述糖化合物而言，例如可列舉單糖類、雙糖類等，但雙糖類為較佳。就單糖類而言，例如可列舉葡萄糖、果糖、岩藻醣(fucose)等。就雙糖類而言，例如可列舉蔗糖、海藻糖、麥芽糖等。單糖類、雙糖類等亦可併用2種以上。又，將糖化合物與血清或血漿混合之際之糖化合物的添加量，相對於血清或血漿100mL，通常為0.5~20g，1~15g為較佳，1.25~12.5g為更佳。
(LDL中之成分之定量方法)
本發明之血清或血漿中LDL中之成分的定量方法包含以下之步驟。
(1)使用血清或血漿中LDL中之成分之測量試藥，而 測量該成分的步驟；(2)使用本發明之標準品及步驟(1)之測量試藥，製作表示該成分之濃度與對該成分的測量值之間之關係之校正曲線的步驟；及(3)自步驟(1)所獲得的測量值、及步驟(2)所製作的校正曲線，決定血清或血漿中之該成分之濃度的步驟。
於上述步驟(1)之應測量的LDL中之成分的測量，可使用周知的LDL中之成分之測量方法。就LDL中之成分之測量方法而言，例如可列舉LDL-C測量方法、LDL中之中性脂肪(以下，記載為LDL-TG)之測量方法等。又，就LDL中之成分之測量方法而言，不將LDL藉由離心分離等之手段作劃分，而於除了LDL以外，HDL或VLDL等之複數種脂蛋白亦共存於同一反應液的狀態下測量LDL中之成分的方法，即所謂利用均質法的測量方法為較佳。
就利用均質法的LDL-C測量方法而言，例如可列舉WO2010/055916小冊所記載的方法：將檢體與膽固醇測量用酵素，於[a]聚氧乙烯‧聚氧伸烷基烷基芳基醚；[b]選自包含聚氧乙烯‧聚氧伸烷基縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯分枝烷基醚及聚氧乙烯‧聚氧伸烷基分枝烷基醚之群組的1個以上之界面活性劑；[c]選自包含一級胺、二級胺、三級胺及四級銨之群組的1個以上之界面活性劑；及[d]多價陰離子之存在下反應，藉由測量於該反應生成的過氧化氫或還原性物質，而測量檢體中之LDL-C的方法等。其中，膽固醇測量用酵素係指(i) 膽固醇酯水解酵素及膽固醇氧化酵素之組合、或(ii)膽固醇酯水解酵素、氧化型輔酶、及膽固醇脫氫酵素之組合。
(LDL中之成分之定量用套組)
本發明之血清或血漿中LDL中之成分之定量用套組，係含有本發明之標準品與LDL中之成分之測量試藥。藉由使用本發明之套組，可簡便地進行LDL中之成分之定量。就LDL中之成分之測量試藥而言，可使用周知的LDL中之成分之測量試藥。就LDL中之成分之測量試藥而言，例如可列舉LDL-C測量試藥、LDL-TG測量試藥等。又，就LDL中之成分之測量試藥而言，不將LDL藉由離心分離等之手段作劃分，而於除了LDL以外，HDL或VLDL等之複數種脂蛋白亦共存於同一反應液的狀態下測量LDL中之成分的試藥，即所謂利用均質法的測量方法所使用的試藥為較佳。
就利用均質法的LDL-C測量方法所使用的LDL-C測量試藥而言，只要為可使用本發明之標準品的LDL-C之定量方法的試藥即可，並未特別限制，例如可列舉記載於WO2010/055916小冊之LDL-C測量試藥：含有膽固醇測量用酵素；[a]聚氧乙烯‧聚氧伸烷基烷基芳基醚；[b]選自包含聚氧乙烯‧聚氧伸烷基縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯分枝烷基醚及聚氧乙烯‧聚氧伸烷基分枝烷基醚之群組的1個以上之界面活性劑；[c]選自包含一級胺、二級胺、三級胺及四級銨之群組的1個以上之界面活性劑；及[d]多價陰離子的LDL-C測量試藥等。 其中，膽固醇測量用酵素係指(i)膽固醇酯水解酵素及膽固醇氧化酵素之組合、或(ii)膽固醇酯水解酵素、氧化型輔酶、及膽固醇脫氫酵素之組合。又，就均質法所使用的LDL-C測量試藥而言，亦可使用市售之測量試藥。就市售之測量試藥而言，例如可列舉LDL-C測量試藥的Determiner L LDL-C(協和Medex公司製)、MetaboLead LDL-C(協和Medex公司製)、Cholestest N LDL(積水MEDICAL公司製)、Wako L-Type LDL-C(和光純藥工業公司製)等。
本發明之標準品或本發明之套組，較佳用於使用自動而連續測量血清或血漿中LDL中之成分的自動分析機的測量方法。
(LDL之變性抑制劑之效果之驗證)
本發明之LDL之變性抑制劑之效果可藉由例如下列方法而驗證。混合自複數健康人類採取的血清或血漿而調製混合血清(pooled serum)或混合血漿(pooled plasma)。將調製的混合血清或混合血漿分成2組，於一方之混合血清或混合血漿中添加本發明之LDL之變性抑制劑，而準備有添加本發明之LDL之變性抑制劑的混合血清或混合血漿(A組之血清或血漿)、及未添加本發明之LDL之變性抑制劑的混合血清或混合血漿(B組之血清或血漿)。將A組之血清或血漿以一定量分注於相同形狀及材質而成的複數個容器中，藉由前述方法進行冷凍乾燥，再藉由前述方法進行定值，而調製冷凍乾燥狀態之標準品(標準品A)。同樣地，使用B組之血清或血漿，而調製冷凍乾燥 狀態之標準品(標準品B)。將調製的標準品A選出N管(標準品A1~標準品AN)，將各標準品A(標準品A1~標準品AN)作為檢體，使用LDL膽固醇測量試藥，而測量對於各標準品A(標準品A1~標準品AN)的吸光度(吸光度A1~吸光度AN)。對標準品B亦進行同樣之操作，測量對於各標準品B(標準品B1~標準品BN)的吸光度(吸光度B1~吸光度BN)。其次，算出對於測量的吸光度A1~吸光度AN的變動係數(coefficient of variation：C.V.)C.V.A。同樣地，算出對於測量的吸光度B1~吸光度BN的變動係數C.V.B。算出的C.V.A及C.V.B係為了表示對於各標準品的吸光度之偏差幅度，C.V.小者意指吸光度較均一，C.V.大者意指吸光度較不均一。照理而言，因自相同血清或血漿調製標準品A及標準品B，對於標準品A的吸光度(吸光度A1~吸光度AN)抑或對於標準品B的吸光度(吸光度B1~吸光度BN)應皆成為均一，但冷凍乾燥時之LDL之變性程度由於在各容器有微妙差異，吸光度產生偏差。因此，若C.V.A相較於C.V.B呈現為小者，可判斷藉由本發明之LDL之變性抑制劑，LDL之冷凍乾燥所致的變性本身被抑制。
以下，藉由實施例以進一步詳細說明本發明，但此等並未以任何方式限定本發明之範圍。又，於本實施例，使用下述製造商之試藥及機器類。
血清(Trina BioreactivesAG公司製；Human TC/TG/HDL/LDL Cholesterol calibrator,LIQUID製品碼：CL1130)、海藻糖(林原公司製)、Bio ACE(KI化成公 司製)、L-甲硫胺酸(Nacalai Tesque公司製)、硼矽酸玻璃小瓶[大和特殊硝子公司製(容量：2mL；直徑：16mm；茶褐色)]、冷凍乾燥機(東京理化器械公司製；EYELA DRC-1100型、FDU-2100型)。
[實施例1]
藉由以下之方法，檢討甲硫胺酸之冷凍乾燥所致的LDL之變性抑制效果。
(1)冷凍乾燥用血清之調製
調製包含以下之組成的血清A~E。
<血清A~E>
血清 1L
海藻糖 40g
Bio ACE 0.05g
L-甲硫胺酸(參照第1表)
(2)冷凍乾燥
將上述調製的血清A各分注0.5mL於玻璃小瓶，將一次冷凍乾燥設定於-34℃ 32小時、二次冷凍乾燥設定於20℃ 4小時，而進行冷凍乾燥，最後直接於真空狀態以橡膠栓加以密封，而製造冷凍乾燥血清A。
使用血清B~E替代血清A，進行同樣的操作，而調製冷凍乾燥血清B~E。
將調製的冷凍乾燥血清A開封，於25℃加熱2小時後，再度以橡膠栓密封，於冷藏(4℃)下保存1週，藉此調製冷凍乾燥血清A+。替代冷凍乾燥血清A，使用冷凍乾燥血清B~E進行同樣之操作，調製冷凍乾燥血清B+~E+。
(3)小瓶間差異之檢討
準備上述(2)調製的冷凍乾燥血清A之小瓶20管，於各小瓶中添加純水0.5mL之純水而將再構成的血清作為檢體(20個檢體)使用，使用「Determiner L LDL-C」作為LDL膽固醇測量試藥，按照附帶於「Determiner L LDL-C」的附屬文件所記載之操作順序，針對各檢體進行共3次測量，測量對於各檢體的吸光度。由測量的吸光度算出吸光度之C.V.。其結果示於第2表。
如由第2表所明示，於添加L-甲硫胺酸而調製的冷凍乾燥血清，與未添加L-甲硫胺酸而調製的冷凍乾 燥血清作比較，無論有無開封後之處理，C.V.為低的，尤其於添加5~10g/L之L-甲硫胺酸的冷凍乾燥血清，C.V.顯著地低。C.V.越高，意指吸光度越不均一，此吸光度之不均一係起因於冷凍乾燥所致的LDL之變性，因此於血清或血漿中添加L-甲硫胺酸的情形，C.V.變低，表示L-甲硫胺酸抑制血清或血漿中之LDL之冷凍乾燥所致的變性。據此可知，藉由本發明之LDL之變性抑制劑，血清或血漿中之LDL之冷凍乾燥所致的變性被抑制，可正確地測量血清或血漿中之LDL中之成分。
[產業上之可利用性]
依據本發明，提供冷凍乾燥所致的血清或血漿中LDL之變性抑制劑、冷凍乾燥所致的血清或血漿中LDL之變性抑制方法、可正確測量血清或血漿中LDL中之成分的標準品及其製造方法、血清或血漿中LDL中之成分之定量方法、及血清或血漿中LDL中之成分之定量套組。
本發明之血清或血漿中LDL之變性抑制劑、血清或血漿中LDL之變性抑制方法、血清或血漿中LDL中之成分定量用標準品及其製造方法、血清或血漿中LDL中之成分之定量方法、及血清或血漿中LDL中之成分之定量套組係有用於代謝症候群等之診斷。

Claims (11)

  1. 一種血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制劑，其含有甲硫胺酸作為有效成分。
  2. 一種血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法，其特徵為於血清或血漿中添加甲硫胺酸後，將血清或血漿冷凍乾燥。
  3. 一種血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分定量用標準品，其特徵為含有經冷凍乾燥的血清或血漿中之低密度脂蛋白、及甲硫胺酸，且該低密度脂蛋白中之成分之含量經定值。
  4. 如請求項3之標準品，其係藉由包含以下步驟的方法所製造：(1)於血清或血漿中添加甲硫胺酸的步驟；(2)將步驟(1)所獲得的混合物冷凍乾燥的步驟；及(3)將步驟(2)所獲得的冷凍乾燥物中所含的低密度脂蛋白中之成分之含量，使用已知量之該成分而定值的步驟。
  5. 如請求項3或4之標準品，其中低密度脂蛋白中之成分係膽固醇。
  6. 一種血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分定量用的標準品之製造方法，其特徵為包含以下之步驟：(1)於血清或血漿中添加甲硫胺酸的步驟；(2)將步驟(1)所獲得的混合物冷凍乾燥的步驟；及(3)將步驟(2)所獲得的冷凍乾燥物中所含的低密度脂蛋白中之成分之含量，使用已知量之該成分而定 值的步驟。
  7. 如請求項6之製造方法，其中低密度脂蛋白中之成分係膽固醇。
  8. 一種血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分之定量方法，其特徵為包含以下之步驟：(1)使用血清或血漿中低密度脂蛋白中成分之測量試藥，而測量該成分的步驟；(2)使用如請求項3或4之標準品、及步驟(1)之測量試藥，製作表示該成分之濃度與對於該成分的測量值之間之關係的校正曲線的步驟；及(3)由步驟(1)所獲得的測量值、及步驟(2)所製作的校正曲線，決定血清或血漿中該成分之濃度的步驟。
  9. 如請求項8之定量方法，其中低密度脂蛋白中之成分係膽固醇。
  10. 一種血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分之定量用套組，其特徵為含有血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分之測量試藥、及如請求項3或4之標準品。
  11. 如請求項10之套組，其中低密度脂蛋白中之成分係膽固醇。
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