TW201021852A - Releasable fusogenic lipids for nucleic acids delivery systems - Google Patents

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TW201021852A
TW201021852A TW098138943A TW98138943A TW201021852A TW 201021852 A TW201021852 A TW 201021852A TW 098138943 A TW098138943 A TW 098138943A TW 98138943 A TW98138943 A TW 98138943A TW 201021852 A TW201021852 A TW 201021852A
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Hong Zhao
wei-li Yan
lian-jun Shi
Maksim Royzen
Dechun Wu
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Enzon Pharmaceuticals Inc
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    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • A61K9/1271Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents

Description

201021852 六、發明說明: 相關申請案之交互參照 本申請案主張2008年11月17 u φ ^ 申M之美國臨時專利 申靖案第61/"5’378之優先權權益,其内容 併入本文中。 万式 【發明所屬之技術領域】 L无則技術】 過去幾年來,已提出使用核酸之 康在力圖治療各種疾 病。反義療法之類的療法在疾病治療方面是有力的工具, 因為治療基因可選擇性地調節與疾病相關之基因表現:使 可能在使用其他治療方法時發生之副作用降至最低。 然而,使用核酸之療法由於不良的基因穩定性和益效 的遞…直受到限制。已提出若干基因遞送系統以克服 ❹這些難題,且有效地在試管内及活體内將治療基因引入把 祀區域’諸如癌細胞或組織。這類試圖改良遞送及增進: 療性基因之細胞吸收的嘗試係針對利用脂質體。 目前可利用的脂質體不能有效地將募核苦酸遞送至身 體内’雖然在質體遞送方面已做到一些進展。在募核苦酸 的遞送方面,合意的遞送系應包括足以中和募核苦酸負電 荷的正電荷。最近,分別自Stuart,D,D等人,“
Bi_s. Acta,2_,1463:219.229 和 Sempie,s c 等人 3 201021852
Biochim. Biophys· Acta, 2001,1510:152-166 所敘述之經塗 佈陽離子脂質體(CCL )和穩定核酸-脂質粒子(snalP ) 調配物,據報導可提供具有小尺寸、高核酸包封率、良好 灰清穩定性及長循環時間的奈米粒子。 儘管有這些嘗試及進展,仍然有提供改良之核酸遞送 系統的需求。本發明即解決此需求。 【發明内容】 本發明提供含有亞胺鍵聯基與兩性離子部分之可釋放 聚合脂質,以及用於遞送核酸之含有該脂質之奈米粒子組 成物。多核酸,諸如寡核苷酸,係被包封於含有陽離子脂 質、本文所述之可釋放融合性脂質及pEG脂質之混合物的 奈米粒子複合物内。 根據本發明之此態樣,用於遞送核酸(亦即寡核苷酸) 之可釋放融合性脂質具有式(〖):
R—(1-1 )a Μ-(L2)b Q 其中 R為水溶性電中性或含兩性離子之部分;
Ll-2為獨立選擇之雙官能鍵聯基; Μ為含亞胺之部分; Q為經取代或未經取代之飽和或不飽和含C4_3〇之邻 分; ° (a) 為零或正整數;且 (b) 為零或正整數, 本發明亦提供用於核酸遞送之奈米粒子組成物。根據 201021852 本發明,用於遞送核酸(亦即寡核苷酸)之奈米粒子組成 物可包含: ⑴陽離子脂質; (ii) 式(I)化合物;及 (iii) PEG 脂質。
在本發明之另一態樣中,提供在活體内及試管内將核 酸(較佳為寡核苷酸)遞送至細胞或組織之方法。由本文 所述之方法引入之寡核苷酸可調節標靶基因之表現。 本發明之另一態樣提供抑制哺乳動物(較佳為人類) 之標乾基0 (亦即致癌基因及與疾病相關之基因)表現之 方法。該方法包括使諸如癌細胞之細胞或組織與自本文所 述之奈米粒子組成物製備之奈米粒子接觸。包封於奈米粒 子内之募核苷酸被釋放,其接著 »ΧΤΑ ^ 、者"^所> 口療細胞或組織中 mRNA或蛋白質之下調。用太半 么 ^ '落($ 不^ ,》口療谷許在惡性疾病治 療(诸如癌細胞生長之抑制)中調節標革巴基因之表現 伴隨的與其相關之益虛) 士 01處)。廷類療法可作為單一治 或作為組合療法的一部分與 '、 -起進行。 夕裡週用及/或批准的治療 以及含有該化合物之 進—步態樣包括製造式(I)化合物 奈米粒子的方法。 米粒子組成物提 米粒子可在奈米 於其内之核酸。 本文所述之含可釋放融合性脂質之夺 供用於活體内及試管内投予核酸的手段J 本文所述之含可釋放融合性脂質之奈 粒子進入細胞與細胞隔室時絮助釋放包: 5 201021852 不受任何理論約束’這種特徵有部分係歸結於酸不穩定鍵 聯基。以亞胺為基之鍵聯基為酸不穩定的且在諸如癌細胞 及核内體之酸性環境中水解。因此,以亞胺為基之鍵聯基 可促進奈米粒子之分裂,從而使核酸可在細胞内釋放。 含兩性離子電荷基團之可釋放融合性脂質增強核酸之 細胞攝取。該極性但電中性之基團使奈米粒子容易越過細 胞膜。 本文所述之可釋放融合性脂質使奈米粒子複合物及其 中的核酸在生物體液中穩定。奈米粒子複合物可保護核酸 分子免受核酸酶作用’從而保護該多核酸免於降解。 本文所述之奈米粒子遞送系統容許足量之治療性寡核 苷酸可經由EPR (增強滲透與滯留)作用而在所欲標靶區 域(諸如癌細胞)處可供選擇性地利用。該在標靶區域之 治療性核酸可調節癌細胞或組織令特異地調節標靶基因的 表現。 本文所述之奈米粒子亦可用於遞送生物活性分子,諸 如小分子化療劑以及一或多種不同類型的治療性核酸,從 而獲得在疾病治療方面之協同效應。 其他及另外優點將自以下敘述顯而易知。 就本發明之目的而言’術語「殘基」應理解為意謂其 所指之化合物,例如C6-30烴等,在已經與另一化合物進 行取代反應後所殘留之部分。 就本發明之目的而言’術語「烷基」係指飽和脂族烴, 包括直鏈、支鏈及環狀烷基。術語「烷基」亦包括烷基-碎 201021852 ‘ 基-烷基、烷氧基烷基、環烷基烷基、雜環烷基及Cw烷基 幾基烧基。較佳地’烧基具有1至12個碳。更佳地,其為 約1至7個碳、又更佳約1至4個碳之低碳烷基。烷基可 經取代或未經取代。經取代時,取代基較佳包括鹵基、氧 基、疊氮基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、烷基-硫基、烷 基-硫基-院基、烧氧基烧基、烧基胺基、三齒甲基、羥基、 巯基、羥基、氰基、烷基矽烷基、環烷基、環烷基烷基、 雜環烷基、雜芳基、烯基、炔基、(^_6烴基、芳基及胺基。 ® 就本發明之目的而言,術語「經取代」係指增加一種 來自以下之群之部分或以其置換在官能基或化合物内所含 之一或多個原子:鹵基、氧基、疊氮基、硝基、氰基、燒 基、院氧基、炫基-硫基、烧基-硫基-院基、院氧基烧基、 烧基胺基、三函甲基、經基、疏基、經基、氰基、燒基秒 烷基、環烷基、環烷基烷基、雜環烷基、雜芳基、稀基、 炔基、Cw烷基羰基烷基、芳基及胺基。 就本發明之目的而言,術語「烯基」係指含有至少一 ® 個碳-碳雙鍵之基團,包括直鏈、支鏈及環狀基團。較佳地, 烯基具有約2至12個碳。更佳地,其為約2至7個碳、又 更佳約2至4個碳之低碳烯基。烯基可經取代或未經取代。 經取代時,取代基較佳包括卤基、氧基、疊氮基、硝基、 氰基、烷基、烷氧基、烷基-硫基、烷基-硫基-烧基、烧氧 基烧基、燒基胺基、三鹵曱基、經基、疏基、經基、氮矣、 烧基發烧基、環烧基、環烧基烧基、雜環燒基、雜芳基、 烯基、炔基、Cw烴基、芳基及胺基。 201021852 就本發明之目的而言,術語「炔基」係指含有至少— 個碳-碳參鍵之基團’包括直鏈、支鏈及環狀基團。較佳地, 炔基具有約2至12個碳◦更佳地,其為約2至7個碳、又 更佳約2至4個碳之低碳炔基。炔基可經取代或未經取代。 經取代時,取代基較佳包括_基、氧基、叠氮基、确基、 氰基、烧基、烧氧基、烧基-硫基、炫>基_硫基-烧基、燒氣 基燒基、烷基胺基、三齒曱基、羥基、巯基、羥基、氰基、 烧基矽烷基、環烷基、環烷基烷基、雜環烷基、雜芳基、 烯基、炔基、C!-6烴基、芳基及胺基。「炔基」之實例包括 炔丙基、丙炔及3-己炔。 就本發明之目的而言’術語「芳基」係指含有至少— 個芳族環之芳族烴環系統。芳族環可視情況與其他芳族烴 環或非芳族烴環稠合或以其他方式連接。芳基之實例包^ 例如苯基、萘基、1,2,3,4-四氫萘及聯苯。芳基之較佳實例 包括苯基及萘基。 就本發明之目的而言,術語「環烷基」係指C38環烴。 環烷基之實例包括環丙基'環丁基'環戊基、環己基、環 庚基及環辛基。 就本發明之目的而言,術語「環烯基」係指含有至少 一個碳-碳雙鍵之C3·8環烴。環烯基之實例包括環戊烯基、 環戊二烯基、環己烯基、1,3-環己二烯基、環庚烯基、環庚 三烯基及環辛烯基。 就本發明之目的而言,術語「環烷基烷基」係指經Gy 環烷基取代之烷基。環烷基烷基之實例包括環丙基甲基及 201021852 環戍基乙基。 就本發明之目的 士 與母分子部分連接之具有指::目::基」係指經由氧橋 基之實例包括例”氧基:乙、::的院基。烧氧 ^乳巷丙虱基及異丙氧基。 「烧芳基」係指經院基取代之 就本發明之目的而言 芳基。 「芳烷基」係指經芳基取代之 術语「烷氧基烷基」係指經烷 就本發明之目的而言 院基。 ❹ Ο 就本發明之目的而言 氧基取代之烷基。 就本發明之目的而言,術钮「焓 Λ ^ # 術烷基-硫基-烷基」係指烷 基各烷基硫謎,例如甲基硫基甲基或甲基硫基乙基。 ,就本發明之目的而言,術言吾「胺基」係指正如此項技 衡中已知’藉由—或多個氫基被有機基團置換而自氨衍生 之含氮基團。舉例而言’術語「醯基胺基」及r烷基胺基」 係指分別經醯基及烷基取代基取代之特定1取代有機"·基 團。 土 就本發明之目的而言,術語「烷基羰基」係指經烷基 取代之羰基。 1 —就本發明之目的而言,術語「南素」或「鹵基」係指 氟、氣、溴及蛾。 就本發明之目的而言’術語「雜環烷基」係指含有至 少一個選自氮、氧及硫之雜原子的非芳族環系統。雜環烷 基環視情況可與其他雜環烷基環及/或非芳族烴環稠合或以 9 201021852 其他方式連接。較佳雜環烷基具有 基之實例句杠, 至7個成員。雜環烧 己括例如哌畊、嗎啉、哌啶、 及吡唑。較佳Μ ρ ρ β 四虱呋喃、吡咯啶 权佳雜%烧基包括哌啶基、 咯啶基。 底讲基 '嗎琳基及0比 就本發明之目的而言,術語「 4 一個ϋ自ϋ ^ 、方基」係指含有至少 選自虱、虱及硫之雜原子的芳族 與一 i乡Μ # # I π .. '展系統。雜芳基環可 芳族或非芳族煙環或雜環烧基環揭 u方式連接。雜芳基之實例包括例如夫喃、 噻吩、5,6,7,8-四氫異喹啉及嘧啶。 滩方基之較佳實例包括 噻吩基、笨并噻吩基、吡啶基 '喹 疋土哩啉基、吡畊基、嘧啶基、 咪嗤基 '苯并咪嗤基“夫減、笨并π夫喃基、㈣基、苯 并㈣基、異_基、聘二♦基H錄 '苯并異喧唾 基、二0坐基、四0坐基、nl;b 其、丨η·Π· «· ^比各丞吲哚基、吡唑基及苯并吡 唑基。 就本發明之目的而言,術語「雜原子」係指氮、氧及 硫。 在一些具體實例中,經取代之烷基包括羧基烷基、胺 基烷基、二烷基胺基、羥基烷基及巯基烷基;經取代之烯 基包括羧基烯基、胺基烯基、二烯基胺基、羥基烯基及疏 基稀基,經取代之炔基包括叛基块基、胺基炔基、二块基 胺基、羥基炔基及巯基炔基;經取代之環烷基包括諸如4_ 氯環己基之部分;芳基包括諸如萘基之部分;經取代之芳 基包括諸如3-溴苯基之部分;芳烷基包括諸如甲苯基之部 分;雜烷基包括諸如乙基噻吩之部分;經取代之雜芳基包 201021852 括諸如3-甲氧基售吩之部分氧基包括諸如?氧基之部 分;以及苯氧基包括諸如3_硝基笨氧基之部分。齒基應理 解為包括氟基、氯基、碘基及溴基。 就本發明之目的而言,「正整數」應理解為包括等於 或大於1且如將為一般熟習此項技術者所瞭解,在一般熟 習此項技術者視為合理之範圍内的整數。 就本發明之目的而言,術語「鍵聯」應理解為包括—
個基團與另-個基團之共價(較佳)<非共價連接,亦即 為化學反應之結果。 就本發明之目 愿、s胃達成如一般熟 效果之量。 的而言,術語「有效量」及「足量」應 習此項技術者所理解之所需效果或治療 使用本文所述之奈米粒子組成物形成之術語「夺米粒 子」及/或「奈米粒子複合物」係指以脂質為基之夺米複人 物。奈米粒子含有包封於陽離子脂質、融合性脂質及顺 c混合物中的核酸’諸如募核苦酸。或者,奈米粒子 可在無核酸之情況下形成。 就本發明之目的而古,糾古「 術°°治療性寡核苷酸)」係 曰用作醫藥或診斷劑之募核苷酸。 =明r的而言’ 「基因表現之調節」應理解為 括在不考慮投㈣徑之情況下,相較於未經本文所 之不米粒子治療時所觀測到之 何類型的基因,較佳為與癌症及炎症相:之基下;周或上調任 就本發明之目的而言,「標乾基因表現之抑制」應理 11 201021852 解為意謂相較於無本文所述之奈米粒子治療時所觀測之結 “ 果,mRNA表現或轉譯蛋白質之量被降低或削弱。這種抑制 之適合檢定包括例如使用熟習此項技術者已知之技術檢杳 蛋白質或mRNA含量,諸如圓點墨點法、北方墨點法、原 位雜交、ELIS A、免疫沈澱、酶功能以及熟習此項技術者已 知之表現型檢疋。所治療狀況可例如由細胞(較佳癌細胞) 或組織中之mRNA含量降低來證實。 泛言之,當獲得所想要的反應時,應視為成功抑制或 治療。舉例而言,可藉由獲得例如1〇%或更高(亦即2〇%、 ⑩ 30% ' 40% )與腫瘤生長抑制相關之基因下調來界定成功抑 制或治療。或者,可藉由相較於未經本文所述之奈米粒子 療時所嬈測之結果,在癌細胞或組織中致癌基因 含量(包括熟習此項技術者預期之其他臨床標記物)方面, 得到至少20%或較佳30%、更佳4〇%或更高(亦即5〇%或 80% )的降低來界定成功治療。 另外,在說明中為方便起見使用單數術語決不音欲具 有如此的限制。因&,舉例而言,提及包含寡核*酸 '膽 〇 固醇類似物、陽離子脂質、可釋放融合性脂質、PEG脂質 等之組成物係指該寡核苦酸、膽固醇類似物、陽離子脂質、 :釋放融合性脂f、PEG脂質等之一或多個分子。亦涵蓋 养核㈣可為相同或不同類型之基因。亦應瞭解本發明不 :於本文t揭示之特定構型、製程步驟及物質,因為這類 構型、製裎步驟及物質可在某種程度上變化。 亦應瞭解本文中採用之術語僅出於描述特定具體實例 12 201021852 之目的且不意欲具有限制性,因為本發明之範峰將由所附 加之申請專利範圍及其均等物來限制。 【實施方式】 A. 概述 K式⑴之可釋放融合性脂質 在本發明之-態樣中,提供式⑴之化合物: ⑴R——(L^g- 其中:
•(L2)b-Q 分 R 4水溶性電中性或含兩性離子之部分 Ll·2為獨立選擇之雙官能鍵聯基; Μ為含亞胺之部分; Q為經取代或未經取代之飽和或不飽和含gw 之 邡 如 (a)為零或正整數,較佳為零或約丨至約1〇之整數(例 6);且 如 同的 (b)為零或正整數,較佳為零或約1至約1 0之整數(例 1'2'3^4>5^6), 田(a)和(b)等於或大於2時,L,和L2獨立地為相 同或不 在 基( 個較佳態樣中,本文所述之式(I)化合物 月曰族)。Q基團具有式(ia):(la) 烴
Qi •(Yi)c-(CR2R3)d
I X—q2 〇3 13 201021852 其中
Yl和Y’l為Ο、S或NR4,較佳為〇; (c) 為0或1 ; (d) 為ο或正整數’較佳為零或約1至約1 ο之整數(例 如1、ο 2、3、4、5、6 ); (e) 為0或1 ; X為C、N或P ;
Qi 為 Η ' Cm 烷基、NR5、〇H 或 -(Ln)fi—(Vnig!—(-C-)-—Rl1 , Q2 為 Η、c"烷基 ' NR6、〇H 或
R Λ2 一 (L12)f2—(Yl2)g2-\rC— Q3為孤電子對、(=〇)、H、Cl-3烷基、NR7、OH或 •(Ll3)f3—(Yl3)g3—^C — h3
R ‘13 其限制條件為 ()田x為c時,Q3不為孤電子對或(=0); (11)當X為N時,q3為孤電子對;及 (0田X為P時,Q3為( = 〇)且⑷為〇, 其中 Y" Ll2及L!3為獨立選擇之雙官能間隔基; NR8 ; .Yl2及Yl3獨立地為〇、S或nr8,較佳為〇或 Y, 12 Y U獨立地為〇、S或NR8,較佳 為〇 ; 201021852 R] !、R!2及Rn獨立地為經取代或未經取代之飽和或不 飽和C 4 - 3 0 ; (fl)、(f2)及(f3)獨立地為〇或1 ; (gl)、(g2)及(g3)獨立地為〇或1 ;且 (hi)、〇2)及(h3)獨立地為〇或1 ; R2·3獨立地選自於下列所組成之群組:氫、經基、胺、 經取代之胺、C〗_6烧基、C2.6稀基、C2.6炔基、C3·]9支鏈燒 基、C3_8環烷基、經取代之c〗·6烷基、經取代之Cw烯基、 © 經取代之炔基、經取代之C3·8環烷基、芳基、經取代 之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、Cl·6雜烷基及經取代之 Ci·6雜烷基,較佳為氫、羥基、胺、甲基、乙基及丙基;以 及 R4-8獨立地選自於下列所組成之群組:氫、C,_6燒基、 C2-6烯基、C2·6炔基、Cn9支鏈烷基、c:3.8環烷基、經取代 之C丨烷基、經取代之Cw烯基、經取代之〇2·6炔基、經 取代之C3_8環烷基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取 ® 代之雜芳基、Cl-6雜烷基及經取代之C,·6雜烷基,較佳為 氫、曱基、乙基及丙基, 和R!3中之至少一者或 其限制條件為Q包括R, t、R12 兩者(例如一者、兩者、三者)。 涵蓋於本發明範疇内之雙 之組合包括其中鍵聯基和間隔 可允許而使這類組合產生穩定 言,等值物與取代基之組合不 官能鍵聯基與雙官能間隔烏 基之變數與取代基之組合為 式(I)化合物之組合。舉例而 允卉氧、氮或羰基直接與亞 15 201021852 胺相鄰定位。 較佳地,Q包括Ru、Rlz和R]3中之至少兩者。 當(句等於或大於2時,-C(R2R3)_在每次出現時相同或 不同。 在本發明之一較佳態樣中,含亞胺之基團具有下式. _N=CR】-或 CR丨=N-,
其中Ri為氫、c〗-6烷基、Cm支鏈烷基、CM環烷基、 經取代之Cm烷基、經取代之C3·8環烷基、芳基及經取代 之芳基’較佳為氫、甲基、乙基及丙基。 在一個較佳具體實例中,M鍵聯基為·N:=cH_或CH=N· 根據本發明,本文所述之可釋放融合性脂質具有式 (I,b): " ” R —从―…叫一从—(Yl)c-(CR2R3)d_^g_^_|_Q2 R—(Ll)a〜CRl=N-(L2)b—(Y^c—(CR2R3)d—^C-)-~~x__q2 Q3 0 2,水溶性電中性或含兩性離子之部分:R基困 本文所述之化合物包含末端兩性離子。在一個具體實 例中’兩性離子包含胺與酸。酸部分位置與胺距離三至八 個原子(例如酸部分位置與胺距離3、4、5、6、7或8個 原子)。較佳而言,酸部分位置與胺距離三至六個原子。 I包括但不限於羧酸、磺酸或磷酸。 在另一具體實例中,含兩性離子之部分為兩性離子形 16 201021852 式之胺基酸。R基團之一些例示性實例包括但不限於. -CH(COO)(NH3,
Lys = -HN-(CH2)4CH(COO)(NH3),
Glu = -C(=0)-(CH2)2CH(COO)(NH3)及 Asp = -C(=0)-(CH2)CH(C00)(NH3) 〇 在另一個具體實例中,含兩性離子之部分為兩性離子 形式之胺基酸的衍生物。該胺基酸為天然存在的胺基酸< 天然存在的胺基酸的衍生物。一些胺基酸類似物及衍生物 ® 的例子包括:2-胺基己二酸、3-胺基己二酸、β_丙胺酸、p_ 胺基丙酸、2-胺基丁酸、4-胺基丁酸、哌啶酸、6-胺基己酸、 2-胺基庚酸、2-胺基異丁酸、3-胺基異丁酸、2-胺基庚二酸、 2,4-胺基丁酸、鎖鏈素((!6811103丨116)、2,2-二胺基庚二酸、 2,3-二胺基丙酸、N-乙基甘胺酸、N-乙基天冬醯胺酸、3-羥 基脯胺酸、4-羥基脯胺酸、異鎖鏈素、別異白胺酸、N-甲基 甘胺酸或肉胺酸、N-曱基-異白胺酸、6-N-曱基離胺酸、N-甲基纈胺酸、正纈胺酸、正白胺酸、烏胺酸及其他族繁不 ❿ 及備載,其係列舉於63 Fed. Reg·,29620,29622中’茲以 引用方式併入本文。 3. 雙官能鍵聯基:L,及L2基團 根據本發明,如包括在式(I)化合物内之基團係選自: -(CR2iR22)tr[C(=Yi6)]ar, -(CR2lR22)tlYl7-(CR23R24)t2-(Yl8)a2-[C(=Yl6)]a3- ’ -(CR21R22CR23R24Yl 7)tl-[C(=Yi 6)]a3,, -(CR21R22CR23R24Y17)U (CR25R26)t4_(Yl 8)a2-[C(=Y! 6)]a3-, 17 201021852 _[(CR21R22CR23R24)t2Y17]l3(CR25R26)t4_(Y,8)a2_[C(=Y16)]a3_, -(CR21R22)tI-[(CR23R24)t2Yl7],3(CR25R26)t4-(Yl8)a2-[C(=Y,6)]a3- > -(CR21R22)tl(Y17)a2[C(=Y16)]a3(CR23R24)tr, -(CR2lR22)tl(Y 17)a2[C(=Y 16)ja3Yl4(CR23R24)t2- J -(CR21R22)tl(Y17)a2[C卜Y16)]a3(CR23R24)t2-Y15-(CR23R24)t3-, -(CR2lR22)tl(Y 17)a2[C(=Y16)]a3Y14(CR23R24)t2-Y15-(CR23R24)〇- » -(CR21R22)tl(Yl7)a2[C(=Y16)]a3(CR23R24CR25R26Y19)t2(CR27CR28)tr, -(CR21R22)tl(Yl7)a2[c(=Y16)]a3Y14(CR23R24CR25R26Yl9)t2(CR27CR28)t3_,及
R27 -(CR2 丨 R22)t 丨[C(=Y ] 6)]a3 γ 丨 4(CR23R24)t2 —〇— (CR25R26)t3- 其中: Y|6為〇、NR28或s,較佳為氧;
Yl4-15和Y17_19獨立地為Ο、NR29或S,較佳為〇或 nr29 ; 尺2丨·27獨立地選自氫、羥基、胺、CN6烷基、C3-丨2支鏈 烧基、環烷基 '經取代之d.6烷基、經取代之c3_8環烷 基'芳基、經取代之芳基、芳烷基、c16雜烷基、經取代之 © Ci-6雜烧基、CU6烷氧基、苯氧基及Cl_6雜烷氧基,較佳為 氫、曱基、乙基或丙基;以及 R2 8-29獨立地選自氫' 烷基、C3 — 12支鏈烷基、C3_8 環貌基、經取代之C,_6烷基、經取代之c3_8環烷基、芳基、 經取代之芳基、芳烷基、cN6雜烷基、經取代之Cu雜烷基、 C!-6烧氧基、苯氧基及C| 6雜烷氧基,較佳為氫 '甲基、乙 基或丙基; 18 201021852 ,較佳為 、6) 零 ‘ (tl)、(t2)、(t3)及⑽獨立地為零或正整數 且 或約1至約10之正整數(例如丨、2、3、4、5 (a2)及(a3)獨立地為零或1。 涵蓋於本發明範疇内之雙官能Li鍵聯基包括其中取代 基與變數之組合為可允許而使這類組合產生穩定式(I)化合 物的鍵聯基。舉例而言,當(a3)為零時,Yi?不直接與 鍵聯。 就本發明之目的而言,當雙官能鍵聯基之值為等於或 ® 大於2之正整數時,可使用相同或不同雙官能鍵聯基。 當(tl)、(t2)、(t3)及(t4)各獨立地等於或大於2時, R21-R28在每次出現時獨立地相同或不同。 在一具體實例中,Y]4-I5及Yl7-I9為Ο或NH;且卜29 獨立地為氫或甲基。 在另一具體實例中,Yl6為〇;丫14叫5及丫17-|9為〇或 ΝΗ ;且 R2|_29 為氯。 在某些具體實例中,L!係獨立地選自於下列: -(CH2)t,-[C(=0)]a3-, -(CH2)tlY17-(CH2)t2-(Y18)a2-[C(=0)]a3-, -(CH2CH2Yl7)tl-[C(=0)]a3-, -(CH2CH2Y17)tl(CH2)t4-(Y18)a2-[C(=0)]a3· ’ -[(CHaCHziaYnltsCCHzk-iYisk-tCC^ilas-' -(CH2)tl-[(CH2)t2Yl7]t3(CH2)t4-(Y 18)a2-[C(=〇)]a3- ' -(CH2)tl(Y17)a2[C(=0)]a3(CH2)t2-, -(CH2)tl(Y17)a2[C(=0)]a3Yl4(CH2)t2-' 201021852 -(CH2)tl(Yl7)a2[C(=0)]a3(CH2)t2-Y15-(CH2)t3-, -(CH2)tl(Y17)a2[C(=0)]a3Y14(CH2)t2-Y15-(CH2)t3-, -(CH2)tl(Y17)a2[C(=0)]a3(CH2CH2Y19)t2(CH2)t3-,及 -(CH2)tl(Y17)a2[C(=0)]a3Y14(CH2CH2Y19)t2(CH2)t3-, 其中
Yl4」5及Yn-u獨立地為〇或NH ; (tl)、(t2)、(t3)及(t4)獨立地為零或正整數,較佳為零 或約1至約10之正整數(例如1、2 ' 3、4、5 ' 6 ) •,且 (a2)及(a3)獨立地為零或1。 當(tl)或(t3)等於或大於2時,Y17在每次出現時相同或 不同。 當(t2)等於或大於2時,Υ19在每次出現時相同或不同。 在另一具體實例及/或替代具體實例中,L!基團之例示 性實例係選自於下列: -CH2- > -(CH2)2- ,-(CH2)3- ,-(CH2)4- ,-(CH2)5- ,_(CH2)6- > -NH(CH2)- > -CH_2)CH2-, -(ch2)4-c(=o)-,-(ch2)5-c(=o)-,-(ch2)6-c(=o)-, -CH2CH20-CH20-C(=0)-, -(CH2CH20)2-CH2〇-C(=0)-, -(CH2CH20)3-CH20-C(=0)-, -(CH2CH20)2-C(=0)-, -ch2ch2o-ch2ch2nh-c(=o)-, -(CH2CH20)rCH2CH2NH-C(=0)-, -ch2-o-ch2ch2o-ch2ch2nh-c(=o)-, 201021852 -ch2-o-(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-c(=o)-, -CH2-0-CH2CH20-CH2C(=0)-, -ch2-o-(ch2ch2o)2-ch2c(=o)-, -(CH2)4-C(=0)NH-,-(ch2)5-c(=o)nh-, -(CH2)6-C(=0)NH---CH2CH20-CH20-C(=0)-NH- > -(ch2ch2o)2-ch2o-c(=o)-nh-, -(ch2ch2o)3-ch2o-c(=o)-nh-,
-(CH2CH20)2-C(=0)-NH-, -ch2ch2o-ch2ch2nh-c(=o)-nh-, -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-c(=o)-nh-, -CH2_0-CH2CH20-CH2CH2NH-C(=0)-NH-, -ch2-o-(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-c(=o)-nh-, -CH2-0-CH2CH20-CH2C(=0)-NH- > -CH2-0-(CH2CH20)2-CH2C(=0)-NH-, -(CH2CH20)2-,-CH2CH20-CH20-, -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh -, -(ch2ch2o)3-ch2ch2nh _ , -CH2CH2〇-CH2CH2NH- > -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-, -CH2-0-CH2CH20-CH2CH2NH-' -CH2-0-(CH2CH20)2-CH2CH2NIl·, -CH2-0-CH2CH20- > -CH2-0-(CH2CH20)2-, 21 201021852
-ch2ch2nh
-c(=o)nh(ch2)2-,-ch2c(=o)nh(ch2)2--c(二o)nh(ch2)3-,-ch2c(=o)nh(ch2)3--c(=o)nh(ch2)4-,-CH2C(=0)NH(CH2)4--C(=0)NH(CH2)5-,-ch2c(=o)nh(ch2)5--C(=0)NH(CH2)6- ' -CH2C(=0)NH(CH2)6--c(=〇)o(ch2)2-,-ch2c(=o)o(ch2)2-, -c(=o)o(ch2)3-,-CH2C(=0)0(CH2)r, -c卜o)o(ch2)4-,-ch2c(=o)o(ch2)4-, -c(=o)o(ch2)5-,-CH2C(=0)0(CH2)5-, -c(=o)o(ch2)6-,-CH2C(=0)0(CH2)6-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)2-, -(CH2CH2)2NHC(=0)NH(CH2)3-, -(CH2CH2)2NHC(=0)NH(CH2)4-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)5-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)6-, -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)2-, -(ch2ch2)2nhc(o)o(ch2)3-, -(CH2CH2)2NHC(=0)0(CH2)4-, -(CH2CH2)2NHC(=0)0(CH2)5- > -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)6-, 22 201021852 -(CH2CH2)2NHC(=0)(CH2)2-, -(CH2CH2)2NHC(=0)(CH2)3-, -(CH2CH2)2NHC(=0)(CH2)4-, -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)5-,及 -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)6-。 在某些具體實例中,l2係獨立地選自於下列: -(CRI21R)22)tM-[C(=Y,i6)]a'3(CR,27CR,28)f2 -, ❹
-(CR’21R’22)t,,Y’14-(CR’23R’24)t,2-(Y’15)a,2-[C(=Y’16)]a,3(CR,27CR’28)n-, -(CR,21R>22CR,23R,24Y,14)n-[C(=Y,,6)]a'3(CR>27CR,28)r2 -, -(CR,21R,22CR,23R,24Y,14)t'l(CR,25R,26)f2-(Y,15)a-2-[C(=Y,t6)]a'3(CR,27CR,28)f3-, -[(CR,21R,22CR,23R,24)f2Y,14]tM(CR,25R,26)r2-(Y,15)a-2-[C(=Y,,6)]a'3(CR,27CR,28)r3-, -(CR,21R522)tM-[(CR,23R,24)t-2Y,14]t*2(CR,25R,26)f3-(Y,t5)a'2-[C(=Y,16)]a-3(CR,27CR,28),4- -(CR,21R)22)t.1(Y,I4)a-2[C(=Y,16)]a'3(CR,23R,24)f2-, -(CR52IR522)f1(Y,,4)a>2[C(=Y,16)]a.3Y>15(CR,23R,24)t'2-, -(CR52lR,22)f.(Y,.4)a-2[C(-Y,16)]a-3(CR,23R,24)f2-Y,15-(CR,23R,24).-3-, -(CR^RbVKY’MVdCeY’ehY’WCRyR’MVrY’WCRSR’MVr, -(CR,21RI22)t.1(Y,,4)a-2[C(=Y>16)]a.3(CR,23R,24CR,25R,26Y,15)t*2(CR,27CR,28),-3-,
-(CRbR’AWY’MVdCeY’ehY’aCRbR’MCR’wR^YWeCRSCR’W R'27 ^〇^21^22)^[€(=¥16)]33¥^4(〇^23^24),2^^^(0^25^26)^3- 其中: Υ·16為〇、NR'28或S,較佳氧; Υ·14·15及丫’17獨立地為〇、NR'29或S’較佳為0或nr’29; R’21-27獨立地選自於氫、經基、胺、C|-6烧基、C3-12支 23 201021852 鏈烷基、C3_8環烷基、經取代之Cw烷基、經取代之c3_8 環烧基、芳基 '經取代之芳基、芳烧基、c i ·6雜烧基、經取 代之C,·6雜烷基' Cl 6烷氧基、笨氡基及Cl.6雜烷氧基,較 佳為氫'甲基、乙基或丙基; R'28_29獨立地選自氫、d-6烷基、C3-12支鏈烷基、C,, 環烷基、經取代之C,·6烷基 '經取代之c3 8環烷基、芳基、 經取代之芳基、芳烷基' C1 6雜烷基、經取代之Cl6雜烷基、 C!-6烷氧基 '苯氧基及Cl 6雜烷氧基,較佳為氫、甲基、乙 基或丙基; (t 1)、(t'2)、(t’3)及(t’4)獨立地為零或正整數,較佳 較佳為
2)和(a'3)獨立地為零或1。
接興Y’14或Y,l7鍵聯。 當包括可釋放鍵聯基之雙官能 © 2之正整數時,可使用相同或 就本發明之目的而言, Ls鍵聯基之值為等於或大於 不同雙官能鍵聯基。 在一具體實例中,γ,14 獨立地為氫或甲基。 14-15 及 Y,17 為 0 或 ΝΗ ;且 R'2l 在另一具體實例中,γ· ΝΗ ;且„ Υ'14-15 及 Υ,17 為 〇 且R'21-29為氮。 在某些具體實例中, Y'16 為 〇 ; 乙2係選自於下列: 24 201021852 -(CH2)fI-[C(=0)]a.3(CH2),-2-' -(CH2)t.1Y,14-(CH2)t.2-(Y,15)a'2-[C(=〇)]a'3(CH2)|.3- -(CH2CH2Y>14).-l-[C(=0)]a'3(CH2)f2- 5 -(CH2CH2Y,14)n(CH2)t.2-(Y,l5)a-2-[C(=〇)]a'3(CH2),.3-. -[(CH2CH2)t.2Y,14]t.1(CH2)t'2-(Y,15)a-2-[C(=〇)]a-3(CH2)t.3-, -((:Η2)η(Υ’14ν2[(:(=0)]3,3((:Η2),,2- ’ -(CH2)t,,(Y’14)a,2[C(=0)]a,3Y’15(CH2)t,2- ’ -(CH2)t>1(Y,14)a-2[C(=0)]a.3(CH2),-2^^5-(^2),-3---(CH2)t.1(Ys14)a>2[C(=0)]a.3Y,i4(CH2)t-2-Y,l5-(CH2)n-, -(CHWnCY’uWCpO^eCCHzCT^YWeCH^-,及 -(CH2)t.1(Y)14)a.2[C(=〇)]a.3Y>t7(CH2CH2Y5,s)t'2(CH2),3-, 其中 Υ·Ι4-Ι5及Y'I7獨立地為O或NH ;
(t’l)、(t’2)、(t’3)及(t,4)獨立地為 ο 0或約1至约1 〇之正整數(例如1、2、 〇'2)和(a'3)獨立地為零或^。 或正整數,較佳為
且 :™等於或大於2時,、在每次出現時相同 當(t'2)等於或大於2時,γ, 在另一具體實例及/或替代 性實例係選自於下列: 15在每次出現時相同或不同。 具體實例+ ’ L2基團之例示 -CH2- · -(CH2)2- > -(CH2)3--CH(NH2)CH2-. <CH2)4- .-(ch2)5- >-(CH2)6- -nhcch2)- 25 201021852 -0(CH2)2-,-C(=0)0(CH2)3 - ’ -C(=0)NH(CH2)3 -, -C(=0)(CH2)2-,-C(=0)(CH2)r, -CH2-C(=0)-0(CH2)3-, -CH2-C(=0)-NH(CH2)3-, -CH2-0C(=0)-0(CH2)3-, -CH2-0C(=0)-NH(CH2)3-, -(CH2)2-C(=0)_0(CH2)r,
-(CH2)2-C(-0)-NH(CH2)3-, -CH2C(=0)0(CH2)r0-(CH2)r, -ch2c(=o)nh(ch2)2-o-(ch2)2-, -(ch2)2c(=o)o(ch2)2-o-(ch2)2-, -(ch2)2c(=o)nh(ch2)2-o-(ch2)2-, -ch2c(=o)o(ch2ch2o)2ch2ch2-, -(CH2)2C(=0)0(CH2CH20)2CH2CHr,
-(ch2ch2o)2-,-ch2ch2o-ch2o-. -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh -,-(ch2ch2o)3-ch2ch2nh - ’ -ch2ch2o-ch2ch2nh-, -ch2-o-ch2ch2o-ch2ch2nh-, -CH2-0-(CH2CH20)rCH2CH2NH-, -CH2-0-CH2CH20-,-CH2-0-(CH2CH2〇)2-,
26 201021852 -(ch2)2nhc(=o)-(ch2ch2o)2-, -C(=0)NH(CH2)2-,-ch2c(=o)nh(ch2)2-, -C(=0)NH(CH2)3-,-ch2c(=o)nh(ch2)3-, -C(=0)NH(CH2)4-,-ch2c(=o)nh(ch2)4-, -c(=o)nh(ch2)5-,-CH2C(=0)NH(CH2)5-, -c(=o)nh(ch2)6-,-ch2c(=o)nh(ch2)6-,
-C(=0)0(CH2)2-,-CH2C(=0)0(CH2)2-, -c(=o)o(ch2)3-,-CH2C(=0)0(CH2)3-, -c(=o)o(ch2)4-,-ch2c(=o)o(ch2)4-, -c(=o)o(ch2)5-,-CH2C(=0)0(CH2)5-, -c(=o)o(ch2)6-,-CH2C(=0)0(CH2)6-, -(CH2CH2)2NHC(=0)NH(CH2)2-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)3-, -(CH2CH2)2NHC(=0)NH(CH2)4-, -(CH2CH2)2NHCH))NH(CH2)5-, -(CH2CH2)2NHC(=0)NH(CH2)6-, -(CH2CH2)2NHC(=0)0(CH2)2-, -(CH2CH2)2NHC(=0)0(CH2)3-, -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)4-, -(CH2CH2)2NHCK))0(CH2)r, -(CH2CH2)2NHC(=0)0(CH2)6-, -(CH2CH2)2NHCe〇)(CH2)2-, -(CH2CH2)2NHC(=0)(CH2)3-, -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)4-, 27 201021852 -(CH2CH2)2NHC(0)(CH2)5-,及 -(CH2CH2)2NHC(=0)(CH2)6- 0 在另一具體貫例中,雙官能鍵聯基L· i和L2可為具有 經取代之飽和或不飽和、支鏈或直鏈C3.5◦烷基(亦即 烷基、C3_2〇烷基' C3_15烷基、c3_1()烷基等)的間隔基,其 中視情況一或多個碳係經NRe、〇、s或C(=Y)(較佳〇或 NH )置換’但不超過70%(亦即小於6〇%、5〇%、4〇%、3〇0/。、 20%、1 0% )之碳係經置換。 4.雙官能間隔基:、Li2及L13基困 © 根據本發明,雙官能間隔基二^3獨立地選自於下列: -(CR3lR32)ql·,·及 -Y26(CR3 】R32)q 丨-, 其中: Y26為Ο、NR33或s,較佳為氧或NR33 ; ❹ ^丨-32獨立地選自於氫、羥基、Cm烷基、C3.12支鏈烷 基'Cw環烷基、經取代之Ci·6烷基、經取代之c3 8環烷基、 Cl-6雜烧基、經取代之C|_6雜氧基、苯氧基及 Cw雜烷氧基,較佳為氫、曱基、乙基或丙基; R33係選自於氣、Cl·6燒基、c3_12支鏈烷基、c3_8環烷 基、經取代之Cl·6烧基、經取代之h環烧基、Cl.6雜烧基、 經取代之C丨·6雜炫美、ρ ^ .. ’ ^ 1-6燒軋基、苯氧基及(:丨.6雜烷氧基, 較佳為氫、曱基、乙基或丙基;且 (qi)為零或正整數,較佳為零或 如1、2 4、5、6 ) 至約1 0之整數(例 28 201021852 * 涵蓋於本發明範疇内之雙官能間隔基包括其中取代基 與變數之組合為可允許而使這類組合產生穩定式(I)化合物 的間隔基。 當(ql)等於或大於2時,R3!及R32在每次出現時獨立 地為相同或不同的。 在一較佳具體實例中,R31-33獨立地為氫或曱基。 在某些較佳具體實例中,R31-32為氫或甲基;且Y26為 Ο 或 ΝΗ。 © 當(ql)等於或大於2時,C(R31)(R32)部分相同或不同。 在另一及/或替代具體實例中,Ln_13係獨立地選自於下 列: -CH2-,-(CH2)2-,-(CH2)3-,-(CH2)4-,-(CH2)5-,-(CH2)6-, -0(CH2)2-,-0(CH2)3- ’ -0(CH2)4-,-0(CH2)5-,-0(CH2)6-,CH(OH)-, -(CH2CH20)-CH2CH2- > -(ch2ch2o)2-ch2ch2-, -c(=o)o(ch2)3-,-c(=o)nh(ch2)3-, -C(=0)(CH2)2-,-C(=0)(CH2)r, -CH2-C(=0)-0(CH2)3-, -CH2-C(=0)-NH(CH2)3-, -CH2-0C(=0)-0(CH2)3-, -CH2-0C(=0)-NH(CH2)3-, -(ch2)2-c(=o)-o(ch2)3-, -(CH2)2-C(=0)-NH(CH2)3-, -CH2C(=0)0(CH2)2-0-(CH2)2-, 29 201021852 -ch2c(=o)nh(ch2)2-〇-(ch2)2-, -(CH2)2C(=0)0(CH2)2-0-(CH2)2-, -(CH2)2C(=0)NH(CH2)2-0-(CH2)r, -ch2c(=o)o(ch2ch2o)2ch2ch2-,及 -(ch2)2c(=o)o(ch2ch2o)2ch2ch2-。 5. Q基團 根據本發明,Q基團含有一或多個經取代或未經取代、 飽和或不飽和之含C4-30之部分。Q基團包括一或多個C4-30 脂族飽和或不飽和烴。 Q基團係由式(la)表示: (la) 〇 -(Y^c-(CR2R3)d -I—Q2 Q3 其中
X為C、N或P ; Q,為 Η、Cj-3 烷基、NR5、OH 或 (X-) 一 (L”)f1 ——(Yll)g1-VC -R11 . Q2 為 H ' Ci-3 烷基、NR6、OH 或 一 (Ll2)f2_(Y12)g2—~\C~7^2—~R12 . t Q3為孤電子對、( = 〇)、H、Cu烷基、NR7、OH或 一 (L!3)f3_(Y13)g3\C7^~R13 30 201021852 L"、1^2及Ln為獨立選擇之雙官能間隔基; Υη、Υ’η、γ12、γ’12、Υ13 及 丫,13獨立地為 〇、s 或 NRs; rh、R!2及Ru獨立地為(經取代或未經取代)飽和或 不飽和c4_3G ;且 所有其他變數係如上文所定義, 其限制條件為Q包括Rn ' Ru及R)3中之至少一者或 兩者。 ❹ ❹ 在—個較佳具體實例中,R"、Ri2及^獨立地包括 C“°飽和或不飽和脂族烴。更佳而言,各脂族烴為飽和或 m煙(又更佳為c⑽烴:c一、稀 。脂族煙之實例包括但不限於月桂_ 12 q寇醯基(c,4)、棕櫊醯基(cI6)、硬 基(〜)、油醯基(C,8)及芬子醯基(C22)心= 飽和C12烧氧基、Cu^氧基、Ci6烧氧基、〆不 炫氧基及C22烧氧基;及飽和或不飽和Ci2烧基、c Ά c16烷基、c18烷基、c2G烷基及c22烷基。 ^基、 較佳地,R丨丨、R 及R , 〗3中之至少兩者獨立地 或不飽和Cs-24烴(更佳為C丨m煙)。 括飽和 一些Q基團實例係由下式表示. Ο ιι I -(CH2)d—C-CH - NH-C—R’ 〇 !—NH-C— 例如(d)為〇,且(ni)為丨或4 31 201021852 〇
II -o-c—Rn 〇—(CH2)d-CH-〇-C—R12 例如(d)為1,且(fll)為1 〇 (CH2)⑴一 O-R”
I _(CH2)d—CH—o—r12 (例如(d)為 1,且(fl 1)為 1 ); H〇' 、CH· -R” -o—(CH2)d—CH-NH-C—R12 〇 例如(d)為1 ); •(CH2)d—N、 及(f22)為 0 II , *C— '(CH2)f22-Yl2—C-R12 〇 (例如 Yn 及 Y12 為 O 或 NH,(f21) 1、2 或 3 ); 〇 II ,(CH2)f21-C-Rn '(CH2)f22 — C-R12 翁 〇 (例如(f21)及(f22)為1、2或3); 響 •Υι
(CH2)⑴一Ο-R 11 (CH2)fi2O R12 (CH2)f13—0—-R13 (例如 Yi 為 NH 或 O ); 32 201021852 • ,(CH2)f1r〇—C—Rn 一丫1~ \ (CH2)f12-〇-C—R12 (CH2)f13-〇-C-R13 (例如(fll)、(fl2)及(fl3)獨立地為 1 或 2); ?、/丫11-η” -γ厂Ρ( 例如Υι、Υπ及Υ12為ο); Υ12—r12 ❹ ? ?\/Υιι—C-R” 一丫厂ρ\ 9
Yi2—C-R12 (例如 Υι、γη 及 Υΐ2 為 〇) 〇 〇 (CH2)f11—Υ^—C Rn —C~ο (CH2)f12-Y12-c——R12(例如 fll 及 fi2 為 1 或 2; Υη 及 ΥΙ2 為Ο或ΝΗ)及 〇 /(CH2)f”一C-Rn —Υι~\^ 〇 (CH2)f12-c——R12 (例如(fi 1)及(fi2)為 1 或 2 ), 其中: Y!為Ο、S或NR31,較佳為氧或NH ; R1 1、R1 2及R1 3獨立地為經取代或未經取代、飽和或不 飽和CU-30 (烧基、稀基、烧氧基); R3 1為氫、曱基或乙基; (d)為0或正整數,較佳為0或約1至約10之整數(例 33 201021852 如 1、2'3、4、5、6); (Π1)、(fl2)及(fl3)獨立地為 〇、1、2、3 或 4 ;且 (f21)及(f2 2)獨立地為1、2 ' 3或4。 在某些具體實例中,Q基團包括二醯基甘油、二醯基甘 醯胺(diacylglycamide ) '二烧基丙基、磷脂醯乙醇月女或腦 醯胺。適合的二醯基甘油或二醯基甘醯胺包括烷基鏈長度 獨立地含有約c4至約C3〇、較佳約Cs至約c24之飽和或不 飽和碳原子的二烷基甘油或二烷基甘醯胺基團。二烷基甘 油或二烷基甘醯胺基團可另外包括一或多個經取代之烷 基。 本文中使用之術語「二醯基甘油」(DAG )係指具有 兩個脂肪醯基鏈R1U及Rn2之化合物。Rnl及Rll2具有相 同或不同之約4至約30個碳(較佳約8至約24個碳)且 係藉由酯鍵聯與甘油鍵結。醯基可為飽和或不飽和的而具 有各種不飽和度。DAG具有通式: 〇
CH2〇^Rl11 0 丫 HO 人 r112 ch2o-卜 〇 DAG之實例可選自於二月桂基甘油(C12)、二肉豆蔻 基甘油(C, 4,DMG )、二棕櫚醯基甘油(C i 6,DPG )、二 硬脂醯基甘油(C1S,DSG)、二油醯基甘油(C18)、二芥 子醯基(C22)、二月桂基甘醯胺(ci2)、二肉豆蔻基甘醯 胺(C! 4)、二棕櫚醯基甘醯胺(C16 )、二硬脂醯基甘醯胺 (C18 ) '二油醯基甘醯胺(C18 )、二芥子酿基甘醯胺(c22 )。 34 201021852 熟習此項技術者將容易瞭解 内。 ”他—i基甘油亦被涵蓋在 術語「二烷氧基丙基」
夕几人此 1具有兩個烷基鏈R丨丨,月R 之化合物。、及^燒基包括在約4至約30二 約8至約24個碳)之間的相同或不同者。烧基可為:較佳 或具有不同的不飽和度。_ …,已和的, 丙基具有通式: ❹ CH20-r112 CH2--1——. 其中R]〗i及RIl2烷基為具有约 „ , 巧具有約4至約30個碳(較佳約8至 、力24 )之相同或不同烷基。 人t 况暴了為飽和或不飽和的。適 5的炫基包括但不限於月桂基(D、肉豆義基(C|4)、 棕櫚基(Cl6)、硬脂基(Cl8)、油酿基(CM)及二十基 (C2〇)。 、在一具體實例中,R…與皆相同,亦即RU,與Rm2 :為肉豆蔻基(Cl4)或皆為油醯基(Ci8) #。在另一具體 實例中,Rm與Rll2不同,亦即R|ll為肉豆蔻基(D而 R 1 1 2為硬脂酿基(C I g )。 在另一具體實例中,Q基團可包括磷脂醯乙醇胺(pE)。 適用於可釋放融合性脂質共軛之磷脂醯乙醇胺可含有碳鏈 長度在約4至約30個碳(較佳約8至約24)之範圍内的飽 和或不飽和脂肪酸。適合磷脂醯乙醇胺包括(但不限於): 二肉豆鐘酿基碟脂酿乙醇胺(DMPE)、二棕櫚醯基磷脂醯 乙醇胺(DPPE )、二油醯基磷脂醯乙醇胺(D〇pE )及二硬 脂醯基磷脂醯乙醇胺(DSPE)。 35 201021852 在又另一具體實例中,Q基團可包括腦醢胺(Cer )。 腦醯胺僅具有一個醯基。腦醯胺可具有碳鏈長度在約4至 約30個碳(較佳約8至約24 )之範圍内的飽和或不飽和脂 肪酸。 一個較佳具體實例包括: 〇
II CH2—NH-C—
II I C——CH-NH-C—R12
II 〇 〇
II CH2 〇一C一Rh 〇
II (CH2)4*~NH~C—R-ιί
?\ I C-CH-NH-C—R12
II o ——〇一CH〇一CH一〇一C一R12 CH2 一 CH_O—R12
II 〇
—〇一CH2—CH—NH—C—R12
II 〇
o II
CH〇-N
❹ (CH2)f11-0-R”
(CH2)f13——0-R13 (CH2)f11-0-R11
(CH2)fi3 ——0-R13 36 9 201021852
—Ο
(CH2)”i~〇一C—R
-NH- 11 (CH2)f12-〇 - C—R12 〇 (CH2)fi3-〇—C—R13 R”
(CH2)fi2'〇_C—R12
(CH2)fi*r〇一C—R 11 (CH2)f13-〇—C—R13 -NH- 〇 Cw/
〇 HN- W/ —P\ N- H 'Rl2 -R”
-R 12 R” q HN—— —R. W ^12 一 NH——P\ 〇— —R 11 12
q HN-W-〇——P\ 、N- H
R 11 "Rl2
—o—Y 〇 II ,〇——C-R-n VHN —〇 Pv ?、/〇一C-Rn -NH—P( 〇 \ u 〇一C-R.
〇 II —C
-K 〇-C-R-J2 3 U 〇 H ii N—C—R11 K— 〇 II -C-R” 〇 II -C-R-,2 (CH2)2—〇—C—R” 12 H 9 (CH2)4—N—C一R12 9 (CH2)2 〇 C — R-I2 H 9 (CH2)2—N—C—R-jt (CH2)2- U 〇 Η ii -N——C——R12
—N
〇 (CH2)2—C—Rn 〇 (CH2)2-C—R12 -〇
(CH2)f”一C——R 11 (CH2)f12—C——R12 及 0,
R 11
(CH2)2-C-R 12 其中R II - 1 3獨立地為相同或不同的c 1 2 - 2 2飽和或不飽和 脂族烴,諸如二月桂基(Cl2)、二肉豆蔻基(C14)、二棕 橺醯基(C16 )、二硬脂醯基(C18 )、二油醯基(CIS )及 二芥子醯基(c22); (fll)、(Π2)及(Π3)獨立地為 0、1、2、3 或 4 ;且 37 201021852 (厂21)及(£22)獨立地為1、2'3或4。 ' B.式(1)之可釋放融合性脂質之製備 代表性特定化合物之合成係閣述於實施例中。然而, -般而言’本發明化合物可以若干方式製備。根據本發明, 製備本文所述之式⑴化合物之方法包括使含胺化合物與含 裕化合物反應’以提供具有亞胺部分之融合性脂質。該胺 可為一級胺且該醛可另外含有脂族或芳族取代基。 一個製備融合性脂質的代表性實施例係示於圖1及圖2 中。先,在諸如EDC或DIpc之偶合劑存在下使脂質與 0 親核性多官能鍵聯基(化合物j)偶合,以提供化合物2。 較佳而言,反應係在惰性溶劑如二氯曱烷 '氣仿、甲苯、 DMF或其混合物中進行。反應亦較佳在驗如DMAp、则八、 吼咬 '三乙胺等存在下在_代至約7(rc (例如_代至約5〇 °C )之溫度下進行。在-較佳具體實例中,反應係在代至 約2 5 C或0 C至約室溫之溫度下進行。 使化合物2之末端官能基進一步與雙官能鍵聯基(如 化合物4)偶合’接著除去胺保護基,以提供具有末端胺之 © 脂質化合物(化合物6 )。 含兩性離子之化合物如Fm〇c_Lys(〇Me)_NH2係與雙官 能鍵聯基如化合物7反應,以提供具有受保護醛之化合物 8。將醛保護基除去。化合物9之醛係與含胺脂質(化合物 6)在脫水條件下反應,接著除去胺保護基及皂化,以提供 含亞胺鍵之融合性脂質。 脂質與親核性多官能鍵聯基之連接可使用料有機合 38 201021852 成技術’在鹼存在下,使用一般熟習此項技術者所已知之 偶合劑’諸如1,3-二異丙基碳化二亞胺(dipc )、-产某 奴化·一亞胺、2 -鹵基-1-烧基η比鍵鹵化物、 w _ — T fe暴丙 基)-3-乙基碳化二亞胺(EDC)、丙烷膦酸環酐(ppACA) 及二氯磷酸苯酯來進行。此外,亞胺鍵之形成可使用用於 脫水之標準有機合成技術,例如使用分子篩、共沸、酸催 化脫水等來進行。 在另一具體實例中,活化脂酸,諸如NHS或PNP酉旨, 可用來與親核性多官能鍵聯基(如化合物反應。 或者,當脂質係用脫離基如随3或PNp活化時,並不 需要偶合劑,且反應在鹼存在下進行。 保護基從含胺化合物之移除可使用強酸(諸如H乙 酸(TFA) 、HC卜硫酸等)或催仆气 ,,^ ^ 4催化虱化、自由基反應等來
進行。或者,胺保護基如F ^ m〇C之移除可使用鹼(諸如哌啶 或DMAP )來進行。在一個較佳 佳具體貫例中,Boc基團之去 保遵係使用HC1之二臢焓咬、泣> s 。 七烷/合液進行。去保護反應可在-4t 約5 0 C之溫度下進行。較佳丄 〇r ^ 奴住而s,反應係在〇t至約25 匕或至室溫之溫度下進扞。力 ^ i ^ 更佳的具體實例中,Boc基團 <去保護係在室溫下進行。 舉例而言,藉由太# 八之方法製備之化合物包括:
39 201021852
40 201021852 Ο Γ\τ7 〇
coo 較佳而言,式(I)之可釋放融合性脂質包括:
,及 41 201021852
c· 奈米粒子組成物 ΐ· 概述 在本發明之一態樣中,提供用於遞送核酸之含有式 之可釋放融合性脂質之奈米粒子組成物。
根據本發明,奈米粒子組成物含有陽離子脂質、式(I) 之可釋放融合性脂質及PEG脂質。 醇。在本發明之一較佳態樣中,奈米粒子組成物包括膽固 。八在本發明之另—態樣中,本文所述之奈米粒子組成物 I含有此項技術中已知之融合性脂質(非陽離子脂質)。 有陽離子脂質之混合物' 不同融合性脂質之混合物及/或 不同選用PEG脂質之混合物的奈米粒子組成物亦涵蓋在 内〇
在另幸乂佳態樣中,奈米粒子組成物含有莫耳比範圍 從存在於奈米粒子組成物中之總脂質之約10%至約99.9% 的陽離子脂質。 %離子脂質組份範圍可從存在於奈米粒子組成物中之 總脂質之約2%至約60%、約5〇/〇至約5〇%、約1〇〇/。至約45%、 約15%至約25%或約30%至約40%。 在一較佳具體實例中,陽離子脂質係以存在於奈来粒 子組成物中之總脂質之約15至約25% (亦即15%、17%、 42 201021852 18%、20%或25%)的量存在。 。根據本發明,奈米粒子組成物含有莫耳比為存在於奈 米粒子組成物中之總脂質之約2〇%至約85%、約25%至約 85〇/。、約 60%至約 8〇% (例如 65%、75%、78%或 的 總融合性脂質,包括以膽固醇及/或非膽輯為基之融合性 脂質。在一較佳具體實例中,總融合性/非陽離子脂質為存 在於奈米粒子組成物中之總脂質的約8 〇 %。 在某些具體實例中,以非膽固醇為基之融合性脂質/非 陽離子月曰質係以存在於奈米粒子組成物中之總脂質之約 25%至約 78% ( 25%、35%、47%、60%或 78%)或約 60%至 約78%之莫耳比存在。在一具體實例中,以非膽固醇為基 之融合性脂質/非陽離子脂質為存在於奈米粒子組成物中之 總脂質的約60%。 在某些具體實例中,除了非膽固醇融合性脂質外,奈 米粒子組成物亦包括莫耳比範圍從存在於奈米粒子組成物 中之總脂質之約0%至約60%、約10%至約60%或約20%至 約50〇/〇(例如20%、30%、40%或5 0%)之膽固醇。在一具 體實例中’膽固醇為存在於奈米粒子組成物中之總脂質的 約 20%。 在某些具體實例中,奈米粒子組成物中所含之PEG-脂 質的莫耳比範圍從存在於奈米粒子組成物中之總脂質之約 0.5%至約20%、約1,5%至約18%。在奈米粒子組成物之一 具體實例中,PEG脂質係以總脂質之約2%至約1 0% (例如 2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或 10%)之莫耳比 43 201021852 被包含。舉例而言,總PEG脂質為存在於奈米粒子組成物 中之總脂質之約2%。 就本發明之目的而言,奈米粒子組成物中所含之可釋 放融合性脂質之量應理解為意謂單獨本文所述之可釋放融 合性脂質之量,或式(I)之可釋放融合性脂質與任何其他的 技術已知融合性脂質(可釋放或不可釋放者)(若存在於 奈米粒子組成物中)之和。 2.式⑴之可釋放融合性脂質及選用之技術已知融合 性/非陽離子脂質 根據本發明’本文所述之奈米粒子組成物含有式⑴之 可釋放融合性脂質。不受任何理論約束,式(1)之可釋放融 合性脂質有助於包封於奈米粒子中之核酸在奈米粒子進入 細胞之後自核内體及奈米粒子釋放。 在本發明之另一態樣中,本文所述之奈米粒子組成物 可包括其他的技術已知融合性脂質。適用於奈米粒子組成 物中之其他適合的技術已知融合性脂質包括中性融合性/非 陽離子脂質。 中性脂質包括在所選pH值下、較佳在生理pH值下以 不帶電荷或中性兩性離子形式存在之脂質。這類技術已知 融合性脂質之實例包括二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基碟脂酿 乙醇胺 '腦醯胺、鞘髓磷脂、腦磷脂、膽固醇、腦苷脂及 —酿基甘油。 陰離子脂質包括在生理pH值下帶負電之脂質。此等脂 貝包括但不限於填脂醯甘油、心磷脂、二釀基填脂酿絲胺 201021852 * 酸、二醯基填脂酸、Μ -十二醯基磷脂醯乙醇胺、N -丁二醯 基磷脂醯乙醇胺、N-戊二醯基磷脂酿乙醇胺、離胺醯基磷 脂醯甘油、標摘醯基油酿基磷脂醯甘油(Ρ Ο P G )及經其他 陰離子改質基團改質之中性脂質。 許多技術已知融合性脂質包括一般具有疏水性部分及 極性頭基之兩性脂質,且可於水溶液中形成微脂粒。 所涵蓋之融合性脂質包括天然存在及合成之磷脂及相 關脂質。 ® 非陽離子脂質之#限制性清單係選自於磷脂及與非磷 脂相關之物質,諸如:印鱗脂,溶血印麟脂,二酿基構脂 醯膽驗;溶企罐脂醯膽驗;攝脂醯乙醇胺;溶血填脂醯乙 醇胺;磷脂醯絲胺酸;磷脂醯肌醇;鞘髓磷脂;腦磷脂; 腦醯胺;心磷脂;磷脂酸;磷脂醯甘油;腦苷脂;磷酸二 氣?、壤基酉旨; 1.2- 二月桂醯基-sn-甘油(DLG); A 1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油(DMG ); 1,2-二棕搁醯基-811-甘油(〇?〇); 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油(DSG); 1.2- 二月桂醯基- sn-甘油基-3-填脂酸(DLPA), 1,2-二肉豆蔬醢基- sn-甘油基-3-攝脂酸(DMPA), 1,2 -二棕摘醯基-sn -甘油基-3 -構脂酸(D P P A ), 1.2- 二硬脂酿基- sn-甘油基-3-填脂酸(DSPA), 1,2-二花生醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DAPC); 1,2-二月桂醯基-sn-甘油基·3-磷酸膽鹼(DLPC); 45 201021852 1,2-二肉豆蔻醯基_sn_甘油基-3-破酸膽驗(DMPC ); 1,2-二標櫚醯基_sn_甘油基_3-乙基磷酸膽驗(DPePC ); 1,2 - —棕櫚醢基_sn_甘油基-3-磷酸膽驗或二棕搁醢基 石粦脂醯膽驗(DPPC ); 1,2-二硬脂醯基_sn·甘油基-3-磷酸膽鹼或二硬脂醯基 鱗脂醯膽驗(DSPC ); 1.2- 二月桂醯基_sn_甘油基-3-磷脂乙醇胺(DLPE);
1.2- —肉豆證酿基_sn-甘油基-3-填脂乙醇胺或二肉豆 蔻醯基磷酸乙醇胺(DMPE); 1,2 -二掠摘酿基-s η -甘油基-3 -鱗脂乙醇胺或二栋搁酿 基填脂醯乙醇胺(DPPE); 1,2-二硬酯醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺或二硬脂醯 基磷脂醯乙醇胺(DSPE); 1.2- 二月桂酿基-sn-甘油基-3-構酸甘油(DLPG) ’ 1,2·二肉豆蔻醢基-sn-甘油基-3-填酸甘油(DMPG) ’
1.2- 二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3_填酸m·1·甘油 (DMP-sn-1-G); 1.2- 二棕櫚醯基-sn-甘油基-3-磷酸甘油或二棕摘醯基 磷脂醯甘油(DPPG ); 1,2•二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸甘油(DSPG) 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基填酸-sn-1_甘油 (DSP-sn-1-G ) 酸-L-絲胺酸(DPPS); 甘油基-3-磷酸膽鹼 1,2-二棕櫊醯基-sn-甘油基-3-磷 1-棕櫚醯基-2-亞油醯基_sn- 46 201021852 * ( PLinoPC); 1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn_甘油基-3-磷酸膽鹼或棕櫊醯 基油醯基磷脂醯膽鹼(POPC); 1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油基-3-磷酸甘油(P〇PG ); 1 -棕櫚醯基-2-溶血-sn-甘油基-3 -磷酸膽鹼(P-溶血 -PC); 1-硬脂醯基-2-溶血-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(s-溶血 -PC); ® 1,2-二油醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺或二油醯基磷 脂醯乙醇胺(DOPE); 二植烧醯基磷脂醯乙醇胺(DPhPE ); 1,2-二油醯基-sn-甘油基-3_磷酸膽鹼或二油醯基磷脂 醯膽鹼(DOPC ):及 1,2-二植烷醯基_sn_甘油基_3_磷酸膽鹼(DPhPC); 二油醯基磷脂醯甘油(DOPG); 棕櫚醯基油醯基磷脂醯乙醇胺(POPE ); ® -、 二油醯基-麟脂酿乙醇胺4-(N-順丁稀二醯亞胺甲基)-環己烷-1-甲酸酯(DOPE-mal); 16-0·單甲基PE ; 16-0-二甲基 PE ; 18-1-反式 PE ; 1硬月曰酿基-2-油酿基_填脂酿乙醇胺(s〇pE); 1,2-二反油醯基_sn_甘油基_3_磷酸乙醇胺(反式 DOPE);及其醫藥上可接受之鹽及混合物。融合性脂質之 47 201021852 洋情係描述於美國專利公開案第2007/0293449號及第 、 2006/0051405 號中。 非陽離子脂質包括固醇或類固醇,諸如膽固醇。 其他非陽離子脂質為例如硬脂胺、十二烷胺、十六烷 月女 '乙酿基棕櫚酸酯 '蓖麻油酸甘油酯 '硬脂酸十六烷酯' 肉丑蔻酸異丙酯、兩性丙烯酸系聚合物、硫酸三乙醇胺月 桂酿、硫酸烧基芳酯聚乙氧基化脂肪醯胺及溴化二(十八炫 基)二曱基銨。 所涵蓋之陰離子脂質包括磷脂醯絲胺酸、磷脂酸、鱗 ❿ 脂醯膽鹼、血小板活化因子(PAF )、磷脂醯乙醇胺、磷脂 醯-DL-甘油 '磷脂醯肌醇、磷脂醯肌醇、心磷脂、溶血磷 月曰、氣化磷脂、鞘髓磷脂、神經節苷脂、植物鞘胺醇 '鞘 胺醇 '其醫藥上可接受之鹽及混合物。 適用於製備本文所述之奈米粒子組成物之適合非陽離 子月曰貝包括二醯基磷脂醯膽鹼(例如二硬脂醯基磷脂醯膽 鹼' 二油醯基磷脂醯膽鹼、二棕搁醯基磷脂醯膽鹼及二亞 /由醯基磷脂醯膽鹼)、二醯基磷脂醯乙醇胺(例如二油醯 ❹ 基磷脂醯乙醇胺及棕櫚醯基油醯基磷脂醯乙醇胺)、腦醯 胺或鞘髓磷脂。此等脂質中之醯基較佳為具有飽和及不飽 和碳鏈之脂肪酸,諸如亞油醯基、異硬脂醯基、油醯基、 反油醯基、岩芹醯基 '次亞麻油醯基、油脂硬脂醯基、花 生醯基、肉豆蔻醯基 '棕橺醯基及月桂醯基。更佳而言, 醯基為月桂醯基、肉豆蔻醯基、棕櫚醯基、硬脂酿基或油 醯基,更佳為具有飽和及不飽和Cs-Cw (較佳Ci()_C24)碳 48 201021852 " 鏈之脂肪酸。 適用於本文所述之奈米粒子組成物之各種破脂醯膽驗 包括: 1,2-二癸醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DDPC,C10:0, C10:0); 1.2- 二月桂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DLPC,C12:0, C12:0); 1.2- 二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DMPC, 〇 C14:0 > C14:0); 1.2- 二棕櫚醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DPPC,Cl 6:0, C16:0); 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC,C 1 8:0, C18:0); 1.2- 二油醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DOPC,C18:], C18:1 ); 1,2-二芬子醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DEPC,C22:l, C22:l); 1.2- 二(二十碳五烯醯基)-sn-甘油基-3 -磷酸膽鹼 (EPA-PC > C20:5 > C20:5 ); 1.2- 雙二十二碳六烯醯基-sn-甘油基-3 -磷酸膽鹼 (DHA-PC,C22:6,C22:6 ); 1-肉豆蔻醯基-2-棕櫚醯基-sn-甘油基-3 -磷酸膽鹼 (MPPC,C14:0,C16:0 ); 1-肉豆蔻醯基-2-硬脂醯基-sn-甘油基-3_填酸膽驗 49 201021852 (MSPC > C14:0 > C18:0); 1 -標摘酿基_2-硬脂酿基-sn-甘油基-3 -填酸膽驗 (PMPC,C16:0,C14:0 ); 1 -掠網酿基-2 -硬脂酿基-s η -甘油基_ 3 -填酸膽驗 (PSPC,C16:0,C18:0); 1-硬脂醯基-2-肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼 (SMPC,C18:0,C14:0 ); 1-硬脂醯基-2-棕櫚醯基-sn-甘油基-3 -磷酸膽鹼 (SPPC,C18:0,C16:0 ); 1.2- 肉豆蔻醯基-油醯基-sn-甘油基-3-磷脂乙醇胺 (MOPC,C14:0,C18:0 ); 1.2- 棕櫚醯基-油醯基-sn-甘油基-3-磷脂乙醇胺 (POPC,C16:0,Cl 8:1 ); 1.2- 硬脂醯基-油醯基-sn-甘油基-3 -磷脂乙醇胺 (POPC,C18:0,C18:1),及其醫藥上可接受之鹽及混合 物。 適用於本文所述之奈米粒子組成物之各種溶血磷脂醯 膽鹼包括: 1-肉豆蔻醯基-2-溶血-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼 (M-LysoPC,C14:0 ); 1-棕櫚醯基-2-溶血-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼 (P-LysoPC,C16:0 ); 1 -硬脂酿基-2 -溶血-s η -甘油基_ 3 -峨·酸膽驗 (S-LysoPC,C18:0 )及其醫藥上可接受之鹽及混合物。 201021852 適用於本文所述之奈米粒子組成物之各種填脂醯甘油 係選自: 氩化大豆鱗脂醯甘油(HSPG); 非氫化卵磷脂醯甘油(EPG); 1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-填酸甘油(DMPG ’ C14:0,C14:0); 1,2-二棕橺醯基-sn-甘油基-3-鱗酸甘油(DPPG ’ C16:0, C16:0); ❹ 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸甘油(DSPG,C18:0 ’ C18:0); 1.2- 二油醯基-sn-甘油基-3-磷酸甘油(DOPG,C18:l ’ C18:l); 1.2- 二芥子醯基-sn-甘油基-3-磷酸甘油(DEPG ’ C22:l,C22:l ); 1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油基-3-磷酸甘油(POPG, C16:0’ C18:l)及其醫藥上可接受之鹽及混合物。 〇 適用於本文所述之奈米粒子組成物之各種磷脂酸包 括: 1.2- 二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-填脂酸(DMPA ’ C14:0,C14:0); 1,2-二棕搁醯基-sn-甘油基_3-磷脂酸(DPPA,C16:0, C16:0); 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷脂酸(DSPA,C 1 8:0, C18:0)及其醫藥上可接受之鹽及混合物。 51 201021852 適用於本文所述之奈米粒子組成物之各種填脂醯乙醇 胺包括: 氫化大豆磷脂醯乙醇胺(HSPE); 非氫化卵磷脂醯乙醇胺(EPE ); 1.2- 二肉豆蔻醯基_sn_甘油基_3_磷酸乙醇胺(DMPE, C14:0 > C14:0); 1,2-二棕橺醯基-sn_甘油基-3 -璘酸乙醇胺(DPPE, C16:0,C16:0);
1,2-二硬脂醯基-sn_甘油基-3_磷酸乙酵胺(DSPE, C18:0,C18:0); 1.2- 二油醯基_sn•甘油基-3_磷酸乙醇胺(dope, C18:l,C18:l ); 1.2- 二油醯基-sn_甘油基_3_磷酸乙醇胺(depe,C22:l, C22:l ); 1,2-二芥子醢基_sn_甘油基-3_磷酸乙醇胺(p〇pE, C16:0,C18._l )及其醫藥上可接受之鹽及混合物。
適用於本文所述之奈米粒子組成物之各種磷脂醯絲胺 酸包括: 1,2- —肉豆缝醯基_sn_甘油基_3_填酸-丨_絲胺酸 (DMPS,C14:0,Cl4:〇 ); 1,2-二掠搁酿基-sn_甘油基_3_磷酸-丨_絲胺酸(DPPS, C16:0,C16:0); 1,2-一硬脂酿基-sn_甘油基_3•磷酸絲胺酸(DSps, C18:0,C18:0); 52 201021852 1,2- 一油醯基-sn-甘油基_3 -填酸小絲胺酸(DOpS, c 18:1 » c 1 8:1 ); 1-掠櫚醯基-2-油醯基_sn_3_磷酸I絲胺酸(p〇pS, c 1 6 ’ 0、c 1 8:1 )及其醫藥上可接受之鹽及混合物。 在一較佳具體實例中,適用於製備本文所述之奈米粒 子組成物之適當中性脂質包括例如: 一油酿基鱗脂醯乙醇胺(DOPE),, ❾ —硬月曰醯基鱗脂醯乙醇胺(dspe), 棕櫚醯基油醯基磷脂醯乙醇胺(POPE ), 卵磷脂醯膽鹼(EPC ), 一棕櫚醯基磷脂膽驗(d p p c ), 一硬脂醯基碟脂醯膽驗(dspc), 二油醯基碟脂醯膽驗(D〇pc ), 棕櫚醯基油醯基磷脂醯膽鹼(p〇pC ), 一棕櫚醯基鱗脂醯甘油(d p p g ), 〇 二油醯基磷脂醯甘油(D0PG ),二油醯基-磷脂醯乙醇 胺4_(N-順丁烯二醯亞胺甲基)·環己烷_丨_曱酸酯 (DOPE-mal )、膽固醇、其醫藥上可接受之鹽及混合物。 在某些較佳具體實例中,本文所述之奈米粒子組成物 包括DSPC、EPC、DOPE等及其混合物。 在本發明之另一態樣中,奈米粒子組成物含有非陽離 子脂質,諸如固醇。奈米粒子組成物較佳含有膽固醇或其 類似物,且更佳為膽固醇。 3. 陽離子脂質 53 201021852 根據本發明,本文所述之奈米粒子組成物可包括陽離 、 子脂質。舉例而言,所涵蓋之適合脂質包括: 氣化N-[l- (2,3 -二油酿基氧基)丙基]-N,N,N -三曱錢 (DOTMA); 氣化1,2-雙(油醯基氡基)-3-3•(三曱銨)丙烷或N-(2,3-二油醯基氧基)丙基)-N,N,N-三甲銨(DOTAP); 1,2-雙(二肉豆蔻醯基氧基)-3-3-(三曱氨)丙烷 (DMTAP); 溴化1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基羥基乙基銨或 ® 臭化N-(l,2-二肉豆蔻基氧基丙-3-基)-N,N-二曱基-N-經基乙 基銨(DMRIE); 溴化二曱基二(十八烷基)銨或溴化N,N-二硬脂醯基 -N,N-二甲基銨(DDAB ); 二曱基胺基乙烷)胺曱醯基)膽固醇(DC-膽 固醇); 3召-[Ν’,Ν·-二胍基乙基-胺基乙烷)胺甲醯基膽固醇 (BGTC) ; 〇 2-(2-(3-(雙(3-胺基丙基)胺基)丙基胺基)乙醯胺 基)-N,N-二-十四烷基乙醯胺(RPR209120 ); 1,2-二稀醯基-sn-甘油基-3-乙基構酸膽驗(亦即ι,2_二 油醯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽鹼、1,2-二硬脂醯基_sn•甘 油基-3-乙基磷酸膽鹼及丨,2-二棕櫊醯基-sn-甘油基-3·乙基 磷酸膽鹼); 四曱基四棕櫚醢基精胺(TMTPS ); 54 201021852 四曱基四油烯基精胺(TMTOS); 四甲基四月桂基精胺(TMTLS ); 四甲基四肉豆蔻基精胺(TMTMS ); 四甲基二油基精胺(TMDOS); 2.5- 雙(3-胺基丙基胺基)-N-(2-(二(十八烷基)胺基)-2-侧氧基乙基)戊醯胺(DOGS); 2.5- 雙(3-胺基丙基胺基)-N-(2-(二(Z)-十八-9-二烯基胺 基)-2-側氧基乙基)戊醯胺(DOGS-9-en); 2.5- 雙(3-胺基丙基胺基)-N-(2-(二(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯基胺基)-2-側氧基乙基)戊醯胺(DLinGS); N4-精胺膽固醇基胺基曱酸酯(GL-67 ); (9Z,9'Z)-2-(2,5 -雙(3-胺基丙基胺基)戊醯胺基)丙烷 -1,3-二基-二(十八)-9-烯酸酯(DOSPER); 三氟乙酸2,3-二油醯基氧基-N-[2(精胺曱醯胺基)乙 基]-N,N-二甲基-1-丙銨(DOSPA); 1,2-二肉豆蔻醯基-3-三曱銨-丙烷;1,2-二硬脂醯基-3-三曱銨-丙烷; 二(十八烷基)二曱銨(DODMA); 二硬脂醯基二甲銨(DSDMA); 氣化N,N-二油烯基-Ν,Ν-二甲基銨(DODAC):其醫 藥上可接受之鹽及混合物。 陽離子脂質之詳情亦描述於US2007/0293449及美國專 利第 4,897,355 號、第 5,279,833 號、第 6,733,777 號、第 6,376,248 號、第 5,736,392 號、第 5,686,958 號、第 5,334,76 1 55 201021852 號、第 5,459,127 號、第 2005/0064595 號、第 5,208,036 號、 第 5,264,61 8 號、第 5,279,833 號、第 5,283,1 85 號、第 5,753,613 號及第 5,785,992 號中。 在一較佳態樣中,陽離子脂質在所選pH值如pH<13(例 如pH 6-12、pH 6-8 )下攜有淨正電荷。奈米粒子組成物之 一較佳具體實例包括具有以下結構之本文所述之陽離子脂 質:
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其中R,為膽固醇或其類似物。 更佳地,奈米粒子組成物包括具有下結構之陽離子脂
NH2 (陽離子脂質1 )。 陽離子脂質之詳情亦描述於PCT/US09/52396中,其内 容係以引用的方式併入本文中。 另外,可使用包括陽離子脂質之市售製劑:例如 LIPOFECTIN® (含有DOTMA及DOPE之陽離子月旨質體,來 自 GIBCO/BRL, Grand Island, New York, USA ); LIPOFECTAMINE® (含有DOSPA及DOPE之陽離子脂質 體,來自 GIBCO/BRL,Grand Island,New York, USA );及 TRANSFECTAM® (含有 DOGS之陽離子脂質體,來自 Promega Corp., Madison, Wisconsin, USA)。 4. PEG脂質 根據本發明,本文所述之奈米粒子組成物含有PEG脂 質。PEG脂質延長本文所述之奈米粒子之循環且防止奈米 粒子過早自身體排泄出。PEG脂質減少免疫產生性且增強 57 201021852 奈米粒子之穩定性。 · 適用於奈米粒子組成物中之PEG脂質包括pEG化形式 之融合性/非陽離子脂質。舉例而言,pEG脂質包括與二醯 基甘油共軛之PEG(PEG-DAG)、與二醯基甘醯胺共軛之 PEG '與二烷氧基丙基共軛之pEG ( pEG_DAA)、與磷脂 共軛之PEG(諸如與磷脂醯乙醇胺偶合之pEG( pEG_pE ))、 與腦醯胺共桃之PEG(PEG-Cer)、與膽固醇衍生物共耗之 PEG (觸心。〇或其混合物。參看美國專利第5,885,613 號及第5,820,873號及美國專利公開案第2⑼6/G514()5號,❹ 其各者之内容係以引用的方式併入本文中。 PEG通常係由下結構表示·· -〇-(CH2CH2〇)n. 其中(η)是約5至約2300、較佳約5至約46〇之正整數, 士此PEG月曰貞之聚合部分便具有約_至約】⑽,_道爾 ❹ 頓、較佳約200至約20,_道爾頓之平均數量分子量。⑻ 表示聚合物的聚合度且係取決於聚合物的分子量。 在一較佳態樣中,PEG為數量平均分子量範圍從約2〇〇 至約20,000道爾_、更佳約则至約ι〇,_道爾頓、又更 佳約1侧至約5,_道爾頓(亦即約I·至約3,〇〇〇道 爾頓)之聚乙二醇。在一具體實例中,刚具有約2,_ 道爾頓之分子量。在另-具體實例中,pE(j具有約75〇道 爾頓之分子量。 或者,聚乙二醇(PEG)殘基部分可由以下結構表示: -Y7KCH2CH2〇)n-CH2CH2Y71-, 58 201021852 -Y71-(CH2CH20)n-CH2C〇=Y72)-Y7i-, -Y71-C(=Y72)-(CH2)al2-Y73-(CH2CH2〇)n-CH2CH2-Y73-(CH2)au-C(=Y72)-Y71-及 -Υ·η -(CR7 iR72)al 2-Y73-(CH2)b 12-〇_(CH:zCH2〇)Tr(CH2)b 1 r Y73-(CR_71 R72)a 12-Y7 r ’ 其中: Y71 和 Y73 獨立地為 o、s、SO、S〇2、NR73 或鍵·, 為〇、S或NR74,較佳為氧;
R7l-74獨立地選自於氫、CU6烷基、C2.6烯基、C2.6炔恭、 C3-19支鏈烧基、C3-8環烧基、經取代之C|-6烧基、經取代 之C2.6烯基、經取代之Cz 6炔基、經取代之C3 8環烷基、 芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、C丨雜炫 基、經取代之Cue雜烷基、Cl_6烷氧基、芳氧基、C1_6雜烷 氧基、雜芳氧基、(:2_6烷醯基、芳基羰基、c26烷氧羰基、 芳氧羰基、C2_6烷醯氧基、芳基羰氧基、經取代之c2 6烷醯 基、經取代之芳基羰基、經取代之C26烷醯氧基、經取代 之芳氧羰基、經取代之C2 6烷醯氧基及經取代之芳基羰氧 基,較佳為氫、曱基、乙基或丙基; ’較佳為零或約1至 ’且更佳為1或2 ; (a 12)及(b 12)獨立地為零或正整數 約6之整數(例如i、2、3、4、5、) 且 王叼230〇、較佳約
PEG之末端可以H、N 如甲基、乙基、丙基)、一 C〇2H、C“貌基(例 I·6貌氣基、醯基或芳美氧破其 在-較佳具體實例中,ΡΕΓ Η 切基為知基。 J ^ PEG之末端羥基係經 取代。在-較佳且體實似φ Μ基或甲基 -體實例中,用於咖脂質中之咖為甲 59 201021852 氧基PEG。 PEG可直接或經由鍵聯基部分與脂質共軛。使用美國 專利第5,122,614號及第5,808,096號中描述之活化技術及 此項技術中已知之其他技術’無須過度實驗,即可將與脂 質結構共軛之聚合物轉化為適當活化之聚合物。 適用於製備PEG脂質之經活化PEG之實例包括例如: 曱氧基聚乙二醇-丁二酸酯、mPEG_NHS、曱氧基聚乙二醇_ 丁二酸丁二醯亞胺酯、曱氧基聚乙二醇-乙酸
(mPEG-CH2CO〇H)、甲氧基聚乙二醇-胺(mPEG-NHa) 及甲氧基聚乙二醇-三氟乙磺酸酯(mPEG-TRES)。 在某些態樣中’具有末端羧酸基之聚合物可用於製備 PEG脂質。製備高純度之具有末端羧酸之聚合物的方法栺 述於吳國專利申請案第11/328,662號中,其内容係以引用 的方式併入本文中。
在替代態樣中’具有末端胺基之聚合物可用於製造 PEG·脂質。製備高純度之含有末端胺之聚合物之方法描述 表美國專利巾清案帛U/5G8,5()7號及第ιι/537,ΐ72號中, 其各内容係以引用的方式併入本文中。 PEG與脂質可經由鍵聯,亦即非含酯鍵聯基部分或含 S曰鍵聯基部分而鍵結適當非含酯鍵聯基包括但不限於:醯 胺基鍵聯基邰分、胺基鍵聯基部分、羰基鍵聯基部分、胺 甲酸酯鍵聯基部分'碳酸醋 聯基部分 '醚鍵聯基部分、 適當酯鍵聯基部份包括 (〇C(=〇)〇 )鍵聯基部分、脲鍵 丁二醯鍵聯基部分及其組合。 例如:丁二醯基、填酸略 60 201021852 (-0-Ρ(=0)(0Η)-0-)、磺酸酯及其組合。 在一具體實例中,本文所述之奈米粒子組成物可包括 聚乙二醇-二醯基甘油(PEG-DAG)或聚乙烯-二醯基甘醯 胺。適合的聚乙二醇-二醯基甘油或聚乙二醇-二醯基甘醯胺 共軛物包括烷基鏈長獨立地含有約C4至約(較佳約Cs 至約C24)飽和或不飽和碳原子的二烷基甘油或二烷基甘醯 胺基團。二烷基甘油或二烷基甘醯胺基團可另外包括一或 多個經取代之烷基。 Ο
本文中使用之術語「二醯基甘油」(dag )係指具有 兩個脂肪醯基鏈R】n及Rj 之化合物。Rn !及Ri 12具有長 度約4至約3 0個碳(較佳約8至約2 4個碳)之相同或不 同碳鏈且係藉由酯鍵聯與甘油鍵結。醯基可為飽和或不飽 和的而具有各種不飽和度。DAG具有通式: 〇 CH20人^川 Ο 疒0人R112 ch20-\- 0 在一較佳具體實例中,peg-二醯基甘油共軛物為PEG-二月桂基甘油(C12)、PEG-二肉豆蔻基甘油(C14,DMG)、 PEG-二棕櫊醯基甘油(Ci6,dPG)或PEG-二硬脂醯基甘油 (Cls ’ DSG)。熟習此項技術者將容易瞭解其他二醯基甘 油亦涵蓋在PEG-二醯基甘油共輕物中。適用於本發明之 PEG·二醯基甘油共軛物及其製造及使用方法係描述於美國 專利公開案第2003/0077829號及PCT專利申請案第CA 02/00669號中,其各者之内容係以引用的方式併入本文中。 61 201021852 PEG-—醢基甘油共軛物之實例可選自於PEG•二月桂基 甘油(C12) 、PEG-二肉豆綠基甘油(c") 、pEG_二棕櫚 醯基甘油(cl6) 、PEG•二硬脂醢基甘油。⑽匕二 醯基甘醢胺共軛物之實例包括PEG_二月桂基甘醯胺 (C|2) 、PEG-二肉豆蔻基甘醯胺(Ci4) 、pEG<棕櫚醯 基甘醯胺(C1(5)及PEG_二硬脂醯基甘醯胺(ci8)。 在另一具體實例中,本文所述之聚合奈米粒子可包括 聚乙二醇-二烷氧基丙基共軛物(PEG-DAA)。 術語「二烷氧基丙基」係指具有兩個烷基鏈Ri v 1 I 2 之化合物。R ill及R112烷基包括在約4至約3 0個碳(較佳 約8至約24個碳)之間的相同或不同碳鏈長度。烷基可為 飽和的’或具有不同的不飽和度。二烷氧基丙基具有通,. 〒h2o-r川 、. CH2〇-R-ii2 ch2—\— 其中R, Μ及Rn 2烷基為具有約4至約30個碳(較佳約 8至約24個碳)之相同或不同烷基。烷基可為飽和或不飽 和者。適合的烷基包括但不限於月桂基(Cl2 )、肉豆競基 (C!4)、棕糊基(Ci6)、硬脂基(C!8)、油醢基(Ci8) 及二十基(C2G )。 在一具體實例中,Rm與Rn2皆相同,亦即Rni與r112 皆為肉豆蔻基(C!4) ’皆為硬脂基(c! 8 )或皆為油醯基(c! 8 ) 等。在另一具體實例中’ RU1與RU2不同’亦即Rln為肉 豆缝基(C14)而Rm2為硬脂酿基(c18)。在一較佳具體實 例中,PEG -二院基丙基共扼物包括相同的Rni與rii2。 62 201021852 在又另一具體實例中,本文所述之奈米粒子組成物可 包括與磷脂醯乙醇胺共軛之PEG ( peg_pe )。適用於PEG 脂質共軛之磷脂醯乙醇胺可含有碳鏈長度在約4至約3〇個 碳(較佳約8至約24個碳)範圍内之飽和或不飽和脂肪酸。 適合的磷脂醯乙醇胺包括但不限於:二肉豆蔻醯基磷脂醯 乙醇胺(D Μ P E )、二稼櫚醯基碟脂醯乙醇胺(〇 p p e )、二 油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE )及二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺 (DSPE)。 在又另一具體實例中,本文所述之奈米粒子組成物可 包括與腦醯胺共輛之PEG ( PEG-Cer)。腦醯胺僅具有一個 醯基。腦醯胺可具有碳鏈長度在約4至約30個碳(較佳約 8至約24個碳)範圍内之飽和或不飽和脂肪酸。 在替代具體實例中,本文所述之奈米粒子組成物可包 括與膽固醇衍生物共軛之PEG。術語「膽固醇衍生物」意 s胃含有經改質(亦即取代及/或消去)之膽固醇結構的任何 膽固醇類似物。本文中之術語膽固醇衍生物亦包括類固醇 激素及膽汁酸。 PEG脂質之例示性實例包括N_(羰基_甲氧基聚乙二 醇)-1,2-二肉豆惹醯基-sn-甘油基-3-墙酸乙醇胺(2k Da mPEG-DMPE 或 5kDa mPEG-DMPE) ; N-(羰基-甲氧基聚乙 一醇二棕摘酿基-sn-甘油基-3-鱗酸乙醇胺(2kDa mPEG-DPPE 或 5kDa mPEG-DPPE) ; N-(截基-曱氧基聚乙二 醇)-1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-破酸乙醇胺(75〇Da mPEG-DSPE 750、2kDa mPEG-DSPE 2000、5k〇a 63 201021852 mPEG-DSPE);其醫藥上可接受之鹽(亦即鈉鹽)及混合 物。 在某些較佳具體實例中,本文所述之奈米粒子組成物 包括具有PEG-DAG或PEG-腦醯胺之PEG脂質,其中PEG 具有約200至約20,000、較佳約500至約10,000且更佳約 1,000至約5,000之平均分子量。 PEG-DAG及PEG-腦醯胺之若干例示性具體實例係提 供於表1中。 Μ 1 © PEG-脂質 PEG-DAG mPEG-二肉豆謹S盘基甘油 mPEG-二棕櫚醯基甘油 mPEG-二硬脂醯基甘油 PEG-腦醯胺 mPEG-CerC8 mPEG-CerCi4 mPEG-CerC,6 mPEG-CerC2〇 較佳而言,本文所述之奈米粒子組成物包括選自於 PEG-DSPE、PEG-二棕櫚醯基糖醯胺(C16 ) 、PEG-腦醯胺 (C,6)等及其混合物之PEG脂質。mPEG-DSPE、mPEG-二棕搁醯基糖醯胺(Cl6)及mPEG-腦醯胺(C16 )之結構如 下:
64 201021852
ΚΐΌ0·^、。^Y^〇CH2CH2)n〇CH3 ./NH Η 〇 Π NH, 及
其中’⑻為約5至約2300、較佳約5至約46〇之整數。 〇 * —較佳具體實例中,⑷為約45。在另—具體實例中 且作為以PA0為主之聚合物(諸如PEG)之替代物,可使 或夕種有效非抗原性物質’諸如聚葡萄糖、聚乙烯醇、 以碳水化合物為主之聚合物、經丙基甲基丙稀隨胺 涵 而言 (HPMA)、聚氧化、烯及/或其共聚物。可用來替代peg之 適合聚合物之實例包括但不限於聚乙烯吡咯啶酮、聚甲基 聘唑啉、聚乙基腭唑啉、聚羥丙基甲基丙烯醯胺、聚甲基 丙烯醢胺及聚二甲基丙烯醯胺、聚乳酸、&乙醇酸及衍生 Q 纖維素,諸如羥甲基纖維素或羥乙基纖維素。亦參看共同 讓渡之美國專利第6,153,655號,其内容係以引用的方式併 入本文中。一般熟習此項技術者將瞭解,可採用與如本文 中針對PAO (諸如PEG)所述相同類型之活化作用。一般 熟習此項技術者亦將進一步瞭解,上述清單僅為例示性且 蓋所有具有本文所述品質的聚合物質。就本發明之目的 言,「實質上或有效非抗原性」意謂在此項技術中所瞭 解為無毒的且在哺乳動物中不會引起明顯免疫原性反應的 所有物質。 65 201021852 在又另一具體實例中’本文所述之奈米粒子組成物可 包含具有可釋放鍵聯基如縮醛或亞胺之PEG脂質。這類可 釋放PEG脂質使核酸(募核苷酸)得以在遞送系統進入細 胞之後與遞送系統分離。這類可釋放PEG脂質之其他詳情 係描述於標題分別為” Releasable Polymeric Lipids Based on Imine Moiety For Nucleic Acids Delievery System” 和”
Releasable Polymeric Lipids Based on Ketal or Acetal Moiety For Nucleic Acids Delivery System” 之美國臨時專 利申請案第61/1 15,379和61/115,371號,以及同一日期申 © 請且標題為” Releasable Polymeric Lipids For Nucleic
Acids Delivery Systems」之PCT專利申請案第___號 中,其各者之内容係以引用的方式併入本文中。 5. 核酸/募核苷酸 本文所述之奈米粒子組成物可用於將各種不同的核酸 遞送至細胞或組織中。核酸包括質體及寡核苷酸。較佳而 言’本文所述之奈米粒子組成物係用於遞送募核苷酸。 為更充分地理解本發明之範圍,茲定義以下術語。此 Θ 項技術者應瞭解術語「核酸」或「核苷酸」適用於去氧核 糖核酸(「DNA」)'核糖核酸(「RNA」),無論為單 股或雙股者,除非另外說明,以及適用於其任何化學修飾 產物或類似物,例如鎖核酸(LNA)。此項技術者將容易瞭 解,所包括之術語「核酸」為多核酸、其衍生物、修飾產 物及類似物。「募核苷酸」一般為相對較短之多核苷酸, 例如大小範圍從長度約2 i 200個核發酸,較佳約8至約 66 201021852 50個核苷酸,更佳約8至約30個核苷酸,且更佳約8至約 20個或約15至約28個核苦酸者。除非另外說明,否則本 發明之寡核苷酸一般為合成核酸,且為單股者。術語「多 核苷酸」及「多核酸」亦可在本文中作同義使用。 募核苷酸(類似物)不侷限於單一種類之募核苷酸, 而是設計成以廣泛不同的這種部分作用,應瞭解,鍵聯基 可與一或多個3'-末端或5'-末端連接,通常為核苷酸之p〇4 基團或SCU基團。所涵蓋之核酸分子可包括硫代磷酸酯核 ^ 苷酸間鍵聯修飾、糖修飾、核酸鹼基修飾及/或磷酸酯骨架 修飾。寡核苷酸可含有天然磷酸二酯骨架或硫代磷酸酯骨 架或任何其他經修飾之骨架類似物,諸如LNA (鎖核酸)、 PNA (具有肽骨架之核酸)、CpG寡聚物及諸如此類,諸如 在 Tides 2002, Oligonucleotide and Peptide Technology Conferences,2002 年 5 月 6 日至 8 日,Las Vegas,NV 及 Oligonucleotide & Peptide Technologies, 2003 年 11 月第 18 ◎ 期及第19期,Hamburg,Germany中所揭示者,其内容係以 引用的方式併入本文中。 本發明所涵蓋之對募核苷酸之修飾,舉例而言,包括 對寡核皆酸加成或取代官能部分,其併入額外電荷、極化 性、氫鍵、靜電相互作用及官能性。這類修飾包括但不限 於2,-位糖修飾、5-位嘧啶修飾、8胃位嘌呤修飾、環外胺 (exocyclic amine)處之修飾、4-硫代尿苷之取代、5漠或 5-碘尿嘧啶之取代、骨架修飾、曱基化、鹼基配對組合如異 鹼基(isobase)異胞苷與異胍,以及類似組合。本發明範 67 201021852 疇内所涵蓋之寡核苷酸亦可包括3,及/或5,帽(αρ)結構。-就本發明之目的而言,「帽結構」應理解為意謂已併 至寡核苷酸之任一末端的化學修飾。該帽可存在於5,_末端 (5’-帽)或3’-末端(3’-帽)處’或可存在於二末端上。5,_ 帽之非限制性實例包括反轉無鹼基(inverted abasi〇殘基 (部分)’ 4·,5·-亞甲基核苷酸;赤呋喃糖基)核苷 酸、4’-硫代核苷酸、碳環核苷酸;丨,5_去水己糖醇核苷酸; L-核苷酸;〇:-核苷酸;修飾鹼基核苷酸;二硫代磷酸酯鍵 助η ’棘-0夫喃戊糖基核皆酸;無環3 ’,41 -斷核苦酸;無環3,4 - ⑩ 二羥丁基核苷酸;無環3,5-二羥戊基核苷酸;3,_3,_反轉核 苦酸部分;3,-3,-反轉無鹼基部分;3,-2,-反轉核苷酸部分; 3 -2 -反轉無驗基部分,麟酸1,4_丁二醇醋;3,_胺基填酸g旨; 石粦酸己S旨,鱗酸胺基己g旨;31 -攝酸醋;31 -硫代麟酸g旨;二 硫代填酸酯;或橋接或非橋接膦酸甲酯部分。詳情係描述 於WO 97/26270中,其内容係以引用的方式併入本文中。 3’-帽可包括例如:4,,5,-亞曱基核苷酸;N(冷赤呋喃糖基) 核普酸’ 41 -硫代核苦酸、碳環核苦酸;鱗酸5'-胺基烧醋; ^ 石粦酸1,3 -二胺基-2 -丙酯;碌酸3 -胺基丙酯;填酸6 -胺基己 酯;磷酸1,2-胺基十二烷酯;磷酸羥丙酯;丨,5_去水己糖酵 核苷酸;L -核苷酸;α -核普酸;修飾驗基核皆酸;二硫代 磷:酸酯;蘇-°夫。南戊糖基核苷酸;無環3 4 ’ -斷核苷酸;3,4 -二經丁基核苷酸;3,5-二經戊基核苷酸;5’-5’-反轉核苷酸部 分;5'-5’-反轉無驗基部分;5'-胺基填酸酷;5’-硫代填酸酯; 磷酸1,4-丁二醇酯;5’-胺基;橋接及/或非橋接5,-胺基磷酸 68 201021852 酯、硫代填酸酯及/或二硫代填酸酯;橋接或非橋接膦酸曱 画日及5 -魏基0P刀 亦參看Beaucage及Iyer, 1993 49,1925 ;其内容係以引用的方式併入本文 中。>核苷類似物之非限制性清單具有如下結構:
〇=U F '°V〇^B „ Β 〇Π Λ Β 0=P-S' 、 硫代磷酸酯 0=?-0' 甲基
Ο 2VMOE 2,-氟
Η CeNA ΡΝΑ
Ν-嗎淋基
0=Ρ-0' 2'-F-ANA ”切〇=?-〇· 〇、
3’-胺基磷酸酯
OH 2’ -(3-經基)丙基
V
B
4429-4443 Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development^ 69 201021852 2000, 3(2),293-213中所述之更多核苷類似物實例,其各者 - 之内容係以引用的方式併入本文中。 術語「反義」’當用於本文時’係指與編碼基因產物 或編碼控制序列之特定DNA序列或RNA序列互補的核# 酸序列。術語「反義股」用於指稱與「有義」股互補之核 酸股。在正常進行之細胞代謝中’ DNA分子之有義股為編 碼多肽及/或其他基因產物之股。有義股充當合成信使RNa (「mRNA」)轉錄物(反義股)之模板,該信使rna轉 錄物繼而指導任何經編碼基因產物之合成。反義核酸分子 ❿ 可由此項技術中已知之任何方法產生,包括合成。被引入 細胞中之後,此轉錄股即與細胞所產生之天然序列組合, 形成雙股體(duplex)。接著’此等雙股體阻斷mRNA之 進一步轉錄或其轉譯。標示「負」或㈠亦為技術已知係指 反義股;而「正」或(+)亦為技術已知係指有義股。 就本發明之目的而言,「互補」應理解為意謂一個核 酸序列與另一個核酸序列形成氫鍵。互補百分比表示一個 核酸分子中可與第二個核酸序列形成氫鍵(亦即,沃森-克 ◎ 里克鹼基配對(Watson-Crick base pairing))之相連殘基 的百分比’亦即在10個殘基中有5、6、7 ' 8、9、10個即 為50%、60%、70%、8〇%、9〇%及1〇〇%互補。「完全互補」 意謂一個核酸序列之所有相連殘基均與第二個核酸序列中 相同數目之相連殘基形成氫鍵。 適用於本文所述之奈米粒子的核酸(諸如一或多種相 同或不同之寡核苷酸或寡核苷酸衍生物)可包含約5至約 70 201021852 1000個核酸’且較佳為相對較短之多核苷酸,例如大小範 圍較佳從長度約8至約5 〇 (例如約8、9、1 0、1 1、1 2、1 3、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21 、 22、 23、 24、 25、 26、 27、28、29或30 )個核苷酸。 在一態樣中’被包封於本文所述奈米粒子中之適用核 酸包括具有天然磷酸二酯骨架或硫代磷酸酯骨架或任何其 他經修飾之骨架類似物的寡核苷酸及募去氧核苷酸,諸如: LNA (鎖核酸); PNA (具有肽骨架之核酸); 短干擾 RNA ( siRNA ); 微 RNA ( miRNA); 具有肽骨架之核酸(PNA); 二胺基填酸酯(N-嗎琳基)寡核苷酸(pmo ); 三環DNA ; 誘餌ODN (雙股募核苷酸); 催化性RNA序列(RNAi ); 核糖核酸酶; 適體(aptamer ); 鏡像異構體(spiegelmer) (L-構型寡核皆酸);
CpG寡聚物;及諸如此類,例如下列文獻中所揭示者: Tides 2002, Oligonucleotide and Peptide Technology Conferences,2002 年 5 月 6 日至 8 日,Las Vegas, NV ;及 Oligonucleotide & Peptide Technologies, 2003 年 1 1 月第 18 期及第19期,Hamburg,Germany ’其内容係以引用的方式 71 201021852 併入本文中。 在被包封於奈米粒子中之核酸的另一態樣中,寡核苷 酸可視情況包含此項技術中已知之任何適合的核苷酸類似 物及衍生物’包括下表2中所列者: 物 表2‘代表性核苷酸類似物及衍生 2Ά-曱基胞茌 5-曱氧基幾~5-甲氣基尿~辱-31 二氫尿苷 2'-〇-曱基假 4-乙醯基胞" AD-甘露糖基辮苷(beta,D-mannosylqueuosiine)
基曱基尿苷 ❹
Q 鎖腺苷 鎖鳥苷 鎖尿苷 甲基尿苷 —廬丁苦(WvGutosine ) 4胸腺嘧啶 -S3J$¥
72 201021852 在一較佳態樣中,舉例而 餐:乾养核苷酸包括但不限於致 因、促細胞增殖路徑基因、病 徑基因。 言’被包封在奈米粒子中之 癌基因、促血管生成路徑基 毒感染因子基因及促炎性路 在一較佳具體實例中,姑&士丄 黃例甲破包封在本文所述之奈米粒子 中的募核苷酸參與靶向腫瘤細 ° a厂5周與腫瘤細胞相關 之基因或蛋白質表現及’或腫瘤細胞對抗癌治療劑之抗性。 ❹ ❹ 舉例而言’用於下調任何技術已知與癌症相關之細胞蛋白 (例如BCL-2 )的反義募核努酸均可用於本發明。參看綱4 年4月9日申請之美國專利申請案第1〇/822,2〇5號,其内 谷係以引用的方式併入本文中。較佳治療性寡核苷酸之非 限制|± m單包括反義bcl_2募核苷酸、反義“寡核苷 酸、反義存活素(survivin)募核苷酸、反義Ε_3寡核苷 酉文、反義PIK3CA募核苷酸、反義HSP27寡核苷酸、反義 雄激素党體募核苷酸、反義Gli2寡核苷酸及反義召-索烴素 (/3 -catenin)募核苷酸。 更佳而言,本文所述之根據本發明之募核苷酸包括硫 代磷酸酯骨架及LNA。 在一較佳具體實例中,募核苷酸可為例如反義存活素 LNA、反義 ErbB3 LNA 或反義 HIF1- a LNA。 在另一較佳具體實例中’募核苷酸可為例如具有與
Genasense® (a/k/a 奥利默森鈉(oblimersen sodium),由
Genta公司(Berkeley heights,NJ )生產)相同或實質上類 似之核苷酸序列的寡核皆酸。Genasense⑧為18聚體 73 201021852 (18-mer)硫代磷酸酯反義寡核苷酸(SEQ ID n〇:4),其 與人類bcl-2 mRNA之起始序列的前六個密碼子互補(人類 bel_2 mRNA為技術已知的,且在例如美國專利第6,414,134 就中描述為SEQ ID NO: 19,該專利以引用的方式併入本文 中)。 所涵蓋之較佳具體實例包括: (〇反義存活素LNA寡聚物(SEQ ID NO: 1 ): mCs_Ts-mCs-As.as-ts-cs-cs-as-ts-gs-gs-mCs-As-Gs-c , 其中大寫字母表示LN A,「s」表示硫代磷酸酯骨架; (ii)反義 Bcl2 siRNA : 有義 S’-gcaugcggccucuguuugadTdT-S’( SEQ ID NO: 2) 反義 3'-dTdTcguacgccggagacaaacu-5' ( SEQ ID NO: 3) ''中dT表示DNA ; (Hi)Genasense (硫代填酸酯反義寡核苷酸)(SEQ NO: 4 ): ts"cs'ts-cs-cs_cs*as*9s-cs"9s*ts"9s*cs'9s"cs*cs_cs aS ^ 其中小寫字母表示DNA,且「S」表示硫代磷酸酿骨架; (lv)反義 HIF1 a LNA 寡聚物(SEQ ID N〇: 5 ).
TsGsGscsasasgscsastscscsTsGsTsa 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; (v) 反義 ErbB3 LNA 募聚物(SEQ ID Ν〇· 6 ) · M e M e ,
TsAsGscscstsg山csascststs l 山 s 其中大寫字母表示LNA,X「sj表示硫代磷酸酯骨架; (vi) 反義 ErbB3LNA 寡聚物(SEQIDN〇:7): 74 201021852
GsMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC ’ 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; (vii)反義 piK3CA LNA 募聚物(SEQ ID NO: 8 ) ··
AsGsMeCscsaststscsaststsCsCsAsMeCsMeC ’ 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; 〇出)反義 PIK3CA LNA 募聚物(SEQ ID NO: 9): TsTsAststsgstsgscsastscstsMeCsAsG ’ 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; (ix)反義 HSP27 LNA 募聚物(SEQ ID NO: 10): CsGsTsgstsastststscscsgscsGsTsG ’ 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; (X)反義 HSP27 LNA 募聚物(SEQ ID NO: 11 ): GsGsMecsascsasgscscsasgstsgsGsMeCsG ’ 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; 〇i)反義雄激素受體LNA寡聚物(SEQ ID NO: 12 ):
MeCsMecsMeCsasasgsgscsascstsgscsAsGsA, 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; (xii) 反義雄激素受體LNA寡聚物(SEQ ID NO: 13 ): ASMeCsMeCsasasgstststsc山tscsAsGsMeC, 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; (xiii) 反義 GLI2 LNA 寡聚物(SEQ ID NO: 14 ): MeCSTs,sCststsgsgstsgsCsasgsTsMeCsT, 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代磷酸酯骨架; (xiv) 反義 GLI2 LNA 寡聚物(SEQ ID NO: 15 ): 75 201021852
TsMeCsAsgsaststscsasasascsMeCsMeCsA, 其中大寫字母表示LNA ’且「s」表示硫代磷酸酯骨架; (xv)反義乃-索烴素[ΝΑ寡聚物(SEQ ID NO: 16 ):
GsTsGststscstsascsascscsasTsTsA, 其中大寫字母表示LNA,且「s」表示硫代鱗酸酯骨架。 小寫字母表示DNA單元,粗體大寫字母表示LNA單 元,諸如/3 -D-氧基-LNA單元。LNA單體中之所有胞嘧啶 驗基均為5 -曱基胞嘧啶。下標「s」表示硫代磷酸酯鍵聯。 LNA包括如下所示之2'-〇,4,-C亞曱基雙環核苷酸: 1 B LNA單體 e_M冓型 參看在標題為厂 LNA Oligonucleotides and the Treatment of Cancer」之美國專利申請案第1 1/272,124號及 標題為「Oligomeric Compounds for the Modulation Survivin
Expression」之美國專利申請案第i〇/776,934號中所揭示之 存活素LNA的詳細描述,其各者之内容係以引用的方式併 入本文中。關於HIF-1 α調節,亦參看美國專利第7,589,19〇
波及美國專利公開案第2004/0096848號;關於ErbB3調節, 見美國專利公開案第2008/03 18894 號及 PCT/US09/063357 ’關於PIK3CA調節,見美國專利公開案 第 2009/01921 10號;關於 HSP27 調節,見 PCT/IB09/052860 ;關於雄激素受體調節,見美國專利公開 案第 2009/0181916 號;及標題為「RNA Antag〇nists Targeting GLI2」之美國臨時申請案第6i/081,135號及pCT 201021852 申請案第PCT/IB09/006407號;及關於/5索烴素調節,見美 國專利公開案第2009/0005335號及第2009/0203 137號;其 各者之内容亦以引用的方式併入本文中。適合之標革巴基因 的其他實例係描述於WO 03/74654、PCT/US03/05028及美 國專利申請案第10/923,536號中,其内容係以引用的方式 併入本文中。 在另一具體實例中,本文所述之奈米粒子可包括與促 核内體釋放基團可釋放地鍵聯之寡核苷酸。核内體釋放促 〇 進基團,諸如富含組胺酸之肽,可破壞核内體膜,從而促 進治療劑之細胞質遞送。富含組胺酸之肽增強募核苦酸至 細胞質之核内體釋放。隨後,細胞内釋放之募核苷酸可移 位至細胞核。募核苷酸-富含組胺酸之肽共軛物之其他詳情 係描述於2008年1 1月1 7曰申請之美國臨時專利申請案第 6 ^15,350號及第61/115,326號,及同一日期申請且標題 為「Releasable Conjugates For Nucleic Acids Delivery Q Systems」之PCT專利申請案第_號中,其各者之内容 係以引用的方式併入本文中。 6· 向基團 視情況/較佳地’本文所述之奈米粒子組成物進一步包 括針對特定細胞或組織類型之乾向配位體。可使用鍵聯分 子’諸如醯胺、醯胺基、幾基、g旨、肽、二硫化物、碎院、 核芽、無驗基核苷、聚_、聚胺、聚醯胺、肽、碳水化合 物知質、聚經、填酸S旨、胺基碟酸S旨、硫代填酸醋、填 酸院S旨、順丁烯二醯亞胺基鍵聯基或光不穩定鍵聯基,將 77 201021852 $向基團與奈米粒子組成物之任何組份(較佳為融合性脂 · 貝及PEG-月曰質)連接。可使用此項技術中已知之任何技術 使無向基團與奈米粒子組成物之任何組份共輛而無須過度 實驗。 舉例而言,可將靶向劑與PEG脂質之聚合部分連接以 在活體内將奈米粒子引導至標粗區域。本文所述之奈米粒 子之靶向遞送增強包封治療性核酸之奈米粒子的細胞吸 藉此改善冶療功效。在某些態樣中,一些細胞穿透性 肽可用多種la向肽置換以供把向遞送至遽瘤部位。 修 在本發明之一較佳態樣中,靶向部分,諸如單鏈抗體 (A)或單鏈杬原結合抗體、單株抗體、細胞黏附肽(諸 D肽及選擇素(Selectin))、細胞穿透性狀 T穿透素(Penetratin )及(Arg)9 )、受體配位 體、革巴向碳水化合物分子或凝集素(lectin)等,使奈米粒 子得以特異性地針對乾向區域。參看如·· 2嶋年9 月 ’ 95(9). 1 856-72 Cell adhesion molecules for targeted — delivery ’其内容係以引用的方式併入本文中。 ❽ μ較佳的1巴向部分包括單鏈抗體(SCA)或抗體之單鏈可 變片段(SFv) 。SCA含有可結合或識別標靶腫瘤細胞之特 分子的抗體結構域。除保持抗原結合部位之外,與pEG_ 脂質共輛之SCA可減少抗原性且增加SCA在血流中之半衰 期。 術語:單鏈抗體」(SCA)、「單鏈抗原結合分子或抗 體」或彳鏈Fv」(sFv)係互換使用。單鏈抗體具有針對 78 201021852 抗原之結合親和力。單鏈抗體(Sc a )或單鏈Fv可以若干 方式構築’且已以若干方式構築。單鏈抗原結合蛋白之理 論及產生的描述係見於共同讓渡之美國專利申請案第 10/915,069號及美國專利第6,824,782號中,其各者之内容 係以引用的方式併入本文中。 典型地,SC A或Fv域可選自在文獻中以其縮寫而為吾 人所知的單株抗體’如26-10、MOPC 315、741F8、520C9、 McPC 603、D1.3、鼠類 ph〇x、人類 phOx、RFL3.8 sTCR、 lA6、Sel55-4、18-2-3、4-4-20、7A4_ 卜 B6.2、CC49、3C2、 2c、MA-15C5/Ki2Go、Ox 等(參看 Huston,J. S.等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988) ; Huston, J. S.等 人,SIM News 3 8(4)(增刊):1 1 (1988) ; McCartney, J.等人, ICSU Short Reports 10:1 14 (1990) ; McCartney, J. E.等人, unpublished results (1990) ; Nedelman, M. A.等人,J. Nuclear Med. 32(增刊):1005 (1991); Huston,J. S.等人, Molecular Design and Modeling: Concepts and Applications, B 部分,J. J. Langone 編,Methods in Enzymology 203:46-88(1991) ; Huston,J. S·等人,Advances in the
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Sci· USA 89:4759-4763 (1993))。各前述出版物係以引用的 方式併入本文中。 把向基團之非限制清單包括血管内皮細胞生長因子、 FGF2、體抑素(somatostatin )及體抑素類似物、轉鐵蛋白、 促黑素(melanotropin )、ApoE及Ap〇E肽、馮威里氏因子 (von Willebrand’s Factor)及馮威里氏因子肽、腺病毒纖 維蛋白及腺病毒纖維蛋白肽、PD1及pdi肽、EGF及Egf 肽、RGD肽、葉酸鹽、對曱氧基苯ψ醯胺(anisamide )等。 熟習此項技術者所瞭解之其他選用靶向劑亦可用於本文所 述之奈米粒子中。 在一較佳具體實例中,適用於本文所述化合物之革巴向 劑包括單鏈抗體(SCA )、RGD肽、選擇素' tat、穿透素、 (Argh、葉酸、對甲氧基苯曱醯胺等,且此等藥劑之一些較 佳結構為: 4 C-TAT : ( SEQ ID NO: 17) CYGRKKRRQRRR ; C-(Arg)9 : ( SEQ ID NO: 18) CRRRRRRRRR ; 81 201021852 RGD可為直鏈或環狀:
HS
葉酸為下式之殘基:
對曱氧基苯曱醯胺為P-Me0-Ph-C( = 0)0H。
Arg9 可包括用於共軛之半胱胺酸,諸如 CRRRRRRRRR,且TAT可在肽末端處添加另外的半胱胺 酸,諸如 CYGRKKRRQRRRC。 就本發明之目的而言,本說明書及圖中所用之縮寫表 示以下結構: (i) C-diTAT ( SEQ ID NO: 19 ) = 82 201021852 cygrkkrrqrrrygrkkrrqrrr-nh2 ; (ii) 直鏈 RGD ( SEQ ID NO: 20) = RGDC ; (iii) 環狀 RGD ( SEQ ID NO: 21 及 SEQ ID NO: 22)= c-RGDFC 或 c-RGDFK ; (iv) RGD-TAT ( SEQ ID NO: 23 ) = CYGRKKRRQRRRGGGRGDS-NH2 ;及 (v) Arg9 ( SEQ ID NO: 24) = RRRRRRRRR。 或者,靶向基團包括:糖及碳水化合物,諸如半乳糖、 ® 半乳糖胺及N-乙醯半乳糖胺;激素,諸如雌激素、睪固酮、 助孕酮、葡糖皮質酮(glucocortisone )、腎上腺素、胰島 素、升糖素、皮質醇、維生素D、曱狀腺激素、視黃酸及生 長激素;生長因子,諸如VEGF、EGF、NGF及PDGF ;神 經傳遞質,諸如GABA、麩胺酸鹽、乙醯膽鹼;NOGO ;三 磷酸肌醇;腎上腺素;去曱腎上腺素;一氧化氮、肽、維 生素(諸如葉酸鹽及°比°多醇(pyridoxine ));可在活體内 或試管内與細胞表面受體相互作用之藥物、抗體及任何其 ❹ 他分子。 D. 奈米粒子之製備 本文所述之奈米粒子可藉由任何技術已知方法製備而 無須過度實驗。 舉例而言,奈米粒子可製備如下:於第一貯器中提供 核酸(諸如寡核苷酸)水溶液(或不含核酸之水溶液以供 用於比較研究),於第二貯器中提供含有本文所述奈米粒 子組成物之有機脂質溶液,且將水溶液與有機脂質溶液混 83 201021852 合,以使得有機脂質溶液與水溶液混合而產 . 不未权子。該方法之詳情係描述於美國專利公 2004/0142025號中,其内容細引料方式併人本文中、。 或者,本文所述之奈來粒子可使用此項技術中已知之 任何方法製備,包括例如清潔劑透析法,或利用有機溶劑 以在混合組份期間提供單一相之改良逆招法。在清潔劑透 析法中’使«(亦即siRNA)與陽離子脂質之清潔劑溶液 接觸以形成經塗佈之核酸複合物。 在本發明之一具體實例中,陽離子脂質係與諸如寡核❿ 苷酸之核酸組合以產生約1:20至約2〇:1之電荷比,較佳為 約1:5至約5:1之比,且更佳約1:2至約2:1之比。 在本發明之一具體實例中,陽離子脂質係與諸如寡核 皆酸之核酸組合以產生約1:1至約2〇:1、約1:1至約ΐ2:ι 之電荷比,且更佳為約2:1至約6:1之比。或者,奈米組成 物之氮對磷酸酯(N/P )比範圍從約2:1至約5:1 (亦即 2.5:1)。 在另一具體實例中,可藉由使用雙泵系統製備本文所 〇 述之奈米粒子。一般而言’該方法包括於第一貯器中提供 含有核酸之水溶液且於第二貯器中提供含有所述奈米粒子 組成物之脂質溶液。藉由使用雙泵系統混合該二溶液以提 供奈米粒子。隨後以水性緩衝液稀釋所得混合溶液且可藉 由透析來純化及/或分離所形成之奈米粒子。奈米粒子可經 進一步加工以藉由經0.22 V m過濾器過濾而滅菌。 含有核酸之奈米粒子範圍從直徑約5至約300 nm。較 84 201021852 佳而σ藉由使用動態光散射(Dynamic Light Scattering, DLS )技術測量,奈米粒子具有小於約i5〇 nm(例如約 nm)之中數直徑,更佳為小於約ι〇〇 之 -^^,30,10〇η,(,ιΗσ59^6^68^^;: 3 96 )、較佳約60至約95 nm之中數直徑。熟習技 術者將瞭解使用其他諸如TEM之技術已知技術之測量,當 與DLS技術,可提供減半的中數直徑數。如聚合度分布性 ❹ ❹ 所不’本發明奈米粒子為在大小方面為實質上均勾的。 視隋况’可藉由任何此技術中已知之方法將奈米粒子 筛分。可進行筛分以便達到合意大小範圍及相對窄之奈米 粒子大小分布。有若干技術可用於將奈米粒子篩分至合意 大小。參看例如美國專利第 ^ 的方式併入本文中。,7,323號’其内容係以引用 (例rtrr製備血清穩定奈㈣子之方法,使得核酸 RNA) #皮包封於脂質多層結構(亦即脂質 雙層)中且免被降解。本文所述之 τ p月曰質 穩定的。被包含在本發明太二中為 存在於體液中之核酸酶。 免方; 另外,根據本發明製備之奈米粒子在 為中性或帶正電荷的。 PH值下較佳 吏用本文所述之奈米粒子組成物製備之奈 米粒子複合物包括:4子或奈 她合物,·㈣ΡΕ=子脂 在…實❹…㈣核酸,諸如寡核*酸。 在-體實例中,奈米粒子組成物包括下列混合物: 85 201021852 陽離子脂質、式(i)化合物視情況與二醯基磷脂醯乙醇 胺、與磷脂醯乙醇胺共軛之PEG ( PEG-PE )及膽固醇之混 合物; 陽離子脂質、式(I)化合物視情況與二醯基磷脂醯膽 鹼、與磷脂醯乙醇胺共軛之PEG ( PEG-PE )及膽固醇之混 合物; 陽離子脂質、式(I)化合物視情況與二醯基磷脂醯乙醇 胺、二醯基磷脂醯膽鹼、與磷脂醯乙醇胺共軛之PEG (PEG-PE)及膽固醇之混合物; © 陽離子脂質、式(I)化合物視情況與二醯基磷脂醯乙醇 胺、、與腦醯胺共軛之PEG( PEG-Cer)及膽固.醇之混合物; 及 陽離子脂質、式(I)化合物視情況與二醯基磷脂醯乙醇 胺、與磷脂醯乙醇胺共軛之PEG ( PEG-pe )、與腦醯胺共 輊之PEG ( PEG-Cer )及膽固醇之混合物。 其他奈米粒子組成物可藉由將含有技術已知陽離子脂 質的組成物改質來製備。可藉由添加技術已知之陽離子脂 © 質將含有式(I)化合物之奈米粒子組成物改質。參看美國專 利申請公開案第2008/0020058號之表IV中所述之技術已知 之組成物,其内容係以引用的方式併入本文中。 用於製備奈米粒子之非限制性奈米粒子組成物清單係 示於表3中。 表3. 86 201021852 樣品 編號 奈米粒子組成物 莫耳比 Oligo 1 陽離子脂質1:化合物10: DSPC:膽固醇:DSPE-PEG 15:15:20:40:10 01igo-l 2 陽離子脂質1:化合物l〇:DSPC:膽固醇:DSPE-PEG 15:5:20:50:10 Oligo-1 3 陽離子脂質1:化合物10: DSPC:膽固醇:DSPE-PEG 25:15:20:30:10 01igo-l 4 陽離子脂質1:化合物10:膽固醇:DSPE-PEG 20:47:30:3 01igo-l 5 陽離子脂質1:化合物10:膽固醇:DSPE-PEG 17:60:20:3 Oligo-1 6 陽離子脂質1:化合物10: DSPE-PEG 20:78:2 Oligo-】 7 陽離子脂質1:化合物10:膽固醇:C16mPEG-腦醯胺 17:60:20:3 Oligo-2 8 陽離子脂質1:化合物10:膽固醇:DSPE-PEG: C16mPEG-腦醯胺 18:60:20:1:1 Oligo-2 在一具體實例中,奈米粒子中之陽離子脂質1:化合物 10:膽固醇:PEG-DSPE: C16mPEG-腦醯胺之莫耳比分別為 約1 8%:60%:20%:1 %: 1 %之莫耳比。(樣品編號8 ) 在另一具體實例中,奈米粒子含有莫耳比為存在於奈 米粒子組成物中之總脂質之約17%:60%:20%:3%的陽離子 脂質1、化合物10、膽固醇及C16mPEG-腦醯胺。(樣品編 號7) 在一具體實例中,被包含在組成物中之陽離子脂質具
,Ν、 Η ,Ν 丫 ΝΗ ΝΗ2 Η ,Ν 丫 ΝΗ ΝΗ2 (陽離子脂質】) 在另一具體實例中,此等奈米粒子組成物含有具有下 結構之可釋放聚合脂質: mPEG 〇
Y 87 201021852 2,000道爾頓之數量平 對於存在於奈米粒子組 其中PEG月旨f t聚合物部分具有約 均重量。 如本文中所用之莫耳比係指相 成物中之總脂質的量。 F. 治療方法
本文所述之奈米粒子可單獨或與其他療法組合用於預 防抑希i降低或治療與細胞或組織中標革巴基因表現量有 關或對其反應之任何錄、疾病或病狀的治療卜該等方 法匕括將本文所述之奈米粒子投予有需要之哺乳動物。 本發明之一態樣提供在活體内及/或試管内將諸如核酸 /寡核芽酸之治療劑引入或遞送至哺乳動物細胞中之方法。 根據本發明之方法包括使細胞與本文所述之化合物接 觸D玄遞送可作為適合之醫藥組成物的一部分在活體内進 订,或在活體外或試管内環境中直接遞送至細胞。 本發明適用於將寡核苷酸引入哺乳動物中。本文所述 之化合物可投予哺乳動物,較佳為人類。
根據本發明’本發明較佳係提供抑制或下調(或調節) 哺礼動物細胞或組織中之基因表現的方法。基因表現之下 調或抑制可在活體内、活體外及/或試管内達成。該等方法 包括使人類細胞或組織與包封核酸之奈米粒子接觸或將奈 米粒子投予有需要之哺乳動物。一旦接觸已經發生,當相 較於在缺乏本文所述之奈米粒子的情況下所觀測之結果, 在活體内、活體外或試管内達成至少約1 〇%、較佳至少約 20%或更高(例如至少約25%、30%、40%、50%、60%)時, 88 201021852 即認為基因表現,諸如在mRNA或蛋白質含量方面,有成 功的抑制或下調發生。 就本發明之目的而言,「抑制」或「下調」應理解為 意謂相較於在缺乏本文所述之奈米粒子的情況下所觀測之 紇果,標靶基因之表現,或編碼—或多個蛋白質次單元之 颜A或均等RNA之含量,或-或多個蛋白質次單元之活性 被降低。
在-較佳具體實例中’舉例而言,標靶基因包括但不 限於致癌基因、促血管生成路徑基因、促細胞增殖路徑基 因、病毒感染因子基因及促炎性路徑基因。 較佳地,標革巴基因之基因表現在癌細胞或組織,例如 腦、乳房、結腸直腸、胃、肺、口腔、胰腺、前列腺、皮 膚或子宮頸癌細胞中受到抑制。癌細胞或組織可來自下列 之或多者.實體腫瘤、淋巴瘤、小細胞肺癌、急性淋巴 球性白血病(ALL)、胰腺癌、神經勝母細胞瘤、⑼巢癌、 胃癌、乳癌、結腸直腸癌、前列腺癌、子宮頸癌、腦腫瘤、 KB癌症、肺癌、結腸癌、表皮癌等。
在-特定具體實例中,根據本文所述之方法的奈米粒 子包括例如反“cl-2寡核皆酸、反義mF心寡核苦酸、 反義存活素寡核㈣、反義Ε_寡核㈣、反義piK3cA 寡核芽酸、反義咖27寡核芽酸、反義雄激素受體寡核發 酸、反義GH2寡核芽酸及反義f索煙素寡核苦酸。 根據本發明,可使用可包括寡核苦酸(SEQIDN0:卜 SEQ ID NO 2 及 3、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 89 201021852 5、SEQIDNO:6、SEQiDN〇:7、sEQiDN〇 则〇:9、SEQidno:10、SEQIDn〇.uQ ^〇: N〇:12^SHQlDN〇:13.SEQiDN〇;u SHQid 及 SEQ ID NO· 16,# 士 々 j Q D N〇·· 15 其中各核酸為天然存在或經修飴+ 酸)之奈米粒子。本文所涵蓋之療法使於核 米粒子中之核酸。在—具體實例令,人 于於上述奈 反義核苷酸之治療性秒努酸 3 上連續 饮,王孩甘酸可用於治療中。 或者,亦提供的是治療哺乳動物之方法 =:Γ含有本文所述奈米粒子的醫藥組成物投二; 要之'。者。方法功效將視核酸對所治 :::提供治療哺乳動物中各種醫學病狀的方法。:;、; 二需要這種治療之哺乳動物投予有效量之 4拉子。本文所述之奈米粒子尤其適用於 4心(但不限於)癌症'發炎疾病及自體 疾病。 、例〈 在-具體實例中,亦提供的是治療患有惡性腫瘤或癌 工Ϊ t之方法’其包括將有效量之含有本文所述奈米粒 的醫樂組成物投予有需要之患者。所治療之癌症可為下 列之一或多者:脊_卩壬+ 貫體腫瘤、淋巴瘤、小細胞肺癌、急性淋 巴球性白灰病(Α τ τ、 π., 田 L J、胰腺癌、神經膠母細胞瘤、卵巢癌、 β ^ 、σ腸直腸癌、前列腺癌、子宮頸癌、腦腫瘤、KB癌 症、肺癌、結腸癌、表皮癌f。奈米粒子藉由下調標靶基 之基因表現而適用於治療哺乳動物之贅生性疾病、降低 ;· ' % 防止腫瘤轉移及防止腫瘤/贅生性生長之復發。 201021852 舉例而言,奈米粒子適用於治療轉移性疾病(亦即轉移炱 肝臟中之癌症)。 在另一態樣中,本發明提供活體内或試管内抑制癌細 胞之生長或增殖之方法。該方法包括使癌細胞與本文所述 之奈米粒子接觸。在一具體實例中,本發明提供在活體内 或試管内抑制癌症生長之方法,其中細胞表現ErbB3基因。 在另一態樣中,本發明提供一種將核酸(例如反義 ErbB3 LNA寡核苷酸)遞送至癌細胞内之方法,其在癌細 胞内可與例如細胞核中之ErbB3 mRNA結合。因此,以bB3 蛋白質表現被抑制,此抑制癌細胞之生長。該方法將募核 苷酸(例如反義募核苷酸,包括LNA)引入癌細胞中,且 降低癌細胞或組織中之標靶基因(例如存活素、HIF_]a或 ErbB3 )表現。 或者’本發明提供調節癌細胞之細胞凋亡的方法。在 又另一態樣中,亦提供的是活體内或試管内增加癌細胞或 組織對化療劑之敏感度的方法。 在又另一態樣中,提供的是活體内或試管内殺死腫瘤 細胞之方法。該方法包括將本文所述之化合物引入腫瘤細 胞中以降低基因表現(諸如ErbB3基因),及使腫瘤細胞 與足以殺死一部分腫瘤細胞之量的至少一種抗癌劑(例如 化療劑)接觸。因此,所殺死之腫瘤細胞部分可多於在缺 乏本文所述奈米粒子的情況下由相同量化療劑殺死之腫瘤 細胞部分。 在本發明之另一態樣中,抗癌劑/化療劑可與本文所述 91 201021852 之化合物同時或依序組合使用。本文所述之化合物可在抗 癌劑之前或與其同時投予或在投予抗癌劑之後投予。因 此,本文所述之奈米粒子可在化療劑治療之前、期間或之 後投予。 尚有其他態樣包括將本文所述之本發明化合物與其他 抗癌療法組合以達成協同或相加效益。 或者’本文所述之奈米粒子組成物可用來將較佳具有 負電荷或中性電荷之醫藥活性劑遞送至哺乳動物。可將包 封醫藥活性劑/化合物之奈米粒子投予有需要之哺乳動物。 醫辦活性劑/化合物包括小分子量分子。通常,醫藥活性劑 具有小於約1,500道爾頓(亦即小於ι,000道爾頓)之分子 量0 在另一具體實例中,本文所述之化合物可用以遞送核 酸、醫藥活性劑或其組合。 在又另一具體實例中’與治療相關之奈米粒子可含有 一或多種治療性核酸(可相同或不同,例如相同或不同募 核苷酸)及/或一或多種醫藥活性劑之混合物以供協同應用。 G.奈米粒子之醫藥組成物/調配物 包括本文所述奈米粒子之醫藥組成物/調配物可連同— 或多種生理上可接受之載劑來調配,該載劑包含有助於將 活性化合物加工成在醫藥上可使用之製劑的職形劑及助 劑。適當調配物視所選投藥途徑而定,亦即是否進行局部 或全身性治療。 例如經
適合的形式有部分視用法或進入途徑而定 92 201021852 I、'=或注射。在此項技術中已知之關於製備適當調配 的考慮因素包括但不限於毒性及會阻礙組成物或調配物 心揮其作用之任何不利因素。 、本文所述之㈣粒子之醫藥組成物可經口、經肺、局 部或非經腸投予。局部投藥句枯 门I杈樂包括但不限於經由表皮、經皮、 眼睛途徑投予,包括綿;由逢上描 .. 栝由黏臈,例如包括陰道及直腸遞送。 亦涵蓋非經腸投予,句杯蟮时& . ^ 包括#脈内、動脈内、皮下、腹膜内 ❹ φ 或肌肉内注射或輸注。 在較佳具體實例中,含有治療性寡核苦酸之奈米粒 子係以靜脈内(i.v.)或腹臈内(ip )方式投予。在本發明 之許多態樣中,非經腸途徑為較佳的。 對於注射,包括但不限於靜脈内、肌肉内及皮下注射 而言’本發明之奈米粒子可調配於水溶液中,車交佳調配於 生理相容性之緩衝液(諸如生理鹽水緩衝液)或極性溶劑 (包括但不限於吡咯啶酮或二曱亞磲)中。 亦可調配奈米粒子供快速注射或連續輸注之用。注射 用調配物可以單位劑型(例如以安瓶形式或以多劑量容器) 存在。適用組成物包括但不限於處於油性或水性媒劑中之 懸浮液、溶液或乳液,且可含有佐劑,諸如懸浮、穩定及/ 一劑。非經腸投予用醫藥組成物包括水溶性形式之水 溶液。水性注射懸浮液可含有調節懸浮液黏度之物質,諸 如緩曱基纖維素鈉、山梨糖醇或聚葡萄糖。視情況,懸浮 液亦可含有適合的穩定劑及/或增加奈米粒子在溶液中之濃 度的藥劑。或者’㈣粒子可呈粉末形式,以供在使用之 93 201021852 月1J用合適媒劑(例如無菌、無熱原質之水)復原。 十於a 口投藥’本文所述之奈米粒子可藉由將奈米粒 子與在此項技術中熟知之醫藥上可接受之載劑組合來調 配^類载劑使本發明奈米粒子能夠調配為供患者經口攝 入之叙劑'丸劑、口含劑'糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、 = 劑、聚液、溶液、懸浮液、供在患者飲用水 釋之;辰喊及懸浮液、供在患者食物中稀釋之預混物,及 ,者如此類。經口使用之醫藥製劑可使用固體賦形劑 ^汗磨所仔混合物且必要時在添加其他合適助劑後加工顆 2混合物以獲得鍵劑或糖衣鍵核心來製備。適用賦形劑 "為.填充劑,諸如糖(例如乳糖、蔗 :梨糖醇纖維素製劑,例如玉米搬粉、小麥1= “粉及馬铃編;及其他物質,諸如明膠、黃f樹腺 (咖叫咖th)、甲基纖維素、㈣基甲基纖維素、绩 〒基纖維素納及/或聚乙稀料㈣(PVP)。必要時。 =崩解劑,諸如交聯聚乙烯…嗣、複脂或海藻酸y 亦可使用諸如海藻酸鈉之鹽。 對於吸人投藥,本發明奈米粒子可以氣溶膠 式’使用加壓包或喷霧器及適合推進劑便利地遞送。 奈米粒子亦可使用例如習4d γ杰丨甘# 甘油輸為直腸用組成物,諸可可脂或其他 ^诸如栓劑或保留灌腸劑。 除了先前描述之調配物外,奈米粒子亦可調 製劑。這類長效調配物可藉由植入(例如 肉内)或藉由肌肉内注射來投予。本發明化合物可用 94 201021852 適合之聚合物質或疏水性物質(例如含有藥理上可接受之 油之乳液形式)、離子交振谢 換樹知進行調配,或調配為微溶 性诉生物,諸如但不限於微溶性鹽,以用於此投藥途徑。 大另外,奈米粒子可使用持續釋放系統遞送,諸如含有 =粒子之固體疏水性聚合物之半渗透性基質。各種持續 釋放物質已經確立且為熟習此項技術者所熟知。 、 另外,可在本文所述奈米粒子 氧化劑及懸浮劑。 之邊樂組成物中使用抗 H·劑量 適足以抑制一或多種預 臨床情況下之治療有效量)之決定之:現的劑量(諸如在 者之能力範圍内,尤其根據本:全在热習此項技術 十入τ义揭不内容。 =發明之方法中所用之任何治療性 療有效里最初可由試管内檢定來估計。 - ❹ :用於動物模型中’以獲得包括有致劑量之:::該劑 圍。隨後可使用該資訊以更準確地決定、“盾畏〉農度範 所投予之醫藥組成物之量將視 入於患者之劑量。 定。一般而言,治療中所用之含核酸3核酸之效力而 乳動物中有效達成所需治療結果之量=叙子之量為在哺 子之劑量在某種程度上將視其^所包’、、;各種奈米粒 性劑)(例如寡核苷酸)而變化。另之核酸(或醫藥活 型及投藥途徑而變化。然而,一般而士劑量當然可視劑 述之奈米粒子令之核酸可以範圍二二被包封於本文所 1公克/公斤/週、較佳從约I至約500公克/公斤/週至約
克/公斤且更佳從I 95 201021852 至、勺100毫克/么;t (亦即從約3至約9〇毫克/公斤 量投予。 上述範圍為例示性的g热 的且熟習此項技術者將根據臨床經 驗^台療適應症來決定最佳劑量。另外,確實的調配物' 投藥途徑及劑量可由個M ^ π j由個別醫師鑒於患者之病狀來選擇。另 卜本文所述不米粒子之毒性及治療功效可藉由標準醫藥 程序在細胞培養物或f胁包此山* ’、 飞只驗動物中使用在此項技術中熟知之 方法來測定。 〜 ❹ 或者,視核醆效力能& ^ 疋,在>〇療中可使用約1毫启/ 公斤/劑至約100毫启/ Λ 兄 少旦毫克“斤/劑(0.1至_毫克/公斤/劑) 之里。早位劑型一般範圍從 寡核苦酸。 ·約1毫克至約6。毫克的活性劍 體實例中,本發明之治療包括^ I ”至約㈣克/公斤/齡勺心⑽毫克/八斤/ :--,,2〇*^,/#1),^d6〇i45^;;-投予舉:二:毫:/公斤/劑(可在單或多劑方案”之. 乃、30或60臺吉/八〇 不未拉子可在q3dx9下以5、 _ 一 A斤劑之量靜脈内投予。對於另一廉 而言,治療方案包括以每週約 ^ 一只例 每週約4至約95毫券/八* 约18毫克/公斤/劑,或 .毫克/ A斤/劑之量投 如在六週循環中,每週約 反義券核苷酸(例 或者,被包封在Γ 斤/劑,歷時3週)。 送包括在活體内'活體外或試管::::内之寡㈣酸的遞 較佳約丨。至約_二二:約°,1至約1〜M、 (亦即约10至約刪…約 96 201021852 30至約1 〇〇〇 # Μ )濃度之寡核苷酸與腫瘤細胞或组織接 觸0 組成物可每天投予一次,或分成可作為多週治療方案 之一部分給予的多劑量。如一般熟習此項技術者所瞭解, 精4劑量將視病狀之階段及嚴重程度、諸如腫瘤之疾病對 核酸之感受性及所治療患者之個別特徵而定。
^在本發明之投予奈米粒子之所有態樣中,所提及之劑 里係基於募核苷酸分子之量,而非所投予之奈米粒子之量。 預期治療將進行-或多天,直至獲得所需臨床結果。 ,封治療性核⑬(或醫藥活性劑)之奈米粒子之精確投藥 ΐ、投藥頻率及投藥時段當然將視患者之性別、年齡及醫 學病狀以及主治臨床醫師所確定之疾病嚴重程度而變化。 更進-步的態樣包括將本文所述之本發明奈米粒子與 其他抗癌療法組合以達成協同或相加效益。 實施例 ❹ Μ下實施㈣來提供對本發明之進一步理解,但並不 意謂以任何方式限制本發明之有效範圍。 在實施例中,所有合成反應皆在乾燥氮氣或氣氣之氛 下進仃。Ν-(3-胺基丙基)],3_丙二胺、b〇c_〇n、u⑽4、 s固醇及1H-。比。坐小曱月米鹽酸鹽係睛自⑽如匕 試劑及溶劑係在未坏有具他 ^ ^ ^ , 進步純化之情況下使用。LNA 〇]ig〇-i
乾向存活素基因及OH g_2靶向ErbB3基因為自製且其序列 ,、D出。核苷間鍵聯為硫代磷酸酯、表 胞嘴咬,且大寫字母指示⑶a。 曱土化 97 201021852 表4 · LNAOligo 序列 Oligo-1 (SEQIDNO: 1) 5,-mCTmCAatccatggmCAGc-3, Oligo-2 (SEQIDNO:6) 5'-TAGcctgtcacttmCTmC-3' 在整個實施例中可使用以下縮寫:諸如LNA (鎖核 酸)' BACC ( 2-[N,N’-二(2-金瓜丙基)]胺基乙基-膽固醇基· 碳酸酯)、Choi (膽固醇)、DIEA (二異丙基乙胺)、DMAP (4-iV,yV-二甲基胺基比啶)、DOPE ( L- α -二油醯基磷脂醯 乙醇胺,Avanti Polar Lipids ( USA)或 NOF ( Japan))、 DLS (動態光散射)、DSPC ( 1,2-二硬脂醯基-μ-甘油基-3· ® 磷酸膽鹼)(NOF, Japan)、DSPE-PEG( 1,2-二硬脂醯基 甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-(聚乙二醇)2000銨鹽或鈉鹽,
Avanti Polar Lipids ( USA)及 NOF ( Japan) )、KD (阻斷 表現(knowndown ) )、EPC (卵磷脂醯膽鹼,Avanti Polar Lipids (USA))及C16 mP EG-腦醯胺(N-棕橺醯基-神經 鞘胺醇-1-丁二醯基(曱氧基聚乙二醇)2〇〇〇,Avanti Polar Lipids ( USA))。亦可使用其他縮寫,諸如FAM ( 6_羧基 ❹ 螢光素)、FBS (胎牛血清)' GApDH (甘油醛_3_磷酸脫 氫酶)、DMEM (杜爾貝科改良伊格爾氏培養基(Dulbecc〇ls Modified Eagle’s Medium) )' MEM (改良伊格爾氏培養基 (Modified Eagle’s Medium) )、TEAA (乙酸四乙銨)、 TFA(三氟乙酸)、RT-qPCR(反轉錄.定量聚合酶鏈反應)。 實施例1. 一般NMR方法 除非另有4曰&否則使用Varian河⑽巧3〇〇 NMR光 譜儀及氘化氣仿作為溶劑,在3〇〇 MHz下獲得1r nmr光 98 201021852 譜’且在75.46 MHz下獲得〗3C NMR光譜。化學位移(5 ) 係以來自四曱基矽烷(TMS )之低場百萬分率(ppm )報告。 實施例2. —般HPLC方法 反應混合物及中間物與最終產物之純度由Becl<nian
Coulter System Gold® HPLC 儀器來監測。其採用 ZORBAX® 300SB C8 逆相管柱(i5〇x4.6 mm)或 Phenomenex Jupiter® 300AC18逆相管枉(150x4.6 mm ),使用1 6 8二極體陣列 UV債測器,使用流速!毫升/分鐘的i〇_9〇0/〇乙腈於〇 〇5〇/〇 ® TFA中之梯度或流速1毫升/分鐘的25-35%乙腈於50 mM TEAA緩衝液中之梯度。陰離子交換層析係在來自 healthcare 之 AKTA 探測器 1 〇〇A ( Amersham Biosciences) 上使用填充於來自Waters之AP-Empty玻璃管柱中的來自 Applied Biosystems之Poros 50HQ強陰離子交換樹脂進 行。脫鹽係藉由使用來自Amersham Biosciences之HiPrep 26/10脫鹽管柱完成(針對peg-寡)。 ❹ 實施例3. —般mRNA下調程序 將細胞維持於完全培養基(F-12K或DMEM,補充有 10% FBS)中。將每孔含有2.5x1 〇5個細胞之12孔板在37 C下培育隔夜。以〇pti-MEM®洗滌細胞一次且每孔添加4〇〇 V L Opti-ΜΕΜ®。隨後向各孔中添加含有寡核苷酸之奈米粒 子或Lipofectamine2000®之溶液。將細胞培育4小時,接著 母孔添加600 /z L培養基,且培育24小時。在處理24小 時之後,由RT-qPCR定量標革巴基因(諸如人類存活素)及 管家基因(housekeeping gene)(諸如GApDH)之細胞内 99 201021852 mRNA含量。將mRNA之表現量正規化。 ' 實施例4· 一般RNA製備程序 對於试管内mRNA下調研究而言,總RNA係遵循製造 商之說明’使用RNAqueous Kit® ( Ambion )來製備。rna 濃度係藉由〇D260 nm使用Nanodrop來測定。 實施例5. —般RT-qPCR程序 所有試劑皆來自Applied Biosystems :高容量cDNA反 轉錄套組® ( 4368813 ) 、20x PCR母體混合物( 4304437 ) 及用於人類GAPDH(目錄號0612177)及存活素(BIRK5 ❹ HsOOl 53353 )之TaqMan®基因表現檢定套組。對於最終體 積為50 # L之cDNA合成使用2_0 # g總RNA。反應係在 PCR溫度循環器中於25°C下進行10分鐘,在37。(:下進行 120分鐘’在85°C下進行5秒’然後儲存在4°C下。即時 PCR 係以 50。(: -2 分鐘 ' 951: -10 分鐘及 95 °C -15 秒 /60°C -1 分鐘之程式進行40個循環。對於各qPCR反應,在30 // L 最終體積中使用1 ^LcDNA。 實施例6: H-Dap-OMe:2HCl (化合物1)之製備 〇 在室溫下’用2M HC1之1,4-二腭烷溶液(130毫升) 處理 H-Dap-(Boc)-〇]VIe:HCl ( 5 g,19.63 毫莫耳)30 分鐘。 在真空中於30-35 °C下移除溶劑。將殘餘物再懸浮於乙喊中 且過遽。將所分離之固體在真空中經p2〇5脫水,獲得3 4 g (90%)產物:i3CNMR(DMS〇d 5 38.95, 49.99, 53.53, 66.37, 166.77 ° 實施例7 :二油醯基_Dap-OMe (化合物2)之製備 100 201021852 將化合物1 ( 3.4 g,17.8毫莫耳)於26毫升無水DMF 中之溶液添加至油酸(22.5毫升,20.0克,71.1毫莫耳) 於170毫升無水DCM中之溶液中。使混合物冷卻至〇至5 °C,接著添加EDC ( 20.5克,106.7毫莫耳)及DMAP ( 28.2 克’ 2 3 1 · 1毫莫耳)。將反應混合物擾拌隔夜且使其在氮氣 下升溫至室溫。反應的完成係由TLC( DCM:MEOH = 90:1, v/v )監測。將反應混合物以200毫升試劑級DCM稀釋且以 1 N HC1 ( 3x80 毫升)及 0.5% NaHC03 水溶液(3x80 毫升) ® 洗滌。將所得有機層分離,經無水硫酸鎂脫水且在真空中 於30 t:下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析 (DCM/MeOH/TEA = 95:5:0.1,v/v/v)純化,獲得 7.0 克 (61%)產物:13C NMR 6 14.15, 22.60, 25.55, 25.69, 27.20, 27.25, 29.18, 29.23, 29.29, 29.34, 29.55, 29.75, 29.78 31.91, 36.43, 36.52, 41.53, 52.63, 53.58, 129.49, 1 29.54, 129.82,129.85, 170.55, 173.59, 174.49。 實施例8 :二油酿基-Dap-ΟΗ (化合物3)之製備 馨 將NaOH (0.87克,21.63毫莫耳)於7毫升水中之溶 液添加至化合物2(7.0克’ 1〇.8毫莫耳)於7〇毫升乙醇中 之溶液中。將混合物在室溫下攪拌隔夜且在真空中於室溫 下濃縮。在0至5°C下將殘餘物懸浮於63毫升水中且用]N HC1酸化溶液。以DCM萃取該水溶液三次。將有機層合併 且經無水硫酸鎂脫水。在真空中於3 5下移除溶劑,獲得 5.5 克(80%)產物:i3C NMR 14.19,22.75,25.51, 25.68, 27.25, 27.29, 29.21, 29.26, 29.32, 29.38, 29.59, 29.79 101 201021852 29.82, 31.95, 36.30, 36.37, 41.58, 55.15, 129.53, 129.91, ' 171.49,1 75.67,176.19。 實施例9 : B〇cNHCH2CH2NH2 (化合物4)之製備 在0-5°C下,將Boc-酸酐(60克,274·9毫莫耳)於150 毫升無水DCM中之溶液缓慢添加至乙烷-1,2-二胺(41.3 克,687.3毫莫耳)於250毫升無水THF及200毫升無水 DCM中之溶液中,歷時1.5小時。將反應混合物攪拌隔夜, 同時使其升溫至室溫。將3 0 0毫升水添加至混合物中,將 其在真空下於30°C下濃縮。將所得水溶液以DCM ( 3x300 © 毫升)洗滌,且將有機層合併且以0.5 N HC1 ( 3x300毫升) 萃取。將水層合併且以4 N NaOH溶液調整pH值至9-1 〇, 接著以DCM ( 3x500毫升)萃取。將有機層合併且經無水 硫酸鎂脫水。在真空中於35。(:下移除溶劑,獲得17.6克 (40% )產物:l3c NMR δ 28.23, 41.67, 43.19, 78.77, 1 55.93。 實施例10:二油醯基-Dap-NHCH2CH2NHBoc(化合物 5)之製備 Θ 將DMAP ( 6.2克,51·2毫莫耳)添加至化合物3 ( 5·4 克’ 8.53毫莫耳)於50毫升無水DMF及400毫升無水DCM 中之溶液中’且使溶液在冰浴中冷卻。將化合物4 ( 2.7 3克, 17.1毫莫耳)及EDC( 6 6克,34·ι毫莫耳)添加至溶液中, 且將溶液攪拌隔夜,同時使之升溫至室溫。反應的完成係 由TLC ( DCM/MeOH = 9:1,v/v )監測且將反應混合物以 5〇〇毫升DCM稀釋,以〇.2N HC1 ( 3x500毫升)及水(3x 102 201021852 5 00毫升)洗滌’及經無水硫酸鎂脫水。在真空中於35 下移除溶劑,獲得5.6克(85%)產物:13C NMR 5 14.16, 22.72,25.52,25.77,27.23,27.26,28_43,29,24,29.35, 29.56, 29.79, 31.92, 36.50, 40.25, 40.38, 41.99, 55.22, 76.57-77.42 (CDC13), 79.41, 129.54, 129.86, 1 56.35, 1 70.44, 174.25, 175.35。 實施例11 :二油醯基_Dap-NHCH2CH2NH2 (化合物6) 之製備 ❹ ❹ 將化合物5 ( 5.6 g,7.2毫莫耳)溶解於95毫升DCM 中,且將溶液以24毫升三氟乙酸處理在室溫下3 〇分鐘。 在室溫下在真空中移除溶劑,且將殘餘物再溶解於2〇〇毫 升DCM中。將溶液以水及P/〇 NaHC〇3洗滌數次,直至pH 為8-9。將有機層經無水硫酸鎂脫水,且在真空中於3〇。〇下 移除溶劑,獲得 4·13 克(85°/。)產物:l3C NMR 3 14.1 5, 2 2 70 25.62, 25.77, 27.25, 29.24, 29.35, 29.55, 29.78, 3】.91, 36.43, 41.53, 54.95, 129.48, 129.85, 170.99 174 43 175.33。 · ’ 實施例12 : 4_(二甲縮醛)苯f酸(化合物14)之製備 將4-甲醯基苯甲酸(15克,1〇毫莫耳)溶解於^毫 升無水甲醇中’接著添加1QM四氟顯链之乙腈溶液(则 “ L ’ 〇.3毫莫耳)、原甲酸三曱酯(1.38 g,1〇毫莫耳)。 使反應混合物回流隔夜。移除溶劑,且將殘餘物懸浮於沸 騰己烧中’歷時3G分鐘。使混合物冷卻至室溫且藉由過遽 分離固體,獲得U克⑺%)產物:13CNMR(CD3〇D) ^ 103 201021852 53.26, 1 〇3.88, 127·75, 13〇.47, 131 14, 144 29, 169 3〇。 實施例13 :化合物8之製備 將 F獅CNH-Lys(OMe)-NH2(〇.6〇 毫莫耳)和 DMAp ⑺9.6毫克’丨·80毫莫耳)溶解於無水dcm與無水dmf 中。將混合物冷卻至0-5接著添加edc( 345 6毫克, 1.80毫莫耳)及化合物7 ( 352.8毫克,丄8〇毫莫耳)。將 反應混合物在A下於〇 Y至室溫攪拌隔夜。除去溶劑,
並使殘餘物自DMF/IPA(1G毫升毫升 > 混合㈣中# 結晶’以得到產物。 實施例14:化合物9之製備 將於6.75毫升氣仿中之化合物8(〇 46毫莫耳)以 毫升86%甲酸在室溫下處理隔夜。移除溶劑,且使殘餘物 自DCM/乙醚中再結晶兩次,得到產物。 實施例I5 :化合物1〇之製傷
將化合物6(0.30毫莫耳)溶解於1〇毫升無水dcm與 2毫升無水DMF中,接著添加化合物9 ( 1〇克,〇·2毫莫 耳)、分子篩(2克)及DIEA ( 25.8毫克,0.2毫莫耳) 將反應混合物在%下於室溫攪拌隔夜。將反應混合物過濾 並將濾液在真空中濃縮。使殘餘物自乙腈_ΙρΑ中再結晶^ 將極細固體懸浮液離心以得到產物。將該化合物用娘:處 理以除去Fmoc以得到胺。將該胺中間物用Na〇H處理以使 曱基酯水解,接著酸化’製得化合物。 實施例16 : LNA-脂質奈米粒子組成物之製備 在此實施例中,製備包封各種核酸,如含LNA之募核 104 201021852 Μ 苦酸的奈米粒子组成物。舉例而言,在i 〇毫升9 〇 %乙醇中 使陽離子脂質b化合物10、膽固酵、:DSPE-PEG與C16mPEG-腦酿胺以18:60:20:1:1之莫耳比混合(總脂質3〇微莫耳)。 將LNA募核芽酸(微莫耳)溶解於1〇毫升2〇 Tris 緩衝液(pH 7.4-7.6 )中。在加熱至37°c之後,經由雙注射 栗將兩溶液混合在一起,且隨後以2〇毫升2〇 Tris緩衝 液(300 mM NaCM,pH 7.4-7.6)稀釋該混合溶液。將混合 物在37°C下培育30分鐘且在1〇 PBS緩衝液(138 mM ❹ NaCl ’ 2·7 mM KC1,pH 7.4)中透析。在藉由透析自混合物 移除乙醇之後獲得穩定的粒子。藉由離心濃縮奈米粒子溶 液。將奈米粒子溶液轉移至15毫升離心過濾裝置(Amic〇n Ultra-15,Millipore,USA)中。在離心期間,離心速度為 3,000 rpm且溫度為4°C。在一段既定時間之後,收集濃縮 的懸浮液且藉由經由0.22 # m注射過濾器(Millex-GV, Millip〇re,USA)過濾來滅菌。 奈米粒子之直徑和聚合度分布性係在25°c下,在作為 ® 介質的水(Slgma)中,用Plus 90型粒度分析器動態光散 射儀器(Brookhaven, New York)測量。 LNA核酸之包封效率係藉由UV-VIS ( Agilent 8453 ) 測定。背景UV-vis光譜係藉由掃描溶液(其為包含pBS緩 衝鹽水( 250 #L)、甲醇(625以1〇及氣仿( 250 #L)之 混合溶液)獲得。為了測定經包封之核酸濃度,將曱醇(625 # L )及氯仿(250 # L )添加至PBS緩衝鹽水奈米粒子懸浮 液( 250 # L)中。在混合之後,獲得澄清溶液,且使此溶 105 201021852 液經超音波處理2分鐘,隨後在2 6 0 n m下測曰视、a I及先度。才艮 據方程式(Ο及(2 )計算經包封之核酸濃 又久貞載效率:
Cen ( β g/ml) A260 x OD260 單位(以 g/mL) X稀釋因子(“ 乙) 其中稀釋因子係由檢定體積(WL)除以樣品儲備液體積(13 L )而得。 包封效率(%) = [Cen/Cinitia|] Xl〇〇....... ^ 2 )
其中Cen為純化之後被包封於奈米粒子懸浮液中的核酸(亦 即LNA寡核苦酸)漠度’且Cinitia|為在形成奈米粒子懸、、參 液之前的初始核酸(LNA寡核苷酸)濃度。 各種不同奈米粒子組成物之實施例係概述於表5中 表5. 樣品 編號 奈米粒子組成物 - Oligo 1 陽離子脂質1:化合物l〇:DSPC:膽固醇:DSPE-PEG 15:15:20:40:10 Oligo-1 2 陽離子脂質1:化合物10:DSPC:膽固醇:DSPE-PEG 15:5:20:50:10 Oligo-1— 3 陽離子脂質1:化合物l〇:DSPC:膽固醇:DSPE-PEG 25:15:20:30:10 Oligo-1 Oligo-1 4 陽離子脂質1:化合物10:膽固醇:DSPE-PEG 20:47:30:3 5 陽離子脂質1:化合物10:膽固醇:DSPE-PEG 17:60:20:3 Oligo-1 6 陽離子脂質1:化合物10: DSPE-pEG 20:78:2 Oligo-1 Oligo-2 7 陽離子脂質1:化合物膽固醇:C16mPEG-腦醯胺 17:60:20:3 8 陽離子脂質1:化合物10:膽固醇:DSPE-PEG: C16mPEG- 腦醯胺 18:60:20:1:1 Oligo-2 表6. 樣品 編號 ^米粒子組成物 龚耳比 Oligo NPl 瘍離子脂質1:化合物10:膽固醇:DSPE-pEG: cl6mPEG_ 腦醯胺 18:60:20:1:1 Oligo-2 NP2 陽離子脂質1:化合物膽固醇:DSPE-PEG: C16mPEG- 腦醯胺 18:60:20:1:1 FAM-Oligo-2 106 201021852 NP3 Γ^60^20ΓΪ7Γ 實施例17··奈米粒子穩定性 奈米粒子穩定性係定義為其在邮緩衝液
隨時間保持結構完整柯夕At + 士、 L T μ 生之此力。奈米粒子之膠體穩定性俜 精由監測平均直徑隨& μ ^ 卞1罝往隨時間之變化來評估。將由表 編號ΝΡ1所製備之太半私24 τ保°口 ㈣之4粒子分散们〇福PBS緩衝液(】38 mM NaC1,2 7 mM Κ"ττ · /議KC1,ρΗ 7.4)中且儲存於4<t下 ❹ 定時間點,取約20-50 # L太乎奴早#玄泣n 曰 # L不水杻子懸洋液且以純水稀釋 至2毫升在25 C下|f由DLS測量奈米粒子大小。 實施例18 :試管内奈米粒子細胞吸收 /被包含在本文所述奈米粒子内之核酸的細胞吸收效率 係在人類癌細胞如前列腺癌細胞(15p 樣一奈米粒子係使用實施…所述=::: LNA募核*酸(〇11§。_2 )係用則標記以供榮光顯微鏡學 研究。 ❹ 奈米粒子係在15PC3細胞株中做評估。將細胞維持於 完全培養基(DMEM ,補充有1〇% FBS)中。將每孔含有 2.5XK)5個細胞之12孔板在37t下培育隔夜。以〇pti_M^^ 洗滌細胞一次且每孔添加400微升〇ρΗ·ΜΕΜ®。然後將細 胞以包封核酸(FAM-修飾OHgo 2)之樣品編號W2 (2〇〇 nM )之奈米粒子溶液或以作為對照組之不含奈米粒子之自 由核酸(裸FAM-修飾〇lig0 2)之溶液處理。將細胞在37 °C下培育24小時。將細胞以PBS洗滌五次,然後每孔以3〇〇 毫升Hoechst溶液(2毫克/毫升)染色3〇分鐘,接著以pBs 107 201021852 洗蘇5次。將細胞以預冷卻(-20°C )之70% EtOH於-2(TC ' 下固定20分鐘。在螢光顯微鏡下檢視細胞,以評估被包封 在本文所述奈米粒子内之核酸的細胞吸收效率。 實施例19 .在各種不同人類癌細胞中奈米粒子對 mRNA下調之試管内功效 本文所述之奈米粒子之功效係在各種不同癌細胞,例 如人類表皮樣癌細胞(A43 1 )、人類胃癌細胞(N87 )、人 類肺癌細胞(A549、HCC827、Η1 58 1 )、人類前列腺癌細 胞(15PC3、LNCaP、PC3、CWR22、DU145)、人類乳癌 ❹ 細胞(MCF7、SKBR3)、結腸癌細胞(SW48〇)、胰腺癌 細胞(B X P C 3 )及黑色素瘤(5 18 A 2 )中評估。將細胞用下 列之一處理:包封反義ErbB3寡核苷酸之奈米粒子(樣品 NP 1 )或空安慰劑奈米粒子(樣品編號NP3 )。奈米粒子各 者對ErbB3表現下調之試管内功效係藉由實施例3中所述 之程序測量。。 實施例20.活體内對標靶基因下調之作用在人類前列腺 癌異種移植小鼠模型之腫瘤及肝中奈米粒子對mRNA下調 ® 之作用 本文所述奈米粒子之活體内功效係在人類前列腺癌異 種移植之小鼠中評估。藉由皮下注射5x 106個細胞/小鼠至 右副腰窩中’在裸小鼠中形成15PC3人類前列腺腫瘤。當 腫瘤達到1 00 mm3的平均體積時,將小鼠隨機分組,每組5 隻小氣。將每組的小鼠以包封反義ErbB3寡核苷酸之奈米 粒子(樣品NP1 )或對應的裸募核苷酸(〇lig〇 2)處理。 108 201021852 ' 奈米粒子係靜脈内(i · v ) r乂 1 ς客* / v & •v.)以丨5毫克/公斤/劑、5毫克/公斤 /劑、1毫克/公斤/劑或〇 s本古/八a ⑴X υ·5毫克/公斤/劑以q3dx4 (或q3dx 10 )給予。劑量以奈米粒 下卞T之养核苷酸之量計。裸寡核 芽酸係腹膜内以30毫克/公斤,或靜脈㈣25毫克/公斤/ 劑或45毫克/公斤/劑以q3dx4給予丨2天。在最終給劑之後 一十四小時處死小鼠。自小鼠收集血漿樣品且儲存於_2〇。匸 下亦自]鼠收集腫瘤及肝樣品。就腫瘤及肝中之mRNa KD 分析樣品。觀察這些動物的存活者。 G 【圖式簡單說明】 圖1示意性說明如實施例6-1 1中所述製備化合物6之 反應流程。 圖2示意性說明如實施例丨2_丨5中所述製備化合物t 〇 之反應流程。 【主要元件符號說明】 無 ❹ 109 201021852 * 序列表 〈110>安龍製藥公司 iS^(Hong ZHAO) 顏威利(Weili YAN) 史連軍(Lianjun SHI) 武德春(Dechun WU) 洛伊森麥克森(Maksim ROYZEN) 〈120〉用於核酸遞送系統的可釋放融合性脂質
<130> 213.1310-PCT <140〉 <141> <150〉 61/115,378 <151〉 2008-11-17 ® <160> 24 〈170> Patentln第3. 5版 <210〉 1 <211〉 16 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成寡核普酸 <400> 1 ctcaatccat ggcagc
<210〉 2 <211〉 21 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223〉組合DNA/RNA分子描述: 合成寡核穿酸 <220> <221〉雜項特徵 <222> (1) (19)
<223> RNA <400> 2 gcaugcggcc ucuguuugat t <210〉 3 <211〉 21
201021852 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223〉組合DNA/RNA分子描述: 合成寡核¥酸 <220> <221〉雜項特徵 <222> (1) (19)
<223> RNA <400〉 3 ucaaacagag gccgcaugct t <210> 4 <211> 19 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉人工序列描述: 合成寡核每酸 <400〉 4 tctcccagcg tgcgcccat <210> 5 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成寡核笼酸 <400> 5 tggcaagcat cctgta <210〉 6 <211> 16 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 〈223>人工序列描述: 合成寡核替酸 <400〉 6 tagcctgtca cttctc <210> 7 <211〉 16 201021852 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成寡核穿酸 <400> 7 gctccagaca tcactc 16 <210> 8 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成寡核¥酸
<400> 8 16 agccattcat tccacc <210> 9 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成寡核苦酸 <400〉 9 ttattgtgca tctcag 16 <210> 10 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉人工序列描述: 合成寡核苹酸 <400> 10 cgtgtatttc cgcgtg 16 <210> 11 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人工序列 第3頁 <220> 201021852 <223〉人工序列描述: 合成寡核苷酸 <400> 11 ggcacagcca gtggcg <210> 12 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成寡核苷酸 <400> 12 cccaaggcac tgcaga <210> 13 <211> 16 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉人工序列描述: 合成寡核芬酸 <400> 13 accaagtttc ttcagc <210> 14 <211> 16 <212〉 DNA 〈213>人工序列 <220〉 <223〉人工序列描述: 合成寡核脊酸 <400> 14 ctccttggtg cagtct <210> 15 <211> 15 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成寡核苷酸 <400〉 15 tcagattcaa accca 201021852 <210> 16 <211> 16 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成寡核登酸 <400> 16 gtgttctaca ccatta 16 <210> 17 <211> 12 <212〉 PRT <213〉人工序列
<220〉 <223〉人工序列描述: 合成ΐ太 <400> 17
Cys Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg 1 5 10 <210> 18 <211> 10 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成ί太 <400> 18
Cys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 〈210〉 19 〈211〉 23 <212〉 PRT <213> 人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成ί太 <400> 19
Cys Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg Tyr Gly Arg Lys 15 10 15
Lys Arg Arg Gin Arg Arg Arg 20 201021852 歹 序 T工 OR、 2 4 p / <210〉 <211> <212〉 <213> <220> <223〉人工序列描述: 合成k <400> 20 Arg Gly Asp Cys <210> 21 <211> 5 <212〉 PRT 〈213> 人工序列 <220〉 <223〉人工序列描述: 合成I太 <400> 21
Arg Gly Asp Phe Cys > > > > ο ,—12 3 n 11 I*-11 2 2 2 2 < < < < 列 序T工 2 R、 2 5 p / <220> <223〉人工序列描述: 合成ί太 <400> 22
Arg Gly Asp Phe Lys > > > > 0 12 3 11 11 11 1x 2 2 22 < < < < 列 序 ΤΗ 3 9 R IV OAW 1A DI —Ay <220> <223〉人工序列描述: 合成肽 <400〉 23
Cys Tyr Gly Arg Lys 201021852 . Gly Asp Ser <210> 24 <211〉 9 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列描述: 合成肤 <400> 24
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 第7頁

Claims (1)

  1. 201021852 • 七、申請專利範圍: l一種式⑴化合物, R-(LOa-Μ-(L2)b-Q 其中 R為水溶性電中性或含兩性離子之部分; Li·2為獨立選擇之雙官能鍵聯基; Μ為含亞胺之部分; Q為經取代或未經取代之飽和或不飽和含C4-30之部 ❹ 分; (a) 為零或正整數;且 (b) 為零或正整數。 2·如申睛專利範圍第1項之化合物,其中Μ為-NeCR,-或CR1=N-,其中Rl為氫、Ci 6烷基、c3_8支鏈烷基、c3.8 環烧基、經取代之C〗.6烷基、經取代之c3_8環烷基、芳基 及經取代之芳基。 3. 如申請專利範圍第丨項之化合物,其中含兩性離子之 ® 部分包括胺及酸’其中該酸性部分位置與胺距離三至八個 原子。 4. 如申請專利範圍第3項之化合物,其中酸為羧酸、磺 酸或磷酸。 5. 如申請專利範圍第3項之化合物,其中含兩性離子之 部分為胺基酸之兩性離子形式。 6·如申請專利範圍第丨項之化合物,其中Q具有式(Ia) 結構: 201021852 一(Yl)c_(CR2R3)d
    f —Q2 q3 其中 Yl和Y,1獨立地為〇、S或nr4 ; (c) 為0或1 ; (d) 為〇或正整數; (e) 為0或1 ; X為C、n或p ; Q】為Η、cK3烧基、NR5、OH或 —(Ln)fi—(Y11)
    Q2 為 Η、Cl 3 烷基、NR6、〇H 或 屢 \ xh2 、( = 〇)、Η、Cw 烷基、NR7、OH -(«-13)β —(Y13)g3
    Q3不為孤電子對或(=〇) Q3為孤電子對;及 ~C-12)f2~~(丫12)92. Q3為孤電子對 Q3 為(=〇)且(e)為 〇, 其限制條件為 ⑴當x為c時, 當X為N時, (iii)當X為P時, 其中 12及L13為獨立選擇之雙 Υ’!2、Y13 及 γ· Ll1、乙12 及 L13
    官能間隔基; U獨立地為〇、 201021852 nr8 ; Rn'Ru及Ru獨立地為經取代或未經取代之飽和 或不飽和C4.30 ; (fi)' (f2)及(η)獨立地為〇或i ; (g1)、(g2)及(g3)獨立地為〇或丨;且 (hi)、(h2)及(h3)獨立地為〇或】; R2-3獨立地選自於下列所組成之群組:氮、經基、胺、 ❹ ❹ 經取代之胺U基、CM基、h炔基、^支㈣ 基、C3·8環烧基、經取代之k燒基、經取代之c2_6烯基、 經取代之C2-6炔基、、絰取代之C3 8魏基、芳基、經取代 之芳基、㈣基、經取代之雜芳基、C16雜烧基及經取代之 C 1-6雜烷基;以及 R4-8獨立地選自於下列所組成之群組:[cl-6烧基、 c2-6烯基、C2.6炔基、C3.19支鏈院基、c3 8環炫基、經取代 之C】.6炫基、經取代之C2 6歸基、經取代之c2.6快基、經 取代之c3-8環烧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取 代之雜芳基、Cu雜烧基及經取代之c“雜炫基, 其限制條件為Q包括Rli、Ri2和U之至少—者或 兩者。 7.如申4專利|&圍第6項之化合物,其具有式(叫或 (rb): R- -(L1)a-N=CR1-(L2)b— i1 -x—q2 〇3 (lb) 201021852 或 Y, °1 R—(LnJa—CR^N—(L2)b—(丫丄 一 (CR2R3)d-~^£·)^—卞一〇2 Q3 ° 8. 如申請專利範圍第6項之化合物,其中Ql-3獨立地包 括選自下列之基團:C12-22烷基、C12-22烯基、Cl2·22烧氧基、 月桂醯基(c12)、肉豆蔻醯基(Cl4)、棕櫚醯基(Cl6)、 硬脂醢基(c18)、油醯基(Cl8)及芥子醯暴(C22);飽 和或不飽和C12烷氧基、c14烷氧基、(:16烷氧基、Cl8烧氧 基、C2G烷氧基及C22烷氧基;及飽和或不飽和c 12烧基、 c14烷基、C16烷基、c18烷基、C2G烷基及C22炫基。 9. 如申請專利範圍第6項之化合物,其中Ln、Ll2及 L!3係獨立地選自由下列所組成之群組: -(CR31R32)ql-;及 Y26(CR31R32)ql-, 其中: Y26 為 Ο、NR33 或 S ; K·31 -32係獨立地選自由下列所組成之群組:氫、經基、 烷基、Cm支鏈烷基、c3_8環烷基、經取代之Cu烷基、 經取代之C3·8環烷基、(^_6雜烷基、經取代之C!-6雜烷基、 Ci-6烷氧基、苯氧基及cN6雜烷氧基; R33係選自由下列所組成之群組:氫、(:卜6烷基、c3_i2 支鏈烷基、C:3·8環烷基、經取代之c!_6烷基、經取代之C 3-8 環燒基、C!·6雜烷基、經取代之(^.6雜烷基、Ci.6烷氧基、 笨氧基及C!_6雜烷氧基;且 201021852 (ql)為零或正整數。 10. 如申請專利範圍第8項之化合物,其中Ln、L12及 L13係獨立地選自由下列所組成之群組:-CH2-、-(CH2)2-、 -(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5_、-(CH2)6-、-〇(CH2)2-、 -〇(CH2)3_、-〇(CH2)4-、-〇(CH2)5-、-〇(CH2)6-及 CH(OH)-。 11. 如申請專利範圍第1項之化合物,其中Ll係選自由 下列所組成之群組: -(CR21R22),l-[C(=yi6)]a3-' -(CR2lR22)tlYl7-(CR23R24)t2_(Yl8)a2-[C(=Yi6)]a3-, ❿ -(CR21R22CR23R24Y 17)tl-[C(=Y 16)]a3" * -(CR2lR22CR23R24Y】7)tl(CR25R26)t4-(Yl8)a2-[C(=Yl6)]a3-, -[(CR2lR22CR23R24)t2Yl7]t3(CR25R26)t4-(Yl8)a2-[C(=Yi6)]a3-, -(CR2lR22)tl-[(CR23R24)t2Yl7]t3(CR25R26)t4-(Yl8)a2-[C(=Y16)]a3-> -(CR2lR22)tl(Yl7)a2[C(=Yl6)]a3(CR23R24)a-> -(CR21R22)tl(Y]7)a2[C(=Y16)]a3Yl4(CR23R24)a- > -(CR2lR22)U(Yl7)a2[C(=Yl6)]a3(CR23R24)t2_Yl5-(CR23R24)t3- ’ -(CR2iR22)tl(Yl7)a2[C(=Yl6)]a3Yl4(CR23R24)t2-Yl5-(CR23R24)t3·, -(CR2lR22)tl(Yl7)a2[C(=Yl6)]a3(CR23R24CR25R26Yl9)t2(CR27CR28)t3- ’ -(CR2lR22)tl(Yl7)a2[C(=Yl6)]a3Yl4(CR23R24CR25R26Yl9)t2(CR2*7CR28)t3- ’ 及
    (CR25R26X3· -(CR21R22)tl[C(=Y16)]a3Y14(CR23R24)t2 其中: Y16 為 〇、NR28 或 S ; Y14.15及Y17.丨9獨立地為o、NR29或S ; 201021852 r21_27獨立地選自由下列所組成之群組:氫、羥基、胺、 Ci_6烧基、C3-I2支鍵烧基、C3-8環烧基、經取代之Ci-6烧基、 經取代之C3_8環烷基、芳基、經取代之芳基、芳烷基、Ci-6 雜烷基、經取代之Cu雜烷基、Cw烷氧基、苯氧基及Cw 雜烷氧基;且 R28-29獨立地選自由下列所組成之群組:氫、Cw烷基、 C3-I2支鍵烧基、C3-8環烧基、經取代之Ci-6烧基、經取代 之C3_8環烷基、芳基、經取代之芳基、芳烷基、Cw雜烷基、 經取代之Cw雜烷基、Cw烷氧基、苯氧基及Cw雜烷氧基; (tl)、(t2)、(t3)及(t4)獨立地為零或正整數;且 (a2)及(a3)獨立地為零或1。 12.如申請專利範圍第1項之化合物,其中係選自由 下列所組成之群組: -CH2- > -(CH2)2- > -(CH2)3- ,-(CH2)4_ ,-(CH2)5- ,-(CH2)6_ ,-NH(CH2)-, -CH(NH2)CH2- > -(ch2)4-c(=o)-,-(ch2)5-c(=o)-,-(ch2)6-c(=o)-, -CH2CH20-CH20-C(=0)-, -(CH2CH20)2-CH20-C(=0)-, -(CH2CH20)3-CH20-C(=0)-, -(CH2CH20)2-C(=0)-, -ch2ch2o-ch2ch2nh-c(=o)-, -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-c(=o)·, -ch2-o-ch2ch2o-ch2ch2nh-c(=o)-, -ch2-o-(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-c(=o)-, 201021852 -ch2-o-ch2ch2o-ch2c(=o)-, -ch2-o-(ch2ch2o)2-ch2c(=o)-, -(ch2)4-c(=o)nh-,-(ch2)5-c(=o)nh-, -(ch2)6-c(=o)nh-, -CH2CH20-CH20-C(=0)-NH---(CH2CH20)2-CH20-C(=0)-NH- > -(ch2ch2o)3-ch2o-c(=o)-nh-, -(CH2CH20)2-C(=0)-NH--
    -ch2ch2o-ch2ch2nh-c(=o)-nh-, -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-c(=o)-nh-, -ch2-o-ch2ch2o-ch2ch2nh-c(=o)-nh-, -ch2-〇-(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-c(=o)-nh-, -ch2-o-ch2ch2o-ch2c(=o)-nh-, -ch2-o-(ch2ch2o)2-ch2c(=o)-nh-, -(CH2CH20)2-,-CH2CH20-CH20-, -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh -, -(ch2ch2o)3-ch2ch2nh -, -CH2CH20-CH2CH2NH- > -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh- > -CH2-0-CH2CH20-CH2CH2NH- > -ch2-o-(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-, -CH2-0-CH2CH20- > -ch2-o-(ch2ch2o)2-, 201021852
    -C(=0)NH(CH2)2- > -CH2C(=0)NH(CH2)2- > -c(=o)nh(ch2)3-,-CH2C(=0)NH(CH2)3-, -C(=0)NH(CH2)4-,-ch2c(=o)nh(ch2)4-, -c(=o)nh(ch2)5-,-CH2C(=0)NH(CH2)5-, -C(=0)NH(CH2)6- ' -CH2C(=0)NH(CH2)6- > -c(=o)o(ch2)2-,-CH2C(=0)0(CH2)2-, -C(=0)0(CH2)3-,-ch2c(=o)o(ch2)3-, -c(=o)o(ch2)4-,-CH2C(=0)0(CH2)4_, -c(=o)o(ch2)5-,-CH2C(=0)0(CH2)5-, -c(=o)o(ch2)6-,-CH2C(=0)0(CH2)6-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)2-, -(CH2CH2)2NHC(=0)NH(CH2)3-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)4-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)5-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)6- > -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)2-, _(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)3-, -(CH2CH2)2NHC(=0)0(CH2)4- ’ -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)5-, -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)6-, 201021852 -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)2-, -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)3-, -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)4-, -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)5-,及 -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)6-。 13.如申請專利範圍第1項之化合物,其中L2係選自由 下列所組成之群組: -(CR,21R,22)n-[C(=Y’16)]a,3(CR,27CR,28)t,2 -,
    -(CR,21R522)nY,14-(CR523R,24V2-(Y,15)a'2-[C(=Y,16)]a.3(CR527CR,28)f3-, -(CR,2lR,22CR,23R,24Y,14),-l-[C(=Y,i6)]a-3(CR,27CR,28)f2 ', -(CR521R522CR;23R524Y,14)t>l(CR525R,26)t>2-(Y,15)a-2-[C(=Y,i6)]a-3(CR,27CR528)f3-, -[(CR52lR,22CR523R,24)f2Y,I4]fl(CR,25R,26)f2-(Y,15)a-2-[C(=Y,16)]a'3(CR,27CR528)«-, -(CR521R)22)t>1-[(CR,23R,24)f2Y,14]f2(CR,25R,26)f3-(Y,15)a'2-[C(=Y,16)]a'3(CR,27CR528)f4- -(CR’21R’22)n(Y’14)a,2[C(=Y’16)]a,3(CR’23R’24)t,2-, (Y514)a'2[C(=Y5i6)]a'3Y,15(CR523R,24)n-, -(CR521R,22),.1(Y,14)a'2[C(=Y,l6)]a'3Y,14(CR523R,24)f2-Y,15-(CR523R,24)t>3-, -(CR521R522>l(Y514)a'2[C(=Y516)]a'3(CR,23R,24CR525R,26Y,l5)f, -(CR’hRiVKY’HVdCeYWkY’KCRbRiCRbRiY’ytYCRSCR^h、 R'27 -(CR’2iR'22)t_l [C(=Yi 6)]a.3 Y'14(CR’23Ri24)t.2 ~~\ ^~(CR'2sR'26)t,3· 其中: Y’16 為 o、nr、8 或 s ; Υ·14-15 及 Y'17 獨立地為 〇、NRi29 或 S ; 9 201021852 R'2l-27係獨立地選自由下列所組成之群組·氣經基 , 胺、Cu烷基、Chu支鏈烷基、C:3·8環烷基、經取代之c 烷基、經取代之C3·8環烷基、芳基、經取代之芳基芳产 基、C!_6雜烷基、經取代之Ci.6雜烷基、Ci.6燒氧基、苯氧 基及Cw雜烷氧基; R·28-29係獨立地選自由下列所組成之群組:氫、Ci 6燒 基、Cs-u支鏈烷基、C3·8環烷基、經取代之Cl_6烷基、經 取代之C3·8環烷基、芳基、經取代之芳基、芳烷基、Ci 6 雜燒基、經取代之Ci _6雜炫基、(^_6烧氧基、苯氧基及❹ 雜烷氧基; (fl)、(t’2)、(f3)及(t'4)獨立地為零或正整數;且 (a'2)和(a'3)獨立地為零或1。 14·如申請專利範圍第1項之化合物,其中L2係選自由 下列所組成之群組: -CH2-,-(CH2)2-,-(CH2)3-,-(CH2)4-,-(CH2)5-,-(CH2)6-,-NH(CH2)-, -CH(NH2)CH2- * -0(CH2)2- ’ _C(=0)0(CH2)3 - , -C(=0)NH(CH2)3 -, ® -C(=0)(CH2)2-,_c(=o)(ch2)3-, -ch2-c(=o)-o(ch2)3-, -CH2-C(=0)-NH(CH2)3---ch2-oc(=o)-o(ch2)3-, -ch2-oc(=o)-nh(ch2)3-, -(ch2)2-c(=o)-o(ch2)3·, -(CH2)2-C(=0)-NH(CH2)3-, 10 201021852 -CH2C(=0)0(CH2)2-0-(CH2)2- > -ch2c(=o)nh(ch2)2-o-(ch2)2-, -(CH2)2C(=0)0(CH2)2-0-(CH2)2-, -(ch2)2c(=o)nh(ch2)2-o-(ch2)2_ , -CH2C(=0)0(CH2CH2〇)2CH2CH2-, <ch2)2c(=o)o(ch2ch2o)2ch2ch2_ , -(CH2CH20)2- > -CH2CH2O-CH2O-. -(ch2ch2o)2-ch2ch2nh _, -(ch2ch2o)3-ch2ch2nh -,
    -CH2CH20-CH2CH2NH- > -CH2-0-CH2CH20-CH2CH2NH- > -ch2-o-(ch2ch2o)2-ch2ch2nh-, -CH2-0-CH2CH20- , -CH2-0-(CH2CH2〇)2-,
    -(ch2)2nhc(=o)-(ch2ch2o)2-,
    -C(=0)NH(CH2)2- -C(=0)NH(CH2)3- -c(=o)nh(ch2)4- -C(=0)NH(CH2)5- -C(=0)NH(CH2)6- -c(=o)o(ch2)2-, -c(=o)o(ch2)3-, ,-CH2C(=0)NH(CH2)2-, ,-CH2C(=0)NH(CH2)3-, ,-CH2C(=0)NH(CH2)4- > ,-ch2c(=o)nh(ch2)5-, ,-CH2C(=0)NH(CH2)6-, -CH2C(=0)0(CH2)2-, -CH2C(=0)0(CH2)3_ , 11 201021852 -C(=0)0(CH2)4-,-CH2C(=0)0(CH2)4-, -c(=o)o(ch2)5-,-CH2C(=0)0(CH2)5-, -C(=0)0(CH2)6-,-ch2c(=o)o(ch2)6- ’ -(CH2CH2)2NHC(=0)NH(CH2)2-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)3-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)4-, -(ch2ch2)2nhc(=o)nh(ch2)5-, -(CH2CH2)2NHC(=0)NH(CH2)6-,
    -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)2-, -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)3-, -(CH2CH2)2NHC(=0)0(CH2)4-, -(ch2ch2)2nhc(=o)o(ch2)5-, -(CH2CH2)2NHC(=0)0(CH2)6-,
    -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)2-, -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)3-, -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)4- > -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)5-,及 -(ch2ch2)2nhc(=o)(ch2)6-。 15.如申請專利範圍第8項之化合物,其中Q係選自由 下列所組成之群組: 0 II -(CH2)d—C- o II •NH—0—R-ti ο II (CH2)fn——O-C—R11 •0H—NH—C—R12 IIo •O—(CH2)d—CH—O—C—R12o 12 201021852 i? jCH2)f11 - 0—R” (CH2)d—CH-0—R12 HO. ?H-R11 '〇—(CH2)d-CH-f . o •(CH2)d一N: 、(CH2)f22.Y12—C--R12 O /(CH2)f21-C- -C—N (CH2)f22—c-R12 o
    (CH2)fn-〇-Rn (CH2)fi2〇-R12 (CH2)fi3—〇-R13 〜Yr ,(CH2)fir〇—c—r1 O (CH2)fi2'0-R12 O -R 11 —Yi -Yi V 〇 y h*^*c-r (CH2)"3-〇—6—R13 , 11 Y 12' •R 12 12 , O 一C-R II —C
    11 9 (CH2)f12—Y12—C-,及 Ύγ 11 其中: (CH2)f12—c-r12, Yi 為 〇、s 或 nr31 ;
    Ru、R12 及 飽和c4.3Q; Ru獨立料經取代或未絲狀飽和或不 Rsl為氫、甲基或乙基; (d)為〇或正整數; (fll)、(fl2)及(f13)獨立地為 〇、工、2、3 或[ (f21)及(f22)獨立地為i、2、3或4。 ’ 16·如申請專利範圍第1項之化合物, 下列所組成之群組: 、選自由 13 201021852 Ο II CH2-ΝΗ—C—R” II I —C-0H—NH—C—Ri2II o o II CH2-0—C—R11 •O—CH2 一 CH—O—C一Ri2II o O II A (CH2)4-NH-C—Rn II I -C-CH-NH-C—R12II O O-R” -CH2—CH—O—R12 HO, 、CH- •R 11 ——0—CH2—CH-NH-C—R12 0 , o II ,(CH2)f2i—〇—C-R 11 O Η II ,(CH2)f21—N——C- •R 11 -CH2—N、 -CH2—N、 O II > •C—N. (CH2)f22—Ο—I-R12 O o II ,(CH2)f2i-C-R11 H 、(CH2)f22-N-C-R12 O
    (CH2)f22—C-R12 〇 (CH2)f11-0-R11 (CH2)fi2*〇-R12 (CH2)f13—o-R13 〇 II
    (CH2)f11-0-R11 (CH2)fi2*〇-R12 '(CH2)f13—0-R13
    (CH2)fi2-〇-C—R12 (CH2)fir〇—C—R11
    (CH2)f13-〇—c—r13 -〇-y •R q HN- W -NH—P、 11 -r12 -R” O (CH2)fir〇-C—R11 (CH2)fi2'〇-C—R12 (CH2)f13'〇—C—R13V° Rl1 -NH——P\ 〇—-R12 'NH- O HN- V 'R11 "Rl2 Μ' •R 12 14 201021852
    ο HN--o-K 〇 II —c- —〇- 及 •R 11 K' •R O CW/ —O—P、 o II c 一 R11 12 1 II C-R 12 O 〇 HN—C-R^—〇—p o XN——C-R12 O II -C-R” V -NH—P\ 9 〇-C-R12
    U 〇 H ii N—C- -Ri (CH2)2—N- -C—R 11 H 9 、(CH2)2—N—C—R12 O ,(CH2)f11—C—R” O 、(CH2)f12—C—R12 H 9 (CH2)4—N—C一R12 —N
    -S
    11 O (ch2)2—c- :c- -R 12 其中Rll-13獨立地為相同或不同之Ci 2-22飽和或不飽和 脂族烴基;
    (fll)、(fl2)及(fl3)獨立地為 0、1、2、3 或 4;且 (f21)及(f22)獨立地為1、2、3或4。 17·如申請專利範圍第1項之化合物,其係選自由下列 所組成之群組:
    15 201021852
    Ο
    16 201021852
    Ο
    Ο
    Θ 馨 ο
    ο
    18. —種奈米粒子組成物,其包含如申請專利範圍第1 項之式(I)化合物。 19. 如申請專利範圍第18項之奈米粒子組成物,其中式 (I)化合物為:
    17 201021852
    20.如申請專利範圍第18項之奈米粒子組成物,其另外 包含陽離子脂質及PEG脂質。 2 1.如申請專利範圍第20項之奈米粒子組成物,其中該 陽離子脂質為
    nh2 。 22. 如申請專利範圍第20項之奈米粒子組成物,其中該 PEG脂質係選自由PEG-DSPE、PEG-二棕櫚醯基甘醯胺、 C16mPEG-腦醯胺及其組合所組成之群組。 23. 如申請專利範圍第20項之奈米粒子組成物,其另外 包含膽固醇。 23. 如申請專利範圍第20項之奈米粒子組成物,其中陽 離子脂質之莫耳比係在存在於奈米粒子組成物中之總脂質 之約10%至約99.9%的範圍内。 24. 如申請專利範圍第20項之奈米粒子組成物,其中陽 離子脂質之莫耳比係在存在於奈米粒子組成物中之總脂質 之約15%至約25%的範圍内。 2 5.如申請專利範圍第23項之奈米粒子組成物,其中陽 離子脂質、包括式(I)化合物之融合性脂質、PEG脂質及膽 18 201021852 固醇之莫耳比為存在於奈米粒子組成物中之總脂質之約 1 5-25%:20-780/〇:0-50〇/〇:2- 10〇/〇。 26. —種奈米粒子,其包含被包封於如申請專利範圍第 1 8項之奈米粒子組成物内的核酸。 27. 如申請專利範圍第26項之奈米粒子’其中該核酸為 單股或雙股寡核苷酸。 28. 如申請專利範圍第26項之奈米粒子,其中該核酸係 選自由下列所組成之群組:脫氧核苷酸、核糖核苷酸、鎖 魯核酸(LNA )、短干擾 RNA ( siRNA )、微 RNA ( miRNA )、 適體(aptamer)、肽核酸(PNA )、二胺基磷酸酯N-嗎啉 基寡核苷酸(PMO )、三環-DNA、雙股寡核苷酸(誘餌 〇DN )、催化性RNA ( RNAi )、適體、鏡像異構體 (spiegelmer) 、CpG寡聚物及其組合。 29. 如申請專利範圍第27項之奈米粒子,其中該寡核苦 酸為反義寡核苷酸。 φ 3〇.如申請專利範圍第27項之奈米粒子,其中該募核苷 酸具有磷酸二酯或硫代磷酸酯鍵聯及其組合。 31.如申請專利範圍第27項之奈米粒子,其中該寡核芽 酸包括LNA。 32. 如申請專利範圍帛27帛之奈米粒子,纟中該寡㈣ 酸具有約8至50個核苷酸。 33. 如申請專利議27項之奈米粒子,其中該寡核壬 抑制致癌基因、促血管生成㈣基因·、促細胞增殖路相 基因、病毒感染因子基因及促炎性路徑基因之表現。 201021852 34.如申請專利範圍第27項之奈米粒子,其中該募核苷 酸係選自由下列所組成之群組··反義bcl-2募核苷酸、反義 HIF-1 α募核普酸、反義存活素(survivin )寡核苷酸、反義 ErbB3募核苷酸、反義PIK3CA寡核苷睃、反義HSP27募 核苷酸、反義雄激素受體寡核苷酸、反義Gli2寡核苷酸及 反義召-索烴素(冷-catenin )寡核苷酸。 3 5.如申請專利範圍第27項之奈米粒子,其中該寡核苷 酸包含八個或以上如SEQ ID NO:卜SEQ ID NO 2及3、SEQ
    ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、 SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO·· 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 16中所示之連續核苷酸,且各核 酸為天然存在或經修飾之核酸。 3 6.如申請專利範圍第26項之奈米粒子,其中該核酸與 式(I)化合物之電荷比在約^0至約之範圍内。
    37.如申請專利範圍第26項之奈米粒子,其中該奈米粒 子具有範圍從約50 nm至約150 nm之大小。 38.—種治療哺乳動物之疾病的方法,其包括將如申 專利範圍第26項之奈米粒子投予有需要之哺乳動物。 39·-種將寡核香酸引人細胞中之方法,其包括使細 與如申請專利範圍第26項之奈米粒子接觸。 4〇·—種抑制人類細胞或組織之基因表現的方法其 括使人類細胞或組織與如中請專利範圍第%項之奈米粒 接觸 20 201021852 4 1.如申凊專利範圍第40項之方法’其中該細胞或組織 為癌細胞或組織。 42.~種下調哺乳動物之基因表現的方法,其包括將有 =如申請專利範圍第26項之奈米粒子投予有需要之哺 種抑制癌細胞生長或增殖之方法,其包括使癌細 與如申請專利範圍第26項之奈米粒子接觸。 44_如申請專利範圍第43項之方 抗癌劑。 万法,其進一步包括投予 八、圖式: (如次頁)
    21
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