TW201204365A - Purine compounds - Google Patents

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201204365 六、發明說明： 【先前技術】 大麻素受體CB!&CB2屬於G蛋白偶聯受體（GPCR)類。 CB!受體在中樞及外周表現，而CB2受體主要在外周、且 主要在免疫細胞及組織上表現。 最近已論述CB2受體之藥理及治療潛能（Br. J. Pharmacol. (2008) 153，319-334)，其將CB2鑒定為疼痛、具體而言炎 症性及神經性疼痛治療之治療乾標。 CB2激動劑、具體而言CB2-選擇性激動劑提供治療疼痛 之靶標，其具有有限中樞調介之副作用。 WO 2004/03 7823係關於嘌呤化合物及其作為大麻素受體 配體、具體而言作為CBi受體拮抗劑之用途。 由於與當前口服藥理學藥劑相關之副作用，業内仍需要 發展疼痛治療之替代療法。 【發明内容】 本發明提供具有下式之化合物：

其中： 154267.doc 201204365 R1 為 Cl 或 CH3 ; R2係 OH、OCH3、CH2〇H 或 CH2OCH3 ; R係H或與R組合形成稠合^比洛咬酮； R 係 Ci-C2 院基、C丨-C2 氟烷基、c(〇)CH3 或 C02CH3 ; R5係 Η、CH3 或 CH2OCH3 ; R6係Η、CH3或與R5組合形成環丙烷環；且 η為0或1 ; 或其醫藥上可接受之鹽。 已發現本發明化合物為活體外CB2受體之激動劑。本發 明之某些化合物呈現比現存cb2激動劑大之效能。本發明 之某些化合物係CB2·選擇性激動劑。本發明之某些化合物 呈現比CB2激動劑大之cb2-選擇性。 本發明提供醫藥組合物’其包含本發明化合物或其醫藥 上可接受之鹽、及醫藥上可接受之稀釋劑或載劑。此外， 本發明提供醫藥組合物，其包含本發明化合物或其醫藥上 可接受之鹽、以及醫藥上可接受之稀釋劑或載劑及視情況 一或多種其他治療成份。 本發明提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法 中。本發明提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治 ?疼痛、具體而言骨關節疼痛。在本發明之另一態樣中， 提供化合物或其醫藥上可接受 的用途’其用於製造用 於^療疼痛、具體而言骨關節疼痛之藥劑。 之2明之另一態樣中，提供化合物或其醫藥上可接受 之鹽的料，其用於製造用於治療或預防疼痛、具“言 154267.doc 201204365 化學療法誘發之疼痛的藥劑。 本發明提供治療疼痛之方法，其包含向需要其之 動物投與有效量之本發明化合物或其醫藥上可接：二貝或 本發明亦提供治療或預防疼痛之方法，其包八〇之鹽。 • ^ 要 之 人類或動物投與有效量之本發明化合物或其醫藥上可接為 之鹽。本發明亦提供治療骨關節疼痛之方法，其包含向: 要其之人類或動物投與有效量之本發明化合物或其=7 可接受之鹽。 ' μ 本發明亦提供治療或預防化學療法誘發之疼痛的方法， 其包含向需要其之人類或動物投與有效量之本發明化合物 或其醫藥上可接受之鹽。 本發明化合物較佳用於治療疼痛、具體而言炎症性疼 痛、更具體而言關節疼痛、最具體而言骨關節疼痛。 本發明化合物較佳用於治療或預防疼痛、具體而言化學 療法誘發之疼痛。 【實施方式】 CB2受體激動劑已鑒定為具有治療多發性硬化之治療潛 能（Br. J. Pharmacol. (2008) 153，216-225及 J. Biol. Chem. (2008) 283，13320-13329)。此外，CB2受體激動劑已鑒定 為具有治療癌症誘發之骨疼痛的潛能（Life Sciences 86 (2010) 646-.653) » 本發明之較佳物質係下式化合物： 154267.doc 201204365 R4

或其醫藥上可接受之鹽，其中R2、R4、R5、R6&n如本文 所定義。 本發明之較佳物質係下式化合物：

或其醫藥上可接受之鹽，直中R2 ^ 俠又瓜八T R、R、R5及R6如 本文所定 義0 以下所列舉選擇闡 式I、II或III化合物之某些類別較佳 述此等較佳類別： 1) R1 係 C1 ; 2) R2係 OH或 CH2OH ; 3) R2係 CH2〇H ; 4) R3係 Η ; 154267.doc 201204365 5) R4 係 Ci-Cz 烷基、CVC2 氟烷基或 C(0)CH3 ; 6) R4係曱基、乙基、2-氟乙基或C(0)CH3 ; 7) R4係甲基或乙基； 8) R5係 Η或 CH3 ; 9) R5係 Η ; 10) R6係 Η 或 CH3 ; 11) R6係 CH3 ; 12) η為 0 ; 13) R5係 Η且 R6係 CH3 ; 14) R2係OH或CH2〇H ;且R4係曱基、乙基、孓氣乙基或 C(0)CH3 ； 15) R2係OH或CH2OH ;且R4係甲基或乙基； 16) R2係〇H或CH2OH ;且R4係曱基； 17) R2係CH2OH ; R4係曱基 '乙基、翁 机乙基或 C(0)CH3 ; R5係 η且 R6係 CH3。 本發明化合物中之每一者的醫藥上可接受之鹽皆函蓋於 本申請案之範疇内。 本文定義」 ’則該基團 及所有特定 如貫穿本說明書所用，應瞭解，若基團由「 (「defined herein」或「herein defined」）修飾 涵蓋首次出現且最廣泛定義以及該基團之每— 定義* 除非另有說明’否則上文及本發明說明通篇 两尸々用之下列

術語應具有下列含義： J 本文所用術語C^-C：2烷基係指甲基或乙基。 154267.doc 201204365 本文所用術語CrC2氟烷基係指如本文所定義之（^匕烷 基，其中一或多個氫經氟替代，且包括三氟甲基、2_氟乙 基、2,2-二氟乙基及2,2,2三氟乙基。較佳烧基係^ 氟乙基。本文所用術語「同分異構體丨」及「同分異構體 2」係指最終化合物或中間體之特定對映異構體，「同分異 構體1」係指自所述層析過程洗脫之第一化合物且「同分 異構體2」係指自所述層析過程洗脫之第二化合物。若首 先用術語「同分異構體丨」或「同分異構體2」描述中間 體，則此術語亦適用於最終化合物。 本文所用術語「醫藥上可接受之鹽」係指本發明化合物 對活的有機體實質上無毒之鹽。該等鹽及其普通製備方法 已為業内熟知。例如，參見P. Stahl等人，Handb〇〇k 〇f Pharmaceutical Salts: Properties Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH，2002);及 J. Pharm· Sci. 66，2_19 (1977) »較佳醫藥上可接受之鹽係鹽酸鹽及草酸鹽。 本發明之實施例包括本文所提供之實例，且儘管所提供 實例可具有一種對掌性或構象形式或其鹽，但本發明之其 他貫施例包括所述實例之所有其他立體異構及構象形式、 以及其醫藥上可接受之鹽。 本文所用術語「CB2·選擇性激動劑」或「CB2_選擇性」 係指於CB2下具有比CB,大之效能。較佳地，本發明化合 物呈現00倍之CB2·選擇性。更較佳地，本發明化合物呈 現2500倍之CBf選擇性。最佳地’本發明化合物呈現 000倍之CB2-選擇性。 154267.doc 201204365 本發明化合物較佳調配成可藉由多種途徑投與之醫藥組 合物。較佳地，該等組合物係口服。該等醫藥組合物及製 備其之方法已為業内所熟知。例如，參見Remingt〇n: The

Science and Practice of Pharmacy(A.Gennaro等人編輯，第 19版，Mack Publishing公司，1995)。 可利用配備有CuKa來源（λ=1.54060 A)及Vantec檢測器且 於35 kV及50 mA下操作之Bruker Endeavor ® X射線粉 末繞射儀獲得本發明化合物之χ射線繞射（XRD)圖案。在 4°與40。2Θ之間掃描試樣，其中步長為〇〇〇9。20且掃描速 率為0.5秒/步，且使用〇·6 mm發散狹縫、5 28 mm固定防散 射狹縫及9.5 mm檢測器狹縫β ±〇.2 2Θ之學位置變化將考慮 到電位變化，且不阻礙指定晶形之明確鑒定。 本發明之較佳化合物係2·[8_(2_氣-苯基）_2·甲基_6_(4_甲 基-哌嗪-1-基）-嘌呤_9-基]-丙·丨·醇；更佳化合物係（2R)_2_ [8-(2-氣苯基）_2_曱基_6_(4·曱基哌嗪“基）嘌呤_9基]丙-卜 醇。 藉由XRD來表徵（2R)-2-[8-(2-氯苯基）-2-甲基-6-(4-甲基 哌嗪-1-基）嘌呤_9-基]丙_ι_醇之較佳形式，其在8 26處具有 、，堯射峰（29值）且具有一或多個選自19.68、14.81及13.20 (土 〇.2°)之峰，較佳在8.26及19.68處具有繞射峰且具有一或 多個選自14.81及13.20 (土0.2〇)之峰。 提供下列反應圖、製備及實例以更好地闡明本發明之實 踐。適於該等反應圖、製備及實例之步驟的反應條件已為 業内所熟知且反應條件之適當修改（包括替代溶劑及共試 154267.doc 201204365 劑）在熟習此項技術者之能力内。 而且，熟習此項技術者應瞭解，在一些情形下，引入各 部分之順序並不重要化合物所需步驟之特定順 序取決於所合成之特定化合物、起始化合物、及經取代部 分之相對不穩^性’該等因素為熟習此項技術者所熟知。 熟習此項技術者應瞭解，並非所有取代基均與所有反應條 件相容。可在合成之方便時刻藉由業内熟知之方法保護或 修飾該等化合物。 適宜保護基團包括彼等以下中所述者：「Pr〇tective

Groups in Organic Synthesis」，John Wiley 及 Sons，New

York，N.Y·，1991，下文稱作「Greenej。如咖指示欲由 熟習此項技術者使用之適宜保護基團之「保護」及「去保 護」的適當條件。 若需要，可藉由普通技術（例如在固體載體（例如矽膠或 氧化铭）上之重結晶或層析）進一步純化本發明之中間體及 最終產物。 使用具有IUPAC命名功能之Symyx 3.1版.NET產生本發 明化合物之名稱。 本文所用之縮寫係如下定義：「鹽水」意指飽和氣化鈉 水溶液；「BSA」意指牛血清白蛋白；r DCM」意指二氣曱 烷；「DDQ」意指2,3-二氣·5,6-二氰基-1,4-苯醌； 「DMAC」意指Ν，Ν·二甲基乙醯胺；r DMF」意指Ν，Ν-二 甲基甲醢胺；「EDTA」意指伸乙基二胺四乙酸；r Et〇 Ac」 意指乙酸乙酯；「GDP」意指鳥苷二磷酸；「hePES」意指 154267.doc 201204365 4-(2-羥基乙基）-1-哌嗪乙磺酸；「IPA」意指2_丙醇； 「IPAm」意指2-丙胺；「MeOH」意指甲醇；「scx」意指 二氧化矽基強陽離子交換樹脂管柱、可棄·式怎柱或等效 物；「SFC」意指超臨界流體層析；r thf」意指四氫β夫 喃；「tBOC」意指第三丁氧基羰基。 反應圖1

R^(CH2)nNH2 步驟1 (1)

可根據如反應圖1中所繪示反應製備式（〗）化合物。 在步驟1中，使4,6-二氣-2-甲基-嘧啶_5_基胺與胺（丨）在 置換反應中反應以提供二胺基嘧啶。可在適宜鹼（例如 二乙胺或二異丙基乙胺）存在下在適宜溶劑（例如異丙醇）中 於高溫（例如約100°C至160°C )下較佳在密封管中進行反 應。或者，可使用微波輻照完成該反應。 在步驟2中，在酸性觸媒（例如二氧化矽上之氣化鐵、或 對甲苯磺酸）存在下自二胺基嘧啶（2)及苯甲醛（3)形成亞 154267.doc

S -12- 201204365 胺。在高溫（例如約70°C至】1(TC)下在適宜溶劑（例如丨，4-二 噁烷或甲苯）中進行反應。在不存在二氧化矽下，添加分 子篩以自反應去除水*在過濾去除固體及濃縮物後，可在 氧化物（例如DDQ)存在下、於適宜溫度（例如約_3〇亡至 40°C )下在適宜溶劑（例如二氯甲烷）中完成亞胺之氧化環 化，從而得到式（4)之6-氯嘌呤。 在步驟3中，6-氯嘌呤（4)與哌嗪（5)經歷置換反應以提供 式（I)之哌嗪基嘌·吟。該反應可在適宜鹼（例如三乙胺或二 異丙基乙胺）存在下在溶劑（例如甲醇 '乙醇或異丙醇）中於 咼溫（例如約50 C至100°C )下進行。或者，可使用微波輻照 完成該反應。 熟習此項技術者應認識到，可用適宜保護基團（例如 tBOC)保護哌嗪基部分中存在之胺官能團。在步驟3中置換 後，隨後可去除保護基團且使胺醯化或烷基化以製備其他 式⑴化合物。 反應圖2

在反應圖2中，繪示獲得式（I)化合物之替代方法。 在適宜氧化劑（例如硝基苯或乙酸）存在下將二胺基嘧啶 154267.doc -13- 201204365 (2)與笨曱醛（3)及哌嗪（5)組合在一起。在適宜溶劑（例如甲 氧基苯）中、在高溫（例如約l2〇C至150°C )下實施反應，其 中反應在該氣氛中敞開，從而提供式（I)化合物。 反應圖3

R4

式(I) 在反應圖3中，繪示製備式（I)化合物之另一替代方案。 在步驟1中，基本上如上文反應圖1之步驟2所述使6_氣_ 2-甲基-4,5-嘧啶二胺與苯甲醛（3)反應以提供6_氣嘌呤（6)。 在步驟2中，基本上如上文反應圖1之步驟3中所述使6•氣 嘌呤（6)與哌嗪（5)反應以提供哌嗪基嘌呤（7)。 在步驟3中’用鹵代烷烴（8)(其中X=Br或I)烷基化旅嗅基 嘌呤（7)以得到式（I)化合物。熟習此項技術者應瞭解完 成該等烧基化有不同方法。舉例而言，可用適宜驗（例 如，氫化鈉、氫化鉀、碳酸鉋或碳酸鉀、或雙（三曱美甲 矽烷基）醯胺鈉或鉀）處理哌嗪基嘌呤（7)。適宜溶劑包括諸 154267.doc •14· 201204365 如THF、二噁烷、dmF、DMAC或N-甲基-2-吡咯啶綱等惰 性溶劑。較佳條件使用存於THF中之氫化鈉、於適宜溫度 (例如約-7(TC至50。〇下，從而提供式（I)化合物。熟習此項 技術者應認識到，可在烷基化步驟期間藉由使用適宜保護 基團且隨後去除保護基團來保護式⑴化合物（其中R2含有 末端醇）。 反應圖4

在反應圖4中’繪示製備式⑴化合物之又一替代方案。 在步驟1中’用苯曱醯氯（9)醯化5_胺基·4,6_二氯_2_曱基 嘴咬’之後用胺（1)置換以提供胺基醯胺基嘧啶（1〇) d在惰 性溶劑（例如二甲基乙醯胺或N_甲基_2_吡咯啶酮）中於高溫 (例如60 C至1〇〇 〇 )下在苯曱醯氯（9)存在下完成該反應。 添加水並繼續加熱，之後添加適宜有機鹼（例如二異丙基 乙胺或三乙胺）。之後在繼續加熱下添加胺（1)。 在少驟2中在在、封容器中組合胺基酿胺基。密咬（1 〇)盘 哌嗪（5)以提供式⑴化合物。該反應在適宜溶劑（例如異丙 醇）中、於高溫（例如140。(：至180。(：）下在適宜有機鹼（例如 一異丙基乙胺）存在下進行。 154267.doc • 15- 201204365 製劑1 6-氯-N4-(2-甲氧基乙基）-2-曱基嘧啶_4,5_二胺

於150°C下在密封試管中將4,6-二氯_2_甲基-嘧啶·5_基胺 (5.0 g，0.02 mol)、2-曱氧基乙胺（2.32 g，〇〇3 则1)及二異 丙基乙胺（3.9 g，0.03 mol)存於異丙醇（7〇 mL)中之溶液加 熱16 h。將反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下去除異丙 醇以得到殘餘物。將殘餘物溶解於二氣曱烷中並用水及鹽 水洗滌。經無水硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮 以得到殘餘物。在用甲醇：二氣甲烷（4:96)洗脫之矽膠管柱 上純化殘餘物，從而得到標題化合物（5 〇 g)。ES/MS m/z 217 (M+l) 〇 藉由基本上遵循如製劑1中所述程序使用適當胺及4,6_二 氣-2-甲基_Μ_5_基胺製備下表中之二胺基μ。使用用 乙酸乙酯/己烷洗脫之矽膠層析純化製劑3、4及7。使用用 丙酮/己烷洗脫之矽膠層析純化製劑9。使用Bi〇tage Isolute® SCX-2(丙磺酸官能化二氧化矽）用存於Me〇H中之 7 Μ NH3作為洗脫劑純化製劑丨〇。

154267.doc •16·

S 201204365 3 6-氣-Ν4-(3-甲氧基丙基)-2-甲 基-嘧啶-4,5-二胺 CI N人广2 V。 1 231 (M+l) 4 6_氣^4-(2-甲氧基-2_甲基-丙 基)-2·甲基-嘴咬-4,5·二胺 Cl νΛ^νη2 ^Ν^ΝΗ 245 (M+l) 5 1-[(5-胺基-6-氯-2-甲基-嘯咬-4-基)胺基]_2-曱基-丙-2-醇 Cl n-Cnh2 -^N^NH 231 (M+l) 6 3-[(5-胺基-6-氣-2-曱基-嘧 咬-4-基）胺基]-2,2-二曱基· 丙_1_醇 Cl N-CNH2 ^N^NH 245 (M+l) 7 1-[(5-胺基-6-氯-2-曱基-喊咬· 4-基胺基)-甲基]•環丙醇 Cl N 〜NH2 ^N^NH A OH 229 (M+l) 8 1-(5-胺基-6-氯-2-甲基-嘴。定_ 4·基胺基)-2-甲基-丙-2-醇 Cl N^^s/NH2 ^γΛμη Λ OH 231 (M+l) 9 2_(5_胺基-6-氯-2-甲基咬_ 4-基胺基)-丙-1-醇 Cl nJ^NH2 Λ OH 217 (M+l) -17· 154267.doc 201204365 6-氣-N*4*-(2-曱氧基-1-甲氧 10 基甲基-乙基)-2-曱基-嘧啶-4,5-二胺 ^Ν^ΝΗ Λ 261 (M+1) 製劑11 6-氣- 8-(2 -氯苯基）-9-(2-曱氧基乙基）_2 -曱基_D票吟

將6 -氯-Ν4-(2·曱氧基乙基）-2 -曱基嘴。定-4,5-二胺（5.0 g， 0.023 mol)、2-氯笨甲酿（4.8 g，0.03 mol)、15% Si〇2上

FeCl3(20 g)存於1，4-二噁烷（150 mL)中之溶液加熱i〇〇〇c並 保持1 6 h。藉由經石夕藻土過濾去除二氧化石夕，並在減壓下 濃縮濾液以得到殘餘物。將殘餘物溶解於無水二氣甲烧 (150 mL)中並於 〇°C 下添加DDQ (5.2 g，0.022 mol)，並於室 溫下將反應混合物搜拌2 h。用二氯甲烧稀釋反應混合 物’用1 N氫氧化鈉溶液、水及鹽水洗務。經無水硫酸鈉 乾無有機層’過遽並濃縮以得到殘餘物。在用乙酸乙醋： 正己烧（40:60)洗脫之矽膠管柱上純化殘餘物，從而得到 標題化合物（2.9 g)。ES/MS m/z 337 (M+1)。 藉由基本上遵循如製劑11中所述程序使用適當二胺基。密 啶及2-氣苯甲醛或2-曱基苯曱醛製備下表中之苯基嘌呤。 使用用丙酮/己烷作為洗脫劑之矽膠層析純化製劑17。 154267.doc • 18· 201204365 製劑 化學名稱 結構 ES/MS m/z 12 6-氣-8-(2-氣苯基)-2-曱基-9H- 嘌呤 Cl ci M Η 279 (M+l) 13 6-氯-8-(2-氣苯基)-9-(3-曱氧基 丙基)-2-曱基票呤 Cl C| Ί ο\ 351 (M+l) 14 6-氯-8-(2-氯苯基)-9-(2-曱氧基-2-甲基·丙基)-2-甲基·嘌呤 Cl ci V 0〜 365 (M+l) 15 2-[6-氯-2-曱基-8-(鄰曱苯基)嘌 呤-9-基]乙醇 点:七 OH 303 (M+l) 16 2_[6·氣-8-(2-氯苯基)-2-曱基-嘌 呤-9-基]-2-甲基-丙-1-醇 Cl ci OH 351 (M+l) 17 (土) 2-[6-氣-8-(2-氣苯基)-2-曱基_ 嗓吟-9-基]丙·1-醇 Cl α 337 (M+l) 製劑18 1-(6-氣-8-(2-氣苯基）-2-甲基-嘌呤-9-基）-2-曱基-丙-2-醇 154267.doc 19- 201204365

將1-(5-胺基-6-氣-2-曱基嘧啶-4-基胺基）_2-甲基丙_2-醇 (0.5 g，0.002 mol)、2-氣苯甲經（〇_6 g，0.004 mol)、對甲苯 磺酸（0.1 g)及分子篩（1.0 g)存於甲苯（25 mL)中之混合物加 熱至13 0 C並保持16 h。藉由經石夕藻土過遽、去除分子篩並 在減壓下濃縮濾液以得到殘餘物。將殘餘物溶解於無水二 氣甲烷（5 mL)中並於0°C 下添加DDQ (0.47 g，0.002 m〇l)。 將反應混合物於室溫下攪拌2 h。用二氣甲烷稀釋反應混 合物，用1 N氫氧化鈉溶液、水及鹽水洗滌。經無水硫酸 納乾燥有機層’過遽並濃縮以得到殘餘物。在用甲醇：二 氯甲烧（2:98)洗脫之矽膠管柱上純化殘餘物，從而得到標 題化合物（0.4 g)。ES/MS m/z 351 (M+1)。 藉由基本上遵循如製劑18中所述程序使用3-[(5-胺基-6-氣-2-甲基-嘧啶-4-基）胺基]-2,2-二甲基-丙-1-醇及2-氣苯甲 醛製備下表中之笨基嗓呤。 製劑 化學名稱 結構 ES/MS m/z 19 3-[6-氣-8-(2-氣笨基)_2_曱基·嗓 呤-9-基]-2,2-二甲基-丙+醇 365 (M+1) (〇Η 製劑20 1-(2-氟乙基）娘。秦二鹽酸鹽 154267.doc 9 •20- 201204365

H 2HCI Η 向反應容器中裝入Ν·第三丁氧基羰基哌嗪（ΐ6〇〇 g， 8.590 mmol)、碳酸鉀（3.56 g，25·77 咖〇1)、埃化納（催化 性）（10 mg，66.7 μΓηοΐ)、1>4_二噁烷（2〇 mL)&1 溴 _2 氟乙 烷（704.0 μί，9.45 mmol)。在回流溫度下邊攪拌邊加熱混 合物過夜。在反應完成時，冷卻至室溫並在減壓下濃縮。 用乙酸乙酯及水分開所得殘餘物。分離有機層並經無水硫 酸鈉乾燥，過濾並在減壓下濃縮，從而獲得純4_(2_氟-乙 基）-派嗪-1-甲酸第三丁基酯。GC-MS m/z 232 (M)。 於室溫及氮下向4-(2-氟-乙基）-哌嗪·曱酸第三丁基酯 (2.00 g，8.61 mmol)存於無水二氯甲烷（6〇 mL)中之攪拌溶 液中添加存於1，4·二噁烷令之4 N HC1 (21.52 mL, 86.1 mmol)。於氮下攪拌過夜。在減壓下濃縮反應物，從而獲 得標題化合物（1.78 g)。ES/MS m/z 133 。 製劑21 8-(2-氯苯基）-6-(4-乙基d底嗪_1_基）_2·甲基_9H-嘌吟鹽酸鹽

於90°C將6-氣-8-(2-氣·苯基）_2_曱基-9H-嘌呤（0.5 g， 154267.doc •21 · 201204365 0.0017 mol)、N-乙基哌嗪（〇.22g，0.0019 mol)及三乙胺 (0.22 g，0.0022 mol)存於乙醇（10 mL)中之溶液加熱8 h。或 者’利用微波輻照加熱反應物。在反應完成時，於減壓下 濃縮反應混合物。將殘餘物溶解於無水二氣曱烷中並用飽 和碳酸氫鈉溶液、水及鹽水洗滌。經無水硫酸鈉乾燥有機 層，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物，在使用 MeOH:DCM (2:98)作為洗脫劑之矽膠管柱上純化殘餘物， 從而得到8-(2 -氯苯基）-6-(4 -乙基娘唤-1-基）-2-甲基-9H-嗓 0令（0.25 g)。於0C下向8-(2 -氣苯基）-6-(4-乙基底嗓-1-基）_ 2-甲基-9Η-嘌呤（0.25 g，0.0007 mol)存於無水醚（2.5 mL)中 之混合物中添加HC1(存於乙醇中之2 Μ溶液）（1.0當量）並於 室溫下攪拌1小時。過濾沉澱，用醚及DCM洗滌。在真空 下乾燥，從而得到白色固體狀標題化合物（0.275 g)。 ES/MS m/z 357 (M+1)。 或者，藉由將游離鹼溶解於丙酮、1:1乙腈：水或另一 適宜有機溶劑中製備HC1鹽，隨後在攪拌的同時添加水性 或含醚HC1溶液。隨後凍乾，從而獲得鹽酸鹽。 藉由基本上遵循如製劑21中所述程序使用適當經取代旅 嗪及經取代6-氯嘌呤製備下表中之苯基哌嗪基嘌呤。除非 另外指明，否則使用利用丙酮/己烷或MeOH/DCM作為洗 脫劑之正相矽膠層析純化游離鹼。 •22- 154267.doc

S 201204365 實例或 製劑 化學名稱 結構 ES/MS m/z 製劑22 4-[8-(2-氣苯基)-9-(2-羥基-2-甲基-丙基)-2-甲基-嗓呤-6-基] 哌嗪-1-甲酸第三丁基酯 -^ΟγΟ 1 Ν ϋ C1 501 (M+l) 實例1 8-(2-氣苯基)-6-(4-乙基派°秦_ 1-基)-9-(2-甲氧基乙基)-2-甲 基-嘌呤鹽酸鹽 广〕HCI P 415 (M+l) 實例2 8-(2-氯苯基)-6-[4-(2-氟乙基） 哌嗪-1-基]-9-(2-甲氧基乙基)- 2-甲基-嘌呤鹽酸鹽 F HCI /° 433 (M+l) 實例3 1-[4-[8-(2-氣苯基)-9-(2-甲氧 基乙基)-2-曱基-嗓吟-6·基]娘 嗪-1-基]乙酮鹽酸鹽 V 0 ： Α；>-〇 429 (M+l) 154267.doc ·23· 201204365 實例4 8-(2-氣苯基)-6-(4-乙基哌嗪-1-基)-9-(3-曱氧基丙基)-2-甲 基-嘌呤鹽酸鹽 =N〕HCI \ 429 (M+l) 實例5 1-[4-[8-(2-氣笨基)-9-(3-曱氧 基丙基)-2-甲基-嘌呤-6-基]哌 嗪-1-基]乙酮鹽酸鹽 °r π. °\ 443 (M+l) 實例6 8-(2-氣苯基)-6-[4-(2-氟乙基） 娘°秦-1-基]-9-(3·甲氧基丙基)_ 2-甲基-嘌呤鹽酸鹽 F S HCI CD Ί 447 (M+l) 實例7 8-(2-氯苯基)-6-(4-乙基派唤_ 1-基)-9-(2-曱氧基-2-曱基-丙 基)-2-甲基-嘌呤鹽酸鹽 1 HCI Vo, 443 (M+l) 154267.doc 24- 201204365 實例8 1-[4-[8-(2-氣苯基)-9-(2-曱氧 基-2-曱基-丙基)-2-曱基-嗓呤· 6-基]13底嘻-1·基]乙嗣 Y0 0 C1 Vo. 457 (M+l) 實例9 2-[8-(2-氯苯基)-2-甲基-6-(4-曱基哌嗪小基)嘌呤-9-基]乙 醇鹽酸鹽 1 HCI c 丨 A；>-b V OH 387 (M+l) 實例10 1-[4-[9-(2-羥基乙基)-2-甲基-8-(鄰甲苯基)嘌呤-6-基]哌嗪-1-基]乙酮鹽酸鹽 Ύ0 .N. 〔〕HCI OH 395 (M+l) 實例11 2-[2-曱基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)-8-(鄰甲苯基)嘌呤-9-基]乙 醇鹽酸鹽 1 C〕HCI s OH 367 (M+l) 實例12 1-[8-(2-氣苯基)-2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘌呤-9-基]-2-甲基-丙-2-醇鹽酸鹽 1 HCI Cl 415 (M+l) 154267.doc -25- 201204365 實例13 1_[4-[8-(2-氣笨基)-9-(2-羥基-2-曱基·丙基)-2-曱基-嗓吟-6-基]哌嗪-1-基]乙酮鹽酸鹽 V 〔〕Ηα HO Λ 443 (M+l) 實例14 3·[8-(2-氯苯基)-2-曱基-6·(4-曱基哌嗪-1-基）嘌呤-9-基]-2,2-二曱基-丙-1-醇鹽酸鹽 I HCI Cl A HO 429 (M+l) 實例15 2-[8-(2-氣-笨基)-2-曱基-6-( 4-甲基_0底嘻-1 -基)-嗓吟-9-基]-2-曱基-丙-1-醇鹽酸鹽3 όHCI OH 415 (M+l) 實例16 1-{4-[8-(2-氣·苯基)-9-(2-經基-1-甲基-乙基)-2-曱基_ 9H-嗓吟-6-基]-派°秦-1-基}-乙 酮鹽酸鹽，同分異構體lb X 〔N〕' A OH 429 (M+l) 實例17 卜{4-[8-(2-氯-苯基)-9-(2-經基-1·曱基-乙基)-2·曱基_ 9H-嘌呤-6-基]-哌嗪-l-基}-乙 酮鹽酸鹽，同分異構體2b V 〔N〕L 少Λ OH 429 (M+l) 154267.doc -26- 201204365

實例18 2-[8-(2_ 氣-苯基)-2-甲基-6-( 4-甲基·哌嗪-1-基)-嘌呤-9-基]-丙-1-醇鹽酸鹽，同分異 構體 Q H： OH 401 (M+l) 入 Γ Ί HC| 2-[8-(2-氣-苯基)-2-甲基-6-( V α 實例19 4-甲基底嗓-1-基)-嘌呤-9- 401 (M+l) 基]-丙-1-醇鹽酸鹽，同分異 構體2C /S OH a反相製備型HPLC，Waters® xbridge，洗脫劑：9°/〇至 100% 乙腈/(NH4C03)水溶液（pH 10)。 b藉由對掌性分離純化：Diacel OJ-H SFC，洗脫劑：12% MeOH(0.2°/〇 IPAm)/C02»同分異構體1(100%對映體過量） 及同分異構體2(91.1%對映體過量）。 c藉由對掌性分離純化：Diacel AD-H SFC，洗脫劑：10% IPA(0.2%二乙基曱基胺）/C02。同分異構體1(100%對映體 過量）及同分異構體2(100%對映體過量）。 製劑23 (2R)-2-[(5-胺基-6-氣-2-曱基-嘧啶-4-基）胺基]丙醇

CI

向安裝於isomantle上且配備有頂置式攪拌器、回流旋管 154267.doc -27- 201204365 冷凝器、溫度計及加料漏斗之1〇 L凸緣燒瓶中裝入4,6_二 氯-2-甲基“密咬-5-基胺（307 g，i 72莫耳）。隨後向燒瓶中 添加異丙醇（3.45 L)並攪拌以得到澄清淺黃色溶液。向燒 瓶中一次添加全量三乙胺（456.7 mL，3 28 m〇1)同時攪拌並 升溫至50t。經30 min自加料漏斗緩慢添加（ΚΜ+2_胺 基-1-丙醇（m.30 g，202.10 mL，2 59 m〇1)。在最後添加 後，於回流下將反應混合物加熱36 j^冷卻反應混合物。 向反應混合物中添加額外（Κ)_(·)_2_胺基_丨_丙醇（64 77 g , 67.37 mL ’ 862.26 mmo 卜 〇·5 當量）及三乙胺（174 51 g， 240.37 mL 1.72莫耳，l.o當量）並回流w匕。冷卻反應混 合物。向反應混合物中添加額外胺基小丙醇 (32.38 g ’ 33.68 mL ’ 431.13 mmol，〇.25 當量）及三乙胺 (87.25 g ’ 120.18 mL ’ 862.26 mmo 卜 0.5 當量）並加熱至回 流6 h »在環境溫度下攪拌同時冷卻48 h。 藉由旋轉蒸發去除溶劑，從而提供灰白色半固體。添加 水（500 mL)並藉由旋轉蒸發自所得白色漿液去除殘餘異丙 醇。藉由過濾收集白色固體並用水（lx2〇〇 mL，lxl3〇 mL) 洗滌。於50°C下在真空爐中經固體氫氧化鉀乾燥白色固 體’從而獲得標題化合物（222 6 g)。ES/MS m/z 217 (M+1)。 實例20 (2R)-2-[8-(2-氯苯基）·2-甲基_6_(4_甲基哌嗪_卜基）嘌呤冬 基]丙-1-醇；草酸 154267.doc •28· 201204365

在空氣中敞開之10 L夾套反應器中將（2R)-2-[(5-胺基-6-氯-2-曱基-喊啶-4-基）胺基]丙-1-醇（228 g，1.05 mol)及1-甲 基哌嗪（210.80 g，233.9 mL，2.1 mol)溶解於二甲亞砜（3.16 L)中。向燒瓶中添加2·氣本甲酿（221.88 g，1.58 mol)，之 後添加二乙胺（127.78 g，176 mL，1.26 mol)及硝基苯 (129.55 g，1.05 mol)。將混合物加熱至i4〇ec並保持3.5 h且 隨後冷卻。在室溫下攪拌18 h。 在搜拌的同時將反應混合物傾倒入包含於2〇 L燒瓶中之 水（7.5 L)中。30 min後，用二氣甲烷（lx7.5 L，1x5 L)萃取 深褐色油並分離有機層。經硫酸鈉乾燥合併之有機層，過 濾，並蒸發以提供油。將該油溶解於四氫呋喃（3.2 L)中並 用草酸（94.74 g ’ 1.05 mol，1當量）存於四氫吱喃（2.1 L)中 之溶液處理，同時快速攪拌。將反應混合物升溫至45。〇並 保持15 min且隨後在重力過濾下過濾熱混合物。用乙酸乙 酉旨-四氫呋喃（1:1)洗滌濾餅若干次且最後用醚洗滌，同時 手動攪拌固體。在真空爐中乾燥固體，從而獲得淺褐色固 體狀標題化合物（329.4叾）》[〇1]0@20<^=-6，濃度=0.101芭/ 100 mL (MeOH)。 實例20a 154267.doc •29. 201204365

基]丙-1 -醇

向快速授拌之2 Μ氫氧化納水溶液（1 〇1 L，2 〇2㈣中 添加（2R)-2-[8-(2-氣苯基）_2_甲基·6_(4曱基㈣卜基）嗓 吟-9-基]丙-1·醇草酸鹽（m3 g，674 17顏⑷。携摔2〇 min且隨後用二氣曱烷（5 L，隨後2 5 L)萃取，先後用水 (2.5 L)及鹽水（1.5 L)洗滌。向二氯曱烷溶液中添加額外游 離鹼物質（15.3 g)(基本上如上文所述在預示反應中產生）。 經硫酸納乾燥二氣曱烷溶液’過濾，並蒸發，從而獲得金 色結晶固體。在真空下乾燥固體，從而獲得標題化合物 (264.5 g)。ES/MS m/z 401.2 (M+1)。[a]20D -4.1 (c 1，MeOH) 〇 實例20b (2R)-2-[8-(2-氣苯基）-2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基）嘌呤·9 基]丙-1-醇鹽酸鹽

S

201204365 在配備有氮入口之250 mL圓底燒瓶中將（2R)-2-[8-(2-氯 苯基）-2-甲基-6-(4-甲基哌嗪_ι_基）嘌呤·9_基]丙_ι_醇（15 29 g，3 8.14 mmol)溶解於二乙醚〇14 mL)中，並用存於二噁烷 中之4 N氯化風（9.53 mL，38.14 mmol)處理。在室溫下授拌 2.5 h且隨後藉由真空過濾收集固體。用二乙醚（3〇〇 mL)洗 滌且隨後真空乾燥，從而獲得標題化合物（12.1 g)。ES/MS m/z 401.2 (M+1-HC1)。 實例20c (2R)-2-[8-(2-氯苯基）-2-曱基-6-(4-甲基哌嗪-1-基）嘌呤_9_ 基]丙-1-醇

在2 L燒瓶中，用乙腈（1.26 L)處理（2R)-2-[8-(2-氣苯基）-2-曱基-6-(4-甲基哌嗪-1-基）嘌呤_9·基]丙醇（2〇2」g， 504.10 mmol)並於室溫下攪拌30 mift。藉由過濾收集固 體，用乙腈（250 mL)洗滌’風乾且隨後於4〇。〇下在真空下 乾燥，從而獲得純標題化合物（134.1 g)。藉由顯示單一對 映異構體之對掌性SFC來測定光學純度^ eS/MS m/z 401.2 (M+1)。對掌性HPLC條件：Diacel AD，H，10% IPA , 0.2% 異丙胺’89.8。/。超臨界二氧化碳，1；¥(22〇11111)，1'11=4.22 min，100%對映體過量》 154267.doc -31 - 201204365 (2R)-2-[8-(2-氣苯基）-2-甲基-6-(4-甲基旅°秦-1-基）嗓吟-9-基]丙-1-醇之替代途徑 製劑23a 2-氣-N-[4-氣-6-[[(lR)-2-羥基-i_曱基-乙基]胺基]-2-曱基- 嘧啶-5-基]苯甲醯胺

在配備有回流冷凝器、攪拌棒及氮入口 /出口之250 mL 二頸圓底燒瓶中合併2 -氣苯甲酿氯（10.44 g，57.86 mmol)、 5-胺基-4,6-二氣-2-甲基嘧啶（i〇 g，56.17 mmol)及N-曱基吡 略啶酮（44 mL)並加熱至8(TC並保持5 h。添加水（506 μί) 並在加熱條件下繼續授拌20 min，之後添加二異丙基乙胺 (29.4 mL，168.52 mmol)。隨後一次添加全量（尺)_(_)_2_胺 基-1-丙醇（6.23 mL，79.77 mmol)，之後用N-曱基吡咯啶酮 (10 mL)沖洗。於8〇t下繼續加熱17 h。將反應溶液冷卻至 至溫且隨後經由加料漏斗經1 〇 min逐滴添加水（112 mL)。 於至；jo·下繼續授拌3 5 miη且隨後傾倒至乙酸乙醋（3 〇〇 mL) 中。分離各相並用乙酸乙酯（2x200 mL)萃取水相。先後用 水（200 mL)及鹽水（200 mL)洗滌合併之有機部分，經硫酸 鎮乾燥’過濾’並蒸發’從而獲得橙色油。將此物質與第 三丁基甲基趟一起研磨，在藉由過濾收集後，從而獲得白

154267.doc 32 S 201204365 色固體。將固體在過濾器上乾燥0.5 h且隨後於5〇t下在真 空爐中乾燥，從而獲得標題化合物（15」g)。ES/MS油 355.0 / 357.0 (M+l) 〇 實例20d (2Κ)_2·[8-(2-氣苯基）-2-曱基-6-(4-曱基哌嗪-1-基）嘌呤_9_ 基]丙·1-醇 Ν

在具有機械攪拌器之3〇〇 mL parr高壓釜中合併2_氣_1^_ [4-氯-6-[[(lR)_2-羥基_ i _曱基·乙基]胺基]_2甲基·嘧啶·5_ 基]苯甲醯胺（13.0 g)、ΙΡΑ (11 mL)、Ν-曱基哌嗪（7.1 mL) 及二異丙基乙胺（7·0 mL)。密封反應容器並加熱至16〇。(：並 保持24 h。蒸發所有揮發性物質，溶解於二氣甲烷（1〇〇 mL)中，從而得到深色溶液。用水（2χ5〇 mL)洗滌，使用疏 水性袖料乾燥，並在減壓下蒸發所有溶劑。取所得固體並 溶解於乙腈（85 mL)中並攪拌。丨.5 ，藉由過濾收集固 體並風乾，之後在真空下乾燥，從而提供標題化合物 (10.73 g)。藉由顯示單一對映異構體之對掌性SFC來測定 光學純度。ES/MS m/z 401.2 (M+1)。對掌性HPLC條件：

Diacel AD-H，10% IPA，〇_2%異丙胺，89 8%超臨界二氧 化石灰 ’ UV (220 nm) ’ TR=4.22 min，100%對映體過量。 154267.doc -33- 201204365 實例20e (2R>2-[8-(2-氣苯基）_2·甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基）嘌呤-9- 基]丙-1-醇 Μ

混合（2R)-2-[8-(2-氯苯基）-2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基）嘌 呤-9-基]丙-i_醇（8〇〇 mg ’實例2〇a)與乙腈（5 mL)。於室溫 下以5〇0 rpm攪拌所得澄清深褐色溶液，且在攪拌丨分鐘 後，白色固體開始沉澱。將試樣檀拌1〇 _以使盡可能多 之物質沉殿出溶液。藉由真空過渡分離白色固體並用】机 乙腈沖洗。於的下在真空爐巾將4 奶叫物質。下表中列舉使用2乾燥1小時以回收 (λ=1·54060 A)之XRD繞射峰。 U a輪射作為來源 相對強度 (最強峰^^ 100.00

角（°2θ)+/-0.2。 1 8.26 2 19.68 〜 _ 3 14.81 4 — 一..5 13.20 23.92 、 6 15.97 7 23.08 〜 8 25.70 9 10.93 10 21.02 ~~ 154267.doc 34- 201204365 實例21 {1-[8-(2_氯-苯基）-2- f基-6-(4-甲基- π底嗓_ι_基）_嗓吟_9_ 基l·環丙基}曱醇鹽酸鹽

攪拌1-(5-胺基-6-氣-2-甲基-嘧啶·4-基胺基）_環丙基]_甲 醇（1.165 g，5.09 mmol)及 N-曱基派唤（622.70 pL，5.60 mmol)存於甲氧基苯（15.28 mL)中之溶液，其中燒瓶在空 氣中敞開。一次添加全量2-氣苯曱醛（860.03 pL，7.64 mmol)，之後添加硝基苯（522.22 μί，5 〇9 mm〇丨）並將溫度 升尚至140 C。於140。(：下將反應物攪拌丨〇 h。將反應物轉 移至旋轉蒸發器以去除揮發物。用2 N氫氣酸（5〇〇 稀 釋並用二氯甲烷（500 mL)洗滌。丟棄有機層並用濃氫氧化 鈉水/谷液處理直至PH=14。用二氣曱烷萃取，經厘以〇4乾 燥並蒸發，從而獲得褐色油。 使用正相SFC(二硝基苯基管柱，2〇% Me〇H(〇 2%二乙基 曱基fe )’ 80% c〇2)純化粗物質。藉由將游離鹼溶解於 水·乙猜（2:1)或另一適宜有機溶劑中製備Η(：1鹽，隨後在 授拌下添加HC1之水溶液或含趟溶液。進行;東乾，從而獲 知&題化合物之鹽酸鹽固體（390 mg)。ES/MS m/z 413 (M+1)。 154267.doc -35. 201204365 藉由基本上遵循如實例21中所述之程序使用適當取代之 二胺基嘧啶、2-氯苯曱醛及N-甲基或N-乙基哌嗪製備下表 中之苯基哌嗪基嘌呤》 實例 化學名稱 結構 ES/MS m/z 22 1-[8-(2-氣-苯基)-2-甲基-6- (4-甲 基-〇底嗓-1-基)-嘌吟-9-基]-2-甲 基-丙-2-醇鹽酸鹽3 1 =N〕HCI OH 415 (M+l) 23 8_(2-氣-苯基)-6-(4·乙基-略°秦-1_ 基)-9-(2-曱氧基-1-曱氧基甲基· 乙基)-2-曱基-9H-嘌呤鹽酸鹽b r =N〕HCI 拙 /A、 459 (M+l) 藉由製備型反相HPLC純化：Phenomenex Gemini®，5微 米C-18管柱；洗脫劑：存於水中之ι〇〇/。至1〇〇%乙腈與〇」〇/〇 TFA。 b藉由正相矽膠層析純化。洗脫劑：存於Me〇H/ DCM中之 0-10% 7 Μ ΝΗ3 ° 製劑24 1-[8-(2 -氣苯基）_2 -曱基- 6-»底嘻-1-基票吟-9 -基]-2 -甲基- 丙-2-醉 154267.doc

S -36 - 201204365

於〇t下向4-[8-(2-氯苯基）-9-(2-羥基_2_曱基-丙基）-2-甲 基-嘌呤-6-基]哌嗪_丨-甲酸第三丁基酯（1 9 g，〇〇〇38 m〇1) 存於一氣甲烷（10 mL)中之溶液中添加三氟乙酸（i〇 mL)並 於至溫下搜拌2 h。用飽和碳酸氫鈉溶液使反應混合物驟 冷並用二氣甲烷萃取。經無水硫酸鈉乾燥有機層，過濾， 並濃縮’從而得到標題化合物（1.5 g)。ES/MS m/z 401 (M+1) 〇 實例24 4-[8-(2-氯苯基）-9-(2-羥基-2-甲基-丙基）_2·甲基_嘌呤_6· 基]哌嗪-1 -甲酸甲酯鹽酸鹽 OMe

°r 於〇C下向1-[8·(2-氣苯基）_2_甲基_6_哌嗪4_基_嘌呤_9_ 基]_2·曱基-丙_2_醇（0.001 m〇l，〇.5 g)及吡咬（2〇机)存於 無水二氣甲烷（3 mL)中之溶液中添加氯曱酸甲酯（〇 29 g， 0.003 1 mol)並於室溫下攪拌2 he用飽和碳酸氫鈉溶液使 154267.doc •37· 201204365 反應混合物驟冷並用二氯甲炫萃取。經&水硫酸納乾燥有 機層’過濾並濃縮以得到殘餘物。在矽膠管柱上使用甲 醇：二氯甲烷（3:97)作為洗脫劑純化殘餘物，從而得到4_ [8-(2-氯苯基）-9-(2-羥基_2_甲基-丙基）·2-甲基-嘌呤_6_基] 哌嗪-1-曱酸曱酯（0.3 g)。ES/MS m/z 459 (M+1)。 於0°C下向4-[8-(2-氣苯基）-9-(2-羥基-2-曱基-丙基）_2-曱 基-嘌呤-6-基]哌嗪曱酸曱酯（〇 3 g，〇 〇〇〇6 m〇1)存於醚（4 mL)中之溶液中添加HC1(存於醚中之2·0 Μ溶液）（0.023 g， 0.0006 mol)並於室溫下攪拌2 h。過濾沉澱，用醚洗滌， 並在真空下乾燥，從而得到白色固體狀標題化合物（〇24 g)。ES/MS m/z 459 (M+1)。 實例25 8-(2-氯苯基）-6-(4-乙基哌嗪-1-基）_9-(甲氧基曱基）_2_甲基_ 嘌吟

於0°C下向8-(2-氣苯基）-6-(4-乙基哌嗪-1-基）-2-曱基-911-嘌呤（0.233 g，0.00065 mol)存於無水四氫呋喃（20 mL)中之 溶液中添加氫化鈉（0.031 g，〇·〇〇ΐ3 m〇i)。將反應混合物攪 拌15 min，隨後冷卻至-30°C並添加溴曱基曱基醚（0.081 g, 154267.doc -38 - 5 201204365 0.00065 mol)。將反應混合物升溫至室溫並攪拌丨小時。用 水使反應混合物驟冷，藉由蒸發去除四氫呋喃且隨後用二 氯甲烷萃取反應混合物。經無水硫酸鈉乾燥有機層，過滤 並濃縮以得到殘餘物。經由製備型反相HPLC(X-Bridge管 柱’ 5 mM NHWAc/乙腈）純化殘餘物，從而得到標題化合 物（0.029 g)。ES/MS m/z 401 (M+1)。 製備25 2-[(5-胺基-6 -氯-2 -甲基-°¾咳-4-基）胺基]乙醇

Η 向1 Ljfj壓爸中裝入5_胺基_4,6_二氯-2-曱基嘴咬（50.0 g， 0.281 mol)、2-胺基乙醇（18_8 g，0.309 mol)、二異丙基乙 胺（54·5 g，0.421 mol)及IPA (500 mL)。將混合物加熱至 145°C至155°C，同時攪拌24 h至30 h。將反應物冷卻至 25°C至3(TC。濃縮反應混合物，在低於50°C下在真空下去 除溶劑。將DCM (500 mL)裝入混合物中並於1〇。〇至25°C 下攪拌2 h ^過濾混合物並於45°C至50°C下在爐中乾燥渡 餅’從而得到淺黃色固體狀產物（35.0g)。1HNMR(；dnls。_ d6): δ 6.76 (s, 1H); 4.79 (s, 3H); 3.53-3.37 (m, 4H); 2.09 (s, 3H)。 製備26 2-[6-氯- 8-(2-氯苯基）-2 -甲基-嗓吟-9-基]乙醇 154267.doc •39- 201204365

向500 mL三頸圓底燒瓶中裝入2-[(5-胺基-6-氯-2-曱基-嘧啶-4-基）胺基]乙醇（13.0 g，0.064 mol)及1，4-二噁烷（300 mL)。一次添加全量2-氣苯甲醛（13.5 g，0.096 mol)，之後 添加矽膠上之5 wt°/〇氣化鐵（III) (3 7.5 g)。將混合物加熱至 100°C至105°C並保持48 h。冷卻至20。(：至3 5。(：，過濾並用 1,4-二噁烷（40 mL)沖洗濾餅。合併濾液並在真空下濃縮。 用二氯甲烧（260 mL，20 mL/g)溶解殘餘物並冷卻至〇。〇至 5C。於 0°C 下添加 2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌（14.5 g， 0.064 mol)，將混合物升溫至⑺它至2yc，並授拌2 h。過 濾並用乙醇（100 rnL)沖洗濾餅並合併濾液。在真空下濃縮 遽液’從而得到深色殘餘物。用二氣甲烷（3 〇〇 mL)重新溶 解殘餘物，將此溶液用】N氫氧化鈉水溶液洗滌至1?11 1〇_ 11，之後用水（2x60 mL)洗滌。濃縮有機層以得到粗物 質。經400 g矽膠純化粗物質，用二氣甲烷/甲醇（5〇:1)洗 脫，從而獲得黃色固體（6.5g)e丨HNMR(dms〇_d6):S 7 73_ 7.56 (m, 4H); 4.83 (t, J=6Hz, 1H); 4.12 (t, J=6Hz, 2H); 3.61 (q’ J=6Hz，2H); 2.73 (s，3H)。 製備27 (±)-2-[8-(2-氣苯基）-9-(2-羥基乙基）_2_曱基_嘌呤_6_基]· l，3,4,7,8,8a-六氫吡咯并[12_a]吡嗪_6_酮 154267.doc

SF •40- 201204365

OH 向500 mL三頸圓底燒瓶中裝入2_[6_氯_8_(2_氣苯基）_2_ 曱基-嘌呤-9-基]乙醇（13.3 g，0.0412 mmol)及乙醇（200 mL)，之後裝入2,3,4,7,8,8a-六氫-1H-吡咯并[l，2-a]吡嗪-6-酮（6.3 65 g，0.0453 mol)及三乙胺（14.8 mL，3.5 當量）。將 混合物加熱至80°C至85°C達24 h。將反應物冷卻至室溫並 在真空下濃縮’從而得到黃色固體作為粗產物。藉由管柱 層析使用400 g矽膠並用二氯甲烷/甲醇（5〇:1)洗脫來純化粗 物質’從而得到黃色固體狀產物（13 38)。4>^11((11118〇-d6)： δ 7.55-7.41 (m, 4H); 5.72 (bs, 2H); 4.16-3.92 (m, 3H); 3·71 (s, 2H); 3.71-3.68 (m, 1H); 3.02-2.93 (m, 2H); 2.74 (m，1H); 2.70 (s, 3H); 2.44 (m, 2H); 2.32-2.29 (m, 1H); 1.76-1.69 (m，1H)。 實例26 2·[Μ2-氣苯基）_9_(2_羥基乙基）-2_曱基·嗓呤-6_基]· l，3,4,7’8,8a-六氫吡咯并[l52_a]吡嗪-6-酮，同分異構體2 154267.doc 201204365

將（±)-2-[8-(2-氯苯基）-9-(2·經基乙基）·2·甲基_嘌吟_6_ 基]-l，3,4,7,8,8a-六氫 °比 η各并[1,2-a]»比《秦-6-鲷（19.0 g)溶解 於甲醇（400 mL)中。使用超臨界流體層析（AD_H管柱， 250x30 mm，5 μιη)分離對映異構體；流動相：a :超臨界 C02 ; B : MeOH 0.05%二乙胺，a: B=75:25，於 85 mL/min 下。檢測器波長係254 nm。蒸發溶劑以獲得峰2之黃色固 體。溶解於二氣甲烷（100 mL)中，用水（2><3〇 mL)洗滌，傾 析，並在低於5(TC下在真空下濃縮有機溶液，從而得到 7.2 g(99.8°/〇對映體過量）白色固體狀同分異構體2。 實例27 2-[8-(2-氣苯基）-9-(2-甲氧基乙基）·2·曱基_嘌呤_6_基]一 l，3,4,7,8,8a-六氫吼略并[l，2-a]°比嘻-6-酿I鹽酸鹽，同分異 構體2

0〜 向100 mL燒瓶中裝入2·[8♦氣苯基）9 (2經基乙基 154267.doc •42· 201204365 曱基-嘌+ -6-基]-l，3,4,7,8,8a-六氫1比洛并[i，2_a]。比嗓-6-酮，同分異構體-2 [C09111070-E] (3.3 g，7.73 mmol)及 DMF (35 mL)，之後裝入碘甲烷（1.24 g，8 5〇 mm〇1)。於 l〇°C 至 25°C 下分批添加 60°/。NaH (0.59 g, 13.9 mmol)並攪 拌2 h。在攪拌的同時將混合物傾倒至水（丨〇〇 mL)中並用乙 酸乙酯（3x50 mL)萃取溶液。合併有機層，用水（2x5〇 mL) 洗滌，並在真空下濃縮，從而得到油。藉由矽膠（丨〇〇 g)管 柱層析法，用二氯甲烷/甲醇（50:1)洗脫純化粗物質，從而 得到黃色固體。將固體重新溶解於乙酸乙酯（4〇 mL)中並 緩慢添加1 N HC1之乙酸乙酯溶液，直至固體沉澱為止。 於室溫下攪拌2 h，經過濾餅過濾，並用乙酸乙酯（丨〇 mL) 洗條。在真空下乾燥渡餅，從而得到2.8 g灰白色固體狀標 題化合物（98.0%對映體過量）；ES/ms m/z 441.3 (M+1) » €8,及€82活體外功能分析 以激動劑模式使用基於SPA之GTPf35S結合分析法，測

試實例化合物。在由20 mM HEPES、100 mM NaC卜5 mM

MgCh構成之分析緩衝液（於室溫下pH 74)中製備所有分析 組份。在含有BSA(最終0.125%)之分析緩衝液中實施半對 數化合物稀釋。以96孔模式，使用CB,分析法之全膜捕獲 技術及修改過去曾說明之Cl分析法之抗體捕獲技術 (DeLapp專人 j pharmac〇i Exp Ther 289:946-955，1999)量 測GTPi35-s結合性。所有培育均係在室溫下進行。 CBl ： 向分析緩衝液中添加hCB^CHO膜、GDP(最終！ μΜ)、 154267.doc -43- 201204365 及皂苷（最終1 〇 Kg/mL)並進行均質化。向分析板中添加稀 釋化合物GTP-Y-35S(最終500 nM)及膜並培育30分鐘。隨後 添加1 mg/孔小麥胚芽凝集素SPA珠粒，且將板密封，旋 轉，並再培育1小時。隨後以7 Ο Ο X g將板離心10分鐘，並 使用閃爍計數器每孔計數1分鐘。 CB2-Sf9 ： 向分析緩衝液中添加hCB2-Sf9膜及GDP(最終1 μΜ)並進 行均質化。向分析板中添加稀釋化合物及膜並預培育1 5分 鐘。之後添加GTP-y-35S(最終500 ηΜ)並再培育35分鐘。其 後，添加含有Nonidet Ρ40清潔劑（最終0,2%)、抗-Gi抗體 (最終稀釋度為1:362)及1.25 mg抗兔抗體閃爍親近分析法 珠粒之混合物。隨後將板密封，旋轉，並再培育2小時， 之後如針對〇8丨進行離心並計數。 為分析數據，首先減去來自所有孔之背景值。相對於全 激動劑（甲極樂醢胺（methanandamide))之反應，將激動劑/ 反激動劑劑量反應數據標準化，來測定激動劑功效百分 比。使用具有Activity Base及XLFit3之4 -參數邏輯降低擬 合法來分析數據。 基本上如上文所述測試所有實例化合物，且發現每一者 針對CB2之相對EC50值$100 nM。實例6針對CB2之相對 EC50值為2.7 nM且針對CBplOOOOO nM。實例19針對CB2 之相對EC50值為22.4 nM且針對CB丨>100000 nM。 因此，本發明化合物顯示CB2活體外活性。此外，本發 明化合物顯示對CB2較CB!高之選擇性且因此可限制中樞 154267.doc -44-

S 201204365 所調介副作用之可能性。 自人類及大鼠082受體置換3H-CP55940 採用 Felder 等人之方法（Mol. Pharmaocol. 48:443-450, 1995)，且稍加修改。具體而言，藉由離心法來洗滌穩定 或暫時表現人類或大鼠CB2受體之細胞的膜勻漿，並將其

稀釋至 50 mM Tris HC1 (pH 7.4)、5 mM MgCl2、2.5 mM EDTA及0_1% BSA緩衝液中。利用i μΜ CP55940界定3H_ CP55940之特異性結合。在1%二甲亞砜存在下，在Tns、 MgCl2、EDTA、BSA緩衝液中，藉由於室溫下，以300 W 體積與多種濃度測試化合物培育90分鐘，測定該化合物置 換特異性3H-CP55940結合之能力。取經過含〇.50/〇聚乙稀 基吡咯啶酮、〇· 1 %聚山梨醇酯20之水溶液預處理之 Unifilter 96孔微板’用冷Tris緩衝液洗蘇三次。随後將反 應混合物轉移至濾板’之後立即藉由快速過濾及用冷TnS 緩衝液洗滌三次（200 μΐ)來終止培育。在乾燥過濾板後’ 向每一孔中添加microscint 20，將板密封並進行計數以測 定每分鐘衰變。採用Graphpad Prism繪製置換曲線拉決疋 所得之Ki值。 實例8具有142 nM之人類受體Ki值及37.5 nM之大鼠受體 Ki值。實例13具有65.2 nM之人類受體Ki值及215 nlVl之大 鼠受體Ki值。 因此，顯示本發明化合物可結合人類及大鼠CB2受艘。 單碘乙酸酯（MIA)模型 對於所有研究而言，在MIA模型中在MIA注射晴使用約8 154267.doc •45· 201204365 週齡之雄性Lewis大鼠來量測疼痛。將大鼠以2或3只/籠分 組圈養並維持於恒溫及12小時明/12小時暗循環下。除數 據採集期間外’在所有時間動物皆可自由獲得食物及水。 在標準MIA模型中，在每一大鼠之右膝注射存於5〇 μ鹽 水中之0.3 mg ΜΙΑ且在左膝注射50 μΐ鹽水。在ΜΙΑ注射後 於不同時間（通常在ΜΙΑ注射後1 〇天内不量測）使用雙足平 衡測試量測疼痛。此測試量測注射ΜΙΑ與鹽水之膝之間之 後爪承重的差異，且每一量測值係3個單獨量測值之平均 值’每一量測值均係經1秒量測。 對於利用CB2激動劑之研究而言，將大鼠隨機分至各劑 量組中（η=5或6)且隨後投與一次所研究化合物。每一大鼠 之投藥相隔15分鐘且在投藥後預定時間（通常2小時）使用雙 足平衡測試來量測疼痛。按慣例以4組運行研究，即媒劑 組（存於水中之1%羧甲基纖維素加上〇 25%聚山梨醇酯8〇) 及3個化合物組，其可為單一劑量之單一化合物或3個劑量 之相同化合物。結果報告為注射鹽水與ΜΙΑ之膝之間之承 重差異且在經媒劑治療與經化合物治療動物之間進行統計 比較以評定化合物在模型中對膝疼痛之效應。 基本上如上文所述測試實例19並發現以〇3爪““及】 mg/kg之劑量相料媒劑可減少疼痛。基本上如上文所述 測試實例18並發現以〇.3 mg/kg之劑量相對於媒劑可 痛。 < 々因此，顯示本發明化合物可用於治療疼痛、具體而言關 154267.doc

S •46- 201204365 化學療法誘發之疼痛分析 克至200克之雄性Harlan Sprague Dawley大鼠在動 物飼養所中適應7天。將動物維持於惶溫及i 2小時明2小 時暗循環下’並以3至4只分組圈養且可隨意獲取食物及 水。 在研究第1天時開始每日兩次投與1〇 mg/kg化合物（口 服）、5 mg/kg嗎啡及媒劑，並在整個研究持續時間中繼續 行（弟18天）。在第2、4、6及8天投與1 mg/kg之紫杉醇 (腹膜腔内）以獲得4 mg/kg之累積劑量，從而誘發化學療法 誘發之外周神經病變。 將大鼠置於單獨樹脂玻璃室中，其具有金屬絲網平臺底 部以使得可接觸後爪。在適應15分鐘至丨小時時間後，在 坐骨神經分佈内評定中跛後爪。將一系列剛度以對數方式 遞增（0.41、0.70、1_2〇、2.00、3.63、5.50、8.50及 15.10 g)之8種弗雷氏毛（von Frey hair)施用至後爪。垂直於踱面 呈遞弗雷氏毛且力度足以產生輕微彎曲。以幾秒之間隔呈 遞刺激。若快速縮爪或若觀察到在去除弗雷氏毛時立即退 縮，則記錄陽性反應。在研究時，投與後丨小時評價行為 終點。使用Dixon升降法評價評分圖案，且轉換成反應閾 值（1980, Ann Rev Pharmacol Toxicol 20:441-462)。所施加 最大力係15.10克。在研究第10天進行初始行為評定，且 在研究第12、15及18天進行後續量測。 結果表示為具有平均值之標準誤差的平均值（平均值+ SE)，每組η為12。採用單向ANOVA實施所有統計評價， 154267.doc •47· 201204365 之後藉由Dunnett’s方法與對照組進行比較。假定在p<0.05 時具有統計顯著性。使用JMP統計分析軟體（SAS Research Institute，6.0.2版）實施統計分析。 媒劑 (平均值±SE) 實例 19 10 mg/kg (平均值±SE) 嗎0非 5 mg/kg (平均值±SE) 第10天 7.83 ±1.35 11.25±1.31 8.16 ±1.22 第12天 7.12±1.27 7.38 ±0.95 3.67 ±0.30* 第15天 4.86 ±0.95 7.90 ±1.04* 3.84 ±0.45 第18天 3.27 ±0.34 6.02 ±0.72* 3.46 ±0.42 *指示統計顯著性 上表中展示實例19、嗎啡及媒劑之平均縮爪潛伏期及標 準誤差。與經媒劑及嗎啡治療之動物相比，經實例19治療 之動物在研究持續時間内發生較少異常疼痛。因此，顯示 本發明之實例19可用於預防疼痛、具體而言化學療法誘發 之疼痛，例如化學療法誘發之外周神經病變。

154267.doc -48- S

Claims (1)

1. 201204365 七、申請專利範圍： 1. 一種下式之化合物：

   其中； R1 為 C1 或 CH3 ; R2係 OH、OCH3、CH2〇H或 CH2〇CH3 ; R3係Η或與R4組合形成稠合吡咯啶_2•酮； R 係 Cl_C2 烷基、Cl-C2 氟烷基、（:（o)ch3 或 co2ch3 ; R5係 Η、CH3 或 CH2〇Ch3 ; R係Η、CH3或與R5組合形成環丙烷環；且 η為0或1 ; 或其醫藥上可接受之鹽。 2·如請求項1之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中Rl 係α。 3. 如請求項1或2中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之 鹽，其中R2係ΟΗ或CH2OH。 4. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中 R2係 CH2OH。 154267.doc 201204365 5. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中 R3係Η且R4係曱基、乙基、2-氟乙基或c(〇)CH3。 6. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中 R3係Η且R4係甲基。 7. 如請求項1之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R5 及R6獨立地選自Η及CH3。 8. 如請求項1之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R5 係Η且R6係ch3。 9. 如請求項1或8之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中

   受之鹽。

   接受之鹽。 12 ·如睛求項1、2、7、8 醫藥上可接受之鹽，. 、8、1〇或11中任一項之化合物、或其 ，其用於治療。 13. > 讀'求項 1、2、7、8 醫藥上可接受之鹽，. 14.如請求項13之化合物、 治療疼痛。 ’、10或11中任一項之化合物、或其 其用於治療或預防疼痛。 、或其醫藥上可接受之鹽，其用於

   1 5 ·如請求項 療骨關節疼痛。 154267.doc 201204365 16. 如請求項13之化合物、或其醫筚μ 穴菌樂上可接受之鹽，其用於 治療或預防化學療法誘發之疼痛。 、、 17. -種醫藥組合物’其包含如請求項中任—項之化 合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之稀釋劑或 載劑。 〆 1 8.如請求項1 7之醫藥組合物，其額 卉顆外包含一或多種治療成 份。 19.:種如請求項1至11中任-項之化合物或其醫藥上可接 受之鹽的用途，其用於製造用於治療或預防疼痛之藥 劑。 其用於治療疼痛。 20.如請求項19之用途 21. 如請求項20之用途， 22. 如請求項19之用途， 疼痛。 其用於治療骨關節疼痛。 其用於治療或預防化學療法誘發之 154267.doc 201204365 四、 指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 五、 本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   154267.doc