TW201043153A - A nutritional composition comprising an apple extract and reducing food allergy symptoms, especially in children - Google Patents

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201043153 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種以含有多酚之天然萃取物於製造用於 減輕過敏患者當暴露於過敏原時之過敏症狀的營養組合物 上之用途。 【先前技術】 過敏屬於影響所有年齡段患者生活的最常見的健康問 題。過敏性疾病如今被WH〇認爲是一種流行病。在過去的 成十年裏，顯示過敏的盛行率有所增加。現代生活方式， 尤其是都市，與過敏表現的高度流行及嚴重程度加深息息 相關。 兒童期之過敏性敏化，尤其是幼兒期，且尤其針對食物 過敏原，係極為關鍵且最具重要性，因為已證實「過敏表 現型」或「特應症」之發展便利於其他過敏原之後續敏 化。因此，兒童期之過敏可為導致日後多重過敏之過敏級 〇 聯之第一階段，該過程常稱爲過敏進行曲（Atopic

March)。例如，已證實在人類族群中，於生命早期患有持 續食物過敏症之孩童，在兒童後期發展過敏性鼻炎（枯草 '熱）或哮喘之風險急劇上升（〇stbl0ni等人2008) 0患有輕緩 型食物過敏症之孩童發展為呼吸性過敏之風險亦增加，但 較患有持續食物過敏症之孩童程度低。因此，緩解食物過 敏症之嚴重性對減緩過敏進行曲（Atopic March)係至關重 要。 就此言之，於兒童期及嬰兒期之過敏事件之處理及過敏 147983.doc 201043153 之預防係極爲重要。 嬰兒的免疫系統在出生的頭幾年内發展活躍。對此等年 幼患者整治、預防、避免、處理、減輕或調節過敏反應可 在曰後短期且長期影響他們的過敏表現。 可達成不同水平之過敏預防： 「一級預防」為防止或降低患者對過敏原之敏化作用之 風險的效果，特徵在於不存在過敏原特異性IgE抗體或降 低其水平。防止或降低敏化作用將導致在暴露於同一過敏 原時不存在或減輕過敏症狀。藉由調節患者對於—種過敏 原或一組過敏原敏化之方式（一級預防），亦可調節後續過 敏反應。 「二級預防」為調節過敏症狀之效果，即已對一種或更 多種過敏原產生敏化之患者當再次暴露於該（等）過敏原 時，過敏反應之發生或強度。藉由調節過敏症狀之發生或 強度（二級預防），可使與過敏相關之困擾降低最低。 儘管已對過敏預防有此清晰概念，但可假設藉由其等固 有作用機理，有些化合物可僅以預防之一或兩特定水平作 用例如，有些可僅降低對一特定過敏原之敏化（一級預 防），而其他化合物僅對二級預防起作用且降低過敏反應 之嚴重性。其他化合物可影響敏化反應及症狀且因此可促 進一級及二級預防。 食物過敏原屬於嬰兒早期遇到的第一種過敏原：通常’ 不僅僅接叉母乳饒養的嬰兒可暴露於牛乳蛋白。乳蛋白的 確屬於嬰兒期食物過敏最常見的原因，其次為蛋蛋白及小 147983.doc 201043153 麥蛋白。、通常，嬰兒及幼兒之食物過敏可表現為皮膚症狀 (皮療、濕療、其他）及胃腸道症狀（腹部絞痛、特定言之腹 部之疼痛"區吐）。當嬰兒/幼兒暴露於諸如穀類、蔬菜或 -水果之新穎食物時，亦出現其他敏化及過敏發作。 • a多酚為-大群常見於植物與水果中之具有抗氧化性之小 分子化合物。類黃酮為具有共有結構特徵之多酚之子群， 其本身可進一步再分爲（仍基於共有結構）諸如黃酮醇、黃 ❹ 烷醇、黃酮、黃烷酮等。蘋果中所含有的化合物已使用且 證實對過敏反應具有整體影響：疑似諸如櫟精之類黃酮及 其他多酚大體上對過敏反應提供有益影響。蘋果富含多種 夕紛，包含櫟精及果樹根皮精（phl〇rizidin)。實驗動物之 體外及體内試驗表明一些多紛可經由類似於常見的抗組胺 藥物之機理降低過敏性反應（即’抑制肥大細胞之脫顆粒 作用）。此尤其已闡述於M. Kimata等人，Clin.Exp.Allergy 2000; 30: 501-508; Μ. P. Nair等人，Biochim.Biophys.Acta Q 2002; 1593: 29-36 及 W. Dorsch 等人，Int.Arch. Allergy. Immunol. 1992; 97: 1-7中。且，Kojima等人於Allergology

International (2000) 49:69-73中闡述蘋果多酶可有益於異 位性皮炎。於Biosci. Biotechno，Biochem. 69 69(4)，829-832, 2005中，Kishi等人闡述蘋果多酚於治療杉樹花粉症之 效能。 然而，仍需要特定地降低尤其幼兒及嬰兒之過敏反應及 症狀。 小時候之食源性過敏反應之問題甚至因嬰兒及幼兒之專 147983.doc 201043153 -性營養需求而進-步複雜化。熱量攝人、熱量密度、所 需營養物之多樣性、蛋白質含量及蛋白質品質皆屬於给與 嬰兒及幼兒最適宜營養之重要因素。諸如維生素及礦物質 之微量營養素之存在亦具有重要性，更仙言，其存在係 文限於對應目標患者年齡之特定定義範圍内。因此，對幼 兒及嬰兒而言，食物傳遞之基質本身就相#複雜，但其種 類亦少：例如嬰兒雖然可能過敏’但仍需要自牛奶衍生之 蛋白質基質的平衡。此等多種營養物之存在會加強食物過 敏原之影響。在此等複雜基質t，無法單獨引發過敏表現 之低關鍵性食物過敏原則在觸發過敏反應時變得更為強 大。類似地，可中和過敏原或抑制過敏之化合物於此等複 雜營養基質巾之效果降低或消失。具體而言，無法預測通 常認爲抑制過敏之化合物在嬰兒或幼兒所使用之複雜基質 (諸如營養組合物）中是否仍然具有活性，及具有何種程度 之活性。 需要緩解具有過敏發作史及/或過敏的嬰兒及幼兒族群 之食物過敏症狀。 需要提供-種完整營養組合物，其不僅提供多種營養物 且亦降低過敏反應之嚴重性。 ，需要提供一㈣養組合㉟’該營養組合物將年幼患者遇 光之之過敏反應調節至輕度形式之過敏，因為此等患者具 有因其腸及免疫系統成熟度低所導致的特殊需求。 ''需要調節不能忍受嚴謹醫藥分子之孩童之過敏反應， 例如精由營養介入’諸如將免疫系統之調節劑包含於正規 J47983.doc 201043153 營養療法中。 需要提供一種營養組合物，其在年幼患者斷奶時及前後 調節過敏反應，此時腸道發生劇烈變化且引入新的潛在過 敏性固體食物且因此患者尤其易對食物過敏原敏化。 需藉由提供一種有效組合物，可能藉由減少對過敏原之 暴露而緩解過敏症狀，即使組合物可能不是直接減輕對過 敏原之敏化反應亦然。 〇 需要一種對過敏症之二級預防具有正面影響之組合物， 但不需作用於對同一過敏症之一級預防。 最後需要一種組合物，其特別最適於年幼患者且係藉由 減輕症狀可幫減弱「過敏表現型」，且因此降低日後對 新過敏原之敏化反應。需要減弱過敏進行曲（atopic march) ° 【發明内容】 於第一態樣中，本發明提供—種完整營養組合物，其用 〇 力減輕因食物過敏原引發過敏之患者之源自食物的過敏症 狀之，尤其是對嬰兒及/或幼兒。 於第二態樣中’本發明提供—種組合物，其顯著促進因 f物過敏原引發之過敏反應之二級預防，但視需要不影響 對抗同一過敏原之一級預防。 於第二態樣中，本發明提供一種富集多紛（尤其梯精）之 組合物。 於本發明之另-態樣中，本發明組合物對嬰兒及/或斷 奶時之幼兒極其有效。 147983.doc 201043153 原之敏化。 本發明進一步提供缓解日後對其他過敏 【實施方式】 定義：在本説明書中，以下術語具有如下意義： 「完蒼#相##」。對於此文獻而言，Μ營養^ 物為一種含有顯著量’通常5〇%或以上之針對特定年㈣ 篇的主要營養素之組合物1使収以提供針對特定年齡 所推薦攝熱量之適量時，此等主要營養素通常係提供滿‘ 特定年齡50%或更多特定推薦營養素劑量之量及比例。完 整營養組合物通常包含蛋白質源、脂質源、碳水化合： 源’而其以滿足特定年齡一般所推薦量之均衡比例存在。 其通常亦包含諸如維生素及礦物質之微量營養素、及一必 需胺基酸源及m旨肪酸源。但應了解完整營養虹合物 不可包含所有特定營養物及所有推薦量來滿^嬰兒或幼兒 養需求。完整營養組合物排除僅含蘋果萃取物或 蘋果萃取物佔主要比例之組合物。 「趨鉸症泼」通常包含過敏原觸發的症狀。此等症狀包 含皮膚（皮膚發紅、皮療、發癢、皮炎、濕療）、眼睛（眼睛 發癢及流淚）、胃腸（充血、腹痛、抽筋"區吐腹⑹、呼吸 (鼻子心'癢鼻塞、鼻炎 '哮喘）及嚴重情況時之全身（眩 暈、意識模糊、過敏反應）表徵。 遜嶔及邊之一.毅預·啟」意指旨在避免或緩解過敏（免 疫）敏化之所有措施，諸如防止或降低特定抗體。 過毅及應之一 ·敍預·嚴」意指阻止經敏化個體之過敏性 疾病/過敏症狀之發展。 347983.doc 201043153 辟勿j」係指嬰兒自純液體營養物適應固體或半固體 食物，及自近單-食物類型（通常係母乳或嬰兒配方）適應 各種食物之期間。 「餃允」意指過敏原·特異IgE抗體之引入/發展。 孩至/勿龙/姿龙/衫耍」：因孩童或幼兒特別易受食物 過敏〜響，故本發明組合物欲針對孩童及/或嬰兒，但非 限於此者。根據2006年12月22曰之歐洲委員會指示 ❹ 2006/141/EC之第2章中出現的關於嬰兒配方及較大嬰兒配 方之定義，「嬰兒」為不滿n個月之孩童且幼兒為1至3歲 之間的孩里。術語「孩童」包含丨至丨4歲的年齡群。幼嬰 可相當於嬰兒及/或幼兒。 發明者已證實當於經敏化之年幼哺乳動物提供含有蘋果 萃取物之完整營養組合物時，可減輕過敏反應及症狀。此 對過敏反應之二級預防存在正面影響。 令人吃驚地’該影響未伴隨有年幼哺乳動物對過敏原之 ❹ 敏化作用之緩解（即未證實過敏反應之一級預防）。 組合物之作用 本發明係關於一種以含有多酚之蘋果萃取物於製造用於 _ 緩解因食物過敏原引起過敏反應之患者之（源自食物之過 敏反應之）症狀之完整營養組合物上之用途。發明者已證 實於接受含有蘋果萃取物之營養組合物之小鼠群中，蘋果 萃取物可緩解食物過敏症狀。此於敏化後引發過敏反應 (激發）時證實。模型模擬人之食物過敏，此時人（典型地嬰 兒/幼兒）經食物過敏原自然敏化。因此，蘋果萃取物顯示 147983.doc 201043153 保邊效應。未受理論限制，相信頻果萃取物之多紛盘完蚊 =養組合物（狀言之脂肪或蛋白組分）相互反應以輸送= 南之作用效果。 於本發明之-實施例中，組合物之作収準確而言為對 過敏反應之二級預防之作用。小鼠模型之過敏反應之症狀 的確有明顯緩解，就如過敏臨床評級較低所示。通常而 言，症狀可包含所有-般公認的過敏症狀或其中一選項。 ;本發月之f施例中’症狀包含腹渴、皮膚刺激或呼 吸症狀或其等組合。 0 於本發明之-實施例中，症狀伴隨有諸如類騰蛋白酶、 凝乳酶、組胺、白三烯之生化介體之釋放。 但於本發明之—實施例中，組合物於患者對過敏原之敏 化無效。的確-級預防似乎並非係藉由含有頻果萃取物之 組合物達成。患者仍對食物過敏原產生敏化，但再次暴露 於敏化過敏原所發展的過敏症狀減輕。未受理論限制，認 爲》玄作用未因此減輕自然免疫防禦（其對患者具有正面效 果）而僅減輕過敏症狀之表現。 ❹ 於實施例中，組合物減輕日後對其他過敏原之敏化。 相信組合物促進（或至少不阻礙）免疫熟化之自然過程，且 因此可對降低於同一過敏原或不同過敏原之敏化存在長期 — 作用效果（緩解日後敏化）^僅藉由緩解過敏症狀（二級預 防），假定本發明組合物可使自然免疫熟化發生，且具有 如此長期有益影響。 本發明之組合物 147983.doc •10- 201043153 於本發明之一實施例中，組合物包含富集多紛之顏果萃 取：。相較於粗製蘋果萃取物(未富集)，該蘋果萃取物的 確虽集多酚。於一實施例中，富集因子為至少15，至少2 或—至少5。肖組合物之$文果似乎重要在於蘋果萃取物濃度 (田本夕酚）足以發展及發揮抗過敏效果。該效果可藉由阻 礙過敏媒質自諸如肥大細胞之效應細胞釋放而進行介導 (此效果相當於抗組胺藥劑ρ未受理論限制，亦相信大量 存在於蘋果萃取物之一些化合物可結合蛋白過敏原，將其 罩蓋之以免遭宿主免疫系統識別。不排除蘋果萃取物（可 能係活性多酚）與組合物之特殊蛋白質（存在於組合物中之

Ο 蛋白質-尤其係源自牛乳之蛋白質y反應形成錯合物且罩蓋 可能的過敏原。 於本發明之一實施例中，組合物包含0 0丨重量％至3重量 %之蘋果萃取物。於一實施例中，組合物包含〇1重量％至 1重量％之蘋果萃取物或〇.4重量％至0.6重量％。雖然關鍵 在於蘋果萃取物量充足可產生所需效果，但蘋果萃取物量 太高將因負面影響組合物（營養物不均衡）而具有副作用。 此意指，錯合太多蛋白質可改變組合物之生物可利用蛋白 質之含量。 於本發明之一實施例中’蘋果萃取物為購自Val de

Bioactives (Conde sur Vire，法國）之參照「p〇mactiv HFV 之蛋白質萃取物。於一實施例中，蘋果萃取物類似於或源 自所引用的Pomactiv HFV且具有類似的效果。 於本發明之一實施例中，組合物包含櫟精。櫟精可包含 147983.doc 201043153 於頻果卒取物中’尤其包含於蘋果萃取物之多酚組分中。 特定言之，櫟精可結合/錯合其中包含過敏原蛋白質之办 整營養組合物之蛋白f，且錯合可藉由使過敏原與免疫^ 統分開而產生抗過敏效果。 、 於本發明之-實施例中，組合物包含水解或部分水解蛋 白以（β刀）水解蛋白爲主之營養組合物特別適於嬰兒/幼 兒之免疫线及胃腸道，原因在於水解蛋白較完整蛋白更 易消化且過敏性降低。且可假設水解蛋白可極有效地藉由 頻果萃取物之多紛固定，諸如因其相對大小。此可提高過 敏原之遮蔽效應且因此可進-步降低組合物之過敏性。此 表不最適合食物過敏之嬰兒/幼兒之免疫系統及胃腸道之 、，且口物⑨此情況下，蘋果萃取物與水解蛋白之組合 發明相關性最強。 〃 於一實施财，水解蛋Μ自乳清蛋白及/或赂蛋白水 解之蛋白質。於 '—鲁iik Μ上 貞於冑施例中’水解蛋白仙胰蛋白酶及/ 或糜蛋白酶對蛋白質(尤其乳清蛋白)之作用而產生的。於 —實施例巾，水解蛋白包含大豆蛋白及/或蛋蛋白。於一 貫施例中，水解蛋白係因諸如Pr〇Umex⑧及/或 〇卿ne⑧⑽vozyme，Den而k)之蛋白酶之作用而產 生的。。於-實施例中1合物之蛋白質，較佳係水解蛋 包含榖或蛋蛋白。於—實施例中，水解蛋白係因驗性 蛋白酶之作用產生的。本發明之組合物可包含㉘或更多 種所引用蛋白質源之混合物。 標乾組 147983.doc -12- 201043153 本發明之組合物最適於針對較年輕患者，衫排出對成 人=作用。實際優先地為年輕至仍可經歷其等免疫系統 及腸月道之成熟期的患者。於此等患者中，組合物之作用 •彳更強&或更迅速。於—實施例中，組合物為嬰兒配方、 - 嬰兒配方、成長乳、嬰兒穀物食品及/或幼嬰食品。 較大嬰兒配方通常理解為於出生六個月之後的嬰兒之^ 物。成長乳通㈣解為於幼兒及/或⑻至續❹或出 ❹冑之間的孩童。成長乳通常為以牛乳爲主之組合物… 物較佳針對嬰兒或幼兒或小於六歲、出生至3歲之間、: 出生至斷奶之間的幼年人。於—實施例中，組合物為出生 者或較大嬰兒之配方。用純與幼年人之營養組合物較佳 包含大量必需營養物。 於一實施例中，用於嬰兒/1至4歲之間的幼兒之營養租 合物為嬰兒縠物組合物。該組合物更確切地針對於斷奶期 及/或長至12個月以後且於這段期間投與。斷奶期就本發 〇日月而&確實重要’因嬰兒在斷奶期間暴露於各種食物，同 時其等免疫系統及胃腸道快速成熟。因此，有效控制過敏 反應在此期間特別重要。 於-實施例中，本發明之營養組合物係針對於山歲之 間的幼兒或3至6歲之間的孩童並特別為其㈣配之以 乳。該組合物係基於牛乳且可包含益生菌及/或益菌素。 該組合物可為⑴歲之持續療法之一部分且於⑴歲之間 及隨後之3至6歲之間投與。此投與非日常型但可正規進行 (例如’每月或週至少-次)以產生所需效果。藉由於免疫 147983.doc -13- 201043153 系統成熟之關鍵期作用及長期投與，組合物之效果更加突 出。 於一實施例中，於嬰兒早期（頭6個月）及/或6個月_丨歲及 嬰兒後期（例如1至4歲或2至6歲）投與組合物。此投與不可 每日進行但可正規進行（例如，每月或週至少一次）以產生 所期效果。長時間（若干年）内連續投與，雖然頻率相對較 低（每週一次，每月一次至4次），但可藉由於免疫系統成熟 之關鍵期作用而提高所觀察的效果。 就本發明之組合物之用途而言，孩童、幼嬰或嬰兒可為 過敏孩里。過敏孩童為對食物過敏原至少發生一次（輕 度、中度或重度）過敏反應之彼等孩童、幼嬰或嬰兒。於 本發明之一實施例中，孩童、幼嬰或嬰兒對食物過敏原嚴 重過敏及/或經歷一次以上的中度或重度食物過敏。 本發明所包含的食物過敏原可包含所有種類的天然發生 或常發生於食物，特定言之幼年人（例如嬰兒、幼嬰、孩 童）之食物中之過敏原。 實驗結果： 人及齧齒動物細胞之體外試驗表明抗氧化劑可調節肥大 細胞功能。因水果及蔬菜富集抗氧化劑，故吾人解決食物 過敏症狀是否可受水果萃取物影響。特定言之，吾人測試 小鼠食物過敏模型消化蘋果萃取物Pomactiv HFV之影響 (OVA食物過敏小鼠模型，圖1中所述）。 激發後’經蘋果萃取物處理之小鼠較經敏化之未處理動 物（陽性對照）發展較不嚴重的臨床症狀。此等結果係藉由 147983.doc -14- 201043153 圖2及3中所示之試驗結果闡述： 圖2顯示1〇隻動物/缸進行之2組獨立探索試驗之結果。 所測結果（過敏評級）顯示接受蘋果萃取物之小鼠較陽性對 照組之過敏評級降低之正向趨勢。（p分別為0.08、0.06) 圖3顯示同一模型之統計強度實驗（n=丨5/組）之結果。證 實在激發前一週期間接受蘋果萃取物（二級預防）之組的過 敏評級降低之影響且具統計顯著性（圖3 ; ρ=〇·〇14，蘋果萃 0 取物Pomactiv HFV組，二級）。於敏化期由同一蘋果萃取 物處理之组（蘋果萃取物P〇rnactiv HFV組，一級）激發後症 狀未顯示減少。同樣，由不同蘋果萃取物處理之組在激發 後症狀未減少（圖 3，Diana Naturals AFPOMM9080組）。 除臨床評級之外，小鼠肥大細胞蛋白酶l(MMCP-l)血清 水平可衡量過敏原激發之腸肥大細胞之活化。較未經處理 之對照動物，消耗蘋果萃取物Pomactiv HFV組之MMCP-1 血清水平明顯降低（圖4)。 Q 與過敏相關之多種基因之腸内表達水平可由同步定量聚 合酶連鎖反應（見以下方法qRT-PCR)確定。於組織之2個不 同點（陽性對照组、陰性對照組及接受蘋果萃取物 (Pomactiv HFV)組之回腸皮耶氏節及回腸）於激發前一週期 (二級預防）測量基因表達。圖5(表1)及圖6(表2)闡述所得結 果··接受蘋果萃取物Pomactiv HFV之組顯示多種基因之表 達減少’包含回腸皮耶氏節内之細胞活素介白素（IL)-5、 IL-13、IL-10、干擾素（IFN)-y及趨化細胞素CCL11(嗜伊紅 趨化因子）及回腸内之細胞活素IL-13、IL-10、IL-12、 147983.doc -15- 201043153 IFN-γ、趨化細胞素ccli 1(嗜伊紅趨化因子）及轉錄因子 GATA-3。已證實表達減少之基因通常為已知促使過敏發 展之T助手2表現型（IL_5, IL_13, CCL1 ls GATA_3)所識別的 標示物。因此，實驗表明經敏化動物接受蘋果萃取物（二 級預防）日ΤΓ藉由減少相關基因之表達而下調免疫反應。據 信此將導致所測蘋果萃取物於減少過敏症狀之抗過敏作用 (二級預防）。 結論 此等數據表明經敏化之動物消化富集多酚之蘋果萃取物 (Pomactiv HFV)暴露於敏化過敏原時使過敏症狀減少。症 狀減少伴隨著MMCP-1之血清濃度降低及與腸過敏相關之 關鍵基因之表達減少，表明諸如肥大細胞之免疫系統之組 分之調節產生保護效應。 分析方法： OVA食物過敏小鼠模型： 藉由經口途徑（例如管飼針）敏化六週大的傳統成年 BALB/c小鼠，每週 20 mg 來自 Fluka (Buchs, Switzerland)之 印清蛋白（〇VA)+10 pg/小鼠之來自 LuBioscience (Lucerne, Switzerland)之霍亂弧菌毒素（用作輔劑），持續7週。距上 一次敏化一週後，藉由100 mg OVA進行經口激發。整個 實驗係藉由併入食物（Kliba 3200，Kliba Nafag Kaiseraugst， Switzerland)之來自 Val de Vire Bioactives (Val de Vire Bioactives - BP2 - 50890 Conde sur Vire，法國，參考種 類：「Pomactiv HFV」）之蘋果萃取物HFV或來自Diana 147983.doc -16 - 201043153

Naturals (Antrain，法國）之 AFPOMM9080(1 重量 ％)進行營 養介入；作爲於敏化期之一級預防或敏化末期開始之二級 預防（圖1)。激發15分鐘後，於30分鐘内分別觀察小鼠。記 錄臨床症狀且如下量化（過敏評級）：0 :無症狀，搔癢次數 小於4次；1 :鼻及頭附近搔癢次數4-10次，無腹瀉；2 : 搔癢次數超過10次或豎毛及無運動或軟便；3:腹瀉或呼 吸費力或發紺；4 :刺激後腹瀉及無運動、豎毛、呼吸費 力或發紺；5 :過敏反應。激發4小時後，小鼠死亡（頸椎 脫位），抽血及最後一釐米之回腸及位於同一面積之一皮 耶氏節並凍結於液氮中。 血清 MMCP-1 : 根據製造商指示，於小鼠血清中藉由講自Moredun Scientific (Midlothian, Scotland)之 ELISA量化鼠科動物之 肥大細胞蛋白酶l(MMCP-l)。藉由利用多項式標準曲線將 OD值轉化而獲得單位為pg/ml之MMCP-1濃度。 腸内基因表達之低密度陣列分析： RNA提取及量化： 根據製造商規程，利用購自Promega(Dtibendorf, Switzerland)之SV總RNA分離系統套組自回腸及皮耶氏節 提取總核糖核酸（RNA)。 根據製造商規程，利用所提供的quant-IT Ribogreen試劑 套組（Promega Dtibendorf, Switzerland)量化 RNA。 反轉錄： 於 1 Kg總 RNA上藉由利用來自 Applied Biosystems(Foster 147983.doc 17 201043153

City USA)之Multiscribe反轉錄酶套組進行反轉錄。將總 RNA與50 μΜ無規六聚物、0.5 mM dNTP、20 U RNase抑 制劑（Applied Biosystems)、62.5 U Multiscribe反轉錄酶、 IX RT緩衝劑、及5.5 mM MgCl2混合，且最終體積為5〇 μΐ。於T3熱循環機（Biometra，G5ttingen，德國）上進行反轉 錄且循環程式如下：25°C下1〇分鐘，48°C下30分鐘’ 95°C 下5分鐘至4°C下結束。 LDA ： 於 Applied Biosytems網站（http://www3.appliedbiosystems. comMndex.htm)在線設計低密度陣列。根據製造商規程於 量化ABI-Prism 7900HT上進行負載、運行及分析。 利用3種管家基因：β-肌動蛋白、GAPDH及HPRT之平均 值對定量進行標準化處理。基於所得的循環閥值（Ct)，利 用ACt確定每一基因之經標準化之相對mRNA表達。每一 基因之Ct值係藉由三種管家基因之Ct平均值進行校正。利 用式-2-ACtxK以相對表達計算結果，K為106係數。對較陰 性組之表達水平成倍增加的結果表達進行標準化。 【圖式簡單說明】 圖1 : OVA食物過敏小鼠模型之概述； 圖2 :過敏原激發前一週期間接受1%蘋果萃取物之小鼠 之食物過敏症狀減輕。2獨立試驗之結果； 圖3 :敏化期間（一級）或過敏原激發前一週期間（二級）接 受 1% 蘋果萃取物（Pomactiv HFV 或 Diana Naturals AFPOMM9080)之小鼠之食物過敏症狀減輕； 147983.doc •18· 201043153 〇

圖4 :激發4小時後血清中小鼠肥大細胞蛋白酶1(MMCP-1)之中值濃度； 圖5/表1 :回腸皮耶氏節之基因表達水平；及 圖6/表2:回腸之基因表達水平。 147983.doc -19·

Claims (1)

1. 201043153 七、申請專利範圍： 1. 一種以包含多酚之蘋果萃取物用途，其係用於製造供減 少因食物過敏原引起過敏之患者所源自食物之過敏症狀 的完整營養組合物。 2 ·如請求項1之用途，其中該組合物提供對因該等食物過 敏原引起之過敏反應之明顯的二級預防。 3.如上述請求項中任一項之用途’其中該組合物對該等患 者於該等過敏原之敏化無影響。 4·如上述請求項中任一項之用途，其中該蘋果萃取物富集 對較粗蘋果萃取物之至少1.5因數之多酚。 5. 如上述請求項中任一項之用途，其中該組合物包含0.1重 量％至1重量％之該蘋果萃取物。 6. 如上述請求項中任一項之用途’其中該組合物包含櫟 精。 7. 如上述請求項中任一項之用途，其中該組合物包含水解 蛋白。 〇 8. 如上述請求項中任一項之用途’其中該組合物降低日後 對其他過敏原之敏化。 - 9·如上述請求項中任一項之用途，其中該蘋果萃取物為來 . 自凡迪販生活食品供應商Val de Vire Bioactives (Conde sur Vire，法國）之珀瑪醍蘋果（Pomactiv HFV)。 10.如上述請求項中任一項之用途’其中該等症狀為腹瀉、 皮膚刺激或呼吸症狀或其組合。 11·如上述請求項中任一項之用途，其中該組合物包含穀蛋 147983.doc 201043153 白。 12.如上述請求項中任一項之用途，其中该組合物為嬰兒配 方、較大嬰兒配方、成長乳品、嬰兒穀物或幼嬰食物。 13_如上述請求項中任一項之用途’其中該組合物為1至4歲 嬰兒之嬰兒榖物组合物。 14.如上述請求項中任一項之用途，其中該組合物提供給斷 奶期及/或超過12個月大之嬰兒。 I5·如上述請求項中任一項之用途，其中該等患者為嬰兒或 6歲以下，較佳出生至3歲之間的幼兒。 16.如上述請求項中任一項之用途，其中該等症狀伴隨有生 化媒質之釋放’諸如類胰蛋白酶、凝乳酶、組胺、白三 稀。 147983.doc