TW201325617A - 陽離子性脂質 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種將核酸容易地導入至細胞內之式(I)所表示之陽離子性脂質、含有該陽離子性脂質及核酸之組合物、使用含有該陽離子性脂質及核酸之組合物而將核酸導入至細胞內之方法等。□(式中，R1及R2相同或不同，為烯基等，X1及X2為氫原子，或者一併形成單鍵或伸烷基，X3不存在，或為烷基等，Y不存在，或為陰離子，a及b相同或不同，為0~3，L3為單鍵等，R3為烷基等，L1及L2為-O-、-CO-O-或者-O-CO-)。

Description

陽離子性脂質
本發明係關於一種將核酸容易地導入至例如細胞內等之新穎陽離子性脂質、含有該陽離子性脂質之新穎組合物等。
所謂陽離子性脂質係具有如下區域的親水親油性(amphipathic property)分子，該區域為包含一個或者複數個烴基之脂質親和性區域、與包含至少一個帶正電之極性頭基(polar headgroup)之親水性區域。陽離子性脂質與核酸等巨大分子形成總電荷帶正電之複合物，由此而使核酸等巨大分子變得容易通過細胞之原生質膜而進入至細胞質內，因此陽離子性脂質有用。可於活體外(in vitro)及活體內(in vivo)進行之該過程作為轉染(transfection)而為人所知。
典型的是陽離子性脂質單獨使用或者與磷脂質中之中性脂質組合。已知將陽離子性脂質與中性脂質組合可容易地形成包含整齊排列之脂質雙層的囊泡，因此有用。陽離子性脂質單獨或者與中性脂質組合而形成之囊泡或者脂質體於表面帶有大量正電荷，藉由該荷電而可與聚核苷酸或者帶負電之蛋白質等其他陰離子分子形成複合物。因聚核苷酸/陽離子性脂質/中性脂質複合物之表面上剩餘之總陽離子荷電，可主要在細胞膜表面和負電荷產生較強之相互反應。
眾多不同種類之陽離子性脂質被合成而用於轉染，目前於市面上已有售。此種陽離子性脂質例如有Lipofectin、Lipofectin ACE、Lipofect AMINE、Transfeactam、DOTAP等。
專利文獻1中所揭示之N-[1-(2,3-二油氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)等是早期開發出之陽離子性脂質之一。DOTMA等藉由對分子提供陽離子部位之具有四級氮之丙銨基、及於分子之丙基主鏈上所醚鍵結之一對高級烴而賦予特徵。四級氮經3個甲基等相對短鏈之烷基鏈取代。結構上類似之陽離子性脂質、N-(2,3-二(9-(Z)-十八碳烯醯氧基))-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTAP)並非包含醚鍵結之烷基而是包含醯基。
專利文獻2及3中所揭示之例如N-[1-(2,3-二油氧基丙基)]-N,N-二甲基-N-羥基乙基溴化銨(DORIE)、2,3-二油氧基-N-[2-(精胺甲醯胺基)乙基]-N,N-二甲基-1-丙基三氟乙酸銨(DOSPA)等藉由對分子提供陽離子部位之具有四級氮的丙銨基、及於分子之丙基主鏈上所醚鍵結之一對高級烴而賦予特徵，進而藉由四級氮經三個甲基等相對短鏈之烷基鏈與羥基烷基取代而賦予特徵。
專利文獻4中例如揭示有1,2-二亞麻氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DLinDMA)等。DLinDMA等係以藉由開發出更柔軟之陽離子性脂質而提高脂質體等之膜流動性為目的，藉由將結構上類似之陽離子性脂質DOTAP及DOTMA之高級烷基設為包含至少2處不飽和部位之高級烷基而賦予特 徵。又，專利文獻5中例如揭示有2,2-二亞麻基-4-二甲基胺基甲基-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-K-DMA)等。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]
日本專利特開昭61-161246號公報(美國專利5049386號說明書)
[專利文獻2]
國際公開第91/16024號說明書
[專利文獻3]
國際公開第97/019675號說明書
[專利文獻4]
國際公開第2005/121348號說明書
[專利文獻5]
國際公開第2009/086558號說明書
本發明之目的在於提供將核酸容易地導入至例如細胞內等之新穎陽離子性脂質、含有該陽離子性脂質之新穎組合物等。
本發明係關於以下之(1)~(27)。
(1)一種陽離子性脂質，其以下述式(I)表示， (式中，R1及R2相同或不同，為碳數為12~24之直鏈狀或分枝狀之烷基、烯基或炔基，或者R1及R2一併形成二烷基亞甲基、二烯基亞甲基、二炔基亞甲基或烷基烯基亞甲基，X1及X2為氫原子，或者一併形成單鍵或伸烷基，X3不存在，或者為碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基，於X3不存在之情形時，Y亦不存在，a及b為0，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代的碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2為-O-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，且a與b均不為0，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基 胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，L3為單鍵，R3為氫原子，L1及L3相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，L3為-CO-或者-CO-O-，R3為吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基、嗎啉-3-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，該取代基之至少1個為胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、吡咯啶基、哌啶基或者嗎啉基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，於X3為碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基之情形時，Y為製藥上所容許之陰離子，a及b相同或不同，為0~3，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6 之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-)。
(2)如上述(1)之陽離子性脂質，其中L1及L2為-O-或者-O-CO-，R1及R2為十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基或者3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基。
(3)如上述(1)之陽離子性脂質，其中L1及L2為-CO-O-，R1及R2為十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基或者2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基。
(4)如上述(1)至(3)中任一項之陽離子性脂質，其中a及b均為0或1。
(5)如上述(1)、(2)及(4)中任一項之陽離子性脂質，其中L3為單鍵，R3為氫原子、甲基、吡咯啶-3-基、哌啶-3- 基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2為-O-。
(6)如上述(1)至(4)中任一項之陽離子性脂質，其中L3為-CO-或者-CO-O-，R3為吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，該取代基之至少1個為胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基，L1及L2為相同之-CO-O-或者-O-CO-。
(7)如上述(1)至(6)中任一項之陽離子性脂質，其中X1及X2一併形成單鍵或者伸烷基。
(8)如上述(1)至(5)中任一項之陽離子性脂質，其中X1及X2一併形成單鍵或者伸烷基，R3為氫原子、甲基或者經相同或不同之1~3個胺基、羥基或胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基。
(9)如上述(1)至(5)中任一項之陽離子性脂質，其中X1及X2為氫原子，R3為氫原子、甲基或者經相同或不同之1~3個胺基、羥基或胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基。
(10)如上述(6)之陽離子性脂質，其中X1及X2一併形成單鍵或者伸烷基，R3為經相同或不同之1~3個胺基、羥基或者胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基。
(11)如上述(6)之陽離子性脂質，其中X1及X2為氫原子，R3為經相同或不同之1~3個胺基、羥基或者胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基。
(12)如上述(1)至(11)中任一項之陽離子性脂質，其中X3不存在，或者為甲基。
(13)一種組合物，其含有如上述(1)至(12)中任一項之陽離子性脂質及核酸。
(14)如上述(13)之組合物，其中陽離子性脂質與該核酸形成複合物，或者形成組合中性脂質及/或高分子而成者與該核酸之複合物。
(15)如上述(13)之組合物，其中陽離子性脂質與該核酸形成複合物，或者形成組合中性脂質及/或高分子而成者與該核酸之複合物，該組合物含有該複合物及封入該複合物之脂質膜。
(16)如上述(13)至(15)中任一項之組合物，其中核酸係具有利用RNA干擾(RNAi)而抑制標靶基因表現之作用的核酸。
(17)如上述(16)之組合物，其中標靶基因係與腫瘤或炎症相關之基因。
(18)一種將核酸導入至細胞內之方法，其係使用如上述 (14)至(17)中任一項之組合物而將該核酸導入至細胞內的方法。
(19)如上述(18)之方法，其中細胞係位於哺乳類之腫瘤或炎症部位之細胞。
(20)如上述(18)或(19)之方法，其中細胞係位於哺乳類之肝臟、肺、腎臟或脾臟之細胞。
(21)如上述(19)或(20)之方法，其中導入至細胞內之方法係藉由靜脈內投予而導入至細胞內的方法。
(22)一種癌或炎症疾病之治療方法，其係將如上述(17)之組合物投予哺乳動物。
(23)如上述(22)之方法，其中投予之方法係靜脈內投予。
(24)一種醫藥，其係包含如上述(16)之組合物的用於治療疾病之醫藥。
(25)如上述(24)之醫藥，其係靜脈內投予用。
(26)一種癌或炎症疾病之治療劑，其係包含如上述(17)之組合物的用於治療癌或炎症疾病的癌或炎症疾病之治療劑。
(27)如上述(26)之癌或炎症疾病之治療劑，其係靜脈內投予用。
藉由將含有本發明之新穎陽離子性脂質及核酸的組合物投予哺乳類等，可將該核酸容易地導入至例如細胞內等。
本發明之陽離子性脂質係以下述式(I)表示， (式中，R1及R2相同或不同，為碳數為12~24之直鏈狀或分枝狀之烷基、烯基或炔基，或者R1及R2一併形成二烷基亞甲基、二烯基亞甲基、二炔基亞甲基或烷基烯基亞甲基，X1及X2為氫原子，或者一併形成單鍵或伸烷基，X3不存在，或者為碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基，於X3不存在之情形時，Y亦不存在，a及b為0，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代的碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2為-O-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，且a與b均不為0，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基 胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，L3為單鍵，R3為氫原子，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，L3為-CO-或者-CO-O-，R3為吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基、嗎啉-3-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，該取代基之至少1個為胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、吡咯啶基、哌啶基或者嗎啉基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，於X3為碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基之情形時，Y為製藥上所容許之陰離子，a及b相同或不同，為0~3，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6 之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-)。
以下，有時將式(I)所表示之化合物稱為化合物(I)。其他式編號之化合物亦相同。
式(I)之各基之定義中，作為碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之烷基，例如可列舉十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基、2,6,10,14-四甲基十五烷基、二十烷基、3,7,11,15-四甲基十六烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基等。
作為碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之烯基，若為包含1~3個雙鍵之碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之烯基即可，例如可列舉(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、2,6,10,14-四甲基十 五碳-1-烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，較佳可列舉(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
作為碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之炔基，若為包含1~3個三鍵之碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之炔基即可，例如可列舉十二碳-11-炔基、十三碳-12-炔基、十五碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十五碳-4,6-二炔基、十六碳-5,7-二炔基、十七碳-8-炔基、十八碳-9-炔基等。
再者，於式(I)中，R1及R2更佳為相同的碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之烷基、烯基或者炔基。又，於R1及R2為相同或不同之任意之情況下，亦更佳為碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之烷基或者烯基，進一步更佳為碳數為12~24之直鏈狀之烯基。
作為伸烷基，例如可列舉亞甲基、伸乙基、伸丙基等。
作為碳數為1~6之烷基，例如可列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、環丁基、環丙基甲基、戊基、異戊基、第二戊基、新戊基、第三戊基、環戊基、己基、環己基等，較佳可列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基、第二戊基、第三戊基、新戊基、己基等，進而較佳為列舉甲基、乙基、丙基等。
作為碳數為3~6之烯基，例如可列舉烯丙基、1-丙烯 基、丁烯基、戊烯基、己烯基等，較佳可列舉烯丙基等。
作為經取代之碳數為1~6之烷基中之烷基部分及經取代之碳數為3~6之烯基中之烯基部分，分別與上述碳數為1~6之烷基及碳數為3~6之烯基同義。
二烷基亞甲基、二烯基亞甲基、二炔基亞甲基或者烷基烯基亞甲基中之烷基、烯基及炔基部分分別與上述碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之烷基、碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之烯基及碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之炔基同義。再者，更佳為二烷基亞甲基、二烯基亞甲基及二炔基亞甲基中之烷基、烯基及炔基部分分別相同。
於本發明中，作為製藥上所容許之陰離子，例如可列舉氯化物離子、溴化物離子、硝酸根離子、硫酸根離子、磷酸根離子等無機離子，乙酸離子、草酸離子、馬來酸離子、富馬酸離子、檸檬酸離子、苯甲酸離子、甲磺酸離子等有機酸離子等。
於本發明中，吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基及嗎啉-3-基分別包含於環中之氮原子上所鍵結之氫原子轉換為甲基或者乙基者。
作為單烷基胺基及二烷基胺基，若分別為經1個及相同或不同之2個碳數為1~6之烷基(與上述同義)、或者經胺基、甲基胺基、乙基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基(與上述同義)取代的胺基即可，例如可列舉甲基胺基、乙基胺基、丙基胺基、丁基胺基、戊基胺基、己基胺基、二甲基 胺基、二乙基胺基、乙基甲基胺基、甲基丙基胺基、丁基甲基胺基、甲基戊基胺基、己基甲基胺基、胺基乙基胺基、胺基丙基胺基、(胺基乙基)甲基胺基、雙(胺基乙基)胺基等，較佳可列舉甲基胺基、乙基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基、胺基丙基胺基、雙(胺基乙基)胺基等。
於本發明中，胺基、單烷基胺基及二烷基胺基亦可分別為於氮原子上之孤電子對上配位氫離子而形成銨基、單烷基銨基及二烷基銨基，胺基、單烷基胺基及二烷基胺基分別包含銨基、單烷基銨基及二烷基銨基。
作為三烷基銨基，若為經相同或不同之3個碳數為1~6之烷基(與上述同義)、或者經胺基、甲基胺基、乙基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基(與上述同義)取代的銨基即可，例如可列舉三甲基銨基、乙基二甲基銨基、二乙基甲基銨基、三乙基銨基、三丙基銨基、三丁基銨基、三戊基銨基、三己基銨基、三(胺基乙基)銨基、(胺基乙基)二甲基銨基、雙(胺基乙基)甲基銨基等，較佳可列舉三甲基銨基、三乙基銨基、三(胺基乙基)銨基、(胺基乙基)二甲基銨基、雙(胺基乙基)甲基銨基等。
於本發明中，於胺基、單烷基胺基及二烷基胺基之氮原子上之孤電子對上配位有氫離子之銨基、單烷基銨基及二烷基銨基、以及三烷基銨基亦可與製藥上所容許之陰離子(與上述同義)形成鹽。
作為烷氧基，若為經碳數為1~6之烷基(與上述同義)、 或者經胺基、甲基胺基、乙基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基(與上述同義)取代的羥基即可，例如可列舉甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、胺基乙氧基、甲基胺基乙氧基等，更佳為列舉甲氧基、乙氧基、胺基乙氧基、甲基胺基乙氧基等。
作為單烷基胺甲醯基及二烷基胺甲醯基，若分別為經1個及相同或不同之2個碳數為1~6之烷基(與上述同義)、或者經胺基、甲基胺基、乙基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基(與上述同義)取代之胺甲醯基即可，例如可列舉甲基胺甲醯基、乙基胺甲醯基、丙基胺甲醯基、丁基胺甲醯基、戊基胺甲醯基、己基胺甲醯基、二甲基胺甲醯基、二乙基胺甲醯基、乙基甲基胺甲醯基、甲基丙基胺甲醯基、丁基甲基胺甲醯基、甲基戊基胺甲醯基、己基甲基胺甲醯基、胺基乙基胺甲醯基、胺基丙基胺甲醯基、(胺基乙基)甲基胺甲醯基、雙(胺基乙基)胺甲醯基等，較佳可列舉甲基胺甲醯基、乙基胺甲醯基、二甲基胺甲醯基等。
又，L1及L2更佳為相同之-O-、-CO-O-或者-O-CO-。
又，於L1及L2之至少1個為-O-之情形時，更佳為與-O-鍵結之R1及R2相同或不同，為十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳- 11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基，或者R1及R2一併形成二烷基亞甲基或二烯基亞甲基，進一步更佳為R1及R2相同或不同，為十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，或者R1及R2一併形成二(十四烷基)亞甲基、二(十六烷基)亞甲基、二(十八烷基)亞甲基、二((Z)-十六碳-9-烯基)亞甲基、二((Z)-十八碳-6-烯基)亞甲基、二((Z)-十八碳-9-烯基)亞甲基、二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)亞甲基，最佳為R1及R2相同或不同，為十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。再者，於任意情形時，均進而較佳為R1及R2相同，或者R1及R2一併形成烷基、烯基或炔基部分相同的二烷基亞甲基、二烯基亞甲基或二炔基亞甲基。
又，於L1及L2之至少1個為-O-CO-之情形時，與-O-CO-鍵結之R1及R2更佳為相同或不同之十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯 基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基，進而較佳為相同或不同之十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。再者，於任意之情形時，均進而較佳為R1及R2相同。
又，於L1及L2之至少1個為-CO-O-之情形時，更佳為與-CO-O-鍵結之R1及R2相同或不同，為十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基，或者R1及R2一併形成二烷基亞甲基、二烯基亞甲基、二炔基亞甲基或烷基烯基亞甲基，進而較佳為R1及R2相同或不同，為十三烷基、十五烷基、十七烷基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基。再者，於任意之情形時，均進而較佳為R1及R2相同，或者R1及R2一併形成烷基、烯基或炔基部分相同之二烷基亞甲基、二烯基亞甲基或二炔基亞甲基。
又，更佳為a及b同時為0或1。
再者，於a及b同時為1之情形時，更佳為X1及X2一併形成單鍵或伸烷基。又，於a及b同時為1，L3為單鍵之情形時，L1及L2為-CO-O-亦係本發明之更佳之形態之一。
又，更佳為X1及X2一併形成單鍵或者伸烷基。再者，於X1及X2一併形成單鍵或者伸烷基之情形時，R3更佳為氫原子、甲基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，進而較佳為氫原子、甲基或者經相同或不同之1~3個胺基、羥基或胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，最佳為氫原子、甲基、2,3-二羥基丙基、3-羥基丙基、胺基甲基、1,2-二胺基乙基、2-胺基乙基、1,3-二胺基丙基、1,4-二胺基丁基、1,5-二胺基戊基、3-胺基丙基、4-胺基丁基、5-胺基戊基、2-胺甲醯基乙基等。
又，於X1及X2一併形成單鍵之情形時，L3為-CO-或者-CO-O-、較佳為-CO-亦係本發明之更佳之形態之一。於此情形時，R3進而較佳為胺基甲基、1,2-二胺基乙基、2-胺基乙基、1,3-二胺基丙基、1,4-二胺基丁基、1,5-二胺基戊基、3-胺基丙基、4-胺基丁基、5-胺基戊基等，最佳為1,2-二胺基乙基、1,3-二胺基丙基、1,4-二胺基丁基、1,5-二胺基戊基。
又，於X1及X2一併形成單鍵之情形時，a及b相同或不 同，為1~3、較佳為1亦係本發明之更佳之形態之一。於此情形時，L1及L2為相同之-CO-O-或者-O-CO-、較佳為-CO-O-，R3為甲基亦係本發明之進一步較佳之形態之一，於此情形時，更佳為R1及R2相同或不同，為(Z)-十七碳-8-烯基或者(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基，最佳為相同地為(Z)-十七碳-8-烯基或者(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基。
又，於X1及X2一併形成單鍵之情形時，X3為碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基、較佳為甲基亦係本發明之更佳之形態之一，於此情形時，L1及L2進而較佳為相同之-CO-O-或者-O-CO-，最佳為-CO-O-。
再者，於X1及X2為氫原子之情形時，R3更佳為氫原子、甲基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，進而較佳為氫原子、甲基或者經相同或不同之1~3個胺基、羥基或胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，最佳為氫原子、甲基、2,3-二羥基丙基、3-羥基丙基、胺基甲基、1,2-二胺基乙基、2-胺基乙基、1-胺基-2-羥基乙基、1,3-二胺基丙基、1,4-二胺基丁基、1,5-二胺基戊基、3-胺基丙基、4-胺基丁基、5-胺基戊基、2-胺甲醯基乙基等。
又，更佳為L3為單鍵。再者，於L3為單鍵之情形時，更佳為L1及L2為-O-。
又，於L3為單鍵之情形時，R3更佳為氫原子、甲基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，進而較佳為氫原子、甲基、羥基甲基、2-羥基乙基、2,3-二羥基丙基、2-羥基丙基、3-羥基丙基、2-羥基-3-甲氧基丙基、胺基甲基、2-胺基乙基、3-胺基丙基、4-胺基丁基、5-胺基戊基、2-(N,N-二甲基胺基)乙基、3-(N,N-二甲基胺基)丙基、2-胺甲醯基乙基、2-二甲基胺甲醯基乙基、1-甲基哌啶-4-基等，最佳為氫原子、甲基、2,3-二羥基丙基、3-羥基丙基、2-胺基乙基、3-胺基丙基、4-胺基丁基、5-胺基戊基、2-胺甲醯基乙基等，於任意之情形時均更佳為L1及L2為-O-。
再者，於X3不存在，Y亦不存在，L3為單鍵，R3為氫原子之情形時，L1及L2為相同之-CO-O-或者-O-CO-、較佳為-CO-O-亦係本發明之更佳之形態之一。於此情形時，R1及R2更佳為相同或不同，為(Z)-十七碳-5-烯基或者(Z)-十七碳-8-烯基，最佳為相同地為(Z)-十七碳-5-烯基或者(Z)-十七碳-8-烯基。
再者，於L3為-CO-或者-CO-O-之情形時，L1及L2更佳為相同之-CO-O-或者-O-CO-，進而較佳為-CO-O-。
又，於L3為-CO-或者-CO-O-之情形時，R3更佳為吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個 胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，該取代基之至少1個是胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基，R3進而較佳為胺基甲基、1,2-二胺基乙基、2-胺基乙基、1,3-二胺基丙基、3-胺基丙基、1,4-二胺基丁基、4-胺基丁基、1,5-二胺基戊基、5-胺基戊基、(N,N-二甲基胺基)甲基、2-(N,N-二甲基胺基)乙基、3-(N,N-二甲基胺基)丙基、1-胺基-2-羥基乙基等，最佳為1,2-二胺基乙基、2-胺基乙基、1,3-二胺基丙基、3-胺基丙基、1,4-二胺基丁基、4-胺基丁基、1,5-二胺基戊基、5-胺基戊基等。
於L3為-CO-或者-CO-O-之情形時，R3為胺基甲基、1-羥基-2-胺基乙基、2-胺基乙基、1,3-二胺基丙基、3-胺基丙基、1,4-二胺基丁基、4-胺基丁基、1,5-二胺基戊基、5-胺基戊基，L1及L2為-O-亦係本發明之更良好之形態之一。於此情形時，R1及R2更佳為相同或不同為(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，最佳為相同為(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
又，更佳為X3不存在，或者為甲基。於X3為甲基之情形時，R3更佳為甲基，L1及L2更佳為相同之-CO-O-或者-O-CO-，進而較佳為-CO-O-。
化合物(I)中，可列舉式(i)所表示之化合物(i)作為更佳之陽離子脂質之一， (式中，R4及R5係R1及R2中的相同或不同之碳數為12~24之直鏈狀或者分枝狀之烷基、烯基或者炔基，L4及L5為-CO-O-或者-O-CO-、較佳為-CO-O-，a及b分別與上述同義，R6係R3中的氫原子、碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基)。
其次，對化合物(I)之製造法加以說明。再者，於以下所示之製造法中，所定義之基於該製造法之條件下變化或者並不適於實施該製造法之情形時，可藉由使用有機合成化學中所常用之保護基之導入及除去方法[例如：有機合成中的保護基、第3版(Protective Groups in Organic Synthesis，third edition)、格林尼(T.W.Greene)著、約翰‧威立父子出版社(John Wiley&Sons Inc.)(1999年)等中所記載之方法]等而製造目標化合物。又，亦可視需要改變取代基導入等反應步驟之順序。
製造法1
化合物(I)中，L1及L2為-O-，L3為單鍵，X3及Y不存在之化合物(Ia)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、R3、X1、X2、a及b分別與上述同義，Z表示氯原子、溴原子、碘原子、三氟甲磺醯氧基、甲磺醯氧基、苯磺醯氧基、對甲苯磺醯氧基等脫離基)。
步驟1及2
化合物(IIb)可藉由如下方式而製造：將化合物(IIa)與化合物(IIIa)於溶劑中，室溫與150℃之間的溫度下、1~30當量之鹼之存在下進行5分鐘~100小時之處理，進行單離。進而，化合物(Ia)可藉由如下方式而製造：將化合物(IIb)與化合物(IIIb)於溶劑中，室溫與150℃之間的溫度下、1~30當量之鹼之存在下進行5分鐘~100小時的處理，進行單離。
溶劑例如可列舉甲苯、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯啶酮、二甲基亞碸等，該等可單獨或者混合使用。
鹼例如可列舉氫化鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、第三丁醇鈉、第三丁醇鉀等。
化合物(IIa)可藉由市售品或者公知之方法(例如「化學與藥學通報(Chem.Pharm.Bull)」，1991年，第39卷，第2219頁、國際公開第2006/10036號說明書)或基於各個方法之方法或者參考例中所記載之方法而獲得。
化合物(IIIa)及化合物(IIIb)可藉由市售品或者公知之方法(例如第5版實驗化學講座13「有機化合物之合成I」、第5版、第374頁、丸善(2005年))或基於該方法之方法而獲得。
R1與R2相同之情形時之化合物(Ia)可藉由於步驟1中使用2當量以上之化合物(IIIa)而獲得。
製造法2
化合物(I)中L1及L2為-CO-O-，L3為單鍵，X3及Y不存在之化合物(Ib)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、R3、X1、X2、a及b分別與上述同義)。
步驟3及4
化合物(IIc)可藉由如下方式而製造：將化合物(IIa)與化合物(IVa)於溶劑中，-20℃與150℃之間的溫度下、1~30當量之縮合劑之存在下進行5分鐘~100小時之處理，進行單離。進而，化合物(Ib)可藉由如下之方式而製造：將化合物(IIc)與化合物(IVb)於溶劑中，-20℃與150℃之間的溫度、1~30當量之縮合劑之存在下進行5分鐘~100小時之處理，進行單離。於步驟3及4中，亦可加入0.01~30當量之添加劑及/或1當量~遠過量之鹼而促進反應。
作為溶劑，例如可列舉二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、二甲基亞碸等，該等可單獨或者混合使用。
作為縮合劑，例如可列舉1,3-二環己基碳二醯亞胺、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽、羰基二咪唑、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)鏻六氟磷酸鹽、(苯并三唑-1-基氧基)三(N-吡咯啶基)鏻六氟磷酸鹽、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽、2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物等。
作為添加劑，例如可列舉1-羥基苯并三唑、4-二甲基胺基吡啶等。
作為鹼，例如可列舉乙酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉、甲醇鈉、第三丁醇鉀、三乙胺、二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啉、吡啶、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一碳烯等。
化合物(IVa)及化合物(IVb)可藉由市售品或者公知之方法(例如第5版實驗化學講座16「有機化合物之合成IV」、第5版、第1頁、丸善(2005年))或基於該方法之方法而獲得。
R1與R2相同之情形時之化合物(Ib)可藉由於步驟3中使用2當量以上之化合物(IVa)而獲得。
製造法3
化合物(I)中L1及L2為-O-CO-，L3為單鍵，X3及Y不存在之化合物(Ic)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、R3、X1、X2、a及b分別與上述同義)。
步驟5及6
化合物(IIe)可藉由如下方式而製造：將化合物(IId)與化合物(Va)於溶劑中，-20℃與150℃之間的溫度下、1~30當量之縮合劑之存在下進行5分鐘~100小時之處理，進行單離。進而，化合物(Ic)可藉由如下方式而製造：將化合物(IIe)與化合物(Vb)於溶劑中，-20℃與150℃之間的溫度下、1~30當量之縮合劑之存在下進行5分鐘~100小時之處理，進行單離。於步驟5及6中，亦可加入0.01~30當量之添加劑及/或1當量~遠過量之鹼而促進反應。
作為溶劑、縮合劑、添加劑及鹼，可分別列舉與製造法2相同者。
化合物(IId)可藉由市售品或者公知之方法(例如第5版實驗化學講座16「有機化合物之合成IV」、第5版、第1頁、丸善(2005年))或基於該方法而獲得。
化合物(Va)及化合物(Vb)可藉由市售品或者公知之方法 (例如第5版實驗化學講座14「有機化合物之合成II」、第5版、第1頁、丸善(2005年))或基於該方法之方法而獲得。
R1與R2相同之情形時之化合物(Ic)可藉由於步驟5中使用2當量以上之化合物(Va)而獲得。
製造法4
化合物(I)中L3為單鍵，R3為氫原子，X3及Y不存在之化合物(Id)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、L1、L2、X1、X2、a及b分別與上述同義)。
步驟7
化合物(Id)可藉由如下方式而製造：將化合物(VI)與氯甲酸-1-氯乙酯於惰性溶劑中、-20℃與230℃之間的溫度下進行5分鐘~100小時之處理，繼而加入1當量~遠過量之醇而於-20℃與230℃之間的溫度下進行5分鐘~100小時之處理。
作為惰性溶劑，例如可列舉二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮等，該等惰性溶劑可單獨或者混合使用。
作為醇，例如可列舉甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇等，該等醇可單獨或者混合使用。
化合物(VI)可藉由基於製造法1、製造法2或者製造法3之方法的方法而獲得。
製造法5
化合物(I)中，L3為單鍵，R3為-CHRARB(RA及RB相同或不同，為氫原子、碳數為1~5之烷基、碳數為3~5之烯基、吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基、嗎啉-3-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~5之烷基或碳數為3~5之烯基，或者與鄰接之碳原子一併形成吡咯啶-3-基、哌啶-3-基或哌啶-4-基，RA及RB均為氫原子之情形除外，RA及RB之烷基、經取代之烷基之烷基部分、烯基及經取代之烯基之烯基部分的碳數之總和為1~5，於RA及RB之任意者為吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基或者嗎啉-3-基之情形時，該RA及RB之另一方為氫原子、碳數為1~5之烷基、碳數為3~5之烯基、吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基、嗎啉-3-基或者經相同或不同之1個或2個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~5 之烷基或碳數為3~5之烯基，於RA及RB為經取代之烷基或者烯基之情形時，該取代基之總數為2或者3)，X3及Y不存在之化合物(Ie)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、RA、RB、L1、L2、X1、X2、a及b分別與上述同義)。
步驟8
化合物(Ie)可藉由如下方式而製造：將化合物(Id)與較佳為1~10當量之化合物(VII)於溶劑中，較佳為1當量~遠過量之還原劑及視需要的較佳為1~10當量之酸之存在下、於-20℃與150℃之間的溫度下使其反應5分鐘~72小時。
作為溶劑，例如可列舉甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、水等，該等溶劑可單獨或者混合使用。
作為還原劑，例如可列舉三乙醯氧基硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉等。
作為酸，例如可列舉鹽酸、乙酸等。
化合物(VII)可藉由市售品或者公知之方法(例如第5版實驗化學講座15「有機化合物之合成III」、第5版、第1頁、 丸善(2005年)、第5版實驗化學講座15「有機化合物之合成III」、第5版、第153頁、丸善(2005年))或基於該方法而獲得。
製造法6
化合物(I)中L3為單鍵、X3及Y不存在之化合物(If)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、R3、L1、L2、X1、X2、a、b及Z分別與上述同義)。
步驟9
化合物(If)可藉由如下方式而製造：將化合物(Id)與化合物(VIII)於無溶劑或者溶劑中，視需要在較佳為1~10當量之添加劑之存在下及/或視需要在較佳為1~10當量之鹼之存在下、於-20℃與150℃之間的溫度下進行5分鐘~72小時之反應。
作為溶劑，例如可列舉甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、吡啶、水等，該等溶劑可單獨或者混合使用。
作為鹼，例如可列舉碳酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉、甲 醇鈉、第三丁醇鉀、三乙胺、二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啉、吡啶、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一碳烯(DBU)等。
作為添加劑，例如可列舉碘化鈉、碘化鉀、四正丁基碘化銨等。
化合物(VIII)可獲得為市售品，或者藉由公知之方法(例如第5版實驗化學講座13「有機化合物之合成I」、第5版、第374頁、丸善(2005年))或基於該方法而獲得。
製造法7
化合物(I)中L3為-CO-、X3及Y不存在之化合物(Ig)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、R3、L1、L2、X1、X2、a及b分別與上述同義)。
步驟10
化合物(Ig)可藉由如下之方式而製造：將化合物(Id)與化合物(IX)於溶劑中、-20℃與150℃之間的溫度下，藉由1當量~遠過量之縮合劑而進行5分鐘~100小時之處理。此時，亦可視需要於較佳為0.01~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要加入較佳為1當量~遠過量之鹼而促進反應。
作為溶劑，例如可列舉甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋 喃、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、二甲基亞碸、水等，該等溶劑可單獨或者混合使用。
作為縮合劑、添加劑及鹼，可分別列舉與製造法2相同者。
化合物(IX)可藉由市售品或者公知之方法(例如第5版實驗化學講座16「有機化合物之合成IV」、第5版、第1頁、丸善(2005年))或基於該方法而獲得。
製造法8
化合物(I)中L3為-CO-O-、X3及Y不存在之化合物(Ih)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、R3、L1、L2、X1、X2、a及b分別與上述同義)。
步驟11
化合物(Ih)可藉由如下方式而製造：將化合物(Id)與化合物(X)於無溶劑中或者溶劑中，視需要在較佳為1~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要在較佳為1~10當量之鹼之存在下，於-20℃與150℃之間的溫度下進行5分鐘~72小時之反應。
溶劑及添加劑可列舉與製造法2相同者。
作為鹼，例如可列舉三乙胺、二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啉、吡啶、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一碳烯等。
化合物(X)可藉由市售品或者公知之方法(例如、「美國化學會誌(J.Am.Chem.Soc.)」，1981年，第103卷，第4194~4199頁)或基於該方法之方法而獲得。
製造法9
化合物(I)中L3為單鍵，R3為-CH2-C(OH)RCRD(RC及RD相同或不同，為氫原子、碳數為1~4之烷基、碳數為3~4之烯基、吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基、嗎啉-3-基或者經相同或不同之1個或2個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~4之烷基或碳數為3~4之烯基，除了RC及RD均為氫原子之情形以外，RC及RD之烷基、經取代之烷基之烷基部分、烯基及經取代之烯基之烯基部分的碳數之總和為1~4，於RC及RD之任意者為吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基或者嗎啉-3-基之情形時，該RC及RD之另一方為氫原子、碳數為1~4之烷基、碳數為3~4之烯基、吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基、嗎啉-3-基或者經1個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~4之烷基或碳數為3~4之烯 基，於RC及RD為經取代之烷基或者烯基之情形時，該取代基之總數為2)，X3及Y並不存在的化合物(Ii)可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、RC、RD、L1、L2、X1、X2、a及b分別與上述同義)。
步驟12
化合物(Ii)可藉由如下方式而製造：將化合物(Id)與化合物(XI)於溶劑中或者無溶劑中，於0℃與230℃之間的溫度下進行5分鐘~100小時之處理。
作為溶劑，例如可列舉甲醇、乙醇、1-丙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、二甲基亞碸等，該等溶劑可單獨或者混合使用。
化合物(XI)可藉由市售品或者公知之方法(例如、第5版實驗化學講座17「有機化合物之合成V」、第5版、第186頁、丸善(2005年))或基於該方法而獲得。
製造法10
化合物(I)中L3為單鍵，X3為碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基，Y為製藥上所容許之陰離子的化合物(Ij)可 藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、R3、L1、L2、X1、X2、X3、Y、a、b及Z分別與上述同義)。
步驟13及14
化合物(Ij-A)可藉由如下方式而製造：將化合物(If)與化合物(XII)於溶劑中或者無溶劑下，於0℃與230℃之間的溫度下進行5分鐘至100小時之處理。化合物(Ij)可藉由以Y型陰離子交換樹脂對化合物(Ij-A)進行處理而製造。
作為溶劑，例如可列舉甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、吡啶等，該等溶劑可單獨或者混合使用。
化合物(XII)可藉由市售品或者公知之方法(例如第5版實 驗化學講座13「有機化合物之合成I」、第5版、第374頁、丸善(2005年))或基於該方法而獲得。
又，於Z與Y相同之情形時，可藉由省略步驟14而製造(Ij)。
製造法11
化合物(I)中L3為單鍵，R3為氫原子，X3及Y不存在之化合物(Id)亦可藉由以下之方法而製造。
(式中，R1、R2、L1、L2、X1、X2、a及b分別與上述同義)。
步驟15
化合物(Id)可藉由如下方式而製造：將化合物(XIII)於無溶劑下或者溶劑中，較佳為1當量~遠過量之酸之存在下，於-20℃與150℃之間的溫度下進行5分鐘~100小時之反應。
作為溶劑，可列舉與製造法2相同者。
作為酸，例如可列舉三氟乙酸、鹽酸、硫酸。
化合物(XIII)可藉由基於製造法1、製造法2或者製造法3之方法的方法而獲得。
化合物(I)中之R1、R2或者R3中所含之官能基之轉化亦可藉由公知之方法[例如有機官能基轉化大全 第2版 (Comprehensive Organic Transformations 2nd edition)、R.C.拉羅克(Larock)著、Vch Verlagsgesellschaft Mbh(1999年)等中所記載之方法]或者基於該等方法而進行。
上述各製造法中之中間體及目標化合物可藉由施加有機合成化學中所常用之分離純化法、例如過濾、萃取、清洗、乾燥、濃縮、再結晶、各種層析法等而進行單離純化。又，於中間體中亦可並不特別地進行純化而供至其後之反應中。
於化合物(I)中，亦可於結構中之氮原子上之孤電子對上配位氫離子，該氮原子亦可與製藥上所容許之陰離子(與上述同義)形成鹽，化合物(I)亦包含於該氮原子上之孤電子對上配位有氫離子之化合物。再者，於本發明中，所謂X3不存在之情形亦包含配位有氫離子之情形。
於化合物(I)中，亦可存在幾何異構物、光學異構物等立體異構物、互變異構物等，化合物(I)包括該等異構物，包含所有之可能的異構物及該等之混合物。
化合物(I)中之各原子之一部分或者全部亦可分別經所對應之同位素原子取代，化合物(I)亦包含經該等同位素原子取代之化合物。例如，化合物(I)中之氫原子之一部分或者全部亦可為原子量為2之氫原子(氘原子)。
化合物(I)中之各原子之一部分或者全部分別經所對應之同位素原子取代之化合物可使用市售之構築嵌段而藉由與上述各製造法同樣之方法製造。又，化合物(I)中之氫原子之一部分或者全部經氘原子取代之化合物例如可使用如下 方法而合成：1)使用過氧化氘，於鹼性條件下對羧酸等進行氘化之方法(參照美國專利第3849458號說明書)；2)使用銥錯合物作為觸媒，使用重水作為氘源而對醇、羧酸等進行氘化之方法[參照J.Am.Chem.Soc.,第124卷，第10號，2092(2002)]；3)使用鈀碳作為觸媒，僅僅使用氘氣作為氘源而對脂肪酸進行氘化之方法[參照脂質(LIPIDS)，第9卷，第11號，913(1974)]；4)使用鉑、鈀、銠、釕、銥等金屬作為觸媒，使用重水或者重水及氘氣作為氘源，對丙烯酸、丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯等進行氘化之方法(參照日本專利特公平5-19536號公報、日本專利特開昭61-277648號公報及日本專利特開昭61-275241號公報)；5)使用鈀、鎳、銅或者亞鉻酸銅等觸媒，使用重水作為氘源，對丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯等進行氘化之方法(參照日本專利特開昭63-198638號公報)等。
將藉由本發明而所得之化合物(I)之具體例示於表1~17。但本發明之化合物並不限定於該等。
又，作為本發明中所使用之核酸，若為由核苷酸及/或具有與該核苷酸同等之功能的分子聚合而成之分子，則可為任意分子，例如可列舉：作為核糖核苷酸之聚合物的RNA、作為脫氧核糖核苷酸之聚合物的DNA、包含RNA與DNA之嵌合核酸、及該等核酸之至少一種核苷酸經具有與該核苷酸同等功能之分子取代之核苷酸聚合物。又，包含由核苷酸及/或具有與該核苷酸同等之功能的分子聚合而成之分子之至少一種衍生物亦包含於本發明之核酸中。再者，亦可列舉肽核酸(PNA)[Acc.Chem.Res.,32,624(1999)]、氧基肽核酸(OPNA)[J.Am.Chem.Soc.,123,4653(2001)]、肽核糖核酸(PRNA)[J.Am.Chem.Soc.,122,6900(2000)]等。再者，於本發明中，RNA中之尿苷U與DNA中之胸腺嘧啶T可分別互換使用。
作為具有與核苷酸同等功能之分子，例如可列舉核苷酸衍生物等。
作為核苷酸衍生物，若為對核苷酸實施修飾之分子則可為任意分子，例如與RNA或者DNA相比，為了使耐核酸酶性提高或者對其他分解因子穩定化，為了提高與互補鏈核酸之親和性，為了提高細胞透過性，或者為了使其可視化，可適宜使用對核糖核苷酸或者脫氧核糖核苷酸實施修飾之分子等。
作為核苷酸衍生物，例如可列舉糖部修飾核苷酸、磷酸二酯鍵修飾核苷酸、鹼基修飾核苷酸等。
作為糖部修飾核苷酸，若為對核苷酸之糖之化學結構的一部分或全部藉由任意取代基進行修飾或取代而成者、或者藉由任意原子取代而成者，則可為任意者，可較佳地使用2'-修飾核苷酸。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基，例如可列舉2'-氰基、2'-烷基、2'-取代烷基、2'-烯基、2'-取代烯基、2'-鹵素基、2'-O-氰基、2'-O-烷基、2'-O-取代烷基、2'-O-烯基、2'-O-取代烯基、2'-S-烷基、2'-S-取代烷基、2'-S-烯基、2'-S-取代烯基、2'-胺基、2'-NH-烷基、2'-NH-取代烷基、2'-NH-烯基、2'-NH-取代烯基、2'-SO-烷基、2'-SO-取代烷基、2'-羧基、2'-CO-烷基、2'-CO-取代烷基、2'-Se-烷基、2'-Se-取代烷基、2'-SiH2-烷基、2'-SiH2-取代烷基、2'-ONO2、2'-NO2、2'-N3、2'-胺基酸殘基(自胺基酸之羧酸除去羥基而成者)、2'-O-胺基酸殘基(與上述胺基酸殘基同 義)等。又，具有2'位之修飾基交聯於4'位之碳原子上之結構的交聯結構型人工核酸(Bridged Nucleic Acid)(BNA)，更具體而言2'位之氧原子與4'位之碳原子經由亞甲基而交聯之鎖定人工核酸(Locked Nucleic Acid)(LNA)、及伸乙基交聯結構型人工核酸(Ethylene bridged nucleic acid)(ENA)[Nucleic Acid Research,32,e175(2004)]等亦包含於本發明中之2'位經修飾基取代之核糖中。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基，較佳為2'-氰基、2'-鹵素基、2'-O-氰基、2'-烷基、2'-取代烷基、2'-O-烷基、2'-O-取代烷基、2'-O-烯基、2'-O-取代烯基、2'-Se-烷基、2'-Se-取代烷基，更佳為2'-氰基、2'-氟、2'-氯、2'-溴、2'-三氟甲基、2'-O-甲基、2'-O-乙基、2'-O-異丙基、2'-O-三氟甲基、2'-O-[2-(甲氧基)乙基]、2'-O-(3-胺基丙基)、2'-O-[2-(N,N-二甲基)胺基氧基]乙基、2'-O-[3-(N,N-二甲基胺基)丙基]、2'-O-{2-[2-(N,N-二甲基胺基)乙氧基]乙基}、2'-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基]、2'-Se-甲基等，進而較佳為2'-O-甲基、2'-O-乙基、2'-氟等，最佳為2'-O-甲基、2'-O-乙基。
又，糖部修飾核苷酸之修飾基亦可根據其大小而定義較佳之範圍，較佳為相當於自氟之大小至-O-丁基之大小者，更好為相當於自-O-甲基之大小至-O-乙基之大小者。
糖部修飾核苷酸之修飾基中之烷基與化合物(I)中之碳數為1~6之烷基同義。
糖部修飾核苷酸之修飾基中之烯基與化合物(I)中之碳數 為3~6之烯基同義。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基中之鹵素，可列舉氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。
作為胺基酸殘基中之胺基酸，例如可列舉脂肪族胺基酸(具體而言為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸等)、羥基胺基酸(具體而言為絲胺酸、蘇胺酸等)、酸性胺基酸(具體而言為天冬醯胺酸、麩胺酸等)、酸性胺基醯胺(具體而言為天冬醯胺、麩醯胺等)、鹼性胺基酸(具體而言為離胺酸、羥基離胺酸、精胺酸、鳥胺酸等)、含硫胺基酸(具體而言為半胱胺酸、胱胺酸、甲硫胺酸等)、亞胺基酸(具體而言為脯胺酸、4-羥基脯胺酸等)等。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基中之經取代之烷基及經取代之烯基之取代基，例如可列舉鹵素(與上述同義)、羥基、磺胺基、胺基、側氧基、-O-烷基(該-O-烷基之烷基部分與上述烷基同義)、-S-烷基(該-S-烷基之烷基部分與上述烷基同義)、-NH-烷基(該-NH-烷基之烷基部分與上述烷基同義)、二烷基胺基氧基(該二烷基胺基氧基之2個烷基相同或不同且與上述烷基同義)、二烷基胺基(該二烷基胺基之2個烷基相同或不同且與上述烷基同義)、二烷基胺基伸烷基氧基(該二烷基胺基伸烷基氧基之2個烷基相同或不同且與上述烷基同義，伸烷基部分表示自上述烷基除去1個氫原子而成者)等，取代數較佳為1~3。
作為磷酸二酯鍵修飾核苷酸，若為對核苷酸之磷酸二酯鍵之化學結構的一部分或全部藉由任意取代基進行修飾或 取代而成者、或者藉由任意原子進行取代而成者，則可為任意者，例如可列舉磷酸二酯鍵被取代為硫代磷酸酯鍵之核苷酸、磷酸二酯鍵被取代為二硫代磷酸酯鍵之核苷酸、磷酸二酯鍵被取代為膦酸烷基酯鍵之核苷酸、磷酸二酯鍵被取代為胺基磷酸酯鍵之核苷酸等。
作為鹼基修飾核苷酸，若為對核苷酸之鹼基之化學結構之一部分或全部藉由任意取代基進行修飾或取代而成者、或者藉由任意原子進行取代而成者，則可為任意者，例如可列舉鹼基內之氧原子被取代為硫原子者、氫原子被取代為碳數為1~6之烷基者、甲基被取代為氫原子或碳數為2~6之烷基者、胺基被碳數為1~6之烷基、碳數為1~6之烷醯基等保護基保護而成者。
進而，作為核苷酸衍生物，亦可列舉於核苷酸或者修飾有糖部、磷酸二酯鍵或鹼基之至少一種的核苷酸衍生物上加成有脂質、磷脂質、啡、葉酸鹽、啡啶、蒽醌、吖啶、螢光素、玫瑰紅、香豆素、色素等其他化學物質者，具體而言可列舉5'-多胺加成核苷酸衍生物、膽固醇加成核苷酸衍生物、類固醇加成核苷酸衍生物、膽汁酸加成核苷酸衍生物、維生素加成核苷酸衍生物、Cy5加成核苷酸衍生物、Cy3加成核苷酸衍生物、6-FAM加成核苷酸衍生物、及生物素加成核苷酸衍生物等。
又，核苷酸衍生物亦可與核酸內之其他核苷酸或者核苷酸衍生物形成伸烷基結構、肽結構、核苷酸結構、醚結構、酯結構、及組合有該等中之至少一種的結構等交聯結 構。
作為本發明中所使用之核酸，較佳可列舉抑制標靶基因之表現的核酸，更佳為列舉具有利用RNA干擾(RNAi)而抑制標靶基因表現之作用的核酸。
作為本發明中所使用之標靶基因，若為產生mRNA而表現之基因則並無特別限定，例如較佳為與腫瘤或炎症相關之基因，例如可列舉血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor、以下簡稱為VEGF)、血管內皮生長因子受體(vascular endothelial growth factor receptor、以下簡稱為VEGFR)、纖維母細胞生長因子、纖維母細胞生長因子受體、血小板源性生長因子、血小板源性生長因子受體、肝細胞生長因子、肝細胞生長因子受體、Kruppel樣因子(Kruppel-like factor、以下簡稱為KLF)、Ets轉錄因子、核因子、低氧誘導因子、細胞週期相關因子、染色體複製相關因子、染色體修復相關因子、微管相關因子、增殖訊號路徑相關因子、增殖相關轉錄因子、細胞凋亡相關因子等編碼蛋白質之基因等，具體而言可列舉VEGF基因、VEGFR基因、纖維母細胞生長因子基因、纖維母細胞生長因子受體基因、血小板源性生長因子基因、血小板源性生長因子受體基因、肝細胞生長因子基因、肝細胞生長因子受體基因、KLF基因、Ets轉錄因子基因、核因子基因、低氧誘導因子基因、細胞週期相關因子基因、染色體複製相關因子基因、染色體修復相關因子基因、微管相關因子基因(例如CKAP5基因等)、增殖訊號路徑相關因子基 因(例如KRAS基因等)、增殖相關轉錄因子基因、細胞凋亡相關因子(例如BCL-2基因等)等。
又，作為本發明中所使用之標靶基因，例如較佳為於肝臟、肺、腎臟或脾臟中表現之基因，例如可列舉與上述之腫瘤或炎症相關之基因、B型肝炎病毒基因組、C型肝炎病毒基因組、載脂蛋白質(APO)、羥基甲基穀胺醯基(HMG)CoA還原酶、Kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)、第12因子、胰高血糖激素受體、糖皮質素受體、白三烯受體、凝血脂素A2受體、組胺H1受體、碳酸脫水酶、血管緊張素轉化酶、腎素、p53、酪胺酸磷酸酶(PTP)、鈉依賴性葡萄糖輸送載體、腫瘤壞死因子、介白素等編碼蛋白質之基因等。
作為抑制標靶基因表現之核酸，例如若為包含與編碼蛋白質等之基因(標靶基因)之mRNA之一部分鹼基序列互補的鹼基序列，且抑制標靶基因之表現的核酸，則例如可使用siRNA(short interference RNA，短干擾RNA)、miRNA(micro RNA，微RNA)等雙鏈核酸，shRNA(short hairpin RNA)、反義核酸、核酶等單鏈核酸等任意核酸，可適宜地使用雙鏈核酸。
將包含與標靶基因之mRNA之一部分鹼基序列互補的鹼基序列的核酸稱為反義鏈核酸，將包含與反義鏈核酸之鹼基序列互補的鹼基序列的核酸稱為正義鏈核酸。正義鏈核酸係指包含標靶基因之一部分鹼基序列之核酸本身等可與反義鏈核酸締合而形成雙鏈形成部之核酸。
所謂雙鏈核酸係指兩根鏈締合而具有雙鏈形成部之核酸。所謂雙鏈形成部係指構成雙鏈核酸之核苷酸或者其衍生物構成鹼基對而形成雙鏈之部分。構成雙鏈形成部之鹼基對通常為15~27個鹼基對，較佳為15~25個鹼基對，更佳為15~23個鹼基對，進而較佳為15~21個鹼基對，特佳為15~19個鹼基對。
作為雙鏈形成部之反義鏈核酸，可適宜地使用包含標靶基因之mRNA之一部分序列之核酸、或者於該核酸中置換、缺失或附加有1~3個鹼基、較佳為1~2個鹼基、更佳為1個鹼基，且具有抑制目標蛋白質之表現的活性之核酸。構成雙鏈核酸之單鏈之核酸長通常包含15~30個鹼基，較佳為15~29個鹼基，更佳為15~27個鹼基，進而較佳為15~25個鹼基，特佳為17~23個鹼基，最佳為19~21個鹼基。
構成雙鏈核酸之反義鏈、正義鏈之任意一方或者雙方之核酸亦可具有與雙鏈形成部相接而於3'側或者5'側不形成雙鏈的追加的核酸。該不形成雙鏈之部分亦稱為突出部(懸突)。
作為具有突出部之雙鏈核酸，使用於至少一方之鏈的3'末端或者5'末端具有包含1~4鹼基、通常為1~3鹼基之突出部者，較佳為使用具有包含2鹼基之突出部者，更佳為使用具有包含dTdT或者UU之突出部者。突出部可僅於反義鏈中具有，僅於正義鏈中具有，以及反義鏈與正義鏈之雙方均具有，可較佳地使用反義鏈與正義鏈之雙方均具有突 出部之雙鏈核酸。
又，亦可使用與雙鏈形成部相接而與標靶基因之mRNA一部分或者全部一致之序列、或者與雙鏈形成部相接而與標靶基因之mRNA之互補鏈之鹼基序列一致的序列。進而，作為抑制標靶基因之表現的核酸，例如亦可使用藉由切丁酶(Dicer)等之核糖核酸酶之作用而生成上述雙鏈核酸之核酸分子(國際公開第2005/089287號說明書)、或者不具有3'末端或5'末端之突出部的雙鏈核酸等。
又，於上述雙鏈核酸為siRNA之情形時，反義鏈係自5'末端側向3'末端側之至少第1~17個鹼基序列為與標靶基因之mRNA所連接之17鹼基序列互補的鹼基序列，較佳為該反義鏈自5'末端側向3'末端側之第1~19個鹼基序列為與標靶基因之mRNA所連接之19個鹼基序列互補的鹼基序列，或者第1~21個鹼基序列為與標靶基因之mRNA所連接之21個鹼基序列互補的鹼基序列，或者第1~25個鹼基序列為與標靶基因之mRNA所連接之25個鹼基序列互補的鹼基序列。
進而，於本發明中所使用之核酸為siRNA之情形時，較佳為該核酸中之糖之10~70%、更佳為15~60%、進而較佳為20~50%於2'位被修飾基取代之核糖。所謂本發明中之核糖之2'位被修飾基取代是表示2'位之羥基被取代為修飾基，與核糖之2'位之羥基之立體構型可相同亦可不同，較佳為與核糖之2'位之羥基之立體構型相同。2'位被修飾基取代之核糖包含於糖部修飾核苷酸中之2'-修飾核苷酸中， 2'位被修飾基取代之核糖之修飾基與2'-修飾核苷酸之修飾基同義。
本發明中所使用之核酸包含：核酸之結構中的磷酸部、酯部等中所含之氧原子等被取代為例如硫原子等其他原子的衍生物。
又，作為與反義鏈及正義鏈之5'末端之鹼基鍵結之糖，各自5'位之羥基亦可被磷酸基或上述修飾基、或者可藉由活體內之核酸分解酶等而轉化為磷酸基或上述修飾基之基所修飾。
又，作為與反義鏈及正義鏈之3'末端之鹼基所鍵結之糖，各自3'位之羥基亦可被磷酸基或上述修飾基、或者可藉由活體內之核酸分解酶等而轉化為磷酸基或上述修飾基之基所修飾。
作為單鏈之核酸，若為包含含有標靶基因所連接之15~27個鹼基、較佳為15~25個鹼基、更佳為15~23個鹼基、進而較佳為15~21個鹼基、特佳為15~19個鹼基之序列的互補序列之核酸，或者於該核酸中置換、缺失或附加1~3個鹼基、較佳為1~2個鹼基、更佳為1個鹼基，且具有抑制目標蛋白質之表現之活性的核酸，則可為任意者。可適宜使用該單鏈之核酸長為15~30個鹼基以下，較佳為15~29個鹼基，更佳為15~27個鹼基、進而較佳為15~25個鹼基、特佳為15~23個鹼基之單鏈核酸。
作為單鏈核酸，可使用將構成上述雙鏈核酸之反義鏈及正義鏈經由間隔序列(間隔寡聚核苷酸)連結而成者。作為 間隔寡聚核苷酸，較佳為6~12個鹼基之單鏈核酸分子，較佳為其5'末端側之序列為2個U。作為間隔寡聚核苷酸之例，可列舉包含UUCAAGAGA之序列的核酸。藉由間隔寡聚核苷酸連接之反義鏈及正義鏈之順序可為任意者成為5'側。作為該單鏈核酸，較佳為藉由莖環結構而具有雙鏈形成部之shRNA等單鏈核酸。shRNA等單鏈核酸通常為50~70個鹼基長。
亦可使用以藉由核糖核酸酶等之作用而生成上述單鏈核酸或者雙鏈核酸之方式設計的70個鹼基長以下，較佳為50個鹼基長以下，進而較佳為30個鹼基長以下之核酸。
再者，本發明中所用之核酸使用已知之RNA或者DNA合成法、及RNA或者DNA修飾法而製造即可。
本發明之組合物係含有化合物(I)與核酸之組合物，例如可列舉含有化合物(I)與核酸之複合物、或者於化合物(I)中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物之組合物，含有該複合物及封入該複合物之脂質膜的組合物等。該脂質膜可為脂質單層膜(脂質1分子膜)亦可為脂質雙層膜(脂質2分子膜)。再者，於該脂質膜中亦可含有化合物(I)、中性脂質及/或高分子。又，於該複合物及/或該脂質膜中亦可含有化合物(I)以外之陽離子性脂質。
又，作為本發明之組合物，例如亦可列舉：含有化合物(I)以外之陽離子性脂質與核酸之複合物、或者於化合物(I)以外之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜，且於脂質 膜中含有化合物(I)之組合物等。於此情形之脂質膜可為脂質單層膜(脂質1分子膜)亦可為脂質雙層膜(脂質2分子膜)。又，於該脂質膜中亦可含有化合物(I)以外之陽離子性脂質、中性脂質及/或高分子。
於本發明之組合物中，更佳為含有化合物(I)與核酸之複合物的組合物、或者含有化合物(I)或化合物(I)以外之陽離子性脂質與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於脂質膜中含有化合物(I)之組合物，進而較佳為含有化合物(I)與核酸之複合物之組合物、或者含有化合物(I)與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於脂質膜中含有化合物(I)之組合物，最佳為含有化合物(I)與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於脂質膜中含有化合物(I)之組合物。再者，於任意之情形時，該脂質膜中均亦可含有中性脂質及/或高分子。又，於該複合物及/或該脂質膜中亦可含有化合物(I)以外之陽離子性脂質。
作為複合物之形態，於任意之情形時均可列舉核酸與包含脂質單層之膜(逆微胞)之複合物、核酸與脂質體之複合物、核酸與微胞之複合物等，較佳可列舉核酸與包含脂質單層之膜之複合物或者核酸與脂質體之複合物。
作為含有複合物及封入該複合物之脂質雙層膜的組合物，可列舉含有如下脂質體之組合物等：所述脂質體包含該複合物及封入該複合物之脂質雙層膜。
再者，本發明之組合物中可使用一種或者複數種之化合物(I)，又，亦可使用混合有化合物(I)與化合物(I)以外之 陽離子性脂質者。
作為化合物(I)以外之陽離子性脂質，例如可列舉日本專利特開昭61-161246號公報(美國專利5049386號說明書)中所揭示之DOTMA、DOTAP等，國際公開第91/16024號說明書及國際公開第97/019675號說明書中所揭示之DORIE、DOSPA等，國際公開第2005/121348號說明書中所揭示之DLinDMA等，國際公開第2009/086558號說明書中所揭示之DLin-K-DMA等，較佳可列舉DOTMA、DOTAP、DORIE、DOSPA、DLinDMA、DLin-K-DMA等包含具有2個未經取代的烷基之三級胺部位或者具有3個未經取代的烷基之四級銨部位的陽離子性脂質，更佳為列舉具有該三級胺部位之陽離子性脂質。該三級胺部位及該四級銨部位之未經取代的烷基更佳為甲基。
使用複數種化合物(I)之情形或者將化合物(I)與化合物(I)以外之陽離子性脂質混合使用之情形或本發明之組合物為含有化合物(I)以外之陽離子性脂質與核酸等之複合物、或者於化合物(I)以外之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸等之複合物以及封入該複合物之脂質膜且於脂質膜中含有化合物(I)之組合物之情形時，化合物(I)更佳為X3不存在，Y亦不存在，L3為單鍵，且R3為碳數為1~6之烷基者。
再者，本發明之組合物可含有核酸，亦可含有與核酸化學性質近似之化合物。
本發明中之組合物可藉由公知之製造方法或者基於此方 法而製造，可為藉由任意製造方法而製造者。例如於作為組合物之一的含有脂質體之組合物之製造中，可適用公知之脂質體之調製方法。作為公知之脂質體之調製方法，例如可列舉班厄姆(Bangham)等人之脂質體調製法[參照「分子生物學雜誌(J.Mol.Biol.)」，1965年，第13卷，第238~252頁]、乙醇注入法[參照「細胞生物學雜誌(J.Cell Biol.)」，1975年，第66卷，第621~634頁]、法式壓碎機法[參照「歐洲生化學會聯合會快報(FEBS Lett.)」，1979年，第99卷，第210~214頁]、冷凍融解法[參照「生物化學與生物物理學集刊(Arch.Biochem.Biophys.)」，1981年，第212卷，第186~194頁]、逆相蒸發法[參照「美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)」，1978年，第75卷，第4194~4198頁]或者pH梯度法(例如參照日本專利第2572554號公報、日本專利第2659136號公報等)等。作為製造脂質體時使脂質體分散之溶液，例如可使用水、酸、鹼、各種緩衝液、生理鹽水或者胺基酸輸液等。又，於製造脂質體時，亦可添加例如檸檬酸、抗壞血酸、半胱胺酸或者乙二胺四乙酸(EDTA)等抗氧化劑，例如甘油、葡萄糖或者氯化鈉等之等張劑等。又，亦可藉由如下方式製造脂質體：將脂質等溶解於例如乙醇等有機溶劑中，蒸餾除去溶劑後，添加生理食鹽水等進行振盪攪拌，形成脂質體。
又，本發明之組合物例如可藉由如下方法製造：將化合物(I)或者化合物(I)與化合物(I)以外之陽離子性脂質之混合物預先溶解於氯仿中，其次加入核酸之水溶液與甲醇進 行混合而形成陽離子性脂質/核酸之複合物，進而取出氯仿層，於其中加入聚乙二醇化磷脂質與中性脂質與水而形成油包水型(W/O)乳液，藉由逆相蒸發法進行處理而製造之方法(參照日本專利特表2002-508765號公報)；將核酸溶解於酸性電解質水溶液中，加入脂質(乙醇中)，使乙醇濃度降低至20 v/v%而內包上述核酸，進行上膠過濾，藉由透析而除去過剩之乙醇後，進而提高pH而對試樣進行透析，除去表面所附著之核酸而製造的方法(參照日本專利特表2002-501511號公報及生物化學與生物物理學報(Biochimica et Biophysica Acta)，2001年，第1510卷，第152~166頁)等。
本發明之組合物中，包含化合物(I)與核酸之複合物、或者於化合物(I)中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質雙層膜的脂質體例如可依照國際公開第02/28367號說明書及國際公開第2006/080118號說明書等中所記載之製造方法製造。
又，作為本發明之組合物中之含有化合物(I)與核酸之複合物、或者於化合物(I)中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜，且於脂質膜中含有化合物(I)及/或化合物(I)以外之陽離子性脂質之組合物；含有化合物(I)以外之陽離子性脂質與核酸之複合物、或者於化合物(I)以外之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜，且於脂質膜中含有化合物(I)或者化合物(I)及 化合物(I)以外之陽離子性脂質的組合物等可藉由如下方式獲得：依照國際公開第02/28367號說明書及國際公開第2006/080118號說明書等中所記載之製造方法，製造各複合物，於水或者0~20%之乙醇水溶液中分散而非溶解該複合物(A液)，另行使各個脂質膜成分溶解於乙醇水溶液中(B液)，將等量之A液與B液混合，進而適宜地加入水。再者，A液及B液中之陽離子性脂質可使用一種或者複數種化合物(I)或者化合物(I)以外之陽離子性脂質，又，亦可將化合物(I)與化合物(I)以外之陽離子性脂質組合而混合使用。
再者，於本發明中，本發明之組合物中，含有化合物(I)與核酸之複合物、或者於化合物(I)中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜，且於脂質膜中含有化合物(I)及/或化合物(I)以外之陽離子性脂質之組合物；含有化合物(I)以外之陽離子性脂質與核酸之複合物、或者於化合物(I)以外之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜，且於脂質膜中含有化合物(I)或者化合物(I)及化合物(I)以外之陽離子性脂質之組合物等的製造過程中及製造後，因複合物中之核酸與脂質膜中之陽離子性脂質之靜電相互作用或複合物中之陽離子性脂質與脂質膜中之陽離子性脂質之融合，而使複合物及/或膜之結構產生位移者亦分別包含於本發明之組合物中之含有化合物(I)與核酸之複合物、或者於化合物(I)中組合有中性脂質 及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜，且於脂質膜中含有化合物(I)及/或化合物(I)以外之陽離子性脂質之組合物；含有化合物(I)以外之陽離子性脂質與核酸之複合物、或者於化合物(I)以外之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜，且於脂質膜中含有化合物(I)或者化合物(I)及化合物(I)以外之陽離子性脂質之組合物等中。
於本發明之脂質奈米粒子中，作為複合物中之化合物(I)之分子之總數，相對於核酸之磷原子數而言較佳為0.5~4倍，更佳為1.5~3.5倍，進而較佳為2~3倍。又，作為該複合物中之化合物(I)及化合物(I)以外之陽離子性脂質之分子之總數，相對於該核酸之磷原子數而言較佳為0.5~4倍，更佳為1.5~3.5倍，進而較佳為2~3倍。
於本發明之脂質奈米粒子中，作為含有複合物及封入該複合物之脂質膜的脂質奈米粒子中之化合物(I)之分子之總數，相對於該核酸之磷原子數而言較佳為1~10倍，更佳為2.5~9倍，進而較佳為3.5~8倍。又，作為該脂質奈米粒子中之化合物(I)及化合物(I)以外之陽離子性脂質之分子之總數，相對於該核酸之磷原子數而言較佳為1~10倍，更佳為2.5~9倍，進而較佳為3.5~8倍。
依照國際公開第02/28367號說明書及國際公開第2006/080118號說明書等中所記載之製造方法，製造含有核酸(與上述同義)、較佳為雙鏈核酸與任意之陽離子性脂質、較佳為化合物(I)及/或本發明中之化合物(I)以外之陽離子 性脂質之脂質體的複合物，於水或者0~20%之乙醇水溶液中，分散而非溶解該複合物(A液)，另行使任意之陽離子性脂質、較佳為化合物(I)及/或本發明中之化合物(I)以外之陽離子性脂質溶解於乙醇水溶液中(B液)，將等量或者體積比為1：1之A液與B液混合，或者進而適宜地加入水，藉此可製造含有該核酸與該陽離子性脂質之組合物。該組合物較佳為含有陽離子性脂質與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜的組合物，更佳為含有該核酸與包含脂質單層(所述脂質單層含有該陽離子性脂質)之膜(逆微胞)之複合物、及封入該複合物之脂質膜的組合物。該等情形時之脂質膜可為脂質單層膜(脂質1分子膜)亦可為脂質雙層膜(脂質2分子膜)。
又，作為本揭示之該核酸與該脂質體之複合物中之脂質體，較佳為預先將大小調節為平均粒徑10 nm~400 nm、更佳為30 nm~110 nm、進而較佳為40 nm~80 nm的脂質體。又，於該複合物及/或脂質膜中亦可含有中性脂質及/或高分子。又，A液若可形成脂質體與該核酸之複合物，則乙醇濃度可為20~40%。
又，亦可以將A液與B液混合後成為並不溶解複合物且不溶解B液中之陽離子性脂質之乙醇濃度，較佳為並不溶解複合物、並不溶解B液中之陽離子性脂質、且成為乙醇濃度為30~60%之乙醇水溶液之比將A液與B液混合而代替將等量之A液與B液混合，或者亦可以成為將A液與B液混合後複合物並不溶解之乙醇濃度之比將A液與B液混合， 進而加入水，由此而設為B液中之陽離子性脂質變得並不溶解之乙醇濃度而代替將等量之A液與B液混合。
根據本揭示，可提供用以獲得如下組合物之新穎且有用之製造方法的發明：含有核酸(與上述同義)、較佳為雙鏈核酸與任意之陽離子性脂質、較佳為化合物(I)及/或本發明中之化合物(I)以外之陽離子性脂質的組合物；較佳為含有如下之複合物與如下之脂質膜之組合物，所述複合物係該核酸與包含脂質單層(所述脂質單層含有該陽離子性脂質)之膜(逆微胞)的複合物，所述脂質膜係封入該複合物之含有任意之陽離子性脂質、較佳為化合物(I)及/或本發明中之化合物(I)以外之陽離子性脂質的脂質膜。與國際公開第02/28367號說明書及國際公開第2006/080118號說明書等中所記載之製造方法相比，於如下特徵方面不同：藥物為核酸(與上述同義)、較佳為雙鏈核酸，於B液中包含陽離子性脂質。於該A液中之核酸與脂質體之複合物於將A液與B液混合、進而適宜地加入水後，於包含脂質單層(所述脂質單層含有陽離子性脂質)之膜(逆微胞)與核酸之複合物中形態產生變化。藉由本揭示之製造方法而獲得之含有該核酸與該陽離子性脂質之組合物較佳為含有陽離子性脂質與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜的組合物，更佳為含有包含脂質單層(所述脂質單層含有陽離子性脂質)之膜(逆微胞)與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有陽離子性脂質之組合物，其製造性(產率及/或均勻性)優異。
於該A液中之核酸與脂質體之複合物中，作為複合物中之陽離子性脂質之分子之總數，相對於核酸之磷原子數而言較佳為0.5~4倍，更佳為1.5~3.5倍，進而較佳為2~3倍。
於將A液與B液混合後的含有該核酸與包含脂質單層(所述脂質單層含有該陽離子性脂質)之膜(逆微胞)之複合物及封入該複合物之脂質膜的組合物中，作為該複合物及封入該複合物之脂質膜中之陽離子性脂質之分子之總數，相對於該核酸之磷原子數而言較佳為1~10倍，更佳為2.5~9倍，進而較佳為3.5~8倍。
作為中性脂質，可為單純脂質、複合脂質或者衍生脂質之任意者，例如可列舉磷脂質、甘油糖脂、神經鞘醣脂、鞘氨醇類或者固醇等，但並不限定於該等。
於本揭示發明中之組合物中含有中性脂質之情形時，中性脂質之分子總數相對於化合物(I)及化合物(I)以外之陽離子性脂質之分子總數而言較佳為0.1~1.8倍，更佳為0.3~1.1倍，進而較佳為0.4~0.9倍。本揭示發明中之組合物可於複合物中含有中性脂質，亦可於封入複合物之脂質膜中含有，更佳為至少於封入複合物之脂質膜中含有，進而較佳為於複合物及封入該複合物之脂質膜之任意者中含有。
作為中性脂質中之磷脂質，例如可列舉磷脂醯膽鹼(具體而言為大豆磷脂醯膽鹼、卵黃磷脂醯膽鹼(EPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二軟脂醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、棕櫚醯油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、二肉豆蔻醯 基磷脂醯膽鹼(DMPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)等)、磷脂醯乙醇胺(具體而言為二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二軟脂醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE)、二肉豆蔻醯基磷酯醯乙醇胺(DMPE)、16-0-單甲基PE、16-0-二甲基PE、18-1-反式PE、棕櫚醯基油醯基-磷脂醯乙醇胺(POPE)、1-硬脂醯基-2-油醯基-磷脂醯乙醇胺(SOPE)等)、甘油磷脂質(具體而言為磷脂絲胺酸、磷脂酸、磷脂醯甘油、磷脂醯肌醇、棕櫚醯油醯基磷脂醯甘油(POPG)、溶血磷脂醯膽鹼等)、神經鞘磷脂質(具體而言為神經鞘磷脂、腦醯胺磷酯醯乙醇胺、腦醯胺磷醯甘油、腦醯胺磷醯甘油磷酸等)、甘油膦酸基脂質、神經鞘膦酸基脂質、天然卵磷脂(具體而言為蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂等)或者氫化磷脂質(具體而言為氫化大豆磷脂醯膽鹼等)等天然或者合成之磷脂質。
作為中性脂質中之甘油糖脂，例如可列舉磺醯核糖基甘油酯、二糖基二甘油酯、二半乳糖基二甘油酯、半乳糖基二甘油酯或者糖基二甘油酯等。
作為中性脂質中之神經鞘醣脂，例如可列舉半乳糖基腦苷脂、乳糖基腦苷脂或者神經節苷脂等。
作為中性脂質中之鞘氨醇類，例如可列舉鞘氨醇膠、二十烷基鞘氨醇膠、化合糖脂醇或者該等之衍生物等。作為衍生物，例如可列舉將鞘氨醇膠、二十烷基鞘氨醇膠或者化合糖脂醇等之-NH2轉化為-NHCO(CH2)xCH3(式中，x為0~18之整數，其中較佳為6、12或者18)而成者等。
作為中性脂質中之固醇，例如可列舉膽固醇、二氫膽固醇、羊毛固醇、β-穀甾醇、菜油甾醇、豆固醇、菜籽甾醇、麥角固醇、海藻固醇或者3β-[N-(N',N'-二甲基胺基乙基)胺甲醯基]膽固醇(DC-Chol)等。
作為高分子，例如可列舉包含如下高分子或者該等鹽之1種以上之微胞：蛋白質、白蛋白、聚葡萄糖、polyfect、聚葡萄胺糖、聚葡萄糖硫酸、例如聚-L-離胺酸、聚乙烯亞胺、聚天冬胺酸、苯乙烯馬來酸共聚物、異丙基丙烯醯胺-丙烯醯基吡咯啶酮共聚物、聚乙二醇修飾樹枝狀聚合物、聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸或者聚乙二醇化聚乳酸等。
此處，高分子中之鹽例如包含金屬鹽、銨鹽、酸加成鹽、有機胺加成鹽、胺基酸加成鹽等。作為金屬鹽，例如可列舉鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽，鎂鹽、鈣鹽等鹼土金屬鹽，鋁鹽或者鋅鹽等。作為銨鹽，例如可列舉銨或者四甲基銨等之鹽。作為酸加成鹽，例如可列舉鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽或者磷酸鹽等無機酸鹽，及乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽或者檸檬酸鹽等有機酸鹽。作為有機胺加成鹽，例如可列舉嗎啉或者哌啶等之加成鹽。作為胺基酸加成鹽，例如可列舉甘胺酸、苯丙胺酸、天冬醯胺酸、麩胺酸或者離胺酸等之加成鹽。
又，總之本揭示發明中之組合物較佳為例如含有選自糖、肽、核酸及水溶性高分子之1種以上物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物、或者界面活性劑等。該選自糖、肽、核酸及水溶性高分子之1種以上物質之脂質衍生物或脂肪 酸衍生物或者界面活性劑可含有於複合物中，亦可含有於封入複合物之脂質膜中，更佳為於複合物及封入該複合物之脂質膜中均含有。
於本發明之組合物含有選自糖、肽、核酸及水溶性高分子之1種以上物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物之情形時，選自糖、肽、核酸及水溶性高分子之1種以上物質之脂質衍生物及脂肪酸衍生物之分子總數較佳為相對於化合物(I)及化合物(I)以外之陽離子性脂質之分子總數而言為0.05~0.3倍，更佳為0.07~0.25倍，進而較佳為0.1~0.2倍。
作為選自糖、肽、核酸及水溶性高分子之1種以上物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物、或者界面活性劑，較佳可列舉糖脂質、或者水溶性高分子之脂質衍生物或脂肪酸衍生物，更佳為列舉水溶性高分子之脂質衍生物或者脂肪酸衍生物。選自糖、肽、核酸及水溶性高分子之1種以上物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物、或者界面活性劑較佳為分子之一部分具有藉由例如疏水性親和力、靜電相互作用等而與組合物之其他構成成分鍵結之性質，其他部分具有藉由例如親水性親和力、靜電相互作用等而與組合物之製造時之溶劑鍵結之性質，從而具有兩面性之物質。
作為糖、肽或者核酸之脂質衍生物或者脂肪酸衍生物，可列舉例如蔗糖、山梨糖醇、乳糖等糖，例如源自酪蛋白之肽、源自蛋白之肽、源自大豆之肽、麩胱苷肽等肽，或者例如DNA、RNA、質粒、siRNA、ODN等核酸與上述組合物之定義中所列舉之中性脂質或化合物(I)或者例如硬脂 酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸、十二烷酸等脂肪酸鍵結而成者等。
又，作為糖之脂質衍生物或者脂肪酸衍生物，例如亦包含上述組合物之定義中所列舉之甘油糖脂或者神經鞘醣脂等。
作為水溶性高分子之脂質衍生物或者脂肪酸衍生物，例如可列舉聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯醯胺、寡糖、糊精、水溶性纖維素、聚葡萄糖、硫酸軟骨素、聚甘油、聚葡萄胺糖、聚乙烯吡咯啶酮、聚天冬胺酸醯胺、聚-L-離胺酸、甘露聚醣、聚三葡萄糖、低聚甘油等或者該等之衍生物，與上述組合物之定義中所列舉之中性脂質或化合物(I)、或者例如硬脂酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸或者月桂酸等脂肪酸鍵結而成者、該等之鹽等；更佳為列舉聚乙二醇衍生物、聚甘油衍生物等之脂質衍生物或者脂肪酸衍生物，進而較佳為列舉聚乙二醇衍生物之脂質衍生物或者脂肪酸衍生物及該等之鹽。
作為聚乙二醇衍生物之脂質衍生物或者脂肪酸衍生物，例如可列舉聚乙二醇化脂質(具體而言為聚乙二醇-磷脂醯乙醇胺(更具體而言為1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DSPE)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DMPE)等)、聚氧乙烯氫化蓖麻油60、CREMOPHOR EL等)、聚乙二醇山梨糖醇酐脂肪酸酯類(具體而言為聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯等)或者聚乙二醇 脂肪酸酯類等，更佳為列舉聚乙二醇化脂質。
作為聚甘油衍生物之脂質衍生物或者脂肪酸衍生物，例如可列舉聚甘油化脂質(具體而言為聚甘油-磷脂醯乙醇胺等)或者聚甘油脂肪酸酯類等，更佳為列舉聚甘油化脂質。
作為界面活性劑，例如可列舉聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯(具體而言為聚山梨醇酯80等)、聚氧乙烯聚丙二醇(具體而言為Pluronic F68等)、山梨糖醇酐脂肪酸酯(具體而言為山梨醇酐單月桂酸酯、山梨醇酐單油酸酯等)、聚氧乙烯衍生物(具體而言為聚氧乙烯氫化蓖麻油60、聚氧乙烯月桂醇等)、甘油脂肪酸酯或者聚乙二醇烷基醚等，較佳可列舉聚氧乙烯聚丙二醇、甘油脂肪酸酯或者聚乙二醇烷基醚等。
又，對於本揭示發明中之組合物中之複合物及脂質膜，亦可任意地進行例如利用高分子、聚氧乙烯衍生物等之表面改質[參照拉西奇(D.D.Lasic)、馬丁(F.Martin)編之「隱形脂質體(Stealth Liposomes)」(美國)，CRC出版有限公司(CRC Press Inc)，1995年，第93~102頁]。作為可於表面改質中所使用之高分子，例如可列舉聚葡萄糖、聚三葡萄糖、甘露聚醣、支鏈澱粉或者羥基乙基澱粉等。作為聚氧乙烯衍生物，例如可列舉聚山梨醇酯80、Pluronic F68、聚氧乙烯氫化蓖麻油60、聚氧乙烯月桂醇或者PEG-DSPE等。藉由該表面改質，可於組合物中之複合物及脂質膜中含有選自糖、肽、核酸及水溶性高分子之1種以上物質之 脂質衍生物或脂肪酸衍生物、或者界面活性劑。
又，亦可任意地進行藉由使標靶化配體共價鍵結於本發明之組合物中之複合物及脂質膜之脂質成分之極性頭殘基上，而直接鍵結於該複合物及該脂質膜之表面(參照國際公開第2006/116107號說明書)。
本揭示發明中之組合物中之複合物或者封入複合物之脂質膜之平均粒徑可視需要而自由地選擇，較佳為設為下述之平均粒徑。作為調節平均粒徑之方法，例如可列舉擠出法、對較大之多重膜脂質體(MLV)等進行機械性粉碎(具體而言使用Manton Gaulin、微噴均質機等)之方法[參照穆勒(R.H.Muller)、貝妮塔(S.Benita)、波姆(B.Bohm)編著,「用於難溶性藥劑之乳液與奈米懸浮液(Emulsion and Nanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs)」，德國，斯圖加特科學出版社(Scientific Publishers Stuttgart)，1998年，第267~294頁]等。
本揭示發明中之組合物中之複合物或者封入複合物之脂質膜的大小較佳為平均粒徑為約10 nm~1000 nm，更佳為約30 nm~300 nm，進而較佳為約50 nm~200 nm。
可藉由將本發明之組合物投予至哺乳類之細胞，而將本發明之組合物中之核酸導入至細胞內。
於活體外將本發明之組合物投予至哺乳類之細胞之方法依照可於活體外進行之公知之轉染之順序進行即可。
於活體內將本發明之組合物投予至哺乳類之細胞之方法依照可於活體內進行之公知之轉染之順序進行即可。例如 藉由將本發明之組合物靜脈內投予包括人之哺乳動物，可送達至例如產生癌或者炎症之器官或者部位，從而於送達器官或者部位之細胞內導入本發明之組合物中之核酸。作為產生癌或者炎症之器官或者部位，並無特別限定，例如可列舉胃、大腸、肝臟、肺、脾臟、胰腺、腎臟、膀胱、皮膚、血管、眼球等。又，藉由將本發明之組合物靜脈內投予包括人之哺乳動物，可送達至例如血管、肝臟、肺、脾臟及/或腎臟，從而於送達器官或者部位之細胞內導入本發明之組合物中之核酸。肝臟、肺、脾臟及/或腎臟之細胞可為正常細胞、與癌或炎症相關之細胞或者與其他疾病相關之細胞之任意者。
本發明之組合物中之核酸若為具有利用RNA干擾(RNAi)而抑制標靶基因表現的作用之核酸，則可於活體內將抑制基因之表現的核酸等導入至哺乳類之細胞內，可抑制基因等之表現。投予對象較佳為人。
又，本發明之組合物之標靶基因若為例如與腫瘤或炎症相關之基因，則可將本發明之組合物用作癌或炎症疾病之治療劑或者預防劑、較佳為實質癌或者血管或血管附近之炎症之治療劑或者預防劑。具體而言，本發明之組合物之標靶基因若為與血管新生相關之基因等，則可抑制血管平滑肌之增生或血管新生等，因此可將本發明之組合物用作例如伴隨著血管平滑肌增生或血管新生之癌或炎症疾病之治療劑或者預防劑。於將化合物(I)複數種組合使用之情形或者與化合物(I)以外之陽離子性脂質組合使用之情形時， 與單獨使用各個陽離子性脂質之情形相比可減量，因此可減小因陽離子性脂質導致之欠佳現象之產生率或程度。
即，本發明亦提供將上述所說明之本發明之組合物投予哺乳動物之癌或炎症疾病之治療方法。投予對象較佳為人，更佳為患有癌或炎症疾病之人。
又，本發明之組合物於與癌或炎症疾病之治療劑或者預防劑相關之活體內藥效評價模式中，亦可用作用以驗證抑制標靶基因之有效性的工具。
本發明之組合物亦可用作例如基於如下目的之製劑：成分等活體成分(例如血液、消化道等)中之上述核酸之穩定化、副作用之減低、或者對包含標靶基因之表現部位之組織或者器官之藥劑積體性之增大等。
於將本發明之組合物用作醫藥品之癌或炎症疾病等之治療劑或者預防劑之情形時，作為投予路徑，較理想為採用治療時最有效之投予路徑，可列舉口腔內、呼吸道內、直腸內、皮下、肌內或者靜脈內等非經口投予或者經口投予，較佳可列舉靜脈內投予或者肌內投予，更佳為可列舉靜脈內投予。
投予量因投予對象之症狀或年齡、投予路徑等而異，例如較佳為以換算為核酸之1日投予量成為約0.1 μg~1000 mg之方式進行投予即可。
作為適於靜脈內投予或肌內投予之製劑，例如可列舉注射劑，亦可將藉由上述方法而調製之組合物之分散液直接作為例如注射劑等形態而使用，亦可藉由例如過濾、離心 分離等將溶劑自該分散液除去而使用，亦可將該分散液冷凍乾燥而使用，及/或將加入有例如甘露醇、乳糖、菌藻糖、麥芽糖或甘胺酸等賦形劑之分散液冷凍乾燥而使用。
於注射劑之情形時，較佳為於上述組合物之分散液或者將上述溶劑除去或冷凍乾燥而成之組合物中，混合例如水、酸、鹼、各種緩衝液、生理鹽水或者胺基酸輸液等而調製注射劑。又，亦可添加例如檸檬酸、抗壞血酸、半胱胺酸或EDTA等抗氧化劑或者甘油、葡萄糖或氯化鈉等之等張劑等而調製注射劑。又，亦可加入例如甘油等冷凍保存劑而進行冷凍保存。
其次，藉由實施例及試驗例對本發明加以具體說明。但本發明並不限定於該等實施例及試驗例。
再者，實施例及參考例中所示之質子核磁共振光譜(1H NMR)係於270 MHz、300 MHz或者400 MHz下測得者，存在因化合物及測定條件而未能明確地觀測到交換性質子之現象。再者，作為訊號之多重度之表述，使用通常所使用者，所謂br表示表觀上寬廣之訊號。
參考例1 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-1)
於氫化鈉(油性，60%，5.80 g，145 mmol)之甲苯(100 mL)懸浮液中一面攪拌一面緩緩添加(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、3.50 g，18.1 mmol)之甲苯(70 mL)溶液，然後滴加(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造，15.6 g，45.3 mmol) 之甲苯(30 mL)溶液。將所得之混合物於加熱回流下進行徹夜攪拌。冷卻至室溫後，以飽和氯化銨水溶液使反應停止。於所得之混合物中加入飽和食鹽水，藉由乙酸乙酯進行2次萃取。將有機層合併，藉由無水硫酸鎂進行乾燥後，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(甲醇/氯仿=0/100~2/98)對殘渣進行純化，藉此獲得化合物VI-1(6.96 g，55.7%)。
ESI-MS m/z：691(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9 Hz,6H),1.26-1.38(m,30H),1.52-1.62(m,6H),2.05(q,J=6.3 Hz,8H),2.50(dd,J=9.9,4.3 Hz,2H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),2.85(dd,J=9.6,5.9 Hz,2H),3.37-3.45(m,4H),3.52-3.66(m,2H),3.83(t,J=4.6 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H),7.23-7.33(m,5H)。
參考例2 (3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸酯)(化合物VI-2)
使(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、350 mg，1.81 mmol)溶解於二氯甲烷(18 mL)中，加入亞麻油酸(Aldrich公司製造、1.24 mL，3.98 mmol)、二環己基碳二醯亞胺(國產化學公司製造、860 mg，4.17 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(東京化成工業公司製造、55.3 mg，0.453 mmol)並於室溫下進行徹夜攪拌。於反應液中加入己烷(18 mL)，進行過濾後，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(己烷/氯仿=40/60~20/80)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物VI-2(1.21 g，93.0%)。
ESI-MS m/z：719(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.30-1.40(m,28H),1.55-1.64(m,4H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.30(t,J=7.5 Hz,4H),2.50(dd,J=10.3,4.0 Hz,2H),2.77(t,J=6.1 Hz,4H),3.06(dd,J=10.3,6.1 Hz,2H),3.62(q,J=13.8 Hz,2H),5.12(dd,J=5.3,4.0 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H),7.23-7.34(m,5H)。
參考例3 (3R,4S)-1-苄基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-3)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3R,4S)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、274 mg，1.42 mmol)及(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造，1.22 g，3.54 mmol)作為原料，獲得化合物VI-3(398 mg，40.7%)。
ESI-MS m/z：691(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.6 Hz,6H),1.29-1.40(m,30H),1.56(dd,J=13.0,7.1 Hz,6H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.46(dd,J=9.5,6.0 Hz,2H),2.77(t,J=6.0 Hz,4H),3.08(dd,J=9.5,6.0 Hz,2H),3.37-3.53(m,4H),3.63(s,2H),3.85-3.92(m,2H),5.28-5.43(m,8H),7.20-7.30(m,5H)。
參考例4 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙((Z)-十八碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-4)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、250 mg，1.29 mmol)及(Z)-十八碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製 造，1.79 g，5.17 mmol)，獲得化合物VI-4(507 mg，56.4%)。
ESI-MS m/z：695(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.36(m,44H),1.53-1.58(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.50(dd,J=9.9,4.7 Hz,2H),2.85(dd,J=9.9,6.1 Hz,2H),3.34-3.47(m,4H),3.59(q,J=12.6 Hz,2H),3.83(t,J=4.7 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H),7.23-7.32(m,5H)。
參考例5 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙(十四烷氧基)吡咯啶(化合物VI-5)
使(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、150 mg，0.776 mmol)溶解於二甲基亞碸(4 mL)中，加入氫氧化鉀(348 mg，6.21 mmol)，於100℃下進行15分鐘之攪拌。於反應溶液中加入甲磺酸十四烷基酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、568 mg，1.94 mmol)之二甲基亞碸(4 mL)溶液，於100℃下進行4小時之攪拌。冷卻至室溫後，加入水，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由水、飽和氯化鈉水溶液對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿100%)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物VI-5(449 mg，98.6%)。
ESI-MS m/z：587(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.25-1.33(m,44H),1.51-1.60(m,4H),2.50(dd,J=9.9,4.7 Hz,2H),2.85(dd,J=9.9,6.0 Hz,2H),3.35- 3.47(m,4H),3.59(q,J=12.8 Hz,2H),3.83(t,J=4.7 Hz,2H),7.21-7.33(m,5H)。
參考例6 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙((Z)-十六碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-6)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、146 mg，0.753 mmol)及(Z)-十六碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、600 mg，1.88 mmol)而獲得化合物VI-6(231 mg，48.0%)。
ESI-MS m/z：639(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.28-1.37(m,36H),1.50-1.60(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.50(dd,J=9.8,4.6 Hz,2H),2.85(dd,J=9.8,5.9 Hz,2H),3.34-3.47(m,4H),3.59(q,J=12.6 Hz,2H),3.83(t,J=4.6 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H),7.20-7.34(m,5H)。
參考例7 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙((Z)-十八碳-6-烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-7)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、134 mg，0.693 mmol)及(Z)-十八碳-6-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、600 mg，1.73 mmol)而獲得化合物VI-7(196 mg，40.7%)。
ESI-MS m/z：695(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.37(m,44H),1.52-1.61(m,4H), 1.97-2.05(m,8H),2.50(dd,J=9.9,4.6 Hz,2H),2.85(dd,J=9.9,5.9 Hz,2H),3.34-3.48(m,4H),3.59(q,J=11.8 Hz,2H),3.83(t,J=4.6 Hz,2H),5.28-5.41(m,4H),7.22-7.34(m,5H)。
參考例8 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-8)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、124 mg，0.644 mmol)及(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、600 mg，1.61 mmol)而獲得化合物VI-8(210 mg，43.7%)。
ESI-MS m/z：747(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.40(m,40H),1.51-1.60(m,4H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.50(dd,J=10.0,4.5 Hz,2H),2.77(t,J=6.1 Hz,4H),2.85(dd,J=10.0,6.1 Hz,2H),3.35-3.47(m,4H),3.59(q,J=12.8 Hz,2H),3.83(t,J=4.5 Hz,2H),5.29-5.43(m,8H),7.22-7.33(m,5H)。
參考例9 (3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二基二((Z)-十八碳-9-烯酸酯)(化合物VI-9)
藉由與參考例2同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、500 mg，2.59 mmol)及油酸(東京化成工業公司製造、1.61 g，5.69 mmol)而獲得化合物VI-9(1.85 g，98.8%)。
ESI-MS m/z：723(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t, J=6.6 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.55-1.65(m,4H),2.01(q,J=5.6 Hz,8H),2.30(t,J=7.4 Hz,4H),2.50(dd,J=10.2,4.1 Hz,2H),3.06(dd,J=10.2,6.3 Hz,2H),3.63(q,J=12.9 Hz,2H),5.12(dd,J=5.1,4.1 Hz,2H),5.28-5.40(m,4H),7.23-7.34(m,5H)。
參考例10 (3S,4S)-1-苄基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-10)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3S,4S)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、500 mg，2.59 mmol)及(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、2.23 g，6.47 mmol)而獲得化合物VI-10(966 mg，54.1%)。
ESI-MS m/z：691(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.4 Hz,6H),1.28-1.38(m,32H),1.50-1.60(m,4H),2.04(q,J=6.6 Hz,8H),2.49(dd,J=10.0,4.1 Hz,2H),2.75-2.88(m,6H),3.34-3.47(m,4H),3.59(q,J=11.2 Hz,2H),3.82(t,J=4.9 Hz,2H),5.27-5.43(m,8H),7.21-7.31(m,5H)。
參考例11 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙(十六烷氧基)吡咯啶(化合物VI-11)
藉由與參考例5同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、100 mg，0.517 mmol)及甲磺酸十六烷基酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、415 mg，1.29 mmol)而獲得化合物VI-11(324 mg，97.6%)。
ESI-MS m/z：643(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t, J=6.8 Hz,6H),1.25-1.33(m,52H),1.50-1.58(m,4H),2.50(dd,J=9.9,4.8 Hz,2H),2.85(dd,J=9.9,6.0 Hz,2H),3.35-3.47(m,4H),3.59(q,J=12.8 Hz,2H),3.83(t,J=4.8 Hz,2H),7.20-7.33(m,5H)。
參考例12 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙(十八烷氧基)吡咯啶(化合物VI-12)
藉由與參考例5同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、100 mg，0.517 mmol)及甲磺酸十八烷基酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、451 mg，1.29 mmol)而獲得化合物VI-12(319 mg，88.3%)。
ESI-MS m/z：699(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.25-1.33(m,60H),1.51-1.59(m,4H),2.50(dd,J=9.8,4.5 Hz,2H),2.85(dd,J=9.8,6.2 Hz,2H),3.35-3.47(m,4H),3.59(q,J=12.7 Hz,2H),3.83(t,J=4.5 Hz,2H),7.21-7.33(m,5H)。
參考例13 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙((Z)-十四碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-13)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、80.0 mg，0.414 mmol)及(Z)-十四碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、301 mg，1.04 mmol)而獲得化合物VI-13(119 mg，49.5%)。
ESI-MS m/z：583(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0 Hz,6H),1.28-1.37(m,28H),1.51-1.60(m,4H), 1.98-2.05(m,8H),2.50(dd,J=9.8,4.6 Hz,2H),2.85(dd,J=9.8,6.0 Hz,2H),3.35-3.47(m,4H),3.59(q,J=12.6 Hz,2H),3.83(t,J=4.6 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H),7.21-7.34(m,5H)。
參考例14 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙((Z)-十八碳-11-烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-14)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、112 mg，0.577 mmol)及(Z)-十八碳-11-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、500 mg，1.44 mmol)而獲得化合物VI-14(244 mg，60.8%)。
ESI-MS m/z：695(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.35(m,44H),1.51-1.59(m,4H),2.01(q,J=6.1 Hz,8H),2.50(dd,J=9.9,4.6 Hz,2H),2.85(dd,J=9.9,6.0 Hz,2H),3.35-3.47(m,4H),3.59(q,J=12.8 Hz,2H),3.83(t,J=4.6 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H),7.21-7.34(m,5H)。
參考例15 (3R,4R)-1-苄基-3,4-雙((Z)-二十碳-11-烯基氧基)吡咯啶(化合物VI-15)
藉由與參考例1同樣的方法，使用(3R,4R)-1-苄基吡咯啶-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司製造、103 mg，0.534 mmol)及(Z)-二十碳-11-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、500 mg，1.34 mmol)而獲得化合物VI-15(251 mg，62.7%)。 ESI-MS m/z：751(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,52H),1.50-1.60(m,4H),2.01(q,J=6.0 Hz,8H),2.50(dd,J=9.8,4.4 Hz,2H),2.85(dd,J=9.8,6.2 Hz,2H),3.35-3.47(m,4H),3.59(q,J=12.8 Hz,2H),3.83(t,J=4.4 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H),7.21-7.34(m,5H)。
參考例16 (反式-1-苄基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇
將參考國際公開第2009/027820號說明書而合成之反式-1-苄基吡咯啶-3,4-二甲酸二乙酯(830 mg，2.72 mmol)溶解於THF(24 mL)中，於0℃下加入氫化鋁鋰(206 mg，5.44 mmol)，於室溫下進行1.3小時之攪拌。於反應混合物中加入硫酸鈉十水合物、氯仿、矽藻土，於室溫下進一步進行攪拌。加入無水硫酸鎂後進行過濾，將濾液於減壓下進行濃縮。加入己烷而濾取固體，藉此獲得(反式-1-苄基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇(565 mg，93.9%)。
ESI-MS m/z：222(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：2.17-2.28(m,2H),2.35(dd,J=9.0,5.1 Hz,2H),2.77(dd,J=9.0,7.1 Hz,2H),3.56-3.68(m,6H),7.22-7.34(m,5H)。
參考例17 反式-1-苄基-3,4-雙(((Z)-十六碳-9-烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物VI-16)
藉由與參考例1同樣的方法，使用參考例16中所得之(反式-1-苄基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇(150 mg，0.678 mmol)及(Z)-十六碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、540 mg，1.70 mmol)而獲得化合物VI-16(372 mg，82.3%)。 ESI-MS m/z：667(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.28-1.35(m,36H),1.49-1.57(m,4H),1.95-2.10(m,10H),2.37(dd,J=9.2,5.5 Hz,2H),2.67(dd,J=9.2,7.0 Hz,2H),3.31-3.44(m,8H),3.57(dd,J=18.1,13.0 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H),7.19-7.32(m,5H)。
參考例18 N-苄基二乙醇胺
於二乙醇胺(1.80 g，17.1 mmol)之氯仿(46 mL)溶液中添加二異丙基乙基胺(2.99 mL，17.1 mmol)與苄基溴(1.36 mL，11.4 mmol)，於加熱回流下進行5小時之攪拌。藉由水、飽和碳酸氫鈉溶液、飽和食鹽水對反應溶液進行清洗，以硫酸鎂加以乾燥，進行過濾後進行蒸發。藉由矽膠管柱層析法(甲醇/氯仿=0/100~12/88)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得N-苄基二乙醇胺(1.77 g，79.4%)。
ESI-MS m/z：196(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：2.29(br s,2H),2.73(t,J=5.3 Hz,4H),3.63(t,J=5.3 Hz,4H),3.71(s,2H),7.24-7.37(m,5H)。
參考例19 N-苄基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物VI-17)
藉由與參考例1同樣的方法，使用參考例18中所得之N-苄基二乙醇胺(149 mg，0.763 mmol)及(Z)-十八碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、661 mg，1.91 mmol)，獲得化合物VI-17(257 mg，48.4%)。
ESI-MS m/z：697(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27(br s,44H),1.50-1.58(m,4H),1.97- 2.04(m,8H),2.74(t,J=6.2 Hz,4H),3.37(t,J=6.6 Hz,4H),3.50(t,J=6.2 Hz,4H),3.71(s,2H),5.29-5.40(m,4H),7.21-7.35(m,5H)。
參考例20 N-苄基-N,N-雙(2-((Z)-十四碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物VI-18)
藉由與參考例1同樣的方法，使用參考例18中所得之N-苄基二乙醇胺(171 mg，0.876 mmol)及(Z)-十四碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、636 mg，2.19 mmol)，獲得化合物VI-18(424 mg，82.9%)。
ESI-MS m/z：585(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.1 Hz,6H),1.25-1.35(m,28H),1.50-1.57(m,4H),1.97-2.05(m,8H),2.74(t,J=6.3 Hz,4H),3.37(t,J=6.7 Hz,4H),3.50(t,J=6.3 Hz,4H),3.71(s,2H),5.29-5.40(m,4H),7.19-7.36(m,5H)。
參考例21 N-苄基-N,N-雙(2-(十四烷氧基)乙基)胺(化合物VI-19)
藉由與參考例5同樣的方法，使用參考例18中所得之N-苄基二乙醇胺(171 mg，0.876 mmol)及甲磺酸十四烷基酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、640 mg，2.19 mmol)而獲得化合物VI-19(173 mg，33.6%)。
ESI-MS m/z：589(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.25(br s,44H),1.50-1.58(m,4H),2.74(t,J=6.1 Hz,4H),3.37(t,J=6.6 Hz,4H),3.50(t,J=6.3 Hz,4H),3.71(s,2H),7.21-7.36(m,5H)。
參考例22 N-苄基-N,N-雙(2-(十六烷氧基)乙基)胺(化合物VI-20)
藉由與參考例5同樣的方法，使用參考例18中所得之N-苄基二乙醇胺(171 mg，0.876 mmol)及甲磺酸十六烷基酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、702 mg，2.19 mmol)而獲得化合物VI-20(411 mg，72.9%)。
ESI-MS m/z：645(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.25(br s,52H),1.50-1.58(m,4H),2.74(t,J=6.3 Hz,4H),3.37(t,J=6.6 Hz,4H),3.50(t,J=6.3 Hz,4H),3.71(s,2H),7.21-7.36(m,5H)。
參考例23 N-苄基-N,N-雙(2-(十八烷氧基)乙基)胺(化合物VI-21)
藉由與參考例5同樣的方法，使用參考例18中所得之N-苄基二乙醇胺(171 mg，0.876 mmol)及甲磺酸十八烷基酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、763 mg，2.19 mmol)而獲得化合物VI-21(421 mg，68.7%)。
ESI-MS m/z：701(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.25(br s,60H),1.49-1.58(m,4H),2.74(t,J=6.3 Hz,4H),3.37(t,J=6.6 Hz,4H),3.50(t,J=6.3 Hz,4H),3.71(s,2H),7.19-7.35(m,5H)。
參考例24 N-苄基-N,N-雙(2-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物VI-22)
藉由與參考例1同樣的方法，使用參考例18中所得之N-苄基二乙醇胺(277 mg，1.42 mmol)及(Z)-十六碳-9-烯基甲 磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、1.13 g，3.55 mmol)而獲得化合物VI-22(739 mg，81.4%)。
ESI-MS m/z：641(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.28-1.35(m,36H),1.49-1.58(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.74(t,J=6.2 Hz,4H),3.37(t,J=6.6 Hz,4H),3.50(t,J=6.2 Hz,4H),3.71(s,2H),5.29-5.40(m,4H),7.19-7.35(m,5H)。
參考例25 反式-1-苄基-3,4-雙(((Z)-十八碳-9-烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物VI-23)
藉由與參考例1同樣的方法，使用參考例16中所得之(反式-1-苄基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇(150 mg，0.678 mmol)及(Z)-十八碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、597 mg，1.70 mmol)而獲得化合物VI-23(359 mg，73.4%)。
ESI-MS m/z：723(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.36(m,44H),1.48-1.57(m,4H),1.98-2.08(m,10H),2.37(dd,J=9.0,5.1 Hz,2H),2.67(dd,J=9.0,7.2 Hz,2H),3.31-3.43(m,8H),3.52-3.63(m,2H),5.29-5.40(m,4H),7.21-7.31(m,5H)。
參考例26 反式-1-苄基-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物VI-24)
藉由與參考例1同樣的方法，使用參考例16中所得之(反式-1-苄基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇(150 mg，0.678 mmol)及(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、584 mg，1.70 mmol)而獲得化合物VI-24(384 mg， 78.9%)。
ESI-MS m/z：719(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.4 Hz,6H),1.28-1.40(m,32H),1.48-1.57(m,4H),2.05(q,J=6.6 Hz,10H),2.37(dd,J=9.0,4.9 Hz,2H),2.67(dd,J=9.0,7.1 Hz,2H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.30-3.43(m,8H),3.51-3.63(m,2H),5.28-5.43(m,8H),7.20-7.31(m,5H)。
參考例27 反式-1-苄基-3,4-雙(((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物VI-25)
藉由與參考例1同樣的方法，使用參考例16中所得之(反式-1-苄基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇(150 mg，0.678 mmol)及(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、631 mg，1.70 mmol)而獲得化合物VI-25(423 mg，80.6%)。
ESI-MS m/z：775(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.38(m,40H),1.49-1.57(m,4H),2.05(q,J=6.7 Hz,10H),2.37(dd,J=9.2,5.1 Hz,2H),2.67(dd,J=9.1,7.1 Hz,2H),2.77(t,J=6.0 Hz,4H),3.31-3.43(m,8H),3.52-3.62(m,2H),5.29-5.43(m,8H),7.21-7.31(m,5H)。
參考例28 反式-1-(第三丁氧基羰基)-3,4-雙(((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)甲基)吡咯啶(化合物XIII-1)
藉由與參考例2同樣的方法，使用參照國際公開第2006/100036號說明書而合成之反式-3,4-雙(羥基甲基)吡咯 啶-1-甲酸第三丁酯(156 mg，0.674 mmol)及油酸(東京化成工業公司製造、419 mg，1.48 mmol)而獲得化合物XIII-1(280 mg，54.6%)。
ESI-MS m/z：761(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.25-1.46(m,36H),1.46(s,9H),1.46-1.66(m,8H),1.97-2.04(m,8H),2.27-2.38(m,6H),3.10-3.23(m,2H),3.53-3.66(m,2H),4.03(dd,J=10.8,6.0 Hz,2H),4.14(dd,J=10.8,6.0 Hz,2H),5.28-5.40(m,4H)。
參考例29 反式-1-(第三丁氧基羰基)-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基)甲基)吡咯啶(化合物XIII-2)
藉由與參考例2同樣的方法，使用參考國際公開第2006/100036號說明書而合成之反式-3,4-雙(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(150 mg，0.674 mmol)及亞麻油酸(Aldrich公司製造，400 mg，1.48 mmol)而獲得化合物XIII-2(351 mg，71.7%)。
ESI-MS m/z：757(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.21-1.45(m,26H),1.46(s,9H),1.47-1.68(m,6H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.26-2.38(m,6H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.10-3.23(m,2H),3.53-3.66(m,2H),4.03(dd,J=11.0,6.0 Hz,2H),4.14(dd,J=11.0,6.0 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例1] (3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物1)
將參考例1中所得之化合物VI-1(6.96 g，10.1 mmol)溶解於1,2-二氯乙烷(100 mL)中，加入氯甲酸-1-氯乙酯(東京化成工業公司製造、3.30 mL，30.3 mmol)並於130℃下進行1小時之攪拌。於反應溶液中加入甲醇(100 mL)，於130℃下進一步進行1小時之攪拌。冷卻至室溫後，於減壓下進行濃縮，藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~92/8)而對所得之殘渣進行純化。收集包含化合物之組份，藉由飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮，藉此獲得化合物1(5.56 g，92.0%)。
ESI-MS m/z：601(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9 Hz,6H),1.29-1.41(m,30H),1.49-1.60(m,4H),1.67(br s,3H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.75-2.85(m,6H),3.09(dd,J=12.4,5.1 Hz,2H),3.37-3.49(m,4H),3.76(dd,J=5.0,3.3 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例2] (3R,4R)-吡咯啶-3,4-二基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸酯)(化合物2)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例2中所得之化合物VI-2(1.51 g，2.10 mmol)而獲得化合物2(1.20 g，90.9%)。
ESI-MS m/z：629(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.41(m,29H),1.56-1.68(m,4H),2.05(q,J=6.4 Hz,8H),2.30(t,J=7.6 Hz,4H),2.77(t,J=5.8 Hz, 4H),2.87(dd,J=13.0,3.0 Hz,2H),3.32(dd,J=13.0,5.0 Hz,2H),5.08(dd,J=5.0,3.0 Hz,2H),5.28-5.44(m,8H)。
[實施例3] (3R,4S)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物3)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例3中所得之化合物VI-3(346 mg，0.501 mmol)而獲得化合物3(245 mg，81.3%)。
ESI-MS m/z：601(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.7 Hz,6H),1.30-1.40(m,30H),1.54-1.68(m,8H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.00(d,J=5.0 Hz,3H),3.41-3.55(rn,4H),3.83(t,J=3.8 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例4] (3R,4R)-3,4-雙((Z)-十八碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物4)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例4中所得之化合物VI-4(455 mg，0.655 mmol)而獲得化合物4(333 mg，84.1%)。
ESI-MS m/z：605(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.5 Hz,6H),1.26-1.35(m,38H),1.50-1.58(m,11H),2.01(q,J=6.5 Hz,8H),2.82(dd,J=12.4,3.0 Hz,2H),3.09(dd,J=12.4,5.0 Hz,2H),3.43(td,J=6.5,1.3 Hz,4H),3.76(dd,J=5.0,3.0 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例5] (3R,4R)-3,4-雙(十四烷氧基)吡咯啶(化合物5)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例5中所得之化合物VI-5(454 mg，0.775 mmol)而獲得化合物5(331 mg，86.1%)。
ESI-MS m/z：497(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.34(m,41H),1.50-1.59(m,4H),1.66(br s,4H),2.82(dd,J=12.6,3.0 Hz,2H),3.09(dd,J=12.6,5.0 Hz,2H),3.40-3.46(m,4H),3.76(dd,J=5.0,3.0 Hz,2H)。
[實施例6] (3R,4R)-3,4-雙((Z)-十六碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物6)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例6中所得之化合物VI-6(208 mg，0.326 mmol)而獲得化合物6(160 mg，89.2%)。
ESI-MS m/z：549(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.36(m,34H),1.50-1.59(m,4H),1.82(br s,3H),2.01(q,J=6.2 Hz,8H),2.84(dd,J=12.5,3.0 Hz,2H),3.10(dd,J=12.5,5.0 Hz,2H),3.43(t,J=6.8 Hz,4H),3.77(dd,J=5.0,3.0 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例7] (3R,4R)-3,4-雙((Z)-十八碳-6-烯基氧基)吡咯啶(化合物7)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例7VI-7(171 mg，0.246 mmol)而獲得化合物7(123 mg，82.2%)。
ESI-MS m/z：605(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t, J=6.6 Hz,6H),1.26-1.38(m,40H),1.51-1.61(m,4H),1.64(s,5H),1.97-2.06(m,8H),2.82(dd,J=12.5,3.3 Hz,2H),3.09(dd,J=12.5,5.1 Hz,2H),3.41-3.46(m,4H),3.76(dd,J=4.6,3.3 Hz,2H),5.29-5.41(m,4H)。
[實施例8] (3R,4R)-3,4-雙((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基)吡咯啶(化合物8)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例8中所得之化合物VI-8(186 mg，0.249 mmol)而獲得化合物8(144 mg，87.5%)。
ESI-MS m/z：657(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.40(m,36H),1.50-1.59(m,4H),1.64(s,5H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.75-2.85(m,6H),3.09(dd,J=12.5,5.0 Hz,2H),3.43(td,J=6.7,1.3 Hz,4H),3.76(dd,J=5.0,2.9 Hz,2H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例9] (3R,4R)-吡咯啶-3,4-二基二((Z)-十八碳-9-烯酸酯)(化合物9)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例9中所得之化合物VI-9(1.79 g，2.48 mmol)而獲得化合物9(965 mg，61.6%)。
ESI-MS m/z：633(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.36(m,38H),1.56-1.64(m,7H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.30(t,J=7.6 Hz,4H),2.87(dd,J=13.1, 2.8 Hz,2H),3.32(dd,J=13.1,5.1 Hz,2H),5.09(dd,J=5.1,2.8 Hz,2H),5.28-5.41(m,4H)。
[實施例10] (3R,4R)-1-甲基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物10)
將實施例1中所得之化合物1(4.00 g，6.67 mmol)溶解於1,2-二氯乙烷(50 mL)、甲醇(50 mL)中，加入甲醛(4.96 mL，66.7 mmol)、三乙醯氧基硼氫化鈉(Acros Organics公司製造、7.06 g，33.3 mmol)並於室溫下進行1小時之攪拌。於反應混合物中加入三乙醯氧基硼氫化鈉(Acros Organics公司製造、7.06 g，33.3 mmol)並於室溫下進一步進行2.5小時之攪拌。於反應溶液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由飽和氯化鈉水溶液對有機層進行清洗，藉由無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~95/5)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物10(3.99 g，97.4%)。
ESI-MS m/z：615(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.30-1.41(m,30H),1.52-1.62(m,4H),1.70(br s,2H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.31(s,3H),2.47(dd,J=9.9,4.0 Hz,2H),2.75-2.86(m,6H),3.36-3.49(m,4H),3.81(dd,J=5.5,4.5 Hz,2H),5.28-5.44(m,8H)。
[實施例11] (3R,4S)-1-甲基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基) 吡咯啶(化合物11)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例3中所得之化合物3(194 mg，0.323 mmol)而獲得化合物11(129 mg，64.6%)。
ESI-MS m/z：615(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.30-1.40(m,28H),1.54-1.62(m,4H),1.76(br s,4H),2.05(q,J=5.9 Hz,8H),2.38(s,3H),2.46-2.51(m,2H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.06-3.11(m,2H),3.39-3.55(m,4H),3.90(t,J=3.8 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例12] (3R,4R)-1-甲基-3,4-雙((Z)-十八碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物12)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例4中所得之化合物4(100 mg，0.166 mmol)而獲得化合物12(81.0 mg，79.4%)。
ESI-MS m/z：619(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.23-1.35(m,44H),1.52-1.61(m,4H),2.01(q,J=5.8 Hz,8H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=9.8,4.4 Hz,2H),2.82(dd,J=9.8,5.8 Hz,2H),3.37-3.48(m,4H),3.81(t,J=4.4 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例13] (3R,4R)-1-甲基-3,4-雙(十四烷氧基)吡咯啶(化合物13)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例5中所得之化合物5(74.0 mg，0.149 mmol)而獲得化合物13(73.6 mg， 96.8%)。
ESI-MS m/z：511(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.35(m,44H),1.52-1.61(m,4H),2.31(s,3H),2.47(dd,J=9.8,4.2 Hz,2H),2.83(dd,J=9.8,5.5 Hz,2H),3.37-3.48(m,4H),3.81(dd,J=5.5,4.2 Hz,2H)。
[實施例14] (3R,4R)-3,4-雙((Z)-十六碳-9-烯基氧基)-1-甲基吡咯啶(化合物14)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例6中所得之化合物6(107 mg，0.195 mmol)而獲得化合物14(107 mg，97.4%)。
ESI-MS m/z：563(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.38(m,34H),1.52-1.62(m,4H),1.67(br s,2H),2.01(q,J=6.1 Hz,8H),2.32(s,3H),2.47(dd,J=9.8,4.4 Hz,2H),2.83(dd,J=9.8,5.8 Hz,2H),3.36-3.49(m,4H),3.81(t,J=4.4 Hz,2H),5.29-5.41(m,4H)。
[實施例15] (3R,4R)-1-甲基-3,4-雙((Z)-十八碳-6-烯基氧基)吡咯啶(化合物15)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例7中所得之化合物7(80.0 mg，0.132 mmol)而獲得化合物14(75.3 mg，91.8%)。
ESI-MS m/z：619(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.41(m,44H),1.53-1.63(m,4H), 1.97-2.06(m,8H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=9.6,4.2 Hz,2H),2.82(dd,J=9.6,5.6 Hz,2H),3.36-3.49(m,4H),3.81(dd,J=5.6,4.2 Hz,2H),5.28-5.41(m,4H)。
[實施例16] (3R,4R)-3,4-雙((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基)-1-甲基吡咯啶(化合物16)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例8中所得之化合物8(90.0 mg，0.137 mmol)而獲得化合物16(87.4 mg，95.0%)。
ESI-MS m/z：671(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.41(m,40H),1.52-1.61(m,4H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=10.0,4.5 Hz,2H),2.77(t,J=5.7 Hz,4H),2.82(dd,J=10.0,5.7 Hz,2H),3.36-3.49(m,4H),3.81(t,J=4.5 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例17] (3R,4R)-1-乙基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物17)
將實施例1中所得之化合物1(70.0 mg，0.117 mmol)溶解於乙醇(2 mL)中，加入碳酸鉀(32.2 mg，0.233 mmol)、碘乙烷(0.0104 mL，0.128 mmol)並於室溫下進行2天之攪拌。於減壓下對反應溶液進行濃縮，藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~96/4)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物17(33.3 mg，45.4%)。
ESI-MS m/z：629(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9 Hz,6H),1.11(t,J=6.8 Hz,2H),1.30-1.38(m,29H),1.55(br s,10H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.53(br s,2H),2.77(t,J=5.6 Hz,4H),2.88(br s,2H),3.44(t,J=6.6 Hz,4H),3.83(t,J=4.6 Hz,2H),5.28-5.44(m,8H)。
[實施例18] (3R,4R)-1-乙基-3,4-雙((Z)-十八碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物18)
藉由與實施例17同樣之方法，使用實施例4中所得之化合物4(40.0 mg，0.066 mmol)而獲得化合物18(13.4 mg，32.0%)。
ESI-MS m/z：633(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.08(t,J=7.1 Hz,3H),1.23-1.35(m,44H),1.52-1.59(m,4H),2.01(q,J=6.2 Hz,8H),2.37-2.52(m,4H),2.84(dd,J=9.5,6.2 Hz,2H),3.41-3.45(m,4H),3.81(t,J=4.9 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例19] (3R,4R)-1,1-二甲基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶鎓氯化物(化合物19)
於實施例10中所得之化合物10(24.6 mg，0.0401 mmol)中加入碘甲烷(1 mL)並於室溫下進行4小時之攪拌。於減壓下對反應液進行濃縮，將殘渣載置於陰離子交換樹脂(Dowex 1x-200氯化物型(陶氏化學(The Dow Chemical Company)公司製造)、0.5 mL、藉由水與甲醇而進行了預 清洗者)上，藉由甲醇進行溶出。於減壓下對溶出液進行濃縮，藉由矽膠管柱層析法(甲醇/氯仿=0/100~25/75)對殘渣進行純化，藉此獲得化合物19(24.9 mg，93.5%)。
ESI-MS m/z：629 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.29(s,32H),1.50-1.57(m,4H),1.58(s,4H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.44-3.57(m,4H),3.67(s,6H),3.86(dd,J=13.4,3.8 Hz,2H),4.04-4.13(m,4H),5.29-5.42(m,8H)。
[實施例20] (3R,4R)-1,1-二甲基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基)吡咯啶鎓氯化物(化合物20)
藉由與實施例19同樣之方法，使用參考例30中所得之化合物A-3(1.16 g，1.81 mmol)而獲得化合物20(1.21 g，96.4%)。
ESI-MS m/z：657 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.29-1.38(m,26H),1.57-1.67(m,4H),1.78(s,2H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.39(t,J=7.6 Hz,4H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.78(s,6H),4.15(dd,J=14.0,3.0 Hz,2H),4.38(dd,J=14.0,5.8 Hz,2H),5.27-5.46(m,10H)。
[實施例21] (3R,4S)-1,1-二甲基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶鎓氯化物(化合物21)
藉由與實施例19同樣之方法，使用實施例11中所得之化合物11(76.0 mg，0.124 mmol)而獲得化合物21(62.8 mg， 76.6%)。
ESI-MS m/z：629 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.7 Hz,6H),1.23-1.41(m,30H),1.52-1.61(m,4H),1.93-2.17(m,2H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.41(s,3H),3.47-3.64(m,9H),4.43-4.50(m,2H),4.58(br s,2H),5.28-5.44(m,8H)。
[實施例22] (3R,4R)-1,1-二甲基-3,4-雙((Z)-十八碳-9-烯基氧基)吡咯啶鎓氯化物(化合物22)
將實施例4中所得之化合物4(135 mg，0.223 mmol)溶解於甲醇(2 mL)中，加入碳酸鉀(154 mg，1.12 mmol)、碘甲烷(0.699 mL，11.2 mmol)並於室溫下進行徹夜攪拌。於減壓下對反應溶液進行濃縮，將殘渣載置於陰離子交換樹脂(Dowex 1x-200氯化物型(陶氏化學(The Dow Chemical Company)公司製造)、1 mL、藉由水與甲醇進行了預清洗者)上，藉由甲醇進行溶出。於減壓下對溶出液進行濃縮，藉由矽膠管柱層析法(甲醇/氯仿=0/100~70/30)對殘渣進行純化，藉此獲得化合物22(27.8 mg，18.6%)。
ESI-MS m/z：633 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.36(m,40H),1.50-1.59(m,4H),1.62(s,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),3.44-3.58(m,4H),3.66(s,6H),3.86(dd,J=13.2,4.0 Hz,2H),4.02-4.13(m,4H),5.29-5.41(m,4H)。
[實施例23] (3R,4R)-1,1-二甲基-3,4-雙((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)吡咯啶鎓氯化物(化合物23)
藉由與實施例19同樣之方法，使用參考例31中所得之化合物A-4(430 mg，0.666 mmol)而獲得化合物23(442 mg，95.2%)。
ESI-MS m/z：661 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.35(m,38H),1.58-1.67(m,4H),1.76(br s,2H),2.01(q,J=5.1 Hz,8H),2.38(t,J=7.5 Hz,4H),3.78(s,6H),4.15(dd,J=13.6,2.6 Hz,2H),4.37(dd,J=13.6,5.7 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H),5.43-5.46(m,2H)。
[實施例24] 3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1,2-二醇(化合物24)
將實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)溶解於1-丙醇(1 mL)中，加入縮水甘油(0.111 mL，1.67 mmol)而進行微波照射(300 W，100℃，2小時)。於反應溶液中加入水，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~87/13)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物24(30.4 mg，27.1%)。
ESI-MS m/z：675(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9 Hz,3.0H),0.93(t,J=7.3 Hz,3.0H),1.26-1.38(m,22.0H),1.51-1.67(m,8.0H),2.05(q,J=6.4 Hz,8.0H),2.33-2.42(m,1.0H),2.54(dd,J=10.2,4.3 Hz,1.0H),2.66-2.90(m,7.0H),3.04(dd,J=9.9,5.9 Hz,1.0H),3.40-3.58 (m,9.5H),3.63-3.88(m,7.5H),5.28-5.44(m,8.0H)。
[實施例25] (3R,4R)-1-(2-(二甲基胺基)乙醯基)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物25)
將實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)溶解於氯仿(2 mL)中，加入N,N-二甲基甘胺酸鹽酸鹽(東京化成工業公司製造、46.5 mg，0.333 mmol)、二異丙基乙基胺(0.146 mL，0.833 mmol)、(苯并三唑-1-基氧基)三(N-吡咯啶基)鏻六氟磷酸鹽(渡邊化學工業公司製造、217 mg，0.417 mmol)，於室溫下進行1.5小時之攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由氯仿對水層進行萃取。藉由飽和氯化鈉水溶液對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~95/5)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物25(98.9 mg，86.8%)。
ESI-MS m/z：686(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.29-1.41(m,32H),1.49-1.57(m,4H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.31(s,6H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.06(s,2H),3.37-3.70(m,8H),3.84-3.91(m,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例26] (3R,4R)-1-(2-(二甲基胺基)乙醯基)吡咯啶-3,4-二基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸酯)(化合物26)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例2中所得之化 合物2(300 mg，0.478 mmol)及N,N-二甲基甘胺酸鹽酸鹽(東京化成工業公司製造、133 mg，0.955 mmol)而獲得化合物26(297 mg，87.2%)。
ESI-MS m/z：714(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.29-1.40(m,28H),1.56-1.64(m,4H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.27-2.35(m,10H),2.77(t,J=5.7 Hz,4H),3.06(s,2H),3.66-3.91(m,4H),5.18(d,J=4.0 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例27] (3R,4R)-1-(2-(二甲基胺基)乙醯基)吡咯啶-3,4-二基二((Z)-十八碳-9-烯酸酯)(化合物27)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例9中所得之化合物9(200 mg，0.316 mmol)及N,N-二甲基甘胺酸鹽酸鹽(東京化成工業公司製造、88 mg，0.633 mmol)而獲得化合物27(210 mg，92.5%)。
ESI-MS m/z：718(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.56-1.64(m,4H),2.01(q,J=6.2 Hz,8H),2.27-2.34(m,10H),3.06(s,2H),3.66-3.91(m,4H),5.18(d,J=3.7 Hz,2H),5.34(tt,J=11.2,4.6 Hz,4H)。
[實施例28] (3R,4R)-1-(3-(二甲基胺基)丙醯基)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物28)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例1中所得之化 合物1(63.0 mg，0.105 mmol)及3-(二甲基胺基)丙酸(MATRIX Scientific公司製造、24.6 mg，0.210 mmol)而獲得化合物28(43.2 mg，58.8%)。
ESI-MS m/z：700(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.28-1.38(m,32H),1.48-1.57(m,4H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.75-2.85(m,6H),2.95(s,6H),3.42-3.53(m,8H),3.59-3.66(m,2H),3.86-3.95(m,2H),5.28-5.44(m,8H)。
[實施例29] (3R,4R)-1-(3-(二甲基胺基)丙醯基)吡咯啶-3,4-二基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸酯)(化合物29)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例2中所得之化合物2(60.0 mg，0.096 mmol)及3-(二甲基胺基)丙酸(MATRIX Scientific公司製造、22.4 mg，0.191 mmol)而獲得化合物29(57.6 mg，82.9%)。
ESI-MS m/z：728(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0 Hz,6H),1.26-1.40(m,28H),1.55-1.63(m,4H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.27-2.34(m,10H),2.44(t,J=7.4 Hz,2H),2.68(t,J=7.4 Hz,2H),2.77(t,J=5.7 Hz,4H),3.55(d,J=12.1 Hz,1H),3.64-3.78(m,2H),3.82(dd,J=12.1,4.0 Hz,1H),5.18(d,J=4.0 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例30] (3R,4R)-1-(3-(二甲基胺基)丙醯基)吡咯啶-3,4-二基二((Z)-十八碳-9-烯酸酯)(化合物30)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例9中所得之化合物9(200 mg，0.316 mmol)及3-(二甲基胺基)丙酸(MATRIX Scientific公司製造、74.1 mg，0.633 mmol)而獲得化合物35(209 mg，90.3%)。
ESI-MS m/z：732(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,38H),1.56-1.65(m,4H),1.74(br s,2H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.28-2.34(m,10H),2.46(t,J=7.3 Hz,2H),2.72(t,J=7.3 Hz,2H),3.55(d,J=12.1 Hz,1H),3.67-3.85(m,3H),5.19(d,J=3.7 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例31] (3R,4R)-1-((S)-2,6-二胺基己醯基)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物31)
將Nε-(第三丁氧基羰基)-Nα-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸(東京化成工業公司製造、125 mg，0.267 mmol)、(苯并三唑-1-基氧基)三(N-吡咯啶基)鏻六氟磷酸鹽(渡邊化學工業公司製造、146 mg，0.280 mmol)溶解於氯仿(1 mL)中，於室溫下進行1小時之攪拌。於反應溶液中加入實施例1中所得之化合物1(80.0 mg，0.133 mmol)之氯仿(2 mL)溶液，於室溫下進行7小時之攪拌。於反應混合物中加入Nε-(第三丁氧基羰基)-Nα-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸(東京化成工業公司製造、187 mg，0.400 mmol)、(苯并三唑-1-基氧基)三(N-吡咯啶基)鏻六氟磷酸鹽(渡邊化學工業公司製造、222 mg，0.427 mmol)並於室 溫下進行徹夜攪拌。於反應混合物中加入Nε-(第三丁氧基羰基)-Nα-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸(東京化成工業公司製造、156 mg，0.333 mmol)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(Aldrich公司製造、152 mg，0.400 mmol)並於室溫下徹夜攪拌，於80℃下攪拌3小時。冷卻至室溫後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由飽和氯化鈉水溶液對有機層加以清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由使所得之殘渣通過矽膠墊，獲得(5S)-5-(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基胺基)-6-(3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)-6-側氧基己基胺基甲酸第三丁酯之粗產物。
將所得之粗產物溶解於二氯甲烷(2 mL)中，加入三氟乙酸(0.103 mL，1.33 mmol)並於室溫下進行4小時之攪拌。於反應混合物中加入三氟乙酸(0.205 mL，2.67 mmol)並於室溫下進行4.5小時之攪拌。於反應溶液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由氯仿對水層進行萃取。藉由飽和氯化鈉水溶液對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~87/13)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得(2S)-6-胺基-1-(3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)-1-側氧基己烷-2-基胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(66.1 mg，2個步驟中為52.2%)。
將所得之(2S)-6-胺基-1-(3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12- 二烯基氧基)吡咯啶-1-基)-1-側氧基己烷-2-基胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(65 mg，0.068 mmol)溶解於四氫呋喃(2 mL)中，加入吡咯啶(0.5 mL)並於室溫下進行5小時之攪拌。於減壓下對反應混合物進行濃縮，藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~60/40)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物31(24.0 mg，48.2%)。
ESI-MS m/z：729(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9 Hz,6H),1.26-1.38(m,32H),1.50-1.74(m,10H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.01(br s,2H),3.32-3.72(m,8H),3.86(br s,2H),3.93(br s,1H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例32] N-甲基-N,N-雙(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)乙基)胺(化合物32)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、119 mg，0.999 mmol)及(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、861 mg，2.50 mmol)而獲得化合物32(68.3 mg，11.1%)。
ESI-MS m/z：617(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9 Hz,6H),1.29(br s,32H),1.50-1.61(m,4H),2.00-2.09(m,8H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.1 Hz,4H),2.77(t,J=5.6 Hz,4H),3.41(t,J=6.8 Hz,4H),3.52(t,J=6.1 Hz,4H),5.27-5.44(m,8H)。
[實施例33] N-甲基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物33)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、119 mg，0.999 mmol)及(Z)-十八碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、865 mg，2.50 mmol)而獲得化合物33(156 mg，25.2%)。
ESI-MS m/z：621(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.25-1.34(m,44H),1.51-1.60(m,4H),1.97-2.04(m,8H),2.33(s,3H),2.63(t,J=6.1 Hz,4H),3.41(t,J=6.8 Hz,4H),3.52(t,J=6.1 Hz,4H),5.28-5.40(m,4H)。
[實施例34] N-甲基-N,N-雙(2-(十四烷氧基)乙基)胺(化合物34)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、119 mg，0.999 mmol)及甲磺酸十四烷基酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、731 mg，2.50 mmol)而獲得化合物34(99.3 mg，0.194 mmol)。
ESI-MS m/z：513(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.26(br s,44H),1.51-1.60(m,4H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.1 Hz,4H),3.41(t,J=6.8 Hz,4H),3.52(t,J=5.9 Hz,4H)。
[實施例35] N-甲基-N,N-雙(2-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物35)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、82.6 mg，0.693 mmol)及(Z)-十六碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、530 mg，1.66 mmol)而獲得化合物35(199 mg，50.9%)。
ESI-MS m/z：565(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.29(br s,36H),1.51-1.56(m,4H),1.97-2.04(m,8H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.1 Hz,4H),3.41(t,J=6.8 Hz,4H),3.52(t,J=6.1 Hz,4H),5.28-5.40(m,4H)。
[實施例36] N-甲基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-6-烯基氧基)乙基)胺(化合物36)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、66.3 mg，0.557 mmol)及(Z)-十八碳-6-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、463 mg，1.34 mmol)而獲得化合物36(205 mg，59.4%)。
ESI-MS m/z：621(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.24-1.37(m,44H),1.52-1.63(m,4H),1.97-2.06(m,8H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.1 Hz,4H),3.41(t,J=6.6 Hz,4H),3.52(t,J=6.1 Hz,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例37] N-甲基-N,N-雙(2-(十八烷氧基)乙基)胺(化合物37)
藉由與參考例5同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、179 mg，1.50 mmol)及1-溴十八烷(東 京化成工業公司製造、1.20 g，3.60 mmol)而獲得化合物37(218 mg，23.3%)。
ESI-MS m/z：625(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26(s,60H),1.51-1.60(m,4H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.1 Hz,4H),3.41(t,J=6.6 Hz,4H),3.52(t,J=6.1 Hz,4H)。
[實施例38] (3R,4R)-3,4-雙(十六烷氧基)吡咯啶(化合物38)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例11中所得之化合物VI-11(288 mg，0.449 mmol)而獲得化合物38(210 mg，84.8%)。
ESI-MS m/z：553(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.34(m,50H),1.50-1.59(m,4H),1.66-1.68(m,3H),2.82(dd,J=12.5,3.0 Hz,2H),3.09(dd,J=12.5,5.0 Hz,2H),3.43(td,J=6.6,0.7 Hz,4H),3.76(dd,J=5.0,3.0 Hz,2H)。
[實施例39] (3R,4R)-3,4-雙(十八烷氧基)吡咯啶(化合物39)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例12中所得之化合物VI-12(290 mg，0.415 mmol)而獲得化合物39(209 mg，82.6%)。
ESI-MS m/z：609(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.34(m,58H),1.50-1.59(m,4H),1.64(br s,3H),2.82(dd,J=12.3,3.1 Hz,2H),3.09(dd,J=12.3, 5.0 Hz,2H),3.43(t,J=6.6 Hz,4H),3.77(dd,J=5.0,3.1 Hz,2H)。
[實施例40] (3R,4R)-3,4-雙((Z)-十四碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物40)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例13中所得之化合物VI-13(100 mg，0.172 mmol)而獲得化合物40(71.4 mg，84.0%)。
ESI-MS m/z：492(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.87-0.92(m,6H),1.29-1.35(m,26H),1.50-1.59(m,4H),1.64(br s,3H),2.02(q,J=5.9 Hz,8H),2.82(dd,J=12.5,2.9 Hz,2H),3.09(dd,J=12.5,4.9 Hz,2H),3.37-3.49(m,4H),3.76(dd,J=4.9,2.9 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例41] (3R,4R)-3,4-雙((Z)-十八碳-11-烯基氧基)吡咯啶(化合物41)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例14中所得之化合物VI-14(220 mg，0.317 mmol)而獲得化合物41(157 mg，82.0%)。
ESI-MS m/z：605(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.37(m,42H),1.50-1.59(m,4H),1.87(br s,2H),2.01(q,J=6.1 Hz,8H),2.83(dd,J=12.5,2.9 Hz,2H),3.10(dd,J=12.5,5.0 Hz,2H),3.43(t,J=6.8 Hz,4H),3.77(dd,J=5.0,2.9 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例42] (3R,4R)-3,4-雙((Z)-二十碳-11-烯基氧基)吡咯啶(化合物42)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例15中所得之化合物VI-15(225 mg，0.300 mmol)而獲得化合物42(168 mg，84.6%)。
ESI-MS m/z：661(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.36(m,50H),1.50-1.59(m,4H),1.78(br s,2H),2.01(q,J=6.2 Hz,8H),2.82(dd,J=12.5,2.9 Hz,2H),3.09(dd,J=12.5,5.0 Hz,2H),3.43(td,J=6.7,0.9 Hz,4H),3.76(dd,J=5.0,2.9 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例43] (3S,4S)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物43)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例10中所得之化合物VI-10(929 mg，1.35 mmol)而獲得化合物43(728 mg，90.1%)。
ESI-MS m/z：601(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9 Hz,6H),1.30-1.41(m,30H),1.50-1.60(m,4H),1.65(br s,3H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.75-2.85(m,6H),3.09(dd,J=12.5,5.3 Hz,2H),3.43(t,J=6.6 Hz,4H),3.75-3.78(m,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例44] 反式-3,4-雙(((Z)-十六碳-9-烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物44)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例17中所得之化合物VI-16(335 mg，0.503 mmol)而獲得化合物44(260 mg，89.7%)。
ESI-MS m/z：577(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.29-1.35(m,36H),1.50-1.59(m,4H),1.96-2.07(m,10H),2.70(dd,J=11.1,5.7 Hz,2H),3.06(dd,J=11.1,7.3 Hz,2H),3.28-3.46(m,8H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例45] (3R,4R)-3,4-雙(十六烷氧基)-1-甲基吡咯啶(化合物45)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例38中所得之化合物38(175 mg，0.317 mmol)而獲得化合物45(182 mg)。
ESI-MS m/z：567(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.35(m,52H),1.52-1.61(m,4H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=9.6,4.3 Hz,2H),2.82(dd,J=9.6,5.5 Hz,2H),3.37-3.48(m,4H),3.81(dd,J=5.5,4.3 Hz,2H)。
[實施例46] (3R,4R)-1-甲基-3,4-雙(十八烷氧基)吡咯啶(化合物46)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例39中所得之化合物39(174 mg，0.286 mmol)而獲得化合物46(169 mg，95.0%)。
ESI-MS m/z：623(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.35(m,60H),1.52-1.61(m,4H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=9.9,4.3 Hz,2H),2.82(dd,J=9.9,5.6 Hz,2H),3.37-3.48(m,4H),3.81(dd,J=5.6,4.3 Hz,2H)。
[實施例47] (3R,4R)-1-甲基-3,4-雙((Z)-十四碳-9-烯基氧基)吡咯啶(化合物47)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例40中所得之化合物40(55 mg，0.112 mmol)而獲得化合物47(53.4 mg，93.6%)。
ESI-MS m/z：507(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.87-0.92(m,6H),1.26-1.35(m,28H),1.52-1.61(m,4H),1.98-2.05(m,8H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=9.9,4.2 Hz,2H),2.82(dd,J=9.9,5.6 Hz,2H),3.37-3.48(m,4H),3.81(dd,J=5.6,4.2 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例48] (3R,4R)-1-甲基-3,4-雙((Z)-十八碳-11-烯基氧基)吡咯啶(化合物48)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例41中所得之化合物41(130 mg，0.215 mmol)而獲得化合物48(125 mg，94.3%)。
ESI-MS m/z：619(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.36(m,44H),1.52-1.61(m,4H),2.01(q,J=6.1 Hz,8H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=9.9,4.0 Hz,2H),2.82(dd,J=9.9,5.9 Hz,2H),3.37-3.48(m,4H),3.81(t,J=4.9 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例49] (3R,4R)-3,4-雙((Z)-二十碳-11-烯基氧基)-1-甲基吡咯啶(化合物49)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例42中所得之化合物42(141 mg，0.214 mmol)而獲得化合物49(132 mg，91.7%)。
ESI-MS m/z：675(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.36(m,52H),1.52-1.61(m,4H),2.01(q,J=6.1 Hz,8H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=10.0,4.2 Hz,2H),2.82(dd,J=10.0,5.9 Hz,2H),3.37-3.48(m,4H),3.81(t,J=4.8 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例50] (3S,4S)-1-甲基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物50)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例43中所得之化合物43(325 mg，0.542 mmol)而獲得化合物50(330 mg，99.2%)。
ESI-MS m/z：615(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.7 Hz,6H),1.29-1.38(m,30H),1.51-1.62(m,4H),1.71(br s,2H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.31(s,3H),2.46(dd,J=10.0,4.5 Hz,2H),2.75-2.86(m,6H),3.36-3.49(m,4H),3.81(t,J=4.5 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例51] 反式-3,4-雙(((Z)-十六碳-9-烯基氧基)甲基)-1-甲基吡咯啶(化合物51)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例44中所得之化合物44(175 mg，0.304 mmol)而獲得化合物51(174 mg， 97.1%)。
ESI-MS m/z：591(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.35(m,36H),1.50-1.59(m,4H),1.98-2.11(m,10H),2.33(s,3H),2.39(dd,J=9.2,5.3 Hz,2H),2.67(dd,J=9.2,7.3 Hz,2H),3.31-3.45(m,8H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例52] (3S,4S)-1,1-二甲基-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶鎓氯化物(化合物52)
藉由與實施例19同樣之方法，使用實施例50中所得之化合物50(125 mg，0.204 mmol)而獲得化合物52(135 mg，99.8%)。
ESI-MS m/z：629 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.7 Hz,6H),1.29-1.38(m,30H),1.50-1.59(m,4H),1.72(br s,2H),2.05(q,J=6.5 Hz,8H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.43-3.57(m,4H),3.68(s,6H),3.87(dd,J=13.2,3.6 Hz,2H),4.03-4.13(m,4H),5.28-5.44(m,8H)。
[實施例53] (3R,4R)-1-(2,3-二羥基丙基)吡咯啶-3,4-二基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-烯酸酯)(化合物53)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例2中所得之化合物2(100 mg，0.159 mmol)、DL-2,3-二羥基丙醛(Aldrich公司製造、143 mg，1.59 mmol)而獲得化合物53(95.4 mg，85.2%)。
ESI-MS m/z：703(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.25-1.40(m,28H),1.56-1.66(m,4H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.31(t,J=7.5 Hz,4H),2.39-2.48(m,1H),2.56(dd,J=10.8,3.8 Hz,1H),2.67-2.85(m,6H),3.09(dd,J=10.3,5.9 Hz,1H),3.24(dd,J=10.3,5.9 Hz,1H),3.50-3.56(m,1H),3.72-3.80(m,2H),5.11(dd,J=8.8,5.1 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例54] 1-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-醇(化合物54)
藉由與實施例24同樣之方法，使用實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)、1,2-環氧丙烷(0.023 mL，0.333 mmol)而獲得化合物54(94.7 mg，86.1%)。
ESI-MS m/z：659(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.12(d,J=6.2 Hz,3H),1.26-1.40(m,28H),1.52-1.61(m,8H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.22-2.30(m,1H),2.41-2.52(m,2H),2.67(dd,J=10.1,4.6 Hz,1H),2.75-2.85(m,5H),3.03(dd,J=9.5,5.9 Hz,1H),3.38-3.49(m,4H),3.73-3.85(m,3H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例55] 1-(3R,4R)-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)-3-甲氧基丙烷-2-醇(化合物55)
藉由與實施例24同樣之方法，使用實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)、2-(甲氧基甲基)環氧乙烷 (0.035 mL，0.333 mmol)而獲得化合物55(92.9 mg，80.8%)。
ESI-MS m/z：689(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.30-1.38(m,28H),1.52-1.60(m,8H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.33-2.43(m,1H),2.50-2.56(m,1H),2.59-2.68(m,2H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),2.86(dd,J=9.7,6.0 Hz,1H),3.01(dd,J=9.7,6.0 Hz,1H),3.33-3.49(m,9H),3.79-3.87(m,3H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例56] 3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1-醇(化合物56)
將實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)溶解於乙醇(2 mL)中，加入丙烯酸乙酯(0.181 mL，1.67 mmol)、乙醇鈉(5.7 mg，0.083 mmol)，於加熱回流下進行5.5小時之攪拌。將反應溶液冷卻後，於減壓下將溶劑蒸餾除去，藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~97/3)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙酸乙酯(107 mg，91.2%)。
將所得之3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙酸乙酯(220 mg，0.314 mmol)溶解於THF(4 mL)中，於-78℃下加入1.0 mol/L之二異丁基氫化鋁甲苯溶液(0.943 mL，0.943 mmol)。一面自-78℃緩緩升溫至0℃一面進行2小時之攪拌，於反應混合物中加入飽和 氯化銨水溶液。藉由乙酸乙酯對水層進行萃取，藉由飽和食鹽水對有機層進行清洗，以硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/3~93/7)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物56(113 mg，54.5%)。
ESI-MS m/z：659(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(dd,J=7.5,6.0 Hz,6H),1.26-1.40(m,32H),1.50-1.59(m,4H),1.66-1.73(m,2H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.56-2.79(m,8H),2.90(dd,J=9.7,5.7 Hz,2H),3.41(t,J=6.6 Hz,4H),3.76-3.81(m,4H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例57] 3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙醯胺(化合物57)
將實施例56中所得之3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙酸乙酯(180 mg，0.257 mmol)溶解於乙醇(2 mL)中，加入2 mol/L之氫氧化鈉水溶液(2 mL)，於室溫下進行2小時之攪拌。於反應溶液中加入1 mol/L之鹽酸水溶液而使pH值成為4，然後藉由氯仿對水層進行萃取。以無水硫酸鎂對有機層加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮，藉此獲得3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙酸(148 mg，85.8%)。
將所得之3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙酸(64 mg，0.095 mmol)溶解於氯仿 (2 mL)中，加入O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU、Aldrich公司製造、72 mg，0.190 mmol)、二異丙基乙基胺(0.083 mL，0.476 mmol)、2 mol/L之氨甲醇溶液(0.238 mL，0.476 mmol)，於室溫下進行徹夜攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由水、飽和食鹽水對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~90/10)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物57(46.1 mg，72.1%)。
ESI-MS m/z：672(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.40(m,32H),1.51-1.60(m,4H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.39(t,J=6.0 Hz,2H),2.56(dd,J=9.7,4.2 Hz,2H),2.63-2.80(m,6H),2.90(dd,J=9.7,5.9 Hz,2H),3.37-3.49(m,4H),3.81(t,J=4.2 Hz,2H),5.24(br s,1H),5.28-5.43(m,8H),8.07(br s,1H)。
[實施例58] 3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基丙醯胺(化合物58)
將實施例57中所得之3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙酸(63 mg，0.094 mmol)溶解於氯仿(2 mL)中，加入O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU、Aldrich公司製造、71 mg，0.187 mmol)、2 mol/L之二甲基胺THF溶液 (0.234 mL，0.469 mmol)、二異丙基乙基胺(0.082 mL，0.469 mmol)，於室溫下進行徹夜攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由水、飽和食鹽水對有機層加以清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~95/5)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物58(60.7 mg，92.6%)。
ESI-MS m/z：700(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0 Hz,6H),1.26-1.40(m,32H),1.52-1.61(m,4H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.51-2.56(m,4H),2.70-2.83(m,6H),2.87-2.95(m,2H),2.93(s,3H),3.00(s,3H),3.37-3.49(m,4H),3.81(t,J=4.8 Hz,2H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例59] (3R,4R)-1-(3-N,N-二甲基胺基丙基)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物59)
將實施例56中所得之化合物56(110 mg，0.167 mmol)溶解於二氯甲烷(3 mL)中，加入三乙胺(0.082 mL，0.585 mmol)、甲磺酸酐(58 mg，0.334 mmol)，於室溫下進行4小時之攪拌。藉由水、飽和食鹽水對反應溶液進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮而獲得3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)丙基甲磺酸酯之粗產物。
將所得之粗產物溶解於THF(1 mL)中，加入2.0 mol/L之二甲基胺THF溶液(0.835 mL，1.67 mmol)而進行微波照射 (300 W，100℃，1小時)。對反應溶液進行濃縮，藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~75/25)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物59(96.6 mg，84.4%)。
ESI-MS m/z：686(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.40(m,32H),1.52-1.62(m,4H),1.63-1.76(m,2H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.23(s,6H),2.29-2.52(m,6H),2.75-2.87(m,6H),3.37-3.49(m,4H),3.81(t,J=4.8 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例60] 4-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)-1-甲基哌啶(化合物60)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)、1-甲基哌啶-4-酮(Aldrich公司製造、0.205 mL，1.67 mmol)而獲得化合物60(72.0 mg，62.0%)。
ESI-MS m/z：698(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.29-1.40(m,32H),1.52-1.62(m,6H),1.77-1.83(m,2H),1.89-2.08(m,11H),2.24(s,3H),2.53(dd,J=9.6,4.7 Hz,2H),2.75-2.85(m,6H),2.92(dd,J=9.6,6.2 Hz,2H),3.37-3.49(m,4H),3.81(t,J=4.7 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例61] (3R,4R)-1-(2-胺基乙醯基)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物61)
將實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)溶解於氯仿(2 mL)中，加入N-(第三丁氧基羰基)甘胺酸(東京化成工業公司製造、55 mg，0.250 mmol)、二異丙基乙基胺(0.146 mL，0.833 mmol)、HATU(O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽)(Aldrich公司製造、127 mg，0.333 mmol)並於室溫下進行4小時之攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由水、飽和食鹽水對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~97/3)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得2-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基胺基甲酸第三丁酯。
將所得之2-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基胺基甲酸第三丁酯溶解於二氯甲烷(2 mL)中，加入三氟乙酸(0.256 mL，3.33 mmol)並於室溫下進行1.5小時之攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由氯仿對水層進行萃取。藉由飽和食鹽水對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~85/15)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物61(60.5 mg，55.3%)。
ESI-MS m/z：658(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.28-1.40(m,32H),1.49-1.58(m,6H),2.05 (q,J=6.6 Hz,8H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.30-3.56(m,9H),3.69(d,J=12.5 Hz,1H),3.86(d,J=4.8 Hz,1H),3.92(d,J=3.7 Hz,1H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例62] (3R,4R)-1-(3-胺基丙醯基)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物62)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例1中所得之化合物1(96 mg，0.160 mmol)、N-(第三丁氧基羰基)-β-丙胺酸(東京化成工業公司製造、45 mg，0.240 mmol)而獲得化合物62(52.5 mg，49.1%)。
ESI-MS m/z：672(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0 Hz,6H),1.26-1.38(m,32H),1.49-1.57(m,4H),1.88(br s,2H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.43(td,J=6.0,1.5 Hz,2H),2.77(t,J=6.0 Hz,4H),3.03(t,J=6.0 Hz,2H),3.37-3.67(m,8H),3.85-3.91(m,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例63] (3R,4R)-1-((S)-2,5-二胺基戊醯基)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物63)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)、(S)-2,5-雙(第三丁氧羰基胺基)戊酸(渡邊化學工業公司製造、83 mg，0.250 mmol)而獲得化合物63(70.5 mg，59.4%)。
ESI-MS m/z：715(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0 Hz,6H),1.29-1.68(m,40H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H), 2.69-2.79(m,6H),3.37-3.56(m,7H),3.64-3.69(m,2H),3.85-3.92(m,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例64] (3R,4R)-1-(6-胺基己醯基)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯啶(化合物64)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例1中所得之化合物1(100 mg，0.167 mmol)、6-(第三丁氧羰基胺基)己酸(渡邊化學工業公司製造、58 mg，0.250 mmol)而獲得化合物64(85.5 mg，71.7%)。
ESI-MS m/z：714(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.71(m,42H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.25(t,J=7.5 Hz,2H),2.70-2.79(m,6H),3.37-3.65(m,8H),3.84-3.90(m,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例65] (3R,4R)-1-(2-胺基乙醯基)吡咯啶-3,4-二基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-烯酸酯)(化合物65)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例2中所得之化合物2(100 mg，0.159 mmol)、N-(第三丁氧基羰基)甘胺酸(東京化成工業公司製造、41.8 mg，0.239 mmol)而獲得化合物65(73.4 mg，67.3%)。
ESI-MS m/z：686(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.40(m,28H),1.56-1.65(m,4H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.27-2.34(m,4H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.38-3.53(m,3H),3.68-3.81(m,3H),5.20(br s,2H), 5.28-5.43(m,8H)。
[實施例66] (3R,4R)-1-((S)-2,6-二胺基己醯基)吡咯啶-3,4-二基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-烯酸酯)(化合物66)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例2中所得之化合物2(100 mg，0.159 mmol)、(S)-2,6-雙(第三丁氧羰基胺基)己酸(渡邊化學工業公司製造、87 mg，0.239 mmol)而獲得化合物66(73.0 mg，60.7%)。
ESI-MS m/z：757(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.65(m,38H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.28-2.34(m,4H),2.70(t,J=6.1 Hz,2H),2.77(t,J=6.1 Hz,4H),3.43(dd,J=7.3,4.8 Hz,1H),3.54(d,J=11.9 Hz,1H),3.74(br s,2H),3.88(dd,J=11.9,4.0 Hz,1H),5.20-5.21(m,2H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例67] 雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物67)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例19中所得之化合物VI-17(243 mg，0.349 mmol)而獲得化合物67(212 mg，69.5%)。
ESI-MS m/z：607(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.25-1.35(m,44H),1.54-1.59(m,4H),1.65(s,1H),1.98-2.05(m,8H),2.80(t,J=5.3 Hz,4H),3.42(t,J=6.8 Hz,4H),3.53(t,J=5.3 Hz,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例68] 雙(2-((Z)-十四碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物68)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例20中所得之化合物VI-18(402 mg，0.688 mmol)而獲得化合物68(291 mg，85.6%)。
ESI-MS m/z：494(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.90(t,J=7.1 Hz,6H),1.29(br s,28H),1.53-1.62(m,4H),1.97-2.06(m,9H),2.81(t,J=5.3 Hz,4H),3.42(t,J=6.7 Hz,4H),3.53(t,J=5.4 Hz,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例69] 雙(2-(十四烷氧基)乙基)胺(化合物69)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例21中所得之化合物VI-19(150 mg，0.255 mmol)而獲得化合物69(79.2 mg，62.4%)。
ESI-MS m/z：499(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26(br s,44H),1.52-1.60(m,4H),1.89(br s,1H),2.81(t,J=5.4 Hz,4H),3.43(t,J=6.7 Hz,4H),3.54(t,J=5.3 Hz,4H)。
[實施例70] 雙(2-(十六烷氧基)乙基)胺(化合物70)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例22中所得之化合物VI-20(389 mg，0.604 mmol)而獲得化合物70(244 mg，72.9%)。
ESI-MS m/z：555(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26(br s,52H),1.52-1.61(m,4H),1.91(br s,1H),2.82(t,J=5.4 Hz,4H),3.43(t,J=6.7 Hz,4H),3.54(t,J=5.4 Hz,4H)。
[實施例71] 雙(2-(十八烷氧基)乙基)胺(化合物71)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例23中所得之化合物VI-21(399 mg，0.570 mmol)而獲得化合物71(151 mg，43.4%)。
ESI-MS m/z：611(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.7 Hz,6H),1.25(br s,60H),1.51-1.60(m,4H),2.08(br s,1H),2.84(t,J=5.3 Hz,4H),3.43(t,J=6.6 Hz,4H),3.55(t,J=5.4 Hz,4H)。
[實施例72] 雙(2-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物72)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例24中所得之化合物VI-22(700 mg，1.09 mmol)而獲得化合物72(516 mg，85.9%)。
ESI-MS m/z：550(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.35(m,36H),1.52-1.63(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.80(t,J=5.3 Hz,4H),3.42(t,J=6.6 Hz,4H),3.53(t,J=5.3 Hz,4H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例73] N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)胺(化合物73)
將雙(2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(Aldrich公司製造、600 mg，2.92 mmol)溶解於二氯甲烷(30 mL)中，加入油酸 (東京化成工業公司製造、1.82 g，6.43 mmol)與1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽(1.29 g，6.72 mmol)與4-二甲基胺基吡啶(89 mg，0.731 mmol)並於室溫下進行徹夜攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由飽和食鹽水對有機層進行清洗，以硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(己烷/氯仿=50/50~0/100)對所得之殘渣進行純化，獲得N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(1.26 g，58.7%)。
將所得之N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(1.22 g，1.66 mmol)溶解於二氯甲烷(30 mL)中，加入三氟乙酸(2.56 mL，33.2 mmol)並於室溫下進行3.5小時之攪拌。於反應溶液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由氯仿對水層進行萃取。藉由飽和食鹽水對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~96/4)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物73(998 mg，94.6%)。
ESI-MS m/z：635(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.58-1.67(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.32(t,J=7.7 Hz,4H),2.89(t,J=5.5 Hz,4H),4.18(t,J=5.5 Hz,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例74] N,N-雙(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基)乙基)胺(化 合物74)
藉由與實施例73同樣之方法，使用雙(2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(Aldrich公司製造、415 mg，2.02 mmol)、亞麻油酸(Aldrich公司製造、1.25 g，4.45 mmol)而獲得化合物74(494 mg，82.6%)。
ESI-MS m/z：631(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.7 Hz,6H),1.31(br s,28H),1.54(br s,1H),1.58-1.66(m,4H),2.00-2.09(m,8H),2.32(t,J=7.6 Hz,4H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),2.89(t,J=5.4 Hz,4H),4.17(t,J=5.6 Hz,4H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例75] N-甲基-N,N-雙(2-((Z)-十四碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物75)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、25.0 mg，0.210 mmol)及(Z)-十四碳-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、152 mg，0.524 mmol)而獲得化合物75(25.5 mg，23.9%)。
ESI-MS m/z：509(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.90(t,J=7.1 Hz,6H),1.25-1.37(m,28H),1.51-1.62(m,4H),1.98-2.06(m,8H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.1 Hz,4H),3.41(t,J=6.7 Hz,4H),3.52(t,J=6.1 Hz,4H),5.29-5.41(m,4H)。
[實施例76] N,N-雙(2-(十六烷氧基)乙基)-N-甲基胺(化合物76)
藉由與參考例5同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、60.0 mg，0.504 mmol)及甲磺酸十六烷基酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、403 mg，1.26 mmol)而獲得化合物76(135 mg，47.2%)。
ESI-MS m/z：569(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.26(br s,52H),1.52-1.61(m,4H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.0 Hz,4H),3.41(t,J=6.8 Hz,4H),3.52(t,J=6.0 Hz,4H)。
[實施例77] N-甲基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-11-烯基氧基)乙基)胺(化合物77)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、80 mg，0.671 mmol)及(Z)-十八碳-11-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、582 mg，1.68 mmol)而獲得化合物77(198 mg，47.5%)。
ESI-MS m/z：621(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.35(m,44H),1.56(dd,J=16.9,10.3 Hz,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.0 Hz,4H),3.41(t,J=6.8 Hz,4H),3.52(t,J=6.0 Hz,4H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例78] N,N-雙(2-((Z)-二十碳-11-烯基氧基)乙基)-N-甲基胺(化合物78)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京 化成工業公司製造、64.1 mg，0.538 mmol)及(Z)-二十碳-11-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、504 mg，1.35 mmol)而獲得化合物78(164 mg，45.1%)。
ESI-MS m/z：677(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.7 Hz,6H),1.27(br s,52H),1.50-1.61(m,4H),1.96-2.06(m,8H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.1 Hz,4H),3.41(t,J=6.7 Hz,4H),3.52(t,J=6.1 Hz,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例79] N,N-雙(2-((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基)乙基)-N-甲基胺(化合物79)
藉由與參考例1同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、58.0 mg，0.487 mmol)及(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc製造、453 mg，1.22 mmol)而獲得化合物79(204 mg，62.4%)。
ESI-MS m/z：673(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.7 Hz,6H),1.29(br s,40H),1.51-1.60(m,4H),2.01-2.09(m,8H),2.33(s,3H),2.64(t,J=6.1 Hz,4H),2.77(t,J=5.6 Hz,4H),3.41(t,J=6.7 Hz,4H),3.52(t,J=6.1 Hz,4H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例80] N,N-二甲基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)氯化銨(化合物80)
藉由與實施例22同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(104 mg，0.172 mmol)而獲得化合物80(114 mg， 99.0%)。
ESI-MS m/z：635 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.51-1.60(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),3.44(s,6H),3.46(t,J=6.6 Hz,4H),3.87-3.91(m,4H),3.97-4.01(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例81] N,N-二甲基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)氯化銨(化合物81)
藉由與實施例22同樣之方法，使用實施例73中所得之化合物73(100 mg，0.158 mmol)而獲得化合物81(86.9 mg，79.0%)。
ESI-MS m/z：663 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.35(m,40H),1.56-1.65(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.35(t,J=7.7 Hz,4H),3.53(s,6H),4.12-4.15(m,4H),4.58-4.62(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例82] 3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺基)丙烷-1,2-二醇(化合物82)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(150 mg，0.247 mmol)、DL-2,3-二羥基丙醛(Aldrich公司製造、223 mg，2.48 mmol)而獲得化合物82(24.2 mg，14.4%)。
ESI-MS m/z：681(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.36(m,44H),1.52-1.61(m,4H),2.01 (q,J=5.9 Hz,8H),2.67-2.69(m,2H),2.73-2.88(m,4H),3.41(t,J=6.8 Hz,4H),3.45-3.54(m,5H),3.64-3.74(m,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例83] 3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)胺基)丙烷-1,2-二醇(化合物83)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例73中所得之化合物73(150 mg，0.246 mmol)、DL-2,3-二羥基丙醛(Aldrich公司製造、222 mg，2.46 mmol)而獲得化合物83(42.2 mg，24.2%)。
ESI-MS m/z：709(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.56-1.66(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.31(t,J=7.5 Hz,4H),2.59-2.72(m,2H),2.76-2.93(m,4H),3.45-3.52(m,1H),3.66-3.78(m,2H),4.09-4.21(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例84] 3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺基)丙醯胺(化合物84)
將實施例67中所得之化合物67(400 mg，0.660 mmol)溶解於乙醇(8 mL)中，加入丙烯酸乙酯(3.59 mL，33.0 mmol)、乙醇鈉(22.5 mg，0.330 mmol)並於加熱回流下進行徹夜攪拌。將反應溶液冷卻後於減壓下將溶劑蒸餾除去，藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~98/2)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧 基)乙基)胺基)丙酸乙酯(399 mg，85.6%)。
將所得之3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺基)丙酸乙酯(200 mg，0.283 mmol)溶解於乙醇(4 mL)中，加入2 mol/L之氫氧化鈉水溶液(3 mL)並於室溫下進行6小時之攪拌。於反應溶液中加入1 mol/L之鹽酸水溶液而使pH值成為6之後，藉由氯仿對水層進行萃取。藉由無水硫酸鎂將有機層乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮，藉此獲得3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺基)丙酸(188 mg，98.0%)。
將所得之3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺基)丙酸(85 mg，0.125 mmol)溶解於氯仿(3 mL)中，加入O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU、Aldrich公司製造、95 mg，0.251 mmol)、7 mol/L之氨之甲醇溶液(0.090 mL，0.627 mmol)、二異丙基乙基胺(0.109 mL，0.627 mmol)並於室溫下進行徹夜攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由水、飽和食鹽水對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~88/12)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物84(72.3 mg，85.0%)。
ESI-MS m/z：678(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.48-1.57(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.36(t,J=5.7 Hz,2H),2.72-2.80(m,6H),3.39(t,J=6.8 Hz,4H),3.48(t,J=5.7 Hz,4H),5.18(br s,1H),5.29-5.40(m,4H),8.22(br s,1H)。
[實施例85] 3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺基)-N,N-二甲基丙醯胺(化合物85)
將實施例84中之3-(雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺基)丙酸(80 mg，0.118 mmol)溶解於氯仿(3 mL)中，加入O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU、Aldrich公司製造、90 mg，0.236 mmol)、2 mol/L之二甲基胺THF溶液(0.295 mL，0.590 mmol)、二異丙基乙基胺(0.103 mL，0.590 mmol)，於室溫下進行徹夜攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由乙酸乙酯對水層進行萃取。藉由水、飽和食鹽水對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~94/6)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物85(71.1 mg，85.6%)。
ESI-MS m/z：706(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.51-1.59(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.56(br s,2H),2.79-2.96(m,6H),2.94(s,3H),3.02(s,3H),3.41(t,J=6.8 Hz,4H),3.53(br s,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例86] 2-胺基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)乙醯胺(化合物86)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(100 mg，0.165 mmol)、N-(第三丁氧基羰基)甘胺酸(東京化成工業公司製造、43 mg，0.247 mmol)而獲得化合物86(83.0 mg，76.1%)。
ESI-MS m/z：664(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.49-1.57(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),3.39(td,J=6.6,2.2 Hz,4H),3.48-3.51(m,4H),3.53(s,2H),3.56(s,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例87] 3-胺基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)丙醯胺(化合物87)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(100 mg，0.165 mmol)、N-(第三丁氧基羰基)-β-丙胺酸(東京化成工業公司製造、47 mg，0.247 mmol)而獲得化合物87(84.2 mg，75.2%)。
ESI-MS m/z：678(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.49-1.58(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.55(t,J=6.0 Hz,2H),2.99(t,J=6.0 Hz,2H),3.39(t,J=6.8 Hz,4H),3.51-3.57(m,8H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例88] 6-胺基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)己醯胺(化合物88)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例67中所得之化 合物67(100 mg，0.165 mmol)、6-(第三丁氧羰基胺基)己酸(渡邊化學工業公司製造、57 mg，0.247 mmol)而獲得化合物88(87.8 mg，74.1%)。
ESI-MS m/z：720(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.38(m,44H),1.41-1.56(m,8H),1.60-1.70(m,2H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.39(t,J=7.5 Hz,2H),2.69(t,J=6.8 Hz,2H),3.39(t,J=6.4 Hz,4H),3.49-3.56(m,8H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例89] 2-(二甲基胺基)-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)乙醯胺(化合物89)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(100 mg，0.165 mmol)及N,N-二甲基甘胺酸鹽酸鹽(東京化成工業公司製造、26 mg，0.247 mmol)而獲得化合物89(92.1 mg，80.8%)。
ESI-MS m/z：692(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.49-1.58(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.29(s,6H),3.20(s,2H),3.39(t,J=6.6 Hz,4H),3.50-3.57(m,6H),3.68(t,J=5.5 Hz,2H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例90] 3-(二甲基胺基)-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)丙醯胺(化合物90)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例67中所得之化 合物67(100 mg，0.165 mmol)、3-(二甲基胺基)丙酸(MATRIX Scientific公司製造、29 mg，0.247 mmol)而獲得化合物90(53.7 mg，46.2%)。
ESI-MS m/z：706(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.49-1.58(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.26(s,6H),2.55-2.68(m,4H),3.39(t,J=6.6 Hz,4H),3.50-3.59(m,8H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例91] (S)-2-胺基-3-羥基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)丙醯胺(化合物91)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(100 mg，0.165 mmol)、(S)-2-(第三丁氧羰基胺基)-3-羥基丙酸(渡邊化學工業公司製造、51 mg，0.247 mmol)而獲得化合物91(31.0 mg，27.1%)。
ESI-MS m/z：694(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.49-1.58(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),3.37-3.45(m,5H),3.49-3.77(m,9H),3.92(dd,J=6.4,4.9 Hz,1H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例92] (S)-2,3-二胺基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)丙醯胺(化合物92)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(100 mg，0.165 mmol)、(S)-2,3-雙(第三丁氧羰基胺基)丙酸二環己胺鹽(渡邊化學工業公司製造、120 mg， 0.247 mmol)而獲得化合物92(91.3 mg，80.1%)。
ESI-MS m/z：693(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.28-1.35(m,44H),1.50-1.58(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.70(dd,J=12.6,7.3 Hz,1H),2.86(dd,J=12.6,5.1 Hz,1H),3.32-3.43(m,5H),3.47-3.58(m,5H),3.71-3.81(m,3H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例93] (S)-2,5-二胺基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)戊醯胺(化合物93)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(100 mg，0.165 mmol)、(S)-2,5-雙(第三丁氧羰基胺基)戊酸(渡邊化學工業公司製造、82 mg，0.247 mmol)而獲得化合物93(57.5 mg，48.3%)。
ESI-MS m/z：721(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.43-1.70(m,8H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.68-2.73(m,2H),3.29-3.57(m,10H),3.65-3.81(m,3H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例94] (S)-2,6-二胺基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)己醯胺(化合物94)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例67中所得之化合物67(100 mg，0.165 mmol)、(S)-2,6-雙(第三丁氧羰基胺基)己酸(渡邊化學工業公司製造、90 mg，0.247 mmol)而獲得化合物94(55.7 mg，46.0%)。
ESI-MS m/z：735(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.38(m,46H),1.41-1.62(m,8H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.69(t,J=6.6 Hz,2H),3.28-3.57(m,10H),3.65-3.82(m,3H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例95] 2-胺基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)乙醯胺(化合物95)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例73中所得之化合物73(100 mg，0.158 mmol)、N-(第三丁氧基羰基)甘胺酸(東京化成工業公司製造、41.4 mg，0.237 mmol)而獲得化合物95(72.8 mg，66.7%)。
ESI-MS m/z：692(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.55-1.64(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.30(td,J=7.7,2.6 Hz,4H),3.51(s,2H),3.53(t,J=7.0 Hz,2H),3.63(t,J=5.7 Hz,2H),4.17-4.25(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例96] 2-胺基-N,N-雙(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基)乙基)乙醯胺(化合物96)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例74中所得之化合物74(100 mg，0.159 mmol)而獲得化合物96(36.3 mg，33.3%)。
ESI-MS m/z：688(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.30(br s,28H),1.55-1.65(m,4H),2.01- 2.08(m,8H),2.27-2.34(m,4H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.50-3.66(m,6H),4.16-4.27(m,4H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例97] (S)-2,6-二胺基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)己醯胺(化合物97)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例73中所得之化合物73(100 mg，0.158 mmol)、(S)-2,6-雙(第三丁氧羰基胺基)己酸(渡邊化學工業公司製造、86 mg，0.237 mmol)而獲得化合物97(49.1 mg，40.8%)。
ESI-MS m/z：763(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.65(m,50H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.27-2.33(m,4H),2.70(t,J=6.2 Hz,2H),3.37-3.56(m,2H),3.64-3.87(m,3H),4.18-4.24(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例98] 2-(二甲基胺基)-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)乙醯胺(化合物98)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例73中所得之化合物73(105 mg，0.166 mmol)及N,N-二甲基甘胺酸鹽酸鹽(東京化成工業公司製造、25.6 mg，0.248 mmol)而獲得化合物98(72.1 mg，60.5%)。
ESI-MS m/z：720(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.34(m,40H),1.57-1.64(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.27-2.35(m,10H),3.15(s,2H),3.61(t, J=5.9 Hz,2H),3.78(t,J=5.9 Hz,2H),4.22(q,J=5.5 Hz,4H),5.30-5.39(m,4H)。
[實施例99] 3-(二甲基胺基)-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)乙基)丙醯胺(化合物99)
藉由與實施例25同樣之方法，使用實施例73中所得之化合物73(100 mg，0.158 mmol)、3-(二甲基胺基)丙酸(MATRIX Scientific公司製造、36.2 mg，0.309 mmol)而獲得化合物99(25.3 mg，21.9%)。
ESI-MS m/z：734(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.56-1.63(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.27-2.33(m,10H),2.52-2.68(m,4H),3.59-3.64(m,4H),4.18-4.23(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例100] (S)-2,6-二胺基-N,N-雙(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基)乙基)己醯胺(化合物100)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例74中所得之化合物74(100 mg，0.159 mmol)、(S)-2,6-雙(第三丁氧羰基胺基)己酸(渡邊化學工業公司製造、87 mg，0.238 mmol)而獲得化合物100(85.1 mg，70.8%)。
ESI-MS m/z：759(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.65(m,38H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.30(td,J=7.4,6.0 Hz,4H),2.70(t,J=6.4 Hz,2H),2.77(t,J=5.7 Hz,4H),3.37-3.57(m,2H),3.64-3.87(m,3H),4.21 (q,J=5.7 Hz,4H),5.28-5.44(m,8H)。
[實施例101] 反式-3,4-雙(((Z)-十八碳-9-烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物101)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例25中所得之化合物VI-23(357 mg，0.494 mmol)而獲得化合物101(252 mg，80.6%)。
ESI-MS m/z：633(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.35(m,44H),1.50-1.59(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,10H),2.69(dd,J=11.3,5.5 Hz,2H),3.06(dd,J=11.3,7.1 Hz,2H),3.28-3.46(m,8H),5.30-5.40(m,4H)。
[實施例102] 反式-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物102)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例26中所得之化合物VI-24(382 mg，0.532 mmol)而獲得化合物102(276 mg，82.7%)。
ESI-MS m/z：629(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.29-1.40(m,32H),1.50-1.59(m,4H),1.97-2.08(m,10H),2.69(dd,J=11.2,5.7 Hz,2H),2.77(t,J=6.0 Hz,4H),3.06(dd,J=11.2,7.1 Hz,2H),3.28-3.46(m,8H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例103] 反式-3,4-雙(((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物103)
藉由與實施例1同樣之方法，使用參考例27中所得之化合物VI-25(420 mg，0.542 mmol)而獲得化合物103(316 mg，85.2%)。
ESI-MS m/z：685(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.40(m,40H),1.50-1.59(m,4H),1.97-2.08(m,10H),2.69(dd,J=11.1,5.8 Hz,2H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.06(dd,J=11.1,7.3 Hz,2H),3.28-3.46(m,8H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例104] 反式-3,4-雙(((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)甲基)吡咯啶(化合物104)
將參考例28中所得之化合物XIII-1(278 mg，0.366 mmol)溶解於二氯甲烷(6 mL)中，加入三氟乙酸(0.563 mL，7.31 mmol)並於室溫下進行3小時之攪拌。於反應混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，藉由氯仿對水層進行萃取。藉由飽和食鹽水對有機層進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。將所得之殘渣溶解於少量之甲醇中，使其吸附於填充於塑膠管柱中之BONDESIL-SCX(VARIAN公司製造、6 g)之上部，藉由甲醇進行清洗，其次藉由氨之甲醇溶液(東京化成工業公司製造、2 mol/L)使目標物溶出。將包含目標物之組份於減壓下進行濃縮，藉此獲得化合物104(162 mg，67.2%)。
ESI-MS m/z：661(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.56-1.64(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.09-2.16(m,2H),2.30(t,J=7.5 Hz,4H),2.72(dd,J=11.3,5.5 Hz,2H),3.11(dd,J=11.3,7.1 Hz,2H),3.99-4.12(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例105] 反式-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基)甲基)吡咯啶(化合物105)
藉由與實施例104同樣之方法，使用參考例29中所得之化合物XIII-2(350 mg，0.463 mmol)而獲得化合物105(224 mg，73.6%)。
ESI-MS m/z：657(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.40(m,28H),1.57-1.66(m,4H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.09-2.17(m,2H),2.31(t,J=7.5 Hz,4H),2.72(dd,J=11.3,6.0 Hz,2H),2.77(t,J=6.2 Hz,4H),3.11(dd,J=11.3,7.3 Hz,2H),3.99-4.13(m,4H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例106] 反式-1-甲基-3,4-雙(((Z)-十八碳-9-烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物106)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例101中所得之化合物101(107 mg，0.169 mmol)而獲得化合物106(87.3 mg，79.9%)。
ESI-MS m/z：647(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t, J=6.8 Hz,6H),1.27-1.36(m,44H),1.50-1.59(m,4H),1.98-2.09(m,10H),2.31(s,3H),2.36(dd,J=9.2,5.3 Hz,2H),2.64(dd,J=9.2,7.0 Hz,2H),3.30-3.45(m,8H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例107] 反式-1-甲基-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物107)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例102中所得之化合物102(123 mg，0.196 mmol)而獲得化合物107(109 mg，86.7%)。
ESI-MS m/z：643(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.26-1.40(m,32H),1.50-1.60(m,4H),2.05(q,J=6.6 Hz,10H),2.31(s,3H),2.36(dd,J=9.2,5.5 Hz,2H),2.64(dd,J=9.2,7.0 Hz,2H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),3.30-3.45(m,8H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例108] 反式-3,4-雙(((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基)甲基)-1甲基吡咯啶(化合物108)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例103中所得之化合物103(165 mg，0.241 mmol)而獲得化合物108(145 mg，85.9%)。
ESI-MS m/z：699(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.40(m,40H),1.50-1.60(m,4H),2.05(q,J=6.2 Hz,10H),2.31(s,3H),2.36(dd,J=9.2,5.8 Hz, 2H),2.64(dd,J=9.2,7.3 Hz,2H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.31-3.45(m,8H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例109] 反式-1-甲基-3,4-雙(((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)甲基)吡咯啶(化合物109)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例104中所得之化合物104(50 mg，0.076 mmol)而獲得化合物109(47 mg，92%)。
ESI-MS m/z：675(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.26-1.35(m,40H),1.56-1.65(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.15-2.24(m,2H),2.27-2.37(m,9H),2.67(dd,J=9.3,7.1 Hz,2H),3.99-4.12(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例110] 反式-1-甲基-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基)甲基)吡咯啶(化合物110)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例105中所得之化合物105(80 mg，0.12 mmol)而獲得化合物110(66 mg，81%)。
ESI-MS m/z：671(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.25-1.40(m,28H),1.57-1.66(m,4H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.13-2.24(m,2H),2.27-2.37(m,9H),2.66(dd,J=9.2,7.3 Hz,2H),2.77(t,J=5.7 Hz,4H),3.99-4.12(m,4H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例111] 反式-1,1-二甲基-3,4-雙(((Z)-十八碳-9-烯基氧基)甲基)吡咯啶鎓氯化物(化合物111)
藉由與實施例22同樣之方法，使用實施例101中所得之化合物101(90.0 mg，0.142 mmol)而獲得化合物111(85.9 mg，86.6%)。
ESI-MS m/z：661 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.37(m,44H),1.50-1.58(m,4H),2.01(q,J=5.9 Hz,8H),2.82-2.87(m,2H),3.43(t,J=6.6 Hz,4H),3.48(s,6H),3.49-3.56(m,4H),3.75(dd,J=11.6,8.2 Hz,2H),4.10(dd,J=11.6,8.1 Hz,2H),5.29-5.41(m,4H)。
[實施例112] 反式-1,1-二甲基-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)吡咯啶鎓氯化物(化合物112)
藉由與實施例22同樣之方法，使用實施例102中所得之化合物102(100 mg，0.159 mmol)而獲得化合物112(107 mg，96.9%)。
ESI-MS m/z：657 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.29-1.40(m,32H),1.50-1.58(m,4H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),2.80-2.87(m,2H),3.43(t,J=6.6 Hz,4H),3.48(s,6H),3.49-3.56(m,4H),3.74(dd,J=11.6,8.1 Hz,2H),4.09(dd,J=11.6,8.1 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例113] 反式-1,1-二甲基-3,4-雙(((Z)-十八碳-9-烯醯氧基)甲基)吡咯啶鎓氯化物(化合物113)
藉由與實施例22同樣之方法，使用實施例104中所得之化合物104(77.0 mg，0.117 mmol)而獲得化合物113(69.5 mg，82.0%)。
ESI-MS m/z：689 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.56-1.65(m,4H),2.01(q,J=5.5 Hz,8H),2.33(t,J=7.5 Hz,4H),2.93(br s,2H),3.57(s,6H),3.86(dd,J=11.9,8.6 Hz,2H),4.19-4.27(m,6H),5.29-5.40(m,4H)。
[實施例114] 反式-1,1-二甲基-3,4-雙(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基)甲基)吡咯啶鎓氯化物(化合物114)
藉由與實施例22同樣之方法，使用實施例105中所得之化合物105(105 mg，0.160 mmol)而獲得化合物114(74.3 mg，64.4%)。
ESI-MS m/z：685 M+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0 Hz,6H),1.26-1.40(m,28H),1.57-1.65(m,4H),2.05(q,J=6.7 Hz,8H),2.33(t,J=7.7 Hz,4H),2.77(t,J=5.9 Hz,4H),2.93(br s,2H),3.56(s,6H),3.86(dd,J=12.1,8.4 Hz,2H),4.19-4.27(m,6H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例115] 反式-1-((S)-2,6-二胺基己醯基)-3,4-雙(((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基)甲基)吡咯啶(化合物115)
藉由與實施例61同樣之方法，使用實施例103中所得之化合物103(100 mg，0.146 mmol)、(S)-2,6-雙(第三丁氧羰基胺基)己酸(渡邊化學工業公司製造、80 mg，0.219 mmol)而獲得化合物115(72.6 mg，61.2%)。
ESI-MS m/z：813(M+H)+：1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0 Hz,6H),1.27-1.59(m,50H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.17-2.26(m,1H),2.35-2.43(m,1H),2.70(t,J=5.7 Hz,2H),2.77(t,J=6.0 Hz,4H),3.21-3.55(m,11H),3.58-3.80(m,2H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例116] 雙(2-((Z)-1-側氧基十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺基甲酸-3-(二甲基胺基)丙基酯(化合物116)
將實施例73中所得之化合物73(160 mg，0.252 mmol)溶解於氯仿(2.5 mL)中，加入藉由「美國化學會誌(J.Am.Chem.Soc.)」，1981年，第103卷，第4194~4199頁所記載之方法而合成之碳酸-3-(二甲基胺基)丙基4-硝基苯基酯鹽酸鹽(115 mg，0.379 mmol)及三乙胺(0.141 mL，1.01 mmol)，使用微波反應裝置而於110℃下進行30分鐘之加熱攪拌。於反應液中加入碳酸3-(二甲基胺基)丙基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(38.4 mg，0.126 mmol)，使用微波反應裝置而於110℃下進行30分鐘之加熱攪拌。藉由氯仿將反應液稀釋，以1 mol/L之氫氧化鈉水溶液進行3次清洗，繼而藉由飽和食鹽水進行清洗，以無水硫酸鎂加以乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。藉由矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇 =100/0~95/5)對所得之殘渣進行純化，藉此獲得化合物116(42.6 mg，22.1%)。
ESI-MS m/z：764(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.24-1.37(m,40H),1.54-1.65(m,4H),1.78-1.89(m,2H),1.97-2.05(m,8H),2.23(s,6H),2.25-2.38(m,6H),3.48-3.58(m,2H),3.62(q,J=5.2 Hz,2H),4.11-4.30(m,6H),5.28-5.41(m,4H)。
[實施例117] 雙(2-((9Z,12Z)-1-側氧基十八碳-9,12-二烯基氧基)乙基)胺基甲酸-3-(二甲基胺基)丙基酯(化合物117)
藉由與實施例116同樣之方法，使用實施例74中所得之化合物74(159 mg，0.252 mmol)而獲得化合物117(60.3 mg，31.5%)。
ESI-MS m/z：760(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9 Hz,6H),1.26-1.38(m,28H),1.58-1.69(m,4H),1.78-1.89(m,2H),2.00-2.09(m,8H),2.23(s,6H),2.26-2.38(m,6H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.48-3.57(m,2H),3.62(q,J=5.3 Hz,2H),4.12-4.30(m,6H),5.28-5.44(m,8H)。
化合物118~136可藉由與實施例1~117同樣之方法而獲得，或者可藉由與國際公開第2009/086558號說明書同樣之方法而獲得。
參考例30 (3R,4R)-1-甲基吡咯啶-3,4-二基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸酯)(化合物A-3)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例2中所得之化合物2(1.20 g，1.90 mmol)而獲得化合物A-3(1.17 g，95.4%)。
ESI-MS m/z：643(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0 Hz,6H),1.31-1.41(m,28H),1.56-1.66(m,4H),2.05(q,J=6.6 Hz,8H),2.29-2.35(m,7H),2.48(dd,J=10.3,4.2 Hz,2H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),3.04(dd,J=10.3,5.8 Hz,2H),5.11(dd,J=5.8,4.2 Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
參考例31 (3R,4R)-1-甲基吡咯啶-3,4-二基二((Z)-十八碳-9-烯酸酯)(化合物A-4)
藉由與實施例10同樣之方法，使用實施例9中所得之化合物9(500 mg，0.791 mmol)而獲得化合物A-4(481 mg，94.0%)。
ESI-MS m/z：647(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6 Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.56-1.66(m,4H),2.01(q,J=6.2 Hz,8H),2.32(t,J=7.7 Hz,4H),2.35(s,3H),2.48(dd,J=10.5,4.0 Hz,2H),3.04(dd,J=10.5,5.7 Hz,2H),5.10(dd,J=5.7,4.0 Hz,2H),5.29-5.40(m,4H)。
參考例32 N-甲基-N,N-雙(2-((9Z,12Z)-1-側氧基十八碳-9,12-二烯基氧基)乙基)胺(化合物A-5)
藉由與參考例2同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、119 mg，1.00 mmol)及亞麻油酸(Aldrich公司製造、617 mg，2.20 mmol)而獲得化合物A-5(348 mg，54.0%)。
ESI-MS m/z：645(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.27-1.38(m,28H),1.56-1.66(m,4H),2.00-2.09(m,8H),2.31(t,J=7.6 Hz,4H),2.35(s,3H),2.70(t,J=5.9 Hz,4H),2.77(t,J=5.8 Hz,4H),4.16(t,J=5.9 Hz,4H),5.28-5.42(m,8H)。
參考例33 N-甲基-N,N-雙(2-((Z)-1-側氧基十八碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物A-6)
藉由與參考例2同樣的方法，使用N-甲基二乙醇胺(東京化成工業公司製造、119 mg，1.00 mmol)及油酸(東京化成工業公司製造、621 mg，2.20 mmol)而獲得化合物A-6(333 mg，51.4%)。
ESI-MS m/z：649(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8 Hz,6H),1.25-1.36(m,40H),1.56-1.67(m,4H),1.97-2.04(m,8H),2.30(t,J=7.6 Hz,4H),2.35(s,3H),2.70(t,J=5.9 Hz,4H),4.16(t,J=5.9 Hz,4H),5.28-5.39(m,4H)。
其次，對本發明之組合物，藉由實施例及試驗例而加以具體說明。但本發明並不限定於該等實施例及試驗例。
[實施例118]
使用實施例1~117中所得之化合物而以如下方式製造製劑。所使用之核酸是包含正義鏈[5'-GmUCAmUCACACmUGAAmUACCAAmU-3'(鍵結於附有m之鹼基上的糖係經2'-O-甲基取代之核糖)]與反義鏈[5'-AUUGGUAUUCAGUGUGAUGACAC-3'(對5'末端進行有磷 酸化)]之鹼基序列的抑制脂蛋白元B(Apolipoprotein-B、以下表示為apo-b)基因表現之APO-B siRNA，分別自NIPPON EGT公司、GeneDesign Inc.、Invitrogen公司或者北海道先進科技有限公司(Hokkaido System Science Co.,Ltd.)獲得正義鏈及反義鏈，藉由使其退火而調製(以下稱為apo-b siRNA)。
以成為實施例1~117之各個中所得之化合物1~117/1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)鈉鹽(PEG-DMPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺鈉鹽、日油公司製造)/二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷膽鹼、日油公司製造)/膽固醇(Avanti Polar Lipids公司製造)=8.947/1.059/5.708/13.697 mmol/L之方式，稱量各試樣而使其溶解於90 vol%乙醇中，調製構成成分之溶液。另一方面，藉由Tris-EDTA緩衝液(200 mM Tris-HCl,20 mM EDTA、Invitrogen製造)及、20 mM檸檬酸緩衝液(pH 5.0)對apo-b siRNA/蒸餾水(24 mg/mL)進行稀釋，調製1.5 mg/mL之apo-b siRNA水溶液(2 mM Tris-EDTA緩衝液、20 mM檸檬酸緩衝液、pH值為5.0)。
將所得之脂質溶液加溫至37℃後，將100 μL移至製劑調製用容器中，於攪拌下加入所得之apo-b siRNA水溶液100 μL。於所得之脂質核酸混合懸浮液200 μL中，於攪拌下加入20 mM檸檬酸緩衝液(含有300 mM NaCl，pH值為6.0)200 μL，進一步滴加杜氏磷酸緩衝液(DPBS、 Invitrogen製造)662 μL而使siRNA濃度為10 μM，獲得製劑(含有化合物1~117及核酸之組合物)。
藉由粒徑測定裝置(Zetasizer Nano ZS、Malvern公司製造)而測定製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑。將結果示於表18中。
比較例1
將化合物1設為DOTAP(化合物A-1、Avanti Polar Lipids製造)，除此以外與實施例118同樣地進行而獲得製劑。該製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑為104.0 nm。
比較例2
將化合物1設為DLinDMA(化合物A-2)，除此以外與實施 例118同樣地進行而獲得製劑。再者，化合物A-2可依照國際公開第2005/121348號說明書中所記載之方法而合成。
該製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑為131.6 nm。
比較例3
使用參考例30之化合物A-3，與實施例118同樣地進行而獲得製劑。該製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑為141.0 nm。
比較例4
使用參考例31之化合物A-4，與實施例118同樣地進行而獲得製劑。該製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑為131.1 nm。
比較例5
使用參考例32之化合物A-5，與實施例118同樣地進行而獲得製劑。該製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑為136.4 nm。
比較例6
使用參考例33之化合物A-6，與實施例118同樣地進行而獲得製劑。該製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑為139.5 nm。
比較例7
使用參考例3之化合物VI-3，與實施例118同樣地進行而獲得製劑。該製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑為167.8 nm。
比較例8
使用參考例4之化合物VI-4，與實施例118同樣地進行而獲得製劑。該製劑中之陽離子性脂質/核酸複合物之平均粒徑為157.8 nm。
將比較例中所使用之化合物A-1~6及化合物VI-3~4之結構式示於表19中。
試驗例1
將實施例118中所得之各製劑(包含化合物1~115及核酸之組合物)及比較例1~8中所得之各製劑分別藉由以下方法而導入至源自人肝癌之細胞株HepG2細胞(HB-8065)中。
以核酸之最終濃度成為3~100 nM或者1~30 nM之方式藉由Opti-MEM(GIBCO公司、31985)進行了稀釋之各製劑， 以每次20 μL分注於96孔之培養板中，然後以成為細胞數6250/80 μL/孔之方式接種包含1.25%胎牛血清(FBS、SAFC Biosciences公司、12203C)之最小必需培養基(MEM)中所懸浮之HepG2細胞，於37℃、5% CO2之條件下進行培養，將各製劑導入至HepG2細胞內。又，接種並未進行任何處理之細胞作為隱形對照群。
將導入各製劑之細胞於37℃之5% CO2恆溫箱內進行24小時之培養，藉由冰冷之磷酸緩衝化生理食鹽水(PBS、GIBCO公司、14190)進行清洗，使用Cells-to-Ct Kit(應用生物科技(ABI)公司、AM1728)，依照產品所附隨之說明書中所記載之方法，進行全RNA之回收、與利用以所得之全RNA為模板之反轉錄反應之cDNA之製作。
將所得之cDNA作為模板，將通用探針庫(Universal Probe Library)(Roche Applied Science公司、04683633001)作為探針，使用ABI7900HT Fast(ABI公司製造)，依照所附隨之使用說明書中所記載之方法而進行PCR反應，由此使apo-b基因及作為構成的表現基因之甘油醛3-磷酸脫氫酶(D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、以下表示為gapdh)基因進行PCR反應而分別測定mRNA擴增量，將gapdh之mRNA擴增量作為內部對照而算出apo-b之mRNA之準定量值。又，同樣地分別測定陰性對照之群中的apo-b之mRNA量及gapdh之mRNA擴增量，將gapdh之mRNA擴增量作為內部對照而算出apo-b之mRNA之準定量值。
作為apo-b之mRNA之表現率(將陰性對照中之apo-b之 mRNA之準定量值設為1而求出所算出apo-b之mRNA之準定量值)之結果，於圖1~12中表示關於實施例118之結果，於圖13中表示關於比較例1~8之結果。再者，縱軸表示將陰性對照設為1之情形時之標靶基因之mRNA之表現率，橫軸表示核酸濃度(nM)、所使用之陽離子性脂質之化合物編號及實施例編號。
由圖1~12明確：將實施例118中所得之製劑(含有抑制apo-b基因之表現的APO-B siRNA與化合物1~115之各個的組合物)導入至源自人肝癌之細胞株HepG2細胞內之後的apo-b基因之mRNA之表現率受到抑制。另一方面，根據圖13明確：比較例3~8中所得之製劑(含有抑制apo-b基因之表現的APO-B siRNA與化合物A-3~6、VI-3及VI-4之各個的組合物)的導入至源自人肝癌之細胞株HepG2細胞內之後的apo-b基因之mRNA之表現率並未受到抑制。
因此，明確本發明之組合物可將核酸導入至細胞內等，且本發明之陽離子性脂質是可容易地導入至細胞內之新穎陽離子性脂質。
[實施例119]
以各個化合物成為4.474/4.474 mmol/L之方式稱量表20中所示之第1陽離子性脂質與第2陽離子性脂質作為陽離子性脂質，與實施例118同樣地製造製劑。
[實施例120]
使用實施例1~117中所得之化合物，以如下方式製造製劑。核酸與實施例118同樣地使用apo-b siRNA。
以成為實施例1~117之各個中所得之化合物1~117/1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)鈉鹽(PEG-DMPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺鈉鹽、日油公司製造)=57.26/5.521 mmol/L之方式使其懸浮於含有鹽酸及乙醇之水溶液中，藉由vortex攪拌混合機進行攪 拌，且反覆進行加溫(50℃)，從而獲得均勻之懸浮液。使該懸浮液於室溫下通過0.2 μm之聚碳酸酯薄膜過濾器31次，進而通過0.05 μm之聚碳酸酯薄膜過濾器41次，獲得引導粒子之分散液。藉由動態光散射儀(Dynamic light scattering，DLS)測定所得之各引導粒子之平均粒徑，確認其在30~110 nm之範圍內。於所得之引導粒子之分散液19.5 μL中加入apo-b siRNA/蒸餾水(24 mg/mL)6.5 μL而進行混合，進一步加入蒸餾水78 μL而進行混合，由此調製陽離子性脂質/核酸複合物粒子(含有陽離子性脂質之脂質體與核酸之複合物)之分散液。
另一方面，以成為實施例1~117之各個中所得之化合物1~117/1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)鈉鹽(PEG-DMPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺鈉鹽、日油公司製造)/二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷膽鹼、日油公司製造)/膽固醇(日油公司製造)8.947/1.059/5.708/13.697 mmol/L之方式稱量各試樣，使其溶解於90 vol%之乙醇中，調製脂質膜成分之溶液。將所得之脂質膜成分之溶液加溫至37℃後，將100 μL移至製劑調製用容器中，於攪拌下加入所得之陽離子性脂質/核酸複合物粒子之分散液100 μL，進而於攪拌下滴加蒸餾水800 μL，進而於攪拌下添加22.5%食鹽水41.6 μL而進行等張化後，添加20.4 μL之生理食鹽水，由此使siRNA濃度為10 μM，獲得製劑(含有化合物1~117及核酸之 組合物，該組合物含有複合物及封入該複合物之脂質膜，所述複合物是核酸與包含含有陽離子性脂質之脂質單層之膜(逆微胞)的複合物)。
[實施例121]
使用表20及21中所示之第1陽離子性脂質作為陽離子性脂質/核酸複合物粒子之陽離子性脂質，使用表20及21中所示之第2陽離子性脂質作為脂質膜成分之陽離子性脂質，與實施120同樣地製造製劑。又，使用表20及21中所示之第2陽離子性脂質作為陽離子性脂質/核酸複合物粒子之陽離子性脂質，使用表20及21中所示之第1陽離子性脂質作為脂質膜成分之陽離子性脂質，與實施120同樣地製造製劑。
試驗例2
與試驗例1同樣地將實施例120及121中所得之各製劑導入至源自人肝癌之細胞株HepG2細胞(HB-8065)中，確認apo-b之mRNA之表現率受到抑制，由此明確：於含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或者於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜的組合物中，本發明之陽離子性脂質是可容易地將核酸導入至細胞內之新穎的陽離子性脂質。
關於實施例120及121中所得之各製劑中的分別使用表22及23中所示之第1陽離子性脂質及第2陽離子性脂質作為陽離子性脂質/核酸複合物粒子之陽離子性脂質及脂質膜構 成成分之陽離子性脂質而所得的製劑，將根據試驗例2之測定結果而求出之apo-b之mRNA之表現率被抑制為50%的siRNA濃度之值(IC50)示於表22及23中。
因此，明確於含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或者於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜的組合物中，本發明之陽離子性脂質係可容易地將核酸導入至細胞內之新穎的陽離子性脂質。
又，明確製造雙鏈核酸與含有任意之陽離子性脂質、較佳為化合物(I)及/或本發明之化合物(I)以外之陽離子性脂質的脂質體之複合物，使該複合物並不溶解地分散於水或者0~20%乙醇水溶液中(A液)，另行使任意之陽離子性脂質、較佳為化合物(I)及/或本發明之化合物(I)以外之陽離子性脂質溶解於乙醇水溶液中(B液)，將A液與B液以1：1之體積比加以混合，進而適宜加入水，藉此而所得之含有該核酸與該陽離子性脂質之組合物可容易地將核酸導入至細胞內等。
[實施例122]
使用實施例1~117之各個中所得之化合物1~117以如下方式製造製劑。所使用之核酸是包含正義鏈[5'-mGmGAAGCUGGCGAUUAUGCAGAUUmUmA-3'(鍵結於附有m之鹼基上的糖係經2'-O-甲基取代之核糖)]與反義鏈[5'-UAAAUCUGCAUAAUCGCCAGCUUCC-3'(對5'末端進行有 磷酸化)]之鹼基序列的抑制CKAP5基因之表現的CKAP5 siRNA，分別自NIPPON EGT公司、GeneDesign Inc.、Invitrogen公司或者北海道先進科技有限公司獲得已退火之冷凍乾燥siRNA，藉由蒸餾水使其溶解而調製為24 mg/mL(以下稱為CKAP5 siRNA溶液)。
以成為實施例1~117之各個中所得之化合物1~117/1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)鈉鹽(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺鈉鹽、日油公司製造)=57.26/5.521 mmol/L之方式使其懸浮於含有鹽酸及乙醇之水溶液中，藉由vortex攪拌混合機反覆進行攪拌及加溫而獲得均勻之懸浮液。使該懸浮液於室溫下通過0.2 μm之聚碳酸酯薄膜過濾器及0.05 μm之聚碳酸酯薄膜過濾器而獲得引導粒子之分散液。藉由動態光散射儀(Dynamic light scattering，DLS)測定所得之引導粒子之平均粒徑，確認其在30~110 nm之範圍內。於所得之引導粒子之分散液中，以3：1之比例混合CKAP5siRNA溶液，進而加入3倍量之蒸餾水而進行混合，由此調製陽離子性脂質/核酸複合物粒子之分散液。
另一方面，以成為實施例1~117之各個中所得之化合物1~117/1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)鈉鹽(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺鈉鹽、日油公司製造)/二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC、1,2-二 硬脂醯基-sn-甘油-3-磷膽鹼、日油公司製造)/膽固醇(日油公司製造)=8.947/2.943/5.707/11.83 mmol/L之方式稱量各試樣而使其溶解於90 vol%之乙醇中，調製脂質膜構成成分之溶液。
對所得之脂質膜構成成分之溶液進行加溫後，將所得之陽離子性脂質/核酸複合物粒子之分散液以1：1之比例加以混合，進一步混合數倍量之蒸餾水而獲得粗製劑。
所得之粗製劑使用Amicon Ultra(Millipore公司製造)而進行濃縮，進而置換為生理食鹽水(生理鹽水)，使用0.2 μm之過濾器(東洋濾紙公司製造)而於清潔台內進行過濾。進而測定所得之製劑之siRNA濃度，以siRNA濃度成為1.0 mg/mL之方式使用生理鹽水進行稀釋。
[實施例123]
使用表20及21中所示之第1陽離子性脂質作為陽離子性脂質/核酸複合物粒子之陽離子性脂質，使用表20及21中所示之第2陽離子性脂質作為脂質膜成分之陽離子性脂質，與實施例120同樣地製造製劑。又，使用表20及21中所示之第2陽離子性脂質作為陽離子性脂質/核酸複合物粒子之陽離子性脂質，使用表20及21中所示之第1陽離子性脂質作為脂質膜成分之陽離子性脂質，與實施例120同樣地製造製劑。
試驗例3
對實施例122及123中所得之各製劑，分別藉由以下之方法而實施活體內mRNA弱化評價試驗，由此明確於含有本 發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或者於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜的組合物中，本發明之陽離子性脂質是可容易地將核酸導入至細胞內、特別是腫瘤之細胞內的新穎之陽離子性脂質。
作為源自人胰腺癌之細胞株的MIA PaCa-2係子JCRB細胞銀行而領取，於包含10%非活化胎牛血清(GIBCO公司製造)及1 vol%盤尼西林-鏈黴素(NACALAI TESQUE,INC.製造、26253-84)之高葡萄糖含量DMEM(GIBCO公司製造，11995-073)中，於37℃、5% CO2之條件下進行培養。以成為1×108 cells/mL之濃度之方式使MIA PaCa-2懸浮於PBS中，將該細胞懸浮液100 μL移植於SCID小鼠(自CLEA Japan,Inc.進貨)之背部皮下(1×107 cells/0.1 mL PBS/head)。於移植6天後，以腫瘤體積為指標進行分群而分為3隻一群，將實施例122及123中所得之製劑以10 mg/kg(10 mL/kg)靜脈內投予小鼠。使用生理食鹽水作為陰性對照，以10 mL/kg進行投予。於投予前及投予48小時後測定小鼠之體重。於體重測定後使小鼠安樂死，摘出皮下腫瘤。將摘出之腫瘤立即於液體氮中冷凍，直至使用之前保存於-80℃下。
關於所得之腫瘤樣本，於放入有樣本之2 mL圓底管中添加1 mL之Trizol試劑(Invitrogen製造，15596-018)及5 mm之氧化鋯顆粒，於組織粉碎機(Tissue lyser II)(QIAGEN製造)中於1/25 freq，1.5 min×2次之條件下進行粉碎。於粉 碎後進行離心(10000 rpm，10 min)而回收上清液，添加200 μL之氯仿進行劇烈攪拌後再次進行離心(15000 rpm，15 min)。自所得之上清液200 μL中，藉由自動核酸萃取機MagNA PURE 96(Roche製造)，使用Cellular RNA Large Volume Kit(Roche製造，5467535)而萃取RNA。藉由微量吸光光度計Dropsense96(Trinean製造)而測定所萃取之RNA濃度，使用Transcriptor(Roche製造、4897030)對相當於200~1000 ng之RNA進行反轉錄。反應液組成、反應條件依照隨附文件。將所得之cDNA樣本以dH2O進行10倍稀釋，用作qPCR之模板。qPCR反應中使用TaqMan Gene Expression Master Mix(Applied Biosystems製造，4369542),TaqMan Gene Expression Assays(Applied Biosystems製造，4331182)。PCR反應之條件依照TaqMan Gene Expression附隨之使用說明書。樣品之mRNA量係作為將生理食鹽水投予群中之CKAP5之mRNA量設為1時的相對比例而算出。
關於實施例122及123中所得之各製劑中的使用化合物110之情形時之實施例122中所得之製劑，作為投予siRNA 10 mg/kg之後48小時後的腫瘤中的CKAP5 mRNA量，以將生理食鹽水處置群之腫瘤中CKAP5 mRNA量設為1之相對值計而言為0.28，活體內mRNA弱化率為72%。
因此，明確本發明之陽離子性脂質是可容易地於活體內將藥物送到至細胞內、特別是腫瘤之細胞內的陽離子性脂質。又，含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或 者於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜的組合物可容易地將核酸於活體內導入至細胞內、特別是腫瘤之細胞內。
又，明確製造雙鏈核酸與含有任意之陽離子性脂質、較佳為化合物(I)及/或本發明之化合物(I)以外之陽離子性脂質的脂質體之複合物，使該複合物並不溶解地分散於水或者0~20%之乙醇水溶液中(A液)，另行使任意之陽離子性脂質、較佳為化合物(I)及/或本發明之化合物(I)以外之陽離子性脂質溶解於乙醇水溶液中(B液)，將A液與B液以1：1之體積比加以混合，進而適宜加入水，藉此而所得之含有該核酸與該陽離子性脂質之組合物可容易地將核酸導入至細胞內、特別是腫瘤之細胞內。
[產業上之可利用性]
藉由將含有本發明之新穎陽離子性脂質及核酸的組合物投予哺乳類等，可將該核酸容易地導入至例如細胞內等。
圖1係表示將實施例118中所得之製劑(使用化合物1~10之製劑)導入至源自人肝癌之細胞株HepG2細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。縱軸表示將陰性對照設為1之情形時之標靶基因之mRNA之表現率，橫軸表示核酸濃度(nM)、所使用之陽離子性脂質之化合物編號。
圖2係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物11~20之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之 mRNA之表現率。
圖3係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物21~30之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖4係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物31~37之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖5係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物38~48之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖6係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物49~58之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖7係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物59~68之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖8係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物69~79之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖9係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物80~90之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖10係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物91~100之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之 mRNA之表現率。
圖11係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物101~110之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖12係表示與圖1同樣地將實施例118中所得之製劑(使用化合物111~115之製劑)導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
圖13係表示與圖1同樣地將比較例1~8中所得之製劑導入至細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。
[序列表自由內容]
序列編號1-siRNA正義鏈
序列編號2-siRNA反義鏈
序列編號2-5'-磷酸化腺苷(5'-phosphorylated Adenosine)
序列編號3-siRNA正義鏈
序列編號4-siRNA反義鏈
序列編號4-5'-磷酸化腺苷(5'-phosphorylated Adenosine)
<110> 日商協和醱酵麒麟有限公司
<120> 陽離子性脂質
<130> 100IP12201
<140> 101140899
<141> 2012/11/02
<150> US61554622
<151> 2011-11-02
<150> US61670840
<151> 2012-07-12
<150> US61671341
<151> 2012-07-13
<160> 2
<170> PatentIn第3.5版
<210> 1
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正義鏈
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (2)..(2)
<223> um
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (5)..(5)
<223> um
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (11)..(11)
<223> um
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (15)..(15)
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<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (21)..(21)
<223> um
<400> 1
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反義鏈
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正義鏈
<220>
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<223> gm
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (2)..(2)
<223> gm
<220>
<221> 修飾鹼基
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<223> um
<220>
<221> 修飾鹼基
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<211> 25
<212> RNA
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<223> siRNA反義鏈
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 5'-磷酸化腺苷
<400> 4

Claims (28)

  1. 一種陽離子性脂質，其以下述式(I)表示， (式中，R1及R2相同或不同，為碳數為12~24之直鏈狀或分枝狀之烷基、烯基或炔基，或者R1及R2一併形成二烷基亞甲基、二烯基亞甲基、二炔基亞甲基或烷基烯基亞甲基，X1及X2為氫原子，或者一併形成單鍵或伸烷基，X3不存在，或者為碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，於X3不存在之情形時，Y亦不存在，a及b為0，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代的碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2為-O-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，且a與b均不 為0，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，L3為單鍵，R3為氫原子，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者Y亦不存在，a及b相同或不同，為0~3，L3為-CO-或者-CO-O-，R3為吡咯啶-2-基、吡咯啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基、嗎啉-3-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，該取代基之至少1個為胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、吡咯啶基、哌啶基或者嗎啉基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-，於X3為碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基之情形時，Y為製藥上所容許之陰離子，a及b相同或不同，為0~3，L3為單鍵，R3為碳數為1~6之烷基、碳數為3~6之 烯基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2相同或不同，為-O-、-CO-O-或者-O-CO-)。
  2. 如請求項1之陽離子性脂質，其中L1及L2為-O-或者-O-CO-，R1及R2為十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基或者3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基。
  3. 如請求項1之陽離子性脂質，其中L1及L2為-CO-O-，R1及R2為十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基或者2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基。
  4. 如請求項1至3中任一項之陽離子性脂質，其中a及b均為0或1。
  5. 如請求項4之陽離子性脂質，其中L3為單鍵，R3為氫原子、甲基、吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，L1及L2為-O-。
  6. 如請求項4之陽離子性脂質，其中L3為-CO-或者-CO-O-，R3為吡咯啶-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基，該取代基之至少1個為胺基、單烷基胺基、二烷基胺基、三烷基銨基、吡咯啶基、哌啶基或嗎啉基，L1及L2為相同之-CO-O-或者-O-CO-。
  7. 如請求項1至3中任一項之陽離子性脂質，其中X1及X2一併形成單鍵或者伸烷基。
  8. 如請求項1至3中任一項之陽離子性脂質，其中X1及X2一併形成單鍵或者伸烷基，R3為氫原子、甲基或者經相同或不同之1~3個胺基、羥基或胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基。
  9. 如請求項1至3中任一項之陽離子性脂質，其中X1及X2為 氫原子，R3為氫原子、甲基或者經相同或不同之1~3個胺基、羥基或胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或碳數為3~6之烯基。
  10. 如請求項6之陽離子性脂質，其中X1及X2一併形成單鍵或者伸烷基，R3為經相同或不同之1~3個胺基、羥基或者胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基。
  11. 如請求項6之陽離子性脂質，其中X1及X2為氫原子，R3為經相同或不同之1~3個胺基、羥基或者胺甲醯基取代之碳數為1~6之烷基或者碳數為3~6之烯基。
  12. 如請求項1至3中任一項之陽離子性脂質，其中X3不存在，或者為甲基。
  13. 一種組合物，其含有如請求項1至3中任一項之陽離子性脂質及核酸。
  14. 如請求項13之組合物，其中陽離子性脂質與該核酸形成複合物，或者形成組合中性脂質及/或高分子而成者與該核酸之複合物。
  15. 如請求項13之組合物，其中陽離子性脂質與該核酸形成複合物，或者形成組合中性脂質及/或高分子而成者與該核酸之複合物，該組合物含有該複合物及封入該複合物之脂質膜。
  16. 如請求項13之組合物，其中核酸係具有利用RNA干擾(RNAi)而抑制標靶基因表現之作用的核酸。
  17. 如請求項16之組合物，其中標靶基因係與腫瘤或炎症相 關之基因。
  18. 一種將核酸導入至細胞內之方法，其係使用如請求項14之組合物而將該核酸導入至細胞內的方法。
  19. 如請求項18之方法，其中細胞係位於哺乳類之腫瘤或炎症部位之細胞。
  20. 如請求項18之方法，其中細胞係位於哺乳類之肝臟、肺、腎臟或脾臟之細胞。
  21. 如請求項19之方法，其中導入至細胞內之方法係藉由靜脈內投予而導入至細胞內的方法。
  22. 如請求項20之方法，其中導入至細胞內之方法係藉由靜脈內投予而導入至細胞內的方法。
  23. 一種癌或炎症疾病之治療方法，其係將如請求項17之組合物投予哺乳動物。
  24. 如請求項22之方法，其中投予之方法係靜脈內投予。
  25. 一種醫藥，其係包含如請求項16之組合物的用於治療疾病之醫藥。
  26. 如請求項24之醫藥，其係靜脈內投予用。
  27. 一種癌或炎症疾病之治療劑，其係包含如請求項17之組合物的用於治療癌或炎症疾病的癌或炎症疾病之治療劑。
  28. 如請求項26之癌或炎症疾病之治療劑，其係靜脈內投予用。
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