TW201315726A - 吡唑－４－基－雜環甲醯胺化合物及使用方法 - Google Patents

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Abstract

式I之吡唑-4-基-雜環甲醯胺化合物，包括其立體異構體、幾何異構體、互變異構體及醫藥學上可接受之鹽，其中X為噻唑基、吡嗪基、吡啶基或嘧啶基，可用於抑制Pim激酶，且可用於治療Pim激酶介導之病症，諸如癌症。本發明揭示使用式I化合物在活體外、原位及活體內診斷、預防或治療哺乳動物細胞之該等病症或相關病理病狀的方法□

Description

吡唑-4-基-雜環甲醯胺化合物及使用方法
本發明大體上係關於吡唑-4-基-雜環甲醯胺化合物，其作為用於治療由Pim激酶(Pim-1、Pim-2及/或Pim-3)介導之病症之抑制劑，因而可用作癌症治療劑。本發明亦係關於包含該等化合物之組合物，更具體言之醫藥組合物，及單獨或組合地使用前述者來治療各種形式之癌症及過度增生性病症之方法，以及使用該等化合物在活體外、原位及活體內診斷或治療哺乳動物細胞或相關病理病狀之方法。
Pim激酶為由基因Pim-1、Pim-2及Pim-3編碼之三種高度相關之絲胺酸及蘇胺酸蛋白激酶構成的家族。該等基因名稱係源自於片語莫洛尼原病毒插入(Proviral Insertion,Moloney)，其為鼠類莫洛尼病毒之常見整合位點，其中該等插入在轉殖基因Myc驅使之淋巴瘤模型中導致Pim激酶之過度表現且新生T細胞淋巴瘤或顯著加速腫瘤發生(Cuypers等人(1984)Cell，第37卷(1)第141-50頁；Selten等人(1985)EMBO J.第4卷(7)第1793-8頁；van der Lugt等人(1995)EMBO J.第14卷(11)第2536-44頁；Mikkers等人(2002)Nature Genetics，第32卷(1)第153-9頁；van Lohuizen等人(1991)Cell，第65卷(5)第737-52頁)。該等實驗揭露了與致癌基因c-Myc之協同作用，且表明抑制Pim激酶可能具有治療益處。
小鼠遺傳學表明，拮抗Pim激酶會具有可接受之安全性 型態；Pim 1 -/-、Pim-2 -/-、Pim-3 -/-小鼠基因剔除仍能存活，不過略小於野生型同窩仔畜(Mikkers等人(2004)Mol Cell Biol第24卷(13)第6104-154頁)。該三種基因產生六種蛋白質同功異型物，包括蛋白激酶結構域，且顯然沒有可識別之調控結構域。所有六種同功異型物均為具組成型活性之蛋白激酶，其不需要轉譯後修飾來提供活性，因此Pim激酶主要在轉錄層面上受調控(Qian等人(2005)J Biol Chem，第280卷(7)第6130-7頁)。Pim激酶之表現高度地可藉由細胞因子及生長因子受體誘導，且Pim為Stat蛋白(包括Stat3及Stat5)之直接轉錄標靶。舉例而言，gp130介導之Stat3增殖信號需要Pim-1(Aksoy等人(2007)Stem Cells，第25卷(12)第2996-3004頁；Hirano等人(2000)Oncogene第19卷(21)第2548-56頁；Shirogane等人(1999)Immunity第11卷(6)第709-19頁)。
Pim激酶在與PI3k/Akt/mTOR信號傳導軸平行之細胞增殖及存活路徑中起作用(Hammerman等人(2005)Blood第105卷(11)第4477-83頁)。實際上，PI3k軸之幾個磷酸化標靶，包括Bad及eIF4E-BP1，均為細胞生長及細胞凋亡調控子，且亦為Pim激酶之磷酸化標靶(Fox等人(2003)Genes Dev第17卷(15)第1841-54頁；Macdonald等人(2006)Cell Biol第7卷第1頁；Aho等人(2004)FEBS Letters第571卷(1-3)第43-9頁；Tamburini等人(2009)Blood第114卷(8)第1618-27頁)。Pim激酶會影響細胞存活，因為Bad磷酸化會增加Bcl-2活性且因此促進細胞存活。同樣，eIF4E-BP1經 mTOR或Pim激酶磷酸化會引起eIF4E之抑制，從而促進mRNA轉譯及細胞生長。此外，亦已認識到Pim-1可經由CDC25A、p21及Cdc25C之磷酸化來促進細胞週期進程(Mochizuki等人(1999)J Biol Chem第274卷(26)第18659-66頁；Bachmann等人(2006)Int J Biochem Cell Biol第38卷(3)第430-43頁；Wang等人(2002)Biochim Biophys Acta第1593卷(1)第45-55頁)。
Pim激酶在c-Myc引發及Akt引發之腫瘤的轉殖基因小鼠模型中顯示出協同作用(Verbeek等人(1991)Mol Cell Biol第11卷(2)第1176-9頁；Allen等人Oncogene(1997)第15卷(10)第1133-41頁；Hammerman等人(2005)Blood第105卷(11)第4477-83頁)。Pim激酶與在急性骨髓白血病(AML)中所鑑別之致癌基因(包括Flt3-ITD、BCR-abl及Tel-Jak2)的轉型活性有關。該等致癌基因在BaF3細胞中之表現使Pim-1及Pim-2之表現上調，引起不依賴於IL-3之生長，且隨後之Pim抑制引起細胞凋亡及細胞生長停滯(Adam等人(2006)Cancer Research 66(7)：3828-35)。亦已注意到在包括白血病及淋巴瘤(Amson等人(1989)Proc Natl Acad Sci USA 86(22)：8857-61；Cohen等人(2004)Leuk Lymphoma 45(5)：951-5；Hüttmann等人(2006)Leukemia 20(10)：1774-82)以及多發性骨髓瘤(Claudio等人(2002)Blood 100(6)：2175-86)在內之許多造血性癌症中，Pim過度表現及調節異常(dysregulation)為一種常見事件。經顯示，Pim 1過度表現且與前列腺癌之發展相關(Cibull等人(2006)J Clin Pathol 59(3)：285-8；Dhanasekaran等人(2001)Nature第412卷(6849)：822-6)。Pim 1之表現在小鼠疾病發展模型中增加(Kim等人(2002)Proc Natl Acad Sci USA 99(5)：2884-9)。據報導，Pim-1在具有c-Myc引發之基因特徵的人類前列腺腫瘤樣品亞組中為最高度過度表現之mRNA(Ellwood-Yen等人(2003)Cancer Cell 4(3)：223-38)。亦已顯示，Pim-3過度表現且在胰臟癌及肝細胞癌中具有功能作用(Li等人(2006)Cancer Research 66(13)：6741-7；Fujii等人(2005)Int J Cancer 114(2)：209-18)。
除腫瘤治療及診斷應用外，Pim激酶可在正常免疫系統功能中起到重要作用，且Pim抑制可用於治療多種不同的免疫病變，包括腫瘤發生(Nawijn等人(2011)Nature Rev.11：23-34)、炎症、自體免疫病狀、過敏，及針對器官移植之免疫抑制(Aho等人(2005)Immunology 116(1)：82-8)。
本發明係關於作為抑制劑之式I之吡唑-4-基-雜環甲醯胺化合物，其係用於治療由Pim激酶(Pim-1、Pim-2及/或Pim-3)介導之病症。
式I化合物具有如下結構： 其中R2係選自以下結構： 其中波形線指示連接位點，且虛線指示視情況存在之雙鍵；X係選自以下結構： 及其立體異構體、幾何異構體、互變異構體及醫藥學上可接受之鹽。各種取代基，包括R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7及X如本文中所定義。
本發明之一個態樣為一種醫藥組合物，其包含式I化合物及醫藥學上可接受之載劑、滑動劑、稀釋劑或賦形劑。該醫藥組合物可進一步包含化學治療劑。
本發明包括一種治療疾病或病症之方法，該方法包含對患有疾病或病症之患者投與治療有效量之式I化合物，該疾病或病症選自癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代謝/內分泌功能病症及神經學病症且由Pim激酶介導。該方法包括進一步投與另一治療劑，該治療劑選自化學治療劑、消炎劑、免疫調節劑、神經營養因子、用於治療心血管疾病之藥劑、用於治療肝病之藥劑、抗病毒劑、用於治療血液病症之藥劑、用於治療糖尿病之藥劑及用於治療免疫缺乏病症之藥劑。
本發明包括式I化合物之用途，其用於製造用以治療癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代謝/內分泌功能病症及神經學病症之藥物，其中該藥物介導Pim激酶。
本發明包括一種用於治療由Pim激酶介導之病狀的套組，包含：a)第一醫藥組合物，其包含式I化合物；及b)使用說明書。
本發明包括一種式I化合物，其用作藥物且用於治療選自癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代謝/內分泌功能病症及神經學病症且由Pim激酶介導之疾病或病症。
本發明包括製備式I化合物之方法。
現將詳細地提及本發明之某些實施例，其實例係以隨附結構及式子來說明。儘管將結合所列舉之實施例來描述本 發明，但應瞭解，不意欲使本發明限於該等實施例。與此相反，本發明意欲涵蓋可包括於如由申請專利範圍所界定之本發明範疇內的所有替代物、修改及等效物。熟習此項技術者將認識到與本文所述之方法及材料類似或等效之許多方法及材料，其可用於實施本發明。本發明決不限於所述方法及材料。在所併入之文獻、專利及類似材料中之一或多者不同於本申請案或與本申請案相悖(包括(但不限於)所定義術語、術語用法、所述技術或其類似內容)之情況下，以本申請案為準。除非另外定義，否則本文中所用之所有技術及科學術語具有與一般熟習本發明所屬技術者通常所理解之含義相同的含義。儘管與本文中所述的方法及材料類似或等效的方法及材料均可用於實施或測試本發明，但下文描述適合的方法及材料。本文提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻皆以全文引用方式併入。除非另作指示，否則本申請案中使用之命名法係基於IUPAC系統命名法。
定義
當指示取代基之數目時，術語「一或多個」係指自一個取代基至最大可能之取代數的範圍，亦即，一個氫之置換直至所有氫均被取代基置換。術語「取代基」表示置換母分子上之一個氫原子的原子或一組原子。術語「經取代」表示指定基團帶有一或多個取代基。在任何基團可攜帶多個取代基且提供多個可能之取代基的情況下，該等取代基係獨立選定的且無需相同。術語「未經取代」意謂指定基 團不帶有取代基。術語「視情況經取代」意謂指定基團未經取代或經一或多個獨立選自可能取代基之群的取代基取代。當指示取代基之數目時，術語「一或多個」意謂自一個取代基至最大可能之取代數，亦即，一個氫之置換直至所有氫均被取代基置換。
如本文所用之術語「烷基」係指具有1至12個碳原子(C1-C12)之飽和直鏈或分支鏈單價烴基，其中該烷基可視情況獨立地經一或多個下文所述之取代基取代。在另一實施例中，烷基為1至8個碳原子(C1-C8)，或1至6個碳原子(C1-C6)。烷基之實例包括(但不限於)甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、異丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、異丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、第二丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、第三丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3) (CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、1-庚基、1-辛基及其類似基團。
如本文所用之術語「伸烷基」係指具有1至12個碳原子(C1-C12)之飽和直鏈或分支鏈二價烴基，其中該伸烷基可視情況獨立地經一或多個下文所述之取代基取代。在另一實施例中，伸烷基為1至8個碳原子(C1-C8)，或1至6個碳原子(C1-C6)。伸烷基之實例包括(但不限於)亞甲基(-CH2-)、伸乙基(-CH2CH2-)、伸丙基(-CH2CH2CH2-)及其類似基團。
術語「烯基」係指具有2至8個碳原子(C2-C8)且具有至少一個不飽和位點(亦即，碳-碳sp2雙鍵)之直鏈或分支鏈單價烴基，其中該烯基可視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代，且包括具有「順式」及「反式」定向或者「E」及「Z」定向之基團。實例包括(但不限於)乙烯基(ethylenyl或vinyl)(-CH=CH2)、烯丙基(-CH2CH=CH2)及其類似基團。
術語「伸烯基」係指具有2至8個碳原子(C2-C8)且具有至少一個不飽和位點(亦即，碳-碳sp2雙鍵)之直鏈或分支鏈二價烴基，其中該伸烯基可視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代，且包括具有「順式」及「反式」定向或者「E」及「Z」定向之基團。實例包括(但不限於)伸乙烯基(ethylenylene或vinylene)(-CH=CH-)、烯丙基(-CH2CH=CH-)及其類似基團。
術語「炔基」係指具有2至8個碳原子(C2-C8)且具有至少一個不飽和位點(亦即，碳-碳sp參鍵)之直鏈或分支鏈單價烴基，其中該炔基可視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。實例包括(但不限於)乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)及其類似基團。
術語「伸炔基」係指具有2至8個碳原子(C2-C8)且具有至少一個不飽和位點(亦即，碳-碳sp參鍵)之直鏈或分支鏈二價烴基，其中該伸炔基可視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。實例包括(但不限於)伸乙炔基(-C≡C-)、伸丙炔基(伸炔丙基、-CH2C≡C-)及其類似基團。
術語「碳環」、「碳環基」及「環烷基」係指具有3至12個碳原子(C3-C12)且呈單環形式或具有7至12個碳原子且呈雙環形式之單價非芳族飽和或部分不飽和環。具有7至12個原子之雙環碳環可排列為例如雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統，且具有9或10個環原子之雙環碳環可排列為雙環[5,6]或[6,6]系統，或排列為橋連系統，諸如雙環[2.2.1]庚烷、雙環[2.2.2]辛烷及雙環[3.2.2]壬烷。螺部分亦包括於此定義之範疇內。單環碳環之實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基、環十二烷基及其類似基團。碳環基視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。
「芳基」意謂藉由自母體芳環系統之單一碳原子移除一 個氫原子而獲得的具有6至20個碳原子(C6-C20)之單價芳族烴基。在例示性結構中一些芳基以「Ar」表示。芳基包括含與飽和、部分不飽和環或芳族碳環稠合之芳族環的雙環基團。典型芳基包括(但不限於)衍生自苯(苯基)、經取代之苯、萘、蒽、聯苯、茚基、二氫茚基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基及其類似物之基團。芳基視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。
「伸芳基」意謂藉由自母體芳族環系統之兩個碳原子移除兩個氫原子而獲得的具有6至20個碳原子(C6-C20)之二價芳族烴基。在例示性結構中一些伸芳基以「Ar」表示。伸芳基包括含與飽和、部分不飽和環或芳族碳環稠合之芳族環的雙環基團。典型伸芳基包括(但不限於)衍生自苯(伸苯基)、經取代之苯、萘、蒽、伸聯苯基、伸茚基、伸二氫茚基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基及其類似物之基團。伸芳基視情況經一或多個本文所述之取代基取代。
術語「雜環」及「雜環基」在本文中可互換使用且係指具有3至約20個環原子之飽和或部分不飽和(亦即，環中具有一或多個雙鍵及/或參鍵)碳環基團，其中至少一個環原子為選自氮、氧、磷及硫之雜原子，其餘環原子為C，其中一或多個環原子視情況獨立地經一或多個下文所述之取代基取代。雜環可為具有3至7個環成員(2至6個碳原子及1至4個選自N、O、P及S之雜原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至6個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。雜環描 述於以下文獻中：Paquette,Leo A.；「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」(W.A.Benjamin,New York,1968)，尤其第1章、第3章、第4章、第6章、第7章及第9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs」(John Wiley & Sons,New York,1950至今)，尤其第13卷、第14卷、第16卷、第19卷及第28卷；及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566。「雜環基」亦包括如下基團，其中雜環基團與飽和、部分不飽和環、或芳族碳環或雜環稠合。雜環之實例包括(但不限於)嗎啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯啶-1-基、硫代嗎啉-4-基、S-二側氧基硫代嗎啉-4-基、氮雜環辛烷-1-基、氮雜環丁烷-1-基、八氫吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮雜環庚烷-1-基、吡咯啶基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫哌喃基、二氫哌喃基、四氫硫代哌喃基、N-哌啶基、N-嗎啉基、N-硫代嗎啉基、硫氧雜環己基、哌嗪基、高哌嗪基、氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基、硫雜環丁烷基、高哌啶基、氧雜環庚烷基、硫雜環庚烷基、噁氮呯基、二氮呯基、噻氮呯基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-哌喃基、4H-哌喃基、二噁烷基、1,3-二氧戊環基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫雜環戊烷基、二氫哌喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑啶基咪唑啉基、咪唑啶基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、3-氮雜雙環[4.1.0]庚基、氮雜雙環[2.2.2]己基、3H-吲哚基、喹嗪基及N-吡啶基脲。螺部分亦包括於此定義之範 疇內。2個環原子經側氧基(=O)部分取代之雜環基的實例為嘧啶酮基及1,1-二側氧基-硫代嗎啉基。本文中之雜環基視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。
術語「雜芳基」係指5員、6員或7員環之單價芳族基團且包括具有5至20個原子且含有一或多個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的稠環系統(其中至少一個環為芳族環)。雜芳基之實例為吡啶基(包括例如2-羥基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羥基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、異噻唑基、吡咯基、喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、噠嗪基、三嗪基、異吲哚基、喋啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋呫基、苯并呋呫基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喏啉基、啶基及呋喃并吡啶基。雜芳基視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。
若可能，則雜環或雜芳基可經碳(碳連接)或氮(氮連接)鍵結。舉例而言(但不帶限制性)，經碳鍵結之雜環或雜芳基鍵結於吡啶之2、3、4、5或6位；噠嗪之3、4、5或6位；嘧啶之2、4、5或6位；吡嗪之2、3、5或6位；呋喃、四氫呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑之2、4或5位；異噁唑、吡唑或異噻唑之3、4或5位；氮丙啶之2或3位；氮雜環丁烷之2、 3或4位；喹啉之2、3、4、5、6、7或8位；或異喹啉之1、3、4、5、6、7或8位。
舉例而言(但不帶限制性)，氮鍵結之雜環或雜芳基在氮丙啶、氮雜環丁烷、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑之1位；異吲哚或異吲哚啉之2位；嗎啉之4位；及咔唑或β-咔啉之9位鍵結。
術語「治療」係指治療性治療及預防性或防治性措施，其中目的在於防止或減緩(減輕)不希望有之生理變化或病症，諸如癌症之發生或擴散。出於本發明之目的，有益或所需臨床結果包括(但不限於)：症狀緩解、疾病程度減小、疾病狀態穩定(亦即，不惡化)、疾病進程延緩或減緩、疾病狀態改善或減輕、及症狀緩解(部分抑或完全)，該等結果為可偵測抑或不可偵測的。「治療」亦可意謂與未接受治療之情況下所預期之存活期相比存活期延長。需要治療者包括已患有病狀或病症者以及傾向於患上病狀或病症者或有待預防病狀或病症者。
片語「治療有效量」意謂(i)治療或預防特定疾病、病狀或病症，(ii)減輕、改善或消除特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀，或(iii)預防或延緩本文所述之特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀發作的本發明化合物之量。在癌症之狀況下，治療有效量之藥物可減少癌細胞之數目；減小腫瘤大小；抑制(亦即，在一定程度上減緩，且較佳 阻止)癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制(亦即，在一定程度上減緩，且較佳阻止)腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上緩解與癌症相關之一或多種症狀。就藥物可防止現有癌細胞生長及/或殺滅現有癌細胞而言，藥物可具有細胞生長抑制性及/或細胞毒性。對於癌症療法而言，可例如藉由評估疾病發展時間(TTP)及/或測定反應率(RR)來量測功效。
術語「癌症」係指或描述哺乳動物中典型地以不受調控之細胞生長為特徵的生理病狀。「腫瘤」包含一或多個癌細胞。癌症之實例包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴惡性病。該等癌症之更特定的實例包括鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌(「NSCLC」)、肺腺癌及肺鱗狀細胞癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌(包括胃腸癌)、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝臟癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎臟癌或腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌以及頭頸癌。
「化學治療劑」為可用於治療癌症之化合物，與作用機制無關。化學治療劑之種類包括(但不限於)：烷化劑、抗代謝物、紡錘體毒素植物鹼、細胞毒性抗生素/抗腫瘤抗生素、拓撲異構酶抑制劑、抗體、光敏劑及激酶抑制劑。化學治療劑包括「靶向療法」及習知化學療法中所用之化合物。化學治療劑之實例包括：埃羅替尼(erlotinib) (TARCEVA®，Genentech/OSI Pharm.)、多烯紫杉醇(TAXOTERE®，Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶，CAS第51-21-8號)、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR®，Lilly)、PD-0325901(CAS第391210-10-9號，Pfizer)、順鉑(cisplatin)(順二胺二氯鉑(II)，CAS第15663-27-1號)、卡鉑(carboplatin)(CAS第41575-94-4號)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL®，Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、曲妥珠單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN®，Genentech)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-側氧基-2,3,4,6,8-五氮雜雙環[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲醯胺，CAS第85622-93-1號，TEMODAR®，TEMODAL®，Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺，NOLVADEX®，ISTUBAL®，VALODEX®)及阿黴素(doxorubicin)(ADRIAMYCIN®)、Akti-1/2、HPPD及雷帕黴素(rapamycin)。
化學治療劑之更多實例包括：奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATIN®，Sanofi)、硼替佐米(bortezomib)(VELCADE®，Millennium Pharm.)、紓癌特(sutent)(SUNITINIB®，SU11248，Pfizer)、來曲唑(letrozole)(FEMARA®，Novartis)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)(GLEEVEC®，Novartis)、XL-518(MEK抑制劑，Exelixis，WO 2007/044515)、ARRY-886(MEK抑制劑，AZD6244，Array BioPharma，Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制劑，Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制劑，Novartis)、XL-147(PI3K抑制劑，Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX®，AstraZeneca)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)(醛葉酸)、雷帕黴素(西羅莫司(sirolimus)，RAPAMUNE®，Wyeth)、雷帕黴素類似物、mTOR抑制劑諸如依維莫司(everolimus)、MEK抑制劑(GDC-0973)、Bcl-2抑制劑諸如納維托克(navitoclax)、(ABT-263)或ABT-199)、拉帕替尼(lapatinib)(TYKERB®，GSK572016，Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(lonafarnib)(SARASARTM，SCH 66336，Schering Plough)、索拉非尼(sorafenib)(NEXAVAR®，BAY43-9006，Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA®，AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan)(CAMPTOSAR®，CPT-11，Pfizer)、替吡法尼(tipifarnib)(ZARNESTRATM，Johnson & Johnson)、ABRAXANETM(不含十六醇聚氧乙烯醚(Cremophor))、太平洋紫杉醇之經白蛋白工程改造之奈米顆粒調配物(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，I1)、凡德他尼(vandetanib)(rINN，ZD6474，ZACTIMA®，AstraZeneca)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、AG1478、AG1571(SU 5271，Sugen)、坦西莫司(temsirolimus)(TORISEL®，Wyeth)、帕唑帕尼(pazopanib)(GlaxoSmithKline)、坎弗醯胺(canfosfamide)(TELCYTA®，Telik)、噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN®，NEOSAR®)；磺酸烷酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊 舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)；伸乙基亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altret胺)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基三聚氰胺；乙醯精寧(acetogenin)(尤其為布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin)(包括合成類似物拓朴替康(topotecan))；苔蘚蟲素(bryostatin)；卡利斯他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻環肽(cryptophycin)(尤其念珠藻環肽1及念珠藻環肽8)；海兔毒素(dolastatin)；多卡黴素(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；沙考地汀(sarcodictyin)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥，諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、氧化二氯甲基二乙胺鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、芬司特瑞(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(氯zotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及拉甯司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二 炔抗生素(例如刺孢黴素(calicheamicin)、刺孢黴素γ1I、刺孢黴素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33：183-186)；達內黴素(dynemicin)、達內黴素A；雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、胺茴黴素(authramycin)、重氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡柔比星(carubicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、N-嗎啉基-阿黴素、氰基(N-嗎啉基)-阿黴素、2-吡咯啉基-阿黴素及脫氧阿黴素)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycin)(諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎那黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5- FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、甲胺喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脫氧尿苷(dideoxyuridine)、脫氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，諸如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺素，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如夫羅林酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸；乙炔尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；倍思塔布(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；艾達曲克(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾弗利散(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖(lentinan)；羅尼達寧(lonidainine)；類美登素，諸如美登素及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；尼曲吖啶(nitracrine)；噴司他丁 (pentostatin)；噴那美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；足葉草酸(podophyllinic acid)；2-乙醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢黴烯族毒素(trichothecene)(尤其T-2毒素、黏液黴素A(verrucarin A)、桿孢菌素A(roridin A)及胺癸汀(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；甲托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春鹼(vinblastine)；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼(vincristine)；長春瑞賓(vinorelbine)(NAVELBINE®)；諾消靈(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；柔紅黴素(daunomycin)；胺基蝶呤(aminopterin)；卡培他濱(capecitabine)(XELODA®，Roche)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視色素，諸如視黃酸；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸及衍生物。
「化學治療劑」定義中亦包括：(i)用以調控或抑制對腫瘤之激素作用的抗激素劑，諸如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括NOLVADEX®；檸檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、鹽酸雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及FARESTON®(檸檬酸托瑞米芬(toremifine citrate))；(ii)抑制芳香酶之芳香酶抑制劑，其調控腎上腺中之雌激素產生，諸如4(5)-咪唑、胺魯米特、MEGASE®(乙酸甲地孕酮(megestrol acetate))、AROMASIN®(依西美坦(exemestane)，Pfizer)、福米斯坦(formestane)、法屈唑(fadrozole)、RIVISOR®(伏氯唑(vorozole))、FEMARA®(來曲唑，Novartis)及ARIMIDEX®(阿那曲唑(anastrozole)，AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧環戊烷核苷胞嘧啶類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑，諸如MEK抑制劑(WO 2007/044515)；(v)脂質激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，尤其為抑制與異常細胞增殖相關之信號轉導路徑中基因表現之反義寡核苷酸，例如PKC-α、Raf及H-Ras，諸如奧利默森(oblimersen)(GENASENSE®，Genta Inc.)；(vii)核糖核酸酶，諸如VEGF表現抑制劑(例如ANGIOZYME®)及HER2表現抑制劑；(viii)疫苗，諸如基 因療法疫苗，例如ALLOVECTIN®、LEUVECTIN®及VAXID®；PROLEUKIN®rIL-2；拓撲異構酶1抑制劑，諸如LURTOTECAN®；ABARELIX®rmRH；(ix)抗血管生成劑，諸如貝伐單抗(bevacizumab)(AVASTIN®，Genentech)；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸及衍生物。
「化學治療劑」定義中亦包括治療性抗體，諸如阿侖單抗(alemtuzumab)(CAMPATH®)、貝伐單抗(bevacizumab)(AVASTIN®,Genentech)；西妥昔單抗(cetuximab)(ERBITUX®,Imclone)；盤尼圖單抗(panitumumab)(VECTIBIX®,Amgen)、利妥昔單抗(rituximab)(RITUXAN®,Genentech/Biogen Idec)、帕妥珠單抗(pertuzumab)(OMNITARGTM,2C4,Genentech)、曲妥珠單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN®,Genentech)及托西莫單抗(tositumomab)(BEXXAR®,Corixa,GlaxoSmithKline)。
與本發明式I化合物組合之具有治療潛力作為化學治療劑之人類化單株抗體包括：阿侖單抗(alemtuzumab)、阿泊珠單抗(apolizumab)、阿塞珠單抗(aselizumab)、阿利珠單抗(atlizumab)、巴平新珠單抗(bapineuzumab)、貝伐單抗、比伐珠單抗美坦辛(bivatuzumab mertansine)、坎妥珠單抗美坦辛(cantuzumab mertansine)、西利珠單抗(cede-1izumab)、培塞妥株單抗(certolizumab pegol)、西弗絲妥珠單抗(cidfusituzumab)、西地妥珠單抗(cidtuzumab)、達利珠單抗(daclizumab)、艾庫珠單抗(eculizumab)、依法珠 單抗(efalizumab)、依帕珠單抗(epratuzumab)、厄利珠單抗(erlizumab)、泛維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗(fontolizumab)、吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumab ozoga-micin)、伊諾妥珠單抗奧唑米星(inotuzumab ozogamicin)、吡利牡單抗(ipilimumab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)、利布奇珠單抗(lebrikizumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、美泊利珠單抗(mepolizumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、莫托珠單抗(motovizumab)、那他珠單抗(natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、諾維珠單抗(nolovizumab)、努維珠單抗(numavizumab)、奧卡利珠單抗(ocrelizumab)、奧馬佐單抗(omalizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、帕考珠單抗(pascolizumab)、派弗西妥珠單抗(pecfusituzumab)、派妥珠單抗(pectuzumab)、帕妥珠單抗、培克珠單抗(pexelizumab)、來利珠單抗(ralivizumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)、來絲利維珠單抗(reslivizumab)、來絲利珠單抗(reslizumab)、來西維珠單抗(resyvizumab)、羅維珠單抗(rovelizumab)、盧利珠單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、希普利珠單抗(siplizumab)、索土珠單抗(sontuzumab)、他珠單抗四西坦(tacatuzumab tetraxetan)、他西珠單抗(tadocizumab)、他利珠單抗(talizumab)、特菲巴珠單抗(tefibazumab)、托珠單抗(tocilizumab)、托利珠單抗(toralizumab)、曲妥珠單抗、土考妥珠單抗西莫白介素(tucotuzumab celmo-leukin)、土庫西妥珠單抗(tucusituzumab)、恩維珠單抗 (umavizumab)、烏珠單抗(urtoxazumab)及維西珠單抗(visilizumab)。
「代謝物」為特定化合物或其鹽經由在體內代謝產生之產物。可使用此項技術中已知之常規技術來鑑別化合物之代謝物，且使用諸如本文所述之測試來測定其活性。該等產物可例如由所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、脫醯胺、酯化、脫酯、酶裂解及其類似過程產生。因此，本發明包括本發明化合物之代謝物，包括藉由一種包含使本發明式I化合物與哺乳動物接觸足以產生其代謝產物時間的方法所產生之化合物。
術語「包裝插頁」用於指通常包括在治療產品之商業包裝內的說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投藥、禁忌症及/或有關該等治療產品使用警告的資訊。
術語「對掌性」係指具有鏡像搭配物之不可重疊性質的分子，而術語「非對掌性」係指可重疊於其鏡像搭配物上之分子。
術語「立體異構體」係指具有相同化學組成，但原子或基團之空間排列不同的化合物。
「非對映異構體」係指具有兩個或兩個以上對掌性中心且分子不互為鏡像之立體異構體。非對映異構體具有不同物理性質，例如熔點、沸點、光譜性質及反應性。非對映異構體混合物可在高解析度分析程序(諸如電泳及層析)下分離。
「對映異構體」係指化合物之互為不可重疊鏡像的兩種 立體異構體。
本文所用之立體化學定義及慣例一般遵循S.P.Parker編，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；以及Eliel,E.及Wilen,S.,「Stereochemistry of Organic Compounds」，John Wiley & Sons,Inc.,New York,1994。本發明化合物可含有不對稱或對掌性中心，且因此以不同立體異構形式存在。預期本發明化合物之所有立體異構形式，包括(但不限於)非對映異構體、對映異構體及滯轉異構體以及其混合物(諸如外消旋混合物)，形成本發明之一部分。許多有機化合物以光學活性形式存在，亦即，其能夠使平面偏光之平面旋轉。在描述光學活性化合物時，字首D及L或R及S用於表示分子關於其對掌性中心之絕對組態。字首d及l或(+)及(-)用以表示化合物之平面偏光之旋轉標記，其中(-)或l意謂化合物為左旋的。具有字首(+)或d之化合物為右旋的。對於指定化學結構，此等立體異構體除互為鏡像外均相同。特定立體異構體亦可稱為對映異構體，且該等異構體之混合物通常稱為對映異構體混合物。對映異構體之50：50混合物稱為外消旋混合物或外消旋物，其可在化學反應或製程中不進行立體選擇或無立體專一性的情況下出現。術語「外消旋混合物」及「外消旋物」係指缺乏光學活性之兩種對映異構體物質的等莫耳混合物。對映異構體可藉由對掌性分離方法，諸如超臨界流體色譜法(SFC)自外消旋混合物分離。分離之對映異構體中在對掌性中心處 組態的指定可為暫定的，且表1中出於說明性目的描繪出結構，而立體化學確定有待例如x射線結晶數據。
術語「互變異構體」或「互變異構形式」係指可經由低能量障壁相互轉化之具有不同能量之結構異構體。舉例而言，質子互變異構體(亦稱為質子轉移互變異構體)包括經由質子遷移而相互轉化，諸如酮-烯醇及亞胺-烯胺異構化。價鍵互變異構體包括藉由一些鍵結電子重組而相互轉化。
術語「醫藥學上可接受之鹽」表示並非在生物學上或其他方面不合需要之鹽。醫藥學上可接受之鹽包括酸加成鹽及鹼加成鹽。片語「醫藥學上可接受」指示物質或組合物必須在化學上及/或毒理學上與構成調配物之其他成分及/或用其治療之哺乳動物相容。
術語「醫藥學上可接受之酸加成鹽」表示與無機酸及有機酸形成之醫藥學上可接受之鹽，該等無機酸諸如為鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸，且該等有機酸選自有機酸之脂族酸、環脂族酸、芳族酸、芳脂族酸、雜環酸、羧酸及磺酸類別，諸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、順丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、天冬胺酸、抗壞血酸、麩胺酸、鄰胺基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、恩波酸、苯乙酸、甲烷磺酸「甲磺酸鹽」、乙烷磺酸、對甲苯磺酸及水楊酸。
術語「醫藥學上可接受之鹼加成鹽」表示與有機鹼或無 機鹼形成之醫藥學上可接受之鹽。可接受之無機鹼的實例包括鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽及鋁鹽。衍生自醫藥學上可接受之有機無毒鹼之鹽包括(但不限於)以下各物之鹽：一級胺、二級胺及三級胺，經取代胺(包括天然存在之經取代胺)、環胺，及鹼性離子交換樹脂，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基胺基乙醇、三甲胺、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因(caffeine)、普魯卡因(procaine)、海巴明(hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可豆鹼(theobromine)、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶及聚胺樹脂。
「溶劑合物」係指一或多個溶劑分子與本發明化合物之締合或錯合。形成溶劑合物之溶劑的實例包括(但不限於)水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺。
術語「EC50」係半數最大有效濃度且表示在活體內獲得50%之最大特定效應所需之特定化合物之血漿濃度。
術語「Ki」為抑制常數且表示特定抑制劑與受體之結合親和力。其係使用競爭結合分析來量測且等於在不存在競爭配位體(例如放射性配位體)下，特定抑制劑將佔據50%受體時之濃度。Ki值可以對數轉換為pKi值(-log Ki)，其中較大值指示按指數規律較大之效能。
術語「IC50」係半數最大抑制濃度且表示在活體外獲得50%之生物過程抑制所需的特定化合物之濃度。IC50值可 以對數轉換為pIC50值(-log IC50)，其中較大值指示按指數規律較大之效能。IC50值不為絕對值，但取決於實驗條件，例如所用濃度，且可使用程-普魯索夫等式(Cheng-Prusoff equation)轉換為絕對抑制常數(Ki)(Biochem.Pharmacol.(1973)22：3099)。
術語「本發明化合物」及「式I化合物」包括式I化合物及其立體異構體、幾何異構體、互變異構體、溶劑合物、代謝物及醫藥學上可接受之鹽及前藥。
本文所提供之任何式或結構(包括式I化合物)亦意欲表示該等化合物之水合物、溶劑合物及多晶型物，以及其混合物。
本文中給出之任何式或結構(包括式I化合物)亦意欲表示化合物之未標記形式以及同位素標記形式。經同位素標記之化合物具有由本文給出之式所描繪之結構，其中例外為一或多個原子經具有所選原子質量或質量數之原子置換。可併入本發明化合物中之同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，諸如(但不限於)2H(氘，D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl及125I。各種同位素標記之本發明化合物，例如放射性同位素(諸如3H、13C及14C)併入其中之化合物。該等同位素標記之化合物可用於患者之代謝研究、反應動力學研究、偵測或成像技術(諸如正電子發射斷層攝影法(PET)或單光子發射電腦斷層攝影法(SPECT)，包括藥物或受質組織分佈分析)或放射性治療中。氘標記或取代之本發明治 療性化合物可具有改良的DMPK(藥物代謝及藥物動力學)性質，該等性質與分佈、代謝及排泄(ADME)有關。經諸如氘之重同位素取代可因代謝穩定性較大而產生某些治療優勢，例如活體內半衰期增加或劑量需求降低。18F標記之化合物可用於PET或SPECT研究。同位素標記之本發明化合物及其前藥一般可藉由進行流程中或下文所述之實例及製備中所揭示之程序，藉由以容易獲得之同位素標記試劑代替非同位素標記試劑來製備。此外，以較重同位素，尤其用氘(亦即，2H或D)進行之取代可因代謝穩定性較大而得到某些治療優勢，例如活體內半衰期增加或劑量需求減小，或治療指數改良。應瞭解，在此上下文中氘被視作式(I)化合物中之取代基。此類較重同位素、特別氘之濃度可由同位素增濃因子界定。在本發明化合物中，未特別指定為特定同位素之任何原子意欲表示該原子之任何穩定同位素。除非另作說明，否則當一位置特別地稱為「H」或「氫」時，應瞭解該位置具有在天然豐度同位素組成下之氫。因此，在本發明之化合物中，特別指定為氘(D)之任何原子意欲表示氘。
吡唑-4-基-雜環甲醯胺化合物
本發明提供式I(包括Ia-i)之吡唑-4-基-雜環甲醯胺化合物及其醫藥調配物，其潛在地可用於治療由Pim激酶調節之疾病、病狀及/或病症。
式I化合物具有結構：
及其立體異構體、幾何異構體、互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，其中：R1係選自H、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C6-C20芳基、C3-C12碳環基、C2-C20雜環基、C1-C20雜芳基及-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)；R2係選自以下結構：
其中波形線指示連接位點，且虛線指示視情況存在之雙 鍵；R3係選自H、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2NH2、-CH2NHCH3、-CH2CH2NH2、-CH2CHCH2NH2、-CH2CH(CH3)NH2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CN、-CF3、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-COCH2NH2、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-CH2OCH3、-S(O)2CH3、環丙基、環丁基、環戊基、環己基及環庚基；R4係獨立選自F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-C(CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH=CH2、-CH=C(CH3)2、=CH2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2NH2、-CH2NHCH3、-CH2CH2NH2、-CH2CHCH2NH2、-CH2CH(CH3)NH2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CN、-CO2H、-COCH3、-COCH2NH2、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCH2CHF2、-NHCH2CF3、-NHCH2CH2OH、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHC(O)OCH2CH3、-NHC(O)OCH2Cl3、-NHC(O)OC6H5、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、=O、-OH、-OCH3、-OCHF2、-OCH2F、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-OCH2CH(CH3)2、 -OC(CH3)3、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-CH2OCH3、-S(O)2CH3、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、氧雜環丁烷基、氧雜環丁烷-3-基甲基胺基、(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基胺基、吡咯啶基、哌嗪基、哌啶基、(哌啶-4-基)乙基、哌喃基、(哌啶-4-基甲基)、N-嗎啉基甲基及N-嗎啉基；或其中兩個偕位R4基團形成選自以下之螺環：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡咯啶基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、氧雜環丁烷基、吡咯啶基、哌嗪基或哌啶基環，其中該螺環視情況經一或多個獨立選自以下之基團取代：-F、-OH、=O、-CH3、-NH2、-CH2F、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2NH2及-CF3；或其中兩個鄰位R4基團或R4基團與R3基團形成5員或6員雜環基稠環，其中該雜環基稠環視情況經一或多個獨立選自以下之基團取代：-F、-OH、=O、-CH3、-NH2、-CH2F、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2NH2及-CF3；n為0、1、2或3；X係選自以下結構：
其中波形線指示連接位點；R5係選自H、Cl、Br、C1-C12烷基、-(C1-C12伸烷基)-(C3-C12碳環基)、-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)、-(C2-C8伸 烯基)-(C3-C12碳環基)、-(C2-C8伸烯基)-(C2-C20雜環基)、C6-C20芳基、-(C6-C20伸芳基)-(C2-C20雜環基)、-(C6-C20伸芳基)-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)、C3-C12碳環基、C2-C20雜環基及C1-C20雜芳基；其中烷基、烯基、炔基、伸烷基、碳環基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經一或多個獨立選自以下之基團取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2NH2、-CH2CH2NH2、-CH2CHCH2NH2、-CH2CH(CH3)NH2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CN、-CF3、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、=O、-OH、-OCH3、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-CH2OCH3、-S(O)2CH3、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、氧雜環丁烷基、吡咯啶基、哌嗪基、哌啶基、(哌啶-4-基)乙基、哌喃基、(哌啶-4-基甲基)、N-嗎啉基甲基及N-嗎啉基；R6獨立地為H或-NH2。
式I化合物之例示性實施例包括R1為H、C1-C12烷基(包括-CH3、-CH2CH3、-CH2CHF2及-CH2CF3)、C3-C12碳環基或-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)(包括氧雜環丁烷-3-基甲基)之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R1為H之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R1為C1-C12烷基或C3-C12碳環基之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R1係選自-CH3、-CH2CH3、-CH2CHF2及-CH2CF3之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R1為-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R1為氧雜環丁烷-3-基甲基之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R3為H或-CH3之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R4係獨立選自F、Cl、-OH、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCH2CHF2、-NHCH2CF3、-CH2NHCH3及-OCH3；且n為1、2或3之情形。
式I化合物之例示性實施例包括n為1或2之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R5為經一或多個F，尤其1個或2個F取代之C6-C20芳基(包括苯基)之情形。
式I化合物之例示性實施例包括R6為-NH2之情形。
式I化合物之例示性實施例包括式Ia-i之結構：
生物學評估
式I化合物之Pim激酶活性可能藉由多種直接及間接偵測方法來測定。對本文所述之某些例示性化合物之Pim激酶結合活性(包括同功異型物Pim-1、Pim-2及Pim-3激酶結合活性)(實例901)及活體外針對腫瘤細胞之活性(實例902)進行分析。某些例示性本發明化合物之Pim結合活性IC50值 小於約1微莫耳濃度(μM)。某些本發明化合物之基於腫瘤細胞之活性EC50值小於約1微莫耳濃度(μM)。在實例901及902中所述的分析中Ki/IC50/EC50小於1 μM的式I化合物可作為Pim激酶抑制劑(Pim-1、Pim-2及/或Pim-3)用於治療。
表1a及1b中之例示性式I化合物係根據本發明之方法製備、表徵，並針對Pim激酶抑制作用進行測試，且具有以下結構及對應名稱(ChemBioDraw Ultra,11.0版，CambridgeSoft Corp.,Cambridge MA)。表1a及1b中具有對掌性原子之一些化合物的立體化學尚未完全得到表徵。暫定的與其他基團之立體化學或立體化學關係指定可展示於結構中。立體異構體之分離方式及表徵資料提供於實例中。
本發明包括一種組合物(例如醫藥組合物)，其包含式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽，以及載劑(醫藥學上可接受之載劑)。本發明亦包括一種組合物(例如醫藥組合物)，其包含式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽，以及載劑(醫藥學上可接受之載劑)，進一步包含第二化學治療劑，諸如本文所述者。本發明組合物可用於在哺乳動物(例如人類)中抑制異常細胞生長或治療過度增生性病症，諸如癌症。舉例而言，本發明化合物及組合物可用於治療哺乳動物(例如人類)之多發性骨髓瘤、淋巴瘤、急性骨髓白血病、前列腺癌、乳癌、肝細胞癌、胰臟癌及/或結腸直腸癌。
本發明包括一種在哺乳動物(例如人類)中抑制異常細胞生長或治療過度增生性病症(諸如癌症)之方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽，或其組合物。舉例而言，本發明包括一種治療哺乳動物(例如人類)之多發性骨髓瘤、淋巴瘤、急性骨髓白血病、前列腺癌、乳癌、肝細胞癌、胰臟癌及/或結腸直腸癌的方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽，或其組合物。
本發明包括一種在哺乳動物(例如人類)中抑制異常細胞生長或治療過度增生性病症(諸如癌症)之方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽或者其組合物與第二化學治療劑(諸如本文 所述者)之組合。舉例而言，本發明包括一種治療哺乳動物(例如人類)之多發性骨髓瘤、淋巴瘤、急性骨髓白血病、前列腺癌、乳癌、肝細胞癌、胰臟癌及/或結腸直腸癌的方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽或者其組合物與第二化學治療劑(諸如本文所述者)之組合。
本發明包括一種治療哺乳動物(例如人類)之淋巴瘤的方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之單獨式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽或者其組合物或與第二化學治療劑的組合，該第二化學治療劑諸如為抗B細胞抗體治療劑(例如美羅華(Rituxan)及/或達西珠單抗)、吉西他濱、皮質類固醇(例如波尼松龍(prednisolone)及/或地塞米松(dexamethasone))、化學療法混合物(chemotherapy cocktail)(例如CHOP(環磷醯胺、阿黴素、長春新鹼、波尼松龍)及/或ICE(異環磷醯胺、賽托散(cytoxan)、依託泊苷))、生物製劑與化學療法之組合(例如美羅華-ICE、達西珠單抗-美羅華-ICE、R-Gem及/或D-R-Gem)、Akt抑制劑、PI3K抑制劑(例如GDC-0941(Genentech)及/或GDC-0980(Genentech))、雷帕黴素、雷帕黴素類似物、mTOR抑制劑(諸如依維莫司或西羅莫司(sirolimus))、MEK抑制劑(GDC-0973)及Bcl-2抑制劑(ABT-263或ABT-199)。
本發明包括一種治療哺乳動物(例如人類)之多發性骨髓瘤之方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之單獨式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽或者其組合物或 與第二化學治療劑之組合，該第二化學治療劑諸如為美法侖、「Imids」(免疫調節劑，例如沙立度胺(thalidomide)、來那度胺(lenalidomide)及/或普莫達胺(pomolidamide))、皮質類固醇(例如地塞米松及/或波尼松龍)及硼替佐米或其他蛋白酶體抑制劑。
本發明包括一種治療哺乳動物(例如人類)之多發性骨髓瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)或急性骨髓白血病(AML)之方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之單獨式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽或者其組合物，或與第二化學治療劑之組合，該第二化學治療劑諸如為阿糖胞苷(araC)、蒽環類抗生素(anthracyclines)(例如道諾黴素及/或伊達比星)、抗骨髓抗體治療劑(例如SGN-33)、抗骨髓抗體-藥物結合物(例如MYLOTARG®)。
本發明包括一種治療哺乳動物(例如人類)之慢性淋巴球性白血病(CLL)之方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之單獨式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽或者其組合物，或與第二化學治療劑之組合，該第二化學治療劑諸如為氟達拉濱、環磷醯胺、抗B細胞抗體治療劑(例如美羅華及/或達西珠單抗)。
本發明包括一種治療哺乳動物(例如人類)之慢性骨髓白血病(CML)之方法，其包含投與該哺乳動物治療有效量之單獨式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽或者其組合物，或與第二化學治療劑之組合，該第二化學治療劑諸如為BCR-abl抑制劑(例如伊馬替尼、尼羅替尼(nilotinib) 及/或達沙替尼(dasatinib))。
本發明包括一種治療哺乳動物(例如人類)之骨髓發育不良疾病(MDS)及骨髓增生病症(包括真性紅血球增多症(PV)、原發性血小板增多症(ET)或骨髓纖維化症(MF))之方法，其包含投與該哺乳動物單獨或組合之治療有效量之式I化合物及/或其溶劑合物、水合物及/或鹽，或其組合物。
本發明包括使用本發明化合物在活體外、原位及活體內診斷或治療哺乳動物細胞、生物體或相關病理病狀之方法。
本發明化合物(下文之「活性化合物」)之投與可藉由能夠將化合物傳遞至作用部位之任何方法來實現。該等方法包括經口途徑、十二指腸內途徑、非經腸注射(包括靜脈內、皮下、肌肉內、血管內或輸注)、局部、吸入及直腸投藥。
所投與活性化合物之量將取決於所治療之個體、病症或病狀之嚴重程度、投藥速率、化合物之處置及處方醫師之判斷。然而，有效劑量在每天每公斤體重約0.001至約100 mg之範圍內，較佳為約1至約35 mg/kg/d，呈單次或分次劑量。對於70公斤之人類而言，此將總計為約0.05至7 g/d，較佳為約0.05至約2.5 g/d。在一些情況下，低於上述範圍下限之劑量含量可能已遠遠足夠，而在其他情況下，可在不引起任何有害副作用之情況下仍採用較大劑量，其限制條件為最初將該等較大劑量分成若干小劑量以在一整 天中投與。
活性化合物可作為單獨療法施用或與一或多種化學治療劑(例如本文所述者)組合施用。該等聯合治療可藉由同時、依序或分別給予治療之個別組分來達成。
該醫藥組合物可例如呈適於經口投藥之形式，如錠劑、膠囊、丸劑、散劑、持續釋放調配物、溶液、懸浮液；適於非經腸注射之形式，如無菌溶液、懸浮液或乳液；適於局部投藥之形式，如軟膏或乳膏；或適於直腸投藥之形式，如栓劑。醫藥組合物可為適於單次投與精確劑量之單位劑型。醫藥組合物應包括習知醫藥載劑或賦形劑及作為活性成分之本發明化合物。另外，其亦可包括其他醫學或醫藥劑、載劑、佐劑等。
例示性非經腸投藥形式包括式I化合物於無菌水溶液(例如丙二醇水溶液或右旋糖水溶液)中之溶液或懸浮液。需要時，該等劑型可經適當緩衝。
合適醫藥載劑包括惰性稀釋劑或填充劑、水及各種有機溶劑。需要時，醫藥組合物可含有其他成分，諸如調味劑、黏合劑、賦形劑及其類似物。因此，對於經口投藥而言，含有諸如檸檬酸之各種賦形劑之錠劑可連同諸如澱粉、海藻酸及某些錯合矽酸鹽之各種崩解劑以及諸如蔗糖、明膠及阿拉伯膠之黏合劑一起使用。另外，出於製錠之目的，經常可使用諸如硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉及滑石之潤滑劑。類似類型之固體組合物亦可以軟及硬填充之明膠膠囊形式使用。因此，較佳材料包括乳糖(lactose)或 乳糖(milk sugar)及高分子量聚乙二醇。當希望將水性懸浮液或酏劑用於經口投藥時，其中活性化合物可與各種甜味劑或調味劑、著色劑或染料且(需要時)乳化劑或懸浮劑以及諸如水、乙醇、丙二醇、甘油或其組合之稀釋劑組合。
熟悉此項技術者已知或將顯而易知用指定量活性化合物製備各種醫藥組合物的方法。舉例而言參見Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Ester,Pa.，第15版增刊(1975)。
式I化合物之投藥
本發明之式I化合物可藉由適合所治療病狀之任何途徑進行投藥。適合途徑包括經口、非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、動脈內、皮內、鞘內及硬膜外)、經皮、直腸、經鼻、局部(包括經頰及舌下)、陰道、腹膜內、肺內及鼻內。對局部免疫抑制治療而言，化合物可藉由病灶內投藥來投與，包括灌注或在移植前以其他方式使移植物與抑制劑接觸。應瞭解，較佳途徑可隨例如接受者之病狀而變。在經口投與化合物之情況下，其可與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑一起調配成丸劑、膠囊、錠劑等。在非經腸投與化合物之情況下，其可與醫藥學上可接受之非經腸媒劑一起調配成單位注射劑型，如下文詳述。
治療人類患者之劑量可在約10 mg至約1000 mg式I化合物之範圍內。典型劑量可為約100 mg至約300 mg化合物。視特定化合物之藥物動力學及藥效學性質(包括吸收、分佈、代謝及排泄)而定，劑量可一天一次(QID)、一天兩次 (BID)或更頻繁地投與。此外，毒性因素可影響劑量及投藥方案。當經口投與時，丸劑、膠囊或錠劑可每日或以更低頻率攝取，持續指定時間段。可將該方案重複多個治療週期。
用式I化合物進行治療之方法
本發明化合物可用於治療過度增生性疾病、病狀及/或病症，包括(但不限於)以Pim激酶(例如Pim-1、Pim-2及Pim-3激酶)之過度表現為特徵者。因此，本發明另一態樣包括治療或預防可藉由抑制Pim激酶治療或預防之疾病或病狀的方法。在一個實施例中，該方法包含向有需要之哺乳動物投與治療有效量之式I化合物或其立體異構體、幾何異構體、互變異構體或醫藥學上可接受之鹽。在一個實施例中，用式I化合物及醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑治療人類患者，其中該式I化合物係以可偵測地抑制Pim激酶活性之量存在。
可根據本發明之方法治療之癌症包括(但不限於)：乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、胃癌、皮膚癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮樣癌、大細胞癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞癌、肺腺癌、骨癌、結腸癌、腺瘤、胰臟癌、腺癌、甲狀腺癌、濾泡癌、未分化癌、乳頭狀癌、精原細胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝臟癌及膽道癌、腎臟癌、骨髓病症、淋巴病症、毛狀細胞癌、口腔咽癌(口腔癌)、唇癌、舌癌、口癌、咽 癌、小腸癌、結腸直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦及中樞神經系統癌、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)及白血病。
本發明另一態樣提供一種本發明之化合物，其用於治療患有本文所述疾病或病狀之哺乳動物(例如人類)之該疾病或病狀。亦提供本發明化合物之用途，其用於製備供治療患有該病症之溫血動物(諸如哺乳動物，例如人類)之本文所述疾病及病狀的藥物。
醫藥調配物
為使用式I化合物對哺乳動物(包括人類)進行治療性治療(包括預防性治療)，通常根據標準醫藥實務將其調配成醫藥組合物。根據本發明之此態樣，提供一種包含本發明化合物與醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑結合的醫藥組合物。
典型調配物係藉由混合式I化合物與載劑、稀釋劑或賦形劑來製備。合適之載劑、稀釋劑及賦形劑為熟習此項技術者所熟知且包括諸如碳水化合物、蠟、水溶性及/或可膨脹聚合物、親水性或疏水性物質、明膠、油、溶劑、水及其類似物之物質。所使用之特定載劑、稀釋劑或賦形劑將取決於施用本發明化合物之方式及目的。溶劑一般係基於熟習此項技術者認為投與哺乳動物安全(GRAS)之溶劑來選擇。一般而言，安全溶劑為無毒水性溶劑，諸如水及可溶於水或可與水混溶之其他無毒溶劑。合適之水性溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG 400、PEG 300)等及其混合物。調配物亦可包括一或多種緩衝劑、穩 定劑、界面活性劑、濕潤劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、抗氧化劑、蔽光劑、滑動劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、芳香劑、調味劑及其他已知添加劑以提供藥物(亦即，本發明化合物或其醫藥組合物)之精緻呈現或幫助製造醫藥產品(亦即，藥劑)。
調配物可使用習知溶解及混合程序來製備。舉例而言，在一或多種上述賦形劑存在下，將塊狀藥物(亦即，本發明化合物或式I化合物之穩定形式(例如，與環糊精衍生物或其他已知複合劑之複合物))溶解於適合溶劑中。通常將本發明之化合物調配成醫藥劑型以提供可易於控制之藥物劑量且使患者能夠順應指定方案。
視投與藥物所用之方法而定，可以多種方式包裝醫藥組合物(或調配物)以供施用。一般而言，供分配用之物品包括其中存放有適當形式之醫藥調配物之容器。合適容器為熟習此項技術者所熟知且包括諸如瓶(塑膠及玻璃)、藥囊、安瓿、塑膠袋、金屬筒及其類似物之材料。容器亦可包括防開啟裝配以防止輕易獲取包裝之內含物。另外，容器上附有描述容器內含物之標籤。該標籤亦可包括適當警告。
本發明化合物之醫藥調配物可針對各種投藥途徑及類型來製備。舉例而言，具有期望純度之式I化合物視情況可與醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、賦形劑或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences(1980)第16版，Osol,A.編)混合，呈凍乾調配物、磨碎粉末或水溶液形式。調 配可藉由在周圍溫度下以適當pH值且以所要純度與生理上可接受之載劑(亦即，以所用劑量及濃度對接受者無毒之載劑)混合來進行。調配物之pH主要取決於化合物之特定用途及濃度，但可在約3至約8範圍內。於乙酸鹽緩衝液(pH 5)中之調配物為一個適合實施例。
用於本文之本發明化合物較佳無菌。特定言之，有待用於活體內投藥之調配物必須無菌。該滅菌易於藉由經無菌過濾膜過濾來實現。
化合物通常可以固體組合物、凍乾調配物或水溶液形式儲存。
包含式I化合物之本發明醫藥組合物將以符合良好醫學實務之方式(亦即，量、濃度、時程、療程、媒劑及投藥途徑)來調配、給藥及投藥。在此背景下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之起因、藥劑之傳遞部位、投藥方法、投藥時程及從業醫生已知之其他因素。待投與之化合物之「治療有效量」將依據該等考慮因素決定，且為預防、改善或治療凝血因子介導之病症所必需之最低量。該量較佳低於對宿主有毒或致使宿主顯著更易出血之量。
作為一般性提議，每劑非經腸投與之式I化合物之初始醫藥有效量將在約0.01至100毫克/公斤範圍內，即約0.1至20毫克/公斤患者體重/天，且所用化合物之典型初始範圍為0.3至15毫克/公斤/天。
可接受之稀釋劑、載劑、賦形劑及穩定劑在所用劑量及 濃度下對接受者無毒，且包括：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八基二甲基苄基銨；氯化六烴季銨(hexamethonium chloride)；氯化苯甲烴銨(benzalkonium chloride)；苄索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚；丁醇或苯甲醇；對羥苯甲酸烷基酯，諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚(catechol)；間苯二酚(resorcinol)；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、二醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，諸如鈉離子；金屬錯合物(例如鋅蛋白質錯合物)；及/或非離子型界面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。亦可將活性藥物成分截留於例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合製造之微囊(分別為例如羥甲基纖維素或明膠微囊及聚(甲基丙稀酸甲酯)微囊)中、膠狀藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或巨乳液中。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980)中。
可製備式I化合物之持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含有式I化合物之固體疏水性聚合物之半透性 基質，該等基質呈成形物品形式，例如薄膜或微膠囊。持續釋放基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥基乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(US 3773919)、L-麩胺酸與γ-乙基-L-麩胺酸之共聚物、不可降解乙烯-乙酸乙烯酯、諸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)構成之可注射微球體)之可降解乳酸-乙醇酸共聚物，及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
調配物包括適於本文所詳述之投藥途徑的調配物。調配物可便利地以單位劑型呈現且可由製藥學技術中所熟知之方法中之任一者來製備。技術及調配物一般見於Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。該等方法包括使活性成分與構成一或多種輔助成分之載劑結合的步驟。一般而言，調配物係藉由使活性成分與液體載劑或細粉狀固體載劑或兩者均勻且精細地結合且接著(必要時)使產物成形來製備。
適於經口投藥之式I化合物調配物可製備成各含有預定量之式I化合物的個別單元，諸如丸劑、膠囊、扁囊劑或錠劑。
壓製錠劑可藉由在合適機器中壓製視情況與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合之呈自由流動形式的活性成分(諸如粉末或顆粒粉末)來製備。模製錠劑可藉由在合適機器中模製經惰性液體稀釋劑潤濕之粉末狀活性成分之混合物來製造。錠劑可視情況經包覆包衣或刻痕，且視情況經調配以使活性成分自其緩慢 或受控釋放。
可製備錠劑、糖衣錠、口含錠、水性或油性懸浮液、可分散散劑或顆粒劑、乳液、硬膠囊或軟膠囊(例如明膠膠囊)、糖漿或酏劑供經口使用。欲經口使用之式I化合物之調配物可根據此項技術中已知用於製造醫藥組合物之任何方法來製備，且該等組合物可含有一或多種試劑，包括甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以提供適口製劑。含有與適合於製造錠劑之無毒醫藥學上可接受之賦形劑混雜之活性成分的錠劑為可接受的。此等賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑及崩解劑，例如玉米澱粉或海藻酸；黏合劑，諸如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可未包覆包衣或可由已知技術(包括微囊化)包覆包衣以在胃腸道中延遲崩解及吸附且藉此提供經較長時段之持續作用。舉例而言，可採用延時物質，諸如單獨或與蠟一起之單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
為治療眼部或其他外部組織(例如口腔及皮膚)，調配物較佳以含有例如0.075至20% w/w量之活性成分之局部軟膏或乳膏形式施用。當調配成軟膏時，活性成分可與石蠟基質或水可混溶軟膏基質一起採用。或者，活性成分可與水包油乳膏基質一起調配成乳膏。
必要時，乳膏基質之水相可包括多元醇，亦即，具有兩個或兩個以上羥基之醇，諸如丙二醇、丁烷1,3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油及聚乙二醇(包括PEG 400)及其 混合物。局部調配物可理想地包括增強活性成分吸收或滲透穿過皮膚或其他受影響區域之化合物。該等皮膚滲透增強劑之實例包括二甲亞碸及相關類似物。
本發明乳液之油相可由已知之成分以已知之方式構成。儘管該相可僅包含乳化劑，但其理想地包含至少一種乳化劑與脂肪或油，或與脂肪及油兩者之混合物。較佳地包括親水性乳化劑與充當穩定劑之親脂性乳化劑。亦較佳包括油及脂肪兩者。總的說來，乳化劑在存在或不存在穩定劑下組成所謂乳化蠟，且蠟與油及脂肪一起組成所謂乳化軟膏基質，該乳化軟膏基質形成乳膏調配物之油性分散相。適用於本發明調配物之乳化劑及乳液穩定劑包括Tween® 60、Span® 80、十六醇十八醇混合物、苄醇、十四烷醇、單硬脂酸甘油酯及十二烷基硫酸鈉。
式I化合物之水性懸浮液含有與適於製造水性懸浮液之賦形劑混合的活性物質。該等賦形劑包括懸浮劑，諸如羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲纖維素、聚聚烯吡酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠及阿拉伯膠；及分散劑或濕潤劑，諸如天然產生之磷脂(例如卵磷脂)、氧化烯與脂肪酸之縮合產物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、氧化乙烯與長鏈脂族醇之縮合產物(例如十七伸乙基氧基十六醇)、氧化乙烯與衍生自脂肪酸及己醣醇酐之偏酯的縮合產物(例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯)。該水性懸浮液亦可含有：一或多種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯；一或多種著色 劑；一或多種調味劑；及一或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
式I化合物之醫藥組合物可呈無菌可注射製劑形式，諸如無菌可注射水性或油性懸浮液。此懸浮液可根據已知技術使用上文已提及之彼等合適分散劑或濕潤劑及懸浮劑來調配。無菌可注射製劑亦可為無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，諸如1,3-丁二醇中之溶液；或製備為凍乾粉末。可採用之可接受的媒劑及溶劑為水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等張氯化鈉溶液。此外，可習知地採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。為此，可使用任何溫和的不揮發性油，包括合成單酸甘油酯或二酸甘油酯。另外，諸如油酸之脂肪酸同樣可用於製備可注射劑。
可與載劑物質組合以產生單一劑型之活性成分的量將取決於所治療之宿主及特定投藥模式。舉例而言，意欲經口投與人類之延時釋放調配物可含有與適當且便利之量(可在總組合物之約5%至約95%(重量：重量)之間變化)的載劑物質混配之約1至1000 mg活性物質。可製備醫藥組合物以提供易量測之量以供投藥。舉例而言，意欲供靜脈內輸注之水溶液每毫升溶液可含有約3至500 μg活性成分，使得可以約30 mL/h之速率進行合適體積之輸注。
適用於非經腸投與之調配物包括水性及非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者之血液等張之溶質；及水性及非水性無菌懸浮 液，其可包括懸浮劑及增稠劑。
適合於局部投與眼部之調配物亦包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮於合適載劑(尤其活性成分之水性溶劑)中。活性成分較佳以約0.5至20% w/w(例如約0.5至10% w/w，例如約1.5% w/w)之濃度存在於該等調配物中。
適合於局部投與口中之調配物包括包含於調味基質(通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠)中之活性成分的口含劑；包含於惰性基質(諸如明膠及甘油，或蔗糖及阿拉伯膠)中之活性成分的片劑；及包含於合適液體載劑中之活性成分的漱劑。
供經直腸投與之調配物可以使用合適基劑(包含例如可可脂或水楊酸酯)之栓劑形式呈現。
適合於肺內或經鼻投與之調配物具有例如在0.1至500微米範圍內之粒度(包括以諸如0.5微米、1微米、30微米、35微米等之微米增量在0.1微米與500微米之間的範圍內之粒度)，其係藉由經鼻孔快速吸入或藉由經口吸入以達到肺泡囊來投與。合適調配物包括活性成分之水性或油性溶液。適合於氣霧劑或乾粉投與之調配物可根據習知方法製備且可與其他治療劑(諸如此前用於治療或預防如下所述病症之化合物)一起傳遞。
適合於陰道投與之調配物可以陰道栓劑、棉球、乳膏、凝膠、糊狀物、泡沫或除活性成分外亦含有諸如此項技術中已知為適當之載劑的噴霧調配物形式呈現。
調配物可包裝於單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿 及小瓶)中，且可在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需在臨用前添加無菌注射用液體載劑(例如水)。即用注射溶液及懸浮液係由先前所述種類之無菌散劑、顆粒及錠劑來製備。較佳單位劑量調配物為含有如上文所述之日劑量或單位日次劑量或其適當部分之活性成分的調配物。
本發明進一步提供包含至少一種如上文所定義之活性成分以及其獸醫學載劑之獸醫學組合物。獸醫學載劑為可用於達成投與組合物之目的之物質且可為其他方面在獸醫學技術中為惰性或可接受的且與活性成分相容之固體、液體或氣體物質。此等獸醫學組合物可非經腸、經口或由任何其他所需途徑投與。
組合療法
式I化合物可單獨或與其他治療劑組合使用以治療本文所述之疾病或病症，諸如過度增生性病症(例如癌症)。在某些實施例中，式I化合物與具有抗過度增殖性質或可用於治療過度增生性病症(例如癌症)之第二化合物組合成醫藥組合調配物或組合療法給藥方案。醫藥組合調配物或給藥方案中之第二化合物較佳具有與式I化合物互補之活性以使其不會對彼此造成不利影響。該等化合物適宜地以對預期目的有效之量以組合形式存在。在一個實施例中，本發明組合物包含式I化合物與諸如本文所述之化學治療劑之組合。
組合療法可以同時或依序方案投與。當依序投與時，可以兩次或兩次以上投藥來投與組合。該組合投藥包括使用 各別調配物或單一醫藥調配物共同投藥及以任一次序連續投藥，其中較佳地存在兩種(或所有)活性劑同時發揮其生物活性的時間段。
上述共同投與之藥劑中之任一者的合適劑量為目前所用之劑量且可因新鑑別之藥劑與其他化學治療劑或治療之組合作用(協同)而降低。
組合療法可提供「協同作用」且證明「協同性」，亦即，活性成分一起使用時所達成之效應大於獨立使用該等化合物所產生之效應的總和。當活性成分(1)共調配成組合之單位劑量調配物且同時投與或傳遞；(2)以各別調配物形式交替或同時傳遞；或(3)藉由某一其他方案傳遞時，可獲得協同作用。當以交替療法傳遞時，協同作用可在依序投與或傳遞(例如藉由各別注射器之不同注射、各別丸劑或膠囊、或各別輸注)化合物時實現。一般而言，在交替療法期間，依序(亦即，連續)投與有效劑量之各活性成分，而在組合療法中，一起投與有效劑量之兩種或兩種以上活性成分。
在抗癌療法之一特定實施例中，式I化合物或其立體異構體、幾何異構體、互變異構體、溶劑合物、代謝物或醫藥學上可接受之鹽或前藥，可與其他化學治療劑、激素或抗體藥劑(諸如本文所述之者)組合，以及與手術療法及放射療法組合。根據本發明之組合療法因此包含投與至少一種式I化合物或其立體異構體、幾何異構體、互變異構體、溶劑合物、代謝物或醫藥學上可接受之鹽或前藥，及 使用至少一種其他癌症治療方法。式I化合物及其他醫藥學活性化學治療劑之量以及相對投藥時序之選擇應能達成所需組合治療作用。
式I化合物之代謝物
本文所述之式I之活體內代謝產物亦在本發明之範疇內。該等產物可例如由所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、脫醯胺、酯化、脫酯、酶促裂解及其類似過程而產生。因此，本發明包括式I化合物之代謝物，包括藉由一種包含使本發明化合物與哺乳動物接觸足以產生其代謝產物之時間段的方法所產生之化合物。
代謝產物典型地藉由以下來鑑別：製備經同位素放射性標記(例如14C或3H)之本發明化合物，將其以可偵測劑量(例如超過約0.5 mg/kg)非經腸投與動物(諸如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴或人類)，持續足以發生代謝之時間(典型地為約30秒至30小時)，及自尿、血液或其他生物樣品中分離其轉化產物。此等產物由於經標記而易於分離(其他產物係藉由使用能夠結合代謝物中殘存之抗原決定基之抗體來分離)。代謝物結構係以習知方式測定，例如MS、LC/MS或NMR分析。一般而言，代謝物之分析係以與熟悉此項技術者熟知之習知藥物代謝研究相同之方式進行。代謝產物只要不是另外在活體內發現，就可用於針對本發明化合物之治療性給藥的診斷分析中。
製品
在本發明之另一實施例中，提供含有可用於治療上述疾 病及病症之物質的製品或「套組」。該套組包括含式I化合物之容器。該套組進一步包含在容器上或與容器相聯之標籤或包裝插頁。術語「包裝插頁」用於指通常包括在治療產品之商業包裝內的說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投藥、禁忌症及/或有關該等治療產品使用之警告的資訊。合適容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡殼包裝等。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。該容器可保存有效治療病狀之式I或式II化合物或者其調配物，且可具有無菌接取口(例如，該容器可為靜脈內溶液袋或具有皮下注射針可刺穿之塞子的小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為式I化合物。標籤或包裝插頁指示，該組合物用於治療所選病狀，諸如癌症。此外，標籤或包裝插頁亦可指示，欲治療之患者為患有諸如過度增生病症、神經退化、心臟肥大、疼痛、偏頭痛或神經外傷疾病或事件之病症的患者。在一實施例中，標籤或包裝插頁指示，包含式I化合物之組合物可用於治療由異常細胞生長所引起之病症。標籤或包裝插頁亦可指示，該組合物可用於治療其他病症。其他或另外，製品可進一步包括含醫藥學上可接受之緩衝劑的第二容器，該緩衝劑諸如為抑菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液及右旋糖溶液。其可進一步包括就商業及使用者觀點而言合需要之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
套組可進一步包含有關投與式I化合物及第二醫藥調配 物(若存在)之說明。舉例而言，若套組包括含式I化合物之第一組合物，及第二醫藥調配物，則該套組可進一步包含有關向有需要之患者同時、依序或分別投與第一及第二醫藥組合物的說明。
在另一實施例中，套組適於傳遞式I化合物之固體經口形式，諸如錠劑或膠囊。該套組較佳包括許多單位劑量。該等套組可包括具有以其預期使用次序定位之劑量的卡片。該套組之一個實例為「泡殼包裝」。泡殼包裝在包裝工業中為熟知的且廣泛用於包裝醫藥單位劑型。必要時，可提供記憶輔助工具，例如呈數字、字母或其他標誌形式或用以指示治療時程中可投與劑量之日子的日曆插頁。
根據一實施例，套組可包含：(a)含有式I化合物之第一容器；及視情況存在之(b)含有第二醫藥調配物之第二容器，其中第二醫藥調配物包含具有抗過度增殖活性之第二化合物。其他或另外，該套組可進一步包括含醫藥學上可接受之緩衝劑的第三容器，該緩衝劑為諸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液及右旋糖溶液。其可進一步包括就商業及使用者觀點而言合需要之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
在套組包含式I組合物及第二治療劑之某些其他實施例中，套組可包含用於容納各別組合物之容器，諸如分隔瓶(divided bottle)或分隔箔包裝(divided foil packet)，然而，各別組合物亦可容納於單一未分隔容器中。套組典型地包 含投與各別組分之說明。當各別組分較佳以不同劑型(例如經口及非經腸)投與時、以不同給藥時間間隔投與時或當處方醫師需要滴定組合之個別組分時，該套組形式特別有利。
式I化合物之製備
式I化合物可藉由包括與化學技術中熟知之方法類似之方法的合成途徑，特別是按照本文所含之描述及以下文獻中描述之用於其他雜環之方法來合成：Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,Katritzky及Rees編，Elsevier,1997，例如第3卷；Liebigs Annalen der Chemie,(9)：1910-16,(1985)；Helvetica Chimica Acta,41：1052-60,(1958)；Arzneimittel-Forschung，40(12)：1328-31,(1990)，各以引用的方式明確併入本文中。起始物質一般可自諸如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI)之商業來源獲得，或容易使用熟習此項技術者熟知之方法製備(例如藉由Louis F.Fieser及Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis，第1-23卷，Wiley,N.Y.(1967-2006編)，或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.編，Springer-Verlag，Berlin，包括增刊(亦經由Beilstein線上資料庫獲得)中大體上描述之方法製備)。
可用於合成式I化合物之合成化學轉化及保護基方法(保護及保護基脫除)以及必要試劑及中間物為此項技術中已知的，且包括例如R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene及P. G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley and Sons(1999)；及L.Paquette編，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其後續版本中描述之方法及試劑。
式I化合物可單獨製備，或製備為包含至少2種、例如5至1,000種化合物或10至100種化合物之化合物庫的形式。式I化合物庫可藉由組合型『分離及混合』方法，或藉由使用溶液相或固相化學之多個平行合成方法、藉由熟悉此項技術者已知之程序製備。因此，根據本發明另一態樣，提供一種化合物庫，其包含至少2種化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
通用程序及實例提供了用於製備式I化合物之例示性方法。熟習此項技術者應瞭解，可使用其他合成途徑合成式I化合物。儘管在圖式、通用程序及實例中描述並論述了特定起始物質及試劑，但其他起始物質及試劑可容易地加以取代，以提供多種衍生物及/或反應條件。此外，藉由所述方法製備之許多例示性化合物可按照本發明使用熟習此項技術者熟知之習知化學來進一步改質。
在製備式I化合物時，可能需要保護中間物之遠端官能基(例如一級胺或二級胺)。對此保護之需要將取決於遠端官能基之性質及製備方法之條件而變化。適合胺基保護基包括乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧羰基(BOC)、苯甲氧羰基(CBz)及9-茀基亞甲氧基羰基(Fmoc)。對此保護之需 要易於由熟習此項技術者確定。對於保護基及其使用之一般性描述，參見T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,New York,1991。
分離方法
在製備式I化合物之方法中，宜將反應產物彼此分離及/或與起始物質分離。每一步驟或一系列步驟之所需產物藉由此項技術中常用之技術分離及/或純化至所需之均質性程度。典型地，該等分離涉及多相萃取、自溶劑或溶劑混合物結晶、蒸餾、昇華或層析。層析可涉及多種方法，包括例如：逆相及正相層析；尺寸排阻層析；離子交換層析；高壓、中壓及低壓液相層析法及裝置；小型分析型層析；模擬移動床(SMB)及製備型薄層層析或厚層層析，以及小型薄層及急驟層析技術。
另一類分離方法涉及用所選可結合至所需產物、未反應之起始物質、反應副產物或其類似物或者使其可以其他方式分離之試劑處理混合物。該等試劑包括吸附劑或吸收劑，諸如活性碳、分子篩、離子交換介質或其類似物。或者，試劑可為酸(在鹼性物質之情況下)、鹼(在酸性物質之情況下)、結合試劑(諸如抗體、結合蛋白)、選擇性螯合劑(諸如冠醚)、液體/液體離子萃取試劑(LIX)或其類似物。適當分離方法之選擇取決於所涉及物質之性質(諸如在蒸餾及昇華時之沸點及分子量)、層析中極性官能基之存在或不存在、多相萃取中物質在酸性及鹼性介質中之穩定性及其類似因素而定。
非對映異構體混合物可基於其物理化學差異，藉由熟習此項技術者熟知之方法，諸如藉由層析法及/或分步結晶法分離成其個別非對映異構體。對映異構體可如下分離：藉由使對映異構體混合物與適當光學活性化合物(例如對掌性助劑，諸如對掌性醇或摩歇爾氏酸氯化物(Mosher's acid chloride))反應將其轉化為非對映異構體混合物，分離非對映異構體，且將個別非對映異構體轉化(例如水解)為相應的純對映異構體。一些本發明化合物亦可為滯轉異構體(例如經取代之聯芳基)且被視為本發明之一部分。對映異構體亦可藉由使用對掌性HPLC管柱來分離。
實質上不含其立體異構體之單一立體異構體(例如對映異構體)可藉由使用諸如使用光學活性解析劑形成非對映異構體的方法解析外消旋混合物來獲得(Eliel,E.及Wilen,S.「Stereochemistry of Organic Compounds,」John Wiley & Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,(1975)J.Chromatogr.,113(3)：283-302)。本發明對掌性化合物之外消旋混合物可藉由任何適合方法分離及離析，該方法包括：(1)與對掌性化合物形成離子性非對映異構體鹽，並藉由分步結晶法或其他方法分離；(2)與對掌性衍生化試劑形成非對映異構化合物，分離非對映異構體及轉化成純立體異構體；及(3)直接在對掌性條件下，諸如在對掌性吸附劑上，藉由HPLC或SFC(超臨界流體層析)分離實質上純或增濃之立體異構體，參見White及Burnett(2005)Jour.of Chrom.A1074：175-185；及「Drug Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology,」(1993)Irving W.Wainer編，Marcel Dekker,Inc.,New York)。
根據方法(1)，可藉由對映異構純對掌性鹼(諸如馬錢子鹼、奎寧、麻黃素、番木鼈鹼、α-甲基-β-苯乙胺(安非他命(amphetamine))及其類似物)與帶有酸性官能基之不對稱化合物(諸如羧酸及磺酸)反應來形成非對映異構體鹽。非對映異構體鹽可藉由分步結晶或離子層析來誘導分離。為分離胺基化合物之光學異構體，添加諸如樟腦磺酸、酒石酸、杏仁酸或乳酸之對掌性羧酸或磺酸，可產生非對映異構體鹽。
或者，利用方法(2)，使欲解析之基質與對掌性化合物之一種對映異構體反應，形成非對映異構體對(E.及Wilen,S.「Stereochemistry of Organic Compounds」，John Wiley & Sons,Inc.,1994，第322頁)。可藉由使不對稱化合物與對映異構純對掌性衍生化試劑(諸如薄荷基衍生物)反應來形成非對映異構化合物，接著分離非對映異構體且水解以產生純或增濃之對映異構體。測定光學純度之方法涉及製備外消旋混合物之對掌性酯，諸如薄荷基酯，例如氯甲酸(-)薄荷基酯(在鹼存在下)；或摩歇爾氏酯，乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯酯(Jacob III.J.Org.Chem.(1982)47：4165)，並分析1H NMR譜圖中兩種滯轉異構對映異構體或非對映異構體之存在。滯轉異構化合物之穩定非對映異構體可遵循用於分離滯轉異構體萘基-異喹啉之方法(WO 96/15111)，藉由正相及逆相層析分離及離析。利用方法 (3)，可藉由層析法，使用對掌性固定相，分離兩種對映異構體之外消旋混合物(「Chiral Liquid Chromatography」(1989)W.J.Lough編，Chapman and Hall,New York；Okamoto,J.Chromatogr.,(1990)513：375-378)。增濃或純化之對映異構體可藉由用於區分其他具有不對稱碳原子之對掌性分子之方法(諸如旋光度及圓二色性)進行區分。
通用製備程序
圖1顯示4-胺基吡唑化合物5之例示性合成。藉由在適合溶劑中或在無溶劑情況下用鹼處理，隨後添加諸如硫酸二甲酯之烷化劑，將4-硝基-1H-吡唑1轉化成2。藉由在適當溫度下於適合溶劑(諸如-78℃，THF)中，用諸如六甲基二矽烷胺基鋰或nBuLi之鹼處理，可將化合物2轉化成5-氯-4-硝基-1H-吡唑3。根據已知方法，藉由直接SnAr或過渡金屬催化之交叉偶合反應，例如鈴木(Suzuki)條件、薗頭(Sonogashira)條件、赫克(Heck)條件、布克瓦德(Buchwald)條件、哥德堡(Goldberg)條件，可將化合物3轉化成化合物4。可由4，藉由適合還原方法，諸如在四氫呋喃中用鋅粉及甲酸銨處理，或用H2及過渡金屬催化劑(諸如鈀/碳)氫化，來合成4-胺基吡唑5。
圖2顯示由羥醯胺化合物6例示性合成4-羧基-噻唑11。藉由在適合溶劑中用還原劑(諸如Na2S2O3，在水中)還原6，得到7，可在含適合鹼之適合溶劑中用醯化試劑，諸如在含碳酸氫鈉之二氯甲烷中用苯甲醯氯，將7轉化成8。可在適合溶劑中用含硫試劑，諸如在吡啶中用勞森氏試劑 (Lawesson's reagent)將化合物8轉化成9，且藉由適合Boc保護基加以保護，得到10。使用適合鹼及溶劑，諸如在甲醇及水中用LiOH，使10發生酯水解，得到11。
圖3顯示藉由12之C-2溴化隨後13之鈴木反應來例示性合成2-取代之4-羧基-5-胺基噻唑11。鈴木型偶合反應可用於藉由在式I化合物之合成中，置換噻唑環、吡啶環、吡嗪環或嘧啶環2位之鹵化物來連接雜環或雜芳基。舉例而言，可使2-溴(或氯)噻唑11與約1.5當量芳基、雜環基或雜芳基酸或酯試劑及過量碳酸鈉水溶液在乙腈中反應。添加催化量或更多之低價鈀試劑，諸如二氯化雙(三苯膦)鈀(II)。可使用多種酸或酸酯。酸酯包括頻哪醇酯(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)。另外，可保護雜環或雜芳基之氮，例如呈N-THP形式。在一些狀況下，使用乙酸鉀代替碳酸鈉來調整水層之pH值。反應可在壓力下在諸如Biotage Optimizer(Biotage,Inc.)之微波反應器中加熱至約140℃至150℃，持續10至30分鐘。用乙酸乙酯或另一有機溶劑萃取內含物。蒸發有機層後，可在二氧化矽上或藉由逆相HPLC純化鈴木偶合產物。
在鈴木偶合步驟期間可使用多種鈀催化劑來形成例示性式I化合物。在鈴木偶合反應中可使用低價Pd(II)及Pd(0)催化劑，包括PdCl2(PPh3)2、Pd(t-Bu)3、PdCl2 dppf CH2Cl2、Pd(PPh3)4、Pd(Oac)/PPh3、Cl2Pd[(Pet3)]2、Pd(DIPHOS)2、Cl2Pd(Bipy)、[PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2、Cl2Pd[P(鄰甲苯基)3]2、Pd2(dba)3/P(鄰甲苯基)3、Pd2(dba)/P(呋喃基)3、Cl2Pd[P(呋 喃基)3]2、Cl2Pd(PmePh2)2、Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2、Cl2Pd[P(C6F6)3]2、Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2、Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2，以及囊封催化劑Pd EnCatTM 30、Pd EnCatTM TPP30及Pd(II)EnCatTM BINAP30(US 2004/0254066)。
圖4顯示由4-胺基-5-氮雜環庚烷基吡唑化合物14與2-溴，4-羧基-5-胺基噻唑11偶合來製備5-氮雜環庚烷基-N-(吡唑-4-基)噻唑-甲醯胺化合物17的例示性合成。化合物14與11可使用諸如HATU、HBTU之醯胺偶合試劑及諸如二氯甲烷或DMF之適合溶劑來偶合。隨後可藉由使用適合酸或鹼，在諸如含HCl之二噁烷及水，或含三氟乙酸之二氯甲烷，或含K2CO3之乙腈之溶劑中脫除保護基，來將偶合中間物15轉化成化合物17。此外，當R5為鹵素基團(例如溴)時，化合物15可經歷鈴木或斯蒂爾(Stille)條件，得到化合物16。用含適合酸或鹼之適合溶劑，諸如含HCl之二噁烷及水，或含三氟乙酸之二氯甲烷，或含K2CO3之乙腈，在酸性或鹼性條件下，移除式16化合物之保護基，可得到化合物17。
圖5顯示由4-胺基，5-氮雜環庚烷基吡唑化合物14與2-溴-3-Boc-胺基-6-羧基-吡啶基化合物18偶合來製備6-胺基-N-(吡唑-4-基)吡嗪-甲醯胺化合物21的例示性合成。化合物14與18可使用諸如HATU、HBTU之醯胺偶合試劑及諸如二氯甲烷或DMF之適合溶劑來偶合。偶合中間物19可經歷鈴木或斯蒂爾條件，得到化合物20。用含適合酸或鹼之適合溶劑，諸如含HCl之二噁烷及水，或含三氟乙酸之二氯甲 烷，或含K2CO3之乙腈，在酸性或鹼性條件下，移除化合物20之保護基，可得到化合物21。
圖6顯示由4-胺基-5-二氮雜環庚烷基吡唑化合物22與2-溴-3-取代，6-羧基-5-胺基吡嗪基化合物23偶合來製備6-胺基-N-(吡唑-4-基)吡嗪-甲醯胺化合物26的例示性合成。化合物22與23可使用諸如HATU、HBTU之醯胺偶合試劑及諸如二氯甲烷或DMF之適合溶劑來偶合。偶合中間物24可經歷鈴木或斯蒂爾條件，得到化合物25。用含適合酸或鹼之適合溶劑，諸如含HCl之二噁烷及水，或含三氟乙酸之二氯甲烷，或含K2CO3之乙腈，在酸性或鹼性條件下，移除化合物25之保護基，可得到化合物26。
圖7顯示由2,3,6,7-四氫-1H-氮呯27例示性合成5-疊氮基-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷32。藉由用m-CPBA處理，或文獻中所述類似方法，可將化合物27轉化成化合物28。可由化合物28，藉由根據文獻方法用疊氮化鈉使環氧化物開環，來合成化合物29。可藉由適合酸性或鹼性或者氫化條件，或其他已知文獻方法，移除化合物29之R保護基。可藉由在氟化鉀存在下於諸如二甲亞碸之適合溶劑中加熱，使化合物30與化合物3反應，得到化合物31。可使用氫化鈉及碘甲烷或藉由文獻中所述其他甲基化方法使化合物31發生O-烷基化，得到5-疊氮基-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷化合物32。化合物31可藉由諸如DAST之親核氟化試劑轉化成32。化合物31可藉由氧化成酮，隨後在諸如鋰或格林納試劑(Grignard reagent)之有機金屬試劑存 在下發生親核加成反應，或隨後利用諸如DAST之親核氟化試劑而轉化成32。
圖8顯示由6,7-二氫-1H-氮呯-3(2H)-酮33例示性合成5-Boc-胺基-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷39。可藉由在TMS-疊氮化物及Amberlite IRA 900F樹脂存在下，於諸如乙腈之適合溶劑中加熱，來將化合物33轉化成5-疊氮基-氮雜環庚烷-3-酮34。使用含硼氫化鈉之THF及水或藉由文獻中所述之方法還原酮34，得到5-疊氮基-氮雜環庚烷-3-醇35。可藉由酸性或鹼性或者氫化條件，或藉由文獻方法，移除35之R保護基。所得胺可藉由在氟化鉀存在下與5-氯-4-硝基-1H-吡唑3一起在諸如二甲亞碸之溶劑中加熱，而轉化成5-疊氮基-1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇36。化合物36可使用與三苯基膦一起在THF及水中一起加熱來進行施陶丁格疊氮化物還原，隨後使用所述方法或文獻中所述之方法，用諸如Boc保護基之適合保護基保護所得胺，而轉化成5-(N-Boc)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇37。藉由諸如用戴斯-馬丁試劑(Dess-Martin reagent)處理或如文獻中所述之方法氧化37，得到1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-側氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸叔丁酯38。可藉由在諸如二氯甲烷之適合溶劑中用脫氧-Fluor®處理或藉由文獻中所述之方法，將化合物38轉化成39。可藉由用諸如鋰或格林納試劑等有機金屬試劑處理，或藉由文獻中所述之方法，將化合物38轉化成39。
圖9顯示由4-硝基-1H-吡唑2例示性合成5-(4-疊氮基-1-氟 環庚基)-4-硝基-1H-吡唑45。在適當溫度下於諸如THF之適合溶劑中，用(Z)-環庚-4-烯酮40及諸如六甲基二矽烷胺基鋰之鹼，或藉由文獻中所述之方法處理4-硝基-1H-吡唑2，得到1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯醇41。在諸如DCM之適合溶劑中用脫氧-Fluor®或文獻中所述之方法處理41，得到5-(1-氟環庚-4-烯基)-4-硝基-1H-吡唑42。用m-CPBA或藉由文獻中報導之類似程序使42環氧化，得到5-(4-氟-8-氧雜雙環[5.1.0]辛-4-基)-4-硝基-1H-吡唑43。根據文獻方法(諸如疊氮化鈉)，用疊氮化鈉使環氧化物43開環，得到2-疊氮基-5-氟-5-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚醇44。使用氫化鈉及碘甲烷，或藉由文獻中所述之其他甲基化方法使44發生O-烷基化，得到45，其中R2為O-烷基且R3為H。可藉由用諸如DAST之試劑進行親核氟化，將化合物44轉化成45，其中R2及R3為H。化合物44可藉由氧化成酮，隨後用諸如鋰或格林納試劑之有機金屬試劑進行親核加成反應，或隨後用諸如DAST進行親核氟化反應，而轉化成45，其中R2(R5)為烷基且R3為F。
圖10顯示由5-氯-4-硝基-1H-吡唑3例示性合成3-氟-1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺52。將3與水合哌啶-4-酮鹽酸鹽及氟化鉀在諸如二甲亞碸之適合溶劑中加熱，或使用文獻中所述之方法加熱3，得到1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮46。將46與三甲基矽烷基氯及三乙胺在諸如DMF之適合溶劑中加熱，或使用文獻中所述之方法加熱46，得到1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)-4-(三甲基矽烷氧基)- 1,2,3,6-四氫吡啶47。在適合溫度下使用SelectFluor®在乙腈中，或使用文獻中所述之方法使47氟化，得到3-氟-1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮48。可在適合溫度下於諸如二氯甲烷之適合溶劑中使用重氮乙酸乙酯及三氟化硼合二乙醚，或使用文獻中所述之方法，使48樹脂膨脹得到6-氟-1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-側氧基氮雜環庚烷-4-甲酸乙酯49。藉由在適合溫度下在鹽酸存在下加熱，或藉由文獻中所述之方法，使49脫羧，得到3-氟-1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-酮50。藉由文獻中所述之方法使50還原胺化，得到3-氟-1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺51。可在諸如二氯甲烷之適合溶劑中使用三氟乙酸酐及二異丙基乙胺，或使用文獻中所述之其他方法，用諸如三氟乙醯胺之保護基保護51之胺，得到胺經保護之52。
實例
實例1 5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑
向含有4-硝基-1-H-吡唑(5 g，44.2 mmol)之500 mL圓底燒瓶中添加氫氧化鈉(1 M,200 mL)及硫酸二甲酯(31 mL，330 mmol)。在室溫下攪拌混合物72小時且用CH2Cl2(2×150 mL)萃取混合物。分離有機層且蒸餾移除溶劑，得到呈白色固體狀之1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(4.30 g，76%)。
遵循WO 2007/99326，向500 mL三頸圓底燒瓶中添加1- 甲基-4-硝基-1H-吡唑(4.30 g，33.8 mmol)及THF(12 mL)。混合物冷卻至-78℃且經由加液漏斗於20分鐘內逐滴添加含六甲基二矽烷胺基鋰之THF(1 M，88.4 mL，90 mmol)。攪拌褐色混合物30分鐘且於30分鐘內升溫至-45℃。混合物再冷卻至-78℃且經由加液漏斗於15分鐘內添加溶解於THF(20 mL)中之六氯乙烷(10.5 g，44.2 mmol)。混合物攪拌2.5小時，由-78℃升溫至-40℃且藉由LCMS監測反應。反應完成後，用飽和NH4Cl溶液(150 mL)淬滅反應，且添加乙酸乙酯(100 mL)。分離有機層且水層用乙酸乙酯(100 mL)萃取。合併之有機層用水(150 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥且蒸餾移除有機溶劑。粗產物經由急驟層析法(CH2Cl2/7% MeOH)純化，得到呈白色固體狀之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.40 g，20%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.13(s,1H),3.92(s,3H)；ESIMS m/z=162.0(M+1)
實例2 1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
向10 mL微波小瓶中添加來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(150 mg，0.93 mmol)、氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(220 mg，1.02 mmol)。添加乙醇(4 mL)及二異丙基乙胺(1.00 mL，8.00 mmol)且混合物用微波在130℃ 下照射60分鐘。冷卻混合物，濃縮且經由急驟層析法(庚烷/乙酸乙酯20%至80%)純化，得到黃色油狀物(306 mg，97%)。
向50 mL圓底燒瓶中添加硝基化合物(306 mg，0.90 mmol)、鐵(202 mg，3.61 mmol)、氯化銨(241 mg，4.5 mmol)、乙醇(10 mL)及水(1.5 mL)。混合物在60℃下攪拌1小時且藉由LCMS監測反應。反應完成後，混合物經由矽藻土墊過濾且用乙酸乙酯(30 mL)及10% K3PO4水溶液(30 mL)洗滌。有機層用水(30 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥且蒸餾移除有機溶劑，得到呈褐色油狀之1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯，純度>98%(264 mg，95%)。ESIMS m/z=310.1(M+1)。
實例3 1-(1-甲基-4-胺基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基胺基甲酸第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以哌啶-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之1-(1-甲基-4-胺基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基胺基甲酸第三丁酯(173 mg，70%)。ESIMS m/z=296.1(M+1)。
實例4 1-(1-甲基-4-胺基-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-基胺基甲酸(S)-第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以哌啶-3-基胺基甲酸(S)-第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之1-(1-甲基-4-胺基-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-基胺基甲酸(S)-第三丁酯(206 mg，75%)。ESIMS m/z=296.1(M+1)。
實例4a 1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-(三氟甲基)哌啶
遵循關於中間物22之程序，以5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑及3-(三氟甲基)哌啶為起始物，得到呈黃色油狀之107(499 mg，97%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),3.77(s,3H),3.41-3.32(m,1H),3.31-3.18(m,2H),3.07-2.97(m,1H),2.54-2.40(m,1H),2.13-2.06(m,1H),1.97-1.90(m,1H),1.80-1.60(m,2H)。
實例5 1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯啶-3-基胺基甲酸(S)-第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以吡咯啶-3-基胺基甲酸(S)-第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之1-(4- 胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯啶-3-基胺基甲酸(S)-第三丁酯(162 mg，62%)。ESIMS m/z=282.1(M+1)。
實例6 4-((4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基氧基)甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
向50 mL圓底燒瓶中添加來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(100 mg，0.60 mmol)、4-(羥甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(200 mg，0.93 mmol)及DMF(10 mL)。緩慢添加NaH(37 mg，1.55 mmol)且混合物攪拌1小時。濃縮混合物且經由急驟層析法(庚烷/乙酸乙酯20%至80%)純化，得到油狀物(150 mg，70%)。
向50 mL圓底燒瓶中添加硝基化合物(150 mg，0.44 mmol)、鐵(173 mg，3.10 mmol)、氯化銨(199 mg，3.71 mmol)、乙醇(10 mL)及水(1.5 mL)。混合物在60℃下攪拌1小時且藉由LCMS監測反應。反應完成後，混合物經由矽藻土墊過濾且用乙酸乙酯(30 mL)及10% K3PO4水溶液(30 mL)洗滌。有機層用水(30 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥且蒸餾移除有機溶劑，得到呈褐色油狀之4-((4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基氧基)甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯，純度>98%(135 mg，99%)。ESIMS m/z=311.1(M+1)。
實例7 1-(1-甲基-4-胺基-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以哌啶-3-基胺基甲酸(R)-第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之1-(1-甲基-4-胺基-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(187 mg，68%)。ESIMS m/z=296.1(M+1)。
實例8 4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
遵循如實例6中所述之程序且以4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(102 mg，50%)。ESIMS m/z=297.1(M+1)
實例9 1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯啶-3-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以吡咯啶-3-基胺基甲酸(R)-第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯啶-3-基胺基甲酸(R)-第三 丁酯(159 mg，61%)。ESIMS m/z=282.1(M+1)。
實例10 4-((4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基胺基)甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以4-(胺基甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之4-((4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基胺基)甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(124 mg，43%)。ESIMS m/z=310.1(M+1)。
實例11 (1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯啶-3-基)甲基胺基甲酸(S)-第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以吡咯啶-3-基甲基胺基甲酸(R)-第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯啶-3-基)甲基胺基甲酸(S)-第三丁酯(230 mg，84%)。ESIMS m/z=296.1(M+1)
實例12 (1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯啶-3-基)甲基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以吡咯啶-3-基甲基胺基甲酸(S)-第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯啶-3-基)甲基胺基甲酸(R)-第三丁酯(200 mg，73%)。ESIMS m/z=296.1(M+1)。
實例13 (1-(4-胺基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以哌啶-4-基甲基胺基甲酸第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之(1-(4-胺基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯(270 mg，98%)。ESIMS m/z=310.1(M+1)。
實例14 (1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-基)甲基胺基甲酸(S)-第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以哌啶-3-基甲基胺基甲酸(R)-第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-基)甲基胺基甲酸(S)-第三丁酯(270 mg，98%)。ESIMS m/z=310.1(M+1)。
實例15 (1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-基)甲基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以哌啶-3-基甲基胺基甲酸(S)-第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-基)甲基胺基甲酸(R)-第三丁酯(268 mg，98%)。ESIMS m/z=310.1(M+1)
實例16 1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(R)-苯甲基酯
遵循如實例2中所述之程序且以氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(R)-苯甲基酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(R)-苯甲基酯(191 mg，60%)。ESIMS m/z=344.1(M+1)。
實例17 1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(S)-苯甲基酯
遵循如實例2中所述之程序且以氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(S)-苯甲基酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸 (S)-苯甲基酯(220 mg，63%)。ESIMS m/z=344.1(M+1)。
實例18 3-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己-6-基胺基甲酸第三丁酯
遵循如實例2中所述之程序且以3-氮雜雙環[3.1.0]己-6-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之3-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己-6-基胺基甲酸第三丁酯(130 mg，48%)。ESIMS m/z=294.1(M+1)。
實例19 2-胺基-2-氰基乙酸乙酯
向2-氰基-2-(羥基亞胺基)乙酸(E)-乙酯(20 g，0.14 mol)於水(250 mL)中之經攪拌溶液中添加NaHCO3飽和水溶液(160 mL)，隨後添加Na2S2O4(60 g，0.423 mol)。使反應混合物升溫至35℃且再攪拌2小時。隨後用NaCl(150 g)使其飽和且用DCM(3×350 mL)萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈紅色油狀之2-胺基-2-氰基乙酸乙酯(7.8 g，43%)，不經額外純化即用於下一步驟。1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：4.45(s, 1H),4.34(q,J=7.0 Hz,2H),1.36(t,J=7.0 Hz,3H)；MS(ESI)m/z：129[M+H+]。
實例20 2-苯甲醯胺基-2-氰基乙酸乙酯
向化合物2-胺基-2-氰基乙酸乙酯(0.64 g，5 mmol)於DCM(15 mL)中之經攪拌溶液中添加NaHCO3飽和水溶液(15 mL)。在劇烈攪拌下，添加苯甲醯氯(0.84 g，6 mmol)。反應混合物在環境溫度下再攪拌30分鐘，此時將其用DCM(3×15 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌且經Na2SO4乾燥，過濾，真空濃縮。所得殘餘物藉由矽膠管柱層析法(5：1 PE/EtOAc)純化，得到呈白色固體狀之2-苯甲醯胺基-2-氰基乙酸乙酯(0.25 g，22%)：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：7.83-7.85(m,2H),7.59(t,J=7.5 Hz,1H),7.49(t,J=7.5 Hz,2H),7.02(d,J=7.0 Hz,1H),5.72(d,J=7.5 Hz,1H),4.40(q,J=7.5 Hz,2H),1.39(t,J=7.0 Hz,3H)；MS(ESI)m/z：233[M+H+]。
實例21 5-胺基-2-苯基噻唑-4-甲酸乙酯
向化合物2-苯甲醯胺基-2-氰基乙酸乙酯(0.46 g，2 mmol)於吡啶(20 mL)中之經攪拌溶液中添加勞森氏試劑 (0.81 g，2 mmol)。反應混合物在回流下加熱15小時。隨後對其進行濃縮且用EtOAc(40 mL)稀釋。經稀釋混合物用水(3×20 mL)、鹽水(10 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析法(10：1 PE/EtOAc)純化，得到呈黃色固體狀之5-胺基-2-苯基噻唑-4-甲酸乙酯(0.2 g，40%)：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：7.80(d,J=6.5 Hz,1H),7.36-7.41(m,3H),4.43(q,J=7.0 Hz,2H),1.44(t,J=7.0 Hz,3H)；MS(ESI)m/z：249[M+H+]。
實例22 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-苯基噻唑-4-甲酸乙酯
向化合物5-胺基-2-苯基噻唑-4-甲酸乙酯(248 mg，1 mmol)於CH3CN(10 mL)中之溶液中依序添加DMAP(6 mg，0.05 mmol)及(Boc)2O(262 mg，1.2 mmol)。反應混合物在環境溫度下再保持30分鐘。隨後在真空中蒸發混合物，得到呈紅色固體狀之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-苯基噻唑-4-甲酸乙酯(340 mg，95%)，不經進一步純化即用於下一步驟。
實例23 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-苯基噻唑-4-甲酸
向化合物5-(第三丁氧羰基胺基)-2-苯基噻唑-4-甲酸乙酯(348 mg，1 mmol)於MeOH/H2O(10 mL，1：1)中之溶液中添加LiOH．H2O(20 mg，5 mmol)。反應混合物在50℃至55℃下加熱，直至起始物質在TLC中消失。在約0℃至4℃下對其進行冷卻且逐滴添加濃HCl，直至pH值為約5。所得混合物隨後用DCM(3×20 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(2×20 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析法(50：1 DCM：MeOH)純化，得到呈白色固體狀之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-苯基噻唑-4-甲酸(0.22 g，68%)：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.69(s,1H),7.89-7.91(m,2H),7.46-7.47(m,3H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：321[M+H+]。
實例24 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2-氟苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.70(s,1H),8.19-8.23(m,1H),7.42-7.45(m,1H),7.20-7.30(m,2H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：339[M+H+]。
實例25 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2,6-二氟苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CD3OD,500 MHz)δ(ppm)：7.42-7.46(m,1H),7.06(t,J=8.5 Hz,2H),1.47(s,9H)；MS(ESI)m/z：355[M+H+]。
實例26 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-氯苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2-氯苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-氯苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(DMSO,500 MHz)δ(ppm)：13.57(s,1H),10.05(s,1H),8.14-8.17(m,1H),7.63-7.65(m,1H),7.49-7.51(m,2H),1.53(s,9H)；MS(ESI)m/z：355[M+H+]。
實例27 2-(5-溴-2-氟苯基)-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將5-溴-2-氟苯甲醯氯轉化成2-(5-溴-2-氟苯基)-5-(第三丁氧羰基胺基)噻 唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.70(s,1H),8.32-8.34(m,1H),7.49-7.52(m,1H),7.09-7.13(m,1H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：418[M+H+]。
實例28 2-(5-溴-2-氯苯基)-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將5-溴-2-氯苯甲醯氯轉化成2-(5-溴-2-氯苯基)-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.70(s,1H),8.31(d,J=2.5 Hz,1H),7.47(dd,J=2.5 Hz,J=8.5 Hz,1H),7.35(d,J=9.0 Hz,1H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：433[M+H+]。
實例29 2-(3-溴苯基)-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將3-溴苯甲醯氯轉化成2-(3-溴苯基)-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.68(s,1H),8.08(s,1H),7.78(d,J=8.0 Hz,1H),7.56(d,J=8.0 Hz,1H),7.32(t,J=8.0 Hz,1H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：399 [M+H+]。
實例30 2-(4-溴-2-氟苯基)-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將4-溴-2-氟苯甲醯氯轉化成2-(4-溴-2-氟苯基)-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.67(s,1H),8.07(t,J=8.0 Hz,1H),7.42(d,J=9.5 Hz,1H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：417[M+H+]。
實例31 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸
在環境溫度下，向吡啶甲酸(1.23 g，10 mmol)、EDCHCl(1.91 g，10 mmol)及HOBT(1.35 g，10 mmol)於THF(80 mL)中之溶液中添加DIPEA(3.6 g，30 mmol)。反應混合物在相同溫度下保持1小時，此時添加2-胺基-2-氰基乙酸乙酯(1.28 g，10 mmol)於THF(5 mL)中之溶液。反應混合物在環境溫度下再攪拌6小時。隨後對其進行濃縮，且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(5：1 PE/EtOAc)純化，得到呈黃色固體狀之2-氰基-2-(吡啶甲醯胺基)乙酸乙酯 (0.7 g，30%)。
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2-氰基-2-(吡啶甲醯胺基)乙酸乙酯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.72(s,1H),8.61(d,J=4.5 Hz,1H),8.09(d,J=8.0 Hz,1H),7.81(t,J=7.5 Hz,1H),7.34(dd,J=5.5 Hz,J=7.0 Hz,1H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：322[M+H+]。
實例32 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-異丙基噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將異丁醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-異丙基噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.54(s,1H),3.16-3.21(m,1H),1.54(s,9H),1.37(d,J=7.0 Hz,6H)；MS(ESI)m/z：287[M+H+]。
實例33 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-環己基噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將環己烷甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-環己基噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.53(s,1H),2.84-2.89(m,1H),2.08-2.12(m,2H),1.84(dd,J=3.5 Hz,J=10.0 Hz, 2H),1.73(d,J=13.0 Hz,1H),1.53(s,9H),1.35-1.50(m,4H),1.25-1.27(m,1H)；MS(ESI)m/z：327[M+H+]。
實例34 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-鄰甲苯基噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2-甲基苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-鄰甲苯基噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CD3OD,500 MHz)δ(ppm)：7.34(s,1H),7.13-7.22(m,3H),2.32(s,3H),1.43(s,9H)；MS(ESI)m/z：335[M+H+]。
實例35 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-甲氧基苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2-甲氧基苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-甲氧基苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CD3OD,500 MHz)δ(ppm)：9.63(s,1H),8.27(d,J=7.5 Hz,1H),7.42(t,J=8.0 Hz,1H),7.09(t,J=7.5 Hz,1H),7.04(d,J=9.0 Hz,1H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：351[M+H+]。
實例36 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2-(三氟甲基)苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CD3OD,500 MHz)δ(ppm)：7.76(d,J=7.5 Hz,1H),7.58-7.64(m,3H),1.46(s,9H)；MS(ESI)m/z：389[M+H+]。
實例37 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-甲基噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將乙醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-甲基噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.62(s,1H),2.62(s,3H),1.54(s,9H)；MS(ESI)m/z：259[M+H+]。
實例38 5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸
在氮氣氛圍(N2)下，在0℃下將HCOOH(2.44 g，53 mmol)添加至Ac2O(6.48 g，63.6 mmol)中。使其升溫至環境溫度後，在50℃下加熱反應15小時。使其冷卻至環境溫度。隨後在0℃下將此混合酸酐逐滴添加至2-胺基-2-氰基 乙酸乙酯(128 mg，1 mmol)於無水THF(5 mL)中之溶液中。移除冷卻浴之後，反應物在環境溫度下再保持1小時。濃縮反應混合物且藉由矽膠管柱層析法(5：1 PE/EtOAc)純化，得到呈白色固體狀之2-氰基-2-甲醯胺基乙酸乙酯(110 mg，70%)。
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2-氰基-2-甲醯胺基乙酸乙酯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.70(s,1H),8.29(s,1H),1.55(s,9H)；MS(ESI)m/z：245[M+H+]。
實例39 2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸
向5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸(1.72 g，10 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液中分三份添加NBS(1.95 g，11 mmol)；反應混合物在環境溫度下攪拌1小時。真空濃縮反應物；所得殘餘物藉由矽膠管柱層析法(6：1石油醚-EtOAc)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸(1.75 g，70%)：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：13.65(s,1H),10.03(s,1H),1.49(s,9H)。MS(ESI)m/z：324[M+H+]
實例40 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2,5-二氟苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.68(s,1H),7.87-7.91(m,1H),7.15-7.26(m,1H),7.08-7.13(m,1H),1.57(s,9H)；MS(ESI)m/z：357[M+H+]。
實例41 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,4-二氟苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2,4-二氟苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,4-二氟苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.66(s,1H),8.16-8.21(m,1H),6.95-7.04(m,2H),1.62(s,9H)；MS(ESI)m/z：357[M+H+]。
實例42 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,3-二氟苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2,3-二氟苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,3-二氟苯基)噻 唑-4-甲酸：1H-NMR(CD3OD,400 MHz)δ(ppm)：7.45(s,1H),7.07-7.16(m,2H),1.42(s,9H)；MS(ESI)m/z：357[M+H+]。
實例43 2-苯甲基-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將2-苯基乙醯氯轉化成2-苯甲基-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.63(s,1H),7.27-7.35(m,5H),4.25(s,2H),1.50(s,9H)；MS(ESI)m/z：335[M+H+]。
實例44 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(喹啉-7-基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將喹啉-7-羰基氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(喹啉-7-基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(DMSO,500 MHz)δ(ppm)：10.14(s,1H),9.11(d,J=5 Hz,1h),8.68(s,1H),8.55(s,1H),8.21-8.25(m,2H),7.75-7.77(m,1H),1.54(s,9H)；MS(ESI)m/z：372[M+H+]。
實例45 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(咪唑并[1,2-a]吡啶- 2-基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羰基氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(DMSO,500 MHz)δ(ppm)：10.12(s,1H),8.58(d,5Hz,1H),8.45(s,1H),7.61(d,5Hz,1H),7.31-7.34(m,1H),6.97-6.99(m,1H),1.53(s,9H)；MS(ESI)m/z：361[M+H+]。
實例46 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-第三丁基噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將特戊醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-第三丁基噻唑-4-甲酸：1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ(ppm)：9.55(s,1H),1.55(s,9H),1.42(s,9H)；MS(ESI)m/z：301[M+H+]。
實例47 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(3-氯苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將3-氯苯甲醯 氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(3-氯苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(DMSO,500 MHz)δ(ppm)：9.67(s,1H),7.91(s,1H),7.72(d,J=7Hz,1H),7.38-7.40(m,2H),1.56s,9H)；MS(ESI)m/z：355[M+H+]。
實例48 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(4-氯苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23中之程序且如圖2中所示，將4-氯苯甲醯氯轉化成5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(4-氯苯基)噻唑-4-甲酸：1H-NMR(DMSO,500 MHz)δ(ppm)：9.66(s,1H),7.81(d,J=8.5 Hz,2H),7.42(d,J=8.5 Hz,2H),1.56(s,9H)；MS(ESI)m/z：355[M+H+]。
實例49 5-胺基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺
遵循如實例113中所述之程序，使1-甲基-1H-吡唑-4-胺、5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸反應，得到呈白色固體狀之5-胺基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺(13 mg，32%)經兩步驟。ESIMS m/z=336.1(M+1)
實例50 3-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯基胺基甲酸第三丁酯
向10 mL微波小瓶中添加來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(150 mg，0.93 mmol)、3-(第三丁氧羰基胺基)苯基酸(440 mg，1.86 mmol)、二氯[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)(152 mg，0.019 mmol)、1：1 M Na2CO3/KOAc溶液(1 mL)及乙腈(4 mL)。混合物用微波照射達到130℃，保持40分鐘，且冷卻混合物，濃縮且經由急驟層析法(庚烷/乙酸乙酯20%至95%)純化，得到黃色油狀物。向50 mL圓底燒瓶中添加硝基化合物(120 mg，0.90 mmol)、鐵(156 mg，2.8 mmol)、氯化銨(200 mg，3.7 mmol)、乙醇(10 mL)及水(1.5 mL)。混合物攪拌1小時且藉由LCMS監測反應。反應完成後，混合物經由矽藻土墊過濾且用乙酸乙酯(30 mL)及10% K3PO4水溶液(30 mL)洗滌。有機層用水(30 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥且蒸餾移除有機溶劑，得到呈褐色油狀之3-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯基胺基甲酸第三丁酯，經兩步驟純度>98%(120 mg，45%)。ESIMS m/z=289.1(M+1)
實例51 1-甲基-5-鄰甲苯基-1H-吡唑-4-胺
遵循如實例2中所述之程序且以鄰甲苯基酸為起始 物，經兩步驟獲得呈褐色油狀之1-甲基-5-鄰甲苯基-1H-吡唑-4-胺(148 mg，85%)。ESIMS m/z=188.1(M+1)
實例52 2-(4-環丙基-2-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
步驟1：三氟甲烷磺酸3-氟-4-硝基苯基酯
在0℃下，向3-氟-4-硝基苯酚(10.00 g，63.65 mmol)及三氟甲烷磺酸酐(20.0 mL，119 mmol，1.87 eq.)於無水DCM(100.0 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加三乙胺(33.27 mL，238.7 mmol，3.75 eq.)。所得褐色反應混合物在0℃下攪拌2小時，且隨後在環境溫度下攪拌16小時。反應混合物緩慢用水淬滅且用DCM(3×100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(1×)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。粗油狀物經由以0至65% DCM/己烷溶離之急驟層析法純化，得到15.67 g(85.1%)呈油狀之三氟甲烷磺酸3-氟-4-硝基苯基酯。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.23(t,J=8.52 Hz,1H),7.34-7.27(m,2H)。
步驟2：4-環丙基-2-氟-1-硝基苯
使三氟甲烷磺酸3-氟-4-硝基苯基酯(7.15 g，24.73 mmol)、環丙基酸(2.55 g，29.67 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)-二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷(1：1)之錯合物(1.62 g，1.98 mmol)及2 M碳酸銫水溶液(19.8 mL，39.56 mmol) 於甲苯(39.5 mL)中之混合物脫氣20分鐘。反應混合物在N2下於90℃下攪拌2.5小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(200 mL)稀釋且經由矽藻土墊過濾。濾液用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。粗殘餘物經由用0至75% DCM/己烷溶離之急驟層析法純化，得到4.11 g(91.7%)呈油狀之4-環丙基-2-氟-1-硝基苯。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 7.98(dd,J=10.2,6.6 Hz,1H),7.12-7.02(m,2H),2.11-1.97(m,1H),1.20-1.11(m,2H),0.89-0.82(m,2H)。
步驟3：4-環丙基-2-氟苯胺
在N2下，將4-環丙基-2-氟-1-硝基苯(3.36 g，18.55 mmol)、鐵粉(4.35 g，77.9 mmol)及2 M氯化銨水溶液(19.8 mL)及3：2：1 v/v EtOH：THF：H2O(86 mL)之混合物在回流下攪拌17小時。使反應混合物冷卻至室溫且經由矽藻土墊過濾。矽藻土墊用乙酸乙酯(約50 mL)充分沖洗。將飽和NaHCO3水溶液緩慢添加至濾液中以中和反應混合物。反應混合物用乙酸乙酯(3×200 mL)萃取。合併之有機層用水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。粗殘餘物經由用0至75%乙酸乙酯/己烷溶離之急驟層析法純化，得到2.80 g(99%)橙色油狀物，其在20℃下凝固。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 6.75-6.63(m,3H),3.57(s,2H),1.87-1.72(m,1H),0.93-0.83(m,2H),0.64-0.51(m,2H)；MS(ESI)m/z：152.3[M+H]+。
步驟4：4-環丙基-2-氟-1-碘苯
在0℃下，向4-環丙基-2-氟苯胺(1.63 g，10.78 mmol)於水(20 mL)中之經攪拌混合物中逐滴添加濃硫酸(8.6 mL，15.0 eq.)，同時溫度恆定保持在0℃。添加亞硝酸鈉(781.0 mg，11.32 mmol，1.05 eq.)於水(2.7 mL)中之溶液且攪拌5分鐘。此所得反應混合物隨後添加至碘化鉀(3.76 g，22.64 mmol，2.1 eq.)於水(9.7 mL)中之溶液中且反應混合物在60℃下攪拌3小時。將DCM(400 mL)添加至冷卻之反應物中。分離兩相層且水層用DCM(2×150 mL)萃取。合併之有機層用Na2S2O4飽和水溶液、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由用100%庚烷溶離之急驟層析法純化，得到2.01 g(71.28%)呈澄清油狀之4-環丙基-2-氟-1-碘苯。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.57(dd,J=8.0,6.9 Hz,1H),6.76(dd,J=9.4,1.9 Hz,1H),6.64(dd,J=8.2,1.9 Hz,1H),1.94-1.77(m,1H),1.09-0.95(m,2H),0.79-0.56(m,2H)。
步驟5：在高壓管中放入4-環丙基-2-氟-1-碘-苯(1.32 g，5.04 mmol)、雙頻哪醇酯酸酯(1.53 g，6.04 mmol)、乙酸鉀(1.98 g，20.15 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(368.5 mg，0.50 mmol)及N,N-二甲基甲醯胺(35 mL)。用N2使反應混合物脫氣15分鐘。密封容器且反應混合物在90℃下攪拌16小時。冷卻之反應混合物用乙酸乙酯(75 mL)及水(25 mL)稀釋且隨後經由矽藻土墊過濾。分離兩相層且有機層用水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。粗殘餘物經由用0至5% EA/庚烷溶離之急驟層 析法純化，得到859.0 mg(65.1%)呈澄清油狀之2-(4-環丙基-2-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.58(s,1H),6.83(d,J=7.7 Hz,1H),6.68(d,J=10.8 Hz,1H),1.91-1.81(m,1H),1.33(s,12 H),0.98(dd,J=8.3,2.0 Hz,2H),0.74-0.66(m,2H)
實例53 ((R)-1-{4-[(2-溴-5-第三丁氧羰基胺基-噻唑-4-羰基)-胺基]-2-甲基-2H-吡唑-3-基}-全氫-氮呯-4-基)-胺基甲酸苯甲基酯
向2-溴-5-(異丙氧基羰基胺基)-噻唑-4-甲酸(650.0 mg，2.01 mmol)及[(R)-1-(4-胺基-2-甲基-2H-吡唑-3-基)-氮雜環庚烷-4-基]-胺基甲酸苯甲基酯(828.9 mg，2.41 mmol，1.2 eq.)於無水N,N-二甲基甲醯胺(22 mL)中之經攪拌溶液中依序添加HATU(1.07 g，2.81 mmol，1.4 eq.)及N,N-二異丙基乙胺(0.88 mL，5.03 mmol，2.5 eq.)，且反應混合物在N2下在室溫下攪拌7天。反應混合物用乙酸乙酯(150 mL)稀釋。有機層用50%鹽水/水、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。粗品經由用45至100%乙酸乙酯/庚烷溶離之急驟層析法純化，得到1.30 g(79.7%)呈黏性凝膠 狀之((R)-1-{4-[(2-溴-5-第三丁氧羰基胺基-噻唑-4-羰基)-胺基]-2-甲基-2H-吡唑-3-基}-全氫-氮呯-4-基)-胺基甲酸苯甲基酯。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.28(s,1H),8.39(s,1H),7.74(s,1H),7.33(s,5H),5.09(s,2H),4.98(s,1H),3.89(s,1H),3.72(s,3H),3.36-3.21(m,2H),3.16-3.03(m,2H),2.19-2.01(m,2H),2.00-1.61(m,4H),1.51(s,9H)。
實例54 N-(5,5-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
將戴斯-馬丁高碘烷(2.3 g，5.4 mmol)分數份添加至4-疊氮基-5-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(1.3 g，4.5 mmol)於DCM(25 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌18小時後，混合物用DCM稀釋且依序用NaHCO3水溶液(40 mL)及Na2S2O3水溶液(20%，40 mL)淬滅。攪拌所得混合物20分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清油狀之4-疊氮基-5-側氧基氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(1.10 g，84%)。向此油狀物(1.10 g，3.8 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，3.5 mL，9.5 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加NaHCO3飽和水溶液 (20 mL)淬滅。觀察到起泡。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。粗產物經由矽膠管柱層析法(0-40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清油狀之5-疊氮基-4,4-二氟氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(0.65 g，56%)。將此油狀物溶解於THF(10 mL)及水(2 mL)中且添加三苯基膦(0.58 g，2.2 mmol)。在60℃下攪拌並加熱18小時後，減壓濃縮混合物。將粗產物溶解於DCM中且有機層用水洗滌，分離，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。向在水/冰浴中冷卻之含粗產物之DCM(20 mL)中添加DIPEA(1.1 mL，6.36 mmol)，隨後逐滴添加三氟乙酸酐(0.75 mL，5.3 mmol)。使混合物升溫至室溫，攪拌18小時且用DCM稀釋。添加水且分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清油狀之4,4-二氟5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(0.59 g，73%)。將此三氟乙醯胺(0.57 g，1.5 mmol)溶解於MeOH(50 mL)中且使其通過H-Cube®(全H2模式，70℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到N-(5,5-二氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺粗品。向氮雜環庚烷(0.37 g，1.5 mmol)於EtOH(4 mL)中之溶液中添加來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(0.73 g，4.5 mmol)及DIPEA(0.65 mL，3.8 mmol)。混合物在微波中於130℃下加熱6小時。減壓移除溶劑且粗產物經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色油狀之N-(5,5-二氟-1- (1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.31 g，56%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.05(s,1H),6.77(d,J=9.0 Hz,1H),4.72-4.58(m,1H),3.80(s,3H),3.55-3.39(m,2H),3.33-3.18(m,2H),2.52-2.17(m,3H),2.14-2.04(m,1H)。
實例55 4-(5-(4,4-二氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
使N-(5,5-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.29 g，0.78 mmol)於MeOH(20 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2模式，70℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到粗胺。向此胺(0.26 g，0.78 mmol)於DCM(15 mL)中之溶液中添加DIPEA(0.68 mL，3.9 mmol)、PyBOP(0.61 g，1.17 mmol)及來自實例25之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(0.30 g，0.86 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM稀釋且用水洗滌。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-80% EtOAc/異己烷)純化，得到呈白色固體狀之4-(5- (4,4-二氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(0.37 g，69%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.28(s,1H),8.71(s,1H),7.82(s,1H),7.42-7.33(m,1H),7.11-7.01(m,2H),6.72(d,J=9.0 Hz,1H),4.73-4.57(m,1H),3.77(s,3H),3.51-3.37(m,2H),3.36-3.25(m,2H),2.49-2.36(m,2H),2.25-2.03(m,2H),1.55(s,9H)。
實例56 3,3-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶
將來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(0.1 g，4.5 mmol)、3,3-二氟哌啶鹽酸鹽(0.14 g，0.93 mmol)及DIPEA(0.5 mL，2.8 mmol)於EtOH(3 mL)中之混合物在微波中於130℃下加熱1小時。再添加DIPEA(0.5 mL，2.8 mmol)及3,3-二氟哌啶鹽酸鹽(0.29 g，1.8 mmol)且混合物在微波中於130℃下加熱2小時。減壓移除溶劑且粗產物經由矽膠管柱層析法(0-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之3,3-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶(127 mg，83%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),3.80(s,3H),3.41-3.29(m,2H),3.26-3.04(m,2H),2.17-2.03(m,2H),1.97-1.88(m,2H)。
實例57 2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1- 甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
遵循實例55之程序，以3,3-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶及來自實例25之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈膏狀固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(57 mg，20%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.33(s,1H),8.67(s,1H),7.71(s,1H),7.41-7.32(m,1H),7.11-7.01(m,2H),3.76(s,3H),3.32(t,J=11.0 Hz,2 H),3.19-3.13(m,2H),2.10-1.97(m,2H),1.94-1.85(m,2H),1.53(s,9H)。
實例58 3-(甲基(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)胺基)丙基胺基甲酸第三丁酯
將來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(0.81 g，5 mmol)、3-胺基丙基胺基甲酸第三丁酯(0.85 g，4.88 mmol)及DIPEA(1.8 mL，10.5 mmol)於EtOH(5 mL)中之混合物在微波中於130℃下加熱90分鐘。冷卻後，減壓濃縮反應混合物且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷) 純化，得到呈黃色膠狀之3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基胺基)丙基胺基甲酸第三丁酯(1.27 g，85%)。將此膠狀物(0.3 g，1 mmol)、K2CO3(0.41 g，3 mmol)及碘甲烷(0.1 mL，1.58 mmol)於DMF(5 mL)中之混合物在60℃下攪拌18小時。再添加碘甲烷(0.1 mL，1.58 mmol)且在60℃下持續攪拌24小時。冷卻反應混合物且減壓濃縮。殘餘物在DCM(100 mL)中濕磨，過濾且減壓濃縮濾液。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色膠狀之3-(甲基(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)胺基)丙基胺基甲酸第三丁酯(0.122 g，38%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),4.60(s,1H),3.77(s,3H),3.20-3.14(m,4H),2.86(s,3H),1.72-1.61(m,2H),1.42(s,9H)。
實例59 2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(第三丁基-(3-甲基胺基)丙基胺甲醯基-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
使3-(甲基(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)胺基)丙基胺基甲酸第三丁酯(122 mg，0.39 mmol)於MeOH(15 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2模式，50℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑得到紅色油狀物(0.12 g)。向此油狀物於DCM中之溶液(10 mL)中添加來自實例 25之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(166 mg，0.47 mmol)、PyBOP(0.33 g，0.64 mmol)及DIPEA(0.5 mL，2.86 mmol)且混合物在室溫下攪拌66小時。添加水(20 ml)且持續攪拌30分鐘。分離各層且水層用DCM萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(第三丁基-(3-甲基胺基)丙基胺甲醯基-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(207 mg，90%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.37(s,1H),8.74(s,1H),7.87(s,1H),7.42-7.32(m,1H),7.10-7.02(m,2H),4.65(s,1H),3.75(s,3H),3.20-3.14(m,2H),3.10(t,J=7 Hz,2H),2.85(s,3H),1.76-1.66(m,2H),1.55(s,9H),1.39(s,9H)。
實例60 5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑
遵循實例1之程序，以1-乙基-4-硝基吡唑為起始物，得到呈無色固體狀之5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑(1.3 g，74%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.16(s,1H),4.26(q,J=7Hz,2H),1.50(t,J=7Hz,3H)。
實例61 5-氯-1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑
遵循實例1之程序，以1-環丙基甲基-4-硝基吡唑為起始物，得到呈無色油狀之5-氯-1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.16 g，56%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.17(s,1H),4.07(d,J=7Hz,2H),1.39-1.28(m,1H),0.66-0.59(m,2H),0.50-0.40(m,2H)。
實例62 5-氯-1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑
遵循實例1之程序，以1-環丙基-4-硝基吡唑為起始物，得到呈無色固體狀之5-氯-1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑(0.23 g，63%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.09(s,1H),3.62-3.54(m,1H),1.38-1.28(m,2H),1.25-1.13(m,2H)。
實例63 (R)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
在氫氣壓下，在10% Pd/C(1 g)存在下將4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(R)-第三丁酯(3.25 g，0.33 mmol)於MeOH(100 mL)中之溶液在室溫下攪拌1.5小時。混合物經由矽藻土過濾且減壓移除溶劑，得到呈淺灰色油狀之4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(R)-第三丁酯(2 g，100%)。在室溫下於5分鐘內向此油狀物(1.8 g，8.4 mmol)及DIPEA(3 mL，17.18 mmol)於DCM(100 mL)中 之經攪拌溶液中逐滴添加三氟乙酸酐(1.31 mL，9.27 mmol)且攪拌所得淺黃色溶液18小時。添加飽和碳酸氫鈉水溶液(150 mL)且持續攪拌1小時。分離各層，使有機物通過相分離柱且減壓移除溶劑，得到呈淺黃色油狀之4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(R)-第三丁酯(2.61 g，100%)。在室溫下向此油狀物(2.6 g，8.38 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(25 mL)且攪拌混合物2小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM中並使其通過SCX管柱，用DCM及MeOH洗滌且用含1 N氨之MeOH溶離。減壓移除溶劑，得到呈淺黃色油狀之(R)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(1.3 g，74%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.83(s,1H),4.44-4.37(m,1H),3.13-3.03(m,2H),2.88(dt,J=13.2,6.6 Hz,1H),2.65-2.55(m,1H),2.03-1.79(m,3H),1.75(s,1H),1.69-1.58(m,3H)。
實例64 (S)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循實例510之程序，以4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(S)-第三丁酯為起始物，得到呈淺黃色油狀之(S)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(1.35 g，75%，經歷三個步驟)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.86(s,1H),4.44-4.37(m,1H),3.15-3.03(m,2H),2.92-2.81(m, 1H),2.67-2.55(m,1H),2.02-1.81(m,4H),1.76-1.56(m,3H)。
實例64a 3-氟-5-(4-甲氧基苯甲氧基)氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
將3-側氧基-2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-甲酸(Z)-第三丁酯(2 g，9.48 mmol)、(4-甲氧基苯基)甲醇(6.55 g，47.4 mmol)及DBU(0.14 mL，0.95 mmol)於乙腈(10 mL)中之溶液在60℃下加熱23小時。減壓移除溶劑。藉由矽膠管柱層析法(0-40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清油狀之5-(4-甲氧基苯甲氧基)-3-側氧基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(1.99 g)。向此油狀物(1.33 g，3.8 mmol)於水/THF(20 mL/20 mL)中之溶液中添加NaBH4且混合物攪拌1.5小時。減壓移除THF且水相用EtOAc(3×20 mL)萃取。減壓濃縮合併之有機層。經由矽膠管柱層析法(0-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清油狀之3-羥基-5-(4-甲氧基苯甲氧基)氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(1.30 g)。將此油狀物(1.15 g，3.28 mmol)溶解於DCM(20 mL)中且添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，5.93 mL，16.4 mmol)。混合物在室溫下攪拌18小時，用DCM(30 mL)稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(50 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-30% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清油 狀之3-氟-5-(4-甲氧基苯甲氧基)氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(746 mg，39%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.36-7.30(m,2H),6.95(d,J=8.2 Hz,2H),5.19-4.64(m,1H),4.65-4.43(m,2H),4.06-3.20(m,8H),2.35-1.67(m,4H),1.55-1.50(m,9H)。
實例64b 3-氟-5-(4-甲氧基苯甲氧基)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷
向3-氟-5-(4-甲氧基苯甲氧基)氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(740 mg，0.21 mmol)於MeOH(5 mL)中之溶液中添加HCl(4 M之1,4-二噁烷溶液，5.3 mL，21 mmol)且該溶液在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於MeOH中，並將其裝載至SCX管柱上。該管柱用MeOH洗滌且用含7 N氨之MeOH溶離。減壓移除溶劑，得到黃色油狀物。向此油狀物於無水DMSO中之溶液(15 mL)中添加氟化鉀(0.32 g，8.4 mmol)及5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(372 mg，2.31 mmol)且混合物在65℃下加熱16小時。在冷卻至室溫後，混合物用水(300 mL)稀釋且用EtOAc(2×50 mL)萃取。合併之有機層用水(3×50 mL)洗滌且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(20-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之3-氟-5-(4-甲氧基苯甲氧基)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷(300 g，55%，經歷兩步 驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.33-7.23(m,3H),6.89-6.86(m,2H),4.82-4.66(m,2H),4.49-3.93(m,1H),3.81(s,3H),3.30-2.99(m,4H),2.95-2.74(m,4H),2.35-2.03(m,2H),1.98-1.83(m,2H)。
實例65 N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循實例503之程序，以5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑及2,2,2-三氟-N-(六氫-1H-氮呯-4-基)-乙醯胺為起始物，得到呈淺黃色膠狀之N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.136 g，55%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07(s,1H),6.39-6.37(m,1H),4.22-4.19(m,1H),4.12(q,J=7 Hz,2H),3.42-3.35(m,1H),3.27-3.18(m,3H),2.25-2.05(m,2H),2.00-1.75(m,4H),1.47(t,J=7 Hz,3H)。
實例66 (R)-N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循實例503之程序，以5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑及 (R)-2,2,2-三氟-N-(六氫-1H-氮呯-4-基)-乙醯胺(0.1 g，0.476 mmol)為起始物，得到呈淺黃色膠狀之(R)-N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.1 g，60%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07(s,1H),6.39-6.36(m,1H),4.23-4.19(m,1H),4.12(q,J=7 Hz,2H),3.42-3.35(m,1H),3.27-3.18(m,3H),2.25-2.05(m,2H),2.00-1.75(m,4H),1.47(t,J=7 Hz,3H)。
實例67 (S)-N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循實例503之程序，以5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑及(S)-2,2,2-三氟-N-(六氫-1H-氮呯-4-基)-乙醯胺為起始物，得到呈淺黃色膠狀之(S)-N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.12 g，44%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07(s,1H),6.42-6.40(m,1H),4.22-4.18(m,1H),4.12(q,J=7Hz,2H),3.42-3.35(m,1H),3.27-3.18(m,3H),2.25-2.05(m,2H),2.00-1.75(m,4H),1.47(t,J=7Hz,3H)。
實例68 (R)-N-(1-(1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循實例503之程序，以5-氯-1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑及(R)-2,2,2-三氟-N-(六氫-1H-氮呯-4-基)-乙醯胺為起始物，得到呈淺黃色膠狀之(R)-N-(1-(1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.98 g，55%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.08(s,1H),6.42-6.39(m,1H),4.22-4.14(m,1H),4.00-3.85(m,2H),3.44-3.32(m,1H),3.30-3.15(m,3H),2.25-2.05(m,2H),2.00-1.75(m,4H),1.30-1.20(m,1H),0.70-0.62(m,2H),0.50-0.35(m,2H)。
實例69 (R)-N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循實例503之程序，以5-氯-1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑及(R)-2,2,2-三氟-N-(六氫-1H-氮呯-4-基)-乙醯胺為起始物，得到呈淺黃色膠狀之(R)-N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.105 g，61%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.96(s,1H),655-6.38(m,1H),4.30-4.15(m,1H),3.65-3.53(m,1H),3.55-3.25(m,4H),2.25-2.05(m,6H),1.35-1.05(m,4H)。
實例70 2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
使N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(136 mg，0.39 mmol)於MeOH(15 mL)中之溶液通過H-Cube®(70巴，25℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈紫色膠狀之粗胺(121 mg)。向此胺於DCM中之溶液(10 mL)中添加來自實例25之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(149 mg，0.42 mmol)、HATU(0.43 g，1.14 mmol)及DIPEA(1 mL，5.72 mmol)。混合物在室溫下攪拌18小時。添加水(30 ml)且持續攪拌15分鐘。分離各層且水層用DCM萃取。使合併之有機物通過相分離柱且減壓移除溶劑。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈無色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(170 mg，68%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39(s,1H),8.75(s,1H),7.95(s,1H),7.42-7.33(m,1H),7.12-7.02(m,2H),6.35(d,J=8 Hz, 1H),4.25-4.13(m,1H),4.05(q,J=7 Hz,2H),3.45-3.25(m,2H),3.23-3.10(m,2H),2.25-1.65(m,6H),1.56(s,9H),1.45(t,J=7 Hz,3H)。
實例71 2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循實例517之程序，以(R)-N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及來自實例25之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈膏狀固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(0.148 g，76%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.40(s,1H),8.76(s,1H),7.95(s,1H),7.43-7.34(m,1H),7.12-7.02(m,2H),6.37(d,J=8 Hz,1H),4.23-4.16(m,1H),4.05(q,J=7 Hz,2H),3.43-3.31(m,2H),3.25-3.15(m,2H),2.22-2.05(m,2H),2.03-1.89(m,2H),1.89-1.72(m,2H),1.57(m,12H)。
實例72 2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5- 基胺基甲酸(S)-第三丁酯
遵循實例517之程序，以(S)-N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及來自實例25之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈膏狀固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(S)-第三丁酯(151 mg，66%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.40(s,1H),8.75(s,1H),7.95(s,1H),7,45-7.34(m,1H),7.12-7.02(m,2H),6.37(d,J=8 Hz,1H),4.23-4.16(m,1H),4.05(q,J=7 Hz,2H),3.43-3.31(m,2H),3.25-3.15(m,2H),2.22-2.05(m,2H),2.03-1.89(m,2H),1.89-1.72(m,2H),1.55(s,9H),1.46(t,J=7 Hz,3H)。
實例73 2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-環丙基甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
使(R)-N-(1-(1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺與5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到呈膏狀固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-環丙基甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(136 mg，77%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39(s,1H),8.75(s,1H),7.95(s,1H),7.41-7.36(m,1H),7.10-7.02(m,2H),6.37(d,J=8 Hz,1H),4.25-4.10(m,1H),3.90-3.83(m,2H),3.43-3.31(m,2H),3.30-3.15(m,2H),2.25-2.05(m,2H),2.03-1.70(m,4H),1.57(s,9H)1.35-1.20(m,1H),0.64-0.59(m,2H),0.43-0.38(m,2H)。
實例74 2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-環丙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
使(R)-N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺與來自實例25之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到呈膏狀固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-環丙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(142 mg，73%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.40(s,1H),8.76(s,1H),7.87(s,1H),7.41-7.34(m,1H),7.10-7.00(m,2H),6.39(d,J=8 Hz,1H),4.25-4.15(m,1H),3.45-3.36(m,3H),3.35-3.15(m,2H),2.25-2.12(m,1H),2.10-1.70(m,5H),1.55(s,9H),1.35-1.15(m,2H),1.10-1.00(m,2H)。
實例75 2-(2-氟苯基)-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循實例506之程序，以(R)-N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈膏狀固體狀之2-(2-氟苯基)-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基 胺基甲酸(R)-第三丁酯(330 mg，72%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.37(s,1H),8.66(s,1H),8.15-8.05(m,1H),7.45-7.35(m,1H),7.30-7.15(m,3H),6.31(d,J=8 Hz,1H),4.25-4.15(m,1H),4.07(q,J=7 Hz,2H),3.43-3,31(m,2H),3.25-3.15(m,2H),2.25-2.10(m,2H),2.10-1.70(m,4H),1.57(s,9H)1.47(t,J=7 Hz,3H)。
實例76 2-(2-氟苯基)-4-(1-環丙基甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循實例506之程序，以(R)-N-(1-(1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈膏狀固體狀之2-(2-氟苯基)-4-(1-環丙基甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(350 mg，70%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.36(s,1H),8.66(s,1H),8.15-8.05(m,1H),7.45-7.35(m,1H),7.28-7.15(m,3H),6.31(d,J=7.5 Hz,1H),4.25-4.15(m,1H),3.95-3.85(m,2H),3.43-3.30(m,2H),3.28-3.15(m,2H),2.25-2.08(m,2H), 2.08-1.70(m,4H),1.55(s,9H),1.35-1.20(m,1H),0.70-0.60(m,2H),0.50-0.35(m,2H)。
實例77 2-(2-氟苯基)-4-(1-環丙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循實例506之程序，以(R)-N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈膏狀固體狀之2-(2-氟苯基)-4-(1-環丙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(370 mg，76%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.36(s,1H),8.69(s,1H),8.12-8.00(m,1H),7.45-7.30(m,1H),7.28-7.15(m,3H),6.40-6.27(m,1H),4.30-4.15(m,1H),3.43-3.15(m,5H),2.25-1.75(m,6H),1.55(s,9H),1.35-1.15(m,2H),1.10-0.95(m,2H)。
實例78 (1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯
將來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.9 g，11.77 mmol)、4-(boc-胺基甲基)哌啶(3.78 g，17.66 mmol)及DIPEA(6.15 mL，35.31 mmol)於EtOH(20 mL)中之溶液在微波中於130℃下加熱1小時。減壓移除溶劑且殘餘物再溶解於DCM中。有機層用水洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固體狀之(1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯(3.95 g，98%)。向此固體(3.84 g，11.30 mmol)於MeOH(125 mL)中之溶液中添加10% Pd/C(0.42 g，3.96 mmol)及甲酸銨(2.85 g，45.2 mmol)。混合物在80℃下加熱2.5小時。減壓濃縮混合物且殘餘物再溶解於EtOAc中並用水洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈褐色油狀之(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯(3.49 g，99%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.04(s,1H),4.63(s,1H),3.64(s,3H),3.11-3.07(m,6H),2.67(s,2H),1.77(d,J=12.8 Hz,2H),1.45(s,9H),1.39-1.26(m,2H)。1H被水峰掩蓋。
實例79 4-(5-(4-(丁氧基羰基胺基甲基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-溴噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
將PyBOP(2.84 g，5.46 mmol)及2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸(1.39 g，4.29 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液在室溫下攪拌30分鐘。添加(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯(1.2 g，3.90 mmol)及DIPEA(1.1 mL，6.24 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM稀釋且用水洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈粉色固體狀之4-(5-(4-(丁氧基羰基胺基甲基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-溴噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(2.32 g，96%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 10.62(s,1H),9.64(s,1H),7.23(s,1H),6.86(t,J=5.8 Hz,1H),3.62(s,3H),3.07(d,J=11.4 Hz,2H),2.95(t,J=11.5 Hz,2H),2.87(t,J=6.3 Hz,2H),1.67(d,J=12.3 Hz,2H),1.52(s,9H),1.45(s,1H),1.40(s,9H),1.27-1.16(m,2H)。
實例80 5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟-3-甲氧基苯基)噻唑-4-甲酸
遵循實例19-23之程序，以2,6-二氟-3-甲氧基苯甲醯氯 為起始物，得到呈淺黃色固體狀之5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟-3-甲氧基苯基)噻唑-4-甲酸(120 mg，70%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 7.32-7.23(m,1H),7.22-7.15(m,1H),3.88(s,3H),1.49(s,9H)。
實例81 1-(4-(5-第三丁氧羰基-胺基-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(R)-苯甲基酯
將PyBOP(1.31 g，2.52 mmol)及2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸(0.61 g，1.89 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液在室溫下攪拌30分鐘。添加氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(R)-苯甲基酯(0.62 g，1.80 mmol)及DIPEA(0.5 mL，2.88 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM稀釋且用水洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/己烷)純化，得到呈粉色固體狀之1-(4-(5-第三丁氧羰基-胺基-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(R)-苯甲基酯(1.04 g，89%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.28(s,1H),8.40(s,1H),7.75(s,1H),7.38-7.27(m,5H),5.09(s,2H),5.00- 4.92(m,1H),3.91-3.84(m,1H),3.73(s,3H),3.36-3.24(m,2H),3.15-3.04(m,2H),2.19-2.03(m,2H),1.96-1.79(m,3H),1.75-1.63(m,1H),1.52(s,9H)。
實例82 2-溴-4-(1-甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
使2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸與(R)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺偶合，得到呈橙紅色固體狀之2-溴-4-(1-甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(500 mg，74%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.27(s,1H),8.38(s,1H),7.74(s,1H),6.41(d,J=8.2 Hz,1H),4.23-4.15(m,1H),3.75(s,3H),3.38-3.29(m,2H),3.22-3.08(m,2H),2.22-2.08(m,2H),2.03-1.93(m,2H),1.88-1.69(m,2H),1.52(s,9H)。
實例83 (R)-4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷或(S)4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷
向250 mL三頸圓底燒瓶中添加4-胺基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(8.80 g，41.0 mmol)、三乙胺(29 mL，0.21 mol)及二氯甲烷(20 mL)。將混合物冷卻至-20℃且經由注射器於10分鐘內逐滴添加氯甲酸苯甲基酯(8.4 g，49 mmol)。將不均質混合物升溫至室溫且攪拌2小時。藉由LCMS監測反應且在反應完成後，蒸餾移除溶劑並經由急驟層析法(庚烷/乙酸乙酯10%至30%)純化粗產物，得到白色固體(6.0 g，42%)。
使用對掌性SFC(超臨界流體層析法，參見White及Burnett(2005)Jour.of Chrom.A1074：175-185)，在加壓二氧化碳下用Chiralpak OJ-H(100×4.6mm，5微米)管柱，15%甲醇/CO2，以200 ml/min流速，100巴壓力且在40℃下解析外消旋氮呯，保持5分鐘，得到兩種對映異構體(4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(R)-第三丁酯及4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(S)-第三丁酯)。
向100 mL圓底燒瓶中添加一種對映異構體、二噁烷(20 mL)及12 N HCl(4mL)。混合物攪拌2小時且蒸餾移除溶劑。產物，即異構體1之鹽酸鹽(2.2 g，37%)及異構體2之鹽酸鹽(2.4 g，40%)直接用於下一步驟中。
實例84 5-疊氮基-3-羥基-3-甲基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
向3-側氧基-2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-甲酸(Z)-第三丁酯(15 g，71.1 mmol)於乙腈(25 mL)中之經攪拌溶液中依序添加疊氮基三甲基矽烷(28.2 mL，213 mmol)及Amberlite IRA 900F樹脂(裝載量：2-3 mmol/g，18 g)且混合物在60℃下加熱4小時。在室溫下靜16小時置後，濾出樹脂，用乙腈洗滌且減壓移除溶劑，得到黃色油狀物。於10分鐘內向在冰-鹽浴中冷卻之此油狀物(813 mg，3.2 mmol)於無水Et2O(20 ml)中之溶液中逐滴添加甲基鋰之溶液(1.6 M之Et2O溶液，2.1 mL，3.36 mmol)。再攪拌1.5小時後，添加飽和NaHCO3(10 mL)且混合物用EtOAc(2×20 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，得到綠色油狀物(0.8 g，81%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 4.00-2.65(m,6H),2.30-1.60(m,4H),1.55-1.20(m,12H)。
實例84a 5-疊氮基-3-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇
將5-疊氮基-3-羥基-3-甲基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(0.8 g，3 mmol)於DCM(15 mL)及三氟乙酸(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌1.5小時，隨後減壓濃縮。將殘餘物溶解於 最小體積之DCM中，將其裝載至SCX管柱上，用DCM及MeOH洗滌且用含1 N氨之MeOH溶離。減壓移除溶劑。向殘餘物於無水DMSO中之溶液(10 mL)中添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(574 mg，3.56 mmol)及氟化鉀(675 mg，12.7 mmol)。混合物在氮氣下於70℃下加熱16小時，隨後冷卻且傾入水(300 mL)中。混合物用EtOAc(3×150 mL)萃取且合併之有機層用水(100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且濃縮，得到褐色膠狀物。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈四種非對映異構體混合物形式之5-疊氮基-3-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(0.38 g，47%，經歷2個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),4.12-3.90(m,1H),3.85及3.74(2s,3H),3.60-3.40(m,1H),3.40-3.30(m,1H),3.25-3.10(m,1H),3.00-2.60(m,2H),2.30-2.10(m,2H),2.00-1.70(m,2H),1.35-1.15(m,3H)。LCMS(ES+)m/z296(M+1)。
經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)將此混合物分離成兩對非對映異構體，得到：極性較小之非對映異構體對(111A)1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),4.12-3.95(m,1H),3.83(s,3H),3.60-3.50(m,1H),3.45-3.30(m,1H),3.25-3.10(m,1H),2.95-2.85(m,1H),2.55(br s,1H),2.30-2.10(m,2H),2.00-1.70(m,2H),1.25(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 296(M+1)。
極性較大之非對映異構體對(111B)1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ 8.04(s,1H),4.00-3.92(m,1H),3.90(s,3H),3.55-3.45(m,1H),3.40-3.30(m,1H),3.25-3.15(m,1H),3.00-2.85(m,1H),2.83(s,1H),2.30-2.10(m,3H),1.95-1.85(m,1H),1.20(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 296(M+1)。
實例84b 6-氟-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
將三苯基膦(338 mg，1.29 mmol)添加至5-疊氮基-3-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(380 mg，1.29 mmol)於THF(15 mL)及水(3 mL)中之經攪拌溶液中且混合物在60℃下加熱16小時。減壓濃縮反應混合物。將殘餘物溶解於DCM(20 mL)中且添加DIPEA(0.67 mL，3.86 mmol)及二碳酸二第三丁酯(565 mg，3.58 mmol)。混合物在室溫下攪拌20小時，減壓濃縮且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到淺橙色固體(0.4 g)。向此固體(0.4 g，1.29 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(1.2 mL，3.31 mmol，50%於THF中)且混合物在室溫下攪拌20小時。添加飽和NaHCO3(30 mL)且持續攪拌15分鐘。水層用DCM(30 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥並減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺橙色膠狀之6-氟-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基 甲酸第三丁酯(315 mg，64%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),5.30-4.90(m,1H),4.75-4.15(m,1H),3.90-3.75(m,3H),3.65-3.00(m,4H),2.55-1.75(m,4H),1.48(s,9H),1.45-1.25(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 394(M+Na)。
實例84c 6-羥基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較小之非對映異構體對)
將三苯基膦(113 mg，0.43 mmol)添加至5-疊氮基-3-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(極性較小之非對映異構體對)(103 mg，0.35 mmol)於THF(5 mL)及水(1 mL)中之經攪拌溶液中且混合物在60℃下加熱16小時。減壓濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於DCM(10 mL)及DIPEA(0.19 mL，1.09 mmol)中，之後添加二碳酸二第三丁酯(153 mg，0.70 mmol)。混合物在室溫下攪拌3小時，且隨後用飽和NaHCO3(15 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到淺橙色膠狀物(110 mg，86%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),4.62(br s,1H),4.2-4.10(m,1H),3.87(s,3H),3.60-3.45(m,1H),3.35-3.10(m,2H),2.90-2.80(m,1H),2.73 (br s,1H),2.25-2.10(m,1H),2.05-1.90(m,1H),1.80-1.65(m,2H),1.45(s,9H),1.19(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 370(M+1)。
實例84d 6-羥基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較大之非對映異構體對)
遵循關於中間物113之程序，以5-疊氮基-3-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(極性較大之非對映異構體對)為起始物，得到呈淺橙色膠狀之6-羥基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較大之非對映異構體對)(100 mg，97%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),4.70(br s,1H),4.05-3.90(m,1H),3.88(s,3H),3.60-3.50(m,1H),3.35-3.25(m,1H),3.15-3.05(m,1H),2.95-2.85(m,1H),2.30-2.10(m,1H),2.10-1.80(m,4H),1.45(s,9H),1.26(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 370(M+1)。
實例84e 6-甲氧基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較小之非對映異構體對)
室溫下，在氮氣下向5-疊氮基-3-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(極性較小之非對映異構體對)(115 mg，0.53 mmol)於無水DMF(2 mL)中之溶液中添加氫化鈉(25 mg，0.63 mmol，60%於油中之分散液)且混合物在室溫下攪拌10分鐘。添加碘甲烷(0.05 mL，0.80 mmol)且混合物在室溫下攪拌1小時。添加冰-水(50 mL)且混合物用EtOAc(2×25 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。將殘餘物溶解於THF(5 mL)中且添加水(1 mL)及三苯基膦(102 mg，0.39 mmol)。反應混合物在60℃下加熱16小時。減壓濃縮混合物。將殘餘物溶解於DCM(10 mL)及DIPEA(0.2 mL，1.15 mmol)中且添加二碳酸二第三丁酯(170 mg，0.78 mmol)。混合物在室溫下攪拌3小時，隨後用飽和NaHCO3(15 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺橙色膠狀之6-甲氧基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較小之非對映異構體對)(118 mg，79%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),4.55(br s,1H),4.20-4.10(m,1H),3.88(s,3H),3.45-3.25(m,2H),3.20(s,3H),3.20-2.95(m,2H),2.30-2.10(m,2H),1.80-1.50(m,2H),1.45(s,9H),1.08(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 384(M+1)。
實例84f 6-甲氧基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體B)
遵循關於中間物115之程序，以5-疊氮基-3-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(極性較大之非對映異構體對)為起始物，得到呈淺橙色膠狀之6-甲氧基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較大之非對映異構體對)(110 mg，68%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),5.70(br s,1H),4.05-3.90(m,1H),3.88(s,3H),3.50-3.25(m,2H),3.15(s,3H),3.10-2.90(m,2H),2.25-2.05(m,2H),2.00-1.85(m,1H),1.75-1.60(m,1H),1.45(s,9H),1.14(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 384(M+1)。
實例85 5-(苯亞甲基胺基氧基)-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
將3-側氧基-2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-甲酸(Z)-第三丁酯(330 mg，1.56 mmol)、(E)-苯甲醛肟(286 mg，2.36 mmol)及DBU(0.007 mL，0.05 mmol)組合於MeCN(0.5 mL)中且混合物在室溫下攪拌48小時。減壓移除溶劑且殘餘物經由製備型HPLC純化，得到呈褐色油狀之5-(苯亞甲基胺基氧基)-3-側氧基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(127 mg)。
用脫氧-Fluor®(50%於THF中，0.67 mL，1.86 mmol)處 理此油狀物(125 mg，0.37 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(20 mL)稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(30 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-30% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清油狀之5-(苯亞甲基胺基氧基)-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(101 mg，18%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.11-8.03(m,1H),7.61-7.55(m,2H),7.40-7.36(m,3H),4.52-4.42(m,1H),4.02-3.56(m,3H),3.51-3.27(m,1H),2.67-2.51(m,1H),2.42-2.21(m,2H),2.09-1.91(m,1H),1.50-1.45(m,9H)。
實例85a 苯甲醛O-6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基肟
遵循關於中間物109之程序，以5-(苯亞甲基胺基氧基)-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈黃色油狀之苯甲醛O-6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基肟(52 mg，33%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.21-7.98(m,1H),8.05(s,1H),7.63-7.58(m,2H),7.41-7.36(m,3H),4.71-4.62(m,1H),385(s,3H),3.80-3.65(m,1H),3.47-3.39(m,2H),3.26-3.23(m,1H), 2.77(q,J=13.2 Hz,1H),2.58-2.29(m,2H),2.23-2.10(m,1H)。
中間物
中間物1 甲基((1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁酯
將來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(0.2 g，1.23 mmol)、甲基(哌啶-4-基甲基)胺基甲酸第三丁酯(0.29 g，1.36 mmol)及DIPEA(1 mL，5.7 mmol)於EtOH(3 mL)中之溶液在微波中於130℃下加熱2小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之(1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯(0.34 g，80%)。向冷卻至0℃之此油狀物(0.15 mg，0.44 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液中添加氫化鈉(27 mg，0.66 mmol，60%於礦物油中)且混合物在0℃下攪拌15分鐘。添加碘甲烷(0.03 mL，0.53 mmol)且混合物在0℃下攪拌30分鐘。再添加氫化鈉(14 mg，0.33 mmol)及碘甲烷(0.02 mL，0.78 mmol)，使反應混合物升溫至10℃且攪拌1小時。添加水(10 mL)且混合物用EtOAc(60 mL)萃取。有機層用水(7×10 mL)洗滌，用鹽水(10 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。殘餘物藉由矽膠管柱層析法(30% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀 之甲基((1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁酯(148 mg，95%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.01(s,1H),3.74(s,3H),3.38-3.26(m,2H),3.25-3.15(m,2H),3.12-2.95(m,2H),2.89(s,3H),1.90-1.71(m,3H),1.60-1.32(m,2H),1.47(s,9H)。
中間物2 6,6-二氟-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
將5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.62 g，10.0 mmol)、1,4-二氮雜環庚烷-6-醇(4.18 g，15.0 mmol)及DIPEA(6.6 mL)於EtOH(6 mL)中之溶液在微波中於130℃下加熱3小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM(60 mL)及DMF(10 mL)中。添加二碳酸二第三丁酯(8.73 g，40 mmol)及DIPEA(3.48 mL)且混合物在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之6-羥基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(2.13 g)。向此油狀物(2.13 g，6.2 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(3.18 g，7.49 mmol)。在室溫下攪拌18小時後，混合物用DCM(20 mL)稀釋且用飽和NaHCO3水溶液(40 mL)隨後20%硫代硫酸鈉水溶液(40 mL)淬滅。攪拌所得混合物20分鐘。分離有機層，經 Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黏性黃色油狀之4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(1.6 g)。向此油狀物(0.49 g，1.43 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，1.3 mL，3.6 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(50 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。粗產物經由矽膠管柱層析法(0-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清油狀之6,6-二氟-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(467 mg，42%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),4.05-3.27(m,11H),1.50(s,9H)。
中間物3 4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
使6,6-二氟-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(467 mg，1.29 mmol)於MeOH(30 mL)中之溶液通過H-Cube®(70巴，60℃，流速：1 mL/ min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到紅色油狀物(428 mg)。向此油狀物於DCM(15 mL)中之溶液中添加2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸(459 mg，1.42 mmol)、PyBOP(1.0 g，1.94 mmol)及DIPEA(0.57 mL，3.22 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(20 ml)且混合物用DCM(100 mL)稀釋。有機層用水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-80% EtOAc/異己烷)純化，得到呈米色泡沫狀之4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(565 mg，69%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.23(s,1H),8.31(s,1H),7.62(s,1H),4.07-3.95(m,2H),3.76(s,3H),3.64(s,2H),3.56-3.42(m,2H),3.38-3.28(m,2H),1.53(s,9H),1.49(s,9H)。
中間物4 (R)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
在氫氣壓下，在10%鈀/碳(1 g)存在下，將4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(R)-第三丁酯(3.25 g，0.33 mmol)於MeOH(100 mL)中之溶液在室溫下攪拌1.5小時。混合物經由矽藻土(Celite®)過濾且減壓移除溶劑，得到呈淺灰色油狀之4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(R)-第三丁酯(2 g，100%)。在室溫下於5分鐘內向此油狀 物(1.8 g，8.4 mmol)及DIPEA(3 mL，17.2 mmol)於DCM(100 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加三氟乙酸酐(1.31 mL，9.3 mmol)且攪拌所得淺黃色溶液18小時。添加飽和NaHCO3水溶液(150 mL)且持續攪拌1小時。分離各層，使有機物通過相分離柱且減壓移除溶劑，得到呈淺黃色油狀之4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(R)-第三丁酯(2.61 g，100%)。在室溫下向此油狀物(2.6 g，8.38 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(25 mL)且攪拌混合物2小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM中並使其通過SCX管柱，用DCM及MeOH洗滌且用含1 N氨之MeOH溶離。減壓移除溶劑，得到呈淺黃色油狀之(R)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(1.3 g，74%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.83(s,1H),4.44-4.37(m,1H),3.13-3.03(m,2H),2.88(dt,J=13.2,6.6 Hz,1H),2.65-2.55(m,1H),2.03-1.79(m,3H),1.75(s,1H),1.69-1.58(m,3H)。
中間物5 5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑
向冷卻至-70℃之1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑(1.0 g，5.13 mmol)於無水THF(20 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加六甲基二矽烷胺基鋰之溶液(1 M之THF溶液，8.47 mL，8.47 mmol)。在-70℃下攪拌40分鐘後，使反應混合物於20分鐘內升溫至-55℃。再冷卻至-70℃後，緩慢添加全氯乙烷(1.74 g，7.34 mmol)於THF(10 mL)中之溶液且反應混合物在-70℃下攪拌1.5小時。依序添加飽和氯化銨水溶液(30 mL)及水(15 mL)且混合物用EtOAc(3×100 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑(438 mg，37%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.24(s,1H),6.18(tt,J=54.8,4.2 Hz,1H),4.58(td,J=12.8,4.2 Hz,2H)。
中間物6 (R)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺
將5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑(438 mg，2.07 mmol)、(R)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(438 mg，2.07 mmol)及DIPEA(1 mL)於EtOH(4 mL)中之溶液在微波中於155℃下加熱5小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺橙色膠狀之(R)-N-(1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(518 mg)。用氫化鈉(60%於礦物油中，5 mg，0.12 mmol)處理含此膠狀物之 一部分(39 mg，0.10 mmol)之無水THF(2 mL)。在室溫下攪拌10分鐘後，添加碘甲烷(0.01 mL，0.20 mmol)且反應混合物在室溫下攪拌2小時。對剩餘(R)-N-(1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺重複該反應。小心地添加水(50 mL)且混合物用EtOAc(2×100 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，得到呈淺黃色膠狀之(R)-N-(1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(518 mg)。將此膠狀物(514 mg，1.29 mmol)溶解於MeOH(20 mL)中且用甲酸銨(325 mg，6.15 mmol)及10%鈀/碳(50 mg)處理。混合物在85℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，濾出催化劑且減壓濃縮濾液。使殘餘物於DCM(50 mL)與水(30 mL)之間分配，且水層用DCM(2×50 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑，得到呈淺黃色膠狀之(R)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(348 mg，46%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.13(s,1H),6.19(tq,J=55.4,4.4 Hz,1H),4.65-4.15(m,3H),3.40-3.10(m,4H),3.10及2.97(2 s,3H),2.80(br s,2H),2.10-1.70(m,6H)。
中間物7 2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
向(R)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(248 mg，0.67 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加DIPEA(1.0 mL，5.7 mmol)、PyBOP(700 mg，1.34 mmol)及2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)-噻唑-4-甲酸(282 mg，0.87 mmol)且混合物在室溫下攪拌20小時。添加水(50 mL)且持續攪拌1小時。混合物用DCM(50 mL)萃取，使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色膠狀之2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(405 mg，90%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.27及10.26(2s,1H),8.32及8.27(2s,1H),7.88及7.85(2s,1H),6.36-6.02(m,1H),4.67-4.11(m,2H),3.41-3.08(m,5H),3.08及2.95(2s,3H),2.22-1.71(m,4H),1.31-1.18(m,2H)。
中間物8 1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
將5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑(470 mg，2.22 mmol)、氮雜環庚烷-4-醇(281 mg，2.44 mmol)及DIPEA(1 mL)於EtOH(3 mL)中之溶液在微波中於155℃下加熱5小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺橙色膠狀之1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(400 mg)。將此膠狀物(390 mg，1.35 mmol)溶解於MeOH(25 mL)中且用甲酸銨(340 mg，5.38 mmol)及10%鈀/碳(50 mg)處理。混合物在85℃下加熱4小時。在室溫下靜置隔夜後，再添加甲酸銨(205 mg，3.25 mmol)及10%鈀/碳(50 mg)至反應混合物中，隨後在85℃下加熱1小時。濾出催化劑且減壓濃縮濾液。使殘餘物於DCM(30 mL)與水(20 mL)之間分配。使有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑，得到呈橙色油狀之1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(265 mg，42%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.17(s,1H),6.27-5.91(m,1H),4.39-4.23(m,2H),4.16-4.04(m,1H),3.30-3.11(m,4H),2.60(br s,3H),2.55(s,2H),2.08-1.81(m,3H),1.80-1.71(m,1H)。
中間物9 2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物7之程序，以1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇及2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)-噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈無色固體狀之2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(265 mg，69%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39(s,1H),9.14(s,1H),8.02(s,1H),6.18(tt,J=55.9,4.5 Hz,1H),4.38-4.27(m,2H),3.33-3.12(m,5H),2.20(br s,1H),2.35-1.58(m,4H),1.70-1.48(m,2H)。
中間物10 4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯
向來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(355 mg，2.2 mmol)及氟化鉀(511 mg，8.8 mmol)於無水DMSO(20 mL)中之溶液中添加3-甲基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯(507 mg，2.53 mmol)且混合物在微波中於100℃下加熱10小時。使混合物於水(40 mL)與EtOAc(100 mL)之間分配且使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈橙色膠狀之3-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯(627 mg)。在氮氣下，向此膠狀物(179 mg，0.55 mmol)及甲酸銨(256 mg，4.4 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添 加10%鈀/碳(59 mg，0.55 mmol)。混合物在70℃下加熱4小時，之後冷卻，過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(20 mL)與DCM(60 mL)之間分配且分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈褐色膠狀之4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯(150 mg，80%，經歷兩個步驟)。LCMS(ES+)m/z 296(M+1)。
中間物11 4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-乙基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯
遵循關於中間物10之程序，以來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑及3-乙基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯為起始物，得到呈橙色膠狀之4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-乙基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯(110 mg，65%，經歷兩個步驟)。LCMS(ES+)m/z 310(M+1)。
中間物12 4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-乙基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯
遵循關於中間物10之程序，以來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑及3-乙基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯為起始物，得到呈橙色膠狀之4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3- 乙基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯(118 mg，67%，經歷兩個步驟)。LCMS(ES+)m/z 310(M+1)。
中間物13 (S)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循關於中間物4之程序，以4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸(S)-第三丁酯為起始物，得到呈淺黃色油狀之(S)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(1.35 g，75%，經歷三個步驟)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.86(s,1H),4.44-4.37(m,1H),3.15-3.03(m,2H),2.92-2.81(m,1H),2.67-2.55(m,1H),2.02-1.81(m,4H),1.76-1.56(m,3H)。
中間物14 (S)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺
遵循關於中間物6之程序，以(S)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑為起始物，得到呈淺紅色膠狀之(S)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(100 mg，32%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.13(s,1H),6.19(tq,J=55.4,4.4 Hz,1H),4.65-4.15(m,3H),3.40-3.10(m,4H),3.10及2.97(2s,3H), 2.80(br s,2H),2.10-1.70(m,6H)。
中間物15 2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(S)-第三丁酯
遵循關於中間物7之程序，以(S)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺及2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)-噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈淺粉色膠狀之2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(S)-第三丁酯(80 mg57%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.27(s,1H),8.31及8.27(2s,1H),7.88及7.85(2s,1H),6.34-6.05(m,1H),4.41-4.31(m,2H),3.42-3.29(m,5H),3.10及2.95(2s,3H),2.08-1.75(m,4H),1.40-1.15(m,2H)。
中間物16 3-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮
將水合哌啶-4-酮鹽酸鹽(1.84 g，12.0 mmol)、來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.3 g，8.0 mmol)及氟化鉀(1.86 g，32 mmol)於無水DMSO(20 mL)中之三種相同溶液在微波中於100℃下加熱12小時。合併混合物，傾入水(700 mL)中且萃取至EtOAc(3×100 mL)中。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色固體狀之1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮(1.97 g，36%)。向此酮於DMF中之溶液(40 mL)中添加NEt3(3.05 mL，21.9 mmol)及氯三甲基矽烷(1.55 mL，12.3 mmol)。密封反應容器且混合物在90℃下加熱16小時。冷卻混合物且將產物萃取至EtOAc(2×50 mL)中。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% Et2O/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-4-(三甲基矽氧基)-1,2,3,6-四氫吡啶(1.53 g，59%)。將此膠狀物溶解於MeCN(130 mL)中且冷卻至0℃。於20分鐘內逐滴添加SelectFluor®(1.99 g，5.61 mmol)於2：1 MeCN：DMF(10 mL)中之溶液且混合物在介於-5℃與0℃之間攪拌2小時。減壓移除溶劑且使殘餘物於EtOAc(50 mL)與水(40 mL)之間分配。將產物萃取至EtOAc(50 mL)及DCM(50 mL)中且使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色固體狀之3-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮(1.23 g，99%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07(s,1H),5.04 (ddd,J=48.3,8.2,5.7 Hz,1H),3.89(s,3H),3.77-3.64(m,2H),3.64-3.51(m,1H),3.50-3.43(m,1H),2.88-2.72(m,2H)。
中間物17 2,2,2-三氟-N-(3-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺
在-5℃下，向3-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮(1.07 g，4.40 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中逐滴添加三氟化硼合二乙醚(0.71 mL，5.72 mmol)於DCM(1 mL)中之溶液。攪拌混合物30分鐘，之後添加重氮乙酸乙酯(0.60 mL，5.72 mmol)於DCM(1 mL)中之溶液。混合物在-5℃下攪拌1小時，之後使其升溫至室溫。添加水(5 mL)且攪拌混合物30分鐘。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之6-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-側氧基氮雜環庚烷-4-甲酸乙酯(0.85 g，58%)。將此膠狀物再溶解於3 M鹽酸(30 mL)中且在100℃下加熱4小時。減壓濃縮混合物，再溶解於DCM(30 mL)中且用水(20 mL)洗滌。使有機相通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色固體狀之3-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-酮(0.30 g，45%)。向此固體(0.30 g，1.15 mmol)於無水MeOH(6 mL)及DCM(6 mL)中之溶液中添加乙酸銨(0.709 g，9.20 mmol)及粉碎的經活化4Å分子篩。混合物在55℃下加熱4小時，之後冷卻至室溫。逐份添加氰基硼氫化鈉(80 mg，1.27 mmol)且混合物在室溫下攪拌1小時。過濾混合物且減壓濃縮。殘餘物再溶解於DCM(10 mL)中且用10% NaOH水溶液(10 mL)洗滌。水性洗滌液用EtOAc(3×20 mL)萃取且使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由胺官能化之矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之3-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺(0.205 g，69%)。向此膠狀物(0.20 g，0.79 mmol)及DIPEA(0.37 mL，2.13 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液中逐滴添加三氟乙酸酐(0.11 mL，0.78 mmol)。混合物在室溫下攪拌16小時，之後用水(10 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色固體狀之3-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(140 mg，55%)。LCMS(ES+)m/z 354(M+1)。
中間物18 5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇
向3-側氧基-2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-甲酸(Z)-第三丁酯(2.0 g，9.5 mmol)於乙腈(3 mL)中之溶液中依序添加疊氮 基三甲基矽烷(3.76 mL，28.4 mmol)及AMBERLITE® IRA 900F樹脂(裝載量：2-3 mmolg-1，2.4 g)且所得混合物在防暴屏蔽後於60℃下加熱16小時。在冷卻至室溫後，過濾溶液，用乙腈洗滌樹脂且減壓濃縮濾液(浴溫<40℃)，得到呈黃色液體狀之5-疊氮基-3-側氧基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(2.21 g)。向該疊氮化物(2.2 g，8.70 mmol)於THF/水(1/1,40 mL)中之溶液中逐份添加NaBH4(0.82 mg，21.8 mmol)且混合物在室溫下攪拌2小時。混合物用水(100 mL)稀釋且用EtOAc(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈油狀之5-疊氮基-3-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(2.01 g)。向此油狀物(2.0 g，7.8 mmol)於MeOH(20 mL)中之溶液中添加HCl(4 M之1,4-二噁烷溶液，43 mL，173 mmol)且溶液在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑且將粗殘餘物溶解於MeOH中，並使其通過SCX管柱，用MeOH洗滌且用含7 N氨之MeOH溶離，得到呈黃色油狀之5-疊氮基氮雜環庚烷-3-醇。向含此油狀物之無水DMSO(20 mL)中添加氟化鉀(1.68 g，28.9 mmol)及來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.17 g，7.2 mmol)且混合物在65℃下加熱16小時。混合物用水(300 mL)稀釋且用EtOAc(2×50 mL)萃取。合併之有機層用水(3×20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-30% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黏性黃色油狀之5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷- 3-醇(1.9 g，72%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06及8.02(2s,1H),4.15-3.97(m,2H),3.95-3.83(m,4H),3.58-3.46(m,1H),3.39-3.16(m,3H),2.29-1.91(m,4H)。
中間物19 6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
向5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇，即中間物18(3.4 g，16 mmol)於THF(40 mL)及水(8 mL)中之溶液中添加三苯基膦(1.89 g，7.2 mmol)且混合物在防爆屏後在65℃下加熱16小時。減壓移除溶劑，得到呈黏性油狀之5-胺基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(混有三苯基膦氧化物)。向含此胺之DCM(40 mL)中添加二碳酸二第三丁酯(4.49 g，20.6 mmol)及DIPEA(4.78 mL，27.4 mmol)且混合物在室溫下攪拌60小時。減壓移除溶劑且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之6-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(1.2 g)。向此油狀物(1.2 g)於DCM(25 mL)中之溶液中逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(1.72 g，1.51 mmol)。在室溫下攪拌16小時後，混合物用DCM(25 mL)稀釋且用飽和NaHCO3水溶液(40 mL)隨後20%硫代硫酸鈉水溶液(40 mL)淬滅。攪 拌所得混合物20分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-側氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(0.56 g)。向此油狀物(0.51 g，1.46 mmol)於DCM(15 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，1.85 mL，5.1 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(30 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈油狀之6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(510 mg，64%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),4.18-4.01(m,1H),3.84(s,3H),3.79-3.19(m,4H),2.56-2.42(m,1H),2.38-1.99(m,4H),1.46(s,9H)。
中間物20 6-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
向5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇，即中間物18(3.4 g，16 mmol)於THF(40 mL)及水(8 mL)中之溶液中添加三苯基膦(1.89 g，7.2 mmol)且混合物在65℃下加熱16小時。減壓移除溶劑，得到呈黏性油狀 之5-胺基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(混有三苯基膦氧化物)。向含此胺之DCM(40 mL)中添加二碳酸二第三丁酯(4.49 g，20.6 mmol)及DIPEA(4.78 mL，27.4 mmol)且混合物在室溫下攪拌60小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之6-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(2.6 g)。向此油狀物(2.6 g，10.2 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液中添加，脫氧-Fluor®(50%於THF中，6.7 mL，18.6 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(30 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色油狀之6-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(1.07 g，66%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.14-7.97(m,1H),5.04-4.46(m,3H),3.96-2.99(m,6H),2.42-1.64(m,5H),1.70-1.22(m,9H)。
中間物21 4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯
遵循關於中間物10之程序，以來自實例1之5-氯-1-甲基- 4-硝基-1H-吡唑及3-甲基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯為起始物，得到呈橙色膠狀之4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯(134 mg，73%，經歷兩個步驟)。LCMS(ES+)m/z 296(M+1)。
中間物22 8-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-2-甲酸第三丁酯
將來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(150 mg，0.93 mmol)、2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-2-甲酸第三丁酯(244 mg，1.02 mmol)及DIPEA(1 mL)於EtOH(3 mL)中之混合物在微波中於130℃下加熱2小時。減壓移除溶劑且粗產物經由矽膠管柱層析法(50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之8-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-2-甲酸第三丁酯(245 mg，72%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),3.76(s,3H),3.49-3.39(m,2H),3.30-3.00(m,6H),1.90-1.60(m,6H),1.55(s,9H)。
中間物23 (S)-5-(2,4-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺
向來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(355 mg，2.2 mmol)及氟化鉀(511 mg，8.8 mmol)於無水DMSO(20 mL)中之溶液中添加3-甲基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯(1.15 eq,2.53 mmol)且混合物在微波中於100℃下加熱10小時。使混合物於水(40 mL)與EtOAc(100 mL)之間分配，使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈橙色膠狀之3-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯(627 mg)。向此膠狀物(212 mg，0.65 mmol)於DCM(9 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(3 mL)且混合物在室溫下攪拌4小時。減壓濃縮混合物且使殘餘物於水(20 mL)與DCM(30 mL)之間分配。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈黃色膠狀之(S)-2-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌嗪(120 mg)。向此膠狀物(119 mg，0.53 mmol)及乙酸(0.12 mL，2.12 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添加甲醛水溶液(37 wt%之水溶液，0.17 mL，2.12 mmol)且混合物在室溫下攪拌1小時。隨後添加氰基硼氫化鈉(83 mg，1.33 mmol)且混合物在室溫下攪拌70小時。減壓濃縮混合物且使殘餘物於水(20 mL)與DCM(30 mL)之間分配。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈黃色膠狀之(S)-2,4-二甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌嗪(109 mg)。在氮氣下，向此膠狀物(108 mg，0.45 mmol)及甲酸銨(209 mg，3.6 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(48 mg，0.45 mmol)。混合物在70℃下加熱4小時，之後冷卻，過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(20 mL)與DCM(50 mL)之間分配且分離有機層，使其通過相分離 柱且減壓濃縮，得到呈褐色膠狀之(S)-5-(2,4-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(94 mg，62%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.07(s,1H),3.66(s,3H),3.51-3.41(m,1H),3.36(td,J=5.7,2.6 Hz,1H),2.94-2.84(m,3H),2.36(s,3H),2.28(td,J=5.6,3.0 Hz,1H),1.92(dd,J=11.2,9.8 Hz,1H),0.86(d,J=6.3 Hz,3H)。未觀察到可交換之NH2。
中間物24 (R)-5-(2,4-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺
遵循關於中間物23之程序，以來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑及3-甲基-哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯為起始物，得到呈褐色固體狀之(R)-5-(2,4-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(94 mg，62%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.07(s,1H),3.66(s,3H),3.59-3.44(m,2H),2.99-2.86(m,3H),2.46-2.31(m,4H),2.03(t,J=10.7 Hz,1H),0.87(d,J=6.3 Hz,3H)。未觀察到可交換之NH2。
中間物25 5-氯-1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑
遵循關於中間物5之程序，以1-環丙基-4-硝基吡唑為起始物，得到呈無色固體狀之5-氯-1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑(0.23 g，63%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.09(s,1H),3.62-3.54(m,1H),1.38-1.28(m,2H),1.25-1.13(m,2H)。
中間物26 4-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
遵循關於中間物2之程序，以5-氯-1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑為起始物，在矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)之後，得到呈黃色油狀之4-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(520 mg，9%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.96(s,1H),4.07-3.34(m,9H),1.49(s,9H),1.34-1.17(m,2H),1.08-1.01(m,2H)。
中間物27 4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
遵循關於中間物3之程序，以4-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡 唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯為起始物，在矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)後，得到呈灰白色泡沫狀之4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(573 mg，62%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.23(s,1H),8.43(s,1H),7.65(s,1H),3.71-3.63(m,4H),3.45-3.10(m,5H),1.49(s,9H),1.44(s,9H),1.27-1.18(m,2H),1.06-0.99(m,2H)。
中間物28 4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
向來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(390 mg，2.4 mmol)及4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷鹽酸鹽(0.48 g，2.9 mmol)於EtOH(9.5 mL)中之溶液中添加DIPEA(1.9 mL，10.9 mmol)。反應混合物在微波中於130℃下加熱1小時。減壓移除溶劑且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到呈無色油狀之4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(410 mg，66%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),3.77(s,3H),3.56-3.47(m,1H),3.28-3.20(m,2H),3.08-3.04(m,1H),2.17-2.03(m,1H),1.95-1.81(m,4H),1.78-1.67(m,1H),1.56(br s,1H),1.25(s,3H)。
中間物29 2-溴-4-(5-(4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
向4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(212 mg，0.83 mmol)於MeOH(15 mL)中之溶液中添加甲酸銨(386 mg，5.63 mmol)及10%鈀/碳(88 mg，0.83 mmol)，且混合物在80℃下加熱18小時。經由矽藻土過濾混合物且減壓濃縮濾液。使殘餘物於DCM(20 mL)與水(20 mL)之間分配且水層用DCM(3×20 mL)再萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈紅色油狀之1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-甲基氮雜環庚烷-4-醇。向此油狀物(140 mg，0.623 mmol)於DCM(25 mL)中之溶液中添加2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸(241 mg，0.75 mmol)、PyBOP(454 mg，1.94 mmol)及DIPEA(0.17 mL，1.0 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(20 ml)且混合物用DCM(100 mL)稀釋。有機層用水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之2-溴-4-(5-(4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(280 mg， 63%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.49(s,1H),9.41(s,1H),7.95(s,1H),3.71(s,3H),3.41-3.30(m,1H),3.24-3.11(m,3H),2.39(br s,1H),2.07-1.75(m,5H),1.84-1.78(m,1H),1.52(s,9H),1.43(s,3H)。
中間物30 4-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
遵循關於中間物2之程序，以5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑為起始物，得到呈淺綠色膠狀之4-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(11%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.13及8.12(2s,1H),6.33-6.02(m,1H),4.60-4.40(m,2H),4.10-3.30(m,8H),1.48(s,9H)。
中間物31 4-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-羥基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
將5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑(800 mg，3.78 mmol)、1,4-二氮雜環庚烷-6-醇二氫溴酸鹽(1.58 g，5.67 mmol)及DIPEA(2.5 mL，14.35 mmol)於EtOH(6 mL)中之混 合物在微波中於130℃下加熱3小時。減壓移除溶劑且使殘餘物通過SCX管柱，用DCM以及1：1 MeOH：DCM及MeOH洗滌且用含1N氨之MeOH溶離，得到呈淺黃色膠狀之1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-6-醇(1.0 g)。將此膠狀物(1.0 g，3.44 mmol)溶解於DCM(100 mL)中且用二碳酸二第三丁酯(2.25 g，10.31 mmol)及DIPEA(2.4 mL，13.75 mmol)處理。反應混合物在室溫下攪拌1.5小時且用飽和NaHCO3水溶液(100 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100%)EtOAc/異己烷純化，得到呈淺綠色膠狀之4-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-羥基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(46%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.11(s,1H),6.18(tdd,J=55.6,5.6,3.2 Hz,1H),4.49-4.31(m,2H),4.19-2.95(m,10H),1.60-1.40(m,9H)。
中間物32 5-氯-1-(4-甲氧基苯甲基)-4-硝基-1H-吡唑
遵循關於中間物5之程序，以1-(4-甲氧基苯甲基)-4-硝基-1H-吡唑為起始物，得到呈黃色固體狀之5-氯-1-(4-甲氧基苯甲基)-4-硝基-1H-吡唑(536 mg，46%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.17(s,1H),7.25(d,J=8.3 Hz,2H),6.89 (d,J=8.3 Hz,2H),5.30(s,2H),3.80(s,3H)。
中間物33 4-(4-胺基-1-(4-甲氧基苯甲基)-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯
向5-氯-1-(4-甲氧基苯甲基)-4-硝基-1H-吡唑(268 mg，1.0 mmol)及氟化鉀(232 mg，4.0 mmol)於無水DMSO(20 mL)中之溶液中添加3-甲基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯(230 mg，1.15 mmol)且混合物在微波中於100℃下加熱8小時。使混合物於水(30 mL)與EtOAc(50 mL)之間分配，且使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之4-(1-(4-甲氧基苯甲基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯(380 mg)。向此膠狀物(371 mg，0.86 mmol)於乙醇/水(20 mL/2 mL)中之溶液中添加氯化銨(230 mg，4.3 mmol)及鐵粉(192 mg，3.44 mmoL)且混合物在80℃下加熱1.5小時。冷卻混合物，經由矽藻土過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(30 mL)與DCM(40 mL)之間分配且分離有機層，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到呈紅色膠狀之4-(4-胺基-1-(4-甲氧基苯甲基)-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯(330 mg，84%，經歷兩個步驟)。1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ 7.17-7.11(m,3H),6.82(d,J=8.6 Hz,2H),5.34(d,J=14.4 Hz,1H),5.17(d,J=14.4 Hz,1H),3.98-3.80(m,2H),3.78(s,3H),3.23(ddd,J=9.9,6.4,3.3 Hz,1H),3.01(td,J=11.4,3.0 Hz,1H),2.92-2.83(m,1H),2.66(s,1H),2.57(s,1H),1.47(s,9H),0.81(d,J=6.3 Hz,3H)。
中間物34 4-(4-胺基-1-(4-甲氧基苯甲基)-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
遵循關於中間物33之程序，以5-氯-1-(4-甲氧基苯甲基)-4-硝基-1H-吡唑及3-甲基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯為起始物，得到呈紅色膠狀之4-(4-胺基-1-(4-甲氧基苯甲基)-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯(325 mg，81%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.16-7.11(m,3H),6.82(d,J=8.6 Hz,2H),5.16(d,J=14.8 Hz,1H),5.05(d,J=14.8 Hz,1H),4.10-3.80(m,2H),3.78(s,3H),3.26-3.19(m,1H),3.01(td,J=11.4,3.0 Hz,1H),2.86(t,J=13.2 Hz,1H),2.66(s,2H),2.57(s,2H),1.47(s,9H),0.81(d,J=6.3 Hz,3H)。
中間物35 (S)-5-(2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺
遵循關於中間物24之程序，以3-乙基-哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯為起始物，得到呈褐色固體狀之(S)-5-(2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(100 mg，86%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.38(s,1H),7.08(s,1H),3.75-3.55(m,5H),3.29(dt,J=11.4,2.4 Hz,1H),3.22(ddd,J=6.0,5.5,2.6 Hz,1H),2.95(dt,J=12.5,2.8 Hz,1H),2.64(dd,J=11.8,3.6 Hz,1H),2.61(s,3H),2.29(t,J=10.9 Hz,1H),1.48-1.31(m,1H),1.26-1.11(m,1H),0.82(t,J=7.6 Hz,3H)。NH2經部分交換。
中間物36 (R)-5-(2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺
遵循關於中間物24之程序，以3-乙基-哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯為起始物，得到呈褐色固體狀之(R)-5-(2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(100 mg，86%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.40(s,1H),7.07(s,1H),3.65(s,3H),3.66-3.46(m,2H),3.24(dt,J=11.3,2.4 Hz,1H),3.16(ddd,J=5.8,5.6,2.7 Hz,1H),2.94(dt,J=12.3,2.8 Hz,1H),2.77-2.34(m,4H),2.21(t,J=10.8 Hz, 1H),1.47-1.32(m,1H),1.27-1.10(m,1H),0.81(t,J=7.5 Hz,3H)。NH2經部分交換。
中間物37 4-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
向4-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-羥基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(370 mg，0.95 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中之溶液，1.0 mL，2.37 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。緩慢添加飽和NaHCO3水溶液(10 mL)且混合物攪拌15分鐘。水層用DCM(10 mL)萃取，使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法純化，得到呈淺綠色膠狀之4-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(366 mg，74%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.12(s,1H),6.34-6.00(m,1H),5.08-2.75(m,11H),1.48(s,9H)。
中間物38 6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基(甲基)胺基甲酸第三丁酯
向冷卻(冰-水浴)之6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(190 mg，0.51 mmol)於THF(10 mL)中之溶液中添加六甲基二矽烷胺基鋰(1 M之THF溶液，0.8 mL，0.8 mmol)且攪拌混合物30分鐘。添加碘甲烷(0.06 mL，1.02 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(2 mL)且用EtOAc(30 mL)萃取混合物。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-70% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基(甲基)胺基甲酸第三丁酯(180 mg，90%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.09-7.99(m,1H),4.57-4.38(m,1H),3.85(s,3H),3.84-3.53(m,1H),3.45-3.15(m,3H),2.81(s,3H),2.53-2.29(m,2H),2.16-2.01(m,2H),1.48(s,9H)。
中間物39 5-溴-4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑
向1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-胺(990 mg，6.0 mmol)於乙酸(5 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加乙酸酐(0.57 mL，6.0 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。再添加乙酸酐(0.57 mL，6.0 mmol)至反應混合物中，在冰浴中冷卻以逐滴添加發煙硝酸(0.28 mL，6 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌7小時且減壓移除溶劑。將殘餘物溶解於EtOH(15 mL)中且添加濃鹽酸(10 mL)。混合物在回流下加熱16小時。減壓濃縮後，使殘餘物於DCM(50 mL)與5% NaHCO3水溶液(100 mL)之間分配。過濾混合物且水層用DCM(100 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，得到淺橙色固體(540 mg)。將此固體(540 mg，2.57 mmol)溶解於溴仿(2.9 mL，33 mmol)中且向該溶液中逐滴添加亞硝酸第三丁酯(0.92 mL，7.71 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌15分鐘，且隨後在145℃下加熱1.5小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色固體狀之5-溴-4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑(536 mg，33%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.30(s,1H),4.86(q,J=7.8 Hz,2H)。
中間物40 (R)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循關於中間物8之程序，以5-溴-4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑(150 mg，0.55 mmol)及(R)-N-(氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(115 mg，0.55 mmol)為起始物，得到呈無色膠狀之(R)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(110 mg，53%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.25(s,1H),7.11(br s,1H),4.54(q,J=8.5 Hz,2H),4.35-4.22(m,1H),3.40-3.23 (m,2H),3.21-3.08(m,2H),2.62(br s,2H),2.17-2.08(m,1H),2.06-1.91(m,1H),1.92-1.71(m,4H)。
中間物41 4-(4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
遵循關於中間物22之程序，以5-溴-4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑及1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺黃色膠狀之4-(4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(197 mg，91%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.19-8.12(m,1H),4.76-4.66(m,2H),3.65-3.49(m,4H),3.32-3.23(m,4H),1.92-1.78(m,2H),1.52-1.47(m,9H)。
中間物42 4-羥基-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯
向4-疊氮基-5-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(1.4 g，4.83 mmol)於THF/水(30 mL/6 mL)中之溶液中添加三苯基膦(1.26 g，4.83 mmol)且反時應混合物在60℃下加熱16小時。添加EtOAc(100 mL)且混合物用水(20 mL)洗滌。分離 有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。所得油狀物在Et2O中濕磨，濾出所得固體且減壓濃縮濾液，得到黃色油狀物。在0℃下向此油狀物於無水DCM中之溶液(20 mL)中添加DIPEA(2.5 mL，14.4 mmol)及三氟乙酸酐(1.0 mL，7.22 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌16小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈金黃色黏性油狀之4-羥基-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(934 mg，54%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.40-7.29(m,5H),6.49(s,1H),5.20-5.11(m,2H),3.94-3.25(m,6H),2.35-1.65(m,5H)。
中間物43 N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
使4-羥基-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(935 mg，3.0 mmol)於MeOH(100 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，50℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈淺黃色固體狀之4-羥基-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷(514 mg)。向此固體(500 mg，2.21 mmol)於無水DMSO(10 mL)中之溶液中添加來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(150 mg，0.93 mmol) 及氟化鉀(513 mg，8.85 mmol)。反應混合物在65℃下加熱16小時。將混合物傾入水(200 mL)中且用EtOAc(5×50 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析法(70% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固體狀之2,2,2-三氟-N-(5-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(640 mg)。將此固體之一部分(200 mg，0.57 mmol)溶解於MeOH(25 mL)中且使其通過H-Cube®(全H2，50℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈橙色泡沫狀之N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(172 mg，68%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.22(d,J=8.1 Hz,1H),6.83(s,1H),4.84(d,J=5.0 Hz,1H),3.91-3.73(m,2H),3.32(s,3H),3.28-2.96(m,4H),2.00-1.75(m,4H)。未觀察到可交換之NH2。
中間物44 6-羥基-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
向6-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1,4-二甲酸二第三丁酯(570 mg，1.82 mmol)於THF(10 mL)中之冷卻溶液(冰水浴)中逐滴添加溴化甲基鎂之溶液(3 M之Et2O溶液，0.79 mL，2.36 mmol)。使混合物升溫至室溫且攪拌16小時。添加飽和氯化銨水溶液(5 mL)且混合物用EtOAc(30 mL)及水 (30 mL)稀釋。分離各層且使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-70% EtOAc/異己烷)純化，得到呈油狀之6-羥基-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1,4-二甲酸二第三丁酯(0.45 g)。向此油狀物(0.45 g，1.36 mmol)於MeOH(2 mL)中之溶液中添加HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，6.8 mL，27.3 mmol)且溶液在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑。將殘餘物溶解於MeOH中且使其通過SCX管柱，用MeOH洗滌且用含1 N氨之MeOH溶離。減壓移除溶劑，得到呈油狀之6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-6-醇。向含此胺之EtOH(3 mL)中添加來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(209 mg，1.29 mmol)及DIPEA(0.9 mL，5.44 mmol)且混合物在微波中於130℃下加熱3小時。減壓移除溶劑。向含6-羥基-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯粗品之DCM(10 mL)中添加二碳酸二第三丁酯(1.18 g，5.44 mmol)及DIPEA(0.9 mL，5.44 mmol)。混合物在室溫下攪拌16小時，減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM(30 mL)中。添加水(20 mL)且分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-80% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之6-羥基-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(235 mg，22%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),4.16-3.79(m,7H),3.52-2.81(m,4H),1.70-1.80(br s,1H),1.51(s,9H),1.16(s,3H)。
中間物45 6-氟-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
向6-羥基-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(100 mg，0.28 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，0.26 mL，0.7 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋，在冰水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(40 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。粗產物經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈澄清無色油狀之6-氟-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(70 mg，70%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),3.80(s,3H),3.73-3.32(m,6H),3.26-3.03(m,2H),1.50(s,9H),1.32(d,J=20.1 Hz,3H)。
中間物46 6,6-二氟-4-(4-硝基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
將5-氯-4-硝基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H- 吡唑(815 mg，2.93 mmol)、1,4-二氮雜環庚烷-6-醇(510 mg，4.39 mmol)及DIPEA(2.55 mL，14.6 mmol)組合於EtOH(10 mL)中且在微波中於130℃下加熱1小時且減壓移除溶劑，得到1-(4-硝基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-6-醇。向此胺中添加二碳酸二第三丁酯(2.56 g，11.7 mmol)及DIPEA(2.55 mL，14.6 mmol)。在室溫下攪拌16小時後，減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM(30 mL)中。添加水(20 mL)且分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈油狀之6-羥基-4-(4-硝基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(590 mg)。向此油狀物(570 mg，1.26 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(0.68 g，1.51 mmol)。在室溫下攪拌16小時後，混合物用DCM稀釋且用飽和NaHCO3水溶液(40 mL)隨後20%硫代硫酸鈉水溶液(30 mL)淬滅。攪拌所得混合物20分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈油狀之4-(4-硝基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)-6-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(0.36 g)。向此油狀物(0.35 g，0.76 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，0.69 mL，1.91 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和 NaHCO3水溶液(30 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。粗產物經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷純化)，得到呈黃色油狀之6,6-二氟-4-(4-硝基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(280 mg，19%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.12-8.03(m,1H),5.61-5.34(m,2H),4.01-3.41(m,6H),3.59-3.09(m,4H),1.67-1.34(m,9H),0.94-0.86(m,2H),SiMe3被內標TMS峰掩蔽。
中間物47 6-甲氧基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
將5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑來自實例1之(1.62 g，10.0 mmol)、1,4-二氮雜環庚烷-6-醇(4.18 g，15.0 mmol)及DIPEA(6.6 mL)於EtOH(6 mL)中之溶液在微波中於130℃下加熱3小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM(60 mL)及DMF(10 mL)中。添加二碳酸二第三丁酯(8.73 g，40 mmol)及DIPEA(3.48 mL)且混合物在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之6-羥基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(2.13 g)。在0℃下向此油狀物(205 mg，0.6 mmol)於THF(5 ml)中之溶液中添加氫化鈉(60%於礦物油中，24 mg，0.6 mmol)。30分鐘後，添加碘甲烷(0.04 mL，0.6 mmol)且使所得混合物於1.5小時內升溫至室溫。混合物用DCM(20 mL)稀釋且用水(20 ml)及飽和NaHCO3水溶液(20 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之6-甲氧基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(116 mg，33%，經歷兩個步驟)。LCMS(ES+)m/z 356(M+1)。
中間物48 5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
將三氟乙酸(20 mL)添加至4-疊氮基-5-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(7.43 g，29.0 mmol)於DCM(70 mL)中之溶液中且在防暴屏蔽後將混合物在35℃下加熱4小時。減壓移除溶劑且殘餘物再溶解於MeOH中並使其通過SCX管柱，用DCM及MeOH洗滌且用3-10%含7 N氨之MeOH/DCM溶離，得到呈黃色油狀之5-疊氮基氮雜環庚烷-4-醇(4.38 g，28.0 mmol)，將其溶解於無水DMSO(100 mL)中。添加來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(5.20 g，32.2 mmol)及氟化鉀(6.51 g，112 mmol)。混合物在70℃下加熱16小時，使其冷卻至室溫，傾入水(1000 mL)中且萃取至 EtOAc(4×250 mL)中。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(7.27 g，77%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),3.94-3.66(m,4H),3.65(td,J=9.7,3.8 Hz,1H),3.44-3.18(m,4H),2.50(d,J=2.8 Hz,1H),2.24-2.12(m,2H),2.02-1.89(m,2H)。
中間物48a 4-疊氮基-5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷
向冷卻至0℃之5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(4.0 g，14.2 mmol)於無水DCM(100 mL)中之溶液中依序緩慢逐份添加三乙胺(4.0 mL，28.5 mmol)以及DMAP(175 mg，1.42 mmol)及4-甲基苯-1-磺醯氯(4.1 g，21.4 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌18小時。再添加4-甲基苯-1-磺醯氯(1.4 g，7.12 mmol)至反應混合物中，再在室溫下攪拌24小時。添加水(40 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(30-70% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黑色膏狀固體狀之4-甲基苯磺酸5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基酯(2.81g)。用TBAF之溶液(1.0 M之THF溶液，21 mL，21.1 mmol)處理此固體(2.3 g，5.29 mmol)且反應混合物在60℃下加熱2小時。在冷卻至室溫後，添加水(30 mL)且混合物用EtOAc(2×150 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(30-40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色黏性油狀之4-疊氮基-5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷(804 mg，20%，經歷兩個步驟)1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),5.06(ddt,J=46.2,8.1,2.5 Hz,1H),4.00(dd,J=20.8,8.1 Hz,1H),3.79(s,3H),3.43-3.34(m,2H),3.26-3.11(m,2H),2.43-2.30(m,1H),2.30-2.18(m,1H),2.12-1.92(m,2H)。
中間物49 N-((4S,5S)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
向5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(7.26 g，25.8 mmol)於無水DCM(100 ml)中之溶液中逐滴添加脫氧-Fluor®(12.1 mL，32.84 mmol，50%於THF中)且混合物在室溫下攪拌16小時。在冰浴中冷卻混合物且緩慢添加飽和NaHCO3水溶液(40 mL)(觀察到起泡)，且混合物用DCM(150 mL)萃取。有機層用飽和NaHCO3水溶液(2×30 mL)洗滌，分離，使其通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之4-疊氮基-5-氟-1-(1-甲基-4-硝基- 1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷(5.55 g)。重複該反應以提供額外物質。用三苯基膦(5.93 g，22.6 mmol)處理此膠狀物(6.40 g，22.6 mmol)於THF/水(120 mL/24 mL)中之溶液且混合物在60℃下加熱16小時。使混合物於EtOAc(150 mL)與水(20 mL)之間分配且分離有機層，用鹽水(20 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮。將殘餘物再溶解於MeOH中且使其通過SCX管柱，用MeOH洗滌且用3-10%含7 N氨之MeOH/DCM溶離，得到呈黃色油狀之5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺(5.70 g)。向此油狀物(5.7 g，22.1 mmol)及DIPEA(11.5 mL，66.3 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液中逐滴添加三氟乙酸酐(3.38 mL，24.3 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(15 mL)且分離有機相，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈黃色膠狀之2,2,2-三氟-N-(5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(7.8 g)在氮氣下。向此膠狀物(7.8 g，22.0 mmol)及甲酸銨(10.23 g，176.0 mmol)於MeOH(100 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(585 mg，5.5 mmol)。混合物在70℃下加熱4小時，之後冷卻，過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(20 mL)與DCM(100 mL)之間分配且分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈褐色固體狀之N-((4S,5S)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(4.72 g，49%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 9.03(s,1H),7.19(s,1H),4.90-4.76(m,2H),3.66(s,3H),3.52-3.43(m, 2H),3.12(td,J=11.9,5.4 Hz,1H),2.96(dt,J=14.8,4.2 Hz,1H),2.43-2.31(m,1H),2.13-1.85(m,3H)。未觀察到可交換之NH2。
中間物49a N-((4S,5R)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
用三苯基膦(1.3 g，4.95 mmol)處理4-疊氮基-5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷(1.4 g，4.95 mmol)於THF/水(30 mL/6 mL)中之溶液且混合物在防爆屏後在60℃下加熱4小時。使混合物於EtOAc(200 mL)與飽和NaHCO3水溶液(30 mL)之間分配。水層用EtOAc(50 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。所得油狀物用乙醚濕磨，濾出所得固體且減壓濃縮濾液，得到呈黃色油狀之5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺混有三苯基膦氧化物。在0℃下向此油狀物(1.27 g，4.95 mmol)於無水DCM(40 mL)中之溶液中依序緩慢逐滴添加DIPEA(2.6 mL，14.8 mmol)及三氟乙酸酐(0.83 mL，5.94 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌18小時。添加水(40 mL)且混合物用DCM(150 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色黏性油狀之2,2,2-三氟-N-(5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙 醯胺(1.4 g)。在氮氣下，向此油狀物(1.4 g，3.97 mmol)及甲酸銨(2.5 g，39.7 mmol)於MeOH(40 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(140 mg)。混合物在70℃下加熱30分鐘，之後冷卻，過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(30 mL)與DCM(75 mL)之間分配。水層用DCM(2×75 mL)萃取且分離合併之有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈呈黃色玻璃狀之N-((4S,5R)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(1.1 g，69%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.47(s,1H),7.12(s,1H),5.02-4.85(m,1H),4.69-4.55(m,1H),3.66(s,3H),3.42-3.20(m,3H),3.11(ddd,J=14.4,6.7,3.3 Hz,1H),2.36-2.22(m,1H),2.23-1.94(m,2H),1.90-1.82(m,1H)。未觀察到NH2。
中間物49b 5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
向反-5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(1.75 g，6.23 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液中逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(3.2 g，7.47 mmol)。觀察到放熱，因此在冷水浴中冷卻混合物。反應混合物在室溫下攪拌18小時。添加飽和NaHCO3水溶液(50 mL)且混合物用DCM(200 mL)萃取。有機層依序用飽和硫代硫酸鈉水溶液 (2×50 mL)及飽和NaHCO3水溶液(2×50 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(30-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固體狀之5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-酮(1.55 g)。在氮氣下，向冷卻至-78℃之此固體(1.5 g，5.38 mmol)於無水THF(40 mL)中之溶液中逐滴添加L-SELECTRIDE®之溶液(1 M之THF溶液，6.5 mL，6.45 mmol)且反應混合物在-78℃下攪拌90分鐘。使混合物升溫至室溫且添加水(30 mL)。混合物用EtOAc(2×100 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(50-70% EtOAc/異己烷)純化，得到呈橙黃色油狀之同-5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(845 mg，50%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07-8.01(m,1H),4.21-4.16(m,1H),3.98-3.92(m,1H),3.80(s,2H),3.44-3.30(m,2H),3.28-3.19(m,1H),3.14(ddd,J=13.3,7.4,4.0 Hz,1H),2.33-2.22(m,1H),2.21-2.09(m,1H),2.07(d,J=5.1Hz,1H),2.01-1.86(m,2H)。未觀察到OH。
中間物49c 5-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
向冷卻至0℃之5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5- 基)氮雜環庚烷-4-醇(420 mg，1.49 mmol)於無水DMF(15 mL)中之溶液中添加氫化鈉(60%於礦物油中，90 mg，2.24 mmol)。攪拌15分鐘後，添加碘甲烷(0.14 mL，2.24 mmol)且使反應混合物升溫至室溫且攪拌1小時。添加水(20 mL)且混合物用EtOAc(150 mL)萃取。有機層用水(6×30 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥，且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法純化，得到呈黃色油狀之4-疊氮基-5-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基 )氮雜環庚烷(350 mg)。用三苯基膦(311 mg，1.19 mmol)處理此油狀物(350 mg，1.19 mmol)於THF/水(15 mL/3 mL)中之溶液中且反應混合物在防爆屏後在60℃下加熱18小時。添加水(2 mL)且混合物用EtOAc(2×50 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。所得油狀物在Et2O中濕磨，濾出所得固體且減壓濃縮濾液，得到黃色油狀物。在0℃下向此油狀物(319 mg，1.19 mmol)於無水DCM(10 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(310 mg，1.42 mmol)於DCM(10 mL)及DIPEA(1.0 mL，5.93 mmol)中之溶液。使反應混合物升溫至室溫且攪拌72小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(40-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之5-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(355 mg，64%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),5.14(d,J=8.9 Hz,1H),4.00-3.90(m,1H),3.78(s,3H),3.68-3.60 (m,1H),3.48(t,J=12.6 Hz,1H),3.39(s,3H),3.33-3.23(m,1H),3.19-3.11(m,1H),3.04-2.95(m,1H),2.25-2.06(m,2H),1.88-1.76(m,2H),1.45(s,9H)。
中間物49d 5-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
用三苯基膦(392 mg，1.49 mmol)處理同-5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(420 mg，1.49 mmol)於THF/水(15 mL/3 mL)中之溶液且反應混合物在60℃下加熱9小時。添加鹽水(5 mL)且混合物用EtOAc(2×75 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。所得油狀物用Et2O濕磨，濾出所得固體且減壓濃縮濾液，得到黃色固體。向此固體於無水DCM中之溶液(10 mL)中添加二碳酸二第三丁酯(391 mg，1.79 mmol)於DCM(10 mL)及DIPEA(1.3 mL，7.47 mmol)中之溶液。使反應混合物升溫至室溫且攪拌18小時。添加水(10 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(60-75% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之5-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(172 mg)，混有三苯基膦氧化物。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),5.20(br s,1H),4.19(br s,1H),3.98-3.90(m,1H), 3.79(s,3H),3.52-3.42(m,1H),3.34-3.05(m,3H),2.72(br s,1H),2.23-2.10(m,1H),2.04-1.95(m,2H),1.92-1.80(m,1H),1.46(s,9H)。
中間物50 5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
遵循關於中間物48之程序，以4-疊氮基-5-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯及5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑為起始物，得到呈黃色膠狀之5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(1.16 g，50%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.14-8.09(m,1H),6.11(tt,J=27.8,4.4 Hz,1H),4.50-4.39(m,2H),3.83(tt,J=8.8,3.1 Hz,1H),3.67(td,J=4.7,3.6 Hz,1H),3.45-3.21(m,4H),2.37(d,J=2.9 Hz,1H),2.25-2.12(m,2H),2.03-1.91(m,2H)。
中間物51 N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循關於中間物49之程序，以5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟 乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈紅色膠狀之N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(720 mg，50%，經歷四個步驟)。LCMS(ES+)m/z 374(M+1)。
中間物52 6,6-二氟-N,N-二甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺
向6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(0.96 g，2.56 mmol)於MeOH(3 mL)中之溶液中添加HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，12.8 mL，51.2 mmol)且溶液在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM(30 mL)中。有機層用飽和NaHCO3水溶液(30 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑，得到6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺。將此胺溶解於MeOH/THF(1：1,50 mL)中且用甲醛(38%於水中，0.45 mL，6.21 mmol)處理。5分鐘後，逐份添加氰基硼氫化鈉(0.39 g，6.21 mmol)且攪拌所得混合物5小時。再添加甲醛(38%於水中，0.45 mL，6.21 mmol)及氰基硼氫化鈉(0.39 g，6.21 mmol)且攪拌所得混合物60小時。減壓移除溶劑且粗品經由矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色油狀之6,6-二氟-N,N-二甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺 (0.64 g，82%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07-8.03(m,1H),3.82(s,3H),3.70-3.57(m,2H),3.42-3.29(m,1H),3.24-3.05(m,1H),3.04-2.98(m,1H),2.51-2.40(m,1H),2.35-2.29(m,6H),2.20-2.01(m,2H),1.97-1.82(m,1H)。
中間物53 6-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
在氮氣下，向冷卻至0℃之5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇，即中間物18(0.85 g，3.0 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液中添加氫化鈉(60%於礦物油中，133 mg，3.3 mmol)且攪拌所得混合物10分鐘。添加碘甲烷(0.37 mL，6.0 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(200 mL)且混合物用EtOAc(2×50 mL)萃取。合併之有機層經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈油狀之5-疊氮基-3-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷(0.76 g)。用三苯基膦(0.71 g，2.7 mmol)處理含此疊氮化物(0.76 g，2.6 mmol)之THF(15 mL)及水(3 mL)。混合物在65℃下加熱16小時且減壓移除溶劑，得到6-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺。將此胺懸浮於 DCM(40 mL)中且添加二碳酸二第三丁酯(1.13 g，5.2 mmol)及DIPEA(1.36 mL，7.8 mmol)。在室溫下攪拌16小時後，減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM(40 mL)中。添加水(20 mL)且分離有機層，經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈油狀之6-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(0.84 g，74%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(d,J=4.3 Hz,1H),5.39(d,J=7.9 Hz,1H),4.21-3.94(m,1H),3.84(s,3H),3.56-3.42(m,2H),3.35-3.03(m,6H),2.28-1.89(m,4H),1.46(s,9H)。
中間物53a N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
向5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(0.69 g，2.25 mmol)於DCM(30 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，1.06 mL，2.86 mmol)且混合物在室溫下攪拌62小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(100 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黏性黃色油狀之5-疊氮 基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3,3-二氟氮雜環庚烷(410 mg)。向此油狀物(400 mg，1.3 mmol)於THF(10 mL)及水(2 mL)中之溶液中添加三苯基膦(341 mg，1.3 mmol)且混合物在防爆屏後在60℃下加熱16小時。混合物用EtOAc(30 mL)稀釋且用水(3×20 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。使殘餘物通過SCX管柱，用DCM及MeOH洗滌且用3-10%含1 N氨之MeOH/DCM溶離，得到呈黏性黃色油狀之1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-胺(555 mg)，混有三苯基膦氧化物)。向此油狀物(360 mg，1.28 mmol)及DIPEA(0.67 mL，3.84 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加三氟乙酸酐(0.2 mL，1.41 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。有機層用水(2×20 mL)洗滌，分離且使其通過相分離柱。減壓移除溶劑且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黏性黃色油狀之N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(280 mg)。
在氮氣下，向此油狀物(276 mg，0.73 mmol)及甲酸銨(340 mg，5.84 mmol)於MeOH(15 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(31 mg，0.29 mmol)。混合物在80℃下加熱4小時，之後冷卻，過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(10 mL)與DCM(50 mL)之間分配。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈黏性紅色油狀之N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺 (210 mg，28%，經歷四個步驟)。LCMS(ES+)m/z 350(M+1)。
中間物54 N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
向冷卻至0℃之5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(500 mg，1.78 mmol)於無水DMF(15 mL)中之溶液中添加氫化鈉(60%於礦物油中，107 mg，2.67 mmol)。攪拌15分鐘後，添加碘甲烷(0.17 mL，2.67 mmol)且使反應混合物升溫至室溫且攪拌90分鐘。添加水(20 mL)且混合物用EtOAc(200 mL)萃取，用水(6×20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥，且減壓濃縮，得到呈黃色油狀之4-疊氮基-5-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷(484 mg)。用三苯基膦(426 mg，1.63 mmol)處理此油狀物(480 mg，1.63 mmol)於THF/水(15 mL/3 mL)中之溶液且反應混合物在60℃下加熱5小時。添加EtOAc(100 mL)且混合物用飽和NaHCO3水溶液(20 mL)洗滌。水層用EtOAc(50 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。所得油狀物在Et2O中濕磨，濾出所得固體且減壓濃縮濾液，得到黃色油狀物。在0℃下向此油狀物於無水DCM中之溶液(20 mL)中添加DIPEA(0.85 mL，4.88 mmol)及三氟乙酸酐(0.27 mL，1.95 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌4小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(40-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之2,2,2-三氟-N-(5-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(530 mg)。用甲酸銨(900 mg，14.2 mmol)及10%鈀/碳(50 mg)處理此油狀物(520 mg，1.42 mmol)於MeOH(20 mL)中之溶液。混合物在65℃下加熱1小時。冷卻至室溫後，濾出催化劑且減壓濃縮濾液。使殘餘物於飽和NaHCO3水溶液(20 mL)與DCM(50 mL)之間分配。水層用DCM(3×50 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈橙色泡沫狀之N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(486 mg，82%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.85(br s,1H),7.17(s,1H),4.64(dd,J=14.5,7.2 Hz,1H),3.65(s,3H),3.57-3.36(m,2H),3.41(s,3H),3.15-3.05(m,1H),2.93-2.85(m,1H),2.61(br s,2H),2.43-2.33(m,1H),1.92-1.77(m,4H)。
中間物55 5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇
遵循關於中間物18之程序，以3-側氧基-2,3,6,7-四氫- 1H-氮呯-1-甲酸(Z)-第三丁酯為起始物，得到呈淺褐色膠狀之5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(88%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.11(s,1H),6.36-5.99(m,1H),4.89-4.70(m,1H),4.55-4.23(m,1H),4.18-4.00(m,1H),3.96-3.76(m,1H),3.73-3.44(m,2H),3.42-3.12(m,2H),2.32-1.95(m,5H)。
中間物56 1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物19之程序，以5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇為起始物，得到呈淺綠色膠狀之1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(1.34 g，46%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.17-8.06(m,1H),6.34-6.00(m,1H),4.72-4.30(m,3H),4.12-3.95(m,1H),3.66-3.10(m,4H),2.59-2.03(m,4H),1.45-1.41(m,9H)。
中間物57 (R)-N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循關於中間物28之程序，以5-氯-1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑及(R)-2,2,2-三氟-N-(六氫-1H-氮呯-4-基)-乙醯胺為起始物，得到呈淺黃色膠狀之(R)-N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(105 mg，61%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.96(s,1H),6.55-6.38(m,1H),4.30-4.15(m,1H),3.65-3.53(m,1H),3.55-3.25(m,4H),2.25-2.05(m,6H),1.35-1.05(m,4H)。
中間物57a 5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇
向3-側氧基-2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-甲酸(Z)-第三丁酯(15.0 g，71.1 mmol)於乙腈(25 mL)中之溶液中依序添加疊氮基三甲基矽烷(28.2 mL，213 mmol)及Amberlite IRA 900F樹脂(裝載量：2-3 mmol/g，18 g)，且所得混合物在防暴屏蔽後在60℃下加熱16小時。在冷卻至室溫後，過濾溶液，用乙腈洗滌樹脂且減壓濃縮濾液(浴溫<40℃)，得到呈淺橙色油狀之5-疊氮基-3-側氧基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯。於15分鐘內向在冰浴中冷卻之此油狀物於THF/水中之溶液(150 mL/150 mL)中逐份添加NaBH4(6.73 g，178 mmol)且混合物在室溫下攪拌3小時。混合物用EtOAc (2×400 mL)萃取，合併之有機層用水(2×250 mL)及鹽水(150 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥，且減壓移除溶劑，得到呈無色油狀之5-疊氮基-3-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(19.2 g)。向此油狀物(4.0 g，15.6 mmol)於DCM(60 mL)中之溶液中添加TFA(30 mL)且溶液在室溫下攪拌2小時。減壓移除溶劑且將粗殘餘物溶解於DCM中並使其通過SCX管柱，用DCM、1：1 MeOH/DCM及MeOH洗滌且用含1 N氨之MeOH溶離，得到呈淺黃色膠狀之5-疊氮基氮雜環庚烷-3-醇(2.36 g)。向含此膠狀物(1.17 g，7.48 mmol)之無水DMSO(25 mL)中添加氟化鉀(1.74 g，29.9 mmol)及5-氯-1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑(1.61 g，8.6 mmol)且混合物在70℃下加熱16小時。混合物用水(100 mL)稀釋且用EtOAc(3×30 mL)萃取。合併之有機層用水(3×20 mL)洗滌，分離，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黏性黃色油狀之5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-醇(2.24 g，81%，經歷四個步驟)。LCMS(ES+)m/z 308(M+1)。
中間物57b N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
向5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚 烷-3-醇(1.54 g，5.0 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液中逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(2.54 g，6.0 mmol)。在室溫下攪拌3小時後，混合物用DCM(25 mL)稀釋且依序用飽和NaHCO3水溶液(50 mL)及飽和硫代硫酸鈉水溶液(50 mL)淬滅。攪拌所得混合物20分鐘。分離有機層且水層再用EtOAc(3×30 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色固體狀之5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-3-酮(1.22 g)。向此固體(1.22 g，4.0 mmol)於DCM(60 mL)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，2.68 mL，7.3 mmol)且混合物在室溫下攪拌62小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋，在冰/水浴中冷卻且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(100 mL)淬滅。攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黏性黃色油狀之5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3,3-二氟氮雜環庚烷(860 mg)。向此油狀物(0.85 g，2.6 mmol)於THF(20 mL)及水(4 mL)中之溶液中添加三苯基膦(682 mg，2.6 mmol)且混合物在防爆屏後在60℃下加熱16小時。混合物用EtOAc(30 mL)稀釋且用水(3×20 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。使殘餘物通過SCX管柱，用DCM以及1：1 MeOH：DCM及MeOH洗滌且用含1 N氨之MeOH溶離，得到呈黏性深黃色油狀之1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)- 6,6-二氟氮雜環庚烷-4-胺(783 mg)，混有三苯基膦氧化物)。向此油狀物(0.78 g，2.60 mmol)及DIPEA(1.36 mL，7.80 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加三氟乙酸酐(0.4 mL，2.86 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。有機層用水(2×20 mL)洗滌，分離且使其通過相分離柱。減壓移除溶劑且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固體狀之N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(880 mg，44%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.99-7.95(m,1H),6.55(d,J=8.0 Hz,1H),4.59-4.50(m,1H),3.74-3.62(m,3H),3.44-3.34(m,2H),2.55-2.44(m,2H),2.31-2.14(m,2H),1.39-1.07(m,4H)。
中間物58 2-溴-4-(1-環丙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
向(R)-N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.725 g，2.00 mmol)於MeOH(20 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(0.75 g，7.07 mmol)及甲酸銨(0.507 g，8.03 mmol)。混合物在80℃下加 熱3小時。經由矽藻土過濾混合物且減壓濃縮濾液。殘餘物再溶解於DCM(20 mL)中且添加2-溴-5-(第三丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸(0.74 g，2.29 mmol)、PyBOP(1.57 g，3.01 mmol)及DIPEA(1 mL，5.6 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌18小時。添加水(20 mL)且持續攪拌10分鐘。分離各層且水層用DCM(2×20 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺褐色固體狀之2-溴-4-(1-環丙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(0.98 g，77%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.26(s,1H),8.43(s,1H),7.71(s,1H),6.47(d,J=8.3 Hz,1H),4.25-4.15(m,1H),3.47-3.35(m,3H),3.29-3.13(m,2H),2.46-1.57(m,6H),1.52(s,9H),1.23-1.17(m,2H),1.12-0.96(m,2H)。
中間物58a 5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
遵循關於中間物48之程序，以4-疊氮基-5-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈黃色膠狀之5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(1.2 g，72%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.96(s,1H),3.82 (tt,J=8.5,4.8 Hz,1H),3.65(ddd,J=10.0,8.5,3.8 Hz,1H),3.62-3.54(m,1H),3.52-3.37(m,2H),3.31(tdd,J=14.1,5.7,3.8 Hz,2H),2.50(d,J=3.1 Hz,1H),2.24-2.13(m,2H),2.04-1.92(m,2H),1.31-1.20(m,2H),1.14-1.05(m,2H)。
中間物58b N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循關於中間物49之程序，以5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈橙色膠狀之N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(900 mg，67%，經歷四個步驟)。LCMS(ES+)m/z 350(M+1)。
中間物59 5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑
遵循關於中間物5之程序，以1-乙基-4-硝基吡唑為起始物，得到呈無色固體狀之5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑(1.3 g，74%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.16(s,1H),4.26(q,J=7Hz,2H),1.50(t,J=7Hz,3H)。
中間物60 N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循關於中間物28之程序，以5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑及2,2,2-三氟-N-(六氫-1H-氮呯-4-基)-乙醯胺為起始物，得到呈淺黃色膠狀之N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(136 mg，55%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07(s,1H),6.39-6.37(m,1H),4.22-4.19(m,1H),4.12(q,J=7 Hz,2H),3.42-3.35(m,1H),3.27-3.18(m,3H),2.25-2.05(m,2H),2.00-1.75(m,4H),1.47(t,J=7 Hz,3H)。
中間物61 2-溴-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循關於中間物58之程序，以(R)-N-(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺為起始物，得到呈淺褐色固體狀之2-溴-4-(1-乙基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(186 mg，31%，經歷兩個步 驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.30(s,1H),8.41(s,1H),7.81(s,1H),6.44(d,J=8.2 Hz,1H),4.25-4.17(m,1H),4.06(q,J=7.2 Hz,2H),3.40-3.32(m,2H),3.23-3.10(m,2H),2.23-2.09(m,2H),2.06-1.94(m,2H),1.91-1.68(m,2H),1.54(s,9H),1.48(t,J=7.2 Hz,3H)。
中間物62 1-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-胺
將4-硝基吡唑(1.13 g，10 mmol)及K2CO3(3.4 g，25 mmol)於MeCN(50 mL)中之混合物在室溫下攪拌15分鐘，之後添加3-(溴甲基)-3-甲基氧雜環丁烷(1.8 g，11 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌18小時，過濾且濾餅用MeCN洗滌。減壓濃縮濾液且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷梯度)純化，得到呈無色固體狀之1-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)-4-硝基-1H-吡唑(1.43 g，73%)。用甲酸銨(260 mg，4.13 mmol)及10%鈀/碳(50 mg)處理溶解於MeOH(20 mL)中之此固體之一部分(206 mg，1.04 mmol)。混合物在80℃下加熱1.5小時，冷卻，經由矽藻土過濾且減壓濃縮濾液，得到呈淺粉色膠狀之1-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-胺(160 mg，92%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.15(s,1H),6.97(s,1H),4.66(d,J=6.1 Hz,2H),4.37(d,J=6.1 Hz,2H),4.19(s,2H), 2.91(s,2H),1.23(s,3H)。
中間物63 4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)丁-3-炔基胺基甲酸第三丁酯
用5-溴-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(100 mg，0.485 mmol)及溴化銅(I)二甲基硫醚錯合物(10 mg，0.049 mmol)處理3-丁炔-1-基胺基甲酸第三丁酯(123 mg，0.728 mmol)於NEt3(4 mL)中之溶液。藉由抽空並再填充氮氣使混合物脫氣4次，之後添加肆(三苯基膦)-鈀(0)(28 mg，0.024 mmol)。重複脫氣2次且反應混合物在室溫下攪拌20小時。再添加3-丁炔-1-基胺基甲酸第三丁酯(123 mg，0.728 mmol)及溴化銅(I)二甲基硫醚錯合物(10 mg，0.049 mmol)且使混合物脫氣3次。添加肆(三苯基膦)鈀(0)(28 mg，0.024 mmol)且反應混合物在室溫下攪拌48小時。混合物用EtOAc(100 mL)稀釋且用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。殘餘物經由矽膠管柱層析法(30-40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)丁-3-炔基胺基甲酸第三丁酯(112 mg，78%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.05(s,1H),5.03(s,1H),3.94(s,3H),3.46(q,J=6.4 Hz,2H),2.79(t,J=6.4 Hz,2H),1.67-1.27(m,9H)。
中間物64 5-氯-1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑
遵循關於中間物5之程序，以1-環丙基甲基-4-硝基吡唑為起始物，得到呈無色油狀之5-氯-1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.16 g，56%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.17(s,1H),4.07(d,J=7Hz,2H),1.39-1.28(m,1H),0.66-0.59(m,2H),0.50-0.40(m,2H)。
中間物65 (R)-N-(1-(1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循關於中間物28之程序，以5-氯-1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑及(R)-2,2,2-三氟-N-(六氫-1H-氮呯-4-基)-乙醯胺為起始物，得到呈淺黃色膠狀之(R)-N-(1-(1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.98 g，55%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.08(s,1H),6.42-6.39(m,1H),4.22-4.14(m,1H),4.00-3.85(m,2H),3.44-3.32(m,1H),3.30-3.15(m,3H),2.25-2.05(m,2H),2.00-1.75(m,4H),1.30-1.20(m,1H),0.70-0.62(m,2H),0.50-0.35(m,2H)。
中間物66 2-溴-4-(1-(環丙基甲基)-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5- 基胺基甲酸(R)-第三丁酯
遵循關於中間物58之程序，以(R)-N-(1-(1-環丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺為起始物，得到呈淺褐色固體狀之2-溴-4-(1-環丙基甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(310 mg，57%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.28(s,1H),8.39(s,1H),7.83-7.75(m,1H),6.40(d,J=8.2 Hz,1H),4.22-4.14(m,1H),3.90-3.80(m,2H),3.39-3.30(m,2H),3.23-3.11(m,2H),2.02-1.91(m,3H),1.89-1.67(m,4H),1.52(s,9H),0.65-0.59(m,2H),0.47-0.37(m,2H)。
中間物67 5-胺基-N-(5-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺
遵循實例110之程序，以3-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-胺為起始物，得到呈灰白色固體狀之5-胺基-N-(5-氯-1-甲基-1H- 吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺(146 mg，46%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.89(s,1H),7.74(s,1H),7.60-7.50(m,3H),7.28(t,J=8.6 Hz,2H),3.80(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 370(M+1)。
中間物68 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-(3-甲氧基丙基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺
遵循實例107之程序，經由製備型HPLC純化後，得到呈膏狀固體狀之5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-(3-甲氧基丙基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺(0.14 g，28%，經歷兩個步驟)。1H(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.75(s,1H),7.97(s,1H),7.67(s,1H),7.58-7.52(m,3H),7.30-7.25(m,2H),4.09(t,J=17.0 Hz,2H),3.27(s,3H),3.23(t,J=15.4 Hz,2H),1.98-1.93(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 394(M+1)。
中間物69 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺
遵循實例107之程序，經由製備型HPLC純化後，得到呈淺褐色固體狀之5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺(0.17 g，43%，經歷兩個步驟)。1H(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.75(s,1H),8.03(s,1H),7.70(s,1H),7.58-7.52(m,3H),7.29-7.25(m,2H),4.40-4.36(m,1H),3.97-3.93(m,2H),3.49-3.43(m,2H),1.97-1.87(m,4H)LCMS(ES+)m/z 406(M+1)。
中間物201 8-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5,8-二氮雜螺[2.6]壬烷-5-甲酸第三丁酯
向5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(323 mg，2.0 mmol)、三乙胺(0.7 mL，5.0 mmol)及氟化鉀(581 mg，10.0 mmol)於無水DMSO(20 mL)中之溶液中添加5,8-二氮雜螺[2.6]壬烷二氫溴酸鹽(686 mg，2.4 mmol)且混合物在微波中於65℃下加熱4小時。混合物用EtOAc(30 mL)稀釋且用飽和NaHCO3水溶液(3×20 mL)洗滌。水層再用DCM(3×20 mL)萃取且使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。將殘餘物裝載至SCX-2管柱上，用MeOH洗滌且用3%含7 M氨之MeOH/DCM溶離，並減壓濃縮，得到呈黃色膠狀之5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5,8-二氮雜螺[2.6]壬烷(153 mg)。向此中間物於DCM中之溶液(10 mL)中添加二碳酸二第三丁酯(157 mg，0.72 mmol)及DMAP(4 mg，0.03 mmol) 且混合物在室溫下攪拌2小時。混合物用水(3×10 mL)洗滌且分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈黃色膠狀之8-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5,8-二氮雜螺[2.6]壬烷-5-甲酸第三丁酯(200 mg，28%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02及8.00(2s,1H),3.85-3.77(m,3H),3.75-3.67(m,2H),3.47-3.27(m,4H),3.29-2.97(m,2H),1.49(s,9H),0.73-0.55(m,2H),0.47-0.38(m,2H)。
中間物202 1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-2-酮
藉由使氮氣鼓泡通過氮雜環庚烷-2-酮(136 mg，1.2 mmol)、5-溴-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(206 mg，1.0 mmol)、Xantphos(116 mg，0.20 mmol)及碳酸銫(456 mg，1.40 mmol)於二噁烷(4 mL)中之混合物，持續15分鐘，來使其脫氣。隨後添加參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)(46 mg，0.05 mmol)且使混合物再脫氣10分鐘，之後在微波中於140℃下加熱3小時。添加水(10 mL)且將混合物萃取至EtOAc(3×10 mL)中。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈褐色膠狀之1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-2-酮(107 mg，44%)。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ 8.11(s,1H),3.96(dd,J=15.2,10.0 Hz,1H),3.76(s,3H),3.53(dd,J=15.2,7.2 Hz,1H),2.82-2.74(m,2H),2.13-1.96(m,3H),1.83-1.67(m,3H)。
中間物203 4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯
遵循關於中間物202之程序，以5-溴-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑及5-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈褐色膠狀之4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(136 mg，33%)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.18(s,1H),4.04-3.72(m,5H),3.90-3.62(m,4H),3.02-2.86(m,2H),1.52(s,9H)。
中間物204 4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-氧雜氮雜環庚烷-5-酮
遵循關於中間物202之程序，以5-溴-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑及1,4-氧氮雜環庚烷-5-酮為起始物，得到呈橙色固體狀之4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-氧氮雜環庚烷-5-酮(40 mg，13%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.11(s, 1H),4.18(dd,J=13.3,6.4 Hz,1H),4.12-3.99(m,2H),3.96-3.82(m,2H),3.77(s,3H),3.64(dd,J=15.7,6.4 Hz,1H),3.08(ddd,J=15.6,8.5,2.1 Hz,1H),2.94(ddd,J=15.6,7.5,1.8 Hz,1H)。
中間物205 5-疊氮基-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
將5-疊氮基氮雜環庚烷-4-醇之溶液(2.5 g，16.0 mmol)溶解於無水DMSO(20 mL)中且添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(2.70 g，15.4 mmol)及氟化鉀(3.71 g，64 mmol)。混合物在60℃下加熱16小時，使其冷卻至室溫，傾入水(300 mL)中且萃取至EtOAc(2×50 mL)中。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之5-疊氮基-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(2.5 g，53%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.18-7.95(m,1H),4.16-4.07(m,2H),3.80(tt,J=9.1,3.1 Hz,1H),3.67-3.59(m,1H),3.42-3.18(m,4H),2.51(d,J=2.9 Hz,1H),2.24-2.12(m,2H),2.07-1.87(m,2H),1.46(t,J=7.3 Hz,3H)。
中間物206 1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
向5-疊氮基-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(1.25 g，4.2 mmol)於無水DCM(20 ml)中之溶液中逐滴添加脫氧-Fluor®(3.8 mL，10.6 mmol，50%於THF中)且混合物在室溫下攪拌16小時。在冰浴中冷卻混合物，緩慢添加飽和NaHCO3水溶液(40 mL)(觀察到起泡)且混合物用DCM(2×20 mL)萃取。有機層用飽和NaHCO3水溶液(2×10 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之4-疊氮基-5-氟-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷(0.91 g)。用三苯基膦(0.8 g，3.0 mmol)處理此膠狀物(0.9 g，3.0 mmol)於THF/水(20 mL/4 mL)中之溶液且混合物在60℃下加熱16小時。冷卻混合物且減壓濃縮至4 mL，用EtOAc(30 mL)稀釋且用1 M HCl(4×10 mL)萃取。合併之水性萃取液用EtOAc(20 mL)洗滌且隨後用6N NaOH鹼化，並用DCM(3×20 mL)萃取。分離合併之有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈黃色油狀之5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺(0.82 g)。向此油狀物(0.8 g，2.9 mmol)及DIPEA(0.77 mL，4.4 mmol)於DCM(25 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(0.97 g，4.4 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(15 mL)且分離有機相，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固 體狀之1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(1.1 g，70%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07(s,1H),4.96(s,1H),474(td,J=7.4,3.6 Hz,1H),4.65-4.58(m,1H),4.16-4.05(m,3H),3.42-3.29(m,2H),3.16(d,J=11.4 Hz,2H),2.31-2.18(m,2H),2.20-2.06(m,2H),1.94-1.82(m,1H),1.60-1.45(m,10H)。
中間物207 1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以5-疊氮基-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈黃色膠狀之1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(0.59 g，70%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.09-8.03(m,1H),4.21-3.99(m,4H),3.54-3.30(m,4H),3.33-3.05(m,4H),2.40-2.30(m,1H),2.08-1.98(m,1H),1.95-1.78(m,2H),1.50-1.40(m,12H)。
中間物208 1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈黃色膠狀之1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(0.67 g，70%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.96(s,1H),5.38(m,1H),4.15-4.08(m,1H),3.68-3.31(m,7H),3.28-3.18(m,1 H),3.07(ddd,J=14.1,6.2,3.1 Hz,1H),2.42-2.32(m,1 H),2.05-1.92(m,2 H),1.93-1.80(m,1 H),1.48(s,9H),1.26-1.13(m,4 H)。
中間物209 同-5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
遵循關於中間物119之程序，以反-5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈褐色膠狀之同-5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(0.57 g，92%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.15-8.07(m,1H),6.35-6.02(m,1H),4.55-4.35(m,2H),3.83(tt,J=8.8,2.9 Hz,1H),3.70-3.62(m,1H),3.37(t,J=11.8 Hz,1H),3.32-3.18(m,3H),2.46(d,J=2.9 Hz,1H),2.25-2.12(m,2 H),2.11-1.85(m,2H)。
中間物210 1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5- 基)-5-羥基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物122之程序，以5-疊氮基-1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈黃色膠狀之1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(0.33 g，47%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.12(s,1H),6.32-6.05(m,1H),5.06(d,J=7.9 Hz,1H),4.64-4.40(m,2H),4.23(m,1H),3.89(m,1H),3.45-3.29(m,2H),3.18-3.09(m,2H),2.60(m,1H),2.20-1.93(m,3H),1.86(dd,J=14.1,5.4 Hz,1H),1.44(s,9H)。
中間物211 同-5-疊氮基-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
遵循關於中間物119之程序，以反-5-疊氮基-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈褐色膠狀之同-5-疊氮基-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(0.5 g，81%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.08-8.04(m,1H),4.25-4.07(m,2H),3.44-3.28(m,1H),3.27-3.09(m,1H),2.32-2.21(m,1H), 2.23-2.09(m,1H),1.99-1.84(m,2H),1.42-1.14(m,5H),1.10-0.84(m,3H)。
中間物212 1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以同-5-疊氮基-1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈黃色膠狀之1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(0.46 g，70%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),5.11(t,J=8.8 Hz,1H),4.14(q,J=7.3 Hz,2H),3.94(m,1 H),3.65-3.61(m,1H),3.59-3.18(m,4H),3.31-3.20(m,1H),3.18-3.10(m,1H),2.99(d,J=13.4 Hz,1H),2.26-2.02(m,2H),1.88-1.76(m,2H),1.45-1.35(m,12H)。
中間物213 3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷
室溫下，在DMSO(4 mL)中將8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷鹽酸鹽(150 mg，1.0 mmol)及DIPEA(0.26 mL，1.5 mmol)攪拌15分鐘。隨後添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑 (150 mg，0.95 mmol)及氟化鉀(170 mg，3 mmol)且反應混合物在70℃下加熱18小時。使混合物冷卻至室溫且傾入水(4 mL)中。水層用EtOAc(3×10 mL)萃取且合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷(220 mg，92%)。1H NMR(400 MHz CDCl3)δ 8.04(s,1H),4.43(s,2H),3.86(s,3H),3.73-3.70(m,2H),2.61-2.58(m 2H),2.09-2.07(m,4H)。
中間物214 3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷
遵循關於中間物213之程序，以(1R,5S)-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷鹽酸鹽為起始物，得到呈灰白色固體狀之3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷(290 mg，99%)。1H NMR(400 MHz CDCl3)δ 8.03(s,1H),3.81 (s,3H),3.44(d,J=10.1 Hz,2H),2.66-2.59(m,2H),2.29 (br s,2H),1.78-1.71(m,4H),1.64-1.59(m,2H)。
中間物215 4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-硫氮雜環庚烷1,1-二氧化物
室溫下，在DMSO(4 mL)中將1,4-硫氮雜環庚烷鹽酸鹽(153 mg，1 mmol)及DIPEA(0.26 mL，1.5 mmol)攪拌15分鐘。隨後添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(150 mg，0.95 mmol)及氟化鉀(170 mg，3 mmol)且反應混合物在70℃下加熱18小時。使混合物冷卻至室溫且傾入水(4 mL)中。水層用EtOAc(3×10 mL)萃取且合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷(220 mg，92%)。將此中間物溶解於DCM(10 mL)中，冷卻至0℃，用間氯過苯甲酸(400 mg，1.9 mmol)處理且所得混合物在室溫下攪拌16小時。濾出所得沈澱，用冷DCM(5 mL)洗滌。濾液用2M NaOH(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈黃色固體狀之4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-硫雜環庚烷1,1-二氧化物(280 mg，97%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.14(s,1H),3.87(s,3H),3.59-3.55(m,2H),3.41-3.36(m,6H),2.29-2.24(m,2H)。
中間物218 (Z)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯醇
在氮氣下，向冷卻至-78℃之1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.5 g，11.8 mmol)及(Z)-環庚-4-烯酮(1.4 g，13.0 mmol)於無 水THF(30 mL)中之溶液中逐滴添加六甲基二矽烷胺基鋰之溶液(1.0 M之THF溶液，30 mL，29.5 mmol)。使反應混合物升溫至-40℃且攪拌90分鐘。添加飽和氯化銨水溶液(30 mL)(最初逐滴添加)且使混合物升溫至室溫，並用EtOAc(150 mL)萃取。有機層用水(30 mL)洗滌，用鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(20-25% EtOAc)純化，得到呈棕褐色油狀之(Z)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯醇(1.37 g，49%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),5.96-5.86(m,2H),4.13(s,3H),3.70(s,1H),2.63-2.54(m,2H),2.41-2.31(m,2H),2.16-2.03(m,2H),2.00-1.92(m,2H)。
中間物219 5-((1E,4Z)-環庚-1,4-二烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑
向(Z)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯醇(1.35 g，5.70 mmol)於無水DCM(60 mL)中之溶液中逐滴添加脫氧-Fluor®之溶液(50%於THF中，6.2 mL，17.1 mmol)且反應混合物在室溫下攪拌90分鐘。將混合物冷卻至0℃且添加飽和NaHCO3水溶液(70 mL)(最初逐滴添加)，且用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥，且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(15-20% EtOAc/己烷)純化，得到呈淺黃色油狀之5-((1E,4Z)-環庚-1,4-二烯基)-1-甲基-4- 硝基-1H-吡唑(523 mg，42%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),5.90(t,J=5.6 Hz,1H),5.88-5.79(m,1H),5.71-5.63(m,1H),3.82(s,3H),3.14-3.08(m,2H),2.62-2.55(m,2H),2.44-2.37(m,2H)。
中間物220 (Z)-5-(1-氟環庚-4-烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑
遵循關於中間物219之程序，得到呈灰白色固體狀之(Z)-5-(1-氟環庚-4-烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(615 mg，45%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03及8.02(2s,1H),5.98-5.94(m,2H),4.10及4.08(2s,3H),2.67-2.54(m,3H),2.49(t,J=13.6 Hz,1H),2.10-1.93(m,4H)。
中間物221 (E)-2-疊氮基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯醇
向冷卻至0℃之5-((1E,4Z)-環庚-1,4-二烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(520 mg，2.37 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中逐份添加m-CPBA(70%，646 mg，2.61 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌90分鐘。添加飽和NaHCO3水溶液(30 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。有機層用2 M NaOH溶液(3×30 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥，且減壓濃縮，得到淺黃色固體(595 mg)。用氯化銨(333 mg，6.28 mmol)及疊氮化鈉(816 mg，12.6 mmol)處理此固體(590 mg，2.51 mmol)於MeOH/水(16mL/4mL)中之懸浮液。反應混合物在70℃下加熱18小時。減壓移除MeOH，殘餘物用水(20 mL)稀釋且用EtOAc(100 mL)萃取。有機層用鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥，且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(50-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色油狀之(E)-2-疊氮基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯醇(294 mg，42%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),5.96(dd,J=8.3,4.9 Hz,1H),3.84-3.70(m,4H),3.56-3.47(m,1H),2.71(ddd,J=15.5,8.3,2.3 Hz,1H),2.61-2.36(m,4H),2.23-2.14(m,1H),1.89-1.76(m,1H)。
中間物222 2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體1)
在氮氣下向(E)-2-疊氮基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯醇(450 mg，1.62 mmol)於無水DCM(20 mL)中 之溶液中逐滴添加脫氧-Fluor®之溶液(50%於THF中，1.5 mL，4.05 mmol)且混合物在室溫下攪拌2小時。添加飽和NaHCO3水溶液(20 mL)且混合物用DCM(75 mL)萃取。有機層用NaHCO3溶液(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥，且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(20-40% EtOAc/異己烷)純化，得到淺黃色油狀物(260 mg)。用三苯基膦(234 mg，0.89 mmol)處理此油狀物(250 mg，0.89 mmol)於THF/水(10 mL/2 mL)中之溶液且混合物在60℃下加熱6小時。再添加三苯基膦(24 mg，0.09 mmol)至反應混合物中，在60℃下加熱1小時。使混合物於EtOAc(75 mL)與飽和NaHCO3水溶液(10 mL)之間分配且分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到黃色油狀物。向此油狀物(227 mg，0.89 mmol)及DIPEA(0.47 mL，2.69 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中逐滴添加三氟乙酸酐(0.15 mL，1.07 mmol)且混合物在室溫下攪拌72小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 ml)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥，且減壓濃縮，得到淺黃色黏性油狀物(240 mg)。使此油狀物(240 mg，0.69 mmol)於MeOH(50 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，70℃，流速：1 mL/min，10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到淺黃色泡沫狀物(195 mg)。向此泡沫狀物(190 mg，0.59 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加DIPEA(1.0 mL)、PyBOP(767 mg，1.48 mmol)及5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(231 mg，0.65 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。添加水(30 mL)且混 合物用DCM(100 mL及30 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(60-70% EtOAc/異己烷)隨後對掌性製備型HPLC純化，得到呈灰白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體1)(53 mg，5%，經歷五個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.31(s,1H),8.70(s,1H),7.79(s,1H),7.40-7.33(m,1H),7.10-7.01(m,2H),6.41(d,J=7.3 Hz,1H),4.81-4.62(m,1H),4.17-4.06(m,1H),3.86(s,3H),2.90-2.79(m,1H),2.40-2.28(m,1H),2.22-1.89(m,5H),1.79-1.67(m,1 H),1.60-1.48(m,10 H)。
中間物223 2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體2)
遵循關於中間物222之程序，得到呈白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體2)(28 mg，3%，經歷五個步驟)。1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ 10.31(s,1H),8.70(s,1H),7.79(s,1H),7.41-7.32(m,1H),7.12-7.02(m,2H),6.50(d,J=7.4 Hz,1H),4.81-4.63(m,1H),4.18-4.05(m,1H),3.86(s,3H),2.87-2.79(m,1H),2.38-2.25(m,1H),2.21-1.91(m,5H),1.68-1.50(m,2H),1.54(s,9H)。
中間物224 2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體3及非對映異構體4)
遵循關於中間物222之程序，在經由矽膠管柱層析法純化後，得到呈灰白色固體狀之呈對映異構體外消旋混合物形式之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體3及非對映異構體4)(82 mg，8%，經歷五個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.35(s,1H),8.56(s,1H),7.78(s,1H),7.44-7.35(m,1H),7.11-7.01(m,2H),6.46(d,J=8.0 Hz,1H),4.64-4.44(m,1H),4.26-4.19(s,1H),3.85(s,3H),3.05-2.95(s,1H),2.36-2.27(m,1H),2.09-1.84(m,7H),1.54(s,9H)。
中間物225 2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟 乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體5)
遵循關於中間物222之程序，得到呈白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體5)(28 mg，3%，經歷五個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.31(s,1H),8.74(s,1H),7.84(s,1H),7.40-7.33(m,1H),7.14-7.04(m,2H),6.63(d,J=8.5 Hz,1H),5.06-4.88(m,1H),4.30-4.16(m,1H),3.85(s,3H),3.09-2.99(m,1H),2.35-1.88(m,8H),1.54(s,9H)。
中間物226 2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體6、非對映異構體7及非對映異構體8)
遵循關於中間物222之程序，得到呈白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體6、非對映異構體7及非對映異構體8)(76 mg，7%，經歷五個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.35及10.31(2s,1H),8.74及8.61(2s,1H),7.84及7.75(2s,1H),7.41-7.34(m,1H),7.12-7.02(m,2H),6.73-6.58(m,1H),4.31-4.11(m,1H),3.86及3.85(2s,3H),3.08-2.97(m,1H),2.44-1.71(m,9H),1.55(s,9H)。
中間物227 (E)-5-(6,6-二氟環庚-1-烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑
將三氟甲烷磺酸(E)-3-側氧基環庚-1-烯基酯(1.8 g，6.98 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-聯(1,3,2-二氧硼)(2.42 g，9.52 mmol)、乙酸鉀(1.56 g，15.8 mmol)及Pd(dppf)Cl2 DCM錯合物(0.32 g，0.39 mmol)懸浮於脫氣之二噁烷(20 mL)中且混合物加熱至80℃，保持16小時。冷卻後，過濾混合物且濾餅用二噁烷(3×20 mL)洗滌。藉由使氮氣鼓泡通過此溶液，保持10分鐘來使其脫氣且向其中添加脫氣之乙酸鉀/碳酸鈉水溶液(1 M，1：1，20.9 mL，20.9 mmol)、Pd(dppf)Cl2 DCM錯合物(0.32 g，0.39 mmol)及5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.54 g，9.51 mmol)。混合物加 熱至110℃，保持24小時，使其冷卻至室溫且經由矽藻土過濾，減壓濃縮濾液且將殘餘物溶解於EtOAc(30 mL)中且用水(3×20 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到油狀物(460 mg)。用脫氧-Fluor®(50%之THF溶液，1.57 mL，4.34 mmol)處理此油狀物(440 mg，1.86 mmol)於DCM(8 mL)中之溶液且反應混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(20 mL)稀釋，在冰-水浴中冷卻且小心地用飽和NaHCO3水溶液(50 mL)淬滅。有機層用水(2×20 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈油狀之(E)-5-(6,6-二氟環庚-1-烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(0.16 g，33%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),6.24-6.16(m,1H),3.84(s,3H),2.49-2.31(m,4H),1.88-1.75(m,3H),1.60(d,J=6.5 Hz,1H)。
中間物228 N-(4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺
將4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(610 mg，2.40 mmol)溶解於乙腈(4 mL)中且冷卻至0℃，之後逐滴添加濃硫酸(2.1 mL)。使反應物升溫至室溫 且攪拌1小時，之後傾至冰(150 g)上，用KOH鹼化且用DCM(2×30 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈黃色固體狀之N-(4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(660 mg，93%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.05-7.98(m,1H),5.31(s,1H),3.81-3.73(m,3H),3.35(ddd,J=14.2,9.3,2.2 Hz,1H),3.22(t,J=5.9 Hz,2H),3.09(ddd,J=14.2,7.6,2.5 Hz,1H),2.43-2.31(m,2H),2.05-1.95(m,3H),1.89-1.74(m,4H),1.53-1.36(m,3H)。
中間物229 N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-乙氧基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
遵循關於中間物54之程序，以5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇及碘乙烷為起始物，得到呈粉色膠狀之N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-乙氧基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(151 mg，60%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.73(s,1H),7.16(s,1H),4.60-4.53(m,1H),3.69-3.36(m,8H),3.16-3.05(m,1H),2.90(dt,J=14.4,4.4 Hz,1H),2.64-2.27(m,3H),1.89-1.76(m,3H),1.22(t,J=7.0 Hz,3H)。
中間物230 同-5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇
遵循關於中間物119之程序，以反-5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈褐色油狀之同-5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(560 mg，78%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.97-7.92(m,1H),3.94(dt,J=9.0,2.7 Hz,1H),3.73-3.62(m,1H),3.53-3.22(m,5H),2.24-2.12(m,2H),2.02-1.88(m,2H),1.28-1.23(m,2H),1.15-1.05(m,2H)。未觀察到OH。
中間物231 1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以同-5-疊氮基-1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇為起始物，得到呈黃色油狀之1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(440 mg，61%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.95(s,1H),5.21(d,J=9.0 Hz,1H),4.00(d,J=10.3 Hz,1H),3.73-3.51(m,3H),3.56-3.27(m,4H),3.26-3.18(m,1H),3.10(d,J=13.5 Hz,1H),2.28-2.16(m,1H),2.15-2.06(m,1H),1.93-1.79(m,2H),1.46(s,9H),1.37-1.03(m,4H)。
中間物232 1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-4-(三氮甲基)氮雜環庚烷-4-醇
向4-側氧基氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(2.0 g，8.08 mmol)於三氮甲基三甲基矽烷(1.42 mL，9.70 mmol)中之溶液中添加氮化銫(70.4 mg，0.40 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌，藉由19F NMR觀察到三氮甲基三甲基矽烷完全消耗，且用1 M HCl溶液(50 mL)淬滅。混合物用EtOAc(3×50 mL)萃取且合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之4-羥基-4-(三氮甲基)氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲酯(1.48 g)。向此油狀物(1.3 g，4.1 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液中添加甲基環己二烯(4.6 mL)及10%鈀/碳(0.13 g)。反應混合物在回流下加熱30分鐘，之後冷卻至室溫，經由矽藻土過濾，用MeOH洗滌且減壓濃縮。將殘餘物溶解於DMSO(10 mL)中且添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(637 mg，3.94 mmol)及氟化鉀(916 mg，15.76 mmol)。反應混合物在70℃下加熱16小時，用水(50 mL)淬滅且用EtOAc(3×50 mL)萃取。合併之有機層用水(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固體狀之1-(1-甲 基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-4-(三氟甲基)氮雜環庚烷-4-醇(1.06 g，40%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),3.78(s,3H),3.71(ddd,J=14.7,10.5,2.0 Hz,1H),3.31(dt,J=11.8,4.4 Hz,1H),3.14(td,J=11.3,4.6 Hz,1H),3.06(ddd,J=14.7,5.7,2.9 Hz,1H),2.31-2.13(m,1H),2.14-1.94(m,5H),1.92-1.83(m,1H)。
中間物233 (E)-7-疊氮基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-3-烯醇
遵循關於中間物221之程序，得到呈淺黃色油狀之(E)-7-疊氮基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-3-烯醇(244 mg，35%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),5.95(dd,J=8.2,5.1 Hz,1H),3.80(s,3H),3.69-3.61(m,2H),2.74-2.63(m,1H),2.61-2.41(m,3H),2.28-2.19(m,1H),1.97-1.86(m,1 H)。未觀察到OH。
中間物234 (E)-2-甲氧基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以(E)-7-疊氮基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-3-烯醇為起始物，得到呈淺黃 色固體狀之(E)-2-甲氧基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯基胺基甲酸第三丁酯(360 mg，62%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.05(s,1H),5.82(t,J=6.5 Hz,1H),4.77(s,1H),3.93(s,1H),3.82(s,3H),3.42(s,3H),3.37(t,J=7.6 Hz,1H),2.71-2.44(m,3H),2.34(t,J=11.7 Hz,1H),2.22-2.11(m,1H),1.86-1.74(m,1H),1.47(s,9H)。
中間物235 4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
向冷卻至-78℃之4-側氧基氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(2.0 g，8.09 mmol)於乙醚(18 mL)中之溶液中逐滴添加甲基鋰溴化鋰錯合物之溶液(1.5 M於Et2O中，10.8 mL，16.17 mmol)。反應混合物在-78℃攪拌30分鐘，之後用飽和氯化銨溶液(50 mL)淬滅。反應物升溫至室溫且用EtOAc(3×50 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淡黃色油狀之4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(1.94 g)。使此油狀物(884 mg，3.36 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，50℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)且減壓移除溶劑。將殘餘物溶解於DMSO(10 mL)中且添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H- 吡唑(521 mg，3.23 mmol)及氟化鉀(750 mg，12.91 mmol)。反應混合物在75℃加熱16小時，之後用水(30 mL)淬滅。混合物用EtOAc(3×30 mL)萃取，且合併之有機層用水(20 mL)洗，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(290 mg)。向此油狀物(260 mg，1.04 mmol)及氯乙腈(139 mL，2.09 mmol)於乙酸(1.0 mL)中在0℃之溶液中逐滴添加濃硫酸(308 mL，3.15 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且再攪拌2小時，之後用2 M NaOH水溶液(10 mL)淬滅且用EtOAc(3×10 mL)萃取。分離合併之有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之2-氯-N-(4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(264 mg)。向此油狀物(264 mg，0.80 mmol)於乙醇(1.4 mL)及乙酸(0.6 mL)中之溶液中添加硫脲(73 mg，0.96 mmol)。反應混合物在回流加熱16小時，用1 M NaOH溶液(5 mL)淬滅且用EtOAc(10 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。殘餘物通過SCX管柱，用含1 M NH3之MeOH溶離，得到呈膠狀之4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺(172 mg)。向此膠狀物(166 mg，0.65 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液中添加DIPEA(0.57 mL，3.27 mmol)，然後添加二碳酸二第三丁酯(171 mg，0.78 mmol)。反應混合物在室溫攪拌16小時， 用水(10 mL)淬滅且用DCM(3×10 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離器且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(188 mg，14%，經歷六個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),4.53(s,1H),3.78(s,3H),3.38-3.28(m,1H),3.28-3.16(m,2H),3.11-3.03(m,1H),2.28-2.12(m,2H),1.90-1.69(m,4H),1.44(d,J=7.2 Hz,12H)。
中間物236 5-(4-氟-8-氧雜雙環[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑
在0℃下，向(Z)-5-(1-氟環庚-4-烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(900 mg，3.77 mmol)於DCM(30 mL)中之溶液中逐份添加間氯過苯甲酸(1.0 g，4.14 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌90分鐘，之後用飽和碳酸氫鈉溶液(30 mL)淬滅。混合物用DCM(100 mL)萃取，用2 M NaOH水溶液(2×50 mL)及鹽水(30 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈無色固體狀之呈2：5比率之非對映異構體形式之5-(4-氟-8-氧雜雙環[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(982 mg，定量)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07及8.01(2 s,1H),4.12-4.00(m,3H),3.27-3.11(m, 2H),2.90-2.63(m,2H),2.24-1.74(m,6H)。
中間物237 2-疊氮基-5-氟-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚醇
用氯化銨(135 mg，2.55 mmol)及疊氮化鈉(332 mg，5.1 mmol)處理5-(4-氟-8-氧雜雙環[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(260 mg，1.02 mmol)於DMF/水(10 mL/1 mL)中之溶液且混合物在100℃下加熱48小時。反應混合物用EtOAc(100 mL)萃取且有機層用水(7×20 mL)洗滌，用鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥，且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈白色固體狀之2-疊氮基-5-氟-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚醇(145 mg，48%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06及8.05(2 s,1H),4.08及4.06(2 s,3H),3.83(dd,J=10.7,8.2 Hz,1H),3.65-3.58(m,1H),2.87-2.55(m,2H),2.33-2.21(m,2H),2.17-1.98(m,3H),1.98-1.84(m,2H)。
中間物238 5-氟-2-甲氧基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以2-疊氮基-5-氟-5-(1-甲 基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚醇為起始物，得到呈灰白色固體狀之5-氟-2-甲氧基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚基胺基甲酸第三丁酯(155 mg，53%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),4.08及4.06(2 s,3H),3.82(d,J=8.8 Hz,1H),3.39(s,3H),2.98-2.62(m,1H),2.16-1.84(m,7H),1.61-1.49(m,2H),1.47(s,9H)。
中間物239 1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，於15分鐘時間段內向5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(5.4 g，19.2 mmol)於DCM(150 mL)中之溶液中逐滴添加Deoxofluor®於THF中之溶液(18.5 mL，51.1 mmol)。在18小時內使反應物升溫至室溫。隨後將混合物冷卻至0℃，之後逐滴添加飽和碳酸氫鈉溶液(300 mL)。反應混合物攪拌1小時，之後分離各層且水層用DCM(200 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺綠色膠狀之4-疊氮基-5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷(3.66 g)。向此膠狀物(3.66 g，12.9 mmol)於THF(200 mL)及水(20 mL)中之溶液中添加三苯基膦(3.38 g，12.9 mmol)。反應混合物在60℃ 下加熱18小時，之後冷卻至室溫且減壓濃縮。殘餘物隨後用EtOAc(500 mL)稀釋，用1 N HCl水溶液(100 mL)淬滅且用水(2×100 mL)洗滌。合併之有機層用EtOAc(300 mL)洗滌，之後用固體氫氧化鈉鹼化至pH 14且用DCM(3×250 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，得到呈淺綠色膠狀之5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺(3.1 g)。向此膠狀物(3.1 g，12.0 mmol)於DCM(150 mL)中之溶液中依序添加三乙胺(4 mL，28.6 mmol)及二碳酸二第三丁酯(3.95 g，18.0 mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌2小時，之後減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色固體狀之5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(3.7 g，86%)。向此固體(1.5 g，4.19 mmol)於MeOH(100 mL)中之溶液中依序添加甲酸銨(1.95 g，33.58 mmol)及10%鈀/碳(178 mg，1.68 mmol)且混合物在75℃下加熱2小時。經由矽藻土過濾混合物且減壓濃縮溶劑。將殘餘物溶解於水(100 mL)中且用DCM(3×100 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈紫色固體狀之1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(1.37 g，54%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.13(s,1H),6.28(s,1H),4.75(d,J=46.1 Hz,1H),4.26(s,1H),3.66(s,3H),3.49-3.30(m,2H),3.13-2.88(m,2H),2.62(s,2H),2.29-2.15(m,1H),2.10-1.97(m,1H),1.89-1.80(m,1H),1.75- 1.54(m,1H),1.45(s,9H)。
中間物240 1-(4-(5-(第三丁氧基-羰基)-胺基-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
將PyBOP(3.06 g，5.03 mmol)及2-溴-5-(第三丁氧羰基-胺基)噻唑-4-甲酸(1.63 g，5.04 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液在室溫下攪拌15分鐘。添加1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(1.37 g，4.20 mmol)及DIPEA(1.17 mL，6.71 mmol)且混合物在室溫下攪拌2天。反應混合物用DCM(50 mL)稀釋且用水(3×50 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈粉色固體狀之1-(4-(5-胺基-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(2.50 g，94%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.27(s,1H),8.27(s,1H),7.64(s,1H),5.01(s,1H),4.86-4.60(m,1H),3.81-3.64(m,3H),3.44-3.27(m,2H),3.15-3.07(m,2H),2.28-2.10(m,3H),1.92-1.70(m,2H),1.52(s,9H),1.44(s,9H)。
中間物240a 6-疊氮基-6-甲基-環己-3-烯-1-醇
將碳酸氫鈉(7.5 g，89 mmol)及間氯過苯甲酸(20 g，89 mmol)逐份添加至冷卻至-15℃之1-甲基環己-1,4-二烯(8.4 g，89 mmol)於DCM(250 mL)中之溶液中且攪拌混合物30分鐘。用20%亞硫酸鈉溶液(100 mL)淬滅反應且升溫至室溫。水層用DCM(3×100 mL)萃取且合併之有機層用亞硫酸鈉水溶液(100 mL)、NaHCO3水溶液(100 mL)、水(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈無色油狀之環氧化物。將該環氧化物(2.1 g，19.1 mmol)緩慢添加至在30℃下攪拌之疊氮化鈉(6.2 g，95 mmol)於乙酸(5 mL)及水(25 mL)中之混合物中，且攪拌所得混合物16小時，將冷凝器上方就地產生之任何疊氮酸吹入漂白劑溶液中。將混合物冷卻至室溫且用NaHCO3水溶液(20 mL)淬滅。混合物用乙醚(3×50 mL)萃取且合併之有機物用2 N NaOH水溶液(50 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈黃色油狀之6-疊氮基-6-甲基-環己-3-烯-1-醇(1.8 g，82%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.58-5.55(m,2H),3.77-3.73(m,1H),2.46(d,J=6.5 Hz,1H),2.30-2.27(m,2H),2.10(s,3H),2.06-2.03(m,2H)。
中間物241 5-疊氮基-1-苯甲基-5-甲基氮雜環庚烷-4-醇
藉由使氮氣鼓泡通過冷卻至-78℃之6-疊氮基-6-甲基環己-3-烯醇(3.9 g，25 mmol)於MeOH/DCM(100 mL/20 mL)中之溶液，持續5分鐘，來使其脫氣。隨後使臭氧鼓泡通過反應混合物，直至持續呈現淺灰藍色。再使氮氣鼓泡通過冷反應混合物，直至僅持續呈現灰白色。依序添加溶解於MeOH(5 mL)中之苯甲基胺(2.7 g，25 mmol)之溶液及含NaCNBH3(6.4 g，101.5 mmol)之MeOH(10 mL)。使混合物升溫至室溫且攪拌16小時。減壓移除溶劑且使殘餘物於EtOAc(50 mL)與水(50 mL)之間分配。水層再用EtOAc(3×50 mL)萃取且合併之有機層用鹽水(40 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(1-10%含7 M NH3之MeOH/DCM)純化，得到呈黏性黃色油狀之5-疊氮基-1-苯甲基-5-甲基氮雜環庚烷-4-醇(4.8 g，73%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.25-7.34(m,5H),3.69-3.62(m,2H),3.51-3.47(m,2H),2.96-2.89(m,1H),2.69-2.62(m,3H),2.19-2.11(m,1H),1.99-1.85(m,1H),1.78-1.68(m,1H),1.61-1.57(m,1H),1.43(s,3H)。
中間物242 5-胺基-1-苯甲基-5-甲基氮雜環庚烷-4-醇
向5-疊氮基-1-苯甲基-5-甲基氮雜環庚烷-4-醇(1.5 g，5.76 mmol)於THF(12 mL)及水(4 mL)中之溶液中緩慢添加三甲基膦之溶液(1 M之甲苯溶液，28 mL，28.9 mmol)且 反應物在65℃下攪拌18小時。使混合物冷卻至室溫且減壓濃縮。將殘餘物溶解於1 M HCl(30 mL)中且用EtOAc(2×25 mL)萃取。水層用6 M NaOH水溶液鹼化至pH 14且用DCM(3×30 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(1-10%含7 M NH3之MeOH/DCM)純化，得到呈黏性黃色油狀之5-胺基-1-苯甲基-5-甲基氮雜環庚烷-4-醇(1.2 g，89%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.34-7.20(m,5H),3.60-3.52(m,2H),3.50-3.46(m,2H),2.80-2.79(m,1H),2,70-2.45(m,4H),2.15-1.95(m,1H),1.79-1.72(m,2H),1.49-1.40(m,2H),1.19(s,3H)。
中間物243 N-(1-苯甲基-5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺
在0℃下，向5-胺基-1-苯甲基-5-甲基氮雜環庚烷-4-醇(1.2 g，5.12 mmol)及Et3N(0.77 g，7.68 mmol)於THF(20 mL)中之溶液中逐滴添加三氟乙酸酐(1.18 g，5.63 mmol，0.78 mL)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌3小時。使混合物於EtOAc(10 mL)與水(10 mL)之間分配且水層用EtOAc(3×25 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(1-5%(含7 M NH3之MeOH)/DCM)純化，得到呈黃色膠狀之N- (1-苯甲基-5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(0.8 g，47%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.34-7.28(m,5H),6.65(br s,1H),4.22-4.15(m,1H),3.60(dd,J=9.6,9.7 Hz,2H),2.90-2.75(m,1H),2.70-2.65(m,1H),2.60-2.49(m,2H),2.20-2.10(m,1H),1.95-1.80(m,2H),1.75-1.55(m,2H),1.58(s,3H)。
中間物244 2,2,2-三氟-N-(5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺
向N-(1-苯甲基-5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(1.7 g，5.0 mmol)於MeOH(30 mL)中之溶液中添加1 M HCl(1 mL)及氫氧化鈀/碳(0.25 g)。在氫氣氛圍(40 psi)下振盪混合物72小時。經由矽藻土過濾混合物，用MeOH(30 mL)洗滌。減壓移除溶劑且使殘餘物通過SCX管柱，用(1-10%(含7 M NH3之MeOH)/DCM)溶離，得到呈黃色膠狀之2,2,2-三氟-N-(5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(0.8 g，66%)。1H(400 MHz,CDCl3)δ 6.90(br s,1H),4.22-4.16(m,1H),3.70-3.60(m,1H),3.40-3.35(m,1H),3.15-2.99(m,1H),2.90-2.75(m,2H),2.20-2.05(m,1H),1.99-1.75(m,4H),1.53(s,3H)。
中間物245 2,2,2-三氟-N-(5-羥基-4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺
遵循關於中間物213之程序，以2,2,2-三氟-N-(5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺為起始物，得到呈白色固體狀之2,2,2-三氟-N-(5-羥基-4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(400 mg，88%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),3.77(s,2H),3.54(dd,J=10.2,3.2 Hz,1H),3.49(s,3H),3.41-3.32(m,1H),3.30-3.22(m,1H),3.13(dt,J=13.1,4.7 Hz,2H),2.22-2.00(m,1H),1.95-1.72(m,2H),1.24-1.15(m,3H),1.08(d,J=7.0 Hz,1H)。
中間物246 1-(4-(5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
向6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(2.5 g，6.67 mmol)於乙醇(100 mL)及水(10 mL)中之溶液中添加氯化銨(3.5 g，65.0 mmol)及鐵粉(3.0 g，53.7 mmol)。反應混合物在100℃下加熱2.5小時，之後在室溫下冷卻，經由矽藻土過濾，用MeOH洗 滌且減壓濃縮濾液。將殘餘物溶解於DCM(200 mL)中，用飽和碳酸氫鈉溶液(300 mL)及10%亞硫酸鈉溶液(100 mL)淬滅且攪拌混合物30分鐘。分離各層且水層用DCM(100 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-30% EtOAc/異己烷)純化，得到呈橙色泡沫狀之1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(2.12 g)。PyBOP(1.92 g，3.70 mmol)及2-溴-5-(第三丁氧羰基-胺基)噻唑-4-甲酸(795 mg，2.46 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液在室溫下攪拌15分鐘。添加1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(850 mg，2.46 mmol)及DIPEA(2.0 mL，11.4 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。反應混合物用DCM(50 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉溶液(100 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色泡沫狀之1-(4-(5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(1.35g，77%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.24(s,1H),8.37(s,1H),7.65(s,11),4.88(s,1H),4.04(s,1H),3.77(s,3H),3.63-3.43(m,2H),3.38-3.24(m,2H),2.52-2.40(m,2H),2.13-2.05(m,1H),1.99(s,1H),1.53(s,9H),1.43(s,9H)。
中間物247 1-(4-(5-(第三丁氧基-羰基-胺基)-2-溴噻唑- 4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-6-甲基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物245之程序，以6-甲氧基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺黃色泡沫狀之1-(4-(5-(第三丁氧基-羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-6-甲基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(530 mg，79%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.43(s,1H),9.25(s,1H),7.92(s,1H),4.60(s,1H),4.03(d,J=10.5 Hz,1H),3.71(s,3H),3.38(s,3H),3.39-3.19(m,4H),3.06(d,J=14.5 Hz,1H),2.36(d,J=14.2 Hz,1H),2.16(d,J=13.4 Hz,1H),1.77(d,J=12.1 Hz,1H),1.52(s,9H),1.43(s,9H),1.12(s,3H)。
中間物248 (E)-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-2-烯酮
向環庚烷-1,3-二酮(10 g，79.3 mmol)於DCM(500 mL)中之溶液中添加吡啶(12.8 mL，158.6 mmol)。在-78℃下冷 卻溶液，之後逐滴添加三氟甲磺酸酐(13.2 mL，95.1 mmol)。使混合物升溫至0℃且攪拌4小時，之後用1 M HCl(150 mL)淬滅。有機層用飽和碳酸氫鈉溶液(200 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈褐色油狀之(E)-3-側氧基環庚-1-烯基三氟甲烷磺酸酯。向此油狀物(1.8 g，6.97 mmol)於脫氣之二噁烷(200 mL)中之溶液中添加乙酸鉀(15.6 g，158.6 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(24.2 g，95.1 mmol)及[1,1'-雙(二苯基膦基)-二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷之錯合物(3.24 g，3.97 mmol)且混合物在90℃下加熱18小時。混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾，用MeOH(50 mL)洗滌且減壓移除溶劑。將殘餘物溶解於脫氣之二噁烷(200 mL)中，之後依序添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(15.4 g，95.1 mmol)及[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷之處錯合物(3.24 mg，3.97 mmol)及1/1碳酸鈉/乙酸鉀之水溶液(63 mL，3.8 M)。混合物在105℃下加熱3小時。使混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾且用MeOH(50 mL)洗滌。減壓濃縮濾液。將殘餘物溶解於EtOAc(50 mL)中且用水(50 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺褐色固體狀之(E)-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-2-烯酮(7.2 g，39%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.08(s,1H),6.09(s,1H),3.83(s,3H),2.81-2.77(m,2H),2.71-2.67(m,2H),2.07-1.97(m,4H)。
中間物249 (2E,6Z)-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-2,6-二烯酮
在-78℃下向LiHMDS之溶液(1 M之THF溶液，1.28 mL，1.28 mmol)中添加(E)-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-2-烯酮(150 mg，0.64 mmol)且混合物在-78℃下攪拌1小時。添加溴化苯基(453 mg，1.92 mmol)於THF(0.5 mL)中之溶液且使反應混合物升溫至0℃且攪拌45分鐘，之後用飽和氯化銨水溶液(2 mL)淬滅。混合物用EtOAc(3×5 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈油狀之(E)-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-7-(苯基硒基)環庚-2-烯酮。將此油狀物溶解於DCM(3 mL)中且依序添加吡啶(0.1 mL，1.28 mmol)及過氧化氫(30 wt%於水中，0.37 mL，3.34 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌18小時。添加1 M HCl(10 mL)且混合物用DCM(2×5 mL)萃取。合併之有機層用1 M HCl(5 mL)、水(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之(2E,6Z)-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-2,6-二烯酮(26 mg，17%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.11(s,1H),6.88-6.82(m,1H),6.26-6.23(dd,J=12.0,1.6 Hz,1H),6.19(d,J=2.0 Hz,1H),3.87(s,3H), 2.82-2.73(m,4H)。
中間物250 5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-側氧基環庚-4-烯基胺基甲酸(E)-第三丁酯
向(2E,6Z)-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-2,6-二烯酮(690 mg，2.95 mmol)於乙腈(10 mL)中之溶液中添加疊氮基三甲基矽烷(1 mL，7.57 mmol)及AmberliteTM IRA900F樹脂(590 mg，1.47 mmol)。反應混合物在40℃下攪拌5小時，冷卻至室溫，過濾且減壓濃縮，得到呈黃色油狀之(E)-6-疊氮基-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-2-烯酮。向此油狀物(810 mg，2.93 mmol)於THF(20 mL)及水(6 mL)中之溶液中添加硼氫化鈉(166 mg，4.40 mmol)。混合物在室溫下攪拌18小時，之後用水(50 mL)稀釋。混合物用EtOAc(100 mL)萃取且分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之(E)-6-疊氮基-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-2-烯醇。將此油狀物(810 mg，2.91 mmol)溶解於THF(15 mL)中且添加至聚合物支撐之三苯基膦(3.1 g，5.76 mmol)於THF(45 mL)及水(1.5 mL)中之懸浮液中。在60℃下小心攪拌混合物18小時，冷卻至室溫且減壓濃縮。殘餘物在DCM(30 mL)中進行稀釋且添加二碳酸二第三丁酯(754 mg，3.46 mmol)及DIPEA(1.51 mL，8.64 mmol)。混合物在室溫下攪拌5小時，用DCM(50 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉溶液(50 mL)淬滅。有機層用水(50 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈白色泡沫狀之5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-側氧基環庚-4-烯基胺基甲酸(E)-第三丁酯(620 mg，59%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.05(s,1H),6.03-5.99(m,1H),4.82-4.60(m,2H),3.86-3.82(m,4H),2.82-2.34(m,1H),2.29-2.35(m,1H),2.34-2.20(m,2H),2.15-2.04(m,1H),1.85-1.51(m,2H),1.45(s,9H)。
中間物251 2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(Z)-第三丁酯
向(Z)-2,3,6,7-四氫-1H-氮呯鹽酸鹽(32.3 g，0.24 mmol)於DMSO(650 mL)中之溶液中依序添加3-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(37.2 g，0.23 mmol)及DIPEA(64 mL，0.36 mmol)及氟化鉀(56.2 g，0.96 mmol)。反應混合物在75℃下加熱25小時，之後冷卻至室溫，傾入水(1.5 L)中且用EtOAc(4×500 mL)萃取。合併之有機層用水(400 mL)及鹽水(300 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到 呈淺褐色固體狀之(Z)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-3-基)-2,3,6,7-四氫-1H-氮呯(50.7 g)。向此固體(1.80 g，8.1 mmol)於乙醇(80 mL)及水(8 mL)中之溶液中添加氯化銨(2.15 g，40.1 mmol)及鐵粉(1.77 g，31.8 mmol)。反應混合物在80℃下加熱1.5小時，之後冷卻至室溫，經由矽藻土過濾且減壓濃縮。將殘餘物溶解於DCM(200 mL)中且用水(200 mL)洗滌。水層用DCM(100 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈褐色油狀之(Z)-1-甲基-3-(2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-基)-1H-吡唑-4-胺(1.36 g，87%)。在室溫下將HATU(3.22 g，8.47 mmol)、5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸(2.52 g，7.07 mmol)、(Z)-1-甲基-3-(2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-基)-1H-吡唑-4-胺(1.36 g，7.07 mmol)及DIPEA(2.48 mL，14.2 mmol)於DMF(30 mL)中之溶液攪拌18小時。反應混合物用DCM(50 mL)稀釋且用水(100 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(5-80%含10% MeOH之DCM/DCM)純化，得到呈褐色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2,3,6,7-四氫-1H-氮呯-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(Z)-第三丁酯(2.71 g，72%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39(s,1H),8.82(s,1H),7.85(s,1H),7.40-7.30(m,1H),7.08-6.99(m,2H),5.93-5.84(m,2H),3.77(s,3H),3.19(t,J=5.1 Hz,4H),2.42-2.37(m,4H),1.58-1.48(m,9H)。
中間物252 1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮
向3-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(1.0 g，6.17 mmol)於乙醇(10 mL)中之溶液中依序添加DIPEA(2 mL，11.4 mmol)及4-羥基吡啶(686 mg，6.79 mmol)。反應混合物在微波中於130℃下加熱60分鐘，之後減壓移除溶劑。殘餘物經由矽膠管柱層析法(75-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈亮黃色油狀之1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-醇(1.46 g)。向此油狀物(1.40 g，6.17 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液中逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(3.1 g，7.41 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時，用DCM(100 mL)稀釋且依序用飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)、飽和硫代硫酸鈉水溶液(30 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(50-75% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固體狀之1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮(1.32 g，95%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),3.86(s,3H),3.54(t,J=6.0 Hz,4H),2.65(t,J=6.0 Hz,4H)。
中間物253 4-(疊氮基甲基)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-醇
在0℃下將氫化鈉(255 mg，6.38 mmol)逐份添加至DMSO(15 mL)中。使反應混合物升溫至室溫且攪拌15分鐘，之後添加三甲基氧化鋶碘(1.34 g，6.09 mmol)。在室溫下攪拌90分鐘後，添加1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮(1.3 g，5.80 mmol)於DMSO(15 mL)中之溶液。混合物在55℃下加熱2小時，隨後傾入水(200 mL)中且用EtOAc(3×80 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈橙色液體狀之6-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷。向此液體(1.38 g，5.80 mmol)於MeOH(25 mL)及水(5 mL)中之溶液中依序添加氯化銨(768 mg，14.4 mmol)及疊氮化鈉(1.9 g，29.2 mmol)。反應混合物在70℃下加熱18小時，使其冷卻至室溫且減壓移除MeOH。殘餘物用水(20 mL)稀釋且用EtOAc(150 mL)萃取。有機層用水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(50-75% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之4-(疊氮基甲基)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-醇(1.03 g，63%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),3.76(s,3H),3.64-3.54(m,2H),3.42(s,2H),3.05-2.96(m,2H),1.92(s,1H),1.81-1.77(m,4H)。
中間物254 (4-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基) 哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以4-(疊氮基甲基)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-醇為起始物，得到呈黃色油狀之(4-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯(330 mg，88%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.01(s,1H),4.72(s,1H),3.74(s,3H),3.51(t,J=11.8 Hz,2H),3.28(d,J=5.9 Hz,2H),3.25(s,3H),2.92(d,J=11.8 Hz,2H),1.91(d,J=13.5 Hz,2H),1.66(t,J=13.5 Hz,2H),1.45(s,9H)。
中間物255 2,2,2-三氟-N-(5-氟-2-羥基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚基)乙醯胺
用三苯基膦(270 g，1.03 mmol)處理2-疊氮基-5-氟-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚醇(280 mg，094 mmol)於THF/水(20 mL/4 mL)中之溶液且混合物在防爆屏後在60℃下加熱18小時。減壓移除溶劑且殘餘物經由SCX柱純化，用MeOH洗滌且用含3 N NH3之MeOH溶離，得到呈無色油狀之2-胺基-5-氟-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚醇。在0℃下向此油狀物(256 mg，0.94 mmol)於無水DCM(20 mL) 中之溶液中依序緩慢逐滴添加DIPEA(0.49 mL，2.82 mmol)及三氟乙酸酐(0.16 mL，1.13 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌18小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(30-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色油狀之2,2,2-三氟-N-(5-氟-2-羥基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚基)乙醯胺(130 mg，38%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07及8.06(2s,1H),6.53(s,1H),4.08及4.06(2s,3H),4.05-3.92(m,2H),3.06-2.69(m,3H),2.32-1.89(m,6H)。
中間物257 4-(胺基甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-醇
在0℃下將氫化鈉(60%於礦物油中，200 mg，4.9 mmol)逐份添加至DMSO(15 mL)中。使反應混合物升溫至室溫且攪拌15分鐘，之後添加三甲基氧化鋶碘(1.0 g，4.6 mmol)。在室溫下攪拌90分鐘後，添加1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-酮(1.0 g，4.45 mmol)於DMSO(15 mL)中之溶液。混合物在55℃下加熱3小時，隨後傾入水(50 mL)中且用EtOAc(3×50 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈橙色液體狀之6-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷。向反應管 中之此液體溶液(0.4 g，1.67 mmol)中添加7 M NH3之MeOH溶液(20 mL)且在室溫下於密封管中將混合物攪拌24小時。減壓濃縮反應混合物且殘餘物經由矽膠層析法(1-10%含7 M NH3之MeOH/DCM)純化，得到呈黃色固體狀之4-(胺基甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-醇(350 mg，60%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),3.76(s,3H),3.64-3.54(m,2H),3.09-3.03(m,2H),2.72(s,2H),1.73-1.62(m,4H)。未觀察到可交換者。
中間物258 N-((4-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-4-哌啶基)甲基)胺基甲酸第三丁酯
向冷卻至0℃之4-(胺基甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-醇(150 mg，0.58 mml)、三乙胺(0.12 mL，0.88 mmol)及DMAP(17 mg，0.15 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中緩慢添加二碳酸二第三丁酯(140 mg，0.65 mmol)於DCM(2 mL)中之溶液。反應混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(10 mL)且水層用DCM(3×15 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(15 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(1-10% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色固體狀之N-((4-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-4-哌啶基)甲基)胺基甲酸第三酯(140 mg，68%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),5.10-5.03(m,1H),3.76(s,3H),3.61-3.49(m,2H),3.25(d,J=6.3 Hz,2H),3.08-2.96(m,2H),1.77-1.72(m,4H),1.46(s,9H)。未觀察到OH。
中間物259 3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-11-氧雜-3,8-二氮雜螺[5.5]十一烷-8-甲酸第三丁酯
向4-(胺基甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-醇(0.5 g，1.95 mmol)於THF(25 mL)中之溶液中添加溶解於水(10 mL)中之K2CO3(0.68 g，4.98 mmol)。冷卻至0℃後，緩慢添加氯乙醯氯(0.19 mL，2.45 mmol)。使混合物升溫至室溫且攪拌16小時，使其於水(15 mL)與EtOAc(15 mL)之間分配且水層用EtOAc(3×30 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到黃色固體。將其溶解於第三丁醇(15 mL)及THF(3 mL)中且添加第三丁醇鉀(0.34 g，2.9 mmol)。混合物在85℃下加熱16小時。在冷卻至室溫後，混合物於水(20 mL)與EtOAc(20 mL)之間分配且水層用EtOAc(3×30 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(1-10%，MeOH/DCM)純化，得到黃色固體(0.47 g)。將此固體溶解於THF(15 mL)中且添加硼烷之溶液(1 M之THF溶液，10 mL)。反應混合物在66℃下加熱72小時，之後冷卻至室溫。反應用1 M鹽酸(5 mL)淬滅且用EtOAc(3×20 mL) 萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。向所得中間物(200 mg)於DCM(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.12 mL，0.85 mmol)及DMAP(20 mg，0.14 mmol)。混合物冷卻至0℃且緩慢添加二碳酸二第三丁酯(0.18 g，0.85 mmol)於DCM(2 mL)中之溶液。使混合物升溫至室溫且攪拌16小時。添加水(5 mL)且混合物用DCM(3×10 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-100%，EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-11-氧雜-3,8-二氮雜螺[5.5]十一烷-8-甲酸第三丁酯(110 mg，44%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),3.82-3.59(m,5H),3.50-3.32(m,4H),2.00-1.85(m,4H),1.82-1.69(m,4H),1.44(s,9H)。
中間物265 5-((4-甲氧基苯基)甲氧基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-醇
在0℃下向(Z)-2,3,6,7-四氫-1H-氮呯鹽酸鹽(5.0 g，25.38 mmol)於MeOH(25 mL)中之溶液中添加HCl之二噁烷溶液(4 M，0.10 mol,25 mL)。反應混合物在0℃下攪拌5分鐘，升溫至室溫且再攪拌3.5小時。減壓濃縮混合物且將粗殘餘物溶解於DMSO(90 mL)中。依序添加DIPEA(8.80 mL，50.52 mmol)及5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(4.1 g，25.37 mmol)及氟化鉀(5.9 g，101.54 mmol)且混合物在70℃下加熱18小時。在冷卻至室溫後，反應用水(500 mL)淬滅且用EtOAc(3×200 mL)萃取。合併之有機層用水(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到淺黃色固體(5.22 g)。向此固體(3.13 g，14.10 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液中添加3-氯過苯甲酸(7.30 g，21.10 mmol)且混合物在室溫下攪拌1.5小時。混合物用DCM(250 mL)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液(250 mL)及1 M NaOH水溶液(150 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到淺黃色固體(3.03 g)。向此固體(1.29 g，5.42 mmol)及對甲氧基苯甲醇(3.74 g，27.10 mmol)於DCM(30 mL)中之溶液中添加三氟甲烷磺酸銅(II)(0.20 g，0.54 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。再添加三氟甲烷磺酸銅(II)(0.10 g，0.26 mmol)且再攪拌混合物48小時。混合物用水(250 mL)淬滅且用DCM(2×250 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(20-90% EtOAc/異己烷隨後0-20% EtOAc/DCM)純化，得到呈淺黃色膠狀之5-((4-甲氧基苯基)甲氧基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-醇(800 mg，8%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(t,J=3.4 Hz,1H),7.31-7.25(m,2H),6.92-6.87(m,2H),4.65(d,J=11.0 Hz,1H),4.49-4.38(m,1H),3.98-3.67(m,4H),3.73(s,3H),3.57-3.44(m,1H),3.34- 3.23(m,2H),3.22-3.12(m,2H),2.95(d,J=1.3 Hz,1H),2.25-2.10(m,2H),1.91-1.75(m,2H)。
中間物266 N-(2-(2,6-二氟苯基)-4-((5-(4-羥基-5-((4-甲氧基苯基)甲氧基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基)胺甲醯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯
向5-((4-甲氧基苯基)甲氧基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-醇(0.80 g，2.18 mmol)於EtOH(30 mL)及水(3 mL)中之溶液中添加鐵粉(0.90 g，16.11 mmol)。反應混合物在100℃下加熱2小時，冷卻至室溫，經由矽藻土過濾且減壓濃縮濾液。將殘餘物溶解於DCM(50 mL)中且用水(50 mL)洗滌。水層再用DCM(50 mL)萃取且使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮，得到淺橙色膠狀物。向此膠狀物(0.55 g，1.60 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液中添加5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(0.62 g，1.76 mmol)、HATU(0.85 g，2.40 mmol)及DIPEA(0.56 mL，3.20 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌66小時，用飽和NaHCO3水溶液(200 mL)淬滅且用EtOAc(3×150 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/ EtOAc)純化，得到呈淺粉色固體狀之N-(2-(2,6-二氟苯基)-4-((5-(4-羥基-5-((4-甲氧基苯基)甲氧基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基)胺甲醯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(530 mg，35%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.44(s,1H),9.02(s,1H),7.91(s,1H),7.38-7.28(m,1H),7.25(d,J=8.2 Hz,2H),7.00(t,J=8.7 Hz,2H),6.92-6.84(m,2H),4.61(d,J=11.1 Hz,1H),4.40(d,J=11.1 Hz,1H),3.91(t,J=8.6 Hz,1H),3.81(s,3H),3.73(s,3H),3.55(td,J=8.4,3.4 Hz,1H),3.34-3.13(m,4H),3.10(s,1H),2.22-2.14(m,2H),1.93-1.77(m,2H),1.62-1.50(m,9H)。
中間物267 5-疊氮基-4-甲氧基-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷
向4-疊氮基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(2.4 g，9.38 mmol)於DCM(100 mL)中之經攪拌溶液中整份添加戴斯馬丁高碘烷(5.16 g，12.19 mmol)且混合物在室溫下攪拌2小時。再依序添加DCM(100 mL)以及飽和NaHCO3(100 mL)及10% Na2S2O3(30 mL)。持續攪拌30分鐘。分離各層且水層用DCM(100 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到無色油狀物(1.99 g)。在氮氣下，於15 分鐘內向冰冷的此油狀物於無水Et2O中之溶液(30 mL)中緩慢添加甲基鋰溴化鋰錯合物於Et2O中之溶液(1.5 M，5.8 mL，8.62 mmol)。在冰冷卻下，攪拌混合物1小時，使其升溫至室溫且攪拌18小時。在冰中冷卻後，添加飽和鹽水(100 mL)。混合物用EtOAc(3×100 mL)萃取且合併之萃取液經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(20-40% EtOAc/異己烷)純化，得到無色油狀物(0.92 g)。在氮氣下，將該油狀物溶解於無水DMF(5 mL)中，在冰中冷卻且於15分鐘內逐份添加氫化鈉(60%於礦物油中之分散液，203 mg，5.08 mmol)。在冰冷卻下攪拌15分鐘後，逐滴添加碘甲烷(1.06 mL，16.94 mmol)且在冰冷卻下攪拌混合物30分鐘。使反應混合物升溫至室溫且攪拌4小時。添加飽和鹽水(100 mL)且混合物用Et2O(3×100 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，得到淺綠色油狀物(1.05 g)。將此油狀物溶解於MeOH(10 mL)中且添加HCl於二噁烷中之溶液(4 M，10 mL)。使溶液升溫至40℃且攪拌2.5小時。減壓濃縮，得到淡褐色膠狀物(1.03 g)，將其溶解於DMSO(10 mL)中。向此溶液中添加5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(712 mg，4.41 mmol)、氟化鉀(720 mg，13.56 mmol)及DIPEA(1.2 mL，6.78 mmol)且混合物在氮氣下在70℃下加熱19小時。冷卻混合物，傾入水(300 mL)中且用EtOAc(3×150 mL)萃取。合併之有機層用水(150 mL)及鹽水(150 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈 淺黃色固體狀之5-疊氮基-4-甲氧基-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷(830 mg，11%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),3.79(s,3H),3.47-3.35(m,2H),3.32-3.20(m,5H),3.06-2.95(m,1H),2.60-2.40(m,1H),2.18-2.08(m,1H),2.06-1.92(m,1H),1.80-1.65(m,1H),1.39(s,3H)。
中間物268 N-(5-甲氧基-5-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物122之程序，以5-疊氮基-4-甲氧基-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷為起始物，得到呈黃色膠狀之N-(5-甲氧基-5-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(780 mg，75%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),5.25-5.15(m,1H),3.75(s,3H),3.74-3.65(m,1H),3.65-3.50(m,1H),3.48-3.35(m,1H),3.20(s,3H),3.19-3.10(m,1H),3.00-2.85(m,1H),2.45-2.30(m,1H),2.20-2.05(m,1H),1.90-1.70(m,2H),1.46(s,9H),1.28(s,3H)。
中間物269 G02693495 N-(1-(4-((5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-5-甲基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯
在氮氣下，將10%鈀/碳(0.2 g)添加至N-(5-甲氧基-5-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.77 g，2.01 mmol)及甲酸銨(1.6 g，25 mmol)於MeOH(30 mL)中之經攪拌溶液中，且混合物在回流下加熱2小時。冷卻至室溫後，經由矽藻土過濾混合物且減壓濃縮濾液。使殘餘物於DCM(100 mL)與飽和NaHCO3水溶液(150 mL)之間分配且水層用DCM(100 mL)萃取。使合併之有機物通過相分離柱且減壓移除溶劑，得到淡褐色膠狀物(700 mg)。將此膠狀物溶解於DCM(10 mL)及DMF(10 mL)中且添加5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(0.84 g，2.2 mmol)、HATU(1.14 g，3 mmol)及DIPEA(0.7 mL，4 mmol)。混合物在室溫下攪拌18小時。減壓移除DCM且添加飽和NaHCO3(300 mL)。混合物用EtOAc(3×200 mL)萃取，使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色固體狀之N-(1-(4-((5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-5-甲基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(540 mg，39%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39(s,1H),8.77(s,1H),7.89(s,1H),7.45- 7.30(m,1H),7.12-6.95(m,2H),5.30-5.20(m,1H),3.73(s,3H),3.72-3.65(m,1H),3.50-3.28(m,2H),3.25-3.15(m,1H),3.14(s,3H),3.05-2.95(m,1H),2.40-2.20(m,1H),2.18-2.05(m,1H),1.95-1.70(m,2H),1.55(s,9H),1.45(s,9H),1.22(s,3H)。
中間物270 N-((4R,5S)-5-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯
提供5-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯之外消旋混合物(5.13 g，14.13 mmol)以進行對映異構體之對掌性SFC分離且得到呈黃色膠狀之N-((4R,5S)-5-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(2.08 g，98.3% ee,40%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),5.12(s,1H),4.19(s,1H),3.93(t,J=8.6 Hz,1H),3.79(s,3H),3.52-3.44(m,1H),3.33-3.26(m,1H),3.22-3.08(m,2H),2.53(s,1H),2.19-2.11(m,1H),2.02-1.95(m,2H),1.92-1.82(m,1H),1.46(s,9H)。
中間物271 N-((4S,5R)-5-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯
提供5-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯之外消旋混合物(5.13 g，14.13 mmol)進行對映異構體之對掌性SFC分離且得到呈黃色膠狀之N-((4S,5R)-5-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(2.02 g，97.6% ee，39%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),5.12(s,1H),4.19(s,1H),3.93(t,J=8.6 Hz,1H),3.79(s,3H),3.52-3.44(m,1H),3.33-3.26(m,1H),3.22-3.08(m,2H),2.53(s,1H),2.19-2.11(m,1H),2.02-1.95(m,2H),1.92-1.82(m,1H),1.46(s,9H)。
中間物272 N-((4R,5S)-1-(4-((5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯
向N-((4R,5S)-5-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(1.92 g，5.40 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(37 mg，0.35 mmol)且在600 psi氫氣壓下，於室溫下攪拌反應混合物6小時。經由矽藻土過濾混合物且減壓濃縮濾液，得到粗胺基-吡唑(1.5 g)。在室溫下攪拌PyBOP(3.35 g，6.44 mmol)及5-(第 三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(1.8 g，5.06 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液30分鐘。添加粗胺基-吡唑(1.5 g，4.60 mmol)及DIPEA(1.28 mL，7.36 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌70小時。反應混合物用DCM(50 mL)稀釋且用水(3×50 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠層析法(0-3% MeOH/DCM)純化且用熱Et2O隨後用熱MeCN濕磨，得到呈灰白色固體狀之N-((4R,5S)-1-(4-((5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(1.85 g，51%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.67(s,1H),9.76(s,1H),8.03(s,1H),7.41-7.34(m,1H),7.09(t,J=8.8 Hz,2H),5.00(d,J=8.4 Hz,1H),4.25(s,1H),3.83(s,1H),3.72(s,3H),3.45-3.25(m,4H),3.20-3.12(m,1H),2.20-1.84(m,3H),1.84-1.78(m,1H),1.55(s,9H),1.42(s,9H)。
中間物273 N-((4S,5R)-1-(4-((5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物272之程序，以N-((4S,5R)-5-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之N-((4S,5R)-1-(4-((5-(第三丁氧羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(1.34 g，37%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.67(s,1H),9.76(s,1H),8.03(s,1H),7.41-7.34(m,1H),7.09(t,J=8.8 Hz,2H),5.00(d,J=8.4 Hz,1H),4.25(s,1H),3.83(s,1H),3.72(s,3H),3.45-3.25(m,4H),3.20-3.12(m,1H),2.20-1.84(m,3H),1.84-1.78(m,1H),1.55(s,9H),1.42(s,9H)。
中間物274 反-7-疊氮基-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚-3-烯-1-醇
亦遵循關於中間物221之程序，得到呈淺黃色油狀之反-7-疊氮基-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚-3-烯-1-醇(294 mg，42%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),5.96(dd,J=8.3,4.9 Hz,1H),3.82(s,3H),3.80-3.73(m,1H),3.56-3.48(m,1H),2.71(ddd,J=15.5,8.3,2.3 Hz,1H),2.58-2.39(m,4H),2.24-2.14(m,1H),1.86-1.73(m,1H)。
中間物275 同-7-疊氮基-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環 庚-3-烯-1-醇
遵循關於中間物119之程序，以反-7-疊氮基-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚-3-烯-1-醇為起始物，得到呈黃色油狀之同-7-疊氮基-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚-3-烯-1-醇(346 mg，67%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),5.93-5.85(m,1H),3.94-3.88(m,1H),3.85(s,3H),2.98(ddd,J=15.2,9.5,6.4 Hz,1H),2.65(dd,J=15.7,9.0 Hz,1H),2.41(dd,J=15.2,6.9 Hz,1H),2.30(dd,J=15.9,9.4 Hz,1H),2.04-1.87(m,4H)。
中間物276 N-(-2-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚-4-烯-1-基)胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以同-7-疊氮基-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚-3-烯-1-醇為起始物，得到呈無色油狀之N-(-2-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚-4-烯-1-基)胺基甲酸第三丁酯(189 mg，89%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.05(s,1H),5.92(ddd,J=8.4,4.7,1.6 Hz,1H),5.23(s,1H),3.91-3.81(m,1H),3.80(s,3H),3.66-3.62(m,1H),3.41(s,3H),2.93(ddd, J=15.1,11.1,4.7 Hz,1H),2.78(t,J=12.9 Hz,1H),2.23(dd,J=15.1,8.5 Hz,1H),2.15-1.82(m,3H),1.46(s,9H)。
中間物277 G02693497 N-(5-(4-((5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基]-2-甲氧基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯
使N-(-2-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚-4-烯-1-基)胺基甲酸第三丁酯(180 mg，0.49 mmol)於MeOH(30 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，70℃，流速：1 mL/min，30 mm 20% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到無色油狀物。向此油狀物於DCM中之溶液(30 mL)中添加DIPEA(2.00 mL，11.48 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸(171 mg，0.50 mmol)隨後添加PyBOP(596 mg，1.15 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。反應用水(20 mL)淬滅且用DCM(80 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠層析法(70-80% EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之呈四種非對映異構體混合物形式之N-(5-(4-((5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基]-2-甲氧基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯(175 mg，54%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39及10.36 (2s,1H),8.69及8.62(2s,1H),8.32-8.28及8.21-8.14(2 m,1H),7.85及7.75(2s,1H),7.43-7.36(m,1H),7.32(t,J=7.6 Hz,1H),7.25-7.17(m,1H),5.19及5.08(2d,J=8.8 Hz,1H),3.84(s,3H),3.78-3.54(m,2H),3.37及3.27(2s,3H),3.11-2.94(m，1H),2.32-1.30(m,8H),1.55(s,9H),1.43(s,9H)。
中間物278 4-甲基-6-側氧基-3,7-二氫-2H-氮呯-1-甲酸第三丁酯
室溫下，在氮氣下於10分鐘內將正丁基鋰於己烷中之溶液(2.5 M，5.1 mL，12.75 mmol)逐滴添加至N-(3-甲基-3-丁烯-1-基)-1,1-二甲基乙基酯(2.14 g，11.57 mmol)於無水THF(30 mL)中之經攪拌溶液中。1.25小時後，於15分鐘內逐份添加1-氯-3-(三苯基-λ5-伸磷烷基)丙-2-酮(4.07 g，11.57 mmol)且在室溫下持續攪拌18小時。小心添加水(100 mL)且反應混合物用EtOAc(3×150 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM)純化，得到淺橙色膠狀物(5.7 g)。將其溶解於無水THF(60 mL)中且添加乙醛(6.4 mL)。反應混合物在室溫下攪拌20小時。減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到淺橙色油狀物(2.18 g)。將此油狀物溶解於用氮氣脫氧之DCM(30 mL)中且添 加Grubbs第二代催化劑(335 mg，0.34 mmol)。混合物在氮氣下在回流下加熱20小時。使混合物冷卻至室溫且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-30% EtOAc/異己烷)純化，得到呈深褐色油狀之4-甲基-6-側氧基-3,7-二氫-2H-氮呯-1-甲酸第三丁酯(1.23 g，47%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.30(s,1H),4.30-4.10(m,2H),3.65-3.50(m,2H),2.70-2.55(m,2H),2.05-1.90(m,3H),1.48及1.44(2s,9H)。
中間物279 5-疊氮基-5-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-3-醇
遵循關於中間物18之程序，以4-甲基-6-側氧基-3,7-二氫-2H-氮呯-1-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺綠色膠狀之5-疊氮基-5-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-3-醇(720 mg，64%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04-8.03(m,1H),4.25-3.90(m,1H),3.88及3.84(2s,3H),3.75-3.45(m,1H),3.45-2.90(m,3H),2.30-2.18(m,1H),2.15-1.75(m,4H),1.55(2s,3H)。
中間物280 N-(6,6-二氟-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯
向5-疊氮基-5-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-3-醇(720 mg，2.44 mmol)於DCM(100 mL)中之溶液中整份添加戴斯-馬丁高碘烷(1.35 g，3.17 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時，用DCM(100 mL)稀釋且依序用飽和NaHCO3水溶液(200 mL)及20% Na2S2O3水溶液(100 mL)淬滅。攪拌所得混合物15分鐘，分離有機層且水層用DCM(100 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑，得到淺綠色膠狀物(720 mg)。向此膠狀物於DCM中之溶液(50 mL)中添加脫氧-Fluor®(50%於THF中，3.12 mL，8.6 mmol)且混合物在室溫下攪拌20小時。再添加脫氧-Fluor®(3.1 mL)且混合物在40℃下加熱28小時。冷卻混合物且藉由逐滴添加飽和NaHCO3水溶液(200 mL)淬滅且用DCM稀釋(100 mL)。分離有機層且水層用DCM(100 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到淺黃色膠狀物(626 mg)。將此膠狀物溶解於THF(20 mL)及水(4 mL)中且添加三苯基膦(522 mg，2 mmol)。混合物在防爆屏後在70℃下加熱16小時。再添加三苯基膦(500 mg)且再持續加熱5小時。減壓移除溶劑且殘餘物溶解於DCM(30 mL)中。向此溶液中添加二碳酸二第三丁酯(1.08 g，5 mmol)及DIPEA(0.7 mL，4 mmol)且混合物在室溫下攪拌66小時。減壓移除溶劑且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈無色固體狀之N-(6,6-二氟-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4- 基)胺基甲酸第三丁酯(540 mg，57%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),4.92(s,1H),3.84(s,3H),3.82-3.55(m,1H),3.52-3.05(m,3H),2.70-2.45(m,2H),2.30-2.05(m,1H),2.04-1.85(m,1H),1.52(s,3H),1.45(s,9H)。
中間物281 N-(4-((5-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基)胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物269之程序，以N-(6,6-二氟-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈黃色固體狀之N-(4-((5-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基)胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基)胺基甲酸第三丁酯(409 mg，58%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39(s,1H),8.79(s,1H),7.88(s,1H),7.45-7.30(m,1H),7.15-7.00(m,2H),5.12(br s,1H),3.78(s,3H),3.75-3.42(m,2H),3.40-3.10(m,2H),2.70-2.45(m,2H),2.40-2.15(m,1H),1.95-1.70(m,1H),1.55(s,9H),1.46(s,3H),1.33(s,9H)。
中間物285 3-乙基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-酮
在室溫下，向3-乙基-4-側氧基-哌啶-1-甲酸第三丁酯(380 mg，1.67 mmol)於DCM(15 mL)中之溶液中添加TFA(3 mL)且反應混合物在室溫下攪拌4小時。減壓濃縮混合物，得到呈三氟乙酸鹽形式之乙基哌啶酮。此鹽(410 mg，1.7 mmol)、5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(330 mg，2.0 mmol)及DIPEA(0.75 mL，4.2 mmol)於EtOH(15 mL)中之混合物在微波條件下於130℃下加熱2小時。減壓濃縮反應混合物。經由矽膠管柱層析法(10-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淡黃色固體狀之3-乙基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-酮(250 mg，58%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.05(s,1H),3.87(s,3H),3.65-3.54(m,1H),3.53-3.41(m,2H),3.36-3.21(m,1H),2.78-2.64(m,1H),2.64-2.49(m,2H),2.01-1.87(m,1H),1.44-1.29(m,1H),0.94(t,J=7.5 Hz,3H)。
中間物286 4-(疊氮基甲基)-3-乙基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-醇
遵循關於中間物253之程序，以3-乙基-1-(2-甲基-4-硝 基-吡唑-3-基)哌啶-4-酮為起始物，得到呈黃色膠狀之4-(疊氮基甲基)-3-乙基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-醇(170 mg，66%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),3.76(s,3H),3.62-3.53(m,2H),3.40(d,J=12.2 Hz,1H),3.34-3.15(m,1H),3.06-2.94(m,2H),1.97-1.77(m,3H),1.37-1.15(m,2H),0.92(t,J=7.4 Hz,3H)。未觀察到OH。
中間物287 N-((3-乙基-4-甲氧基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-4-哌啶基)甲基)胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物120之程序，以4-(疊氮基甲基)-3-乙基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)哌啶-4-醇為起始物，得到呈淡黃色固體狀之N-((3-乙基-4-甲氧基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-4-哌啶基)甲基)胺基甲酸第三丁酯(110 mg，70%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),4.95-4.35(m,1H),3.76(s,3H),3.53-3.43(m,2H),3.36-3.09(m,7H),2.07-1.93(m,1H),1.44-1.10(m,4H),0.96-0.81(m,12H)。
中間物292 3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-6-醇
藉由使氮氣鼓泡通過冷卻至-78℃之7-氧雜雙環[2.2.1]庚-2-烯-5-醇(0.7 g，6.2 mmol)於MeOH/DCM(25 mL/5 mL)中之溶液，保持5分鐘，來使其脫氣。使臭氧鼓泡通過反應混合物，直至持續呈現淺灰藍色。再使氮氣鼓泡通過冷反應混合物，直至僅持續呈現灰白色。依序添加溶解於MeOH(5 mL)中之苯甲基胺(0.67 g，6.2 mmol)之溶液及含NaCNBH3(1.6 g，25 mmol)之MeOH(10 mL)。使混合物升溫至室溫且攪拌16小時。減壓移除溶劑且殘餘物於EtOAc(30 mL)與水(30 mL)之間分配。水層再用EtOAc(3×50 mL)萃取且合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到經苯甲基保護之胺。將其溶解於EtOH(40 mL)中且隨後添加2 M HCl水溶液(1 mL)及Pd(OH)2/C(0.2 g)。在600 psi氫氣壓下，在70℃下攪拌混合物18小時。將反應混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾，用EtOH(40 mL)洗滌。減壓濃縮濾液，得到呈鹽酸鹽形式之脫苯甲基產物。向該鹽酸鹽(1.1 g，6.6 mmol)於DMSO(15 mL)中之懸浮液中添加5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(1.2 g，7.3 mmol)、DIPEA(1.7 mL，9.7 mmol)及氟化鉀(1.1 g，20 mmol)且反應物在85℃下加熱16小時。將混合物冷卻至室溫，使其於水(25 mL)與EtOAc(25 mL)之間分配且水層用EtOAc(3×25 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(25 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-6- 醇(550 mg，62%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),4.66-4.57(m,1H),4.38(d,J=7.6 Hz,1H),4.19(d,J=6.3 Hz,1H),3.94(s,3H),3.82-3.73(m,1H),3.68(dd,J=11.1,2.8 Hz,1H),3.12(d,J=11.1Hz,1H),2.71-2.59(m,2H),2.38(d,J=7.0 Hz,1H),1.97(dd,J=12.9,3.9 Hz,1H)。
中間物293 6-疊氮基-3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷
將3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-6-醇(500 mg，1.96 mmoL)溶解於DCM(15 mL)中且添加三乙胺(0.41 mL，2.95 mmol)。冷卻至0℃後，緩慢添加甲烷磺醯氯(0.19 mL，2.45 mmol)且使反應混合物升溫至室溫且攪拌18小時。混合物用DCM(10 mL)稀釋，用水(10 mL)淬滅，且水層用DCM(3×20 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到淡褐色固體。將此固體(450 mg，1.35 mmol)溶解於DMF(20 mL)中，添加疊氮化鈉(450 mg，6.8 mmol)且混合物在防爆屏蔽後在150℃下加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，使混合物於水(20 mL)與EtOAc(20 mL)之間分配，且水層用EtOAc(3×25 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層 析法(10-50%，EtOAc/異己烷)純化，得到呈褐色膠狀之6-疊氮基-3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷(25 mg，68%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.05(s,1H),4.65(d,J=7.4 Hz,1H),4.34(s,1H),4.28(dd,J=8.0,3.2 Hz,1H),3.82(s,3H),3.75-3.70(m,2H),2.83-2.73(m,1H),2.64-2.49(m,2H),2.20(ddd,J=13.4,7.3,3.2 Hz,1H)。
中間物294 N-(3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-6-基)胺基甲酸第三丁酯
向6-疊氮基-3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷(250 g，0.8 mmol)於THF(10 mL)及水(2 mL)中之溶液中添加三甲基膦(1 M之甲苯溶液，5 mL，4.47 mmol)且混合物在65℃下加熱16小時。減壓移除溶劑且將所得殘餘物溶解於(2 M,15 mL)中且用EtOAc(2×10 mL)洗滌。水層用5 M NaOH水溶液鹼化至pH 14且用DCM(3×20 mL)萃取。使合併之DCM層通過相分離柱且減壓濃縮，得到膏狀固體(220 mg)。向此胺於DCM中之溶液(10 mL)中添加三乙胺(0.18 mL 1.3 mmol)及DMAP(26 mg，0.22 mmol)。將混合物冷卻至0℃且緩慢添加二碳酸二第三丁酯(0.28 g，1.3 mmol)於DCM(2 mL)中之溶液。反應混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(10 mL)稀釋且用 水(10 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(1-10% MeOH/DCM)純化，得到呈灰白色固體狀之N-(3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-6-基)胺基甲酸第三丁酯(110 mg，66%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),4.64-4.52(m,1H),4.20(s,1H),3.85(s,3H),3.50-3.41(m,4H),2.69-2.46(m,3H),1.84-1.76(m,1H),1.45(s,9H)。
中間物295 N-(5-氟-2-羥基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚基)胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物294之程序，以2-疊氮基-5-氟-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚醇為起始物，得到呈無色固體狀之N-(5-氟-2-羥基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環庚基)胺基甲酸第三丁酯(572 mg，61%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06及8.05(2s,1H),4.70(br s,1H),4.07及4.06(2s,3H),3.86-3.67(m,3H),2.96(ddd,J=40.6,15.3,10.4 Hz,1H),2.74(dt,J=44.6,13.8 Hz,1H),2.25-2.04(m,2H),2.01-1.79(m,3H),1.72-1.63(m,1H),1.47(s,9H)。
中間物302 5-羥基-4-甲基-氮雜環庚烷-1,4-二甲酸O1-苯甲基O4-乙基酯
在0℃下，向1-(苯甲氧基羰基)-4-哌啶酮(20.0 g，85.80 mmol)於Et2O(200 mL)中之溶液中添加醚合三氟化硼(12.0 mL，94.40 mmol)，隨後添加重氮乙酸乙酯(11.7 mL，94.40 mmol)，同時保持溫度低於7℃。攪拌反應混合物1小時，用2 M碳酸鈉水溶液(150 mL)淬滅且用EtOAc(3×150 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到淡黃色油狀物。在0℃下將此油狀物(10 g，31.30 mmol)溶解於DMF(75 mL)中且逐份添加氫化鈉(60%於礦物油中之分散液，1.38 g，34.50 mmol)。時反應混合物在0℃下攪拌1小時，之後添加碘甲烷(2.15 mL，34.50 mmol)。使反應物升溫至室溫且攪拌18小時。混合物用Et2O(100 mL)稀釋且用水(100 mL)淬滅。水層用Et2O(3×75 mL)萃取且合併之有機層用水(2×100 mL)及鹽水(2×100 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(50% Et2O/異己烷)純化，得到淡黃色油狀物。將此油狀物之一部分(0.90 g，2.70 mmol)溶解於MeOH(4 mL)中且在0℃下添加至NaBH4(0.12 g，3.24 mmol)於MeOH(5 mL)中之經攪拌懸浮液中。反應混合物在0℃下攪拌3小時，之後用1 M HCl水溶液(5 mL)淬滅。水層用DCM(3×10 mL)萃取且使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析 法(25-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈無色油狀之5-羥基-4-甲基-氮雜環庚烷-1,4-二甲酸O1-苯甲基O4-乙基酯(480 mg，1%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.37-7.28(m,5H),5.17-5.10(m,2H),4.20-4.07(m,2H),3.78-3.20(m,7H),2.32-2.24(m,1H),2.07-1.86(m,3H),1.73-1.62(m,1H),1.30-1.19(m,3H)。未觀察到可交換之OH。
中間物303 3a-甲基-2-側氧基-3,4,5,7,8,8a-六氫噁唑并[4,5-d]氮呯-6-甲酸苯甲基酯
向5-羥基-4-甲基-氮雜環庚烷-1,4-二甲酸O1-苯甲基O4-乙基酯(0.48 g，1.43 mmol)於二噁烷(5 mL)中之溶液中添加1 M NaOH水溶液(2.9 mL，2.87 mmol)且在室溫下攪拌反應16小時。混合用2 M HCl水溶液物酸化至pH 3且用Et2O(10 mL)及DCM(10 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到無色油狀物(0.42 g)。將此油狀物之一部分(0.21 g，0.68 mmol)、疊氮化磷酸二苯酯(0.17 mL，0.82 mmol)及三乙胺(0.12 mL，0.88 mmol)溶解於甲苯(7 mL)中且反應混合物在室溫下攪拌40分鐘，並在防爆屏蔽後在90℃下加熱40分鐘。添加第三丁醇(0.05 mL，0.56 mmol)且反應混合物在防爆屏蔽後在回流下加熱16小時。將反應混合物冷卻至室溫且用飽和NaHCO3水溶液(10 mL)淬滅。混合物用EtOAc(15 mL)萃取且有機層用水(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色油狀之3a-甲基-2-側氧基-3,4,5,7,8,8a-六氫噁唑并[4,5-d]氮呯-6-甲酸苯甲基酯(100 mg，22%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.38-7.28(m,5H),5.26-4.97(m,3H),4.51(s,1H),3.98-3.76(m,1H),3.43-3.06(m,2H),2.17(s,1H),1.96-1.77(m,3H),1.58(s,3H)。未觀察到可交換物。
中間物304 3a-甲基-6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3,4,5,7,8,8a-六氫噁唑并[4,5-d]氮呯-2-酮
在氮氣下向3a-甲基-2-側氧基-3,4,5,7,8,8a-六氫噁唑并[4,5-d]氮呯-6-甲酸苯甲基酯(305 mg，1.0 mmol)及1-甲基-1,4-環己二烯(1.1 mL，10.00 mmol)於EtOH(10 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(53 mg，0.50 mmol)且混合物在60℃下加熱2小時。將混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾且減壓濃縮。向殘餘物(170 mg，1.00 mmol)於DMSO(5 mL)中之溶液中添加5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(178 mg，1.10 mmol)及氟化鉀(232 mg，4.00 mmol)且混合物在微波中於 110℃下加熱4小時。反應用水(20 mL)淬滅且用EtOAc(3×5 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到黃色固體(220 mg，74%，經歷兩步驟)。將此物質與另一批次合併，得到350 mg藉由逆相製備型HPLC進行非對映異構體分離。分離出呈黃色固體狀之主要非對映異構體(196 mg，67%，經歷兩步驟)1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.11(s,1H),7.72(s,1H),4.48(dd,J=6.6,2.7 Hz,1H),3.74(s,3H),3.10-3.01(m,2H),2.20-1.96(m,3H),1.85(dd,J=15.2,7.8 Hz,1H),1.32(s,3H)。兩個質子在水峰下。LCMS(ES+)m/z 296(M+1)。
中間物305 8-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇
遵循關於中間物218之程序，以1-甲基-4-硝基-1H-吡唑及1,4-環己二酮單伸乙基乙縮醛為起始物，得到呈淡米色固體狀之8-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇(3.68 g，83%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.06(s,1H),4.45(s,1H),4.12(s,3H),4.04-3.93(m,4H),2.44-2.34(m,2H),2.23-1.95(m,4H),1.75-1.67(m,2H)。
中間物306 4-氟-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環己酮
在氮氣下向8-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇(3.68 g，13.0 mmol)於無水DCM(80 mL)中之溶液中逐滴添加脫氧-Fluor®之溶液(50%於THF中，14.1 mL，39.0 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。冷卻至0℃後，添加飽和NaHCO3水溶液(100 mL)(最初逐滴添加)，且混合物用DCM(2×75 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(30-50% EtOAc/異己烷)純化，得到淺黃色油狀物。將此油狀物之一部分(780 mg，2.74 mmol)溶解於THF(20 mL)中且用2 M HCl水溶液(3 mL)處理。反應混合物在室溫下攪拌4小時，在60℃下加熱7小時，且在室溫下攪拌18小時。添加水(10 mL)且混合物用EtOAc(100 mL)萃取。有機層用鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(25-40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈白色固體狀之4-氟-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環己酮(490 mg，30%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.10及8.09(2s,1H),4.17及4.15(2s,3H),3.16-2.94(m,2H),2.84-2.72(m,2H),2.51(dd,J=15.4,5.6 Hz,2H),2.43-2.33(m,2H)。
中間物307 N-[[4-氟-1-羥基-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環己基]甲基]胺基甲酸第三丁酯
在氮氣下，在0℃下將氫化鈉(60%於礦物油中之分散液，183 mg，4.56 mmol)逐份添加至無水DMSO(15 mL)中。將反應混合物升溫至室溫且攪拌15分鐘，之後逐份添加三甲基氧化鋶碘(0.96 g，4.36 mmol)。在室溫下攪拌90分鐘後，逐滴添加4-氟-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環己酮(1.0 g，4.15 mmol)於DMSO(15 mL)中之溶液。混合物在55℃下加熱2小時，冷卻至室溫，傾入水(200 mL)中且用EtOAc(3×60 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到膠狀物。將此膠狀物(1.1 g，4.15 mmol)於7 M NH3之MeOH溶液(30 mL)及DCM(10 mL)中之溶液在室溫下攪拌4天。減壓移除溶劑且將所得黃色油狀物(1.1 g，4.15 mmol)溶解於DCM(30 mL)及DIPEA(3.6 mL)，20.7 mmol)中。用二碳酸二第三丁酯(1.1 g，4.98 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液處理該溶液且反應混合物在室溫下攪拌18小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(50% EtOAC/汽油40-60)純化，得到呈膏狀泡沫狀之N-[[4-氟-1-羥基-4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)環己基]甲基]胺基甲酸第三丁酯(858 mg，56%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.07及8.06(2s,1H),5.05-4.95(m,1H),4.09及4.07(2s,3H),3.21(d,J=6.3 Hz,2H),2.95-2.72(m, 2H),2.54(s,1H),1.99-1.87(m,2H),1.85-1.65(m,4H),1.45(s,9H)。
中間物308 N-[(4R)-6,6-二氟-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯
中間物280進一步經由對掌性SFC純化，得到N-[(4R)-6,6-二氟-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(第一溶離異構體)(440 mg)ee 100%。LCMS(ES+)m/z 412(M+23)。
中間物309 N-[(4S)-6,6-二氟-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯
遵循中間物308之程序，進一步溶離，得到N-[(4S)-6,6-二氟-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(第二溶離異構體)(430 mg)ee 93%。LCMS(ES+)m/z 412(M+23)。
中間物310 N-[4-[[5-[(5R)-5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物269之程序，以N-[(4R)-6,6-二氟-4-甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺褐色固體狀之N-[4-[[5-[(5R)-5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(210 mg，57%)ee 98.6%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39(s,1H),8.79(s,1H),7.88(s,1H),7.45-7.30(m,1H),7.15-7.00(m,2H),5.12(br s,1H),3.78(s,3H),3.75-3.40(m,2H),3.35-3.10(m,2H),2.70-2.45(m,2H),2.40-2.15(m,1H),1.95-1.70(m,1H),1.55(s,9H),1.46(s,3H),1.33(s,9H)。
中間物311 N-[4-[[5-[(5S)-5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物269之程序，以N-[(4S)-6,6-二氟-4-甲 基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(中間物309)為起始物，得到淺褐色固體(246 mg)。將其進一步經由對掌性SFC純化，得到呈淺褐色固體狀之N-[4-[[5-[(5S)-5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(190 mg，51%)ee 98.5%。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.39(s,1H),8.79(s,1H),7.88(s,1H),7.45-7.30(m,1H),7.15-7.00(m,2H),5.12(br s,1H),3.78(s,3H),3.75-3.40(m,2H),3.35-3.10(m,2H),2.70-2.45(m,2H),2.40-2.15(m,1H),1.95-1.70(m,1H),1.55(s,9H),1.46(s,3H),1.33(s,9H)。
中間物312 5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-烯
在-78℃下向氯化二茂鋯(20.8 g，71 mmol)於THF(300 mL)中之溶液中緩慢添加溴化乙基鎂(1 M之THF溶液，142 mL，142 mmol)且混合物在-78℃下攪拌30分鐘，之後升溫至0℃。持續攪拌，直至獲得紅色溶液。再攪拌混合物30分鐘。緩慢添加含6-側氧基-3,7-二氫-2H-氮呯-1-甲酸第三丁酯(15 g，71 mmol)之THF(100 mL)且使混合物升溫至室溫且攪拌3小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM (150 mL)中。添加四氯化鈦(8 mL，71 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。將飽和氯化銨溶液(100 mL)緩慢添加至反應混合物中，得到白色懸浮液。分離各層且水層用DCM(3×200 mL)萃取。合併之有機層用飽和NaHCO3水溶液(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-50% Et2O/異己烷)純化，得到所需Boc保護之物質。將其溶解於DCM(50 mL)中，添加TFA(10 mL)且混合物在40℃下攪拌4小時。減壓移除溶劑，得到呈三氟乙酸鹽形式之胺。將其溶解於DMSO(50 mL)中且添加DIPEA(6.2 mL，35 mmol)、氟化鉀(3.1 g，19.1 mmol)及5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(3.0 g，19.1 mmol)。混合物在85℃下加熱16小時，之後冷卻至室溫。使混合物於水(50 mL)與EtOAc(50 mL)之間分配，水層用EtOAc(3×50 mL)萃取且合併之有機物用鹽水(50 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-烯(2.0 g，56%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.00(s,1H),5.69(dt,J=11.2,5.4 Hz,1H),5.22-5.11(m,1H),3.82(s,3H),3.47-3.38(m,2H),3.18(s,2H),2.55-2.48(m,2H),0.72-0.61(m,4H)。
中間物313 8-疊氮基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-9-醇
向5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-烯(1.0 g，4.1 mmol)於DCM(25 mL)中之溶液中添加m-CPBA(1.1 g，4.8 mmol)且所得混合物在室溫下攪拌16小時。添加飽和NaHCO3水溶液(15 mL)且水層用DCM(3×20 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-50%，EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固體狀之中間物環氧化物。將其溶解於DMSO(30 mL)及乙酸(3 mL)中且添加疊氮化鈉。混合物在防爆屏蔽後在110℃下加熱16小時。冷卻至室溫後，使混合物於飽和NaHCO3水溶液(10 mL)與EtOAc(10 mL)之間分配。水層用EtOAc(3×20 mL)萃取且合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-50%，EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之8-疊氮基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-9-醇(160 mg，54%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.01(s,1H),3.80(s,3H),3.79-3.72(m,1H),3.55(dd,J=7.4,2.4 Hz,1H),3.51-3.34(m,1H),3.31-3.18(m,2H),2.92(d,J=13.4 Hz,1H),2.33-2.24(m,1H),2.20(d,J=2.7 Hz,1H),2.09-1.98(m,1H),1.00-0.94(m,1H),0.81-0.71(m,1H),0.53-0.44(m,2 H)。
中間物314 9-疊氮基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-醇
亦遵循關於中間物313之程序，得到呈黃色膠狀之9-疊氮基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-醇(350 mg，68%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),3.99-3.92(m,1H),3.79(s,3H),3.53-3.20(m,4H),2.76(d,J=13.7 Hz,1H),2.61(d,J=5.9 Hz,1H),2.35-2.15(m,1H),2.17-1.82(m,1H),0.94-0.73(m,2H),0.61-0.51(m,2H)。
中間物315 8-疊氮基-9-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬烷
向8-疊氮基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-9-醇(200 mg，0.67 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(340 mg，0.80 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(50 mL)稀釋，添加飽和NaHCO3水溶液(50 mL)且混合物用DCM(50 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-50% EtOAc/異己烷)純化，得到中間物酮。在氮氣下，向冷卻至-78℃之此酮(190 mg，0.62 mmol)於無水THF(7 mL)中之溶液中逐滴 添加L-selectride之溶液(1 M之THF溶液，0.8 mL，0.78 mmol)且反應混合物在-78℃下攪拌2小時。使混合物升溫至室溫且添加水(10 mL)。混合物用EtOAc(2×30 mL)萃取且合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到中間物醇。向冷卻至0℃之此醇(160 mg，0.52 mmol)於無水DMF(5 mL)中之溶液中添加氫化鈉(60%於礦物油中，25 mg，0.62 mmol)。攪拌15分鐘後，添加碘甲烷(0.05 mL，0.78 mmol)且使反應混合物升溫至室溫且攪拌18小時。減壓濃縮混合物且使殘餘物於水(30 mL)與EtOAc(30 mL)之間分配。水層用EtOAc(30 mL)萃取且合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之8-疊氮基-9-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬烷(120 mg，55%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),3.84(s,3H),3.84-3.72(m,1H),3.58(s,3H),3.57-3.47(m,2 H),3.22-3.15(m,1H),2.93(s,1H),2.40-2.28(m,1H),2.24(d,J=12.5 Hz,1H),2.07-1.91(m,1H),0.79-0.72(m,1H),0.67-0.46(m,3H)。
中間物316 9-疊氮基-8-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬烷
遵循關於中間物315之程序，以9-疊氮基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-醇為起始物，得到呈黃色膠狀之9-疊氮基-8-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬烷(170 mg，62%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.02(s,1H),3.90(d,J=13.4 Hz,1H),3.84(s,2H),3.73-3.67(m,1H),3.45-3.36(m,1H),3.41(s,3H),3.28(s,1H),3.21-3.14(m,2H),2.32-2.15(m,2H),2.09-1.99(m,1H),0.82-0.74(m,1H),0.69-0.51(m,3H)。
中間物317 N-[9-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-基]胺基甲酸第三丁酯
用三甲基膦(1.0 M之甲苯溶液，1.8 mL，1.8 mmol)處理8-疊氮基-9-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬烷(120 mg，0.37 mmol)於THF/水(5 mL/1 mL)中之溶液且反應混合物在防爆屏後在70℃下加熱4小時。將反應物冷卻至室溫且減壓濃縮。殘餘物用1 M HCl水溶液酸化且用EtOAc(2×20 mL)洗滌。水層用6 M NaOH水溶液鹼化至pH 14且用DCM(2×30 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮，得到淡褐色膠狀物。在0℃下向此膠狀物(80 mg，0.27 mmol)於無水DCM(5 mL)中之溶液中依序添加DIPEA(0.1 mL，0.54 mmol)及二碳酸二第三丁酯 (90 mg，0.41 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液。使反應混合物升溫至室溫且攪拌4小時。添加水(5 mL)且混合物用DCM(2×30 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(10-50% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色膠狀之N-[9-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-基]胺基甲酸第三丁酯(110 mg，72%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.00(s,1H),5.08(d,J=8.9 Hz,1H),3.97-3.86(m,2H),3.81(s,3H),3.60(ddd,J=13.6,10.5,2.8 Hz,1H),3.51(s,3H),3.12-3.04(m,1H),2.74(s,1H),2.16(d,J=12.6 Hz,1H),2.25-1.86(m,1H),1.95-1.85(m,1H),1.45(s,9H),0.77-0.57(m,4H)。
中間物318 N-[8-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-9-基]胺基甲酸第三丁酯
遵循關於中間物317之程序，以9-疊氮基-8-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬烷為起始物，得到呈黃色膠狀之N-[8-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-9-基]胺基甲酸第三丁酯(160 mg，67%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.01(s,1H),5.12(d,J=8.8 Hz,1H),3.82(s,3H),3.68-3.57(m,2H),3.52-3.38(m,1H),3.36(s,3H),3.32(d,J=12.7 Hz, 1H),3.21-3.14(m,1H),2.74(d,J=12.8 Hz,1H),2.13-1.88(m,2H),1.47(s,9H),0.91-0.81(m,1H),0.68-0.53(m,2H),0.43-0.36(m,1H)。
表1a及表1b之式I化合物101-531
實例101 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(4-((甲基胺基)甲基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺101
使中間物1，即甲基((1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁酯(145 mg，0.41 mmol)於MeOH(40 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，50℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈紅褐色油狀之(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基(甲基)胺基甲酸第三丁酯粗品(117 mg)。向此胺(115 mg，0.36 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加DIPEA(1.0 mL)、PyBOP(0.46 g，0.89 mmol)及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(127 mg，0.36 mmol)，且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(80 mL)稀釋且用水(20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(75% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淡紫色泡沫狀之(1-(4-(5-第三丁氧基羰基胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基(甲基)胺基甲酸第三丁酯(200 mg)。在室溫下，將此泡沫狀物(200 mg，0.30 mmol)與HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M,3.8 mL，15.1 mmol)一起於MeOH(5 mL)中攪拌3天。減壓移除溶劑且將粗殘餘物再溶 解於MeOH，並裝載至SCX管柱上。管柱用MeOH洗滌且用含7 N氨之MeOH溶離，得到呈米色固體狀之101(99 mg，53%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.75(s,1H),7.59-7.49(m,3H),7.44(s,1H),7.32-7.22(m,2H),6.90(br s,1H),3.63(s,3H),3.14-2.96(m,4H),2.66(d,J=6.8 Hz,2H),2.45(s,3H),1.77(d,J=12.6 Hz,2H),1.78-1.55(m,1H),1.36-1.22(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)。
實例102 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(3-甲基哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺102
步驟A. (±)-2-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將2-甲基哌嗪(1 g，6.2 mmol)、來自實例1之5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(2.48 g，12.4 mmol)、DIPEA(2.4 g，18.6 mmol)於EtOH(10 mL)中之混合物在微波烘箱中於140℃下加熱5小時。減壓移除溶劑，得到殘餘物。殘餘物藉由使用MeOH/DCM(10：1)作為溶離溶劑之矽膠層析法純化，得到呈黃色固體狀之(±)-2-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.0 g，40%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ(ppm)：8.03(s,1H),4.38(s,1H),3.99- 3.68(m,1H),3.83(s,3H),3.67-3.65(m,1H),3.46-3.41(m,1H),3.31-3.25(m,1H),2.90-2.88(d,J=9.6Hz,1H),2.71-2.68(d,J=9.2 Hz,1H),1.49(s,9H),1.36-1.34(d,J=5.2Hz,3H)。
步驟B. (±)-4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向(±)-2-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg，1.54 mmol)於MeOH(20 mL)及H2O(5 mL)中之溶液中添加鋅(845 mg，13 mmol)及NH4Cl(1.4 g，26 mmol)。反應混合物在環境溫度下攪拌2小時且經由矽藻土過濾。減壓濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由PE/EtOAc(10/1~1/10)作為溶離溶劑之矽膠層析法純化，得到呈紅色固體狀之(±)-4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(650 mg，約100%)。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ(ppm)：7.22(s,1H),4.35-4.33(m,1H),4.12-4.11(m,1H),3.94(s,3H),3.43-3.46(m,1H),3.25-3.30(m,2H),3.01-3.00(m,1H),2.89-2.87(d,J=12 Hz,1H),1.49(s,9H),1.34-1.36(d,J=5.6Hz,3H)；MS(ESI)m/z=296(M+H+)。
步驟C. (±)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向(±)-4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg，2.05 mmol)、5-(第三丁氧基羰基胺 基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(630 mg，2.46 mmol)、HATU(0.83g，8.19 mmol)於DMF(15 mL)中之溶液中添加TEA(1.5mL)。反應混合物在25℃下攪拌20小時且傾入水(100 mL)中。混合物用EtOAc(50 mL×2)萃取。合併之有機層用水(50 mL×2)及鹽水(30 mL×2)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由使用DCM/MeOH(1：1)作為溶離溶劑之矽膠層析法純化，得到呈白色固體狀之(±)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(280 mg，52%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ(ppm)：10.32(s,1H),8.70(s,1H),7.80(s,1H),7.38-7.35(m,1H),7.06-7.03(m,2H),4.34(s,1H),3.94-3.97(m,1H),3.81(s,3H),3.67-3.40(m,1H),3.20-3.25(m,2H),3.04-3.06(m,1H),2.88-2.90(m,1H),1.55(s,9H),1.47(s,9H),1.34-1.36(d,J=6.4Hz,3H)；MS(ESI)m/z=434(M+H+)。
步驟D. (R)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯及(S)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯
藉由使用製備型HPLC對掌性分離(±)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(280 mg)，得 到(S)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(80 mg)及(R)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(80 mg)。
步驟E. 在環境溫度下將(R)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(80 mg，0.126 mmol)於TFA(1 ML)及DCM(4 mL)中之溶液攪拌3小時。藉由添加氨將混合物之pH值調至約8~9且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到102(40 mg，73%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ(ppm)：8.48(s,1H),8.33(s,1H),7.69(s,1H),7.30-7.36(m,1H),7.03-7.07(m,2H),6.14-6.17(m,2H),3.78(s,3H),3.53-3.48(m,1H),2.90-3.34(m,6H),1.32(d,J=6.5 Hz,3H)；MS(ESI)m/z=434(M+1+)。
實例103 (S)-5-胺基-N-(5-(3-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺103
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之103。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 7.77(s,1H),7.60-7.43(m,3H),7.27(dd,J=14.5,5.8 Hz,2H),6.39(tt,J=55.3,4.2 Hz,1H),4.54-4.28(m,2H),3.23-3.02(m,4H),3.00-2.90(m,2H),1.85-1.40(m,6H)。MS(ESI)m/z： 498.2[M+H+]。
實例104 (R)-5-胺基-N-(5-(3-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺104
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之104。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 7.78(s,1H),7.60-7.42(m,3H),7.34-7.21(m,2H),6.39(tt,J=55.3,4.1 Hz,1H),4.54-4.29(m,2H),3.25-3.02(m,4H),3.00-2.90(m,2H),1.87-1.36(m,8H)。MS(ESI)m/z：498.2[M+H+]。
實例105 5-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺105
藉由小心地使氮氣鼓泡通過中間物3，即4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧基羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(283 mg，0.44 mmol)、Na2CO3(93 mg，0.88 mmol)及2-氟-5-甲基苯基酸(95 mg，0.62 mmol)於DME(4.9 mL)及水(1.6 mL)中之混合物，保持10分鐘，來使混合物脫氣。隨後添加[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(36 mg，0.04 mmol)且再使混合物脫氣10分鐘，之後在微波中於120℃下加熱1小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於DCM(50 mL)中且用水(2×20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-80% EtOAc/異己烷)純化，得到4-(4-(5-第三丁氧基羰基胺基-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(179 mg)及4-(4-(5-胺基-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(50 mg)。合併分離之中間物且懸浮於MeOH(2 mL)中，且向其中添加HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，1.7 mL，6.75 mmol)且在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於EtOAc(50 mL)中且用1 M NaOH溶液(20 mL)洗滌。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM)純化，得到呈米色固體狀之105(59 mg，30%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.98(s,1H),7.90(dd,J=7.0,2.5 Hz,1H),7.80(s,1H),7.16-7.11(m,1H),7.09-7.01(m,1H),6.09(s,2H),3.77(s,3H),3.63(t,J=13.5 Hz,2H),3.46-3.29(m,4H),3.06(t,J=5.5 Hz,2H),2.39(s,3H),1.95(s,1H)。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。
實例106 5-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺106
遵循實例105之程序，使4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧基羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯與2,5-二氟苯基酸反應，得到呈米色固體狀之106(57 mg，28%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.90(s,1H),7,88-7.81 (m,2H),7,18-7.10(m,1H),7.06-6.99(m,1H),6.16(s,2H),3.78(s,3H),3.70-3.56(m,2H),3.44(t,J=14.0 Hz,2H)，3.35(t,J=5.5 Hz,2H),3.11-3.05(m,2H),1.95(s,1H)。LCMS(ES+)m/z 470(M+1)。
實例107 (R)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(甲基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺107
向(R)-N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(100 mg，0.28 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中添加DIPEA(0.5 mL，2.87 mmol)、PyBOP(293 mg，0.56 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-環丙基噻唑-4-甲酸(125 mg，0.35 mmol)，且混合物在室溫下攪拌20小時。混合物用DCM(50 mL)稀釋且用水(10 mL)洗滌。有機層藉由通過相分離柱進行分離且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色固體狀之4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(172 mg)。在50℃下，將此胺狀物(170 mg，0.24 mmol)於HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，5 mL)及MeOH(5 mL)中攪拌4小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之107(62 mg，41%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.56(s,1H),7.72(s,1H),7.49(tt,J=8.5,6.2 Hz,1H),7.20-7.12 (m,2H),6.24(tt,J=55.5,4.2 Hz,1H),4.48(td,J=14.0,4.2 Hz,2H),3.40-3.20(m,5H),2.68(s,3H),2.28-1.74(m,6H)。LCMS(ES+)m/z 512(M+1)。
實例108 (R)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(甲基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺108
藉由小心地使氮氣鼓泡通過2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(200 mg，0.29 mmol)、Na2CO3(62 mg，0.59 mmol)及2,5-二氟苯酸(66 mg，0.41 mmol)於DME(3 mL)及水(1 mL)中之混合物，保持5分鐘，來使混合物脫氣。隨後添加[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(30 mg，0.037 mmol)且混合物在微波中於120℃下加熱60分鐘。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，5 mL)及MeOH(5 mL)中且在70℃下攪拌48小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於MeOH/DCM中並使其通過SCX柱，用DCM及MeOH洗滌且用含1 N氨之MeOH溶離。減壓移除溶劑且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈淺褐色固體狀之呈單甲酸鹽形式之108(21 mg，14%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.53(s,1H),8.15-7.95(m,1H),7.58(s,1H),7.35-7.05(m,2H),6.25(tt,J=55.6,4.1 Hz,1H),4.54-4.43(m,2H),3.43-3.22(m,5H),2.68(s,3H),2.28-1.74(m,6H)。LCMS(ES+)m/z 512(M+1)。
實例109 (R)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(甲基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺109
遵循實例108之程序，使2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(200 mg，0.29 mmol)與2-氟-5-甲基苯酸(63 mg，0.41 mmol)反應，得到呈淺褐色固體狀之呈單甲酸鹽形式之109(67 mg，45%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.56(s,1H),8.07(dd,J=7.3,2.2 Hz,1H),7.61(s,1H),7.26-7.20(m,1H),7.12(dd,J=11.4,8.4 Hz,1H),6,25(tt,J=55.6,4.2 Hz,1H),4.48(td,J=13.9,4.2 Hz,2H),3.41-3.33(m,3H),3.30-3.13(m,2H),2.58(s,3H),2.40(s,3H),2.23-1.72(m,6H)。LCMS(ES+)m/z 508(M+1)。
實例110 5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺110
向1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(100 mg，0.39 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加DIPEA(0.5 mL，2.87 mmol)、PyBOP(300 mg，0.58 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-環丙基噻唑-4-甲酸(164 mg，0.46 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(100 mL)稀釋且用水(20 mL)洗滌。有機層藉由通過相分離柱進行分離且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層 析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈無色固體狀之4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(145 mg)。在室溫下，將此固體(145 mg，0.24 mmol)於HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M,5 mL)中攪拌20小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈膏狀固體狀之110(80 mg，44%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.81(s,1H),7.46(tt,J=8.5,6.2 Hz,1H),7.19-7.11(m,2H),6.22(tt,J=55.6,4.2 Hz,1H),4.45(td,J=13.9,4.2 Hz,2H),4.01-3.93(m,1H),3.32-3.15(m,5H),2.10-1.90(m,3H),1.87-1.65(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 499(M+1)。
實例111 5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺111
遵循實例105之程序，以2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(0.13 g，0.23 mmol)及2-氟-5-甲基苯酸(53 mg，0.35 mmol)為起始物，得到呈黑色固體狀之111(56 mg，50%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.93(s,1H),8.08(d,J=7.4 Hz,1H),7.66(s,1H),7.42(s,2H),7.24(d,J=8.7 Hz,2H),6.39(tt,J=55.3,4.2 Hz,1H),4.55(d,J=3.8 Hz,1H),4.42(td,J=14.5,4.2 Hz,2H),3.86-3.80(m,1H),3.29-3.03(m,4H),2.37(s,3H), 1.94-1.84(m,3H),1.77-1.55(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 495(M+1)。
實例112 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(2-甲基哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺112
將PyBOP(313 mg，0.60 mmol)及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(153 mg，0.43 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液在室溫下攪拌30分鐘。添加4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯(133 mg，0.45 mmol)及DIPEA(0.12 mL，0.68 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(50 mL)稀釋且用水(20 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。將分離之中間物再溶解於DCM(6 mL)中且添加TFA(2 mL)。混合物在室溫下攪拌4小時。減壓濃縮混合物且將殘餘物再溶解於DCM(50 mL)中且用飽和NaHCO3水溶液(2×10 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。藉由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之112(41 mg，22%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.66(s,1H),7.92(s,1H),7.38-7.25(m,1H),7.03(t,J=9.0 Hz,2H),6.20(s,2H),3.77(s,3H),3.27-3.15(m,2H),3.10-2.93(m,4H),2.59(dd,J=12.5,9.5 Hz,1H),0.88(d,J=6.3 Hz,3H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 434(M+1)。
實例113 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(2-乙基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺113
遵循實例112之程序，使4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-乙基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯與來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到呈白色固體狀之113(27 mg，19%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.68(s,1H),7.91(s,1H),7.31(t,J=7.7 Hz,1H),7.03(t,J=9.2 Hz,2H),6.20(s,2H),3.77(s,3H),3.24-3.14(m,2H),3.12-2.93(m,4H),2.60(t,J=10.8 Hz,1H),1.48-1.28(m,1H),1.28-1.16(m,1H),0.79(t,J=7.6 Hz,3H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 448(M+1)。
實例114 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(2-乙基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺114
遵循實例112之程序，使4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-乙基哌嗪-1-甲酸(R)-第三丁酯與來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到呈白色固體狀之114(30 mg，21%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.68(s,1H),7.91(s,1H),7.36-7.27(m,1H),7.02(t,J=8.9 Hz,2H),6.24(s,2H),3.76(s,3H),3.25-3.15(m,2H),3.11-2.90(m,4H),2.58(t,J=5.5 Hz,1H),1.41-1.31(m,1H),1.28-1.14(m,1H),0.79(t,J=7.5 Hz,3H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 448(M+1)。
實例115 (R)-5-胺基-N-(5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-環丙基-2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲 醯胺115
步驟A. 2-(5-環丙基-2-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
將2-(5-氯-2-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(309 mg，0.44 mmol)、環丙基三氟硼酸鉀(98 mg，0.66 mmol)、乙酸鈀(20.0 mg，0.088 mmol)、丁基-二-1-金剛烷基膦(50.1 mg，0.133 mmol)及碳酸銫(437 mg，1.33 mmol)裝入40 mL反應瓶中且用氮氣吹掃真空三次。添加甲苯(10.8 mL)及水(1.2 mL)且混合物在105℃下加熱4天，同時用LCMS進行監測。反應物經由矽藻土過濾，且用甲醇充分洗滌。減壓濃縮濾液且殘餘物經由用含0至100%乙酸乙酯之庚烷溶離之急驟層析法純化，得到2-(5-環丙基-2-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲 酸第三丁酯(192 mg，62%)。
步驟B. 將Cbz及Boc基團自2-(5-環丙基-2-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯脫除，得到115。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.83(br,1H),7.59(s,1H),7.48(br,2H),7.20-7.05(m,2H),3.65(d,J=4.6 Hz,3H),3.18-3.04(m,4H),3.3.05-2.95(m,1H),2.1.-2.02(m,1H),1.85-1.75(m,3H),1.68-1.43(m,3H),0.98(dt,J=8.4,3.1 Hz,2H),0.79-0.68(m,2H)。MS(ESI)m/z：488.2[M+H+]。
實例116 (R)-5-胺基-N-(5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟-3-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺116
根據實例115中所述之程序製備化合物116。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.81(s,1H),7.58(s,1H),7.47(s,2H),7.40(dd,J=15.0,8.5 Hz,1H),7.17(t,J=9.3 Hz,1H),3.64(s,3H),3.19-2.93(m,5H),2.27(s,3H),1.93-1.72(m,3H),1.67-1.43(m,3H)。MS(ESI)m/z：462.2[M+H+]。
實例117 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(3-甲基哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺117
遵循實例102之程序，使(S)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯反應，得到呈白色固體狀之117(40 mg，73%)。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ(ppm)： 8.81(s,1H),8.17(s,1H),7.51-7.57(m,3H),7.36(s,1H),7.25-7.29(m,2H),3.65(s,3H),3.17-3.19(m,3H),2.91-3.14(m,4H),1.10(d,J=5.2 Hz,3H)；MS(ESI)m/z=434(M+1+)。
實例118 5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺118
遵循實例105之程序，使2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(130 mg，0.23 mmol)與2,5-二氟苯酸(55 mg，0.35 mmol)反應，得到呈深綠色固體狀之118(66 mg，57%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.10-8.00(m,1H),7.68(s,1H),7.30-7.20(m,1H),7.19-7.11(m,1H),6.24(tt,J=55.6,4.2 Hz,1H),4.51-4.40(m,2H),4.01-3.92(m,1H),3.45-3.30(m,2H),3.31-3.16(m,3H),2.13-1.91(m,2H),1.90-1.67(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 499(M+1)。
實例119 (S)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(甲基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺119
遵循實例108之程序，使2-溴-4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(80 mg，0.12 mmol)與2-氟-5-甲基苯酸(30 mg，0.20 mmol)反 應，得到呈淺粉色固體狀之呈單甲酸鹽形式之119(11 mg，19%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.56(s,1H),8.08(dd,J=7.3,2.2 Hz,1H),7.60(s,1H),7.26-7.20(m,1H),7.12(dd,J=11.4,8.4 Hz,1H),6.41-6.08(m,1H),4.54-4.43(m,2H),3.40-3.33(m,3H),3.32-3.24(m,2H),2.64(s,3H),2.41(s,3H),2.33-1.94(m,3H),1.91-1.76(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 508(M+1)。
實例120 5-胺基-N-(5-(4-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺120
在氮氣下，向中間物17，即2,2,2-三氟-N-(3-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(70 mg，0.20 mmol)及甲酸銨(101 mg，1.60 mmol)於MeOH(5 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(21 mg，0.20 mmol)。混合物在70℃下加熱3小時，之後冷卻，過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(10 mL)與DCM(50 mL)之間分配。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈紅色膠狀之N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(64 mg)。將PyBOP(146 mg，0.28 mmol)及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(78 mg，0.22 mmol)於DCM(3 mL)中之溶液在室溫下攪拌30分鐘。添加N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(65 mg，0.20 mmol)及DIPEA(56 μL,0.32 mmol)於DCM(2 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌30小時。再添加DCM(50 mL)且混 合物用水(20 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% Et2O/DCM)純化，得到呈白色固體狀之呈四種非對映異構體之外消旋混合物形式之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(3-氟-4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(82 mg)。將此固體再溶解於DCM(12 mL)及TFA(2 mL)之混合物中且混合物在室溫下攪拌4小時。減壓移除溶劑。殘餘物隨後再溶解於含7 N氨之MeOH(20 mL)中且在55℃下加熱24小時。減壓移除溶劑且經由矽膠管柱層析法(0-5%含7 N氨之MeOH/DCM)純化，得到2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(3-氟-4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯之兩對單獨之對映異構體。獲得呈白色固體狀之一對對映異構體120(41 mg)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.60(s,1H),7.53-7.43(m,1H),7.15(t,J=8.8 Hz,2H),4.48-4.30(m,1H),3.83-3.72(m,3H),3.57(d,J=4.4 Hz,1H),3.59-3.45(m,1H),3.37-3.29(m,2H),3.14(td,J=11.4,5.2 Hz,1H),1.95-1.84(m,3H),1.82-1.71(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。
實例121 5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺121
遵循實例101之程序，中間物19，即6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯 在溶解於5% MeOH/DCM(350 mL)中，用飽和NaHCO3(50 mL)及水(4×50 mL)洗滌且減壓移除溶劑之後，得到呈米色固體狀之121(1.1 g，34%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.83(s,1H),7.57-7.47(m,4H),7.31-7.22(m,2H),3.78-3.45(m,4H),3.45-3.02(m,3H),2.25-2.06(m,2H),1.92-1.55(m,5H)。LCMS(ES+)m/z 484(M+1)。
實例122 5-胺基-N-(5-((3S,5S)-5-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺122
遵循實例101之程序，中間物20，即6-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸在矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM，1%含7 N氨之MeOH)之後，得到白色固體(93 mg，7%，經歷三個步驟)。藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物122。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.51(s,1H),7.88(s,1H),7.38-7.28(m,2H),7.08-6.98(m,3H),6.18-6.07(m,2H),4.83-4.66(m,1H),4.30-4.21(m,1H),4.16-4.09(m,1H),3.74(s,3H),3.40-3.16(m,3H),3.11(m,1H),2.98-2.89(m,1H),1.95-1.76(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。
實例123 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(2-甲基哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺123
遵循實例112之程序，以(S)-第三丁基4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈白色固體狀之123(61 mg，32%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.66(s,1H),7.92(s,1H),7.34-7.27(m,1H),7.03(t,J=8.8 Hz,2H),6.11(s,2H),3.77(s,3H),3.28-3.16(m,2H),3.08-2.93(m,4H),2.59(dd,J=12.4,9.5 Hz,1H),0.88(d,J=6.3 Hz,3H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 434(M+1)。
實例124 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(2,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺124
遵循實例101之程序，以8-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-2-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈米色固體狀之124(140 mg，47%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)1H NMR δ 8.85(br s,1H),8.81(s,1H),7.61-7.45(m,4H),7.29(t,J=8.8 Hz,2H),3.64(s,3H),3.22(t,J=7.5 Hz,2H),3.14-2.96(m,6H),1.81(t,J=7.5 Hz,2H),1.73-1.60(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 474(M+1)。
實例125 5-胺基-N-(5-(4-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺125
亦遵循實例121之程序，得到呈灰白色固體狀之一對對映異構體125(37 mg)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.73(s,1H),7.53-7.41(m,1H),7.14(t,J=8.8 Hz,2H), 4.78-4.56(m,1H),3.75(s,3H),3.55(t,J=15.3 Hz,1H),3.51-3.31(m,2H),3.20-2.97(m,2H),2.14(q,J=12.2 Hz,1H),2.05-1.83(m,1H),1.78-1.69(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。
實例126 5-胺基-N-(5-((3R,5R)-5-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺126
遵循實例101之程序，以中間物20，即6-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，在矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM，1%含7 N氨之MeOH)之後，得到白色固體(273 mg，19%，經歷三個步驟)。藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物126。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.52(s,1H),7.80(s,1H),7.37-7.28(m,2H),7.08-6.98(m,3H),6.13(s,2H),4.83-4.78及4.72-4.68(2 m,1H),3.79-3.72(m,3H),3.54-3.30(m,3H),3.24-3.12(m,2H),2.31-2.22(m,1H),2.18-2.07(m,1H),1.93-1.76(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。
實例127 5-胺基-N-(5-((3S,5R)-3-胺基-5-氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺127
在環境溫度下，將(3S,5R)-1-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟哌啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.15 mmol)於HCl/MeOH(10 mL)中之混合物攪拌20小時且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用MeOH(10 mL)稀釋，用28%氨溶液中和，且濃縮，得到粗產物。粗產物藉由製備型HPLC純化，得到127(40 mg，59%)。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ(ppm)：7.51-7.49(m,2H),7.17-7.12(m,2H),4.95-4.86(m,2H),3.75(s,3H),3.31-3.25(m,3H),2.97-2.90(m,1H),2.31-2.23(m,1H),1.64-1.48(m,1H)；MS(ESI)m/z：452[M+H+]。
實例128 N-(5-(1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺128
在1：1之二氯甲烷：TFA中自4-(4-(5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯移除Boc基團，得到128。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 11.57(s,1H),8.57(s,1H),7.65(s,2H),7.61-7.43(m,1H),7.29(t,J=8.7 Hz,2H),5.21-5.03(m,1H),4.58-4.36(m,2H),4.26-4.04(m,2H),3.59(s,2H),3.46-3.36(m,2H),2.98(t,J=6.1 Hz,2H),2.79(t,J=5.7 Hz,2H),1.60-1.40(m,2H)。MS(ESI)m/z：490.2[M+H+]。
實例129 N-(5-(1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-胺基-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺129
在1：1之二氯甲烷：TFA中自4-(4-(5-胺基-2-(2-氟-5-甲基 苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯移除Boc基團，得到129。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 10.78(s,1H),8.49(s,1H),8.41(s,2H),7.90(d,J=7.4 Hz,1H),7.55(s,2H),7.26(d,J=9.0 Hz,2H),4.61-4.42(m,2H),4.27-4.11(m,2H),3.70-3.54(m,2H),3.00(t,J=5.4 Hz,2H),2.84(t,J=5.5 Hz,2H),2.36(s,3H),1.71-1.57(m,2H)。MS(ESI)m/z：486.2[M+H+]。
實例130 N-(5-(1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-胺基-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺130
在1：1之二氯甲烷：TFA中自4-(4-(5-胺基-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯移除Boc基團，得到130。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 10.43(s,1H),8.42(s,1H),8.36(s,2H),8.06-7.94(m,1H),7.60(s,2H),7.51-7.37(m,1H),7.36-7.24(m,1H),4.56(dd,J=10.5,8.2 Hz,1H),4.47(dd,J=11.2,8.1 Hz,1H),4.25(dd,J=10.7,5.5 Hz,1H),4.18(dd,J=11.2,5.7 Hz,1H),3.60-3.36(m,7H),2.94(t,J=5.5 Hz,2H),2.83-2.74(m,2H),1.75-1.56(m,2H)。MS(ESI)m/z：486.2[M+H+]。
實例131 (R)-5-胺基-2-(2-氟苯基)-N-(5-(4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺131
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之131。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),8.33-8.20(m,1H),7.53(s,1H),7.50-7.24(m,5H),4.24(s,1H),3.65(s,3H),3.43-3.32(m,1H),3.28-3.17(m,1H),3.11-2.98(m,1H),2.96-2.83(m,1H),2.05-1.88(m,1H),1.84-1.64(m,4H),1.63-1.45(m,1H),1.17(s,3H)。MS(ESI)m/z：445.2[M+H+]。
實例132 (S)-5-胺基-2-(2-氟苯基)-N-(5-(4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺132
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之132。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),8.33-8.22(m,1H),7.53(s,1H),7.50-7.23(m,5H),4.24(s,1H),3.65(s,3H),3.42-3.33(m,1H),3.27-3.19(m,1H),3.11-2.98(m,1H),2.96-2.80(m,1H),2.06-1.89(m,1H),1.80-1.63(m,4H),1.63-1.47(m,1H),1.17(s,3H)。MS(ESI)m/z：445.2[M+H+]。
實例133 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(5-(三氟甲基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺133
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之133。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 11.98(s,1H),7.90(s,1H),7.64-7.39(m,3H),7.37-7.21(m,2H),3.62(s,3H),3.22-2.97(m,6H),2.89(dd,J=14.6,10.5 Hz,1H),2.79-2.60(m,1H),2.25(dd,J=12.4,10.6 Hz,1H), 1.83-1.59(m,1H),0.68(d,J=6.7 Hz,3H)。MS(ESI)m/z：448.2[M+H+]。
實例134 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(5-(三氟甲基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺134
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之134。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 11.98(s,1H),7.90(s,1H),7.64-7.39(m,3H),7.37-7.21(m,2H),3.62(s,3H),3.22-2.97(m,6H),2.89(dd,J=14.6,10.5 Hz,1H),2.79-2.60(m,1H),2.25(dd,J=12.4,10.6 Hz,1H),1.83-1.59(m,1H),0.68(d,J=6.7 Hz,3H)。MS(ESI)m/z：448.2[M+H+]。
實例135 (S)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺135
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之135。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.69(s,1H),7.69(s,1H),7.59-7.43(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),6.37(tt,J=55.3,4.1 Hz,1H),4.41(td,J=14.5,4.1 Hz,2H),3.79(d,J=7.8 Hz,1H),3.24-2.94(m,4H),1.96-1.75(m,3H),1.73-1.48(m,3H)。MS(ESI)m/z：499.1[M+H+]。
實例136 (R)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺136
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之136。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.69(s,1H),7.69(s,1H),7.58-7.42(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),6.37(tt,J=55.3,4.0 Hz,1H),4.47(d,J=3.8 Hz,1H),4.40(td,J=14.5,4.1 Hz,2H),3.87-3.72(m,1H),3.23-2.94(m,4H),1.92-1.76(m,3H),1.73-1.46(m,3H)。MS(ESI)m/z：499.1[M+H+]。
實例137 (S)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺137
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之137。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.91(s,1H),8.07(d,J=7.5 Hz,1H),7.65(s,1H),7.41(s,2H),7.23(d,J=9.0 Hz,2H),6.38(tt,J=55.4,4.1 Hz,1H),4.53(s,1H),4.42(td,J=14.5,4.1 Hz,2H),3.89-3.76(m,1H),3.27-2.98(m,4H),2.36(s,3H),1.95-1.79(m,3H),1.79-1.48(m,3H)。MS(ESI)m/z：495.2[M+H+]。
實例138 (R)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺138
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之138。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.91(s,1H),8.07(d,J=7.5 Hz,1H),7.66(s,1H),7.41(s,2H),7.23(d,J=9.0 Hz,2H),6.38(tt,J=55.4,4.1 Hz,1H),4.53(d, J=3.8 Hz,1H),4.42(td,J=14.5,4.1 Hz,2H),3.93-3.74(m,1H),3.27-3.00(m,4H),2.37(s,3H),1.97-1.78(m,3H),1.78-1.49(m,3H)。MS(ESI)m/z：495.2[M+H+]。
實例139 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺139
步驟A：向4-疊氮基-5-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(1.0 g，3.45 mmol)於無水DCM(10 ml)中之溶液中添加脫氧-Fluor®(1.6 mL，8.62 mmol，50%於THF中)且混合物在室溫下攪拌18小時。添加飽和NaHCO3水溶液(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。有機層用飽和NaHCO3水溶液(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(20% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺黃色油狀之呈同式及反式異構體之混合物形式之4-疊氮基-5-氟氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(0.76 g)。
步驟B：用三苯基膦(0.45 g，1.71 mmol)處理4-疊氮基-5-氟氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(0.5 g，1.71 mmol)於THF/水(10 mL/2 mL)中之溶液且混合物在60℃下加熱24小時。使混合物於EtOAc(100 mL)與水(20 mL)之間分配且用鹽水(20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到無色油狀物。在Et2O中濕磨此油狀物，濾出所得固體，用Et2O洗滌且減壓濃縮濾液，得到無色油狀物。以一半規模重複此反應且將合併之批料溶解於無水DCM(20 mL)中且用二碳酸二第三丁酯(1.1 g，5.11 mmol)及NEt3 (1.1 mL，7.67 mmol)處理。混合物在室溫下攪拌18小時。添加水(10 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈無色油狀之呈同式及反式異構體之混合物形式之4-(第三丁氧基羰基胺基)-5-氟氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(0.55 g)。
步驟C：使4-(第三丁氧基羰基胺基)-5-氟氮雜環庚烷-1-甲酸苯甲基酯(0.55 g，1.50 mmol)於MeOH(75 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，50℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈無色油狀之呈同式及反式異構體之混合物形式之5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(317 mg)。
步驟D：向5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(310 mg，1.34 mmol)於EtOH(4 mL)中之溶液中添加DIPEA(1 mL，5.7 mmol)及5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(216 mg，1.34 mmol)。反應混合物在微波中於130℃下加熱8小時。減壓移除溶劑且殘餘物經由矽膠管柱層析法(30-40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色玻璃狀之兩種反式異構體，即5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(65 mg)，其中混雜有一些同式異構體。
步驟E：使5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及5-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H- 吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(65 mg，0.182 mmol)於MeOH(20 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，50℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈淺黃色玻璃狀之游離胺(51 mg)。
步驟F：向此胺(51 mg，0.156 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中添加5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(56 mg，0.156 mmol)、PyBOP(203 mg，0.39 mmol)及DIPEA(0.5 mL，2.9 mmol)且反應混合物在室溫下攪拌18小時。添加水(10 mL)且混合物用DCM(40 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈淺紫色固體狀之4-(5-(4-Boc-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯之兩種反式異構體(36 mg)，其中混雜有少量同式(順式)異構體。
步驟G：用HCl之二噁烷溶液(4 M，0.65 mL，2.63 mmol)處理4-(5-(4-Boc-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯之兩種反式異構體(35 mg，0.053 mmol)於MeOH(2 mL)中之溶液/懸浮液且混合物在室溫下攪拌18小時。減壓移除溶劑且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈灰白色固體狀之5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺(3 mg，0.16%，經歷八個步驟)。4-胺基及5-氟基團為反 式。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.81(s,1H),7.88(s,1H),7.38-7.27(m,1H),7.08-6.98(m,2H),6.14(s,2H),4.92-4.77(m,1H),3.73(s,3H),3.50-3.29(m,3H),3.18-3.05(m,2H),2.29-2.24(m,1H),2.11-1.76(m,3H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)
藉由SFC對掌性分離5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，得到呈單一對映異構體形式之139。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.82(s,1H),7.59-7.42(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.55-4.31(m,1H),3.63(s,3H),3.23-3.03(m,5H),2.20-2.02(m,1H),2.02-1.88(m,1H),1.88-1.76(m,1H),1.67-1.52(m,1H)。MS(ESI)m/z：466.1[M+H+]。
實例140 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺140
遵循實例139之程序，得到5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，其中4-胺基及5-氟基團為順式。藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之140。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.82(s,1H),7.59-7.42(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.55-4.31(m,1H),3.63(s,3H),3.23-3.03(m,5H),2.20-2.02(m,1H),2.02-1.88(m,1H),1.88-1,76(m,1H),1.67-1.52(m,1H)。MS(ESI)m/z：466.1[M+H+]。
實例141 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺141
遵循實例112之程序，使(S)-5-(2,4-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺與來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到呈粉色固體狀之141(86 mg，46%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.59(s,1H),7.88(s,1H),7.35-7.28(m,1H),7.02(t,J=8.7 Hz,2H),6.13(s,2H),3.77(s,3H),3.43-3.31(m,2H),2.98(d,J=11.6 Hz,1H),2.83(t,J=11.4 Hz,2H),2.35(s,3H),2.32-2.25(m,1H),1.96(t,J=10.2 Hz,1H),0.90(d,J=6.3 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 448(M+1)。
實例142 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺142
遵循實例110之程序，使(R)-5-(2,4-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺與來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到呈白色固體狀之142(54 mg，29%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.59(s,1H),7.88(s,1H),7.36-7.25(m,1H),7.02(t,J=8.7 Hz,2H),6.12(s,2H),3.77(s,3H),3.43-3.30(m,2H),2.98(dt,J=11.5,2.8 Hz,1H),2.83(t,J=11.4 Hz,2H),2.35(s,3H),2.42-2.20(m,1H),1.96(t,J=10.2 Hz,1H),0.92(d,J=8.6 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 448(M+1)。
實例143 5-胺基-N-(1-環丙基-5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯 胺143
遵循實例105之程序，使4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧基羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯與2,5-二氟-苯基酸反應，得到呈米色泡沫狀之143(60 mg，42%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.92(s,1H),7.92-7.84(m,2H),7.17-7.08(m,1H),7.07-6.99(m,1H),6.15(s,2H),3.68(t,J=13.2 Hz,2H),3.52-3.32(m,5H),3.11(t,J=5.4 Hz,2H),1.95(s,1H),1.26-1.20(m,2H),1.08-1.00(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 496(M+1)。
實例144 5-胺基-N-(1-環丙基-5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺144
遵循實例105之程序，使4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧基羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯與2-氟-5-甲基苯基酸反應，得到呈米色泡沫狀之144(75 mg，53%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.99(s,1H),7.92(dd,J=7.2,2.2 Hz,1H),7.84-7.79(m,1H),7.16-7.11(m,1H),7.10-7.00(m,1H),6.09(s,2H),3.69(t,J=13.3 Hz,2H),3.51-3.35(m,5H),3.09(t,J=5.5 Hz,2H),2.39(s,3H),2.05-1.80(m,1H),1.29-1.19(m,2H),1.09-0.98(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)。
實例145 5-胺基-N-(1-環丙基-5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜 環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺145
藉由小心地使氮氣鼓泡通過4-(4-(2-溴-5-(第三丁氧基羰基胺基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(191 mg，0.29 mmol)、二水合氟化鉀(90 mg，0.96 mmol)及2,6-二氟-苯基酸(137 mg，0.87 mmol)於THF(3 mL)中之混合物，保持15分鐘，來使混合物脫氣。隨後添加參(二苯亞甲基丙酮)二鈀/三第三丁基鏻四氟硼酸鹽混合物(莫耳比：1/1.2)(35 mg，0.029 mmol)且脫氣之混合物在微波中於100℃下加熱2小時。減壓移除溶劑。添加水(5 mL)且混合物用EtOAc(2×20 mL)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈橙色固體狀之4-(4-(5-第三丁氧基羰基胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(95 mg，0.13 mmol)，將其溶解於HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，0.7 mL，2.73 mmol)及MeOH(0.2 mL)中且在70℃下攪拌48小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於MeOH/DCM並使其通過SCX柱，用DCM及MeOH洗滌且用含1 N氨之MeOH溶離。藉由矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM)純化，得到呈米色固體狀之145(35 mg，25%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 9.42(s,1H),7.87(s,1H),7.38-7.28(m,1H),7.08-6.97(m,2H),6.20(s,2H),3.71-3.56(m, 3H),3.46-3.35(m,4H),3.12-3.06(m,2H),1.25-1.19(m,2H),1.06-0.97(m,2H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 496(M+1)。
實例146 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺146
在氮氣下向4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(212 mg，0.83 mmol)及甲酸銨(386 mg，6.6 mmol)於MeOH(15 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(88 mg，0.83 mmol)。混合物在80℃下加熱16小時，之後冷卻，經由矽藻土過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(20 mL)與DCM(40 mL)之間分配且分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈紅色油狀之1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-甲基氮雜環庚烷-4-醇，不經進一步純化即使用。向DIPEA(0.06 mL，0.33 mmol)、PyBOP(151 mg，0.29 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸(89 mg，0.25 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中(預先攪拌30分鐘)添加1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-甲基氮雜環庚烷-4-醇(47 mg，0.21 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(30 mL)及水(20 mL)稀釋。使有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第 三丁酯(109 mg)。在室溫下，將此固體與HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，5 mL，20 mmol)一起於MeOH(5 mL)中攪拌16小時。減壓移除溶劑，將殘餘物再溶解於MeOH中並使其通過SCX管柱，用DCM及MeOH洗滌且用3-10%含7 N氨之MeOH/DCM溶離。經由矽膠管柱層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到呈灰白色固體狀之146(36 mg，37%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.68(s,1H),7.52-7.43(m,1H),7.17-7.10(m,2H),3.74(s,3H),3.56-3.44(m,1H),3.19-3.10(m,1H),3.04-2.96(m,1H),2.14-2.02(m,1H),1.94-1.80(m,4H),1.74-1.64(m,1H),1.23(s,3H)(1個質子與溶劑峰重疊)。LCMS(ES+)m/z 463(M+1)。
實例147 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺147
步驟A：向5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(784 mg，2.2 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液中添加PyBOP(1.46 g，2.8 mmol)且混合物在室溫下攪拌30分鐘。隨後添加N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(647 mg，2.0 mmol)及DIPEA(0.59 mL，3.4 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(60 mL)稀釋且用水(30 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷) 純化，得到呈灰白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(1.32 g)。
步驟B：在壓力容器中，將2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯懸浮於MeOH(20 mL)中且向其中添加HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，20 mL，80.0 mmol)。密封容器且混合物在60℃下加熱16小時。減壓移除溶劑且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-10%含7 N氨之MeOH/DCM)純化，得到呈淺褐色固體狀之5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺(653 mg，70%，經歷兩步驟)。4-胺基及5-氟基團為順式。1H NMR(400 M Hz,CDCl3)δ 8.63(s,1H),7.84(s,1H),7.37-7.29(m,1H),7.03(t,J=8.7 Hz,2H),6.13(s,2H),4.48(dtd,J=47.9,8.6,3.6 Hz,1H),3.72(s,3H),3.37-3.15(m,5H),2.23-1.92(m,3H),1.75-1.67(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之147。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.04(s,1H),7.59(s,1H),7.56-7.43(m,3H),7.26(dd,J=14.5,5.9 Hz,2H),4.82(dd,J=47.0,7.4 Hz,1H),3.63(s,3H),3.29-3.15(m,4H),3.08-2.91(m,2H),2.24-2.06(m,1H),1.91-1.76(m,2H),1.74-1.59(m,1H)。MS(ESI)m/z：466.1[M+H+]。
實例148 (S)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺148
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之148。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.10(s,1H),8.15(ddd,J=9.3,5.7,3.3 Hz,1H),7.55(s,1H),7.51-7.36(m,3H),7.27(tt,J=7.4,3.6 Hz,1H),6.38(tt,J=55.4,4.1 Hz,1H),4.50(d,J=3.8 Hz,1H),4.42(td,J=14.5,4.1 Hz,2H),3.87-3.71(m,1H),3.25-2.97(m,4H),1.92-1.76(m,3H),1.73-1.47(m,3H)。MS(ESI)m/z：499.1[M+H+]。
實例149 (R)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺149
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之149。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.10(s,1H),8.15(ddd,J=9.3,5.7,3.3 Hz,1H),7.55(s,1H),7.51-7.36(m,3H),7.27(tt,J=7.4,3.6 Hz,1H),6.38(tt,J=55.4,4.1 Hz,1H),4.50(d,J=3.8 Hz,1H),4.42(td,J=14.5,4.1 Hz,2H),3.87-3.71(m,1H),3.25-2.97(m,4H),1.92-1.76(m,3H),1.73-1.47(m,3H)。MS(ESI)m/z：499.1[M+H+]。
實例150 5-胺基-N-(5-((4R,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺150
遵循實例147之程序，得到5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮 雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，其中4-胺基及5-氟基團為順式。藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，得到呈單一對映異構體形式之150。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.05(s,1H),7.59(s,1H),7.57-7.47(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),4.82(dd,J=47.0,7.2 Hz,1H),3.63(s,3H),3.30-3.15(m,4H),3.08-2.94(m,2H),2.26-2.09(m,1H),1.93-1.74(m,2H),1.74-1.60(m,1H)。MS(ESI)m/z：466.1[M+H+]。
實例151 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺151
根據實例102中所述之程序，使用6-氟-1,4-二氮雜環庚烷製備化合物151。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.74(s,1H),8.17(s,1H),7.59-7.46(m,3H),7.43(s,1H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),4.47-4.37(m,1H),4.30(dd,J=5.2,2.3 Hz,1H),3.64(s,3H),3.08-2.73(m,8H)。MS(ESI)m/z：452.1[M+H+]。
實例152 (R)-5-胺基-N-(5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺152
根據本文中所述之程序製備化合物152。
實例153 5-胺基-N-(5-((3S,5R)-5-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺153
遵循實例101之程序，中間物20，即6-氟-1-(1-甲基-4-硝 基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸在矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM,1%含7 N氨之MeOH)後，得到白色固體(273 mg，19%，經歷三個步驟)。藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物153。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.77(s,1H),7.61-7.41(m,4H),7.27(dd,J=14.5,5.8 Hz,2H),4.84-4.56(m,1H),3.67(d,J=7.4 Hz,3H),3.44-3.34(m,2H),3.21-2.86(m,3H),2.22-2.07(m,1H),1.87(ddt,J=34.3,21.1,7.4 Hz,3H),1.70-1.53(m,1H)。MS(ESI)m/z：466.1[M+H+]。
實例154 5-胺基-N-(5-(5-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺154
遵循實例101之程序，中間物20，即6-氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸在矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM，1%含7 N氨之MeOH)之後，得到白色固體(273 mg，19%，經歷三個步驟)。藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物154。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.77(s,1H),7.61-7.41(m,4H),7.27(dd,J=14.5,5.8 Hz,2H),4.84-4.56(m,1H),3.67(d,J=7.4 Hz,3H),3.44-3.34(m,2H),3.21-2.86(m,3H),2.22-2.07(m,1H),1.87(ddt,J=34.3,21.1,7.4 Hz,3H),1.70-1.53(m,1H)。MS(ESI) m/z：466.1[M+H+]。
實例155 5-胺基-N-(5-((3R,4S)-4-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺155
遵循實例101或實例112之程序，藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物155。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.77(s,1H),7.60-7.44(m,4H),7.26(dd,J=14.4,5.8 Hz,2H),4.34-4.10(m,1H),3.66(s,3H),3.54-3.33(m,2H),3.17-2.93(m,3H),1.96-1.50(m,5H)。MS(ESI)m/z：466.1[M+H+]。
實例156 5-胺基-N-(5-((3S,4R)-4-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺156
遵循實例101或實例112之程序，藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物156。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.77(s,1H),7.60-7.44(m,4H),7.26(dd,J=14.4,5.8 Hz,2H),4.34-4.10(m,1H),3.66(s,3H),3.54-3.33(m,2H),3.17-2.93(m,3H),1.96-1.50(m,5H)。MS(ESI)m/z：466.1[M+H+]。
實例157 5-胺基-N-(5-((3R,4R)-4-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺157
遵循實例101或112之程序，藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物157。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.77(s,1H),7.61-7.41(m,4H),7.26(dd,J=14.4,5.8 Hz,2H),4.33-4.09(m,1H),3.66(s,3H),3.51-3.32(m,2H),3.06(m,3H),1.87-1.49(m,4H)。MS(ESI)m/z：466.2[M+H+]。
實例158 5-胺基-N-(5-((3S,4S)-4-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺158
遵循實例101或實例112之程序，藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物158。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.77(s,1H),7.61-7.41(m,4H),7.26(dd,J=14.4,5.8 Hz,2H),4.33-4.09(m,1H),3.66(s,3H),3.51-3.32(m,2H),3.06(m,3H),1.87-1.49(m,4H)。MS(ESI)m/z：466.2[M+H+]。
實例159 5-胺基-N-(5-((3R,5R)-3-胺基-5-氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺159
在環境溫度下將(3R,5R)-1-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟哌啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(150 mg，0.23 mmol)於HCl/MeOH(10 mL)之混合物攪拌20小時且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用MeOH(10 mL)稀釋，用28%氨溶液中和且濃縮，得到粗產物。粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈灰白色固體狀之159(77 mg，74%)。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ(ppm)：7.74(s,1H),7.48-7.42(m,1H), 7.14-7.11(m,2H),5.36-5.24(m,1H),4.00-3.94(m,1H),3.83-3.72(m,4H),3.42-3.37(m,1H),2.74-2.62(m,2H),2.50-5.42(m,1H),2.02-1.88(m,1H)；MS(ESI)m/z：452[M+H+]。
實例160 5-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺160
遵循實例162，製備化合物160。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 10.13(s,1H),9.14(s,1H),8.51(s,1H),7.60-7.45(m,1H),7.27(t,J=8.4 Hz,2H),5.17(s,1H),4.55(t,J=8.2 Hz,2H),4.33-4.10(m,2H),3.77(t,J=12.8 Hz,2H),3.69-3.51(m,2H),3.47-3.36(m,2H),3.19(t,J=14.3 Hz,2H),3.03-2.81(m,3H)。MS(ESI)m/z：526.2[M+H+]。
實例161 (R)-5-胺基-N-(5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺161
遵循實例101，使5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-吡唑與氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸(R)-苯甲基酯反應，得到161。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.12(s,1H),8.18-8.06(m,1H),7.57(s,1H),7.52-7.35(m,3H),7.34-7.18(m,1H),6.39(tt,J=55.3,4.2 Hz,1H),4.42(td,J=14.5,4.2 Hz,2H),3.21-3.03(m,4H),3.03-2.91(m,1H),1.91-1.71(m,3H),1.64-1.36(m,3H)。MS(ESI)m/z：498.2[M+H+]。
實例162 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(4-羥基氮雜環 庚烷-1-基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺162
步驟A. 甲烷磺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯
將氧雜環丁烷-3-基甲醇(1.85 g，21.0 mmol)溶解於二氯甲烷且冷卻至0℃。添加三乙胺(5.31 g，52.2 mmol)，隨後緩慢添加甲烷磺醯氯(2.89 g，25.2 mmol)。使混合物升溫至環境溫度，保持2小時，且用飽和碳酸氫鈉(14 mL)淬滅。水溶液用二氯甲烷萃取3次。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到甲烷磺酸氧雜環丁烷-3-基甲基酯粗品(定量)。
步驟B. 4-硝基-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)吡唑
4-硝基吡唑(1000 mg，8.80 mmol)、甲烷磺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯(1.90 g，11.0mmol)、碳酸銫(8.70 g，27.0 mmol)及乙腈(13 mL)之混合物在100℃下加熱3小時。將混合物冷卻至室溫，添加飽和氯化銨。混合物用二氯甲烷萃取3次。乾燥(Na2SO4)合併之有機物且減壓移除溶劑。粗產物藉由用含0至70%乙酸乙酯之庚烷溶離之急驟層析法純化，得到4-硝基-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)吡唑(1.60g，99%)。
步驟C. 5-氯-4-硝基-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑
在-78℃下，於15分鐘時間段內向4-硝基-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)吡唑(3200 mg，17.47 mmol)於THF(80 mL)中之溶液中逐滴添加LHMDS(1 M之THF溶液，22.7 mL，22.7 mmol)。所得混合物在-78℃下攪拌30分鐘。在-78℃下逐滴添加含六氯乙烷(5.38 g，22.7 mmoL)之THF(20 mL)。所得混合物在-78℃下再攪拌40分鐘。反應混合物用氯化銨水溶液淬滅且用乙酸乙酯(X3)萃取。合併之有機層經Na2SO4乾燥且減壓濃縮。粗物質藉由以含0至75%乙酸乙酯之庚烷作為溶離劑之管柱層析法純化，得到5-氯-4-硝基-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑(3.60 g，95%)。
步驟D. 遵循實例101，以5-氯-4-硝基-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑及氮雜環庚烷-4-醇為起始物，在最後一個步驟脫除保護基時使用TFA代替4 N HCl之二噁烷溶液，獲得162。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.25(s,1H),8.27(s,1H),7.65-7.48(m,3H),7.26(dd,J=14.3,5.8 Hx,2H),5.18(t,J=5.2 Hz,1H),4.65-4.52(m,2H),4.41(dd,J=11.0,8.2 Hz,1H),4.27(dd,J=10.5,5.8 hZ,1H),4.10(dd,J=11.1,6.1 Hz,1H),3.80-3.66(m,1H),3.63-3.43(m,5H),3.43-3.32(m,1H),1.95-1.78(m,2H),1.77-1.52(m,4H)。MS(ESI)m/z：505.1[M+H+]。
實例163 5-胺基-2-(2-氟-5-甲基苯基)-N-(5-(4-羥基氮 雜環庚烷-1-基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺163
遵循實例162之程序，獲得163。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),8.05(d,J=7.6 Hz,1H),7.56(s,1H),7.40(s,2H),7.23(d,J=9.1 Hz,2H),4.72-4.61(m,2H),4.53(d,J=3.8 Hz,1H),4.46(t,J=6.2 Hz,2H),4.25(d,J=7.4 Hz,2H),3.90-3.76(m,1H),3.49-3.36(m,1H),3.28-2.97(m,4H),2.37(s,3H),1.99-1.81(m,3H),1.78-1.53(m,3H)。MS(ESI)m/z：501.1[M+H+]。
實例164 (R)-5-胺基-N-(5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺164
遵循實例162之程序，獲得164。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.09(s,1H),8.31(s,1H),8.29(s,1H),7.66-7.45(m,2H),7.27(td,J=8.4,5.9 Hz,2H),5.17(s,1H),4.59(dd,J=18.0,7.8 Hz,1H),4.48-4.35(m,1H),4.32-4.18(m,1H),4.16-4.02(m,1H),3.67-3.38(m,6H),2.97-2.84(m,1H),1.91-1.30(m,6H)。MS(ESI)m/z：504.1[M+H+]。
實例165 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺
遵循實例162之程序，獲得165。MS(ESI)m/z：508.2[M+H+]。
實例166 (S)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚 烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺166
遵循實例101及實例112之程序，藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物166。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.83(s,1H),7.59-7.43(m,4H),7.28(t,J=8.6 Hz,2H),3.75-3.54(m,4H),3.25-3.01(m,4H),2.29-2.09(m,2H),1.90-1.77(m,1H),1.77-1.62(m,1H)。MS(ESI)m/z：484.1[M+H+]。
實例167 (R)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺167
遵循實例101及實例112之程序，藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物167。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.84(s,1H),7.59-7.44(m,4H),7.28(t,J=8.7 Hz,2H),3.73-3.57(m,4H),3.26-2.96(m,4H),2.30-2.09(m,2H),1.91-1.79(m,1H),1.79-1.60(m,1H)。MS(ESI)m/z：484.1[M+H+]。
實例168 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺168
實例169 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺169
步驟A. (±)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-(三氟甲基)哌嗪
在微波烘箱中於140℃下，將(±)-2-(三氟甲基)哌嗪(1 g，6.2 mmol)、5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(2.1 g，13 mmol)、DIPEA(2.4 g，18.6 mmol)於EtOH(10 mL)之混合物加熱5小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物藉由使用DCM/MeOH(10：1)作為溶離溶劑之矽膠層析法純化，得到呈黃色油狀之(±)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-(三氟甲基)哌嗪(1.8 g，99%)。MS(ESI)m/z：280[M+H+]。
步驟B. (±)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-胺
向(±)-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-(三氟甲基)哌嗪(420 mg，1.5 mmol)於MeOH(20 mL)及H2O(5 mL)中之溶液中添加鋅(590 mg，4 mmol)及NH4Cl(805 mg，10 mmol)。反應混合物在環境溫度下攪拌2小時且經由矽藻土過濾。減壓濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由使用PE/EtOAc(10/1~1/10)作為溶離溶劑之矽膠層析法純化，得到呈紅色固體狀之(±)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-胺(340 mg，90%)。1H NMR(500 MHz,DMSO- d 6)δ(ppm)：6.84(s,1H),3.38-3.52(m,5H),3.13-3.17(m,2H),2.94-3.00(m,2H),2.50-2.78(s,3H),1.98(m,1H)；MS(ESI)m/z：250(M+1+)。
步驟C. (±)-2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯
向(±)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-胺(300 mg，2.05 mmol)、來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(516 mg，1.73 mmol)、HATU(0.54 g，1.73 mmol)於DMF(15 mL)中之溶液中添加TEA(1.1 mL)。反應混合物在25℃下攪拌20小時，傾入水(100 mL)中且用EtOAc(50 mL×2)萃取。合併之有機層用水(50 mL×2)及鹽水(30 mL×2)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由使用DCM/MeOH(1：1)作為溶離溶劑之矽膠層析法純化，得到呈白色固體狀之(±)-2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸 第三丁酯(380 mg，52%)。MS(ESI)m/z：588(M+1+).
步驟D. 藉由使用製備型HPLC對掌性分離(±)-2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(380 mg)，得到(S)-2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(123 mg)及(R)-2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(120 mg)。
步驟E. 在環境溫度下，將(S)-2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(80 mg，0.126 mmol)於TFA(1 ML)及DCM(4 mL)之混合物攪拌3小時。藉由添加氨將混合物之pH值調至約8~9且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之168之甲酸鹽(40 mg，73%)。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ(ppm)：8.85(s,1H),7.50-7.56(m,3H),7.37(s,1H),7.25-7.28(m,2H),3.65(s,3H),3.46-3.48(m,1H),3.02-3.14(m,3H),2.92-2.97(m,2H),2.78(m,1H),1.23(s,1H)；MS(ESI)m/z=488.1(M+1+)。
步驟F. 在環境溫度下，將(R)-2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(80 mg，0.126 mmol)於TFA(1 ML)及DCM(4 mL)之混合物攪拌3小時。藉由添加氨將混合 物之pH值調至約8~9且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之169之甲酸鹽(40 mg，73%)。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ(ppm)：8.84(s,1H),7.50-7.55(m,3H),7.37(s,1H),7.25-7.28(m,2H),3.47(s,3H),3.36-3.48(m,1H),3.07-3.16(m,3H),2.94-2.96(m,2H),2.78-2.80(m,1H),1.24(s,1H)；MS(ESI)m/z=488.1(M+1+)。
實例170 (S)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(3-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺170
遵循實例101或實例102之程序，藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物170。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.84(s,1H),7.71(s,1H),7.56-7.52(m,1H),7.51(s,2H),7.27(m,2H),6.39(tt,J=55.4,4.1 Hz,1H),4.63(d,J=3.9 Hz,1H),4.60-4.50(m,1H),4.42-4.31(m,1H),3.70(d,J=3.8 Hz,1H),3.18(ddd,J=17.8,12.9,4.7 Hz,2H),3.11-3.02(m,2H),1.91-1.82(m,1H),1.77(dd,J=17.4,10.6 Hz,1H),1.67(m,2H),1.60-1.47(m,2H)。ESIMS m/z=499.1(M+1)。
實例171 (R)-5-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(3-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺171
遵循實例101或實例102之程序，藉由SFC對掌性分離外消旋混合物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物171。 1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.84(s,1H),7.72(s,1H),7.56-7.52(m,1H),7.51(s,2H),7.27(m,2H),6.39(tt,J=55.4,4.1 Hz,1H),4.63(d,J=3.9 Hz,1H),4.52(m,1H),4.43-4.32(m,1H),3.75-3.66(m,1H),3.18(ddd,J=17.8,12.9,4.7 Hz,2H),3.11-3.02(m,2H),1.91-1.82(m,1H),1.77(dd,J=17.4,10.6 Hz,1H),1.67(m,2H),1.45(m,2H)。ESIMS m/z=499.1(M+1)。
實例172 5-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺172
遵循實例149之程序，且以4-(4-硝基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(64 mg，0.16 mmol)為起始物，獲得呈淺橙色固體狀之化合物172(13 mg，16%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.45(s,1H),7.72(s,1H),7.60-7.47(m,3H),7.29(t,J=8.7 Hz,2H),6.53-6.21(m,1H),4.45(td,J=14.5,4.0 Hz,2H),3.56(t,J=13.6 Hz,2H),3.31-3.14(m,3H),2.89(s,3H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 520(M+1)。
實例173 5-胺基-N-(5-(6-羥基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺173
遵循實例149之程序，以4-(4-硝基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-6-羥基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(18 mg，0.46 mmol)為起始物，得到呈無色固體狀之173(78 mg，34%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 11.42(s,1H),8.01(s,1H),7.60(s,2H),7.59-7.48(m,1H),7.30(t,J=8.7 Hz,2H),6.37(tt,J=55.4,4.2 Hz,1H),4.72(s,1H),4.55-4.30(m,2H),3.65-3.50(m,1H),3.10-2.93(m,4H),2.73-2.63(m,2H),2.45(dd,J=12.7,8.8 Hz,1H)。未觀察到烷基NH及OH。LCMS(ES+)m/z 500(M+1)。
實例174 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺174
在室溫下，將PyBOP(328 mg，0.63 mmol)及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(176 mg，0.50 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液攪拌30分鐘。添加中間物33，即4-(4-胺基-1-(4-甲氧基苯甲基)-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸(S)-第三丁酯(181 mg，0.45 mmol)及DIPEA(0.13 mL，0.72 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌65小時。混合物用DCM(40 mL)稀釋且用水(15 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色固體狀之(S)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(4-甲氧基苯甲基)-1H-吡唑-5-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg)。將此固體再溶解於DCM(10 mL)中且添加TFA(2 mL)，之後在65℃下加熱2.5小時。減壓濃縮混合物，之後 再溶解於含7 N氨之MeOH(20 mL)中且在防爆屏蔽後在密封壓力容器中於55℃下加熱16小時。減壓濃縮混合物，將其再溶解於MeOH中，並使其通過SCX管柱，用DCM及MeOH洗滌且用3-10%含7 N氨之MeOH/DCM溶離，得到呈灰白色固體狀之174(60 mg，32%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.03(s,1H),7.51-7.41(m,1H),7.16(t,J=8.9 Hz,2H),3.20-3.14(m,1H),3.08-2.98(m,5H),2.64(dd,J=12.7,9.4 Hz,1H),0.93(d,J=6.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 420(M+1)。
實例175 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺175
遵循實例174之程序，4-(4-胺基-1-(4-甲氧基苯甲基)-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸，得到呈白色固體狀之175(29 mg，15%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.03(s,1H),7.50-7.44(m,1H),7.16(t,J=8.9 Hz,2H),3.20-3.14(m,1H),3.09-2.99(m,5H),2.64(dd,J=12.6,9.3 Hz,1H),0.93(d,J=6.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 420(M+1)。
實例176 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺176
遵循實例110之程序，以(S)-5-(2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈淡 紫色固體狀之176(53 mg，31%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.58(s,1H),7.88(s,1H),7.37-7.27(m,1H),7.01(t,J=8.8 Hz,2H),6.16(s,2H),3.76(s,3H),3.32(t,J=11.3 Hz,1H),3.22(t,J=9.3 Hz,1H),2.96(t,J=12.9 Hz,2H),2.79(d,J=11.0 Hz,1H),2.42-2.22(m,4H),1.96(t,J=10.2 Hz,1H),1.41-1.33(m,1H),1.29-1.15(m,1H),0.80(t,J=7.5 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)。
實例176 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺176
遵循實例110之程序，(R)-5-(2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸，得到呈白色固體狀之176(47 mg，28%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.58(s,1H),7.87(s,1H),7.37-7.25(m,1H),7.01(t,J=8.8 Hz,2H),6.17(s,2H),3.76(s,3H),3.33(t,J=11.3 Hz,1H),3.22(t,J=9.2 Hz,1H),2.97(t,J=12.7 Hz,2H),2.79(d,J=11.0 Hz,1H),2.41-2.22(m,4H),1.96(t,J=10.2 Hz,1H),1.41-1.33(m,1H),1.28-1.13(m,1H),0.80(t,J=7.5 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)。
實例178 5-胺基-2-(2-氟-5-甲基苯基)-N-(5-(4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺178
遵循實例105之程序，以2-溴-4-(5-(4-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺 基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈灰白色固體狀之178(60 mg，25%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.06(d,J=7.3 Hz,1H),7.59(s,1H),7.24-7.19(m,1H),7.11(dd,J=11.4,8.4 Hz,1H),3.75(s,3H),3.51-3.48(m,1H),3.26-3.17(m,1H),3.09-3.01(m,1H),2.41(s,3H),2.16-2.04(m,1H),1.96-1.83(m,4H),1.78-1.68(m,1H),1.26(s,3H)(1個質子與溶劑峰重疊)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)。
實例179 5-胺基-N-(5-(6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺179
遵循實例149之程序，以4-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(366 mg，0.93 mmol)為起始物，得到呈淺黃色固體狀之179(40 mg，10%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 10.26(s,1H),7.88(s,1H),7.66-7.52(m,3H),7.34(t,J=8.9 Hz,2H),6.42(t,J=55.3 Hz,1H),4.71(d,J=47.8 Hz,1H),3.61-3.41(m,2H),3.42-3.04(m,4H),3.05(t,J=16.5 Hz,1H),2.83-2.57(m,3H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 502(M+1)。
實例180 (R)-3-胺基-N-(5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺180
遵循實例101或實例102之程序，製備(R)-3-胺基-6-溴-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚 烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)吡啶甲醯胺。在微波反應管中，將(R)-3-胺基-6-溴-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)吡啶甲醯胺(284 mg，0.51 mmol)、(2-氟苯基)酸(215 mg，1.54 mmol)及Pd(dppf)2Cl2(37 mg，0.051 mmol)溶解於乙腈(4 mL)中。添加1.0M乙酸鉀(0.77 mL，0.77 mmol)及1.0 M碳酸鈉(0.77 mL，0.77 mmol)。在微波下於120℃下照射混合物30分鐘。將其冷卻且經由矽藻土過濾，且用甲醇洗滌。濃縮濾液且藉由用含0至10%甲醇之二氯甲烷溶離之急驟層析法純化，得到(R)-3-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺(98 mg，33%)。
在50℃下，將(R)-3-胺基-N-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺(98 mg，0.17 mmol)與碳酸鉀(144 mg，1.03 mmol)一起於甲醇(5 mL)中攪拌隔夜。過濾混合物且濾液在逆相HPLC上純化，得到180。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.81(s,1H),8.00(td,J=8.3,1.8 Hz,1H),7.86(s,1H),7.74(dd,J=8.7,2.2 Hz,1H),7.43(dt,J=7.2,3.8 Hz,1H),7.38-7.20(m,4H),7.08(s,2H),6.38(tt,J=55.3,4.1 Hz,1H),4.43(td,J=14.5,4.1 Hz,2H),3.55(s,1H),3.21-3.07(m,4H),2.92(dd,J=19.4,10.4 Hz,1H),1.89-1.69(m,3H),1.69-1.37(m,3H)。MS(ESI)m/z：474.2[M+H+]。
實例181 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺181
遵循本文中所述之程序，製備化合物181。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.78(s,1H),7.59(s,1H),7.51(d,J=12.3 Hz,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),4.55(d,J=4.1 Hz,1H),3.68(m,1H),3.66(s,3H),3.20-3.10(m,2H),3.05(dd,J=13.6,7.4 Hz,2H),,2.07-1.55(m,6H)。ESIMS m/z=449.1(M+1)。
實例182 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺182
遵循本文中所述之程序，製備化合物182。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.78(s,1H),7.59(s,1H),7.49(m,3H),7.28(d,J=8.8 Hz,2H),4.55(d,J=4.0 Hz,1H),3.68(m,1H)3.66(s,3H),3.23-3.11(m,2H),3.05(dd,J=13.6,7.4 Hz,2H),1.95-1.82(m,1H),1.81-1.61(m,3H),1.61-1.47(m,2H)。ESIMS m/z=449.1(M+1)。
實例183 5-胺基-N-(5-(3,3-二氟-5-(甲基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺183
遵循實例101之程序，以6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基(甲基)胺基甲酸第三丁酯為起始物，在矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM，1%含7 N氨之MeOH)之後，得到呈白色固體狀之183(122 mg，48%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.85(s, 1H),7.59-7.49(m,4H),7.33-7.23(m,2H),3.80-3.57(m,4H),3.48-3.24(m,2H),3.14-3.03(m,1H),2.90-2.80(m,1H),2.50-2.04(m,5H),1.95(d,J=13.9 Hz,1H),1.77-1.65(m,1H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 498(M+1)。
實例184 5-胺基-N-(5-((3R,5S)-3-胺基-5-氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺184
在環境溫度下，將(3R,5S)-1-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟哌啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.31 mmol)於HCl/MeOH(10 mL)之混合物攪拌20小時且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用MeOH(10 mL)稀釋，用28%氨溶液中和且濃縮，得到粗產物。粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈灰白色固體狀之184(138 mg，99%)。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ(ppm)：7.60(s,1H),7.50-7.45(m,1H),7.14-7.11(m,2H),5.36-5.23(m,1H),3.84-3.74(m,4H),3.63-3.49(m,2H),2.72-2.62(m,2H),2.54-5.41(m,1H),2.16-2.05(m,1H)；MS(ESI)m/z：452[M+H+]。
實例185 (R)-5-胺基-N-(5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺185
遵循實例107之程序，以2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁 酯(148 mg，0.21 mmol)為起始物，得到呈橙色固體狀之185(69 mg，65%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.0(br s,1H),7.79(s,1H),7.60-7.48(m,3H),7.33-7.25(m,2H),4.84(q,J=9.1 Hz,2H),3.15-3.10(m,4H),3.04-2.97(m,1H),1.88-1.73(m,3H),1.65-1.45(m,3H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 516(M+1)。
實例186 N-(5-(1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺186
遵循實例145之程序，以4-(4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(197 mg，0.5 mmol)為起始物，在含5% MeOH之Et2O中濕磨後，得到呈雙鹽酸鹽形式且呈橙色固體狀之186(48 mg，19%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.22(br s,2H),8.91(s,1H),7.60(s,1H),7.60-7.52(m,3H),7.34-7.24(m,2H),5.02(q,J=9.1 Hz,2H),3.43-3.12(m,8H),2.02-1.95(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 502(M+1)。未觀察到烷基NH。
實例187 5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺187
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺為起始物，得到呈米色固體狀之187(119 mg，49%，經歷兩步 驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.83(s,1H),7.60-7.47(m,4H),7.28(t,J=8.8 Hz,2H),3.64(s,3H),3.50-3.05(m,8H),2.81(t,J=8.7 Hz,1H),2.00-1.84(m,2H),1.78-1.67(m,1H),1.65-1.56(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)。
實例188 5-胺基-N-(5-(3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺188
遵循本文中所述之程序，製備化合物188。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.74(s,1H),7.56(s,1H),7.52-7.46(m,2H),7.31-7.23(m,2H),3.67(s,3H),3.52(t,J=13.2 Hz,2H),3.16(t,J=6.0 Hz,2H),2.23-2.09(m,2H),1.82-1.68(m,4H)。ESIMS m/z=469.1(M+1)
實例189 5-胺基-N-(5-((3S,5S)-3-胺基-5-氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺189
在環境溫度下，將(3S,5S)-1-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟哌啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(208 mg，0.32 mmol)於HCl/MeOH(10 mL)中之混合物攪拌20小時且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用MeOH(10 mL)稀釋，用28%氨溶液中和且濃縮，得到粗產物。粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈固體狀之189(130 mg，90%)。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ(ppm)：8.82(s,1H),7.56-7.51(m,3H),7.41(s,1H),7.30-7.26(m,2H),4.80-4.65(m,1H),3.64(s,3H),3.06-2.98(m,2H),2.89-2.84(m,1H),2.70-2.66(m, 1H),2.23-2.18(m,1H),1.72(br s,3H),1.41-1.32(m,1H)；MS(ESI)m/z：452[M+H+]。
實例190 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-羥基-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺190
向中間物44，即6-羥基-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(70 mg，0.20 mmol)於MeOH(5 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(10 mg)且混合物在H2氛圍(60 psi)下攪拌16小時。混合物經由矽藻土過濾且減壓移除溶劑，得到呈油狀之4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-羥基-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯。向此胺於DCM(5 mL)中之溶液中添加DIPEA(0.1 mL，9.6 mmol)、PyBOP(0.16 g，0.3 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸(78 mg，0.22 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋且用水(10 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-60% EtOAc/異己烷)純化，得到呈固體狀之4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-羥基-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(122 mg)。向含此固體(122 mg，0.18 mmol)之MeOH(1 mL)中添加HCl之溶液(4 M之1,4-二噁烷溶液，3.2 mL，12.9 mmol)且所得溶液在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑且將粗殘餘物溶解於MeOH中，並裝載至SCX管柱上。該管柱用 MeOH洗滌且用含7 N氨之MeOH溶離。藉由製備型HPLC純化，得到呈灰白色固體狀之190(40 mg，44%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.19(s,1H),8.24(s,1H),7.59-7.48(m,3H),7.33-7.23(m,2H),3.69(s,3H),3.26-3.02(m,4H),2.98-2.73(m,4H),1.01(s,3H)。未觀察到烷基NH及OH。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)。
實例191 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-氟-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺191
遵循實例101之程序，以6-氟-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯為起始物，在矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM，1%含7 N氨之MeOH)後，得到呈米色固體狀之191(51 mg，39%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.37(s,1H),7.62-7.48(m,4H),7.34-7.24(m,2H),3.68(s,3H),3.16(t,J=6.4 Hz,4H),3.03-2.79(m,4H),1.21(d,J=21.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。
實例192 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-甲氧基-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺192
在氮氣下，向中間物44，即6-羥基-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(70 mg，0.20 mmol)於DMF(1 mL)中之冷卻(冰-水浴)溶液中添加氫化鈉(60%於礦物油中，9.5 mg，0.24 mmol)且攪拌混 合物10分鐘。添加碘甲烷(0.04 mL，0.6 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。再添加氫化鈉(60%於礦物油中，9.5 mg，0.24 mmol)且攪拌混合物30分鐘，之後再添加碘甲烷(0.04 mL，0.6 mmol)。5小時後添加，水(30 mL)且混合物用EtOAc(2×5 mL)萃取。合併之有機層經Na2SO4乾燥且減壓移除溶劑，得到呈油狀之6-甲氧基-6-甲基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯。使此油狀物於MeOH中之溶液(4 mL)通過H-Cube®(全H2，60℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈油狀之4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯。向此胺於DCM中之溶(10 mL)中添加DIPEA(0.1 mL，9.6 mmol)、PyBOP(160 mg，0.30 mmol)及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(78 mg，0.22 mmol)，且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(30 mL)稀釋且用水(20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(75% EtOAc/異己烷)純化，得到呈米色固體狀之4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(123 mg)。在室溫下，將此固體(120 mg，0.30 mmol)與HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，2.3 mL，9.1 mmol)一起於MeOH(1 mL)中攪拌16小時。減壓移除溶劑且將粗殘餘物再溶解於MeOH中，並裝載至SCX管柱上。該管柱用MeOH 洗滌且用含7 N氨之MeOH溶離，且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM,1%含7 N氨之MeOH)純化。再藉由製備型HPLC純化，得到呈灰白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之192(19 mg，20%，經歷四個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.38(s,1H),8.21(s,1H),7.66(s,1H),7.60-7.48(m,3H),7.33-7.23(m,2H),3.67(t,J=4.9 Hz,3H),3.29-2.69(m,11H),0.97(s,3H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)。
實例193 5-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺193
遵循實例101之程序，以6,6-二氟-4-(4-硝基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯為起始物，在矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM，1%含7 N氨之MeOH)及製備型HPLC之後，得到呈灰白色固體狀之193(86 mg，25%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 11.99(s,1H),8.53(s,1H),7.85(s,1H),7.59-7.47(m,3H),7.32-7.24(m,2H),3.70(t,J=13.9 Hz,2H),3.22-3.10(m,4H),2.96-2.91(m,2H),2.80-2.73(s,1H)。LCMS(ES+)m/z 456(M+1)。
實例194 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-甲氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺194
使中間物47，即6-甲氧基-4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(114 mg，0.32 mmol)於MeOH(15 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，70℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈粉色固體狀之4-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(100 mg)。向此固體於DCM中之溶液(5 mL)中添加DIPEA(0.84 mL，48 mmol)、PyBOP(219 mg，0.42 mmol)及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(118 mg，0.33 mmol)，且混合物在室溫下攪拌65小時。混合物用DCM(50 mL)稀釋且用水(10 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到呈粉色固體狀之4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(160 mg)。將此固體(159 mg，0.24 mmol)溶解於HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，3 mL，12.0 mmol)及MeOH(3 mL)中且在防爆屏蔽後在密封壓力容器中於60℃下加熱16小時。減壓移除溶劑且將粗殘餘物再溶解於MeOH中，並裝載至SCX管柱上。該管柱用MeOH洗滌且用0-10%含7 N氨之MeOH/DCM溶離，得到呈淺褐色固體狀之194(53 mg，36%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 11.35(s,1H),8.13(s,1H),7.39-7.29(m,1H),7.04(t,J=8.6 Hz,2H),6.33(s,2H),3.74(s,3H),3.41-3.28(m,4H),3.36-3.00(m,6H),2.88-2.77(m,1H),2.69(dd,J=12.7,7.6 Hz,1H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)。
實例195 5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺195
遵循本文中所述之程序，中間物49，即N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸，得到呈褐色固體狀之195(368 mg，69%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.49(s,1H),8.13(td,J=7.7,1.8 Hz,1H),7.79(s,1H),7.39-7.31(m,1H),7.33-7.17(m,1H),7.17(dd,J=11.4,8.3 Hz,1H),6.09(s,2H),4.50(dtd,J=48.0,8.7,3.8 Hz,1H),3.73(s,3H),3.36-3.19(m,5H),2.34-2.23(m,1H),2.14-2.05(m,1H),2.01-1.93(m,1H),1.78-1.67(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 448(M+1)。
實例196 5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺196
在室溫下，將PyBOP(1.82 g，3.5 mmol)及2-溴-5-(第三丁氧基羰基-胺基)噻唑-4-甲酸(889 mg，2.75 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液攪拌30分鐘。添加N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(808 mg，2.50 mmol)及DIPEA(0.74 mL，4.25 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(50 mL)稀釋且用水(10 mL)洗滌。分離有機 層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到呈淺褐色固體狀之2-溴-4-(5-(4-氟-5-(第三丁氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(1.57 g)。藉由小心地使氮氣鼓泡通過此固體(786 mg，1.25 mmol)、Na2CO3(265 mg，2.50 mmol)及2-氟-5-甲基苯酸(250 mg，1.63 mmol)於DME(12 mL)及水(4 mL)中之混合物，保持30分鐘，來使混合物脫氣。隨後添加[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(102 mg，0.125 mmol)且再使混合物脫氣10分鐘，之後在微波中於100℃下加熱4小時。添加水(10 mL)且混合物用EtOAc(2×50 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到呈褐色固體狀之4-(5-(4-氟-5-(第三丁氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(600 mg)。將此固體(591 mg，0.9 mmol)溶解於HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，10 mL，40.0 mmol)及MeOH(10 mL)中且在防爆屏蔽後在密封壓力容器中於60℃下加熱16小時。減壓移除溶劑且將殘餘物再溶解於MeOH中，並裝載至SCX管柱上。該管柱用MeOH洗滌且用0-10%含7 N氨之MeOH/DCM溶離，得到呈淺褐色固體狀之196(235 mg，41%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.44(s,1H),7.87(dd,J=7.2,2.2 Hz,1H),7.74(s,1H),7.18-7.12(m,1H),7.05(dd,J=11.0,8.4 Hz,1H), 6.08(s,2H),4.49(dtd,J=48.0,8.5,3.7 Hz,1H),3.74(s,3H),3.38-3.19(m,5H),2.40(s,3H),2.31-2.20(m,1H),2.15-2.09(m,1H),2.01-1.94(m,1H),1.74-1.68(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)。
實例197 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺197
將4-(5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(112 mg，0.204 mmol)及三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙酯(95 mg，0.409 mmol)溶解於二氯甲烷/DMF(1.5 mL/1.5 mL)中。添加N,N-二異丙基乙胺(132 mg，1.02 mmol)且在室溫下攪拌混合物隔夜。濃縮反應混合物以移除DMF，將其再溶解於乙酸乙酯中且用鹽水洗滌。水層用乙酸乙酯萃取3次。濃縮合併之有機層且藉由用溶離含0至100%乙酸乙酯之庚烷溶離之急驟層析法純化，得到2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(4-(2,2,2-三氟乙基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(R)-第三丁酯(96 mg，75%)，藉由4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，且在逆相HPLC上純化，得到197。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.65(s,1H),7.59-7.43(m,4H),7.25(t,J=8.7 Hz,2H),3.64(s,3H),3.24-3.01(m,6H),2.81(s,1H),2.14(d,J=6.1 Hz,1H),1.96-1.74(m,3H),1.65-1.48(m,3H)。MS(ESI)m/z：530.2[M+H+]。
實例198 3-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺198
遵循實例180之程序，製備化合物198。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.81(s,1H),8.03(dd,J=11.2,4.9 Hz,1H),7.72(dd,J=8.7,2.3 Hz,1H),7.64(s,1H),7.42(ddd,J=7.4,6.1,1.8 Hz,1H),7.36-7.24(m,3H),7.07(s,2H),3.70(s,3H),3.59(t,J=13.8 Hz,2H),3.17(dt,J=18.1,9.7 Hz,4H),2.89(s,2H),2.78(s,1H)。MS(ESI)m/z：446.2[M+H+]。
實例199 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺199
遵循本文中所述之程序，製備化合物199。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.72(s,1H),7.55(s,1H),7.55-7.50(m,1H),7.48(s,2H),7.28(d,J=8.8 Hz,2H),4.85-4.64(m,1H),3.66(s,3H),3.50-3.33(m,2H),3.18-3.05(m,2H),1.96(ddd,J=23.4,9.2,4.8 Hz,2H),1.74(ddt,J=20.0,14.0,7.3 Hz,3H),1.60-1.46(m,1H)。ESIMS m/z=451.1(M+1)
實例200 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺200
遵循本文中所述之程序，製備化合物200。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.72(s,1H),7.55(s,1H),7.55-7.50(m,1H),7.48(s,2H),7.30-7.23(m,2H),4.91-4.60(m,1H),3.66(s,3H),3.50-3.33(m,2H),3.17-3.08(m,2H),2.01-1.89(m,2H),1.89-1.72(m,2H),1.67(dd,J=15.2,9.1 Hz,1H),1.60-1.47(m,1H)。ESIMS m/z=451.1(M+1)
實例201 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-羥基-3-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺201
遵循本文中所述之程序，製備化合物201。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),7.60(s,1H),7.56-7.50(m,1H),7.48(s,2H),7.26(m,2H),4.19(s,1H),3.66(s,3H),3.09(t,J=6.1 Hz,2H),3.03(s,2H),1.85-1.57(m,5H),1.50(dd,J=14.0,8.1 Hz,1H),1.05(s,3H)。ESIMS m/z=463.2(M+1)
實例202 5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺202
遵循本文中所述之程序，製備出呈灰白色固體狀之化合物202(212 mg，36%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.41(s,1H),7.84(ddd,J=9.1,5.8,3.2 Hz,1H),7.78(s,1H),7.13(td,J=9.7,4.4 Hz,1H),7.07-7.00(m,1H),6.15(s,2H),4.50(dtd,J=47.9,8.7,3.8 Hz,1H),3.74(s,3H),3.37-3.21(m,5H),2.32-2.21(m,1H),2.15-1.96(m,2H),1.76-1.70(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。
實例203 5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺203
在室溫下，將PyBOP(692 mg，1.33 mmol)及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸 (372 mg，1.05 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液攪拌30分鐘。添加中間物51，即N-(1-(4-胺基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(354 mg，0.95 mmol)及DIPEA(0.28 mL，1.62 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌16小時。混合物用DCM(50 mL)稀釋且用水(20 mL)洗滌。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到呈灰白色固體狀之4-(1-(2,2-二氟乙基)-5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(600 mg，0.84 mmol)，將其溶解於HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，10 mL，40.0 mmol)及MeOH(10 mL)中且在防爆屏蔽後在密封壓力容器中於60℃下加熱16小時。減壓移除溶劑且將殘餘物再溶解於MeOH中，並裝載至SCX管柱上。該管柱用MeOH洗滌且用0-10%含7 N氨之MeOH/DCM溶離，得到呈灰白色固體狀之203(197 mg，40%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.75(s,1H),8.00(s,1H),7.37-7.29(m,1H),7.09-6.99(m,2H),6.31-6.01(m,3H),4.56-4.28(m,3H),3.39-3.13(m,5H),2.32-2.17(m,1H),2.14-1.94(m,2H),1.77-1.64(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 516(M+1)。
實例204 (R)-5-胺基-N-(5-(4-(2,2-二氟乙基胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺204
遵循實例197之程序，製備化合物204。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.66(s,1H),7.61-7.40(m,4H),7.25(dd,J=14.5,5.8 Hz,2H),5.89(tt,J=56.6,4.3 Hz,1H),3.64(s,3H),3.22-3.01(m,4H),2.91-2.73(m,3H),1.97-1.75(m,3H),1.64-1.46(m,3H)。MS(ESI)m/z：512.2[M+H+]。
實例205 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(5-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺205
遵循本文中所述之程序，製備外消旋化合物205。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 12.03(s,1H),7.91(s,1H),7.63-7.46(m,3H),7.35-7.21(m,2H),3.60(s,3H),3.22-2.99(m,5H),2.85-2.64(m,3H),1.52-1.35(m,1H),1.31-1.11(m,1H),0.89(d,J=6.3 Hz,3H)。MS(ESI)m/z：448.2[M+H+]。
實例206 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-氟-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺206
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物206。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.37(s,1H),7.62(s,1H),7.56-7.52(m,1H),7.51(s,2H),7.26(dd,J=14.5,5.8 Hz,2H),3.66(s,3H),3.34(s,1H),3.12(dd,J=13.6,3.1 Hz,3H),2.99-2.87(m,2H),2.87-2.73(m,2H),1.19(d,J=21.2 Hz,4H)。ESIMS m/z=466.1(M+1)
實例207 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-羥基-6- 甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺207
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物207。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.20(s,1H),7.60(s,1H),7.54(dd,J=8.3,6.3 Hz,1H),7.49(s,2H),7.27(m,2H),4.30(s,1H),3.67(s,3H),3.08(m,5H),2.89(dt,J=11.7,5.7 Hz,1H),2.84-2.76(m,1H),2.74(s,2H),0.99(s,3H)。ESIMS m/z=464.2(M+1)
實例208 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-羥基-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺208
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物208。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.20(s,1H),7.60(s,1H),7.53(m,1H)7.50(s,2H),7.27(m,2H),4.30(s,1H),3.67(s,3H),3.16-3.00(m,5H),2.89(dt,J=11.8,5.8 Hz,1H),2.83-2.77(m,1H),2.74(s,2H),0.99(s,3H)。ESIMS m/z=464.2(M+1)
實例209 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(6-氟-6-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺209
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物209。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.37(s,1H),7.62(s,1H),7.56-7.52(m,1H),7.52(s,2H),7.26(dd,J=14.5,5.8 Hz,2H),3.66(s,3H),3.34(s,1H), 3.11(dd,J=13.6,3.1 Hz,3H),2.98-2.87(m,2H),2.87-2.73(m,2H),1.18(d,J=21.2 Hz,4H)。ESIMS m/z=466.1(M+1)
實例210 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺210
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物210。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.91(s,1H),8.22(s,1H),7.68(s,1H),7.53(m,1H),7.50(s,2H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),6.36(m,1H),4.42(dd,J=14.3,4.0 Hz,2H),3.25-3.07(m,6H),2.21-2.04(m,1H),1.94(ddd,J=41.1,22.7,8.9 Hz,2H),1.75-1.53(m,1H)。ESIMS m/z=516.1(M+1)
實例211 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺211
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物211。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.90(s,1H),8.22(s,1H),7.68(s,1H),7.53(m,1H),7.51(s,2H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),6.36(m,1H),4.42(dd,J=14.3,4.0 Hz,2H),3.25-3.09(m,6H),2.21-2.04(m,1H),1.94(ddd,J=41.1,22.7,8.9 Hz,2H),1.75-1.55(m,1H)。ESIMS m/z=516.1(M+1)
實例212 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑- 4-甲醯胺212
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物212。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.95(s,1H),8.07(d,J=7.7 Hz,1H),7.46(s,1H),7.39(s,2H),7.23(d,J=9.3 Hz,2H),4.48(dtd,J=48.1,8.3,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.15(ddd,J=13.5,8.5,3.3 Hz,5H),2.36(s,3H),2.22-2.06(m,1H),2.06-1.92(m,1H),1.91-1.78(m,1H),1.64(m,1H)。ESIMS m/z=462.2(M+1)
實例213 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺213
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物213。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.95(s,1H),8.07(d,J=7.7 Hz,1H),7.45(s,1H),7.39(s,2H),7.23(d,J=9.3 Hz,2H),4.51(dtd,J=48.1,8.3,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.15(ddd,J=13.5,8.5,3.3 Hz,5H),2.36(s,3H),2.22-2.06(m,1H),2.06-1.92(m,1H),1.91-1.78(m,1H),1.64(m,1H)。ESIMS m/z=462.2(M+1)
實例214 3-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡嗪-2-甲醯胺214
遵循實例180中之程序，製備化合物214。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.93(s,1H),8.67(s,1H),8.12(t,J=7.9 Hz,1H),7.73(s,2H),7.58(s,1H),7.52-7.40(m,1H),7.35(dd,J=13.3,5.6 Hz,2H),3.70(s,3H),3.58(t,J=13.8 Hz, 3H),2.89(s,2H),2.78(s,1H)。MS(ESI)m/z：447.2[M+H+]。
實例215 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(5-(二甲基胺基)-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺215
遵循實例101之程序，以6,6-二氟-N,N-二甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺為起始物，在藉由製備型HPLC純化後，得到呈白色固體狀之215(119 mg，12%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.72(s,1H),7.58-7.48(m,4H),7.31-7.21(m,2H),3.75-3.50(m,3H),3.53-3.22(m,2H),3.16-3.06(m,1H),2.89-2.81(m,1H),2.37-2.19(m,2H),2.10-2.05(m,6H),1.89-1.74(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 512(M+1)。
實例216 5-胺基-N-(5-(5-胺基-3-甲氧基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺216
遵循實例101之程序，以6-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，在藉由製備型HPLC純化後，得到呈白色固體狀之216之單甲酸鹽(480 mg，39%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.92及8.79(2 br s,1H),8.43(s,1H),7.61-7.46(m,4H),7.36-7.25(m,2H),3.67及3.66(2 s,3H),3.54-2.99(m,9H),2.26-2.18(m,1H),2.05-1.91(m,1H),1.86-1.69(m,2H)。未見到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 478 (M+1)。
實例217 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-甲氧基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺217
向中間物54，即N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(150 mg，0.45 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加DIPEA(1.0 mL)、PyBOP(580 mg，1.12 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸(159 mg，0.45 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(100 mL)稀釋且用水(20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(70-80% EtOAc/異己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-甲氧基-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(260 mg，0.39 mmol)，在室溫下將其與HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，4.8 mL，19.3 mmol)一起於MeOH(5 mL)中攪拌3天。減壓移除溶劑且將所得固體溶解於MeOH/水(10 mL/10 mL)中且向其中添加K2CO3(267 mg，19.3 mmol)。反應混合物在65℃下加熱3小時。減壓移除MeOH且水性殘餘物用水(5 mL)稀釋且用含5% MeOH之DCM(2×75 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈米色固體狀之217(144 mg，67%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.62(s,1H),7.84(s,1H),7.38-7.28(m,1H),7.02(t,J=8.8 Hz,2H),6.15(s,2H),3.72(s,3H),3.37(s,3H),3.36-3.25(m,2H),3.22-3.08(m,3H),3.07-2.99(m,1H),2.17-2.10(m,1H),2.02-1.93(m,1H),1.88-1.65(m,2H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)。
實例218 5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺218
遵循實例145之程序，以中間物19，即6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈黃色固體狀之218(560 mg，60%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.54(s,1H),8.18(td,J=3.9,1.8 Hz,1H),7.74(s,1H),7.39-7.33(m,1H),7.33-7.17(m,1H),7.17(ddd,J=11.4,8.2,1.2 Hz,1H),6.09(s,2H),3.76(s,3H),3.73-3.61(m,1H),3.53-3.36(m,3H),3.26(td,J=11.6,4.9 Hz,1H),2.41-2.25(m,2H),2.02-1.91(m,1H),1.88-1.78(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)。
實例219 5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺219
遵循實例145之程序，以中間物19，即6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈黃色固體狀之219(665 mg，70%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.52(s,1H),7.95(d,J=7.3 Hz,1H),7.72(s,1H),7.14(s,1H),7.04(dd, J=11.1,8.5 Hz,1H),6.09(s,2H),3.86-3.51(m,4H),3.57-3.37(m,3H),3.33-3.23(m,1H),2.53-2.15(m,5H),2.02-1.90(m,1H),1.87-1.74(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 480(M+1)。
實例220 5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺220
遵循實例145之程序，以中間物19，即6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈黃色固體狀之220(570 mg，59%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.62(s,1H),7.95-7.88(m,1H),7.85(s,1H),7.13(td,J=9.7,4.4 Hz,1H),7.07-6.98(m,1H),6.15(s,2H),3.81-3.58(m,4H),3.56-3.36(m,3H),3.30-3.20(m,1H),2.51-2.39(m,1H),2.38-2.21(m,1H),2.05-1.94(m,1H),1.91-1.79(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 484(M+1)。
實例221 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺221
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物221。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.08(s,1H),8.15(s,1H),7.45(d,J=11.0 Hz,2H),7.43(s,2H),7.27(t,J=8.3 Hz,1H),4.45(dtd,J=48.2,8.4,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.15(ddd,J=25.1,17.1,8.5 Hz,5H), 2.20-2.03(m,1H),2.02-1.90(m,1H),1.88-1.77(m,1H),1.71-1.53(m,1H)。ESIMS m/z=466.1(M+1)
實例222 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺222
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物來製備化合物222。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.08(s,1H),8.15(s,1H),7.46(d,J=11.0 Hz,2H),7.43(s,2H),7.28(t,J=8.3 Hz,1H),4.45(dtd,J=48.2,8.4,3.6 Hz,1H),3.66(s,3H),3.15(ddd,J=25.1,17.1,8.5 Hz,5H),2.20-2.03(m,1H),2.02-1.90(m,1H),1.89-1.78(m,1H),1.71-1.53(m,1H)。ESIMS m/z=466.1(M+1)
實例223 5-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺223
遵循本文中所述之程序，製備化合物223。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.12(s,1H),8.54(d,J=4.7 Hz,1H),8.08(d,J=8.0 Hz,1H),7.92(td,J=7.8,1.5 Hz,1H),7.56(s,2H),7.47(s,1H),7.38(dd,J=7.0,5.3 Hz,1H),3.68(s,3H),3.59(t,J=13.9 Hz,2H),3.24-3.16(m,2H),2.97-2.86(m,2H)。MS(ESI)m/z：435.1[M+H+]。
實例224 5-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺224
遵循本文中所述之程序，製備化合物224。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.37(s,1H),8.44(d,J=4.6 Hz,1H),7.86(dd,J=11.1,8.5 Hz,1H),7.68(d,J=2.8 Hz,3H),7.48(dt,J=8.4,4.2 Hz,1H),3.68(s,3H),3.57(t,J=13.4 Hz,2H),3.27-3.18(m,3H),3.07-2.89(m,3H),2.07(s,2H)。MS(ESI)m/z：453.1[M+H+]。
實例225 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(5-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺225
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離205之外消旋混合物製備出呈單一對映異構體形式之化合物225。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 11.81(s,1H),8.20(s,1H),7.88(s,1H),7.62-7.46(m,3H),7.35-7.21(m,2H),3.60(s,3H),3.21-3.01(m,5H),2.90-2.69(m,3H),1.48(d,J=11.6 Hz,1H),1.35-1.17(m,1H),0.92(d,J=6.3 Hz,3H)。MS(ESI)m/z：448.1[M+H+]。
實例226 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(5-甲基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺226
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離205之外消旋混合物，製備出呈單一對映異構體形式之化合物226。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 11.83(s,1H),8.23(s,1H),7.88(s,1H),7.61-7.47(m,3H),7.33-7.23(m,2H),3.60(s,3H),3.26-2.98(m,6H),2.84-2.67(m,3H),1.48(d,J=11.9 Hz,1H),1.32-1.12(m,1H),0.92(d,J=6.3 Hz, 3H)。MS(ESI)m/z：448.1[M+H+]。
實例227 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-羥基-3-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺227
遵循本文中所述之程序，製備化合物227。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),7.61(s,1H),7.56-7.50(m,1H),7.48(s,2H),7.26(m,2H),4.19(s,1H),3.67(s,3H),3.09(t,J=6.1 Hz,2H),3.03(s,2H),1.85-1.58(m,5H),1.50(dd,J=14.0,8.1 Hz,1H),1.05(s,3H)。ESIMS m/z=463.2(M+1)
實例228 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-羥基-3-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺228
遵循本文中所述之程序，製備化合物228。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),7.61(s,1H),7.56-7.50(m,1H),7.48(s,2H),7.26(m,2H),4.19(s,1H),3.67(s,3H),3.09(t,J=6.1 Hz,2H),3.03(s,2H),1.85-1.57(m,5H),1.50(dd,J=14.0,8.1 Hz,1H),1.05(s,3H)。ESIMS m/z=463.2(M+1)
實例229 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺229
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物，製備出化合物呈單一對映異構體形式之229。 1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.93(s,1H),8.29(m,1H),7.48(s,1H),7.43(m,1H),7.41(s,2H),7.33(d,J=7.9 Hz,2H),4.48(dtd,J=47.9,8.5,3.5 Hz,1H),3.65(s,3H),3.23-3.10(m,5H),2.14(ddd,J=19.7,8.6,3.1 Hz,1H),1.98(ddd,J=18.3,9.4,4.9 Hz,1H),1.86(dd,J=18.4,13.0 Hz,1H),1.63(dtd,J=14.3,9.5,4.6 Hz,1H)。ESIMS m/z=448.2(M+1)
實例230 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺230
遵循本文中所述之程序，藉由在SFC上對掌性分離外消旋混合物，製備出化合物呈單一對映異構體形式之230。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.94(s,1H),8.29(m,1H),7.47(s,1H),7.43(m,1H),7.41(s,2H),7.34(d,J=7.9 Hz,2H),4.48(dtd,J=47.9,8.5,3.5 Hz,1H),3.65(s,3H),3.23-3.10(m,5H),2.14(ddd,J=19.7,8.6,3.1 Hz,1H),1.98(ddd,J=18.3,9.4,4.9 Hz,1H),1.86(dd,J=18.4,13.0 Hz,1H),1.65(dtd,J=14.3,9.5,4.6 Hz,1H)。ESIMS m/z=448.2(M+1)
實例231 3-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺231
遵循本文中所述之程序，製備外消旋化合物231。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.73(s,1H),8.01(dd,J=11.3,4.8 Hz,1H),7.73(dd,J=8.7,2.1 Hz,1H),7.67(s,1H), 7.43(ddd,J=7.2,6.2,1.7 Hz,1H),7.37-7.24(m,3H),7.06(s,2H),4.40(dtd,J=48.0,8.2,3.6 Hz,1H),3.67(s,3H),3.28-3.00(m,5H),2.21-2.04(m,1H),2.04-1.89(m,1H),1.83(dd,J=9.3,5.6 Hz,1H),1.76-1.54(m,3H)。MS(ESI)m/z：442.2[M+H+]。
實例232 3-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡嗪-2-甲醯胺232
遵循本文中所述之程序，製備外消旋化合物232。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.76(s,1H),8.68(d,J=2.4 Hz,1H),8.12(td,J=8.2,1.8 Hz,1H),7.73(s,2H),7.57(s,1H),7.46(dt,J=7.2,3.7 Hz,1H),7.41-7.27(m,2H),4.39(dtd,J=48.0,8.2,3.6 Hz,1H),3.66(s,3H),3.26-2.97(m,5H),2.19-1.87(m,2H),1.87-1.74(m,1H),1.69-1.51(m,3H)。MS(ESI)m/z：443.2[M+H+]。
實例233 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺233
步驟A. (±)-2-甲基-4-(4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
在微波烘箱中於130℃下將中間物39，即5-溴-4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑(550 mg，2.01 mmol)、(±)2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(403 mg，2.01 mmol)、DIPEA(2 mL)於EtOH(6 mL)中之溶液攪拌2小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物藉由使用PE：EtOAc(1：1)作為溶離溶劑之矽膠層析法純化，得到呈黃色固體狀之(±)-2-甲基-4-(4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(377 mg，48%)。MS(ESI)m/z：394[M+H+]。
步驟B. (±)-4-(4-胺基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向(±)2-甲基-4-(4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(370 mg，0.94 mmol)於MeOH(15 mL)及H2O(3 mL)中之溶液中添加鋅(362 mg，5.6 mmol)及NH4Cl(400 mg，7.5 mmol)。反應混合物在環境溫度下攪拌4小時，經由矽藻土過濾且減壓蒸發，得到呈黃色固體狀之(±)-4-(4-胺基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg，88%)。MS(ESI)m/z：364[M+H+]。
步驟C. (±)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-2- 甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向(±)-4-(4-胺基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg，0.83 mmol)、5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(294 mg，0.83 mmol)、HATU(410 mg，1.08 mmol)於DME(15 mL)中之溶液中添加TEA(2 mL)。混合物在30℃下攪拌20小時，傾入水(100 mL)中且用EtOAc(40 mL×3)萃取。合併之有機層用水(50 mL×2)及鹽水(30 mL×2)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之(±)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(190 mg，33%)。MS(ESI)m/z：702[M+H+]。
步驟D. 藉由製備型HPLC對掌性分離(±)-4-(4-(5-(第三丁氧基-羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(190 mg)，得到各約80 mg之(R)對映異構體及(S)對映異構體。
步驟E. 在環境溫度下，將(R)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(82 mg，0.12 mmol)於HCl/MeOH(10 mL)之混合物攪拌20小時。減壓濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物用MeOH(30 mL)稀釋，用28%氨溶液中和，濃縮且藉由製備型HPLC純化， 得到呈白色固體狀之233(32 mg，56%)。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ(ppm)：7.69(s,1H),7.51-7.45(m,1H),7.17-7.12(m,2H),4.84-4.78(m,2H),3.22.-3.17(m,1H),3.05-2.86(m,6H),1.08(d,J=6 Hz,3H)；MS(ESI)m/z：502[M+H+]。
實例234 5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺234
遵循實例145之程序，以中間物56，即1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(1.33 g，3.13 mmol)為起始物，得到呈淺黃色固體狀之234(300 mg，36%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.95(s,1H),7.67(s,1H),7.59-7.48(m,3H),7.29(t,J=8.7 Hz,2H),6.38(tt,J=55.2,4.2 Hz,1H),4.44(td,J=14.4,4.2 Hz,2H),3.75-3.58(m,1H),3.50-3.05(m,6H),2.29-2.06(m,2H),1.92-1.80(m,1H),1.77-1.63(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 534(M+1)。
實例235 5-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲醯胺235
遵循實例237之程序，製備化合物235。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.78(s,1H),8.61(s,1H),8.13-8.00(m,1H),7.67(s,1H),7.53-7.39(m,1H),7.35-7.23(m,2H),7.00(s,2H),4.51-4.29(m,1H),3.29-2.98(m,5H),2.23-2.04(m,1H),2.04-1.87(m,1H),1.87-1.72(m,1H),1.72- 1.51(m,1H)。MS(ESI)m/z：447.1[M+H+]。
實例236 5-胺基-N-(5-(6,6-二氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲醯胺236
遵循實例237中提供之程序，製備化合物236。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.95(s,1H),8.61(s,1H),8.08-7.94(m,2H),7.66(s,1H),7.55-7.40(m,1H),7.35-7.21(m,2H),7.00(s,2H),3.58-3.44(m,2H),3.23-3.10(m,4H),2.96-2.81(m,2H)。MS(ESI)m/z：447.1[M+H+]。
實例237 5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲醯胺237
將乙醇鈉(21質量%之乙醇溶液；8.69 mL，23.268 mmol)添加至冰浴冷卻之2-氟苯甲脒(2.71 g，15.512 mmol)於乙醇(100 mL)中之混合物中。使所得混合物升溫至室溫且在氮氣下於室溫下攪拌30分鐘。向反應混合物中添加(E)-2,3-二溴-4-側氧基-丁-2-烯酸(2.00 g，7.7561 mmol)於乙醇(20 ml)中之溶液。混合物在50℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，真空濃縮反應物。添加水及1 M NaOH(約50 ml)且水性混合物用EtOAc萃取。用1 N HCl(約30 ml)將水相酸化至pH 4，隨後用EtOAc萃取3次。合併之有機萃取液經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到5-溴-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲酸，770 mg。
將CuSO4(帶有5H2O，65 mg)添加至以上製備之5-溴-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲酸(770 mg，2.59 mmol)及28%氫氧化銨水溶液(12 mL)之混合物中。反應物在微波反應器中於 110℃下加熱30分鐘。將其冷卻至室溫且真空濃縮。殘餘物用1 N HCl(20 mL)稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機萃取液經硫酸鈉乾燥且過濾且濃縮，得到5-胺基-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲酸(320 mg，53%)。
將1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-胺(99 mg，0.29 mmol)、5-胺基-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲酸(87 mg，0.37 mmol)，PyBOP(304 mg，0.57 mmol)及二異丙基乙胺(222 mg，1.72 mmol)溶解於二氯甲烷(10 mL)中且在室溫下攪拌隔夜。濃縮反應混合物且藉由用含0至100%乙酸乙酯之庚烷溶離之急驟層析法純化，得到1-(4-(5-胺基-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(157 mg，97%)。
在室溫下，將1-(4-(5-胺基-2-(2-氟苯基)嘧啶-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(157 mg)與4 N HCl之二噁烷溶液(6 mL)一起攪拌1小時。將反應混合物濃縮至乾，用飽和碳酸氫鈉鹼化且用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機相經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗產物在逆相HPLC上純化，得到237。MS(ESI)m/z：461.1[M+H+]。
實例241 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺241
遵循實例101之程序，以對映異構純之1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-胺及來自實例25之5-(第三丁 氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物241。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.80(s,1H),7.62-7.47(m,1H),7.45(s,1H),7.32-7.14(m,2H),3.65(s,3H),3.23(dd,J=11.5,3.8 Hz,1H),3.15-2.91(m,3H),2.71-2.55(m,1H),1.95(dd,J=12.8,3.3 Hz,1H),1.79(d,J=13.2 Hz,1H),1.70-1.51(m,1H),1.39(ddd,J=24.5,12.2,4.1 Hz,1H)。MS(ESI)m/z：487.3[M+H+]。
實例242 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[1-甲基-5-(3-三氟甲基-哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基]-醯胺242
遵循實例101之程序，以對映異構純之1-甲基-5-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-胺及來自實例25之5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，獲得呈單一對映異構體形式之化合物242。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.80(s,1H),7.62-7.47(m,1H),7.45(s,1H),7.32-7.14(m,2H),3.65(s,3H),3.23(dd,J=11.5,3.8 Hz,1H),3.15-2.91(m,3H),2.71-2.55(m,1H),1.95(dd,J=12.8,3.3 Hz,1H),1.79(d,J=13.2 Hz,1H),1.70-1.51(m,1H),1.39(ddd,J=24.5,12.2,4.1 Hz,1H)。MS(ESI)m/z：487.3[M+H+]。
實例243 3-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡嗪-2-甲醯胺243
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物232，得到作為峰2之對掌性非對映異構體243。1H NMR(400 MHz, DMSO)δ 9.76(s,1H),8.68(d,J=2.5 Hz,1H),8.22(s,1H),8.13(td,J=8.2,1.9 Hz,1H),7.71(s,2H),7.55(s,1H),7.50-7.40(m,1H),7.40-7.24(m,2H),4.58-4.35(m,1H),3.67(s,3H),3.28-3.02(m,5H),2.23-2.05(m,1H),2.05-1.92(m,1H),1.92-1.77(m,1H),1.71-1.57(m,1H)。MS(ESI)m/z：443.1[M+H+]。
實例244 3-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡嗪-2-甲醯胺244
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物232，得到作為峰1之對掌性非對映異構體244。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.75(s,1H),8.68(d,J=2.5 Hz,1H),8.12(td,J=8.1,1.9 Hz,1H),7.72(s,2H),7.56(s,1H),7.52-7.40(m,1H),7.40-7.27(m,2H),4.53-4.28(m,2H),3.67(s,3H),3.23-2.97(m,5H),2.19-2.03(m,1H),2.03-1.90(m,1H),1.90-1.74(m,1H),1.67-1.52(m,1H)。MS(ESI)m/z：443.1[M+H+]。
實例245 3-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺245
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物231，得到作為峰2之對掌性非對映異構體245。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.72(s,1H),8.01(td,J=8.0,1.8 Hz,1H),7.73(dd,J=8.7,2.2 Hz,1H),7.67(s,1H),7.48-7.37(m,1H),7.37-7.21(m,3H),7.05(s,2H),4.39(dtd,J=48.0,8.2,3.7 Hz,1H),3.67(s,3H),3.24-2.98(m,5H),2.19-2.04(m, 1H),1.97(dtd,J=19.7,9.8,4.8 Hz,1H),1.89-1.77(m,1H),1.73-1.53(m,2H)。MS(ESI)m/z：442.1[M+H+]。
實例246 3-胺基-N-(5-(4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺246
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物231，得到作為峰1之對掌性非對映異構體246。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.72(s,1H),8.01(td,J=8.0,1.8 Hz,1H),7.73(dd,J=8.7,2.2 Hz,1H),7.67(s,1H),7.47-7.37(m,1H),7.38-7.22(m,3H),7.05(s,2H),4.39(dtd,J=48.0,8.2,3.7 Hz,1H),3.67(s,3H),3.25-2.97(m,5H),2.21-2.03(m,1H),2.03-1.88(m,1H),1.88-1.75(m,1H),1.75-1.52(m,2H)。MS(ESI)m/z：442.1[M+H+]。
實例247 (S)-3-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡嗪-2-甲醯胺247
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物293，得到對映異構體247作為峰2。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.78(s,1H),8.68(d,J=2.5 Hz,1H),8.15(dd,J=11.3,4.9 Hz,1H),7.73(s,2H),7.54(s,1H),7.51-7.41(m,1H),7.35(dd,J=16.1,7.7 Hz,2H),3.79-3.59(m,4H),3.53-3.37(m,2H),3.19-3.10(m,1H),2.37-2.15(m,2H),1.98-1.67(m,2H)。MS(ESI)m/z：461.1[M+H+]。
實例248 (R)-3-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡嗪-2-甲醯 胺248
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物293，得到作為峰1之對映異構體248。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.76(s,1H),8.68(d,J=2.5 Hz,1H),8.17-8.04(m,1H),7.73(s,2H),7.59(s,1H),7.54-7.41(m,1H),7.41-7.25(m,2H),3.77-3.55(m,4H),3.50-3.34(m,1H),3.21-3.04(m,2H),2.27-2.03(m,2H),1.92-1.64(m,3H)。MS(ESI)m/z：461.1[M+H+]。
實例249 3-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺249
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物292，得到作為峰2之對映異構體249。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.71(s,1H),8.07-7.96(m,1H),7.71(dd,J=8.7,2.3 Hz,1H),7.66(s,1H),7.48-7.38(m,1H),7.38-7.23(m,3H),7.06(s,2H),3.78-3.58(m,4H),3.50-3.33(m,1H),3.19-3.02(m,2H),2.24-1.97(m,2H),1.88-1.78(m,1H),1.78-1.63(m,1H),1.63-1.42(m,1H)。MS(ESI)m/z：460.1[M+H+]。
實例250 (R)-3-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺250
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物292，得到作為峰1之對映異構體250。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.71(s,1H),8.06-7.96(m,1H),7.71(dd,J=8.7,2.3 Hz,1H),7.66(s,1H),7.48-7.37(m,1H),7.37-7.25(m,3H),7.06(s, 2H),3.76-3.59(m,4H),3.51-3.33(m,1H),3.18-3.04(m,2H),2.25-2.01(m,2H),1.91-1.77(m,1H),1.77-1.64(m,1H),1.64-1.43(m,2H)。MS(ESI)m/z：460.1[M+H+]。
實例252 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺252
遵循實例145之程序，以6-甲氧基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較大之非對映異構體對)為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈淺黃色固體狀之呈單甲酸鹽形式之252(116 mg，53%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.83(br s,1H),8.43(s,1H),7.60-7.45(m,4H),7.35-7.20(m,2H),3.68(s,3H),3.30-3.15(m,5H),3.10-2.85(m,5H),2.15-1.65(m,4H),1.02(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例253 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺253
遵循實例145之程序，以6-羥基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較大之非對映異構體對)為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈淺黃色固體狀之呈單甲酸鹽形式之253(37 mg，19%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.70(br s,1H),8.44(s,1H),7.58-7.45(m,4H),7.35-7.20 (m,2H),3.70(s,3H),3.60-2.80(m,8H),2.05-1.60(m,4H),1.14(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例254 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺254
遵循實例145之程序，以6-甲氧基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較小之非對映異構體對)為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈淺黃色固體狀之呈單甲酸鹽形式之254(78 mg，34%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.84(s,1H),8.44(s,1H),7.63(s,1H),7.60-7.45(m,3H),7.35-7.20(m,2H),3.67(s,3H),3.60-3.15(m,5H),3.15-2.90(m,5H),2.15-1.55(m,4H),1.01(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例255 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺255
遵循實例145之程序，以6-羥基-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(極性較小之非對映異構體對)為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈淺黃色固體狀之呈單甲酸鹽形式之255(39 mg，18%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.88(s,1H),8.42(s,1H),7.60-7.45(m,4H),7.35-7.20(m,2H),3.68(s,3H),3.67-3.55(m,2H),3.30-2.80(m, 6H),2.05-1.60(m,4H),1.06(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例256 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3-氟-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺256
遵循實例145之程序，以6-氟-6-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺褐色固體狀之256(110 mg，27%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.64-8.56(m,1H),7.89及7.80(2s,1H),7.40-7.26(m,1H),7.06-6.99(m,2H),6.22(br s,2H),3.77及3.64(2s,3H),3.67-2.99(m,5H),2.45-2.05(m,1H),2.05-1.60(m,5H),1.45-1.25(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 480(M+1)
實例257 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(3-氟-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺257
遵循實例145之程序，以1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-(三氟甲基)哌啶為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈米色固體狀之257(222 mg，41%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 9.08及8.66(2s,1H),7.93及7.83(s,1H),7.33(ddd,J=8.6,5.9,2.7 Hz,1H),7.07-6.99(m,2H),6.22及6.16(2s,2H),4.96-4.73(m,1H),4.45及4.12(2s,1H),3.76及3.74(2s,3H),3.60-3.17(m,4H),2.44-1.90(m,4H)。未觀察到OH。LCMS(ES+)m/z 467(M+1)
實例258 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[1-甲基-5-(3-三氟甲基-哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基]-醯胺258
遵循實例101之程序，以1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-(三氟甲基)哌啶為起始物，在經由矽膠管柱層析法(20-100% EtOAc/異己烷)純化後，得到呈灰白色泡沫狀之258(415 mg，48%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.52(s,1H),7.77(s,1H),7.37-7.26(m,1H),7.07-6.97(m,2H),6.13(s,2H),3.73(s,3H),3.32(dd,J=11.5,3.8 Hz,1H),3.17-3.04(m,3H),2.54-2.40(m,1H),2.10-2.04(m,1H),1.94-1.84(m,1H),1.84-1.43(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 487(M+1)
實例261 (S)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺261
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體261。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),8.54(d,J=4.7 Hz,1H),8.12(d,J=8.0 Hz,1H),7.93(t,J=7.7 Hz,1H),7.53(d,J=14.5 Hz,3H),7.42-7.35(m,1H),3.68(s,3H),3.50-3.37(m,2H),3.20-3.09(m,2H),2.36-2.16(m,3H),1.90(d,J=18.9 Hz,1H),1.83-1.68(m,1H)。ESIMS m/z=449.1(M+1)
實例262 (R)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯 胺262
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體262。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),8.54(d,J=4.7 Hz,1H),8.12(d,J=8.0 Hz,1H),7.93(t,J=7.7 Hz,1H),7.53(d,J=14.5 Hz,3H),7.42-7.35(m,1H),3.68(s,3H),3.50-3.37(m,2H),3.20-3.09(m,2H),2.36-2.16(m,3H),1.90(d,J=18.9 Hz,1H),1.83-1.68(m,1H)。ESIMS m/z=449.1(M+1)
實例263 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺263
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體263。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.88(s,1H),8.53(d,J=4.7 Hz,1H),8.14(d,J=7.9 Hz,1H),7.89(d,J=1.4 Hz,1H),7.54(s,2H),7.49(s,1H),7.40-7.35(m,1H),4.49(dtd,J=48.0,8.5,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.22-3.11(m,5H),2.22-2.08(m,1H),2.08-1.95(m,1H),1.93-1.79(m,1H),1.63(dtd,J=14.3,9.5,4.5 Hz,1H)。ESIMS m/z=431.1(M+1)
實例264 (S)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺264
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體264。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.69(s,1H),8.43(d, J=4.5 Hz,1H),8.27(s,2H),7.88(dd,J=10.9,8.6 Hz,1H),7.67(s,2H),7.61(s,1H),7.48(dt,J=8.3,4.1 Hz,1H),3.68(s,3H),3.20-2.99(m,3H),2.32(t,J=19.9 Hz,3H),1.93(d,J=13.3 Hz,1H),1.82(dd,J=14.8,9.4 Hz,2H)。ESIMS m/z=467.1(M+1)
實例265 5-胺基-N-(5-((4R,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺265
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體265。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.16(s,1H),8.05(s,1H),7.51(s,1H),7.40(s,2H),7.23(d,J=9.0 Hz,2H),4.88(dd,J=47.4,7.4 Hz,1H),3.65(s,3H),3.09(m,3H),2.36(s,3H),2.20(ddd,J=10.8,7.3,3.4 Hz,1H),2.00-1.80(m,3H),1.78-1.67(m,1H)。ESIMS m/z=462.1(M+1)
實例266 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺266
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體266。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.21(s,1H),8.28(s,2H),8.12(ddd,J=9.3,5.7,3.3 Hz,1H),7.47(s,2H),7.40(m,2H),7.27(tt,J=7.4,3.5 Hz,1H),4.88(d,J=40.8 Hz,2H),3.67(s,3H),3.09(d,J=4.0 Hz,1H),2.25-2.09(m,2H),2.06-1.82(m,3H),1.82-1.66(m,2H)。ESIMS m/z=466.1(M+1)
實例267 5-胺基-N-(5-((4R,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺267
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體267。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.11(s,1H),8.26(dd,J=14.8,6.9 Hz,1H),7.51(s,1H),7.41(s,3H),7.39-7.29(m,2H),4.88(dd,J=47.4,7.1 Hz,1H),3.65(s,3H),3.12-3.03(m,5H),2.26-2.12(m,1H),2.00-1.80(m,2H),1.79-1.67(m,1H)。ESIMS m/z=448.1(M+1)
實例268 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺268
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體268。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.79(s,1H),8.43(d,J=4.6 Hz,1H),7.85(dd,J=11.0,8.6 Hz,1H),7.63(d,J=13.0 Hz,3H),7.47(dt,J=8.3,4.1 Hz,1H),4.49(dtd,J=47.9,8.1,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.18-3.07(m,4H),2.21-2.04(m,1H),1.98(dt,J=9.5,7.4 Hz,1H),1.94-1.83(m,1H),1.76-1.50(m,1H),1.72-1.57(m,1H)。ESIMS m/z=449.1(M+1)
實例269 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺269
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構 體269。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.79(s,1H),8.43(d,J=4.6 Hz,1H),7.85(dd,J=11.0,8.6 Hz,1H),7.63(d,J=13.0 Hz,3H),7.47(dt,J=8.3,4.1 Hz,1H),4.49(dtd,J=47.9,8.1,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.18-3.07(m,4H),2.21-2.04(m,1H),1.98(dt,J=9.5,7.4 Hz,1H),1.94-1.83(m,1H),1.76-1.50(m,1H),1.72-1.57(m,1H)。ESIMS m/z=449.1(M+1)
實例270 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺270
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體270。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.11(s,1H),8.26(dd,J=14.8,6.9 Hz,1H),7.51(s,1H),7.41(s,3H),7.39-7.29(m,2H),4.88(dd,J=47.4,7.1 Hz,1H),3.65(s,3H),3.12-3.03(m,5H),2.26-2.12(m,1H),2.00-1.80(m,2H),1.79-1.67(m,1H)。ESIMS m/z=448.1(M+1)
實例271 5-胺基-N-(5-((4R,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺271
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體271。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.21(s,1H),8.28(s,2H),8.12(ddd,J=9.3,5.7,3.3 Hz,1H),7.47(s,2H),7.40(m,2H),7.27(tt,J=7.4,3.5 Hz,1H),4.88(d,J=40.8 Hz,2H),3.67(s,3H),3.09(d,J=4.0 Hz,1H),2.25-2.09(m, 2H),2.06-1.82(m,3H),1.82-1.66(m,2H)。ESIMS m/z=466.1(M+1)
實例272 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺272
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體272。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.16(s,1H),8.05(s,1H),7.51(s,1H),7.40(s,2H),7.23(d,J=9.0 Hz,2H),4.88(dd,J=47.4,7.4 Hz,1H),3.65(s,3H),3.09(m,3H),2.36(s,3H),2.20(ddd,J=10.8,7.3,3.4 Hz,1H),2.00-1.80(m,3H),1.78-1.67(m,1H)。ESIMS m/z=462.1(M+1)
實例273 (R)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺273
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體273。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.69(s,1H),8.43(d,J=4.5 Hz,1H),8.27(s,2H),7.88(dd,J=10.9,8.6 Hz,1H),7.67(s,2H),7.61(s,1H),7.48(dt,J=8.3,4.1 Hz,1H),3.68(s,3H),3.20-2.99(m,3H),2.32(t,J=19.9 Hz,3H),1.93(d,J=13.3 Hz,1H),1.82(dd,J=14.8,9.4 Hz,2H)。ESIMS m/z=467.1(M+1)
實例274 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺274
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體274。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.88(s,1H),8.53(d,J=4.7 Hz,1H),8.14(d,J=7.9 Hz,1H),7.89(d,J=1.4 Hz,1H),7.54(s,2H),7.49(s,1H),7.40-7.35(m,1H),4.49(dtd,J=48.0,8.5,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.22-3.11(m,5H),2.22-2.08(m,1H),2.08-1.95(m,1H),1.93-1.79(m,1H),1.63(dtd,J=14.3,9.5,4.5 Hz,1H)。ESIMS m/z=431.1(M+1)
實例275 5-胺基-2-(2,6-二氟-3-碘-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺275
遵循實例145之程序，以6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈灰白色固體狀之275(220 mg，34%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.93-7.85(m,1H),7.64(s,1H),7.04(ddd,J=10.3,8.8,1.4 Hz,1H),3.77(s,3H),3.74-3.62(m,1H),3.55-3.36(m,3H),3.30-3.23(m,1H),2.41-2.22(m,2H),2.06-1.95(m,1H),1.91-1.80(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 610(M+1)
實例276 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺276
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第 三丁氧基羰基-胺基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈灰白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之276(170 mg，40%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.54(s,1H),8.06(ddd,J=9.4,5.8,3.2 Hz,1H),7.39(s,1H),7.28(td,J=9.9,4.4 Hz,1H),7.19-7.11(m,1H),4.86(dtd,J=49.0,9.3,3.6 Hz,1H),3.62-3.49(m,2H),3.50-3.38(m,4H),2.45-2.31(m,1H),2.26-2.06(m,2H),1.99-1.86(m,1H),1.21-1.12(m,2H),1.15-1.05(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例277 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺277
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈黃色固體狀之277(228 mg，55%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.07(dd,J=7.3,2.3 Hz,1H),7.48(s,1H),7.24-7.19(m,1H),7.11(dd,J=11.4,8.4 Hz,1H),4.49(dtd,J=48.3,8.8,3.8 Hz,1H),3.56-3.48(m,1H),3.47-3.34(m,4H),3.23-3.13(m,1H),2.41(s,3H),2.35-2.21(m,1H),2.19-2.06(m,1H),2.01-1.91(m,1H),1.84-1.72(m,1H),1.19-1.10(m,2H),1.11-1.04(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 488(M+1)
實例278 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚 烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺278
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈灰白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之278(209 mg，50%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.54(s,1H),7.52(s,1H),7.51-7.44(m,1H),7.19-7.12(m,2H),4.86(dtd,J=48.0,9.3,3.0 Hz,1H),3.61-3.47(m,2H),3.48-3.36(m,4H),2.46-2.32(m,1H),2.26-2.05(m,2H),1.99-1.86(m,1H),1.23-1.11(m,2H),1.13-1.05(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例279 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基]-醯胺279
遵循實例145之程序，以N-(1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺為起始物，得到呈灰白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之279(166 mg，16%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.55(s,1H),7.55-7.43(m,2H),7.19-7.12(m,2H),3.87-3.71(m,1H),3.69-3.45(m,4H),3.44-3.39(m,1H),2.70-2.45(m,2H),2.24-2.13(m,1H),2.08-1.95(m,1H),1.24-1.11(m,2H),1.14-1.05(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 510 (M+1)。
實例280 (R)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺280
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體280。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),7.66(s,1H),7.52(d,J=8.0 Hz,3H),7.28(t,J=8.6 Hz,2H),6.37(m,2H),4.43(d,J=4.1 Hz,3H),3.64(dt,J=27.0,13.5 Hz,2H),2.26(s,3H),1.92-1.80(m,1H),1.71(tt,J=19.7,10.0 Hz,1H),1.49(dd,J=8.3,6.7 Hz,1H),0.98(d,J=2.4 Hz,1H)。ESIMS m/z=534.1(M+1)
實例281 (S)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺281
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體281。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),7.66(s,1H),7.52(d,J=8.0 Hz,3H),7.28(t,J=8.6 Hz,2H),6.37(m,2H),4.43(d,J=4.1 Hz,3H),3.64(dt,J=27.0,13.5 Hz,2H),2.26(s,3H),1.92-1.80(m,1H),1.71(tt,J=19.7,10.0 Hz,1H),1.49(dd,J=8.3,6.7 Hz,1H),0.98(d,J=2.4 Hz,1H)。ESIMS m/z=534.1(M+1)
實例282 (S)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺282
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體282。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.11(s,1H),8.13(s,1H),7.48(s,2H),7.44(s,1H),7.43(m,1H),7.28(tt,J=7.5,3.6 Hz,1H),3.68(s,3H),3.67-3.62(m,1H),3.48-3.35(m,2H),3.19-3.06(m,2H),2.23(ddd,J=35.9,24.1,14.0 Hz,3H),1.92-1.82(m,1H),1.73(ddd,J=20.0,12.7,8.0 Hz,1H)。ESIMS m/z=484.1(M+1)
實例283 (R)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺283
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體283。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.11(s,1H),8.13(s,1H),7.48(s,2H),7.44(s,1H),7.43(m,1H),7.28(tt,J=7.5,3.6 Hz,1H),3.68(s,3H),3.67-3.62(m,1H),3.48-3.35(m,2H),3.19-3.06(m,2H),2.23(ddd,J=35.9,24.1,14.0 Hz,3H),1.92-1.82(m,1H),1.73(ddd,J=20.0,12.7,8.0 Hz,1H)。ESIMS m/z=484.1(M+1)
實例284 (S)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺284
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體284。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.98(s,1H),8.318.08(d,J=7.4 Hz,1H),7.49(s,1H),7.41(s,2H),7.23(d,J=9.0 Hz,2H),3.68(s,3H),3.64(d,J=14.5 Hz,1H),3.45 (ddd,J=19.7,15.1,9.3 Hz,2H),3.21-3.11(m,2H),2.37(s,3H),2.28(dd,J=31.2,15.2 Hz,2H),1.88(d,J=15.3 Hz,1H),1.81-1.66(m,1H)。ESIMS m/z=480.1(M+1)
實例285 ((R)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺285
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體285。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.98(s,1H),8.318.08(d,J=7.4 Hz,1H),7.49(s,1H),7.41(s,2H),7.23(d,J=9.0 Hz,2H),3.68(s,3H),3.64(d,J=14.5 Hz,1H),3.45(ddd,J=19.7,15.1,9.3 Hz,2H),3.21-3.11(m,2H),2.37(s,3H),2.28(dd,J=31.2,15.2 Hz,2H),1.88(d,J=15.3 Hz,1H),1.81-1.66(m,1H)。ESIMS m/z=480.1(M+1)
實例286 (S)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺286
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體286。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.99(s,1H),8.30(dd,J=14.7,6.9 Hz,1H),7.51(s,1H),7.48-7.40(m,3H),7.40-7.32(m,2H),3.68(s,3H),3.50-3.37(m,3H),3.16(m,2H),2.35-2.17(m,2H),1.87(m,1H),1.76(m,1H)。ESIMS m/z=466.1(M+1)
實例287 (R)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯 胺287
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體287。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.99(s,1H),8.30(dd,J=14.7,6.9 Hz,1H),7.51(s,1H),7.48-7.40(m,3H),7.40-7.32(m,2H),3.68(s,3H),3.50-3.37(m,3H),3.16(m,2H),2.35-2.17(m,2H),1.87(m,1H),1.76(m,1H)。ESIMS m/z=466.1(M+1)
實例288 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-甲氧基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺288
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體288。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.79(s,1H),8.31(s,1H),7.53-7.49(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.63(s,3H),3.25(s,3H),3.24-3.13(m,4H),3.06(m,2H),1.69(m,2H)。ESIMS m/z=478.2(M+1)
實例289 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-甲氧基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺289
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體289。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.79(s,1H),8.31(s,1H),7.53-7.49(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.63(s,3H),3.25(s,3H),3.24-3.13(m,4H),3.06(m,2H),1.69(m,2H)。ESIMS m/z=478.2(M+1)
實例290 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(5-(二甲基 胺基)-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺290
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體290。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.70(s,1H),8.18(s,1H),7.54(s,1H),7.50(m,2H),7.25(t,J=8.6 Hz,2H),3.68(s,3H),3.65-3.51(m,2H),2.84(s,1H),2.24(m,4H),2.07(s,6H),1.96-1.76(m,2H)。ESIMS m/z=512.1(M+1)
實例292 3-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡啶甲醯胺292
遵循實例180之程序，製備化合物292。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.72(s,1H),8.02(t,J=7.3 Hz,1H),7.72(dd,J=8.7,2.1 Hz,1H),7.66(s,1H),7.49-7.38(m,1H),7.38-7.25(m,3H),7.07(s,2H),3.80-3.58(m,4H),3.51-3.33(m,2H),3.20-3.03(m,2H),2.25-2.09(m,1H),1.90-1.76(m,1H),1.76-1.61(m,1H),1.54-1.37(m,1H)。MS(ESI)m/z：460.2[M+H+]。
實例293 3-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(2-氟苯基)吡嗪-2-甲醯胺293
遵循實例180之程序，製備化合物293。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.79(s,1H),8.68(d,J=2.3 Hz,1H),8.25(s,1H),8.12(t,J=8.1 Hz,1H),7.74(s,2H),7.60-7.52(m,1H),7.52-7.41(m,1H),7.41-7.28(m,2H),3.77-3.57(m,5H),3.18-2.96(m,3H),2.31-2.15(m,2H),1.94-1.81(m,1H),1.81-1.62(m,1H)。MS(ESI)m/z：461.2[M+H+]。
實例291 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(5-(二甲基胺基)-3,3-二氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺291
藉由SFC對掌性分離母體外消旋化合物，得到對映異構體291。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.70(s,1H),8.18(s,1H),7.54(s,1H),7.50(m,2H),7.25(t,J=8.6 Hz,2H),3.68(s,3H),3.65-3.51(m,2H),2.84(s,1H),2.24(m,4H),2.07(s,6H),1.96-1.76(m,2H)。ESIMS m/z=512.1(M+1)
實例294 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲醯胺294
遵循實例221之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，在經由矽膠管柱層析法(5% MeOH/具有1%含7 N氨之MeOH之DCM)純化後，得到呈膏狀固體狀之294(107 mg，48%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.73(s,1H),7.90-7.84(m,1H),7.82(s,1H),7.17-7.11(m,1H),7.04(dd,J=11.1,8.4 Hz,1H),6.10(s,2H),4.95-4.78(m,1H),3.74(s,3H),3.49-3.33(m,3H),3.24-3.11(m,2H),2.40(s,3H),2.40-2.26(m,1H),2.09-1.91(m,2H),1.87-1.77(m,1H)。未見到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例295 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲 醯胺295
遵循實例221之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈深色膏狀固體狀之295(166 mg，73%，經歷三個步驟。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.65(s,1H),7.87-7.81(m,2H),7.17-7.09(m,1H),7.07-7.01(m,1H),6.16(s,2H),4.90(dd,J=47.1,6.7 Hz,1H),3.74(s,3H),3.49-3.32(m,3H),3.23-3.09(m,2H),2.36-2.28(m,1H),2.18-1.81(m,3H)。未見到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)
實例296 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺296
遵循實例221之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，在經由矽膠管柱層析法(5-7% MeOH/具有1%含7 N氨之MeOH之DCM)純化後，得到呈膏狀固體狀之296(128 mg，59%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.72(s,1H),8.13-8.08(m,1H),7.84(s,1H),7.40-7.32(m,1H),7.29-7.20(m,1H),7.17(dd,J=11.4,8.3 Hz,1H),6.10(s,2H),4.89(dd,J=47.0,7.0 Hz,1H),3.74(s,3H),3.50-3.31(m,3H),3.22-3.09(m,2H),2.37-2.27(m,1H),2.12-1.89(m,2H),1.86-1.78(m,1H)。未見到烷基NH2。LCMS(ES+) m/z 448(M+1)
實例297 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺297
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈淺褐色固體狀之297(424 mg，72%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.70(s,1H),8.39(dt,J=4.6,1.4 Hz,1H),7.86(s,1H),7.52(ddd,J=10.8,8.3,1.4 Hz,1H),7.32-7.26(m,1H),6.32(s,2H),4.51(dtd,J=47.9,8.5,3.6 Hz,1H),3.73(s,3H),3.40-3.17(m,5H),2.34-2.19(m,1H),2.16-1.96(m,2H),1.79-1.66(m,1H)。未見到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 449(M+1)
實例298 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺298
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈淺黃色固體狀之298(418 mg，74%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.54(d,J=4.9 Hz,1H),8.40(s,1H),8.06(d,J=8.0 Hz,1H),7.78-7.73(m,2H),7.28-7.23(m,1H),6.26(s,2H),4.51(dtd,J=48.0,8.8,3.8Hz,1H), 3.73(s,3H),3.37-3.20(m,5H),2.35-2.21(m,1H),2.18-2.04(m,1H),2.02-1.92(m,1H),1.79-1.66(m,1H)。未見到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 431(M+1)
實例299 5-胺基-2-(3-氟-吡啶-2-基)-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺299
遵循實例145之程序，以6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺黃色固體狀之299(350 mg，43%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.56(s,1H),8.39(dt,J=4.6,1.4 Hz,1H),7.81(s,1H),7.52(ddd,J=10.8,8.3,1.4 Hz,1H),7.32-7.26(m,1H),6.32(s,2H),3.76(s,3H),3.71-3.57(m,1H),3.54-3.35(m,3H),3.33-3.24(m,1H),2.41-2.26(m,2H),2.03-1.92(m,1H),1.90-1.78(m,1H),1.34(br s,2H)。LCMS(ES+)m/z 467(M+1)
實例300 5-胺基-2-吡啶-2-基-噻唑-4-甲酸[5-(5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺300
遵循實例145之程序，以6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺黃色固體狀之300(519 mg，66%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.55(d,J=4.9 Hz,1H),8.41(s,1H),8.07(d,J=8.0 Hz,1H),7.76(t,J=7.8 Hz,1H),7.69(s,1H),7.33-7.20(m,1H),6.25(s,2H),3.77(s,3H),3.74-3.59(m,1H),3.55-3.36(m,3H),3.33-3.23(m,1H), 2.43-2.28(m,2H),2.03-1.92(m,1H),1.88-1.77(m,1H)。未見到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 449(M+1)。
實例301 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺301
遵循實例233之程序，以(S)-4-(4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之301(25 mg，50%)。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ(ppm)：7.69(s,1H),7.51-7.45(m,1H),7.16-7.12(m,2H),4.90-4.78(m,2H),3.22.-3.17(m,1H),3.05-2.86(m,6H),1.08(d,J=6 Hz,3H)；MS(ESI)m/z：502[M+H+]
實例304 5-胺基-2-(2,6-二氟-苯基)-噻唑-4-甲酸[5-(3,3-二氟-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-醯胺304
遵循實例101之程序，以來自實例85a之苯甲醛O-6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基肟為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈白色固體狀之304(37 mg，27%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.77(s,1H),7.84(s,1H),7.39-7.29(m,1H),7.09-6.99(m,2H),6.19(s,2H),4.30(s,1H),3.75(s,3H),3.66-3.36(m,3H),3.34-3.24(m,1H),2.57-2.40(m,2H),2.10-2.02(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 485(M+1)
實例305 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-甲氧基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺305
遵循實例101之程序，以來自實例49c之5-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物得到呈杏黃色泡沫狀之305(286 mg，66%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.94(s,1H),7.90(s,1H),7.38-7.28(m,1H),7.02(t,J=8.7 Hz,2H),6.16(s,2H),3.72(s,3H),3.49-3.44(m,1H),3.45-3.18(m,6H),3.20-3.06(m,2H),2.17-2.06(m,1H),2.06-1.96(m,1H),1.85-1.65(m,2H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例306 5-胺基-N-(5-((3R,5R)-5-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺306
遵循實例107之程序，以來自實例53a之N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺為起始物，在經由對掌性製備型HPLC純化後，得到呈灰白色固體狀之306(7.6 mg，2%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.63(s,1H),7.51-7.42(m,1H),7.20-7.11(m,2H),4.89-4.85(m,1H),3.63-3.46(m,4H),3.45-3.27(m,2H),2.34-2.18(m,1H),2.10-1.90(m,2H),1.80-1.66(m,1H),1.25-1.15(m,1H),1.17-1.00(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例307 5-胺基-N-(5-((3S,5S)-5-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺307
遵循實例107之程序，以來自實例53a之N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺為起始物，在經由對掌性製備型HPLC純化後，得到呈灰白色固體狀之307(7.8 mg，2%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.63(s,1H),7.51-7.42(m,1H),7.20-7.11(m,2H),4.89-4.85(m,1H),3.63-3.46(m,4H),3.45-3.27(m,2H),2.34-2.18(m,1H),2.10-1.90(m,2H),1.80-1.66(m,1H),1.25-1.15(m,1H),1.17-1.00(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例308 5-胺基-N-(5-((3S,5R)-5-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺308
遵循實例107之程序，以來自實例53a之N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺為起始物，在經由對掌性製備型HPLC純化後，得到呈灰白色固體狀之308(2.6 mg，1%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.58(s,1H),7.52-7.44(m,1H),7.21-7.11(m,2H),4.87-4.86(m,1H),3.61-3.49(m,4H),3.38-3.30(m,1H),3.12(t,J=5.8 Hz,1H),2.32-2.23(m,1H),2.21-2.07(m,1H),2.03-1.93(m,1H),1.93-1.83(m,1H),1.22-1.04(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例309 5-胺基-N-(5-((3R,5S)-5-胺基-3-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺309
遵循實例107之程序，以來自實例53a之N-(1-(4-胺基-1-環丙基-1H-吡唑-5-基)-6-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺為起始物，在經由對掌性製備型HPLC純化後，得到呈灰白色固體狀之309(2.5 mg，1%，經歷兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.58(s,1H),7.52-7.44(m,1H),7.21-7.11(m,2H),4.87-4.86(m,1H),3.61-3.49(m,4H),3.38-3.30(m,1H),3.12(t,J=5.8 Hz,1H),2.32-2.23(m,1H),2.21-2.07(m,1H),2.03-1.93(m,1H),1.93-1.83(m,1H),1.22-1.04(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例310 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺310
遵循實例101之程序，以來自實例49d之5-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淡米色固體狀之310(106 mg，68%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.05(br s,1H),7.60-7.47(m,4H),7.28(t,J=8.8 Hz,2H),3.90-3.82(s,1H),3.70-3.58(m,3H),3.40-3.20(m,3H),3.08-2.92(m,2H),1.99-1.83(m,2H),1.70-1.55(m,2H)。未觀察到烷基NH2及OH。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)
實例313 5-胺基-N-[5-(5,8-二氮雜螺[2.6]壬-8-基)-1-甲 基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺313
遵循實例101中之程序，以8-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5,8-二氮雜螺[2.6]壬烷-5-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺黃色固體狀之313(90 mg，35%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 12.25(s,1H),8.15(s,1H),7.41-7.22(m,1H),7.02(t,J=8.6 Hz,2H),6.34(s,2H),3.66(s,3H),3.38(t,J=6.3 Hz,2H),3.11(t,J=6.3 Hz,2H),2.97(s,2H),2.74(s,2H),0.33(t,J=5.3 Hz,2H),0.13(t,J=5.3 Hz,2H)。未觀察到可交換之NH。LCMS(ES+)m/z 460(M+1)
實例314 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺314
藉由SFC對掌性分離外消旋5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，得到314。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.28(s,1H),7.64(s,1H),7.61-7.40(m,4H),7.32-7.17(m,2H),3.62(s,3H),3.40(d,J=8.4 Hz,1H),3.20(s,3H),3.18-3.07(m,2H),3.07-2.92(m,3H),2.13-1.93(m,1H),1.83-1.74(m,1H),1.74-1.56(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例315 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺315
藉由SFC對掌性分離外消旋5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，得到315。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.28(s,1H),7.64(s,1H),7.60-7.42(m,4H),7.31-7.20(m,2H),3.62(s,3H),3.44-3.36(m,1H),3.19(s,3H),318-3.07(m,2H),3.02(dt,J=13.0,3.8 Hz,3H),2.12-1.95(m,1H),1.86-1.73(m,1H),1.73-1.57(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例318 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(2-側氧基氮雜環庚烷-1-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺318
遵循實例101中之程序，以1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-2-酮為起始物，得到呈白色固體狀之318(51 mg，26%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.40(s,1H),7.95(s,1H),7.35-7.28(m,1H),7.01(t,J=8.9 Hz,2H),6.14(s,2H),3.78-3.58(m,5H),2.76(d,J=7.4 Hz,2H),1.92-1.75(m,6H)。LCMS(ES+)m/z 447(M+1)
實例319 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(7-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺319
遵循實例101中之程序，以4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之319(35 mg，20%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.70(s,1H),7.96(s,1H),7.36-7.28(m,1H),7.02(t,J=8.7 Hz,2H),6.16(s, 2H),3.83(ddd,J=15.2,8.3,2.4 Hz,1H),3.72(s,3H),3.64(ddd,J=15.2,6.1,2.5 Hz,1H),3.22-3.02(m,4H),2.96-2.84(m,2H)。未觀察到可交換之NH。LCMS(ES+)m/z 448(M+1)
實例322 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺322
遵循實例101之程序，使((4R,5R)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯與5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸反應，得到外消旋之322(58.4 mg，41%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.89(s,1H),8.54(d,J=4.7 Hz,1H),8.17(d,J=8.0 Hz,1H),7.89(t,J=7.7 Hz,1H),7.62-7.47(m,3H),7.43-7.31(m,1H),3.64(s,3H),3.27(s,3H),3.23-2.91(m,6H),2.15-2.00(m,1H),1.92-1.80(m,1H),1.79-1.55(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 443(M+1)
實例323 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3-氟-2-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺323
遵循實例101之程序，使((4R,5R)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯與5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(3-氟-吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸反應，得到外消旋之323(35.8 mg，24%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.84(s,1H),8.43(d,J=4.6 Hz,1H),7.89-7.78(m,1H),7.66(s,2H),7.62(s, 1H),7.48(dt,J=8.3,4.1 Hz,1H),3.65(s,3H),3.28(d,J=7.5 Hz,5H),3.26-2.95(m,8H),2.07(dd,J=10.6,4.4 Hz,1H),1.92(dd,J=10.6,7.4 Hz,1H),1.79-1.55(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 461(M+1)
實例324 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺324
遵循實例101之程序，使((4R,5R)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯與5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到324(118 mg，63%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.94(s,1H),8.30(t,J=8.2 Hz,1H),7.51(s,1H),7.48-7.39(m,3H),7.39-7.27(m,2H),3.64(s,3H),3.27(s,4H),3.24-2.90(m,7H),2.14-2.01(m,1H),1.91-1.81(m,1H),1.77-1.54(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 460(M+1)
實例325 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-氟-5-甲基-苯基)噻唑-4-甲醯胺325
遵循實例101之程序，使((4R,5R)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯與5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(2-氟-5-甲基苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到325(70.8 mg，40%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.98(s,1H),8.07(d,J=7.4 Hz,1H),7.48(s,1H),7.40(s,2H),7.23(d,J=9.0 Hz,2H),3.64 (s,3H),3.24(s,4H),3.23-2.86(m,8H),2.37(s,3H),2.11-1.95(m,1H),1.91-1.79(m,1H),1.79-1.53(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 474(M+1)。
實例326 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺326
遵循實例101之程序，使((4R,5R)-1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯與5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(2,5-二氟苯基)噻唑-4-甲酸反應，得到326(64.2 mg，33.6%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.08(s,1H),8.22-8.10(m,1H),7.46(d,J=9.7 Hz,2H),7.45-7.35(m,2H),7.34-7.18(m,1H),3.64(s,3H),3.23(d,J=12.0 Hz,4H),3.21-2.89(m,6H),2.10-1.97(m,1H),1.89-1.79(m,1H),1.78-1.53(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例327 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺327
藉由SFC對掌性分離外消旋5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，得到單一對映異構體327。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.14(s,1H),7.60(s,1H),7.57-7.41(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.77(d,J=7.1 Hz,1H),3.62(s,3H),3.25-2.91(m,5H),1.96-1.78(m,2H),1.72-1.55(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)
實例328 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺328
遵循實例333之程序，且以5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(其為對掌性分離時之第二個溶離峰)為起始物，獲得328(18%)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),7.60-7.39(m,4H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.63(s,3H),3.22-3.01(m,5H),2.81-2.68(m,1H),1.97-1.78(m,2H),1.76-1.62(m,1H),1.62-1.45(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)
實例331 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺331
在AD管柱上用20%甲醇/0.1% NH4OH對掌性分離外消旋之N-[1-(2-環丙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氟-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸反-第三丁酯。遵循實例369中之程序，將第二溶離峰轉化成331。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.83(s,1H),7.59-7.40(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.44(dtd,J=47.9,8.3,3.7 Hz,1H),3.54(tt,J=7.5,3.9 Hz,1H),3.27-3.05(m,5H),2.23-2.09(m,1H),2.01-1.77(m,4H),1.70-1.53(m,1H),1.03(dd,J=7.4,3.8 Hz,2H),0.94(dd,J=6.8,4.6 Hz,2H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例332 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺332
遵循331之製備，將第一溶離峰轉化成單一對映異構體332。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.81(s,1H),8.25(s, 1H),7.95(s,1H),7.60-7.42(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),4.64-4.42(m,1H),3.59-3.49(m,1H),3.32-3.10(m,5H),2.24-2.07(m,1H),2.03-1.85(m,2H),1.74-1.59(m,1H),1.04(dd,J=8.3,4.1 Hz,2H),0.96(dd,J=10.3,5.8 Hz,2H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例333 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺333
步驟A：用三苯基膦(476 mg，1.78 mmol)處理5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(502 mg，1.78 mmol)(對掌性分離時之第一溶離峰)於THF/水(15 mL/3 mL)中之溶液且反應混合物在60℃下加熱5小時。添加EtOAc(100 mL)且混合物用飽和NaHCO3水溶液(20 mL)洗滌。水層用EtOAc(50 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到油狀物。在0℃下向此油狀物於無水DCM中之溶液(20 mL)中添加DIPEA(0.85 mL，4.88 mmol)及三氟乙酸酐(0.29 mL，2.05 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌4小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色油狀之2,2,2-三氟-N-(5-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(626 mg，88%)。用甲酸銨(1002 mg，15.7 mmol)及10%鈀/碳(50 mg)處理此油狀物(554 mg，1.57 mmol)於MeOH(20 mL)中之溶液。混合物在65℃下加熱1小時。冷卻至室溫後，濾出催化劑且 減壓濃縮濾液。使殘餘物於飽和NaHCO3水溶液(20 mL)與DCM(50 mL)之間分配。水層用DCM(3×50 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到呈橙色泡沫狀之N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺。
步驟B：向N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(504 mg，1.57 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加DIPEA(1.65 mL，9.42 mmol)、PyBOP(1.17 mg，2.20 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸(559 mg，1.57 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(100 mL)稀釋且用水(20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈灰白色固體狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-羥基-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(240 mg，23%)。在室溫下，將此固體(240 mg，0.36 mmol)與HCl之1,4-二噁烷溶液(4 M，6 mL，24 mmol)一起於MeOH(5 mL)中攪拌18小時。減壓移除溶劑，用飽和NaHCO3鹼化且用乙酸乙酯(3x)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到333。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)
實例334 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-[(4S)-4-[(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基胺基]氮雜環庚烷-1-基]吡 唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺334
向(4-((5-(4-胺基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基)胺基甲酸(S)-第三丁酯(103 mg，0.19mmol)於乙腈(2 mL)及THF(2 mL)中之溶液中添加3-(碘甲基)-3-甲基-氧雜環丁烷(78 mg，0.38 mmol)及碳酸鉀(130 mg，0.94 mmol)。混合物在65℃下加熱3天。冷卻至室溫後，添加水(20 mL)且混合物用DCM(50 mLx3)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0至15%甲醇/DCM)純化，得到N-[2-(2,6-二氟苯基)-4-[[1-甲基-5-[(4R)-4-[(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基胺基]氮雜環庚烷-1-基]吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(130 mg，定量)。在室溫下，將此固體(130 mg，0.21 mmol)與TFA(3 mL)及DCM(3 mL)一起攪拌1小時。減壓移除溶劑，用飽和NaHCO3鹼化且用乙酸乙酯(3x)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到334(55.7 mg，51%)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.66(s,1H),8.18(s,1H),7.56(s,1H),7.55-7.41(m,3H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.28(d,J=5.6 Hz,2H),4.12(d,J=5.5 Hz,2H),3.65(s,3H),3.23-3.00(m,4H),2.83-2.70(m,1H),2.70-2.58(m,2H),1.99-1.77(m,3H),1.68-1.51(m,3H),1.17(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 532(M+1)
實例335 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-[(4S)-4-(2-羥基乙基胺基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]噻唑-4- 甲醯胺335
遵循實例334中之程序，但用2-碘乙醇代替3-(碘甲基)-3-甲基-氧雜環丁烷，得到N-[2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-[(4R)-4-(2-羥基乙基胺基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(37 mg，38%)及N-[4-[[5-[(4R)-4-[雙(2-羥基乙基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(10 mg，9.6%)。遵循實例334中之脫除保護基程序，將N-[2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-[(4R)-4-(2-羥基乙基胺基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯轉化成335(16.7 mg，31%)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.69(s,1H),8.27(s,1H),7.59-7.41(m,4H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.65(s,3H),3.50-3.42(m,2H),3.24-3.03(m,5H),2.98-2.83(m,1H),2.73-2.57(m,2H),1.89(m,3H),1.68-1.49(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例336 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-[雙(2-羥基乙基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺336
在335之製備中，遵循實例334中之程序將N-[4-[[5-[(4R)-4-[雙(2-羥基乙基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯脫除保護基，得到336(6 mg，71%)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.63(s,1H),8.24(s,1H),7.56(s,1H), 7.55-7.41(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.65(s,3H),3.19-3.02(m,7H),2.85-2.71(m,2H),2.46(t,J=6.2 Hz,4H),1.92-1.75(m,3H),1.67-1.50(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 536(M+1)
實例337 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺337
藉由SFC對掌性分離5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，得到單一對映異構體337。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)
實例340 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(5-側氧基-1,4-氧氮雜環庚烷-4-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺340
遵循實例101中之程序，以4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-氧氮雜環庚烷-5-酮為起始物，得到呈白色固體狀之340(45 mg，70%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.38(s,1H),7.86(s,1H),7.36-7.27(m,1H),7.06-6.98(m,2H),6.12(s,2H),4.01-3.86(m,5H),3.80-3.62(m,4H),3.03-2.94(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 449(M+1)
實例341 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺341
遵循實例101中之程序，以3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷為起始物，得到呈白色固體狀之341(49 mg，40%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.71(s,1H),7.56-7.52(m,3H),7.47(s,1H),7.30-7.24(m,2H),4.27(br s,2H),3.68(s,3H),3.35-3.32(m,2H),2.68(d,J=10.9 Hz,2H),2.09-1.97(m,2H),1.82-1.79(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 447(M+1)
實例342 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-[(4S)-4-(氧雜環丁烷-3-基甲基胺基)氮雜環庚烷-1-基]吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺342
遵循實例334之程序，但用3-(碘甲基)氧雜環丁烷代替3-(碘甲基)-3-甲基-氧雜環丁烷，得到N-[2-(2,6-二氟苯基)-4-[[1-甲基-5-[(4R)-4-(氧雜環丁烷-3-基甲基胺基)氮雜環庚烷-1-基]吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(17 mg，25.5%)及N-[4-[[5-[(4R)-4-[雙(氧雜環丁烷-3-基甲基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(19 mg，25.6%)。遵循實例334中之脫除保護基程序，將N-[2-(2,6-二氟苯基)-4-[[1-甲基-5-[(4R)-4-(氧雜環丁烷-3-基甲基胺基)氮雜環庚烷-1-基]吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯轉化成342(4.1 mg，29%)。LCMS(ES+)m/z 518(M+1)
實例343 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-[雙(氧雜環丁烷-3-基甲基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺343
在342之製備中，遵循實例334中之程序，將N-[4-[[5-[(4R)-4-[雙(氧雜環丁烷-3-基甲基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]- 1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯脫除保護基，得到343。LCMS(ES+)m/z 588(M+1)
實例348 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺348
遵循實例101中之程序，以1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之348(37 mg，23%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.64(s,1H),7.88(s,1H),7.39-7.26(m,1H),7.03(t,J=8.7 Hz,2H),6.17(s,2H),4.48(dtd,J=48.0,8.7,3.6 Hz,1H),4.02(q,J=7.2 Hz,2H),3.38-3.13(m,6H),2.32-2.18(m,1H),2.14-1.93(m,2H),1.85-1.79(m,1H),1.83-1.57(m,1H),1.43(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 480(M+1)
實例349 5-胺基-N-[5-(3-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺349
遵循實例101之程序，以3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷為起始物，得到呈灰白色固體狀之349(80 mg，30%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.57(s,1H),7.86(s,1H,)7.39-7.22(m,1H),7.04-6.99(m,2H),6.12(br s,2H),3.76(s,3H),3.25(d J=10.4 Hz,2H),2.81-2.78(dd J=10.4,3.4 Hz,2H)2.24(br s,2H),1.86(d,J=7.7 Hz,2H),1.72-1.69(m,2H),1.60 (br s,2H)。LCMS(ES+)m/z 445(M+1)
實例350 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(1,1-二側氧基-1,4-硫氮雜環庚烷-4-基)-1-甲基-吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺350
遵循實例101之程序，以4-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,4-硫氮雜環庚烷1,1-二氧化物為起始物，得到呈灰白色固體狀之350(52 mg，20%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.45(s,1H),7.74(s,1H),7.36-7.32(m,1H),7.07-7.01(m,2H),6.12(br s,2H),3.79(s,3H),3.59-3.56(m,2H),3.47-3.43(m,2H),3.38-3.35(m,2H),3.30-3.27(m,2H),2.24-2.18(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 483(M+1)
實例352 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺352
藉由SFC對掌性分離5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，得到單一對映異構體352。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),8.46(s,1H),7.64(s,1H),7.60-7.44(m,3H),7.29(t,J=8.7 Hz,2H),3.65(s,3H),3.27-3.14(m,3H),3.07(dd,J=10.9,5.5 Hz,1H),3.02(s,3H),2.97(d,J=14.4 Hz,1H),2.00(d,J=14.3 Hz,1H),1.92-1.82(m,1H),1.71-1.57(m,1H),1.48(dd,J=14.3,10.8 Hz,1H),0.99(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例353 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺353
藉由SFC對掌性分離5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺，得到單一對映異構體353。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),8.47(s,1H),7.64(s,1H),7.59-7.45(m,3H),7.29(t,J=8.7 Hz,2H),3.65(s,3H),3.28-3.12(m,3H),3.11-3.03(m,1H),3.02(s,3H),2.97(d,J=14.3 Hz,1H),2.00(d,J=14.2 Hz,1H),1.93-1.80(m,1H),1.71-1.57(m,1H),1.48(dd,J=14.3,10.8 Hz,1H),0.99(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例354 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(9-氧雜-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬-3-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺354
步驟A. 向微波反應瓶中添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(141 mg，0.88 mmol)、9-氧雜-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁酯(200 mg，0.88 mmol)。添加乙醇(8 mL)及二異丙基乙胺(0.92 mL，5.25 mmol)且混合物用微波在130℃下照射60分鐘。冷卻混合物，濃縮且經由急驟層析法(乙酸乙酯/庚烷0%至100%)純化，得到黃色油狀之7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-9-氧雜-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁酯(202 mg，65%)。
StepB：使以上黃色油狀物於MeOH中之溶液(30 mL)通 過H-Cube®(60巴，60℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈褐色油狀之7-(4-胺基-2-甲基-吡唑-3-基)-9-氧雜-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁酯。向此油狀物於DCM中之溶液(10 mL)中添加5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(260 mg，0.74 mmol)、PyBOP(480 g，0.91 mmol)及DIPEA(0.60 mL，3.40 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)稀釋。有機層用水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/庚烷)純化，得到7-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-9-氧雜-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁酯(380 mg，定量)。
步驟C：將此固體(380 mg，0.57 mmol)與TFA(7 mL)及DCM(10 mL)一起在室溫下攪拌1小時。減壓移除溶劑，用飽和NaHCO3鹼化，且用乙酸乙酯(3x)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到354(82 mg，29%)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.58(s,1H),7.63-7.40(m,4H),7.27(t,J=8.6 Hz,2H),3.66(s,3H),3.62(d,J=19.8 Hz,3H),3.20-2.86(m,7H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例357 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺357
向2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基) 環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體1)(49 mg，0.074 mmol)於MeOH(2 mL)中之溶液/懸浮液中添加HCl之二噁烷溶液(4 M，1.9 mL，7.42 mmol)且混合物在60℃下加熱72小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於MeOH/水(5 mL/5 mL)中且用K2CO3(51 mg，0.37 mmol)處理。混合物在65℃下加熱18小時。減壓移除MeOH且水性殘餘物用5% MeOH/DCM(2×30 mL)萃取。合併有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中並裝載至SCX管柱上。該管柱用MeOH洗滌，用含3 N氨之MeOH溶離且減壓移除溶劑，得到呈米色固體狀之357(非對映異構體1)(10 mg，29%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.44(s,1H),7.76(s,1H),7.35-7.28(m,1H),7.07-6.99(m,2H),6.11(s,2H),4.46-4.29(m,1H),3.83(s,3H),3.23-3.13(m,1H),2.84-2.76(m,1H),2.26-1.81(m,6H),1.60-1.40(m,2H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 465(M+1)
實例358 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺358
向2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體2)(28 mg，0.042 mmol)於MeOH(2 mL)中之懸浮液中添加HCl之二噁烷溶液(4 M，1.1 mL，4.24 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於MeOH/水(3 mL/3 mL)中，用 K2CO3(29 mg，0.21 mmol)處理且在60℃下加熱18小時。減壓移除MeOH且水性殘餘物用5% MeOH/DCM(2×40 mL)萃取。合併有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈灰白色固體狀之358(非對映異構體2)(17 mg，86%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.44(s,1H),7.76(s,1H),7.34-7.29(m,1H),7.03(t,J=8.7 Hz,2H),6.11(s,2H),4.47-4.29(m,1H),3.83(s,3H),3.23-3.12(m,1H),2.86-2.75(m,1H),2.25-1.84(m,6H),1.60-1.40(m,2H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 465(M+1)
實例359 5-胺基-N-[5-(2,6-二氮雜螺[3.4]辛-6-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺359
遵循實例354中之程序，用2,7-二氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁酯代替9-氧雜-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁酯，得到359。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.70(s,1H),8.44(s,1H),7.58-7.44(m,3H),7.39(s,1H),7.26(t,J=8.6 Hz,2H),3.61(s,5H),3.56(d,J=8.2 Hz,4H),3.21(t,J=6.8 Hz,2H),2.10(t,J=6.9 Hz,2H)。LCMS(ES+)m/z 446(M+1)
實例360 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(1-側氧基-2,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺360
遵循實例354中之程序，用3,8-二氮雜螺[4.5]癸-4-酮代替9-氧雜-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁酯，得到360。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.78(s,1H),7.58- 7.43(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.64(s,3H),3.21-3.07(m,4H),3.07-2.92(m,2H),1.97(t,J=6.8 Hz,2H),1.86-1.74(m,3H),1.41(d,J=12.9 Hz,2H)。LCMS(ES+)m/z 488(M+1)
實例361 5-胺基-N-[5-(2,7-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺361
遵循實例354中之程序，用2,7-二氮雜螺[3.4]辛烷-7-甲酸第三丁酯；草酸代替9-氧雜-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁酯，得到361。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.73(s,1H),7.60-7.43(m,3H),7.27(t,J=8.6 Hz,2H),7.15(s,1H),4.04(d,J=7.0 Hz,2H),3.97(d,J=7.0 Hz,2H),3.57(s,3H),3.11(t,J=7.3 Hz,2H),2.89(s,1H),2.73(s,1H),2.14(t,J=7.3 Hz,2H),2.07(s,2H)。LCMS(ES+)m/z 446(M+1)
實例362 5-胺基-N-[5-[4-(氮雜環丁烷-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺362
步驟A：向微波反應瓶中添加5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(500 mg，3.10 mmol)、1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(744 mg，3.72 mmol)。添加乙醇(15 mL)及二異丙基乙胺(3.23 mL，18.57 mmol)且混合物用微波在130℃下照射60分鐘。冷卻混合物，濃縮且經由急驟層析法(乙酸乙酯/庚烷0%至100%)純化，得到黃色油狀之4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(690 mg， 69%)。
步驟B：在室溫下將4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(200 mg，0.61 mmol)於DCM(4 mL)及TFA(4 mL)中之溶液攪拌1小時。減壓移除溶劑，用飽和NaHCO3鹼化且用乙酸乙酯(3x)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-10%甲醇/DCM)純化，得到1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷(88 mg，64%)。將其溶解於乙腈(3 mL)中。添加3-碘氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(221 mg，0.78 mmol)及DIPEA(5 eq)且混合物在75℃下加熱7天，且在第2天及第3天時再添加碘化物及DIPEA。將反應混合物冷卻至室溫，添加水(20 mL)且混合物用DCM(50 mL)萃取。有機層用水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-10%甲醇/DCM)純化，得到3-[4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(144 mg，97%)。
步驟C：遵循實例354之程序，將3-[4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯轉化成362。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.71(s,1H),8.36(s,1H),7.62-7.41(m,4H),7.29(t,J=8.7 Hz,2H),4.12-3.96(m,1H),3.89-3.75(m,1H),3.66(s,3H),3.59(dd,J=17.1,10.1 Hz,4H),3.41(dd,J=14.3,7.1 Hz,2H),3.21(t,J=5.4 Hz,4H),2.68-2.54(m,2H),1.91-1.73 (m,2H)。LCMS(ES+)m/z 489(M+1)
實例363 5-胺基-N-[5-(3,3-二氟環庚基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺363
使(E)-5-(6,6-二氟環庚-1-烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(0.14 g，0.54 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，65℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑得到油狀物。將其溶解於DCM(20 mL)及DIPEA(0.28 mL)中且添加PyBOP(0.42 g，0.81 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(211 mg，0.59 mmol)。混合物在室溫下攪拌18小時，用DCM(30 mL)稀釋且用水(10 mL)洗滌。分離有機層且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-50% EtOAc/異己烷)純化，得到泡沫狀物(210 mg)。用HCl之二噁烷溶液(4 M，2.7 mL，10.8 mmol)處理此泡沫狀物(200 mg)於MeOH(2 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌5小時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於EtOAc(25 mL)中且用飽和NaHCO3水溶液(2×20 mL)及水(20 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓移除溶劑。經由對掌性製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之363(對映異構體1)(6.3 mg，5%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.49(s,1H),7.79(s,1H),7.40-7.30(m,1H),7.10-7.00(m,2H),6.13(s,2H),3.88(s,3H),3.19-3.07(m,1H),2.68-2.37(m,2H),2.30-1.94(m,6H),1.89-1.57(m,2H)。
實例364 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-甲氧基氮雜環 庚烷-1-基)-1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺364
遵循實例101中之程序，以1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之364(70 mg，64%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.41(s,1H),7.59-7.45(m,2H),7.27(t,J=8.8 Hz,2H),3.96(q,J=7.2 Hz,2H),3.33-3.27(m,4H),3.23-3.04(m,5H),2.13(d,J=14.4 Hz,1H),1.96(d,J=14.4 Hz,1H),1.75-1.67(m,2H),1.32(t,J=7.2 Hz,3H)。未見到可交換物。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例365 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-甲氧基氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺365
遵循實例101中之程序，以1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之365(68 mg，64%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.40(s,1H),7.58-7.47(m,1H),7.43(s,1H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.55-3.47(m,1H),3.36-3.08(m,9H),2.15(d,J=14.4 Hz,1H),2.02-1.94(m,1H),1.83-1.66(m,2H),1.07-0.94(m,4H)。未見到可交換物。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例366 5-胺基-N-[5-(3,3-二氟環庚基)-1-甲基-吡唑- 4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺366
遵循實例363中之程序，得到呈白色固體狀之366(對映異構體2)(6.6 mg，5%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.49(s,1H),7.80(s,1H),7.39-7.30(m,1H),7.10-7.00(m,2H),6.13(s,2H),3.88(s,3H),3.17-3.06(m,1H),2.64-2.33(m,2H),2.30-1.94(m,6H),1.85-1.57(m,2H)
實例367 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(2-側氧基-1,9-二氮雜螺[4.6]十一烷-9-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺367
遵循實例508中之程序，製備出呈單一對映異構體形式之367。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 8.64(s,1H),7.99(s,1H),7.59-7.50(m,2H),7.48(s,2H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.65(s,2H),3.30(s,3H),3.31-3.15(m,2H),3.11-2.96(m,2H),2.15-2.05(m,2H),1.80(m,6H)。MS(ESI)m/z：502.1[M+H+]
實例368 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(2-側氧基-1,9-二氮雜螺[4.6]十一烷-9-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺368
遵循實例508中之程序，製備出呈單一對映異構體形式之368。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 8.64(s,1H),7.99(s,1H),7.59-7.50(m,2H),7.48(s,2H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.65(s,2H),3.30(s,3H),3.31-3.15(m,2H),3.11-2.96(m,2H),2.15-2.05(m,2H),1.80(m,6H)。MS(ESI)m/z：502.1[M+H+]
實例369 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺369
在AD管柱上利用20 w%甲醇/0.1% NH4OH對掌性分離外消旋之(1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸反-第三丁酯。遵循實例354之程序，將第一溶離峰轉化成369。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.82(s,1H),7.60(s,1H),7.57-7.43(m,3H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.42(dtd,J=47.8,8.2,3.6 Hz,1H),3.95(q,J=7.2 Hz,2H),3.24-3.04(m,5H),2.18-1.76(m,3H),1.66-1.51(m,1H),1.32(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 480(M+1)
實例370 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺370
在369之製備中，將第二溶離峰轉化成370。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.82(s,1H),7.60(s,1H),7.57-7.44(m,3H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.42(dd,J=47.9,3.6 Hz,1H),3.95(q,J=7.2 Hz,2H),3.24-3.02(m,5H),2.19-2.03(m,1H),2.00-1.77(m,2H),1.67-1.52(m,1H),1.32(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 480(M+1)
實例371 5-胺基-N-[5-(3,3-二氟-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺371
在AD管柱上利用35 w%甲醇/0.1% NH4OH對掌性分離外消旋之N-[6,6-二氟-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]氧基-1-苯基-甲胺。遵循實例369中之程序，將第一溶離峰轉化成轉化成371。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.76(s,1H),7.61-7.40(m,4H),7.26(t,J=8.6 Hz,2H),4.90(d,J=3.8 Hz,1H),4.06-3.90(m,1H),3.74-3.57(m,4H),3.47-3.34(m,1H),3.34-3.20(m,1H),3.17-3.01(m,1H),2.43-2.23(m,2H),2.00-1.73(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 485(M+1)
實例372 5-胺基-N-[5-(3,3-二氟-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺372
在371之製備中，將第二溶離峰轉化成單一對映異構體372。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.76(s,1H),7.60-7.42(m,4H),7.26(t,J=8.6 Hz,2H),4.90(d,J=3.9 Hz,1H),4.00(s,1H),3.75-3.54(m,4H),3.46-3.34(m,1H),3.34-3.23(m,1H),3.16-3.03(m,1H),2.45-2.23(m,2H),2.01-1.70(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 485(M+1)
實例373 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺373
遵循實例369中之程序，將第一溶離峰轉化成單一對映異構體373。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),8.28(t,J=7.9 Hz,1H),7.56(s,1H),7.51-7.27(m,5H),4.56-4.32(m,1H),3.96(q,J=7.2 Hz,2H),3.24-3.06(m,5H),2.20-2.04(m,1H),2.04-1.90(m,1H),1.90-1.77(m,1H),1.77-1.54(m,3H),1.33(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例374 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺374
在373之製備中，將第二溶離峰轉化成單一對映異構體374。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),8.28(t,J=7.7 Hz,1H),7.56(s,1H),7.50-7.23(m,5H),4.56-4.33(m,1H),3.96(q,J=7.2 Hz,2H),3.25-3.04(m,5H),2.21-2.05(m,1H),2.05-1.90(m,1H),1.90-1.79(m,1H),1.79-1.50(m,3H),1.33(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例375 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺375
遵循實例101之程序，以1-(1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺褐色固體狀之呈單甲酸鹽形式之375(58 mg，47%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.42(s,1H),7.65(s,1H),7.58-7.48(m,1H),7.28(t,J=8.8 Hz,2H),6.36(tt,J=55.3,4.1 Hz,1H),4.43(td,J=14.5,4.2 Hz,2H),4.04(s,1H),3.40-3.29(m,2H),3.26-3.18(m,1H),3.12-3.02(m,1H),2.95(dt,J=13.7,4.7 Hz,1H),2.14-2.02(m,1H),1.93-1.66(m,2H),1.77-1.67(m,1H)。未觀察到可交換物。LCMS(ES+)m/z 514(M+1)
實例376 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-甲氧基氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺376
遵循實例101之程序，以1-(1-乙基-4-硝基-1H-吡唑-5- 基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺褐色固體狀之呈單甲酸鹽形式之376(60 mg，51%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.41(s,1H),7.59(s,1H),7.58-7.45(m,1H),7.27(t,J=8.8 Hz,2H),3.96(q,J=7.2 Hz,2H),3.42(dt,J=9.8,3.0 Hz,1H),3.70-3.60(m,1H),3.50-2.94(m,5H),3.09-3.00(m,1H),3.00-2.91(m,1H),2.13-2.04(m,1H),2.03-1.91(m,1H),1.79-1.65(m,2H),1.31(t,J=7.2 Hz,3H)。未觀察到可交換物。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例377 5-胺基-N-(5-((4R,5S)-4-胺基-5-氟環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺377
遵循實例358中之程序，以2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體5)為起始物，得到呈灰白色固體狀之377(非對映異構體5)(16 mg，79%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.46(s,1H),7.79(s,1H),7.38-7.28(m,1H),7.03(t,J=8.8 Hz,2H),6.14(s,2H),4.88-4.71(m,1H),3.82(s,3H),3.25-3.14(m,1H),3.06-2.96(m,1H),2.20-1.83(m,7H),1.78-1.63(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 465(M+1)
實例378 N-[5-(4-乙醯胺基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺378
向N-(4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(330 mg，1.11 mmol)於EtOH(25 mL)及水(2.5 mL)之混合物中之經攪拌溶液中添加氯化銨(300 mg，5.55 mmol)及鐵粉(250 mg，4.44 mmol)。反應混合物在100℃下加熱2小時，之後冷卻，經由矽藻土過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(20 mL)與DCM(40 mL)之間分配且分離有機層，用鹽水(20 mL)洗滌，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈褐色固體狀之N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺，不經進一步純化即使用。遵循實例149之程序，使用此中間物即5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸，得到呈灰白色泡沫狀之378(54 mg，19%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.52(s,1H),7.86(s,1H),7.39-7.29(m,1H),7.07-6.99(m,2H),6.15(s,2H),5.38(s,1H),3.74(s,3H),3.30-3.18(m,4H),3.12(ddd,J=13.6,6.6,3.1 Hz,1H),2.30-2.19(m,2H),2.00-1.72(m,6H),1.45(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例379 5-胺基-N-(5-((4R,5R)-4-胺基-5-氟環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺379
遵循實例358中之程序，以2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體3及非對映異構體4)為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈對映異構體之外消旋對形式且呈灰白色固體狀之379(非 對映異構體3及非對映異構體4)(4 mg，7%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.41(s,1H),7.76(s,1H),7.38-7.28(m,1H),7.03(t,J=8.7 Hz,2H),6.12(s,2H),4.33-4.18(m,1H),3.83(s,3H),3.14-3.05(m,1H),2.96-2.88(m,1H),2.32-2.20(m,1H),2.00-1.69(m,7H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 465(M+1)
實例380 5-胺基-N-(5-((4R,5S)-4-胺基-5-氟環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺380
遵循實例358中之程序，以2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體6、非對映異構體7及非對映異構體8)為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈白色泡沫狀之380(非對映異構體6及非對映異構體7)(8 mg，15%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.47(s,1H),7.75(s,1H),7.38-7.29(m,1H),7.02(t,J=8.9 Hz,2H),6.13(s,2H),4.77(dd,J=47.1,6.6 Hz,1H),3.83(s,3H),3.18(dd,J=23.9,8.0 Hz,1H),2.93-2.85(m,1H),2.42-2.32(m,1H),2.18-1.55(m,7H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 465(M+1)
實例381 5-胺基-N-(5-((4R,5S)-4-胺基-5-氟環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺381
遵循實例358中之程序，以2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4-氟-5-(2,2,2-三氟乙醯胺基)環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(非對映異構體6、非對 映異構體7及非對映異構體8)為起始物，在經由製備型HPLC純化後，得到呈灰白色固體狀之381(非對映異構體8)(9 mg，17%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)8.46(s,1H),7.80(s,1H),7.36-7.29(m,1H),7.03(t,J=8.8 Hz,2H),6.11(s,2H),4.88-4.72(m,1H),3.82(s,3H),3.24-3.15(m,1H),3.05-2.97(m,1H),2.13-1.82(m,7H),1.74-1.67(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 465(M+1)
實例383 5-胺基-N-(5-環庚基-1-甲基-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺383
使(Z)-5-(1-氟環庚-4-烯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(100 mg，0.42 mmol)於MeOH(30 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，70℃，流速：1 mL/min，10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到紅色膠狀物(81 mg)。向此胺(80 mg，0.41 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加DIPEA(1 mL)、PyBOP(606m g，1.17 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(183 mg，0.51 mmol)，且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(100 mL)稀釋且用水(20 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(30-40% EtOAc/異己烷)純化，得到呈膏狀固體狀之4-(5-環庚基-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(140 mg)。將此固體(130 mg，0.25 mmol)與HCl之二噁烷溶液(4 M，3.1 mL，12.2 mmol)一起於MeOH(3 mL)在室溫下攪拌18小 時。減壓移除溶劑且將殘餘物溶解於MeOH中並裝載至SCX管柱上。該管柱用MeOH洗滌，用含2 N氨之MeOH溶離且減壓移除溶劑。經由製備型HPLC純化，得到呈膏狀固體狀之383(45 mg，25%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.59(s,1H),7.85(s,1H),7.35-7.29(m,1H),7.02(t,J=8.9 Hz,2H),6.10(s,2H),3.83(s,3H),2.92-2.81(m,1H),1.97-1.83(m,6H),1.72-1.50(m,6H)。LCMS(ES+)m/z 432(M+1)
實例384 N-[5-(4-乙醯胺基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-5-胺基-2-(3-氟-2-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺384
遵循實例378中之程序，以N-(4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈灰白色泡沫狀之384(80 mg，29%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.57(s,1H),8.41(d,J=4.3 Hz,1H),7.90(s,1H),7.52(t,J=9.7 Hz,1H),7.31(dt,J=8.4,4.3 Hz,1H),6.32(s,2H),5.75(s,1H),3.74(s,3H),3.33-3.15(m,4H),2.38-2.21(m,2H),2.02-1.84(m,4H),1.82-1.74(m,3H),1.51(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 487(M+1)
實例385 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-乙氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺385
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑- 5-基)-5-乙氧基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈褐色固體狀之385(127 mg，60%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.61(s,1H),7.85(s,1H),7.42-7.28(m,1H),7.04(t,J=8.9 Hz,2H),6.19(s,2H),3.78-3.58(m,4H),3.47-3.35(m,1H),3.38-3.25(m,2H),3.25-3.16(m,3H),3.09-3.01(m,1H),2.13(d,J=14.7 Hz,1H),2.00(d,J=14.7 Hz,1H),1.92-1.82(m,1H),1.84-1.58(m,3H),1.22(t,J=7.0 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例386 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-甲氧基氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺386
遵循實例101之程序，以1-(1-環丙基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-甲氧基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈灰白色固體狀之386(29 mg，23%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.96(s,1H),7.86(s,1H),7.36-7.28(m,1H),7.02(t,J=8.9 Hz,2H),6.19-6.10(m,2H),3.50-3.35(m,4H),3.33(s,3H),3.25-3.11(m,2H),2.19-2.05(m,1H),2.03-1.96(m,1H),2.01-1.60(m,2H),1.57(s,3H),1.27-1.12(m,2H),0.97(d,J=7.1 Hz,2H)。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例387 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚 烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺387
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈灰白色固體狀之387(106 mg，68%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.65(s,1H),8.54(d,J=4.6 Hz,1H),8.04(d,J=7.9 Hz,1H),7.81(s,1H),7.76(t,J=7.9 Hz,1H),7.29-7.20(m,1H),6.27(s,2H),4.90(d,J=47.2 Hz,1H),3.73(s,3H),3.58-3.33(m,3H),3.23-3.11(m,2H),2.44-2.22(m,1H),2.11-1.92(m,2H),1.87-1.76(m,1H)。未觀察到可交換之NH2。LCMS(ES+)m/z 431(M+1)
實例388 5-胺基-N-(5-((4S,5R)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲醯胺388
遵循實例107之程序，以N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(3-氟吡啶-2-基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈灰白色固體狀之388(120 mg，74%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.42(s,1H),7.85(t,J=9.8 Hz,1H),7.64(s,1H),7.50-7.44(m,1H),4.85(d,J=47.3 Hz,1H),3.64(s,3H),3.40-3.22(m,3H),3.23-2.83(m,2H),2.31-2.01(m,1H),2.04-1.66(m,2H),1.92-1.48(m,1H)。未觀察到可交換之NH2(x 2)及NH。LCMS(ES+)m/z 449(M+1)
實例389 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺389
在AD管柱上利用15%甲醇對掌性分離外消旋之N-[1-(2-乙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸反-第三丁酯。遵循實例369中之程序，將N-[1-(2-乙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸反-第三丁酯之第一溶離峰轉化成389。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.88(s,1H),7.63(s,1H),7.58-7.40(m,3H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.95(q,J=7.2 Hz,2H),3.24(s,3H),3.22-2.97(m,5H),2.94-2.82(m,1H),2.07-1.95(m,1H),1.90-1.49(m,3H),1.32(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例390 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺390
遵循389之製備，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-(2-乙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸反-第三丁酯之第二溶離峰轉化成390。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.88(s,1H),7.63(s,1H),7.59-7.43(m,3H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.95(q,J=7.2 Hz,2H),3.24(s,3H),3.22-2.98(m,5H),2.94-2.83(m,1H),2.08-1.95(m,1H),1.90-1.47(m,3H),1.32(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS (ES+)m/z 492(M+1)
實例391 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺391
遵循389之製備，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-(2-乙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸反-第三丁酯之第一溶離峰轉化成391。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),8.30(t,J=8.0 Hz,1H),7.60(s,1H),7.49-7.39(m,3H),7.39-7.27(m,2H),3.96(q,J=7.2 Hz,2H),3.26(s,3H),3.24-3.02(m,5H),2.99-2.88(m,1H),2.13-2.01(m,1H),1.91-1.78(m,1H),1.78-1.51(m,2H),1.33(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 474(M+1)
實例392 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺392
遵循390之程序，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-(2-乙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸反-第三丁酯之第二溶離峰轉化成392。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),8.30(t,J=8.0 Hz,1H),7.60(s,1H),7.50-7.38(m,3H),7.33(t,J=7.7 Hz,2H),3.96(q,J=7.2 Hz,2H),3.26(s,3H),3.23-3.03(m,5H),2.98-2.89(m,1H),2.13-2.01(m,1H),1.91-1.50(m,3H),1.33(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 474(M+1)
實例393 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-胺基氮雜環庚烷-1-基]- 1-甲基-吡唑-4-基]-2-(6-羥基-2-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺393
步驟A：在微波反應瓶中，將N-[4-[[5-[(4S)-4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-溴-噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.31 mmol)、6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶-2-醇(205 mg，0.93 mmol)及PDCL2(DPPF)(23 mg，0.031 Mmol)溶解於乙腈(8 mL)中。添加乙酸鉀(1.0 M，0.46 mL,0.46 mmol)及碳酸鈉(1.0 M,0.46 mL，0.46 mmol)且混合物用微波在120℃下照射30分鐘。冷卻混合物，經由Na2SO4及矽藻土過濾，濃縮且經由急驟層析法(甲醇/DCM 0%至10%)純化，得到N-[4-[[5-[(4S)-4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(6-羥基-2-吡啶基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯。
步驟B：在圓底燒瓶中，將以上N-[4-[[5-[(4S)-4-(苯甲氧基羰基胺基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(6-羥基-2-吡啶基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯溶解於DCM(10 mL)中。緩慢添加三溴化硼(1.0 m之DCM溶液，2.2 mL，2.21 mmol)且混合物在室溫下攪拌4小時。減壓濃縮反應物。殘餘物用飽和NaHCO3鹼化且用EA萃取3次。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到393(10.3 mg，7.6%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.98(s,1H),7.60(t,J=7.8 Hz,1H),7.50(s,2H),7.47(s,1H),7.16(d,J=7.2 Hz,1H),6.49(d,J=8.4 Hz,1H),3.65(s,3H),3.21-2.98(m, 5H),1.96-1.71(m,3H),1.71-1.45(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 429(M+1)
實例394 5-胺基-N-[5-[4-(2-胺基乙醯基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺394
步驟A：在362之製備中，將1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷(105 mg，0.47 mmol)、2-(第三丁氧基羰基胺基)乙酸(106 mg，0.61 mmol)及PyBOP(396 mg，0.75 mmol)溶解於DCM(6 mL)中。添加DIPEA(0.49 ml,2.80 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。濃縮粗反應混合物且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到N-[2-[4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(定量產率)。
步驟B：遵循354之程序，將N-[2-[4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯轉化成394(85 mg，24%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.72(d,J=8.0 Hz,1H),7.59-7.39(m,4H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.70-3.58(m,5H),3.58-3.45(m,2H),3.35(d,J=18.5 Hz,2H),3.28-3.22(m,1H),3.22-3.08(m,3H),1.89-1.70(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 491(M+1)
實例395 5-胺基-N-[5-[4-(2-胺基乙基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯 胺395
步驟A：在362之製備中，將1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷(105 mg，0.47 mmol)及N-(2-溴乙基)胺基甲酸第三丁酯(209 mg，0.93 mmol)溶解於乙腈(3 mL)中。添加DIPEA(0.41 mL,2.33 mmol)且混合物在80℃下加熱18小時。濃縮粗反應混合物且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到N-[2-[4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]乙基]胺基甲酸第三丁酯(定量產率)。
步驟B：遵循354之程序，將N-[2-[4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基]乙基]胺基甲酸第三丁酯轉化成395(17 mg)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.74(s,1H),8.33(s,2H),7.58-7.43(m,4H),7.28(t,J=8.7 Hz,2H),3.66(s,3H),3.21(t,J=5.4 Hz,4H),2.82-2.68(m,6H),2.62(t,J=6.1 Hz,2H),1.91-1.76(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)
實例396 N-[5-(3,4,4a,5,6,8,9,9a-八氫-2H-[1,4]噁嗪并[2,3-d]氮呯-7-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺396
在微波反應瓶中，將(4aR,9aR)-2,3,4,4a,5,6,7,8,9,9a-十氫-[1,4]噁嗪并[2,3-d]氮呯二鹽酸鹽(509 mg；2.22 mmol)及5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(322 mg，2.00 mmol)溶解於乙腈(16 mL)中。添加DIPEA(3.11 mL，17.77 mmol)且混合物用微波在130℃下照射60分鐘。反應混合物用水稀釋，用EA 萃取3次。合併之有機層經Na2SO4乾燥且濃縮，得到反-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3,4,4a,5,6,8,9,9a-八氫-2H-[1,4]噁嗪并[2,3-d]氮呯。向此化合物於DCM中之溶液(15 mL)中添加二碳酸二第三丁酯(727 mg，3.33 mmol)及DIPEA(1.16 mL，6.66 mmol)。混合物在室溫下攪拌18小時。濃縮粗反應混合物且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到外消旋7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-2,3,4a,5,6,8,9,9a-八氫-[1,4]噁嗪并[2,3-d]氮呯-4-甲酸反-第三丁酯，在AD管柱上利用20 w%甲醇/0.1% NH4OH對其進行對掌性分離。遵循實例354之程序，將自SFC對掌性分離得到之7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-2,3,4a,5,6,8,9,9a-八氫-[1,4]噁嗪并[2,3-d]氮呯-4-甲酸反-第三丁酯之第一溶離峰轉化成396。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.63(s,1H),7.55(s,1H),7.54-7.43(m,3H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.64(s,3H),3.24-3.13(m,4H),3.13-2.95(m,3H),2.65(d,J=5.6 Hz,2H),2.60-2.52(m,1H),1.82-1.68(m,3H),1.64-1.53(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例397 N-[5-(3,4,4a,5,6,8,9,9a-八氫-2H-[1,4]噁嗪并[2,3-d]氮呯-7-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺397
遵循396之製備，將自SFC對掌性分離得到之7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-2,3,4a,5,6,8,9,9a-八氫-[1,4]噁嗪并[2,3-d]氮呯-4-甲酸反-第三丁酯之第二溶離峰轉化成397。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.63(s,1H),7.55(s,1H),7.53- 7.40(m,3H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.64(s,3H),3.23-3.13(m,4H),3.13-2.94(m,3H),2.65(d,J=6.8 Hz,2H),2.60-2.52(m,1H),1.86-1.65(m,3H),1.65-1.54(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例398 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺398
在AD管柱上利用30%甲醇對掌性分離外消旋之N-[1-[2-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-吡唑-3-基]-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸順-第三丁酯。遵循實例369中之程序，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-[2-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-吡唑-3-基]-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸順-第三丁酯之第一溶離峰轉化成398。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.30(s,1H),7.76(s,1H),7.59-7.41(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),6.55-6.17(m,1H),4.56(s,1H),4.45-4.28(m,2H),3.76(d,J=7.8 Hz,1H),3.26-3.13(m,2H),3.13-2.93(m,3H),1.95-1.77(m,2H),1.73-1.55(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 514(M+1)
實例399 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-羥基-氮雜環庚烷-1-基)-1-(2,2-二氟乙基)吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺399
遵循398之製備，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-[2-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-吡唑-3-基]-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸順-第三丁酯之第二溶離峰轉化成399。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.29(s,1H),7.76(s,1H),7.62-7.41(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),6.55-6.19(m,1H),4.58(s,1H),4.45-4.31(m,2H),3.76(d,J=7.9 Hz,1H),3.25-3.13(m,2H),3.13-2.93(m,3H),1.94-1.77(m,2H),1.71-1.55(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 514(M+1)
實例401 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺401
在AD管柱上利用30%甲醇對掌性分離外消旋之N-[1-(2-環丙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸順-第三丁酯。遵循實例369之程序，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-(2-環丙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸順-第三丁酯之第一溶離峰轉化成401。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.38(s,1H),7.64(s,1H),7.58-7.44(m,3H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.58-3.45(m,1H),3.39(d,J=8.3 Hz,1H),3.27-3.20(m,1H),3.27-3.21(m,1H),3.19(s,3H),3.07(dd,J=11.4,6.5 Hz,2H),2.13-1.96(m,1H),1.85-1.58(m,4H),1.08-0.86(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例402 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺402
遵循401之製備，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-(2-環丙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基 甲酸順-第三丁酯之第二溶離峰轉化成402。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.38(s,1H),7.64(s,1H),7.58-7.41(m,3H),7.27(t,J=8.6 Hz,2H),3.60-3.46(m,1H),3.40(d,J=8.6 Hz,1H),3.33-3.27(m,1H),3.27-3.21(m,1H),3.19(s,3H),3.15-2.99(m,2H),2.11-1.97(m,1H),1.85-1.61(m,4H),1.09-0.87(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例403 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺403
在AD管柱上利用15%甲醇對掌性分離外消旋之N-[1-(2-環丙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸反-第三丁酯。遵循實例369中之程序，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-(2-環丙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸反-第三丁酯之第一溶離峰轉化成403。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),7.60-7.39(m,4H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.59-3.45(m,1H),3.29-3.02(m,8H),2.96-2.85(m,1H),2.10-1.96(m,1H),1.93-1.83(m,1H),1.78-1.65(m,1H),1.65-1.49(m,1H),1.10-0.85(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例404 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-環丙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺404
遵循403之製備，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-(2-環丙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基 甲酸反-第三丁酯之第二溶離峰轉化成404。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.92(s,1H),7.62-7.41(m,4H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.53(t,J=5.4 Hz,1H),3.28-2.99(m,8H),2.96-2.83(m,1H),2.10-1.97(m,1H),1.92-1.80(m,1H),1.79-1.64(m,1H),1.64-1.46(m,1H),1.10-0.82(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例405 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-[4-羥基-4-(三氟甲基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺405
遵循實例101之程序，以1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-4-(三氟甲基)氮雜環庚烷-4-醇及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈淺褐色固體狀之405(53 mg，29%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.95(s,1H),7.94(s,1H),7.39-7.28(m,1H),7.02(t,J=8.7 Hz,2H),6.21(s,2H),3.73(s,3H),3.46(ddd,J=13.7,8.5,5.0 Hz,1H),3.29-3.18(m,3H),2.95(s,1H),2.15-1.97(m,5H),1.87-1.77(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 517(M+1)
實例406 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺406
在AD管柱上利用30%甲醇對掌性分離外消旋之N-[1-(2-乙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸順-第三丁酯。遵循實例369之程序，將自SFC對掌性 分離得到之N-[1-(2-乙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸順-第三丁酯之第一溶離峰轉化成406。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.20-9.01(s,1H),8.39-8.28(s,1H),7.69-7.60(s,1H),7.60-7.45(m,3H),7.35-7.19(t,J=8.7 Hz,2H),4.01-3.89(q,J=8.1,7.7 Hz,2H),3.56-3.47(d,J=6.9 Hz,1H),3.26-3.20(s,3H),3.21-2.88(m,1H),2.15-1.98(s,0H),1.96-1.80(s,0H),1.76-1.60(m,2H),1.37-1.27(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例407 5-胺基-N-[5-(4-胺基-5-甲氧基-氮雜環庚烷-1-基)-1-乙基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺407
遵循406之製備，將自SFC對掌性分離得到之N-[1-(2-乙基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸順-第三丁酯之第二溶離峰轉化成407。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.23-9.02(s,1H),8.40-8.32(s,1H),7.70-7.61(s,1H),7.59-7.45(m,3H),7.35-7.20(t,J=8.7 Hz,2H),4.01-3.90(m,2H),3.56-3.44(d,J=7.1 Hz,1H),3.27-3.20(s,3H),3.21-2.91(m,1H),2.13-1.99(m,1H),1.94-1.79(m,1H),1.77-1.60(m,2H),1.36-1.27(t,J=7.2 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例410 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-5-胺基-4-甲氧基環庚-1-烯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺410
遵循實例378中之程序，以(E)-2-甲氧基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯基胺基甲酸第三丁酯及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-環丙基噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈灰白色泡沫狀之呈單甲酸鹽形式之410(13 mg，4%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.63(s,1H),8.35(s,1H),7.80(s,1H),7.59-7.43(m,3H),7.26(t,J=8.8 Hz,2H),5.93(t,J=6.4 Hz,1H),3.70(s,3H),3.26(s,3H),3.02-2.96(m,1H),2.91(t,J=9.3 Hz,1H),2.68-2.60(m,1H),2.42-2.24(m,4H),1.98-1.89(m,2H),1.48-1.37(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 475(M+1)
實例411 5-胺基-N-[5-(4-胺基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺411
遵循實例101之程序，以4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈淺褐色固體狀之411(68 mg，55%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.98(s,1H),7.91(s,1H),7.38-7.25(m,1H),7.02(t,J=8.7 Hz,2H),6.20(s,2H),3.73(s,3H),3.34-3.26(m,1H),3.33-3.08(m,2H),3.17-3.09(m,1H),1.95-1.78(m,2H),1.77-1.66(m,4H),1.19(s,3H)。未觀察到可交換之NH2。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例412 5-胺基-N-[5-(4-胺基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺412
遵循實例101之程序，以4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈淺褐色固體狀之412(87 mg，74%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.73(s,1H),8.13(t,J=7.7 Hz,1H),7.85(s,1H),7.39-7.30(m,1H),7.26-7.11(m,2H),6.11(s,2H),3.75(s,3H),3.40-3.18(m,3H),3.17-3.09(m,1H),1.98-1.89(m,1H),1.90-1.71(m,5H),1.23(s,3H)。未觀察到可交換之NH2。LCMS(ES+)m/z 444(M+1)
實例413 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-甲氧基環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺413
使5-氟-2-甲氧基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚基胺基甲酸第三丁酯(430 mg，1.27 mmol)於MeOH(50 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，70℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到橙色泡沫狀物。隨後將此泡沫狀物溶解於MeOH(70 mL)且添加10%鈀/碳(45 mg)。隨後在室溫下，在H2氛圍(400 psi)下將混合物攪拌3小時，經由矽藻土過濾且減壓移除溶劑，得到呈橙色泡沫狀之含有5-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-甲氧基環庚基胺基甲酸第三丁酯之複雜混合物(378 mg)。向此混合物(378 mg，1.13 mmol)於DCM(30 mL)中之溶液中添加DIPEA(1.0 mL，5.74 mmol)、PyBOP(1.5 g，2.81 mmol)及5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲酸(418 mg，1.24 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用 DCM(150 mL)稀釋且用水(30 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(70-80% EtOAc/異己烷)純化，得到呈桃紅色固體狀之四種非對映異構體之混合物(240 mg)，藉由製備型HPLC對其進行分離。隨後在室溫下，將各非對映異構體(25 mg，0.03 mmol)與HCl之二噁烷溶液(4 M，0.95 mL，3.80 mmol)一起於MeOH(1 mL)中攪拌18小時。減壓移除溶劑且將粗殘餘物再溶解於MeOH中並裝載至SCX管柱上。該管柱用MeOH洗滌，用含7 N氨之MeOH溶離，得到呈灰白色固體狀之413(非對映異構體1)(13 mg，2%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.43(s,1H),8.21(td,J=7.7,1.9 Hz,1H),7.79(s,1H),7.38-7.32(m,1H),7.26-7.21(m,1H),7.16(dd,J=11.4,8.3 Hz,1H),6.09(s,2H),3.84(s,3H),3.36(s,3H),3.11-2.99(m,2H),2.91-2.84(m,1H),2.13-2.02(m,2H),1.98-1.91(m,2H),1.85(t,J=12.3 Hz,4H),1.58-1.46(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)
實例414 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-甲氧基環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺414
遵循實例413中之程序，得到呈米色固體狀之414(非對映異構體2)(16 mg，2%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.39(s,1H),8.22-8.15(m,1H),7.76(s,1H),7.38-7.31(m,1H),7.27-7.20(m,1H),7.15(dd,J=11.4,8.3 Hz,1H),6.10(s,2H),3.83(s,3H),3.35(s,3H),3.16-3.12(m,1H),3.05(t,J=9.2 Hz,1H),2.95-2.82 (m,1H),2.15-2.00(m,2H),1.98-1.80(m,5H),1.64-1.50(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)
實例415 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-甲氧基環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺415
遵循實例413中之程序，得到呈米色固體狀之415(非對映異構體3)(15 mg，2%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.37(s,1H),8.17(t,J=7.8 Hz,1H),7.72(s,1H),7.38-7.31(m,1H),7.26-7.12(m,2H),6.11(s,2H),3.84(s,3H),3.36(s,3H),2.99(d,J=6.6 Hz,2H),2.92(t,J=7.6 Hz,1H),2.17(dd,J=14.1,7.0 Hz,1H),2.13-1.79(m,7H),1.47(d,J=13.7 Hz,2 H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)。
實例416 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-甲氧基環庚基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺416
遵循實例413中之程序，得到呈米色固體狀之416(非對映異構體4)(14 mg，2%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.37(s,1H),8.17(td,J=7.7,1.9 Hz,1H),7.72(s,1H),7.39-7.31(m,1H),7.26-7.12(m,2H),6.10(s,2H),3.84(s,3H),3.36(s,3H),3.02-2.96(m,2H),2.96-2.87(m,1H),2.22-2.11(m,1H),2.13-1.78(m,7H),1.54-1.41(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)
實例417 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-胺基氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺417
步驟A：在圓底燒瓶中，將N-[(4S)-1-(4-胺基-2-甲基-吡 唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]-2,2,2-三氟-乙醯胺(733 mg，2.40 mmol)、2-溴-5-(第三丁氧基羰基胺基)-1H-咪唑-4-甲酸(955 mg，3.12 mmol)及PyBOP(2020 mg，3.84 mmol)溶解於DCM(40 mL)中。添加DIPEA(2.51 mL，14.4 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。濃縮混合物且經由急驟層析法(EA/庚烷0%至100%)純化，得到N-[2-溴-4-[[1-甲基-5-[(4S)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(1.39 g，95%)。
步驟B：在微波反應瓶中，將N-[2-溴-4-[[1-甲基-5-[(4S)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.16 mmol)、2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶(110 mg，0.49 mmol)及PD(DPPF)CL2(12 mg，0.016 mmol)溶解於乙腈(3 mL)中。添加1.0 M KOAc(0.25 mL，0.25 mmol)及1.0 M Na2CO3(0.25 mL，0.25 mmol)且反應物用微波在120℃下照射30分鐘。冷卻混合物，經由矽藻土過濾，濃縮且經由急驟層析法(EA/庚烷0%至100%)純化，得到N-[2-(2-氟-4-吡啶基)-4-[[1-甲基-5-[(4S)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)胺基]氮雜環庚烷-1-基]吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(60 mg，58%)。在室溫下將此化合物與4 N HCl之二噁烷溶液(3 mL，12 mmol)及甲醇(2 mL)一起攪拌3小時。減壓移除溶劑。將殘餘物溶解於甲醇(3 mL)及水(1 mL)中，添加碳酸鉀(67 mg，0.48 mmol)且混合物在60℃下加熱1.5小時。冷卻至室溫後，反 應混合物用水稀釋且用EA萃取3次。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到417。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.04(s,1H),8.29(d,J=5.3 Hz,1H),7.74(d,J=5.3 Hz,3H),7.59(s,1H),7.42(s,1H),3.66(s,3H),3.24-3.01(m,5H),1.94-1.73(m,3H),1.67-1.48(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 431(M+1)
實例418 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-胺基氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-甲氧基-3-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺418
遵循417之程序，用(2-甲氧基-3-吡啶基)酸代替2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶，製備出418。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.97(s,1H),8.64(d,J=7.6 Hz,1H),8.22(d,J=4.6 Hz,1H),7.40(s,1H),7.32(s,2H),7.22-7.13(m,1H),4.05(s,3H),3.66(s,3H),3.25-2.98(m,5H),2.04-1.79(m,3H),1.77-1.54(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 443(M+1)
實例419 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-胺基氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(1-甲基吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺419
遵循417之程序，用1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡唑代替2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶，製備出419。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.73(s,1H),8.18(d,J=47.7 Hz,1H),7.81(d,J=11.8 Hz,1H),7.53(d,J=24.5 Hz,1H),7.24(s,2H),3.87(s,3H), 3.64(s,3H),3.21-3.01(m,5H),1.96-1.77(m,3H),1.72-1.48(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 416(M+1)
實例420 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-胺基氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(5-氟-3-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺420
遵循417之程序，用3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶代替2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶，製備出420。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.01(s,1H),8.90(s,1H),8.58(d,J=2.4 Hz,1H),8.20(d,J=10.0 Hz,1H),7.61(s,2H),7.39(s,1H),3.66(s,3H),3.22-3.03(m,5H),1.99-1.75(m,3H),1.69-1.51(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 431(M+1)
實例421 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-胺基氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二甲基異噁唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺421
遵循417之程序，用(3,5-二甲基異噁唑-4-基)酸代替2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶，製備出421。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.60(s,1H),8.41(s,1H),7.50(s,1H),7.39(s,2H),3.66(s,3H),3.26-2.98(m,5H),2.65(s,3H),2.47(s,3H),2.04-1.75(m,3H),1.72-1.50(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 431(M+1)
實例422 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3-氟吡啶-4-基)噻唑-4-甲醯胺422
向1-(4-(5-(第三丁氧基-羰基)-胺基-2-溴噻唑-4-甲醯胺 基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.16 mmol)於二噁烷(1.6 mL)中之溶液中添加3-氟-4-(三丁基錫烷基)吡啶(90 mg，0.23 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(0)(9 mg，0.008 mmol)、碘化銅(I)(9 mg，0.05 mmol)及氯化鋰(20 mg，0.48 mmol)。使混合物脫氣5分鐘，之後在微波中於120℃下加熱1小時。減壓濃縮混合物且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-10% MeOH/DCM)純化，得到褐色油狀物(100 mg，96%)。向此油狀物(100 mg，0.15 mmol)於二噁烷(3 mL)中之溶液中添加HCl之二噁烷溶液(4 M，3 mL，12.0 mmol)且混合物在室溫下攪拌36小時。經由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之呈單甲酸鹽形式之422(24 mg，35%)。1H NMR(d6-DMSO)δ 9.11(s,1H),8.70(d,J=2.76 Hz,1H),8.51(d,J=5.10 Hz,1H),8.33-8.20(m,2H),7.69(s,2H),7.49-7.38(m,1H),4.78-4.44(m,1H),3.66(s,3H),3.30-3.10(m,5H),2.22-2.05(m,1H),2.05-1.96(m,1H),1.95-1.90(m,1H),1.75-1.62(m,1H)。未觀察到可交換之NH2。LCMS(ES+)m/z 449(M+1)
實例423 5-胺基-2-(2-氟苯基)-N-[5-(2-甲氧基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-5-基)-1-甲基-吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺423
遵循實例413中之程序，得到呈米色固體狀之423(109 mg，18%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.96(s,1H),8.27(t,J=7.7 Hz,2H),7.37-7.29(m,1H),7.22-7.11(m,2H),6.06(s,2H),3.91(s,3H),3.62-3.56(m, 1H),3.44(s,3H),2.37-2.28(m,1H),2.19-2.00(m,5H),1.89-1.73(m,3H),1.52-1.39(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 457(M+1)
實例424 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺424
在氮氣下向2,2,2-三氟-N-(5-羥基-4-甲基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(200 mg，0.55 mmol)及甲酸銨(700 mg，2.74 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(50 mg，0.13 mmol)。混合物在65℃下加熱2小時，之後冷卻至室溫，過濾且減壓濃縮。使殘餘物於水(10 mL)與DCM(50 mL)之間分配。分離有機層，使其通過相分離柱且減壓濃縮，得到呈紅色膠狀之N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(140 mg)。在室溫下將PyBOP(330 mg，0.62 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(160 mg，0.45 mmol)於DCM(3 mL)中之溶液攪拌30分鐘。添加N-(1-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羥基-4-甲基氮雜環庚烷-4-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(140 mg，0.41 mmol)及DIPEA(140 μL,0.83 mmol)於DCM(2 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌18小時。再添加DCM(50 mL)且混合物用水(20 mL)洗滌。使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。將殘餘物溶解於THF(2 mL)、MeOH(2 mL)及水(1 mL)之混合物中且添加碳酸鉀(200 mg，1.44 mmol)。反應混合物在60℃下加熱18小時，冷卻至室溫，過濾且減壓濃縮。隨後將殘餘物溶解於DCM(3 mL)中且添加三氟乙酸(1 mL)。混合物在室溫下攪拌2小時，減壓濃縮且經由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之424(5 mg，2%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.56(s,1H),7.57(s,1H),7.53-7.44(m,1H),7.15(t,J=8.8 Hz,2H),3.86-3.72(m,5H),3.45-3.35(m,2H),3.26-3.14(m,1H),2.15-1.90(m,4H),1.46(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例425 5-胺基-N-[5-[(4S)-4-胺基氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-氟-5-甲基-3-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺425
遵循417之程序，用2-氟-5-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶代替2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶，製備出425。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.00(s,1H),8.55(d,J=9.7 Hz,1H),8.06(s,1H),7.51(s,2H),7.44(s,1H),3.66(s,3H),3.22-2.95(m,5H),2.38(s,3H),1.92-1.77(m,3H),1.67-1.42(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 445(M+1)
實例426 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3-氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺426
遵循實例422之程序，以1-(4-(5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟 氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之426(76 mg，51%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.16(s,1H),8.71(d,J=2.8 Hz,1H),8.54(d,J=5.2 Hz,1H),8.32-8.19(m,2H),7.70(s,2H),7.45(s,1H),3.69(s,3H，在水峰下)，3.56-3.34(m,3H，在水峰下)，3.37-3.24(m,1H),3.22-3.11(m,1H),2.44-2.31(m,2H),2.03-1.91(m,1H),1.90-1.80(m,1H)。未觀察到可交換之NH2。LCMS(ES+)m/z 467(M+1)
實例428 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(4-甲基-3-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺428
步驟A：在圓底燒瓶中，將N-[(4R,5R)-1-(4-胺基-2-甲基-吡唑-3-基)-5-氟-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(1240 mg，3.80 mmol)、2-溴-5-(第三丁氧基羰基胺基)-1H-咪唑-4-甲酸(1510 mg，4.94 mmol)及PyBOP(3.20 g，6.08 mmol)溶解於DCM(50 mL)中。添加DIPEA(3.97 mL，22.8 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。濃縮混合物且經由急驟層析法(EA/庚烷0%至100%)純化，得到N-[2-溴-4-[[5-[(4R,5R)-4-(第三丁氧基羰基胺基)-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(2.23 g，93%)。
步驟B：在微波反應瓶中，將N-[2-溴-4-[[5-[(4R,5R)-4-(第三丁氧基羰基胺基)-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(161 mg， 0.25 mmol)、(4-甲基-3-吡啶基)酸(105 mg，0.76)及PD(DPPF)CL2(19 mg，0.025 mmol)溶解於乙腈(3 mL)中。添加1.0 M KOAc(0.38 mL，0.38 mmol)及1.0 M Na2CO3(0.38 mL，0.38 mmol)且反應物用微波在125℃下照射30分鐘。冷卻混合物，經由矽藻土過濾，濃縮且經由急驟層析法(EA/庚烷0%至100%)純化，得到N-[4-[[5-[(4R,5R)-4-(第三丁氧基羰基胺基)-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]-2-(4-甲基-3-吡啶基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(95 mg，58%)。在室溫下，將此化合物與4 N HCl之二噁烷溶液(3 mL，12 mmol)及甲醇(2 mL)一起攪拌3小時。減壓移除溶劑。殘餘物用飽和NaHCO3鹼化且用EA萃取3次。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到428(38 mg，58%)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.83(s,1H),8.79(s,1H),8.43(d,J=5.0 Hz,1H),7.49(s,2H),7.47(s,1H),7.37(d,J=4.9 Hz,1H),4.42(dt,J=8.4,5.0 Hz,1H),3.64(s,3H),3.26-3.02(m,5H),2.63(s,3H),2.18-2.02(m,1H),2.02-1.88(m,1H),1.87-1.75(m,1H),1.66-1.53(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 445(M+1)
實例429 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(1,5-二甲基吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺429
遵循428之程序，用1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡唑代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備出 429。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.61(s,1H),7.69(s,1H),7.54(s,1H),7.23(s,2H),4.46(dt,J=48.2,6.6 Hz,1H),3.78(s,3H),3.64(s,3H),3.25-3.04(m,5H),2.56(s,3H),2.21-2.03(m,1H),2.03-1.91(m,1H),1.91-1.76(m,1H),1.71-1.55(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 448(M+1)
實例430 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-甲基-3-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺430
遵循428之程序，用(2-甲基-3-吡啶基)酸代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備出430。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.76(s,1H),8.47(d,J=4.7 Hz,1H),8.04(d,J=7.9 Hz,1H),7.49(s,2H),7.40-7.28(m,1H),4.56-4.34(m,1H),3.64(s,3H),3.26-3.02(m,5H),2.82(s,3H),2.22-2.03(m,1H),2.03-1.89(m,1H),1.89-1.76(m,1H),1.70-1.51(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 445(M+1)
實例431 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-甲基-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺431
遵循428之程序，用(2-甲基-4-吡啶基)酸代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備出431。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.97(s,1H),8.48(d,J=5.2 Hz,1H),7.64(d,J=6.5 Hz,3H),7.58(d,J=5.2 Hz,1H),7.45(s,1H),4.61-4.37(m,1H),3.65(s,3H),3.26-3.06(m,5H),2.22-2.06(m,1H),2.06-1.93(m,1H),1.93-1.76(m,1H),1.70-1.54(m,1H)。 LCMS(ES+)m/z 445(M+1)
實例432 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(6-氰基-2-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺432
遵循428之程序，用6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶-2-甲腈代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備432出。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.03(s,1H),8.44(d,J=8.2 Hz,1H),8.14(t,J=7.9 Hz,1H),8.00(d,J=7.6 Hz,1H),7.74(s,2H),7.44(s,1H),4.67-4.41(m,1H),3.65(s,3H),3.28-3.05(m,5H),2.23-2.06(m,1H),2.06-1.94(m,1H),1.94-1.77(m,1H),1.75-1.57(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 456(M+1)
實例433 5-胺基-N-[5-(4-胺基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺433
藉由SFC對掌性分離外消旋412，得到單一對映異構體433。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.02(s,1H),8.42(s,1H),8.29(t,J=7.8 Hz,1H),7.45(d,J=7.2 Hz,3H),7.42-7.26(m,2H),3.66(s,3H),3.24-2.95(m,4H),1.95-1.53(m,6H),1.23(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 444(M+1)
實例434 5-胺基-N-[5-(4-胺基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺434
藉由SFC對掌性分離412，得到434。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.03(s,1H),8.42(s,1H),8.28(t,J=7.9 Hz,1H),7.45(d,J=11.1 Hz,3H),7.41-7.25(m,2H),3.66(s,3H), 3.24-2.98(m,4H),1.96-1.52(m,6H),1.21(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 444(M+1)
實例435 5-胺基-N-[5-(4-胺基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺435
藉由SFC對掌性分離外消旋411，得到單一對映異構體435。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.96(s,1H),7.58(s,1H),7.56-7.43(m,2H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.65(s,3H),3.23-2.94(m,5H),1.97-1.48(m,6H),1.15(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例436 5-胺基-N-[5-(4-胺基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺436
藉由SFC對掌性分離411，得到436。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.96(s,1H),7.57(s,1H),7.56-7.44(m,2H),7.27(t,J=8.7 Hz,2H),3.65(s,3H),3.25-2.90(m,5H),1.93-1.51(m,6H),1.15(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例437 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(1,3-二甲基吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺437
遵循實例428之程序，用1,3-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡唑代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備出437。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.55(s,1H),8.08(s,1H),7.57(s,1H),7.22(s,2H),4.46(dt,J=48.3,6.7 Hz,1H),3.78(s,3H),3.65(s,3H),3.26-3.03(m,5H), 2.42(s,3H),2.23-2.05(m,1H),2.05-1.92(m,1H),1.92-1.77(m,1H),1.70-1.53(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 448(M+1)
實例438 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺438
遵循實例422之程序，以1-(4-(5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及3,5-二氟-4-(三丁基錫烷基)吡啶為起始物，得到呈白色固體狀之438(68 mg，43%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.83(s,1H),8.67(s,2H),7.78(s,2H),7.61-7.56(m,1H),3.79-3.56(m,4H),3.46-3.33(m,1H),3.37-3.16(m,2H),3.16-3.06(m,1H),2.35-2.08(m,2H),1.91-1.78(m,1H),1.81-1.60(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 485(M+1)
實例439 5-胺基-N-(5-((4S,5S)-4-胺基-5-氟氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(3,5-二氟吡啶-4-基)噻唑-4-甲醯胺439
遵循實例422之程序，以1-(4-(5-(第三丁氧基-羰基)-胺基-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及3,5-二氟-4-(三丁基錫烷基)吡啶為起始物，得到呈白色固體狀之439(42 mg，28%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.84(s,1H),8.65(s,2H),7.75(s,2H),7.58(s,1H),4.44(dtd, J=47.9,8.0,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.26-3.08(m,5H),2.19-2.05(m,1H),2.04-1.79(m,2H),1.73-1.50(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 467(M+1)
實例440 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺440
遵循實例422之程序，以1-(4-(5-(第三丁氧基-羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-6-甲基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯及3,5-二氟-4-(三丁基錫烷基)吡啶為起始物，得到呈白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之440(67 mg，43%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.84(s,1H),8.70(s,2H),8.45(s,1H),7.82(s,2H),7.70(s,1H),3.68(s,3H),3.52(t,J=11.2 Hz,2H),3.36-3.19(m,3H),3.13-3.04(m,1H),3.04(s,3H),2.98(d,J=14.4 Hz,1H),2.18(d,J=14.2 Hz,1H),2.12-1.98(m,1H),1.85-1.75(m,1H),1.68-1.57(m,1H),1.03(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 493(M+1)
實例441 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3-氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺441
遵循實例422之程序，以1-(4-(5-(第三丁氧基-羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-6-甲基氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之呈單甲酸鹽形式之441(72 mg，48%， 經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.15(s,1H),8.71(d,J=2.7 Hz,1H),8.58(d,J=5.1 Hz,1H),8.41(s,1H),8.23(dd,J=5.2,6.4 Hz,1H),7.72(s,2H),7.59(s,1H),3.69(s,3H),3.54(t,J=10.6 Hz,1H),3.33-3.21(m,2H),3.25-2.91(m,5H),2.22-1.95(m,2H),1.82-1.72(m,1H),1.74-1.61(m,1H),1.05(s,3H)。未觀察到可交換之NH2。LCMS(ES+)m/z 475(M+1)
實例442 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(5-氰基-2-氟-苯基)噻唑-4-甲醯胺442
遵循實例428之程序，用(5-氰基-2-氟-苯基)酸代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備出442。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.22(s,1H),8.86(d,J=6.8 Hz,1H),7.91(s,1H),7.67-7.57(m,1H),7.53(s,2H),7.35(s,1H),4.56-4.34(m,1H),3.65(s,3H),3.24-3.00(m,5H),2.20-2.03(m,1H),2.03-1.89(m,1H),1.79(s,1H),1.67-1.50(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 473(M+1)
實例443 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二甲基-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺443
遵循實例428之程序，用2,6-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備出443。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.95(s,1H),7.63(s,2H),7.45(s,1H),7.44(s,2H),4.60-4.35(m,1H), 3.65(s,3H),3.27-3.00(m,5H),2.47(s,6H),2.23-2.06(m,1H),2.06-1.90(m,1H),1.90-1.76(m,1H),1.71-1.54(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)。
實例444 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(5-氰基-3-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺444
遵循實例428之程序，用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶-3-甲腈代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備出444。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.29(s,1H),9.03(s,1H),8.97(s,1H),8.74(s,1H),7.64(s,2H),7.41(s,1H),4.44(dtd,J=11.5,8.2,3.2 Hz,1H),3.64(s,3H),3.27-3.00(m,5H),2.20-2.04(m,1H),2.04-1.89(m,1H),1.89-1.78(m,1H),1.66-1.52(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 456(M+1)
實例445 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,5-二甲基-3-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺445
遵循實例428之程序，用2,5-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶代替(4-甲基-3-吡啶基)酸，製備出445。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.70(s,1H),7.92(d,J=8.0 Hz,1H),7.51(s,1H),7.42(s,2H),7.19(d,J=8.0 Hz,1H),4.43(dt,J=47.9,6.1 Hz,1H),3.64(s,3H),3.27-2.99(m,5H),2.77(s,3H),2.47(s,3H),2.16-2.05(m,1H),2.04-1.89(m,1H),1.87-1.69(m,3H),1.68-1.52(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)
實例446 5-胺基-N-[5-[(5S)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3-氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺446
藉由SFC對掌性分離外消旋426，得到單一對映異構體446。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.09(s,1H),8.70(d,J=2.4 Hz,1H),8.54(d,J=5.1 Hz,1H),8.22(t,J=5.9 Hz,1H),7.68(s,2H),7.49(s,1H),3.78-3.57(m,4H),3.53-3.35(m,1H),3.29-3.04(m,3H),2.37-2.11(m,2H),1.95-1.67(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 467(M+1)
實例447 5-胺基-N-[5-[(5R)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3-氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺447
藉由SFC對掌性分離外消旋426，得到單一對映異構體447。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.11(s,1H),8.70(d,J=2.6 Hz,1H),8.53(d,J=5.1 Hz,1H),8.27(s,1H),8.26-8.16(m,1H),7.68(s,2H),7.47(s,1H),3.79-3.62(m,4H),3.51-3.08(m,3H),2.40-2.19(m,2H),2.02-1.86(m,1H),1.86-1.70(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 467(M+1)
實例448 5-胺基-N-[5-(6-胺基-1-氧雜-9-氮雜螺[3.6]癸-9-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺448
步驟A：將溴化甲基三苯基鏻(3.09 g，8.49 mmol)懸浮於甲苯(25 mL)中。添加含第三丁醇鉀(1.0 mol/L)之THF(7.07 mL，7.074 mmol)且混合物變成亮黃色。將其在室溫下攪 拌4小時，隨後添加含N-[(4S)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-6-側氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(1000 mg，2.83 mmol)(對掌性分離中之第二溶離峰)之5 mL甲苯。混合物在室溫下攪拌30分鐘，用飽和氯化銨淬滅且用EA萃取3次。濃縮合併之有機層且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到N-[(4R)-6-亞甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(699 mg，70%)。
步驟B：將MCPBA(335 mg，1.49 mmol，77質量%)添加至N-[(4R)-6-亞甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(350 mg，1.00 mmol)於DCM(12 mL)中之經攪拌溶液中。混合物在室溫下攪拌隔夜。反應物用飽和NaHCO3淬滅且用DCM萃取3次。濃縮合併之有機層且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到N-[(5S)-8-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-2-氧雜-8-氮雜螺[2.6]壬-5-基]胺基甲酸第三丁酯(316 mg，86%)。
步驟C：向氫化鈉(115 mg，2.87 mmol，60質量%)於DMSO(5 mL)中之經攪拌懸浮液中添加三甲基氧化鋶碘(644 mg，2.87 mmol)且在60℃下攪拌懸浮液2小時，得到澄清溶液。將環氧化物N-[(5S)-8-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-2-氧雜-8-氮雜螺[2.6]壬-5-基]胺基甲酸第三丁酯(320 mg，0.87 mmol)溶解於DMSO(2 mL)中且添加至反應混合物中。所得澄清溶液在65℃下攪拌2天。冷卻至室溫後，反應用水淬滅且用EA萃取3次。濃縮合併之有機層且殘餘物 經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到((9S)-6-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1-氧雜-6-氮雜螺[3.6]癸-9-基)胺基甲酸第三丁酯(114 mg，34%)。
步驟D：使以上化合物於MeOH中之溶液(30 mL)通過H-Cube®(50巴，50℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈褐色油狀之((9S)-6-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-氧雜-6-氮雜螺[3.6]癸-9-基)胺基甲酸第三丁酯。向此油狀物於DCM中之溶液(10 mL)中添加5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(131 mg，0.39 mmol)、PyBOP(251 g，0.48 mmol)及DIPEA(0.31 mL，1.79 mmol)且混合物在室溫下攪拌16小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)稀釋。有機層用水(20 mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/庚烷)純化，得到N-[(6S)-9-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-3-氧雜-9-氮雜螺[3.6]癸-6-基]胺基甲酸第三丁酯(185 mg，90%)。
步驟E：將以上化合物與TFA(5 mL)及DCM(5 mL)一起在室溫下攪拌30分鐘。減壓移除溶劑，用飽和NaHCO3鹼化且用乙酸乙酯(3x)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到448(11 mg，8.4%)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 7.60(s,1H),7.58-7.43(m,3H),7.30(t,J=8.7 Hz,2H),4.39-4.19(m,2H),3.66(s,3H),3.44(d,J=13.9 Hz,1H),3.24-3.13(m, 1H),3.09-2.89(m,3H),2.48-2.38(m,1H),2.34-2.20(m,2H),1.90-1.74(m,2H),1.69-1.51(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例449 5-胺基-N-[5-[(5R)-5-胺基-3-亞甲基-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺449
在448之製備中，將N-[(4R)-6-亞甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯轉化成449。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.73(s,1H),7.56(s,1H),7.55-7.41(m,3H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.89(d,J=9.7 Hz,2H),3.86-3.71(m,2H),3.67(s,3H),3.16-3.05(m,1H),3.05-2.92(m,1H),2.85(s,1H),2.44-2.28(m,1H),1.82-1.69(m,2H),1.53-1.35(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 460(M+1)
實例450 5-胺基-N-[5-[(4S,5S)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-(三氘甲基)吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺450
遵循實例147中之程序，將5-氯-1-三氘甲基-4-硝基-1H-吡唑轉化成450。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.83(s,1H),7.62-7.41(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.41(dtd,J=47.9,8.2,3.6 Hz,1H),3.24-3.02(m,5H),2.18-2.02(m,1H),2.02-1.89(m,1H),1.89-1.78(m,1H),1.69(br,2H),1.64-1.49(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 469(M+1)
實例451 5-胺基-N-[5-[(4R,5R)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚 烷-1-基]-1-(三氘甲基)吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺451
遵循實例150中之程序，將5-氯-1-三氘甲基-4-硝基-1H-吡唑轉化成451。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.83(s,1H),7.60-7.40(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),4.41(dtd,J=48.0,8.2,3.6 Hz,1H),3.24-3.02(m,5H),2.19-2.03(m,1H),2.03-1.88(m,1H),1.88-1.77(m,1H),1.69(br,2H),1.66-1.52(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 469(M+1)
實例452 5-胺基-N-[5-(6-胺基-1-氧雜-9-氮雜螺[3.6]癸-9-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺452
遵循實例448中之程序，將第一溶離峰N-[(4R)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-6-側氧基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯轉化成452。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例453 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺453
在448之製備中，將N-[(4R)-6-亞甲基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯轉化成453。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.65(s,1H),8.41(s,1H),7.61-7.43(m,4H),7.28(td,J=8.8,2.0 Hz,2H),3.66(d,J=3.0 Hz,4H),3.33-3.01(m,3H),2.96-2.77(m,2H),2.19-1.58(m,4H),1.49(dd,J=24.1,11.2 Hz,1H),0.86(dd,J=15.5,6.8 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例454 5-胺基-N-[5-[(5S)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚 烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺454
藉由SFC對掌性分離外消旋438，得到單一對映異構體454。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.81(s,1H),8.66(d,J=1.1 Hz,2H),7.76(s,2H),7.60(s,1H),3.76-3.59(m,4H),3.49-3.34(m,1H),3.28-3.02(m,3H),2.37-2.09(m,2H),1.92-1.61(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 485(M+1)
實例455 5-胺基-N-[5-[(5R)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺455
藉由SFC對掌性分離外消旋438，得到單一對映異構體455。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.79(s,1H),8.66(s,2H),8.28(s,1H),7.76(s,2H),7.58(s,1H),3.78-3.60(m,4H),3.51-3.23(m,3H),3.18-3.05(m,1H),2.42-2.15(m,2H),1.99-1.73(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 485(M+1)
實例456 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-環庚基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺456
使3-羥基-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)環庚-4-烯基胺基甲酸(E)-第三丁酯(620 mg，1.76 mmol)於MeOH(40 mL)中之溶液通過H-Cube®(全H2，70℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C柱)。減壓移除溶劑，得到呈黃色油狀之5-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-羥基環庚基胺基甲酸第三丁酯。向此胺於DCM中之溶液(50 mL)中添加DIPEA(0.92 mL，5.28 mmol)、PyBOP(1.37 g，2.64 mmol) 及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(690 mg，1.94 mmol)且混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(100 mL)稀釋且用水(50 mL)洗滌。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(75% EtOAc/異己烷)純化，得到呈黃色泡沫狀之(5-(4-(5-第三丁氧基羰基胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-羥基環庚基胺基甲酸第三丁酯(890 mg)。將此泡沫狀物(890 mg，1.34 mmol)溶解於DCM(50 mL)中且添加戴斯-馬丁高碘烷(684 mg，1.61 mmol)，混合物在室溫下攪拌1.5小時。混合物用1/1之20%硫代硫酸鈉水溶液/飽和NaHCO3水溶液(100 mL)淬滅，萃取各層，經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到淡黃色固體(500 mg)。將此固體之一部分(356 mg，0.54 mmol)溶解於無水THF(5 mL)中且在0℃下冷卻，之後逐滴添加溴化甲基鎂之溶液(3 M之Et2O溶液，0.72 mL，2.15 mmol)。混合物在0℃下攪拌3小時，之後再添加一定量溴化甲基鎂(3 M之Et2O溶液，0.3 mL，0.9 mmol)。混合物再攪拌6小時，用氯化銨飽和溶液(30 mL)淬滅，用EtOAc(50 mL)萃取且用水洗滌。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑。經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到淡黃色油狀物。藉由製備型HPLC分離所得四種非對映異構體，得到呈白色固體狀之非對映異構體1(22 mg，2%，經歷五個步驟)。將此固體(22 mg，0.03 mmol)溶解於HCl之 二噁烷溶液(4 M，1 mL，4.0 mmol)及MeOH(1 mL)中且在室溫下攪拌5小時。減壓移除溶劑且粗殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈橙色固體狀之456(15 mg，96%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.79(s,1H),8.45(s,2H),7.59-7.50(m,2H),7.33-7.25(m,2H),3.78(s,3H),3.58-3.05(m,1H),3.17(s,1H),2.85-2.77(m,1H),2.08-1.92(m,4H),1.88-1.78(m,5H),1.55-1.44(m,1H),1.17(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)
實例457 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-((4R,5S)-4,5-二羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺457
向2-(2,6-二氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2,3,6,7-四hydro-1H-氮呯-1-基)-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸(Z)-第三丁酯(1.28 g，2.41 mmol)於第三丁醇(35 mL)中之溶液中依序添加N-甲基嗎啉-N-氧化物(0.80 g，6.80 mmol)於水(35 mL)中之溶液及四氧化鋨之溶液(2.5重量%之第三丁醇溶液，2.5 mL)。反應混合物在室溫下攪拌72小時，之後用DCM(100 mL)稀釋且用連二亞硫酸鈉之飽和溶液(50 mL)淬滅，使有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0-10%MeOH/DCM)純化，得到呈褐色膠狀之2-(2,6-二氟苯基)-4-(5-(4,5-同-二羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基胺甲醯基)噻唑-5-基胺基甲酸第三丁酯(0.12 g)。將此膠狀物(0.12 g，0.21 mmol)溶解於HCl之二噁烷溶液(4 M，10 mL，40.0 mmol)及MeOH(2 mL)中且在 室溫下攪拌20小時。減壓移除溶劑且粗殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之457(36 mg，3%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.74(s,1H),7.60-7.50(m,4H),7.34-7.26(m,2H),4.41(d,J=4.1 Hz,2H),3.91(t,J=4.7 Hz,2H),3.67(s,3H),2.96(ddd,J=12.8,7.7,4.4 Hz,2H),2.55-2.52(m,2H),2.02-1.92(m,2H),1.72-1.64(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 465(M+1)
實例458 5-胺基-N-[5-[4-(胺基甲基)-4-甲氧基-1-哌啶基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺458
遵循實例101之程序，以(4-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)哌啶-4-基)甲基胺基甲酸第三丁酯及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸為起始物，得到呈灰白色固體狀之458(30 mg，7%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.56(s,1H),7.56-7.42(m,2H),7.15(t,J=8.7 Hz,2H),3.74(s,3H),3.42-3.33(m,4H),3.23(s,2H),3.12-2.95(m,3H),1.97(d,J=13.6 Hz,2H),1.76-1.66(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例459 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟-4-甲氧基-苯基)噻唑-4-甲醯胺459
向1-(4-(5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.31 mmol)於二甲醚(3 mL)中之溶 液中添加2,6-二氟-4-甲氧基苯基酸(101 mg，0.54 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷之錯合物(50 mg，0.06 mmol)、碳酸鈉(67 mg，0.63 mmol)及水(1 mL)。使混合物脫氣5分鐘，之後在微波中於120℃下加熱2.5小時。減壓濃縮混合物且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EtOAc/異己烷)純化，得到褐色油狀物。向此油狀物於MeOH中之溶液(10 mL)中添加HCl之二噁烷溶液(4 M，10 mL，40.0 mmol)且混合物在40℃下加熱3小時。經由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之459(10 mg，6%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.82(s,1H),7.54(s,1H),7.43(s,2H),6.99-6.88(m,2H),3.85(s,3H),3.79-3.50(m,4H),3.47-3.33(m,1H),3.29-3.16(m,2H),3.15-3.05(m,1H),2.29-2.09(m,2H),1.90-1.78(m,1H),1.77-1.65(m,1H),1.62(s,2H)。LCMS(ES+)m/z 514(M+1)
實例460 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(1,5-二甲基吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺460
遵循實例459中之程序，以1-(4-(5-(第三丁氧基羰基-胺基)-2-溴噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-6,6-二氟氮雜環庚烷-4-基胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈紅色固體狀之460(13 mg，8%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.63(s,1H),7.74-7.65(m,1H),7.59-7.52(m,1H),7.25(s,2H),3.79(s,3H),3.82-3.55(m,4H), 3.48-3.34(m,1H),3.29-3.05(m,3H),2.57(s,3H),2.28-2.05(m,2H),1.92-1.80(m,1H),1.84-1.56(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)
實例461 5-胺基-N-[5-[(5R)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(6-氰基-2-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺461
步驟A：遵循實例166中之程序，將(6,6-二氟-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸(R)-第三丁酯轉化成N-[2-溴-4-[[5-[(5R)-5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯。
步驟B：遵循實例428中之程序，使N-[2-溴-4-[[5-[(5R)-5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯與6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)吡啶-2-甲腈反應，得到461。LCMS(ES+)m/z 474(M+1)
實例462 5-胺基-N-[5-[(5R)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(1,3-二甲基吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺462
遵循實例461中之程序，製備462。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.57(s,1H),8.07(s,1H),7.57(s,1H),7.22(s,2H),3.79(s,3H),3.74-3.57(m,4H),3.49-3.34(m,1H),3.26-3.04(m,3H),2.43(d,J=9.1 Hz,3H),2.31-2.04(m,2H),1.86(d,J=14.1 Hz,1H),1.82-1.59(m,3H)。LCMS (ES+)m/z 466(M+1)
實例463 5-胺基-N-[5-[(5R)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(1,5-二甲基吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺463
遵循實例461中之程序，製備出463。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.62(s,1H),8.28(s,1H),7.68(s,1H),7.53(s,1H),7.23(s,2H),3.78(s,3H),3.75-3.58(m,4H),3.52-3.35(m,1H),3.35-3.23(m,2H),3.21-3.06(m,1H),2.56(s,3H),2.37-2.18(m,2H),1.92(d,J=13.3 Hz,1H),1.80(dd,J=14.9,9.7 Hz,1H)。LCMS(ES+)m/z 466(M+1)
實例464 5-胺基-N-[5-[(5R)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-甲基-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺464
遵循實例461中之程序，製備出464。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.99(s,1H),8.50(d,J=5.2 Hz,1H),8.27(s,1H),7.64(d,J=5.6 Hz,3H),7.57(d,J=5.2 Hz,1H),7.47(s,1H),3.75-3.60(m,4H),3.54-3.37(m,1H),3.37-3.22(m,2H),3.22-3.05(m,1H),2.53(s,3H),2.41-2.22(m,2H),1.99-1.87(m,1H),1.87-1.70(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 463(M+1)
實例465 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-環庚基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺465
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基- 吡唑-3-基]-3-羥基-3-甲基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之465。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.66(s,1H),8.44(s,1H),7.56(s,1H),7.53(t,J=8.4 Hz,1H),7.47(s,2H),7.27(t,J=8.8 Hz,2H),3.77(s,3H),3.53-3.10(m,2H),2.11-1.99(m,1H),1.99-1.78(m,4H),1.72-1.53(m,3H),1.15(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)
實例466 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-環庚基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺466
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-3-羥基-3-甲基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之466。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)
實例467 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-環庚基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺467
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-3-羥基-3-甲基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之467。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)
實例468 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-環庚基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺468
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧 基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-3-羥基-3-甲基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之468。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.70(s,1H),7.85(s,2H),7.60-7.49(m,1H),7.46(s,1H),7.28(t,J=8.7 Hz,2H),3.78(s,3H),3.72-3.42(m,1H),2.99-2.84(m,1H),2.10-1.94(m,3H),1.94-1.74(m,4H),1.65(d,J=13.6 Hz,1H),1.26(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)
實例469 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-環庚基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺469
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-3-羥基-3-甲基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之469。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.70(s,1H),7.85(s,2H),7.60-7.50(m,1H),7.46(s,1H),7.28(t,J=8.7 Hz,2H),3.79(s,3H),3.74-3.43(m,1H),2.99-2.84(m,1H),2.12-1.95(m,3H),1.95-1.71(m,4H),1.65(d,J=13.5 Hz,1H),1.26(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)
實例470 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-羥基-3-甲基-環庚基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺470
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-3-羥基-3-甲基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨 後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之470。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.66(s,1H),8.43(s,1H),7.56(s,1H),7.53(dd,J=11.6,5.2 Hz,1H),7.48(s,2H),7.27(t,J=8.8 Hz,2H),3.76(s,3H),3.51-3.29(m,2H),2.13-2.00(m,1H),2.00-1.79(m,4H),1.72-1.54(m,3H),1.16(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 477(M+1)
實例471 5-胺基-N-[5-[(4S,5S)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺471
藉由SFC對掌性分離外消旋439，得到單一對映異構體471。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.81(s,1H),8.64(d,J=0.9 Hz,2H),7.73(s,2H),7.58(s,1H),4.57-4.34(m,1H),3.65(s,3H),3.26-3.04(m,5H),2.20-1.78(m,5H),1.71-1.51(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 467(M+1)
實例472 5-胺基-N-[5-[(4S,5S)-4-胺基-5-氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺472
藉由SFC對掌性分離外消旋439，得到單一對映異構體472。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.82(s,1H),8.64(d,J=1.1 Hz,2H),7.73(s,2H),7.58(s,1H),4.44(dtd,J=47.9,8.2,3.6 Hz,1H),3.65(s,3H),3.24-3.04(m,5H),2.23-1.71(m,5H),1.68-1.51(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 467(M+1)
實例473 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜 環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺473
藉由SFC對掌性分離外消旋440，得到單一對映異構體473。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),8.67(s,2H),7.76(s,2H),7.70(s,1H),3.66(s,3H),3.31-3.23(m,2H),3.24-3.13(m,1H),3.12-2.92(m,5H),2.00(d,J=14.1 Hz,1H),1.88-1.75(m,1H),1.70-1.55(m,1H),1.42(dd,J=14.3,10.6 Hz,1H),0.99(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 493(M+1)
實例474 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3,5-二氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺474
藉由SFC對掌性分離外消旋440，得到單一對映異構體474。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.85(s,1H),8.67(s,2H),7.76(s,2H),7.70(s,1H),3.66(s,3H),3.29-3.11(m,3H),3.12-2.89(m,5H),2.00(d,J=14.1 Hz,1H),1.89-1.76(m,1H),1.67-1.55(m,1H),1.41(dd,J=14.4,10.5 Hz,1H),0.99(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 493(M+1)
實例475 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3-氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺475
藉由SFC對掌性分離外消旋441，得到單一對映異構體475。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.20(s,1H),8.69(d,J=2.8 Hz,1H),8.57(d,J=5.0 Hz,1H),8.31-8.16(m,1H), 7.69(s,2H),7.68(s,1H),3.67(s,3H),3.46(t,J=10.2 Hz,1H),3.36-3.18(m,2H),3.09-2.91(m,5H),2.09(d,J=14.0 Hz,1H),1.94-1.81(m,1H),1.77-1.59(m,1H),1.50(dd,J=14.2,10.7 Hz,1H),1.02(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 475(M+1)
實例476 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3-甲氧基-3-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(3-氟-4-吡啶基)噻唑-4-甲醯胺476
藉由SFC對掌性分離外消旋441，得到單一對映異構體476。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.20(s,1H),8.69(d,J=2.8 Hz,1H),8.57(d,J=5.1 Hz,1H),8.29-8.21(m,1H),7.69(s,2H),7.68(s,1H),3.67(s,3H),3.46(t,J=10.3 Hz,1H),3.38-3.21(m,2H),3.09-2.94(m,5H),2.09(d,J=14.2 Hz,1H),1.95-1.82(m,1H),1.75-1.63(m,1H),1.50(dd,J=14.2,10.7 Hz,1H),1.02(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 475(M+1)
實例477 5-胺基-2-(2-氟苯基)-N-[1-甲基-5-(1-氧雜-6,9-二氮雜螺[3.6]癸-6-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺477
遵循實例448中之程序，將4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-6-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯轉化成外消旋477。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.46(s,1H),8.35(t,J=6.9 Hz,1H),7.63(s,1H),7.51-7.27(m,5H),4.28(dt,J=15.1,6.3 Hz,2H),3.67(s,3H),3.45(q,J=14.5 Hz,2H),3.23-3.02(m,4H),2.88-2.74(m,2H),2.42-2.29(m,1H), 2.29-2.14(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 458(M+1)。
實例478 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(1-氧雜-6,9-二氮雜螺[3.6]癸-6-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺478
遵循實例448中之程序，將4-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-6-側氧基-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯轉化成外消旋478。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.73(s,1H),7.67(s,1H),7.61-7.41(m,3H),7.29(t,J=8.7 Hz,2H),4.30-4.15(m,2H),3.66(s,3H),3.48-3.33(m,2H),3.21-2.98(m,4H),2.81(t,J=5.8 Hz,2H),2.38-2.25(m,1H),2.25-2.09(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 458(M+1)。
實例479 5-胺基-N-[5-[4-(胺基甲基)-4-羥基-1-哌啶基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺479
遵循實例101之程序，以N-[[4-羥基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-4-哌啶基]甲基]胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈膏狀固體狀之479(37 mg，35%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 8.55(s,1H),7.52-7.43(m,2H),7.20-7.10(m,2H),3.74(s,3H),3.49-3.38(m,2H),3.09-3.03(m,2H),2.92(s,2H),1.85-1.73(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 464(M+1)
實例480 (R)-5-胺基-2-(2-氟苯基)-N-[1-甲基-5-(1-氧雜-6,9-二氮雜螺[3.6]癸-6-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺480
藉由SFC對掌性分離外消旋5-胺基-2-(2-氟苯基)-N-[1-甲基-5-(1-氧雜-6,9-二氮雜螺[3.6]癸-6-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺477，得到480(第一溶離峰)。1H NMR(400 MHz, DMSO)δ 9.46(s,1H),8.41-8.32(m,1H),7.63(s,1H),7.51-7.30(m,5H),4.36-4.19(m,2H),3.67(s,3H),3.45(q,J=14.5 Hz,2H),3.26-3.04(m,4H),2.88-2.71(m,2H),2.42-2.29(m,1H),2.29-2.16(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 458(M+1)。
實例481 (S)-5-胺基-2-(2-氟苯基)-N-[1-甲基-5-(1-氧雜-6,9-二氮雜螺[3.6]癸-6-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺481
藉由SFC對掌性分離5-胺基-2-(2-氟苯基)-N-[1-甲基-5-(1-氧雜-6,9-二氮雜螺[3.6]癸-6-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺477之外消旋混合物，得到481(第二溶離峰)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.46(s,1H),8.36(dd,J=11.1,4.8 Hz,1H),7.63(s,1H),7.52-7.31(m,5H),4.36-4.21(m,2H),3.67(s,3H),3.45(q,J=14.5 Hz,2H),3.21-3.05(m,4H),2.91-2.72(m,2H),2.41-2.31(m,1H),2.26-2.14(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 458(M+1)
實例482 (R)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(1-氧雜-6,9-二氮雜螺[3.6]癸-6-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺482
藉由SFC對掌性分離478之外消旋混合物，得到482(第一溶離峰)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.71(s,1H),7.67(s,1H),7.60-7.44(m,3H),7.28(dd,J=14.5,5.9 Hz,2H),4.30-4.16(m,2H),3.66(s,3H),3.40(q,J=14.7 Hz,2H),3.19-3.00(m,4H),2.82(t,J=5.8 Hz,2H),2.38-2.26(m,1H),2.23-2.13(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 458(M+1)。
實例483 (S)-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-(1-氧雜-6,9-二氮雜螺[3.6]癸-6-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺483
藉由SFC對掌性分離478之外消旋混合物，得到483(第二溶離峰)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.71(s,1H),8.22(s,1H),7.66(s,1H),7.62-7.44(m,3H),7.29(t,J=8.7 Hz,2H),4.30-4.17(m,2H),3.66(s,3H),3.48-3.31(m,2H),3.20-2.99(m,4H),2.82(t,J=5.7 Hz,2H),2.38-2.25(m,1H),2.25-2.12(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 458(M+1)。
實例484 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[1-甲基-5-(1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)吡唑-4-基]噻唑-4-甲醯胺484
遵循實例121之程序，以3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-11-氧雜-3,8-二氮雜螺[5.5]十一烷烷-8-甲酸第三丁酯為起始物，得到呈灰白色固體狀之484(15 mg，30%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.56(s,1H),7.80(s,1H),7.39-7.16(m,1H),7.06-6.96(m,2H),6.12(s,2H),3.75(s,3H),3.69(t,J=4.8 Hz,2H),3.40-3.30(m,2H),2.99-2.92(m,2H),2.88-2.83(m,2H),2.79(s,2H),2.11-2.00(m,2H),1.74-1.63(m,2H)。未觀察到烷基NH。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例485 5-胺基-N-[5-(5-胺基-4-甲氧基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺485
向N-(1-(4-((5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-甲氧基-5-甲基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(0.12 g，0.17 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添加HCl之二噁烷溶液(4 M，10 mL，0.04 mol)。反應混合物在室溫下攪拌16小時，且減壓濃縮。經由製備型HPLC純化，得到呈淺黃色固體狀之485(64 mg，74%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 9.63(s,1H),7.69(s,1H),7.59-7.48(m,3H),7.31-7.22(m,2H),3.61(s,3H),3.31-3.25(m,1H),3.14-3.03(m,2H),3.03(s,3H),2.99-2.89(m,1H),2.11-2.02(m,1H),1.92-1.82(m,1H),1.79-1.59(m,4H),1.47(dd,J=14.5,6.2 Hz,1H),1.19(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例486 N-[5-[(3aR,8aS)-2-側氧基-3a,4,5,7,8,8a-六氫-3H-噁唑并[4,5-d]氮呯-6-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺486
在0℃下向N-((4R,5S)-1-(4-((5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(199 mg，0.30 mmol)於DMF(2 mL)中之經攪拌溶液中添加氫化鈉(60%於油中之分散液，26 mg，0.66 mmol)。使混合物於2小時內升溫至室溫，用水(3 mL)淬滅且濾出所得沈澱，並減壓乾燥。水層用EtOAc(3×3 mL)萃取且使合併之有機層通過相分離柱，減壓濃縮且將殘餘物與先前收集之沈澱合併。將此物質(159 mg，0.27 mmol)於HCl之二噁烷溶液(4 M，10 mL)及MeOH(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑。經由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之486(55 mg，41%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.50(s,1H),7.79(s,1H),7.37-7.28(m,1H),7.05(t,J=8.8 Hz,2H),6.14(s,2H),5.08-5.00(m,1H),4.87(s,1H),4.26(td,J=9.3,3.5 Hz,1H),3.75(s,3H),3.45-3.33(m,2H),3.16-3.07(m,2H),2.34-2.27(m,2H),2.20-2.09(m,1H),2.06-1.97(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例487[(4S,5R)-5-胺基-1-[4-[[5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]氮雜環庚烷-4-基]乙酸酯487
向N-((4R,5S)-1-(4-((5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.3 mmol)及DMAP(55 mg，0.45 mmol)於DCM(2 mL)中之溶液中添加乙酸酐(0.43 mL，0.45 mmol)且混合物在室溫下攪拌2小時。反應混合物用水(3 mL)淬滅且用EtOAc(3×3 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。殘餘物經由矽膠層析法(0-5% MeOH/DCM)純化，得到灰白色固體。將此固體(176 mg，0.25 mmol)於HCl之二噁烷溶液(4 M，10 mL)及MeOH(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌4小時。減壓移除溶劑且殘餘物經由製備型HPLC隨後矽膠層析法(0-10%含7 M NH3之MeOH/DCM)純化，得到呈白色固體狀之487(52 mg，41%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4- MeOD)δ 7.64(s,1H),7.51-7.42(m,1H),7.15(t,J=8.7 Hz,2H),4.19(dt,J=10.1,2.6 Hz,1H),4.13-4.09(m,1H),3.76(s,3H),3.53(ddd,J=13.5,9.7,3.3 Hz,1H),3.35-3.20(m,2H),3.17-3.09(m,1H),2.29-2.18(m,1H),2.09-1.86(m,5H),1.78-1.69(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 506(M+1)
實例488 N-[5-[(3aS,8aR)-2-側氧基-3a,4,5,7,8,8a-六氫-3H-噁唑并[4,5-d]氮呯-6-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺488
遵循實例486之程序，以N-((4S,5R)-1-(4-((5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之488(69 mg，52%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.50(s,1H),7.79(s,1H),7.37-7.28(m,1H),7.05(t,J=8.8 Hz,2H),6.14(s,2H),5.08-5.00(m,1H),4.87(s,1H),4.26(td,J=9.3,3.5 Hz,1H),3.75(s,3H),3.45-3.33(m,2H),3.16-3.07(m,2H),2.34-2.27(m,2H),2.20-2.09(m,1H),2.06-1.97(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例489[(4R,5S)-5-胺基-1-[4-[[5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]氮雜環庚烷-4-基]乙酸酯489
遵循實例487之程序，以N-((4S,5R)-1-(4-((5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基)胺基)-2-甲基-吡唑-3-基)-5-羥基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯為 起始物，得到呈白色固體狀之489(40 mg，31%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δ 7.64(s,1H),7.51-7.42(m,1H),7.15(t,J=8.7 Hz,2H),4.19(dt,J=10.1,2.6 Hz,1H),4.13-4.09(m,1H),3.76(s,3H),3.53(ddd,J=13.5,9.7,3.3 Hz,1H),3.35-3.20(m,2H),3.17-3.09(m,1H),2.29-2.18(m,1H),2.09-1.86(m,5H),1.78-1.69(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 506(M+1)
實例490 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(5-((4R,5R)-4,5-二羥基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺490
向N-(2-(2,6-二氟苯基)-4-((5-(4-羥基-5-((4-甲氧基苯基)甲氧基)氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基)胺甲醯基)噻唑-5-基)胺基甲酸第三丁酯(0.50 g，0.73 mmol)於MeOH(25 mL)中之溶液中添加10% Pd/C(0.20 g)。室溫下，在50 psi氫氣氛圍下將混合物攪拌18小時。反應混合物經由矽藻土過濾且減壓濃縮濾液，得到無色固體。將粗固體溶解於DCM(10 mL)中且添加TFA(10 mL)。反應混合物在室溫下攪拌18小時，減壓濃縮且將粗殘餘物溶解於1/1之MeOH/2 M NaOH水溶液(40 mL)之混合物中且在50℃下加熱18小時。減壓濃縮反應混合物，用水(30 mL)稀釋且用DCM(50 mL)及EtOAc(2×50 mL)萃取。使合併之有機層通過相分離柱且減壓濃縮。經由製備型HPLC純化，得到呈淺黃色固體狀之490(86 mg，25%，經歷兩步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.72-8.63(m,1H),7.61-7.45(m,4H), 7.31-7.23(m,2H),4.57(s,2H),3.63(s,3H),3.52(d,J=6.5 Hz,2H),3.20-3.05(m,4H),1.94-1.86(m,2H),1.74-1.64(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 465(M+1)
實例491 5-胺基-N-[5-[4-胺基-5-(三氘甲氧基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2-氟苯基)噻唑-4-甲醯胺491
遵循實例101及實例333中之程序，以三氘甲基碘為起始物，得到491。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.93(s,1H),8.30(t,J=7.9 Hz,1H),7.52(s,1H),7.50-7.27(m,5H),3.64(s,3H),3.24-3.03(m,5H),3.02-2.87(m,1H),2.13-2.01(m,1H),1.92-1.79(m,1H),1.78-1.53(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 463(M+1)
實例492 5-胺基-N-[5-[4-胺基-5-(三氘甲氧基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺492
遵循實例101及實例333中之程序，以三氘甲基為起始物，得到492。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.87(s,1H),7.63-7.41(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.63(s,3H),3.25-2.98(m,5H),2.98-2.84(m,1H),2.07-1.93(m,1H),1.95-1.80(m,1H),1.79-1.63(m,1H),1.63-1.49(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 481(M+1)
實例493 5-胺基-N-[5-[(5S)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-(三氘甲基)吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺493
遵循實例101及實例112中之程序，將5-氯-1-三氘甲基-4-硝基-1H-吡唑轉化成493。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.82(s,1H),7.61-7.40(m,4H),7.28(t,J=8.7 Hz,2H),3.72-3.56(m,1H),3.50-3.33(m,1H),3.27-3.03(m,3H),2.29-2.08(m,2H),1.91-1.78(m,1H),1.78-1.46(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 487(M+1)
實例494 5-胺基-N-[5-[(5R)-5-胺基-3,3-二氟-氮雜環庚烷-1-基]-1-(三氘甲基)吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺494
遵循實例101及實例112中之程序，將5-氯-1-三氘甲基-4-硝基-1H-吡唑轉化成494。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.82(s,1H),7.60-7.40(m,4H),7.28(t,J=8.7 Hz,2H),3.72-3.55(m,1H),3.48-3.33(m,1H),3.27-3.02(m,3H),2.29-2.05(m,2H),1.90-1.78(m,1H),1.78-1.49(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 487(M+1)
實例495 5-胺基-N-[5-(5-胺基-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺495
向N-(4-((5-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基)胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基)胺基甲酸第三丁酯(0.36 g，0.51 mmol)於MeOH(5 mL)中之溶液中添加HCl之二噁烷溶液(4 M，0.02 mol,5 mL)。反應混合物在室溫下攪拌16小時，且減壓濃縮。經由SCX柱純化，依序用1/1 MeOH/DCM(250 mL)及MeOH(250 mL)洗滌且用含1 N NH3之MeOH(200 mL)溶離，得到呈淺黃色泡沫狀之495(250 mg，87%)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.92(s,1H),7.85(s,1H),7.33(tt,J=8.4,6.1 Hz,1H),7.07-6.99(m,2H),6.28-6.06(m,2H),3.78-3.74(m,3H),3.65-3.40(m,3H),3.29-3.20(m,1H),2.41-2.16(m,2H),1.96-1.85(m,1H),1.77(dt,J=14.7,4.6 Hz,1H),1.26(s,3H)。未觀察到可交換物。LCMS(ES+)m/z 498(M+1)
實例496 5-胺基-N-(5-((3S,4R)-4-(胺基甲基)-3-乙基-4-甲氧基哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺496
遵循實例101之程序，以N-((3-乙基-4-甲氧基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-4-哌啶基)甲基)胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之496(21 mg，33%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.52(s,1H),7.80(s,1H),7.36-7.27(m,1H),7.07-6.97(m,2H),6.15(s,2H),3.75(s,3H),3.18(s,3H),3.20-3.03(m,4H),3.03(d,J=13.8 Hz,1H),2.91(d,J=13.8 Hz,1H),1.89-1.74(m,2H),1.72-1.45(m,5H),0.89(t,J=7.5 Hz,3H)。LCMS(ES+)m/z 506(M+1)
實例497 5-胺基-N-[5-(5-胺基-1-氧雜-8-氮雜螺[3.6]癸-8-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺497
步驟A：用三苯基膦(476 mg，1.78 mmol)處理5-疊氮基- 1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(502 mg，1.78 mmol)(對掌性分離時之第二溶離峰)於THF/水(15 mL/3 mL)中之溶液且反應混合物在60℃下加熱5小時。添加EtOAc(100 mL)且混合物用飽和NaHCO3水溶液(20 mL)洗滌。水層用EtOAc(50 mL)萃取且合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓濃縮，得到油狀物。在0℃下向此油狀物於無水DCM中之溶液(20 mL)中添加DIPEA(0.85 mL，4.88 mmol)及三氟乙酸酐(0.29 mL，2.05 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌4小時。添加水(20 mL)且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色油狀之2,2,2-三氟-N-(5-羥基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺(626 mg，88%)。
步驟B：向此油狀物於DCM中之溶液中添加戴斯-馬丁高碘烷(1.0 eq.)及碳酸氫鈉(4.0 eq.)。混合物攪拌在室溫下隔夜，隨後添加水，且混合物用DCM(100 mL)萃取。分離有機層，經MgSO4乾燥且減壓濃縮。經由矽膠管柱層析法(0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到(S)-2,2,2-三氟-N-(1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-側氧基氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺。
步驟C：遵循實例448中之程序，將(S)-2,2,2-三氟-N-(1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-側氧基氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺轉化成2,2,2-三氟-N-[(10S)-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3-氧雜-7-氮雜螺[3.6]癸-10-基]乙醯胺。藉由SFC對 掌性分離，得到作為單一對映異構體之兩個峰。遵循實例417中所述之程序使第二溶離峰脫除保護基，得到497。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.72-8.61(m,1H),7.56(s,1H),7.54-7.40(m,2H),7.25(t,J=8.6 Hz,2H),3.65(s,3H),3.44-3.33(m,2H),3.08-2.86(m,4H),2.73-2.57(m,1H),1.93-1.66(m,5H),1.66-1.53(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例498 5-胺基-N-[5-(5-胺基-1-氧雜-8-氮雜螺[3.6]癸-8-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺498
在497之製備中，將自SFC對掌性分離得到之2,2,2-三氟-N-[(10S)-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3-氧雜-7-氮雜螺[3.6]癸-10-基]乙醯胺之第一溶離峰轉化成498。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.67(s,1H),7.60-7.41(m,3H),7.25(t,J=8.6 Hz,2H),3.65(s,3H),3.44-3.33(m,2H),3.08-2.86(m,4H),2.65-2.54(m,1H),1.91-1.69(m,5H),1.65-1.50(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例499 5-胺基-N-(5-((1R,5R,6S)-6-胺基-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺499
遵循實例101之程序，以N-[3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛-6-基]胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈灰白色固體狀之呈甲酸鹽形式之499(12 mg，28%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.41(s,1H),8.10(s,1H),7.75(s,1H),7.38-7.29(m,1H),7.08-6.97(m,2H),6.14(s,2H),4.53(d,J=7.2 Hz,1H),4.00(s,1H),3.87(d,J=7.8 Hz,1H),3.77(s,3H),3.51-3.40(m,2H),2.86(d,J=11.2 Hz,1H),2.68-2.53(m,3H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 462(M+1)
實例500 5-胺基-N-[5-[5-胺基-4-羥基-4-(2-羥基乙基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺500
步驟A：遵循實例498中之程序，將5-疊氮基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-醇(502 mg，1.78 mmol)(對掌性分離時之第一溶離峰)轉化成(R)-2,2,2-三氟-N-(1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-側氧基氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺。
步驟B：遵循實例448中所述之程序，將(R)-2,2,2-三氟-N-(1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-5-側氧基氮雜環庚烷-4-基)乙醯胺轉化成2,2,2-三氟-N-[(10R)-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3-氧雜-7-氮雜螺[3.6]癸-10-基]乙醯胺。藉由SFC對掌性分離，得到作為單一對映異構體之兩個峰。遵循實例448中所述之程序及實例417中所述之三氟乙醯胺脫除保護基程序將第一溶離峰轉化成500(氧雜環丁烷開環產物)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.14(s,1H),8.21(s,1H),7.61-7.41(m,4H),7.25(t,J=8.6 Hz,2H),3.64(s,3H),3.47-3.37(m,2H),3.22-2.83(m,5H),2.72(s,1H),2.34-2.17(m,2H),1.94-1.82(m,1H),1.82-1.59(m,2H), 1.59-1.37(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 508(M+1)
實例501 5-胺基-N-[5-(5-胺基-1-氧雜-8-氮雜螺[3.6]癸-8-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺501
遵循實例498中之程序，將自SFC對掌性分離得到之2,2,2-三氟-N-[(10S)-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3-氧雜-7-氮雜螺[3.6]癸-10-基]乙醯胺之第二溶離峰轉化成501。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.67(s,1H),8.39(s,1H),7.61-7.38(m,4H),7.26(t,J=8.7 Hz,2H),3.66(s,3H),3.52-3.17(m,2H),3.12-2.93(m,4H),2.92-2.78(m,1H),2.00-1.77(m,5H),1.72-1.57(m,1H)。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)
實例502 5-胺基-N-[5-(5-胺基-4-甲氧基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺502
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[1-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-5-甲氧基-5-甲基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之502。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.56(s,1H),7.68(s,1H),7.61-7.43(m,3H),7.26(t,J=8.6 Hz,2H),3.61(s,3H),3.18-3.05(m,3H),3.02(s,3H),2.91(t,J=8.2 Hz,1H),2.15-2.02(m,1H),1.96-1.82(m,1H),1.78-1.63(m,1H),1.55-1.40(m,1H),1.18(s,3H)。LCMS (ES+)m/z 492(M+1)
實例503 5-胺基-N-[5-(5-胺基-4-甲氧基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺503
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[1-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-5-甲氧基-5-甲基-氮雜環庚烷-4-基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之503。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 9.54(s,1H),7.68(s,1H),7.60-7.41(m,3H),7.26(t,J=8.6 Hz,2H),3.61(s,3H),3.18-3.05(m,3H),3.01(s,3H),2.92(d,J=7.1 Hz,1H),2.13-2.00(m,1H),1.96-1.81(m,1H),1.76-1.62(m,1H),1.56-1.40(m,1H),1.19(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 492(M+1)
實例504 5-胺基-N-[5-(5-胺基-4-甲氧基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺504
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-2-甲氧基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之504。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.88(s,1H),8.32(s,1H),7.52(s,1H),7.49-7.26(m,4H),7.03-6.91(m,1H),6.70-6.58(m,1H),3.76(s,3H),3.24(s,3H),3.17-3.10(m, 1H),3.02-2.91(m,1H),2.27-2.12(m,1H),2.07-1.84(m,3H),1.76-1.62(m,2H),1.57-1.42(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)
實例505 5-胺基-N-[5-(5-胺基-4-甲氧基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺505
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-2-甲氧基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之505。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.89(s,1H),8.27(s,1H),7.53-7.24(m,5H),7.03-6.91(m,1H),6.67-6.51(m,1H),3.75(s,3H),3.24(s,3H),3.12-2.93(m,2H),2.00-1.61(m,7H),1.58-1.39(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)
實例506 5-胺基-N-[5-(5-胺基-4-甲氧基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺506
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-2-甲氧基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之506。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.89(s,1H),8.27(s,1H),7.55-7.24(m,5H),7.05-6.91(m,1H),6.67-6.54 (m,1H),3.75(s,3H),3.24(s,3H),3.12-2.96(m,2H),1.97-1.62(m,7H),1.60-1.36(m,2H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)
實例507 5-胺基-N-[5-(5-胺基-4-甲氧基-4-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺507
藉由SFC對掌性分離外消旋混合物N-[5-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2-氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-2-甲氧基-環庚基]胺基甲酸第三丁酯，隨後用4 N HCl之二噁烷溶液脫除保護基，得到呈單一對映異構體形式之507。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.87(s,1H),8.33(s,1H),7.52(s,1H),7.48-7.26(m,4H),7.02-6.89(m,1H),6.66-6.55(m,1H),3.76(s,3H),3.24(s,3H),3.17-3.07(m,1H),3.02-2.89(m,1H),2.26-2.09(m,1H),2.12-1.86(m,3H),1.77-1.60(m,2H),1.61-1.40(m,3H)。LCMS(ES+)m/z 459(M+1)
實例508 5-胺基-N-[5-(2,6-二氮雜螺[3.5]壬-6-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺508
步驟A：將5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(0.16 g；0.99 mmol)及2,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯(0.2 g，0.88 mmol)懸浮於丁-1-醇(2 mL)中，隨後添加DIPEA(0.7 mL；3.9616 mmol)。反應混合物在120℃下加熱2天。蒸發所有溶劑且藉由用含0-30%乙酸乙酯之二氯甲烷梯度溶離之矽膠純化粗混合物。獲得呈黃色油狀之6-(1-甲基-4-硝基-1H- 吡唑-5-基)-2,6-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯(200 mg)，產率57%。MS(ESI)m/z：352.2[M+H+]。
步驟B：將8-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-2,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯(200 mg，0.57 mmol)溶解於甲醇(20 mL)中。50℃下，且在50巴氫氣壓力及1 mL/分鐘之流速下，使用H-Cube經由Pd/C柱對溶液進行氫化。反應在經由該系統進行4個循環後完成(流速1 mL/min，80 min)。蒸發後，得到呈淡褐色固體狀之所需產物6-(4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2,6-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯(184 mg，100%)。MS(ESI)m/z：322.3[M+H+]。
步驟C：將5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸(224.4 mg，0.63 mmol)懸浮於二氯甲烷(2 mL)中，隨後添加含HATU(269.3 mg，0.69 mmol)、DIPEA(299.0 mg，2.3 mmol)及8-(4-胺基-2-甲基-吡唑-3-基)-2,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯(184 mg，0.57 mmol)之二氯甲烷(2 mL)。懸浮液在室溫下攪拌16小時。將飽和NaHCO3(5 mL)添加至反應混合物中。分離後，水層用二氯甲烷(5 mL×2)萃取。合併之有機層經Na2SO4乾燥，過濾且蒸發。所得粗混合物在矽膠管柱上用含0-6%甲醇之二氯甲烷梯度溶離來進行純化。獲得作為所需產物6-(4-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2,6-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯之白色固體(336 mg，89%)。MS(ESI)m/z：674.5[M+Na+]。
步驟D：將8-[4-[[5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-羰基]胺基]-2-甲基-吡唑-3-基]-2,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯(336 mg，0.51 mmol)溶解於甲醇(2 mL)及二氯甲烷(2 mL)中，之後添加4 M氯化氫之1,4-二噁烷溶液(2 mL)。該溶液在室溫下攪拌16小時。蒸發後，獲得呈灰白色固體狀之粗混合物(345 mg)。粗混合物藉由逆相HPLC純化，得到呈白色固體狀之508(66 mg，28%)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 8.70(s,1H),7.55-7.45(m,4H),7.26(t,J=8.8 Hz,2H),3.66(s,3H),3.54(s,1H),3.22(s,4H),3.12(s,2H),2.94(t,J=5.3 Hz,2H),1.68-1.60(m,2H),1.58-1.50(m,2H)。MS(ESI)m/z：460.2[M+H+]。
實例509 5-胺基-2-(2,6-二氟苯基)-N-(1-甲基-5-((3aR,8aS)-3a-甲基-2-側氧基四氫-2H-噁唑并[5,4-d]氮呯-6(7H,8H,8aH)-基)-1H-吡唑-4-基)噻唑-4-甲醯胺509
在氮氣下，向3a-甲基-6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3,4,5,7,8,8a-六氫噁唑并[4,5-d]氮呯-2-酮(195 mg，0.66 mmol)及1-甲基-1,4-環己二烯(0.52 mL，4.60 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(35 mg，0.33 mmol)且混合物在60℃下加熱2小時。TLC指示主要為起始物質，因此濾出催化劑且添加新鮮10%鈀/碳(35 mg，0.33 mmol)。混合物在65℃下加熱16小時。TLC指示主要為起始物質，因此濾出催化劑，將體積補足至14 mL MeOH且使混合物通過H-Cube®(全氫模式，75℃，流速：1 mL/min，30 mm 10% Pd/C)。減壓移除溶劑，得到粗胺基-吡唑(175 mg)。在室溫下將HATU(351 mg，0.92 mmol)及5-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(2,6-二氟苯基)-噻唑-4-甲酸(259 mg，0.73 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液攪拌30分鐘。添加粗胺基-吡唑(175 mg，0.66 mmol)及DIPEA(0.18 mL，1.06 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液且混合物在室溫下攪拌16小時。減壓移除溶劑且殘餘物用DCM隨後MeOH濕磨。將剩餘固體懸浮於DMSO(3 mL)及甲醇(5 mL)中，添加HCl之二噁烷溶液(4 M，15 mL)且混合物在50℃下攪拌16小時。減壓移除揮發性溶劑且剩餘DMSO溶液提供用於經由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之509(13 mg，4%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)8.78(s,1H),7.66(s,1H),7.57-7.47(m,4H),7.27(t,J=8.8 Hz,2H),4.45(dd,J=6.8,3.8 Hz,1H),4.02(s,1H),3.66(s,3H),3.31-3.29(m,1H),3.23-3.15(m,1H),3.07-2.95(m,2H),2.09-2.02(m,2H),1.90(t,J=5.1 Hz,2H),1.30(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例510 5-胺基-N-[5-(5-胺基-1-氧雜-8-氮雜螺[3.6]癸-8-基)-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺510
向N-[2-(2,6-二氟苯基)-4-[[1-甲基-5-[(10R)-10-[(2,2,2-三氟乙醯基)胺基]-3-氧雜-7-氮雜螺[3.6]癸-7-基]吡唑-4-基]胺甲醯基]噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(30 mg，0.044 mmol)於甲醇(2 mL)及水(2 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(67 mg，0.48 mmol)。混合物在65℃下加熱8小時。冷卻至室溫後，反應混合物用水稀釋且用EA萃取3次。合併之有機層經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物與DCM(4 mL)及TFA(2 mL)一起攪拌20分鐘且減壓濃縮，用飽和NaHCO3鹼化且用乙酸乙酯(3x)萃取。合併之有機層經MgSO4乾燥且減壓移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到510。LCMS(ES+)m/z 490(M+1)。
實例511 5-胺基-N-[5-[4-胺基-5-(二氟甲基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺511
步驟A：將氯化(甲氧基甲基)三苯基鏻(5.59 g，15.8 mmol)(使用前真空乾燥隔夜)懸浮於乙醚(65 mL)中。將懸浮液冷卻至-15℃。緩慢添加含第三丁醇鉀(1.0 mol/L)之THF(12.6 mL，12.6 mmol)且在-25℃至-10℃下將亮橙色懸浮液攪拌1小時，同時該顏色保持。在-15℃下，將2,2,2-三氟-N-[(4R)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-側氧基-氮雜環庚烷-4-基]乙醯胺(1.38 g，3.95 mmol)溶解於THF(12 mL)中且添加至該內鎓鹽中。使混合物緩慢升溫至室溫且攪拌隔夜，隨後用飽和氯化銨淬滅且用EA萃取3次。濃縮合併之有機層且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到2,2,2-三氟-N-[(4R)-5-(甲氧基亞甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]乙醯胺。
步驟B：向2,2,2-三氟-N-[(4R)-5-(甲氧基亞甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]乙醯胺(1060 mg， 2.81 mmol)於氯仿(90 mL)中之溶液中添加三氯乙酸(1.84 g，11.24 mmol)。混合物在70℃下加熱隔夜，且再添加一份三氯乙酸(1.84 g，11.24 mmol)並持續加熱6小時。冷卻至室溫後，反應用飽和碳酸氫鈉淬滅且用DCM萃取3次。濃縮合併之有機層且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到2,2,2-三氟-N-[(4R)-5-甲醯基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]乙醯胺(896 mg，88%)。
步驟C：向2,2,2-三氟-N-[(4R)-5-甲醯基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]乙醯胺(190 mg，0.52 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液中緩慢添加脫氧-FLUOR(R)(1.16 g,2.62 mmol,50質量%於甲苯中)。混合物在室溫下攪拌1.5小時，用飽和NaHCO3淬滅且用DCM萃取3次。濃縮合併之有機層且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到N-[(4R)-5-(二氟甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]-2,2,2-三氟-乙醯胺(121 mg，60%)。藉由SFC對掌性分離此化合物，得到兩種單一對映異構體。遵循實例497中所述之程序，將自SFC對掌性分離得到之N-[(4R)-5-(二氟甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]-2,2,2-三氟-乙醯胺之第一溶離峰轉化成511。LCMS(ES+)m/z 498(M+1)
實例512 5-胺基-N-[5-[4-胺基-5-(二氟甲基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺512
遵循511之製備，將自SFC對掌性分離得到之N-[(4R)-5-(二氟甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]-2,2,2-三氟-乙醯胺之第二溶離峰轉化成512。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.72(s,1H),7.60-7.36(m,4H),7.30-7.17(m,2H),6.30(t,J=58.2 Hz,1H),3.64(s,3H),3.29-3.21(m,2H),3.21-3.05(m,3H),2.92-2.79(m,1H),2.05-1.87(m,2H),1.79-1.55(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 498(M+1)
實例513 5-胺基-N-[5-[4-胺基-5-(羥基甲基)氮雜環庚烷-1-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺513
步驟A：在511之製備中，將2,2,2-三氟-N-[(4R)-5-甲醯基-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]乙醯胺(192 mg，0.53 mmol)溶解於甲醇(5 mL)中且在冰浴中冷卻。添加硼氫化鈉(41 mg，1.06 mmol)，使其升溫至室溫，且攪拌40分鐘。反應用飽和NaHCO3淬滅且用EA萃取3次。濃縮合併之有機層且殘餘物經由矽膠管柱層析法(0-100% EA/庚烷)純化，得到2,2,2-三氟-N-[(4R)-5-(羥基甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]乙醯胺(120 mg，62%)。
步驟B：遵循實例497中之程序，將2,2,2-三氟-N-[(4R)-5-(羥基甲基)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氮雜環庚烷-4-基]乙醯胺轉化成513。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ 8.72(s,1H),7.60-7.36(m,4H),7.30-7.17(m,2H),6.30(t, J=58.2 Hz,1H),3.64(s,3H),3.29-3.21(m,2H),3.21-3.05(m,3H),2.92-2.79(m,1H),2.05-1.87(m,2H),1.79-1.55(m,4H)。LCMS(ES+)m/z 478(M+1)
實例516 5-胺基-N-(5-((8R,9S)-8-胺基-9-甲氧基-5-氮雜螺[2.6]壬-5-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺516
遵循實例101之程序，以N-[9-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-8-基]胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之516(10 mg，58%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.77(s,1H),7.94(s,1H),7.38-7.28(m,1H),7.08-6.98(m,2H),6.17(s,2H),3.77(dd,J=12.7,1.7 Hz,1H),3.71(s,3H),3.45(s,3H),3.43-3.37(m,1H),3.19-3.12(m,2H),2.65(d,J=2.3 Hz,1H),2.26(d,J=12.7 Hz,1H),2.12-2.00(m,1H),1.79-1.70(m,1H),0.68-0.62(m,1H),0.60-0.43(m,3H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例517 5-胺基-N-(5-((8R,9S)-9-胺基-8-甲氧基-5-氮雜螺[2.6]壬-5-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺517
遵循實例101之程序，以N-[8-甲氧基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-5-氮雜螺[2.6]壬-9-基]胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈白色固體狀之517(5 mg，51%，經歷三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 9.77(s,1H),8.02(s,1H),7.38-7.28(m,1H),7.07-6.97(m,2H),6.24(s,2H), 3.97(d,J=13.2 Hz,1H),3.69(s,3H),3.58-3.50(m,1H),3.34-3.25(m,1H),3.22(s,3H),3.23-3.15(m,1H),2.57(d,J=2.8 Hz,1H),2.31-2.16(m,2H),1.85-1.78(m,1H),0.64-0.53(m,2H),0.49-0.41(m,1H),0.39-0.32(m,1H)。未觀察到烷基NH2。LCMS(ES+)m/z 504(M+1)
實例518 (R)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟-5-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺518
向N-(4-((5R-(5-(第三丁氧基羰基胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基)胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯(205 mg，0.294 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添加HCl之二噁烷溶液(4 M，0.04 mol,10 mL)。反應混合物在40℃下攪拌1小時，且減壓濃縮，得到呈淺褐色固體狀之呈鹽酸鹽形式之518(145 mg，92%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.81(s,1H),8.39(br s,3H),7.65-7.53(m,1H),7.51(s,1H),7.35-7.20(m,2H),3.90-3.75(m,1H),3.74-3.60(m,4H),3.55-3.42(m,2H),3.40-3.30(m,1H),3.25-3.10(m,1H),2.70-2.45(m,2H),2.35-2.15(m,1H),2.00-1.85(m,1H),1.48(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 498(M+1)
實例526 (S)-5-胺基-N-(5-(5-胺基-3,3-二氟-5-甲基氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲醯胺526
遵循實例520之程序，以N-(4-((5S-(5-(第三丁氧基羰基 胺基)-3,3-二氟-5-甲基-氮雜環庚烷-1-基)-1-甲基-吡唑-4-基)胺甲醯基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-5-基]胺基甲酸第三丁酯為起始物，得到呈淺褐色固體狀之呈鹽酸鹽形式之526(147 mg，98%)。1H NMR(400 MHz,d6-DMSO)δ 8.81(s,1H),8.37(br s,3H),7.65-7.53(m,1H),7.52(s,1H),7.35-7.20(m,2H),3.90-3.75(m,1H),3.74-3.65(m,4H),3.60-3.42(m,2H),3.40-3.30(m,1H),3.25-3.10(m,1H),2.70-2.45(m,2H),2.35-2.15(m,1H),2.00-1.85(m,1H),1.46(s,3H)。LCMS(ES+)m/z 498(M+1)
實例901 Pim激酶結合活性
以表現在細菌中之融合蛋白形式產生PIM-1、PIM-2及PIM-3酶，且以IMAC管柱層析法純化(Sun,X.,Chiu,J.F.及He,Q.Y.(2005)Expert Rev.Proteomics,2：649-657)。由American Peptide Company(Sunnyvale,CA)定製合成螢光標記之Pim特異性肽受質。反應緩衝液含有10 mM HEPES(pH 7.2)、10 mM MgCl2、0.01% Tween 20、2 mM DTT。終止緩衝液含有190 mM HEPES(pH 7.2)、0.015% Brij-35、0.2%塗覆試劑3(Coating Reagent 3；Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)、20 mM EDTA。分離緩衝液含有100 mM HEPES(pH 7.2)、0.015% Brij-35、0.1%塗覆試劑3、1：200塗覆試劑8(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)、10 mM EDTA及5% DMSO。
PIM反應係在384孔盤中以每孔10 μL之最終體積進行。標準酶促反應物，係藉由添加5 μL 2X ATP及測試化合物 至5 μL 2X酶及FAM-肽中來引發反應，其在反應緩衝液中含有20 pM PIM1、50 pM PIM2或55 pM PIM3；1 μM FAM-肽，及10 μM ATP。在室溫下培育90分鐘後，藉由添加10 μL終止緩衝液來中止磷酸化反應。用在Caliper LC3000®(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)上運作之帶有12個吸樣針之微流體晶片(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)分離每一獨立反應中之產物及受質。藉由使用Caliper之優化軟體(Hopkinton,MA)選擇電壓及壓力來優化產物與受質之分離。分離條件使用-500V之下游電壓、-2150V之上游電壓及-1.2 psi之篩選壓力。在488 nm下激發產物及受質之螢光團且在530 nm下偵測。使用HTS Well Analyzer軟體(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)，由電泳圖譜計算受質轉化率。計算測試化合物之Ki值。關於例示性化合物之代表性PIM1 LC3K Ki之微莫耳濃度值，參見表1。
實例902 活體外細胞增殖效力分析
自DSMZ庫獲得BaF3親本株。產生經PIM1或PIM2轉染之BaF3株。自R&D Systems購得小鼠IL-3。自Clontech購得G418。BaF3親本株之培養基含有RPMI、10% FBS、2 mM L-麩醯胺酸、2 ng/mL mIL-3。BaF3 PIM1及PIM2株之培養基含有RPMI、10% FBS、2 mM L-麩醯胺酸、250 μg/mL。MM1.S(多發性骨髓瘤細胞)株之培養基含有RPMI、10% FBS、2 mM L-麩醯胺酸。
將BaF3(一種鼠類介白素-3依賴性原B細胞株)親本細胞、BaF3 PIM1細胞、BaF3 PIM2細胞及MM1.S(多發性骨 髓瘤)細胞分別以2000個/孔、5000個/孔、5000個/孔及10000個/孔接種於384孔盤中，每孔45 μL。以每孔5 μL添加測試化合物。將BaF3細胞(親本及經轉染細胞)培育隔夜，而MM1.S細胞在37℃、5% CO2下培育72小時。以每孔50 μL添加CELL TITER GLO®試劑(Promega)，將各盤培育30分鐘，且在HT Analyst上讀取其發光度。計算測試化合物之IC50/EC50值。
如上文所述測試本發明之代表性化合物，且發現其展現如下表2a及表2b中所示之Ki/IC50/EC50。
「包含」及「包括」等詞當用於本說明書及以下申請專利範圍中時，意欲表示所述特徵、整數、組分或步驟之存在，但其並不排除一或多個其他特徵、整數、組分、步驟或其群組之存在或添加。
儘管已出於理解清楚之目的而藉助於說明及實例相當詳細地描述了前述發明，但該等描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文中引用之所有專利及科技文獻之揭示內容均以全文引用之方式明確地併入本文中。
圖1顯示由硝基-1H-吡唑1例示性合成4-胺基吡唑化合物5。
圖2顯示由羥醯胺化合物6例示性合成4-羧基-噻唑11。
圖3顯示藉由12之C-2溴化隨後13之鈴木反應來例示性合成2-取代之4-羧基-5-胺基噻唑11。
圖4顯示由4-胺基-5-氮雜環庚烷基吡唑化合物14與2-溴、4-羧基-5-胺基噻唑11偶合來製備5-氮雜環庚烷基-N-(吡唑-4-基)噻唑-甲醯胺化合物17的例示性合成。
圖5顯示由4-胺基-5-氮雜環庚烷基吡唑化合物14與2-溴、3-Boc-胺基、6-羧基-吡啶基化合物18偶合來製備6-胺基-N-(吡唑-4-基)吡啶基-甲醯胺化合物21的例示性合成。
圖6顯示由4-胺基、5-二氮雜環庚烷基吡唑化合物22與2-溴、3-取代、6-羧基-5-胺基吡嗪基化合物23偶合來製備6-胺基-N-(吡唑-4-基)吡嗪-甲醯胺化合物26的例示性合成。
圖7顯示由2,3,6,7-四氫-1H-氮呯27例示性合成5-疊氮基-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷32。
圖8顯示由6,7-二氫-1H-氮呯-3(2H)-酮33例示性合成5-Boc-胺基-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷39。
圖9顯示由4-硝基-1H-吡唑2例示性合成5-(4-疊氮基-1-氟環庚基)-4-硝基-1H-吡唑45。
圖10顯示由5-氯-4-硝基-1H-吡唑3例示性合成3-氟-1-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氮雜環庚烷-4-胺52。

Claims (30)

  1. 一種選自式I之化合物： 及其立體異構體、幾何異構體、互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，其中：R1係選自H、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C6-C20芳基、C3-C12碳環基、C2-C20雜環基、C1-C20雜芳基及-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)；R2係選自以下結構： 其中波形線指示連接位點，虛線指示視情況存在之雙鍵；R3係選自H、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2NH2、-CH2NHCH3、-CH2CH2NH2、-CH2CHCH2NH2、-CH2CH(CH3)NH2、-CH2OH、-CH2CH2 OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2C H2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CN、-CF3、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-COCH2NH2、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-CH2OCH3、-S(O)2CH3、環丙基、環丁基、環戊基、環己基及環庚基；R4係獨立選自F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-C(CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH=CH2、-CH=C(CH3)2、=CH2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2NH2、-CH2NHCH3、-CH2CH2NH2、-CH2CHCH2NH2、-CH2CH(CH3)NH2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CN、-CO2H、-COCH3、-COCH2NH2、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NO2、-NH2、-NHCH3、 -N(CH3)2、-NHCH2CHF2、-NHCH2CF3、-NHCH2CH2OH、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHC(O)OCH2CH3、-NHC(O)OCH2Cl3、-NHC(O)OC6H5、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、=O、-OH、-OCH3、-OCHF2、-OCH2F、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-OCH2CH(CH3)2、-OC(CH3)3、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-CH2OCH3、-S(O)2CH3、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、氧雜環丁烷基、氧雜環丁烷-3-基甲基胺基、(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基胺基、吡咯啶基、哌嗪基、哌啶基、(哌啶-4-基)乙基、哌喃基、(哌啶-4-基甲基)、N-嗎啉基(morpholino)甲基及N-嗎啉基；或其中兩個偕位(geminal)R4基團形成選自以下之螺環：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡咯啶基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、氧雜環丁烷基、吡咯啶基、哌嗪基或哌啶基環，其中該螺環視情況經一或多個獨立選自以下之基團取代：-F、-OH、=O、-CH3、-NH2、-CH2F、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2NH2及-CF3；或其中兩個鄰位R4基團或R4基團與R3基團形成5員或6員雜環基稠環，其中該雜環基稠環視情況經一或多個獨立選自以下之基團取代：-F、-OH、=O、-CH3、-NH2、-CH2F、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2NH2及-CF3；n為0、1、2或3；X係選自以下結構： 其中波形線指示連接位點；R5係選自H、Cl、Br、C1-C12烷基、-(C1-C12伸烷基)-(C3-C12碳環基)、-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)、-(C2-C8伸烯基)-(C3-C12碳環基)、-(C2-C8伸烯基)-(C2-C20雜環基)、C6-C20芳基、-(C6-C20伸芳基)-(C2-C20雜環基)、-(C6-C20伸芳基)-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)、C3-C12碳環基、C2-C20雜環基及C1-C20雜芳基；其中烷基、烯基、炔基、伸烷基、碳環基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經一或多個獨立選自以下之基團取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2NH2、-CH2CH2NH2、-CH2CHCH2NH2、-CH2CH(CH3)NH2、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CN、-CF3、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2 S(O)2CH3、=O、-OH、-OCH3、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-CH2OCH3、-S(O)2CH3、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、氧雜環丁烷基、吡咯啶基、哌嗪基、哌啶基、(哌啶-4-基)乙基、哌喃基、(哌啶-4-基甲基)、N-嗎啉基甲基及N- 嗎啉基；及R6獨立地為H或-NH2。
  2. 如請求項1之化合物，其中R1為H。
  3. 如請求項1之化合物，其中R1為C1-C12烷基或C3-C12碳環基。
  4. 如請求項3之化合物，其中R1係選自-CH3、-CH2CH3、-CH2CHF2及-CH2CF3。
  5. 如請求項1之化合物，其中R1為-(C1-C12伸烷基)-(C2-C20雜環基)。
  6. 如請求項5之化合物，其中R1為氧雜環丁烷-3-基甲基。
  7. 如請求項1至6中任一項之化合物，其中R3為H或-CH3。
  8. 如請求項1至6中任一項之化合物，其中R4係獨立選自F、Cl、-OH、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCH2CHF2、-NHCH2CF3、-CH2NHCH3及-OCH3；且n為1、2或3。
  9. 如請求項1至6中任一項之化合物，其中R5為C6-C20芳基。
  10. 如請求項1至6中任一項之化合物，其中R5為經一或多個F取代之苯基。
  11. 如請求項1至6中任一項之化合物，其中R6為-NH2。
  12. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式Ia結構：
  13. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式Ib結構：
  14. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式Ic結構：
  15. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式Id結構：
  16. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式Ie結構：
  17. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式If結構：
  18. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式Ig結構：
  19. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式Ih結構：
  20. 如請求項1至6中任一項之化合物，其具有式Ii結構：
  21. 如請求項1之化合物，其選自表1a。
  22. 如請求項1之化合物，其選自表1b。
  23. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至22中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑、滑動劑、稀釋劑或賦形劑。
  24. 如請求項23之醫藥組合物，其進一步包含化學治療劑。
  25. 如請求項23之醫藥組合物，其用於治療選自癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能病症及神經學病症及由Pim激酶介導之疾病或病症。
  26. 一種如請求項1至22中任一項之化合物的用途，其用於製造用以治療癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能病症及神經學病症之藥物，其中該藥物調節Pim激酶。
  27. 如請求項26之用途，其中該疾病或病症為選自以下之癌症：多發性骨髓瘤、乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、胃癌、皮膚癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮樣癌、大細胞癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞癌、肺腺癌、骨癌、結腸癌、腺瘤、胰臟癌、腺癌、甲狀腺癌、濾泡癌、未分化癌、乳頭狀癌、精原細 胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌及膽道癌、腎癌、胰臟癌、骨髓病症、淋巴瘤、毛細胞癌、頰腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小腸癌、結腸直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦癌及中樞神經系統癌、霍奇金氏病(Hodgkin's)、白血病、支氣管癌、甲狀腺癌、肝癌及肝內膽管癌、肝細胞癌、胃癌、神經膠質瘤/神經膠母細胞瘤、子宮內膜癌、黑色素瘤、腎癌及腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、子宮頸癌、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴球性白血病、骨髓白血病、口腔癌及咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤及結腸絨毛腺瘤。
  28. 如請求項26之用途，其中該藥物進一步包含另一治療劑，該治療劑選自化學治療劑、消炎劑、免疫調節劑、神經營養因子、用於治療心血管疾病之藥劑、用於治療肝病之藥劑、抗病毒劑、用於治療血液病症之藥劑、用於治療糖尿病之藥劑及用於治療免疫缺乏病症之藥劑。
  29. 如請求項1至6中任一項之化合物，其用於治療癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能病症及神經學病症，其中該化合物調節Pim激酶。
  30. 一種用於治療Pim激酶介導之病狀的套組，其包含：a)如請求項23之醫藥組合物；及b)使用說明書。
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