TW200817439A - PTH receptor modulators and uses thereof - Google Patents

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TW200817439A
TW200817439A TW096133901A TW96133901A TW200817439A TW 200817439 A TW200817439 A TW 200817439A TW 096133901 A TW096133901 A TW 096133901A TW 96133901 A TW96133901 A TW 96133901A TW 200817439 A TW200817439 A TW 200817439A
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Taiwan
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leu
compound
mpeg
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arg
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TW096133901A
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Patricia Lea Brown-Augsburger
Wayne David Kohn
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Lilly Co Eli
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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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    • C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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Description

200817439 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於副甲狀腺素受體（PTHR)調節劑化合物及其 製造及使用方法。 【先前技術】 諸如骨質疏鬆症之骨退化疾病發生於大部分高齡成年人 群中。骨質疏鬆症涵蓋一組複雜病症，其表示存在骨折之 主要風險及對健康照護系統構成沉重負擔。關於治療骨質 疏鬆症之醫療照護，每年花費數十億美元。臨床上，骨質 疏鬆症之特徵為減少骨量，降低骨礦物質密度（BMD)及骨 礦物質含量（BMC)，且損失骨骼架構，從而導致降低骨強 度及增加骨折風險。 雖然包括抑鈣素、雙膦酸鹽、雌激素及SERM之大量抗 吸收劑預防進一步骨質流失，但一旦骨質已經流失，其並 不會重建骨骼。第一種經FDA認可用於治療骨質疏鬆症之 骨路構成同化劑（anabolic bone building agent)為人類 PTH(l-34)，亦稱為特立帕肽（teriparatide)，其以商標名稱 FORTEO<s>(Eli Lilly and Company，Indianapolis，IN)市 售。吾人認為PTH或PTH(l-34)由經由（1)腺苷酸環化酶及 蛋白激酶A及（2)磷脂酶C及蛋白激酶C之兩種細胞内信號轉 導路徑之受體-介導活性來發揮效應。在具有高骨折風險 之骨質疏鬆患者體内，ΡΤΗ(1-34)構成骨量，恢復骨骼架 構且降低椎骨及非椎骨骨折之風險（R. Neer，NEJM， 344:1434，2001)。作為肽產物，PTH(1-34)需每日經皮下 124252.doc 200817439 注射。國際公告號W02004/060386揭示包含引起比ΡΤΗ(1-34)更大之高鈣血性反應之媒劑的多種PTH/PTHrP調節劑。 仍需要新穎、治療性PTH類似物，其證實了如增加的骨 礦物質含量（BMC)及/或骨強度所反映之骨骼構成功效，同 時較佳維持其高鈣血效應類似於或小於當前PTH(1-34)治 療劑之高約血效應，且與PTH( 1 -34)相比要求更低頻率之 投藥。本發明化合物滿足該等需要且提供相關優勢。 【發明内容】 本發明之聚乙二醇化化合物為具有選自由以下各序列組 成之群的序列之化合物： a)Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Met Glu Arg
His Asn Phe-NH2 (SEQ ID NO:l)， b)Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Gin Arg Gly Arg His Leu Ala Ser Nle Glu Arg
NH2(SEQ ID NO:2)， 124252.doc 200817439 c)Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Met Glu Arg
Leu Leu Gin Asp Val
Val Glu Trp Leu Arg His Asn Phe-NH2 (SEQ ID NO:3)，
d)Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Asn Leu Gly Arg His
Leu Ala Ser Nle Glu Arg
mPEG
Val Glu Trp Leu Arg His Asn Phe-NH2
Leu Leu Gin Asp Val (SEQ ID NO:4)，及
e)Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Gin Arg Gly Arg His Leu Ala Ser Nle Glu Arg
Leu Leu Gin Glu Val
Val Glu Trp Leu Arg
His Gin Phe-NH2 (SEQ ID NO:5);其中mPEG為平均分子量為1500至5500道 爾頓，較佳約2000至5000道爾頓’更佳約2000道爾頓之單 甲氧基-聚乙二醇；或其醫藥學上可接受之鹽。 124252.doc 200817439 在一較佳實施例中，本發明提供具有以下序列之化合 物：
Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Met Glu Arg
Val Glu Trp Leu Arg
Leu Leu Gin Asp Val
His Asn Phe-NH2 (SEQ ID NO:l)，其中mPEG為平均分子量為1500至5500道 爾頓，較佳約2000至5000道爾頓，更佳約20⑻道爾頓之單 甲氧基-聚乙二醇；或其醫藥學上可接受之鹽。 在另一較佳實施例中，本發明提供具有以下序列之化合 物：
Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Asn Leu Gly Arg His
Leu Ala Ser Nle Glu Arg
,X^mpEG
I
Leu Leu Gin Asp Val
His Asn Phe-NH2 (SEQIDNO:4)，其中mPEG為平均分子量為1500至5500道 爾頓，較佳約2000至5000道爾頓，更佳約2000道爾頓之單 曱氧基-聚乙二醇；或其醫藥學上可接受之鹽。 在一實施例中，本發明提供具有以下序列之化合物： 124252.doc 200817439
Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Xaa8 His Asn Leu Gly Arg His
Leu Ala Ser Xaa!8 Glu Arg
His Asn Phe-NH2(SEQ ID NO:6);其中 乂&&8及又犯18為
Met，或Xaa8&Xaa!^ Nle ;且其中mPEG為平均分子量為 (、 1500至5500道爾頓，較佳約2000至5000道爾頓，更佳約 2000道爾頓之單甲氧基-聚乙二醇；或其醫藥學上可接受 之鹽。 在一實施例中，本發明提供具有選自由以下各序列組成 之群的序列之中間體： a)Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His Asn Phe(SEQ ID NO:8)， i , b)Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Gin Arg Gly Arg His
Leu Ala Ser Nle Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Glu Val(SEQ ID NO:9)， c) Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His Asn Phe(SEQ ID NO:10)， d) Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Nle Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu 124252.doc -10- 200817439
Gin Asp Val His Asn Phe(SEQ ID ΝΟ:11)，及 e)Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Gin Arg Gly Arg His Leu Ala Ser Nle Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Glu Val His Gin Phe(SEQ ID NO:12)； 或其C-末端醯胺。 本發明提供一種誘導哺乳動物骨形成之方法，其包含向 需要該治療之哺乳動物投與有效量之SEQ ID NO: 1、2、 3、4、5或6化合物（其中mPEG為平均分子量為15〇〇至55〇〇 道爾頓，較佳約2000至5000道爾頓，更佳約2000道爾頓之 單甲氧基-聚乙二醇）或其醫藥學上可接受之鹽。 本發明提供一種治療包括骨質疏鬆症、骨質減少、骨 折、脊椎融合、骨植入、關節植入、牙植入及牙周病之疾 病或病狀之方法，其中新骨形成及/或骨量及骨生物力學 強度增加將對哺乳動物有益，該方法包含向需要該治療之 哺乳動物投與有效量之SEQ ID N〇:1、2、3、4、5或6化合 物（其中mPEG為平均分子量為15〇〇至55〇〇道爾頓，較佳約 2000至5000道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單曱氧基-聚乙 二醇）或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明提供一種治療患者之骨質疏鬆症或骨質減少之方 法^包3向需要該治療之患者投與有效量之SEQ ID 3 4、5或6化合物（其中mpEG為平均分子量為 1500至5500道爾頓，較佳約2〇〇〇至5〇〇〇道爾頓，更佳約 2000道爾頓之單甲氧基-聚乙二醇)或其醫藥學上可接受之 鹽0 124252.doc -11 - 200817439 本發明亦提供一種預防哺乳動物之骨質疏鬆症或骨質減 少之方法，其包含向需要該預防之哺乳動物投與有效量之 SEQ ID ΝΟ:1、2、3、4、5或6化合物（其中mPEG為平均分 子畺為1500至5500道爾頓，較佳約2〇〇〇至5〇〇〇道爾頓，更 佳約2000道爾頓之單甲氧基_聚乙二醇）或其醫藥學上可接 受之鹽。 本發明提供一種治療患者骨折之方法，其包含向需要該 治療之患者投與有效量之SEq m Ν〇:ι、2、3、4、5或6化 合物（其中mPEG為平均分子量為15〇〇至55〇〇道爾頓，較佳 約2000至5000道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單甲氧基_聚 乙二醇）或其醫藥學上可接受之鹽。 在一實施例中，本發明提供一種包含與醫藥學上可接受 之載劑、稀釋劑或賦形劑相結合之SEq ID NO: 1、2、3、 4、5或6化合物（其*mPEG*平均分子量為15〇〇至55〇〇道 爾頓較佳約200〇至5000道爾頓，更佳約2000道爾頓之單 甲氧基-聚乙二醇）或其醫藥學上可接受之鹽之醫藥調配 物。 在一實施例中，本發明提供SEQ ID ΝΟ:1、2、3、4、5 或6化σ物（其中111]?£〇為平均分子量為μ⑼至μ⑼道爾 頓車又佳約200〇至5000道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單甲 乳基-聚乙二醇）或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療。 在一實施例中，本發明提供SEQ ID ΝΟ:1、2、3、4、5 或6化口物（其中mPEGg平均分子量為η⑻至乃⑽道爾 頓車乂佺約200〇至5000道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單甲 124252.doc -12- 200817439 氧基-聚乙二醇）或其醫藥學上可接受之鹽，其用於誘導哺 乳動物（較佳為人類）之骨形成。 在一實施例中，本發明提供SEq m ΝΟ:1、2、3、4、5 或6化合物（其中mpEG &平均分子量為15〇〇至55〇〇道爾 頓，較佳約2000至5000道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單甲 氧基·聚乙二醇）或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療哺 礼動物之其中新骨形成及/或骨量及骨生物力學強度之增 加將可為有益之疾病或病狀，包括骨質疏鬆症、骨質減 少、骨折復原、脊椎融合、骨植入、關節植入、牙植入及 牙周病。 在一實施例中，本發明提供SEQ m N〇:i、2、4、5或6 化合物（其中mPEG為平均分子量為15〇〇至55〇〇道爾頓，較 佳約2000至5000道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單甲氧基_ 聚乙二醇）或用其醫藥學上可接受之鹽，其於治療哺乳動 物（較佳為人類）之骨質疏鬆症。 在一實施例中，本發明提供SEq ID N〇:1、2、3、4、5 或化5物（其中mPEG為平均分子量為15〇〇至55〇〇道爾 頓，較佳約2000至5000道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單甲 氧基-聚乙二醇）或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防哺 礼動物（較佳為人類）之骨質疏鬆症。 在一實施例中，本發明提供SEq ID Ν〇:ι、2、3、4、 或6化合物（其中111叩(}為平均分子量為15〇〇至55〇〇道爾5 頓，較佳約2000至5000道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單甲 虱基-聚乙二醇）或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療哺 124252.doc -13- 200817439 乳動物（較佳為人類）之骨折。 本發明提供SEQ ID ΝΟ:1、2、3、4、5或6化合物（其中 mPEG為平均分子量為15〇〇至55〇〇道爾頓，較佳約2〇〇〇至 5〇〇〇道爾頓，更佳約2000道爾頓之單甲氧基-聚乙二醇）或 其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療可藉 由誘導骨形成來改良或預防之疾病或病狀之藥物。 本發明提供SEQ ID ΝΟ:1、2、3、4、5或6化合物（其中 G為平均分子篁為1500至5500道爾頓，較佳約2〇〇〇至 5000道爾頓，更佳約2000道爾頓之單甲氧基_聚乙二醇）或 其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療哺乳 動物之其中新骨形成及/或骨量及骨生物力學強度之增加 將可為有益之疾病或病狀之藥物，包括骨質疏鬆症、骨質 減少、骨折復原、脊椎融合、骨植入、關節植入、牙植入 及牙周病。 本發明亦提供SEQ ID N0:1、2、3、4、5或6化合物（其 中mPEG為平均分子量為15〇〇至55〇〇道爾頓，較佳約2〇⑼ 至5〇〇〇道爾頓，更佳約2〇〇〇道爾頓之單甲氧基-聚乙二醇） 或其醫藥學上可接受之鹽之料，其用以製造用於治療哺 乳動物（較佳為人類）之骨質疏鬆症之藥物。 本發明亦提供SEQ m NO:1、2、3、4、5或6化合物（其 中mPEG為平均分子量為测至·道_，較佳約靡 至5〇〇〇道_，更佳約2_道爾頓之單甲氧基·聚乙二醇） :戈其醫藥學上可接受之鹽之用途’其用以製造用於預防哺 乳動物（較佳為人類）之骨質疏鬆症或骨質減少之藥物。 124252.doc -14- 200817439 本發明亦提供SEQ ID ΝΟ:1、2、3、4、5或6化合物（其 中mPEG為平均分子量為1500至5500道爾頓，較佳約2〇〇〇 至5000道爾頓，更佳約2000道爾頓之單甲氧基_聚乙二醇） 或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療哺 乳動物（較佳為人類）之骨折之藥物。 【實施方式】 月形成在胎兒發育及出生後生長期間發生，且亦在成年 生活期間作為正常骨重塑之一部分以低速率發生或作為對 損傷或異常骨質流失之反應而加速發生。骨形成包含大量 過程，其包括成骨細胞母細胞增殖，成骨細胞自母細胞中 刀化及礦化由成骨細胞產生之基質。採用術語"誘導骨形 成”或’’誘導新骨形成”意謂骨量之淨增加（例如，如使用本 文實例4B之方法所確定，如骨礦物質含量（，，BMC，，）及/或骨 生物力學強度之增加所證實）。 如本文所用之術語，，有效量”為達到所要藥理效應所需要 之本發明化合物之劑量。 術語”活體外活性”係指本發明化合物在一或多種合適的 活體外檢定中之活性，其包括（例如）在基於細胞之檢定中 活化PTH受體之能力。活性可表示為，，EC^，，，其識別在所 選擇之檢定中導致50%最大活化之化合物之有效濃度。任 何合適之活體外檢定均可用以測試PTH受體之結合作用及 /舌化作用，包括導致環狀AMP(cAMP)含量增加（參見本文 κ例3)之腺苷酸環化酶之活化作用。本發明化合物具有導 致細胞内CAMP增加之可變促效活性。 124252.doc 15 200817439 典型形式之mPEG(單甲氧基聚乙二醇）為含有末端羥基 之具有式CHbCHCHbCE^OVCi^CH^OH之線性聚合物，其 中η為约8至约4000。用於本發明之—抓之平均分子量為 1，500至5,500道爾頓，較佳約2,〇〇〇至5,〇〇〇道爾頓，更佳約 2,000至2,300，甚至更佳约2,〇〇〇道爾頓。市售 (例如，NOF SUNBRIGHT⑧ME-020AS)—般具有一定程度 之多分散性，意謂在粗略之高斯分布 distribution)範圍内變化，較佳在一窄範圍内變化。末端 氫一般可經諸如烷基或芳族基團之終止基團取代。雖然 mPEG分子中之末端氫經甲氧基取代，但預期末端氫可經 變化長度之碳鏈取代，例如至多1〇個碳之鏈（直鏈或支 鏈），且仍屬於本發明。 在本發明之聚乙二醇化化合物的合成中，具有如SEq NO:8-12中所示序列之化合物可用作中間體。在化合物之 羧基-末端，具有如SEQ ID n〇H2中所示序列之化合物 較佳地為醯胺形式。 本文採用術語”連接體，，、”連接部分”及，，間隔基，，係指視 情況用以連接諸如聚合物區段及肽之末端的互連部分之原 子或原子之集合。連接部分為含有反應部分以使得共價結 合至肽之相互反應位置之總體聚合物的一部分。 本文採用術語”共軛”（或可交換地為，，共軛肽，，）以指示藉 由使肽共價結合至PEG分子而形成之異質分子。 術語’’共價！吉合”意謂肽及聚乙二醇分子直接地彼此共價 連接或…f如連接體、連接部》或間隔基之插入部分間接 124252.doc -16- 200817439 地彼此共價連接。
C 本發明之聚乙二醇化化合物可與多種無機及有機酸或鹼 中之任一種反應以形成醫藥學上可接受之鹽。較佳醫藥學 上可接受之鹽為與乙酸、擰檬酸及鹽酸形成之彼等鹽。尤 其較佳為SEQ ID ΝΟ:1、2、3、4或5化合物之乙酸鹽，其 中mPEG為平均分子量為自15〇〇至55〇〇道爾頓，車I佳^ 2000至5000道爾頓，更佳為2〇〇〇道爾頓之單曱氧基-聚乙 一醇。熟習技藝者熟知製備本發明化合物之 受之鹽的方法（參一丨等人，，二。二 Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use"， VCHA/Wiley_VCH (2002);及以哪等人，彳 尸/66:1-19，1977)。 諸如骨質疏鬆症之骨退化疾，病的特徵為減少骨量、降低 BMD及損失骨骼架構，從而導致降低骨強度且增加骨折之 風險。對於具有高骨折風險之骨f疏鬆患者而言，本發明 之聚？二醇化化合物可構成骨量、增加骨之生物力學強 度、復原㈣架構且降低椎#及非椎骨骨折之風險。因 :’本發明之聚乙二醇化化合物適用作骨絡構成劑以治療 或預防諸如骨質疏鬆症之骨退化疾病。此外，本發明之聚 乙一醇化化合物亦適 Μ Μ & 占 料月植人、關即植人或牙植入之位 置處之骨骼構成劑以增強骨拆f 於治療牙周病。…折復原且刺激骨生長，或適用 ^適^包括遭受例如骨折之骨質流失病狀或骨創傷之 男性、女性及兒童’其中新骨形成、骨量增加及/或骨生 124252.doc 200817439 二:強度之增加將為有益的。舉例而言，可投與本發明 因^ 誘導骨形成及/或增加骨量及強度之措施， 低具有該等骨折風險之患者罹患椎骨及非椎骨骨折 I風險，該等患者包括#為私所 以又月貝殽鬆症或骨質減少之患 -二如具有與年齡相關之骨質疏鬆症、類固醇誘發之骨 :症u後之骨質疏鬆症、特發性骨質疏鬆症及原 号只性或繼發性骨質濟羞彡 戌月買4氣、症之患者。非椎骨位點包括（例如） w H肢骨、腔骨、繞骨、踩、肋骨、腳、骨盆及 股骨。 亦可將本發明之聚乙二醇化化合物投與至患纟以增強或 促進椎骨及/或非椎骨骨折復原，例如，在已遭受(例如)由 於事故或運動損傷造成之創傷從而導致骨折之患者，或已 k叉與低骨量相關的易碎性骨折之患者體内，骨折位點包 括髖部、前臂、肱骨、脛骨、橈骨、踝、肋骨、腳、骨盆 及股骨。 化合物合成 本發明化合物可如以下關於合成具有^(^ ID NO:丨之化 合物所例示之流程所述來製備： H2N-Rink醯胺聚苯乙烯樹脂 固相狀合成
Fmoc策略，DIC/HOBt活化 ♦
Fmoc-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-
Arg-His-Leu，Ala-Ser_Met_Glu-Arg-Val-Glu-Trp_Leu-Arg-
Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe(SEQ ID NO:7)-Rink 124252.doc -18- 200817439 醯胺樹脂（側鏈保護基為：用於Lys及Trp之Boc;用於Arg 之 Pbf;用於 Ser、Asp及 Glu之 tBu ;用於 Gin、His及 Asn之 Trt) 1. TFA裂解 v 2. rp-HPLC純化
Fmoc-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Arg-His-Leu-Ala-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Π Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-NH2(SEQ ID NO:7) 1. mPEG-NHS 2·旅咬（Fmoc移除） 3.酸化 ▼ 4.逆相HPLC純化
Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Arg-
His-Leu-Ala-Ser-Met-
j] .mPEG
Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg H 〇 Leu-Leu-Gln-
Asp-Val-His-Asn-Phe-NH2(SEQ ID NO:l) 0 本發明化合物之肽鏈可使用標準手動或自動固相合成程 序來合成。自動肽合成器可購自（例如）Applied Bio systems (Foster City ， CA)及 Protein Technologies Inc.(Tucson，AZ)。用於固相合成之試劑可易於自商業來 124252.doc -19- 200817439 源獲仔。根據製造商之說明書，固相合成器可用於阻斷干 擾基團，在反應期間保護胺基酸，偶合、去保護及封端未 反應之胺基酸。 通吊，在至/m下，在諸如二異丙基_碳化二醯亞胺（DW) 及1-羥基苯幷三唑（HOBt)之偶合劑存在下，使經N«_胺甲 醯基保護之胺基酸與連接至樹脂之生長肽鏈上的N_末端胺 基酸在諸如二甲基甲醯胺、N_甲基吡咯啶酮或二氯甲烷之 惰性溶劑中偶合。使用諸如三氟乙酸（TFA)或哌啶之試劑 將N -胺甲醯基保護基自所得肽樹脂中移除，且用待添加 至肽鏈中的另一種所要之經N«保護之胺基酸重複偶合反 應。合適胺保護基在此項技術中已為吾人所熟知且描述於 (例如）Green 及 Wuts，，，Protecting Gr〇ups in 〇rganie
Synthesis”，John Wiley and Sons，1991 中。最通常使用之 實例包括tBoc及苐基甲氧基羰基（Fm〇c)。在完成合成後， 在酸性條件下使用標準治療方法使肽自同時經歷側鏈去保 護之固相載體中裂解。 熟習技藝者將瞭解’本發明化合物之肽鏈可用C末端游 離酸或甲醯胺合成。裂解後，該類用於合成之所衍生的聚 苯乙烯樹脂將判定C-末端部分。熟知大量連接體且其通常 用於此技術中。對於C-末端醯胺肽之合成而言，併入有 Rink醯胺MBHA或Rink醯胺AM連接體之樹脂通常與Fmoc 合成一起使用，而MBHA樹脂一般與tBoc合成一起使用。 對於C-末端酸肽之產生而言，2-氯三苯甲基或Wang樹脂通 常用於Fmoc合成中，而tBoc合成通常採用PAM樹脂。在此 124252.doc -20- 200817439 項技術中熟知將第一胺基酸加載至樹脂中之方法。 粗肽通常在C8或C18管柱中使用0.05至0.1% TFA中之水-乙腈梯度用逆相高效液相層析法（Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography ， rp-HPLC)系屯 4匕。、純 化可由分析rp-HPLC來驗證。肽之識別可由質譜法來驗 證。肽可溶解於寬pH值範圍之水性緩衝劑中。 可使用充分表徵之化學合成反應（參見：Roberts等人， Adv· Drug Deliv. Rev· 54: 459-476 (2002)及 Veronese， F.M.，22:405-417 (2001))或根據製造商之推 薦使mPEG與肽共軛。較佳地，該程序使用相對於肽莫耳 過量之聚合物以推動反應完成。藉由諸如rp-HPLC之習知 分離方法將過量mPEG試劑自共軛肽產物中分離。 用於製備本發明之聚乙二醇化化合物之共軛化學為活化 為（例如）NHS(N-羥基琥珀醯亞胺）酯之mPEG-甲酸鹽與肽 上之胺基之間的醯胺鍵的形成。mPEG與肽之間的連接體 為CO-CH2(羧曱基）。本發明之肽序列係經設計成含有單一 Lys側鏈以使得與引入之mPEG-NHS S旨選擇性反應。一 般，此亦包括具有隨後移除之保護基（諸如Fmoc或三氟乙 醯基）之胺基末端的衍生。或者，在最佳pH值及溶劑條件 下可使胺基末端未受保護且可獲得部分選擇性醯化之Lys 側鏈（參見，美國專利第5,646,242號）。較佳地，由mPEG· NHS酯衍生物及含有單一 Lys(或其他含胺胺基酸）之N-末端 經Fmoc保護之肽在pH值為9至10之水性混合物中且於室溫 下進行醯胺共輛，歷經20至60 min。在共輛之後，藉由諸 124252.doc -21 200817439 如rp-HPLC之習知分離方法來回收及純化所要之共輛肽。 組合物 本發明之聚乙二醇化化合物可併入適用於投與至受檢者 (尤其為人類）之醫藥組合物中。本發明之聚乙二醇化化合 物可單獨投與，或與醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/ 或賦形劑組合投與。特定言之，本發明之聚乙二醇化化合 • 物可經含有20 mM於0.9% NaCl中之NaH2P04、3 mg/ml甘 ( 露糖醇之媒劑（PH 5)投與。用於投與之組合物係經設計成 適用於所選之投藥模式’且若適當，使用諸如分散劑、緩 衝劑、界面活性劑、防腐劑、增溶劑、等張劑、穩定劑及 其類似物之醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑及/或賦形 劑。舉例而言，根據一般為從業者所已知之提供調配技術 簡述之 Remington，r/ze ^ 〇/户；^謂卿， 第 19 版，Gennaro 編，Mack PubHshing c〇，以“⑽，pA， 1995中之習知技術，設計該等組合物。 C / 包合本發明之聚乙二醇化化合物之組合物可使用包括靜 脈内、腹膜内、皮下、肺部、、經皮、肌肉内、鼻内、口 腔、舌下或栓劑投與之標準投藥技術投與至具有如本文所 • 述之病變風險或表現該等病變之受檢者。 - 纟，明之聚乙二醇化化合物之投與途徑可為非經腸、經 口或措由吸人或經皮傳遞。較佳地，本發明之聚乙二醇化 化口物可併入適用於非經腸投藥之醫藥組合物中。如本文 所用之術語非經腸包括靜脈内、肌肉内、皮下、直腸、陰 C或腹膜内技藥。較佳為藉由靜脈内或腹膜内或皮下注射 124252.doc -22- 200817439 進行之周邊全身傳遞。 對於治療目的而言，本發明之聚乙二醇化化合物可以 用吸入設備投與且含有本發明化合物之氣溶膠形式來= 與。此項技術中描述氣溶膠及其合成方法。 ^ 本發明之聚乙二醇化化合物可有規律地投與，例如，每 天一次或每週一次。或者，本發明之聚乙二醇化化合物= 以（例如）每週兩次或每週三次來投與。或者，本發明化合 物可循環投與（例如有規律地歷時數天或數週之時期，^ 後為不投藥時期）。較佳地，本發明之聚乙二醇化化合物 每週投與一次，歷時介於3個月至3年之間之時期。 在製造及儲存條件下，所提供之容器(例如，包括密封 小航或注射器）中之組合物通常必須為無菌及穩定的。因 可在製得調配物後將組合物無菌過渡，或另外使其為 微生物學上可接受的。對於非經腸投藥而言，本發明化合 物之典型劑1範圍為每週約1 pg至每週約10 mg。較佳 7人類劑量介於每週5 μ§至每週約1〇〇〇叫之範圍内。更 ^地^里介於每週10叫至每週1〇〇〇 gg之範圍内，包括 母週一次投與 10 叫、15 “g、20 pg、25 pg、30 μ§、35 叩 4〇 叫、45 、50 盹、55 、60 pg、65 、70
Pg、75|^ig、只 〇 〇
Pg、85 pg、9〇 pg、95 pg或100 pg、150 μδ；§2〇〇_μδ； ^ .^3〇〇 μ§.5〇〇 μ§.75〇 μ§^1〇〇〇 μ§ 隹…、4等劑量範圍以每週為單位來闡明，但預期可使 用其他時間間隔。 化合物之該笙 Β _ 寻遷礅1經受了大量治療判斷。選擇適當劑 124252.doc 200817439 量及進度之關鍵因素為戶 之因素包括所治療 "°床、〜果。本文中所考慮 個體患者之臨床病壯、疋病症、所治療之特定哺乳動物、 藥方法、投筚進戶；^、病症起因、化合物之傳遞位點、投 本發明之=及醫學從業者已知之其他因素。 .前以合適；=經冷㈣乾以便儲存，且可在使用 .合物活性損:载:f:。細構可導致不同程度之化 #1J,t 里可必須經調節以進行補償。一沪妯， 〇製劑之PH值介於如之間為較佳的。 本發明化合物可單獨投與， 抑1…雙膦酸鹽、-二^ 素D2 H)、激素替代療法（HRT)、妈、維生素D1、維生 投與。本二Γ:、維生素D4及雌激素之骨抗吸收劑組合 明化χ π合物可與另—藥劑共同投與。或者，本發 α物可與另__相繼投與；例如 :1:一週至一年之時期，接著與該化合物-起或::: ^ 化&物不存在之情形下投與另-藥劑。 製造物件 1月之另實知例中，提供含有適用於治療或預防 =病或病狀之材料之製造物件。該製造物件包含容器 t鐵。例如，合適容器包括觀、小瓶、注射器、筆、吸 ^、貼片及測試管。容器可由諸如玻璃、金屬或塑料之 =材枓形成。容器容納有效預防或治療疾病或病狀之本 合物且可具有無菌入口 (例如，容器可為靜脈内溶 液衣或具有可由皮下注射針穿透之塞子的小瓶）。容器中 124252.doc -24 - 200817439 之活性劑為本發明組合物。容器上或與容器一起之標鐵於 示組合物係用於治療所選之病狀。製造物件可另外包含另 一容器’該容器包含諸如填酸鹽緩衝生理食鹽水、林林 溶液（Ringer’s solution)及右旋糖溶液之醫藥學上可接受之 緩衝劑。其可另外包括根據商業及使用者立場合乎需要之 其他材料’包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針、注射 器及具有使用說明書之包裝插頁。 以下實例僅為說明性目的而提供，且不意欲以任何方式 限制本發明之範疇。 實例1 :肽合成 在Rapp AM RAM Fmoc-醯胺聚苯乙烯樹脂（Rapp Polymere Tubingen，Germany)上進行肽合成（取代為〇.6至 0.7 mmol/g)。使用Fmoc主鏈保護基策略進行合成。另 外，任何芳族、酸性、鹼性或高度極性之胺基酸側鏈均可 此為反應性的。亦必須保護該等側鏈以防止不需要之支鏈 形成。四種主要基團以此方式使用：用於Lys及τΓρ之 18〇〇(弟二丁氧幾基）；用於八^之？6£(2,2,4,6,7-五曱基二氫 苯幷吱喃-5-績醯基）；用於Ser、Asp及Glu之tBu(第三丁 基）；用於Gin、His及Asn之Trt(三苯甲基）。所用之胺基酸 側鏈衍生物為：Arg(Pbf)、Asn(Ti*t)、Asp(OtBu)、
Cys(Trt)、Gln(Trt)、Glu(OtBu)、His(Trt)、Lys(B〇c)、
Ser(OtBu)、Trp(Boc)。藉由於二甲基甲醯胺（DMF)中用二 異丙基碳化二醯亞胺（DIC)及羥基苯幷三唑（jjOBt)活化約 10當里之fe基酸（莫耳比為1:1:1)來進行偶合。使胺基酸於 124252.doc -25- 200817439 位置1處之Fmoc保護基保留於適當位置以使得離胺酸側鏈 選擇性共軛（參見以下實例2)。 在室溫下，於含有三氟乙酸：三異丙基矽烷：甲醇：苯甲醚 (90:5:2.5 :2.5)之溶液中進行樹脂及側鏈保護基移除之併發 裂解，歷時1.5至2小時。使肽自Rink醯胺樹脂中裂解會產 生肽之C-末端曱醯胺形式。將肽用乙醚沈澱，再溶解於30 至40 mL之10%乙腈中且在C18逆相HPLC管柱中以12至15 mL/min之流動速率用線性AB梯度（其中A = 0.05% TFA/水 及B = 0.05% TFA/乙腈）進行純化。所用之管柱為Waters SymmetryPrep 7 μπι，19x300 mm 或 Kromasil 10 μιη， 22x250 mm。在 Agilent 1100 Series LC-MS系統中，用單 一四極MS债測器確認肽純度及分子量。在Zorbax Eclipse XDB-C8，5微米，4.6 mm内徑xl5 cm管柱中，用10至100% B之線性AB梯度歷時15分鐘（其中A = 0.05% TFA/H20且B = 0.05% TFA)於 60:40 之 CH3CN:H20中且以 1 ml/min 之流動速 率進行分析HPLC分離。將所有肽皆純化至純度> 95%且確 認其具有與1 amu内之計算值相對應之分子量。 實例2 :肽共軛 將在適當位置具有N-末端Fmoc基之非共軛肽溶解於1 mL 50/50 之水 / 乙腈中（36.8 mg，4272.9 g/mol，0·0086 mmol)。稱出1.5至2倍莫耳過量之mPEG-2kDaNHS酯（NOF Sunbright ME-020AS)(39.7 mg，2280 ave MW，0.017 mmol)。用2 mL 40 mM爛酸納、緩衝劑（pH 9.8)及2 mL乙 腈稀釋肽溶液且隨後將該溶液添加至mPEG溶液中。在室 124252.doc •26- 200817439 溫下，使所得混合物渦動且隨後攪拌。藉由分析逆相 HPLC(如實例1所述之方法）來監控反應混合物，且通常在 20至30 min反應時間後，顯示肽峰（在約14.5 min時）完全消 失且由於肽-PEG共輛物（在約1 5.7 min時）而出現一峰。使 混合物於乾冰中冷卻，且添加2 mL哌啶以移除N-末端 Fmoc基。在室溫下將混合物擾拌30 min，隨後於乾冰中冷 卻且用2 mL冰乙酸中和（最終pH值=約6至7)。根據分析 HPLC，現應存在約13.2 min時之峰（由於哌啶-苐加合物）及 約14.25 min時之峰（由於去保護肽-mPEG共軛物）。用水將 混合物稀釋至約 40 mL，且在 Waters SymmetryPrep 7 μηι， 19x300 mm或 Kromasil 10 μπι，22x250 mm 中以 12 mL/min 用0至3 0% B歷時20 min，接著30至80% B歷時100 min之二 階線性AB梯度（其中A = 0.05% TFA/水且B = 0.05% TFA/乙 腈）進行純化。 將含有產物之經組合溶離份凍乾以獲得肽之三氟乙酸鹽 形式。隨後，可藉由此項技術中已知之程序將產物轉化為 另一種所要之鹽形式。使用基於肽序列計算之莫耳消光係 數，藉由2 8 0 nm之UV吸光度來量化純化肽。共輛物之平 均 MW為(ave PEG-NHS MW+Fmoc-肽 MW-Fmoc MW-NHS MW) = 2280+4273-115-222 = 6216。對於使用 36.8 mg非共軛 肽之實例而言，可獲得34.8 mg聚乙二醇化肽。實質上， 如上文所述進行本發明所述之其他肽之共軛，其中使用 mPEG-NHS 酯。 以下實例中之所有資料均使用本發明化合物，該等化合 124252.doc -27- 200817439 物為在本發明之肽主鏈之位置26處的Lys殘基上與mPEG共 軛之C-末端醯胺肽及三氟乙酸鹽（參見例如，SEQ ID ΝΟ:1-5)。 實例3 : cAMP誘導之活體外檢定 使SaOS-2骨肉瘤細胞以5χ 105個細胞/毫升再懸浮於刺激 緩衝劑中[1 M HEPES/10% BSA/250 μΜ IBMX(3_異丁基-1-甲基黃嘌呤，MP Biomedicals)/HBSS]。將20微升/孔之細 胞懸浮液添加至96孔黑色半區檢定板（Costar)之每孔中以 得到1 X 1 04個細胞/孔。隨後，將20 kL經稀釋之測試化合物 (例如，本發明之PTH類似物，n=2)立即添加至細胞中。以 半對數稀釋（½ log dilutions)來製備測試化合物且經3 μΜ 至0.1 ηΜ之滴定範圍來檢定該等化合物。在室溫下，將板 培養一小時。亦製備含有作為標準曲線之cAMP的分離96 孔檢定板。在刺激緩衝劑中，經400至0.0012皮莫耳/孔（40 微升/孔）(n=6)之滴定範圍以半對數稀釋來製備cAMP標準 曲線。在一小時培養階段後，根據製造商之說明書使用 HTRF®(均相時差式螢光）cAMP動力學2套組（Cisbio)來檢定 cAMP 〇 當以下化合物實質上如上文所述進行測試時，發現其如 同以下列表誘導cAMP產生。該等資料證實該等化合物具 有以類似PTH之方式有效活化PTH受體（PTHR1)之能力。 124252.doc -28- 200817439 表1 化合物 平均 EC5()(nM) (n=2) 具有2 kD mPEG之SEQ ID N0:1 7.7 具有 2 kD mPEG 之 SEQ ID NO:2 2.1 具有2 kD mPEG之SEQ ID NO:4 6.9 具有2 kD mPEG之SEQ ID NO:5 2.6 實例4 :共軛化合物之活體内評價 A.年輕成年骨質減少之卵巢切除的大鼠 除假手術對照組外，將約3個月大之雌性Sprague-Dawley大鼠切除卵巢，且於22°C下維持12小時光/暗週 期，同時使其隨意取食（含有0.5% Ca及0.4% P之TD 89222，Teklad，Madison，WI)及飲水。可使得卵巢切除 的（Ovx)大鼠骨骼流失25天，且隨後稱重及隨機分至治療 組。經含有 20 mM 於0.9% NaCl 中之 NaH2P〇4、3 mg/ml 甘 露糖醇之媒劑（pH 5)，藉由經皮下注射不同劑量（如下表2 ( 中所指示）之本發明化合物歷時1個月來進行治療。每隔3 或4天向大鼠注射化合物以近似於每週一次投與至人類。 假手術及Ovx對照組僅用媒劑治療（π假手術媒劑對照組”及 ηονχ媒劑對照組”）。在最終注射後約24小時，在異氟烷麻 ' 醉下進行屍體剖檢時（在最終注射後約24小時）藉由心臟穿 刺收集血清，且使用臨床化學分析儀（Hitachi 917，Tokyo, Japan)進行分析。 在屍體剖檢中，在4°C下移除左側股骨、清除軟組織且 124252.doc -29- 200817439 將其儲存於50%乙醇/生理食鹽水中。在室溫下，將5〇〇/〇 EtOH/生理食鹽水中之股骨包覆於Parafilln中且相對於量化 電腦斷層攝影術（QCT)之支架處於中心（Research M， Stratec)。在3D分析之前，首先以2D產生遠端股骨幹骺端 之冠狀定位掃描。如先前所詳述（Sat〇等人，/凡^， 272:1252-1259，1995)量測QCT參數，包括骨礦物質密度 (BMD，mg/ml之羥基磷灰石）、骨礦物質含量（BMC，mg· 基磷灰石）及截面積（mm2)。 在本文中，高鈣血係定義為使用臨床化學資料及自心臟 穿刺收集之血清，針對所用動物類型之正常卵巢切除的媒 劑對照組之較高97.5個百分點的血清鈣值（國際臨床化學聯 盟（International Federation 〇f Clinical Chemistry)，he
Solberg in Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry， 版，Burtis CA及 Ashwood ER 編，2001，第251-261頁）。反 映97.5個百分點之值為對〇νχ媒劑對照組而言每几血清 11.2 mg鈣。"高鈣血劑量"（亦即，在注射測試化合物後μ 小時，使用臨床化學資料及自心臟穿刺收集之血清觀察到 高每企時之劑量）係藉由内插法來測定，其中使用回料 析以擬合向印巢切除的大鼠投與化合物後24小時 之鈣血劑量反應。 / 相對於假手術媒劑對照組，_巢切除經7.5週時期顯著 減少大氣之BMD(3.5週預處理期加上4週治療期）伽〇等 日t，’ J韻42:1_24, 1999)。直至4週治療期結束 、’本發明之聚乙二醇化化合物可將刪恢復回假手術媒 124252.doc -30 - 200817439 劑對照組程度。對於在此檢定之參數内測試之較佳本發明 聚乙二醇化化合物而言，需要使BMD恢復至假手術媒劑對 照組程度（nBMD劑量π)之劑量並不大於高鈣血劑量。當實 質上如上文所述進行測試時，列於下表2中之化合物在用 某一劑量進行4週治療後能夠使Ονχ大鼠之BMD恢復至假 手術媒劑對照組程度；然而，需要類似或更高劑量之化合 物以誘導高鈣金劑量。影響高鈣血劑量/BMD劑量之比率 的因素包括（但可不限於）肽主鏈之胺基酸序列及連接PEG 之胺基酸之位置。在此檢定之參數内測試的較佳本發明化 合物具有如下表2中所示之等於或大於約1 ·0的高鈣血劑量 /BMD劑量之比率。 表2 化合物 BMD劑量1 (奈莫耳/公 斤)(pg/kg) 高妈血劑量+ (奈莫耳/公 斤)(Mg/kg) 7¾約血 劑量 /BMD 劑量 具有 5 kD mPEG之EQ ID NO: 1 3.7 34.3 >32.52 >300 >8.8 具有5 kD mPEG之SEQ ID NO:2 6.7 59.8 >34 >300 >5.1 具有5 kD mPEG之SEQ ID NO:4 31.8 297.9 >32 >300 >1.00 具有5 kD mPEG之SEQ ID NO:5 4.4 41.0 >32.2 >300 >7.3 124252.doc -31- 1 在檢定參數内使BMD恢復至假手術對照組程度之劑量（如擬 合至回歸線且藉由内插法來測定） 2 +在檢定參數内投與測試化合物後24小時觀察到高鈣血時之 劑量（如擬合至回歸線且藉由内插法來測定） 200817439 指示所述之劑量為最高測試劑量且如本文所定義之高 約血並未達到該劑量。 B·老年骨質減少之卵巢切除的大鼠 在此實例中，確定本發明聚乙二醇化化合物將〇νχ大鼠 之生物力學骨強度、BMD及BMC增加至假手術媒劑對照組 程度之肖b力。預期化合物對於骨生物力學強度之影響較 BMD而言係較佳的臨床功效預測因子。椎骨bmd能夠勉 r, 強預測骨質疏鬆症療法降低椎骨骨折發病率之臨床功效 (Cummings等人，/⑽尸⑽/ 〇/价山.c^，112:281_289, 2002 , Sarkar專人，/·万㈣泛浚滅乃 17:1_2〇, 2002)。因為ΡΤΗ(1-34)降低椎骨及非椎骨骨折之風險（Neer 等人，Λ^/Μ，344:1434-1441，2001)，分析本發明化合物之 功效以證實其是否增加腰椎及兩個非椎骨位點（亦即，股 骨幹中段及股骨頸）的骨生物力學強度。 除假手術對照組外，將約6個月大之雌性Sprague_ Dawley大鼠切除卵巢，且於22π下維持12小時光/暗週 期’同時使其隨意取食（含有0.5% Ca及0.4% p之TD 89222，Teklad，Madison，WI)及飲水。使卵巢切除的 (Ovx)大鼠骨骼流失一個月，接著在另外兩個月用本發明 化合物進行治療。使待測試化合物以不同劑量（如下表3中 所示）經含有20 mM於0.9% NaCl中之NaH2P04、3 mg/mi甘 露糖醇之媒劑（pH 5)每隔6或7天經皮下投與，歷時2個月。 假手術對照組及Ovx對照組僅以媒劑治療（”假手術媒劑對 照組’’及”ovx媒劑對照組”）。隨後，在異氟烷麻醉下進行屍 124252.doc -32- 200817439 體剖檢時藉由心臟穿刺來收集血清，且使用臨床化學分析 儀進行分析。在4°C下移除腰椎L4-6及左側股骨，清除軟 組織且將其儲存於50%乙醇/生理食鹽水中。在室溫下，將 50% EtOH/生理食鹽水中之L-5包覆於Parafilm中且相對於 QCT支架處於中心（Research M，Stratec)。在3D分析之前， 首先以2D產生L-5椎骨之冠狀定位掃描。量測QCT參數， 該等參數包括BMD(mg/cc)、BMC(mg)及截面積（mm2)。隨 後，準備腰椎L-5、股骨幹中段及近端股骨以進行生物力 學測試。如先前所述，藉由加載樣本至骨折來評價強度 (N)(Sato等人，五㈣Mg;;，10:4330-4337，1997)。 在此檢定中，相對於3-5 pg/kg/d ΡΤΗ(1-38)之陽性對照 組評價本發明之聚乙二醇化化合物。可見，根據骨質減少 之卵巢切除的大鼠之骨骼功效或鈣血效應不能區分PTH( 1 - 34)及 ΡΤΗ(1-38)。先前已顯示，投與 5 yg/kg/dG nm〇l /kg/d)PTH(l-34)之大鼠的全身暴露量約為投與pth(1-34) (亦即，FORTEO™)之人類的全身暴露量的3倍（丁⑽叫抓及 Chabner, J. Bone Miner Res, 17:1151-1161, 2002 ； Tashjian 及 Gagel，J·心μ 及叫 21:354-365, 2006)。先前亦已 顯示，在老年骨質減少之卵巢切除的大鼠模型中，ΡΤΗ( 1 _ 34) 5 pg/kg/d將〇νχ之椎骨BMD恢復至假手術媒劑對照組 程度（Kishi等人，22:515-522，1998 ; Kimmel等人， 幻；132:1577-1584，1993)。證實在此模型中 ΡΤΗ(1-38)之劑量為 3-5 pg/kg/d。 在老年大鼠中，相對於假手術媒劑對照組，切除卵巢經 124252.doc -33- 200817439 3個月時期顯著降低BMD、BMC及骨強度。“ 文所述進行測試時，下表3中之化 田:貝"
物將〇vx大鼠之BMC 恢復至假手術媒劑對照組程度（當 8週時)。另外，當實質上如上所列之劑量治療 卜W實貝上如上文所述進行測試時，在椎 骨、中段及股骨頸測試位置之—處、兩處或三處，表3中 所列之化合物將0vx大鼠的骨生物力學強度恢 媒劑對照組程度。 何
對於在此檢定之參數㈣以之某些較佳本發明化合物而 言，在高達約m nm〇1/kg之最大測試劑量時仍未觀察到高 鈣血。在此檢定之參數内測試之較佳本發明化合物能將 雌及BMC恢復至假手術媒劑對照組程度，同時㈣血劑 量/BMD劑量之比率亦等於或大於約1〇、2〇、3〇或4.〇, 或甚至更佳地大於約5·〇、6·〇、7·〇、8〇、9〇、1〇〇或更 高。在此敎之參數内測試之較佳本發明化合物能將βμ〇 及BMC恢復至假手術媒劑對照組程度，同時亦在椎骨、中 段及股骨頸位置之一處、兩處或三處將骨生物力學強度恢 復至假手術媒劑對照組程度。甚至更佳地，在此檢定之參 數内測試之本發明化合物能夠在椎骨、中段及股骨頸位置 之一或多處將BMC及骨生物力學強度恢復至假手術媒劑對 照組程度，同時高鈣血劑量/BMD劑量之比率亦等於或大 於約1·0、2.0、3.0或4.0，或甚至更佳地等於或大於約 5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、1〇·〇或更高。 對於椎骨、中段及股骨頸部分而言，在不存在最高測試 劑量之高鈣血時，具有2 kD mPEG(ave mw)之SEQ id 124252.doc -34- 200817439 NO:4化合物在11 nmol/kg之劑量下達到假手術媒劑對照組 程度強度。因此，對於所有3個位點而言，此化合物之高 鈣血劑量/生物力學強度劑量之比率>10。類似地，在不存 在最高測試劑量之高鈣血時，具有2 kD mPEG之SEQ ID NO: 1在11 nmol/kg之劑量下將椎骨及股骨頸強度恢復至假 手術媒劑對照組程度，且因此對於此兩個位點而言，高鈣 血劑量/生物力學強度劑量之比率>10。該等資料指示本發 明化合物之肽主鏈的序列以及共軛至化合物之肽主鏈的 Γ mPEG之尺寸有助於化合物之骨骼功效（如BMD、BMC及強 度量測所反應）。 表3 化合物 高約血 劑量+ (nmol/k g) 椎骨 BMD 劑量"" (nmol/k g) 椎骨 BMC劑 量* (nmol/k g) 椎骨強度 劑量 (nmol/kg) 中段強 度劑量Λ (nmol/k g) 股骨頸 強度劑 量^ (nmol/k g) 具有5 kD ml^EG 之 SEQ ID ΝΟ:1 >107 >108 32 108 108 11 具有5 kD mPEG 之 SEQ ID NO:2 >112 112 34 32 108 32 具有5 kD mPEG 之 SEQ ID NO:4 >110 >107 32 107 32 32 具有5 kD mPEG 之 >110 11 11 107 32 107 124252.doc -35- 200817439 化合物 南妈血 劑量+ (nmol/k g) 椎骨 BMD 劑量++ (nmol/k g) 椎骨 BMC#] 量* (nmol/k g) 椎骨強 度劑量 *氺 (nmol/k g) 中段強 度劑量 Λ (nmol/k g) 股骨頸 強度劑 量ΛΛ (nmol/k g) SEQ ID NO:5 具有2 kD mPEG 之 SEQ ID NO:l >110 110 32 11 32 11 具有2 kD ml^EG 之 SEQ ID NO:2 >117 34 34 >117 117 34 具有2 kD mPEG 之 SEQ ID NO:4 >110 11 11 11 11 11 具有2 kD mPEG 之 SEQ ID NO:3 97 >110 11 >110 11 11 +在投與檢定參數内之測試化合物後24小時在血清中觀察 到高約血時之劑量（如擬合至回歸線且藉由内插法來測 定）。π >π指示所述之劑量為最高測試劑量且如本文所定義 之高弼血並未達到該劑量。 ++檢定參數内達到椎骨骨礦物質密度（BMD)之假手術程度 時之劑量。 *在檢定參數内達到椎骨骨礦物質含量（BMC)之假手術程度 時之劑量。 **達到與假手術對照組及陽性對照組（3-5 pg/kg/d PTH(1- 124252.doc -36- 200817439 3可相當之椎骨強度（在檢定對照組内）之劑量。 達到與假手術媒劑對照組及3-54§/]^/(1?丁11(1-38)之陽性 對照組可相當之中段強度時之劑量。 ΛΛ達到與假手術媒劑對照組及3-5 pg/kg/d PTH (1-34)之陽 欧對照組可相當之股骨頸強度時之劑量。 下表4闡明衍生自表3中之值的所關注比率。較佳之本發 化&物於;疋參數内所達到之南約血劑量/椎骨Bmd劑 里之比率為約1〇或更高，更佳地等於或大於3、5、 7、8、9或1〇。較佳之本發明化合物於檢定參數内所達到 之高鈣血劑量/椎骨BMC劑量之比率為約3〇或更高，更佳 地大於6、7、8、9或10。較佳之本發明化合物於檢定 苓數内所達到之高鈣血劑量/椎骨強度劑量之比率為約1〇 或更高，更佳為3、5、6、7、8、9或10或更高。較佳之本 發明化合物於檢定參數内所達到之高鈣血劑量/中段強度 劑里之比率為約i ·〇或更高，更佳地大於3、5、6、7、8、 9或10。較佳之本發明化合物於檢定參數内所達到之高鈣 血劑量/股骨頸強度劑量之比率為約3 〇或更高，更佳為約 5、6、7、8、9或 1()或更高。 124252.doc -37- 200817439 表4 化合物 高鈣血劑 量/椎骨 BMD劑量 高鈣血劑 量/椎骨 BMC劑量 兩詞血 劑量/椎 骨強度 劑量 兩姜弓血 劑量/中 段強度 劑量 高鈣血劑 量/股骨頸 強度劑量 具有5 kD mPEG 之 SEQ ID ΝΟ:1 >1.0 >3.34 >1.0 >1.0 >9.7 具有5 kD mPEG 之 SEQ ID NO:2 >1.0 >3.14 >3.34 >1.0 >3.34 具有5 kD mPEG 之 SEQ ID NO:4 >1.02 >3.43 >1.02 >3.43 >3.43 具有5 kD mPEG 之 SEQ ID NO:5 >10.0 >10.0 >1.02 >3.43 >10.0 具有2 kD mPEG 之 SEQ ID NO:l >1.0 >3.43 >10.0 >3.43 >10.0 具有2 kD mPEG 之 SEQ ID NO :2 >3.4 >3.4 1 >1 >3.4 具有2 kD mPEG 之 SEQ ID NO:4 >10.0 >10.0 >10.0 >10.0 >10.0 具有2 kD mPEG 之 SEQ ID NO:3 <0.9 8.8 <0.9 8.8 8.8 124252.doc -38- 200817439 實例5
將其中所共軛之mPEG為2 kD mPEG的具有SEQ ID ΝΟ:1 之本發明化合物直接與其中所共軛之mPEG為5 kD mPEG 的具有SEQ ID ΝΟ:1之本發明化合物相比較。使老年骨質 減少之卵巢切除的大鼠骨骼流失一個月，接著每隔6天僅 以媒劑給藥（如表5及6中之nmol/kg)，或以2 kD聚乙二醇化 SEQ ID NChl化合物或5 kD聚乙二醇化SEQ ID ΝΟ:1化合物 給藥歷時8週。表5顯示給藥後24小時之平均血清鈣 (mg/dL)值。表 6顯示平均 BMD(mg/cc)。 以任何化合物給藥之動物均在給藥後24小時具有正常血 清鈣含量。然而，與具有5 kD mPEG之化合物相比，具有 2 kD mPEG之化合物在低、中等及高劑量下對血清鈣影響 較小，同時顯示出較佳BMD骨骼功效。該等資料證實關於 骨骼功效，2 kD聚乙二醇化化合物與5 kD聚乙二醇化化合 物類似，同時具有較低血清鈣影響。 表5·血清約（mg/dL) 劑量(nmol/kg) 假手術 Ovx PEG 2 kD PEG 5 kD 0 10.69 10.68 11 10.45 10.86 32 10.38 10.79 108 11.03 110 10.25 124252.doc -39- 200817439 表 6·椎骨 BMD(mg/cc) 劑 量 (nmol/kg) 假手術 Ονχ PEG2kD PEG5kD 10.3 625 544 11 590 567 32 603 589 108 ^612 110 623 實例6老年骨質減少之卵巢切除的大鼠中之ptjj(1-34) 在22 C下’使6個月大之卵巢切除的Sprague-Dawley大鼠 維持12小時光/暗週期，同時使其隨意取食（含有〇.5% Ca& 0.4% P 之 TD 89222，Teklad，Madison，WI)及飲水。使卵 巢切除的大鼠骨骼流失丨個月，接著在以下3個月内用 rhPTH(l-34)治療。每週，使老年骨質減少之卵巢切除的 大鼠經皮下注射〇、10或30 pg/kg人類ΡΤΗ(1-34)，歷時12 週。使假手術對照組及〇νχ對照組僅注射媒劑。在屍體剖 檢中切除腰椎且藉由微-CT(Stratec)進行分析，且隨後準備 進订生物力學測試。以牛頓（N)表示之強度係藉由加載椎 骨樣本至骨折來進行評價。關於〇vx媒劑對照組之顯著性 係由下表7中之*(Fishers PLSD，Ρ<〇·〇5)指出。下表7中提 供模型資料。 相對於Ονχ媒劑對照組，在12週治療之後骨質減少之卵 巢切除的大鼠中高達30 pg/kg(7 nmol/kg)之ΡΤΗ(1-34)對椎 骨BMD或椎骨生物力學強度並無顯著效應。當最後給藥後 、、勺24小時進行量測時，血清鈣正常。與上文所示之資料相 124252.doc -40- 200817439 比，相對於每週之ΡΤΗ( 1-34)，本發明化合物具有較高椎 骨BMD及生物力學椎骨強度。 表7 :每週以ΡΤΗ( 1-34)給藥之骨骼功效 椎骨BMD : 組 劑量(με/kg) 平均BMD mg/mL 假手術 0 605* Ovx 0 512 ΡΤΗ(1-34) 10 534 ΡΤΗ(1-34) 30 529 椎骨強度： 組 劑量(pg/kg) 達到骨折之平 均負載(N) 假手術 0 277* Ovx 0 210 ΡΤΗ(1-34) 10 222 ΡΤΗ(1-34) 30 243 實例7 ΡΤΗ受體内化 對於本發明化合物而言，PTHR1(PTH受體1)内化之動力 學係根據結合至膜受體之配位體來測定。用PTHR-emGFP 質體（In vitro gen)轉染 HEK 293 細胞。 將細胞以7,000個細胞/孔、100微升/孔接種至清潔底部 之黑色、經聚-D離胺酸塗佈之96孔培養板中。在接種至96 孔培養板中之後24小時，在0分鐘至3小時之交錯時間點以 100 nM之最終濃度將10 pL待測試化合物給予細胞。在給 藥之終點吸出培養基。用100 pL Prefer(Anatech，Battle 124252.doc -41 - 200817439
Creek，MI)固定細胞歷經30分鐘。自細胞中吸出Prefer， 且用100 pL 1XPBS洗滌細胞3次。用100 pL經稀釋之 Hoechst核染劑（稀釋於1XPBS中）對細胞染色歷經30分鐘。 將Hoechst染劑吸出且用1XPBS替換。在4°C下，將培養板 儲存於暗處直至掃描。在48小時内，使用Cellomics® Array Scan掃描細胞。表8提供來自各時間點之代表資料， 該等資料係作為僅媒劑對照組（基線=100%)之百分比加以 闡述。 表8 化合物* 20 min 40 min 60 min 180 min ΡΤΗ(1-38) 166 177 224 175 SEQ ID NO:4(但未經聚乙二醇化)及胺基 酸26處之離胺酸 136 132 136 151 具有2 kD mPEG之SEQ ID NO:4 154 167 186 163 具有5 kD mPEG之SEQ ID NO:4 106 96 98 107 SEQ ID NO:2(但未經聚乙二醇化)及胺基 酸26處之離胺酸 126 114 139 139 具有2 kD mPEG之SEQ ID NO:2 148 102 107 96 具有5 kD mPEG之SEQ ID NO:2 128 95 108 102 SEQ ID ΝΟ··1(但未經聚乙二醇化)及胺基 酸26處之離胺酸 106 126 113 142 具有2 kD mPEG之SEQ ID ΝΟ:1 160 120 104 102 具有5 kD mPEG之SEQ ID NO: 1 127 93 91 92 124252.doc -42- 200817439 該等資料顯示與ΡΤΗ(1-38)相比，本發明化合物具有顯 著不同之内化動力學，其視肽主鏈之序列、是否聚乙二醇 化及PEG尺寸而定。應注意除在位置26處存在離胺酸殘基 外，未經聚乙二醇化之分子具有所命名之序列的主鏈。當 使用本發明化合物形成配位體-PTHR1受體複合物時，較 慢之内化動力學指示PTHR1受體内化速率降低，從而在配 位體結合後於細胞中產生大量信號轉導。此可能部分地說 明，以每週給予具有2 kD PEG之本發明化合物的形式所觀 察到的骨骼功效相對每週給予PTH所觀察到的骨骼功效有 所改良。 124252.doc -43- 200817439 序列表 <110〉美國禮來大藥廠 <120〉聚乙二醇化PTH受體調節劑及其用途 <130> X17107 <140> 096133901 <141〉 2007-09-11 <150> 60/829,383 <151> 2006-10-13 <160> 12 <170> Patentln version 3.4 <210〉 1 <211〉 34 <212〉 PRT <213〉人工 <220〉 <223〉合成構築體 <220> <221> MISC^FEATURE <222〉 (26).. (26) <223>位置26處之Xaa為經修飾離胺酸 <220〉 <221〉 MOD一RES <222〉（34)..(34) <223〉醢胺化作用 <400> 1
Ser Val Ser Glu 1 Ser Met Glu Arg 20 Asn Phe lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His 5 10
Val Glu Trp Leu Arg Xaa Leu Leu Gin Asp 25 30
Leu Ala 15 Val His <210〉 2 <211> 31 <212> PRT <213〉人工 <220〉 <223>合成構築體 <220〉 <221> MISC.FEATURE <222〉 (8).. (8) <223〉位置8處之Xaa為正白胺酸 <220〉 <221> MISC_FEATURE <222〉 （18)..(18) <223>位置18處之Xaa為正白胺酸 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <222〉 (26).. (26) <223〉位置26處之Xaa為經修飾離胺酸 <220〉 <221> M0D.RES <222〉 （31)..(31) <223〉醯胺化作用 <400〉 2 124252.doc 200817439
Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Xaa His Gin Arg Gly Arg His Leu Ala 1 5 10 15
Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Leu Leu Gin Glu Val 20 25 30 <210> 3 <211〉 34 <212〉 PRT <213〉人工 <220〉 <223〉合成構築體 <220〉 <221> MISC^FEATURE <222〉 （26)..(26) <223>位置26處之Xaa為經修飾離胺酸 <220〉
<221> M0D_RES <222〉 （34),.(34) <223>醯胺化作用 <400〉 3
Pro Val Ser Glu He Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala 1 5 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Leu Leu Gin Asp Val His 20 25 30
Asn Phe <210> 4 <211> 34 <212〉 PRT <213〉人工 <220> <223〉合成構築體 <220〉
<221> MISC^FEATURE <222> (8)..(8) <223〉位置8處之Xaa為正白胺酸 <220> <221〉 MISC—FEATURE <222〉 （18)..(18) <223>位置18處之Xaa為正白胺酸 <220> <221〉 MISCJFEATURE <222> (26).,(26) 〈223>位置26處之Xaa為經修飾離胺酸 <220〉 <221> MOD.RES <222〉 （34)..(34) <223〉醯胺化作用 <400〉 4
Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala 1 5 10 15 124252.doc 200817439
Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Leu Leu Gin Asp Val His 20 25 30
Asn Phe <210〉 5 <211> 34 <212> PRT <213〉人工 <220〉 <223〉合成構築體 <220〉
<221〉 MISC一FEATURE <222〉 （8)..(8)
<223>位置8處之Xaa為正白胺酸 <220> <221〉 MISC_FEATURE <222〉 （18)..(18) <223〉位置18處之Xaa為正白胺酸 <220> <221> MISC^FEATURE <222〉 （26)..(26) <223>位置26處之Xaa為經修飾離胺酸 <220> <221〉__RES <222> (34)..(34) <223〉酿胺化作用 <400> 5
Ser Val Ser Glu He Gin Leu Xaa His Gin Arg Gly Arg His Leu Ala 15 10 15
Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Leu Leu Gin Glu Val His 20 25 30
Gin Phe <210> 6 <211〉 34 <212> PRT <213〉人工 <220〉 <223>合成構築體 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <222> (8)·. (8) <223>惹垡置p气之Xaa為畔t，則位置g處之Xaa亦為Met ;若位置 18處之Xaa為正白胺酸，則位置8處之Xaa亦為正白胺酸。 <220〉 <221〉 MISC—FEATURE <222> (18).. (18) <223> 置18%之Xa,a為¥，則位置8處之Xaa亦為Met ;若位置 18處之Xaa為正白胺酸’則位置8處之Xaa亦為正白胺酸。 124252.doc 200817439 <220〉 <221> MISC^FEATURE <222〉 (26).. (26) <223>位置26處之Xaa為經修飾離胺酸 <220> <221〉MODjES <222〉 （34)..(34) <223>醯胺化作用 <400> 6
Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala 15 10 15
Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Leu Leu Gin Asp Val His 20 25 30
Asn Phe
<210> 7 <211〉 34 <212> PRT <213〉人工 <220〉 <223>合成構築體 <220>
<221> MOD.RES <222> (1)..(1) 〈223>經FMOC修飾 <400〉 7
Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala 15 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His 20 25 30
Asn Phe <210〉 8 <211> 34 <212〉 PRT <213〉人工 <220〉 <223〉合成構築體 <220> <221〉 MOD一RES <222> (34)·· (34〉 <223>可醯胺化或不可醯胺化 <400> 8
Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala 1 5 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His 20 25 30 124252.doc -4- 200817439
Asn Phe <210> 9 <211> 31 <212> PRT <213〉人工 <220> <223〉合成構築體 <220〉 <221〉 MISC一FEATURE <222〉 （8).· (8) <223>位置8處之Xaa為正白胺酸 <220> <221〉 MISC一FEATURE <222〉 （18)..(18) <223>位置18處之Xaa為正白胺酸
<220〉
<221〉 MOD一RES /〇99\ ) hi) <223>可醯化或不可醯胺化 <400> 9
Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Xaa His Gin Arg Gly Arg His Leu Ala 15 10 15
Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Glu Val 20 25 30 , <210> 10 <211〉 34 <212> PRT <213〉人工 〈220〉 <223〉合成構築體 <220〉
<221〉 MOD一RES <223>可醯化或不可醯胺化 <400> 10
Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala 1 5 * 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His 20 25 30
Asn Phe <210〉 11 <211> 34 <212〉 PRT <213〉人工 <220〉 <223〉合成構築體 124252.doc 200817439 <220〉
<221> MISC_FEATURE <222> (8).. (8) <223>位置8處之Xaa為正白胺酸 <220〉 <221〉 MISC_FEATURE <222〉 （18)..(18) <223>位置18處之Xaa為正白胺酸 <220>
<221> M0D.RES /999> <223>可si®化或不可醯胺化 <400> 11
Ser Val Ser Glu He Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala
Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His 20 25 30
Asn Phe <210〉 12 <211〉 34 <212〉 PRT <213〉人工 <220〉 <223〉合成構築體 <220> <221〉 MISC—FEATURE <222〉（8)-.(8)
<223>位置8處之Xaa為正白胺酸 <220〉 <221> MISC.FEATURE <222〉 （18)..(18) <223>位置18處之Xaa為正白胺酸 <220> <221〉 MOD-RES <222〉 （34)..(34) <223> 可醯胺化或不可醯胺化 <400〉 12
Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Xaa His Gin Arg Gly Arg His Leu Ala 15 10 15
Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Glu Val His 20 25 30
Gin Phe 124252.doc -6-

Claims (1)

  1. 200817439 十、申請專利範圍： 1. 一種具有以下序列之化合物： Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Xaa8 His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Xaai8 Glu Arg Val Glu Trp
    mPEG Leu Leu Gin Asp
    Val His Asn Phe_NH2(SEQ ID N〇:6); 其中Xaa8及又&&18為Met，或Xaa8及Xaai8為Nle ;且其 中mPEG為平均分子量為自1500至55 00道爾頓之單曱氧 基-聚乙二醇；或其醫藥學上可接受之鹽。 2.如請求項1之化合物，其具有以下胺基酸序列： Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Met Glu Arg ϋ Val Glu Trp
    mPEG Leu Leu Gin Asp 3. Val His Asn Phe-NH2(SEQ ID N〇：〇 0 如請求項1之化合物，其具有以下胺基酸序列： Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Nle Glu Arg mPEG
    Val Glu Trp Leu Arg 〇 Leu Leu Gin Asp 124252.doc 200817439 Val His Asn Phe-NH2(SEQ ID NO:4) 〇 4 · 一種化合物，其係選自由以下各物組成之群： a)Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Nle His Gin Arg Gly Arg His Leu Ala Ser Nle Glu Arg U
    mPEG Leu Leu Gin Glu Val -NH2(SEQ ID NO:2); b)Pro Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Ala Ser Met Glu Arg
    Val Glu Trp Leu Arg Val His Asn Phe-NH2(SEQ ID 及 c)Ser Val Ser Glu lie Gin L^u His Leu Ala Ser Nle Glu Arg /ftiPEG Leu Leu Gin Asp :3)； His Gin Arg Gly Arg
    其中mPEG為平均分子量為Θ 甲氧基-聚乙二醇；或其醫藥攀> Val Glu Trp Leu Arg Val His Gin Phe-NH2(SEQ ID Leu Leu Gin Glu N〇:5)， l5〇0至5500道爾頓之單 <接受之鹽 124252.doc 200817439 5_ 種中間體，其具有選自由SEQ ID NOs:8-12組成之群之 序歹ij。 6·如請求項1至4中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受 之鹽，其中mPEG具有自約2000至5000道爾頓之平均分 子量。 7·如凊求項1至4中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受 之鹽，其中mPEG具有約2000道爾頓之平均分子量。
    C 8· 一種組合物，其包含與醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑 或賦形劑組合之如請求項丨至4中任一項之化合物或其醫 藥學上可接受之鹽。 9·如請求項8之組合物，其中1111^(3具有自約2〇〇〇至5〇〇〇道 爾頓之平均分子量。 10·如睛求項8之組合物，其中mPEG具有約2〇〇〇道爾頓之平 均分子量。 汝明求項1至4中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受 之鹽’其用於治療。 如叫求項1至4中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受 之鹽’其用於誘導哺乳動物之骨形成。 13. 如請求項⑴中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受 之鹽，其用於治療哺乳動物之其中新骨形成及/或骨量及 骨生物力學強度之増加將可為有益之疾病或病狀，包括 :質疏鬆症、骨質減少、骨折、脊椎融合、骨植入、關 即植入、牙植入及牙周病。 14. 如請求項1至4中任-項之化合物，或其醫藥學上可接受 124252.doc 200817439 之孤，其用於治療哺乳動物之骨質疏鬆症。 15·如明求項丨至4中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受 之鹽，其用於預防哺乳動物之骨質疏鬆症或骨質減少。 女明求項1至4中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受 之鹽，其用於治療哺乳動物之骨折。 17·如睛求項1之化合物，其fmPEG具有自約2〇〇〇至5〇㈧道 爾頓之平均分子量。 如明求項化合物，其中mpEG具有約⑽道爾頓之平 均分子量。 19·如晴求項丨之化合物，其中該哺乳動物為人類。 2〇· —種如請求項！至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接 文之鹽之用途，其用以製造用於治療可藉由誘導骨形成 而改良或預防之疾病或病狀之藥物。 21· —種如請求項丨至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接 叉之鹽之用途，其用以製造用於治療哺乳動物之其中新 骨形成及/或骨量及骨生物力學強度之增加將可為有益之 病狀之藥物，包括骨質疏鬆症、骨質減少、骨折、脊椎 融合、骨植入、關節植入、牙植入及牙周病。 22· 一種如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接 义之鹽之用途’其用以製造用於治療哺乳動物之骨質疏 鬆症或骨質減少之藥物。 23. —種如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接 文之鹽之用途，其用以製造用於預防哺乳動物之骨質疏 鬆症或骨質減少之藥物。 124252.doc 200817439 24. —種如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接 受之鹽之用途，其用以製造用於治療哺乳動物之骨折之 藥物。 25. 如請求項20至24中任一項之用途，其中mPEG具有自約 2000至5000道爾頓之平均分子量。 26. 如請求項20至24中任一項之用途，其中mPEG具有約 2000道爾頓之平均分子量。 27. 如請求項20至24中任一項之用途，其中該哺乳動物為人 類。 124252.doc 200817439 七、指定代表圖·· (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明·· p 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無） 124252.doc
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