TW201331584A - 診斷方法 - Google Patents

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Abstract

本文係描述用於鑑定具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之哺乳動物的方法，與其所用之套組及其相關的用途和方法。

Description

診斷方法
本文係描述用於鑑定具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之哺乳動物的方法，與其所用之套組及其相關的用途和方法。
因牙醫師和病患間對於酸蝕(erosion)及其影響之體悟增加，而需要正確診斷酸蝕來源及鑑定高度易罹患酸蝕個體之方法。與因長期暴露於細菌酸而產生深局部表面下病灶之齲蝕(caries)不同，酸蝕係由於短暫和經常性暴露於低pH膳食酸而使整個琺瑯質表面溶解和軟化，導致微米量礦物質流失，特別是在以研磨性牙膏刷洗後。膳食酸如檸檬酸，不僅由於其酸性pH還有其鈣螯合能力，進一步使琺瑯質溶解，為特別具傷害性。
獲得性琺瑯質膜(AEP)本質上提供一些抗酸侵蝕琺瑯質之保護。AEP含有鈣和磷酸離子以及蛋白質和酵素。薄膜形成為一複雜、多步驟過程，其中前驅蛋白如富酪蛋白(statherin)和富含脯胺酸之蛋白最先結合並為另外的蛋白(黏蛋白等)提供結合位置。成熟係涉及薄膜蛋白之交叉連接和去磷酸化以及2小時之後晚期的菌斑細菌之結合。薄膜之組成高度地依賴隨流速、刺激、 時段、飲食等而變之唾液量。唾液流速大大地影響唾液pH、離子組份和緩衝能力。
酸蝕可由數種狀況造成-經常暴露於膳食酸、胃酸或缺乏足夠的唾液(口乾症)。患有胃酸糜爛之病患一般係經由腐蝕性傷害之嚴重度和位置(上顎表面)之評估來鑑定，而患有口乾症之病患則係由肉眼檢驗唾液和測量唾液流速來鑑定。酸蝕與酸性飲料攝取增加、低唾液流速及由低唾液流速所造成的低唾液pH/緩衝能力間有關聯。然而，某些唾液流速正常和無胃酸暴露之病患仍為膳食性酸蝕傷害所苦，即使將膳食酸暴露降至最小，其顯示對酸蝕具高度敏感性，可能與其AEP有關。對於鑑定此高度敏感性病患之亞群給予適當治療，以及鑑定病患供臨床研究評估口腔保健活性劑用以降低、減輕和控制膳食酸之牙酸蝕的簡單和可靠方法有其需要。
令人驚訝地發現，高度易罹患膳食性琺瑯質酸蝕之病患在整個口部唾液中顯現1)明顯較低的黏蛋白5B、碳酸酐酶6及/或較高的富酪蛋白量，以及相較於具有類似唾液流速和飲食的健康對照組，在AEP中2)明顯較低的總蛋白、富酪蛋白及/或鈣濃度。使用唾液和薄膜診斷法，依據總蛋白濃度、鈣分析和蛋白鑑定，這些因子可用於鑑定易罹患酸蝕之病患。因試驗樣本為唾液和唾液薄膜，所以樣本收集容易並且有豐富的蛋白和礦物質含量相關之資料。
因此，某些本發明之實施例係提供鑑定具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之病患的方法，其包括一或二個下列步驟：(i)從病患得到全口唾液之樣本並測量唾液中一或多項黏蛋白5B、碳酸酐酶6及/或富酪蛋白含量，其中相對於各對照值，較低的黏蛋白5B、較低的碳酸酐酶6及/或較高的富酪蛋白含量係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；及(ii)從病患得到琺瑯質膜(AEP)之樣本並測量AEP中一或多項總蛋白、富酪蛋白及鈣濃度，其中相對於各對照值，較低的各這些試劑之量係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕。
在某些實施例中，此酸蝕為膳食性病因。
本發明其他可應用的領域，從下文所提供的詳細說明將會變得顯而易見。應了解，在指出本發明之較佳實施例的同時，詳細說明和特定的實例僅希望用作說明之目的而不希望限制本發明之範圍。
詳細說明
下列較佳的實施例說明基本上僅作為示例且不希望在任何方面限制本發明、其應用或用途。
因此本發明之某些實施例係提供鑑定具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之病患的方法(方法1)，其包括測量一或多項，例如下列任何2、3、4或5項，例如所有6項：(i)測量全口唾液中之黏蛋白5B濃度，例如來自病患之刺激的全口唾液(UWMS)樣本，其中相對於對照值，較低的黏蛋白5B濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕； (ii)測量全口唾液中之碳酸酐6濃度，例如來自病患之刺激的全口唾液(UWMS)樣本，其中相對於對照值，較低的碳酸酐6濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；(iii)測量全口唾液中之富酪蛋白濃度，例如來自病患之刺激的全口唾液(UWMS)樣本，其中相對於對照值，較高的富酪蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；(iv)測量來自病患之獲得性琺瑯質膜(AEP)樣本中之總蛋白濃度，其中相對於對照值，較低的總蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；(v)測量來自病患之獲得性琺瑯質膜(AEP)樣本中之富酪蛋白濃度，其中相對於對照值，較低的富酪蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；及(vi)測量來自病患之獲得性琺瑯質膜(AEP)樣本中之鈣濃度，其中相對於對照值，較低的鈣濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕。
例如，本發明係提供
1.1. 方法1，其中病患在收集樣本前至少一小時未飲食，例如至少二小時未飲食；1.2. 方法1或1.1，其中當病患具有一或多項下列指標時，則鑑定該病患具有高度易罹患琺瑯質酸蝕：
1.3. 方法1.2，其中鑑為具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之病患係符合至少二項方法1.2中所鑑定的指標。
1.4. 任何前述的方法，係包括測量全口唾液中之黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白；1.5. 任何前述的方法，其中病患之AEP係藉由於病患的口部放置固定在顎口盤/夾板或夾具上之羥磷灰石或琺瑯板，歷時例如0.5-2小時，例如約1小時所採樣，並從病患口中移出後，由此板收集AEP；1.6. 任何前述的方法，進一步係包括治療經鑑定為具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之病患，其包括投予或指導病患投予牙齒一有效的治療劑或產品，供控制琺瑯質或牙本質酸蝕，其包括下列一或多項：(a)選自氟化物漱口水和高氟化物濃度牙膏之氟化物治療；(b)包括磷酸鈣或鈣研磨劑例如焦磷酸鈣、磷酸二鈣二水合物或碳酸鈣之牙膏；(c)口腔保健產品，例如包括游離或鹽形式之L-精胺酸的漱口水；(d)牙本質結合劑或於暴露的牙本質區域塗漆；(e)含亞錫離子之口腔保健產品； (f)含鈣離子之口腔保健產品。
本發明之某些實施例進一步係提供診斷易罹患琺瑯質酸蝕之套組，其包括用於測量一或多項下列蛋白濃度之用具：黏蛋白5B、碳酸酐酶6及/富酪蛋白，例如包括該蛋白之抗體與使用說明書。
本發明進一步係提供一或多種黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白之抗體於製造套組供診斷高度易罹患琺瑯質酸蝕的用途。
在某些實施例中，本發明係提供鑑定具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之哺乳動物的方法，其包括：a.由哺乳動物的口腔得到全口唾液樣本；b.測量一或多項下列生物標記之濃度i)黏蛋白5B；ii)碳酸酐酶6；及iii)富酪蛋白；並將黏蛋白5B濃度；碳酸酐酶6濃度；及富酪蛋白濃度與各生物標記之對照值比較；其中該對照值為由未患有琺瑯質酸蝕之哺乳動物的口腔所採集之全口唾液樣本的生物標記濃度；且其中相對於黏蛋白5B之對照值，較低的黏蛋白5B濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；其中相對於碳酸酐酶6之對照值，較低的碳酸酐酶6濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；及其中相對於富酪蛋白之對照值，較高的富酪蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕。在某些實施例中，琺瑯質酸蝕為膳食性病因。
在某些實施例中，該全口唾液為未受刺激的全口唾液。在某些實施例中，該全口唾液為刺激的全口唾液。
在某些實施例中，當哺乳動物具有一或多項下列指標時，則鑑定該哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕：
在某些實施例中，依據具有至少二項下列指標，鑑定該哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕：
本發明某些實施例係提供進一步包括治療經鑑定具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之哺乳動物步驟之方法，其中該步驟係包括將一有效量之預防或降低牙本質或琺瑯質酸蝕之試劑或產品投予該哺乳動物之口腔。
在某些實施例中，預防或降低牙本質或琺瑯質酸蝕之試劑或產品係選自：氟化物漱口水；高氟化物濃度牙膏；包括磷酸鈣或鈣研磨劑例如焦磷酸鈣、磷酸二鈣二水合物或碳酸鈣之牙膏；包括游離或鹽形式之L-精胺酸的口腔保健組成物；牙本質 結合劑或漆劑；含亞錫離子來源之口腔保健組成物；及其一或二項之組合。
某些實施例係提供用於哺乳動物中診斷高度易罹患琺瑯質酸蝕之套組，其包括供測量採自哺乳動物口腔之全口唾液樣本中一或多項黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白之濃度的用具，以及使用說明書。
在某些實施例中，該哺乳動物係選自人類；貓；和狗。在某些實施例中，該哺乳動物為人類。
本發明某些實施例係提供一或多種黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白之抗體，於製造套組供哺乳動物診斷高度易罹患琺瑯質酸蝕之用途。
本發明其他的實施例係提供用於鑑定哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之方法，其包括：a.由哺乳動物的口腔得到獲得性琺瑯質膜(AEP)樣本；b.測量一或多項下列生物標記之濃度i)總蛋白；ii)富酪蛋白；及iii)鈣；並將總蛋白濃度；富酪蛋白濃度；及/或鈣濃度與各生物標記之對照值比較；其中該對照值為未患有琺瑯質酸蝕之哺乳動物的口腔所採集之AEP樣本的生物標記濃度；且其中相對於總蛋白之對照值，較低的總蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；其中相對於富酪蛋白之對照值，較低的富酪蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；及其中相對於鈣之對照值，較低的鈣濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕。
在某些實施例中，當哺乳動物具有一或二項下列指標時，則鑑定該哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕：
某些實施例係提供用於哺乳動物中診斷高度易罹患琺瑯質酸蝕之套組，其包括供測量於1小時內或更長時間所形成的AEP樣本中鈣、富酪蛋白及/或總蛋白之用具。
如全文所用，範圍係用於速記供描述在此範圍內的各個和每個值。在此範圍內的任何值皆可選作此範圍的終端值。此外，文中所引述的所有參考文獻其全文係以引用的方式併入本文中。
在本文揭示文與所引述的參考文獻的定義有衝突時，則以本揭示文為主。
除非另有說明否則文中和說明書之其他地方所表示的所有百分比和量，應了解係指重量百分比。所給予的量係以物質之有效重量為基準。
實例 實例1
進行一臨床試驗用以鑑定易罹患琺瑯質酸蝕之標記。登記標準包括(i)無刺激下唾液流速>0.2ml/min，及(ii)無胃酸糜爛損傷或異常唾液功能之現象。
檢查二組病患(各n=30)，一組為無膳食酸蝕現象(對照組)而另一組為具膳食酸蝕現象(酸蝕組)，二組具有類似的飲食和正常的唾液流速。AEP係藉由於病患的口部放置固定在顎口盤/夾板或夾具上之羥磷灰石/琺瑯板，歷時例如1小時所採樣，並從病患口中移出後，由此板收集AEP。AEP亦從病患的門牙採樣。
唾液中之黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白：將未受刺激的全口唾液(UWMS)以免疫墨點法對黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白作分析。半定量分析係藉由比較抗純化的MUC 5b、碳酸酐酶6及富酪蛋白標準之抗體染色密度來進行。相較於對照組，在酸蝕病患的全唾液中有大約25%具較低MUC 5b(p<0.05)和碳酸酐酶6(p<0.05)。相反地，在相同的樣本中明顯有更高(大約二倍)的富酪蛋白(p<0.001)。
於1小時內原位形成的AEP中之總蛋白含量：使用BCA分析，將以Sialostrip紙所收集之AEP內的總蛋白量作比較。就超過>2小時本身上門牙上所形成的AEP中的總蛋白，對照組和酸蝕組病患並無差異。相反的，1小時之夾在夾板內覆蓋羥磷灰石或琺瑯質板之AEP則顯示明顯的差異(分別為p<0.01和p<0.05，各組n=18)。此顯示在酸蝕組中AEP形成的速率較慢。
原位暴露1小時後AEP中的富酪蛋白：AEP內特定蛋白之分析顯示在黏蛋白或碳酸酐6量上有微小差異(雖然有許多受試者無偵測到蛋白)，但富酪蛋白有明確下降。
原位暴露1小時後AEP中的鈣：在羥磷灰石片上形成1小時之AEP的離子分析(ICP/MS)顯示明顯的鈣和磷之量。再者，就對照組對酸蝕組，鈣量顯著地較高。使用相同的溶離技術， 從非唾液處理的羥磷灰石片溶離小量的鈣或磷，其顯示鈣和磷係與吸附的唾液蛋白有關。
總結，唾液和琺瑯質膜樣本係從大量的健康和酸蝕受試者族群中收集。使用人類琺瑯質或羥磷灰石並未有任何牴觸且在使用的所有分析中得到類似的結果。使用ICP/MS需要進一步闡明，雖然其顯示二組間有差異。輪廓測定顯示薄膜之保護效應和二組間的差異。易罹患酸蝕增加可能係由於薄膜形成率降低。雖然在受試者牙齒(門牙)中未偵測到薄膜蛋白量之差異，但在夾片所夾住的琺瑯質和羥磷灰石板則為明顯的。薄膜形成之速率可能係依唾液中薄膜組成份之濃度而定，但亦可能係受微生物降解或其他離子性因子影響。
從上述實例，使用任何或所有下列參數開發出診斷方法，用以鑑定高度易罹患牙齒酸蝕之個體，例如

Claims (20)

  1. 一種鑑定哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之方法，其包括：a.由該哺乳動物的口腔得到全口唾液樣本；b.測量一或多項下列生物標記之濃度：i)黏蛋白5B；ii)碳酸酐酶6；及iii)富酪蛋白；c.將黏蛋白5B濃度；碳酸酐酶6濃度；及/或富酪蛋白濃度與各該生物標記之對照值比較；其中該對照值為由未患有琺瑯質酸蝕之哺乳動物的口腔所採集之全口唾液樣本的該生物標記濃度；且其中相對於該黏蛋白5B之對照值，較低的黏蛋白5B濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；其中相對於該碳酸酐酶6之對照值，較低的碳酸酐酶6濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；及其中相對於富酪蛋白之對照值，較高的富酪蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕。
  2. 如請求項第1項之方法，其中該琺瑯質酸蝕為膳食性病因。
  3. 如請求項第1或2項之方法，其中該全口唾液為未受刺激的全口唾液。
  4. 如任何前述請求項之方法，其中當哺乳動物具有一或多項下列指標時，則鑑定該哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕：
  5. 如任何前述請求項之方法，其中依據具有至少二項下列指標，則鑑定該哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕：
  6. 如任何前述請求項之方法，進一步係包括其中該哺乳動物需在口腔採取樣本前至少1小時避免飲食之步驟。
  7. 如任何前述請求項之方法，進一步係包括治療經鑑定具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之哺乳動物之步驟，其包括將一有效量之預防或降低牙本質或琺瑯質酸蝕之試劑或產品投予該哺乳動物之口腔。
  8. 如請求項第7項之方法，其中該預防或降低牙本質或琺瑯質酸蝕之試劑或產品係選自：氟化物漱口水；高氟化物濃度牙膏；包括磷酸鈣或鈣研磨劑之牙膏，例如焦磷酸鈣、磷酸二鈣二水合物或碳酸鈣；包括游離或鹽形式之L-精胺酸的口腔保健組成物；牙本質結合劑或漆劑；含亞錫離子來源之口腔保健組成物；及其一或二項之組合物。
  9. 如任何前述請求項之方法，其中該哺乳動物為人類。
  10. 一種用於哺乳動物中診斷高度易罹患琺瑯質酸蝕之套組，其包括供測量採自哺乳動物口腔之全口唾液樣本中一或多項黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白之濃度的用具。
  11. 如請求項第10項之套組，其中該琺瑯質酸蝕為膳食性病因。
  12. 如請求項第10或11項之套組，其中該測量一或多項黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白濃度之用具係包括其抗體。
  13. 一種抗一或多種黏蛋白5B、碳酸酐酶6及富酪蛋白之抗體於製造供哺乳動物診斷高度易罹患琺瑯質酸蝕之套組的用途。
  14. 一種鑑定哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之方法，其包括： a.由該哺乳動物的口腔得到獲得性琺瑯質膜(AEP)樣本；b.測量一或多項下列生物標記之濃度：i)總蛋白；ii)富酪蛋白；及iii)鈣；及c.將總蛋白濃度；富酪蛋白濃度；及/或鈣濃度與各該生物標記之對照值比較；其中該對照值為由未患有琺瑯質酸蝕之哺乳動物的口腔所採集之AEP樣本的該生物標記濃度；且其中相對於該總蛋白之對照值，較低的總蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；其中相對於該富酪蛋白之對照值，較低的富酪蛋白濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕；及其中相對於該鈣之對照值，較低的鈣濃度係表示高度易罹患琺瑯質酸蝕。
  15. 如請求項第14項之方法，其中該琺瑯質酸蝕為膳食性病因。
  16. 如請求項第14或15項之方法，其中當哺乳動物具有一或二項下列指標時，則鑑定該哺乳動物具有高度易罹患琺瑯質酸蝕：
  17. 如請求項第14至16項任一項中之方法，進一步係包括治療經鑑定具有高度易罹患琺瑯質酸蝕之哺乳動物之步驟，其中該步驟係包括將一有效量之預防或降低牙本質或琺瑯質酸蝕之試劑或產品投予該哺乳動物之口腔。
  18. 如請求項第17項之方法，其中該預防或降低牙本質或琺瑯質酸蝕之試劑或產品係選自：氟化物漱口水；高氟化物濃度牙膏；包括磷酸鈣或鈣研磨劑之牙膏，例如焦磷酸鈣、磷酸二鈣二水合物或碳酸鈣；包括游離或鹽形式之L-精胺酸的口腔保健組成物；牙本質結合劑或漆劑；含亞錫離子來源之口腔保健組成物；及其一或二項之組合物。
  19. 如請求項第14至18項任一項中之方法，其中該哺乳動物為人類。
  20. 一種用於哺乳動物中診斷高度易罹患琺瑯質酸蝕之套組，其包括供測量於1小時或更長時間內所形成的AEP樣本中鈣、富酪蛋白及/或總蛋白之用具。
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