TW200810765A - Induction of weight loss and the selective inhibition of PTP1B - Google Patents

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200810765 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本申請案係針對化合物1436用於誘發肥胖哺乳動物體重 減輕之用途。 【先前技術】

V 已自角鯊魚之一種白斑角鯊（Mwa/w ac㈣ί/π·似）肝臟中 分離出若干胺基固醇（aminosterol)化合物。此等化合物之 一種表示為1436，其結構顯示於圖1中。先前已在（例如）美 • 國專利 5,763,430、5,795,885、5,847，172、5,840,936 及 6，143,738(其各以全文併入）中描述化合物1436且顯示化合 物1436在動物模型中抑制體重增加且抑制食慾，從而導致 體重減輕。 肥胖症在美國為主要醫學問題，且在發達世界之其他地 方亦日漸增加。原因主要為久坐式生活方式及高脂肪飲食 的影響。肥胖個體易患與其肥胖症直接相關之醫學問題， _ 諸如第Π型糖尿病、抗胰島素症、升高之血清膽固醇、高 血£、先天性肥胖症候群（包括先天性瘦素、前阿黑皮素 (POMC)及黑皮素_4受體（MC4R)缺乏）及睡眠呼吸中止症 . (尤其在皮克威克症候群（Pickwickian syndrome)中）。此 1 外，脂肪在肝臟中之累積可發展成非酒精性脂肪變性肝炎 及肝硬化。肥胖個體之另一問題為在任何必須穿過高度血 管化之厚脂肪組織層的外科手術中危險增加且因此易於出 血。必需之外科手術常延遲至肥胖患者可減去足夠體重使 得手術危險可接受。 120542.doc 200810765 胰島素為不同代謝過程之重要調節因子且在血糖控制中 起重要作用。與騰島素合成及信號轉導相關之缺陷導致糖 尿病。胰島素結合胰島素受體（IR)引起若干酪胺酸殘基在^ 次單元之胞内部分中快速自體磷酸化。三種位置接近之絡 胺酸殘基（酪胺酸1150域）必須磷酸化以獲得最大活性之胰 島素受體酪胺酸激酶（IRTK)，其經由其他細胞基質（包括 胰島素受體基質-l(IRS-l)及胰島素受體基質—2(irs-2))之 酪胺酸磷酸化傳輸更多信號。 蛋白質填酸化為公認之在細胞功能之不同階段期間轉換 及調節信號之細胞機制（例如參見Hunter, Phil，Trans. R.

Soc· Lond· Β· 353: 583-605 (1998); Chan等人，人111111.1^兄

Immunol. 12: 555-592 (1994); Zhang, Curr. Top· Cell.

Reg· 35: 21-68 (1997); Matozaki及 Kasuga，Cell· Signal. 8: 113-119 (1996))。存在至少兩種主要公認類別之磷酸酶： (1)使在絲胺酸或蘇胺酸部分上含有磷酸基之蛋白質脫磷酸 化之彼等填酸酶（稱為Ser/Thr填酸酶或雙特異性礙酸酶或 DSP)及（2)自胺基酸酪胺酸移除磷酸基之彼等磷酸酶（稱為 蛋白酪胺酸磷酸酶或PTPase或PTP)。 若干研究清楚表明自體磷酸化IRTK之活性可藉由在活體 外脫填酸化而逆轉（Goldstein, Receptor 3: 1-15 (1993)中評 ：. t 論）’其中三磷酸化酪胺酸1150域為PTPase之最敏感目 標。此三磷酸化酪胺酸1150域似乎充當IRTK活性之控制開 關且IRTK似乎由PTP介導之活體内脫磷酸作用緊密調控 (Faure等人，J· Bioi· Chem· 267: 11215-11221(1992)) 〇 120542.doc 200810765 經由在活體外（Seely 等人，Diabetes 45: 1379-1385 (1996))及活體内使用PTP1B中和抗體（Ahmad等人，J· Biol· Chem· 270: 20503-20508 (1995))進行之研究，已鑑 別PTP1B為涉及於IRTK調控之主要磷酸酶之至少一者。兩 個獨立研究表明當進行高脂肪飲食時剔除PTP1B之小鼠具 有增加之葡萄糖耐受性、增加之胰島素敏感性及減少之體 重增加（Elchebly等人，Science 283: 1544-1548 (1999)及 Klaman等人，Mol· Cell· Biol. 20: 5479-5489 (2000))。酪 胺酸磷酸酶PTP1B之過度表現或改變之活性可促進各種病 症（包括抗膜島素症及糖尿病）之發展（Ann· Rev. Biochem· 54: 897-930 (1985))。此外，有證據表明抑制蛋白酪胺酸 磷酸酶PTP1B在治療學上有益於治療諸如下列各病症之病 症：第I型及第II型糖尿病、肥胖症、自體免疫病症、急性 及慢性發炎、骨質疏鬆症及各種形式之癌症（Zhang ZY等 人，Expert Opin· Investig· Drugs 2: 223-33 (2003);

Taylor SD等人，Expert Opin· Investig· Drugs 3:199-214 (2004); J. Natl. Cancer Inst. 86: 372-378 (1994); Mol. Cell. Biol. 14: 6674-6682 (1994); The EMBO J. 12: 1937-1946 (1993); J· Biol· Chem· 269: 30659-30667 (1994);及 Biochemical Pharmacology 54: 703-711(1997))。 酶類PTP ase家族可分成兩個子群：（1)胞内或非跨膜 PTPase及（2)受體型或跨膜PTPase。最知名胞内型PTPase含 有由220-240胺基酸殘基組成之單個保守催化磷酸酶域。 咸信在PTPase域外之區域在亞細胞上定位胞内PTPase中起 120542.doc 200810765 重要作用（Mauro，L.J_ 及 Dixon J.E·，TIBS 19: 151-155 (1994))。待純化及特徵化之胞内PTPase之第一者為 PTPlB(Tonks等人，J· Biol· Chem. 263: 6722-6730 (1988))。胞 内PTPase之其他實例包括（1)T細胞PTPase(TCPTP)(Cool等 A ^ Proc. Natl· Acad. Sci. USA 86: 5257-5261 (1989))、 (2)神經元石粦酸酶 STEP(Lombroso 等人，Proc· Natl. Acad· Sci. USA 88: 7242-7246 (1991)) > (3)PTP 1C/SH-PTP1/SHP-l(Plutzky等人，Proe. Natl· Acad. Sci· USA 89: 1123-1 127 • (1992))、（4)PTPlD/Syp/SH-PPT2/SHP-2(Vogel 等人，Science 259: 1611-1614(1993); Feng 等人 Science. 259: 1607- 1611(1993))。 受體型PTPase由（a)假定之配位基結合之胞外域、（b)跨 膜區段及（c)胞内催化區組成。受體型PTPase之假定之配位 基結合的胞外域之結構及大小差異很大。相比之下，受體 型PTPase之胞内催化區彼此極同源且與胞内PTPase極同 A 源。大部分受體型PTPase具有兩個串聯重複之催化PTPase 域。經鑑別之第一 PTPase受體亞型為（1)CD45(Ralph，S.J·， EMBO J· 6: 1251-1257(1987))及（2)LAR(Streuli 等人 J· / EXP· Med. 168:1523-1530(1988))。此後，已分離且特徵化 • 更多受體亞型，包括（例如）ΡΤΡα、ΡΤΡβ、ΡΤΡδ、ΡΤΡε及 PTP$(Knieger等人ΒΜΒΟ J. 9: 3241-3252 (1990))。 雖然已鑑別用作PTP1B抑制劑之藥劑（諸如WO 01/1983 1、WO 01/19830 及 WO 01/17516 中所述之雜芳基及 芳基胺基乙酸），但此等藥劑未顯示PTP1B與TCPTP之間的 I20542.doc 200810765 抑制活性之分離。此外，因為源自抑制TCPTP之潛在免疫 抑制作用，所以選擇性抑制PTP1B勝過TCPTP使得該等藥 劑更適於藥物發展，因為該等藥劑可減小或消除源自該非 選擇性之非所要副作用。 多巴胺及正腎上腺素轉運體（分別為DAT及NET)定位於 下視丘之突觸前神經元且在其釋放至突觸後用以減少突觸 多巴胺或正腎上腺素之含量。當DAT或NET受到抑制時’ 其在突觸中含量增加，從而激活其受體。

Billes 及 Cowley(Neuropsychopharmacology 1 ： 1-13 (2006) )、Gadde及 Xiong(Expert Rev· Neurother·· 7: 17-24 (2007) )及 Gehlert等人（J· Pharmacol· Exp· Ther· 287: 122-7 (1998))之研究證實DAT及/或NET之抑制劑或其受體促效 劑可充當有效體重減輕劑。因此，在本發明中活體外觀測 到化合物1436抑制DAT及NET支持此作為造成體重減輕之 機制。 因此，需要一種可安全誘發肥胖個體快速減輕體重之藥 物，其中肥胖症為飲食所誘發之肥胖症。此類型藥物亦適 用於治療歸因於肥胖症、第II型糖尿病之肥胖症、高血清 膽固醇、睡眠呼吸中止症（尤其在皮克威克症候群中）、非 酒精性脂肪變性肝炎及肥胖患者之手術併發症。 【發明内容】 本發明之一態樣為一種藉由投予化合物1436來快速誘發 外因性肥胖受檢者體重減輕之方法。 本發明之另一態樣為一種藉由投與化合物1436來治療與 120542.doc -10· 200810765 外因性肥胖症相關之併發症（包括（但不限於）第η型糖尿 病、高血清膽固醇、心臟病發作及中風之發生、睡眠呼吸 中止症（尤其在皮克威克症候群中）、先天性肥胖症候群（包 括先天性瘦體激素、P0MC及MC4R缺乏）、非酒精性脂肪 變性肝炎及手術併發症）的方法。 另一悲樣為用化合物1436治療外因性肥胖哺乳動物以使 身體脂肪％顯著降低。 在本發明之另一態樣中，提供化合物1436形式之ρτρΐΒ 抑制劑，其證實對PTP1B之勝於其他磷酸酶的選擇性抑制 活性。 在一例示性實施例中，本發明係針對圖1之化合物（亦即 化合物1436)或其醫藥學上可接受之鹽或前藥。 本發明之另一態樣為包含治療有效量之化合物丨436以及 醫藥學上可接受之載劑之醫藥組合物。 本發明之另一態樣係關於一種選擇性抑制蛋白酪胺酸碟 酸酶1B勝於T細胞蛋白酪胺酸磷酸酶之方法，該方法包含 投與治療有效量之化合物14 3 6。 本發明之另一態樣係關於一種治療由蛋白酪胺酸磷酸酶 1B過度表現或蛋白酪胺酸磷酸酶1B之增強活性引起之病 症的方法’該方法包含將治療有效量之化合物1436投予有 需要之接受者。 本發明之另一態樣係關於一種治療第I型及第π型糖尿病 之方法’該方法包含將治療有效量之化合物1436投予與羅 患此等疾病之任一者之接受者。 120542.doc •11 - 200810765 本發明之另一態樣係關於一種治療肥胖症之方法，該方 法包含將治療有效量之化合物1436投予罹患肥胖症之接受 者。 本發明之另一態樣係關於一種藉由增加多巴胺或正腎上 腺素在其再攝入轉運體附近之量來治療病症之方法，該方 法包含將治療有效量之化合物1436投予有需要之接受者。 【實施方式】 定義 如本文所用之，，化合物1436”或”MSI_1436，，或簡單”1436” 係指圖1中結構表示之胺基固醇。化合物1436亦意欲涵蓋 游離鹼化合物之醫藥學上可接受之鹽。 如本文所用之術語”肥胖症”在關於人類時包括（但不限 於）體重指數超過至少約3 0之人類。 如本文所用之術語"肥胖症”在關於小鼠時包括（但不限 於）身體總脂肪％大於至少約25%之小鼠。 如本文所用之術語"外因性肥胖症”係指歸因於飲食過量 之肥胖症。 如本文所用之術語”皮克威克症候群"係指肥胖症、嗜眠 症、換氧不足及紅血球過多症之複合物。 如本文所用之術語"非酒精性脂肪變性肝炎"係指最常在 患有第II型糖尿病之肥胖女性中發現之肝部發炎疾病。 如本文所用之術語"骨關節炎，，係指因肥胖>而加重之非 炎性退行性關節疾病。 x 如本文所用之術語"基礎代謝率"或職係指哺乳動物 120542.doc •12- 200810765 所燃燒之熱量。 係指哺乳動物（包括 (包括人類）休息時為保持正常身體功能 如本文所用之術語”減少之熱量攝入，， (但不限於）人類）消耗之熱量減少。 如本文所用之術語"選擇性抑制蛋白赂胺酸磷酸酶_ ΙΒ(ΡΤΡΙΒ)勝過T細胞蛋白酪胺酸磷酸酶-1B(TcpTp)”係指

以比T細胞蛋白酪胺酸磷酸酶-值小至少約4〇倍之 ICw值抑制蛋白酪胺酸磷酸酶-1B。在特定實施例中，抑制 PTP1B之1^值比抑制TCPTP之ICw值小至少約5〇倍或至少 約60倍或至少約70倍或至少約80倍或至少約9〇倍或至少約 100倍或至少約200倍。 如本文所用之術語，，抑制劑”係指阻止？”^結合其内因 性基質及/或阻止由PTP1B中介在其内因性基質（包括（但不 限於）胰島素受體酪胺酸激酶（IRTK)及IRTK之片段）及人造 基質（諸如對硝基苯基磷酸酯）上脫磷酸之化合物。 如本文所用之術語，，選擇性，，係指化合物根據與其他酶（包 括（但不限於）TC-PTP、SHP-2、LAR、CD45、PP2B 及 Cdc25c)之IC5〇值相比的PTP1B酶之IC5〇值具有至少約3倍更 大之抑制。 如本文所用之"有效量，，為足以實現有益或所需結果之 量。舉例而言，治療量為達成所需治療效果之量。此量可 與預防有效量相同或不同，預防有效量為預防疾病或疾病 症狀發作所需之量。有效量可以一或多次投藥、施加或劑 量來投予。在一實施例中，有效量為誘發肥胖個體體重減 輕之化合物1436之量。 120542.doc -13- 200810765 治療方法

在本發明中已顯示胺基_化合物1436誘發飲食誘發肥 胖症之小鼠的體重快速減輕。此外’所觀_之體重減輕 在取胖小鼠中最大且其主要歸因於脂肪損耗而非任何蛋白 質損耗。亦觀測到經1436處理之最胖小鼠比其對飼對應小 鼠顯著減輕更多體重，此表明誘發由多於食慾抑制引起之 體重減輕。令人驚奇地，觀測到一段時間處理(諸如約7至 約1〇天處理)後對對飼小鼠而言體重減輕速率似乎下降而 對經H36處理之小鼠而言速率下降較小。經㈣處理之组 與對飼組之間的最終體重差異似乎至少部分歸因於經1436 處理之組的脂肪減少相對較大。 :療外因性肥胖症之最常見方法為抑制飲食。此方法具 有三個主要問題：⑴個體順應性；(2)不但減少脂肪而且 減少顯著量肌肉之趨勢；及（3)個體代謝復位至較低水平。 用化合物1436治療克服所有此等問題。醫師控制之藥物 治療極大改良個體順應性。如圖6如3中所示，經化合 物1436治療後，脂肪顯著減少，而同時蛋白質減少很少： 如圖3-5中所不’代謝復位似乎未發生，因為甚至當飲食 經處理之動物體重減輕穩定時經1436處理之動物體重繼續 減輕。 、 化口物143 6之醫藥學上可接受之鹽包括自無機酸或驗或 有機酸或鹼形成m無毒鹽或四級銨鹽。該等酸加成鹽 之貝例包括乙酸鹽、己二酸鹽、苯甲酸鹽、苯石黃酸鹽、捧 松酉夂鹽、樟腦酸鹽、十二烷基硫酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸 120542.doc -14- 200810765 鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、硝酸鹽、草酸 鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽及酒石酸鹽。 驗式鹽包括銨鹽、鹼金屬鹽（諸如鈉鹽及鉀鹽）、鹼土金屬 鹽（諸如鈣鹽及鎂鹽）、具有有機鹼之鹽（諸如二環己胺鹽） 及具有胺基酸（諸如精胺酸）之鹽。驗性含氮基團亦可經（例 如）烧基1¾化物季錄化。 除載劑外，本發明之醫藥組合物亦可包括穩定劑及防腐 劑。熟習此項技術者已知之典型載劑、穩定劑及佐劑之實 例參 ^Remington: The Science and Practice of Pharmacy， 第 21 版（Lippincott，Williams & Wilkins，PA (2005)) 〇 化合物1436可單獨投予或較佳以包含1436以及至少一種 醫藥學上可接受之載劑之醫藥調配物的形式投予。視情況 而言，熟習此項技術者已知之其他療法可與1436之投藥組 合。 化合物143 6之活體内投予可以一次給藥、貫穿治療過程 連續或間歇多次給藥來實現。在單次或分次每日給藥中， 劑量範圍為約〇·〇5 mg/kg至約5 mg/kg，諸如介於約0·07 mg/kg至約3 mg/kg之間，諸如介於約〇1 至約 2 mg/kg之間，諸如介於約〇·3 mg/kg至約15 mg/kg之間， 諸如介於約0.5 mg/kg至約1 mg/kg之間。判定最有效投藥 方式及劑I之方法為熟習此項技術者所熟知且視用於治療 之組合物、治療目的、所治療之目標細胞及所治療之受檢 者而變。可進行單次或多次投藥，其中劑量水平及類型由 治療醫師選擇。亦可投予化合物1436之延長、延遲及/或 120542.doc -15- 200810765 持續釋放調配物。 可藉由任何適合途徑（包括經口、直腸、鼻内、局部（包 括經皮、氣霧劑、口腔及舌下）、非經腸（包括皮下、肌肉 内、靜脈内）、腹膜内及肺部）投予含有化合物1436之醫藥 組合物。應暸解較佳途徑將視接受者之病症及年齡及所治 療之疾病而變。 實例 實例1-誘發飲食誘發肥胖症之小鼠的體重減輕 小鼠及研究設計在斷乳時，使來自傑克遜實驗室 (Jackson Laboratories，Bar Harbor，Maine，USA)之雄性 AKR/J小鼠進行10%、45%或60%之脂肪kcal飲食（Research Diets，Inc·，New Brunswick，NJ，USA)。每週稱重小鼠且在 攝入不同脂肪飲食13-14週後開始治療。在即將開始治療 前將來自所有三種飲食之小鼠進一步隨機再分成在相同脂 肪組成飲食内且體重分佈均勻之三組。以q7dx4之時程給 藥（腹膜内途徑）所有小鼠，其中第一次1436劑量為10 mg/kg且所有剩餘劑量為5 mg/kg。向經食鹽水處理之動物 投予10 mL/kg。以相同q7dx4之時程在與其他組錯開1天時 給予對飼動物食鹽水（10 mL/kg)。每曰稱重剩餘食物以作 為食物消耗之量測。分配對飼組由24小時前經1436處理之 組消耗的確切量之食物。所有涉及小鼠之程序均根據由實 驗動物管理與使用委員會（Institutional Animal Care and Use Committee)批准之方案實施。 如圖2中可見，進行45%及60%脂肪飲食之小鼠變胖，而 120542.doc -16- 200810765 進行10%脂肪飲食（正常小鼠飲食）之彼等小鼠正常增重。 進行60%脂肪飲食之動物比餵養45%飲食之動物顯著較重 且兩者均比餵養10%脂肪飲食之彼等動物顯著較重。合二 組經1436處理時（圖2中在第〇天開始），所有三組均減^體 重’但小鼠愈胖體重減輕愈快且體重減輕愈大，因為在二 週結束時所有三組均達到約相同體重（圖2)。 圖3-5展示1436對體重減輕之影響比單獨飲食之影響大 (例如基於比較經1436處理之組的體重減輕與對飼組之體 重減輕）。此影響在60%脂肪組中最大，其中p值為〇〇13。 此觀測支持化合物1436亦藉由阻止基礎代謝率復位（在飲 艮誘發之體重減輕中常見）來誘發體重減輕的結論。 身體組成根據經修改之所述方法（〇fficia][ Methods of

Analysis of AOAC INTERNATIONAL·· 2000)測定身體組成 (水分/〇、月曰肪％、蛋白質及灰分％)。簡言之，在！ 2 5。〇下 乾燥樣品歷時4小時以測定水分。乾燥後，將戊烷滴過樣 品5小時以測定脂肪組成。經由針對氮偵測之燃燒方法來 測定蛋白質，且使用係數6·25將氮。/〇轉化成蛋白質。/〇。為 測定灰分，在550°C下燃燒樣品5小時且按重量分析定量。 圖6-8展示在研究結束時1〇%、45%及6〇%脂肪飲食組之 總身體組成。治療前之飲食影響展示對高脂飲食而言身體 脂肪％大於30。/。’而對正常飲食而言身體脂肪％低於2〇%。 在所有飲食上經1436處理之組及對飼組均減少顯著身體脂 肪％。存在一趨勢，即與對飼組相比，經1436處理之組的 身體脂肪損耗較大。 120542.doc -17- 200810765 組織結構將肩内褐色脂肪組織固定於1 〇%鋅福馬林 (formalin)(Fisher Scientific，Kalamazoo，MI，USA)中 48小 時且轉移至70% EtOH中。將組織埋入石蠟中且將5 μΜ切 片施加至玻璃顯微鏡載玻片。用蘇木精/曙紅染色切片且 用識別力18.2彩色馬賽克相機（Diagnostic Instruments, Sterling Heights，MI，USA)在 Olympus AX70 顯微鏡 (Melville，NY，USA)上捕獲影像。 圖9展示正常小鼠（經食鹽水處理之10%脂肪飲食，圖 A)、經食鹽水處理之60%飲食之小鼠（圖B)、經1436處理之 60%飲食之小鼠（圖C)及60%飲食之對飼小鼠中褐色脂肪組 織（BAT)之脂肪量。經1436處理之小鼠已減去由60%飲食 所增加之所有脂肪且超過僅進行限制飲食之小鼠（對飼）。 圖13展示正常小鼠（經食鹽水處理之10%脂肪飲食，圖 A)、經食鹽水處理之60%飲食之小鼠（圖B)、經化合物1436 處理之60%飲食之小鼠（圖C)及60%飲食之對飼小鼠中白色 脂肪組織（WAT)之脂肪量。經1436處理之小鼠已減去由 60%飲食所增加之所有脂肪且超過僅限制飲食之小鼠（對 飼）。 實例2-酪胺酸磷酸酶之選擇性抑制 藉由MDS Pharma在酶檢定中使用在大腸桿菌（五· co/z_)中 表現之人類重組蛋白且分別以酪胺酸磷酸肽（20 pg/ml)或 DiFMUP(10 μΜ)為基質在感染下測定化合物1436對PTP1B 及TCPTP之抑制。在ΡΤΡ1Β檢定中，經由在室溫下用各種 濃度之1436(0.05 μΜ至500 μΜ)培育30分鐘後ELISA分析剩 I20542.doc -18- 200810765 餘酪胺酸磷酸肽來定量磷酸酶活性。使用資料分析 ToolboxTM(MDL Information Systems)藉由非線性最小平方 回歸分析來測定IC5〇值（1.14 μΜ)(參見表1)。TCPTP檢定需 要37°C下酶及基質預先培育1 5分鐘接著37°C下用各種濃度 1436(0.05 μΜ至50 μΜ)培育60分鐘。TCPTP活性藉由螢光 分光光度法定量DiFMU來評估。因為在所測試之任何濃度 下之1436下未證實抑制，所以估計IC5G大於50 μΜ(表1)。 表1: 1436抑制酪胺酸磷酸酶之IC50值 ΡΤΡ1Β TCPTP 〜IC50 (μΜ) 1.14 >50.0 實例3-抑制結合多巴胺（DAT)及正腎上腺素轉運體（NET) 在放射性配位子結合檢定中使用分別在CHO-K1或 MDCK細胞中表現之人類重組蛋白質來測定MSI-1436抑制 結合多巴胺轉運體（DAT)及正腎上腺素轉運體（NET)。在 1436(0.005 μΜ 至 50 μΜ)存在下於 4°C 下用[125I] RTI_55(對 DAT而言0.15 nM，對NET而言0·20 nM)培育膜製劑，歷時 3小時。如在PTP1B檢定中測定IC50值（參見表2)。 表2: 1436抑制結合DAT及NET之IC50值 DAT NET 〜ic5_m) 1.74 3.24 實例4-MSI-1436對細胞攝入多巴胺及正腎上腺素之抑制 使用表現多巴胺轉運體之CHO-K1細胞及表現正腎上腺 素轉運體之MDCK細胞來研究在化合物1436(0.05 μΜ至5 120542.doc -19- 200810765 μΜ)存在下多巴胺及正腎上腺素之攝入。室溫下在化合物 存在下用放射性配位子培育細胞10分鐘後，[3Η]多巴胺或 [3Η]正腎上腺素之定量顯示1436之拮抗作用。若與諾米芬 辛（nomifensine)(DAT)或地昔帕明（desipramine)(NET)之誘 發反應相比250%抑制攝入，則滿足拮抗作用之重要標 準。表3詳述所量測之拮抗作用及圖1 〇顯示劑量反應曲 線。計算出抑制多巴胺攝入之IC5〇值為422 nM及抑制正腎 上腺素攝入之IC5G值為718 nM。 表3 : 1436對多巴胺及正腎上腺素攝入之抑制 入 r&T 攝 胺 巴 多 度 濃 43 30.5).25).05 抑制°/〇 94 81 57 39 正腎上腺素攝入 95 78 33 26 22 5.0 2.5 0.5 0.25 0.05 貝例5-蛋白酪胺酸磷酸酶⑺之活體外及活體内抑制 在活體外將HepG2細胞（永生化肝細胞）用或不用1〇 nM胰 島素、10 μΜ MSI-1436兩者處理30分鐘或3小時。圖11展 示細胞溶解產物之西方墨點分析。未看到胰島素受體％ir_ β)量的差別（圖A)。胰島素受體β之免疫沉澱反應接著磷酸 化酪胺酸之西方墨點分析顯示單獨胰島素誘發讯卬磷酸化 120542.doc -20- 200810765 且MSI-1436未誘發磷酸化（圖B)。經胰島素及 者處理30分鐘之細胞證實與胰島素誘發之磷酸化相比磷酸 化增加（圖B)。此影響在3小時時略微減小。 為離體檢測]\/181-1436對？丁？13之作用，用媒劑、]^81-. 1436(單次給藥，10 mg/kg，腹膜内）處理ob/ob小鼠或對飼 • 對照小鼠（每組n=4)。單次處理後24小時，麻醉小鼠且經 由切割暴鉻門靜脈。將胰島素或磷酸鹽緩衝食鹽水（PBs) 注射至門靜脈且在注射後2 min採集肝臟。使肝臟溶解且 將溶解產物與抗胰島素受體基質免疫沉澱，且接 著用表示磷酸化胰島素受體基質“（PJRH)之所得墨點進 行點樣。使用成像軟體來分析墨點。圖12展示活體内MSI_ 1436增強胰島素誘發之IRSel磷酸化且比對飼對胰島素誘 發之影響程度大（圖12)。 除非另外定義，否則本文所有科技術語具有與一般熟習 本發明所屬之技術者通常理解之含義相同的含義。雖然類 瞻似於或等同於本文所述者之方法及材料可用於本發明之實 施或測試中’但本文描述較佳方法及材料。本文引用之所 有專利及公開案均以全文引用的方式併入本文中。 ' 【圖式簡單說明】 圓1展示化合物14 3 6之結構。 圖2展示高脂肪飲食對鼠科動物體重之影響及藉由化合 物1436處理之逆轉。 圖3展示在各種處理下進行6〇%脂肪飲食之小鼠體重改 變％ 〇 120542.doc •21 200810765 圖4展示在各種處理下進行45%脂肪飲食之小鼠體重改 變％。 圖5展示在各種處理下進行i 〇%脂肪飲食之小鼠體重改 變％。 圖6展示在各種處理下進行6〇%脂肪飲食之小鼠的身體 組成。 圖7展示在各種處理下進行45%脂肪飲食之小鼠的身體 組成。 圖8展示在各種處理下進行1〇%脂肪飲食之小鼠的身體 組成。 圖9展示正常小鼠與在各種處理下進行6〇%脂肪飲食之 小鼠之褐色脂肪組織的組織結構。 圖10展示藉由MSI-1436抑制細胞攝入多巴胺及正腎上腺 素之劑量-反應曲線。 圖11展示MSI-1436對胰島素受體β磷酸化程度之影響的 西方墨點分析。 圖12展示MSI-1436對胰島辛受I#其槪 旬系又體基質-1磷酸化程度之影 響的西方墨點分析。 圖13展示正常小氣與在各種處理下進行60%脂肪飲食之 小鼠之白色脂肪組織的組織結構。 120542.doc -22.

Claims (1)

1. 200810765 十、申請專利範圍： L -種，發肥胖哺乳動物體重減輕之方法，其包含：投予 有效里之組合物’其包含醫藥學上可接受之載劑或賦邢 劑及根據下式之胺基固醇化合物： "

   2·如明求項1之方法，其中該哺乳動物亦罹患選自由下列 、 病症·弟II型糖尿病、高血清膽固醇、睡眠呼吸 " 皮克威克症候群（Pickwickian syndrome)及非酒 精性脂肪變性肝炎。 月求項1之方法’其中該哺乳動物為外因性肥胖。 4·如印求項2之方法，其中該病症為第II型糖尿病。 5·如請求項2之方法，其中該病症為高血清膽固醇。 6·如明求項2之方法，其中該病症為睡眠呼吸中止症。 7·如睛求項2之方法，其中該病症為皮克威克症候群。 如明求項2之方法，其中該病症為非酒精性脂肪變性肝 炎。 9·如凊求項1之方法，其中該肥胖哺乳動物需要手術程 序。 10. —種誘發外因性肥胖哺乳動物身體脂肪快速減少之方 120542.doc 200810765 法’其包含以下步驟：投予有效量之組合物 藥學上可接受之載劑或賦形劑及根據：包含醫 合物： 私基固醇化

   Η 11. 或其醫藥學上可接受之鹽。 一種敏化哺乳動物之胰島 要之哺乳動物有效量之根 素之方法，其包含：投予有需 據下式之胺基固醇化合物：

   Η 或其醫藥學上可接受之鹽。 12 ·如請求項11之方法 13 ·如請求項11之方法 型糖尿病之治療。 其中該哺乳動物為人類。 其中該胰島素敏化包含第ϊ型或第π 14. 如請求項11之方法，豆巾 八中以胰島素破化包含肥胖症之治 療。 15. -種在哺乳動物體内選擇性抑制ρτρΐΒ酶勝過π·酶 120542.doc 200810765 之方法，其包含：捂 ^ ^ 予有需要之哺乳動物有效量之根據 下式之胺基固醇化合物：

   0 16.如請求項15之方法，其中該ρτρΐΒ 類的。 酶及該TCPTP酶係人 17 ·如請求項i 5之方丰 其中該哺乳動物為人類。18· =求項15之方法’其中該選擇性抑❹·酶勝過 ΤΡ酶包含改良第！型或第π型糖尿病之治療。 19·如請求項15之方法，直 中δ亥選擇性抑制ΡΤΡ1Β酶勝過 TCPTP酶包含改良肥胖症之治療。 2〇·如請求項讥或^之方 万忐其中該化合物進一步包含醫藥 學上可接受之載劑或賦形劑。 〃 21·如請求項η*15之方 投予。 22·如請求項^或^之方 予0 法’其中該化合物係經由皮下注 法’其中該化合物係經由吸入 射 投 、用於敏化哺礼動物之胰島素之醫藥組合物，其包含 下式化合物： 120542.doc 200810765

   Ο 24. —種維持哺乳動物體内基礎代 度代w射旱冋時減少熱量攝入之 方法，其包含投予該哺乳動物一旦 — 两孔動物里之組合物，其包含醫 藥學上可接受之載劑或賦形劑 合物之： ^及根據下式之胺基固醇化

   〇 其中該胺基固醇化合物以右对嫉& 乂有效維持該哺乳動物基礎代謝 率之量投予。 25·如請求項11至24中任一項之方沬 朴丄 $(万去’其中該哺乳動物為人 類。 26. -種抑㈣乳動物之多巴胺攝人之方法，其包含投予該有 需要之哺乳動物有效量之根據下式之胺基固醇化合物：

   '0 200810765 或其醫藥學上可接受之鹽。 27. 如請求項26之方法’其中該喷乳動物為人類。 28. 如請求項26之方法’其中該抑制多 型或第II型糖尿病之治療。 匕3改良第] 29·如請求項26之方法’其中 胖症之治療。 >巴胺攝入包含改良肥 30· —種抑制哺乳動物之正腎 工斗士 腺素攝入之方法，其包含轳 予该有需要之哺乳動物有效 合物： 里之根據下式之胺基固醇化

   b 或其醫藥學上可接受之鹽。 31·如請求項30之方法，直由 /、中該哺乳動物為人類。 3 2 ·如請求項3 〇之方法，i 其中该抑制正腎上腺素攝入包含 良弟I型或第II型糖尿病之治療。 33·如請求項3〇之方沐 ，、中該抑制正腎上腺素攝入包含 良肥胖症之治療。 34·如請求項26或30之方法 / 去，其中該化合物進一步包含醫 予上可接受之載劑或賦形劑。 35_如請求項26或3〇之太& 法，其中該化合物經由皮下注射 120542.doc 200810765 予。 36·如請求項26或30之方法，其中該化合物經由吸入投予。 3 7. —種用於敏化哺乳動物之胰島素之醫藥組合物，其包含 下式化合物：

   或其醫藥學上可接受之鹽。

   120542.doc