TW201043638A

TW201043638A - Compositions and methods for antibodies targeting complement protein C3b

Info

Publication number: TW201043638A
Application number: TW099114417A
Authority: TW
Inventors: Bijan Etemad-Gilbertson; Braydon Charles Guild; Yong-In Kim; Ingo Klagge; Alexandra Kraus; Michael Roguska; Igor Splawski; Ke-Hao Zhao
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2009-05-06
Filing date: 2010-05-05
Publication date: 2010-12-16
Also published as: WO2010136311A3; AR076655A1; CA2760757A1; IL216061A0; MA33402B1; WO2010136311A2; CL2011002756A1; KR20120088551A; UY32612A; CN102459334A; TN2011000528A1; EA201101593A1; CO6440515A2; EP2427491A2; MX2011011754A; JP2012525829A; PE20120899A1; US20100291106A1; ECSP11011445A; AU2010252156A1

Description

201043638 六、發明說明：【先前技術】年齡相關之黃斑變性（AMD)為一種進行性疾病且為年齡 65歲及65歲以上美國人視力降低及失明的主要原因。主要影響黃斑，亦即視網膜中負責閱讀或駕駛所需之高視覺銳度之部分。大多數AMD患者遭受特徵為存在稱為脈絡膜小疣之細胞外視網膜沈積物的疾病早期階段。脈絡膜小疣為細胞碎片、發炎性介體及細胞外基質成分之細胞外視〇網膜沈積物。AMD晚期表現為乾燥形式或濕潤形式，其均與視力降低相關。乾型AMD亦稱為地圖狀萎縮，其在檢眼鏡檢查時表現為相應於視網膜色素上皮（RpE)損失之局部區域之界限分明區域。濕型AMD與脈絡膜之新血管生成相關，導致布氏膜（Bruch’s membrane)喪失完整性損失及視網膜中血管生長，在此處其可常常出血。該滲漏引起對視網膜細胞之永久性損傷，該等視網膜細胞相繼死亡且在中心視覺中產生盲點。〇先天性人類糸統由補體路控構成。補體路徑用於防禦化腹性細菌感染，從而將先天性及適應性免疫連接起來；且處置掉免疫複合物及發炎性損傷之產物。補體為具有超過 3 0種參與血漿及細胞表面中之級聯反應之蛋白質的系統。補體系統及其補體組分參與各種免疫過程。舉例而言，亦稱為末端複合物或臈攻擊複合物（MAC)之補體C5b-9複合物藉由誘導膜參透性損傷而在細胞死亡中起重要作用。近期工作已證明’補體組分C3及C5為患有Amd之患者 148032.doc 201043638 中脈絡膜小疲的主要組分。Mulling，R.F等人，（2000) FASEB J 14, 835-46。已推測覆蓋於脈絡膜小疣上之rpE細胞中該等組分之存在以及膜攻擊複合物（MAC)C5b-9及其它急性期反應蛋白質之存在與可能觸發補體活化及MAC形成之過程有關。Johnson，L等人，（2001) Exp Eye Res 73, 887-896。因此，有愈來愈多的跡象表明補體组分不僅僅為先天性免疫之介體。已開出營養介入的處方來抑制乾型AMD發展成濕型 AMD ^目前，用於濕型AMD之唯一經1?1)八批准之治療包括光動力療法（PDT)、抗VEGF適體（諸如哌加他尼（pegaptanib)) 及抗VEGF抗體蘭尼單抗（ranibizuniab)。通常將該等藥物或療法投與已遭受實質視力降低之患者。對開發用於AMD之有效治療仍存在需要以替代或補充當前治療。特定而言，對可提供視力降低之早期偵測、預防或恢復之治療存在需要。【發明内容】本發明係關於一種特異性結合於人類或獼猴補體C3b蛋白之經分離抗體或其抗原結合片&，其中該抗體以小於或等於100 PM之KD結合於人類C3b及以小於或等於2〇〇 pM之 KD結合於獼猴C3b。舉例而言，本文所述之抗體或抗原結合片段可以小於或等於90 PM、小於或等於8〇 pM、小於或等於70 PM、小於或等於60 pM、小於或等於5〇 pM、小於或等於40 PM、小於或等於30 ρΜχ較佳高達小於或等於 20、19、18、17、16、15、14、13、mw τ 148032.doc 201043638 於人類C3b。該抗體或其抗原結合片段較佳以小於或等於 10 PM之Kd結合於人類C3b。舉例而言，該抗體或其抗原結合片段可以小於或等於9 pm、小於或等於8 pM、小於或等於7 pM、小於或等於6 pM、小於或等於5 pM、小於或等於4 pM、小於或等於3 pM、小於或等於2 pM或高達小於或等於1 pM之KD結合C3b。本文所述之抗體或抗原結合片段可以小於或等於25〇 PM、小於或等於240 pM、小於或等於230 pM、小於或等於220 pM、小於或等於21〇 pM、小於或4於200 pM、小於或等於丨9〇 pM、小於或等於18〇 pM、小於或等於170 PM、小於或等於160 pM、小於或等於150 PM、小於或等於140 pM、小於或等於13〇 pM、小於或等於120 PM、小於或等於110 pM、小於或等於1〇〇 PM、小於或等於90 pM、小於或等於8〇 pM、小於或等於 70 PM、小於或等於60 pM、小於或等於5〇 pM、小於或等於 40、39、38、37、36、35、34、33、32 或 31 pM、小於或等於30 pM、小於或等於20、19、18、17、16、15、 14、13、12或11 PM且較佳高達小於或等於1〇、9、8、7、 6、5、4、3、2或1 PM之KD結合於獼猴c3b。本文所述之抗體的結合親和力較佳藉由溶液平衡滴定 (SET)來測定。SET方法為此項技術中所已知且進一步詳述於下文。本發明之抗體可用於抑制替代補體路徑。舉例而言，如利用活體外溶血檢定所測量，本文所述之抗體或其片段可以小於或等於70nM、較佳小於或等於6511河、較佳小於或 148032.doc 201043638 等於50 nM、較佳小於或等於40 nM、30 nM或20 nM、且更佳小於或等於10 nM之IC50抑制替代補體路徑。如利用活體外溶血檢定所測量，本文所述之抗體或其片段可以小於或等於100 nM、較佳小於或等於90 nM、較佳小於或等於80 nM、較佳小於或等於75 nM、且更佳小於或等於7〇 nM之IC50抑制獼猴中之替代補體路徑。如利用活體外c3b 沈積所測量，本文所述之抗體或其片段可以小於或等於 nM、小於或等於25 nM、小於或等於2〇 nM、且較佳小於或等於10 nM之IC50抑制替代補體路徑。如利用活體外C3b 沈積所測量，本文所述之抗體或其片段可以小於或等於7〇 nM、小於或等於50 nM、小於或等於40 nM、且較佳小於或等於30 nM之IC50抑制獼猴中之替代補體路徑。如利用補體膜攻擊複合物沈積所測量’本文所述之抗體或其片段可以小於或等於5 nM、較佳小於或等於4 、3 nM、2 nM、且更佳小於或等於1 nM之IC50抑制替代補體路徑。如利用補體膜攻擊複合物沈積所測量，本文所述之抗體或其片段可以小於或等於2〇 nM、較佳小於或等於Η nM、18 nM、17 nM、16 nM、15 nM、14 nM 或 13 nM、且更佳小於或等於l〇 nM之IC50抑制獼猴中之替代補體路徑。如利用C3a及C5a之產生所測量，本文所述之抗體或其片段可以小於或等於100 nM、較佳小於或等於9〇 nM、肋 nM、70 nM、60 nM、50 nM、40 nM、30 nM或 20 nM、且更佳小於或等於1 〇 nM之IC50抑制替代補體路徑。 148032.doc 201043638 本發明中所述之抗體或其抗原結合片段較佳具有如表12 中所示之Fab之結合特徵。本發明亦包括特異性結合於人類或獼猶補體C3b蛋白且與表1中所述之抗體交叉競爭的經分離抗體或其抗原結合片段。本文所述之抗體或其抗原結合片段可為單株抗體、人類或人類化抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段、Fv片段、F(ab，)2片段、或ScFv片段、及/或IgG同型。本發明之抗體可包括一種構架，其中已對各別人類VH 或VL生殖系序列之抗體構架進行胺基酸取代。在一態樣中’本發明之抗體以該抗體結合於C3之親和力至少1000倍的親和力結合於C3b。本發明包括一種具有表1中抗體9556之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表1中抗體9611之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表1中抗體9612之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表1中抗體 9609之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表1中抗體9610之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明進一步包括一種具有表1中抗體 9674之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明進一步包括一種具有表1中抗體9675之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表1中抗體 9124之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明 148032.doc 201043638 亦包括一種具有表1中抗體9397之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括-種具有表1中抗體 9398之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明進步匕括#具有表！中抗體9136之重鍵及輕鍵序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表】中抗體9141之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明進—步包括一種具有表1中抗體9373之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表” 抗體9423之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。D 本毛月包括種具有表1中抗體9556之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表 1中抗體9611之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結。片奴。本發明包括一種具有表〗中抗體之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表1中抗體96〇9之重鏈及輕鍵可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表1中抗體9610之重鏈^輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明◎ 、v匕括種具有表1中抗體9674之重鍵及輕鏈可變域序歹J的抗體或其抗原結合片段。本發明進一步包括一種具有表1中抗體9675之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表丄中抗體9124之重鍵及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括種具有表1中抗體9397之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表i中抗體 148032.doc 201043638 9398之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明進一步包括一種具有表1中抗體9136之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表1中抗體9141之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明進一步包括一種具有表丨中抗體 9373之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表1中抗體9423之重鏈及輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦係關於一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包括選自由 SEQ ID NO: 1、15、29、43、57、71、85、 99、113、127、141、155、169 及 183 組成之群之重鏈 CDR1 ;選自由 SEQ ID NO: 2、16、30、44、58、72、 86、100、114、128、142、156、170及 184組成之群之重鏈 CDR2 ;及選自由 SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、 73、87、101、115、129、143、157、171及 185組成之群之重鏈CDR3，其中該經分離抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白C3b。在另一態樣中，該經分離抗體或其抗原結合片段進一步包括選自由SEQ ID NO: 4、18、32、46、 60、 74、88、102、116 ' 130 > 144、158、172及 186組成之群之輕鏈CDR1 ;選自由SEQ ID NO: 5、19、33、47、 61、 75、89、103、117、131、145、159、173 及 187 組成之群之輕鏈CDR2 ;及選自由SEQ ID NO: 6、20、34、 48、62、76、90、104、118、132、146、160、174及 188 組成之群之輕鏈CDR3。 148032.doc -9- 201043638 本發明亦係關於一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包括選自由 SEQ ID NO: 4、18、32、46、60、74、 ' 102、116、130、144、158、172 及 186 組成之群之麵鍵 CDR1 ;選自由 SEQ ID NO: 5、19、33、47、61、 1 x 7 5、 89、103、117、131、145、159、173 及 187組成之群之 _ 鏈 CDR2 ;及選自由 SEQ ID NO: 6、20、34、48、62 76、90、104、118、132、146、160、174及 188組成之群之輕鏈CDR3，其中該經分離抗體或其抗原結合片段結人於補體蛋白C3b。本發明亦係關於一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包括選自由 SEQ ID NO: 7、21、35、49、63、77、91、 105、 119、133、147、161、175及189組成之群之重鏈可變域序列，且進一步包括選自由SEQ ID NO: 8、22、30、 50、64、78、92、106、120、134、148、162、176及 190 組成之群之輕鏈可變域序列，其中該經分離抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白C3b。本發明亦係關於一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包括選自由 SEQ ID NO: 8、22、36、50、64、78、92、 106、 120、134、148、162、176及190組成之群之輕鏈可變域序列’其中該經分離抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白C3b。本發明亦係關於一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包括與選自由 SEQ ID NO: 7、21、35、49、63、77、91、 105、119、133、147、161、175及189組成之群之序列具 148032.doc -10- 201043638 有至少95°/。序列一致性的重鏈可變域，其中該抗體結合於 C3b。在一態樣中，該經分離抗體或其抗原結合片段亦包括與選自由 SEQ ID NO: 8、22、36、50、64、78、92、 106、120、134、148、162、176及190組成之群之序列具有至少9 5 %序列一致性的輕鏈可變域。本發明亦係關於一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包括與選自由 SEQ ID NO: 8、22、36、50、64、78、92、〇 1〇6、I20、134、148、162、176及190組成之群之序列具有至少95%序列一致性的輕鏈可變域，其中該抗體結合 C3b。本發明進一步係關於一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包括與選自由SEQ ID NO: 9、23、37、51、65、 79、93、107、121、135、149、163、177及 191 組成之群之序列具有至少95°/。序列一致性的重鏈，其中該抗體結合於C3b。在一態樣中，該經分離抗體或其抗原結合片段亦 ❹ 包括與選自由 SEQ ID NO: 10、24、38、52、66、80、 94、108、122、136、150、164、178及 192組成之群之序列具有至少9 5 %序列一致性的輕鍵。本發明進一步係關於一種經分離抗體或其抗原結合片段’其包括與選自由SEQ ID NO: 10、24、38、52、66、 80 94、i〇8、122、136、150、164、178及 192組成之群之序列具有至少95%序列一致性的輕鏈，其中該抗體結合 C3b。本發明亦包括醫藥組合物，其包含本文所述之抗體組合 148032.doc 201043638 物以及醫藥學上可接受之載劑。特定言之，本發明包括— 種包含表1之抗體或其抗原結合片段（諸如抗體9556、 9611、9612、9609、9610、9674、9675、9124、9397、 9398、9136、9141、9373或9423)之醫藥組合物。本發明亦包括一種包含表1之兩種或兩種以上抗體或其抗原結合片段之組合的醫藥組合物。本發明亦包括一種經分離核酸’其包含編碼包括與選自由 SEQ ID NO: 7、21、35、49、63、77、91、1〇5、119、 133、147、161、175及189組成之群之序列具有至少95% 序列一致性的重鏈可變域之多肽的序列。本發明亦係關於一種經分離核酸，其包含編碼包括與選自由 SEQ ID NO: 8、22、36、50、64、78、92、106、 120、134、148、162、176及190組成之群之序列具有至少 95%序列一致性的輕鏈可變域之多肽的序列。在一態樣中，本發明亦包括一種包括一或多種本文所述之核酸分子的載體。本發明亦包括一種經分離宿主細胞，其包括編碼上述抗體之重鏈之重組DNA序列及編碼所述抗體之輕鏈之第二重組DNA序列，其中該等DNA序列可操作地連接至啟動子且能夠在宿主細胞中表現。預期該抗體可為人類單株抗體。亦預期該宿主細胞為非人類哺乳動物細胞。本發明進一步係關於一種治療年齡相關之黃斑變性之方法，其中該方法包括向有需要之個體投與有效量的包含本文所述之抗體或其片段之組合物的步驟。預期該個體為人 148032.doc •12- 201043638 類。本發明亦提供—種抑制個體中替代補體路徑之方法，其中ι方法i括向有需要之個體投與有效量的包含本文所述之抗體或抗原結合片段之組合物的步驟。在一態樣中，該個體為人類。本發明亦提供一種抑制C3b結合於因子b、P或Η之方法’其包括使C3b與本文所述之抗C3b抗體或其片段接觸。 ❹ 本發明亦提供一種抑制C3轉化酶、C4轉化酶及C3b-C3b 一聚體形成之方法’其包括使C3b與抗C3b抗體或其片段接觸。本發明亦包括一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包含至少一個與選自由SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、6、 15 16、17、18、19、20、29、30、31、32、33、34、 43、44、45、46、47、48、57、58、59、60、61、62、 Q 71、72、73 ' 74、75、76、85、86、87、88、89及 90組成之群之序列具有至少80%、85°/。、90。/。、及高達至少95%序列一致性的互補決定區（CDR) ’其中該抗體結合於補體蛋白 C3b。本發明亦包括一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包含至少—個選自由 SEQ ID NO: 1、2、3、15、16、17、 29 ' 30、31、43、44、45、57、58、59、71、72、73、 85、86及87組成之群之重鏈cdR序列，其中該抗體結合 C3b 〇 148032.doc •13· 201043638 本發明亦包括一種經分離抗體或其抗原結合片段，其包含至少一個選自由 SEQ ID NO: 4、5、6、18、19、20、 32、 33、34、46 ' 47、48、60、61、62、74、75、76、 88、89及90組成之群之輕鏈CDR序列，其中該抗體結合 C3b。本發明亦包括一種經分離抗原結合多肽，其包含選自由 SEQ ID NO: 1、15、29、43、57、71 及 85 組成之群之重鏈 CDR1 ;選自由 SEQ ID NO: 2、16、30、44、58、72及 86 組成之群之重鏈CDR2 ;及選自由SEQ ID NO: 3、17、 31、45、59、73及87組成之群之重鏈CDR3，其中該抗原結合多肽結合於補體蛋白C3b。本發明進一步包括一種抗原結合多肽，其包含選自由 SEQ ID NO: 4、18、32、46、60、74 及 88 組成之群之輕鏈 CDR1 ;選自由 SEQ ID NO: 5、19、33 ' 47、61、75及 89 組成之群之輕鏈CDR2 ;及選自由SEQ ID NO: 6、20、 34、48、62、76及90組成之群之輕鏈CDR3，其中該抗原結合多肽結合於補體蛋白C3b。除包括上述重鏈CDR序列之抗原結合多肽外，抗原結合多肽亦可包括選自由SEQ ID NO·· 4、18、32、46、60、74 及88組成之群之輕鏈CDR1 ;選自由SEQ ID NO: 5、19、 33、 47、61、75及89組成之群之輕鏈CDR2 ;及選自由 SEQ ID NO: 6、20、34、48、62、76 及 90 組成之群之輕鏈 CDR3。本文所述之抗原結合多肽較佳以小於或等於1 〇〇 pM、較 148032.doc -14- 201043638 佳小於或等於10 PM、較佳小於或等於2 pMiKD結合 C3b另外，該抗原結合多肽較佳結合於人類及獼猴 C3b » 本發明亦包括一種調節C3b之方法，其包含向有需要之個體投與有效量的本文所述之抗體、其抗原結合片段或抗原結合多狀。任何上述抗體或其抗原結合片段可為單株抗體或其抗原結合片段。〇定義除非另作疋義，否則本文中所用之所有技術及科學術語均具有與通常由一般熟習本發明所屬之技術者所瞭解之含義相同的含義。如本文中所用之術語「抗體」包括完整抗體及其任何抗原結合片段（亦即「抗原結合部分」）或單鏈。天然存在之「抗體」為包含經二硫鍵相互連接之至少兩條重（H)鏈及 ◎ 至少兩條輕（L)鏈的醣蛋白。各重鏈由重鏈可變區（本文中縮寫為VH)及重鏈怪定區構成。重鍵怔定區包含三個結構域，亦即CHI、CH2及CH3。各輕鏈由輕鏈可變區（本文中縮寫為VL)及輕鏈恆定區構成。輕鏈恆定區由一個結構域 CL構成。VH及VL區可進-步再分為高變區（稱作互補決定區（CDR)) ’其間穿插有較保守區（稱作構架區。各及VL由三個CDR及四個FR構成，其自胺基末端至羧基末端按以下順序排列·· FR1 ' CDR1、FR2、CDR2、呢、 CDR3、FR4。重鏈及輕鏈之可變區含有與抗原相互作用的 148032.doc -15· 201043638 結合域。抗體之恆定區可介導免疫球蛋白與包括免疫系統之各種細胞（例如效應細胞）及經典補體系統之第一組分 (Clq)的宿主組織或因子之結合。如本文中所使用之術語抗體之「抗原結合部分」係指保留與指定抗原（例如C3b)特異性結合之能力的完整抗體之一或多個片段。抗體之抗原結合功能可由完整抗體之片段執行。術語抗體之「抗原結合部分」内所涵蓋之結合片段的實例包括Fab片段，其為由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段；F(ab)2片段，其為包含兩個由鉸鏈區上之雙硫橋連接之Fab片段的二價片段；由VH及CH1域組成之Fd片段；由抗體之單個臂之VL及VH域組成之Fv片段；由VH域或VL域組成之單域抗體（dAb)片段（Ward等人，1989 Nature 341:544-546);及經分離互補決定區（CDR)。此外，儘管Fv片段之兩個域（VL及VH)由獨立基因編碼，但其可使用重組方法由人工肽連接子聯接，該連接子使其能夠製成其中VL及VH區配對形成單價分子之單一蛋白鏈（稱為單鏈Fv(scFv);參見，例如Bird等人，1988 Science 242:423-426 ;及 Huston 等人，1988 Proc. Natl· Acad. Sci. 85:5879-5883)。該等單鏈抗體包括抗體之一或多個「抗原結合部分」。此等抗體片段係使用熟習此項技術者已知的習知技術獲得，且可以與完整抗體相同之方式來就效用對該等片段進行筛檢。抗原結合部分亦可併入單域抗體、最大抗體（maxibody)、微型抗體（minibody)、雙功能抗體、三功能抗體、四功能 148032.doc -16- 201043638 抗體、v-NAR 及雙-scFv 中（參見例如，Hollingei^Huds〇n， 2005, Nature Biotechnology，23，9，1 126-1136)。可將抗體之抗原結合部分移植至基於諸如Ιπ型纖維結合蛋白（Fn3) 之多肽之骨架中（參見美國專利第6,703,199號，其描述纖維結合蛋白多肽單株抗體）。抗原結合部分可併入包含一對串聯Fv區段（VH_CH卜vh-CH1)之單鏈分子中，該等巧區段連同互補輕鏈多肽一起形 ❹ 成一對抗原結合區（Zapata等人，1995 Protein Eng. 8(10):1057-1062 ;及美國專利第 5,641 87〇號）。如本文中所使用之術語「親和力（Affinity)」係指單一抗原位點處抗體與抗原之間相互作用的強度。在各抗原位點内，抗體「臂」之可變區經由弱非共價力與抗原在諸多位點處相互作用；相互作用愈多，親和力愈強。如本文中所使用之術語「親和性（avidity)」係指抗體-抗原複合物之總體穩定性或強度之資訊性量度。其受三個主 Q 要因素控制.抗體抗原決定基親和力；抗原及抗體之價數，及相互作用部分之結構排列。最終該等因素定義抗體之特異性，亦即特定抗體與正確抗原之抗原決定基結合之可能性。術語「胺基酸」係指天然存在及合成之胺基酸以及以類似於天然存在胺基酸的方式起作用之胺基酸類似物及胺基酸模擬物。天然存在胺基酸為彼等由遺傳密碼子編碼之胺基酸以及彼等後來經修飾之胺基酸，例如羥脯胺酸、羧基麩胺酸及0-磷絲胺酸。胺基酸類似物係指具有與天然存 148032.doc -17· 201043638 在胺基酸相同之基本化學結構（亦即結合至氫、羧基、胺基及R基團之α碳）的化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞礙、甲硫胺酸甲基疏。該等類似物具有經修飾之R基團（例如正白胺酸）或經修飾之肽骨架，但保留與天然存在胺基酸相同之基本化學結構。胺基酸模擬物係指具有不同於胺基酸之-般化學結構之結構但以類似於天然存在胺基酸之方式起作用的化合物。如本文中所用之術語「結合特異性」係指個別抗體結合位點與僅-個抗原決定子反應的能力。抗體之結合位點位〇於分子之Fab部分中且由重鏈及輕鏈之高變區構建。抗體之結合親和力為單-抗原決定子與抗體上單一結合位點之間的反應強度。其為作用於抗原決定子與抗體結合位點之間的吸引力及排斥力之總和。兩個貫體之間的特異性結合意謂以至少丨χ 1 〇7 丨、1 〇8 Μ-丨、1〇9 Μ' 10丨。M-i、1〇丨丨 π、l〇12 μ' ι〇13 …之平衡常數（KA)結合。短語「特異性（或選擇性）結合」於抗體（例如C3b結合抗體）係指可判定蛋白質之異源群體及其◎ 匕生物製劑中存在同源抗原（例如人類C3b或獼猴的結。反應。除上述平衡常數（KA)之外，本發明之c3b結合抗體通常亦具有約 lx10.2 S-1、lxl〇-3 s•丨、ΐχΐ〇-4 s]、ΐχΐ〇 4 s1或更低之解離速率常數（Kd)，且以至少1〇倍、較佳ι〇〇倍' 或高達Η)00倍或更大倍數於其與非特異性抗原（例如〇)結合之親和力的親和力與C3b結合。本文中短語「識別抗原之抗體」1「對抗原具特異性之抗體」可與術語「特 148032.doc -18- 201043638 異性結合於抗原之抗體」互換使用。如本文中所使用，「新抗原決定基」或「新抗原」可互換使用’且為在蛋白水解裂解C3後存在於C3b上之蛋白質之抗原部分。在尚未裂解之C3上，該等新抗原決定基不可接近。術語「與黃斑變性相關之病狀或病症」係指許多病狀中之任何病狀，在該等病狀中視網膜黃斑例如由於黃斑細胞生長降低、黃斑細胞（例如RPE細胞）之死亡或重排增加、〇喪失正常生物功能或該等事件之組合而變性或變得功能異常。黃斑變性造成正常黃斑喪失細胞及/或細胞外基質之組織架構完整性及/或黃斑細胞喪失功能。黃斑變性相關病症之實例包括AMD、北卡羅來納黃斑營養不良（N〇rth Carolina macular dystrophy)、索斯比氏眼底營養不良 (Sorsby's fundus dystr〇phy)、斯特格氏病（Stargardt，s dlSease)、圖案營養不良（Pattern dystrophy)、貝斯特氏病 ◎ (Best disease)、顯性脈絡膜小疢（dominant drusen)及放射狀玻璃膜夜（malattia leventinese)(放射狀脈絡膜小疲）。該術語亦涵蓋在黃斑功能異常及/或變性之前或之後發生之頁斑外變化。因此，術語「黃斑變性相關病症」亦廣泛包括改變或損害黃斑之完整性或功能（例如對rPE或布氏膜之損害）之任何病狀。舉例而言，該術語涵蓋視網膜脫落、脈絡膜視網膜變性、視網膜變性、感光器變性、RpE變性、黏多醣病、視桿-視錐營養不良、視錐_視桿營養不良及視錐變性。 148032.doc -19- 201043638 術語「補體組分」、「補體蛋白」或「補體組分蛋白」係指補體系統之活化中所涉及之分子。經典路徑組分包括例如 Clq、Clr、Cls、C4、C2、C3、C5、C6、C7、C8、 C9及C5b-9複合物（膜攻擊複合物：MAC)。替代路徑組分包括例如因子B、因子D、備解素（properdin)、j。術語「調節」或「調節（m〇dulate)」在本文中可互換使用以指活性或生物過程（例如補體過程）之上調（亦即活化或刺激（例如藉由促效或強化））及下調（亦即抑制或抑止（例如藉由拮抗、降低或抑制））。「調節」欲描述使過程上調或❹ 下調。藉由某一刺激劑上調之過程可藉由該刺激劑之枯抗劑來抑制。相反地，藉由某一調節劑下調之過程可藉由該調節劑之促效劑來抑制。術語「補體路徑相關分子」、「補體路徑分子」及「補體路徑相關蛋白」可互換使用且係指在補體活化及由經活化補體系統介導'回應於經活化補體系統或由經活化補體系統觸發之下游細胞活性中起作用的各種分子。其包括補 ❹ 體路徑之引發劑（亦即，直接且按次間接觸發補體系統活化之分子）、在補體活化期間產决忐座生戈起作用之分子（例如，補體蛋白/酶，諸如C3、C5、CSho L5b_9、因子 B、因子D、MASP-1 及MASP-2)、補體辱雜斗、上又體或抑制劑（例如，叢集蛋白 (clusterin)、玻璃連結蛋白f — 皮曰（Vltr〇nectin)、CR1 或 CD59)及由經活化補體系統調節或觸路+八7 I之刀子（例如，膜攻擊複合物_ 抑制因子’ MACIF ;參貝彻Λ 〇 . Ή如 ’ Sugita等人，J Biochem， 106:589-92，1989)。因此，a + b 除本文中所述之補體蛋白外， 148032.doc -20- 201043638 補體路徑相關分子亦包括例如C3/C5轉化酶調節劑 (RCA)，諸如1型補體受體（亦稱為CR1或CD35)、2型補體受體（亦稱為CR2或CD21)、膜輔因子蛋白（MCP或CD46)及 C4bBP ; MAC調節劑，諸如玻璃連結蛋白、叢集蛋白（亦稱為「SP40、40」）、CRP、CD59及同源限制因子（HRF); 免疫球蛋白鏈，諸如IgK、IgX或Igy) ; C1抑制劑；及其它蛋白質，諸如 CR3、CR4(CD11 b/18)及 DAF(CD55)。術語「受補體路徑調節之細胞活性」包括因C5b-9攻擊複合物、血管渗透性改變、平滑肌細胞之收縮及遷移、τ 細胞增殖、免疫黏附、樹突狀細胞、單核細胞、粒細胞及也小板之聚集、吞嗟作用、嗜中性白血球（ρΜΝ)及巨嗤細胞之遷移及活化導致之細胞損傷。另外，補體路徑之活化使得由補體路徑内之副產物導致之促發炎反應增加。與補體路徑之活化相關之病症包括腎炎、哮喘、再灌注損傷、血液透析、類風濕性關節炎、全身性狼瘡、牛皮癖、多發性硬化症、移植、阿茲海默氏病 (Alzheimer's disease)、aHUS、MPGN II或任何其它補體介導之疾病。與黃斑變性相關之病症包括AMD、北卡羅來納黃斑營養不良、索斯比氏眼底營養不良、斯特格氏病、圖案詧養不良、貝斯特氏病、顯性脈絡膜小疣及放射狀玻璃膜疣（放射狀脈絡膜小疣）、在黃斑之功能異常及/或變性之前或之後發生的黃斑外變化、視網膜脫落、脈絡膜視網膜變性、視網膜變性、《光器變性、RPE變性、黏多聽病、視桿-視錐營養不良、視錐_視桿營養不良及視錐變性。 148032.doc -21- 201043638 如本文中所用，術語「個體」包括任何人類或非人類動物。術#「非人類動物」包括所有非人類脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，諸如非人類靈長類動物、餐齒動物、兔、綿羊、犬、貓、馬、牛、鳥、兩棲動物、攸行動物等。術#「敗合抗體」為一種抗體分子’其申（a)恆定區或其部分經變更、置換或交換以便抗原結合位點（可變區）與不同或改變之種類'效應功能及/或物種的恆定區、或賦予〇嵌合抗體新特性之完全不同分子（例如酶、毒素、激素、生長因子、藥物等）連接；或（b)可變區或其部分用具有不同或改變之抗原特異性之可變區變更、置換或交換。舉例而言’小鼠抗體可藉由使用人類免疫球蛋白之恆定區置換其恒定區來修飾。歸因於用人類恆定區置換，嵌合抗體可保留其識別抗原之特異性同時在人類中與原始小鼠抗體相比具有較低抗原性。術補體C3b蛋白」或「C3b」可互換使用且係指不〇同物種之C3b蛋白。舉例而言’人類C3b具有如SEq m NO. 197(A鏈）及198(B鏈）所述之序列。人類C3b可獲自

Complement Technology lne· (Tyier，Τχ)。獼猴 C3b可如以下實例部分中所說明來產生。術經保守修飾之變異體」適用於胺基酸及核酸序列。相對於特定核酸序列，經保守修飾之變異體係指彼等編碼相同或基本上相同之胺基酸序列之核酸，或其中核酸 148032.doc •22· 201043638 並不編碼胺基酸序列成基本上相同之序列。由於遺傳密碼子之簡併性’大量功能上相同之核酸編碼任何指定蛋白質。例如，密碼子GCA、GCC、GCG及GCU皆編碼胺基酸丙胺酸。因此’在每個由密碼子指定之丙胺酸位置處，密碼子可在不改變所編碼之多肽的情況下變更成任何所述相應密碼子。該等核酸變異為「沉默變異（silent variation)」，其為一種保守修飾之變異。本文中編碼多肽之各種核酸序列亦描述核酸之各種可能沉默變異。熟習此項技術者將認識到，核酸中之各密碼子（除通常為曱硫胺酸之唯一密碼子的AUG及通常為色胺酸之唯一密碼子的 TGG外）可經修飾以獲得功能上相同之分子。因此，編碼多肽之核酸之各沉默變異隱含於各所述序列中。對於多肽序列，「經保守修飾之變異體」包括對多肽序列進行的導致一胺基酸經化學上相似之胺基酸取代的個別取代、缺失或添加。提供功能上相似之胺基酸之保守取代表為此項技術中所熟知。該等經保守修飾之變異體可附加於且並不排除本發明之多形變異體、物種間同源物及等位基因。以下8個組含有彼此為保守取代之胺基酸：丨）丙胺酸（A)、甘胺酸（G) ; 2)天冬胺酸（D)、麵胺酸（E) ; 3)天冬酿胺（N)、楚胺酿胺（Q) ; 4)精胺酸（R)、離胺酸（K) ; 5)異白胺酸（I)、白胺酸（L)、曱硫胺酸（M)、纊胺酸（v) ; 6)苯丙胺酸（F)、酪胺酸（Y)、色胺酸（W) ; 7)絲胺酸（s)、蘇胺酸 ⑺’及8)半胱胺酸（c)、甲硫胺酸（M)(參見例如Creighton, Proteins (1984))。在一些實施例中，使用術語「保守序列 148032.doc -23- 201043638 修飾」來指並不明顯影響或改變含有該胺基酸序列之抗體之結合特徵的胺基酸修飾。術語「交叉阻斷（cross_block)」、「交叉阻斷（cross_ blocked)」及「交又阻斷（cr〇ss_bi〇cking)」在本文中可互換使用，意謂在標準競爭性結合檢定中抗體或其它結合劑干擾其它抗體或結合劑結合C3之能力。可使用標準競爭性結合檢定測定抗體或其它結合劑能夠干擾另一抗體或結合分子結合C3之能力或程度，且因此判定其能否根據本發明稱為交叉阻斷。一合適檢定涉及使用〇 Biacore技術（例如藉由使用BIAc〇re 3〇〇〇儀器⑺代，

Uppsala，Sweden))，其可使用表面電漿共振技術測量相互作用之程度。測量交叉阻斷之另一檢定使用基於A之方法。術語「抗原決定基」意謂能夠特異性結合於抗體之蛋白質決定子。抗原、決定基通常由化學活性表面分子群（諸如胺基酸或糖側鏈）組成且通常具有特定三維結構特徵以及荷質比特徵。構形抗原決定基及非構形抗原決定基之區別〇在於在變性溶劑存在下，與前者(而非後者)之結合減少。如本文中所用’術語IgG抗體或其片段（例如㈣片段）之「^親和力」係指抗體對於目標抗原具有1q.8 _更小' !〇 Μ或更小、或1〇.】、、或或更小、或1〇 ]、或更小、或1〇-丨3 μ或更小之kd。鋏品「_ U然而，「高親和力」結合、於其它抗體同型可能改變。舉例而言，_同型之「高親和力」結合係指抗體具有1〇-7 _更小、或ι〇.8 Μ或更 148032.doc -24- 201043638 小之仙。在一態樣中，本文所述之抗⑶抗體或其抗原社合片段具有小於或等於lnM、較佳小於或等於^ 佳小於或等於100pM、及更佳小於或等於ι〇ρΜ之KD。如本文中所用，術語「人類抗體」意欲包括具有其中構架區及CDR區均來源於人類來源之序列之可變區的抗體。此外’若抗冑含有怪定H ’則該恆定區亦來源於該等人類序列（例如人類生殖系序列或人類生殖系序列之突變形式）。本發明之人類抗體可包括並非由人類序列編碼之胺基酸殘基（例如藉由活體外隨機或定點突變誘發或藉由活體内體細胞突變所引入之突變）。術5#「人類單株抗體」係指顯示單一結合特異性之抗體’其具有其中構架區及CDR區來源於人類序列之可變區。在一實施例中，人類單株抗體係由包括與永生化細胞融合之B細胞的融合瘤產生’該B細胞係自具有包含人類重鏈轉瘦基因及輕鏈轉殖基因之基因組的轉殖基因非人類動物（例如轉殖基因小鼠）獲得。「人類化」抗體為保留非人類抗體之反應性同時在人類中具有較低免疫原性的抗體。其可例如藉由保留非人類 CDR區且使抗體之剩餘部分置換為其人類對應部分（亦即怪定區以及可變區之構架部分）來獲得。參見例如M〇rris〇n 專人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855，1984 ; Morrison及 Oi，Adv. Immunol.，44:65-92，1988 ; Verhoeyen 等人，Science, 239:1534-1536，1988 ; Padlan，Molec. Immun.，28:489-498，1991 及 Padlan，Molec. lmmun·, 148032.doc -25- 201043638 31:169-217，1994。人類工程改造技術之其它實例包括（但不限於）US 5,766,8 86中所揭示之乂〇11^技術。在兩個或兩個以上核酸或多肽序列之情形中，術語「— 致」或「一致性」百为比係指相同之兩個或兩個以上序列或子序列。當如使用一種以下序列比較算法或由手動對準及目視檢查所測量在比較窗或指定區域上進行比較且對準以獲得最大一致性時，若兩個序列具有所規定百分比之相同胺基酸殘基或核苷酸（亦即在指定區域上或若未指定則在整個序列上具有60% —致性，視情況具有65%、7〇%、 0 75%、80%、85%、90%、95。/。或 99%—致性），則兩個序列為「實質上一致」。一致性視情況存在於長度為至少約5〇個核苷酸（或10個胺基酸）之區域上、或更佳存在於長度為 100至500或1000或更多個核苷酸（或2〇、5〇、2〇〇或更多個胺基酸）之區域上。為進行序列比較，通常-個序列充當測試序列所比較的參考序列。當使用序列比較算法時，將測試序列及參考序列輸入電冑，必I時指定子序列座標且指定序列算法程式❹ 參數。可使用預設程式參數或可指定替代參數。隨後序列比較算法基於程式參數計算測試序列相對於參考序列之序列一致性百分比。本文中所用’ 「比較窗」包括參考連續位置數目選自由20至_、通常約50至約2〇〇、更通常約⑽至約15〇組成之群的任一者之區段’其中在最佳對準兩個序列之後，序列可與具有相同數目連續位置之參考序列相比較。對準序 148032.doc •26· 201043638 列以供比較之方法為此項技術中所熟知。可例如由Smith 及 Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c之局部同;原算法，由 Needleman及 Wunsch，J. Mol. Biol. 48:443, 1970之同源對準算法，由 Pearson及 Lipman, Proc. Nat'l. Acacj Sci· USA 85:2444, 1988之相似性搜尋法，由該等算法之電腦化實施（Wisconsin Genetics Software Package, Genetics

Computer Group, 575 Science Dr.，Madison, WI 中之 gap、 BESTFIT、FASTA及TFASTA)或藉由手動對準及目视檢查 (參見例如 Brent 等人，Current Protocols in M〇iecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (ringbou編，2003))對序列進行最佳對準以供比較。適用於測定序列一致性及序列相似性百分比之算法的兩個實例為BLAST及BLAST 2.0算法，其分別描述於Altschul 等人，Nuc. Acids Res. 25:3389-3402, 1977;及 Altschul 等人，J. Mol. Biol· 215:403-410，1990 中。用於執行 BLAST 分析之軟體可經由國家生物技術資訊中心（National Center for Biotechnology Information)公開獲得。此算法涉及首先藉由鑑別查詢序列中長度為W之短字組來鑑別高得分序列對（HSP)，其在與資料庫序列中相同長度之字組對準時匹配或滿足一些正值臨限得分T。T稱為鄰近字組得分臨限值 (Altschul等人，前述）。該等初始鄰近字組樣本充當啟始搜尋以發現含有其之較長HSP的種子。只要累積對準得分可增加該等字組樣本就一直沿各序列雙向延伸。對於核苷酸序列，使用參數M(—對匹配殘基之獎勵得分；始終>〇)及 148032.doc 27· 201043638 N(錯配殘基之懲罰得分；始終，計算累積得分。對於胺基酸序列，使料分轉計算累積得分。t出現以下情況時停止字組樣本在各方向上之延伸：累積對準得分比盆最大所獲值減少數量X;冑因於一或多個負得分殘基對準之積累，累積得分降至零或零以下；或到達任—序列之末端。BLAST算法參數W、ΤΑχ決定對準之敏感性及速度。 BLASTN程式（對於核㈣序列）使用字長㈤為"、期望值 ⑻為丨0、M=5、N=-4及比較兩條股作為預設值。對於胺基酸序列，BLASTP程式使用字長為3、及期望值（幻為 H)，及BLOSUM62計分矩陣（參見Henik〇ff及如如订，

Pf〇c· Natl· Acad· Sci· USA 89:10915，1989)對準（B)為 50、期望值（E)為10、M=5、N=-4及比較兩條股作為預設值。 BLAST算法亦進行兩個序列之間相似性的統計分析（參

見例如 Karlin 及 Altschul，Proc_ Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787，1993)。BLAST算法提供之一個相似性量度為最小和機率（P(N)) ’其提供兩個核苷酸或胺基酸序列之間會偶然發生匹配的機率指標。舉例而言，若測試核酸與參考核酸之比較中最小和機率小於約〇.2，更佳小於約 0.01 ’且最佳小於約0.001，則認為核酸與參考序列相似。兩條胺基酸序列之間的一致性百分比亦可使用已併入 ALIGN程式（2.0版）中之E. Meyers及W· Miller之算法 (Comput.Appl.Biosci.，4:ll-17，1988)H^^PAM12(^tM^ 殘基表（weight residue table)、間隙長度罰分為12及間隙罰分為4來測定。此外，兩條胺基酸序列之間的一致性百分 148032.doc •28- 201043638 比可使用已併入GCG套裝軟體（可在h坤得）中 GAP 私式中的 Needleman 及 Wunsch(j _，則 48.444 453，1970)算法，使用 B1〇ss〇m 62矩陣或 pAM25〇矩陣及間隙加權16、14、12、1〇、8、6或4及長度加權卜 2、3、4、5或ό來測定。除以上所述之序列一致性百分比以外，兩個核酸序列或多肽為實質上-致之另一指標為如下所述由第一核酸編碼〇之多狀與針對由第二核酸編碼之多肽產生的抗體在免疫上交叉反應。因此，舉例而言，若兩個肽之不同之處僅在於保守取代，則多1通常與第^多肽實質上一1。兩條核酸序列實質上一致的另一指標為如下所述兩個分子或其互補序列在嚴格條件下彼此雜交。兩條核酸序列實質上一致的另一指標為可使用相同引子來擴增序列。術語「經分離抗體」係指實質上不含具有不同抗原特異性之其它抗體的抗體（例如特異性結合C3b之經分離抗體實〇質上不含特異性結合除C3b以外之抗原的抗體）。然而，特異性結合C3b之經分離抗體可對其它抗原可具有交又反應性。此外，經分離抗體可實質上不含其它細胞物質及/或化學物質。術語「同型」係指由重鏈恆定區基因提供之抗體種類 (例如IgM、IgE、IgG，諸如IgGl或IgG4)。同型亦包括該等種類中一者之經修飾形式，其中已進行修飾以改變以功能’例如以增強或降低效應功能或與Fc受體之結合。如本文所用之術語「Kassoc」或「Ka」意欲指特定抗 148032.doc -29· 201043638 體-抗原相互作用之締合速率，而如本文所用之術語「Kdis」或「Kd」意欲指特定抗體-抗原相互作用之解離速率。如本文所使用之術語「KD」意指解離常數，其係自 Kd與Ka之比率（亦即Kd/Ka)獲得且以莫耳濃度（M)表示。抗體之KD值可使用此項技術中充分確立之方法測定。一種測定抗體KD之方法係使用表面電漿共振或使用生物感測器系統，諸如Biacore®系統。如本文中所用，術語「單株抗體」或「單株抗體組合

物」係指具有單一分子組成之抗體分子的製劑。單株抗體組合物對特定抗原決定基顯示單一結合特異性及親和力。術語「核酸」與術語「聚核苷酸」在本文_可互換使用且係指呈單股或雙股形式之脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。該術語涵蓋含有已知核苷酸類似物或經修飾骨架殘基或鍵聯的核酸’該等核苷酸類似物或經修飾骨架殘基或鍵聯為合成、天然、存在及非天然存在的，具有與參考核酸相結合㈣且以類似於參考核$酸的方式代

射為等類似物之實例包括（但*限於）硫代填酸酿、胺基碟酸醋、膦酸甲酷、斜I a 1 T曰對旱性膦酸曱酯、2-0-曱基核糖核苷酸、肽核酸（ΡΝΑ)。除非另有所述，否則特令知_於— %疋核酸序列亦隱含地涵蓋其嶝俘守修飾之變異體（例如簡併 ’、間併在碼子取代）及互補序列以及明確扣定之序列。特定言之，之如下文所詳述，簡併密碼子取代可藉由產生其中一或容佃I、 ^ 罢一所選（或所有）密碼子之第三位置、盈混合驗基及/或脫氣m 4 脫乳肌苷殘基取代之序列來達成 148032.doc -30 - 201043638 (Batzerf Λ, Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991 ； Ohtsuka# 人，J. Bi〇1. Chem. 260:2605-2608, 1985 ;及 R〇ssolini 等人，

Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994) 〇術》。了操作地連接」係指兩個或兩個以上聚核苷酸 Ο

(例如DNA)區段之間的功能關係。其通常係指轉錄調節序列與所轉錄序列的功能關係。舉例而言，若啟動子或強化子序列於合適宿主細胞或其它表現系統中刺激或調節編碼序列之轉錄，則其可操作地連接於該編碼序列。一般而吕，可操作地連接於轉錄序列之啟動子轉錄調節序列實體田比連轉錄序列，亦即其為順式作用。《而，某些轉錄調節序列（諸如強化子）不必實體毗連或位置上緊密接近轉錄受其增強之編碼序列。如本文中所使用之術語「最佳化」意謂核苷酸序列已經改變以使用在產生細胞或生物體（通常為真核細胞，例如畢赤酵母細胞、中國倉鼠卵細胞（CH〇)或人類細胞）中較佳之密碼子編碼胺基酸序列。最佳化核苷酸序列經工程改造以完全或儘可能多地保留最初由起始核苷酸序列編碼之胺基酸序列，該起始核苷酸序列亦稱為「親本」序列。本文中之最佳化序列已經工程改造以具有在哺乳動物細胞中較佳之密碼子。然而’亦在本文中設想該等序列在其它真核細胞或原核細胞中之最佳化表現。由最佳化核苷酸序列編碼之胺基酸序列亦稱為最佳化胺基酸序列。在本文中可互換使用術語「多肽」及「蛋白質」來指代胺基酸殘基之聚合物。該等術語適用於其中一或多個胺基 148032.doc -31 - 201043638 酸殘基為相應天然存在胺基酸之人造化學模擬物的胺基酸聚合物以及適用於天然存在胺基酸聚合物及非天然存在胺基酸聚合物。除非另有所述，否則特定多肽序列亦隱含地涵蓋其經保守修飾之變異體。如本文中所用，術語「重組人類抗體」包括所有藉由重組方式製備、表現、產生或分離之人類抗體，諸如自人類免疫球蛋白基因之轉殖基因或轉染色體動物（例如小鼠）戋由其製備之融合瘤分離之抗體，自經轉型以表現人類抗體之宿主細胞（例如自轉染瘤）分離之抗體，自重組組合人類抗體文庫分離之抗體，及藉由涉及所有或一部分人類免疫球蛋白基因序列與其它DNA序列之拼接的任何其它方式製備、表現、產生或分離之抗體。該等重組人類抗體具有其中構架區及CDR區來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區。然而’在某些實施例中，該等重組人類抗體可經受活體外突變誘發（或當使用人類Ig序列之轉殖基因動物時，則為活體内體細胞突變）且因此重組抗體VH及VL區之胺基酸序列為如下序列，當來源於人類生殖系VH及VL序列且與人類生殖系VH及VL序列相關時，其可能不天然存在於活體内人類抗體生殖系譜系内。術語「重組宿主細胞」（或簡稱「宿主細胞」）係指其中已引入重組表現載體之細胞。應瞭解此等術語不僅意指特定個體細胞，而且意指此細胞之後代。由於在後繼各代中因突變或環境影響可能發生某些改變，因此事實上該後代可能不同於親代細胞，但仍包括於本文中所使用之術語 148032.doc -32- 201043638 「宿主細胞」之範_内。術語「個體j包括人類及非人類動物。非人類動物包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，諸如非人類靈長類動物、綿羊、犬、牛、雞、兩棲動物及爬行動物。除非註明，否則術語「患者」或「個體」在本文中可互換使用。術語「治療」包括投與組合物或抗體以預防或延遲疾病〇(例如AMD)之症狀、併發症或生化指標的發作，減輕症狀，或阻止或抑制疾病、病狀或病症進一步發展。治療可為預防性（預防或延遲疾病之發作，或預防其臨床或亞臨床症狀之表現）或在疾病表現之後治療性抑止或減輕症狀。術s吾「載體」意欲指能夠輸送與其連接之另一聚核苷酸的聚核苷酸分子。一種類型之載體為「質體」，其係指其它DNA區段可連接於其中的環狀雙股DNA。另一種類型之 ◎ 載體為病毒載體，諸如腺相關病毒載體（AAV或AAV2), 其中其它DNA區段可連接至病毒基因組中。某些載體能夠在其所引入之宿主細胞中自主複製（例如具有細菌複製起點之細菌載體及游離型哺乳動物載體）。其它載體（例如非游離型哺乳動物載體）可在引入宿主細胞之後整合至宿主細胞基因組中，且藉此與宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠指導與其可操作地連接之基因之表現。該等載體在本文中稱為「重組表現載體」（或簡稱「表現載體」）。-般而言，適用於重組DNA技術中之表現載體通 148032.doc •33· 201043638 =質體形式。在本說明書中’由於質體為最常用之載體形式’故「質體」與「載體」可互換使用。然而，本發明意欲包括起等效作用之諸如病毒㈣（例如，複製缺陷型反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)之該等其它形式的表現載體。文中所用之術C3b活性」意謂替代補體路徑飞游產生C3b之活性，其包括(但不限於)例如c3轉化酶诗性、C5轉化酶活性。可佬用太』便用本文所述之如下檢定測定C31

純，諸如（但不限於）溶血檢定、㈣量⑶及⑸產生之柏定、C3b沈積檢定、及膜攻擊複合物（mac)沈積檢定。^ ^所用：「⑶活性之改變」或「⑶活性之調節」痛才曰藉由或多種本文所述之檢定測量C3b活性，其中C31 活性相對於相關對照增加或降低至少1〇%。例如，當d 活性在抗體或#段存在下相對於不存在抗體或#段情況下之C3b活性降低或增加至少1〇%時，可認為本發明之抗靡或抗原結合片段調節C3b活性。

士本文中所使用之術語「獼猴」係指食蟹獼猴（食蟹猴 {Macaca fascicularis)) ° 【實施方式】本發明部分基於特異性結合於人類及獼猴C3b之抗體分子的發現。本發明係關於完全IgG格式抗體（參見例如抗體 95 56、9611、9612、9609、9610、9674及 9675)以及其抗原結合片段，諸如Fab片段（例如，參見抗體9124、9397、 9398 、 9136 、 9141 、 9373及9423)。 148032.doc -34- 201043638 因此’本發明提供特異性結合於補體C3b蛋白（例如人類 C3b、摘猴C3b)之抗體、醫藥組合物、製備方法及該等抗體及組合物之使用方法。 C3b抗體本發明提供特異性結合於C3b(例如人類C3b、獼猴C3b) 之抗體。在一些實施例中’本發明提供特異性結合於人類及獼猴C3b之抗體。本發明之抗體包括（但不限於）如實例中所述分離之人類單株抗體。本發明提供特異性結合C3b蛋白（例如人類及/或獼猴 C3b)之抗體’該等抗體包含具有SEQ ID NO: 7、21、35、 49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 及 189 之胺基酸序列的VH域。本發明亦提供特異性結合於C3b蛋白（例如人類及/或獼猴C3b)之抗體，該等抗體包含具有下文表1中列舉之VH CDR中任一者之胺基酸序列的vh CDR。特定而言，本發明提供特異性結合於C3b蛋白（例如人類及/或獼猴C3b)之抗體’該等抗體包含以下（或者由以下組成）：一個、兩個、三個、四個、五個或五個以上具有下文表1中列舉之任何VH CDR之胺基酸序列的vh CDR。本發明提供特異性結合於C3b蛋白（例如人類及/或獼猴 C3b)之抗體’該等抗體包含具有SEQ ID NO: 8、22、36、 50 、 64 、 78 、 92 、 106 、 120 、 134 、 148 、 162 、 176及190 之胺基酸序列的VL域。本發明亦提供特異性結合於C3b蛋白（例如人類及/或獼猴C3b)之抗體，該等抗體包含具有下 148032.doc -35- 201043638 文表1中列舉之VL CDR中任一者之胺基酸序列的VL CDR。特定而言，本發明提供特異性結合於C3b蛋白（例如人類及/或獼猴C3b)之抗體，該等抗體包含以下（或由以下組成）·· 一個、兩個、三個或三個以上具有下文表1中列舉之任何VL CDR之胺基酸序列的VL CDR。本發明之其它抗體包括已突變、但在CDR區中與表1中所述序列中描述之CDR區仍具有至少60%、70%、80%、 85°/。、90°/。或95% —致性的胺基酸。在一些實施例中，其包括突變型胺基酸序列，其中當與表1中所述序列中描述之CDR區相比較時，CDR區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸已突變。本發明亦提供編碼特異性結合於C3b蛋白（例如人類及/ 或獼狼C3b)之抗體之VH、VL、全長重鏈及全長輕鏈的核酸序列。該等核酸序列可經最佳化以供在哺乳動物細胞中表現（例如，表i展示抗體9556、9611、9612、9609、 9610、9674 及 9675 以及 Fab 片段 9124、9397、9398、 9136、9141、9373及9423之重鏈及輕鏈的最佳化核酸序列）。表1.本發明之C3b抗體、Fab及C3b蛋白之實例表1 胺基酸序列邊苷酸（PN) Π A C C ^ --1 ---- 序列識別符（SEQ.I .D.1S10:)及序列 CDRH1 ------- 1 _^YWMT CDRH2 ~~ Τ'----- — KPDGYAAS VKG -----__ 148032.doc 201043638

CDRH3 3 LFYQYFARMDY CDRL1 4 RASQDISNYLN CDRL2 5 AASNLQS CDRL3 6 QQYDSYSPT VH 7 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVSSIKI KPDGYAASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLFYQYFARMD YWGQGTLVTVSS VL 8 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASN LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYDSYSPTFGQGTKVEI K 重鏈 9 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTVJVRQAPGKGLEWVSSIK工 KPDGYAASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLFYQYFARMD YWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV DKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 輕鏈 10 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYL顺YQQKPGKAPKLLIYAASN LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYDSYSPTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC 編瑪 SEQ.I.D.NO:7 之PN 11 GAGGTGCAATTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAGCCT GAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTGGATGACAT GGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAGGGACTGGAATGGGTGTCCAGCATCAAGATC AAGCCCGACGGCTACGCCGCCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGA CAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACA CCGCCGTGTACTACTGCGCCAGACTGTTCTACCAGTACTTCGCCCGGATGGAC TACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA 編碼 SEQ·I·D.N〇：8 之PN 12 GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAG AGTGACCATCACCTGCCGGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGT ATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAC CTGCAGAGCGGCGTGCCCAGCCGGTTTAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTT CACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGTACGACAGCTACAGCCCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATC AAG 編碼 SEQ.I.D.NO：9 13 ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTCGCCGCTCCCAGATGGGTGCT 148032.doc •37- 201043638 之PN GTCCGAGGTGCAATTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCA GCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTGGATG ACATGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAGGGACTGGAATGGGTGTCCAGCATCAA GATCAAGCCCGACGGCTACGCCGCCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCC GGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAG GACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGACTGTTCTACCAGTACTTCGCCCGGAT GGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGG GTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACA GCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTC GTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTAC AGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGC TTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAA GGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCAC CGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCA AAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGT GGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACG GCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACT^GCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGC ACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGG CAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGA AAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTG CCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGT CAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGC CGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTC TTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGT CTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA GCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA 編碼 SEQ.I.D.NO:10 之PN 14 GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAG AGTGACCATCACCTGCCGGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGT ATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAC CTGCAGAGCGGCGTGCCCAGCCGGTTTAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTT CACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGTACGACAGCTACAGCCCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATC AAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCA GAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCC CAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAG CACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCG AAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGA GAGTGT MOR09611 CDRH1 15 SYWMT CDRH2 16 SIKIKPDGYAASVKG CDRH3 17 LFYQYFARMDY CDRL1 18 RASQDISNYLN CDRL2 19 -38 · 148032.doc 201043638

AASNLQS CDRL3 20 QQHDTFRPT VH 21 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVSSIKI KPDGYAASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLFYQYFARMD YWGQGTLVTVSS VL 22 diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkapklliyaasn lqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqhdtfrptfgqgtkvei k 重鍵 23 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVSSIKI KPDGYAASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLFYQYFARMD YWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV DKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVW DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 輕鏈 24 diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkapklliyaasn lqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqhdtfrptfgqgtkvei krtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgns qesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrg ec 編碼 SEQ·工.D_N〇：21 之PN 25 GAGGTGCAATTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAGCCT GAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTGGATGACAT GGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAGGGACTGGAATGGGTGTCCAGCATCAAGATC AAGCCCGACGGCTACGCCGCCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGA CAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACA CCGCCGTGTACTACTGCGCCAGACTGTTCTACCAGTACTTCGCCCGGATGGAC TACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA 编碼 SEQ.I.D.NO:22 之PN 26 gatatccagatgacccagagccccagcagcctgagcgccagcgtgggcgacag agtgaccatcacctgtcgggccagccaggacatcagcaactacctgaactggt atcagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatctacgccgccagcaat ctgcagagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactt taccctgacaatttcctctctgcagcctgaggacttcgccacctactactgcc agcagcacgacaccttccggcccaccttcggccagggcaccaaggtggagatc aag 編碼 SEQ.I.D.NO:23 之PN 27 ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTCGCCGCTCCCAGATGGGTGCT GTCCGAGGTGCAATTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCA GCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTGGATG ACATGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAGGGACTGGAATGGGTGTCCAGCATCAA GATCAAGCCCGACGGCTACGCCGCCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCC GGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAG 148032.doc -39- 201043638

GACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGACTGTTCTACCAGTACTTCGCCCGGAT GGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGG GTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACA GCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTC GTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTAC AGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGC TTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAA GGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCAC CGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCA AAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGT GGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACG GCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGC ACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGG CAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGA AAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTG CCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGT CAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGC CGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTC TTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGT CTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA GCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA 編碼 SEQ.I.D.NO:24 之PN 28 gatatccagatgacccagagccccagcagcctgagcgccagcgtgggcgacag agtgaccatcacctgtcgggccagccaggacatcagcaactacctgaactggt atcagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatctacgccgccagcaat ctgcagagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactt taccctgacaatttcctctctgcagcctgaggacttcgccacctactactgcc agcagcacgacaccttccggcccaccttcggccagggcaccaaggtggagatc aagcgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagca gttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatccca gagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcc caggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcag csccctgacgctgagcaasgcagsctacgsgaaacscaaagtctacgcctgcg aagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacagggga gagtgt MOR09612 CDRH1 29 SYWMT CDRH2 30 SIKIKPDGYAASVKG CDRH3 31 LFYQYFARMDY CDRL1 32 RASQDISNYLN CDRL2 33 AASNLQS CDRL3 34 QQWDSFSPT VH 35 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVSSIKI -40- 148032.doc 201043638

KPDGYAASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLFYQYFARMD YWGQGTLVTVSS VL 36 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASN LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWDSFSPTFGQGTKVEI K 重鏈 37 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVSSIKI KPDGYAASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLFYQYFARiyiD YWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV DKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 輕鍵 38 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASN LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWDSFSPTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC 編碼 SEQ.工·D.N〇：35 之PN 39 GAGGTGCAATTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAGCCT GAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTGGATGACAT GGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAGGGACTGGAATGGGTGTCCAGCATCAAGATC AAGCCCGACGGCTACGCCGCCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGA CAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACA CCGCCGTGTACTACTGCGCCAGACTGTTCTACCAGTACTTCGCCCGGATGGAC TACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCA 編碼 SEQ.I.D.NO:36 之PN 40 GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAG AGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGT ATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CTGCAGAGCGGCGTGCCCAGCCGGTTTAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTT TACCCTGACAATCTCCTCTCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGTGGGACAGCTTCAGCCCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATC AAG 編瑪 SEQ.I.D.NO:37 之PN 41 ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTCGCCGCTCCCAGATGGGTGCT GTCCGAGGTGCAATTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCA GCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACTGGATG ACATGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAGGGACTGGAATGGGTGTCCAGCATCAA GATCAAGCCCGACGGCTACGCCGCCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCC GGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAG GACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGACTGTTCTACCAGTACTTCGCCCGGAT GGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCAGCCTCCACCAAGG GTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACA GCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTC 148032.doc -41- 201043638 GTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTAC AGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGC TTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAA GGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCAC CGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCA AAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGT GGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACG GCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGC ACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGG CAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGA AAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTG CCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGT CAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGC CGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTC TTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGT CTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA GCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA 編碼 SEQ.I.D.NO:38 之PN 42 GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAG AGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGT ATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CTGCAGAGCGGCGTGCCCAGCCGGTTTAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTT TACCCTGACAATCTCCTCTCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGTGGGACAGCTTCAGCCCCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATC AAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCA GAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCC CAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAG CACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCG AAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGA GAGTGT MOR09609 CDRH1 43 SYTFS CDRH2 44 N 工 L PIFGDANYAQKFQG CDRH3 45 nkgafyymstypsldv CDRL1 46 RASQNINYYLN CDRL2 47 DAFSLQS CDRL3 48 QQSWSVPPFT VH 49 evqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssytfswvrqapgqglewmgnilp ifgdanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarnkgafyym stypsldvwgqgtlvtvss VL 50 diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqninyylnwyqqkpgkapklliydafs • 42· 148032.doc 201043638

Iqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqswsvppftfgqgtkve ik 重鏈 51 evqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssytfswvrqapgqglewmgnilp ifgdanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarnkgafyym stypsldvwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfp epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnh kpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtp evtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlh qdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqv sltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksr wqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 輕鍵 52 diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqninyylnwyqqkpgkapklliydafs lqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqswsvppftfgqgtkve ikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgn sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnr gee 編瑪 SEQ.I.D.N〇：49 之PN 53 gaggtgcaattggtgcagagcggagccgaagtgaagaagcccggcagcagcgt caaggtgtcctgcaaggccagcggcggcaccttcagcagctacaccttcagct gggtgcgccaggccccaggacagggcctggaatggatgggcaacatcctgccc atcttcggcgacgccaactacgcccagaagttccagggcagagtcaccatcac cgccgacgagagcaccagcaccgcctacatggaactgagcagcctgcggagcg aggacaccgccgtgtactactgcgcccggaacaagggcgccttctactacatg agcacctaccccagcctggacgtgtggggccagggcaccctggtgaccgtgag ctca 編瑪 SEQ.I.D.NO:50 之PN 54 gatatccagatgacccagagccccagcagcctgagcgccagcgtgggcgacag agtgaccatcacctgtcgggccagccagaacatcaactactacctgaactggt atcagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatctacgacgccttcagc ctgcagagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactt taccctgacaatttcctctctgcagcctgaggacttcgccacctactactgcc agcagtcttggagcgtgccccccttcaccttcggccagggcaccaaggtggag atcaag 編碼 SEQ.I.D.NO:51 之PN 55 gaggtgcaattggtgcagagcggagccgaagtgaagaagcccggcagcagcgt caaggtgtcctgcaaggccagcggcggcaccttcagcagctacaccttcagct gggtgcgccaggccccaggacagggcctggaatggatgggcaacatcctgccc atcttcggcgacgccaactacgcccagaagttccagggcagagtcaecatcac cgccgacgagagcaccagcaccgcctacatggaactgagcagcctgcggagcg aggacaccgccgtgtactactgcgcccggaacaagggcgccttctactacatg agcacctaccccagcctggacgtgtggggccagggcaccctggtgaccgtgag ctcagcctccaccaagggtccatcggtcttccccctggcaccctcctccaaga gcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttcccc gaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacac cttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtga ccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcac aagcccagcaacsccsaggtggscaagsgagttgdgcccaastcttgtgacaa aactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagcagcggggggaccgtcag 148032.doc •43- 201043638 tcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccct gaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagtt caactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcggg aggagcagtacaacagcacgtaccgggtggtcagcgtcctcaccgtcctgcac caggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccct cccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaac cacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtc agcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtg ggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctgg actccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcagg tggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaa ccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 編碼 SEQ.I.D.NO:52 之PN 56 gatatccagatgacccagagccccagcagcctgagcgccagcgtgggcgacag agtgaccatcacctgtcgggccagccagaacatcaactactacctgaactggt atcagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatctacgacgccttcagc ctgcagagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactt taccctgacaatttcctctctgcagcctgaggacttcgccacctactactgcc agcagtcttggagcgtgccccccttcaccttcggccagggcaccaaggtggag atcaagcgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatga gcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatc ccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaac tcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcag cagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcct gcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacagg ggagagtgt MOR09610 CDRH1 57 SYTFS CDRH2 58 NILPIFGDANYAQKFQG CDRH3 59 nkgafyymstypsldv CDRL1 60 RASQNINYYLN CDRL2 61 DAFSLQS CDRL3 62 QQSIAVPPFT VH 63 evqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssytfswvrqapgqglewmgnilp ifgdanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarnkgafyym stypsldvwgqgtlvtvss VL 64 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNINYYLNWYQQKPGKAPKLLIYDAFS LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSIAVPPFTFGQGTKVE IK 重鏈 65 evqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssytfswvrqapgqglewmgnilp ifgdanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarnkgafyym -44- 148032.doc 201043638

stypsldvwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfp epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnh kpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtp evtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlh qdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqv sltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksr wqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 輕鏈 66 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNINYYLNWYQQKPGKAPKLLIYDAFS LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSIAVPPFTFGQGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC 編碼 SEQ.I.D.NO:63 之PN 67 gaggtgcaattggtgcagagcggagccgaagtgaagaagcccggcagcagcgt caaggtgtcctgcaaggccagcggcggcaccttcagcagctacaccttcagct gggtgcgccaggccccaggacagggcctggaatggatgggcaacatcctgccc atcttcggcgacgccaactacgcccagaagttccagggcagagtcaccatcac cgccgacgagagcaccagcaccgcctacatggaactgagcagcctgcggagcg aggacaccgccgtgtactactgcgcccggaacaagggcgccttctactacatg agcacctaccccagcctggacgtgtggggccagggcaccctggtgaccgtgag ctca 編碼 SEQ.I.D.NO:64 之PN 68 GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAG AGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCCAGAACATCAACTACTACCTGAACTGGT ATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGACGCCTTCAGC CTGCAGAGCGGCGTGCCCAGCCGGTTTAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTT TACCCTGACAATTTCCTCTCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGAGCATTGCCGTGCCCCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAG ATCAAG 編碼 SEQ.I.D.NO:65 之PN 69 gaggtgcaattggtgcagagcggagccgaagtgaagaagcccggcagcagcgt caaggtgtcctgcaaggccagcggcggcaccttcagcagctacaccttcagct gggtgcgccaggccccaggacagggcctggaatggatgggcaacatcctgccc atcttcggcgacgccaactacgcccagaagttccagggcagagtcaccatcac cgccgacgagagcaccagcaccgcctacatggaactgagcagcctgcggagcg aggacaccgccgtgtactactgcgcccggaacaagggcgccttctactacatg agcacctaccccagcctggacgtgtggggccagggcaccctggtgaccgtgag ctcagcctccaccaagggtccatcggtcttccccctggcaccctcctccaaga gcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttcccc gaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacac cttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtga ccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcac aagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaa aactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagcagcggggggaccgtcag tcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccct gaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagtt caactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcggg aggagcagtacaacagcacgtaccgggtggtcagcgtcctcaccgtcctgcac caggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccct cccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaac 148032.doc -45· 201043638

cacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtc agcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtg ggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctgg actccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcagg tggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaa ccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 編碼 SEQ.I.D.N〇：66 之PN 70 GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAG AGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCCAGAACATCAACTACTACCTGAACTGGT ATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGACGCCTTCAGC CTGCAGAGCGGCGTGCCCAGCCGGTTTAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTT TACCCTGACAATTTCCTCTCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGAGCATTGCCGTGCCCCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAG ATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGA GCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATC CCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAAC TCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAG CAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCT GCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGG GGAGAGTGT MOR09674 CDRH1 71 SYSMH CDRH2 72 LIN PYNGNTHYAQKFQG CDRH3 73 MLRFDV CDRL1 74 TGTSSDGGGYNYVS CDRL2 75 GVSNRPS CDRL3 76 QTYTRYSDSPV VH 77 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYSMHWVRQAPGQGLEWMGLINP YNGNTHYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARMLRFDVWG QGTLVTVSS VL 78 ESALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDGGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYGV SNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCQTYTRYSDSPVFGGGT KLTVLGQ 重鏈 79 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYSMHWVRQAPGQGLE刪GLINP YNGNTHYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARMLRFDVWG QGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKR VEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLM工SRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS -46- 148032.doc 201043638

VMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 輕鏈 80 ESALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDGGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYGV SNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCQTYTRYSDSPVFGGGT KLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSP VKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVA PTECS 編瑪 SEQ.I.D.NO:77 之PN 81 GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCAGGCGCTTCCGT GAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACAGCATGCACT GGGTCCGGCAGGCTCCAGGGCAGGGACTGGAATGGATGGGCCTGATCAACCCC TACAACGGCAACACCCACTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGAC CCGGGACACCAGCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGCGGAGCG AGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGGATGCTGCGGTTCGACGTGTGGGGC CAGGGCACCCTGGTCACCGTCAGCTCA 編碼 SEQ.I.D.NO:78 之PN 82 GAGAGCGCCCTGACCCAGCCTGCCAGCGTGTCTGGCAGCCCTGGCCAGAGCAT CACCATCAGCTGCACCGGCACCAGCAGCGACGGCGGAGGCTACAACTACGTGT CCTGGTATCAGCAGCACCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGATGATCTACGGCGTG AGCAACCGGCCCAGCGGGGTGTCCAACCGGTTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAA CACCGCCAGCCTGACCATCTCTGGGCTGCAGGCTGAGGACGAGGCCGACTACT ACTGCCAGACCTACACCAGATACAGCGACAGCCCTGTGTTCGGAGGCGGAACA AAGTTAACCGTCCTA 編碼 SEQ.I.D.NO:79 之PN 83 GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCAGGCGCTTCCGT GAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACAGCATGCACT GGGTCCGGCAGGCTCCAGGGCAGGGACTGGAATGGATGGGCCTGATCAACCCC TACAACGGCAACACCCACTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGAC CCGGGACACCAGCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGCGGAGCG AGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGGATGCTGCGGTTCGACGTGTGGGGC CAGGGCACCCTGGTCACCGTCAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTT CCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCT GCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGC GCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACT CTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGA CCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGA GTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACC TGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACA CCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGC CACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCA TAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGG TCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAG TGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAA AGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGG AGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTAT CCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTA CAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCA AGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCC GTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTC TCCGGGTAAA 148032.doc • 47· 201043638

編碼 84 SEQ.I.D.NO:80 GAGAGCGCCCTGACCCAGCCTGCCAGCGTGTCTGGCAGCCCTGGCCAGAGCAT 之PN CACCATCAGCTGCACCGGCACCAGCAGCGACGGCGGAGGCTACAACTACGTGT CCTGGTATCAGCAGCACCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGATGATCTACGGCGTG AGCAACCGGCCCAGCGGGGTGTCCAACCGGTTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAA CACCGCCAGCCTGACCATCTCTGGGCTGCAGGCTGAGGACGAGGCCGACTACT ACTGCCAGACCTACACCAGATACAGCGACAGCCCTGTGTTCGGAGGCGGAACA AAGTTAACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCC GCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAA GTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCC GTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTA CGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAA GCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCC CCTACAGAATGTTCA MOR09675 CDRH1 85 GYYIN CDRH2 86 工工SPNQGTTGYAQKFQG CDRH3 87 GNYDHLDY CDRL1 88 RASQGISNYLN CDRL2 89 DASTLQS CDRL3 90 QQDWHTLPVT VH 91 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYINWVRQAPGQGLEWMG工ISP NQGTTGYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYDHLDY WGQGTLVTVSS VL 92 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDAST LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQDWHTLPVTFGQGTKVE IK 重鏈 93 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYINWVRQAPGQGLEWMGIISP NQGTTGYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYDHLDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 輕鏈 94 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDAST LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQDWHTLPVTFGQGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR

148032.doc -48- 201043638

GEC 編碼 SEQ_I.D.N〇：91 之PN 95 GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCAGGCGCTTCCGT GAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGGCTACTACATCAACT GGGTCCGGCAGGCTCCAGGGCAGGGACTGGAATGGATGGGCATCATCAGCCCC AACCAGGGCACAACCGGCTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGAC CCGGGACACCAGCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGCGGAGCG AGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGGCAACTACGACCACCTGGACTAC TGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCAGCTCA 編碼 SEQ.I.D.NO:92 之PN 96 GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAG AGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCCAGGGCATCAGCAACTACCTGAACTGGT ATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGACGCCAGCACC CTGCAGAGCGGCGTGCCTAGCAGATTCTCCGGGAGCGGCTCCGGCACCGACTT CACCCTGACCATTAGCTCACTGCAGCCAGAAGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGGACTGGCACACCCTGCCCGTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAG ATCAAG 編碼 SEQ.I.D.NO:93 之PN 97 GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAAGTGAAGAAACCAGGCGCTTCCGT GAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGGCTACTACATCAACT GGGTCCGGCAGGCTCCAGGGCAGGGACTGGAATGGATGGGCATCATCAGCCCC AACCAGGGCACAACCGGCTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGAC CCGGGACACCAGCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGCGGAGCG AGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGGCAACTACGACCACCTGGACTAC TGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCAGCTCAGCCTCCACCAAGGGTCCATC GGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCC TGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAAC TCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTC AGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCA CCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAAGCAGCGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCA AGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGAC GTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACC GGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAG TACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCAT CTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGC TTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAA CAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCT ACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCA TGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTC CCTGTCTCCGGGTAAA 編碼 SEQ.I.D.NO：94 之PN 98 GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAG AGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCCAGGGCATCAGCAACTACCTGAACTGGT ATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGACGCCAGCACC CTGCAGAGCGGCGTGCCTAGCAGATTCTCCGGGAGCGGCTCCGGCACCGACTT CACCCTGACCATTAGCTCACTGCAGCCAGAAGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGGACTGGCACACCCTGCCCGTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAG 148032.doc • 49· 201043638 ATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGA GCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATC CCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAAC TCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAG CAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCT GCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGG GGAGAGTGT MOR09124 CDRH1 99 SYWMT CDRH2 100 SIKIKPDGYAASVKG CDRH3 101 LFYQYFARMDY CDRL1 102 RASQDISNYLN CDRL2 103 AASNLQS CDRL3 104 QQYDSYSPT VH 105 qvqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssywmtwvrqapgkglewvssiki kpdgyaasvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarlfyqyfarmd ywgqgtlvtvss VL 106 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASN LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYDSYSPTFGQGTKVEI K 重鏈 107 qvqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssywmtwvrqapgkglewvssiki kpdgyaasvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarlfyqyfarmd ywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvsw nsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkv dkkvepks 輕鏈 108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASN LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYDSYSPTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC 編瑪 SEQ.I.D.NO:105 之PN 109 caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcct gcgtctgagctgcgcggcctccggatttaccttttcttcttattggatgactt gggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagctctattaagatt aagcctgatggttatgctgcttctgttaagggtcgttttaccatttcacgtga taattcgaaaaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgcgtgcggaagata cggccgtgtattattgcgcgcgtcttttttatcagtattttgctcgtatggat tattggggccaaggcaccctggtgacggttagctca 編碼 SEQ.I.D.NO:106 110 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg -50- 148032.doc 201043638

之PN tgtgaccattacctgcagagcgagccaggatatttctaattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgctgcttctaat ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcggtttattattgcc agcagtatgattcttattctcctacctttggccagggtacgaaagttgaaatt aaa 編碼 SEQ.I.D.NO:107 之PN 111 caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcct gcgtctgagctgcgcggcctccggatttaccttttcttcttattggatgactt gggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagctctattaagatt aagcctgatggttatgctgcttctgttaagggtcgttttaccatttcacgtga taattcgaaaaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgcgtgcggaagata cggccgtgtattattgcgcgcgtcttttttatcagtattttgctcgtatggat tattggggccaaggcaccctggtgacggttagctcagcgtcgaccaaaggtcc aagcgtgtttccgctggctccgagcagcaaaagcaccagcggcggcacggctg ccctgggctgcctggttaaagattatttcccggaaccagtcaccgtgagctgg aacagcggggcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcaaag cagcggcctgtatagcctgagcagcgttgtgaccgtgccgagcagcagcttag gcactcagacctatatttgcaacgtgaaccataaaccgagcaiacaccaaagtg gataaaaaagtggaaccgaaaagc 編碼 SEQ.I.D.NO:108 之PN 112 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccaggatatttctaattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgctgcttctaat ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcggtttattattgcc agcagtatgattcttattctcctacctttggccagggtacgaaagttgaaatt aaacgtacggtggctgctccgagcgtgtttatttttccgccgagcgatgaaca actgaaaagcggcacggcgagcgtggtgtgcctgctgaacaacttttatccgc gtgaagcgaaagttcagtggaaagtagacaacgcgctgcaaagcggcaacagc caggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctattctctgagcag caccctgaccctgagcaaagcggattatgaaaaacataaagtgtatgcgtgcg aagtgacccatcaaggtctgagcagcccggtgactaaatcttttaatcgtggc gaggcc MOR09397 CDRH1 113 SYWMT CDRH2 114 SIKIKPDGYAASVKG CDRH3 115 LFYQYFARMDY CDRL1 116 RASQDISNYLN CDRL2 117 AASNLQS CDRL3 118 QQHDTFRPT VH 119 qvqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssywmtwvrqapgkglewvssiki kpdgyaasvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarlfyqyfarmd 148032.doc -51 - 201043638 ywgqgtlvtvss VL 120 diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkapklliyaasn lqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqhdtfrptfgqgtkvei k 重鏈 121 qvqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssywmtwvrqapgkglewvssiki kpdgyaasvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarlfyqyfarmd ywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvsw nsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkv dkkvepks 輕鏈 122 diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkapklliyaasn lqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqhdtfrptfgqgtkvei krtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgns qesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrg ec 編碼 SEQ.I.D.N〇：119 之PN 123 caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcct gcgtctgagctgcgcggcctccggatttaccttttcttcttattggatgactt gggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagctctattaagatt aagcctgatggttatgctgcttctgttaagggtcgttttaccatttcacgtga taattcgaaaaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgcgtgcggaagata cggccgtgtattattgcgcgcgtcttttttatcagtattttgctcgtatggat tattggggccaaggcaccctggtgacggttagctca 編碼 SEQ.I.D.NO:120 之PN 124 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccaggatatttctaattatctgaattggt accagcagasaccaggtsaagcsccgaaact&ttaatttatgctgcttctaat ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacctattattgcc agcagcatgatacttttcgtcctacctttggccagggtacgaaagttgaaatt aaa 編瑪 SEQ.I.D.NO:121 之PN 125 caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcct gcgtctgagctgcgcggcctccggatttaccttttcttcttattggatgactt gggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagctctattaagatt aagcctgatggttatgctgcttctgttaagggtcgttttaccatttcacgtga taattcgaaaaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgcgtgcggaagata cggccgtgtattattgcgcgcgtcttttttatcagtattttgctcgtatggat tattggggccaaggcaccctggtgacggttagctcagcgtcgaccaaaggtcc aagcgtgtttccgctggctccgagcagcaaaagcaccagcggcggcacggctg ccctgggctgcctggttaaagattatttcccggaaccagtcaccgtgagctgg aacagcggggcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcaaag cagcggcctgtatagcctgagcagcgttgtgaccgtgccgagcagcagcttag gcactcagacctatatttgcaacgtgaaccataaaccgagcaacaccaaagtg gataaaaaagtggaaccgaaaagc 編碼 SEQ.I.D.NO:122 之PM 126 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccaggatatttctaattatctgaattggt -52- 148032.doc 201043638

Ο accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgctgcttctaat ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacctattattgcc agcagcatgatacttttcgtcctacctttggccagggtacgaaagttgaaatt aaacgtacggtggctgctccgagcgtgtttatttttccgccgagcgatgaaca actgaaaagcggcacggcgagcgtggtgtgcctgctgaacaacttttatccgc gtgaagcgaaagttcagtggaaagtagacaacgcgctgcaaagcggcaacagc caggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctattctctgagcag Gaccctgaccctgagcaaagcggattatgaaaaacataaagtgtatgcgtgcg aagtgacccatcaaggtctgagcagcccggtgactaaatcttttaatcgtggc gaggcc MOR09398 CDRH1 127 SYWMT CDRH2 128 SIKIKPDGYAASVKG CDRH3 129 LFYQYFARMDY CDRL1 130 RASQDISNYLN CDRL2 131 AASNLQS CDRL3 132 QQWDSFSPT VH 133 qvqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssywmtwvrqapgkglewvssiki kpdgyaasvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarlfyqyfarmd ywgqgtlvtvss VL 134 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASN LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWDSFSPTFGQGTKVEI K 重鏈 135 qvqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssywmtwvrqapgkglewvssiki kpdgyaasvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarlfyqyfarmd ywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvsw nsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkv dkkvepks 輕鏈 136 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASN LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWDSFSPTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC 編瑪 137 SEQ.I.D.NO:133 caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcct 之PN gcgtctgagctgcgcggcctccggatttaccttttcttcttattggatgactt gggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagctctattaagatt aagcctgatggttatgctgcttctgttaagggtcgttttaccatttcacgtga taattcgaaaaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgcgtgcggaagata 148032.doc -53- 201043638 cggccgtgtattattgcgcgcgtcttttttatcagtattttgctcgtatggat tattggggccaaggcaccctggtgacggttagctca 編碼 SEQ.I.D.NO:134 之PN 138 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccaggatatttctaattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgctgcttctaat ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacctattattgcc agcagtgggattctttttctcctacctttggccagggtacgaaagttgaaatt aaa 編碼 SEQ.I.D.NO:135 之PN 139 caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcct gcgtctgagctgcgcggcctccggatttaccttttcttcttattggatgactt gggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagctctattaagatt aagcctgatggttatgctgcttctgttaagggtcgttttaccatttcacgtga taattcgaaaaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgcgtgcggaagata cggccgtgtattattgcgcgcgtcttttttatcagtattttgctcgtatggat tattggggccaaggcaccctggtgacggttagctcagcgtcgaccaaaggtcc aagcgtgtttccgctggctccgagcagcaaaagcaccagcggcggcacggctg ccctgggctgcctggttaaagattatttcccggaaccagtcaccgtgagctgg aacagcggggcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcaaag cagcggcctgtatagcctgagcagcgttgtgaccgtgccgagcagcagcttag gcactcagacctststttgcaacgtgaaccstaaaccgagcaecaccadagtg gataaaaaagtggaaccgaaaagc 編碼 SEQ.I.D.NO:136 之PN 140 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccaggatatttctaattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgctgcttctaat ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacctattattgcc agcagtgggattctttttctcctacctttggccagggtacgaaagttgaaatt aaacgtacggtggctgctccgagcgtgtttatttttccgccgagcgatgaaca actgaaaagcggcacggcgagcgtggtgtgcctgctgaacaacttttatccgc gtgaagcgaaagttcagtggaaagtagacaacgcgctgcaaagcggcaacagc caggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctattctctgagcag caccctgaccctgagcaaagcggattatgaaaaacataaagtgtatgcgtgcg aagtgacccatcaaggtctgagcagcccggtgactaaatcttttaatcgtggc gaggcc MOR09136 CDRH1 141 SYTFS CDRH2 142 NILPIFGDANYAQKFQG CDRH3 143 nkgafyymstypsldv CDRL1 144 RASQNINYYLN CDRL2 145 DAFSLQS CDRL3 146 -54- 148032.doc 201043638

QQSWSVPPFT VH 147 qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssytfswvrqapgqglewmgnilp ifgdanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarnkgafyym stypsldvwgqgtlvtvss VL 148 diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqninyylnwyqqkpgkapklliydafs lqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqswsvppftfgqgtkve ik 重鏈 149 qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssytfswvrqapgqglewmgnilp ifgdanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarnkgafyym stypsldvwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfp epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnh kpsntkvdkkvepks 輕鏈 150 diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqninyylnwyqqkpgkapklliydafs lqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqswsvppftfgqgtkve ikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgn sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnr gee 編碼 SEQ.I.D.NO:147 之PN 151 caggtgcaattggttcagtctggcgcggaagtgaaaaaaccgggcagcagcgt gaaagtgagctgcaaagcctccggaggcactttttcttcttatactttttctt gggtgcgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggcaatatccttccg atttttggcgatgcgaattacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccattac cgcggatgaaagcaccagcaccgcgtatatggaactgagcagcctgcgtagcg aagatacggccgtgtattattgcgcgcgtaataagggtgctttttattatatg tctacttatccttctcttgatgtttggggccaaggcaccctggtgacggttag ctca 編碼 SEQ-I.D.NO:148 之PN 152 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccagaatattaattattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgatgctttttct ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacctattattgcc agcagtcttggtctgttcctccttttacctttggccagggtacgaaagttgaa attaaa 編碼 SEQ.I.D.NO:149 之PN 153 caggtgcaattggttcagtctggcgcggaagtgaaaaaaccgggcagcagcgt gaaagtgagctgcaaagcctccggaggcactttttcttcttatactttttctt gggtgcgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggcaatatccttccg atttttggcgatgcgaattacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccattac cgcggatgaaagcaccagcaccgcgtatatggaactgagcagcctgcgtagcg aagatacggccgtgtattattgcgcgcgtaataagggtgctttttattatatg tctacttatccttctcttgatgtttggggccaaggcaccctggtgacggttag ctcagcgtcgaccaaaggtccaagcgtgtttccgctggctccgagcagcaaaa gcaccagcggcggcacggctgccctgggctgcctggttaaagattatttcccg gaaccagtcaccgtgagctggaacagcggggcgctgaccagcggcgtgcatac ctttccggcggtgctgcaaagcagcggcctgtatagcctgagcagcgttgtga 148032.doc -55- 201043638 ccgtgccgagcagcagcttaggcactcagacctatatttgcaacgtgaaccat aaaccgagcaacaccaaagtggataaaaaagtggaaccgaaaagc 編碼 SEQ.I.D.NO:150 之PN 154 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccagaatattaattattatctgaattggt sccagcagaa己ccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgatgctttttct ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacctattattgcc agcagtcttggtctgttcctccttttacctttggccagggtacgaaagttgaa attaaacgtacggtggctgctccgagcgtgtttatttttccgccgagcgatga acaactgaaaagcggcacggcgagcgtggtgtgcctgctgaacaacttttatc cgcgtgaagcgaaagttcagtggaaagtagacaacgcgctgcaaagcggcaac agccaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctattctctgag cagcaccctgaccctgagcaaagcggattatgaaaaacataaagtgtatgcgt gcgaagtgacccatcaaggtctgagcagcccggtgactaaatcttttaatcgt ggcgaggcc MOR09141 CDRH1 155 SYTFS CDRH2 156 NIL PIFG DANYAQKFQG CDRH3 157 nkgafyymstypsldv CDRL1 158 RASQNINYYLN CDRL2 159 DAFSLQS CDRL3 160 QQSIAVPPFT VH 161 qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssytfswvrqapgqglewmgnilp ifgdanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarnkgafyym stypsldvwgqgtlvtvss VL 162 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNINYYLNWYQQKPGKAPKLLIYDAFS LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSIAVPPFTFGQGTKVE IK 重鏈 163 qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssytfswvrqapgqglewmgnilp ifgdanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycarnkgafyyin stypsldvwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfp epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnh kpsntkvdkkvepks 輕鏈 164 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNINYYLNWYQQKPGKAPKLLIYDAFS LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSIAVPPFTFGQGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC 編碼 165 -56- 148032.doc 201043638

SEQ.I.D-N〇：161 之PN caggtgcaattggttcagtctggcgcggaagtgaaaaaaccgggcagcagcgt gaaagtgagctgcaaagcctccggaggcactttttcttcttatactttttctt gggtgcgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggcaatatccttccg atttttggcgatgcgaattacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccattac cgcggatgaaagcaccagcaccgcgtatatggaactgagcagcctgcgtagcg aagatacggccgtgtattattgcgcgcgtaataagggtgctttttattatatg tctacttatccttctcttgatgtttggggccaaggcaccctggtgacggttag ctca 編碼 SEQ.I.D.NO:162 之PN 166 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccagaatattaattattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgatgctttttct ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacctattattgcc agcagtctattgctgttcctccttttacctttggccagggtacgaaagttgaa attaaa 編碼 SEQ.I.D.NO:163 之PN 167 caggtgcaattggttcagtctggcgcggaagtgaaaaaaccgggcagcagcgt gaaagtgagctgcaaagcctccggaggcactttttcttcttatactttttctt gggtgcgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggcaatatccttccg atttttggcgatgcgaattacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccattac cgcggatgaaagcaccagcaccgcgtatatggaactgagcagcctgcgtagcg aagatacggccgtgtattattgcgcgcgtaataagggtgctttttattatatg tctacttatccttctcttgatgtttggggccaaggcaccctggtgacggttag ctcagcgtcgaccaaaggtccaagcgtgtttccgctggctccgagcagcaaaa gcaccagcggcggcacggctgccctgggctgcctggttaaagattatttcccg gaaccagtcaccgtgagctggaacagcggggcgctgaccagcggcgtgcatac ctttccggcggtgctgcaaagcagcggcctgtatagcctgagcagcgttgtga ccgtgccgagcagcagcttaggcactcagacctatatttgcaacgtgaaccat aaaccgagcaacaccaaagtggataaaaaagtggaaccgaaaagc 編碼 SEQ.I.D.NO:164 之PN 168 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccagaatattaattattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgatgctttttct ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacctattattgcc agcagtctattgctgttcctccttttacctttggccagggtacgaaagttgaa attaaacgtacggtggctgctccgagcgtgtttatttttccgccgagcgatga acaactgaaaagcggcacggcgagcgtggtgtgcctgctgaacaacttttatc cgcgtgaagcgaaagttcagtggaaagtagacaacgcgctgcaaagcggcaac agccaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctattctctgag cagcaccctgaccctgagcaaagcggattatgaaaaacataaagtgtatgcgt gcgaagtgacccatcaaggtctgagcagcccggtgactaaatcttttaatcgt ggcgaggcc MOR09373 CDRHl 169 SYSMH CDRH2 170 LINPYNGNTHYAQKFQG CDRH3 171 148032.doc -57- 201043638 MLRFDV CDRL1 172 TGTSSDGGGYNYVS CDRL2 173 GVSNRPS CDRL3 174 QTYTRYSDSPV VH 175 qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsysmhwvrqapgqglewmglinp yngnthyaqkfqgrvtmtrdtsistaymelsslrsedtavyycarmlrfdvwg qgtlvtvss VL 176 dialtqpasvsgspgqsitisctgtssdgggynyvswyqqhpgkapklmiygv snrpsgvsnrfsgsksgntasltisglqaedeadyycqtytrysdspvfgggt kltvl 重鏈 177 qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsysmhwvrqapgqglewmglinp yngnthyaqkfqgrvtmtrdtsistaymelssirsedtavyycarmlrfdvwg qgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsg altsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkk vepks 輕鍵 178 dialtqpasvsgspgqsitisctgtssdgggynyvswyqqhpgkapklmiygv snrpsgvsnrfsgsksgntasltisglqaedeadyycqtytrysdspvfgggt kltvlgqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadssp vkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektva ptea 編碼 SEQ.I.D.NO:175 之PN 179 caggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgcgagcgt gaaagtgagctgcaaagcctccggatatacctttacttcttattctatgcatt gggtccgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggccttatcaatccg tataatggcaatacgcattacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccatgac ccgtgataccagcattagcaccgcgtatatggaactgagcagcctgcgtagcg aagatacggccgtgtattattgcgcgcgtatgcttcgttttgatgtttggggc caaggcaccctggtgacggttagctca 編碼 SEQ.I.D.NO:176 之PN 180 gatatcgcactgacccagccagcttcagtgagcggctcaccaggtcagagcat taccatctcgtgtacgggtactagcagcgatggtggtggttataattatgtgt cttggtaccagcagcatcccgggaaggcgccgaaacttatgatttatggtgtt tctaatcgtccctcaggcgtgagcaaccgttttagcggatccaaaagcggcaa caccgcgagcctgaccattagcggcctgcaagcggaagacgaagcggattatt attgccagacttatactcgttattctgattctcctgtgtttggcggcggcacg aagttaaccgttctt 編碼 SEQ.I.D.NO:177 之PN 181 caggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgcgagcgt gaaagtgagctgcaaagcctccggatatacctttacttcttattctatgcatt gggtccgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggccttatcaatccg tataatggcaatacgcattacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccatgac ccgtgataccagcattagcaccgcgtatatggaactgagcagcctgcgtagcg aagatacggccgtgtattattgcgcgcgtatgcttcgttttgatgtttggggc -58- 148032.doc 201043638

caaggcaccctggtgacggttagctcagcgtcgaccaaaggtccaagcgtgtt tccgctggctccgagcagcaaaagcaccagcggcggcacggctgccctgggct gcctggttaaagattatttcccggaaccagtcaccgtgagctggaacagcggg gcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcaaagcagcggcct gtatagcctgagcagcgttgtgaccgtgccgagcagcagcttaggcactcaga cctatatttgcaacgtgaaccataaaccgagcaacaccaaagtggataaaaaa gtggaaccgaaaagc 編碼 SEQ.I.D.NO:178 之PN 182 gatatcgcactgacccagccagcttcagtgagcggctcaccaggtcagagcat taccatctcgtgtacgggtactagcagcgatggtggtggttataattatgtgt cttggtaccagcagcatcccgggaaggcgccgaaacttatgatttatggtgtt tctaatcgtccctcaggcgtgagcaaccgttttagcggatccaaaagcggcaa caccgcgagcctgaccattagcggcctgcaagcggaagacgaagcggattatt attgccagacttatactcgttattctgattctcctgtgtttggcggcggcacg aagttaaccgttcttggccagccgaaagccgcaccgagtgtgacgctgtttcc gccgagcagcgaagaattgcaggcgaacaaagcgaccctggtgtgcctgatta gcgacttttatccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagcccc gtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagta cgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaa gctacagctgccaggtcacgcatgaggggagcaccgtggaaaaaaccgttgcg ccgactgaggcc MOR09423 CDRH1 183 GYYIN CDRH2 184 IIS PNQGTTGYAQKFQG CDRH3 185 GNYDHLDY CDRL1 186 RASQGISNYLN CDRL2 187 DASTLQS CDRL3 188 QQDWHTLPVT VH 189 qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftgyyinwvrqapgqglewmgiisp nqgttgyaqkfqgrvtmtrdtsistaymelsslrsedtavyycargnydhldy wgqgtlvtvss VL 190 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDAST LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQDWHTLPVTFGQGTKVE IK 重鏈 191 qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftgyyinwvrqapgqglewmgiisp nqgttgyaqkfqgrvtmtrdtsistaymelsslrsedtavyycargnydhldy wgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswn sgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvd kkvepks 輕鏈 192 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDAST 14S032.doc •59- 201043638

LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQDWHTLPVTFGQGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC 編碼 SEQ.I.D.NO:189 之PN 193 caggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgcgagcgt gaaagtgagctgcaaagcctccggatatacctttactggttattatattaatt gggtccgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggcattatctctccg aatcagggcactacgggttacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccatgac ccgtgataccagcattagcaccgcgtatatggaactgagcagcctgcgtagcg aagatacggccgtgtattattgcgcgcgtggtaattatgatcatcttgattat tggggccaaggcaccctggtgacggttagctca 編碼 SEQ.I.D.NO:190 之PN 194 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccagggtatttctaattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgatgcttctact ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacttattattgcc agcaggattggcatactcttcctgttacctttggccagggtacgaaagttgaa attaaa 編碼 SEQ.I.D.NO:191 之PN 195 caggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgcgagcgt gaaagtgagctgcaaagcctccggatatacctttactggttattatattaatt gggtccgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggcattatctctccg aatcagggcactacgggttacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccatgac ccgtgataccagcattagcaccgcgtatatggaactgagcagcctgcgtagcg aagatacggccgtgtattattgcgcgcgtggtaattatgatcatcttgattat tggggccaaggcaccctggtgacggttagctcagcgtcgaccaaaggtccaag cgtgtttccgctggctccgagcagcaaaagcaccagcggcggcacggctgccc tgggctgcctggttaaagattatttcccggaaccagtcaccgtgagctggaac agcggggcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcaaagcag cggcctgtatagcctgagcagcgttgtgaccgtgccgagcagcagcttaggca ctcagacctatatttgcaacgtgaaccataaaccgagcaacaccaaagtggat aaaaaagtggaaccgaaaagc 編碼 SEQ.I.D.NO:192 之PN 196 gatatccagatgacccagagcccgtctagcctgagcgcgagcgtgggtgatcg tgtgaccattacctgcagagcgagccagggtatttctaattatctgaattggt accagcagaaaccaggtaaagcaccgaaactattaatttatgatgcttctact ttgcaaagcggggtcccgtcccgttttagcggctctggatccggcactgattt taccctgaccattagcagcctgcaacctgaagactttgcgacttattattgcc agcaggattggcatactcttcctgttacctttggccagggtacgaaagttgaa attaaacgtacggtggctgctccgagcgtgtttatttttccgccgagcgatga acaactgaaaagcggcacggcgagcgtggtgtgcctgctgaacaacttttatc cgcgtgaagcgaaagttcagtggaaagtagacaacgcgctgcaaagcggcaac agccaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctattctctgag cagcaccctgaccctgagcaaagcggattatgaaaaacataaagtgtatgcgt gcgaagtgacccatcaaggtctgagcagcccggtgactaaatcttttaatcgt ggcgaggcc 人類C3b A鍵 197 SPMYSIITPNILRLESEETMVLEAHDAQGDVPVTVTVHDFPGKKLVLSSEKTV -60- 148032.doc 201043638

LTPATNHMGNVTFTIPANREFKSEKGRNKFVTVQATFGTQVVEKVVLVSLQSG YLFIQTDKTIYTPGSTVLYRIFTVNHKLLPVGRTVMVNIENPEGIPVKQDSLS SQNQLGVLPLSWDIPELVNMGQWKIRAYYENSPQQVFSTEFEVKEYVLPSFEV 工VEPTEKFYYIYNEKGLEVTITARFLYGKKVEGTAFVIFGIQDGEQRISLPES LKRIPIEDGSGEVVLSRKVLLDGVQNLRAEDLVGKSLYVSATVILHSGSDMVQ AERSGIP工VTSPYQIHFTKTPKYFKPGMPFDLMVFVTNPDGSPAYRVPVAVQG EDTVQSLTQGDGVAKLSINTHPSQKPLSITVRTKKQELSEAEQATRTMQALPY STVGNSNNYLHLSVLRTELRPGETLNVNFLLRMDRAHEAKIRYYTYLIMNKGR LLKAGRQVREPGQDLVVLPLSITTDFIPSFRLVAYYTLIGASGQREVVADSVW VDVKDSCVGSLVVKSGQSEDRQPVPGQQMTLKIEGDHGARVVLVAVDKGVFVL NKKNKLTQSKIWDWEKADIGCTPGSGKDYAGVFSDAGLTFTSSSGQQTAQRA ELQCPQPAA 人類C3b B鏈 198 SNLDEDIIAEENIVSRSEFPESWLWNVEDLKEPPKNGISTKLMNIFLKDSITT WEILAVSMSDKKGICVADPFEVTVMQDFFIDLRLPYSVVRNEQVEIRAVLYNY RQNQELKVRVELLHNPAFCSLATTKRRHQQTVTIPPKSSLSVPYVIVPLKTGL QEVEVKAAVYHHFISDGVRKSLKVVPEGIRMNKTVAVRTLDPERLGREGVQKE DIPPADLSDQVPDTESETRILLQGTPVAQMTEDAVDAERLKHLIVTPSGCGEQ NMIGMTPTVIAVHYLDETEQWEKFGLEKRQGALELIKKGYTQQLAFRQPSSAF AAFVKRAPSTWLTAYVVKVFSLAVNLIAIDSQVLCGAVKWLILEKQKPDGVFQ EDAPVIHQEMIGGLRNNNEKDMALTAFVLISLQEAKDICEEQVNSLPGSITKA GDFLEANYMNLQRSYTVAIAGYALAQMGRLKGPLLNKFLTTAKDKNRWEDPGK QLYNVEATSYALLALLQLKDFDFVPPVVRWLNEQRYYGGGYGSTQATFMVFQA LAQYQKDAPDHQELNLDVSLQLPSRSSKITHRIHWESASLLRSEETKENEGFT VTAEGKGQGTLSWTMYHAiCAKDQLTCNKFDLKVTIKPAPETEKRPQDAKNTM ILEICTRYRGDQDATMSILDISMMTGFAPDTDDLKQLANGVDRYISKYELDKA FSDRNTLIIYLDKVSHSEDDCLAFKVHQYFNVELIQPGAVKVYAYYNLEESCT RFYHPEKEDGKLNKLCRDELCRCAEENCFIQKSDDKVTLEERLDKACEPGVDY VYKTRLVKVQLSNDFDEYIMAIEQTIKSGSDEVQVGQQRTFISPIKCREALKL EEKKHYLMWGLSSDFWGEKPNLSYIIGKDTWVEHWPEEDECQDEENQKQCQDL GAFTESMVVFGCPN

本發明之其它抗體包括彼等其中胺基酸或編碼胺基酸之核酸已突變，但仍與表1中所述之序列具有至少60%、 65%、70%、75%、80%、85%、90% 或 95°/。一致性之抗體。在一些實施例中，其包括突變型胺基酸序列，其中當與表1中所述序列中描述之可變區相比較時，可變區不超過1、2、3、4或5個胺基酸已突變，同時保留實質上相同之治療活性。由於該等抗體中每一者皆可結合於C3b，故VH、VL、全長輕鏈及全長重鏈序列（胺基酸序列及編碼胺基酸序列 -61 - 148032.doc 201043638 之核*酸序列)可「經混合及匹配」卩產生本發明之其它 C3b、、’。合杬體。該等「經混合及匹配」之⑶結合抗體可使用此項技術中已知之結合檢定（例如elisa及實例部分中所述之其匕檢定）來檢驗。當混合及匹配該等鏈時特定 VH/VL配對之VH序列應以結構上類似之¥；9序列置換。同樣，特定全長重鏈/全長輕鏈配對之全長重鏈序列應以結構上類似之全長重鏈序列置換。同樣，特定vh/vl配對之

VL序列應以結構上類似之vL序列置換。同樣，特定全長重鏈/全長輕鏈配對之全長輕鏈序列應以結構上類似之全長輕鏈序列置換。因此，在一態樣中，本發明提供一種經分離單株抗體或其抗原結合區，其具有：包含選自由SEQ ID NO: 21 、 35 、 49 、 63 、 77 、 91 、 105 、 119 、 133 、 147、161、175及1 89組成之群之胺基酸序列的重鏈可變域及包含選自由 SEQ ID NO: 8、22、36、50、64、78、92、 106、120、134、148、162、176及190組成之群之胺基酸序列的輕鏈可變域’其中該抗體特異性結合於C3b(例如人類及/或獼猴C3b)。在另一態樣中，本發明提供⑴經分離單株抗體，其具有：包含已經最佳化以供在哺乳動物細胞中表現之選自由 SEQ ID NO: 9、23、37、51、65、79、93、107、121、 135、149、163、177及191組成之群之胺基酸序列的全長重鏈，及包含已經最佳化以供在哺乳動物細胞中表現之選自由 SEQ ID NO: 10、24、38、52、66、80、94、108、 122、136、150、164、178及192組成之群之胺基酸序列的 148032.doc •62· 201043638 全長輕鏈；或（ii)包含其抗原結合部分之功能蛋白。在另一態樣中，本發明提供包含表1中所述之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3或其組合之C3b結合抗體。抗體之 VH CDR1之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 1、15、29、 43、57、71、85、99、113、127、141、155、169及 183 中。抗體之VH CDR2之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 2、 16、30、44、58、72、86、100、114、128、142、156、 170及184中。抗體之VH CDR3之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、73、87、101、115、129、 143、157、171及185中。抗體之VL CDR1之胺基酸序列展示於 SEQ ID NO: 4、18、32、46、60、74、88、102、 116、130、144、158、172及 186 中。抗體之VL CDR2之胺基酸序列展示於 SEQ ID NO: 5、19、33、47、61、75、 89、103、117、131、145、159、173 及 187 中。抗體之 VL CDR3之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 6、20、34、48、 62、76、90、104、118、132、146、160、174及 188 中。 CDR區使用Kabat系統劃界（Kabat，E. A等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，美國健康與公共事業部（U.S· Department of Health and Human Services), NIH公開案第 91-3242號）。

鑒於該等抗體中每一者皆可結合於C3b且抗原結合特異性主要由CDR1、2及3區提供，因此VH CDR1、2及3序列及VL CDR1、2及3序列可「經混合及匹配」（亦即’不同抗體之CDR可經混合及匹配，儘管各抗體較佳含有VH 14B032.doc -63- 201043638 CDR1、2及3及1 CDR1、2及3)以產生本發明之其它⑶ 結合分子。t亥f「經混合及匹配」之⑶結合抗體可使用此項技術中已知之結合檢定及實例中所述之彼等檢定（例如ELISA)來檢驗。當混合及匹配VH CDR序列時，特定序列之CDR1、CDR2及/或CDR3序列應以結構上類似之 CDR序列置換。同樣，當混合且匹配VL CDr序列時，特定VL序列之CDR1、CDR2及/或CDR3序列應以結構上類似之CDR序列置換。一般技術者應易於瞭解新穎乂^及序列可藉由以與本文中關於本發明單株抗體所示的CDR序列之結構上類似之序列取代一或多個VH及/或VL CDR區序列來產生。除上述外’在一實施例中’本文所述抗體之抗原結合片段亦可包含VH CDR1、2及3或VL CDR1、2及3，其中該片段以單一可變域形式結合於C3b。

因此’本發明提供一種經分離單株抗體或其抗原結合區，其包含：包含選自由SEQ ID NO: 1、15、29、43、 57、71、85、99、113、127、141、155、169及 183組成之群之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1 ;包含選自由SEQ ID NO: 2、16、30、44、58、72、86、100、114、128、 142、156、170及184組成之群之胺基酸序列的重鏈可變區 CDR2 ;包含選自由 SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、 73、87、101、115、129、143、157、171 及 185 組成之群之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3 ;包含選自由SEQ ID NO: 4、18、32、46、60、74、88、102、116、130、 144、158、172及186組成之群之胺基酸序列的輕鏈可變區 148032.doc -64- 201043638 CDRl ;包含選自由 SEQ ID NO·· 5、19、33、47、61、 75、89、103、117、131、145、159、173 及 187 組成之群

之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2 ;及包含選自由SEQ ID NO: 6、20、34、48、62、76、90、104、118、132、 146、160、174及188組成之群之胺基酸序列的輕鏈可變區 CDR3 ;其中該抗體特異性結合C3b。

❹ 本發明包括一種具有表1中抗體9556之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表丨中抗體9611之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表1中抗體9612之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表丨中抗體 9609之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括-種具有表1中抗體961〇之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片&。本發明進一步包括—種具有^中抗體 9674之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合^。本發明 ^ ―步^—種具有表1中抗體9675之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括一種具有表i中抗體 9⑶之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表1中枋艚甲柷體9397之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。太恭^ , 本發明亦包括一種具有表1中抗體 939S之重鏈及輕鏈序列的括斤幻的抗體或其抗原結合片段。本發明另外包括一種具有表 ^ . . 几& 36之重鏈及輕鏈序列的抗 9⑷之重鏈及輕鏈序列的於^；^種具有表1中抗體序歹]的抗體或其抗原結合片段。本發明 148032.doc •65- 201043638 進一步包括一種具有表1中抗體9373之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明亦包括一種具有表1中抗體9423之重鏈及輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。在一特定實施例中，特異性結合於C3b之抗體包含SEQ ID NO: 1之重鏈可變區CDR1 ; SEQ ID NO: 2之重鏈可變區 CDR2 ; SEQ ID NO: 3之重鏈可變區 CDR3 ; SEQ ID NO: 4 之輕鏈可變區CDR1 ; SEQ ID NO: 5之輕鏈可變區CDR2 ; 及SEQ ID NO: 6之輕鏈可變區CDR3。在另一特定實施例中’特異性結合於C3b之抗體包含SEQ ID NO: 15之重鏈可變區 CDR1 ; SEQ ID NO: 16之重鏈可變區 CDR2 ; SEQ ID NO: 17之重鏈可變區CDR3 ; SEQ ID NO: 18之輕鏈可變區 CDR1 ; SEQ ID NO: 19之輕鏈可變區 CDR2 ;及 SEQ ID NO: 20之輕鏈可變區CDR3。在另一特定實施例中，特異性結合於C3b之抗體包含 SEQ ID NO·· 29之重鏈可變區 CDR1 ; SEQ ID NO·· 30之重鏈可變區CDR2 ; SEQ ID NO: 3 1之重鏈可變區CDR3 ; SEQ ID NO: 32之輕鏈可變區CDR1 ; SEQ ID NO: 33之輕鏈可變區CDR2 ;及SEQ ID NO: 34之輕鏈可變區CDR3。在另一特定實施例中，特異性結合於C3b之抗體包含SEQ ID NO: 43之重鏈可變區CDR1 ; SEQ ID NO: 44之重鏈可變區 CDR2 ; SEQ ID NO: 45之重鏈可變區 CDR3 ; SEQ ID NO: 46之輕鏈可變區CDR1 ; SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區 CDR2 ;及SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區CDR3。在另一特定實施例中，特異性結合於C3b之抗體包含 148032.doc •66- 201043638 SEQ ID NO: 57 之重鏈可變區 CDRl ; SEQ ID NO: 58 之重鏈可變區CDR2 ; SEQ ID NO: 59之重鏈可變區CDR3 ; SEQ ID NO: 60之輕鏈可變區CDRl ; SEQ ID NO: 61之輕鏈可變區CDR2 ;及SEQ ID NO: 62之輕鏈可變區CDR3。在另一特定實施例中，特異性結合於C3b之抗體包含SEQ ID NO: 71之重鏈可變區CDRl ; SEQ ID NO: 72之重鏈可變區 CDR2 ; SEQ ID NO: 73之重鏈可變區 CDR3 ; SEQ ID NO: 74之輕鏈可變區CDRl ; SEQ ID NO: 75之輕鏈可變區 CDR2 ;及SEQ ID NO: 76之輕鍵可變區CDR3。在另一特定實施例中，特異性結合於C3b之抗體包含 SEQ ID NO: 85 之重鏈可變區 CDRl ; SEQ ID NO: 86 之重鏈可變區CDR2 ; SEQIDNO: 87之重鏈可變區CDR3 ; SEQ ID NO: 88之輕鏈可變區CDRl ; SEQ ID NO: 89之輕鏈可變區〇〇112;及8丑(5 1〇]^〇:90之輕鏈可變區。〇113。在某些實施例中，特異性結合於C3b之抗體為表1中所述之抗體。在一較佳實施例中，結合C3b之抗體為抗體 95 56。在另一較佳實施例中，結合C3b之抗體為抗體 96 10。在另一較佳實施例中，結合C3b之抗體為抗體 9674。在另一較佳實施例中，結合C3b之抗體為抗體 9675。在另一較佳實施例中，結合C3b之抗體為抗體 9609 ° 如本文中所用之人類抗體包含重鏈或輕鏈可變區或全長重键或輕鍵’右遠抗體之可變區或全長鍵係自使用人類生殖系免疫球蛋白基因之系統獲得，則其為特定生殖系序列 148032.doc -67- 201043638 之產物」或「來源於」該特定生殖系序列。該等系統包括以所關注抗原免疫帶有人類免疫球蛋白基因之轉殖基因卜乳，或以所關注抗原來篩檢呈現於噬菌體上之人類免疫球蛋白基因文庫。為人類生殖系免疫球蛋白序列「之產物」或來源於」人類生殖系免疫球蛋白序列之人類抗體了因而藉由將§亥人類抗體之胺基酸序列與人類生殖系免疫球蛋白之胺基酸序列相比較，且選擇序列最接近（亦即最大一致性百分比）該人類抗體之序列的人類生殖系免疫球蛋白序列來鑑別。為特定人類生殖系免疫球蛋白序列「之產物」或「來源於」特定人類生殖系免疫球蛋白序列的人類抗體與該生殖系序列相比較時可能因例如天然存在之體細胞突變或有意引入定點突變而含有胺基酸差異。然而，在VH或VL構架區，所選人類抗體之胺基酸序列通常與由人類生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列至少9〇% 一致’且含有當與其它物種之生殖系免疫球蛋白胺基酸序列 (例如鼠類生殖系序列）相比較時鑑別該人類抗體為人類抗體的胺基酸殘基。在某些情況下，人類抗體之胺基酸序列可與由生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列至少 60%、70%、80%、90%或至少95%，或甚至至少96%、 97%、98%或99%—致。通常，重組人類抗體將在Vh*Vl 構架區顯示不超過10個胺基酸不同於由人類生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列。在某些情況下，人類抗體與由生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列相比可顯示不超過5個’或甚至不超過4、3、2或1個胺基酸之差異。人 148032.doc -68- 201043638 類生殖系免疫球蛋白基因之實例包括（但不限於）如下所述之可變域生殖系片段以及DP47及DPK9。同源抗體在另一實施例中，本發明提供一種包含與表丨中所述之序列同源之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段，且該抗體結合於C3b蛋白（例如人類及/或獼猴C3b)且保留表i中所述抗體之所需功能特性。 0 舉例而§，本發明提供一種包含重鏈可變域及輕鏈可變域之經分離單株抗體（或其功能性抗原結合片段），其中該重鏈可變域包含與選自由SEQ m NO: 7、21、35、49、 63、77、91、105、119、133、147、161、175 及 189 組成之群之胺基酸序列至少80%、至少90%、或至少95°/。一致的胺基酸序列’該fe鏈可變域包含與選自由SEQ id NO: 8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、 162、176及190組成之群之胺基酸序列至少8〇%、至少 Q 90%、或至少95% 一致的胺基酸序列；該抗體特異性結合於C3b(例如人類及/或獼猴C3b)且該抗體可在溶血檢定中抑制紅血球溶解。在一特定實例中，該等抗體在溶血檢定中具有在10%人類或獼猴血清下小於50 nM之IC5〇值。在其它實施例中’ VH及/或VL胺基酸序列可與表1中所述之序列 50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、 97%、98%或99%—致。在其它實施例中，Vh及/或VL胺基酸序列除不超過1、2、3、4或5個胺基酸位置之胺基酸取代以外可一致。具有與表1中所述序列之VH及VL區具有 148032.doc -69- 201043638 高（亦即80°/。或80%以上）一致性之VH及VL區之抗體可藉由對分別編碼 SEQ ID NO: 7、21 ' 35、49、63、77、91、 105、119、133 ' 147、161、175、189、8、22、36、50、 64、78、92、106、120、134、148、162、176及 190之核酸分子進行突變誘發（例如定點或PCR介導之突變誘發），接著使用本文所述之功能檢定檢驗所編碼改變之抗體的保留功能來獲得。在其它實施例中，全長重鏈及/或全長輕鏈胺基酸序列可與表1中所述之序列50%、60%、70%、80%、90%、 95%、96%、97%、98°/。或 99%—致。具有分別與 SEQ ID NO: 9、23、37、51、65、79、93、107、121、135、 149、163、177及191中任一者之全長重鏈及SEQ ID NO: 10、24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、 164、178及192中任一者之全長輕鏈具有高（亦即80%或 80%以上）一致性之全長重鏈及全長輕鏈之抗體可藉由對分別編碼該等多肽之核酸分子進行突變誘發（例如定點或PCR 介導之突變誘發），接著使用本文所述之功能檢定檢驗所編碼改變之抗體的保留功能來獲得。在其它實施例中，全長重鏈及/或全長輕鏈核苷酸序列可與上述序列 60%、70%、80%、90%、95%、96%、 97%、98%或 99%—致。在其它實施例中，重鏈及/或輕鏈核苷酸序列之可變區可與上述序列 60%、70%、80%、90%、95%、96%、 97%、98% 或 99%—致。 148032.doc -70- 201043638 如本文中所用’兩個序列之間的一致性百分比為該等序列所共有之一致位置數之函數（亦即，一致性％=一致位置數/位置總數χ 100)，考慮因素為達成兩個序列之最佳對準所需要引入之間隙數及各間隙之長度。兩個序列之間的序列比較及一致性百分比測定可使用如在以下非限制性實例中所述之數學演算法來達成。或者或另外，本發明之蛋白質序列可進一步用作「查詢 ο 序列」以對公開資料庫進行搜尋以例如鑑別相關序列。舉例而言’該等搜尋可使用Altschul等人，1990 J. Mol. Biol. 215:403-10 之 BLAST程式（2.0版）執行。具有保守修飾之抗體在某些實施例中’本發明之抗體具有包含CDR1、CDR2 及CDR3序列之重鏈可變區及包含cdri、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該等CDR序列中之一或多者具有基於本文中所述抗體之特定胺基酸序列或其保守修飾，且其〇中該等抗體保留本發明之C3b結合抗體所需之功能特性。因此，本發明提供一種經分離單株抗體或其功能性抗原結合片段，其由包含CDRI、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區及包3 CDRI、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區組成，其中：該等重鏈可變區CDR1胺基酸序列係選自由SEQ m NO: 1、15、29、43、57、71、85、99、113、127、i4i、 155、169及183及其保守修飾組成之群；該等重鏈可變區 CDR2胺基酸序列係選自由SEQ m NO: 2、16 ' 30、44、 58、72、86、100、114、128、142、156、i7〇及 i84及其 148032.doc -71· 201043638 保守修飾組成之群；該等重鏈可變區CDR3胺基酸序列係選自由 SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、73、87、ioj 115、129、143、157、171及185及其保守修飾組成之群；該等輕鏈可變區CDR1胺基酸序列係選自由SEQ扣NO 4、18、32、46、60、74、88、102、116、13〇、144、 158、172及186及其保守修飾組成之群；該等輕鏈可變區 CDR2胺基酸序列係選自由SEq id NO: 5、19、33、47、 61、75、89、103、117、131、145、159、173 及 i87 及其保守修飾組成之群；該等輕鏈可變區CDR3胺基酸序列係〇選自由 SEQ ID NO: 6、20、34、48、62、76、90、1〇4、 IIS、I32、I46、⑽、⑺及⑻及其保守修飾組成之群；該抗體或其抗原結合片段特異性結合於C3b且在本文所述之溶也檢定中抑制紅血球溶解。在其它實施例中，本發明之經最佳化以供在哺乳動物細胞中表現之抗體具有全長重鏈序列及全長輕鏈序列其中該等序列中之一或多者具有基於本文所述之抗體之特定胺基酸序列或其保守修飾，且其中該等抗體保留本發明之〇 C3b結合抗體之所需功能特性。因此，本發明提供一種由全長重鏈及全長輕鏈組成經最佳化以供在哺乳動物細胞中表現之經分離單株抗體，其中：該全長重鏈具有選自由 SEQ ID NO: 9、23、37、51 ' 65、79、93、107、121、 135 149' 163 ' 177及191及其保守修飾組成之群之胺基酸序列’·且該全長輕鏈具有選自由SEq ID Ν〇· 1〇、24、 38 、 52 、 66 、 80 、 94 、 1〇8 、 122 、 136 、 150 、 164 、 178及 148032.doc •72- 201043638 192及其保守修飾組成之群之胺基酸序列；該抗體特異性結合於C3b(例如人類及/或獼猴C3b);且該抗體在本文所述之溶血檢定中抑制紅血球溶解。在一特定實施例中，該等抗體在溶血檢定中具有在1 〇%人類或獼猴血清下小於50 nM 之 IC5G 值。結合於相同抗原決定基之抗體本發明提供與表1中所述之C3b結合抗體結合於相同抗原決定基之抗體。其它抗體可因此基於其在C3b結合檢定中與本發明之其它抗體交叉競爭（例如以統計上顯著之方式競爭性抑制結合）的能力來鑑別。測試抗體抑制本發明抗體與C3b蛋白（例如人類及/或獼猴C3b)結合之能力表明測試抗體可與本發明抗體競爭結合於C3b ;根據非限制性理論，該抗體可與其所競爭之抗體結合於C3b蛋白上相同或相關（例如結構上類似或空間接近）之抗原決定基。在某一實施例中，與本發明抗體結合於C3b上相同抗原決定基之抗體為人類單株抗體。該等人類單株抗體可如本文所述製備及分離。如本文所用，當在高於106xKd之競爭性抗體濃度的競爭性抗體存在下，競爭性抗體抑制本發明抗體之 C3b結合大於50%時，抗體「競爭」結合。經工程改造及修飾之抗體另外’本發明之抗體可使用具有本文中所示之VH&/或 VL序列中之一或多者的抗體作為起始物質來對經修飾抗體進行工程改造來製備’該經修飾抗體可具有與起始抗體相比經改變之特性。抗體可藉由修飾一或兩個可變區（亦 148032.doc -73- 201043638 即’ VH及/或VL)中，例如一或多個CDR區中及/或一或多個構架區中之-或多個殘基來進行工程改造。或者或另外，抗體可藉由修錦怪定區内之殘基例如以改變該抗體之效應功能來進行工程改造。可進行之一種類型之可變區工程改造為CDR移植。抗體主要經由位於六個重鏈與輕鏈互補決定區内（CDR)之胺基酸殘基與目標抗原相互作用。出於此原因，在個別抗體之間，CDR内之胺基酸序列相比於CDR外之序列具有較大多樣性。由於CDR序列負責大部分抗體_抗原相互作用，故可藉由建構包括來自特定天然存在抗體之CDR序列移植至來自具有不同特性之不同抗體之構架序列上的表現載體來表現模擬特定天然存在抗體之特性的重組抗體（參見例如

Riechmann，L_ 等人，1998 Nature 332:323-327 ; Jones，P.等人，1986 Nature 321:522-525 ; Queen，C.等人，1989 Pr〇c Natl· Acad·, U.S.A. 86:10029-10033 ; Winter之美國專利第 5,225,539號；及Queen等人之美國專利第5,53〇，1〇1號、第 5,585,089號、第 5,693,762號及第 6，180,370號）。因此’本發明之另一實施例係關於一種包含重鏈可變區及輕鏈可變區之經分離單株抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區包含分別具有選自由SEQ ID NO: 1、15、29、 43、57、71、85、99、113、127、141、155、169及 183組

成之群之胺基酸序列的CDR1序列；具有選自由SEq ID NO: 2、16、30、44、58、72、86、100、114、128、 142、156、170及184組成之群之胺基酸序列的CDR2序 -74- 148032.doc 201043638 列；具有選自由 SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、73、 87、101、115、129、143、157、171 及 185 組成之群之胺基酸序列的CDR3序列；且該輕鏈可變區包含分別具有選自由 SEQ ID NO: 4、18、32、46、60、74、88 ' 102、 116、130、144、158、172及186組成之群之胺基酸序列的 CDR1 序列；具有選自由 SEQ ID NO: 5、19、33、47、 61、75、89、103、117、131、145、159、173及 187組成之群之胺基酸序列的CDR2序列；及由選自由SEQ ID NO: 6、20、34、48、62、76、90、104、118 ' 132、146、 160、174及188組成之群之胺基酸序列組成的CDR3序列。因此，該等抗體含有單株抗體之VH及VL CDR序列，亦可含有與該等抗體不同之構架序列。可自包括生殖系抗體基因序列之公開DNA資料庫或已公開文獻獲得此等構架序列。舉例而言，人類重鏈及輕鏈可變區基因之生殖系DNA序列可見於「VBase」人類生殖系序列資料庫（可在網際網路 www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase獲得）以及 Kabat，E. A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版，美國健康與公共事業部 (U.S. Department of Health and Human Services), NIH公開案第 91-3242 號；Tomlinson, I. M.等人，1992 J. f〇l. Biol. 227:776-798 ;及 Cox，J. P. L.等人，1994 Eur. J lmmunol. 24:827-836中’各參考文獻之内容均以引用的方式明確併入本文中。用於本發明抗體中之構架序列的一實例為與由本發明之 148032.doc -75- 201043638 選定抗體所用之構架序列（例如共同序列）及/或由本發明單株抗體所用之構架序列在結構上類似的構架序列^ VH CDR1、2及3序列及VL CDR1、2及3序列可移植至與產生構架序列之生殖系免疫球蛋白基因中所見的序列具有一致序列之構架區上，或者CDR序列可移植至與生殖系序列相比含有一或多個突變之構架區上。舉例而言，已發現在某些情況下’使構架區内之殘基突變以保持或增強該抗體之抗原結合能力係有益的（參見例如Queen等人之美國專利第 5,530，101 號、第 5,585,089 號、第 5,693,762 號及第 6,180,3 70號）。可用作可在其上構建本文所述之抗體及抗原結合片段之骨架的構架包括（但不限於）VH1A、vH1B、 VH3 Vkl、V12及Vk2。其它構架為此項技術中所已知且可見於例如全球資訊網vbase mrc_cpe cam扣uk/index php?&MMN_p〇sition=l:l之vBase資料庫中。另一類可變區修飾為使VH及/或乂[ CDR1、CDR2&Z或 CDR3區内之胺基酸殘基突變以藉此改良所關注抗體之一或多種結合特性（例如親和力），稱為「親和力成熟」。可進行定點突變誘發或⑽介導之突變誘發以引入突變，且對抗體結合或其它所關注之功能特性之影響可以如本文中所述及實财所提供之活體外絲_檢定來評估。可引入保守修飾（如上文所論述該等突變可為胺基酸取代、添加或缺失。此外，通常CDR區内改變不超過工、2、3、4 或5個殘基。因此’在另-實施例中，本發明提供由以下組成之經分 148032.doc 201043638 離C3b結合單株抗體或其抗原結合片段：具有以下之重鏈可變區：由選自具有SEQ ID NO: 1、15、29、43、57、 71 ' 85、99 ' 113、127、141、155、169及 183之群之胺基酸序列或與 SEQ ID NO: 1、15、29、43、57、71、85、 99、113、127、141、155、169及 183相比具有 1、2、3、4 或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列組成的VH CDR1 區；具有選自由 SEQ ID NO: 2、16、30、44、58、 72、 86、100、114、128、142、156、170及 184組成之群之胺基酸序列或與 SEQ ID NO: 2、16、30、44、58、72、 86、100、114、128、142、156、170及 184相比具有 1、 2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列的 VH CDR2 區；具有選自由 SEQ ID NO: 3、17、31、45、 59、 73、87、101、115、129、143、157、171 及 185 組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、 73、 87、101、115、129、143、157、171 及 185相比具有 1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列的 VH CDR3區；具有選自由 SEQ ID NO: 4、18、32、46、 60、 74、88、102、116、130、144、158、172及 186 組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4、18、32、46、60、 74、 88、102、116、130、144、158、172及 186相比具有 1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列的 VL CDR1 區；具有選自由 SEQ ID NO: 5、19、33、47、 61、 75、89、103、117、131、145、159、173 及 187 組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 5、19、33、47、61、 148032.doc -77· 201043638 75、89、103、117、131、145、159、173及 187相比具有 1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列的VL CDR2區；及具有選自由SEQ ID NO: 6、20、34、 48 、 62 、 76 、 90 、 104 、 118 、 132 、 146 、 160 、 174及188 組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 6、20、34、48、 62、76、90、104、118、132、146、160、174及 188相比具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列的VL CDR3區。移植抗原結合域至替代構架或骨架中可使用多種抗體/免疫球蛋白構架或骨架，只要所得多肽包括至少一個特異性結合於C3b之結合區。該等構架或骨架包括人類免疫球蛋白之5個主要個體基因型或其片段’且包括較佳具有人類化態樣之其它動物物種的免疫球蛋白。諸如在路，較;類動物（camelids)中鑑別出之單重鍵抗體在此方面尤其受關注。熟習此項技術者繼續發現及開發新穎的構架、骨架及片段。在一態樣中’本發明係關於使用本發明之CDR可移植至其上的非免疫球蛋白骨架來產生基於非免疫球蛋白之抗體。可使用已知或將來的非免疫球蛋白構架及骨架，只要其包含對目標C3b蛋白（例如人類及/或獼猴C3b)具有特異性之結合區。已知非免疫球蛋白構架或骨架包括（但不限於）纖維結合蛋白（C〇mp0und Therapeutics，Inc.，Waltham， ΜΑ)、錨蛋白（Molecular Partners ag，Zurich, Switzerland)、域抗體（Domantis，Ltd.，Cambridge, MA 及 Ablynx nv， 148032.doc 201043638

Zwijnaarde，Belgium)、脂質運載蛋白（Pieris Proteolab AG， Freising, Germany)、小分子免疫藥物（Trubion Pharmaceuticals Inc.，Seattle, WA)、馬波地（maxybody)(Avidia，Inc.， Mountain View，CA)、蛋白質 A(Affibody AG，Sweden)及阿菲林（affilin)(y-晶狀體球蛋白或泛素）(Scil Proteins GmbH, Halle, Germany)。纖維結合蛋白骨架係基於III型纖維結合蛋白域（例如， III型纖維結合蛋白之第十模組（10 Fn3域））。III型纖維結合蛋白域具有7條或8條分佈於兩個β摺疊之間的β股，該兩個 β摺疊本身彼此相抵靠緊形成該蛋白質的核，且進一步含有將該等β股彼此連接且暴露於溶劑之環（與CDR類似）。在 β摺疊夾層之各邊緣處存在至少三個此類環，其中該邊緣為該蛋白質垂直於β股之方向的邊界（參見US 6,81 8,418)。此等基於纖維結合蛋白之骨架不為免疫球蛋白，儘管總體摺疊與包含路(camel)及路馬（llama)IgG中之完整抗原識別單元之最小功能性抗體片段（重鏈之可變區）的總體摺疊密切相關。由於此結構，非免疫球蛋白抗體模擬在性質及親和力上與抗體之抗原結合特性類似之抗原結合特性。此等骨架可用於與活體内抗體之親和力成熟過程類似之活體外環隨機化及改組策略中。此等基於纖維結合蛋白之分子可用作骨架，其中可使用標準選殖技術使該分子之環區置換為本發明之CDR。錨蛋白技術係基於使用具有錨蛋白來源之重複模組的蛋白質作為用於承載可變區之骨架，該等可變區可用於與不 148032.doc •79- 201043638 同目標結合。錨蛋白重複模組為由兩個反平行α_螺旋及卜轉角組成之33個胺基酸的多肽。可變區之結合主要藉由使用核糖體呈現來最佳化。向親合性多聚體（Avimer)係來源於天然含a域蛋白質，諸如LRP-1。該等域本性上用於蛋白質_蛋白質相互作用且人類有25〇餘種蛋白質在結構上基於a域。高親合性多聚體由大量經由胺基酸連接子連接之不同「A域」單體（2_1〇個）組成。可使用例如美國專利申請公開案第2〇〇4〇175756 號 '第 2〇〇5〇〇53973 號、第 20050〇48512號及第 2〇〇6〇〇〇8844 號中所述之方法產生可結合於目標抗原的高親合性多聚體。親和抗體（Affibody)親和力配位體為由基於蛋白質八之

IgG結合域之一者的骨架之3螺旋束構成的小型簡單蛋白質。蛋白質A為細菌金黃色葡萄球菌（Staphyi〇c〇ccus aureus)之表面蛋白。此骨架域係由58個胺基酸組成，其中 13個胺基酸經隨機化以產生具有大量配位體變異體之親和抗體文庫（參見例如us 5,831，〇12)。親和抗體分子模擬抗體，其與150 kDa之抗體分子量相比具有6 kDa之分子量。儘管親和抗體分子之尺寸較小，但其結合位點仍與抗體之結合位點類似。杬運载蛋白（Anticalin)為由Pieris prote〇Lab ag公司開發之產品。其係衍生自一大群小型且穩固之蛋白質脂質運載蛋白’該等脂質運載蛋白通常與化學上敏感或不溶之化合物之生理輸送或儲存有關。若干種天然脂質運载蛋白存在 148032.doc 201043638 於人類組織或體液中。該蛋白質架構與免疫球蛋白類似，其中高變環位於剛性構架之頂部。然而，與抗體或並重电片段相比’脂質運載蛋白由具有160至職胺基酸殘美之單一多肽鏈構成，其僅略大於單一免疫球蛋白域。構成結合袋之-組四個環展示顯著結構可塑性且能容納多個側鏈。該結合位點因此可在特有過程中再成形從而以高親和力及特異性識別具有不同形狀之指定目標分子。脂質運载蛋白家族之一種蛋白質-大菜粉蛾（Pieris Brassieae)之後膽色素結合蛋白（bmn-binding protein，BBp)已用於藉由對該組四個環進行突變誘發來開發抗運載蛋白。描述抗運載蛋白之專利巾請案之—實例為pCT公開㈣w〇 199916873 號。阿菲林分子為小型非免疫球蛋白蛋白質，其經設計以對蛋白質及小分子具有特異性親和力。新型阿菲林分子可極快地選自兩個文庫，每一文庫係基於不同的人類來源之骨 0架蛋白。阿菲林分子並不展示與免疫球蛋白蛋白質的任何結構同源性。目前使用兩種阿菲林骨架，其中之一為^士晶，一種人類結構性眼晶狀體蛋白，且另一者為「泛素了超家族蛋白。兩種人類骨架均極小，展示高溫穩定性且對 PH值變化及變性劑幾乎具有抗性。此高穩定性主要歸因於該等蛋白質具有延伸的㈣疊結構。γ結晶衍生蛋白之實例描述於wo 200104144中且「泛素樣」蛋白質之實例描述於 WO 2004106368 中。蛋白質抗原決定基模擬物(ΡΕΜ)為中等尺寸環狀肽樣分 148032.doc -81- 201043638 子（MW 1-2 kDa) ’其模擬蛋白質之卜髮夾二級結構，亦即蛋白質-蛋白質相互作用所涉及之主要二級結構。人類或人類化抗體本發明提供特異性結合於C3b蛋白（例如人類及/或獼猴 C3b)之完全人類抗體。與嵌合或人類化抗體相比，當投與人類個體時，本發明之人類C3b結合抗體具有進一步降低之抗原性。人類C3b結合抗體可使用此項技術中已知之方法來產生。舉例而言，可使用人類工程化技術將非人類抗體轉化為經工程改造之人類抗體。美國專利公開案第 20050008625號描述在抗體中以人類可變區置換非人類抗體可老區同時維持相對於非人類抗體相同或提供更佳結合特徵之活體内方法。該方法依賴於用完全人類抗體對非人類參考抗體之可變區進行抗原決定基引導置換。所得人類抗體通常在結構上與參考非人類抗體無關，但與參考抗體結合於相同抗原上之相同抗原決定基。簡言之，藉由於細胞中建立「競爭劑（c〇mpetit〇r)」與參考抗體（「測試抗體J )之各種雜交體之文庫之間在能對測試抗體與抗原之結合作出反應之報導體系統存在下對與有限量之抗原結合的競爭能夠實施連續抗原決定基引導之互補性置換方法。競爭劑可為參考抗體或其衍生物，諸如單鏈Fv片段。競爭劑亦可為抗原之天然或人造配位體，其與參考抗體結合於相同抗原決定基。料狀唯—要求為其與參考抗體結合於相同抗原決定基且其與參考抗體競爭結合抗原。測試抗 148032.doc -82- 201043638 體具有一來自非人類參考抗體之共同抗原結合v區及另一來自不同來源（諸如人類抗體之全套文庫）之隨機選擇之V 區。來自參考抗體之共同v區充當導引，其使測試抗體定 4於抗原上之相同抗原決定基上且處於相同方位上，以便選擇偏向於類似參考抗體之最高抗原結合保真度。可使用許多類型之報導體系統來偵測測試抗體與抗原之間的所需相互作用。舉例而言，互補報導體片段可分別連 0 接至抗原及測試抗體，以便片段互補導致之報導體活化僅在測试抗體結合於抗原時發生。當測試抗體-報導體及抗原-報導體片段融合體與競爭劑共表現時，報導體活化變得依賴於於測試抗體與競爭劑競爭之能力，其與測試抗體對抗原之親和力成比例。其它可使用之報導體系統包括如美國專利申請案第10/208,730號（公開案第20030198971號）中所揭示之自體抑制性報導體再活化系統（尺…幻的再活化劑或美國專利申請案第10/076,845號（公開案第 Q 200301 57579號）中所揭示之競爭性活化系統。利用連續抗原決定基引導之互補性置換系統，進行選擇以鑑別表現單一測試抗體以及競爭劑、抗原及報導體組分之細胞。在該等細胞中，各測試抗體與競爭劑一對一競爭結合於有限量之抗原。報導體之活性與結合於測試抗體之抗原的量成比例，該所結合抗原量又與測試抗體對抗原之親和力及測試抗體之穩定性成比例。當表現為測試抗體時，最初基於測試抗體相對於參考抗體之活性的活性來選擇測試抗體。第一輪選擇之結果為一組r雜交」抗體，其 148032.doc •83- 201043638 中每一者由來自參考抗體之相同非人類v區及來自文庫之人類v區構成且其中每一者與參考抗體結合於抗原上之相同抗原決定基。多種第一輪中所選擇之雜交抗體之一者將對抗原具有與參考抗體相比相當或更高的親和力。在第二V區置換步驟中’將在第一步驟中所選擇之人類 V區用作選擇用同源人類V區之多種文庫對剩餘非人類參考抗體V區進行人類置換的導引。亦可將第一輪中所選擇之雜交抗體用作第二輪選擇之競爭劑。第二輪選擇之結果為一組完全人類抗體，其在結構上不同於參考抗體，但其與參考抗體競爭結合於相同抗原。某些所選人類抗體與參考抗體結合於相同抗原之相同抗原決定基。在該等所選人類抗體中，一或多者以與參考抗體相比相當或更高之親和力結合於相同抗原決定基。使用如上所述之小鼠或嵌合C3b結合抗體之一者作為參考抗體’可易於採用該方法來產生以相同結合特異性及相同或更佳結合親和力結合於人類C 3 b的人類抗體。此外，該專人類C3b結合抗體亦可自通常生產人類抗體之公司（例如 KaloBios，Inc.(Mountain View, CA))購得。駱駝類抗體自駱駝及單峰駱駝（雙峰駝（Camelus bactrianus)及單峰駝 (Calelus dromaderius))家族之成員，包括諸如美洲駝 (llama)物種（羊駝（Lama paccos)、大羊駝（Lama glama)及小羊駝（Lama vicugna))之新世界成員所獲得之抗體蛋白質已就尺寸、結構複雜性及對人類個體之抗原性進行表徵。自 148032.doc -84- 201043638 然界中所發現之該哺乳動物家族之某些IgG抗體缺乏輕鏈，且因此在結構上不同於其它動物抗體之典型的具有兩條重鏈及兩條輕鏈之四鏈四級結構。參見PCT/EP93/02214 (1994年3 月 3 日公開之 WO 94/04678)。駱駝類抗體中鑑別為VHH之小型單一可變域之區域可藉由遺傳工程改造獲得以產生對目標具有高親和力之小型蛋白質，從而得到低分子量抗體來源蛋白質，稱作「駱駝類奈米抗體」。參見1998年6月2日頒予之美國專利第 5,759,808 號；亦參見 Stijlemans, B.等人，2004 J Biol Chem 279: 1256-1261 ; Dumoulin, Μ.等人，2003 Nature 424: 783-788 ; Pleschberger, M.等人，2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448 ; Cortez-Retamozo，V.等人，2002 Int J Cancer 89: 456-62 及 Lauwereys, M.等人，1998 EMBO J 17: 3512-3 5 20。駱駝類抗體及抗體片段之工程改造文庫可購得，例如賭自Ablynx、Ghent、Belgium。如同其它非人類來源之抗體，可對駱駝類抗體之胺基酸序列進行重組改造以獲得更密切類似於人類序列之序列，亦即，該奈米抗體可經「人類化」。因此，可進一步降低駱駝類抗體對人類之天然低抗原性。駱駝類奈米抗體具有約為人類IgG分子之十分之一的分子量，且該蛋白質具有僅為幾奈米之實體直徑。該小尺寸所引起之一結果為駱駝類奈米抗體結合於功能上不可為較大抗體蛋白所見之抗原位點之能力，亦即駱駝類奈米抗體適用作使用經典免疫技術偵測否則會隱藏之抗原之試劑且 148032.doc -85- 201043638 適用作可能治療劑。因此，小尺寸所引起之另一結果為駱駝類奈米抗體由於可與目標蛋白之溝槽或窄小裂隙中之特疋位點結合而可抑制目標蛋白，且因此可以與經典抗體之功能相比更接近類似經典低分子量藥物之功能的能力發揮作用。低分子量及緊湊尺寸進-步使‘㈣類奈米抗體對熱極其穩定，對極端pH值及蛋白水解消化穩定，且具有弱抗原性。另-結果為駱駝類奈米抗體易於自循環系統移至組織中，且甚至跨過血腦障壁且可治療影響神經組織之病症。此外，奈米抗體可有利於藥物輸送跨過血腦障壁。參見 2004年8月19日公開之美國專利申請案2〇〇4〇i6i738。該等特徵與對人類之低抗原性組合指示巨大治療潛力。此二該等分子可在原核細胞（諸如大腸桿菌（E c〇h))中完全表現且表現為與噬菌體之融合蛋白且具有功能性。因此，本發明之一特徵為—磁亏代马種對C3b具有高親和力之駱乾類抗體或奈米抗體。在本文鞏 +又 < 系些實施例中，駱駝類抗體或奈米抗體係在路乾類動铷由續勖物中天然產生，亦即由駱駝類動物在以C3b或其肽片段使使用本文對於其它抗體所述之技術免疫之後產生。或者，腺人η ^將C3b結合駱駝類奈米抗體工程改造，亦即藉由如本文竇你丨士私、μ 又只例中所述例如使用淘選程序以 C3b作為目標自噬菌體呈呈見之紅適當突變誘發之駱駝類奈米抗體蛋白的文庫選擇漆4 禪產生。經工程改造之奈米抗體可進一步藉由遺傳工程改造定创丨、，冰士 > 疋I以使在党體個體中之半衰期自 4 5分鐘增加至2週。A __ + 特疋貫施例中，駱駝類抗體或奈 148032.doc -86- 201043638 米抗體係如例如PCT/EP93/〇2214中所述藉由將本發明人類抗體之重鏈或輕鏈CDR序列移植至奈米抗體或單域抗體構架序列中來獲得。雙特異性分子及多價抗體在另一態樣令，本發明之特徵為包含本發明之c3b結合抗體或其片段之雙特異性或多特異性分子。本發明之抗體或其抗原結合區可衍生或連接至另一功能分子（例如另一 0 肽或蛋白質（例如受體之另一抗體或配位體））以產生與至少兩個不同結合位點或目標分子結合之雙特異性分子。事實上，本發明之抗體可衍生或連接至一個以上其它功能分子以產生結合兩個以上不同結合位點及/或目標分子之多特異性分子；如本文所用之術語「雙特異性分子」亦意欲涵蓋此等多特異性分子。為產生本發明之雙特異性分子可使本發明之抗體與諸如另一抗體、抗體片段、肽或結合模擬物之一或多個其它結合分子功能性連接（例如藉由化學 ◎ 偶合、遺傳融合、非共價締合或其它方式）以產生雙特異性分子。因此，本發明包括包含至少一種針對C3b之第一結合特異性及針對第二目標抗原決定基之第二結合特異性的雙特異性分子。舉例而言，第二目標抗原決定基為C3b中不同於第一目標抗原決定基之另一抗原決定基。此外，對於雙特異性分子具有多特異性之本發明而言，除第一及第一目標抗原決定基外，該分子可進一步包括第三結合特異性。 148032.doc -87· 201043638 在一實施例中，本發明之雙特異性分子包含作為結合特異性之至少一個抗體或其抗體片段’包括例如Fab、Fab·、 F(ab')2、Fv或單鏈Fv。該抗體亦可為輕鏈或重鏈二聚體或其任何最小片段，諸如Fv或單鏈構築體，如Ladner等人之美國專利第4,946,778號中所述。雙功能抗體為二價雙特異性分子’其中及VL域表現於單一多肽鏈上，由過短而不容許同一鏈上之兩個域之間配對的連接子連接。VH及VL域與另一鏈之互補域配對，由此產生兩個抗原結合位點（參見例如Holliger等人，1 993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 ; Poljak等人， 1994 Structure 2:1121-1123)。雙功能抗體可藉由在同一細胞内表現兩條具有結構VHA-VLB及VHB-VLA(VH-VL構型）或VLA-VHB及VLB-VHA(VL-VH構型）之多肽鏈來產生。其中大多數可在細菌中以可溶形式表現。單鏈雙功能抗體（scDb)可藉由用具有約15個胺基酸殘基之連接子將兩條形成雙功能抗體之多肽鏈加以連接來產生（參見Holliger 及 Winter，1997 Cancer Immunol. Immunother·，45(3-4):128-30 ; Wu等人，1996 Immunotechnology，2(1):21-36)。scDb 可在細菌中以可溶活性單體形式表現（參見Holliger及 Winter, 1997 Cancer Immunol. Immunother., 45(34): 128-30 ; Wu 等人，1996 Immunotechnology, 2(1):21-36 ； Pluckthun及 Pack, 1997 Immunotechnology, 3(2): 83-105 ; Ridgway等人，1996 Protein Eng_，9(7):617-21)。可將雙功能抗體與Fc融合以產生「雙-雙功能抗體」（參見Lu等人， 148032.doc •88- 201043638 2004 J. Biol_ Chem·, 279(4):2856-65)。可用於本發明之雙特異性分子中之其它抗體為鼠類、嵌合及人類化單株抗體。本發明之雙特異性分子可藉由使用此項技術中已知之方法將組分結合特異性共軛來製備。舉例而言，雙特異性分子之各結合特異性可獨立地產生且隨後彼此共軛。當結合特異性為蛋白質或肽時，多種偶合劑或交聯劑可用於共價共軛。交聯劑之實例包括蛋白質A、碳化二亞胺、N-琥珀〇醯亞胺基-S-乙醯基-硫代乙酸酯（SATA)、5,5'-二硫代雙（2-硝基苯曱酸）(DTNB)、鄰苯二順丁烯二醯亞胺（oPDM)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基）丙酸酯（SPDP)及4-(N-順丁烯二醯亞胺基曱基)環己烷-1-甲酸磺酸基琥珀醯亞胺酯 (績酸基-SMCC)(參見例如 Karpovsky 等人，1984 J. Exp-Med. 160:1686 ; Liu， MA等人， 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648)。其它方法包括以下文獻中所述者：Paulus， 1985 Behring Ins· Mitt. No. 78,1 18-132 ; Brennan 等人， ◎ 1985 Science 229:81-83 ;及 Glennie 等人，1987 J. Immunol. 139: 2367-2375。共軛劑為SATA及磺酸基-SMCC，其均可自 Pierce Chemical Co.(Rockford, IL)獲得。當結合特異性為抗體時，其可經由兩條重鏈之C端鉸鏈區之酼基鍵結共軛。在一特定實施例中，該鉸鏈區在共扼之前經修飾以含有奇數個酼基殘基，例如1個。或者，兩種結合特異性可在同一載體中編碼且在同一宿主細胞中表現及組裝。在該雙特異性分子為mAbxmAb、 148032.doc -89- 201043638 mAbxFab、FabxF(abi)2或配位體邛吐融合蛋白之情況下此方法尤其it用。纟發明之雙特異#分子可為包含—個單鍵抗體及-個結合決定子的單鏈分子，《包含兩個結合決定子的單鍵雙特異性分子。雙特異性分子可包含至少兩個單鏈为子。製備雙特異性分子之方法描述於例如美國專利第 5,260,203號、美國專利第5,455，㈣號、美國專利第4,881，⑺ 號、美國專利第5，132,405號、美國專利第5,091，513號、美國專利第5,476,786號、美國專利第5,〇13,653號、美國專利第5,258,498號及美國專利第5,482,858號中。雙特異性分子與其特異性目標之結合可藉由例如酶聯免疫吸附劑檢定（ELISA)、放射免疫檢定（REA)、FACS分析、生物檢定（例如生長抑制）或西方墨點檢定（Western Blot assay)來證實。此等檢定中之每一者一般藉由使用對所關注之複合物具有特異性的經標記試劑（例如抗體）來偵測特別受關注之蛋白質_抗體複合物的存在。在另一態樣中’本發明提供多價化合物，其包含本發明抗體之與C3b結合之至少兩個相同或不同抗原結合部分。抗原結合部分可經由蛋白質融合或共價或非共價鍵聯連接在一起。或者’鍵聯之方法已對於雙特異性分子進行描 & °可例如藉由使本發明抗體之抗體與結合於本發明抗體之十亙定區（例如Fc或鉸鏈區）的抗體交聯來獲得四價化合物。二聚化域描述於例如Borean專利EP 1 012 280B1中。五聚化模組描述於例如PCT/EP97/05897中。 148032.doc -90· 201043638 具有延長之半衰期之抗體本發明提供具有延長之活體内半衰期之特異性結合於 C3b蛋白之抗體。許多因素可影響蛋白質之活體内半衰期。例如，腎臟過濾、肝臟中之代謝、蛋白水解酶（蛋白酶）進行之降解及免疫原性反應（例如因抗體導致之蛋白質中和及巨噬細胞及樹突狀細胞進行之吸收）。可使用多種策略來延長本發明 0 杬體之半衰期。例如，藉由化學鍵聯至聚乙二醇（PEG)、 reCODE PEG、抗體骨架、聚唾液酸（pSA)、羥乙基澱粉 (HES)、白蛋白結合配位體及碳水化合物掩蔽物；藉由遺傳融合至結合血清蛋白之蛋白質（諸如白蛋白、igG、

FcRn)，且進行轉移；藉由偶合（經由遺傳或化學方法）至與血清蛋白結合之其它結合部分，諸如奈米抗體、Fab、 DARPin、高親合性多聚體、親和抗體及抗運載蛋白；藉由遺傳融合至rPEG、白蛋白、白蛋白結構域、白蛋白結合 ◎ 蛋白及Fc;或藉由併入奈米載體、緩釋調配物或醫學裝置中。為延長活體内抗體之血清循環，可在有或無多官能連接子的情況下，經由將PEG位點特異性共軛至該等抗體端或C端或經由離胺酸殘基上存在之心胺基將惰性聚合物分子（諸如高分子量PEG)連接至抗體或其片段。為使抗體聚乙二醇化，通常使該抗體或其片段與聚乙二醇（pEG)，諸如PEG之反應性酯或醛衍生物在其中可使一或多個pEG 基團連接至該抗體或抗體片段之條件下反應。聚乙二醇化 14S032.doc .91· 201043638 可經由與反應性PEG分子（或類似之反應性水溶性聚合物）之醯化反應或烷基化反應來進行。如本文中所用，術語「聚乙二醇」意欲涵蓋已用於衍生化其它蛋白質之任何形式之PEG，諸如單（C1_C10)烷氧基聚乙二醇或單（cl_ci〇) 芳氧基聚乙一醇或聚乙二醇_順丁稀二醯亞胺。在某些實施例中，待聚乙二醇化之抗體為去糖基化抗體。將使用產生农小生物活性損失之線性或分支聚合物衍生化。可藉由 SDS-PAGE及質譜分析密切監測共軛程度以確保pEG分子與該等抗體之適當共軛。未反應之PEG可藉由尺寸排阻或藉由離子交換層析與抗體_PEG共軛物分離。可使用熟習此項技術者熟知之方法，例如藉由本文所述之免疫檢定檢驗經PEG衍生化之抗體的結合活性以及活體内功效。用於使蛋白質聚乙二醇化之方法為此項技術中所已知且可應用於本發明之抗體。參見例如Nishimura等人之EP 〇 154 316戋 Ishikawa等人之EP 〇 401 384。其匕改進之聚乙二醇化技術包括重構化學正交引導之工程改造技術（ReCODE PEG)，其將化學上指定之側鏈經由包括tRNA合成酶及tRNA之重構系統併入至生物合成蛋白貝中。5亥技術能在大腸桿菌、酵母及哺乳動物細胞中使超過30個新胺基酸併入至生物合成蛋白質中。tRNA可使非天然胺基酸併入至琥珀密碼子所處之任何位置，將琥珀密碼子自終止密碼子轉變為指示併入化學上指定之胺基酸的密碼子。重組聚乙二醇化技術（rPEG)亦可用於血清半衰期延長。 148032.doc •92- 201043638 該技術涉及以基因融合則·_個胺基酸的非結構化蛋白質尾與現有醫藥蛋白f。由料非結構化蛋白質鏈之表觀分子量為約15倍大於其實際分子量，故該蛋白質之血清半衰期極大增加。與需要化學接合及再純化之傳統聚乙二醇化相比，該製造方法極為簡化且產物均質。聚唾液酸化為另一種技術，其使用天然聚合物聚唾液酸 (PSA)來延長治療性肽及蛋白質之有效壽命且提高穩定性。PSA為唾液酸（一種糖）之聚合物。當用於蛋白質及治療性肽藥㈣遞時，㈣液酸在接合時提供保護性微環境。此增加治療性蛋白質在循環中之有效壽命且防止其被免疫系統識別。PSA聚合物天然可見於人體。其被某些經歷數百萬年進化之細菌採用來塗佈細胞壁。隨後該等天然聚唾液酸化之細菌能藉由分子模擬阻撓身體之防禦系統。天然終極隱匿技術PSA可輕易由該等細菌大量產生且具有預定物理特徵。細菌PSA完全不具免疫原性，即使與蛋白質偶合，因為其在化學上與人體中之PSA相同。另一技術包括使用羥乙基澱粉（「HES」）衍生物連接至抗體。HES為來源於蠟狀玉米澱粉之經修飾之天然聚合物且可由身體内之酶代謝。通常投與HES溶液以取代不足灰液容量且改良血液之流變性質。抗體之羥乙基澱粉化 (heSylation)可增加分子之穩定性以及降低腎臟清除率而延長循環半衰期，從而使生物活性增加。藉由改變不同參數 (諸如HES之分子量），可定製廣泛範圍之HES抗體接合物。 148032.d〇c -93- 201043638 亦可藉由引入一或多個胺基酸修飾（亦即取代、插入或缺失）至IgG恆定域或其FcRn結合片段（較佳Fc或鉸鏈卜域片段）中來產生具有增加之活體内半衰期的抗體。參見例如國際公開案第WO 98/23289號；國際公開案第w〇 97/34631號及美國專利第6,277,3 75號。另外’可使抗體與白蛋白（例如人類血清白蛋白；Hsa) 共軛來使抗體或抗體片段在活體内更穩定或在活體内具有更長半衰期。該等技術為此項技術中所熟知，參見例如國際公開案第冒0 93/15199號、第评0 93/152〇0號及第\^0 01/77137號；及歐洲專利第ep 413,622號。另外，在如上所述之雙特異性抗體之情況下，可設計抗體特異性以使得該抗體之一個結合域結合於C3b而該抗體之第二結合域結合於血清白蛋白（較佳HSA)。增加半衰期之策略尤其適用於奈米抗體、基於纖維結合蛋白之結合劑及其它需要增加活體内半衰期之抗體或蛋白質。抗體共軛物本發明提供特異性結合於C3b蛋白之抗體或其片段與異源蛋白質或多肽（或其片段，較佳至少丨〇、至少2〇、至少 30、至少40、至少50、至少6〇、至少7〇、至少8〇、至少9〇或至少100個胺基酸之多肽）重組融合或化學共辆（包括共價及非共彳貝共輛）以產生融合蛋白。特定言之，本發明提供包含本文中所述之抗體的抗原結合片段（例如Fab片段、Fd 片段、Fv片段、F(ab)2片段、vh域、VH CDR、VL域或 148032.doc -94- 201043638 VL CDR)及異源蛋白質、多肽或肽之融合蛋白。使蛋白質、多肽或肽與抗體或抗體片段融合或共軛之方法為此項技術中所已知。參見例如美國專利第5,336,603號、第 5,622,929 號、第 5,359,046 號、第 5,349,053 號、第 5,447,851號及第5,1 12,946號；歐洲專利第EP 307,434號及第EP 367,166號；國際公開案第WO 96/04388號及第WO 91/06570號；Ashkenazi等人，1991，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 10535-10539 ; Zheng 等人，1995, J. Immunol. o ,.. 154:5590-5600，及 Vil 等人，1992，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:1 1337-11341。其它融合蛋白可經由基因改組、基元改組、外顯子改組及/或密碼子改組（統稱為「DNA改組」）之技術來產生。可使用DNA改組來改變本發明之抗體或其片段之活性（例如具有較高親和力及較低解離速率之抗體或其片段）。一般參見美國專利第5,605,793號、第5,811，238號、第 q 5,830,721號、第 5,834,252號及第 5,837,458號；Patten等人， 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33 ； Harayama, 1998, Trends Biotechnol· 16(2):76-82 ; Hansson等人，1999, J· Mol. Biol. 287:265-76 ;及 Lorenzo 及 Blasco，1998, Biotechniques 24(2):308-3 13(該等專利及公開案之每一者係以全文引用之方式併入本文中）。抗體或其片段或所編碼之抗體或其片段可在重組之前藉由易錯PCR、隨機核苷酸插入或其它方法進行隨機突變誘發來改變。編碼特異性結合於C3b蛋白之抗體或其片段的聚核苷酸可與一或多種 148032.doc -95- 201043638 異源分子之一或多種組分、基元、區段、部分、結構域、片段等重組。此外’抗體或其片段可與標記序列（諸如肽）融合以有利於純化。在較佳實施例中，標記胺基酸序列為六組胺酸肽，諸如 PQE 載體（QIAGEN，Inc.，9259 Eton Avenue， Chatsworth，Calif.，9mi)中提供之標籤，其中許多可購得。舉例而言，如Gentz等人，1989, Pr〇c. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824中所述，六組胺酸可便利於融合蛋白之純化其匕適用於純化之肽標籤包括（但不限於）與來源於流◎ 感血球凝集素蛋白（Wilson等人，1984，Cell 37··767)之抗原決定基對應的血球凝集素（「ΗΑ」）標籤及「flag」標籤。在其它實施例中，本發明之抗體或其片段與診斷劑或可偵測劑共軛。發作、發展、該等抗體可適用於監測或預測疾病或病症

(aequorin);放射性物質， .*·、々、木s右（luminol);生物於）螢光素酶、螢光素及水母素諸如（但不限於）碘（1311、1251、 148032.doc -96· 201043638 1231 及 1211) ' 碳（14C)、硫（35S)、氚（3H)、銦（1151η、 1131η、1121η及 1111η)、鍀（99Tc)、鉈（201Ti)、鎵（68Ga、 67Ga)、鈀（103Pd)、鉬（99Mo)、氙（133Xe)、氟（18F)、 153Sm 、 177Lu 、 159Gd 、 149Pm 、 140La 、 175Yb 、 166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、 97RU、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、 169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn及 117Tin ;及使用各種正電子發射斷層攝影法之正電子發射金屬，及非放射性順磁金屬離子。本發明進一步涵蓋與治療性部分共軛之抗體或其片段之用途。抗體或其片段可與治療性部分共軛，諸如細胞毒素 (例如，細胞生長抑制劑或殺細胞劑）、治療劑或放射性金屬離子（例如，α-發射體細胞毒素或細胞毒性劑包括對細胞有害之任何藥劑。另外，抗體或其片段可與改變指定生物反應之治療性部刀或藥物口Ρ刀共軛。治療性部分或藥物部分不應理解為侷限於傳統化學治療劑。舉例而言，藥物部分可為具有所要

生物活性之蛋白質、肽或多肽。該等蛋白質可包括例如毒 t諸如相心子驗、萬麻毒素A、#腹桿菌外毒素、霍亂毒素或白喉毒素；蛋白質，諸如腫瘤壞死因子、α·干擾素β干擾素、神經生長因子、企小板衍生生長因子、组織纖維蛋白溶酶原活化因子、細胞调亡劑、抗血管生成劑’或生物反應調節劑’諸如淋巴介質。卜抗體可與治療性部分共軛，諸如放射性金屬離 148〇32.doc -97- 201043638 子，諸如α-發射體，諸如213Bi，或與適用於使放射性金屬離子（包括（但不限於）131In、131LU、131Y、131Ho、 13 1 Sm)與多肽共軛之大環螯合劑共軛。在某些實施例中，該大環螯合劑為1,4,7,10-四氮環十二烷-N，N',NM，Nm-四乙酸（DOTA)，其可經由連接子分子連接至抗體。該等連接子分子通常為此項技術中所已知且描述於Denardo等人， 1998, Clin Cancer Res. 4(10):2483-90 ; Peterson 等人， 1999，Bioconjug. Chem. 10(4):553-7 及 Zimmerman 等人， 1999，Nucl_ Med_ Biol. 26(8):943-50 中，該等文獻每一者係以全文引用的方式併入。使治療性部分與抗體共軛之技術為熟知的，參見例如 Arnon等人，「Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy」，Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy，Reisfeld 等人（編），第 243-56 頁（Alan R. Liss，Inc. 1985) ; Hellstrom等人，「Antibodies For Drug Delivery」，Controlled Drug Delivery(第 2版），Robinson 等人（編），第 623-53 頁（Marcel Dekker, Inc. 1987) ; Thorpe，「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review」，Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera 等人（編），第 475-506 頁（1985) ; 「Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy」，Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin等人（編），第 303- 148032.doc -98- 201043638 16頁（Academic press 1985);及Thorpe等人，1982, Immunol· Rev. 62:1 19-58。抗體亦可連接至特別適用於免疫檢定或純化目標抗原之固體支撐物。該等固體支撐物包括（但不限於）玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、耐綸（nyl〇n)、聚苯乙烯、聚氣乙烯或聚丙烯。產生本發明抗體之方法編碼抗體之核酸本發明提供經實質上純化之核酸分子，其編碼包含上述 C3b結合抗體鏈之區段或結構域的多肽。本發明之一些核酸包含編碼 SEQ ID NO: 7、21、35、49、63、77、91、 105、119、133、147、161、175及189中所示之重鏈可變區的核苷酸序列，及/或編碼SEq m NO: 8、22、36、 50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 中所示之輕鏈可變區的核苷酸序列。在一特定實施例中，該等核酸分子為表1中所標識者。本發明之一些其它核酸分子包含與表1中標識之彼等核酸分子之核苷酸序列實質上一致 (例如至少65%、80%、95%或99%)之核苷酸序列。當自合適表現載體表現時’由該等聚核苷酸編碼之多肽能夠顯示 C 3 b抗原結合能力。本發明亦提供編碼上述C3b結合抗體之重鏈或輕鏈的至少一個CDR區及通常所有3個CDR區之聚核苷酸。一些其它聚核苷酸編碼上述C3b結合抗體之重鏈及/或輕鏈的所有或實質上所有可變區序列。由於存在密碼子簡併性，故每 148032.doc -99- 201043638 一免疫球蛋白胺基酸序列將有多種核酸序列編碼。本發明之核酸分子可編碼抗體之可變區及互定區。本# 明之一些核酸序列包含編碼與SEQ ID NO: 9、23、37、 51、65、79、93、107、121、135、149、163、177及 191 中闡明之成熟重鏈序列實質上一致（例如至少8〇%、9〇%或 99%)之成熟重鏈序列的核苷酸。一些其它核酸序列包含編碼與 SEQ ID NO: 10、24、38、52、66、80、94、1〇8、 122、136、150、164、178及192中闡明之成熟輕鏈序列實質上一致（例如至少80%、90%或99%)之成熟輕鏈序列的核苷酸。聚核苷酸序列可藉由固相DNA合成從頭產生或藉由對編碼C3b結合抗體或其結合片段之現有序列（例如如下文實例中所述之序列）進行PCR突變誘發產生。核酸之直接化學合成可藉由此項技術中已知之方法達成，諸如Narang等人， 1979，Meth. Enzymol. 68:90之填酸三醋法；Brown等人， Meth. Enzymol. 68:109, 1979之填酸二酿法；Beaucage 等

人，Tetra· Lett.，22:1859, 1981之二乙基胺基磷酸酯法；及美國專利第4,458,066號之固相支撐物法。可如以下文獻中所述藉由PCR將突變引入聚核苷酸序列中，例如：PCR Technology: Principles and Applications for DNA

Amplification, H.A. Erlich(編），Freeman Press, NY, NY， 1992 ； PCR Protocols: A Guide to Methods and

Applications, Innis 等人（編），Academic Press, San Diego, CA, 1990 ; Mattila等人，Nucleic Acids Res. 19:967，1991 ; 148032.doc -100- 201043638 及 Eckert 等人，PCR Methods and Applications 1:17，1991 〇本發明亦提供用於產生上述C3b結合抗體的表現載體及宿主細胞。可採用多種表現載體來表現編碼C3b結合抗體鏈或結合片段之聚核苷酸。可使用基於病毒之表現載體及非病毒表現載體來在哺乳動物宿主細胞中產生抗體。非病毒載體及系統包括質體、游離型載體（通常具有用於表現蛋白質或RNA之表現卡匣）及人類人造染色體（參見例如 Harrington等人，Nat Genet 15:345, 1997)。舉例而言，適用於在哺乳動物（例如人類）細胞中表現C3b結合聚核苷酸及多肽之非病毒載體包括pThioHis A、pThioHis B及 pThioHis C、pcDNA3.1/His、pEBVHis A、pEBVHis B及 pEBVHis C(Invitrogen，San Diego, CA)、MPSV載體及此項技術中已知用於表現其它蛋白質的許多其它載體。適用病毒載體包括基於反轉錄病毒、腺病毒、腺袓關病毒、癌療病毒之載體；基於SV40、乳頭狀瘤病毒、HBP EB病毒 (HBP Epstein Barr virus)之載體；痘瘡病毒載體及勝利基森林病毒（Semliki Forest virus，SFV)。參見 Brent 等人，前述；Smith，Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995 ;及 Rosenfeld等人，Cell 68:143, 1992。表現載體之選擇視載體欲表現於其中之預定宿主細胞而定。表現載體通常含有可操作地連接至編碼C3b結合抗體鏈或片段之聚核苷酸的啟動子及其它調控序列（例如強化子）。在一些實施例中，採用誘導性啟動子來防止插入序列在除誘導條件以外的條件下表現。誘導性啟動子包括例 148032.doc -101 - 201043638 如阿拉伯糖、lacZ、金屬硫蛋白（metaii〇thi〇nein)啟動子或熱休克啟動子。經轉型生物體之培養物可在不偏向編碼序列（伯主細胞可更好地财受其表現產物）之群體的情況下在非誘導條件下擴增。除啟動子外，亦可能要求或需要其它調控元件以供有效表現C3b結合抗體鏈或片段。該等元件通#包括ATG起始密碼子及鄰近核糖體結合位點或其它序列。另外’表現效率可藉由在使用中納入適合於細胞系統之強化子來增強（參見例如Scharf等人，Results Pr〇bl ceii

Differ. 20:125，1994 ;及 Bittner 等人，Meth. Enzymol., 153:516，1987)。舉例而言，可使用SV40強化子或CMV強化子來增加哺乳動物宿主細胞中之表現。表現載體亦可提供分泌信號序列位置以形成與由插入之 C3b結合抗體序列所編碼之多肽的融合蛋白。更通常而 σ ’插入之C3b結合抗體序列可在納入載體中之前連接至信號序列。欲用於接受編碼C3b結合抗體輕鏈及重鏈可變域之序列的載體有時亦編碼恆定區或其部分。該等載體使可變區表現為與恆定區之融合蛋白，藉此導致產生完整抗體或其片段。該等恆定區通常為人類恆定區。容納及表現C3b結合抗體鏈之宿主細胞可為原核細胞或真核細胞。大腸桿菌為一種適用於選殖及表現本發明之聚核普酸的原核宿主。其它適用微生物宿主包括桿菌 (bacilli) ’諸如枯草桿菌（Baciiius subtiHs);及其它腸内菌科（enterobacteriaceae)，諸如沙門氏菌（salmonella)、沙雷氏菌（Serratia);及多種假單胞菌（Pseud〇m〇nas)物種。在該 148032.doc •102· 201043638 等原核但主中’亦可製造通常含有與宿主細胞相容之表現控制序歹j (例如複製起點）的表現載體。此外，將存在許多各種熟知啟動子，諸如乳糖啟動子系統、色胺酸……啟動子系統、β-内釀胺酶啟動子系統或來自噬菌體1之啟動子系統。该等啟動子通常視情況與操縱序列一起控制表現，且具有用於啟始及完成轉錄及轉譯之核糖體結合位點序列及其類似序列。亦可使用其它微生物（諸如酵母）來表現本發明之C3b結合多肽。亦可使用與桿狀病毒載體組合之見蟲細胞。在一些較佳實施例中，使用哺乳動物宿主細胞來表現及產生本發明之C3b結合多肽。舉例而言，其可為表現内源免疫球蛋白基因之融合瘤細胞株（例如如下文實例中所述之1D6.C9骨髓瘤融合瘤純系）或容納外源表現載體之哺乳動物細胞株（例如下文例示之SP2/〇骨髓瘤細胞）。該等細胞包括任何正常死亡或正常或異常不死動物或人類細胞。舉例而言，已開發出多種能夠分泌完整免疫球蛋白之合適宿主細胞株，其包括CH〇細胞株、各種c〇s細胞株、海拉 (HeLa)細胞、骨髓瘤細胞株、經轉型b細胞及融合瘤。使用哺乳動物組織細胞培養物來表現多肽一般性論述於例如 Winnacker, FROM GENES TO CLONES, VCH Publishers, N.Y” Ν·Υ·，1987中。用於哺乳動物宿主細胞之表現載體可包括諸如複製起點、啟動子及強化子之表現控制序列（參見例如 Queen等人，lmmun〇i. Rev_ 89:49-68，1986)及必需加工資訊位點，諸如核糖體結合位點、rna拼接位點、聚 148032.doc •103- 201043638 腺苦酸化位點及轉錄終止子序列。該等表現載體通常含有來源於哺乳動物基因或哺乳動物病毒之啟動子。合適啟動子可為組成性啟動子、細胞型特異性啟動子、階段特異性啟動子及/或可調節或可調控啟動子。適用啟動子包括(但不限於）此項技術中已知之金屬硫蛋白啟動子、組成性腺病毒主要晚期啟動子、地塞米松（dexamethas〇ne)誘導性 MMTV啟動子、S V40啟動子、MRp ρ〇1ΙΠ啟動子、組成性 MPSV啟動子、四環素誘導性CMV啟動子（諸如人類極早期 CMV啟動子）、組成性CMV啟動子及啟動子_強化子組合。❹ 引入含有所關注聚核苷酸序列之表現載體的方法視細胞佰主之類型而變化。舉例而言，對於原核細胞通常使用氯化鈣轉染，而對於其它細胞宿主可使用磷酸鈣處理或電穿孔。（通常參見Sambrook等人，前述）。其它方法包括例如電穿孔 ' 處理、脂f體介導之轉型、注射及顯微注射、生物彈衝擊法（ballistic method)、病毒顆粒、免疫脂質體t陽離子.核酸共|厄物、裸DNA、人造病毒粒子、與疱疹病毒結構蛋白VP22融合（EUi〇t及〇，Hare, Cell ϋ 88:223，1997)、DNA之藥劑增強吸收及離體轉導。對於長期问產罝產生重組蛋白而言，通常需要穩定表現。舉例而 3 ’穩定表現C3b結合抗體鏈或結合片段之細胞株可使用本發明含有病毒複製起點或内源表現元件及可選擇標記基因之表現載體來製備。繼引入載體之後，可使細胞於富營養培養基中生長1 ·2天，隨後將其轉至選擇性培養基。可選擇標記之目的為賦予針對選擇之抗性且其存在允許成功 148032.doc 201043638 表現所引入序列的細胞在選擇性培養基中生長。穩定轉$ 之抗性細胞可使用適合於該細胞類型之組織培養技術增殖。本發明之單株抗體的產生單株抗體（mAb)可經由多種技術來製備，包括習知單株抗體方法，例如Kohler 及 Milstein，1975 Nature 256. 495 之標準體細胞雜交技術。可使用多種技術製備單株抗體，例如B淋巴細胞之病毒或致癌基因轉型。用於製備融合瘤之動物系統為鼠類系統。在小鼠體内產生融合瘤為充分確立之程序。分離經免疫脾細胞以供融合之免疫方案及技術在此項技術中已知。融合搭配物（例如鼠類骨髓瘤細胞）及融合程序亦已知。本發明之嵌合抗體或人類化抗體可基於如上所述製備之乳類單株抗體的序列來製備。編碼重鍵及輕鍵免疫球蛋白之DNA可使用標準分子生物學技術自所關注之鼠類融合瘤獲知且可經工程改造以含有非鼠類（例如人類）免疫球蛋白序列。舉例而言，為產生嵌合抗體，可使用此項技術中已知的方法來將鼠類可變區連接至人類恆定區（參見例如 Cabilly等人之美國專利第4,816,567號）。為產生人類化抗體，可使用此項技術中已知之方法將鼠類CDR區插入人類構架中。參見例如Winter之美-專利第5225539號及Queen 等人之美國專利第5530101號、第5585〇89號、第5693762 號及第6180370號。在某一實施例中，本發明之抗體為人類單株抗體。該等 148032.doc -105 - 201043638 針對C3b之人類單株抗體可使用帶有部分人類免疫系統而非小鼠系統的轉殖基因或轉染色體小鼠來產生。此等轉殖基因及轉染色體小鼠包括在本文中分別稱為HuMAb小鼠及 KM小鼠之小鼠，且在本文中統稱為「人類Ig小鼠」。

HuMAb小鼠®(Medarex，Inc.)含有編碼未重排人類重鏈（μ 及γ)及κ輕鏈免疫球蛋白序列之人類免疫球蛋白基因微型基因座以及使内源μ及κ鏈基因座失活之靶向突變（參見例如 Lonberg等人，1994 Nature 368(6474): 856-859)。因此，小鼠顯示小鼠IgM或κ表現減少，且對免疫反應時，引入之人類重鏈及輕鏈轉殖基因經歷類別轉換及體細胞突變從而產生高親和力人類IgGK單株抗體（Lonberg, N.等人，1994, 前述；回顧於Lonberg, N·, 1994 Handbook of Experimental

Pharmacology 113:49-101 ; Lonberg，N.及 Huszar, D.，1995

Intern. Rev. Immunol. 1 3 : 65-93 ;及 Harding, F.及 Lonberg, N·，1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 764:536-546中）。下列文獻中進一步描述HuMAb小鼠之製備及用途及此等小鼠所帶之基因組修飾：Taylor, L等人，1992 Nucleic Acids Research 20:6287-6295 ; Chen, J.等人，1993 International Immunology

5: 647-656 ; Tuaillon等人，1993 Proc. Natl· Acad. Sci· USA 94:3720-3724 ; Choi 等人，1993 NatureGenetics4:117- 123 ; Chen, J.等人，1993 EMBO J. 12: 821-830 ; Tuaillon * 等人，1994 J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L.等人， 1994 International Immunology 579-591 ;及 Fishwild, D.等人，1996 Nature Biotechnology 14: 845-85 1，該等文獻之 148032.doc -106- 201043638 全部内容均以全文引用的方式明確併入本文中。另外參見

Lonberg及Kay之美國專利第5,545,806號、第5,569,825號、第 5,625，126 號、第 5,633,425 號、第 5,789,650 號、第 5,877,397 號、第 5,661，016 號、第 5,814,318 號、第 5,874,299號及第5,770,429號；Surani等人之美國專利第 5,545,807號；Lonberg及 Kay 之 PCT公開案第 WO 92103918 號、第 WO 93/12227 號、第 WO 94/25585 號、第 WO 97113852號、第 WO 98/24884號及第 WO 99/45962號；及；^〇1'111311等人之？(：1'公開案第\^0 01/14424號。在另一實施例中’本發明之人類抗體可使用在轉殖基因及轉染色體上帶有人類免疫球蛋白序列之小鼠，諸如帶有人類重鏈轉殖基因及人類輕鏈轉染色體之小鼠來培育。該等小鼠（在本文中稱為「KM小鼠」）詳細描述於ishida等人之PCT公開案WO 02/43478中。另外’表現人類免疫球蛋白基因之替代性轉殖基因動物系統在此項技術中可獲得且可用以產生本發明之C3b結合抗體。舉例而言，可使用稱為Xenomouse(Abgenix，Inc.)之替代性轉殖基因系統。該等小鼠描述於例如Kucherlapati 等人之美國專利第5,939,598號、第6,075，181號、第 6，114,598號、第6，150,584號及第 6,162,963號中。此外，表現人類免疫球蛋白基因之替代性轉染色體動物系統在此項技術中可獲得且可用以產生本發明之C3b結合抗體。舉例而言，可使用稱為「TC小鼠」之帶有人類重鏈轉染色體與人類輕鏈轉染色體之小鼠；該等小鼠描述於 148032.doc -107· 201043638

Tomizuka等人，2000 Proc. Natl. Acad· Sci. USA 97:722- 727中。此外，帶有人類重鏈及輕鏈轉染色體之牛已於此項技術中描述（Kuroiwa 專人，2002 Nature Biotechnology 20:889-894)且可用於產生本發明之C3b結合抗體。亦可使用用於篩檢人類免疫球蛋白基因文庫之噬菌體呈現方法來製備本發明之人類單株抗體。該等用於分離人類抗體之D筮菌體呈現方法在此項技術中已確立或描述於下文實例中。參見例如：Ladner等人之美國專利第5,223,409 號、第5,403,484號及第5,571，698號；Dower等人之美國專利第5,427,908號及第5,580,717號；McCafferty等人之美國專利第5,969，108號及第6，172，197號；及Griffiths等人之美國專利第 5,885,793 號、第 6,521，404號、第 6,544,731 號、第 6,555,3 13號、第 6,582,915號及第 6,593,081 號。本發明之人類單株抗體亦可使用其中已重構有人類免疫細胞以使得可在免疫後產生人類抗體反應之SCID小鼠來製備。s亥等小鼠描述於例如Wilson等人之美國專利第 5,476,996號及第 5,698,767號中。構架或Fc工程改造本發明之經工程改造抗體包括其中已對VH及/或VL内之構架殘基進行修飾（例如，以改良抗體特性）之彼等抗體。通常進行該等構架修飾以降低該抗體之免疫原性。舉例而言，一種方法為使一或多個構架殘基「回復突變 (backmutate)」成相應生殖系序列。更特定言之，已經歷體細胞突變之抗體可含有與該抗體所來源之生殖系序列不 148032.doc 201043638 同的構架殘基。該等殘基可藉由將該等抗體構架序列與該抗體所來源之生殖系序列相比較來鑑別。為使該等構架區序列回復為其生殖系構型，可藉由例如定點突變誘發來使體細胞突冑「回復突變」纽殖系序列。㈣經「回復突變」之抗體亦意欲為本發明所涵蓋。另一種類型之構架修飾涉及使該構架區内或甚至一或多個CDR區内之一或多個殘基突變以移除τ細胞抗原決= Ο

基，以由此降低該抗體之潛在免疫原性。此方法亦稱為「去免疫」，且進一步詳細描述於Carr等人之美國專利公開案苐20030153043號中。附加於或替代構架區或CDR區内所作之修飾，本發明之抗體亦可經工程改造以在以區内納入修飾’通常以改變該抗體之一或多種功能特性，諸如血清半衰期、補體結合、 Fc受體結合及/或抗原依賴性細胞毒性。此外，本發明之抗體可經化學修飾（例如，可將一或多個化學部分連接至抗體）或經修飾以改變其糖基化，再改變該抗體之一或多種功能特性。下文進一步詳細描述此等實施例中之每一者。Fc區中之殘基的編號為Kabat之EU索引之編號。在—實施例中，對CH1之鉸鏈區進行修飾以使得該鉸鏈區中半胱胺酸殘基之數目被改變，例如增加或減少。此方法進一步描述於Bodmer等人之美國專利第5,677,425號中。CH1之鉸鏈區中半胱胺酸殘基之數目經改變以例如有利於輕鏈及重鏈之組裝或增強或降低該抗體之穩定性。在另一實施例中，抗體之!^鉸鏈區經突變以縮短該抗體 148031doc 201043638 之生物半哀期。更特之’將一或多個胺基酸突變引入 Fc鉸鏈片段之CH2-CH3域界面區中以使得該抗體之葡萄球菌蛋白質A(SpA)結合相對於原生Fc鉸鏈域SpA結合削弱。此方法進一步詳細描述於Ward等人之美國專利第 6，165,745號中。在另一實施例中，該抗體經修飾以增加其生物半衰期。多種方法可行。舉例而言，如Ward等人之美國專利第 6,277,375號中所述，可引入下列突變中之一或多種： T252L、T254S、T256F。或者，為增加生物半衰期，如 Presta等人之美國專利第5,869,〇46號及第號中所述，可使抗體在CH1或CL區内發生改變以含有結合取自 IgG Fc區之CH2域之兩個環的抗原決定基之救助受體。在其它實施例中’ Fc區藉由以不同胺基酸殘基置換至少一個胺基酸殘基來改變以改變該抗體之效應功能。舉例而言’一或多個胺基酸可經不同胺基酸殘基置換以使得該抗體對效應配位體之親和力改變但保留親本抗體之抗原結合能力。對其之親和力改變之效應配位體可為例如Fc受體或補體之C1組分。此方法進一步詳細描述於界丨加“等人之美國專利第5,624,821號及第5,648,260號中。在另一實施例中，可以不同胺基酸殘基置換選自胺基酸殘基之一或多個胺基酸以使得抗體具有改變之Clq結合及/ 或減弱或消除補體依賴性細胞毒性（CDC)。此方法進一步詳細描述於Idusogie等人之美國專利第6，194,551號中。在另一實施例中，改變一或多個胺基酸殘基以藉此改變 148032.doc -110- 201043638 該抗體結合補體之能力。此方法進一步詳細描述於B〇dmer 等人之PCT公開案WO 94/29351中。在另一實施例中，修飾Fc區以增強抗體介導抗體依賴性細胞毒性（ADCC)之能力及/或藉由修飾一或多個胺基酸來增強抗體對Fey受體之親和力。此方法進一步描述於Presta 之PCT公開案WO 00/42072中。此外，已對人類1§(31上 FcyRI、FcyRII、FcyRIII及FcRn之結合位點進行定位並已描述具有改良結合之變異體（參見Shields, R.L.等人，2001 J. Biol. Chen. 276:6591-6604)。在另一實施例中’抗體之糖基化經修飾。舉例而言，可製備去糖基化抗體（亦即’缺乏糖基化之抗體）。可改變糖基化以例如增強該抗體對「抗原」之親和力。可藉由例如改變抗體序列内之一或多個糖基化位點來達成該等碳水化合物修飾。舉例而言，可進行一或多個胺基酸取代，致使消除一或多個可變區構架糖基化位點以由此消除彼位點處之糖基化。該去糖基化可增強抗體對抗原之親和力。此方法進一步詳細描述於Co等人之美國專利第5,714,35〇號及第 6,350,861號中。或者或另外’可製備糖基化類型已改變之抗體，諸如岩藻糖基殘基量減少之低岩藻糖基化抗體或對分G1 c N a c結構增加之抗體。已證明該等改變之糖基化模式將增強抗體之 ADCC能力。該等碳水化合物修飾可藉由例如於糖基化機構已改變之宿主細胞中表現抗體來達成。糖基化機構已改變之細胞已描述於此項技術中且可用作表現本發明重組抗 148032.doc -111 - 201043638 體以產生糖基化改變之抗體的宿主細胞。舉例而言，Hang 等人之EP 1,176,195描述FUT8基因（其編碼岩藻糖基轉移酶）之功能遭破壞的細胞株，致使在該細胞株中表現之抗體顯示低岩藻糖基化。Presta之PCT公開案WO 03/035835 描述使岩藻糖連接至Asn(297)-連接型碳水化合物之能力降低的變異型CHO細胞株、Lecl3細胞，亦使得在彼宿主細胞中表現之抗體顯示低岩藻糖基化（亦參見Shields，R.L.等人，2002 J· Biol. Chem. 277:26733-26740)。Umana等人之 PCT公開案WO 99/54342描述經工程改造以表現修飾醣蛋白之糖基轉移酶（例如β(1，4)-Ν乙醯基葡糖胺轉移酶 III(GnTIII))的細胞株，使得在該工程改造細胞株内表現之抗體顯示對分GlcNac結構增加，此導致該等抗體之ADCC 活性增強（亦參見 Umana 等人，1999 Nat. Biotech. 17:176-180)。對改變之抗體進行工程改造之方法如上文所論述’具有本文所示之乂^及VL序列或全長重鏈及輕鏈序列之C3b結合抗體可用於藉由修飾全長重鏈及/ 或輕鏈序列、VH及/或VL序列或其所連接之怪定區來產生新型C3b結合抗體。因此，在本發明之另一態樣中’使用本發明C3b結合抗體的結構特徵產生結構上相關之c3b結合抗體，其保留本發明抗體之至少一種功能特性’諸如結合於人類C3b且亦抑制C3b之一或多種功能特性（例如在溶血檢定中抑制紅企球溶解）。舉例而言’可將本發明抗體之一或多個CDR區或其突變 148032.doc -112- 201043638 與已知構架區及/或其它CDR重組組合以產生如以上文所論述之本發明之其它經重組工程改造之C3b結合抗體。其它類型之修飾包括先前部分中所述之修飾。工程改造方法之起始物質為本文中提供之VH及/或VL序列中之一或多者’或其一或多個CDRg ◊為產生工程改造抗體，並非必需實際製備（亦即表現為蛋白質）具有本文中所提供之VH及/ 或VL序列中之一或多者，或其一或多個。⑽區的抗體。而疋’使用該等序列中所含之資訊作為起始物質來產生來源於原始序列之「第二代」序列，且隨後製備「第二代」序列且表現為蛋白質。因此’在另一實施例中，本發明提供一種製備由以下組成之C3b結合抗體的方法：具有選自由SEQ ID NO: 1、 15、 29、43、57、71、85、99、113、127、141、155、 169及183組成之群之CDR1序列，選自由SEQ ID NO: 2、 16、 30、44、58、72、86、100、114、128、142、156、 170及184組成之群之CDR2序列，及/或選自由SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、73、87、101、115、129、143、 157、171及185組成之群之CDR3序列的重鏈可變區抗體序列；及具有選自由 SEQ ID NO: 4、18、32、46、60、74、 88、102、116、130、144、158、172 及 186 組成之群之 CDR1序列’選自由 SEQ ID NO: 5、19、33、47、61、 75、89、103、117、131、145、159、173及 187組成之群之 CDR2序列，及 /或選自由 SEQ ID NO: 6、20、34、48、 62、76、90、104、118、132、146、160、174及 188組成 148032.doc • 113 - 201043638 之群之CDR3序列的輕鏈可變區抗體序列；改變重鏈可變區抗體序列及/或輕鏈可變區抗體序列内之至少一個胺基酸殘基以產生至少一種改變之抗體序列；且使該改變之抗體序列表現為蛋白質。因此，在另一實施例中，本發明提供一種製備經最佳化以供於哺乳動物細胞中表現之C3b結合抗體之方法，該 C3b結合抗體由以下組成：具有選自SEQ ID NO: 9、23、 37 、 51 、 65 、 79 、 93 、 107 、 121 、 135 、 149 、 163 、 177及 191之群之序列的全長重鏈抗體序列；及具有選自SEq id NO·· 10、24、38、52、66、80、94、108 ' 122、136、 150、164、178及192之群之序列的全長輕鏈抗體序列；改變王長重鏈抗體序列及/或全長輕鏈抗體序列内之至少一個胺基酸殘基以產生至少一種改變之抗體序列；且使該改變之抗體序列表現為蛋白質。亦可藉由筛檢具有固定CDR3序列或如US2005〇255552中所述之最小基本結合決定子且CDR1及CDR2序列具有多樣性之抗體文庫來製備改變之抗體序列。篩檢可根據適合於自抗體文庫篩檢抗體之任何篩檢技術（諸如噬菌體呈現技術）來執行。可使用標準分子生物學技術來製備及表現改變之抗體序列由改變之抗體序列編碼之抗體為保留本文所述之c3b 釔cr抗體之一種、一些或所有功能特性的匸孙結合抗體，該等功此特性包括（但不限於）特異性結合於人類及/或铜猴 C3b;及該抗體在溶血檢定中抑制紅血球溶解。 148032.doc 201043638 改變之抗體之功能特性可使用此項技術中可用及/或本文中所述之標準檢定，諸如實例中所述之標準檢定（例如 ELISA)來評估。在工程改造本發明抗體之方法的某些實施例中，可沿整個或一部分C3b結合抗體編碼序列隨機或選擇性引入突變，且可對所得經修飾C3b結合抗體就如本文中所述之結合活性及/或其它功能特性進行篩檢。突變方法已描述於此項技術中。例如，Short之PCT公開案WO 02/092780描述〇使用飽和突變誘發、合成連接組裝或其組合產生及篩檢抗體突變之方法。或者，Lazar等人之PCT公開案WO 03/074679描述使用計算篩檢方法來最佳化抗體之生理化學特性的方法。本發明之抗體的表徵本發明之抗體可利用各種功能檢定來表徵。舉例而言，其可利用其在溶血檢定中抑制紅血球溶解之能力、其對 ^ C3b蛋白（例如人類及/或獼猴C3b)之親和力、其抑制C3a或〇 C5a產生之能力、其抑制C3b沈積之能力、抗原決定基分級 (binning)、其對蛋白水解之抗性及其阻斷補體級聯之能力，例如其抑制MAC形成之能力來進行表徵。各種方法可用於測量補體路徑分子之存在及補體系統之活化（參見例如美國專利第 6,087，120號；及Newell等人，J Lab Clin Med，100:437-44，1982)。舉例而言，可藉由⑴測量對紅血球之補體介導溶解（溶血）之抑制；（ii)測量抑制C3 或C5裂解之能力；及（iii)對替代路徑介導之溶血之抑制來 148032.doc -115- 201043638 監測補體活性。兩種最常用技術為溶血檢定（參見例如’ Baatrup等人， Ann Rheum Dis，51:8 92-7，1992)及免疫學檢定（參見例如， Auda等人，Rheumatol Int，10:185-9，1990)。溶血技術測量整個序列（經典或替代路徑）之功能性能力。免疫學技術測量特定補體組分或分裂產物之蛋白質濃度。在本發明之方法中可用以偵測補體活化或測量補體組分活性之其它檢定包括例如T細胞增殖檢定（Chain等人，J Immunol Methods， 99:221-8，1987)及遲發型過敏症（DTH)檢定（Forstrom等人， 1983，Nature 303:627-629 ; Halliday等人，1982, Assessment of Immune Status by the Leukocyte Adherence Inhibition Test, Academic, New York 第 1-26 頁；Koppi 等人，1982, Cell. Immunol. 66:394-406 ;及美國專利第 5,843,449號）。在溶血技術中，所有補體組分必須存在且具有功能。因此，溶血技術可篩檢補體系統之功能完整性及缺乏（參見例如 Dijk等人，J Immunol Methods 36: 29-39, 1980 ; Minh 等人，Clin Lab Haematol. 5:23-34 1983 ;及 Tanaka 等人，J Immunol 86: 161-170, 1986)。為測量經典路徑之功能性能力，將塗有溶企素（hemolysin)(針對练羊紅血球之兔IgG)之綿羊紅血球或以兔抗雞抗體致敏之雞紅血球用作目標細胞 (致敏細胞）。該等Ag-Ab複合物活化經典路徑且當組分具功能性且以足夠濃度存在時，致使目標細胞溶解。為測定替代路徑之功能性能力，使用兔紅血球作為目標細胞（參見例如，美國專利第6,087，120號）。 148032.doc -116- 201043638 為檢驗抗體抑制MAC(膜攻擊複合物）形成之能力，可進行MAC沈積檢定。簡言之，可使用酵母聚糖來活化替代路徑且可使用IgM來活化經典路徑。Fab以人類血清預培育且添加至塗有酵母聚糖或IgM之板中。可計算各樣品相對於基線（EDTA處理之人類血清）及陽性對照（人類血清）對MAC 沈積之抑制百分比。為檢驗本發明之抗體在替代路徑中抑制補體蛋白C 3之能力，測量沈積於酵母聚糖上之C3分解產物C3b的產生。測量C3b沈積之特定方法詳細描述於下文實例中。抗體抑制C 5分解產物C 5 a之產生的能力可藉由例如 ELISA檢定使用特異性抗C5a抗體（諸如可自US Biologies獲得之小鼠抗人類C5a-消-Arg抗體）來測量。抗體結合於C3b之能力可藉由直接標記所關注之抗體來偵測，或抗體可未經標記且使用此項技術中已知之各種夾心檢定格式來間接偵測結合。在一些實施例中，本發明之C3b結合抗體阻斷或競爭參考C3b結合抗體與C3b多肽之結合。該等抗體可為如上所述之完全人類C3b結合抗體。其亦可為與參考抗體結合於相同抗原決定基的其它小鼠、嵌合或人類化C3b結合抗體。阻斷或競爭參考抗體結合之能力表明所測試C3b結合抗體結合於相同或相似的由參考抗體定義之抗原決定基，或結合於與參考C3b結合抗體所結合之抗原決定基足夠接近的抗原決定基。該等抗體尤其可能共有對於參考抗體鑑別出之有利特性。阻斷或競爭參考抗體之能力可利用例如 148032.doc -117- 201043638 競爭結合檢定來測定。在競爭結合檢定下，檢驗所測試抗體抑制參考抗體與共同抗原（諸如C3b多肽）特異性結合的能力。若過量測試抗體實質上抑制參考抗體之結合，則測試抗體競爭參考抗體與抗原之特異性結合。實質上抑制意謂測試抗體通常使參考抗體之特異性結合減少至少10%、 25%、50%、75%或 90%。存在許多已知競爭結合檢定可用於評估C3b結合抗體與參考C3b結合抗體對結合於C3b蛋白之競爭。該等檢定包括例如固相直接或間接放射免疫檢定（RIA)、固相直接或間接酶免疫檢定（EIA)、夾心競爭檢定（參見Stahli等人， Methods in Enzymology 9:242-253，1983);固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(參見Kirkland等人，J. Immunol. 137:3614-3619，1986);固相直接標記檢定、固相直接標記夾心檢定（參見Harlow & Lane，前述）；使用I-1 25標記之固相直接標記RIA(參見Morel等人，Molec. Immunol. 25:7-15，1988);固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人，Virology 176:546-552, 1990);及直接標記 RIA(Moldenhauer 等人，Scand. J· Immunol. 32:77-82, 1990)。該檢定通常涉及使用經純化之抗原結合於攜帶該等未經標記測試C3b結合抗體及經標記參考抗體之任一者的固體表面或細胞。競爭性抑制藉由測定在測試抗體存在下結合於固體表面或細胞之標記的量來測量。測試抗體通常以過量存在。藉由競爭檢定鑑別出之抗體（競爭抗體）包括與參考抗體結合於相同抗原決定基的抗體及結合於與參 148032.doc •118- 201043638 鄰近抗原決定基而考抗體所結合之抗原決定基足夠接近的導致發生位阻之抗體。

為測定所選C3b結合單株抗體是否結合於獨特抗原決定基，可使用市售試劑（例如來自pierce，R〇ckf〇rd，比之試劑）對各抗體進行生物素標記。可使用經C3b多肽塗佈^ ELISA板進行使用未經標記單株抗體及生物素標記單株抗體之競爭作用研究。生物素標記MAb結合可用鏈球菌-抗生物素蛋白-鹼性磷酸酶探針進行偵測。為測定經純化C讣結合抗體之同型，可進行同型ELISA。舉例而言，可在 4°C下將微量滴定板之孔塗以i gg/mL抗人類IgG隔夜。在以ΡΛ BSA阻斷之後，使該等板與i ^/mL或更少之單株 C3b結合抗體或經純化同型對照在環境溫度下反應i至2小時。隨後可使該等孔與人類IgG1或人類IgM_特異性鹼性磷酸酶-共軛探針反應。隨後將板顯色且分析以便可測定經純化抗體之同型。為證明單株C3b結合抗體結合於表現C3b多肽之活細胞’可使用流動式細胞測量術。簡言之，可將表現C 3 b之細胞株（在標準生長條件下生長）與各種濃度之C3b結合抗體混合於含有0.1% BSA及10%胎牛血清之PBS中且在37°C 下培育1小時。在洗滌後’使該等細胞在與一次抗體染色相同之條件下與經螢光素標記之抗人類IgG抗體反應。樣品可藉由FACScan儀器使用光及側向散射特性以對單一細胞進行門控來進行分析。除流動式細胞測量術檢定之外或替代流動式細胞測量術檢定，亦可使用利用螢光顯微術之 148032.doc •119- 201043638 替代檢定。細胞可完全如上所述染色且藉由螢光顯微術進行檢驗。該方法允許觀測個別細胞，但可能會隨抗原密度而降低敏感性。本發明之C3b結合抗體可進一步利用西方墨點法測試與 C3b多肽或抗原性片段之反應性。簡言之，可製備經純化之C3b多肽或融合蛋白或自表現⑶之細胞製備細胞萃取物且對其進行十二烷基磺酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳。在進行電泳之後，將經分離之抗原轉移至碗化纖維素膜上，以 1〇〇/。胎牛血清阻斷且以待測試之單株抗體進行探測。人類〇 IgG結合可使用抗人類IgG鹼性磷酸酶偵測且以丁受質錢劑（Sigma Chem. Co_，St. L〇uis，M〇)顯色。功能檢定之實例亦描述於下文實例部分中。預防及治療用途本發明提供藉由向有需要之個體投與有效量的本發明抗體來治療與補體活性增強有關之疾病或病症的方法。在— 特定實施财，本發明提供一種藉由向有需要之個體投與有效量的本發明抗體來治療年齡相關之黃斑變性（amd)的〇方法。本發明之抗體可尤其用以防止乾型AMD進展為濕型 AMD、減緩及/或預防地圖狀萎縮之進展、治療或預防黃斑水遽及改善由於乾型AMD進展導致之視力降低。其亦可與抗VEGF療法組合用於治療濕型AMD患者。在二貫施例中’本發明提供藉由向有需要之個體投與有效量的本發明抗體來治療補體相關疾病或病症的方法:、 148032.doc •120- 201043638 已知補體相關疾病或病症之實例包括：神經病症、多發性硬化症、中風、格巴二氏症候群（Guillain Barre Syndrome)、創知性胳知傷、帕金森氏病（Parkinson’s disease)、具有不當或不良補體活化之病症、血液透析併發症、超急性同種異體移植排斥反應、異種移植排斥反應、在IL_2療法期間介白素-2誘發之毒性、發炎性病症、自體免疫性疾病之炎症、克羅恩氏病（Crohn's disease)、成人呼吸碧迫症候群、包括灼傷或来傷之溫度損傷、缺丘性再灌注後病狀、心肌梗塞、氣球金管成形術、心肺繞道或腎繞道中之泵後症候群、企液透析、腎缺血、無脈重建後之腸系膜動脈再灌注、感染性疾病或敗血症、免疫複合物病症及自體免疫性疾病、類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡（SLE)、SLE腎 k、增生性腎炎、溶血性貧血及重症肌無力。另外，其它已知補體相關疾病為肺部疾病及病症，諸如呼吸困難、咳血、ARDS、哮喘、慢性阻塞性肺病（c〇pD)、肺氣腫、肺栓塞及梗塞、肺炎、纖維化積塵病、惰性粉塵及礦物質 (例如矽、煤塵、鈹及石棉）、肺纖維化、有機積塵病、化學品損傷（歸因於刺激性氣體及化學品，例如氯氣、光氣、二氧化硫、硫化氫、二氧化氮、氨及鹽酸）、煙霧損傷、溫度損傷（例如灼傷、冷凍）、哮喘、過敏症、支氣管收縮、過敏性肺炎、寄生蟲病、古巴士德氏症候群 (Goodpasture's Syndrome)、肺血管炎及免疫複合物相關性炎症。在一特定實施例中，本發明提供藉由向有需要之個體投 148032.doc -121 - 201043638 與有效量的本發明抗體來治療補體相關疾病或病症的方法，其中該疾病或病症為哇一 Μ 内庇马孝％、關卽炎（例如類風渴節炎）、自體免疫性心臟病、 ''' 職闲多發性硬化症、發炎性腸病、局部缺灰再灌注損傷、_ H φ _ (B_q跡Simons Syndr〇me)、血液透析全身性狼瘡症、紅斑狼瘡、牛皮癖、多發性硬化症、移植、中樞神經系統之疾病（諸如阿兹海默氏病及其它神經退化性病狀）、 a刪、絲球體腎炎、大皰性類天錢或MPGNII。

在特疋實知例中，本發明提供藉由向有需要之個體投 ’、有效1的匕3本發明抗體之組合物來治療絲球體腎炎的方法。絲球體腎炎之症狀包括（但不限於）蛋白尿；腎絲球過滅率（GFR)降低；包括氮血症（尿毒廢、過度血尿素氮-BUN)及鹽⑼留之血清電解質改變，致使水滞留引起高血壓及水腫，血尿症及包括紅血球管型之異常尿沈降；低白蛋白血症，·高脂質血症；及脂肪尿。在一特定實施例中， f發明提供藉由向有需要之個體投與有效量的包含本發明豆之、.且s物來治療陣發性夜間血紅素尿症（PNH)的方法0 在一特定實施例中，本發明提供藉由向有需要之個體投與有效量的包含本發明抗體之組合物來減少與體外循環有關之免疫及止血系統功能障礙的方法。本發明之抗體可用於任何涉及使患者血液自患者Α管經由導管且回到患者血 s之循環的程序，該導管具有包含能夠導致補體活化、血 J板活化、白血球活化或血小板_白血球黏附中之至少— ^8〇32.(|〇〇 -122- 201043638 者之物質的内腔表面。該等程序包括（但不限於）所有形式之ECC，m涉及將人造或外來器冑、組織或血管引入患者血液環路中之程序。 ^ 待用本發^治㈣j治療之個體亦可使H療與黃斑變性有關之病狀的已知方法（諸如美國專利第6,2iM68號中所述之抗生素治療）投與其它治療劑。在其它治療中，諸如環孢素（cyclosporine)之免疫抑制劑為能夠抑制免疫反應〇之茱劑。5玄等藥劑包括細胞毒性藥物、皮質類固醇、非類固醇消炎藥（NSAID)、特異性τ淋巴細胞免疫抑制劑及其抗體或片段（參見 Physicians，Desk Reference，第 53 版， Medical Economics Company Inc., Montvale, N.J. (1999)) 〇免疫抑制治療通常以一定時間間隔持續一週、一個月、3 個月、6個月或一年之時期。在一些患者中，投與治療持續至多患者之餘生。當本發明之治療劑與另一藥劑一起投與時，該兩者可按 Q 順序依次投與或同時投與。在一些態樣中，本發明之抗體投與亦接受使用第二藥劑（例如維替泊芬（vertep〇rfin))之療法的個體。在其它態樣中，結合外科手術治療投與結合分子。用於與C3b結合抗體組合治療之適合藥劑包括此項技術中已知能調節補體組分之活性之藥劑（參見例如，美國專利第5,808，109號）。已報導減弱補體介導之活性之其它藥月!1。β亥等樂劑包括.胺基酸（Takada, Y.等人，Immunology 1978，34，509);膦酸醋（Becker, L_ Biochem. Biophy. Acta 148032.doc -123 - 201043638 1967，147，289);聚陰離子物質（Conrow, R. B.等人，J. Med. Chem. 1980，23, 242);績隨基氟化物（Hansch, C·; Yoshimoto, M. J. Med. Chem. 1974, 17, 1 160及其中引用之參考文獻）；聚核苷酸（DeClercq，P. F.等人，Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975, 67, 255)；海松脂酸（pimaric acid)(Glovsky, Μ. M.等人，J. Immunol. 1969，102, 1) ; 口卜吩（porphine)(Lapidus, M.及 Tomasco, J. Immunopharmacol. 1 98 1，3，137);若干消炎藥（Burge, J. J.等人，】_1111〇11111〇1· 1978, 120，1625);紛（Muller-Eberhard，H. J. 1978，Molecular Basis of Biological Degradative Processes, Berlin, R. D.等人，編.Academic Press, New York,第 65 頁）；及苯曱脒 (Vogt, W·等人，Immunology 1979, 36, 13 8)。一些該等藥劑藉由對蛋白酶及酯酶進行一般性抑制來起作用。其它藥劑對補體路徑中之任何特定中間步驟均不具特異性，而是抑制補體活化中之一個以上步驟。後者化合物之實例包括苯曱脒，其阻斷Cl、C4及C3b利用（參見例如，Vogt等人， Immunol. 1979, 36, 138)。此項技術中已知可抑制補體組分活性之其它藥劑包括穗黴菌（Stachybotrys)之真菌代謝物K-76(Corey等人，J. Amer. Chem. Soc. 104: 5 551, 1982)。K-76及 K-76 COOH 已展示主要在C3b步驟抑制補體（Hong等人，J. Immunol. 122: 2418, 1979 ; Miyazaki 等人，Microbiol. Immunol. 24: 1091, 1980) ’且防止自正常人類補體產生趨化性因子（Bumpers 等人，Lab. Cline· Med. 102: 421, 1983)。在高濃度之K-76 148032.doc -124- 201043638 或K-76 COOH下，顯示C2、C3、C6、C7及C9與其各別前述中間物之反應受到一定程度的抑制。亦已報導K-76或K-76 COOH抑制補體之C3b去活劑系統（Hong等人，J. Immunol. I27: 104-108，1981)。實施本發明方法之其它合適藥劑包括灰黃黴素（griseofulvin)(Weinberg，Principles of Medicinal Chemistry,第 2 版，Foye，W. 0·,編，Lea & Febiger，Philadelphia，Pa” 第 813 頁，1981)、異潘那林 (isopannarin)(Djura等人，Aust. J. Chem.36: 1057，1983)及海綿（Siphonodictyon coralli-phagum)之代謝物（Sullivan 等人，Tetrahedron 37: 979，1981) ° 組合療法方案可具有相加作用，或其可產生協同結果 (例如，對於組合使用兩種藥劑，補體路徑活性之降低超過預期值）。在一些實施例中，本發明提供一種使用本發明之C3b結合抗體及抗血管生成劑（諸如抗VEGF劑）預防及/ 或治療AMD或如上所述之另一補體相關疾病的組合療法。診斷用途在一態樣中，本發明涵蓋用於在生物樣品（例如血液、血清、細胞、組織）情形中或受疾病或病症折磨或處於患上與AMD有關之病症的風險中之個體中測定c3b蛋白及/或核酸表現以及C3b蛋白功能之診斷檢定。診斷檢定，諸如競爭性檢定，依賴標記之類似物（「示蹤劑」）與測試樣品分析物競爭共同結合搭配物上有限數目之、。口位點之牝力。結合搭配物一般在競爭之前或之後不冷且Ik後使結合於結合搭配物之示縱劑及分析物與未 148032.doc -125- 201043638 結合之示蹤劑及分析物分離。此分離可藉由傾析（在結合搭配物預先不溶之情況下）或藉由離心（在競爭性反應後結合搭配物沈澱之情況下）達成。如藉由標記物質之量所測量，測試樣品分析物之量與所結合示縱劑之量成反比。製備已知量分析物之劑量反應曲線且將其與測試結果相比較以定量測定測試樣品中存在之分析物的量。當使用酶作為可偵測標記時，此等檢定稱為ELISA系統。在該形式之檢定中，抗體與C3b結合抗體之間的競爭性結合使得結合之 C3b蛋白（較佳本發明之C3b抗原決定基）成為血清樣品中之抗體（最特定而言，血清樣品中之中和抗體）的量度。該檢定之一顯著優勢在於利用中和抗體直接進行測量 (亦即干擾C3b蛋白（尤其抗原決定基）結合者）。該檢定（尤其呈ELISA檢驗之形式）已大量應用於臨床環境及常規血液師檢中。免疫學技術使用針對各種補體組分（例如C3、C4、C5)之不同抗原決定基的多株或單株抗體來偵測例如補體組分之分裂產物（參見例如Hugli等人，Immunoassays Clinical Laboratory Techniques 443-460，1980 ; Gorski 等人，J Immunol Meth 47: 61-73, 1981 ； Linder等人，J Immunol Meth 47: 49-59, 1981 ； ^Burger# A, J Immunol 141: 553-558, 1988)。可隨後測量抗體與分裂產物在與已知濃度的經標記分裂產物競爭下之結合。諸如放射免疫檢定、 ELIS A及徑向擴散檢定之各種檢定可用於偵測補體分裂產物。 148032.doc -126- 201043638

組分之可溶分裂產物測量異常補體活化來達成。該等測量可如例如Chen〇weth等人，N EngI ^ Med 3〇4 :

Biochim Biophys Acta 737· 較佳僅測量活體内形成之補 497-502，1981 及 Bhakdi 等人， 343-372，1983中所述來進行。體活化。其可藉由自個體收集生物樣品（例如血清）於含有補體系統抑制劑之介質中，且隨後測量樣品中之補體活化 (例如定量分裂產物）來達成。在患有與眼部疾病或病症相關之病症之患者的臨床診斷或監測中，與來自正常個體之相應生物樣品中之含量相比較偵測補體蛋白指示患者具有與黃斑變性相關之病症。活體内診斷或成像描述於US2006/0067935中。簡言之， Q 該等方法一般包含向患者投與或引入診斷有效量之C3b結合分子’該C3b結合分子可操作地連接至可藉由非侵襲性方法偵測之標記物或標記。給予抗體_標記共軛物足夠時間以在眼睛内定位且結合於補體蛋白。隨後，使患者於債測裝置以鑑別可偵測標記，因此形成C3b結合分子在患者眼睛中位置之影像。C3b結合抗體或其抗原結合片段之存在藉由測定抗體-標記是否與眼睛之組分結合來侦測。與不具有AMD疾病之正常個體相比較，偵測到所選補體蛋白或蛋白質組合之含量增加指示易患與黃斑變性相關 148032.doc -127- 201043638 之病症及/或該病症發作。本發明之該等態樣亦較佳用於眼睛成像方法及組合血管生成診斷及治療方法中。本發明亦係關於預測醫學領域，其中出於預後（預測）目的使用診斷檢定、預後檢定、藥物基因組學及監測臨床試驗以藉此預防性治療個體。本發明亦提供用於判定個體是否處於發展與補體路徑活性失調有關之病症的風險中之預後（或預測）檢定。例如’ 可在生物樣品中檢定C3b基因中之突變。該等檢定可用於預後或預測目的以藉此在以C3b蛋白、核酸表現或活性為特徵或與C3b蛋白、核酸表現或活性有關之病症發作之前預防性治療個體。本發明之另一態樣提供在個體中測定C3b核酸表現或 C3b蛋白活性以藉此選擇適合於該個體之治療劑或預防劑的方法（在本文中稱為「藥物基因組學」）。藥物基因組學允許基於個體之基因型（例如檢查個體之基因型以判定個體對特定藥劑反應之能力）選擇藥劑（例如藥物）用於治療性或預防性治療個體。本發明之另一態樣係關於監測藥劑（例如藥物）在臨床試驗中對C3b蛋白之表現或活性的影響。醫藥組合物本發明提供醫藥組合物，其包含C3b結合抗體（完整或結合片段）與醫藥學上可接受之載劑調配在一起。該等組合物可另外含有一或多種適於治療或預防補體㈣疾病（例如編)之其它治療劑。醫藥學上可接受之載劑增強或安 148032.doc -128- 201043638 定組合物或有助於組合物之製備。醫藥學上可接受之载劑包：生理上相容之溶劑、分散介質、塗料、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑及其類似物。本發明之醫藥組合物可获ώ μ 籍由此項技術中已知之多種方法投與。投藥之途徑及/或方鉬祕兩沾田万式視所而結果而變化。投藥較佳為靜脈内、肌肉β、腹膜内或皮下投藥或投與至目標部位附近。在-特定實施例中，調配本發明之抗體以使其可 Ο 玻璃體内投與至眼睛中。m蕴與μ▲ τ谙樂學上可接受之載劑應適於靜脈内、肌肉内、皮下、兆么τ<四_ ^ ^ ^ 非鉍腸、舍椎或表皮投藥（例如藉由注射或輸注）。視投藥途徑而$，活性化合物(亦即抗體、雙特異性及多特異性分子）可經物f塗佈以保護化合物不受酸作用及其它可能會使化合物去活之天然條件影響。該組合物應為無菌及液體組合物。可例如藉由使用諸如㈣脂之塗料、在分散液情況下藉由維持所需粒度及藉由〇使用界面活性劑來保持適當流動性。在許多情況下，組合物中較佳包括等張劑，例如糠、諸如甘露糖醇或山梨糖醇之多π醇及氯化鈉。可藉由在組合物中納入延遲吸收之藥劑（例如單硬脂酸鋁或明膠）來達成可注射組合物之長期吸收0 本發明之醫藥組合物可根據此項技術中熟知且常用之方法製備。參見例如 Remington: The Science and practice 〇f

Pharmacy, Mack Publishing Co·，第 20版，2000 ;及 Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. 148032.doc -129· 201043638 R〇blnson，編，Marcel Dekker，Inc，New Y〇rk，197卜醫藥組合物較佳在GMP條件下製造。在本發明之醫藥組合物通常使用治療有效劑量或有功效劑量之C3b結合抗體。 C3b結合抗體藉由熟習此項技術者已知之習知方法調配為醫藥學上可接受之劑型。調整給藥方案以提供最佳所需反應（例如治療反應）。舉例而言，可投與單一大丸劑；可隨時間投與若干分次劑量；或可按治療情況之緊急需要所指不按比例減小或增加劑量。出於投藥容易性及劑量均一性考慮，將非經腸組合物調配成單位劑型尤其有利。如本文中所用之單位劑型係指適合作為單一劑量用於待治療之個體的實體上不連續之單位；每一單位含有經計算以產生所要治療作用之預定量的活性化合物與所需醫藥載劑締合。可改變本發明之醫藥組合物中活性成分的實際劑量濃度以便獲得在對患者無毒之情況下有效達成特定患者、組合物及技藥方式所需之治療反應的活性成分之量。所選劑量濃度視夕種藥物動力學因素而定，該等藥物動力學因素包括所用本發明特定組合物或其酯、鹽或醯胺之活性、投藥途仅技藥日守間、所用特定化合物之排泄速率、治療持續時間、與所用特定組合物組合使用之其它藥物、化合物及/ 或物質、所治療患者之年齡、性別、體重、病狀、一般健康狀況及前病史，及其類似因素。 4師或獸醫可以比達成所需治療作用所需含量低的含量開始以醫藥組合物形式使用之本發明抗體的劑量且逐步增加劑ϊ直至達成所需作用。一般而言，用於治療本文所述 148032.doc •130- 201043638 之過敏性發炎性病症之本發明組合物的有效劑量視許多不同因素而改變，該等因素包括投藥方式、目標仅點、患者

Ο 生理狀態、患者為人類抑或動物、所投與之其它藥物療法及治療為預防性抑或治療性治療。需要滴定治療劑量以最佳化安全性及功效。對於以抗體全身性投藥，劑量範圍為每公斤佰主體重約0.000 i至1〇〇毫克且更通常為每公斤宿主體重0.01至15毫克》一例示性治療方案需要每兩週全身性投藥一次或一月全身性投藥一次或每3至6個月全身性投藥一次。對於以抗體玻璃體内投藥，劑量範圍為約〇〇〇〇ι 至約10 mg。一例示性治療方案需要每兩週全身性投藥一次或一月全身性投藥一次或每3至6個月全身性投藥一次。、抗體通常多次投與。單個劑量之間的時間間隔可為數週、數月或數年。時間間隔亦可根據測量患者中⑶結合抗體之血液含量所指示而不定期。在全身性投與之—些方法中’調整劑量以達成1·_ 之血漿抗體濃度:在 -些方法中達成25-500叩就之血漿抗體濃度。或者，抗體可以持續釋放調配物形式投與，在該種情況下，需 =车劑:及頻率視抗體在患者體内之半衰期而體長的半=投Sr示比嵌合抗體及非人類抗 / 樂之劑里及頻率可視治療為預防性抑或化療性而變化。在預一敏* 應用中，歷經長時期以相對不瓶繁之k間間隔投與相對低之劑量。_些患者在 ’、續接受治療。在治療性應用中，對、持間“投與相對高之劑量直至疾病進展減弱或終止，且： 148032.doc •131· 201043638 其後’可對患者投佳直至患者展示病症部分或完全改善與預防性療法。實例提供以下實例以進一步說明本發明，但該等實例不限制本發明之㈣。本發明之其它變體對—般技術者而言將顯而易見且涵蓋於隨附申請專利範圍中。實例1 :抗原之產生及品質控制生物素標記之C3b的產生使用來自Pierce之標記試劑，在2〇倍莫耳過量之生物素標記試劑下生物素標記經純化之C3b。在室溫下進行生物素標記且使用0.5 ml Zeba旋轉脫鹽柱分離未共軛生物素。使用EZ-連接NHS-LC-LC-生物素標記C3b之離胺酸殘基，且使用EZ-連接順丁烯二醯亞胺_PEG2_生物素標記半胱胺酸殘基。使用HABA檢定及LC-MS/MS定量生物素標記之程度。藉由LC-MS/MS確認C3上與硫酯鍵形成有關之單個半胱胺酸之生物素標記。結合於瓊脂糖珠粒之C3b的產生使用來自 Amersham Biosciences(17-0851-01)之 PD-10 脫鹽柱將經純化之C3b(Quidel A413,批號903726)緩衝液交換至偶合緩衝液（5〇 mM Tris，5 mM EDTA-Na，pH 8.5) 中。使SulfoLink偶合凝膠（Pierce 20401)及所有其它試劑平衡至室溫。使SulfoLink偶合凝膠與4凝膠床體積之偶合緩衝液平衡且旋轉並移除上清液。隨後將緩衝液交換之 C3b蛋白溶液添加至旋轉平衡之Suif〇Link偶合凝膠中。在 148032.doc -132- 201043638 室溫下搖動混合物1 5分鐘且隨後在不混合下靜置3 0分鐘。隨後以3凝膠床體積之偶合缓衝液洗滌共軛之C3b偶合凝膠。之後’添加一凝膠床體積之淬滅試劑（5〇 mM L-半胱胺酸-HCL(44889)於偶合緩衝液中）至C3b偶合凝膠中且在室溫下搖動15分鐘。15分鐘後，在不混合下將共軛之C3b 偶合凝膠在室溫下靜置30分鐘。以至少6凝膠床體積之洗務溶液（1 M NaCl)洗滌共軛之C3b偶合凝膠且隨後以2凝勝 0 床體積之脫氣儲存緩衝液（含有0.05%疊氮化鈉之磷酸鹽緩衝鹽水）洗滌。最後步驟為添加一凝膠床體積之儲存緩衝液至估算1 mg/mL蛋白質中達凝膠床體積。 C3b-Sulf〇Link偶合凝膠蛋白質濃度測定在還原條件下，使以下量之C3b在4-12%變性蛋白質凝膠上電泳：2 、1_5 、丨吨、〇·75 、〇 5吨及〇 25 μ§。相鄰於該等泳道，亦在還原條件下負載2 μ1、4 4及8 μΐ 50%珠粒懸浮液（C3b偶合凝膠）。由於α鏈共價連接至珠 ◎ 粒，故其將不會出現於蛋白質凝膠上，因此藉由比較β鏈來測定蛋白質濃度。據估算i μ1偶合凝膠上存在約丨^ C3b，因此獲得大於9〇%之偶合效率。計算SulfoLink偶合凝膠上之活性C3b百分數以4種不同濃度（0122 μΜ、〇 244 μΜ、〇 %? 及〇 *料 μΜ)之因子B、固定濃度之可溶性⑶（所有4個皆為ο· μΜ)及固定濃度之因子D(所有4個皆為〇47 μΜ)設置四個對照。在該等對照反應中省略因子ρ。在抓下培育反應物 15分鐘。此時，將所有對照樣品即刻添加至4x樣品緩衝液 148032.doc •133· 201043638 中且於951下放置10分鐘，賴後在4_12% 蛋白質凝膠上電泳。偶合C3b之珠粒之濃度為每丨mg床體積約丄 mg C3b。以下7個反應由固定濃度之偶合C3b珠粒（〇294 μΜ)、固定之因子Ρ(2.68 μΜ)及固定之因子d(〇.95 _)組成。因子Β之濃度如下：0.367 μΜ、〇 489 _、〇 978 μΜ、1.467 μΜ、1.955 μΜ、2.933 μΜ 及 3·910 μΜ。對於該等7個反應，除因子D外一切均在37。〇下培育3〇分鐘。在該 30分鐘培育之後，添加〇.95 μΜ因子D且培育反應物2分名里。此時，將所有樣品即刻添加至4x樣品緩衝液中且在還原條件下在4-12% Bis-Tris凝膠上電泳。在分析資料時，比較所有泳道中之Bb譜帶。珠粒-C3b穩定性 C3b_Sulf〇Link偶合凝膠共軛後，旋轉珠粒且使其逐漸再懸浮於100%甘油中（使得最終甘油濃度為50%)。隨後將珠粒置於-8(TC下進行若干次冷凍解凍（至多檢驗3次）。隨後使珠粒在冰上解凍且轉移至1 5 m丨錐形管中。添加5管柱體積之lxPBS以再懸浮珠粒。在850 g下使其旋轉5分鐘。再以10管柱體積之1 xPBS洗滌2次。最後步驟為用1 xpBs再懸浮珠粒為最終50¾漿狀溶液。測試各冷凍解凍之Bb產生：培育3 μΜ因子B、〇·5 μΜ因子D、1 μΜ C3b-珠粒及5 mM MgCl 1小時且尋找完全Bb產生。除此之外，亦在-got：下儲存若干週後經由Bb產生檢驗冷凍珠粒。獼猴C3之純化及獼猴C3b之產生獼猴血漿係購自 Alphagenesis(Yemassee, SC)。用 PBS、 148032.doc •134· 201043638 10 mM EDTA及2個完全混合抑制劑錠劑（Roche)將50 ml血漿稀釋至200 m卜緩慢添加40% PEG6000至溶液中至4%之最終濃度且再在4°C下溫和攪拌30分鐘。藉由在17,500 rpm 下離心20分鐘移除沈澱。再添加PEG6000至上清液中至 12.5%之最終濃度且在4°C下攪拌30分鐘。在175,000 rpm 下離心20分鐘後棄去上清液。離心塊再溶解於50 ml lxPBS、10 mM EDTA緩衝液中且使含有C3之溶液兩次穿過15 ml蛋白質G(GE)管柱以移除獼猴IgG。用4 L 20 mM Tris pH 8.0、10 mM EDTA透析流經蛋白質G管柱之流體隔夜。同時，用0.5 M NaOH，接著用水及較大體積之20 mM Tris pH 8.0及 10 mM EDTA清潔 20 ml MonoQ管柱（GE)直至管柱基線清晰且平衡。隨後藉由ATKA 100(GE)以0.8 ml/min之流動速率將透析溶液負載至MonoQ管柱。負載後，用10管柱體積之20 mM Tris pH 8.0及10 mM EDTA洗滌管柱或洗滌直至基線達到穩定。用20管枉體積之0至500 mM NaCl線性梯度將蛋白質自管柱溶離且以4 ml/管收集溶離份。在非還原條件下及還原條件下藉由SDS-PAGE凝膠鑑別溶離份中之C3蛋白峰。進一步藉由西方墨點法及MS 肽定位分析確認C3。隨後彙集85%純C3溶離份且進一步藉由2660丙浠葡聚糖（sephacryl)300凝膠過滤管柱（GE)使用 PBS緩衝液進行純化。再次藉由SDS-PAGE及MS分析驗證 C3峰溶離份。彙集純溶離份且藉由微孔濃縮器濃縮至約1 mg/mL，等分且在-80°C冷束機中儲存供稍後使用。獼猴C3以PBS緩衝液稀釋至500 pg/ml。藉由添加含0.4 148032.doc •135· 201043638 μΜ fB(Comptech)、0.05 μΜ fD(CompTech)及 5 mM MgCl2 之PBS緩衝液使C3完全轉化為C3b且在室溫下培育30分鐘。隨後藉由2660丙烯葡聚糖300凝膠過濾管柱進一步純化C3b。彙集含有C3b之峰溶離份，藉由微孔濃縮器濃縮。在C 3轉化酶檢定中檢驗獮猴C 3 b活性。蛋白質展示與人類C3b(CompTech)相當之Bb產生活性。藉由與補體因子及市售抗體之結合對C3b試劑進行品質控制酶聯免疫吸附檢定（ELISA)結合（抗原決定基保守性) 在ELISA中比較經生物素標記C3b分子與未經生物素標記C3b以評估市售抗體識別之C3b抗原決定基的保守性。

Maxisorp板以1 00微升/孔之2 pg/ml於塗佈緩衝液（石炭酸氫鹽卩119.5-9.8)中之市售抗〇3或抗€3匕抗體塗佈且在4°(：下培育隔夜。在使用PBST洗滌三次之後，在室溫下用300微升/孔稀釋劑（Synblock, AbD Serotec)阻斷板2小時。在吸出阻斷溶液之後，在室溫下培育100 μΐ於稀釋劑中稀釋之 C3b(+/-生物素）樣品1小時。歷時30分鐘每孔添加100微升以1:5000稀釋於稀釋劑（聚HRP稀釋劑）中之Strep-HRP(聚 HRP抗生蛋白鏈菌素）或HRP共軛之抗C3抗體。在用PBST 洗滌4次之後，歷時5-10分鐘每孔添加100微升TMB受質 (超TMB受質溶液）。使用50微升/孔終止溶液（2 N H2S04)終止反應。讀取吸光度（A450-A570)且使用SoftMax Pro分析資料。與補體因子及市售抗體之結合測試固定於瓊脂糖珠粒上之C3b結合於市售抗體及補體 148032.doc -136- 201043638 因子蛋白的能力。添加4 μΐ C3b珠粒漿液（相當於約1 gg C3b)至各管中。珠粒再懸浮於100 μΐ稀釋劑中。隨後以稀釋劑+抗體或補體因子蛋白使管中總體積達到200 μΐ。在室溫下搖動該等管1小時，隨後使用稀釋劑洗滌一次。施加珠粒漿液於微型管柱且再洗滌兩次。快速旋轉除去剩餘液體（1，200 G，1分鐘）。堵塞管柱，隨後添加500 μΐ含二次抗體之稀釋劑 (1:5000)或抗補體因子抗體。在室溫下培育1小時，隨後使用稀釋劑洗滌4次。[對於補體因子，使用二次抗體重複上述步驟]。快速旋轉除去剩餘液體（1，200 G，1分鐘）。堵塞管柱，隨後添加100 μΐ ΤΜΒ受質。將液體快速旋轉（1，200 G，1分鐘）至新管中。轉移溶液至96孔板中。使用50微升/ 孔終止溶液（2 N H2S04)終止反應。讀取吸光度（Α450-A570)且使用SoftMax Pro分析資料。實例2:由HuCALGOLD®文庫產生C3b特異性抗體藉由使用市售嗔菌體呈現文庫（Morphosys HuCAL GOLD®文庫）作為抗體變異型蛋白質之來源選擇具有高結合親和力之純系來產生抗C3b抗體。HuCAL GOLD®文庫為 Fab文庫（knappik等人，2000)，其中所有六個CDR藉由適當突變而多樣化，且其使用CysDisplay TM技術將Fab連接於噬菌體表面（參見例如W001/05950)。提供HuCAL GOLD®噬菌體-抗體作為12個獨立子文庫： VHIk ' VHU ' VH2k ' νΗ2λ ' VH3k ' νΗ3λ ' VH4k ' ΥΗ4λ、VH5k、ΥΗ5λ、VH6k ' ΥΗ6λ。根據特定實驗要求 148032.doc -137- 201043638 以任何組合彙集12個子文庫。為選擇結合於C3b之抗體，應用三種不同淘選策略： a) 使用生物素標記之人類C3b進行溶液淘選，其中藉由抗生蛋白鏈菌素磁性珠粒捕捉噬菌體_抗原複合物， b) 基於珠粒之淘選，其中C3b結合於瓊脂糖珠粒，及 c) 差示肽淘選，其中交替進行各輪對偶合至載體蛋白之肽的選擇與各輪對全長C3b(任一生物素標記之結合於瓊脂糖珠粒的C3b)的選擇。噬粒救助、噬菌體擴增及純化

使HuCAL GOLD®文庫在含有34 gg/m丨氯黴素及1%葡萄糖之2xYT培養基（2XYT-CG)中擴增。在〇·5之〇D_㈣下用 VCSM13輔助噬菌體感染（在37。〇無震盪下儿分鐘；在 37C、250 rpm震盪下30分鐘）後，旋轉細胞（412〇 g ; 5分鐘；4C) ’使其再懸浮於2χγΤ/34 μ8/ηιί氯黴素/5〇 ^g/mL 康黴素/0.25 mM IPTG中且在22。〇下生長隔夜。使噬菌體自上清液PEG沈澱，再懸浮於PBS/2〇%甘油中且在下儲存。如下在兩輪淘選之間進行噬菌體擴增：用溶離之噬菌體感染中對數期大腸桿菌TG1細胞且塗鋪至補充有葡萄糖及34 pg/mL氣黴素之LB瓊脂上（LB_CG板）。在3(rc下培育隔夜後，自瓊脂板到下TG1菌落且用於接直至OD0()G ηιη達到〇·5。如上所述添加VCSM13輔助噬菌體進行感染。溶液淘選該淘選策略中所之抗原為經生物素標記之C3b。經生 148032.doc -138- 201043638 物素標記之C3b存在兩種不同生物素標記變體。在一種變體中，生物素經由連接至C3b上之半胱胺酸殘基的順丁烯二酸亞胺-PEG-連接子連接至C3b。該變體在下文中稱為 C3b-半胱胺酸-生物素。在另一變體中，生物素經由連接至C3b上3個不同離胺酸殘基之磺酸基_nhs_LclC-連接子連接至C3b。該變體在下文中稱為C3b_離胺酸_生物素。對兩種不同變體之選擇在各輪選擇中交替進行以便不致選擇結合於該等連接子分子之噬菌體。〇如—、在至溫下用PBS洗滌抗生蛋白鏈菌素磁性珠粒（Dynabeads M-280 ’ Dynal) —次且用Chemiblocker阻斷2小時。亦在室溫下於旋轉器上用Chemibl〇cker阻斷pBS稀釋之噬菌體^ 小時。歷時3 0分鐘使阻斷之噬菌體預吸附於阻斷之抗生蛋白鏈菌素磁性珠粒上兩次。轉移噬菌體上清液至已阻斷之新2 ml反應管中，且添加經生物素標記之人類C3b並在室溫下於旋轉器上培育混合物丨_2小時。添加丨〇〇 y阻斷之抗 Q 生蛋白鏈菌素磁性珠粒至各淘選池中，在旋轉器上培育20 分鐘。珠粒以粒子分離器（Dynal MPC_E)收集約2 5分鐘且將溶液小心移除。

隨後將珠粒於PBST中使用旋轉器洗滌7次，隨後再以 PBS洗蘇3次。藉由添加2〇〇…含2〇 DTT之1〇 mM

Tns/HCl pH 8至各管中且培育1〇分鐘使噬菌體自Dynabead 溶離。利用磁性粒子分離器移除Dynabeada將上清液添加至14 ml生長至〇〇6〇〇 nm 〇 6_〇 8的大腸桿菌TG1培養物中。為進行噬菌體感染，將培養物在50 ml塑膠管中在37。(：下 148032.doc -139- 201043638 在不進行震I下培育45分鐘。在412Qxg下離心5分鐘後，將細菌離心塊各自再懸浮於8〇〇 μ1 2χγτ培養基中塗鋪於3XYT-CG瓊脂板上且在坑下培育隔夜。自板刮下菌落且如本文中所述救出嗤菌體並擴增。以與第一輪選擇相同之方式進行第二輪及第三輪選擇。為選擇C3b特異性㈣體’在各種子池巾應用關於〇蛋白之若干種不同阻斷方法。當耗體用ChemiblQeker阻斷且在旋轉器上培育丨-2小時時，一般添加經純化之〇或含有C3之血清。因此，潛在C3b/C3交又反應性噬菌體在與 C3b接觸時應已結合於抗原且應僅選擇c3b特異性噬菌體。為淘選1812.1，以10倍莫耳過量添加經純化之〇(僅在第一輪期間）。不對淘選1889之子池卜6進行阻斷。對於子池7-12，在所有三輪選擇中應用使用人類血清之各種阻斷條件。對於子池7及8，添加未經稀釋之人類血清，致使 C3相對C3b之莫耳過量達約7〇倍。由於擔心血清因子可能會降解C3b，故添加蛋白酶抑制劑（Pefabl〇c %，，最終濃度4 mM)。對於子池9]2,添加經稀釋之人類血清，致使C3相對C3b之莫耳過量為約2倍。子池9及1〇含有蛋白酶抑制劑，而對於池11及12未添加抑制劑。基於珠粒之淘選基於珠粒之淘選中所用的抗原為偶合至Sulf〇Hnk瓊脂糖珠粒之C3b。用於預吸附噬菌體成阻斷珠粒之珠粒由 M〇rph〇SyS藉由用半胱胺酸（來自Sulf〇Unk固定試驗套組）處理瓊脂糖珠粒（SulfoLink偶合凝膠）而生產，半胱胺酸阻 148032.doc -140- 201043638 斷珠粒上所有可能的結合位點。 ❹

在至狐下於旋轉器上用Chemiblocker阻斷經PBS稀釋之噬菌體1_2小時。歷時30分鐘使阻斷之噬菌體預吸附於阻斷之瓊脂糖珠粒上兩次。轉移噬菌體上清液至阻斷之新2 ml反應管中，且添加偶合至人類C3b之瓊脂糖珠粒並在室溫下於旋轉器上培育混合物1-2小時。藉由在台式離心機中離心（_ g，1分鐘）收集凌脂糖珠粒且棄去上清液。藉由溫和再懸浮於i ml洗務溶液中、在洗務緩衝液中培育且藉由離心收集來反覆洗務離心塊。藉由添加 200 μΐ含 20 mM 〇„之1〇 mM τ^/η(：ι ❻ 各管中且培育10分鐘使嗟菌體自瓊脂糖珠粒溶離。藉由離心使珠粒成塊且將上清液添加至14 ml生長至0D6⑽謂06_ 0.8的大腸桿菌叫培養物巾。為進行嗟菌體感染，將培養物在50 ml塑膠管中在37艺下在不進行震盪下培育化分鐘在4120xg下離心5分鐘後，將細菌離心塊各自再懸浮於剛μ"χΥΤ培養基中，塗鋪於州心瓊脂板上且在 37。(：下培育隔夜。自板刮下菌落且如本文中所述救出噬菌體且擴增。以與第一輪選擇相同之方式進行第二輪及第三輪選擇。當為上清液時境脂糖珠粒之離心塊難以看見且易於溶解。因此決定使用至少25 _㈣便能夠看見離心塊。此舉產生相對較高之抗原濃度，由於使用不同體積，故對於第-輪所有子池均不同。第一輪之子池中⑶之濃度大致如下：子池⑽」中為189nM、子池mG.2中為128囊、 148032.doc 201043638 子池1820.3中為257 nM、子池1820.4中為98 nM、子池 1820.5及1820.6中為66 nM。在第二輪選擇中，C3b濃度對於子池1820.1-3為112 nM及對於子池1820.4-6為57 nM。在第三輪選擇中，C3b濃度在所有子池中均為57 nM。在第一輪藉由添加經純化之C3至約475 nM之最終濃度來以C3對子池1820.4-6進行阻斷。差示肽淘選差示肽淘選中所用之抗原為代表C3b上不同抗原決定基之肽。該等肽已在比較C3b與C3上之表面暴露殘基的蛋白質結構分析中鑑別為C3b特異性肽。如上所述藉由 MorphoSys進行與兩種不同載體蛋白BSA及轉鐵蛋白之偶合。在各輪選擇期間兩種不同載體蛋白須交替使用以便不致選擇結合於載體蛋白之噬菌體。另外，對肽之各輪選擇與對全長C3b之各輪選擇交替進行，以確保所選噬菌體結合於正確摺疊之全長C3b。肽淘選之實際淘選程序為使用經肽偶合之載體蛋白作為結合於Maxisorp板之抗原的固相淘選。將Maxisorp板（F96 Nunc免疫板）中合適數目之孔（視預阻斷之噬菌體的體積而定）塗以300 μΐ以PBS中50 pg/ml之濃度偶合至肽之載體蛋白。密封該板且在4°C下培育隔夜。將經塗佈之孔以400 μΐ PBS洗滌兩次且在微量滴定板震盪器上在室溫下以350 μΐ PBS/5%奶粉阻斷2小時。在室溫下於旋轉器上用PBST/5%奶粉及最終濃度為0.5%(ν/ν)之未經偶合載體蛋白阻斷噬菌體2小時。阻斷程序之後，將經 148032.doc -142- 201043638 塗佈之孔以400 μΐ PBS洗務2次。將300 μΐ經預阻斷之嗟菌體添加至每一經塗佈孔中且在室溫下在震盪器上培育2小時。藉由添加若干次400 μΐ PBST進行洗滌，隨後用pbS洗滌若干次（詳情參見表8及1〇)。利用每孔300 μΐ含20 mM DTT之 10 mM Tris/HCl pH 8歷時10分鐘使噬菌體自板溶離。添加DTT噬菌體溶離液至14 ml大腸桿菌TG1中，該大腸桿菌TG1已在37°C下在2YT培 ^ 養基中生長至Ο〇6〇〇 0.6-0.8且在37t下於50 ml塑膠管中不進行震盪下培育45分鐘供噬菌體感染。在412〇Xg下離心5 分鐘後，將細菌離心塊各自再懸浮於6〇〇 μ1 2χγτ培養基中，塗鋪於3XYT-CG瓊脂板上且在37t：下培育隔夜。如本文中所述自板刮下菌落且如本文中所述救出噬菌體且擴增。對於淘選1849,第一輪及第三輪選擇為如上所述進行之肽淘選。第二輪為如本文所述稍微變化之對於結合於瓊脂 ❹糖珠粒之C3b的選擇：用於噬菌體預吸附之瓊脂糖珠粒上的結合位點已使用奶粉而非半胱胺酸阻斷，以及如上所述在PBST/5%奶粉中預阻斷噬菌體。對於淘選1883，第一輪及第三輪選擇為如本文中所述使用經生物素標記之c3b進行之溶液淘選。第二輪為如上所述（此部分）之肽淘選。淘選結果三輪淘選後選出之純系已次選殖至表現載體中且隨後關於其與選擇中所用之C3b或肽的結合來進行筛選。顯示結合信號至少2倍於背景含量之純系視為初級採樣。 14S032.doc -143- 201043638

猴為極佳非人類靈長類動物安全性/毒性物種。針對獼猴之C3bneo抗體之效能及親和力需要在人類之5_1〇倍以内。選擇該準則以便在獼猴中達成對C 3 b濃度之顯著抑制且因此可評估對C3b濃度之顯著抑制引起之潛在毒性。在篩選階段’許多純系由於無或具有弱獼猴交叉反應性而必須捨棄。為鑑別更多獼猴雜交反應性純系，進行淘選1812之再篩選。對於再篩選，選擇178個純系，其已在中性鏈親和素板上展示與C3b顯著結合（至少超過背景5倍）且之前並未定序。178個純系中有38個展示結合於獼猴C3b且進一步用於C3對比篩選。38個純系中有10個通過對比篩選，獲得丄個新的獨特純系，將其純化。使用利用巯基板進行之ELISA來篩選基於珠粒之淘選 1820 ^ 79個初級採樣中有49個展示對C3b之信號強於對C3 之信號。定序該等初級採樣獲得13個獨特一序列，其中7 148032,doc -144- 201043638 個可確認及純化。關於與相應選擇中所用之肽的結合篩選來源於差示肽淘選1849之微表現Fab。與肽偶合之載體蛋白用作ELISA中直接塗佈之抗原。鑑別2944中之566個初級採樣，但僅22 個初級採樣展示超過背景至少5倍之信號。該等22個純系及展示超過背景接近於5倍之信號的32個其它純系進一步用於篩選以檢查與全長C3b之結合。該等54個純系中無一者展示與全長C3b結合。 ❹ 與先前差示肽淘選對比，在差示肽淘選1883中進行兩輪對全長C3b之選擇及僅一輪對肽之選擇。在捕捉ELISA中關於與C3b之結合篩選淘選1883之輸出。4416個純系之篩選產生497個初級採樣。將275個已展示超過背景至少5倍之結合信號的初級採樣進一步用於對比篩選。定序通過對比篩選之1 83個純系，獲得9個獨特純系。該等獨特純系中有7個可確認及純化。在捕捉ELISA中關於與C3b之結合篩選第二輪溶液淘選 u 1889之輸出，獲得4416個初級採樣中之2878個。大部分初級採樣（2469/2878)展示超過背景至少5倍之結合信號。決定取396個代表性純系進行來源於不同淘選子池且具有不同信號強度之對比篩選。396個純系中有1 58個通過對比篩選且定序，獲得14個獨特序列及最終11個經純化Fab。為了不疏漏任何有益純系，測試並未進行對比篩選之對於 C3b具有超過背景5倍之結合信號的剩餘純系（2073/2469)與獼猴C3b之結合。就C3b與C3特異性對所得129個獼猴交叉 148032.doc -145- 201043638 反應性純系進行篩選。25個純系展示超過C3結合之C3b選擇性，最終獲得4個新獨特序列。4個純系中有3個可確認及純化。抗原決定基分級使用套組（ECL蛋白質生物素標記模組，GE)根據製造商說明書以生物素標記經純化之Fab。藉由使經生物素標記之Fab流經Zeba脫鹽旋轉柱（Pierce)，除去其中未結合之生物素。在捕捉ELIS A(本文所述）中直接與Fab之未經生物素標記原體比較檢驗經生物素標記之Fab對人類C3b之結合活性。僅取結合活性不受生物素標記影響之Fab進行進一步試驗。藉由競爭ELISA進行抗原決定基分級。所用捕捉抗體為一種針對C3d蛋白之抗體（兔多株抗人類C3d抗體， Abeam)，C3d蛋白為C3b之子域。以在PBS中稀釋至2 pg/ml之捕捉抗體填充Maxisorp板之孔。密封該板且在4°C 下培育隔夜。次日，藉由添加PBST/5%奶粉阻斷板上之剩餘結合位點。在室溫下培育板1小時且隨後以PBST洗滌兩次。以稀釋於PBST/0.5%奶粉中2.5 pg/rnl之最終濃度添加C3b。在室溫下培育板1小時且隨後以PBST洗滌兩次。同時將皆稀釋於PBS中最終濃度為2.5 pg/ml之C3b、經生物素標記之Fab及未經生物素標記之Fab(超過生物素標記之Fab 100倍莫耳過量）添加至孔中。在室溫下培育板1小時且隨後以PBST洗滌兩次。 148032.doc -146- 201043638 為偵測經生物素標記之Fab，添加AP共軛之抗生蛋白鏈菌素（Zymed)，在室溫下培育板1小時且隨後以TBST洗滌5 次。根據製造商說明書使用螢光受質AttoPhos。在Tecan GENios Pro板讀取器中測量螢光。如上所述藉由競爭ELISA進行抗原決定基分級。將經生物素標記之Fab與未經生物素標記之Fab( 100倍過量）之混合物添加至人類C3b中。偵測生物素標記。將關於陰性對照 Fab MOR03207獲得之信號設置為100%值。相對於該100% ^ 信號將抑制分級。鑑別6個抗原決定基群（概述於下表中）。群B及C以及群D 及E共享部分重疊之抗原決定基。 ❹ 148032.doc 147- 201043638 表2 :抗原決定基群之概述

A 7 & 3 3 s ο β 1 4 1 5 97 O QBJ^**8,818335358587 zos nalrc一giglglml 經生物素標記之Fab

K e W) ^ iA τ· ·* β β» ^ τ- Ρϊ « 1ί> SB 40 00 CO 80 e a» h. ^ tf> so at e> ο κ> *- « ^ « Φ 1Λ ^ tO CO 03 W Ά 09 I r nd nd nci nd nd 卜 nd nd nc nd nd r nd nd nC nd mi r nd nd nd nd nd r nd nd nc nd nd □ nd nd nc nd nd 311ί 9135 3136 81邡 9219 3220 8233 3502 3651 3G32 SS53 3674 3115 8116 811Ϊ 8120 3121 3137 8139 8292 9304 3336 S3D7 8312 8314 3554 8555 0 [ i [ [ fnd" fnd [nd nd nd nd nd M K nd nd nd a 雨 nd nd nd nd nd W； nd Zj π CEl nd I nd nd 1 π ! ai nd nd rtd nd nd id W nd Hd* nc nd nd nc >75%bio-Fab之剩餘信號 75-50% bio-Fab之剩餘信號 50-25% bio-Fab之剩餘信號 <25%bio-Fab之剩餘信號

m nd nd rd nd nd PH M nd nd nc nd nd nd nd nc nd nd 鬥 _ 11 nd nd nc nd nd r 讕 m nd nd nd nd nd S5S2 MMBSS3 nd nd 3600 Bum p 8597 8601 X K X X X X X ΐβ X X MX X SSSSSSSSSSS8S 超過Fab-btn之過量實例3.親和力成熟及最佳化親和力成熟文庫之產生為增強所選抗體片段之親和力及生物活性，使用三核苷酸定向突變誘發（Virnekas等人，1994)藉由卡匣突變誘發並行最佳化L-CDR3及H-CDR2，同時保持構架區恆定。在選殖以便進行親和力成熟之前，將所有親本Fab片段經由 148032.doc 148- 201043638

Xhl/心oRI自相應表現載體（pMORPH®X9_FH)轉移至 CysDisplayTM載體 pMORPH®25_LHC 中。pMORPH®25_LHC 係由HuCAL GOLD®呈現載體pMORPH®23_LHC藉由移除干擾文庫選殖進行H-CDR2最佳化之一個BwHII位點而產生。為最佳化親本Fab之L-CDR3，藉由尽piIAS>/7l移除輕鏈之 L-CDR3、構架4及恆定區（405 bp)且置換為多樣化L-CDR3 以及構架4及恒定域之全套。約1 · 5 pg Fab載體片段與3 - 5 倍莫耳過量之帶有多樣化L-CDR3之插入片段連接。在第二文庫組中，將H-CDR2(Z/2〇I/5m//II)多樣化，同時保持連接構架區恆定。為監測選殖效率，在選瘦多樣化H_ CDR2卡匣之前，以模擬物置換親本H-CDR2。將文庫之連接混合物電穿孔至4 mL大腸桿菌TOP 10F細胞（Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)中，獲得 1〇8至 1〇9個獨立菌落。該文庫大小確保覆蓋理論多樣性。如本文中所述進行文庫擴增。為控制品質，隨機挑選單個純系並進行定序。用於親和力成熟淘選之噬菌體之製備在含有34 pg/ml氣黴素及1%葡萄糖之2χγτ培養基 (2XYT-CG)中擴增HuCAL®成熟文庫。在〇5之〇D_㈣時用 VCSM13輔助嗟菌體感染（不震盛下於下3〇分鐘；37°C 下以250 rpm震盪30分鐘）後，收集細胞（412〇Xg; 5分鐘； 4C)，再懸洋於2XYT/34 pg/ml氯黴素/5〇 gg/mi康黴素/ 0.25 mM IPTG中且在22°C下生長隔夜。將噬菌體自上清液 148032.doc -149· 201043638 PEG沈澱兩次，再懸浮於PBS中且如下所述用於成熟淘選。 (a)成熟淘選成熟中所用之選擇程序為如上所述之溶液淘選。為增加淘選嚴格度且選擇以便提高選出率，降低抗原濃度且應用延長之洗滌條件（至多24小時）。在4°C下進行隔夜洗滌步驟，所有其它洗滌步驟均在室溫下進行。選擇用於親和力成熟之候選者自初級淘選獲得之Fab已於各種檢定中表徵。其根據以下準則分級及分組為潛在成熟候選者： • 結合於C3b與結合於C3之選擇性 •溶血檢定中之效能 • C3b及MAC沈積檢定中之效能 •作用模式 •抗原決定基分級 *親和力取8個初級抗體進行成熟，其因此在下文稱為「親本」抗體。在初級淘選後發現親本抗體MOR08035、8598及8599屬於Fab之最大群。其為抗原決定基分級D之成員，在功能性檢定中顯示活性，且抑制C 3轉化酶及C 5轉化酶。該等抗體強烈抑制因子B與C3b之結合，以較低程度抑制因子Η之結合。親本抗體MOR08552除具有稍有不同的抗原決定基（分級 148032.doc -150、 201043638 c)以外顯示相同特徵。 MOR08672及MOR08675皆屬於抗原決定基分級D。其充分抑制因子Η之結合，但展示僅微弱抑制其它因子之結合。其可經由與上述抗體不同之機制起作用。缺乏其它因子之競爭亦可致使以較低親和力達成相同效能。此論點可能尤其適用於MOR08675，其顯示適度效能，不過實際上其對C3b之親和力較低。 MOR08555為抗原決定基群C之成員，其具有與 MOR08305群類似之特徵，但不抑制C5轉化酶。 MOR08653屬於抗原決定基分級B，分級B與分級C部分一致。MOR08653在功能性檢定中之存在導致抑制所有所測試之機制：因子P、因子B及因子Η之結合、對C3b二聚體形成之抑制、及對C3轉化酶及C5轉化酶之抑制。分別構築各親本之成熟文庫以便能夠在淘選池之組成中維持靈活性。在稍後的時間點彙編該等池。對於各親本抗體，根據該抗體施加之抑制的主要機制定義目標KD值。 MOR08598 與 MOR08653 以及 MOR0855 5 與 MOR08599 彙編於各2者之池中。在各池内，抗體對抗原顯示之親和力類似；充分表現；具有相同目標KD且不共享重疊抗原決定基。用於親和力成熟之文庫藉由平行交換LCDR3及HCDR2卡匣進行親和力成熟。藉由三核苷酸定向卡匣突變誘發最佳化CDR序列。將來自表現載體pMORPH®x9_Fab_MH之Fab片段選殖至噬粒載體 148032.doc -151 - 201043638 pMORPH®25 中。藉由標準選殖程序及將多樣化純系轉型至電感受態大腸桿菌T〇Pl0F’細胞（Invitrogen)中產生16個不同的親和力成 !、、文庫（對於各親本抗體，一個LCDR3文庫及一個HCDR3 文庫）。文庫大小在5x108_4xl09範圍内較佳。對隨機挑選之純系進行定序展示100%之多樣性。在挑選之純系中未發現親本結合劑。最後分別製備所有16個文庫之噬菌體。親和力成熟之淘選策略在選擇期間單獨保持HCDR2及LCDR3文庫。將8個親本中之4個處理為先導；其它4個親本置於各2者之池中。對、、勺10個自所產生之親和力成熟文庫救出之噬菌體進行成熟淘選。使用經生物素標記之抗原在人類C3b與獼猴C3b之間交替進行使用各別噬菌體池之溶液淘選。為增加淘選嚴格度且選擇以便提高選出率，降低抗原濃度且應用延長之洗滌條件（至多24小時）。淘選及洗滌條件概述於上文。成熟淘選之後，將增濃之噬粒池次選殖於pM0RpH®x9 表現載體中。親和力綿選及成熟淘選結果就對於人類C3b之提高親和力以細菌溶解產物形式筛選自所有淘選獲得之總共2464個純系。藉由溶液平衡滴定 (SET)估算初步親和力。將親和力與其親本純系相比經话算獲認可之純系視為初級採樣。自各淘選子池獲得初級採樣且除83〇5_LCDR3之外對所 148032.doc -152· 201043638 有初級採樣進行定序，其中8305-LCDR3文庫中對65個初級採樣中最好的17個進行定序。26 1個定序之初級採樣中鑑別出總共173個獨特序列。可鑑別除MOR08598外所有親本Fab之衍生物。親本MOR08552及MOR08599中未鑑別出 HCDR2成熟之衍生物。選擇親和力最佳化之Fab用於蛋白質純化將獨特的初級採樣挑選至微孔培養板中且用於Fab之微表現。在二級篩選中使用Fab溶解產物在捕捉ELISA中測試與人類C3b、獼猴C3b之結合、在捕捉ELISA中檢查對對比目標C3d加C5之交叉反應性且進行對比篩選。取通過篩選之純系進行進一步試驗。目標為大規模地表現及純化各親本之約12種衍生物。若超過12種衍生物通過二級篩選，則基於序列變異性進行用於蛋白質純化之選擇。以下段落詳細描述各淘選子池之選擇過程。已自親本MOR08305鑑別23個HCDR2成熟之獨特純系及 11個LCDR3成熟之純系。23個HCDR2成熟純系中有21個通過對比篩選且該等21個純系中有1 8個與人類C3b良好結合。但1 8個純系中僅1個展示與獼猴C3b良好結合。選擇該純系（MOR09124)用於大規模純化。根據序列變異性選擇另外5個純系用於大規模純化。純化對於MOR09122不可行。11個LCDR3成熟純系中有3個未通過對比篩選，但該3 個純系中有2個包括於大規模純化中（MOR09130及9131)，因為其對人類C3b的高結合信號暗示低親和力，該低親和力轉而可能引起對於血清之殘餘結合。純化對於MOR09132 148032.doc -153 - 201043638 不可行。已自親本85 52鑑別16種LCDR3成熟衍生物。根據與如上所述類似之準則選擇16種該等衍生物中之7種用於大規模純化。但對其全部之純化皆失敗。因此將所有剩餘9種衍生物帶入大規模純化中。9種衍生物中僅2種可純化 (MOR09308及 9313)。已自親本MOR08555鑑別1個HCDR2成熟之獨特純系及3 個LCDR3成熟之純系。由於總共僅有4種衍生物，故決定將對其全部進行純化，而不管其在二級篩選中之行為。已自親本MOR08599鑑別25個LCDR3成熟之獨特純系。在二級篩選期間進行之所有檢驗中，25個純系中的大多數表現良好。基於序列變異性選擇用於大規模純化之純系。已自親本MOR08653鑑別25個HCDR2成熟之獨特純系及 1 0個LCDR3成熟之獨特純系。各子集中僅1者在對比篩選中表現良好。取該等純系（MOR09 198及9202)進行進一步試驗。基於序列變異性對其它純系進行選擇。已自親本MOR08672鑑別5個HCDR2成熟之獨特純系及 29個LCDR3成熟之獨特純系。5個HCDR2成熟純系中僅1個通過對比篩選且取其進行進一步試驗（MOR09139)。選擇另外兩個HCDR2成熟純系。純化對於MOR09137不可行。在二級篩選中大部分LCDR3成熟純系表現良好。基於序列變異性對該等純系進行選擇。已自親本MOR08675鑑別7個HCDR2成熟之獨特純系及 17個LCDR3成熟之獨特純系。7個HCDR2成熟純系中之1個 148032.doc -154- 201043638 展示僅與人類及獼猴C3b弱結合且被排除。剩餘6個純系中僅3個不含潛在糖基化位點且取其進行大規模純化。另外2 個含有潛在糖基化位點之純系包括於選擇中。大部分 LCDR3成熟純系在二級篩選中表現良好。基於序列變異性對該等純系進行選擇。進一步選擇親和力最佳化之Fab 在審閱所有先前部分中提供之可用資料之後，包括未展示之與親和力最佳化之Fab的表徵有關之資料（例如結合親〇和力、溶血抑制、C3 b沈積抑制），進一步選擇最佳Fab。選擇結果由來源於4種不同親本抗體之22種成熟Fab組成。表5概述所選Fab之關鍵特徵。表5:進一步選擇之22種成熟Fab之關鍵特徵 MORQ 親本成熟型目標 KplpH] HOR資料㈣ SET中之親和力ϊί^ϊ Biacore中之親和力fpm 溶it檢定中之IC50f d〇%血清丨丨sM! C3b沈積撿定中之IC50 .% <1愧血清丨丨nM] MAC沈讀檢定中之IC50 <z% 血清)hMj 人«C3b 獼猴ab 人頬C3b 獼獾C3b 人類獮猴人類锎狼人類搞猴 9124 HC032 w^m： .21 .. 鑛 'K 73 912S LCOR3 2έ - e? 9129 LCDR3 - MM- >Λ 警、， $130 830$ LCDR3 10 2 , 172 9131 LCDR3 swum 182 S255 LCD!» 助 IIHmI 9256 LCDR3 - HI 270 n 100 ggpif 9186 LCDS3 HCDR2 愐 IWMS MI^K 9187 LCDR3 HCDR2 no MBnMIS. $188 ICDR3 HC0R2 1» 123 9189 LCDR3 r4CDR2 限 S?9C LCD33 HCDR3 295 BZ\ 2扣 S191 LCOR3 HCDR2 US X 1·Λ' 37 ^ΚιββΙ WB^ml ϋΜηρ^ «134 LC0R3 211 'JS S136 LCOfW '75 S^roi $140 βΰ72 LC0R3 190 mIssk 9U1 LCD33 S142 IC0S3 1J? «Β u n .« SUS ICDR3 KCDR2 输綠 1 β1 ,s 23 • S14I LCDR3 HCDR2 £10 2*-i 6& •5 9150 S151 8675 LCDR3 LC033 fKDR2 rtCDR? 73； 170 2:31 19? 7 :.1.. ..ss..:.::: 由於不完全滴定未計算

IgG2§MUST準則：人類血清之IC50i50nM及獼猴血清之IC50£150nM IgC^%MUST準則：人類血清之IC50^20nM及鵪猫血清之IC50S60nM IgG之&MUST準則：人類血清之IC50$5nM及獼猴血清之丨C50^15nM

高足MUST準則〜 xz5>MUST準則 MU^T 準則最佳化之Fab的IgG轉化及在IgG層面上之交叉選殖將所有8種親本Fab、具有所需概況之若干種成熟Fab及 -155- 148032.doc 201043638 若干種成熟修復（潛在糖基化位點移除）Fab次選殖至人類 IgG格式中。藉由以輕鏈及重鏈構築體之組合轉染細胞達成在IgG層面上之交叉選殖。由於MOR09124為僅有的所鑑別之 HCDR2成熟純系，故交叉選殖僅可能用於各別家族 (MOR08305衍生物），其中MOR09124之重鏈與其它成熟家族成員之輕鏈組合。對交叉純系給予新MOR編號，其概述於表8中。表8:交叉選殖抗體之MOR編號 MORQ 類型 MORO之重鏈 MORO之輕鏈 ms 交叉純系 9124 9128 9396 交又純系 9124 9129 9397 交叉純系 9124 9130 9398 交又純系 9124 9131 9399 交叉純系 9124 9255 9403 交又純系 9124 9256 對於上述親和力成熟Fab、修復Fab(糖基化位點移除）及交叉選殖Fab，根據本文中所述之方法測定Fab 9124、 9397、9398、9136、9141、9373 及 9423 之結合特徵。表 9 概述該等Fab之結合親和力、功能性效能及對補體因子結合之抑制。 148032.doc -156- 201043638 ο ο

1 交又反應性 1 1 C3c 1 味i CN X to 〇 |iC3b I 1 C3dJ Kf κ〇 K〇 Κ〇 κ〇 K〇 u*> ϋ κ〇 κ〇 K〇 Κ〇 1 對因子結合之抑制 | a 〇 δ ο s | C3b-fH | τ— 5 5 κ〇 Τ Ο 0.08 I C3b-fP | Κ〇 I 300 I | 300 | 你 ¥Ρ K〇 I C3b-fB | fO 5 5 Η〇 οο ο CM o 1 功能性效能，IC50 1 s = α Q Ο < i獼猴1 ΙΟ 卜 in CO CN CD 寸 1人類1 τ-~ CN τ— T— 5 Q Q 吳 Ο P獼糇1 CO ΙΟ CO CD in CO σ> in CD CO 1人類1 CD τ— CO τ- CO CO 卜 δ? ο S S < X Γ獼播1 Τ Ο σ> LO (D CO (N in CN <D CO CO 1人id ιο CO 导 CN CO 親和力 1 h· UJ (/> Έ Q Q R 猴 C3b| o CD CO I 340 | 1 huC3bl τ- CM CD I 100 | CO CO I 100 | 2 ο 运 m α Ο 1獼猴C3b| CO C0 O) 00 <N σ> in 寸 σ> I 486 | | huC3b | 卜卜 CO LO σ> CO CO ιο jO 1 Fab | 1 9124 | I 9397 I I 9398 | I 9136 I I 9141 | | 9373 | I 9423 I 148032.doc -157 201043638 用於測定表8中概述之Fab的結合親和力及功能特性之方法詳細描述於下文中。由表8中之資料可見，本發明之Fab 片段能夠以小於或等於100 pM且在許多情況下小於或等於 10 pM之親和力結合於人類及獼猴C3b。另外，該等Fab片段顯示對於人類及獼猴C3b具有小於或等於100 nM且在大多數情況下小於或等於50 nM之IC50之功能性效能。實例4. IgG格式C3b結合劑之產生及表徵 IgG之生殖系化 pM2表現載體中編碼免疫球蛋白輕鏈及重鏈可變區之區域由 Geneart(Geneart AG, Regensburg, Germany)生瘦系化及最佳化以匹配生殖系化序列，以避免不適合在哺乳動物細胞中表現之密碼子且避免隱藏拼接位點。所有重鏈之N 端QVQ更換為EVQ，因為末端Q可能形成焦麩胺醯胺。選擇各親本家族之抗體進行生殖系化/最佳化。簡言之，如下在IgG格式中使抗體生殖系化且表現抗體。

轉化為IgG 為表現全長免疫球蛋白，將Fab重鏈（VH)及輕鏈（VL)之可變域片段自Fab表現載體次選殖至IgGl表現載體中。使用限制酶M/Η及5/pI次選殖VH域片段至pMORPH®2_h_ IgGlAA中，其中位置234及235之白胺酸突變為丙胺酸以消除FcRY結合且減弱效應功能。將VL域片段次選殖至 pMORPH®2_h_IgK中係經由EcoRV及5WWI位點進行，而次選殖至pMORPH®2—h_IgX2中使用五coRV及i/ραΐ進行。人類IgG之短暫表現與純化 148032.doc -158- 201043638 用1:1比率之IgG重鏈及輕鏈表現載體DNA轉染真核 HKB11及HEK293細胞。在轉染後第3或第7天收集細胞培養物上清液且進行標準蛋白質A親和性層析（MabSelect SURE，GE Healthcare)。由於未另作說明，故將缓衝液交換為1><杜爾貝科氏？68(〇1111:〇6(^〇’8?88)(?117.2，11^打〇§611) 且對樣品進行無菌過渡（0.2 μπι)。在SDS-PAGE中在變性、還原及非還原條件下或藉由使用Agilent BioAnalyzer且在天然狀態下藉由HP-SEC分析IgG之純度。對生殖系化抗體給予新MOR編號，如表10中所示。表10:生殖系化抗體之MOR編號生殖系化抗體之MORO 原抗體之MORO 9555 9140 9556 9124 9609 9136 9610 9141 9611 9397 9612 9393 9613 9314 9674 9373 9675 9423

其中進一步表徵生殖系化抗體9556、9611、9612、 9609 ' 9610 ' 9674及9675 ° 親和力測定

C3bneo抗體藉由結合於C3b分子上之新抗原決定基 (neoepitope)阻斷補體活化。C3b上之新抗原決定基亦為血漿中其它豐富補體蛋白之結合位點，例如因子Η、因子B 148032.doc -159- 201043638 及因子P ’其經由替代路徑調控補體活化。因此C3bneo抗體應具有高親和力以便與該等豐富補體蛋白競爭，以便藉由阻斷該專補體蛋白與C3b之結合而有效阻斷補體活化。需要高親和力來達成低治療劑量。例如，血漿中因子Η之濃度為約3 μΜ且因子Η對C3b之結合親和力（Kd)為約30 nM ;因子Η濃度高於其Kd 1〇〇倍。當c3bneo抗體與因子Η 競爭結合於C3b時’將需要1 ηΜ濃度之1〇 PM Kd C3bneo抗體（抗體濃度為其Kd之100倍高）來抑制50°/。因子Η結合於 C3b。等於或小於10 pM Kd之C3bneo抗體因此將以適當治療性抗體劑量達成替代路徑補體活化之有效阻斷。因此，選擇具有在小於或等於65 pM，較佳小於或等於1〇 PM範圍内之高結合親和力的本發明抗體分子。例如，選擇具有對於C3b具有9、8、7、6、5、4、3或2 pM或更少（亦即小於2 pM之較高親和力）之結合親和力的本發明之抗體分子。如下所述藉由Biacore及溶液平衡滴定（SET)測定生殖系化IgG抗體結合C3b之親和力。

Biacore 測定在 25°C 下使用 CM5感測器晶片（GE Healthcare, BR-1005-30)以 BIAcore T100(GE Healthcare)進行 Biacore動力學實驗。操作缓衝液為 HBS-EP(+)(GE Healthcare, BR-1001-8 8)。簡言之，執行以下步驟來測定結合親和力。 •製備抗C3d IgG固定之感測器晶片：根據供應商說明書 (GE Healthcare, BR-1000-50)使用胺基偶合程序在 CM5 晶片上以10 μΐ/min之流動速率使兔抗C3d多株抗體 148032.doc -160- 201043638 (八1^&111，313-15981)(5〇0§/1111於乙酸鹽？115.〇偶合緩衝液 (GE Healthcare，BR-1003-51)中）與兩個不同流槽（Fcl 及 2)偶合600秒。最終固定含量將大於7000 RU。 •在第二個流槽上捕捉C3b :以10 μΐ/min將含1 gg/ml C3b 之操作緩衝液注射於第二個流槽（Fc2)上以達到對於Fab 動力學分析約70RU之捕捉量或對於IgG動力學分析約 20RU之捕捉量。 •注射不同濃度之抗C3b Fab或IgG於兩個流槽上：以60 μΐ/min持續240秒注射抗C3b溶液（0.3125 nM-10 nM於操作緩衝液中；以1:2連續稀釋）於兩個流槽（Fcl及2)上。 •解離：以60 μΐ/min注射HBS-EP(+)操作緩衝液於兩個流槽上以監測C3b與抗C3b Fab/IgG之間的解離。對於5 nM 及2.5 M Fab/IgG濃度而言，解離時間設置為2400秒且對於所有其它濃度（包括另一 5 nM Fab/IgG)而言，解離時間設置為300秒。 •再生：在兩個流槽上各循環結束時使用甘胺酸-HC1 pH 1.6(由甘胺酸-HC1 pH 1.5及甘胺酸pH 2.0製成，GE Healthcare)+0.05% P20界面活性劑（GEHealthcare，BR-1 000-54)以60 μΐ/min之流動速率持續40秒進行再生兩次。 •動力學分析：藉由使用BIAevaluation 1.1軟體應用1:1結合模型獲得動力學速率常數，其中局部擬合Rmax值。 Biacore結合動力學測定之結果展示於下表11中。如所示，本文所述之抗體顯示結合於人類C3b的高親和力，其 148032.doc -161 - 201043638 中KD值通常小於或等於1 0 pM且在許多情況下小於或等於 5 pM。該等抗體亦展示對於獼猴C3b具有極高親和力（小於 200 pM之結合親和力）。表11 人類C3b結合獼猴C3b結合 C3bneo IgG ka (1/Ms) kd (1/s) Kd(M) ka (1/Ms) kd (1/s) Kd(M) 9556 3.21E+06 3.21E-07 1.00E-13 4.57E+06 4.67E-05 1.02E-11 9611 7.13E+06 3.10E-06 4.35E-13 6.97E+06 1.28E-04 1.83E-11 9612 5.05E+06 9.04E-06 1.79E-12 3.43E+06 8.67E-05 2.53E-11 9609 1.44E+06 3.16E-06 2.20E-12 2.02E+06 4.60E-05 2.28E-11 9610 8.20E+05 4.02E-06 4.90E-12 1.91E+06 6.41E-05 3.35E-11 9674 5.58E+06 6.66E-06 1.19E-12 8.34E+06 5.95E-05 7.13E-12 9675 3.53E+05 1.02E-06 2.88E-12 1.45E+06 2.90E-04 2.02E-10 SET測定為藉由溶液平衡滴定（SET)測定KD，使用抗體蛋白之單體溶離份（分別藉由分析型SEC分析至少90%單體含量；用 Superdex75(Amersham Pharmacia)分析 Fab 或用 Tosoh G3000SWXL(Tosoh Bioscience)分析 IgG)。基本上如文獻（Friguet等人，305-19)中所述在溶液中進行親和力測定。為提高SET方法之敏感性及精確度，將其自經典ELISA轉移至基於ECL之技術中（Haenel等人，2005)。根據製造商說明書使用MSD磺酸基-TAG™ NHS-酯 (Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD, USA)標記 1 mg/ml山羊抗人類（Fab)2片段特異性抗體（Dianova)。在聚丙烯微量滴定板中進行實驗且用含0.5% BSA及 0.02% Tween 20之PBS pH 7.4作為檢定緩衝液。以至少10 倍高於預期KD之濃度起始，以2n級數連續稀釋未經標記之 148032.doc -162- 201043638 人類C3b或獮猴C3b。使用不含抗原之孔測定Bmax值；使用具有檢定缓衝液之孔測定背景。在添加例如1 〇 pM Fab(60 μί最終體積中之最終濃度）之後，在室溫下培育混合物隔夜。所用Fab濃度相似於或低於預期KD。以含0.05 pg/mL人類C3b之PBS(30 μΐ/孔）塗佈標準MSD 板隔夜且以含3% BSA之PBS阻斷1小時。在用檢定缓衝液洗滌板之後，將平衡樣品轉移至彼等板（每孔30 μΙ〇且培育 20分鐘。洗滌後，向MSD板中每孔添加30微升含MSD-磺酸基-標籤標記之偵測抗體（山羊抗人類（Fab)2)的1:1500最終稀釋液且在室溫下於Eppendorf震蘯器上（700 rpm)培育 30分鐘。在洗滌板且添加30微升/孔含界面活性劑之MSD讀取緩衝液T之後，使用 Sector Imager 6000(Meso Scale Discovery， Gaithersburg, MD，US A)偵測電化學發光信號。以XLfit(IDBS)軟體應用定製擬合模型評估資料。為測定Fab分子之KD，使用以下擬合模型（根據Haenel等人， 2005，根據 Abraham等人，1996修改）： |圳,+ X + 夂d - ^([Fab\ +x + KD)2 - 4x[Fab],) 2[Fab\ [Fab]t :所應用之總Fab濃度 x :所應用之總可溶性抗原濃度（結合位點 Bmax:無抗原時Fab之最大信號 KD :親和力原則上應用相同方案來測定IgG分子之KD值，其中具有 148032.doc -163- 201043638 以下不同：替代Fab分子，添加完整IgG分子至抗原之系列稀釋液中且在室溫下平衡隔夜。隨後如上所述處理樣品。為評估資料，亦即測定IgG分子之KD，使用以下IgG之擬合模型（根據Piehler等人，1997修改）： [IgG] 2 ix + feG]+^ [IgG] [ 2

2[lgG] [IgG]:所應用之總IgG濃度 X :所應用之總可溶性抗原濃度（結合位點）

Bmax :無抗原時IgG之最大信號 Kd :親和力雖然未特定展示，但SET資料證實本文所述之抗體為人類C3b之高親和力結合劑，其中結合親和力在小於或等於 10 pM且在許多情況下小於或等於5 pM範圍内。類似地，本文所述之抗體以高親和力，通常以小於或等於200 pM範圍内之KD結合於獼猴C3b。 C3b抗體展示相對於C3之顯著結合選擇性檢驗C3b抗體以測定其是否相對於C3b前驅物C3選擇性結合於C3b。簡言之，藉由執行以下步驟來測定對於C3b 之結合選擇性。用含2 pg/ml抗C3d兔單株抗體（abeam 1745 3)之碳酸鹽緩衝液中以100微升/孔塗佈]\4&\丨3〇卬板 Nunc(442404)。密封板且在4°C下培育隔夜。抽吸板且以 PBS/0.5% Tween 20洗滌 3次。以稀釋劑（PBS、4% BSA 部 148032.doc -164- 201043638 分 V(Fisher ICN16006980)、0.1% Tween 20(Sigma P1379)、 0.1% Triton X-100(Sigma P234729))阻斷板且在室溫下培育2小時或在4°C下培育隔夜。隨後以PBS/0.5% Tween 20 洗滌板一次。於稀釋劑中稀釋經純化之C3b(補體技術A114 批號21)及C3(補體技術A113c)至1 pg/ml且每孔塗鋪100 μΐ。在室溫下培育1小時。隨後以PBS/0.5% Tween 20洗滌3 次。於稀釋劑中稀釋100 nM之Fab及後續稀釋液（或較高濃度）且每孔塗鋪100 μΐ。在室溫下培育1小時。以PBS/0.5% Tween 20洗滌3次。每孔添加100微升以1:400於稀釋劑中之抗組胺酸-HRP單株偵測抗體且在室溫下培育1小時。隨後以PBS/0.5% Tween 20洗滌4次。添加100 μΐ TMB受質 (Pierce 34028)且在室温下培育至多5分鐘。添加50 μΐ終止溶液（2 Ν硫酸）至各孔中且在450 nm下讀取板並在570 nm 下校正塑膠讀數。如圖1中所示，C3b抗體相對於C3結合具有選擇性。抗體達成超過C3結合1000倍之C3b結合選擇性。雖然圖1展示抗體9556之結合選擇性實例，但1〇〇〇倍結合選擇性為本文中所揭示之七種IgGC3b抗體所具有之性質。 C3b抗體抑制替代補體路徑為證明抗C3b抗體抑制替代補體路徑，進行以下檢定。溶血檢定溶血檢定為測試補體活化之基本功能性檢定且已用於評估抗人類C3b mAb及Fab分子藉由補體路徑阻斷紅血球 (RBC)溶解之能力（Evans等人，（1995). In vitro and in vivo 148032.doc • 165- 201043638 inhibition of complement activity by a single-chain Fv fragment recognizing human C5. Mol Immunol 32, 1 183-1195 ; Thomas等人，（1996). Inhibition of complement activity by humanized anti-C5 antibody and single-chain Fv. Mol Immunol 33, 1389-1401 ; Rinder等人，（1995). Blockade of C5a and C5b-9 generation inhibits leukocyte and platelet activation during extracorporeal circulation. J Clin Invest 96, 15 64-15 72)。簡言之，對於經典路徑檢定，使用致敏紅血球作為血清中存在之補體蛋白的溶解目標。該檢定因其可表徵及篩選高親和力抗人類C3b mAb而受關注。該程序改編自Rinder等人，（1995)及Thomas等人， (1996)。試劑：兔紅血球（Rb RBC)-Lampire，目錄號7246408 人類血清-Novartis Blood Research Program ;或獼猴血清-Alpha Genesis 明膠佛蘿那緩衝液（Gelatin veronal buffer，GVB)-Boston BioProducts，目錄號IBB-300 EGTA-Boston BioProducts，目錄號BM-151

MgCl2 U型底96孔板-Corning，目錄號3795 平底96孔板-Corning，目錄號3370 NP-40-Sigma，目錄號 74385 方案： 148032.doc -166- 201043638 1. 洗滌Rb RBC且在GVB/EGTA/Mg++中調整至8.33e7個細胞/毫升 2. 添加50 μΐ稀釋於GVB中之抗體至96孔圓底板之孔中；抗體之濃度應為所需最終濃度之2倍。 3. 添加50μ1稀釋於含EGTA及Mg++之GVB中之血清。 a·製備對照孔：血清+0 nM抗體、0%溶解對照（僅缓衝液）、100%溶解對照（0.1% NP-40)及血清、緩衝液及NP-40空白。

Ο b.若針對10%血清檢驗抗體’則使用1〇 mM EGTA及 5 mM Mg++(最終）；若針對50%血清檢驗抗體，則使用 15-30 mM EGTA、5 mM Mg++(最終）。 4. 在室溫下培育30分鐘。 5. 添加30 μΐ Rb RBC至樣品及對照孔中；添加30 μΐ缓衝液至空白孔中。在37°C下培育30分鐘。 6. 在2000 rpm下離心板5分鐘。 7. 收集上清液，轉移至平底板。 8. 讀取OD415及OD570。計算％溶血·· %-溶血—(⑽樣品—0乃血清空白）-(⑽0%溶解—⑽緩衝液空白） 0冷 _ (0/)100%溶解-OZW/MO.空白)-(〇£>0%溶解-QD緩衝液空白) 圖2展示抗C3b抗體在10%人類血清或獼猴血清中抑制溶血之能力的實例。本文所述之各C3b抗體以小於或等於50 nM之IC50抑制溶血。相比之下，當使用致敏紅血球進行檢定來檢驗經典補體路徑之活化時，發現本文所述之抗C3b抗體並不活化經典 148032.doc -167- 201043638 補體路徑（資料未展示）。 C3b沈積檢定一種測量針對替代路徑中補體C 3之抑制劑活性之方法為測量其沈積於酵母聚糖上之分解產物C3b。根據以下步驟進行該基於ELISA之檢定：在4°C下將25 μΐ含1 mg/ml酵母聚糖A(Sigma Z4250)之碳酸鹽緩衝液pH 9.6(Pierce目錄號 28382)塗佈於 Maxisorp 384 孔 ELISA 板（Nunc 464718)中隔夜。第二天在室溫下，抽吸酵母聚糖塗佈之板且以每孔 100 μΐ ELISA阻斷緩衝液 Synblock(AbD Serotec BUF034C) 阻斷2小時。在另一反應中，添加連續稀釋於明膠佛蘿那緩衝液（Boston Bioproducts IBB320-10 mM 巴比妥（Barbital)、 145 mM NaC卜 0.1%明膠、0.5 mM MgCl2、10 mM EGTA) 中之抑制劑至補充有MgCl2及EGTA(最終總反應濃度為1 mM MgCl2及10 mM EGTA)之10%血清中。陽性對照不含抑制劑且陰性對照具有25 mM EDTA。藉由在室溫下培育 30分鐘使混合物達到平衡。為移除阻斷緩衝液，抽吸板且以TBS/0.05% Tween-20洗滌一次。向板中每孔添加25 μΐ含有抑制劑或對照之1 〇%血清且在37°C下培育30分鐘（按時程預先測定在酵母聚糖上C3b沈積之線性範圍内）。培育30分鐘後，以TBS/0.05% Tween-20洗滌板三次。為偵測酵母聚糖上之C3b沈積，向板中每孔添加25 μΐ根據製造商稀釋於含 2% BSA 部分 V(Fisher 目錄號 ICN 16006980)、0.1% Tween 20(Sigma 目錄號 P1379)及 0.1% TritonX-100(Sigma 目錄號P234729)之PBS中之雞抗人類C3-HRP共軛多株抗體 148032.doc -168- 201043638 (Immunology Consultants Laboratory, Inc.目錄號CC3-80P-1)且在室溫下培育1小時。之後，以TBS/0.05% Tween-20 洗滌板三次且隨後添加25 μΐ超TMB受質溶液（Pierce目錄號 34028)。當孔中溶液變藍時，以15 μΐ 2 N硫酸終止反應。使用Spectromax在450 nm下讀取板，在570 nm下校正塑朦板（OD45Q-57()nm讀數）。使用下式計算酵母聚糖上C3b沈積之百分比： %C3b 沈積==100 100* [(OD無抑制剤 _ 〇D 25mMEDTA)-(〇D樣品-OD 25mMEDTA)] (〇D無抑制劑-〇D25mMEDTA) 圖3展示C3b抗體抑制C3分解產物C3b產生之能力的實例。各所檢驗抗體展示以至少小於或等於1 〇 nM之IC50抑制C3b沈積。 MAC沈積檢定測定C3b抗體抑制替代補體路徑之功能性能力的另一檢定為測量抗體抑制膜攻擊複合物（MAC)產生之能力，膜攻擊複合物為C3b加工之下游產物。簡言之，將含1 mg/mi酵母聚糖A(Sigma)之碳酸鹽緩衝液pH 9.5塗佈於板上來活化替代路徑。分別用血清（2%血清、5 mM MgCl2、10 mM EDTA)預培育Fab或IgG ’隨後添加至板中且在室溫下培育隔夜。在用TBST洗滌板三次之後，藉由與抗c5b-9-ALP (Diatec)—起培育1小時隨後以TBST洗滌三次且與用補充有2 mM MgCh之4-曱基香豆素磷酸酯（Fisher)一起培育3〇分鐘來偵測MAC。用〇·2 M EDTA終止反應且在ex=355 nm、em=460 nm下讀取板。相對於基線（EDTA處理之人類 148032.doc •169· 201043638 企清）及陽性對照（人類血清）計算各樣品對MAC沈積之抑制，且用於利用PRISM產生IC50曲線。圖4展示證明C3b抗體抑制MAC沈積之能力的例示性資料，由此表明該等抗體抑制替代補體路徑。特定言之，該等抗體以小於或等於5 nM之1C50抑制MAC沈積。抑制C3a及C5a產生可用於測定C 3 b抗體抑制替代補體路徑之能力的另一檢疋為測量C3a及C5a之產生，該兩者皆為替代路徑中C3b之下游活化產物。〇簡5之，申凊者使C5a-消-Arg ELISA顯色來測量溶血期間C5a之產生以證實在溶血檢定中具有抑制性之抗體亦抑制C5裂解為C5a及C5b。以100微升/孔含1 pg/ml小鼠抗人類C5a_消_Arg(us Biologies)之塗佈緩衝液（碳酸氫鹽pH 9 5_9 8)塗佈 Maxisorp板且在4°C下培育隔夜。在以PBST洗滌三次之後，在室溫下用300微升/孔稀釋劑（Synbl〇ck，AbD Serotec) 阻斷板2小時。吸出阻斷溶液後，在室溫下培育⑽μΐ以稀υ 釋劑稀釋之樣品或標準物丨小時。標準物如下製備：開妒為20 ng/ml標準物（rC5a^, _Arg)且製備丨:4連續稀釋液用於得到7點曲線。將溶血檢定樣品以1:5稀釋於稀釋劑中（溶血檢定上清液應在-⑽艺下儲存直至用於C5a EUsa)。其間以PB ST洗縣:板三次。每孔添加100微升〇·4 pg/mi稀釋於稀釋劑中之偵測抗體 (生物素_山羊抗人類Ch，R&D SyStems)且在室溫下培育^ 148032.doc -170- 201043638 小時後，歷時30分鐘每孔添加100微升以1:5000稀釋於HRP 稀釋劑（聚HRP稀釋劑）中之Strep-HRP(聚HRP抗生蛋白鏈菌素）。在用PB ST洗滌4次之後，歷時5-10分鐘每孔添加1 〇〇微升受質（超TMB受質溶液）。用50微升/孔終止溶液（2 N ΗβΟ4)終止反應。讀取吸光度（A450-A570)且使用SoftMax Pro分析資料。類似地’申請者使C3 a-消-Arg ELISA顯色來測量溶血_期〇間C 3 a之產生以證實在溶血_檢定中具有抑制性之抗體亦抑制C3裂解為C3a及C3b。以100微升/孔含1 pg/ml小鼠抗人類C3a-消-Arg neo(US Biologies)之塗佈緩衝液（碳酸氫鹽pH 9.5-9.8)塗佈 Maxisorp板且在4°C下培育隔夜。在以PBST洗蘇三次之後’在室溫下用300微升/孔稀釋劑（Synblock，AbD Serotec) 阻斷板2小時。吸出阻斷溶液後，在室溫下培育1〇〇 μ1以稀釋劑稀釋之樣品或標準物1小時。標準物如下製備：開始 Q 為1 Kg/ml標準物（rC3a-消-Arg)且製備1:3連續稀釋液用於传到8點曲線。將溶血檢定樣品以1:5稀釋於稀釋劑中（溶血檢定上清液應在-80°C下儲存直至用於C5a ELISA)。其間以PBST洗滌板三次。母孔添加100微升10 pg/ml稀釋於稀釋劑中之彳貞測抗體 (生物素-小鼠抗人類C3a，Chemicon且内部生物素標記）且在室溫下培育1小時後，歷時30分鐘每孔添加1〇〇微升以 1:5000稀釋於HRP稀釋劑（聚HRP稀釋劑）中之Strep_HRp(聚 HRP抗生蛋白鏈菌素）。在用PBST洗滌4次之後，歷時5_1〇 148032.doc -171- 201043638 分鐘每孔添加100微升TMB受質（超TMB受質溶液）。用50 微升/孔終止溶液（2 N H2S04)終止反應。讀取吸光度 (A450-A5 70)且使用 SoftMax Pro分析資料。如圖5中所示，C3b抗體能夠藉由抑制C3a及C5a之產生來阻斷替代路徑驅動之補體活化。更特定言之，本文所述，之C3b抗體如藉由抑制C3a及C5a產生所測量以小於或等於 50 nM之IC50抑制替代路徑。 C3b抗體抑制活體外C3轉化酶活性基於C3水缓慢轉化（tick-over)轉化酶凝膠之檢定在此檢定中，Fabs/IgGs與含C3之10% C3-水預培育，使得添加因子D及因子B時，可測量經由C3水緩慢轉化之轉化酶活性。蛋白質試劑以下列最終濃度使用··天然因子 B(100 nM)、因子D(40 nM)、C3(400 nM)、MgCl(5 mM)及 Fab/IgG 1000 nM，進行後續稀釋。在96孔聚丙烯板中，添加Fabs/IgGs各種稀釋液（包括PBS對照樣品）。向其中添加C3且在室溫培育1小時。隨後製備因子B、因子D及MgCl 於1 xPBS中之儲備混合物。1小時培育後，添加適量反應混合物至各孔之Fab/IgG-C3中。即刻取零時間點，且添加 4χ樣品緩衝液並置於95°C。轉化酶反應物在室溫培育15分鐘。隨後取最終時間點，且添加4χ樣本缓衝液並置於 95°C。各樣品之全部體積在4-12% Bis-Tris凝膠上在還原條件下進行電泳。（零時間點亦可在省去因子D之另一反應中產生）。基於C3b凝膠之轉化酶檢定 148032.doc -172- 201043638 設計此檢定使得Fabs/IgGs與C3b —起預培育。在培育後，將其添加至C3反應混合物中以檢查轉化酶活性。蛋白質試劑以下列最終濃度使用：天然C3b(32 nM)、天然因子 B(100 nM)、因子D(40 nM)、C3(400 nM)、MgCl(5 mM)及 Fab/IgG 1000 nM，進行後續稀釋。在96孔聚丙烯板中’ 添加適當體積之Fab/IgG各種稀釋液（包括PBS對照樣品）° 向其中每孔添加適量C3b。在37Ό培育1小時。隨後製備因子B、因子D及MgCl於lxPBS中之儲備混合物。1小時培育後，向儲備混合物中添加C3 ’且即刻添加適量反應混合物至各孔中之Fab/IgG -C3中。即刻取零時間點，且添加4x樣品緩衝液並置於95°C。轉化酶反應物在室溫培育15分鐘。隨後取最終時間點，且添加4x樣本緩衝液並置於95 °C °各樣品之全部體積在4-12% Bis-Tris凝膠上在還原條件下進行電泳。（零時間點亦可在省去因子D之另一反應中產生）。基於預先形成之轉化酶凝膠之檢定設計該檢定使得使用C3b、因子B突變體及因子D產生穩定轉化酶。向其中添加Fab/IgG且進行培育。隨後添加C3 且取樣進行分析。C3b不能形成轉化酶。蛋白質試劑以以下最終濃度使用：天然C3b(32 nM)、因子B突變體（16 nM)、因子D(40 nM)、C3(400 nM)、MgCl(5 mM)及FaWIgG 1000 nM，進行後續稀釋。在96孔聚丙烯板中，添加C3b、因子B、因子D及MgCl且在37°C下培育1〇分鐘。隨後以適當稀釋度添加Fab/IgG(PBS對照）且在37°C下培育20分鐘。 148032.doc •173· 201043638 隨後添加C3且在室溫下培育15分鐘。即刻取零時間點且添加4χ樣品缓衝液並置於95°C下。在室溫下將轉化酶反應物培育15分鐘。隨後取最終時間點且添加4χ樣本緩衝液並置於95°C下。在還原條件下，在4-12% Bis-Tris凝膠上對各樣品之全部體積進行電泳。（零時間點亦可在省去因子D之另一反應中產生）。如圖6中所示，C3b抗體抑制替代路徑活體外C3轉化酶酶活性。圖6A展示SDS-PAGE凝膠，其顯示對缓慢轉化轉化酶酶活性之抑制。圖6B展示對6A中之凝膠中C3b產生之抑制的定量。圖6C展示抗C3b抗體抑制預先形成之C3轉化酶酶活性。 C3b抗體抑制活體外C5轉化酶酶活性為進一步表徵抗C3b抗體抑制替代補體路徑之能力，檢驗該等抗體抑制C5轉化酶活化之能力。簡言之，藉由在室溫下與經純化之C3及胰蛋白酶（Sigma)—起培育10分鐘使 C3b沈積於酵母聚糖A(Sigma)上。離心酵母聚糖且移除上清液，且藉由添加經純化之C3、fB、fD及NiCl2擴增C3b。重複擴增步驟直至在酵母聚糖上獲得所需C3b密度。在室溫下將Fab/IgG與酵母聚糖-C3b—起預培育45分鐘。添加經純化之蛋白質（Complement Tech) : C5(100 nM) > C6(100 nM)、fB(500 nM)、fD(160 nM)及 5 mM NiCl2。在37°C下培育反應物5分鐘且利用於冰冷GVB + 10 mM EDTA中之1:10稀釋液終止。藉由添加反應產物至 chRBC(8E7/ml)及2%人類血清中且在37°C下培育30分鐘， 148032.doc -174- 201043638 使用溶血檢定定量C5bC6含量。在2000 rpm下離心細胞5分鐘且在A415/A570下讀取上清液。使用經純化之C5bC6蛋白（Complement Tech)作為標準曲線。如圖7中所示’ C3b抗體抑制替代路徑活體外C5轉化酶酶活性。藉由C3b抗體阻斷補體因子結合於C3b 進行以下實驗來測定抗C3b抗體抑制C3b與替代補體路徑其它成員之間相互作用之能力且由此證明該等抗體抑制替代補體路徑之潛在機制。簡言之，在室溫下48小時培育期間使用AminoLink還原劑（Pierce)使經純化之C3b及fP與未共輛受體或供體珠粒（PerkinElmer)共耗。使用叛曱氧基胺半鹽酸鹽（Aldrich)淬滅珠粒且藉由在uooo rpm下離心純化並以0.1 M TBST洗滌三次。在室溫下在3〇分鐘培育期間使用20倍莫耳過量之NHS產色生物素（Pierce)對經純化之 fB(D24G/N260D)及fH進行生物素標記且使用Zeba 0.5 ml 脫鹽管柱（Pierce)進行純化。為進行C3b-C3b及C3b-fP近接檢定，在室溫下分別將Fab 或IgG與C3b受體珠粒（20 pg/ml)—起預培育60分鐘。隨後添加C3b供體珠粒或fP供體珠粒（20 pg/ml)，且在室溫下培育板隔夜，隨後讀取。為進行C：3b-fB及C3b-fH近接檢定，在室溫下將抗體與C3b受體珠粒（20 pg/ml)—起預培育60分鐘。隨後添加經生物素標記之fB(D24G/N260D)或fH且在室溫下培育60分鐘。隨後添加SA供體珠粒（20 Ι^/ιη1)且在室溫下培育板隔夜，隨後讀取。在BMG pherastar上讀取 148032.doc -175- 201043638 板（ex=680，em=520-620)。如圖8中所示，C3b抗體阻斷若干補體因子結合於C3b。如圖中可見，抗C3b抗體利用不同作用機制阻斷替代補體路徑。圖8A展示藉由C3b抗體抑制因子B結合於C3b。圖8B 展示藉由C3b抗體抑制因子P結合於C3b。圖8C展示藉由 C3b抗體抑制因子Η結合於C3b。圖8D展示藉由C3b抗體抑制C3b-C3b二聚體形成。 C3b抗體不與人類C3d或人類C5交叉反應檢驗抗C3b抗體與人類C3d及C5之交叉反應性。測試與人類C3b、人類C3d或獼猴C3b結合之ELISA中所用的捕捉抗體為針對C3d蛋白之抗體兔多株抗人類C3d (Abeam)，該C3d為C3b之子域。以在PBS中稀釋至2 pg/ml 之捕捉抗體填充Maxisorp板之孔。密封板且在4°C下培育隔夜。為檢驗Fab與C5之結合，捕捉抗體為以5 pg/ml最終濃度使用之抗C5抗體（US Biologicals)。次日藉由添加PBST/5%奶粉阻斷板上之剩餘結合位點。在室温下培育板1小時且隨後用PBST洗滌兩次。以稀釋於 PBST/0.5%奶粉中2.5 pg/ml之最終濃度添加C3b。在室溫下培育板1小時且隨後用PBST洗滌3次。製備Fab之連續稀釋液且隨後添加至經阻斷之板中。在室溫下培育板1 -2小時且隨後用PBST洗滌3次。為偵測Fab，添加抗HIS AP共輛抗體（Invitrogen, 46-0284)，在室溫下培育板1小時且隨後用TBST洗滌5次。根據製造商說明書使用螢光受質AttoPhos。在Tecan GENios 148032.doc -176- 201043638

Pro板讀取器中測量螢光。 C3d及C5之該等實驗結果分別展示於圖9及10中。如所示，C3b抗體不結合C3d或C5。 C3b抗體以相同程度識別iC3b及C3c 為測定本文所述之抗C3b抗體是否可結合於補體路徑組分iC3b及C3c，進行以下步驟：以每孔1〇〇 μΐ向Coat Maxisorp 板 Nunc(442404)上直接添加含 2 pg/ml iC3b(complement Technologies A115)、C3d(complement Technologies A117) 或 C3c(complement Technologies A116)之碳酸鹽緩衝液。密封板且在4°C下培育隔夜。抽吸板且以PBS/0.5% Tween 20洗滌3次。用稀釋劑（PBS、4% BSA部份V(Fisher ICN16006980) ' 0.1% Tween 20(Sigma P1379) ' 0.1% Triton X-100(Sigma P234729)阻斷板且在室溫下培育2小時或在 4°C下培育隔夜。隨後用PBS/0.5% Tween 20洗滌板一次。將Fab以100 nM及後續稀釋液（或必要時較高濃度）稀釋於稀#劑中且每孔塗鋪1 00 μΐ。在室溫下培育1小時。以 PBS/0.5% Tween 20洗滌板3次。每孔添加100微升於稀釋劑中以1··400稀釋之抗組胺酸-HRP單株偵測抗體且在室溫下培育1小時。隨後以PBS/0.5% Tween 20洗滌4次。添加 100 μΐ TMB受質（Pierce 34028)且在室溫下培育至多5分鐘。添加50終止溶液（2 N硫酸）至各孔中且在450 nm下讀取板且在570 nm下校正塑膠讀數。如圖11中所示，C3b抗體與iC3b及C3c交叉反應。物種交叉反應性 148032.doc •177- 201043638 為測定除人類及獼猴之外本文所述之抗C3b抗體是否亦可能結合於其它物種之C3b，如上所述進行溶血檢定。各物種之所用血清濃度如下：10%大鼠血清；20%兔血清； 10%豬血清；20%小鼠血清；10%天竺鼠血清；及10%犬血清。如圖12中所示，C3b抗體能夠與若干物種交又反應，包括大鼠、兔、猪、小鼠及天竺鼠。

Fab格式C3bneo結合劑除上述完全IgG格式抗C3b抗體之外，亦可使用相同可變域來構築Fab格式抗原結合片段。根據上文中所述之方法評估抗C3b Fab來測定其結合特徵。表11概述Fab子集之結合親和力、功能性效能及對補體因子結合之抑制。 148032.doc 178- 201043638 ο ο Μ I C3(H20) I I_iC3b I I C3d I ¥P κ〇 U) 〇 ¥P κ〇 1 Μ〇Α IC50(nM) | | C3b-(H | Μ d K〇 <Ν ό cs d | C3b-fP | ¥Ρ | C3b-fB | L_〇-i5 I <Ν - 1 C5a (ηΜ) | 截 < 卜 s to <〇 1 C3a(nM) | % 给 £ 1 MAC Dep (ηΜ) | 弊褰 CO 00 卜嫘 < «Ο <〇 1 C3bD8p(nM) 1 % 赛 Ο 5 漿 < ΙΟ - 1 ΗΑ(ηΜ), 10% | 獎赛 Ο) σ> <s 0D <M σ> 駿 < <Ν *D V S LU W ί Q 〇籙 α> <〇 Φ 厂241 | | huC3b | u> CO (Ο <N U7 Φ (Β m ί α ο 〇赛 o L 119 I I 562 | | huC3b | (D <0 «ο Ιί> 5 Γ Fab I IMOR95S61 |MOR9610| | MOR9674 | |MOR9675| 148032.doc •179 201043638 本發明之實施例本發明包括（但不限於）以下實施例： 1 · 一種特異性結合於人類或獼猴補體C3b蛋白之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體以小於或等於1〇〇 pM之KD結合於人類C3b。 2.前述段落之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段亦以小於或等於25〇之KD結合於獼猴C3b。 3·任何前述段落之經分離抗體或抗原結合片段，其中该杬體或其抗原結合片段以小於或等於1〇 pMiKD結合於人類C3b。 4·任何前述段落之經分離抗體或其抗原結合片段，其中忒抗體或抗原結合片段以小於或等於2卩河之KD結合於人類C3b。 5·任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體如藉由活體外洛血檢定所測量以小於或等於65 nM2 IC5〇抑制人類替代補體路徑。 6·任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體如藉由活體外C3b沈積所測量以小於或等於5〇 nMiIC5〇抑制人類替代補體路徑。 7.任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體如藉由補體膜攻擊複合物之沈積所測量以小於或等於5 nM之IC5〇抑制人類替代補體路徑。 8'任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體如藉由 H8032.doc 201043638 C3a及C5a之產生所測量以小於或等於1〇〇 ηΜ2Ι(：5 替代補體路徑。 ^ 9. 任何前述段落之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類或獼猴補體 C3b蛋白質且與表i中所述之抗體交叉競爭。 10. 任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體為單株抗體。 0 U.任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體為人類或人類化抗體。 12. 任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體為嵌合抗體。 13. 任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體為單鏈抗體。 14. 任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體為Fab片段或ScFv片段。 Q 15·任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體為IgG同型〇 16.任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體包含已在來自各別人類VH或VL生殖系序列之抗體構架中進行胺基酸取代之構架。 17·任何前述段落之經分離抗體，其中該抗體以該抗體結合於C3之親和力至少1〇〇〇倍的親和力結合於C3b。 18.任何前述段落之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO: 1、 148032.doc -181 - 201043638 15、 29、43、57、71、85、99、113、127、141、155 ' 169及183組成之群之重鏈CDR1 ;選自由SEQ ID NO: 2、 16、 30、44、58、72、86、100、114、128、142、156、 170及184組成之群之重鏈CDR2 ;及選自由SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、73、87、101、115、129、143、 157、171及185組成之群之重鏈CDR3，其中該經分離抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白C3b。 19.任何前述段落之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEq ID NO: 4、 18 、 32 、 46 、 60 、 74 、 88 、 102 、 116 、 130 、 144 、 158 、 172及186組成之群之輕鏈CDR1 ;選自由SEQ ID NO: 5、 19、33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、 173及187組成之群之輕鏈cdr2 ;及選自由SEQ ID NO: 6 20、34、48、62、76、90、104、118、132、146、 160、174及188組成之群之輕鏈cDR3，其中該經分離抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白C3b。

，其中該之群之輕鏈CDR1 ;選自由SEq id NO: 5、19 18 ' 32 > 46 ' 172及186組成 5 、 19 、 33 、 47 、 λ

48、62、76、90、104、118、 159、173 及 187 組成、20 、 34 、 118、132、146、160、174及 188 組成之群之輕鏈CDR3。 148032.doc •182- 201043638 可月〗述敫落之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含選自由S E Q】D N 〇 · 7、2 i、 35、49、63、77、91、1〇5、119、133、147、161、175及 189組成之群之重鏈可變域序列， SEQ ID NO: 8、22、36、50、64 且進一步包含選自由 78 、 92 、 106 、 120 、 148 I62、176及190組成之群之輕鏈可變域序列，其中A ’、呈刀離抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白 C3b。

22.任何前述段落之經分離抗體或其抗原结合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含與選自由SEQ ID NO: 7、 21 35、49、63、77、91、1〇5、119、133、147、161、 175及189組成之群之序列具有至少95%序列一致性的重鍵可變域’其中該抗體結合於C3b。 23·任何前述段落之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含與選自由SEQ m N〇: 8、 22 、 36 、 50 、 64 、 78 、 92 、 106 、 120 、 134 、 148 、 162 、 176及190組成之群之序列具有至少95%序列一致性的輕鏈可變域，其中該抗體結合於C3b。 24·前述段落之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段進一步包含與選自由SEq ID NO: 8、22、 36 、 50 、 64 、 78 、 92 、 106 、 120 、 134 、 148 、 162 、 176及 190組成之群之序列具有至少95%序列一致性的輕鏈可變域0 25.任何前述段落之經分離抗體或其抗原結合片段，其 148032.doc -183- 201043638 中該抗體或其抗原結合片段包含與選自由Seq id NO: 9、 23 、 37 、 51 、 65 、 79 、 93 、 107 、 121 、 135 、 149 、 163 、 177及191組成之群之序列具有至少95%序列一致性的重鏈，其中該抗體結合於C3b。 26.任何前述段落之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含與選自由SEq NO: 10、24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、 164、178及192組成之群之序列具有至少95%序列一致性的輕鏈，其中該抗體結合於C3b。 27.前述段落之經分離抗體或抗原結合片段，其進一步包含與選自由 SEQ ID N0: 10、24、38、52、66、8〇、 94、1〇8、122、136、150、164、m 及 192 組成之群之序列具有至少95%序列一致性的輕鍵。 2 8. —種醫藥組合物，其包合杯/ a 匕3任何則述段落之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑。 29 · —種經分離核酸，其包合維—人&明 i 3編碼包含與選自由SEq id NO: 7、21、35、49、63、77 "、91、ΐ〇5、η9、133、 147、 I6l、175及189組成之雜少产，鮮之序列具有至少95%序列一致性之重鏈可變域之多肽的序歹。 30. —種經分離核酸，其包合絶

^ 3編碼包含與選自由SEQ ID NO: 8、22、36、50、64、7s Λ 、92、106、120、134、 148、 162、176及190組成之群 # <序列具有至少95%序列一致性之輕鏈可變域之多肽的序歹。 31. -種載體’其包含前述段落之核酸。 I48032.doc -184. 201043638 32. —種經分離宿主細胞，其包含編碼任何前述段落之抗體或其抗原結合片段之重鏈的重組DNA序列及編碼任何前述段落之抗體或其抗原結合片段之輕鏈的第二重組dna 序列，其中該等DNA序列可操作地連接至啟動子且能夠在宿主細胞中表現。 33. 前述段落之經分離宿主細胞，其中該抗體為人類單株抗體。 34. 前兩段之經分離宿主細胞，其中該宿主細胞為非人類哺乳動物細胞。 35. —種治療年齡相關之黃斑變性的方法，其包含向有需要之個體投與有效量的包含前述段落之抗體或其抗原結合片段的組合物。 36. 前述段落之方法，其中該個體為人類。 37. —種抑制個體中替代補體路徑之方法，其包含向有需要之個體投與有效量的包含前述段落之抗體或其抗原結合片段的組合物。 3 8.前述段落之方法，其中該個體為人類。本文中引用之所有專利、專利申請案及公開之參考文獻均以全文引用的方式併人本文中。雖然本發明已參照其較佳實施例加以特定展示並描述，但熟習此項技術者應瞭解’可在不悻離附加巾請專利範圍所涵蓋之本發明範嘴下進行各種形式或細節上的改變。【圖式簡單說明】圖1展示C3b抗體以相料认s | , Λ 肢乂相對於C3咼至少looo倍之選擇性結 148032.doc •185- 201043638 合於C3b。圖2展示抗C3b抗體在10%人類或獼猴血清中抑制溶血之能力的實例。圖3展示C3b抗體抑制產生C3b作為C3分解產物之能力的實例。圖4展示證明C3b抗體抑制MAC沈積之能力的例示性資料。圖5展示C3b抗體藉由抑制C3a及C5a產生來阻斷替代路徑驅動之補體活化。圖6A展示顯示缓慢轉化轉化酶酶活性抑制之SDS-PAGE 凝膠。圖68展示6八中之凝膠中0313產生抑制之定量。圖6€ 展示抗C3b抗體抑制預先形成之C3轉化酶酶活性。圖7展示抗C3b抗體抑制活體外C5轉化酶酶活性。圖8A展示藉由C3b抗體抑制因子B結合於C3b。圖8B展示藉由C3b抗體抑制因子P結合於C3b。圖8C展示藉由C3b抗體抑制因子Η結合於C3b。圖8D展示藉由C3b抗體抑制C3b-C3b二聚體形成。圖9展示針對C3d之抗體交叉反應性檢定結果。圖10展示針對C5之抗體交叉反應性檢定結果。圖11展示為判定C3b抗體是否結合於iC3b或C3c所執行之結合檢定的結果。圖12展示物種交叉反應性研究結果。圖12A展示大鼠交叉反應性。圖12B展示兔交叉反應性。圖12C展示豬交叉反應性。圖12D展示小鼠交叉反應性。圖12E展示天竺鼠交叉反應性。圖12 F展示犬交叉反應性。 148032.doc -186- 201043638 序列表 <110>瑞士商諾華公司 <120>用於靶向補體蛋白C3B之抗體的組合物及方法 <130> 53586 <140> 099114417 <141> 2010-05-05 <150> 61/175,860 <151> 2009-05-06 <160> 198 <170> Patentln version 3.3

<210> 1 <211> 5 <212> PRT <213〉智人 <400> 1

Ser Tyr Trp Met Thr 1 5 <210> 2 <211〉 15 <212> PRT <213〉智人 <400〉 2

Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 15 10 15 <210> 3 <211〉 11 <212> PRT <213> 智人 <400> 3

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr 1 5 10 148032-序列表.doc 201043638 <210〉 4 <211〉 11 <212> PRT <213〉智人 <400〉 4

Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210〉 5 <211〉 7 <212〉 PRT <213〉智人〈400〉 5

Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser 1 5 <210> 6 <211〉 9 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 6

Gin Gin Tyr Asp Ser Tyr Ser Pro Thr 1 5 <210> 7 <211〉 118 <212> PRT <213〉智人 <400〉 7

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 -2 - 148032-序列表.doc 201043638

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Lys He Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

O

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr loo 105 no

Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210〉 8 〈211〉 107 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 8

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Asn Tyr 20 25 30 148032-序列表.doc 201043638

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Ser Tyr Ser Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 9 <211〉 448 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 9

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60 4- 148032-序列表.doc 201043638

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 ❹

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 148032-序列表.doc 201043638

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 325 330 335 lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 -6 148032-序列表.doc 201043638

Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210〉 10 〈211〉 214 <212> PRT 〈213〉智人 <400〉 10

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Ser Tyr Ser Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 148032-序列表.doc 201043638 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210〉 11 <211〉 354 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 11 60 120 180 240 300 gaggtgcaat tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctactgga tgacatgggt gcgccaggcc cctggcaagg gactggaatg ggtgtccagc atcaagatca agcccgacgg ctacgccgcc tccgtgaagg gccggttcac catcagccgg gacaacagca agaacaccct gtacctgcag atgaacagcc tgcgggccga ggacaccgcc gtgtactact gcgccagact gttctaccag tacttcgccc ggatggacta ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag ctca 148032-序列表.doc 354 60 60

201043638 <210〉 12 <211〉 321 <212〉DNA <213〉智人 <400〉 12 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc atcacctgcc gggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcaacc tgcagagcgg cgtgcccagc cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacgacagct acagccccac cttcggccag ggcaccaagg tggagatcaa g 〈210〉 13 〈211〉 1404 〈212〉 DNA <213〉智人 <400〉 13 atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtcgccgctc ccagatgggt gctgtccgag gtgcaattgg tggaatctgg cggcggactg gtgcagcctg gcggcagcct gagactgagc tgcgccgcca gcggcttcac cttcagcagc tactggatga catgggtgcg ccaggcccct ggcaagggac tggaatgggt gtccagcatc aagatcaagc ccgacggcta cgccgcctcc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac aacagcaaga acaccctgta cctgcagatg aacagcctgc gggccgagga caccgccgtg tactactgcg ccagactgtt ctaccagtac ttcgcccgga tggactactg gggccagggc accctggtga ccgtgagctc agcctccacc aagggtccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 148032-序列表.doc 120 180 240 300 321 60 120 180 240 300 360 420 480 540 201043638 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 720 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag cagcgggggg accgtcagtc 780 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960 cgggtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtct ccaacELaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1080 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1140 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1200 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1260 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1320 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1380 ctctccctgt ctccgggtaa atga 1404 <210> 14 <211> 642 <212> DNA <213〉智人 <400〉 14 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgcc gggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcaacc tgcagagcgg cgtgcccagc 180 •10· 148032·序列表.doc 240 201043638 cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacgacagct acagccccac cttcggccag ggcaccaagg tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt

O <210〉 15 <211〉 5 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 15

Ser Tyr Trp Met Thr 1 5

<210> 16 <211〉 15 <212> PRT <213〉智人 <400> 16

Ser lie Lys He Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 15 10 15 〈210〉 17 <211〉 11 <212〉 PRT 〈213>智人 -11- 300 360 420 480 540 600 642 148032-序列表.doc 201043638 <400〉 17

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr 1 5 10 <210〉 18 〈211〉 11 〈212〉 PRT <213〉智人 <400> 18

Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210〉 19 <211〉 7 <212〉 PRT <213> 智人 <400〉 19

Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser 1 5 <210〉 20 <211〉 9 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 20 1 <210〉 21 〈211〉 118 <212> PRT <213〉智人

Gin Gin His Asp Thr Phe Arg Pro Thr -12- 148032-序列表.doc 201043638 <400〉 21

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser He Lys He Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 〇 50 55 60

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210〉 22 <211〉 107 <212> PRT <213〉智人 <400> 22

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 -13- 148032-序列表.doc 201043638

Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asp Thr Phe Arg Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 <210〉 23 <211> 448 〈212〉 PRT <213〉智人 <400> 23

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 14- 148032-序列表.doc 201043638

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 ❹

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160

O

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 15· 148032·序列表.doc 201043638

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 16- 148032-序列表.doc 201043638

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445

<210〉 24 <211〉 214 <212> PRT <213〉智人 <400> 24

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

O

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asp Thr Phe Arg Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala -17- 148032·序列表.doc 201043638 100 105 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asm Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 25 <211〉 354 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 25 gaggtgcaat tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctactgga tgacatgggt gcgccaggcc cctggcaagg gactggaatg ggtgtccagc atcaagatca agcccgacgg ctacgccgcc tccgtgaagg gccggttcac catcagccgg gacaacagca agaacaccct gtacctgcag •18- 148032·序列表.doc 201043638 atgaacagcc tgcgggccga ggacaccgcc gtgtactact gcgccagact gttctaccag tacttcgccc ggatggacta ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag ctca <210> 26 <211〉 321 〈212〉 DNA <213〉智人〈400〉 26 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc atcacctgtc gggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcaatc tgcagagcgg cgtgcccagc cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatttcctc tctgcagcct gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cacgacacct tccggcccac cttcggccag ggcaccaagg tggagatcaa g <210> 27 <211> 1404 <212> DNA <213〉智人

<400〉 27 atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtcgccgctc ccagatgggt gctgtccgag gtgcaattgg tggaatctgg cggcggactg gtgcagcctg gcggcagcct gagactgagc tgcgccgcca gcggcttcac cttcagcagc tactggatga catgggtgcg ccaggcccct ggcaagggac tggaatgggt gtccagcatc aagatcaagc ccgacggcta cgccgcctcc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac aacagcaaga acaccctgta cctgcagatg aacagcctgc gggccgagga caccgccgtg tactactgcg ccagactgtt ctaccagtac ttcgcccgga tggactactg gggccagggc accctggtga ccgtgagctc agcctccacc • 19· 148032-序列表.doc 201043638 aagggtccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 720 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag cagcgggggg accgtcagtc 780 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960 cgggtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1080 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1140 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1200 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1260 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1320 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1380 ctctccctgt ctccgggtaa atga 1404 〈210〉 28 <211〉 642 <212> DNA 〈213> 智人〈400〉 28 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 20· 148032-序列表.doc 120 201043638 atcacctgtc gggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcaatc tgcagagcgg cgtgcccagc cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatttcctc tctgcagcct gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cacgacacct tccggcccac cttcggccag ggcaccaagg tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacgO ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 180 240 300 360 420 480 540 600 642 G <210><211〉<212〉 <213> <400〉 <210〉 29 <211> 5 〈212〉 PRT <213〉智人 <400〉 29 Ser Tyr Trp Met Thr 5 30 15 PRT 智人 30 Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 15 10 15 〈210〉 31 148032-序列表.doc -21 - 201043638 <211〉 11 〈212〉 PRT <213〉智人〈400〉 31

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213〉智人 <400> 32

Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213〉智人 <400〉 33

Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser 1 <210> 34 〈211〉 9 <212〉 PRT <213> 智人 <400〉 34

Gin Gin Trp Asp Ser Phe Ser Pro Thr 1 5 <210〉 35 22- 148032-序列表.doc 201043638 <211〉 118 <212> PRT <213〉智人 <400> 35

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 〇 35 40 45

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr loo 105 no

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 36 <211> 107 <212> PRT <213〉智人 <400> 36 -23- 148032-序列表.doc 201043638

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Asp Ser Phe Ser Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 37 <211> 448 <212> PRT <213〉智人 <400> 37

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 -24· 148032-序列表doc 201043638

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser He Lys He Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 ❹

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175

Ser Ser Gly Lea Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 -25· 148032-序列表.doc 201043638

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 -26· 148032-序列表.doc 201043638

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445

O <210> 38 <211> 214 <212> PRT <213〉智人〈400〉 38

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30 ❹

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Asp Ser Phe Ser Pro -27- 148032·序列表.doc 201043638 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 39 <211〉 354 〈212〉 DNA <213〉智人 <400〉 39 gaggtgcaat tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctactgga tgacatgggt gcgccaggcc -28 · 60 120 148032-序列表.doc 201043638 cctggcaagg gactggaatg ggtgtccagc atcaagatca agcccgacgg ctacgccgcc 180 tccgtgaagg gccggttcac catcagccgg gacaacagca agaacaccct gtacctgcag 240 atgaacagcc tgcgggccga ggacaccgcc gtgtactact gcgccagact gttctaccag 300 tacttcgccc ggatggacta ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag ctca 354 <210> 40 〈211〉 321 〈212〉 DNA <213〉智人

<400〉 40 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgtc gggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcaatc tgcagagcgg cgtgcccagc 180 cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatctcctc tctgcagcct 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tgggacagct tcagccccac cttcggccag 300 ggcaccaagg tggagatcaa g 321 ❹ <210> 41 <211〉 1404 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 41 atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtcgccgctc ccagatgggt gctgtccgag gtgcaattgg tggaatctgg cggcggactg gtgcagcctg gcggcagcct gagactgagc tgcgccgcca gcggcttcac cttcagcagc tactggatga catgggtgcg ccaggcccct ggcaagggac tggaatgggt gtccagcatc aagatcaagc ccgacggcta cgccgcctcc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac aacagcaaga acaccctgta cctgcagatg 60120 180 240 148032·序列表 _doc -29- 300 201043638 aacagcctgc gggccgagga caccgccgtg tactactgcg ccagactgtt ctaccagtac 360 ttcgcccgga tggactactg gggccagggc accctggtga ccgtgagctc agcctccacc 420 aagggtccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 720 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag cagcgggggg accgtcagtc 780 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960 cgggtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1080 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1140 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1200 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1260 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1320 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1380 ctctccctgt ctccgggtaa atga 1404 〈210〉 42 〈211〉 642 <212> DNA <213〉智人 -30- 148032·序列表.doc 60201043638 Ο <400〉 42 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc atcacctgtc gggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcageiagccc ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcaatc tgcagagcgg cgtgcccagc cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatctcctc tctgcagcct gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tgggacagct tcagccccac cttcggccag ggcaccaagg tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 120 180 240 300 360 420 480 540 600 642 <210〉 43 <211〉 5 <212> PRT <213〉智人

<400〉 43 Ser Tyr Thr Phe Ser 1 5 〈210〉 44 <211〉 17 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 44

Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 148032-序列表.doc -31- 201043638 1 Gly 〈210〉 45 <211〉 16 <212> PRT <213〉智人〈400〉 45

Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu Asp Val 15 10 15 〈210〉 46 <211> 11 <212〉 PRT <213> 智人 <400〉 46

Arg Ala Ser Gin Asn He Asn Tyr Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213〉智人 <400〉 47

Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser 1 5 <210〉 48 <211〉 10 <212〉 PRT <213〉智人 32- 148032-序列表.doc 201043638 <400> 48

Gin Gin Ser Trp Ser Val Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 49 <211〉 125 <212〉 PRT 〈213〉智人 <400> 49

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 -33- 148032-序列表.d〇c 201043638 <210> 50 <211> 108 <212> PRT <213〉智人 <400> 50

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn He Asn Tyr Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Trp Ser Val Pro Pro 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 51 <211〉 455 <212> PRT <213〉智人 <400> 51 34· 148032-序列表.doc 201043638

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

O

Gin Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 35 148032_ 序列表.doc 201043638

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys 195 200 205

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255

Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr 290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335

Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 340 345 350 148032-序列表.doc . -36- 201043638

Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365

Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 o

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 〈210〉 52 〈211〉 215 <212〉 PRT <213〉智人〈400〉 52

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn He Asn Tyr Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie -37- 148032-序列表.doc 201043638 35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Trp Ser Val Pro Pro 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160

Q

Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys -38 - 148032-序列表.doc 201043638 210 215 <210〉 53 〈211> 375 <212> DNA 〈213> 智人 <400〉 53 gaggtgcaat tggtgcagag cggagccgaa gtgaagaagc ccggcagcag cgtcaaggtg tcctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc agctacacct tcagctgggt gcgccaggcc ccaggacagg gcctggaatg gatgggcaac atcctgccca tcttcggcga cgccaactac gcccagaagt tccagggcag agtcaccatc accgccgacg agagcaccag caccgcctac atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ccggaacaag ggcgccttct actacatgag cacctacccc agcctggacg tgtggggcca gggcaccctg gtgaccgtga gctca <210〉 54 <211> 324 <212〉 DNA <213〉智人〈400〉 54 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc atcacctgtc gggccagcca gaacatcaac tactacctga actggtatca gcagaagccc ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgac gccttcagcc tgcagagcgg cgtgcccagc cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatttcctc tctgcagcct gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tcttggagcg tgcccccctt caccttcggc cagggcacca aggtggagat caag <210> 55 148032-序列表.doc -39- 60 120 180 240 300 360 375 60 120 180 240 300 324 201043638 <211> 1365 <212> mk 〈213>智人 <400〉 55 gaggtgcaat tggtgcagag cggagccgaa gtgaagaagc ccggcagcag cgtcaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc agctacacct tcagctgggt gcgccaggcc 120 ccaggacagg gcctggaatg gatgggcaac atcctgccca tcttcggcga cgccaactac 180 gcccagaagt tccagggcag agtcaccatc accgccgacg agagcaccag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ccggaacaag 300 ggcgccttct actacatgag cacctacccc agcctggacg tgtggggcca gggcaccctg 360 gtgaccgtga gctcagcctc caccaagggt ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagagagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720 gaagcagcgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900 gaggagcagt acaacagcac gtaccgggtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960 tggctgaatg gcaaggagia caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 1080 ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200 •40· 148032·序列表.doc 1260201043638 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa 1320 1365

O <210〉 56 <211〉 645 〈212〉 DNA <213〉智人 <400〉 56 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc atcacctgtc gggccagcca gaacatcaac tactacctga actggtatca gcagaagccc ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgac gccttcagcc tgcagagcgg cgtgcccagc cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatttcctc tctgcagcct gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tcttggagcg tgcccccctt caccttcggc cagggcacca aggtggagat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 645 <210〉 57 <211〉 5 <212> PRT <213〉智人 <400〉 57 148032·序列表.doc •41· 201043638

Ser Tyr Thr Phe Ser 1 5 〈210〉 58 <211> 17 〈212〉 PRT <213〉智人 <400〉 58

Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15

Gly <210> 59 <211〉 16 <212> PRT <213〉智人 <400> 59

Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu Asp Val 15 10 15 <210〉 60 <211> 11 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 60

Arg Ala Ser Gin Asn lie Asn Tyr Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 61 <211〉 7

<212> PRT -42- 148032-序列表.doc 201043638 <213〉智人 <400〉 61

Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> 62 <211> 10 <212> PRT <213〉智人 <400> 62

Gin Gin Ser lie Ala Val Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210〉 63 〈211〉 125 <212> PRT <213〉智人 <400〉 63

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Asn lie Leu Pro He Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 •43- 148032-序列表.doc 201043638

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 64 <211> 108 <212> PRT <213〉智人 <400> 64

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Asn Tyr Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser lie Ala Val Pro Pro 85 90 95 44- 14803 2-序列表.doc 201043638

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 <210> 65 〈211〉 455 <212> PRT <213〉智人 <400〉 65

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 〇

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 45· 148032-序列表 _doc 201043638

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys 195 200 205

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255

Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr 290 295 300 46- 148032-序列表.doc 201043638

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335

Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 340 345 350

Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365

O

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 66 <211〉 215 <212〉 PRT <213〉智人 47· 148032-序列表.doc 201043638 <400> 66

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Asn Tyr Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser lie Ala Val Pro Pro 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160

Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 48- 148032-序列表.doc 201043638 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 ❹ <210〉 67 <211〉 375 <212> DNA <213〉智人 <400> 67 gaggtgcaat tggtgcagag cggagccgaa gtgaagaagc ccggcagcag cgtcaaggtg tcctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc agctacacct tcagctgggt gcgccaggcc ccaggacagg gcctggaatg gatgggcaac atcctgccca tcttcggcga cgccaactac gcccagaagt tccagggcag agtcaccatc accgccgacg agagcaccag caccgcctac atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ccggaacaag ggcgccttct actacatgag cacctacccc agcctggacg tgtggggcca gggcaccctg gtgaccgtga gctca <210> 68 <211> 324 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 68 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc -49· 148032·序列表.doc 201043638 atcacctgtc gggccagcca gaacatcaac tactacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgac gccttcagcc tgcagagcgg cgtgcccagc 180 cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatttcctc tctgcagcct 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcattgccg tgcccccctt caccttcggc 300 cagggcacca aggtggagat caag 324 <210> 69 <211〉 1365 〈212〉 DNA <213〉智人 <400> 69 gaggtgcaat tggtgcagag cggagccgaa gtgaagaagc ccggcagcag cgtcaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc agctacacct tcagctgggt gcgccaggcc 120 ccaggacagg gcctggaatg gatgggcaac atcctgccca tcttcggcga cgccaactac 180 gcccagaagt tccagggcag agtcaccatc accgccgacg agagcaccag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ccggaacaag 300 ggcgccttct actacatgag cacctacccc agcctggacg tgtggggcca gggcaccctg 360 gtgaccgtga gctcagcctc caccaagggt ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagagagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720 gaagcagcgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 -50- 148032-序列表.doc 900 900

201043638 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgggtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg o cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa <210〉 70 <211〉 645 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 70 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc atcacctgtc gggccagcca gaacatcaac tactacctga actggtatca gcagaagccc ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgac gccttcagcc tgcagagcgg cgtgcccagc cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatttcctc tctgcagcct gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcattgccg tgcccccctt caccttcggc cagggcacca aggtggagat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 148032·序列表.doc •51· 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1365 60 120 180 240 300 360 420 480 540 201043638 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 600 645 <210〉 71 <211〉 5 〈212〉 PRT <213〉智人〈400〉 71

Ser Tyr Ser Met His 1 5 <210> 72 <211> 17 <212> PRT <213〉智人 <400> 72

Leu He Asn Pro Tyr Asn Gly Asn Thr His Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 1 5 10 15

Gly <210> 73 <211〉 6 <212> PRT <213〉智人 <400〉 73

Met Leu Arg Phe Asp Val 1 5 <210〉 74 <211> 14 52- 148032-序列表.doc 201043638 <212> PRT <213〉智人 <400> 74

Thr Gly Thr Ser Ser Asp Gly Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 75 <211> 7 <212> PRT <213〉智人〈400〉 75

O

Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 76 <211〉 11 <212> PRT <213〉智人 <400〉 76

Gin Thr Tyr Thr Arg Tyr Ser Asp Ser Pro Val 1 5 10

G <210〉 77 <211〉 115 <212〉 PRT 〈213〉智人 <400> 77

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 -53- 148032-序列表.doc 201043638

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Asn Thr His Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Met Leu Arg Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110

Val Ser Ser 115 <210〉 78 <211〉 113 <212> PRT <213〉智人 <400> 78

Glu Ser Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Gly Gly Gly Tyr 20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 • 54- 148032-序列表.doc 201043638

Met lie Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Ser Gly Leu 65 70 75 80

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Thr Arg Tyr 85 90 95

Ser Asp Ser Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 o

Gin <210> 79 <211> 445 〈212〉 PRT <213〉智人 <400> 79

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 ❹

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Asn Thr His Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60 55- 148032-序列表.doc 201043638

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser He Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Met Leu Arg Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly 165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190

Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205

Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 -56· 148032-序列表.doc 201043638

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300

O

Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 325 330 335

Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 415 57 148032-序列表.doc 201043638

Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 80 <211〉 217 <212〉 PRT <213> 智人 <400> 80

Glu Ser Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Gly Gly Gly Tyr 20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45

Met lie Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 75 80

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Thr Arg Tyr 85 90 95

Ser Asp Ser Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110

Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 58- 148032-序列表.doc 201043638 115 120 125

Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe 130 135 140

Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 145 150 155 160

Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys 165 170 175

Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser 180 185 190

His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 195 200 205

Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210〉 81 <211> 345 <212> DNA G 〈213> 智人 <400> 81 gaggtgcagc tggtgcagag cggagccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgtgaaggtg tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacagca tgcactgggt ccggcaggct ccagggcagg gactggaatg gatgggcctg atcaacccct acaacggcaa cacccactac gcccagaaat tccagggcag agtgaccatg acccgggaca ccagcatcag caccgcctac atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ccggatgctg cggttcgacg tgtggggcca gggcaccctg gtcaccgtca gctca -59- 60 120 180 240 300 148032·序列表.doc 345 201043638 <210> 82 <211〉 333 <212> DNA 〈213>智人 <400〉 82 gagagcgccc tgacccagcc tgccagcgtg tctggcagcc ctggccagag catcaccatc 60 agctgcaccg gcaccagcag cgacggcgga ggctacaact acgtgtcctg gtatcagcag 120 caccccggca aggcccccaa gctgatgatc tacggcgtga gcaaccggcc cagcggggtg 180 tccaaccggt tcagcggcag caagagcggc aacaccgcca gcctgaccat ctctgggctg 240 caggctgagg acgaggccga ctactactgc cagacctaca ccagatacag cgacagccct 300 gtgttcggag gcggaacaaa gttaaccgtc eta 333 <210> 83 <211> 1335 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 83 gaggtgcagc tggtgcagag eggageegaa gtgaagaaac caggcgcttc cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacagca tgcactgggt ccggcaggct 120 ccagggcagg gactggaatg gatgggcctg atcaacccct acaacggcaa cacccactac 180 gcccagaaat tccagggcag agtgaccatg acccgggaca ccagcatcag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagegaggae accgccgtgt actactgcgc ccggatgctg 300 cggttcgacg tgtggggcca gggcaccctg gtcaccgtca gctcagcctc caccaagggt 360 ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540 • 60- 148032-序列表.doc 201043638 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600 aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagagagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagcagcgg ggggaccgtc agtcttcctc 720 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgggtg 900 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020 o ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1080 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320 ctgtctccgg gtaaa 1335 <210〉 84 〇 <211〉 651 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 84 gagagcgccc tgacccagcc tgccagcgtg tctggcagcc ctggccagag catcaccatc 60 agctgcaccg gcaccagcag cgacggcgga ggctacaact acgtgtcctg gtatcagcag 120 caccccggca aggcccccaa gctgatgatc tacggcgtga gcaaccggcc cagcggggtg 180 tccaaccggt tcagcggcag caagagcggc aacaccgcca gcctgaccat ctctgggctg 240 -61 - 148032-序列表.doc 201043638 caggctgagg acgaggccga ctactactgc cagacctaca ccagatacag cgacagccct 300 gtgttcggag gcggaacaaa gttaaccgtc ctaggtcagc ccaaggctgc cccctcggtc 360 actctgttcc cgccctcctc tgaggagctt caagccaaca aggccacact ggtgtgtctc 420 ataagtgact tctacccggg agccgtgaca gtggcctgga aggcagatag cagccccgtc 480 aaggcgggag tggagaccac cacaccctcc aaacaaagca acaacaagta cgcggccagc 540 agctatctga gcctgacgcc tgagcagtgg aagtcccaca gaagctacag ctgccaggtc 600 acgcatgaag ggagcaccgt ggagaagaca gtggccccta cagaatgttc a 651 <210> 85 <211> 5 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 85

Gly Tyr Tyr He Asn <210〉 86 <211〉 17 <212> PRT <213〉智人 <400> 86 lie lie Ser Pro Asn Gin Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe Gin

Gly

<210> 87 <211〉 8 <212> PRT •62- 148032·序列表.doc 201043638 <213〉智人 <400> 87

Gly Asn Tyr Asp His Leu Asp Tyr 1 5 〈210〉 88 <211〉 11 <212> PRT <213〉智人 <400〉 88

Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 89 <211〉 7 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 89

Asp Ala Ser Thr Leu Gin Ser 1 5 <210〉 90 <211〉 10 〈212〉 PRT 〈213> 智人 <400〉 90

Gin Gin Asp Trp His Thr Leu Pro Val Thr 1 5 10 <210> 91 <211> 117

<212〉 PRT -63 - 148032-序列表.doc 201043638 <213〉智人 <400> 91

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr He Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly He He Ser Pro Asn Gin Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Asn Tyr Asp His Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <210〉 92 <211〉 108 <212> PRT <213〉智人 <400〉 92

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly •64- 148032-序列表.doc 15 201043638

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Asp Trp His Thr Leu Pro 85 90 95

Val Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 〈210〉 93 〈211〉 447 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 93

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr He Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 •65 · 148032·序列表.doc 201043638

Gly lie lie Ser Pro Asn Gin Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Asn Tyr Asp His Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser 165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190

Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 -66- 148032·序列表.d〇c 201043638

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 o

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 • 67- 148032-序列表.doc 201043638

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210〉 94 <211〉 215 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 94

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Asp Trp His Thr Leu Pro 85 90 95 68- 148032-序列表.d〇c 201043638

Val Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160

O

Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 八 210 215 〇 <210> 95 〈211〉 351 <212〉 DNA 〈213〉智人〈400〉 95 gaggtgcagc tggtgcagag cggagccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgtgaaggtg tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctactaca tcaactgggt ccggcaggct ccagggcagg gactggaatg gatgggcatc atcagcccca accagggcac aaccggctac 69- 60 120 180 148032·序列表.doc 201043638 gcccagaaat tccagggcag agtgaccatg acccgggaca ccagcatcag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagaggcaac 300 tacgaccacc tggactactg gggccagggc accctggtca ccgtcagctc a 351 <210> 96 <211> 324 〈212〉 DNA <213〉智人 <400> 96 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgtc gggccagcca gggcatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgac gccagcaccc tgcagagcgg cgtgcctagc 180 agattctccg ggagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccattagctc actgcagcca 240 gaagacttcg ccacctacta ctgccagcag gactggcaca ccctgcccgt gaccttcggc 300 cagggcacca aggtggagat caag 324 <210> 97 <211〉 1341 <212> DNA <213〉智人 <400> 97 gaggtgcagc tggtgcagag cggagccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctactaca tcaactgggt ccggcaggct 120 ccagggcagg gactggaatg gatgggcatc atcagcccca accagggcac aaccggctac 180 gcccagaaat tccagggcag agtgaccatg acccgggaca ccagcatcag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagaggcaac 300 tacgaccacc tggactactg gggccagggc accctggtca ccgtcagctc agcctccacc 360 -70- 148032-序列表.doc 420 420

201043638 aagggtccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag cagcgggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ❹ ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgggtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa a <210〉 98 <211〉 645 <212> DNA 〈213> 智人 <400> 98 gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 148032-序列表.doc -71 - 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1341 60 201043638 atcacctgtc gggccagcca gggcatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgac gccagcaccc tgcagagcgg cgtgcctagc agattctccg ggagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccattagctc actgcagcca gaagacttcg ccacctacta ctgccagcag gactggcaca ccctgcccgt gaccttcggc cagggcacca aggtggagat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 120 180 240 300 360 420 480 540 600 645 <210〉 99 <211> 5 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 99

Ser Tyr Trp Met Thr 1 5 <210〉 100 <211〉 15 <212〉 PRT 〈213> 智人 <400〉 100

Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 15 10 15 <210〉 101 148032·序列表.doc -72- 201043638 <211> 11 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 101

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 102 〈211〉 11 <212〉 PRT 〈213> 智人〇 <400〉 102

Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 〈210〉 103 <211> 7 <212> PRT 〈213>智人 <400〉 103

Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser

<210〉 104 〈211〉 9 <212> PRT <213〉智人 <400> 104

Gin Gin Tyr Asp Ser Tyr Ser Pro Thr 1 5 <210> 105 73- 148032-序列表.doc 201043638 <211> 118 <212> PRT <213〉智人 <400> 105

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 106 <211〉 107 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 106 74- 148032-序列表.doc 201043638

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 ❹

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Ser Tyr Ser Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 107

<211> 220 <212〉 PRT 〈213>智人 <400〉 107

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 -75- 148032-序列表.doc 201043638

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 -76· 148032-序列表.doc 201043638

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 <210〉 108 <211〉 214 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 108

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Ser Tyr Ser Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 HO

Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala -77· 148032-序列表.doc 201043638 130 135 140

Lvs Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 109 <21.1> 354 <212> DNA <213〉智人 <400〉 109 caggtgcaat, tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg agctgcgcgg cctccggatt taccttttct tcttattgga tgacttgggt gcgccaagcc cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagctct attaagatta agcctgatgg ttatgctgct tctgttaagg gtcgtttt.ac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tttttatcag tattttgctc gtatggatta ttggggccaa ggcaccctgg tgacggttag ctca <210> 110 <211> 321 78· 60 120 180 240 300 148032-序列表,doc 354 60 201043638 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 110 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc attacctgca gagcgagcca ggatatttct aattatctga attggtacca gcagaaacca ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgct gcttctaatt tgcaaagcgg ggtcccgtcc cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct gaagactttg cggtttatta ttgccagcag tatgattctt attctcctac ctttggccag ggtacgaaag ttgaaattaa a o <210〉 111 <211〉 660 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 111 caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg agctgcgcgg cctccggatt taccttttct tcttattgga tgacttgggt gcgccaagcc cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagctct attaagatta agcctgatgg ttatgctgct tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa o atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tttttatcag tattttgctc gtatggatta ttggggccaa ggcaccctgg tgacggttag ctcagcgtcg accaaaggtc caagcgtgtt tccgctggct ccgagcagca aaagcaccag cggcggcacg gctgccctgg gctgcctggt taaagattat ttcccggaac cagtcaccgt gagctggaac agcggggcgc tgaccagcgg cgtgcatacc tttccggcgg tgctgcaaag cagcggcctg tatagcctga gcagcgttgt gaccgtgccg agcagcagct taggcactca gacctatatt tgceLacgtga accataaacc gagcaacacc aaagtggata aaaaagtgga accgaaaagc 148032-序列表.doc -79· 120 180 240 300 321 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 201043638 <210〉 112 <211> 642 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 112 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc attacctgca gagcgagcca ggatatttct aattatctga attggtacca gcagaaacca ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgct gcttctaatt tgcaaagcgg ggtcccgtcc cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct gaagactttg cggtttatta ttgccagcag tatgattctt attctcctac ctttggccag ggtacgaaag ttgaaattaa acgtacggtg gctgctccga gcgtgtttat ttttccgccg agcgatgaac aactgaaaag cggcacggcg agcgtggtgt gcctgctgaa caacttttat ccgcgtgaag cgaaagttca gtggaaagta gacaacgcgc tgcaaagcgg caacagccag gaaagcgtga ccgaacagga tagcaaagat agcacctatt ctctgagcag caccctgacc ctgagcaaag cggattatga aaaacataaa gtgtatgcgt gcgaagtgac ccatcaaggt ctgagcagcc cggtgactaa atcttttaat cgtggcgagg cc <210〉 113 <211〉 5 <212> PRT <213〉智人 <400> 113

Ser Tyr Trp Met Thr 1 5 <210〉 114 <211> 15 -80 - 148032-序列表.doc 201043638 <212> PRT <213〉智人 <400〉 114

Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 15 10 15 <210〉 115 <211> 11 〈212〉 PRT <213>智人 <400〉 115

O

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr 1 5 10 <210〉 116 <211〉 11 <212> PRT <213〉智人 <400〉 116

Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10

G <210〉 117 <211〉 7 <212> PRT <213〉智人 <400> 117

Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser 1 5 <210〉 118 <211> 9 -81 - 148032-序列表.doc 201043638 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 118

Gin Gin His Asp Thr Phe Arg Pro Thr 1 5 <210> 119 <211> 118 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 119

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 -82- 148032·序列表.doc 201043638

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210〉 120 〈211〉 107 〈212〉 PRT <213〉智人 <400> 120

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 〇

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asp Thr Phe Arg Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 〈210〉 121 <211〉 220 <212> PRT <213〉智人 -83- 148032-序列表.doc 201043638 <400> 121

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175 •84 148032-序列表.doc 201043638

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 <210〉 122 <211〉 214 <212> PRT O 〈213> 智人 <400> 122

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

O

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asp Thr Phe Arg Pro 85 90 95 85- 148032-序列表.doc 201043638

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val. Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Glv 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Va.l Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210〉 123 <211> 354 <212> DNA 〈213〉智人 <400〉 123 caggtgcaat tggtggaaag agctgcgcgg cctccggatt cctgggaagg gtctcgagtg cggcggcggc ctggtgcaac taccttttct tcttattgga ggtgagctct, attaagatta. cgggcggcag cctgcgtctg tgacttgggt gcgccaagcc agcctgatgg ttatgctgct 148032-序列表.doc 86- 201043638 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tttttatcag 300 tattttgctc gtatggatta ttggggccaa ggcaccctgg tgacggttag ctca 354 〈210〉 124 <211> 321 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 124 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc 60

attacctgca gagcgagcca ggatatttct aattatctga attggtacca gcagaaacca 120 ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgct gcttctaatt tgcaaagcgg ggtcccgtcc 180 cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag catgatactt ttcgtcctac ctttggccag 300 ggtacgaaag ttgaaattaa a 321 <210〉 125 <211> 660 <212〉 DNA <213〉智人〈400〉 125 caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg 60 agctgcgcgg cctccggatt taccttttct tcttattgga tgacttgggt gcgccaagcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagctct attaagatta agcctgatgg ttatgctgct 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tttttatcag 300 tattttgctc gtatggatta ttggggccaa ggcaccctgg tgacggttag ctcagcgtcg 360 • 87 - 148032-序列表 _doc 201043638 accaaaggtc caagcgtgtt tccgctggct ccgagcagca aaagcaccag cggcggcacg 420 gctgccctgg gctgcctggt taaagattat ttcccggaac cagtcaccgt gagctggaac 480 agcggggcgc tgaccagcgg cgtgcatacc tttccggcgg tgctgcaaag cagcggcctg 540 tatagcctga gcagcgttgt gaccgtgccg agcagcagct taggcactca gacctatatt 600 tgcaacgtga accataaacc gagcaacacc aaagtggata aaaaagtgga accgaaaagc 660 <210〉 126 <211〉 642 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 126 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc 60 attacctgca gagcgagcca ggatatttct aattatctga attggtacca gcagaaacca 120 ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgct gcttctaatt tgcaaagcgg ggtcccgtcc 180 cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag catgatactt ttcgtcctac ctttggccag 300 ggtacgaaag ttgaaattaa acgtacggtg gctgctccga gcgtgtttat ttttccgccg 360 agcgatgaac aactgaaaag cggcacggcg agcgtggtgt gcctgctgaa caacttttat 420 ccgcgtgaag cgaaagttca gtggaaagta gacaacgcgc tgcaaagcgg caacagccag 480 gaaagcgtga ccgaacagga tagcaaagat agcacctatt ctctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaaag cggattatga aaaacataaa gtgtatgcgt gcgaagtgac ccatcfiaggt 600 ctgagcagcc cggtgactaa atcttttaat cgtggcgagg cc 642 <210> 127

<211〉 5 <212> PRT -88- 148032-序列表.doc 201043638 <213〉智人 <400> 127

Ser Tyr Trp Met Thr 1 5 <210〉 128 <211〉 15 <212〉 PRT <213> 智人〈400〉 128 Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 129 <211> 11 〈212〉 PRT 〈213〉智人 <400〉 129

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr 1 5 10 <210〉 130 <211〉 11 <212〉 PRT 〈213〉智人 <400〉 130

Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 131

<211〉 7 <212〉 PRT •89- 148032-序列表.doc 201043638 <213〉智人 <400> 131

Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser 1 5 <210〉 132 <211〉 9 <212> PRT <213〉智人 <400> 132

Gin Gin Trp Asp Ser Phe Ser Pro Thr 1 5 <210〉 133 <211〉 118 <212> PRT 〈213〉智人 <400〉 133

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80 -90· 148032-序列表.doc 201043638

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210〉 134 <211> 107 <212> PRT <213〉智人 <400〉 134

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

O

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Asp Ser Phe Ser Pro 85 90 95 91- 148032-序列表.doc 201043638

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 〈210〉 135 <211> 220 <212> PRT <213〉智人 <400〉 135

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Lys lie Lys Pro Asp Gly Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 50 55 60

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95

Leu Phe Tyr Gin Tyr Phe Ala Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 -92- 148032·序列表.doc 201043638

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

O

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 <210〉 136 <211> 214 <212> PRT 〈213〉智人.

O <400> 136

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly •93- 148032·序列表.doc 201043638 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Asp Ser Phe Ser Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210〉 137 94· 148032-序列表.d〇c 201043638 <211> 354 <212> DNA <213〉智人 <400〉 137

caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg agctgcgcgg cctccggatt taccttttct tcttattgga tgacttgggt gcgccaagcc cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagctct attaagatta agcctgatgg ttatgctgct tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tttttatcag tattttgctc gtatggatta ttggggccaa ggcaccctgg tgacggttag ctca 〈210〉 138 <211> 321 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 138 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc attacctgca gagcgagcca ggatatttct aattatctga attggtacca gcagaaacca ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgct gcttctaatt tgcaaagcgg ggtcccgtcc cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tgggattctt tttctcctac ctttggccag ggtacgaaag ttgaaattaa a 〈210〉 139 <211> 660 <212> DNA 〈213〉智人 <400〉 139 caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg -95- 148032-序列表.doc 201043638 agctgcgcgg cctccggatt taccttttct tcttattgga tgacttgggt gcgccaagcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagctct attaagatta agcctgatgg ttatgctgct 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tttttatcag 300 tattttgctc gtatggatta ttggggccaa ggcaccctgg tgacggttag ctcagcgtcg 360 accaaaggtc caagcgtgtt tccgctggct ccgagcagca aaagcaccag cggcggcacg 420 gctgccctgg gctgcctggt taaagattat ttcccggaac cagtcaccgt gagctggaac 480 agcggggcgc tgaccagcgg cgtgcatacc tttccggcgg tgctgcaaag cagcggcctg 540 tatagcctga gcagcgttgt gaccgtgccg agcagcagct taggcactca gacctatatt 600 tgcaacgtga accataaacc gagcaacacc aaagtggata aaaaagtgga accgaaaagc 660 <210〉 140 <211〉 642 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 140 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc 60 attacctgca gagcgagcca ggatatttct aattatctga attggtacca gcagaaacca 120 ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgct gcttctaatt tgcaaagcgg ggtcccgtcc 180 cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tgggattctt tttctcctac ctttggccag 300 ggtacgaaag ttgaaattaa acgtacggtg gctgctccga gcgtgtttat ttttccgccg 360 agcgatgaac aactgaaaag cggcacggcg agcgtggtgt gcctgctgaa caacttttat 420 ccgcgtgaag cgaaagttca gtggaaagta gacaacgcgc tgcaaagcgg caacagccag 480 -96- 148032-序列表.doc 540 201043638 600 642 gaaagcgtga ccgaacagga tagcaaagat agcacctatt ctctgagcag caccctgacc ctgagcaaag cggattatga aaaacataaa gtgtatgcgt gcgaagtgac ccatcaaggt ctgagcagcc cggtgactaa atcttttaat cgtggcgagg cc <210> 141 <211〉 5 <212〉 PRT 〈213> 智人 <400> 141

Ser Tyr Thr Phe Ser O 1 5 <210〉 142 <211〉 17 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 142

Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15

G

Gly <210〉 143 <211〉 16 <212> PRT 〈213>智人 <400> 143

Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu Asp Val 15 10 15 -97- 148032-序列表.doc 201043638 <210> 144 <211> 11 <212> PRT <213〉智人 <400〉 144

Arg Ala Ser Gin Asn He Asn Tyr Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 145 <211〉 7 <212> PRT <213〉智人 <400〉 145

Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser 1 5 <210〉 146 <211〉 10 <212> PRT <213〉智人 <400> 146

Gin Gin Ser Trp Ser Val Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 147 <211〉 125 <212> PRT <213〉智人 <400〉 147

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15 •98- 148032-序列表.doc 201043638

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 o

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210〉 148

O <211> 108 <212〉 PRT 〈213> 智人 <400〉 148

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Asn Tyr Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie -99- 148032-序列表.doc 201043638 35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Trp Ser Val Pro Pro 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 149 <211〉 227 <212> PRT <213〉智人 <400〉 149

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 100· 148032-序列表.doc 201043638

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg A$n Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140

O

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys 195 200 205

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220

Pro Lys Ser 225 <210> 150 〈211〉 215 -101 - 148032·序列表.doc 201043638 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 150

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Asn Tyr Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Trp Ser Val Pro Pro 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 102- 148032-序列表.doc 201043638

Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

O

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210〉 151 〈211〉 375 <212> DNA <213〉智人 <400〉 151 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatactt tttcttgggt gcgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcaat atccttccga tttttggcga tgcgaattac gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtaataag ggtgcttttt attatatgtc tacttatcct tctcttgatg tttggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctca 60 120 180 240 300 360 375 〈210〉 152 <211〉 324 〈212〉 DNA <213〉智人 <400〉 152 148032-序列表.doc -103- 201043638 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc 60 attacctgca gagcgagcca gaatattaat tattatctga attggtacca gcagaaacca 120 ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgat gctttttctt tgcaaagcgg ggtcccgtcc 180 cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tcttggtctg ttcctccttt tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaa 324 <210〉 153 <211> 681 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 153 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatactt tttcttgggt gcgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcaat atccttccga tttttggcga tgcgaattac 180 gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtaataag 300 ggtgcttttt attatatgtc tacttatcct tctcttgatg tttggggcca aggcaccctg 360 gtgacggtta gctcagcgtc gaccaaaggt ccaagcgtgt ttccgctggc tccgagcagc 420 aaaagcacca gcggcggcac ggctgccctg ggctgcctgg ttaaagatta tttcccggaa 480 ccagtcaccg tgagctggaa cagcggggcg ctgaccagcg gcgtgcatac ctttccggcg 540 gtgctgcaaa gcagcggcct gtatagcctg agcagcgttg tgaccgtgcc gagcagcagc 600 ttaggcactc agacctatat ttgcaacgtg aaccataaac cgagcaacac caaagtggat 660 aaaaaagtgg aaccgaaaag c 681 -104· 148032-序列表.doc 60 60

201043638 <210〉 154 <211> 645 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 154 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc attacctgca gagcgagcca gaatattaat tattatctga attggtacca gcagaaacca ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgat gctttttctt tgcaaagcgg ggtcccgtcc cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tcttggtctg ttcctccttt tacctttggc

O cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg gtggctgctc cgagcgtgtt tatttttccg ccgagcgatg aacaactgaa aagcggcacg gcgagcgtgg tgtgcctgct gaacaacttt tatccgcgtg aagcgaaagt tcagtggaaa gtagacaacg cgctgcaaag cggcaacagc caggaaagcg tgaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct attctctgag cagcaccctg accctgagca aagcggatta tgaaaaacat aaagtgtatg cgtgcgaagt gacccatcaa ggtctgagca gcccggtgac taaatctttt aatcgtggcg aggcc <210> 155 〈211〉 5 <212〉 PRT 〈213>智人〈400〉 155

Ser Tyr Thr Phe Ser 1 5 <210〉 156 <211> 17 〈212〉 PRT <213〉智人 148032-序列表.doc •105· 120 180 240 300 360 420 480 540 600 645 201043638 <400> 156

Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15

Gly <210〉 157 <211> 16 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 157

Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu Asp Val 15 10 15 <210〉 158 <211> 11 <212> PRT <213〉智人 <400〉 158

Arg Ala Ser Gin Asn He Asn Tyr Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 159 <211〉 7 <212> PRT <213〉智人 <400〉 159

Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser 1 5 106- 148032-序列表 _doc 201043638 <210〉 160 <211〉 10 <212> PRT 〈213>智人 <400> 160

Gin Gin Ser lie Ala Val Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210〉 161 <211〉 125 <212> PRT <213〉智人

〈400〉 161

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Asn lie Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu 100 105 110 -107- 148032-序列表.doc 201043638

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 162 <211〉 108 <212> PRT <213〉智人 <400〉 162

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Asn Tyr Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser lie Ala Val Pro Pro 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 163

<211> 227 <212〉 PRT -108 - 148032·序列表.doc 201043638 <213〉智人 <400> 163

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 ❹

Gly Asn He Leu Pro lie Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

G

Ala Arg Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Tyr Met Ser Thr Tyr Pro Ser Leu 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 -109- 148032-序列表.doc 201043638

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys 195 200 205

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220

Pro Lys Ser 225 <210〉 164 <211> 215 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 164

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Asn Tyr Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro -110- 148032-序列表.doc 201043638 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser lie Ala Val Pro Pro 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160

Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

G

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210〉 165 <211> 375 <212> DNA <213〉智人 111 - 148032-序列表 _doc 201043638 <400〉 165 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatactt tttcttgggt gcgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcaat atccttccga tttttggcga tgcgaattac 180 gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtaataag 300 ggtgcttttt attatatgtc tacttatcct tctcttgatg tttggggcca aggcaccctg 360 gtgacggtta gctca 375 <210> 166 <211〉 324 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 166 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc 60 attacctgca gagcgagcca gaatattaat tattatctga attggtacca gcagaaacca 120 ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgat gctttttctt tgcaaagcgg ggtcccgtcc 180 cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tctattgctg ttcctccttt tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaa 324 <210> 167 <211> 681 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 167 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatactt tttcttgggt gcgccaagcc 120 -112· 148032-序列表.doc 180 201043638 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcaat atccttccga tttttggcga tgcgaattac gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtaataag ggtgcttttt attatatgtc tacttatcct tctcttgatg tttggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctcagcgtc gaccaaaggt ccaagcgtgt ttccgctggc tccgagcagc aaaagcacca gcggcggcac ggctgccctg ggctgcctgg ttaaagatta tttcccggaa ccagtcaccg tgagctggaa cagcggggcg ctgaccagcg gcgtgcatac ctttccggcg gtgctgcaaa gcagcggcct gtatagcctg agcagcgttg tgaccgtgcc gagcagcagc ❹ ttaggcactc agacctatat ttgcaacgtg aaccataaac cgagcaacac caaagtggat aaaaaagtgg aaccgaaaag c <210> 168 <211> 645 〈212〉 DNA <213〉智人 <400> 168 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc attacctgca gagcgagcca gaatattaat tattatctga attggtacca gcagaaacca 〇 ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgat gctttttctt tgcaaagcgg ggtcccgtcc cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tctattgctg ttcctccttt tacctttggc cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg gtggctgctc cgagcgtgtt tatttttccg ccgagcgatg aacaactgaa aagcggcacg gcgagcgtgg tgtgcctgct gaacaacttt tatccgcgtg aagcgaaagt tcagtggaaa gtagacaacg cgctgcaaag cggcaacagc 148032-序列表.doc -113 - 240 300 360 420 480 540 600 660 681 60 120 180 240 300 360 420 480 540 201043638 caggaaagcg tgaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct attctctgag cagcaccctg accctgagca aagcggatta tgaaaaacat aaagtgtatg cgtgcgaagt gacccatcaa ggtctgagca gcccggtgac taaatctttt aatcgtggcg aggcc <210〉 169 <211> 5 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 169

Ser Tyr Ser Met His 1 5 <210> 170 <211〉 17 <212> PRT <213〉智人 <400〉 170

Leu He Asn Pro Tyr Asn Gly Asn Thr His Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15

Gly <210> 171 <211〉 6 <212> PRT <213〉智人〈400〉 171

Met Leu Arg Phe Asp Val 1 5 114- 600 645 148032-序列表.doc 201043638 <210〉 172 〈211〉 14 <212〉 PRT <213> 智人 <400> 172 Thr Gly Thr Ser Ser Asp Gly Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210〉 173 〈211〉 7 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 173 Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210〉 174 <211> 11 <212〉 PRT <213> 智人 <400> 174

Gin Thr Tyr Thr Arg Tyr Ser Asp Ser Pro Val 1 5 10 〈210〉 175 <211〉 115 <212〉 PRT 〈213〉智人〈400〉 175

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 115- 148032-序列表.doc 201043638

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu He Asn Pro Tyr Asn Gly Asn Thr His Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser He Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Met Leu Arg Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110

Val Ser Ser 115 <210〉 176 <211> 111 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 176

Asp lie Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Gly Gly Gly Tyr 20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu -116- 148032-序列表.doc 201043638 35 40 45

Met lie Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 75 80

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Thr Arg Tyr 85 90 95

Ser Asp Ser Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 177 <211〉 217 <212> PRT <213〉智人 <400〉 177

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Asn Thr His Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser He Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 117- 148032·序列表 _doc 201043638

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Met Leu Arg Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly 165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190

Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 <210〉 178 〈211〉 216 <212> PRT <213〉智人 <400〉 178 118· 148032-序列表.doc 201043638

Asp lie Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Gly Gly Gly Tyr 20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45

Met lie Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60

O

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 75 80

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Thr Arg Tyr 85 90 95

Ser Asp Ser Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 o

Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125

Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe 130 135 140

Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 145 150 155 160

Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys 165 170 175 -119 148032-序列表,d〇c 201043638

Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser 180 185 190

His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 195 200 205

Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Ala 210 215 <210〉 179 <211> 345 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 179 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttattcta tgcattgggt ccgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcctt atcaatccgt ataatggcaa tacgcattac 180 gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtatgctt 300 cgttttgatg tttggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctca 345 <210> 180 <211〉 333 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 180 gatatcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60 tcgtgtacgg gtactagcag cgatggtggt ggttataatt atgtgtcttg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgttt ctaatcgtcc ctcaggcgtg 180 -120-

O 148032-序列表.doc 201043638 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc cagacttata ctcgttattc tgattctcct 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtt ctt 333 <210〉 181 <211〉 651 <212> DNA <213〉智人 <400> 181 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 651

O caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttattcta tgcattgggt ccgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcctt atcaatccgt ataatggcaa tacgcattac gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtatgctt cgttttgatg tttggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctcagcgtc gaccaaaggt ccaagcgtgt ttccgctggc tccgagcagc aaaagcacca gcggcggcac ggctgccctg ggctgcctgg ttaaagatta tttcccggaa ccagtcaccg tgagctggaa cagcggggcg ctgaccagcg gcgtgcatac ctttccggcg gtgctgcaaa gcagcggcct gtatagcctg agcagcgttg tgaccgtgcc gagcagcagc ttaggcactc agacctatat ttgcaacgtg aaccataaac cgagcaacac caaagtggat aaaaaagtgg aaccgaaaag c <210〉 182 <211> 648 <212〉 DNA 〈213> 智人 <400〉 182 gatatcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc -121- 148032-序列表.doc 60 201043638 tcgtgtacgg gtactagcag cgatggtggt ggttataatt atgtgtcttg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgttt ctaatcgtcc ctcaggcgtg 180 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc cagacttata ctcgttattc tgattctcct 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtt cttggccagc cgaaagccgc accgagtgtg 360 acgctgtttc cgccgagcag cgaagaattg caggcgaaca aagcgaccct ggtgtgcctg 420 attagcgact tttatccggg agccgtgaca gtggcctgga aggcagatag cagccccgtc 480 aaggcgggag tggagaccac cacaccctcc aaacaaagca acaacaagta cgcggccagc 540 agctatctga gcctgacgcc tgagcagtgg aagtcccaca gaagctacag ctgccaggtc 600 acgcatgagg ggagcaocgt ggaaaaaacc gttgcgccga ctgaggcc 648 <210〉 183 <211> 5 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 183

Gly Tyr Tyr lie Asn <210> 184 〈211〉 17 <212〉 PRT <213〉智人 <400> 184 lie lie Ser Pro Asn Gin Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe Gin

Gly • 122- 148032-序列表.doc 201043638 <210> 185 <211> 8 <212> PRT <213〉智人 <400> 185

Gly Asn Tyr Asp His Leu Asp Tyr 1 5 <210> 186 <211> 11 <212> PRT <213〉智人 o <400> 186

Arg Ala Ser Gin Gly He Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 〈210〉 187 <211> 7 <212> PRT <213〉智人 <400> 187

Asp Ala Ser Thr Leu Gin Ser 〇 1 5 <210〉 188 <211〉 10 <212〉 PRT <213〉智人〈400〉 188

Gin Gin Asp Trp His Thr Leu Pro Val Thr 123 - 148032-序列表.doc 201043638 <210> 189 <211〉 117 <212> PRT 〈213> 智人 <400〉 189

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr lie Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Ser Pro Asn Gin Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Asn Tyr Asp His Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 190 <211〉 108 148032-序列表.doc - 124- 201043638 <212> PRT <213〉智人 <400> 190

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

O

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Asp Trp His Thr Leu Pro 85 90 95

Val Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 〈210〉 191 <211〉 219 <212〉 PRT 〈213>智人 <400> 191

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 •125- 148032-序列表.doc 201043638

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr lie Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Ser Pro Asn Gin Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Asn Tyr Asp His Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser 165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 •126- 148032-序列表.doc 201043638

Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 <210〉 192 <211〉 215 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 192

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly He Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

G

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Seir Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Asp Trp His Thr Leu Pro 85 90 95

Val Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser -127- 148032-序列表.doc 201043638 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160

Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 193 <211〉 351 <212〉 DNA <213〉智人 <400〉 193 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggata tacctttact ggttattata ttaattgggt ccgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcatt atctctccga atcagggcac tacgggttac gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtaat tatgatcatc ttgattattg gggccaaggc accctggtga cggttagctc a -128- 60 120 180 240 300 148032-序列表.doc 351 60 201043638 〈210> 194 <211> 324 <212> DNA <213〉智人 <400〉 194 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc attacctgca gagcgagcca gggtatttct aattatctga attggtacca gcagaaacca ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgat gcttctactt tgcaaagcgg ggtcccgtcc cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct gaagactttg cgacttatta ttgccagcag gattggcata ctcttcctgt tacctttggc

O cagggtacga aagttgaaat taaa <210> 195 <211> 657 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 195 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggata tacctttact ggttattata ttaattgggt ccgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcatt atctctccga atcagggcac tacgggttac gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtaat tatgatcatc ttgattattg gggccaaggc accctggtga cggttagctc agcgtcgacc aaaggtccaa gcgtgtttcc gctggctccg agcagcaaaa gcaccagcgg cggcacggct gccctgggct gcctggttaa agattatttc ccggaaccag tcaccgtgag ctggaacagc ggggcgctga ccagcggcgt gcataccttt ccggcggtgc tgcaaagcag cggcctgtat 148032-序列表.doc •129- 120 180 240 300 324 60 120 180 240 300 360 420 480 540 201043638 agcctgagca gcgttgtgac cgtgccgagc agcagcttag gcactcagac ctatatttgc 600 aacgtgaacc ataaaccgag caacaccaaa gtggataaaa aagtggaacc gaaaagc 657 <210〉 196 <211〉 645 <212> DNA <213〉智人 <400〉 196 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc 60 attacctgca gagcgagcca gggtatttct aattatctga attggtacca gcagaaacca 120 ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgat gcttctactt tgcaaagcgg ggtcccgtcc 180 cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct 240 gaagactttg cgacttatta ttgccagcag gattggcata ctcttcctgt tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg gtggctgctc cgagcgtgtt tatttttccg 360 ccgagcgatg aacaactgaa aagcggcacg gcgagcgtgg tgtgcctgct gaacaacttt 420 tatccgcgtg aagcgaaagt tcagtggaaa gtagacaacg cgctgcaaag cggcaacagc 480 caggaaagcg tgaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct attctctgag cagcaccctg 540 accctgagca aagcggatta tgaaaaacat aaagtgtatg cgtgcgaagt gacccatcaa 600 ggtctgagca gcccggtgac taaatctttt aatcgtggcg aggcc 645 <210〉 197 <211> 645 <212> PRT <213〉智人 <400〉 197

Ser Pro Met Tyr Ser lie lie Thr Pro Asn lie Leu Arg Leu Glu Ser 15 10 15 -130- 148032-序列表.doc 201043638

Glu Glu Thr Met Val Leu Glu Ala His Asp Ala Gin Gly Asp Val Pro 20 25 30

Val Thr Val Thr Val His Asp Phe Pro Gly Lys Lys Leu Val Leu Ser 35 40 45

Ser Glu Lys Thr Val Leu Thr Pro Ala Thr Asn His Met Gly Asn Val 50 55 60

Thr Phe Thr He Pro Ala Asn Arg Glu Phe Lys Ser Glu Lys Gly Arg 65 70 75 80 ❹

Asn Lys Phe Val Thr Val Gin Ala Thr Phe Gly Thr Gin Val Val Glu 85 90 95

Lys Val Val Leu Val Ser Leu Gin Ser Gly Tyr Leu Phe lie Gin Thr 100 105 HO

Asp Lys Thr lie Tyr Thr Pro Gly Ser Thr Val Leu Tyr Arg He Phe 115 120 125

Thr Val Asn His Lys Leu Leu Pro Val Gly Arg Thr Val Met Val Asn 130 135 140 lie Glu Asn Pro Glu Gly He Pro Val Lys Gin Asp Ser Leu Ser Ser 145 150 155 160

Gin Asn Gin Leu Gly Val Leu Pro Leu Ser Trp Asp He Pro Glu Leu 165 170 175

Val Asn Met Gly Gin Trp Lys lie Arg Ala Tyr Tyr Glu Asn Ser Pro 180 185 190 -131 - 148032·序列表.doc 201043638

Gin Gin Val Phe Ser Thr Glu Phe Glu Val Lys Glu Tyr Val Leu Pro 195 200 205

Ser Phe Glu Val He Val Glu Pro Thr Glu Lys Phe Tyr Tyr He Tyr 210 215 220

Asn Glu Lys Gly Leu Glu Val Thr lie Thr Ala Arg Phe Leu Tyr Gly 225 230 235 240

Lys Lys Val Glu Gly Thr Ala Phe Val lie Phe Gly He Gin Asp Gly 245 250 255

Glu Gin Arg He Ser Leu Pro Glu Ser Leu Lys Arg lie Pro He Glu 260 265 270

Asp Gly Ser Gly Glu Val Val Leu Ser Arg Lys Val Leu Leu Asp Gly 275 280 285

Val Gin Asn Leu Arg Ala Glu Asp Leu Val Gly Lys Ser Leu Tyr Val 290 295 300

Ser Ala Thr Val He Leu His Ser Gly Ser Asp Met Val Gin Ala Glu 305 310 315 320

Arg Ser Gly He Pro lie Val Thr Ser Pro Tyr Gin He His Phe Thr 325 330 335

Lys Thr Pro Lys Tyr Phe Lys Pro Gly Met Pro Phe Asp Leu Met Val 340 345 350

Phe Val Thr Asn Pro Asp Gly Ser Pro Ala Tyr Arg Val Pro Val Ala 355 360 365 -132- 148032-序列表.doc 201043638

Val Gin Gly Glu Asp Thr Val Gin Ser Leu Thr Gin Gly Asp Gly Val 370 375 380

Ala Lys Leu Ser lie Asn Thr His Pro Ser Gin Lys Pro Leu Ser lie 385 390 395 400

Thr Val Arg Thr Lys Lys Gin Glu Leu Ser Glu Ala Glu Gin Ala Thr 405 410 415

Arg Thr Met Gin Ala Leu Pro Tyr Ser Thr Val Gly Asn Ser Asn Asn 420 425 430 ❹

Tyr Leu His Leu Ser Val Leu Arg Thr Glu Leu Arg Pro Gly Glu Thr 435 440 445

Leu Asn Val Asn Phe Leu Leu Arg Met Asp Arg Ala His Glu Ala Lys 450 455 460 lie Arg Tyr Tyr Thr Tyr Leu He Met Asn Lys Gly Arg Leu Leu Lys 465 470 475 480

Ala Gly Arg Gin Val Arg Glu Pro Gly Gin Asp Leu Val Val Leu Pro 485 490 495 〇

Leu Ser lie Thr Thr Asp Phe lie Pro Ser Phe Arg Leu Val Ala Tyr 500 505 510

Tyr Thr Leu lie Gly Ala Ser Gly Gin Arg Glu Val Val Ala Asp Ser 515 520 525

Val Trp Val Asp Val Lys Asp Ser Cys Val Gly Ser Leu Val Val Lys 530 535 540 148032-序列表.doc -133- 201043638

Ser Gly Gin Ser Glu Asp Arg Gin Pro Val Pro Gly Gin Gin Met Thr 545 550 555 560

Leu Lys lie Glu Gly Asp His Gly Ala Arg Val Val Leu Val Ala Val 565 570 575

Asp Lys Gly Val Phe Val Leu Asn Lys Lys Asn Lys Leu Thr Gin Ser 580 585 590

Lys lie Trp Asp Val Val Glu Lys Ala Asp lie Gly Cys Thr Pro Gly 595 600 605

Ser Gly Lys Asp Tyr Ala Gly Val Phe Ser Asp Ala Gly Leu Thr Phe 610 615 620

Thr Ser Ser Ser Gly Gin Gin Thr Ala Gin Arg Ala Glu Leu Gin Cys 625 630 635 640

Pro Gin Pro Ala Ala 645 <210> 198 <211> 915 <212> PRT <213〉智人 <400> 198

Ser Asn Leu Asp Glu Asp lie lie Ala Glu Glu Asn lie Val Ser Arg 15 10 15

Ser Glu Phe Pro Glu Ser Trp Leu Trp Asn Val Glu Asp Leu Lys Glu 20 25 30 -134- 148032-序列表.doc 201043638

Pro Pro Lys Asn Gly lie Ser Thr Lys Leu Met Asn lie Phe Leu Lys 35 40 45

Asp Ser lie Thr Thr Trp Glu lie Leu Ala Val Ser Met Ser Asp Lys 50 55 60

Lys Gly lie Cys Val Ala Asp Pro Phe Glu Val Thr Val Met Gin Asp 65 70 75 80

Phe Phe lie Asp Leu Arg Leu Pro Tyr Ser Val Val Arg Asn Glu Gin 85 90 95

O

Val Glu lie Arg Ala Val Leu Tyr Asn Tyr Arg Gin Asn Gin Glu Leu 100 105 110

Lys Val Arg Val Glu Leu Leu His Asn Pro Ala Phe Cys Ser Leu Ala 115 120 125

Thr Thr Lys Arg Arg His Gin Gin Thr Val Thr lie Pro Pro Lys Ser 130 135 140

Ser Leu Ser Val Pro Tyr Val lie Val Pro Leu Lys Thr Gly Leu Gin 145 150 155 160

Glu Val Glu Val Lys Ala Ala Val Tyr His His Phe lie Ser Asp Gly 165 170 175

Val Arg Lys Ser Leu Lys Val Val Pro Glu Gly lie Arg Met Asn Lys 180 185 190

Thr Val Ala Val Arg Thr Leu Asp Pro Glu Arg Leu Gly Arg Glu Gly 195 200 205 -135· 148032-序列表doc 201043638

Val Gin Lys Glu Asp lie Pro Pro Ala Asp Leu Ser Asp Gin Val Pro 210 215 220

Asp Thr Glu Ser Glu Thr Arg He Leu Leu Gin Gly Thr Pro Val Ala 225 230 235 240

Gin Met Thr Glu Asp Ala Val Asp Ala Glu Arg Leu Lys His Leu He 245 250 255

Val Thr Pro Ser Gly Cys Gly Glu Gin Asn Met lie Gly Met Thr Pro 260 265 270

Thr Val He Ala Val His Tyr Leu Asp Glu Thr Glu Gin Trp Glu Lys 275 280 285

Phe Gly Leu Glu Lys Arg Gin Gly Ala Leu Glu Leu lie Lys Lys Gly 290 295 300

Tyr Thr Gin Gin Leu Ala Phe Arg Gin Pro Ser Ser Ala Phe Ala Ala 305 310 315 320

Phe Val Lys Arg Ala Pro Ser Thr Trp Leu Thr Ala Tyr Val Val Lys 325 330 335

Val Phe Ser Leu Ala Val Asn Leu lie Ala lie Asp Ser Gin Val Leu 340 345 350

Cys Gly Ala Val Lys Trp Leu lie Leu Glu Lys Gin Lys Pro Asp Gly 355 360 365

Val Phe Gin Glu Asp Ala Pro Val lie His Gin Glu Met lie Gly Gly 370 375 380 -136- 148032-序列表.doc 201043638

Leu Arg Asn Asn Asn Glu Lys Asp Met Ala Leu Thr Ala Phe Val Leu 385 390 395 400 lie Ser Leu Gin Glu Ala Lys Asp lie Cys Glu Glu Gin Val Asn Ser 405 410 415

Leu Pro Gly Ser He Thr Lys Ala Gly Asp Phe Leu Glu Ala Asn Tyr 420 425 430

Met Asn Leu Gin Arg Ser Tyr Thr Val Ala He Ala Gly Tyr Ala Leu 435 440 445

O

Ala Gin Met Gly Arg Leu Lys Gly Pro Leu Leu Asn Lys Phe Leu Thr 450 455 460

Thr Ala Lys Asp Lys Asn Arg Trp Glu Asp Pro Gly Lys Gin Leu Tyr 465 470 475 480

Asn Val Glu Ala Thr Ser Tyr Ala Leu Leu Ala Leu Leu Gin Leu Lys 485 490 495

O

Asp Phe Asp Phe Val Pro Pro Val Val Arg Trp Leu Asn Glu Gin Arg 500 505 510

Tyr Tyr Gly Gly Gly Tyr Gly Ser Thr Gin Ala Thr Phe Met Val Phe 515 520 525

Gin Ala Leu Ala Gin Tyr Gin Lys Asp Ala Pro Asp His Gin Glu Leu 530 535 540

Asn Leu Asp Val Ser Leu Gin Leu Pro Ser Arg Ser Ser Lys lie Thr 545 550 555 560 -137 148032-序列表.doc 201043638

His Arg lie His Trp Glu Ser Ala Ser Leu Leu Arg Ser Glu Glu Thr 565 570 575

Lys Glu Asn Glu Gly Phe Thr Val Thr Ala Glu Gly Lys Gly Gin Gly 580 585 590

Thr Leu Ser Val Val Thr Met Tyr His Ala Lys Ala Lys Asp Gin Leu 595 600 605

Thr Cys Asn Lys Phe Asp Leu Lys Val Thr lie Lys Pro Ala Pro Glu 610 615 620

Thr Glu Lys Arg Pro Gin Asp Ala Lys Asn Thr Met lie Leu Glu He 625 630 635 640

Cys Thr Arg Tyr Arg Gly Asp Gin Asp Ala Thr Met Ser lie Leu Asp 645 650 655 lie Ser Met Met Thr Gly Phe Ala Pro Asp Thr Asp Asp Leu Lys Gin 660 665 670

Leu Ala Asn Gly Val Asp Arg Tyr lie Ser Lys Tyr Glu Leu Asp Lys 675 680 685

Ala Phe Ser Asp Arg Asn Thr Leu He lie Tyr Leu Asp Lys Val Ser 690 695 700

His Ser Glu Asp Asp Cys Leu Ala Phe Lys Val His Gin Tyr Phe Asn 705 710 715 720

Val Glu Leu lie Gin Pro Gly Ala Val Lys Val Tyr Ala Tyr Tyr Asn 725 730 735 -138

O

148032-序列表.doc 201043638

Leu Glu Glu Ser Cys Thr Arg Phe Tyr His Pro Glu Lys Glu Asp Gly 740 745 750

Lys Leu Asn Lys Leu Cys Arg Asp Glu Leu Cys Arg Cys Ala Glu Glu 755 760 765

Asn Cys Phe lie Gin Lys Ser Asp Asp Lys Val Thr Leu Glu Glu Arg 770 775 780

Leu Asp Lys Ala Cys Glu Pro Gly Val Asp Tyr Val Tyr Lys Thr Arg 785 790 795 800 ❹

Leu Val Lys Val Gin Leu Ser Asn Asp Phe Asp Glu Tyr He Met Ala 805 810 815 lie Glu Gin Thr He Lys Ser Gly Ser Asp Glu Val Gin Val Gly Gin 820 825 830

Gin Arg Thr Phe He Ser Pro He Lys Cys Arg Glu Ala Leu Lys Leu 835 840 845

Glu Glu Lys Lys His Tyr Leu Met Trp Gly Leu Ser Ser Asp Phe Trp 850 855 860

Gly Glu Lys Pro Asn Leu Ser Tyr lie He Gly Lys Asp Thr Trp Val 865 870 875 880

Glu His Trp Pro Glu Glu Asp Glu Cys Gin Asp Glu Glu Asn Gin Lys 885 890 895

Gin Cys Gin Asp Leu Gly Ala Phe Thr Glu Ser Met Val Val Phe Gly 900 905 910 _ 139· 148032·序列表,d〇c 201043638

Cys Pro Asn 915 148032-序列表.doc • 140

Claims

201043638 七、申請專利範圍： 1. 種特異性結合於人類或獼猴補體C3b蛋白之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體以小於或等於1〇〇 pM之KD結合於人類C3b。 2·如請求項1之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該 k體或其抗原結合片段亦以小於或等於25〇 pM之結合於獼猴C3b。 3.如請求項丨或2之經分離之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段以小於或等於1 〇之KD結合於人類C3b。 4·如請求項1或2之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段以小於或等於2 之結合於人類C3b。 ' 5 ·如π求項1或2之經分離之抗體，其中如藉由活體外溶血檢疋所测量，該抗體以小於或等於65 之抑制人類替代補體路徑。士吻求項1或2之經分離之抗體，其中如藉由活體外匸％沈積所測量，該抗體以小於或等於5〇 nM2IC5〇抑制人類替代補體路徑。、二求項1或2之經分離之抗體，其中如藉由補體膜攻擊灵&物之沈積所測量，該抗體以小於或等於5 nM之IC50 抑制人類替代補體路徑。月求項1或2之經分離之抗體，其中如藉由C3a及Gy之生所/則量，該抗體以小於或等於i〇〇 nM之抑制替 148032.doc 201043638 代補體路徑。 9. 如請求項1之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段特显性社人、 ° σ於人類或獼猴補體 C3b蛋白’且與表丨中所述之抗體交又競爭。 10. 如請求項卜2及9中任一項之經分離之抗體，其中該抗體為單株抗體。 11.如請求項i、2及9中任一項之經分離之抗體，其中該抗體為人類或人類化抗體。 12·如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體，其中該抗體為嵌合抗體。 13_如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體，其中該抗體為單鏈抗體。 14. 如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體其中該抗體為Fab片段或ScFv片段。 15. 如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體，其中該抗體為 IgG 同型（isotype)。 1 6.如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體，其中該抗體包含各別人類VH或VL生殖系序列之抗體構架中已經胺基酸取代之構架。 17.如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體，其中該抗體以大於該抗體結合於C3之親和力至少1〇〇〇倍的親和力結合於C3b。 1 8.如請求項1、2及9中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ 148032.doc 201043638 ID NO: 1、15、29、43、57、71、85、99、113、127、 141、 155、169及183組成之群之重鏈CDRl ;選自由SEQ ID NO: 2、16、30、44、58、72、86、100、114、128、 142、 156 ' 170及184組成之群之重鏈CDR2 ;及選自由 SEQ ID NO: 3、17、31、45、59、73、87、101、115、 129、143、157、171及185組成之群之重鏈CDR3，其中該經分離之抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白 C3b。 19.如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段’其中該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO: 4、18、32、46、60、74、88 ' 102、116、130、 144、 158、172及186組成之群之輕鏈⑶^ ;選自由SEq ID NO·· 5、19、33、47 ' 61、75、89、103、117、131、 145、 159、173及187組成之群之輕鏈CDR2 ;及選自由 SEQ ID NO: 6、20、34、48、62、76、90、104、118、 132' 146、160、174及188組成之群之輕鏈⑶们，其中該經分離之抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白 C3b。 20. ^請求項18之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該單株抗體進—步包含選自由SEQ ID N〇: 4、18、32、 60 74、88 ' 102、116、130、144、158、172及 186組成之群之輕鏈CDR1 ;選自由SEQ ID NO: 5、19、 61 ' 75 、 89 、 103 、 117 、 131 、⑷、159 、 173 成之群之輕鏈CDR2 ;及選自由SEq ID Ν〇: 6、 148032.doc 201043638 20、34、48、62、76、90、l〇4、118、132、146、 160、174及188組成之群之輕鏈CDR3。 21. 如請求項！、2及9中任—項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含選自由seq NO: 7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、 147、161、175及189組成之群之重鏈可變域序列，及進一步包含選自由 SEQ ID NO: 8、22、36、50、64、78、 92、106、120、134、148、162、176及 190組成之群之輕鏈可變域序列，其中該經分離之抗體或其抗原結合片段結合於補體蛋白C3b。 22. 如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含與選自由 SEQ ID NO: 7、21、35、49、63、77、91、1〇5、119、 133、 I47、161、I75及189組成之群之序列具有至少95% 序列一致性的重鏈可變域，其中該抗體結合於C3b ^ 23·如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含與選自由 SEQ ID NO: 8、22、36、5〇、64、78、％、1〇6、12〇、 134、 148、162、176及190組成之群之序列具有至少95〇/〇序列一致性的輕鏈可變域，其中該抗體結合於C3b。 24_如請求項22之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段進一步包含與選自由SEQ m N〇: 8、22、 36、 50、 64、 78、 92、 106、 120、 134、 148、 162、 176 及190組成之群之序列具有至少95%序列—致性的輕鏈可 148032.doc -4- 201043638 變域。 25.如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體或其抗原結 &片·^，其中該抗體或其抗原結合片段包含與選自由 SEQ ID ΝΟ: 9、23、37、51、65、79、93、107、121、 135、149、163、177及191組成之群之序列具有至少95% 序列—致性的重鏈，其中該抗體結合於C3b。 Ο

26. 如請求項丨、2及9中任一項之經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含與選自由 SEQ ID NO: 10、24、38、52、66、80、94、1〇8、m、 136、150、164、178及192組成之群之序列具有至少％% 序列一致性的輕鏈’其中該抗體結合於C3b。 27. 如請求項25之經分離之抗體或抗原結合片段，其進一步包含與選自由 SEQ ID NO: 10、24、38、52、66、8〇、 94、1〇8、122、136、150、164、m 及 192 組成之群之序列具有至少95%序列一致性的輕鏈。 28. —種醫藥組合物，其包含如請求項i至27中任一項之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑。、几 29. —種經分離之核酸，其包含編碼一種包含重鏈可變域與選自由 SEQ ID N0: 7、21、35、49、63、77、91、1〇5、、 U9、Π3、147、161、175及189組成之群之序列具有至少9 5 %序列一致性之多肽的序列。 30. -種經分離之核酸，其包含編瑪一種包含輕鍵可變域與選自由 SEQ ID NO: 8、22、36、50、64、78、92、1〇/、、 120、！34、148、162、176及19〇組成之群之序列具有至 148032.doc 201043638 少95%序列一致性之多肽的序列。 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 一種載體，其包含如請求項29或30之核酸。一種經分離之宿主細胞，其包含編碼如請求項1至27中任一項之抗體或其抗原結合片段之重鏈的重組DNA序列及編碼如請求項1至27中任一項之抗體或其抗原結合片段之輕鏈的第二重組DNA序列，其中該等DNA序列可操作地連接至啟動子且能夠在該宿主細胞中表現。如請求項32之經分離之宿主細胞，其中該抗體為人類單株抗體。如請求項32之經分離之宿主細胞，其中該宿主細胞為非人類哺乳動物細胞。一種如請求項1至27中任一項之抗體或其抗原結合片段其係用於製造治療個體之年齡相關黃斑變性的藥物。如明求項35之用途，其中該個體為人類。 -士生 ° h求項1至27中任一項之抗體或其抗原結合片的用i余 ^ 物其係用於製造抑制個體之替代補體路徑之藥如請喪〆’ 37之用途，其中該個體為人類0 】48032.doc • 6 ·