TW202327589A

TW202327589A - 肝病之組合療法

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Publication number: TW202327589A
Application number: TW111143279A
Authority: TW
Inventors: 馬蒂金費諾; 凱文克魯雀; 克里斯多弗Ｔ瓊斯; 索斯頓Ａ柯奇柏格; 宇錦王
Original assignee: 美商拓臻製藥公司
Priority date: 2021-11-11
Filing date: 2022-11-11
Publication date: 2023-07-16
Also published as: WO2023086561A1; US20230241071A1

Abstract

本文提供用於治療患者之肝病(包括非酒精性脂肪變性肝炎(NASH))及其症狀及臨床表現的方法，該等方法尤其利用SSAO抑制劑與THR-β促效劑之組合療法。亦提供SSAO抑制劑與THR-β促效劑用於治療NASH之固定劑量組合。

Description

肝病之組合療法

本發明係關於用於治療患者之肝病的方法及組成物。

脂肪肝病(FLD)涵蓋一系列疾病狀態，其特徵為脂肪在肝中過度積聚，通常伴有發炎。FLD可導致非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)，其特徵可為胰島素抗性。若不加以治療，則NAFLD可能惡化成持續的發炎反應或非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、漸進性肝纖維化，最終惡化為肝硬化。在歐洲及美國，NAFLD為肝臟移植的第二大最常見原因。因此，治療需求非常緊急，但由於患者缺乏明顯症狀，患者可能缺乏維持治療方案的動力，尤其是繁重的治療方案，例如注射藥物、每天投與多次的藥物，或任何產生危險或刺激性副作用的藥物。目前並無NASH的核准療法。

本文提供用於治療有需要患者之諸如NASH之肝病的方法及組成物。該等方法包含將半卡肼敏感性胺氧化酶(SSAO)/血管黏附蛋白-1 (VAP-1)抑制劑及甲狀腺激素受體β (THR-β)促效劑投與患者，如本文所述。在一些實施例中，該等方法包含將半卡肼敏感性胺氧化酶(SSAO)/血管黏附蛋白-1 (VAP-1)抑制劑、甲狀腺激素受體β (THR-β)促效劑及法尼醇X受體(FXR)促效劑投與患者，如本文所述。

在一個態樣中，本發明提供減輕有需要之患者之肝炎的方法，其包含向該患者投與治療有效量之SSAO抑制劑及治療有效量之THR-β促效劑。在一些實施例中，本發明提供減輕有需要之患者之肝炎的方法，其包含向該患者投與治療有效量之SSAO抑制劑、治療有效量之THR-β促效劑及FXR促效劑，如本文所述。

在另一態樣中，本發明提供治療特徵為肝纖維化之疾病或病狀的方法，其包含向患者投與治療有效量之SSAO抑制劑及治療有效量之THR-β促效劑。在一些實施例中，本發明提供治療特徵為肝纖維化之疾病或病狀的方法，其包含向患者投與治療有效量之SSAO抑制劑、治療有效量之THR-β促效劑及FXR促效劑，如本文所述。

在另一態樣中，本發明提供治療特徵為肝臟脂肪變性之疾病或病狀的方法，其包含向患者投與治療有效量之SSAO抑制劑及治療有效量之THR-β促效劑。在一些實施例中，本發明提供治療特徵為肝臟脂肪變性之疾病或病狀的方法，其包含向患者投與治療有效量之SSAO抑制劑、治療有效量之THR-β促效劑及FXR促效劑，如本文所述。

在另一態樣中，本發明提供治療或預防有需要患者之NASH的方法，該方法包含向患者投與治療有效量之SSAO抑制劑及治療有效量之THR-β促效劑。在一些實施例中，本發明提供治療或預防有需要患者之NASH之方法，該方法包含向患者投與治療有效量之SSAO抑制劑、治療有效量之THR-β促效劑及FXR促效劑，如本文所述。在一個實施例中，有需要之患者為患有脂肪肝疾病(諸如NAFLD)的患者。在另一實施例中，有需要的患者為患有代謝症候群之患者。

在一些實施例中，SSAO抑制劑及THR-β促效劑及視情況存在之FXR促效劑同時投與。在一些此類實施例中，SSAO抑制劑及THR-β促效劑及視情況存在之FXR促效劑以固定劑量組成物形式提供於如本文所述之單一醫藥組成物中。在其他實施例中，SSAO抑制劑及THR-β促效劑及視情況存在之FXR促效劑依序投與。在一些實施例中，SSAO抑制劑及THR-β促效劑中之任一者或兩者經口投與。在一些實施例中，SSAO抑制劑及THR-β促效劑及FXR促效劑中之至少一者經口投與。

在一些實施例中，患者患有肝病及糖尿病。在一些實施例中，患者患有肝病及心血管疾病。在一些實施例中，治療期為患者之剩餘壽命。在一些實施例中，方法不包含投與抗組織胺、免疫抑制劑、類固醇、利福平(rifampicin)、類鴉片拮抗劑或選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)。

在一些實施例中，SSAO抑制劑每天投與一次。在一些實施例中，SSAO抑制劑每天投與兩次。在一些實施例中，THR-β促效劑每天投與一次。在一些實施例中，THR-β促效劑每天投與兩次。在一些實施例中，FXR促效劑每天投與一次。在一些實施例中，FXR促效劑每天投與兩次。在一些實施例中，投與包含在一或多週之治療期每天投與SSAO抑制劑。在一些實施例中，投與包含在一或多週之治療期每天投與THR-β促效劑。在一些實施例中，投與包含在一或多週之治療期每天投與FXR促效劑。在一些實施例中，投與包含在一或多週之治療期每天投與SSAO抑制劑及每天投與THR-β促效劑。在一些實施例中，投與包含在一或多週之治療期每天投與SSAO抑制劑、每天投與THR-β促效劑及每天投與FXR促效劑。

多種不同的SSAO抑制劑及THR-β促效劑及視情況存在的FXR促效劑可用於達成針對如本文所論述之肝臟疾病的有益作用。舉例而言，在一些實施例中，向有需要之患者投與之SSAO抑制劑為式(I)化合物 (I) 其中： n為1或2；以及 R1為H或-CH ₃，或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，向有需要的患者投與之SSAO抑制劑為式(I)化合物，其中n為1,或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，SSAO抑制劑為式(I)化合物，其中n為2,或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，向有需要的患者投與之SSAO抑制劑為式(I)化合物，其中R1為H，或其醫藥學上可接受之鹽。在又另一個實施例中，本發明提供式(II)化合物，其中R1為-CH ₃，或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，向有需要之患者投與之SSAO抑制劑為，其為(E)-3-氟-2-(((2-(4-甲氧基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)甲基)丙-2-烯-1-胺或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，向有需要之患者投與之SSAO抑制劑為(E)-3-氟-2-(((2-(4-甲氧基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)甲基)丙-2-烯-1-胺二鹽酸鹽。在一些實施例中，向有需要之患者投與的SSAO抑制劑為(E)-3-氟-2-(((2-(4-甲氧基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)甲基)丙-2-烯-1-胺4-甲基苯磺酸鹽。

在一些實施例中，向有需要之患者投與的THR-β促效劑為瑞美替羅(resmetirom)(MGL-3196)。在一些實施例中，向有需要之患者投與的THR-β促效劑為VK2809 (Viking Therapeutics)。在一些實施例中，向有需要之患者投與的THR-β促效劑為索貝替羅(sobetirome)。在一些實施例中，向有需要之患者投與的THR-β促效劑為伊羅替羅(eprotirome)。在一些實施例中，向有需要之患者投與的THR-β促效劑為ALG-055009 (Aligo)。在一些實施例中，向有需要之患者投與的THR-β促效劑為CNPT-101101。在一些實施例中，向有需要之患者投與的THR-β促效劑為CNPT-101207。在一些實施例中，向有需要之患者投與的THR-β促效劑為ASC41 (Ascletis)。

在一些實施例中，THR-β促效劑為式(II)化合物 (II) 其中： R ₁係選自由以下組成之群：氫、氰基、經取代或未經取代之C _1-6烷基，及經取代或未經取代之C _3-6環烷基，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群； R ₂及R ₃各自獨立地選自由以下組成之群：鹵素原子及經取代或未經取代之C _1-6烷基，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群；環A為經取代或未經取代之飽和或不飽和C _5-10脂族環，或經取代或未經取代之C _5-10芳族環，取代基為選自由以下組成之群的一或多種物質：氫、鹵素原子、羥基、-OCF ₃、-NH ₂、-NHC _1-4烷基、-N(C _1-4烷基) ₂、-CONH ₂、-CONHC _1-4烷基、-CON(C _1-4烷基) ₂、-NHCOC _1-4烷基、C _1-6烷基、C _1-6烷氧基或C _3-6環烷基，且當包含兩個取代基時，該兩個取代基可與其連接之碳形成環結構；以及鹵素原子係選自由F、Cl及Br組成之群，或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，向有需要的患者投與的THR-β促效劑為式(IIa)化合物 (IIa) 其中： R ₁至R ₃之定義係如本文中關於式(II)所詳述； R ₄係選自由以下組成之群：氫、鹵素原子、羥基、-OCF ₃、-NH ₂、-NHC _1-4烷基、-N(C _1-4烷基) ₂、-CONH ₂、-CONHC _1-4烷基、-CON(C _1-4烷基) ₂、-NHCOC _1-4烷基、C _1-6烷基、C _1-6烷氧基及C _3-6環烷基； m為1至4範圍內之整數；以及該等鹵素原子選自由F、Cl及Br組成之群。或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，其中R ₄選自由以下組成之群：氫、鹵素原子、羥基、-OCF ₃、C _1-6烷基、C _1-6烷氧基及C _3-6環烷基；且m為1至3範圍內之整數。

在一些實施例中，其中R ₁係選自由氫、氰基及經取代或未經取代之C _1-6烷基組成之群，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群；且鹵素原子係選自由F、Cl及Br組成之群。

在一些實施例中，THR-β促效劑為，其為2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4-二氫呔 -1-基)氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-甲腈或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，THR-β促效劑為2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4-二氫呔 -1-基)氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-甲腈鉀鹽。在一些實施例中，THR-β促效劑為2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4-二氫呔 -1-基)氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-甲腈鈉鹽。

在一些實施例中，FXR促效劑為奧貝膽酸(obeticholic acid)。在一些實施例中，FXR促效劑為希勒氟索(cilofexor)。在一些實施例中，FXR促效劑為曲匹氟索(tropifexor)。在一些實施例中，FXR促效劑為EYP001 (沃那氟素(Vonafexor)，建議的INN)。在一些實施例中，FXR促效劑為MET409 (Metacrine)。在一些實施例中，FXR促效劑為EDP-305 (Enanta)。

在一些實施例中，FXR促效劑為式(III)化合物： (III) 其中： q為1或2； R ¹為氯、氟或三氟甲氧基； R ²為氫、氯、氟或三氟甲氧基； R ^3a為三氟甲基、環丙基或異丙基； X為CH或N，限制條件為當X為CH時，q為1；以及 Ar ¹為吲哚基、苯并噻吩基、萘基、苯基、苯并異噻唑基、吲唑基或吡啶基，其各自視情況經甲基或苯基取代，或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，FXR促效劑為或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，提供了使用半卡肼敏感性胺氧化酶(SSAO)抑制劑及甲狀腺激素受體β (THR-β)促效劑及視情況存在的FXR促效劑治療有需要患者之肝病的方法，其包含投與治療有效量之SSAO抑制劑，其中該SSAO抑制劑為，或其醫藥學上可接受之鹽，及投與治療有效量之THR-β促效劑，其中該THR-β促效劑為，或其醫藥學上可接受之鹽，及視情況投與治療有效量之FXR促效劑，其中該肝病係選自肝炎、肝纖維化、酒精誘導性纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發硬化性膽管炎(PSC)、原發膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。在一些實施例中，肝病為NASH。

在一些實施例中，提供了使用半卡肼敏感性胺氧化酶(SSAO)抑制劑及甲狀腺激素受體β (THR-β)促效劑治療有需要患者之肝病的方法，其包含投與治療有效量之SSAO抑制劑，其中該SSAO抑制劑為，或其醫藥學上可接受之鹽，及投與治療有效量之THR-β促效劑，其中該THR-β促效劑為，或其醫藥學上可接受之鹽，及視情況投與治療有效量之FXR促效劑，其中該FXR促效劑為，或其醫藥學上可接受之鹽，其中該肝病係選自肝炎、肝纖維化、酒精誘導性纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發硬化性膽管炎(PSC)、原發膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。在一些實施例中，肝病為NASH。

在一些實施例中，提供了使用半卡肼敏感性胺氧化酶(SSAO)抑制劑及甲狀腺激素受體β (THR-β)促效劑治療有需要患者之肝病的方法，其包含投與治療有效量之SSAO抑制劑，其中該SSAO抑制劑為 4-甲基苯磺酸鹽，及投與治療有效量之THR-β促效劑，其中該THR-β促效劑為鉀鹽，及視情況投與治療有效量之FXR促效劑，其中該FXR促效劑為，其中該肝病係選自肝炎、肝纖維化、酒精誘導性纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發硬化性膽管炎(PSC)、原發膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。在一些實施例中，肝病為NASH。

相關申請案之交叉參考

本申請案主張美國臨時申請案第63/263,933號(2021年11月11日提交)及第63/349,977號(2022年7月6日提交)的權益及優先權。前述專利申請案之內容以全文引用之方式併入本文中用於所有目的。定義

除非另外指明，否則如本文所使用，下列定義應適用。此外，若本文所用之任何術語或符號的定義未列於下文，則其應具有本技藝中之一般含義。

「包含」意指組成物及方法包括所引述之成分，但不排除其他。「基本上由……組成」用於定義組成物及方法時，應意謂組合中排除具有任何實質意義的其他成分。舉例而言，基本上由如本文所定義之成分組成之組成物將不排除對所主張發明之基本及新穎特徵無實質影響的其他成分。「由……組成」應意謂排除超過痕量之例如其他成分及引述之實質方法步驟。由此等過渡術語中之每一者定義的實施例屬於本發明之範疇內。

「組合療法」或「組合治療」係指使用兩種或更多種藥物或藥劑進行治療，例如使用本文所用之式(I)或(II)化合物以及另一種適用於治療肝病(諸如NAFLD、NASH及其各自的症狀及臨床表現)之藥劑為組合療法。「組合」投與係指以兩種藥劑之藥理學作用在患者中同時顯現之任何方式投與兩種藥劑(例如如本文所用之式(I)或(II)化合物，及另一種藥劑)。因此，組合投與不要求使用單一醫藥組成物、相同劑型或甚至相同投與途徑來投與兩種藥劑，或在恰好相同的時間投與兩種藥劑。兩種藥劑亦可調配成醫藥學上可接受之單一組成物。此類單一組成物之非限制性實例為口服組成物或口服劑型。舉例而言，且不限於，經考慮，可依據本發明在組合療法中投與式(I)或(II)化合物。

如本文所用，術語「賦形劑」意謂可用於製備藥物或醫藥(諸如含有本發明化合物作為活性成分的錠劑)的惰性或無活性物質。術語賦形劑可涵蓋各種物質，包括但不限於用作以下的任何物質：黏合劑、崩解劑、包衣劑、壓縮/囊封助劑、乳膏或洗劑、潤滑劑、非經腸投與溶液、用於咀嚼錠、甜味劑或調味劑之材料、懸浮/膠凝劑或濕式造粒劑。黏合劑包括例如卡波姆(carbomers)、聚維酮(povidone)、三仙膠(xanthan gum)等；包衣劑包括例如鄰苯二甲酸乙酸纖維素、乙基纖維素、結冷膠(gellan gum)、麥芽糊精、腸溶包衣等；壓縮/囊封助劑包括例如碳酸鈣、右旋糖、dc果糖(dc意謂「可直接壓縮」)、dc蜂蜜、乳糖(無水物或單水合物；視情況與阿斯巴甜糖、纖維素或微晶纖維素組合)、dc澱粉、蔗糖等；崩解劑包括例如交聯羧甲基纖維素鈉、結冷膠、乙醇酸澱粉鈉等；乳膏或洗劑包括例如麥芽糊精、角叉菜膠等；潤滑劑包括例如硬脂酸鎂、硬脂酸、硬脂醯反丁烯二酸鈉等；用於咀嚼錠之材料包括例如右旋糖、dc果糖、乳糖(單水合物，視情況與阿斯巴甜糖或纖維素組合)等。懸浮/膠凝劑包括例如角叉菜膠、乙醇酸澱粉鈉、三仙膠等；甜味劑包括例如阿斯巴甜糖、右旋糖、dc果糖、山梨糖醇、dc蔗糖等；且濕式造粒劑包括例如碳酸鈣、麥芽糊精、微晶纖維素等。

「患者」係指哺乳動物且包括人類及非人類哺乳動物。患者之實例包括但不限於小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、豬、兔、貓、犬、山羊、綿羊、牛及人類。在一些實施例中，患者係指人類。

「醫藥學上可接受」係指安全且無毒的，較佳用於活體內投與，更佳用於人類投與。

「醫藥學上可接受之鹽」係指為醫藥學上可接受的鹽。本文所描述之化合物可以醫藥學上可接受之鹽形式進行投與。

「鹽」係指酸與鹼之間形成的離子化合物。當本文所提供之化合物含有酸性官能基時，此類鹽包括(但不限於)鹼金屬、鹼土金屬及銨鹽。如本文所用，銨鹽包括含有質子化氮鹼及烷基化氮鹼之鹽。適用於醫藥學上可接受之鹽的例示性及非限制性陽離子包括基於天然存在之胺基酸的Na、K、Rb、Cs、NH ₄、Ca、Ba、咪唑鎓及銨陽離子。當本文所用之化合物含有鹼官能基時，此類鹽包括但不限於有機酸之鹽，諸如羧酸及磺酸，及礦物酸，諸如鹵化氫、硫酸、磷酸及類似物。適用於醫藥學上可接受之鹽中的例示性及非限制性陰離子包括草酸根、反丁烯二酸根、順丁烯二酸根、乙酸根、丙酸根、丁二酸根、酒石酸根、氯離子、硫酸根、硫酸氫根、單磷酸根、二磷酸根及三磷酸根、甲磺酸根、甲苯磺酸根及其類似陰離子。

化合物或組成物之「治療有效量」或劑量係指使得患者之症狀得以減輕或抑制或存活期得以延長的化合物或組成物的量。結果可能需要化合物或組成物之多次劑量。

「治療(treatment)」或「治療(treating)」係指獲得包括臨床結果之有益或期望結果的方法。出於本發明之目的，有益或所需結果包括但不限於以下中之一或多者：減輕由疾病或病症引起之一或多種症狀；降低疾病或病症之程度；使疾病或病症穩定(例如預防或延遲疾病或病症惡化)；延遲疾病或病症發生或復發；延遲或減緩疾病或病症進展；改善疾病或病症狀態；使疾病或病症(不論部分或完全)緩解；將治療疾病或病症所需之一或多種其他藥物之劑量降低；增強用於治療疾病或病症之另一藥物之效果；延遲疾病或病症進展；提高患者生活品質；及/或延長患者存活期。「治療」亦涵蓋減少疾病或病症之病理後果。本發明方法涵蓋此等治療態樣中之任一或多者。

如本文所用，「延遲」疾病發展意謂推遲、阻礙、減緩、阻滯、穩定及/或延遲疾病發展及/或在其發展後減緩進展或改變潛在疾病過程及/或病程。此延遲可為不同時間長度，此視疾病病史及/或治療之個體而定。如熟習此項技術者顯而易見，足夠或顯著延緩可實際上涵蓋預防，從而使個體不出現與疾病相關之臨床症狀。「延遲」疾病發展之方法為與不使用該方法相比，在給定時間範圍內降低疾病發展機率及/或在給定時間範圍內降低疾病程度(包括穩定由疾病產生之一或多種症狀)的方法。

處於發展疾病之「風險」之個體可或可不患有可偵測之疾病，且可在本文所描述之治療方法之前可或可不呈現可偵測之疾病。「處於風險」表示個體有一或多個所謂的風險因素，此為與疾病發展相關的可量測參數。具有此等風險因素中之一或多者之個體出現疾病的機率高於不具有此等風險因素的個體。此等風險因素包括但不限於年齡、性別、人種、飲食、先前疾病之病史、前驅疾病之存在及基因(亦即遺傳)考慮因素。在一些實施例中，化合物可投與處於疾病或病狀之風險中或具有疾病或病狀之家族病史的個體(包括人類)。

「立體異構物(Stereoisomer/stereoisomers)」係指諸如但不限於在一或多個立構中心之對掌性方面或關於碳-碳或碳-氮雙鍵之順式或反式組態，構成原子之立體異構源性不同的化合物。立體異構物包括鏡像異構物及非鏡像異構物。

「烷基」係指具有1至12個碳原子、較佳1至10個碳原子、且更佳1至6個碳原子之單價飽和脂族烴基。此術語包括例如直鏈及分支鏈烴基，諸如甲基(CH ₃-)、乙基(CH ₃CH ₂-)、正丙基(CH ₃CH ₂CH ₂-)、異丙基((CH ₃) ₂CH-)、正丁基(CH ₃CH ₂CH ₂CH ₂-)、異丁基((CH ₃) ₂CHCH ₂-)、二級丁基((CH ₃)(CH ₃CH ₂)CH-)、三級丁基((CH ₃) ₃C-)、正戊基(CH ₃CH ₂CH ₂CH ₂CH ₂-)及新戊基((CH ₃) ₃CCH ₂-)。C _x烷基係指具有x數目個碳原子之烷基。

「伸烷基」係指具有1至12個碳原子、較佳1至10個碳原子且更佳1至6個碳原子之二價飽和脂族烴基。此術語包括例如直鏈及分支鏈烴基，諸如亞甲基(-CH ₂-)、伸乙基(-CH ₂CH ₂-或-CH(Me)-)、伸丙基(-CH ₂CH ₂CH ₂-或-CH(Me)CH ₂-，或-CH(Et)-)及其類似烴基。

「烯基」係指具有2至6個碳原子且較佳具有2至4個碳原子且具有至少1個、較佳1至2個乙烯(＞C=C＜)不飽和位點之直鏈或分支鏈單價烴基基團。此類基團之示例為例如乙烯基、烯丙基及丁-3-烯-1-基。此術語包括順式及反式異構體或此等異構體之混合物。C _x烷基係指具有x數目個碳原子之烯基。

「炔基」係指具有2至6個碳原子且較佳具有2至3個碳原子且具有至少1個、較佳1至2個乙炔(-C≡C-)不飽和位點之直鏈或分支鏈單價烴基基團。此類炔基之實例包括乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH ₂C≡CH)。C _x炔基係指具有x數目個碳原子之炔基。

「烷氧基」係指基團-O-烷基，其中烷基定義於本文中。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、三級丁氧基、二級二丁氧基及正戊氧基。

「芳基」係指6至14個碳原子之單價芳族碳環基，其具有單個環(例如苯基(Ph))或多個縮合環(例如萘基或蒽基)，該等縮合環可為或可不為芳族(例如2-苯并唑啉酮、2H-1,4-苯并 -3(4H)-酮-7-基及其類似物)，限制條件為連接點位於芳族碳原子。較佳芳基包括苯基及萘基。

「氰基」係指基團-C≡N。

「環烷基」係指飽和或不飽和、但非芳族的環狀烷基，其具有3至10個碳原子，較佳3至8個碳原子且更佳3至6個碳原子，且具有單個或多個環，包括稠合、橋接及螺接的環係統。C _x環烷基係指具有x數目個環碳原子之環烷基。適合環烷基之實施例包括例如金剛烷基、環丙基、環丁基、環戊基及環辛基。一或多個環可為芳基、雜芳基或雜環基，限制條件為連接點係經由非芳族、非雜環飽和碳環。「經取代之環烷基」係指具有1至5個或較佳1至3個取代基之環烷基，該等取代基選自由以下組成之群：側氧基、硫酮、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、醯基、醯胺基、醯氧基、胺基、經取代之胺基、胺基羰基、胺基硫羰基、胺基羰基胺基、胺基硫羰基胺基、胺基羰氧基、胺基磺醯基、胺基磺醯基氧基、胺基磺醯基胺基、甲脒基、芳基、經取代之芳基、芳氧基、經取代之芳氧基、芳硫基、經取代之芳硫基、羧基、羧基酯、(羧基酯)胺基、(羧基酯)氧基、氰基、環烷基、經取代之環烷基、環烷基氧基、經取代之環烷基氧基、環烷基硫基、經取代之環烷基硫基、胍基、經取代之胍基、鹵基、羥基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基氧基、經取代之雜芳基氧基、雜芳基硫基、經取代之雜芳基硫基、雜環、經取代之雜環、雜環基氧基、經取代之雜環基氧基、雜環基硫基、經取代之雜環基硫基、硝基、SO ₃H、經取代之磺醯基、磺醯基氧基、硫醯基、硫醇、烷基硫基及經取代之烷基硫基，其中該等取代基定義於本文中。

「鹵基」或「鹵素」係指氟、氯、溴及碘且較佳為氟或氯。

「羥基(Hydroxy)」或「羥基(hydroxyl)」係指基團-OH。

「雜芳基」係指環內具有1至10個碳原子及1至4個選自由氧、氮及硫組成之群之雜原子的芳族基團。此類雜芳基可具有單個環(例如吡啶基或呋喃基)或多個縮合環(例如吲哚基或苯并噻吩基)，其中該等縮合環可為或可不為芳族且/或含有雜原子，限制條件為連接點係經由芳族雜芳基之原子。在一個實施例中，雜芳基之氮及/或硫環原子視情況經氧化以提供N-氧化物(N→O)、亞磺醯基或磺醯基部分。較佳雜芳基包括5或6員雜芳基，諸如吡啶基、吡咯基、苯硫基及呋喃基。其他較佳雜芳基包括9員或10員雜芳基，諸如吲哚基、喹啉基、喹啉酮基、異喹啉基及異喹啉酮基。

「雜環(heterocycle)」或「雜環(heterocyclic)」或「雜環烷基(heterocycloalkyl)」或「雜環基(heterocyclyl)」係指飽和或部分飽和、但非芳族的基團，其具有1至10個環碳原子，較佳1至8個碳原子，且更佳1至6個碳原子；以及1至4個環雜原子，較佳1至3個雜原子，且更佳1至2個雜原子，該等雜原子選自由氮、硫或氧組成之群。C _x雜環烷基係指具有x數目個環原子(包括環雜原子)之雜環烷基。雜環涵蓋單個環或多個縮合環，包括稠環、橋聯環及螺環系統。在稠環系統中，一或多個環可為環烷基、芳基或雜芳基，其限制條件為連接點係經由非芳族環。在一個實施例中，雜環基之氮及/或硫原子視情況經氧化以提供N-氧化物、亞磺醯基、磺醯基部分。

雜環基及雜芳基之實施例包括(但不限於)氮雜環丁烷基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡基、嘧啶基、嗒基、吲哚基、異吲哚基、吲哚基、二氫吲哚基、吲唑基、嘌呤基、喹基、異喹啉基、喹啉基、呔基、萘基吡啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噌啉基、喋啶基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、啡啉基、異噻唑基、啡基、異唑基、啡基、啡噻基、咪唑啶基、咪唑啉基、哌啶基、哌基、吲哚啉基、鄰苯二甲醯亞胺基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、4,5,6,7-四氫苯并[b]苯硫基、噻唑基、噻唑啶基、苯硫基、苯并[b]苯硫基、嗎啉基、硫代嗎啉基(亦稱為噻嗎啉基)、1,1-二氧硫代嗎啉基、哌啶基、吡咯啶基及四氫呋喃基。

「側氧基」係指原子(=O)或(-O)。

如本文所用，術語「視情況(optional)」或「視情況(optionally)」意謂隨後描述之事件或情形可能發生，但不一定發生，且該描述包括其中該事件或情形發生之情況以及不發生之情況。舉例而言，「氮原子視情況經氧化以得到N-氧化物(N→O)部分」意謂氮原子可經氧化，但不一定經氧化，且描述包括氮原子未經氧化之情形及氮原子經氧化之情形。

如本文所述之化合物之劑量，適當時係基於化合物之游離酸或游離鹼來確定。 SSAO 抑制劑

可根據本文所述之方法使用的適當SSAO抑制劑包括但不限於PXS-4728A (BI-1467335)及式(I)化合物或醫藥學上可接受之鹽。式(I)化合物(包括化合物1)揭示於US 2018/0297987中，該文獻的內容以全文引用的方式併入本文中，尤其是關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽或鏡像異構物以及前述者之製備及使用方法的內容。

在一些實施例中，SSAO抑制劑為式(I)化合物 (I) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： n為1或2；以及 R1為H或-CH ₃。

與氟之鍵(繪示為 )指示氟原子及甲氧基嘧啶基團相對於彼此可為Z型(一起位於同側)或E型(相反的異側) (Brecher, J.等人,「Graphical Representation of Stereochemical Configuration」, Pure and Appl. Chem, 2006, 78(10) 1897, 1959年)。式(II)所繪示之結構包括具有Z立體化學構型、E立體化學構型之化合物、或Z或E立體化學構型之化合物之混合物。本發明之較佳化合物具有E立體化學構型。

在一種形式中，式(I)化合物呈現為游離鹼。在其他形式中，式(I)化合物呈現為酸加成鹽，諸如單或二HCl加成鹽或磺酸鹽，較佳為4-甲基苯磺酸鹽(甲苯磺酸鹽)。

在一些實施例中，SSAO抑制劑為式(Ia)化合物 (Ia) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： n為1或2；以及 R1為H或-CH ₃。

在一些實施例中，SSAO抑制劑為 (Ib) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： n為1或2；以及 R1為H或-CH ₃。

在一些實施例中，SSAO抑制劑為式(I)、(Ia)或(Ib)之化合物且n為2。

在一些實施例中，SSAO抑制劑為式(I)、(Ia)或(Ib)之化合物且R1為CH ₃。

在一些實施例中，SSAO抑制劑為式1化合物：或其醫藥學上可接受之鹽，諸如二鹽酸鹽或4-甲基苯磺酸鹽。「化合物1」係指式1之化合物。 THR-β 促效劑

可根據本文所述之方法使用的適合THR-β促效劑包括但不限於瑞美替羅(MGL-3196)、VK2809 (Viking Therapeutics)、索貝替羅、伊羅替羅、ALG-055009 (Aligo)、CNPT-101101 (FronThera Pharmaceuticals)、CNPT-101207 (FronThera Pharmaceuticals)、ASC41 (Ascletis)，及式(II)化合物或醫藥學上可接受之鹽。

式(II)化合物揭示於美國申請公開案第20200190064號中，其內容以全文引用之方式併入，且特定言之，關於式(II)化合物，諸如化合物2或其醫藥學上可接受之鹽或鏡像異構物，以及製造及使用前述之方法。

在一些實施例中，THR-β促效劑為式(II)化合物 (II) 其中： R ₁係選自由以下組成之群：氫、氰基、經取代或未經取代之C _1-6烷基，及經取代或未經取代之C _3-6環烷基，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群； R ₂及R ₃各自獨立地選自由以下組成之群：鹵素原子及經取代或未經取代之C _1-6烷基，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群；環A為經取代或未經取代之飽和或不飽和C _5-10脂族環，或經取代或未經取代之C _5-10芳族環，取代基為一或多種選自由以下組成之群的物質：氫、鹵素原子、羥基、-OCF ₃、-NH ₂、-NHC _1-4烷基、-N(C _1-4烷基) ₂、-CONH ₂、-CONHC _1-4烷基、-CON(C _1-4烷基) ₂、-NHCOC _1-4烷基、C _1-6烷基、C _1-6烷氧基及C _3-6環烷基，且當含有兩個取代基時，該兩個取代基可與其所連接的碳一起形成環結構；以及鹵素原子係選自由F、Cl及Br組成之群，或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，THR-β促效劑為式(IIa)化合物 (IIa) 其中： R ₁至R ₃之定義如本文中關於式(II)所詳述； R ₄係選自由以下組成之群：氫、鹵素原子、羥基、-OCF ₃、-NH ₂、-NHC _1-4烷基、-N(C _1-4烷基) ₂、-CONH ₂、-CONHC _1-4烷基、-CON(C _1-4烷基) ₂、-NHCOC _1-4烷基、C _1-6烷基、C _1-6烷氧基及C _3-6環烷基； m為1至4範圍內之整數；以及該等鹵素原子選自由F、Cl及Br組成之群。或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，其中R ₁係選自由氫、氰基、及經取代或未經取代之C _1-6烷基組成之群，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群；且鹵素原子係選自由F、Cl及Br組成之群。

在一些實施例中，THR-β促效劑為式2化合物： , 或其醫藥學上可接受之鹽，諸如鉀或鈉鹽。「化合物2」係指式2化合物。 FXR 促效劑

可根據本文所述之方法使用的適合FXR促效劑包括但不限於奧貝膽酸、希勒氟索、曲匹氟索、EYP001 (沃那氟素，建議的INN)、MET409 (Metacrine)、EDP-305 (Enanta)及式(I)化合物或醫藥學上可接受之鹽。式(III)化合物(包括化合物3)揭示於US 2010/0152166中，該文獻的內容以全文引用的方式併入本文中，尤其是關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽或鏡像異構物以及前述者之製備及使用方法的內容。

在一些實施例中，FXR促效劑為式(III)化合物 (III) 其中： q為1或2； R ¹為氯、氟或三氟甲氧基； R ²為氫、氯、氟或三氟甲氧基； R ^3a為三氟甲基、環丙基或異丙基； X為CH或N，限制條件為當X為CH時，q為1；以及 Ar ¹為吲哚基、苯并噻吩基、萘基、苯基、苯并異噻唑基、吲唑基或吡啶基，其各自視情況經甲基或苯基取代，或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，FXR促效劑為式(III)化合物，其中R ¹為氯或三氟甲氧基；且R ²為氫或氯。

在一些實施例中，FXR促效劑為式(III)化合物，其中R ^3a為環丙基或異丙基。

在一些實施例中，FXR促效劑為式(III)化合物，其中Ar ¹為5-苯并噻吩基、6-苯并噻吩基、5-吲哚基、6-吲哚基或4-苯基，其各自視情況經甲基取代。

在一些實施例中，FXR促效劑為式(III)化合物，其中q為1；且X為N。

在一些實施例中，FXR促效劑為式3化合物：或其醫藥學上可接受之鹽。「化合物3」係指式3之化合物。 醫藥學上可接受之組成物及調配物

本發明涵蓋本文中所詳述之任一種化合物的醫藥學上可接受之組成物或簡稱「醫藥組成物」。因此，本發明包括包含以下的醫藥組成物：SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)、THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹽為酸加成鹽，諸如由無機或有機酸形成之鹽。根據本發明的醫藥組成物可採取適於經口、口頰、非經腸、鼻、體表或直腸投與之形式或適合藉由吸入投與之形式。

如本文中所詳述之化合物在一個態樣中可呈純化形式，且包含呈純化形式之化合物的組成物詳述於本文中。提供包含如本文所述之化合物或其鹽之組成物，諸如實質上純化合物之組成物。在一些實施例中，含有如本文詳述之化合物或其鹽的組成物呈實質上純形式。在一種變化形式中，「實質上純」意指組成物含有不超過35%的雜質，其中該雜質表示除構成組成物之大部分之化合物或其鹽以外的化合物。舉例而言，實質上純化合物之組成物意欲含有不超過35%雜質之組成物，其中雜質表示除化合物或其鹽外之化合物。在一種變化形式中，提供實質上純化合物或其鹽之組成物，其中該組成物含有不超過25%雜質。在另一變型中，提供實質上純化合物或其鹽之組成物，其中該組成物含有或含有不超過20%雜質。在另一變型中，提供實質上純化合物或其鹽之組成物，其中該組成物含有或不超過10%雜質。在另一變型中，提供實質上純化合物或其鹽之組成物，其中該組成物含有或不超過5%雜質。在另一變型中，提供實質上純化合物或其鹽之組成物，其中該組成物含有或不超過3%雜質。在另一變型中，提供實質上純化合物或其鹽之組成物，其中該組成物含有或不超過1%雜質。在另一變型中，提供實質上純化合物或其鹽之組成物，其中該組成物含有或不超過0.5%雜質。在又其他變型中，實質上純化合物之組成物意謂該組成物含有不超過15%或較佳不超過10%或更佳不超過5%或甚至更佳不超過3%且最佳不超過1%雜質，該雜質可為化合物的不同立體化學形式。

在一種變型中，本文中之化合物為針對投與個體(諸如人類)而製備的合成化合物。在另一變型中，提供含有呈實質上純形式之化合物的組成物。在另一變型中，本發明涵蓋醫藥組成物，其包含本文詳述之化合物及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。在另一變型中，提供投與化合物之方法。純化形式、醫藥組成物及投與該等化合物之方法適用於本文所詳述之任何化合物或其形式。

化合物可調配用於任何可用的遞送途徑，包括經口、黏膜(例如鼻、舌下、陰道、口頰或直腸)、非經腸(例如肌肉內、皮下或靜脈內)、體表或經皮遞送形式。可用適合載劑調配化合物以提供遞送形式，包括(但不限於)錠劑、囊片、膠囊(諸如硬明膠膠囊或軟彈性明膠膠囊)、扁囊劑、糖衣錠、口含錠、口香糖、分散液、栓劑、軟膏、泥罨劑(cataplasms/poultices)、糊狀物、散劑、敷料、乳膏、溶液、貼片、氣溶膠(例如鼻噴霧劑或吸入劑)、凝膠、懸浮液(例如水性或非水性液體懸浮液、水包油乳液或油包水液體乳液)、溶液及酏劑。

本文所描述之化合物可用於製備調配物，諸如醫藥調配物，其藉由將化合物作為活性成分與醫藥學上可接受之載劑(諸如上文所提及之彼等物)合併來製備。視系統之治療形式(例如經皮貼片相對於口服錠劑)而定，載劑可以呈各種形式。此外，醫藥調配物可含有防腐劑、增溶劑、穩定劑、再濕潤劑、乳化劑、甜味劑、染料、調節劑及用於調節滲透壓之鹽、緩衝劑、包衣劑或抗氧化劑。包含該化合物之調配物亦可含有具有寶貴治療特性之其他物質。醫藥調配物可藉由已知醫藥方法製備。適合的調配物可見於例如 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins, 第21版 (2005)，該文獻以引用的方式併入本文中。

如本文所述的化合物可以普遍接受的口服組成物形式(諸如錠劑、包衣錠劑，及硬殼或軟殼凝膠膠囊、乳液或懸浮液)投與個體(例如人類)。可用於製備此類組成物的載劑實施例為乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等。軟殼凝膠膠囊的可接受載劑為例如植物油、蠟、脂肪、半固體及液體多元醇等。此外，醫藥調配物可含有防腐劑、增溶劑、穩定劑、再濕潤劑、乳化劑、甜味劑、染料、調節劑及用於調節滲透壓之鹽、緩衝劑、包衣劑或抗氧化劑。

本文描述包括有兩種化合物(SSAO抑制劑及THR-β促效劑)或三種化合物(SSAO抑制劑、THR-β促效劑及FXR促效劑)的組成物。本文所描述之任一種化合物可調配成錠劑，調配成本文所描述之任何劑型。

本發明進一步涵蓋套組(例如醫藥包裝)。所提供的套組可包含本文所述之醫藥組成物或化合物及容器(例如藥瓶、安瓿、瓶、注射器及/或子包裝或其他適當容器)。在一些實施例中，套組包括容器，該容器包含SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)。在一些此類實施例中，容器進一步包含FXR促效劑(諸如式(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)。在其他實施例中，套組包括包含SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)之第一容器及包含THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)之第二容器。在一些此類實施例中，套組進一步包括包含FXR促效劑(諸如式(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)之第三容器。

在一些實施例中，組成物包含如本文所述之SSAO抑制劑及THR-β促效劑。在一些實施例中，此類組成物包括式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本文提供一種劑型，其包含治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及治療有效量之式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽為化合物1或其醫藥學上可接受之鹽，且式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽為化合物2或其醫藥學上可接受之鹽，如本文所述。在前述者之一些實施例中，組成物進一步包含如本文所述的FXR促效劑。在一些此類實施例中，FXR促效劑為式(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，式(III)化合物為如本文所述的化合物3或其醫藥學上可接受之鹽。 使用方法與用途

本文所描述之化合物及組成物在某些態樣中可用於治療或預防肝病。在一些實施例中，治療或預防有需要患者之肝病的方法包含向該患者投與半卡肼敏感性胺氧化酶(SSAO)抑制劑及甲狀腺激素受體β (THR-β)促效劑。在一些實施例中，該方法進一步包含向患者投與FXR促效劑，包括但不限於化合物3。在一些實施例中，SSAO抑制劑為式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，且THR-β促效劑為式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽為化合物1,且式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽為如本文所述之化合物2。不受理論束縛，咸信與單一療法相比，SSAO抑制劑與THR-β促效劑根據本文所述之方法進行組合可有效地提供治療，且從而減少可伴隨單一療法治療之劑量依賴性不良作用。

肝病包括但不限於肝炎、纖維化及脂肪變性肝炎。在一些實施例中，肝病係選自肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。在一些實施例中，肝病係選自：肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、NAFLD及NASH。在一個實施例中，肝病為NASH。在另一實施例中，肝病為肝炎。在另一實施例中，肝病為肝纖維化。在另一實施例中，肝病為酒精誘導之纖維化。在另一實施例中，肝病為脂肪變性。在另一實施例中，肝病為酒精性脂肪變性。在另一實施例中，肝病為NAFLD。在一個實施例中，本文提供之治療方法阻礙或減緩NAFLD惡化成NASH。在一個實施例中，本文提供之治療方法阻礙或減緩NASH惡化。NASH可惡化成諸如肝硬化、肝癌等中之一或多者。在一些實施例中，肝病為NASH。在一些實施例中，患者已經歷肝臟生檢。在一些實施例中，方法進一步包含獲得肝切片檢查之結果。

在一些實施例中，治療有需要患者之肝病的方法，其中肝病係選自由以下組成之群：肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。

本文提供用SSAO抑制劑及THR-β促效劑治療或預防有需要患者(例如人類患者)之肝病的方法，其包含投與治療有效量之SSAO抑制劑及治療有效量之THR-β促效劑，其中肝病係選自肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。在一些實施例中，該方法進一步包含FXR促效劑，包括但不限於化合物3。在一些實施例中，SSAO抑制劑為式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽且THR-β促效劑為式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽為化合物1，且式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽為如本文所述之化合物2。

本文亦提供阻礙或減緩有需要患者(例如人類患者)之非酒精性脂肪肝病(NAFLD)惡化為非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)的方法，其包含投與SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)。在一些實施例中，方法進一步包含投與FXR促效劑，包括但不限於化合物3。在一些實施例中，方法包含投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及治療有效量之式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及視情況存在的治療有效量之式(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本文亦提供阻礙或減緩有需要患者(例如人類患者)之NASH惡化的方法，其包含投與SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)。在一些實施例中，方法進一步包含投與FXR促效劑，包括但不限於化合物3。在一些實施例中，方法包含投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及治療有效量之式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及視情況存在的治療有效量之式(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

在患者中，鹼性磷酸酶、γ-麩胺醯轉移酶(GGT)、丙胺酸轉胺酶(ALT)及/或天冬胺酸轉胺酶(AST)含量可升高。在一些實施例中，本文提供一種減少肝損傷的方法，其包含投與SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)，其中在SSAO抑制劑治療之前，GGT、ALT及/或AST含量升高。在一些實施例中，SSAO抑制劑為式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，本文提供用SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)治療有需要患者之肝病的方法，其中SSAO抑制劑選擇性地抑制SSAO。在一些實施例中，SSAO抑制劑為式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。因此，在一些實施例中，MAO-A (單胺氧化酶A)未受到抑制。在一些實施例中，MAO-B (單胺氧化酶B)未受到抑制。在一些實施例中，MAO-A及MAO-B未受到抑制。

在一些實施例中，患者為人類。肥胖與NAFLD及NASH高度相關，但瘦人亦可受NAFLD及NASH影響。因此，在一些實施例中，患者為肥胖型。在一些實施例中，患者不肥胖。肥胖亦可與其他疾病相關或引起其他疾病，諸如糖尿病或心血管病症。相應地，在一些實施例中，患者亦患有糖尿病及/或心血管病症。不受理論束縛，咸信諸如肥胖、糖尿病及心血管病症之共生病症可使得NAFLD及NASH更難以治療。相反，目前公認的用於解決NAFLD及NASH之唯一方法為體重減輕，對於瘦患者而言，體重減輕的作用可能極小直至沒有。

NAFLD及NASH風險隨年齡增長而增加，但兒童亦可能罹患NAFLD及NASH，文獻報導的兒童低至2歲(Schwimmer等人, Pediatrics, 2006, 118:1388-1393)。在一些實施例中，患者為2-17歲，諸如2-10、2-6、2-4、4-15、4-8、6-15、6-10、8-17、8-15、8-12、10-17或13-17歲。在一些實施例中，患者為18-64歲，諸如18-55、18-40、18-30、18-26、18-21、21-64、21-55、21-40、21-30、21-26、26-64、26-55、26-40、26-30、30-64、30-55、30-40、40-64、40-55或55-64歲。在一些實施例中，患者為65歲或更大，諸如70歲或更大、80歲或更大、或90歲或更大。

NAFLD及NASH為肝移植之常見病因，但已接受一次肝移植之患者通常再次發生NAFLD及/或NASH。相應地，在一些實施例中，患者已經歷肝移植。

在一些實施例中，根據本文所提供之方法治療使得患者之NAFLD活動性(NAS)分數降低。舉例而言，在一些實施例中，治療後，脂肪變性、炎症及/或膨大減輕。在一些實施例中，本文所提供之治療方法減少肝纖維化。在一些實施例中，方法降低血清三酸甘油酯。在一些實施例中，方法降低肝臟三酸甘油酯。

在一些實施例中，患者在根據本文所提供之方法投與之前處於產生不良作用之風險中。在一些實施例中，不良作用為影響腎臟、肺、心臟及/或皮膚之不良作用。

在一些實施例中，患者已經歷一或多種先前療法。在一些實施例中，肝病在治療期間惡化。

在一些實施例中，方法不包含投與抗組織胺、免疫抑制劑、類固醇(諸如皮質類固醇)、利福平、類鴉片拮抗劑或選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)。

在一些實施例中，SSAO抑制劑及THR-β促效劑及視情況存在之FXR促效劑同時投與。在一些此類實施例中，SSAO抑制劑及THR-β促效劑及視情況存在之FXR促效劑可在單一醫藥組成物中提供。在其他實施例中，SSAO抑制劑及THR-β促效劑及視情況存在之FXR促效劑依序投與。

當與THR-β促效劑組合投與時，SSAO抑制劑及/或THR-β促效劑及/或視情況存在之FXR促效劑可以當任一藥劑單獨投與時典型投與的劑量投與。或者，由於對組合可能觀測到協同作用，因此SSAO及/或THR-β促效劑及/或視情況存在之FXR促效劑可以比各藥劑單獨投與時的劑量低的劑量投與。

在其中SSAO抑制劑為化合物1或其醫藥學上可接受之鹽的實施例中，化合物對人類患者之治療劑量通常為每天經口投與約4 mg至約40 mg。在特定實施例中，當與THR-β促效劑組合投與時，視情況進一步與FXR促效劑組合時，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以約4 mg至約20 mg (例如4 mg、5 mg、6 mg、8 mg、10 mg、15 mg或20 mg)之口服劑量投與或以較低劑量投與。舉例而言，當與THR-β促效劑組合投與時，視情況進一步與FXR促效劑組合時，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以如下劑量經口投與：每日約1 mg至約40 mg、每日約1 mg至約20 mg、每日約1 mg至約3.9 mg、每日約1 mg至約3 mg、每日約1.5 mg至約3.5 mg、每日約2 mg至約3 mg，或每日1、1.5、2、2.5、3、3.5、3.6、3.8、3.9、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20 mg中的任一者。

在其中THR-β促效劑為化合物2或其醫藥學上可接受之鹽的實施例中，各化合物經口投與人類患者之治療劑量通常為每日約0.5 mg至約90 mg、每日約1 mg至約90 mg、每日約3 mg至約90 mg、每日約0.5 mg至約30 mg、每日約1 mg至約30 mg或每日約3 mg至約30 mg。在特定實施例中，當與SSAO抑制劑組合投與時，視情況進一步與FXR促效劑組合時，式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以約0.5 mg至約90 mg (例如0.5 mg、1 mg、3 mg、5 mg、6 mg、10 mg、20 mg、30 mg、40 mg、50 mg、60 mg、70 mg、80 mg或90 mg)之口服劑量投與或可以更低劑量投與。舉例而言，當與SSAO抑制劑組合時，視情況進一步與FXR促效劑組合時，式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以如下劑量經口投與：每日約0.1 mg至約90 mg、每日約0.1 mg至約30 mg、每日約0.1 mg至約25 mg、每日約0.1 mg至約20 mg、每日約0.1 mg至約15 mg、每日約0.1 mg至約10 mg、每日約0.1 mg至約5 mg、每日約0.1 mg至約3 mg，或每日約0.1 mg至約1 mg。

在其中FXR促效劑為化合物3或其醫藥學上可接受之鹽的實施例中，化合物經口投與人類患者的治療性劑量通常為每日約5 mg至約75 mg，或每日約5 mg至約25 mg，較佳為每日約10 mg至約15 mg。在特定實施例中，當與SSAO抑制劑及THR-β促效劑組合投與時，式(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以約5 mg至約75 mg之口服劑量投與或可以較低劑量投與。舉例而言，當與SSAO抑制劑及THR-β促效劑組合投與時，式(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以每日約1 mg至約75 mg、每日約5 mg至約75 mg、每日約1 mg至約25 mg、每日約1 mg至約15 mg、每日約1 mg至約10 mg、每日約1 mg至約5 mg、或每日約5 mg至約10 mg。

在特定實施例中，其中SSAO抑制劑為式(I)化合物(例如化合物1)或其醫藥學上可接受之鹽且THR-β促效劑為式(II)化合物(例如化合物2)或其醫藥學上可接受之鹽，視情況進一步與FXR促效劑組合，各個別化合物之劑量可如前述投與。舉例而言，在一些實施例中，化合物1或其醫藥學上可接受之鹽可以每日約1 mg至約40 mg之劑量投與，其與以每日約0.1 mg至約90 mg之劑量投與的化合物2或其醫藥學上可接受之鹽組合，視情況與以每日約1 mg至約75 mg之劑量投與的化合物3或其醫藥學上可接受之鹽組合。在一些實施例中，化合物1或其醫藥學上可接受之鹽可以每日約1 mg至約20 mg之劑量投與，其與以每日約0.1 mg至約30 mg之劑量投與的化合物2或其醫藥學上可接受之鹽組合，視情況與以每日約1 mg至約20 mg之劑量投與的化合物3或其醫藥學上可接受之鹽組合。在一些實施例中，化合物1或其醫藥學上可接受之鹽可以每日約1 mg至約10 mg之劑量投與，其與以每日約0.1 mg至約10 mg之劑量投與的化合物2或其醫藥學上可接受之鹽組合，視情況與以每日約1 mg至約15 mg之劑量投與的化合物3或其醫藥學上可接受之鹽組合。在一些實施例中，化合物1或其醫藥學上可接受之鹽可以每日約1 mg至約6 mg之劑量投與，其與以每日約0.1 mg至約5 mg之劑量投與的化合物2或其醫藥學上可接受之鹽組合，視情況與以每日約1 mg至約10 mg之劑量投與的化合物3或其醫藥學上可接受之鹽組合。

在一些實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以每日約5 mg至約15 mg之劑量投與，其與以每日約0.1 mg至約10 mg、每日約10 mg至約20 mg、每日約10 mg至約40 mg、每日約20 mg至約50 mg或每日約50 mg至約90 mg之劑量投與的式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽組合。在一些實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽以每日約1 mg至約5 mg之劑量投與，其與以每日約0.1 mg至約10 mg、每日約10 mg至約20 mg、每日約10 mg至約40 mg、每日約20 mg至約50 mg或每日約50 mg至約90 mg之劑量投與的式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽組合。

在一些實施例中，治療期第1天投與之SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)之量及THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)之量及視情況存在之FXR促效劑之量可大於或等於治療期之所有後續日投與之該等化合物的量。在一些實施例中，治療期第1天投與之各種化合物的量可等於治療期之所有後續日投與之該化合物的量。

根據本文所述之方法使用的式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可在第一時間段每日投與個體一次劑量，隨後在第二時間段可中斷投與化合物，其中在第一與第二時間段期間可維持SSAO抑制活性。在一些實施例中，第一及第二時間段各為一週時間段。舉例而言，本文提供一種以14天為一週期來治療個體的方法，其包含前7天向個體投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，每日一次劑量，隨後在接下來的7天中斷投與化合物，其中在整個14天週期期間，個體中的SSAO抑制活性可得以維持。作為另一實例，本文提供一種以四週為一週期來治療個體的方法，其包含前兩週向個體投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，每日一次劑量，隨後在接下來的兩週中斷投與化合物，其中在整個四週週期期間，個體中的SSAO抑制活性可得以維持。在一些實施例中，每日劑量為約10 mg。應瞭解，本文所揭示之劑量及給藥方案亦適用於使用式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽治療NASH之單一療法中。

在一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在的FXR促效劑組合投與使個體的脂肪變性減少。評估脂肪變性之方法為熟習此項技藝者所知，且可包括組織學分析及組織學評分分配。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可減少個體的脂肪變性。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可使個體之脂肪變性以同等程度減少。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可協同地減少個體之脂肪變性。因此，應瞭解，在一些實施例中，本文中詳述之治療方法包含治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其中治療包含減少與脂肪變性相關之組織學標記物。

在一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑組合投與使個體之肝炎減少。評估肝炎的方法為熟習此項技術者所知，且可包括組織學分析及小葉發炎之組織學分數的分配。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可減少個體的肝炎。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可使個體之肝炎以同等程度減少。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可協同地減少個體之肝炎。因此，應瞭解，在一些實施例中，本文中詳述之治療方法包含治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其中治療包含減少小葉發炎或與小葉發炎相關之組織學標記物。

在一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑組合投與使個體之肝纖維化減少。評估肝纖維化之方法為熟習此項技術者所知且可包括組織學分析。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可減少個體的肝纖維化。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可使個體之肝纖維化以同等程度減少。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可協同地減少個體的肝纖維化。因此，應瞭解，在一些實施例中，本文中詳述之治療方法包含治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其中治療包含減少纖維化或與纖維化相關之組織學標記物。

在一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑組合投與使個體之肝脂肪變性、發炎及纖維化中的至少一者或至少兩者減少。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可使個體之肝脂肪變性、發炎及纖維化中的至少一者或至少兩者減少。在一些實施例中，組合投與減少個體之肝脂肪變性、發炎及纖維化。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可減少個體的肝脂肪變性、發炎及纖維化。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可協同地減少個體之脂肪變性、發炎及纖維化中的至少一者或至少兩者。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可協同地減少個體的脂肪變性、發炎及纖維化。因此，應瞭解，在一些實施例中，本文中詳述之治療方法包含治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其中治療包含減少脂肪變性、小葉發炎、纖維化中之至少一者或至少兩者，或前述中之任一者的組織學標記物。

在一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑的組合投與使個體之血清三酸甘油酯降低。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可降低個體的血清三酸甘油酯。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可使個體之血清三酸甘油酯以同等程度降低。因此，應瞭解，在一些實施例中，本文中詳述之治療方法包含治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其中治療包含降低血清三酸甘油酯。

在一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑的組合投與使個體之血清總膽固醇降低。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可降低個體的血清總膽固醇。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可使個體之血清總膽固醇以同等程度降低。因此，應瞭解，在一些實施例中，本文中詳述之治療方法包含治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其中治療包含降低血清膽固醇。

在一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑的組合投與使個體之血清丙胺酸轉胺酶降低。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可降低個體的血清丙胺酸轉胺酶。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可使個體之血清丙胺酸轉胺酶以同等程度降低。因此，應瞭解，在一些實施例中，本文中詳述之治療方法包含治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其中治療包含降低血清丙胺酸轉胺酶。

在一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑的組合投與使個體之血清三酸甘油酯、總膽固醇及丙胺酸轉胺酶中的至少一者或至少兩者降低。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可使個體之血清三酸甘油酯、總膽固醇及丙胺酸轉胺酶中的至少一者或至少兩者降低。在一些實施例中，組合投與可降低個體之血清三酸甘油酯、總膽固醇及丙胺酸轉胺酶。在一些實施例中，與SSAO抑制劑或THR-β促效劑之單一療法投與相比，組合投與可降低個體的血清血清三酸甘油酯、總膽固醇及丙胺酸轉胺酶。因此，應瞭解，在一些實施例中，本文中詳述之治療方法包含治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其中治療包含降低血清三酸甘油酯、總膽固醇及丙胺酸轉胺酶中之至少一者或至少兩者。

在一些實施例中，提供減少有需要患者之肝炎的方法，其包含將SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑組合投與患者。在一些實施例中，方法不提高患者之LDL-c含量。在一些實施例中，方法降低患者之LDL-c含量。在一些實施例中，患者患有以肝炎為特徵的疾病。在一些實施例中，患者患有肝纖維化。在一些實施例中，患者患有NASH。

在一些實施例中，提供治療有需要患者之以肝纖維化為特徵之疾病的方法，其包含將SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑組合投與患者。在一些實施例中，疾病與肝炎相關。在一些實施例中，患者患有NASH。

在一些實施例中，提供抑制有需要患者之基因表現的方法，該等基因負責在肝細胞外基質中產生膠原蛋白，該等方法包含將SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑組合投與患者。在一些實施例中，基因為纖維母細胞基因。在一些實施例中，患者患有肝纖維化。在一些實施例中，患者患有NASH。

本文亦提供SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑的組合，其用於治療有需要之個體之肝病，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，該治療係利用如本文所述之方法進行。

本文亦提供SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及視情況存在之FXR促效劑之組合的用途，其用於製造供治療有需要之個體之肝病用的藥劑，諸如肝炎、肝纖維化、酒精誘導之纖維化、脂肪變性、酒精性脂肪變性、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，該治療係利用如本文所述之方法進行。

在前述的一些實施例中，SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)係經口投與。在前述的一些實施例中，THR-β促效劑(諸如式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)係經口投與。在前述的一些實施例中，FXR促效劑(諸如式(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)係經口投與。

在前述之任一項的一些實施例中，式(I)化合物為化合物1或其甲苯磺酸鹽，且式(II)化合物為化合物2或其鉀鹽。在一些此類實施例中，FXR促效劑為式(III)化合物，較佳為化合物3或其醫藥學上可接受之鹽。 製品與套組

本發明進一步提供製品，其包含本文所述之化合物或其鹽、本文所述之組成物，或存在於適合封裝中的本文所述之一或多個單位劑量。在某些實施例中，該製品係用於本文所描述之任何方法。適合封裝(例如容器)為本技藝中已知的，且包括例如小瓶、容器、安瓿、瓶子、罐、可撓性封裝及其類似物。製品可進一步滅菌及/或密封。

本發明進一步提供用於執行本發明之方法的套組，其包含至少兩種本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，或包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的組成物。套組可使用本文所揭示之任一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，套組使用本文所述之SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)。套組可用於本文所述之任一或多種用途，且因此可含有如本文所述之治療指示。

套組通常包含適當的封裝。套組可包含一或多個容器，其包含本文所述之任何化合物或其醫藥學上可接受之鹽。各組分可封裝於各別容器中，或在交叉反應性及存放期允許的情況下，可將一些組分合併於一個容器中。在一些實施例中，套組包括容器，該容器包含SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)。在其他實施例中，套組包括包含SSAO抑制劑(諸如式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)之第一容器及包含THR-β促效劑(諸如(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽)之第二容器。

套組可為單位劑型、散裝封裝(例如多劑量封裝)或次單位劑量。舉例而言，可提供的套組含有足夠劑量之如本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及/或另一種醫藥活性化合物，該另一種醫藥活性化合物適用於本文詳述之疾病，以向個體提供延長時段的有效治療，諸如1週、2週、3週、4週、6週、8週、3個月、4個月、5個月、7個月、8個月、9個月或更多個月中之任一者。套組亦可包括化合物之多個單位劑量及使用說明書，且足量封裝以供藥房(例如醫院藥房及混配藥房)儲存及使用。

關於本發明之方法中之各組分的使用，套組可視情況包括一組說明書，通常為書面說明書，但含有說明書的電子儲存媒體(例如磁片或光碟)亦可接受。套組所包括的說明書通常包括關於各組分及其投與個體的資訊。實例

可藉由藥劑組合投與熟知小鼠模型且評價結果來測試本文提供之組合療法。此類測試之方法可自已知之方法調適。參見例如美國專利公開案第2015/0342943號，該文獻以引用的方式併入本文中。實例 1 ：化合物 1 在健康人類個體中的耐受性及藥物動力學背景

半卡肼敏感性胺氧化酶(SSAO)造成非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)，其經由使一級胺(例如甲基胺，MMA)去胺基而變成醛、銨及H ₂O ₂來增強氧化應激且將發炎細胞募集至肝，加重肝炎及損傷。NASH中的SSAO含量升高且與纖維化階段相關。化合物1為選擇性的共價SSAO抑制劑，其在大鼠NASH模型中使肝炎及纖維化減少。對化合物1進行單一遞增劑量臨床試驗。

本文所述之化合物可藉由WO 2018/028517中所述之方法獲得，該案以全文引用之方式併入本文中，尤其是製備本文中詳述之化合物的方法。方法

四組8名健康參與者以3:1比率隨機分組接受化合物1 (甲苯磺酸鹽)膠囊或匹配安慰劑。在給藥前及給藥後不同時間點測定化合物1及PD生物標記物之血漿含量。藉由在添加外源受質(苯甲胺)之後量測血漿H ₂O ₂產生之相對減少來測定SSAO抑制。量測血漿中之內源甲基胺(MMA)含量，預測其在SSAO抑制後增加。在給藥後7 (±3)天評估安全性。

在投與單次劑量之研究藥品(安慰劑或化合物)之後的第0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、48小時(僅SSAO活性)及168小時(僅SSAO活性)，收集血漿樣品用於測定化合物1濃度及SSAO活性。藉由非室性分析測定血漿PK參數。藉由量測安慰劑接受者及活性化合物1接受者之血漿樣品中之過氧化氫(H ₂O ₂)產生水平來評估SSAO活性。相對於對應給藥前(基線)樣品測定總胺氧化酶活性之變化百分比。

使用基本上如先前(Schilter等人)所述之基於動力學之分析來測定血漿中之SSAO特異性胺氧化酶含量。在量測安慰劑接受者及活性藥物接受者中之H ₂O ₂產生水平之前，藉由將巴吉林(pargyline)添加至血漿樣品中來抑制內源單胺氧化酶A及B。最大抑制由另外經高劑量之化合物1處理之給藥前(基線)樣品定義，且相對於基線樣品計算SSAO特異活性的變化百分比。

結果

招募32名健康人類參與者(100%男性、63%黑人、19%亞洲人、13%白人)且接受單次口服劑量之化合物1 (1、3、6及10 mg，各n=6)或安慰劑(n=2)。在1與10 mg劑量水平之間，化合物1血漿PK暴露以大於劑量比例的方式增加。化合物1之平均半衰期範圍為1-3小時。在給藥後4小時，在所有劑量群組中見到血漿SSAO活性幾乎完全被抑制，且在單次劑量之化合物1之後至多1週偵測到持續抑制。在化合物1存在下，最大血漿MMA含量增加。未報告臨床相關不良事件或實驗室異常。

如表1中所示，劑量1、3、6及10 mg化合物1皆具有良好耐受性。表1：化合物1治療相關不良事件

	1 mg 化合物1 之甲苯磺酸鹽或安慰劑 (n=8)	3 mg 化合物1 之甲苯磺酸鹽或安慰劑(n=8)	6 mg 化合物1 之甲苯磺酸鹽或安慰劑(n=8)	10 mg 化合物1 之甲苯磺酸鹽或安慰劑(n=8)	全部(n=32)
任何TEAE之個體發生率	0	0	2 (25)	3 (37.5)	5 (15.6)
被認為可能與治療相關之TEAE的個體發生率	0	0	0	1 (12.5)	1 (3.1)
TEAE診斷與頻率
便秘	0	0	0	1 (12.5)	1 (3.1)
接觸性皮膚炎	0	0	2 (25)	0	2 (6.3)
味覺障礙	0	0	0	1 (12.5)	1 (3.1)
頭痛	0	0	0	1 (12.5)	1 (3.1)
口腔疱疹	0	0	0	1 (12.5)	1 (3.1)
喉嚨痛	0	0	1 (12.5)	0	1 (3.1)
上呼吸道感染	0	0	0	1 (12.5)	1 (3.1)

單次劑量之針對SSAO之化合物1甲苯磺酸鹽自血漿快速清除且在1與10 mg之間展現大於劑量比例的血漿PK。

單次劑量之化合物1在所有個體中快速且有效地降低血漿胺氧化酶活性，如圖1A及圖1B中所示。如給藥後第4小時所觀測，SSAO特異活性幾乎完全被抑制(圖1A及圖1B)。在單次劑量之化合物1之後持續長達1週，血漿SSAO胺氧化酶活性受到抑制且血漿MMA出現劑量依賴性增加，表明共價標靶接合強且支持每日給藥一次，儘管血漿半衰期短(圖1A及圖1B)。

在所有劑量水平下，化合物1或安慰劑之濃度(C _max)比MAO-A及MAO-B之IC ₅₀濃度低大於800倍(圖1C)。表2：生物化學活性(IC ₅₀µM)

SSAO 抑制劑	SSAO	MAO-A	MAO-B
化合物1	0.0065	＞50	＞50
BI 1467335 (PXS-4728A)	0.005	＞100	2.7

觀測到甲胺出現劑量依賴性增加，表明在整個劑量範圍內，血漿SSAO標靶接合強。圖1D。結論

化合物1在以1 mg至10 mg範圍內之單次口服劑量投與的健康個體中安全且具有良好耐受性。化合物1在單次劑量後長達七天抑制SSAO活性。此表明化合物1可藉由選擇性地抑制SSAO而有效治療肝病或病症。其亦可在僅單次劑量之後展現七天的SSAO活性，表明歷時一週的每日投與可發揮兩週時段的治療作用。實例 2 ：化合物 1 在健康人類個體中的多次遞增劑量試驗

對化合物1進行多次遞增劑量臨床試驗。3組8名健康參與者以3:1比率隨機分配接受多次劑量每日一次(QD)之化合物1或匹配安慰劑，歷時7天(1 mg及4 mg)或14天(10 mg)。在給藥前及給藥後不同時間點測定化合物1及PD生物標記物之血漿含量(血漿胺氧化酶活性及甲胺含量)。最後一次劑量之後長達14天，評估安全，包括實驗室、生命徵象及ECG，所有個體均無顯著發現。除安慰劑治療組出現一個中度(2級)不良事件之外，所有不良事件均視為輕度(1級)。無個體因不良事件而中斷(參見表3)。

在第1天，化合物1血漿PK暴露增加大於劑量組之間的劑量比例，且在多次QD劑量之後，在各劑量水平下觀測到顯著累積。給藥第一天與最後一天之間的累積比率隨著劑量增加而減小。在7天後，最高劑量組(10 mg)達到穩定狀態。化合物1半衰期隨劑量增加，與飽和標靶介導之清除率一致(參見圖2A及圖2B，表4)。

發現所有劑量組在第1天的血漿SSAO活性幾乎完全被抑制(圖3A)，使得作為SSAO內源受質的甲基胺增加(圖3B)。血漿甲基胺含量以劑量比例方式增加(圖3B)。多次劑量之後，在化合物1投與之最後一天觀測到血漿甲基胺進一步增加(圖3C)。由於存在未被化合物1抑制的血漿胺氧化酶(例如MAO-A、MAO-B)(圖3D、E)，因此總胺氧化酶未被完全抑制。

當以至多10 mg QD投與14天時，化合物1在健康個體中為安全的且具有良好耐受性。化合物1在給藥7天之後達成穩態含量，支持QD給藥方案。停止給藥之後持續長達2週，血漿SSAO胺氧化酶活性幾乎完全被抑制且血漿甲基胺出現劑量依賴性增加，表明兩週每日投與化合物1可在停止給藥之後發揮兩週時段的治療作用。表 3 ：化合物 1 治療相關不良事件

	安慰劑 (n=6)	1 mg化合物1 (n=6)	4 mg化合物1 (n=6)	10 mg化合物1 (n=6)	整體化合物1 (n=18)
任何TEAE之個體發生率，n (%)	3 (50)	2 (33.3)	2 (33.3)	6 (100)	10 (55.6)
被認為可能與治療相關的TEAE之個體發生率 ¹，n (%)	1 (16.7)	1 (16.7)	0	0	1 (5.6)
TEAE診斷與頻率
背痛	1 (16.7)	0	0	0	0
導管位點發炎	1 (16.7)	0	0	0	0
挫傷	1 (16.7)	0	0	0	0
接觸皮膚炎	0	1 (16.7)	2 (33.3)	0	3 (16.7)
腹瀉	1 (16.7)	0	0	0	0
頭暈	0	1(16.7)	0	0	1 (5.6)
頭痛	0	1 (12.5)	0	0	1 (5.6)
醫學裝置位點反應 ²	2 (33.3)	0	0	6 (100)	6 (33.3)
鼻炎	0	0	0	1 (16.7)	1 (5.6)

¹7天接受1 mg化合物1的一名個體出現被認為可能與治療有關的事件(頭痛)。 ²10 mg組中的所有8名個體(6名給予化合物1，2名給予安慰劑)在ECG導線位點出現輕度接觸性皮炎事件(「醫學裝置位點反應」)；根據方案，ECG至少每天進行一次。表 4 ：化合物 1 藥物動力學資料

劑量 (mg)	天數	C _max(ng/mL)	T _max(h)	*AUC _0-t(hng/mL)**	t _1/2(h)	AR (C _max)	AR (AUC)
1	1	0.568 (64)	1.53 (0.82, 2.00)	NC
	最後	2.75 (36)	2.51 (1.02, 3.00)	13.3 (14)	2.27 (2.00, 2.48)	5.98 (49)	NC
4	1	5.11 (64)	2.02 (1.02, 3.07)	17.1 (29)
	最後	18.6 (20)	3.03 (1.03, 3.07)	198 (32)	6.71 (2.85, 8.13	4.32 (34)	11.7 (22)
10	1	17.7 (49)	1.90 (1.48, 4.00)	102 (53)
	最後	47.5 (31)	3.98 (2.03, 4.02)	656 (29)	13.3 (9.97, 14.9)	3.35 (57)	8.2 (63)

T _max及t _1/2呈現為：中值(min, max)。所有其他PK參數呈現為：平均值(CV%)。AR = 第1天與最後一天之間的累積比。NC = 無法計算。實例 3 ：式 (II) 化合物的活性及藥物動力學

例示性式(II)化合物提供於下表5。化合物2在表中列為化合物編號2。本文所述的化合物揭示於US申請公開案第20200190064號中，該文獻之內容以全文引用之方式併入，尤其是關於式(II)化合物(諸如化合物2)或其醫藥學上可接受之鹽或鏡像異構物，以及前述者之製備及使用方法。表 5 ：例示性式 (II) 化合物

化合物	結構
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

在一些實施例中，式(II)化合物選自由以下組成之群： 2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫呔 -1-基)氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-腈； 2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫-5,8-乙橋呔 -1-基)氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-腈； 2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫-5,8-甲橋呔 -1-基)側氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-腈； 1-(3,5-二氯-4-((7,7-二甲基-1-側氧基-2,5,6,7-四氫-1H-環戊烷[d]嗒 -4-基)氧基)苯基)-2,4-二側氧基-1,2,3,4-四氫嘧啶-5-腈； 2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4-二氫呔 -1-基)側氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-腈； 2-(3,5-二氯-4-((5-氯-4-側氧基-3,4-二氫呔 -1-基)側氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-腈； 2-(3,5-二氯-4-((5-甲基-4-側氧基-3,4-二氫呔 -1-基)側氧基)苯基)-3,5-二側氧基-2,3,4,5-四氫-1,2,4-三 -6-腈； 2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫-5,8-乙橋呔 -1-基)側氧基)苯基)-1,2,4-三 -3,5(2H,4H)-二酮； 2-(3,5-二氯-4-((7,7-二甲基-1-側氧基-2,5,6,7-四氫-1H-環戊基[d]嗒 -4-基)側氧基)苯基)-1,2,4-三 -3,5(2H,4H)-二酮；以及 2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4-二氫呔 -1-基)側氧基)苯基)-1,2,4-三 -3,5-(2H,4H)二酮。

與參考文獻中的 參考化合物相比(「Discovery of 2-[3,5-Dichloro-4-(5-isopropyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yloxy)phenyl]-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahydro[1,2,4]triazine-6-carbonitrile (MGL-3196), a Highly Selective Thyroid Hormone Receptor β Agonist in Clinical Trials for the Treatment of Dyslipidemia,」Martha等人, Journal of Medicinal Chemistry, 2014, 3912-3923)，式(II)化合物對THR-β受體具有良好的促效活性且對THRα具有改良的選擇性。參考化合物的結構為。

測試資料顯示於表6及表7中。表 6 ：式 (II) 化合物對甲狀腺素受體 β 之結合活性

化合物	IC50
	THR-β結合力(µM)	THR-α結合力(µM)	THR-α/-β選擇性(係數)
2	0.17	＞10	＞58.8
3	1.23	＞10	＞ 8.1
4	2.33	＞10	＞4.29
5	5.2	＞10	＞1.92
6	0.36	4.3	＞11.9
7	1.47	＞10	＞6.80
8	1.78	＞10	5.61
9	0.80	0.2	0.25
10	0.17	1.22	7.17
11	0.262
參考化合物	0.26	5.0	19.2
三碘甲狀腺素(T3)	0.00052	0.00026	-

表 7 ：式 (II) 化合物對甲狀腺素受體 β 的促效活性

化合物	EC ₅₀
THR-β促效活性(µM)	THR-α促效活性(µM)
2	1.75	3.98
6	2.45	4.25
9	0.79	1.08
10	0.097	0.123
參考化合物	2.48	4.57
三碘甲狀腺素(T3)	0.001	0.0005

與參考化合物相比，例示性式(II)化合物顯示較高THR-β活性(＜0.2 µM)及/或對THRα之較高選擇性。資料亦表明，式(II)化合物可活化甲狀腺激素受體β之下游信號。

藥物動力學評價：將購自Shanghai Sippr-Bk Laboratory Animal Co., Ltd. (具有動物生產許可證編號SCXK (上海) 2008-0016)之六隻健康雄性SD大鼠分成2組，每組3隻。

藥物製備：取一定量藥物且添加至2% Klucel LF + 0.1% Tween 80水溶液中，以製備透明溶液或均勻懸浮液。

劑量：使SD大鼠禁食隔夜且各自藉由以2 mg/kg之投與劑量及10 mL/kg之投與體積進行胃內輸注來給藥。

操作：藉由胃內輸注化合物而對大鼠給藥。在給藥之前及之後的第15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、10小時及24小時，自尾靜脈收集至少0.2 mL血液；接著將血液置於肝素化樣品管中，在4℃及3500 rpm下離心10分鐘以分離血漿。接著將肝素化樣品管在-20℃下儲存，且允許大鼠在給藥後2小時進食。

在胃內輸注不同濃度之藥物之後，測定大鼠血漿中之測試化合物含量：血漿樣品在室溫下解凍，各取50 µL且添加至130 µL內標工作溶液(1000 ng/mL，乙腈、甲苯磺丁脲)中，且混合物攪拌約1分鐘且接著在4℃及13000 rpm下離心10分鐘。取50 µL上清液且與100 µL之50%乙腈水混合，且接著引入用於LC/MS/MS分析。

藥物動力學參數的結果如表8所示。表 8 ：大鼠之醫藥代謝資料

化合物	劑量	達到尖峰時間	峰值血液藥物濃度	曲線面積	半衰期
(mg/kg)	(h)	(ng/mL)	(ng∙h/mL)	(h)
2	2.0	4.67±1.15	2007±106	24790±3704	4.56±0.42
6	2.0	5.33±1.15	727±183	9242±1245	5.14±0.83
參考化合物	2.0	5.3±1.15	1163±97.1	12854 ±961	3.53±0.42

資料顯示例示性化合物展現良好的藥物動力學吸收及顯著的藥物動力學優勢。與參考化合物相比，例示性化合物在相同劑量及製備下顯示較高Cmax值及暴露量。實例 4 ：化合物 2 對血清膽固醇及三酸甘油酯的影響

向SD大鼠餵食高膽固醇飲食2週，在該時間內血清膽固醇含量增加約4倍。腹膜內注射0.3至30 mpk單次劑量之化合物2或單次30 mpk劑量之MGL-3196，且在注射之後24小時分析血清之總血清膽固醇及三酸甘油酯。化合物2使血清總膽固醇顯著降低30-70% (圖4A）。化合物2使血清三酸甘油酯相對於0時顯著降低30-80% (圖4B)。實例 5 ：化合物 2 對小鼠 NASH 模型的影響

將高脂肪飲食餵給C57BL/6J小鼠10週以誘導肥胖(＞38 g BW)。肥胖小鼠腹膜內(i.p.)注射0.5 μl/g 25% CCl ₄(於橄欖油中調配)，一週兩次，歷時四週，以誘導纖維化，且一組正常BW小鼠腹膜內注射橄欖油，一週兩次，歷時四週，以充當健康對照組。在相同給藥期內，肥胖小鼠經口餵食媒劑或不同劑量之化合物2，一天一次，歷時28天。在CCl ₄給藥日，在化合物或媒劑給予後4小時投與CCl ₄。在第27天，所有動物在終末安樂死之前禁食約16小時。在第28天，處死所有動物且分析各種生物參數。量測總體重、肝重量、心臟重量及腦重量且利用腦重量將肝及心臟重量之變化標準化。

化合物2顯著降低肝/腦重量而對總體重或心臟/腦重量無影響(圖5)。關於化合物2對脂肪變性、發炎及纖維化之影響分析肝組織組織學。化合物2在所有測試劑量下顯著減少脂肪變性，在3及10 mpk下顯示減少發炎及顯著減少肝纖維化的傾向(圖6)。化合物2亦在所有測試劑量下顯著減少血清總膽固醇、三酸甘油酯及ALT (圖7)。

收集肝樣品以藉由RNA定序(RNAseq)進行全總轉錄本分析。使用Illumina標準方案進行RNAseq庫(n=5/組)製備及定序。使用STAR比對軟體對定序讀段執行比對，且使用RSEM估算讀段計數。使用EdgeR軟體測定差異表現基因(與經媒劑處理之NASH對照小鼠相比)。使用Advaita軟體進行基因本體論分析，其中變化倍數及經調整之p值截止值分別為＞1.5及＜0.05。基因本體論來源於基因本體論聯盟資料庫(2019年4月26日)((Ashburner等人, Gene ontology: Tool for the unification of biology. Nature Genetics 25(1): 25-9 (2000)；Gene Ontology Consortium, Creating the Gene Ontology Resource: Design and Implementation. Genome Research 11: 1425-1433 (2001))。化合物2對與膠原蛋白細胞外基質及肝星形細胞活化相關之基因的表現具有顯著影響，主要是降低其表現量(相對於NASH對照小鼠)(圖8)。實例 6 ： pH 及增溶劑對化合物 2 溶解度的影響

評估化合物2 (鉀鹽)在不同pH水平下之溶解性。化合物2於水溶液中之溶解性依賴pH且隨pH增加，如表9中所示。在增溶劑(月桂基硫酸鈉，SLS)存在下，在24小時之後，化合物2於pH 10.0緩衝液 + 2 wt% SLS中的溶解度在25℃下進一步提高至308 μg/mL。表 9：pH及增溶劑對化合物2之溶解度的影響

	溶解度(μg/mL)
溶劑	24 h (無2 wt% SLS)	24 h (有2 wt% SLS)
0.1 N HCl	＜0.03	5.7
pH 2.0緩衝液	＜0.07	5.5
pH 4.0緩衝液	＜0.07	10.0
pH 6.0緩衝液	2.2	42.3
pH 8.0緩衝液	10.8	301.9
pH 10.0緩衝液	10.2	308.2

化合物2之大致pKa = 4.12。實例 7 ：化合物 2 調配物在米格魯犬中的藥物動力學、食物影響

為了測定增溶劑對化合物2之攝取的影響，在有或無5 wt% SLS的膠囊中調配50 mg (基於游離酸)化合物2 (參見表10)且投與經五肽胃泌素預處理(6 μg/kg，化合物2投與之前的30 ±2分鐘藉由肌肉內注射來投與)的禁食米格魯犬。量測24小時期間的血漿化合物2濃度(參見圖9)。有5 wt% SLS的調配物使化合物2的暴露(C _max, AUC)增加大於70% (參見表11)。表 10：50 mg 化合物2膠囊調配物之組成.

	調配物1 (PO1) (wt%)	調配物2 (PO2) (wt%)
化合物2	18.25	18.25
微晶纖維素PH-102	51.16	47.83
甘露醇200SD	25.58	23.92
十二烷基硫酸鈉SLS Fine	0	5.0
交聯羧甲纖維素鈉	3.0	3.0
膠狀二氧化矽Aerosil 200 Pharma	1.0	1.0
硬脂酸鎂LIGAMED MF-2-V	1.0	1.0

表 11 ：化合物2在以50 mg膠囊給予米格魯犬(n=5)後的藥物動力學.

	調配物1	調配物2
C _max(ng/mL)	572	1010
T _max(h)	3.60	3.20
t _1/2(h)	4.46	4.11
AUC _0- _終末(ng*h/mL)	3420	6210
AUC _0-inf(ng*h/mL)	3700	6360

為了測定pH對PK效能的影響，將米格魯犬分成兩組(n=3/組)。第1組犬用五肽胃泌素預處理(6 μg/kg，化合物2投與之前的30±2分鐘肌肉內注射)。第2組犬用法莫替丁預處理(2個錠劑，20 mg/錠劑，化合物2投與之前的180 ±10分鐘經口投與)。投與化合物2 (10 mg膠囊，5% SLS)，且監測血漿化合物2濃度24小時且描繪於圖10中。在研究條件下，犬中出現的pH影響最小。為了測定食物對PK效能的影響，將米格魯犬分成兩組(n=3/組)。禁食組犬禁食隔夜直至給藥後4小時。餵食組犬在投與之前的30分鐘餵給高脂肪食物。監測血漿化合物2濃度24小時。投與化合物2 (10 mg膠囊，5% SLS)，且監測血漿化合物2濃度24小時且描繪於圖11中。食物攝取延遲化合物2 T _max，但對血漿暴露無影響。實例 8 ：化合物 2 於健康人類個體中的單次遞增劑量試驗 方法

對化合物2 (鉀鹽)執行單遞增劑量臨床試驗。四組8名健康參與者以3:1比率(n=6給予活性劑且n=2給予安慰劑)隨機分配接受化合物2 (3 mg、10 mg、30 mg或60 mg膠囊)或匹配安慰劑，且在研究第1天、在禁食狀態期間投與。在給藥前及給藥後的不同時間點測定化合物2及PD生物標記物之血漿含量。

在整個研究期間，評估不良事件(AE)監測、常規臨床實驗室測試(包括甲狀腺軸測試[游離及總甲狀腺激素三碘甲狀腺素(T3)、游離及總甲狀腺激素甲狀腺素(T4)、促甲狀腺激素(TSH)]心臟生物標記物[CK-MB、肌鈣蛋白I]及肝生物化學)、密集的生命徵象、心臟遙測術及心電圖。使用驗證式液相層析-串聯質譜分析來測定血漿及尿液化合物2濃度。

在給藥前及在單次劑量之研究藥物(安慰劑或化合物)投與之後的0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、48及72小時收集血漿樣品用於測定化合物2濃度及PK取樣。在給藥前及在以下時間點收集尿液樣品用於測定化合物2濃度及PK取樣：0-6小時、6-12小時、12-24小時及24-48小時。使用Phoenix ^®WinNonlin ^®(Certara, LP, Princeton, NJ)，經由非隔室方法估算PK參數。使用免疫分析量測血清藥效學(PD)生物標記物脂蛋白元B (Apo B)及性激素結合球蛋白(SHBG)濃度，且使用分光測光學測定血清脂質。

給藥前及給藥後48小時及72小時執行PD取樣。使用變異數分析模型計算PD標記物相對於基線的變化百分比，其中相對於基線的變化百分比作為因變數，處理組作為固定影響，且基線作為共變數。分析僅使用觀測資料而不對遺漏資料進行設算。結果 治療引發不良事件監測

所有不良事件的嚴重程度均為輕度或中度，且基本上與研究藥物無關。未報告與心臟相關的AE (例如心搏過速、心律失常)，且未發現生命徵象或ECG參數發生顯著變化(參見表12)。表12

	安慰劑 (n=8)	3 mg化合物2 (n=6)	10 mg化合物2 (n=6)	30 mg化合物2 (n=6)	60 mg化合物2 (n=6)
所有CTCAE等級的任何AE	1 (12.5%)	2 (33.3%)	0	2 (33.3%)	0
1級CTCAE	0	0	0	1 (16.7%)	0
2級CTCAE	0	0	0	1 (16.7%)	0
3級或更高級CTCAE	0	0	0	0	0
嚴重AE	0	0	0	0	0
AE與藥物的關係
不相關	1 (12.5%)	2 (33.3%)	0	1 (16.7%)	0
不太可能相關	0	0	0	0	0
可能相關	0	0	0	1 (16.7%)*	0
相關	0	0	0	0	0

*一位個體報告在第1天及第3天出現頭痛，頭痛自發地消退，且在第2天報告胸膜痛(左腋窩)，胸膜痛持續數小時且在一次劑量(1000 mg)的乙醯胺苯酚之後消退。 安全與甲狀腺軸監測

在化合物2給予後的24小時，心率保持穩定且在正常範圍內，其依據如安慰劑組中所見類似的模式(圖12)。TSH、游離T3及游離T4含量保持在正常範圍內。沒有個體經歷比正常值上限(ULN)大超過2倍的ALT增加；沒有個體展現高於正常範圍的膽紅素含量。另外，未觀測到心臟生物標記物(肌鈣蛋白I、CK-MB)或其他臨床安全測試出現顯著變化。 藥物動力學

在禁食條件下，化合物2的吸收可變性低(%CV≤33%)。暴露(AUC，C _max)與劑量大致成比例。化合物2之中值半衰期的範圍為13.8至17.3小時，支持每日給藥一次。測定所有劑量的最小腎排出。參見表13、圖13A、圖13B。

表13

化合物2劑量	AUC _inf(hr*ng/mL)	C _max(ng/mL)	T _max(h)	t _1/2(h)	f _e(%劑量，尿液)
3 mg (n=6)	4060 (16.6)	217 (13.9)	4.00 (3.00-4.00)	17.3 (13.8 – 20.1)	2.95 (62)
10 mg (n=6)	8110 (23.9)	614 (29.0)	4.00 (3.00-4.03)	14.4 (11.5 – 16.2)	2.05 (74)
30 mg (n=6)	33000 (33.0)	1800 (23.7)	4.00 (3.00-6.00)	15.7 (11.3 – 23.1)	1.78 (35)
60 mg (n=6)	50000 (31.4)	3300 (33.2)	4.00 (3.00-4.00)	13.8 (10.5-16.9)	1.53 (53)

參數以平均值 (%CV) 呈現為 3 個有效數字，但 T _max和 t _1/2除外，以中位數 (最小-最大範圍) 表示。f _e為尿液中作為未修飾之化合物2分泌的劑量分率。 藥效學

在研究第1天給予單次劑量之化合物2之後的第3天，性激素結合球蛋白(SHBG)及脂蛋白元B(Apo B)之平均變化百分比分別顯示於圖14A及圖14B中。平均變化百分比係指變異數分析模型的最小平方均值(LSM)及標準誤差(SE)。相對於安慰劑的P值：*＜0.05；**＜0.01；***＜0.001；****＜0.0001。單次劑量之≥10 mg 化合物2之後，觀測到SHBG相對於安慰劑顯著增加。以單次劑量投與化合物2之後，第3天觀測到LDL-c、總膽固醇及Apo-B出現劑量依賴性降低，第4天結果類似。單次劑量之化合物2之後，觀測到三酸甘油酯含量無顯著變化(參見表14)。表14：PD標記物變化，第3天

	安慰劑(PBO) (n=8)	3 mg (n=6)	10 mg (n=6)	30 mg (n=6)	60 mg (n=6)
SHBG
基線(nmol/L)	35.0 (17.97)	46.7 (26.30)	55.0 (20.63)	26.0 (11.19)	39.3 (31.97)
變化(nmol/L)	-0.77 (2.17)	0.20 (2.51)	15.8 (2.61)	6.0 (2.6)	5.05 (2.49)
LSM %變化	-3.8 (3.91)	6.3 (4.52)	31.3 (4.69)	16.5 (4.67)	13.8 (4.48)
相對於PBO的P值	-	0.11	＜0.0001	0.0023	0.0064
LDL-c
基線(nmol/L)	106.1 (36.06)	137.5 (17.4)	133.7 (18.2)	123.3 (23.55)	125.2 (45.96)
變化(nmol/L)	5.8 (3.44)	-3.98 (3.39)	0.68 (3.34)	-15.7 (3.32)	N/A
LSM %變化	5.6 (2.85)	-3.1 (2.80)	0.70 (2.76)	-12.5 (2.75)	N/A
相對於PBO的P值	-	0.048	0.24	0.0002	N/A
HDL-c
基線(nmol/L)	45.4 (11.40)	51.0 (22.53)	63.7 (23.55)	49.5 (7.82)	48.2 (13.93)
變化(nmol/L)	0.29 (0.93)	0.87 (0.91)	-1.1 (0.96)	-6.1 (0.91)	N/A
LSM %變化	1.7 (1.77)	2.4 (1.73)	-1.0 (1.83)	-12.1 (1.74)	N/A
相對於PBO的P值	-	0.78	0.3027	＜0.0001	N/A
TC
基線(nmol/L)	171.7 (45.05)	216.5 (29.87)	217.7 (38.10)	196.2 (31.2)	191.2 (51.68)
變化(nmol/L)	2.3 (4.73)	-1.85 (4.59)	-1.93 (4.61)	-24.14 (4.52)	N/A
LSM %變化	1.6 (2.15)	-0.88 (2.09)	-0.84 (2.09)	-11.84 (2.06)	N/A
相對於PBO的P值	-	0.44	0.45	0.0002	N/A
Apo B
基線(nmol/L)	86.7 (23.18)	113.5 (20.06)	105.8 (9.26)	101.2 (15.89)	92.3 (24.9)
變化(nmol/L)	3.8 (2.72)	-1.5 (3.14)	-5.6 (3.0)	-11.5 (2.97)	-13.9 (3.0)
LSM %變化	5.5 (2.63)	-2.7 (3.04)	-6.0 (2.91)	-11.0 (2.9)	-15.75 (2.91)
相對於PBO的P值	-	0.064	0.0081	0.0003	＜0.0001

結論

至多60 mg之單一遞增劑量的化合物2總體安全且良好耐受且展現可變性低、與劑量成比例的線性血漿暴露。在所有單次劑量水平下，半衰期皆為＞13小時，支持每日一次經口給藥。未變化之化合物2的腎排出率最小，表明腎消除為次要路徑。

在單次劑量之化合物2之後，觀測到對SHBG、Apo B及LDL-c出現顯著的劑量依賴性作用，表明存在潛在的功效。相對於化合物2在臨床前模型中的有效劑量(在小鼠NASH模型中，3,320 ng*h/mL的臨限值AUC達成顯著的組織改善)，所有化合物2劑量皆在人類個體中達成足夠的暴露水平。

安全、PK及PD結果支持化合物2的連續開發且表明其非常適合與其他口服小分子NASH藥劑共調配為每日一次固定劑量的口服組合。實例 9 ：化合物 2 在健康人類個體中的多次遞增劑量試驗

對化合物2進行多次遞增劑量臨床試驗。四組8名健康參與者以3:1比率(n=6給予活性劑且n=2給予安慰劑)隨機分配接受化合物2 (1 mg、3 mg、6 mg或10 mg膠囊)或匹配安慰劑，且在禁食狀態期間、每日投與一次，歷時14天。在給藥前及給藥後的不同時間點測定化合物2及PD生物標記物之血漿含量。

在整個研究期間，評估不良事件(AE)監測(表15)、常規臨床實驗室測試(包括甲狀腺軸測試[游離及總甲狀腺激素三碘甲狀腺素(T3)、游離及總甲狀腺激素甲狀腺素(T4)、促甲狀腺激素(TSH)]心臟生物標記物[CK-MB、肌鈣蛋白I]及肝生物化學)(圖15A-C、圖16A-C)、密集的生命徵象、心臟遙測術及心電圖。使用驗證式液相層析-串聯質譜分析來測定血漿及尿液化合物2濃度。

第一次劑量給予前及給予後的0.5、1、2、3、4、6、8、12及24小時，在第3、4、5、8、11及13天給藥的給藥前，及在研究藥物(安慰劑或化合物)給予前及在投與14天之後的0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、48及72小時，收集血漿樣品用於測定化合物2濃度及PK取樣。(參見表16、圖17) 使用Phoenix ^®WinNonlin ^®(Certara, LP, Princeton, NJ)、經由非隔室方法估算PK參數。使用免疫分析量測血清藥效學(PD)生物標記物脂蛋白元B (Apo B)及性激素結合球蛋白(SHBG)濃度，且使用分光測光學測定血清脂質。

亦進行PD取樣。使用變異數分析模型計算PD標記物相對於基線的變化百分比，其中相對於基線的變化百分比作為因變數，處理組作為固定影響，且基線作為共變數。分析僅使用觀測資料而不對遺漏資料進行設算。研究第15天的PD資料顯示於圖18中。 結果與結論 安全性表15：安全與不良作用

依據類別的個體AE發生率	安慰劑(N=6) n (%)	3 mg (N=6) n (%)	6 mg (N = 6) n (%)	10 mg (N=6) n (%)
所有CTCAE等級的任何AE	0	1 (16.7%)	1 (16.7%)	2 (33.3%)
1級	0	1 (16.7%)	1 (16.7%)	2 (33.3%)
2級或更高級	0	0	0	0
嚴重AE	0	0	0	0
AE與藥物的關係
不相關	0	1 (16.7%)	0	2 (33.3%)
不太可能相關	0	0	0	0
可能相關	0	0	1 (16.7%)	0
相關	0	0	0	0

*一名個體報告眩暈；CTCAE = 不良事件常用術語標準，AE = 不良事件；治療引發不良事件(TEAE)為研究藥物第一次給予時或第一次給予之後發生的事件。不良事件的嚴重程度係根據CTCAE 5版分級。 14天每日一次給予至多10 mg的安慰劑或化合物2在總體上良好耐受。不符合研究中止準則或劑量遞增中止準則。所有AE為1級且大部分被認為與研究藥物無關。隨機分配接受化合物2的所有個體完成研究而未中斷研究藥物。在整個研究期間，心率及血壓保持穩定。游離T4以劑量依賴方式下降，而TSH或游離T3未發生明顯變化。T4變化無症狀且被認為在臨床上不顯著，表明周邊甲狀腺激素調節引起游離T4降低而T3或TSH無變化。

各組的平均ALT值相似，且與安慰劑組無顯著差異；未治療之個體的ALT升高至≥2×ULN。對於經治療之患者而言，注意到GGT出現劑量依賴性增加，而值仍低於ULN。觀測到總睪固酮出現劑量依賴性增加，但未鑑別出游離含量出現顯著變化。

未鑑別出ECG、心臟生物標記物或其他臨床實驗室測試出現顯著變化。藥物動力學及藥效學表16：藥物動力學

第14天PK參數	1 mg，QD	3 mg，QD N=6	6 mg，QD N=6	10 mg，QD N=6
AUC _tau(hr.ng/mL) (平均值，% CV)	1090 (15.7)	3600 (26.9)	8310 (44.4)	10600 (21.1)
C _max(ng/mL) (平均值，%CV)	80.3 (20.0)	291 (30.9)	699 (35.1)	996 (18.0)
C _tau(ng/mL) (平均值，%CV)	25.7 (28.6)	77.9 (37.6)	175 (64.7)	196 (38.0)
t _1/2(hr) (中值，min-max)	19.5 (17.0- 23.8)	16.0 (14.1 – 19.6)	15.8 (12.7 – 17.6)	15.4 (13.1-18.5)

藥物動力學資料表明口服生物可用性良好且PK可變性低。多次劑量的化合物2引起SHBG出現顯著的劑量依賴性增加，即使在3 mg QD的低劑量下。在化合物2的所有劑量水平下，觀測到總膽固醇、LDL-c、Apo B及三酸甘油酯降低，但在第15天、在10 mg劑量組中觀測到顯著降低。截至第15天，HDL-c未發生顯著變化。此等結果證明每日一次低劑量的化合物2為有效的。

實例10：對化合物2在健康人體中的藥物-藥物相互作用研究

活體外研究表明，化合物2對於有機陰離子轉運多肽(OATP) 1B1/1B3的首過抑制及乳癌抗藥性蛋白(BCRP)轉運蛋白的腸抑制具有潛力(OATP1B1 IC50=2.01微莫耳濃度；OATP1B3 IC50=0.71微莫耳濃度；BCRP IC50=9.37微莫耳濃度)。藉由投與化合物2及ROS (如表17中所述)與PK取樣的組合來測定化合物2對共投與之羅素他汀(rosuvastatin，ROS)(一種抗高脂血症藥物及OATP與BCRP受質)於健康參與者中之代謝的影響。表17

研究日	1	2	3-8	9	10-11	12
第1組(n=10)	10 mg ROS PO的單次劑量	無治療	至多90 mg化合物2，QD PO	至多90 mg的單次劑量化合物2 + 10 mg ROS PO之單次劑量	無治療	門診出院

PO = 經口；QD = 每日一次

另外，化合物3為腸表現之轉運蛋白P-醣蛋白(P-gp)及BCRP (P-gp IC50=3.92微莫耳濃度；BCRP IC50=4.39微莫耳濃度)之抑制劑。基於活體外研究，化合物3對此等轉運蛋白的抑制具有增強共投與之化合物2吸收的潛力。因此，如表18中所述，執行藥物-藥物相互作用(DDI)研究，以評估化合物3經由抑制腸P-gp及BCRP來增強化合物2吸收的潛力。表18

研究日	1	2-6	7-12	13	14-16	17
第2組	單次劑量至多90 mg化合物2 PO	無治療	15 mg化合物3 QD PO	至多90 mg 化合物2之單次劑量 + 15 mg化合物3之單次劑量	無治療	門診出院

實例 11 ：食物對健康人體中之化合物 2 的影響

藉由在餵食及禁食狀態期間投與化合物2 (如表19中所述)與PK取樣之組合來測定食物對健康參與者中之化合物2之吸收及藥物動力學的影響。表19

研究時段/ 研究日	第1 時段/ 第1 天	第2 天至第8 天	第2 時段/ 第9 天	第10 天至第11 天	第12 天
第3組序列A (n=4)	至多90 mg化合物2 PO (禁食)	沖洗	至多90 mg化合物2 (餵食)	無治療	門診出院
第3組序列B (n=4)	至多90 mg化合物2 PO(餵食)	沖洗	至多90 mg化合物2 PO(禁食)	無治療	門診出院

參與者經歷隔夜禁食(在給藥之前至少10小時，除水之外，不提供食物或液體)。序列A在第9天且序列B在第1天，在研究藥物投與之前的30分鐘提供含有約1000 kcal及45%至55%脂肪的高脂肪/高卡路里早餐。參與者完成(100%消耗)早餐之後的5分鐘時或5分鐘內投與研究藥物。

如前述實例中所述執行甲狀腺軸安全監測及心血管安全監測。實例 12. 在大鼠 NASH 模型中進行的化合物 1 與化合物 3 之組合療法

動物處理：到達後，使大鼠保持2週的適應期，在此期間其習慣於動物設施工作人員且進行經口管飼程序的訓練。2週後，將動物置於CHDFD (缺乏膽鹼之高脂肪飲食)且預餵4週。大鼠接著開始用測試化合物治療，且每週3次腹膜內注射 NaNO ₂，同時其保持CDHFD另外8週。腹膜內投與25 mg/kg溶於PBS中的NaNO ₂，一週3次(週一、週三及週五)，歷時8週，同時保持CDHFD。

最終處死：各治療組之一半動物在第84天終止。各組中之另一半動物在第二天(第85天)終止。在處死當天，使動物禁食2小時且接受各別測試物質之最終治療。在最終化合物治療之後，動物不再取食，直至處死。在最後一次投藥之後的第4小時，處死所有動物且對肝取樣供進一步分析。

結果：缺乏膽鹼之高脂肪飲食(CDHFD)通常用於在嚙齒動物物種中誘導NASH樣表型。另外，在CDHFD大鼠中藉由腹膜內(IP)注射亞硝酸鈉(NaNO ₂)誘導肝纖維化可用於模擬晚期NASH疾病。因此，大鼠CDHFD+NaNO ₂NASH模型用於測試化合物3單獨及與化合物1組合之功效。在此模型中，在每日口服藥物及每週三次腹膜內NaNO ₂治療之前，向雄性威斯塔(Wistar)大鼠餵飼CDHFD 4週以誘導疾病。在以單一藥劑或組合形式給與化合物3 (3 mg/kg)及化合物1 (25 mg/kg) 8週之後，處理肝組織以藉由RNAseq進行全總轉錄本分析，尋找與疾病消退相關之基因表現變化。在NASH中，消退為一種複雜過程，其涉及免疫系統之特殊細胞(包括調節性T細胞(Treg)及M2巨噬細胞)對肝的浸潤。Treg及M2巨噬細胞參與免疫抑制及減輕發炎且在包括NASH之肝損傷的動物模型中似乎具有有益作用。為尋找此等細胞之存在，吾等利用RNAseq表現資料、使用細胞類型特異性基因表現標誌執行單一樣品基因集富集分析(ssGSEA)，以定量Treg及M2巨噬細胞浸潤至肝中之相對含量(圖19)。相對於經媒劑處理之NASH對照動物，化合物3 (3 mg/kg)與化合物1 (25 mg/kg)之組合對Treg與M2巨噬細胞均顯示顯著更高的分數。相比之下，經單一藥劑治療之動物與對照無顯著差異。藉由分析Treg及M2巨噬細胞之個別標記物(包括Foxp3 (Treg)、Ikzf2 (Treg)及Cd163 (M2巨噬細胞))來驗證此等結果(圖20)。僅化合物3 (3 mg/kg)與化合物1 (25 mg/kg)之組合顯示與Treg及M2巨噬細胞相關之標記物的顯著較高表現。綜合而言，此等資料表明化合物3 (FXR促效劑)與化合物1 (SSAO之抑制劑)之組合使得肝臟中之與NASH消退相關之免疫細胞標記物的表現增加。鑒於其獨特作用機制，化合物3及化合物1可在組合使用時提供互補益處以加速NASH消退過程。

此等結果表明FXR促效劑與SSAO抑制劑之組合經組合以具有大於單獨投與之兩種藥物中之任一者的作用。實例 13 ：化合物 1 與化合物 3 之組合療法在大鼠 NASH 模型中的差異基因表現

進行研究以顯示FXR促效劑與SSAO抑制劑組合在大鼠NASH模型中的有益作用。

動物處理：到達後，使大鼠保持2週的適應期，在此期間其習慣於動物設施工作人員且進行經口管飼程序的訓練。2週後，將動物置於缺乏膽鹼之高脂肪飲食(CHDFD)且預餵4週，以誘導脂肪變性及NASH樣疾病表型。大鼠接著用測試化合物治療另外8週，同時保持CDHFD。在化合物治療的同時，藉由每週三次腹膜內(IP)注射向大鼠投與亞硝酸鈉(溶解於PBS中的25 mg/kg NaNO ₂)以誘導肝纖維化。

取樣及分析：在MedGenome Inc.進行RNA定序(RNAseq)之前，將小肝塊收集至RNAlater (Thermo Fisher Scientific Dreieich Germany)中且在-20℃下儲存。藉由Illumina定序，使用標準方法對肝組織進行RNAseq分析。簡言之，使用Illumina Truseq股式mRNA套組產生RNAseq庫(n=5/組)且在NovaSeq 6000定序儀上進行定序。使用STAR (v2.7.3a)比對軟體進行比對，且在比對之前，移除相對於核糖體及粒線體基因體定位之讀段。使用HTSeq (v0.11.1)估算原始讀段計數且使用DESeq2 (v2.22.2)標準化。使用DESeq2 (R Bioconductor套裝)測定差異表現基因(DEG)。結果

缺乏膽鹼之高脂肪飲食(CDHFD)通常用於在嚙齒動物物種中誘導NASH樣表型。另外，在CDHFD大鼠中藉由腹膜內(IP)注射亞硝酸鈉(NaNO ₂)誘導肝纖維化可用於模擬晚期NASH疾病。因此，大鼠CDHFD+NaNO ₂NASH模型用於測試化合物3單獨及與化合物1組合之功效。在此模型中，在每日口服藥物及每週三次腹膜內NaNO ₂治療之前，向雄性威斯塔大鼠餵飼CDHFD 4週以誘導疾病。在以單一藥劑或組合形式給與化合物3 (3 mg/kg)及化合物1 (25 mg/kg) 8週之後，處理肝組織以藉由RNAseq進行全總轉錄本分析。表20顯示CDHFD+NaNO ₂大鼠中所鑑別之差異表現基因(DEG)的總數及變化方向(亦即，相對於媒劑對照組上調或下調)，該等大鼠經化合物3 (3 mg/mg)、化合物1 (25 mg/kg)或化合物3 (3 mg/kg)與化合物1 (25 mg/kg)之組合治療。使用≥1.5倍之絕對變化倍數截止值及＜0.01之經調整之p值，在化合物3治療組中鑑別出309個DEG，在經化合物1治療之動物中鑑別出847個DEG，且在組合治療組中鑑別出1351個DEG。此等結果表明相對於單一藥劑治療組，組合療法對DEG之總數產生至少累加效應。

驚人的是，相對於個別治療組，在組合治療組中觀測到較大數目之上調DEG。圖21顯示分別使用≥1.5之絕對變化倍數及＜0.01之經調整之p值截止值，在各治療組中鑑別之DEG (相對於媒劑NASH對照)之數目及重疊。表20. 差異表現基因(DEG)

治療組	下調DEG	上調DEG	DEG 總數
化合物3(3 mg/kg)	118	191	309
化合物1(25 mg/kg)	641	206	847
化合物3(3 mg/kg) + 化合物1(25 mg/kg)	724	627	1351

經鑑別之DEG數目(媒劑NASH對照組相對於治療組)，其針對各治療組鑑別。經調整之p值＜0.01且變化倍數≥1.5倍。

吾等接著檢查先前所述之與脂質代謝及三酸甘油酯累積相關之基因的差異表現(Shepherd E, Karim S, Newsome P及Lalor P., Inhibition of vascular adhesion protein-1 modifies hepatic steatosis in vitro and in vivo. World J Hepatol. 2020 12(11): 931-948)。化合物1治療引起與脂質代謝及脂肪酸轉運相關之基因表現發生統計顯著變化，該等基因包括Vldlr、Fabp2、Vegfc、Ldlrap1、Ldlr、Ppargc1a及Slc27a5 (表21，由星號表示)。其中，Vldlr、Fabp2及Slc27a5改變≥1.5倍(以粗體顯示)。用化合物3治療後，僅Fabp2受到顯著差異表現。有趣的是，化合物3與化合物1之組合產生的與脂質代謝及脂肪酸轉運相關之DEG實質上大於任一單一藥劑治療組。此外，相對於媒劑對照組，若干基因差異表現≥1.5倍，包括Vldlr、Fabp2、Il1r2、Ppara、Ldlr、Ppargc1a、Rxra及Slc27a5。

綜合而言，此等資料表明化合物3 (FXR促效劑)與化合物1 (SSAO之抑制劑)之組合使得參與脂質代謝及脂肪酸轉運之基因的表現顯著變化。此外，相對於單獨化合物3治療，基因表現變化模式與增強之抗脂肪變性作用在很大程度上一致。鑒於其獨特作用機制，化合物3及化合物1可在組合使用時提供互補益處以加速NASH消退過程。表 21.與脂質代謝及脂肪酸轉運相關之差異表現基因

	相對於媒劑對照組的差異基因表現分析 (log ₂ 變化倍數 )
基因	化合物1 (25 mg/kg)	化合物3 (3 mg/kg)	化合物1 + 化合物3 (25 mg/kg + 3 mg/kg)
Vldlr	-1.6*	-0.58	-1.17*
Fabp2	-1.02*	-1.02*	-1.2*
Il1r2	-0.45	-0.05	-0.95*
Vegfc	-0.45*	-0.28	-0.54*
Lrp2	0.08	0.33	0.32*
Irs2	0.13	0.27	0.41*
Vegfa	0.23	0.48	0.41*
Lrp1	0.25	0.51	0.48*
Irs1	0.26	-0.03	0.45*
Ppara	0.32	0.36	0.68*
Slc27a1	0.33	0.16	0.51*
Ldlrap1	0.38*	-0.07	0.32*
Ldlr	0.41*	0.4	0.67*
Ppargc1a	0.51*	0.25	0.85*
Rxra	0.51	0.03	0.62*
Slc27a5	0.68*	0.5	0.81*

CDHFD+NaNO ₂大鼠肝中之基因表現分析(RNAseq)。參與脂質代謝及脂肪酸轉運之基因相對於媒劑對照組的Log ₂變化倍數。負變化方向(-)表示相對於媒劑，治療使表現減少；正變化方向表示相對於媒劑對照組，基因表現增加。≥1.5倍之絕對變化倍數值(亦即，≥0.6或≤-0.6之log ₂變化倍數)以粗體指示。*p值＜0.05。實例 14 ：化合物 2 與化合物 3 之組合療法在大鼠 NASH 模型中的差異表現基因 (DEG)

將高脂肪飲食餵給C57BL/6J小鼠10週以誘導肥胖(＞38 g BW)。肥胖小鼠腹膜內(i.p.)注射0.5 μl/g 25% CCl ₄(於橄欖油中調配)，一週兩次，歷時四週，以誘導纖維化，且一組正常BW小鼠腹膜內注射橄欖油，一週兩次，歷時四週，以充當健康對照組。在相同給藥期期間，將媒劑、化合物3或化合物2以單一藥劑或組合經口餵給肥胖小鼠，一天一次，歷時28天。在CCl ₄給藥日，在化合物或媒劑給予後4小時投與CCl4。在第27天，所有動物在終末安樂死之前禁食約16小時。在第28天，處死所有動物且收集肝樣品以藉由RNA定序(RNAseq)進行全總轉錄本分析。使用Illumina標準方案進行RNAseq庫(n=5/組)製備及定序。使用STAR比對軟體對定序讀段執行比對，且使用RSEM估算讀段計數。使用EdgeR軟體測定差異表現基因(與經媒劑處理之NASH對照小鼠相比)。使用Advaita軟體進行基因本體論分析，其中變化倍數及經調整之p值截止值分別為＞1.5及＜0.05。基因本體論來源於基因本體論聯盟資料庫(2019年4月26日)((Ashburner等人, Gene ontology: Tool for the unification of biology. Nature Genetics 25(1): 25-9 (2000)；Gene Ontology Consortium, Creating the Gene Ontology Resource: Design and Implementation. Genome Research 11: 1425-1433 (2001))。

在經媒劑治療之NASH對照與用化合物3 (3 mg/mg)、化合物2 (1 mg/kg)或化合物3 (3 mg/kg)與化合物2 (1 mg/kg)之組合治療之小鼠之間鑑別的差異表現基因(DEG)之變化方向(亦即，向上或向下)及總數顯示於表22中。使用＞1.5倍之絕對變化倍數截止值及＜0.05之經調整p值，在化合物3治療之小鼠中鑑別出617個DEG，在化合物2治療之小鼠中鑑別出1113個DEG，且在化合物3與化合物2之組合治療之小鼠中鑑別出1871個DEG。此等結果表明，相對於自各單一治療組鑑別之DEG之算術和，組合療法對DEG之總數產生至少累加效應。組合治療組中之下調DEG (下調DEG)的數目高於各單一藥劑治療組之下調DEG的算術和。此等結果表明，化合物3與化合物2之組合產生的DEG預期數目大於單一藥劑療法，且此效應為大於預期數目之下調DEG的結果。表 22. 差異表現基因 (DEG)

治療組	下調DEG	上調DEG	DEG總數
化合物3 (3 mg/kg)	271	346	617
化合物2 (1 mg/kg)	635	478	1113
化合物3 (3 mg/kg) + 化合物2 (1 mg/kg)	1182	689	1871

經鑑別之DEG數目(媒劑NASH對照組相對於治療組)，其針對各治療組鑑別。經調整p值＜0.05且變化倍數＞1.5倍實例 14.1 ：基因本體論 (GO) 富集分析

基因本體論(GO)富集分析用於理解表22中之結果的潛在生物後果。為了進行GO術語富集分析，將針對特定術語(亦即，生物學過程)註釋之DEG數目(亦即，富集)與僅偶然預期之DEG數目進行比較。利用過度展現方法計算觀測至少指定數目之DEG的統計顯著性(p值)；對p值進行校正以供多重比較。

肝炎為NASH疾病之定義特徵及關鍵驅動因素，且在很大程度上由白血球過度活化及浸潤至肝臟中介導。經由消炎機制直接靶向發炎過程或藉由例如使代謝功能正常化及減少肝脂肪變性減少氧化應激而間接靶向發炎過程的療法具有影響NASH疾病之潛力。表23顯示與白血球相關生物過程相關之DEG的GO術語富集分析。如表23中所示，僅化合物3與化合物2之組合顯示與白血球相關生物過程有關之DEG的統計顯著富集。此等結果表明，化合物3與化合物2之組合對白血球相關生物過程的影響比任一單獨的單一療法深遠得多。表 23. 針對白血球相關生物過程的 GO 術語富集分析

生物過程	GO ID	化合物3 (3 mg/kg)	化合物2 (1 mg/kg)	化合物3 + 化合物2
骨髓白血球活化	GO:0002274	0.52	0.36	1.6E-08
白血球活化	GO:0045321	0.73	0.45	5.8E-08
白血球遷移	GO:0050900	0.47	0.36	2.3E-07
涉及發炎反應的白血球活化	GO:0002269	0.38	0.1	5.1E-06
骨髓白血球遷移	GO:0097529	0.74	0.52	1.1E-05
白血球趨化	GO:0030595	0.65	0.45	2.6E-05
白血球細胞-細胞黏附	GO:0007159	0.58	0.36	6.9E-05
白血球增殖	GO:0070661	0.79	0.62	9.4E-05
調節白血球遷移	GO:0002685	0.49	0.25	0.00017
白血球介導免疫	GO:0002443	0.71	0.84	0.00018

針對各治療組所示之經調整p值。所示化合物3與化合物2組合治療組中富集之前十個白血球相關生物過程。表24顯示與免疫及白血球相關生物過程相關之DEG的GO術語富集分析，該等DEG藉由如實例14中所述的組合療法獨特地富集。表24 藉由組合療法獨特富集之免疫相關生物路徑的GO術語富集分析

生物過程	GO術語ID	DEG計數(n)	總基因(n)	校正 p值
免疫反應	GO:0006955	216	941	1.21E-10
發炎反應	GO:0006954	124	467	1.12E-09
骨髓白血球活化	GO:0002274	55	156	1.59E-08
免疫系統過程	GO:0002376	327	1674	3.94E-08
白血球活化	GO:0045321	145	615	5.79E-08
免疫系統過程的正向調節	GO:0002684	156	687	1.86E-07
白血球遷移	GO:0050900	69	233	2.33E-07
調節免疫反應	GO:0050776	132	567	5.75E-07
調節免疫系統過程	GO:0002682	202	972	9.68E-07
涉及發炎反應的白血球活化	GO:0002269	18	32	5.1E-06
骨髓白血球遷移	GO:0097529	45	142	1.09E-05
白血球趨化	GO:0030595	44	142	2.6E-05
免疫反應的正向調節	GO:0050778	104	455	3.94E-05
先天免疫反應	GO:0045087	113	508	5.06E-05
白血球細胞-細胞黏附	GO:0007159	61	231	6.9E-05
白血球增殖	GO:0070661	59	223	9.41E-05
神經發炎反應	GO:0150076	20	47	0.000173
調節白血球遷移	GO:0002685	43	148	0.000173
白血球介導免疫	GO:0002443	66	265	0.000185
涉及免疫反應的細胞活化	GO:0002263	51	192	0.000323
涉及免疫反應的白血球活化	GO:0002366	50	188	0.000373
調節白血球活化	GO:0002694	87	386	0.000383
調節發炎反應	GO:0050727	63	256	0.000397
白血球活化的正向調節	GO:0002696	58	230	0.000406
後天免疫反應	GO:0002250	69	293	0.000639
白血球遷移的正向調節	GO:0002687	32	106	0.000913
免疫效應過程	GO:0002252	114	554	0.001036
發炎反應的正向調節	GO:0050729	29	93	0.001062
涉及免疫反應的嗜中性白血球活化		9	14	0.001102
免疫反應活化信號轉導	GO:0002757	59	246	0.001269
調節白血球增殖	GO:0070663	44	168	0.001381
免疫反應調節信號傳導路徑	GO:0002764	60	255	0.001816
白血球聚集	GO:0070486	8	12	0.001944
調節白血球介導免疫	GO:0002703	42	164	0.003108
免疫效應過程的正向調節	GO:0002699	43	170	0.003403
白血球細胞-細胞黏附的正向調節	GO:1903039	38	145	0.003827
調節白血球細胞-細胞黏附	GO:1903037	50	208	0.003827
涉及免疫反應的骨髓細胞活化	GO:0002275	21	64	0.004329
白血球趨化的正向調節	GO:0002690	21	64	0.004329
白血球分化	GO:0002521	86	413	0.004907
免疫反應的活化	GO:0002253	68	312	0.005594
骨髓白血球介導免疫	GO:0002444	22	70	0.005847
白血球介導免疫的正向調節	GO:0002705	29	104	0.006575
急性發炎反應	GO:0002526	24	81	0.007746
白血球去顆粒	GO:0043299	17	50	0.00959
調節白血球趨化	GO:0002688	23	78	0.010243
免疫反應活化細胞表面受體信號傳導路徑	GO:0002429	35	140	0.012131
調節骨髓白血球介導的免疫	GO:0002886	16	47	0.012275
免疫反應調節細胞表面受體信號傳導路徑	GO:0002768	36	147	0.014639
白血球增殖的正向調節	GO:0070665	26	99	0.023913

藉由化合物1 (3 mg/kg)與化合物2 (1 mg/kg)組合療法獨特富集之前50個免疫相關生物過程。顯示富集DEG之數目、包含生物過程之基因之總數及經調整p值。實例 14.2 ：所選生物過程之差異基因表現分析

亦檢查與NASH疾病相關之其他生物過程。圖22顯示與不同生物過程相關之上調及下調DEG (媒劑NASH對照組相對於治療組)的數目，該等生物過程與NASH及纖維化有關，包括：白血球活化(GO：0045321)；發炎反應(GO：0006954)及膠原蛋白代謝過程(GO：0032963)。對於所檢查之各種生物過程而言，化合物3與化合物2之組合顯示的DEG預期數目始終大於單一藥劑治療組。另外，相比於基於單一藥劑治療之結果所預期的，化合物3與化合物2之組合顯示下調DEG的數目大於預期。

圖23顯示分別使用≥1.5之絕對變化倍數及＜0.05之經調整之p值截止值，在各治療組中鑑別之DEG (相對於媒劑NASH對照)之數目及重疊。化合物3與化合物2組合時，差異表現基因之總數目大於預期，其中＞800為該組合所獨有的，且此主要由較高數目之下調DEG驅動。圖24顯示相對於NASH對照，在治療組中顯著富集之生物過程的數目及重疊。＜0.05之FDR調整之p值用作統計顯著性截止值。實例 14.3 ：對小鼠 NASH 模型的其他影響

如實例14中所述，在治療的第28天，使動物安樂死以收集樣品。使用Hitachi 7180臨床分析儀進行膽固醇、三酸甘油酯及ALT之分析。處理肝樣品以進行脂質定量(比色分析，SpectraMax 340PC384)、組織學及RNA分析。使用Illumina標準方案進行RNAseq庫製備(n=5/組)及定序。使用STAR比對軟體對定序讀段執行比對，且使用RSEM估算讀段計數。使用EdgeR測定相對於NASH對照之差異表現基因(DEG)。使用Advaita軟體進行基因本體論分析。

圖25顯示如藉由組織學分析根據脂肪變性、小葉發炎及纖維化程度定量的肝脂肪變性、發炎及纖維化。在終止時收集血清且分析三酸甘油酯(TG)、總膽固醇(TC)及肝損傷之生物標記丙胺酸轉胺酶(ALT)。展現個別動物之資料(圓點)及平均值(虛線)；**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001，相對於NASH媒劑對照組(NASH)。藉由單向變異數分析、隨後藉由圖基來確定統計學資料。化合物1與化合物2之組合療法顯著改善NASH之多種組分，包括脂肪變性、纖維化、血清三酸甘油酯、總膽固醇及肝損傷，如藉由ALT所量測。

圖26顯示與FXR及THRβ路徑活化相關之基因的平均表現量。在單一治療組與組合治療組中，FXR及THRβ路徑基因受到調節。

圖27顯示與膠原蛋白/纖維化及發炎路徑相關之基因的平均表現量(每百萬個讀段之計數，CPM)，其由RNAseq測定。*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001，相對於媒劑(NASH)對照。誤差條表示標準差(n=5)。化合物1與化合物2之組合療法顯著減少膠原蛋白/纖維化基因及發炎基因(諸如Col1a1、Col3a1、Mmp2、Lgals3、Cd68及Ccr2)之表現。結論

化合物3與化合物2之組合治療引起基因表現變化，該等基因表現變化分別與FXR及THR-β之中靶促效作用一致。化合物3與化合物2之組合療法顯著減少纖維化及發炎基因之表現。

基因本體論富集分析鑑別出不可預測的結果：化合物3與化合物2組合療法獨特地富集了幾乎500種生物過程，包括與免疫過程(發炎)、白血球功能及膠原蛋白(包括膠原蛋白產生)相關之彼等生物過程的下調(參見圖22、圖27)。此等資料共同支持化合物3與化合物2之組合相對於單一藥劑療法可對NASH提供額外益處的概念，諸如相比於單獨的單一藥劑療法，更顯著地減少NASH之發炎組分或纖維化組分。預期此等影響會降低疾病嚴重程度以及疾病惡化。實例 15 ：組合療法在 NASH 患者中的安全、耐受性、功效

執行隨機分組、雙盲、安慰劑對照研究，以評價組合療法(例如化合物1與化合物2，或化合物1、2及3之組合)的安全及功效。患有NASH之個體用SSAO抑制劑與THR-β促效劑之組合治療，每日一次，歷時約12至52週。藉由MRI-PDFF監測肝脂肪，藉由校正之T1 (cT1)鬆弛時間監測纖維化發炎，且量測基於血清的非侵入性纖維化或NASH標記物，諸如C3、TIMP-1、PIIINP、CK-18及ALT。亦監測血清脂質含量(諸如LDL-c及其他脂質)之變化。

實例 16 ：化合物 2 鉀鹽的產生 . 將(E)-(2-氰基-2-(2-(3,5-二氯-4-((4-側氧基-3,4-二氫呔 -1-基)氧基)苯基)亞肼基)乙醯基)胺基甲酸乙酯(7.4 kg，0.99-1.01X)、乙酸鉀(7.4 kg，0.95-1.00X)及DMAc (41 kg，5.6-6.0X)裝入500L GL反應器中。所得混合物在80-90℃下保存12-16小時。降混合物調節至20-30℃。在20-30℃下添加KOH (0.85 kg，0.11-0.17X)於製程用水(8 kg，1.0-1.5X)中的溶液1至2小時。在20至30℃下攪拌混合物1至2小時。在20-30℃下添加製程用水(39 kg，5.0-5.5X) 4至6小時。在20至30℃下攪拌混合物2至3小時。所得混合物藉由不鏽鋼離心機離心。濕濾餅用製程用水沖洗兩次(18+20 kg，2-3X)。將濕濾餅及製程用水(38 kg，5.0-6.0X)裝入500L GL反應器中。在20-30℃下攪拌混合物2-3小時。所得混合物藉由不鏽鋼離心機離心。濕濾餅用製程用水沖洗兩次(18+22 kg，2-3X)，且在減壓下、在55-65℃下、藉由不鏽鋼乾燥器乾燥，獲得化合物2之粗鉀鹽(5.45 kg，純度：98.4%；分析：95.9%；產率：72%)。

將化合物2之粗鉀鹽(5.3 kg，0.99-1.01X)及DMSO (43 kg，6.0-8.0X)裝入250 GL反應器(R1)中。所得混合物在40 -50℃下保存0.5-1小時，得到透明溶液。在40-50℃下，經1至2小時添加乙酸乙酯(EA)(22 kg，4.0-4.5X)。所得混合物經由管線內過濾器過濾且轉移至250 GL反應器(R2)中。R1用DMSO (1.8 kg，0.2-0.5X)沖洗，且物質經由管線內過濾器過濾且轉移至R2中。調節至40-50℃且在40-50℃下，經1至2小時將EA (22 kg，4.0-4.5X)裝入R2中。將化合物2晶種(0.010 kg，0.001-0.002X)裝入R2中。所得混合物在40至50℃下攪拌1至2小時。在40至50℃下，經12至15小時將EA (67 kg，12.0-13.0X)裝入R2中，且在40至50℃下攪拌2至3小時。在40至50℃下，經2小時將EA (27 kg，1.0-5.0X)裝入R2中，且在40至50℃下攪拌2至3小時。經2小時將R2調節至20-30℃且在20至30℃下攪拌4至6小時。所得混合物在不鏽鋼過濾乾燥器中過濾。濕濾餅用EA沖洗兩次(16+14 kg，2-3X)。將EA (36 kg，6-7X)裝入不鏽鋼過濾乾燥器。調節至20至30℃且在20至30℃下攪拌2至3小時。所得混合物在不鏽鋼過濾乾燥器中過濾。濕濾餅用EA (16 kg，2-3X)沖洗，且在減壓下、在60-70℃下、藉由不鏽鋼過濾乾燥器乾燥。篩分物質，得到純化的化合物2鉀鹽(4.16 kg，純度：99.81%；分析：97.6%；產率：80%)。實例 17 ：

方法

兩部分試驗之第1部分為對具有非肝硬化NASH表型之30個成人進行的雙盲、安慰劑對照研究，其評價歷時12週每日一次(QD)的10 mg化合物1，隨後在第16週時進行停止治療評價(圖28)。藉由不良事件(AE)及實驗室測試對第1部分中期分析主要終點進行安全評估；血漿VAP-1活性相對於基線(BL)的變化百分比為次要終點。亦評估肝炎及纖維化之探究成像及基於血液之生物標記物。相對於基線之變化(或變化百分比)的分析係使用變異數分析模型，其中相對於基線的變化(或變化百分比)作為因變數，包括治療組及隨機分層作為固定效應及基線作為共變數。

結果

安慰劑組與治療組患者的人口統計資料及基線特徵總體相似(圖29)。幾乎所有患者(28/30，95%的化合物1及90%的安慰劑)完成第1部分(圖30)。化合物1 (10 mg)良好耐受，其AE發生率與安慰劑相似(圖31)。所有AE為輕度或中度的，未報告嚴重AE或AE或實驗室異常的傾向(圖32A及圖32B)。cT1自基線至治療結束時未發生顯著變化(圖33)。化合物1 (10 mg)使得大部分個體之血漿VAP-1活性在第2週出現＞98%抑制且持續抑制直至第12週(圖34)。在安慰劑與10 mg化合物1之間，BL cT1的變化、肝脂肪分率、肝酶或細胞角蛋白-18不存在統計顯著差異。在第12週，觀測到細胞黏附標記物VCAM-1與肝纖維發生標記物金屬蛋白酶-1組織抑制劑(TIMP-1)與安慰劑組存在顯著差異(圖35及圖36)。細胞黏附標記物(包括VCAM-1及ICAM-1)：第12週，相對於BL，VCAM-1在化合物1組中減少24.327 (20.5850) µg/L且在安慰劑組中增加63.450 (31.6861) µg/L之平均值(±SE)(p=0.0245)。第8週，相對於BL，ICAM-1在化合物1組中減少34.85 (56.03) µg/L之平均值(±SE)且在安慰劑組中增加7.46 (46.97) µg/L之平均值(±SE)(p=0.0313)。第12週，相對於BL，TIMP-1在化合物1組中減少29.58 (9.26) ng/mL之平均值(±SE)且在安慰劑組中增加13.56 (14.22) ng/mL之平均值(±SE)(p＜0.05)。

結論

化合物1在患者中良好耐受，安全概況類似於安慰劑，其中基線多參數MRI及LS值指示至少2期纖維化之NASH。與安慰劑相比，化合物1 (10 mg)引起血漿VAP-1活性幾乎完全被抑制，引起肝纖維發生標記物TIMP-1含量降低，且引起細胞黏附生物標記物ICAM-1 (第8週)及VCAM-1 (第12週)出現統計學上顯著之降低。治療12週之後，在化合物1與安慰劑之間未觀測到肝炎及損傷之其他標記物出現統計學上顯著之差異。實例 18. 化合物 2 在 LDL-c 升高之健康個體中的臨床評價

目標：評估多次遞增劑量之化合物2在LDL-c升高之健康個體中的總體安全及耐受性。

次要目標：在化合物2之多次遞增劑量之後，評價化合物2在LDL-c升高之健康個體中的PK及PD，

主要終點：治療引發不良事件(TEAE)、生命徵象、臨床實驗室參數及心電圖(ECG)監測

次要終點：化合物2之血漿PK參數、THR-β促效劑標靶接合之PD標記物，包括LDL-c及其他脂質參數及性激素結合球蛋白(SHBG)

LDL-c輕度升高的健康自願者以3:1隨機分配接受化合物2 (n=6)或安慰劑(n=2)。在研究之MAD組中，隨機分配化合物2的自願者接受多次劑量之1、3、6或10 mg 化合物2，每日一次，歷時14天。

結果

化合物2通常安全且良好耐受，所有化合物2治療組與安慰劑組的AE發生率相似。所有AE均為輕度至中度，無明顯劑量關係。一位安慰劑個體(1 mg組)因撤銷同意書而終止早期研究；所有化合物2個體均完成研究而無過早中斷。不符合研究中止準則或劑量遞增中止準則。

肝生物化學：所有治療組的ALT、AST、ALP及總膽紅素值在總體上相似。接受化合物2之個體無一者之ALT升高至≥2x ULN。無DILI證據。甲狀腺激素：無甲狀腺功能亢進/甲狀腺功能低下的症狀。平均TSH及游離T3值高度可變，但各組間通常相似。在化合物2組中觀測到游離T4出現劑量依賴性降低，此與在其他THR-β促效劑存在下所觀測到的周邊甲狀腺激素調節一致。其他實驗室評估(例如臨床化學、血液學)未顯示明顯傾向。

1、3、6及10 mg 化合物2每日一次給予14天在總體上安全且良好耐受，無甲狀腺功能低下/甲狀腺功能亢進或THR-α促效作用的臨床徵象或症狀。化合物2展現與劑量成比例的PK及低可變性及適於每日給藥一次的半衰期。化合物2使肝THR-β接合之關鍵標記物SHBG以劑量依賴性方式增加。化合物2使得致動脈粥樣硬化的脂質(包括LDL-c、Apo B、總膽固醇及三酸甘油酯)在循環中的含量顯著降低。綜合而言，PD資料表示化合物2的投與在肝中引起穩定的THR-β標靶接合。

本說明書中提及之所有出版物，包括專利、專利申請案及科學論文，皆以全文引用之方式併入本文中用於所有目的，其程度如同各個別公開案，包括專利、專利申請案或科學論文，特別地且個別地指示以引用的方式併入一般。

雖然本發明前述內容已藉由說明及實例較詳細地描述以用於清楚理解之目的，但是熟習此項技術者顯而易知可根據上述教示內容實施某些較小變更及潤飾。因此，說明及實例不應理解為限制本發明之範疇。實例 19 ：在切片檢查確認之 DIO-NASH 雄性小鼠中，化合物 3 與化合物 2 單一及組合治療 12 週對代謝參數、肝病變及 NAFLD 活動性分數 ( 包括纖維化階段 ) 的影響 縮寫清單

Acta2	肌動蛋白α2光滑肌動蛋白
ALP	鹼性磷酸酶
ALT	丙胺酸轉胺酶
ANOVA	變異分析
AST	天冬胺酸轉胺酶
BW	體重
CD146	黑色素瘤細胞黏附分子
cDNA	互補DNA
CK18 M30	細胞角蛋白18 M30
Col1a1	膠原蛋白I型α1
DAB	3,3'-二胺基聯苯胺
DEG	差異表現基因
Dhcr7	7-去氫膽固醇
DIO	飲食誘導肥胖症
DIO-GAN	飲食誘導肥胖症Gubra澱粉素NASH模型
ELISA	酶聯免疫吸附分析
FFPE	福馬林固定、石蠟包埋
FPKM	每百萬個定位讀段、每千鹼基轉錄本的片段
FXR	法尼醇X受體
g	重力
Gal-3	半乳糖凝集素-3
GAN	Gubra澱粉素NASH
H&E	蘇木精及曙紅染色
HDL-c	高密度脂蛋白膽固醇
Hmgcs1	羥甲基戊二醯基輔酶A合酶
HPMC	羥丙基甲基纖維素
HRP	辣根過氧化酶
IHC	免疫組織化學
kg	公斤
LDL-c	低密度脂蛋白膽固醇
Lgals3	半乳糖凝集素-3
mg	毫克
NA	不適用
NAFLD	非酒精性脂肪肝病
NAS	NAFLD活動性分數
NASH	非酒精性脂肪變性肝炎
NP-40	Nonidet P-40
PO	經口(經口給藥)
PSR	天狼星紅
QD	每日一次

引言

非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)(在肝脂肪變性之情形下，表現為肝炎及損傷的疾病)可能需要組合療法，該組合療法靶向疾病之多個方面以達成高度的疾病消退。法尼醇X受體(FXR)(維持代謝路徑恆定的一種核激素受體)及甲狀腺激素受體β (THR-β)(調控與FXR互補之代謝路徑的一種核激素受體)的小分子促效劑正處於開發中以用於治療NASH。在飲食誘導之小鼠NASH模型中評價單獨及組合的化合物3 (FXR之非類固醇促效劑)及化合物2 (分佈於肝中的THR-β選擇性促效劑)。

材料與方法

動物處理與研究設計將Gubra澱粉素NASH (GAN)飲食(40%脂肪、22%果糖、2%膽固醇[D09100310，Research Diets])或低脂肪飲食向C57BL/6JRj雄性小鼠(n=138)餵食35週後開始治療。在治療之前，所有動物經歷肝切片檢查，以便利用非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活動性評分(NAS)及纖維化分期系統進行組織學證實(脂肪變性分數≥2且纖維化分期≥1)及分層。使用GAN飲食(DIO-GAN)之飲食誘導肥胖小鼠基於天狼星紅(PSR)染色之面積百分比隨機分成8個治療組(表25)。DIO-GAN小鼠(n=16/組)接受治療(PO，QD) 12週：媒劑(含有0.5% HPMC+0.2% Tween-80的Tris緩衝液[50 mM，pH 8])、化合物3 (10 mg/kg)、化合物2 (0.3 mg/kg[低]、2 mg/kg [中]或10 mg/kg [高])，或化合物3與化合物2之組合療法(低組合、中組合或高組合)。給予媒劑的低脂肪食物餵食對照組充當健康對照組(n=10)。在持續研究期間，小鼠維持其各別飲食(GAN或低脂肪食物)。執行個體內比較(治療前相對於治療後)以獲得肝切片組織病理學分數。終末定量終點指標包括血漿/肝生物化學、肝組織形態測定，及藉由RNAseq進行的肝總轉錄本分析。表 25. 治療組

分組	劑量	N
低脂肪食物媒劑對照組	NA	10
DIO-GAN 媒劑對照組	NA	16
化合物3	10 mg/kg	16
低化合物2	0.3 mg/kg	16
中化合物2	2 mg/kg	16
高化合物2	10 mg/kg	16
低組合	10 mg/kg化合物3 + 0.3 mg/kg化合物2	16
中組合	10 mg/kg化合物3 + 2 mg/kg化合物2	16
高組合	10 mg/kg化合物3 + 10 mg/kg化合物2	16

分配給研究之治療組. DIO-GAN媒劑對照組每日一次投與媒劑(含有0.5% HPMC + 0.2% Tween 80的Tris緩衝液[pH 8])。NA，不適用。

肝切片處理及評分

藉由將肝樣品在10%中性緩衝福馬林中置放約24小時且接著轉移至70%乙醇中、在4℃儲存來製備福馬林固定、石蠟包埋(FFPE)的肝切片。包埋於塊中之前，將FFPE置於Histokinette中浸潤。接著使用薄片切片機切割3 μm切片組織且將切片固定於載片上。肝切片用蘇木精及曙紅(H&E)染色以評估脂肪變性、發炎及膨大，且用PSR染色以評估纖維化。另外，處理載片，以利用免疫組織化學(IHC)偵測I型膠原蛋白(Col1a1)、半乳糖凝集素-3 (Gal-3)及平滑肌肌動蛋白(α-SMA)蛋白質表現。為了進行H&E染色，載片在Mayer的蘇木精(Dako)中培育，用自來水洗滌，在曙紅Y溶液(Sigma-Aldrich)中染色，脫水且蓋上蓋玻片。對於PSR而言，將載片在Weigert鐵蘇木精(Sigma-Aldrich)中培育，在自來水中洗滌，在天狼星紅(Sigma-Aldrich)中染色且在酸化水中洗滌兩次。藉由振盪載片來移除過量水且載片接著用乙醇脫水，在二甲苯中澄清且蓋上蓋玻片。NAS及纖維化分期如先前所述評分(Kleiner等人，2005)。NAS表示脂肪變性、發炎及膨大分數之未加權總和且在0至8範圍內(表26)；纖維化分期的範圍為0 (無纖維化)至4 (肝硬化)。為了偵測Col1a1、Gal-3及α-SMA，藉由標準程序執行IHC。簡言之，在抗原修復及阻斷內源過氧化酶活性之後，將載片與一級抗體(Col1a1：Southern Biotech，目錄1310-01；Gal-3：Biolegend，目錄125402；α-SMA：Abcam目錄Ab124964)一起培育。使用聚合物HRP-連接子抗體結合物偵測一級抗體。用DAB作為色素原，使一級抗體可視化。最後，用蘇木精對切片進行對比染色且蓋上蓋玻片。表 26 ： NAS 與纖維化之組織學評分

特點	程度	分數
脂肪變性 ( 含有脂滴之肝細胞的百分比)	＜5% 5-33% ＞33-66% ＞66%	0 1 2 3
小葉發炎	無病灶＜2個病灶 2至4個病灶	0 1 2
膨大退化	無很少許多細胞/顯著膨大	0 1 2
纖維化	無竇周或門靜脈周竇周及門靜脈/門靜脈周橋接纖維化肝硬化	0 1 2 3 4

肝酶、血漿脂質及 CK18 M30 之分析

藉由心臟穿刺自異氟醚(2-3%)麻醉的小鼠收集末梢血液，與抗凝血劑混合且在4℃下置放，隨後以3000×g離心10分鐘。將血漿上清液轉移至新管中且立即在乾冰上且在-80℃下儲存。在Cobas c 501自動分析儀上，使用市售套組(Roche Diagnostics)，根據製造商說明書量測丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)、鹼性磷酸酶(ALP)、三酸甘油酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-c)及低密度脂蛋白(LDL-c)。使用市售ELISA套組(Cusabio)，根據製造商說明書量測血漿中的細胞角蛋白18 M30 (CK18 M30)。

肝脂質分析

將肝樣品均質化且在5% NP-40中、藉由在90℃加熱(2次)來萃取TG及TC。將樣品離心且在Cobas c 501自動分析儀上，使用市售套組(Roche Diagnostics)，根據製造商說明書量測上清液中的TG及TC含量。

藉由 RNAseq 進行的肝總轉錄本分析

收集組織且在液氮中急凍且在-80℃下儲存直至處理。使用NucleoSpin套組(MACHEREY-NAGEL)分離RNA。使用Illumina的NEBNext Utra II定向RNA庫製備套組(New England Biolabs)，使用來自各樣品之總共10 ng至1 μg純化RNA產生cDNA文庫。接著在NextSeq 500上，使用NextSeq 500/550高輸出套組V2 (Illumina)將cDNA庫定序。使用Spliced Transcripts Alignment to a Reference (STAR)軟體，將定序資料與小鼠基因體進行比對。使用R套裝DESeq2鑑別差異表現基因。

血漿化合物谷值含量的分析

最後一次投與化合物之後的大約21-24小時，藉由心臟穿刺收集末梢血漿樣品。使用Triple Quad 6500+儀器，藉由高解析度LC-MS/MS分析末梢血漿樣品。將20 μL血漿樣品與200 μL內標溶液(100 ng/mL拉貝洛爾(Labetalol) + 100 ng/mL甲苯磺丁脲(Tolbutamide)於乙腈中)混合，渦旋且在4℃下以4,000 rpm離心15分鐘。將上清液(100 μL)轉移至樣品盤中，與水(100 μL)混合且振盪(800 rpm) 10分鐘，隨後使用0.1%甲酸於水中之梯度(表27)移動相(移動相A)及0.1%甲酸於乙腈中之移動相(移動相B)、以0.6 mL/min之流量注射(2 μL)至1.7 μm, 2.1 x 50 mm ACQUITY UPLC BEH C18管柱(Waters)上。內標1 (滯留時間：0.87分鐘)及內標2 (滯留時間：0.96分鐘)分別用於定量化合物3 (滯留時間：0.87分鐘)及化合物2 (滯留時間：0.97分鐘)。內標(滯留時間：0.76分鐘)用於定量化合物3之葡萄糖苷酸代謝物(滯留時間：0.77分鐘)。利用小鼠血漿基質(混合的媒劑對照組)產生各種分析物的校準曲線(1-3000 ng/mL)。表 27 ： LC-MS/MS 梯度

時間 ( 分鐘 )	移動相 B (%)
初始	35
1.00	98
1.70	98
1.71	35
2.20	中止

結果

試驗設計概述

飲食誘導的肥胖Gubra澱粉素NASH模型(DIO-GAN)再現人類NASH之許多組織病理學特徵(Hansen 2020)。使用DIO-GAN模型評估FXR促效劑化合物3及THR-β促效劑化合物2作為單一藥劑及組合的功效。為了誘發NASH疾病，使C57BL/6JRj小鼠維持高脂肪、高膽固醇及高果糖飲食(GAN飲食) ＞35週。在治療性干預之前，對小鼠進行切片檢查以評估NASH疾病及纖維化嚴重程度；脂肪變性分數＜2且纖維化分期＜1的小鼠自研究中排除。接著基於治療前切片檢查之天狼星紅(PSR)染色分率面積百分比以及藉由全身Echo磁共振成像(EchoMRI)測定的體脂肪組織質量，將DIO-GAN小鼠隨機分為8個治療組(n=16/組)。在單一藥劑治療組中，化合物3每日一次以10 mg/kg之劑量藉由經口管飼來投與，而化合物2每日一次以0.3 mg/kg (低化合物2)、2 mg/kg (中化合物2)或10 mg/kg (高化合物2)之劑量水平藉由經口管飼投與。在組合治療組中，將恆定劑量水平的化合物3 (10 mg/kg)與低、中及高劑量之化合物2組合(亦即，分別為低組合、中組合、高組合)。每日一次藉由經口管飼投與媒劑的DIO-GAN小鼠充當對照。小鼠治療總共12週且在整個研究期間維持GAN飲食。在整個研究期間維持正常飲食的瘦小鼠(n=10)充當健康對照。

治療對體重、食物攝取及肝重的影響

在研究期間，化合物3單獨及與化合物2的組合治療(低劑量組合、中劑量組合及高劑量組合)減少體重(圖46A)。在研究結束時，化合物3的中組合及高組合治療組顯著低於DIO-GAN媒劑對照組(圖46B)。體重降低似乎與食物攝取的減少不相關(圖47)。所有治療組皆顯著改善肝腫大(圖48A)，其中組合治療組(中組合及高組合)中觀測到的肝重降幅最大；脾重變化不顯著(圖48B)。

治療對身體質量組成的影響

在基線(第-1週)及研究第11週，藉由全身EchoMRI測定身體組成，從而以體重百分比測定瘦組織及脂肪組織的相對含量。在各治療組之間，瘦組織與脂肪組織的基線含量良好平衡(圖49A及圖49B)。化合物3及與化合物2的組合治療使第11週的脂肪組織含量降低(圖50A)；在化合物3及組合治療組中觀測到瘦組織相對質量顯著增加(圖50B)。

治療對血漿及肝脂質含量的影響

所有治療組的血漿總膽固醇(TC，圖51A)均顯著降低，其中發現在組合療法(中組合及高組合)的情況下，降幅最大；觀測到肝中的TC存在類似傾向(圖51B)。血漿低密度及高密度脂蛋白膽固醇(分別為HDL-c及LDL-c)的降低與所發現之對TC的影響一致。化合物3及高化合物2以及組合療法使血漿三酸甘油酯(TG，圖52A)顯著降低。僅高組合組中的肝TG含量顯著降低(圖52B)。

治療對活酶的影響

相對於DIO-GAN媒劑對照組，化合物2 (低、中及高)的單一藥劑治療使ALT含量顯著降低(圖53A)；組合療法未使ALT含量顯著降低。AST含量顯示與ALT類似的傾向，但沒有一個治療組與DIO-GAN媒劑對照組存在顯著差異(圖53B)。任一治療組中的ALP含量與DIO-GAN媒劑對照組無顯著差異，但單一藥劑治療組(化合物3、低化合物2及中化合物2)的ALP在數值上低於DIO-GAN媒劑對照組且中組合及高組合治療組的ALP在數值上高於DIO-GAN媒劑對照組(圖54)。

肝組織學

NAFLD 活動性分數 (NAS)

NAFLD活動性分數(NAS)用於評估治療的組織學影響。NAS定義為脂肪變性、發炎及膨大組織學分數之未加權總和且可在0至8範圍內。在治療之前(基線)及在治療12週之後，在研究結束時測定NAS。在各治療組之間，NAS良好平衡，大部分小鼠在基線時的NAS範圍為5-6 (圖55A)。治療12週之後，大部分治療組的NAS顯著改善，且發現在組合療法的情況下，改善最深遠(圖55B)。在化合物3治療組中，56%動物顯示≥1-pt NAS改善，相比之下，低化合物2、中化合物2及高化合物2治療組分別為31%、27%及62% (表28)。組合療法更有效，其中低組合、中組合及高組合的組合治療組中69%、81%及100%小鼠分別顯示≥1-pt NAS改善。另外，組合治療組的NAS改善量級更大。儘管化合物3治療組中0%小鼠的NAS改善＞1-pt，但低組合、中組合及高組合的組合組中分別有19%、25%及43%小鼠達成≥2-pt NAS改善。此等結果優於化合物2單一藥劑治療組，其中化合物2低劑量、化合物2中劑量及化合物2高劑量組中分別有0%、7%及25%小鼠達成≥2-pt NAS改善。表28：治療對NAFLD活動性分數(NAS)的影響

治療(n)	無變化 % (n)	惡化 % (n)	改善 % (n)
≥1-pt	1-pt	≥2-pt	總計
低脂肪對照(10)	80% (8)	10% (1)	10% (1)	0	10% (1)
DIO-GAN對照(16)	68.75% (11)	25% (4)	6.25% (1)	0	6.25% (1)
TERN-101 (16)	43.7% (7)	0	56.25% (9)	0	56.25% (9)
TERN-501-低(16)	56.25% (9)	12.5% (2)	31.25% (5)	0	31.25% (5)
TERN-501-中(15)	73.33% (11)	0	20% (3)	6.7% (1)	26.7% (4)
TERN-501-高(16)	31.25% (5)	6.25% (1)	37.5% (6)	25% (4)	62.5% (10)
低組合(16)	18.75% (3)	12.5% (2)	50% (8)	18.75% (3)	68.75% (11)
中組合(16)	18.75% (3)	0	56.25% (9)	25% (4)	81.25% (13)
高組合(14)	0	0	57.1% (8)	42.9% (6)	100% (14)

脂肪變性

NAS改善主要受到脂肪變性之更大減少驅動(表29)。在化合物3組中，81%在治療結束時顯示脂肪變性改善，但最大改善為1-pt。在化合物2單一藥劑治療組中，發現顯示脂肪變性改善之小鼠百分比發生劑量依賴性增加，在化合物2低劑量、化合物2中劑量及化合物2高劑量組中分別有31%、47%及81%小鼠與此對應。在各化合物2單一藥劑治療組中，一個小鼠(亦即，約6%)的脂肪變性顯示≥2-pt改善。相比之下，低組合、中組合及高組合治療組中25%、31%及71%小鼠分別顯示≥2-pt脂肪變性改善。定量肝組織形態測定術支持此等影響，其顯示含有脂滴之肝細胞百分比降低(圖56A)及肝脂質含量降低(圖56B)以及脂滴尺寸較小(圖57)。表 29 ：治療對組織學脂肪變性分數的影響

治療(n)	無變化 % (n)	改善 % (n)
1-pt	≥2-pt	總計
低脂肪對照(10)	100% (10)	0	0	0
DIO-GAN對照(16)	81.25% (13)	18.75% (3)	0	18.75% (3)
化合物3 (16)	18.75% (3)	81.25% (13)	0	81.25% (13)
低化合物2 (16)	68.75% (11)	25% (4)	6.25% (1)	31.25% (5)
中化合物2 (15)	53.33% (8)	40% (6)	6.7% (1)	46.7% (7)
高化合物2 (16)	18.75% (3)	75% (12)	6.25% (1)	81.25% (13)
低組合(16)	6.25% (1)	68.75% (11)	25% (4)	93.75% (15)
中組合(16)	6.25% (1)	62.5% (10)	31.25% (5)	93.75% (15)
高組合(14)	0	28.6% (4)	72.4% (10)	100% (14)

化合物3與化合物2之組合引起肝脂肪變性出現較大改善。在基線及治療結束時，藉由組織學測定各個別小鼠的肝脂肪變性。表29顯示各治療組內脂肪變性分數無變化或改善(相對於基線降低1-pt及≥2-pt)的小鼠百分比。總計表示各治療組中顯示脂肪變性相對於基線改善至少1-pt的小鼠百分比。

膨大、發炎及纖維化

肝細胞膨大(細胞凋亡指標)被觀測到的頻率低且未被任一種療法顯著改變。在治療組與DIO-GAN媒劑對照組之間，CK18 M30 (與細胞凋亡相關的血漿生物標記物)亦無顯著差異(圖58)。在低化合物2、中化合物2及高化合物2治療組中以及在中組合的組合組中，治療未使小葉發炎顯著改善，但觀測到發炎分數改善(儘管頻率低)(表30)。為了進一步評估發炎，利用免疫組織化學(IHC)肝染色來測定半乳糖凝集素-3 (Gal-3)(發炎性淋巴球浸潤標記物)的蛋白質表現。相對於DIO-GAN媒劑對照組，化合物3單獨及與化合物2的組合(低組合)治療使得肝中的Gal-3表現量降低(圖59A)。表 30 ：治療對小葉發炎的影響

治療(n)	惡化 % (n)	無變化 % (n)	改善 % (n)
低脂肪對照(10)	10% (1)	80% (8)	10% (1)
DIO-GAN對照(16)	31.25% (5)	68.75% (11)	0
化合物3 (16)	31.25% (5)	68.75% (11)	0
低化合物2 (16)	25% (4)	68.75% (11)	6.25% (1)
中化合物2 (15)	20% (3)	73.3% (11)	6.7% (1)
高化合物2 (16)	31.25% (5)	56.25% (9)	12.5% (2)
低組合(16)	31.25% (5)	68.75% (11)	0
中組合(16)	31.25% (5)	62.5% (10)	6.25% (1)
高組合(14)	35.7% (5)	64.3% (9)	0

治療未顯著改善發炎。在基線及治療結束時，藉由組織學測定小葉發炎。表30顯示各治療組內小葉發炎分數惡化(相對於基線增加≥1-pt)、無變化或改善(相對於基線降低≥1-pt)的小鼠百分比。

與單一藥劑組相比，在組合藥劑治療組中更頻繁地觀測到纖維化分期的改善，但差異未達到顯著性(表31)。在各治療組之間，Col1a1蛋白質表現的變化無顯著差異，如藉由IHC肝染色所測定。在化合物3、低化合物2及中化合物2治療組中觀測到肝星形細胞活化標記物α-SMA的數量減少。僅在低組合治療組中觀測到顯著減少(圖59B)。表 31 ：治療對肝纖維化的影響

治療(n)	惡化 % (n)	無變化 % (n)	改善 % (n)
低脂肪對照(10)	0	100% (10)	0
DIO-GAN對照(16)	31.25% (5)	68.75% (11)	0
化合物3 (16)	37.5% (6)	56.25% (9)	6.25% (1)
低化合物2 (16)	31.25% (5)	62.5% (10)	6.25% (1)
中化合物2 (15)	26.7% (4)	60% (9)	13.33% (2)
高化合物2 (16)	25% (4)	68.75% (11)	6.25% (1)
低組合(16)	37.5% (6)	43.75% (7)	18.75 (3)
中組合(16)	18.75% (3)	75% (12)	6.25% (1)
高組合(14)	21.4% (3)	50% (7)	28.6% (4)

在組合療法的情況下，觀測到更頻繁的纖維化改善。在基線及治療結束時，藉由組織學確定肝纖維化分期。表31顯示各治療組內纖維化惡化(相對於基線增加≥1期)、無變化或改善(相對於基線降低≥1期)的小鼠百分比。

藉由 RNAseq 進行的肝總轉錄本分析

處理來自治療組的終末肝樣品(n=10)以便藉由RNAseq進行總轉錄本分析。藉由與DIO-GAN媒劑對照組比較來鑑別出差異表現基因(DEG)。鑑別所有治療組的DEG；低化合物2治療組中的DEG數目最少(987)且高組合治療組中的DEG數目最大(3533)。高化合物2與高組合的比較表明，組合療法使參與能量及脂質代謝的基因受到更大程度的差異性表現(圖60)。藉由比較變化倍數值之標識線(點線，斜率=1)與線性回歸線(實線，斜率=0.55)之斜率來說明此。組合組中之角鯊烯環氧酶(Sqle)及7-脫氫膽固醇還原酶(Dhcr7)(參與膽固醇代謝的酶)之表現量顯著高於單一藥劑治療組(圖61A及圖61B)。羥甲基戊二醯輔酶A合酶(Hmgcs1)(能量代謝中的關鍵酶)顯示相似的表現模式(圖61C)。硬脂醯輔酶A去飽和酶(Scd1)(一種參與脂肪酸代謝的酶)藉由化合物3治療而減少，且藉由組合療法進一步減少(圖61D)。

最後，吾等檢查與纖維化及發炎相關之所選基因的表現，包括膠原蛋白I型α1 (Col1a1)、肌動蛋白α2光滑肌動蛋白(Acta2)、半乳糖凝集素3 (Lgals3)及黑色素瘤細胞黏附分子(CD146)。一般而言，相對於DIO-GAN媒劑對照組，化合物3單獨及與化合物2的組合使此等基因的表現顯著減少(圖62)；組合治療組與單獨化合物3治療組無顯著差異。

總結

使用飲食誘導之小鼠肥胖Gubra-澱粉素NASH (DIO-GAN)模型評價化合物3及化合物2作為單一藥劑及組合對NASH及纖維化之代謝及組織病理學參數的功效。此模型已受到廣泛的表徵且在不使用肝毒性劑誘導疾病的情況下再現人類NASH之多個方面( Hansen 2020)。在此模型中，使小鼠維持高脂肪、高膽固醇及高果糖飲食(GAN飲食) ＞35週。在治療性干預之前，對小鼠進行切片檢查以藉由組織學評估NAFLD活動性分數(NAS)及纖維化嚴重程度；研究中僅使用基線脂肪變性分數＞2且纖維化分期＞1的小鼠。重要的是，此預選步驟確保僅具有顯著NAFLD活動性之小鼠用於研究中。此外，對於基線NAS的瞭解，不僅可以評估相對於DIO-GAN媒劑對照組的治療反應，而且可以評估相對於個別基線值的治療反應。DIO-GAN小鼠用單獨及組合的化合物3及化合物2治療12週且在整個研究期間維持GAN飲食。小鼠用單次劑量水平的化合物3單獨或與3種劑量水平(低[0.3 mg/kg]、中[2 mg/kg]及高[10 mg/kg])的化合物2組合治療，以便最大化辨別潛在累加治療效果的能力。

就顯示NAS減少之小鼠百分比及NAS改善量級而言，化合物3與化合物2之組合使NAS的減少大於單一藥劑療法。NAS改善主要受到脂肪變性較大減少的驅動，此與血漿及肝總膽固醇及三酸甘油酯的較大降低相關。在組合治療組中，在組合療法之情況下發現的較大總體影響似乎不受到個別藥物之較高暴露的驅動(表32)。另外，儘管體重變化可有助於改善NAS，但在化合物3治療組與組合治療組(低組合及中組合)之間，體重降幅相似，表明單獨的體重損失不能充分解釋組合療法的較大抗脂肪變性活性。實際上，組合療法對涉及能量及脂質代謝之基因的表現存在較大影響。此等結果表明，化合物3與化合物2之組合似乎對此等路徑具有至少一種相加效應且可能負責所觀測到的較大抗脂肪變性活性。

治療未顯著改善發炎及纖維化的組織學改善。然而，注意到纖維化改善的證據，包括在使用組合療法的情況下顯示纖維化改善的小鼠數目較大。另外，總轉錄本分析鑑別出組合療法使纖維化及發炎的關鍵標記物減少。化合物3療法亦減少此等基因的表現，表明FXR促效作用在基因表現層面上可為針對纖維化及發炎之作用的主要驅動因素。在此情況下，FXR促效作用可視為與THR-β促效作用之較大抗脂肪變性機制互補。結合藉由化合物3與化合物2組合而觀測到的較大抗脂肪變性效應，此等結果表明此組合可解決NASH疾病的多個方面。 參考文獻

Kleiner DE, Brunt EM, Van Natta M, Behling C, Contos MJ, Cummings OW, Ferrell LD, Liu YC, Torbenson MS, Unalp-Arida A, Yeh M, McCullough AJ, Sanyal AJ; Nonalcoholic Steatohepatitis Clinical Research Network. Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology. 2005 Jun;41(6):1313-21.

Hansen, H.H., Ægidius, H.M., Oró, D. et al. Human translatability of the GAN diet-induced obese mouse model of non-alcoholic steatohepatitis. BMC Gastroenterol 20, 210 (2020).

補充資料 表 32 ：藉由 LC-MS/MS 測定的血漿藥物谷值濃度

治療組(n)	平均谷值分析物濃度 (SD) ， ng/mL
化合物3	化合物3 葡萄糖苷酸代謝物	化合物2
化合物3 (16)	7.4 (3.8)	52.7 (26.0)	ND
中化合物2 (15)	ND	ND	135.5 (62.0)
高化合物2 (16)	ND	ND	320.0 (189.9)
中組合(16)	5.8 (3.5)	53.1 (36.8)	49.5 (42.9)
高組合(14)	3.3 (1.8)	49.0 (23.7)	143.0 (87.9)

在最終治療劑量(亦即，谷值)後的21-24小時藉由心臟穿刺收集終末血漿樣品，藉由LC-MS/MS分析該等終末血漿樣品。化合物3之葡萄糖苷酸代謝物。值代表平均值及標準差(SD)。ND，未測定實例 20 ：

執行多中心、隨機分組、雙盲、劑量範圍、安慰劑對照的臨床研究，以評價經口投與之化合物1在推定患有非肝硬化非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)之患者中的安全、藥物動力學、藥效學及初步功效。研究參與之總持續時間為大約22週，其由6週篩選期、12週治療期及4週隨訪期組成。

招募滿足研究合格性準則、在臨床上或組織學上診斷為非肝硬化之推定NASH之大約80位成年患者且在研究的2個部分中以2:1之總體比率隨機分成3個劑量組及安慰劑組。合格性準則包括：超重或肥胖，臨床診斷或切片檢查為NASH，ALT≥43 U/L (男性)或≥28 U/L (女性)，MRI-cT1肝炎＞800 ms。

此研究的第1部分評估10 mg化合物1 (實例2中研究的最高劑量)。在實例2中，此劑量在健康參與者中引起血漿VAP-1/SSAO特異性胺氧化酶活性出現＞90%抑制。預期NASH患者具有較高的VAP-1基線含量，且因此，化合物1在NASH患者中的PD效應可不同於健康參與者。可基於在10 mg劑量下對安全及PK的評估來招募高達20 mg的較高劑量，且可基於觀測化合物1在10 mg組中對血漿VAP-1/SSAO活性之穩定PD效應來招募4 mg的降低劑量，從而最小化暴露的患者數目，直至可在研究之第1部分中證實化合物1的PK及PD效應。

在第1部分中，大約30位患者將經口接受10 mg化合物1 (n = 20)或匹配安慰劑(n = 10)，每日一次，歷時12週。大約12位隨機分組患者在第一次劑量(第0週/第1天)之後、在第6週及在最後一次劑量之研究藥物(第12週)之後參與密集的PK及PD收集。隨機分組將確保化合物1組中之大約8位患者及安慰劑組中之大約4位患者被指派至PK/PD子研究。不參與PK/PD子研究的患者僅接受谷值PK/PD取樣。

第1部分中的所有患者已完成第6週評估後，執行中期分析。評估中期PK及PD資料。亦評審盲態安全資料。若觀測到穩定的VAP-1/SSAO活性抑制且自第1部分可獲得的PK表明較低劑量亦可能引起穩定的VAP-1/SSAO活性抑制，則可起始第2部分中的招募(使用4 mg化合物1)。若安全資料表明10 mg化合物1總體安全且良好耐受，且自第1部分可獲得的PK預測高達20 mg劑量的靶向暴露就AUC _0-24hr而言將低於5400 ng•hr /mL的上限且就C _max而言將低於768 ng/mL的上限，則可起始第2部分的招募(使用高達20 mg化合物1的劑量)。

在第2部分中，大約50位患者經口接受4 mg化合物1 (n = 20)及/或多達20 mg化合物1 (n = 20)或匹配安慰劑(n = 10)，每日一次，歷時12週。大約15位隨機分組患者在第一次劑量(第0週/第1天)之後、在第6週及在最後一次劑量之研究藥物(第12週)之後參與密集的PK及PD收集。隨機分組將確保各化合物1劑量水平之大約6位患者及安慰劑組中之大約3位患者被指派至PK/PD子研究。不參與PK/PD子研究的患者僅接受谷值PK/PD取樣。 PK/PD 子研究及谷值 PK/PD 取樣

收集血漿樣品用於量測研究藥物及代謝物的血漿濃度。收集尿液樣品用於量測研究藥物及代謝物的尿液濃度。不參與PK/PD子研究的患者僅經歷谷值PK取樣。亦執行血液收集用於量測NASH/纖維化標記物(CK-18 (M30及M65)、PIIINP、TIMP-1、HA、PRO-C3及C3M)及發炎標記物(hs-CRP、IL-6、ICAM-1及VCAM-1)。亦可計算以下探究纖維化分數：FIB-4、增強肝纖維化(ELF)及NAFLD。可計算PRO-C3/C3M比率。監測患者的不良事件。

在第1、2、15、29、43、57及85天給藥前收集所有患者的血漿及尿液樣品。對於PK/PD子研究內的患者而言：在第1天(第0週)、第43天(第6週)及第85天(第12週)，在給藥後的30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時及8小時收集血漿樣品，且在給藥後的0至8小時執行總尿液收集。在第2天(第0週)、第44天(第6週)及第96天(第12週)，收集樣品(給藥後第24小時)。在第87天及第88天(第12週給藥後的48小時及72小時)，收集樣品。監測標記物，包括ALT、AST、ALP及總膽紅素。

圖1A顯示投與單次劑量之安慰劑或1、3、6或10 mg化合物1之健康自願者在給藥後第4小時及第168小時的相較於基線之血漿SSAO特異性胺氧化酶活性。圖1B投與單次劑量之安慰劑或1、3、6或10 mg化合物1之健康自願者的相較於基線之血漿總胺氧化酶活性的時程。圖1C顯示在單次劑量之安慰劑或1、3、6或10 mg之後，健康自願者中之化合物1含量的時程。圖1D顯示單次劑量之安慰劑或1、3、6或10 mg化合物1之後，健康自願者之血漿甲基胺濃度的時程。

圖2A顯示單次劑量之1、4或10 mg化合物1之後，健康自願者中之化合物1濃度的時程。圖2B顯示1 mg或4 mg化合物1之7日劑量之最後一天及10 mg化合物1之14日劑量之最後一天的化合物1濃度之時程。

圖3A顯示在1、4或10 mg化合物1之第一日劑量之後的第24小時，健康自願者中的SSAO特異性胺氧化酶活性。圖3B顯示在1、4或10 mg化合物1之第一日劑量之後，健康自願者之血漿甲基胺濃度的時程。圖3C顯示1 mg或4 mg化合物1之7日劑量之最後一天之後與10 mg化合物1之14日劑量之最後一天之後，健康自願者之血漿甲基胺濃度的時程。圖3D顯示1、4或10 mg化合物1之單次劑量之後，健康自願者中之總胺氧化酶活性(相對於基線的變化百分比)的時程。圖3E顯示1 mg或4 mg化合物1之7日劑量之第6天之後，或10 mg化合物1之14日劑量之第13天之後，健康自願者之總胺氧化酶活性(相對於基線的變化百分比)的14天時程。

圖4A顯示化合物2對大鼠高膽固醇血症模型之血清膽固醇的影響。圖4B顯示化合物2對大鼠高膽固醇血症模型之血清三酸甘油酯的影響。

圖5顯示化合物2對小鼠NASH模型之體重及器官重量的影響。

圖6顯示化合物2對小鼠NASH模型之肝脂肪變性、炎症及纖維化的影響。

圖7顯示化合物2對小鼠NASH模型之脂質及肝損傷指標(ALT)的影響。

圖8顯示化合物2對與膠原蛋白細胞外基質及肝星形細胞活化相關之基因表現的影響。

圖9顯示在化合物2與或不與5 wt% SLS之50 mg膠囊投與之後，米格魯犬(beagle dogs)的血漿化合物2濃度。

圖10對五肽胃泌素(pentagastrin)或法莫替丁(famotidine)預治療之後之米格魯犬的血漿化合物2濃度進行了比較。

圖11對處於禁食或餵食狀態下之米格魯犬的血漿化合物2濃度進行了比較。

圖12顯示3 mg、10 mg、30 mg及60 mg劑量之安慰劑或化合物2投與之單次劑量投與之後，健康人類患者的心率。

圖13A顯示3 mg、10 mg、30 mg及60 mg劑量之化合物2投與之後，健康人的血漿化合物2濃度。圖13B表明AUC及Cmax與各劑量的相關性。

圖14A顯示3 mg、10 mg、30 mg及60 mg劑量之化合物2投與單次劑量之後，性激素結合球蛋白(SHBG)相對於基線的變化百分比。圖14B顯示3 mg、10 mg、30 mg及60 mg劑量之化合物2投與單次劑量之後，脂蛋白元B (Apo B)相對於基線的變化百分比。

圖15A、15B及15C分別顯示14天每日投與化合物2或安慰劑之後的第15天，人體中的游離T3、T4及TSH。

圖16A、16B及16C顯示14天每日投與化合物2或安慰劑之後的第15天，人體中之游離睪固酮、總睪固酮及性激素結合球蛋白(SHBG)相對於基線的變化百分比。

圖17顯示在多次遞增劑量研究的第1天及第14天，血漿化合物2濃度隨時間的變化，其中化合物2每天給予一次。

圖18顯示14天每日投與化合物2或安慰劑之後的第15天，人體中之藥效學標記物(性激素結合球蛋白、ApoB、總膽固醇、LDL-c、HDL-c及三酸甘油酯)相對於基線的變化百分比。

圖19顯示藉由單樣本基因集富集分析所測定之Treg及M2巨噬細胞對肝的浸潤程度。對CDHFD大鼠的肝RNA定序資料進行分析，該等大鼠被投與NaNO ₂且經化合物3、化合物1或化合物3與化合物1之組合處理(*p值＜0.05；***p值＜0.001)。

圖20顯示藉由RNA定序對CDHFD大鼠肝中之Treg及M2巨噬細胞標記物進行表現分析，該等大鼠被投與NaNO ₂且經化合物3、化合物1或化合物3與化合物1之組合處理。Ikzf2，IKAROS家族鋅指2 (Treg標記物)；Foxp3，Forkhead Box P3 (Treg標記物)；Cd163 (M2巨噬細胞標記物)。(*p值＜0.05；**p值＜0.01)。

圖21顯示相對於媒劑NASH對照組，藉由RNA定序分析在投與NaNO ₂且經化合物3、化合物1或化合物3與化合物1之組合處理之CDHFD大鼠肝中所鑑別之差異表現基因(DEG)的數目及重疊，使用分別為≥1.5及0.01的倍數變化及p值截止值。

圖22顯示經3 mg/kg化合物3及/或1 mg/kg化合物2處理之小鼠NASH模型之所選生物過程的差異基因表現分析。

圖23顯示相對於媒劑NASH對照組，經3 mg/kg化合物3、1 mg/kg化合物2或3 mg/kg化合物3及1 mg/kg化合物2處理之小鼠NASH模型中所鑑別之差異表現基因(DEG)的數目及重疊。

圖24顯示相對於媒劑NASH對照組，經3 mg/kg化合物3、1 mg/kg化合物2或3 mg/kg化合物3及1 mg/kg化合物2處理之小鼠NASH模型中顯著富集之生物過程的數目及重疊。

圖25顯示相對於媒劑NASH對照組，經3 mg/kg化合物3、1 mg/kg化合物2或3 mg/kg化合物3及1 mg/kg化合物2處理之小鼠NASH模型中的肝脂肪變性、炎症及纖維化以及血清三酸甘油酯、總膽固醇及丙胺酸轉胺酶(ALT)。

圖26顯示相對於媒劑NASH對照組，經3 mg/kg化合物3、1 mg/kg化合物2或3 mg/kg化合物3及1 mg/kg化合物2處理之小鼠NASH模型中的與FXR及THRβ路徑相關之基因的表現量。

圖27顯示經化合物3與化合物2之組合處理之後，與纖維化及發炎路徑相關之基因的平均表現量(每百萬讀段的計數CPM)，其藉由RNAseq測定。在小鼠NASH模型相對於媒劑(NASH)對照組中，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001。

圖28顯示化合物1的研究設計。

圖29顯示患者人口統計資料及基線特徵。

圖30顯示根據研究設計的患者配置。

圖31顯示不良事件的總體概述。

圖32A顯示自基線至第6週及第12週的TIMP-1變化。

圖32B顯示與NASH及炎症生物標記物自基線至第12週之平均(SE)變化有關的結果。

圖33顯示第12週的cT1變化。

圖34顯示第12週時相對於基線的VAP-1/SSAO活性%。

圖35顯示ELF組分(TIMP-1、P3NP、HA)自基線至第12週的變化。

圖36顯示ICAM-1及VCAM-1自基線至第12週的變化。

圖37顯示對化合物2在健康自願者中的總體研究。

圖38顯示化合物2的人口統計資料及基線特徵。

圖39顯示化合物2的第14天血漿濃度-時間特徵曲線。

圖40顯示化合物2的第14天PK參數。

圖41顯示性激素結合球蛋白(SHBG)(自基線至第15天的變化百分比)。

圖42顯示LDL-c (自基線至第15天的變化百分比)。

圖43顯示在治療結束時(第15天)，單次劑量的化合物2使SHBG及LDL-c相對於基線的變化百分比。

圖44顯示單次劑量的化合物2使總膽固醇(TC)、Apo B及三酸甘油酯(TG)均降低。

圖45顯示治療引發不良事件為輕度的且大部分不相關，生命徵象無顯著變化。

圖46A及圖46B顯示切片檢查確認之DIO-NASH雄性小鼠的體重變化。化合物3單獨及與化合物2的組合使體重降低。在研究期間每日量測體重。研究期間的體重變化顯示於圖46A中，其中圓點表示相對於基線的平均體重變化(n=10-16隻小鼠/組)。在圖46B中，條柱表示研究第11週所量測的平均(SD)體重。低脂肪媒劑對照組，白色；DIO-GAN媒劑對照組，灰色；化合物3，藍色；低化合物2，淺橙色；中化合物2，橙色；高化合物2，深橙色；低組合，淺紫色；中組合，紫色；高組合，深紫色。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正(Tukey correction)進行多重比較。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。

圖47顯示研究期間的個別每週攝食量。圓點表示平均每週攝食量(公克)(n=10-16隻小鼠/組)。低脂肪媒劑對照組，白色；DIO-GAN媒劑對照組，灰色；化合物3，藍色；低化合物2，淺橙色；中化合物2，橙色；高化合物2，深橙色；低組合，淺紫色；中組合，紫色；高組合，深紫色。

圖48A顯示肝重且圖48B顯示脾重。單獨及組合的化合物3與化合物2使肝腫大顯著減小，而脾重無變化。條柱表示在研究結束時測定的平均(SD)肝器官重量(圖48A)及脾器官重量(圖48B)(n=10-16隻小鼠/組)。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。

圖49A及圖49B顯示基線時的身體質量組成。在基線時(第-1週)，所有治療組的身體質量組成均良好平衡。條柱表示在研究第-1週時，藉由全身EchoMRI測定的脂肪組織(圖49A)及低脂肪組織(圖49B)平均(SD)質量(體重的百分比(%BW，n=10-16隻小鼠/組))。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。

圖50A及圖50B顯示第11週時的身體質量組成。化合物3單獨及與化合物2的組合使脂肪組織質量顯著降低。條柱表示在研究第11週藉由全身EchoMRI測定的脂肪組織(圖50A)及低脂肪組織(圖50B)平均(SD)質量(體重的百分比(%BW，n=10-16隻小鼠/組))。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。

圖51A及圖51B顯示血漿及肝總膽固醇。單獨及組合的化合物3與化合物2使總膽固醇顯著降低。條柱表示在研究結束時所量測之血漿(圖51A)及肝(圖51B)中的平均(SD)總膽固醇含量(n=10-16隻小鼠/組)。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。

圖52A顯示血漿三酸甘油酯且圖52B顯示肝三酸甘油酯。化合物3單獨及與化合物2的組合使血漿三酸甘油酯顯著降低。條柱表示在研究結束時所量測之血漿(圖52A)及肝(圖52B)中的平均(SD)三酸甘油酯含量(n=10-16隻小鼠/組)。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。

圖53A顯示丙胺酸轉胺酶(ALT)含量且圖53B顯示天冬胺酸轉胺酶(AST)含量。單獨化合物2使丙胺酸轉胺酶(ALT)含量顯著降低。條柱表示在研究結束時測定的平均(SD) ALT (圖53A)及天冬胺酸轉胺酶(AST) (圖53B)含量(n=10-16隻小鼠/組)。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。

圖54顯示鹼性磷酸酶含量。治療未使鹼性磷酸酶(ALP)含量發生顯著變化。條柱表示在研究結束時測定的平均(SD) ALP含量(n=10-16隻小鼠/組)。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。

圖55A顯示基線時的NAFLD活動性分數(NAS)且圖55B顯示治療結束時的NAFLD活動性分數(NAS)。NAFLD活動性分數(NAS)在基線時良好平衡且在組合治療組中顯著改良。在基線時(圖55A)及在12週治療之後(圖55B)測定NAS，NAS定義為膨大、脂肪變性及小葉炎症組織分數的複合、未加權總和。圓點表示各治療組中的個別小鼠(n=14-16)。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p ＜0.05，**p ＜0.01，***p ＜0.001，****p ＜0.0001。

圖56A及圖56B顯示藉由組織形態量測分析測定的肝脂肪變性。化合物3與化合物2的組合使得肝脂肪變性出現更大的減少，如組織形態量測分析所測定。在研究結束時，藉由形態量測分析測定肝組織樣品中的肝細胞脂肪變性，包括具有脂滴之肝細胞的百分比及肝脂質含量(分率面積(FA)百分比)。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p ＜0.05，**p ＜0.01，***p ＜0.001，****p ＜0.0001。

圖57顯示肝細胞脂滴尺寸。組合療法使肝細胞脂滴尺寸顯著減小。在研究結束時，藉由形態量測分析測定肝組織樣品中的脂滴尺寸。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p ＜0.05，**p ＜0.01，***p ＜0.001，****p ＜0.0001。

圖58顯示血漿CK18 M30。治療未使細胞凋亡生物標記物細胞角蛋白18 M30 (CK18 M30)含量發生顯著變化。在研究結束時，量測血漿樣品中的CK18 M30，一種細胞凋亡生物標記物。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p ＜0.05，**p ＜0.01，***p ＜0.001，****p ＜0.0001。

圖59A顯示半乳糖凝集素-3的肝蛋白質表現且圖59B顯示平滑肌肌動蛋白的肝蛋白質表現。化合物3治療使半乳糖凝集素-3 (Gal-3)的表現減少。在研究結束時，藉由免疫組織化學(IHC)染色來評估經治療之小鼠之肝臟中的Gal-3表現(圖59A)及α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表現(圖59B)。藉由變異數分析(ANOVA)測定與DIO-GAN媒劑對照組的統計比較，隨後藉由圖基校正進行多重比較。*p ＜0.05，**p ＜0.01，***p ＜0.001，****p ＜0.0001。

圖60顯示肝臟中的能量及脂質代謝基因之表現。在高化合物2治療組與高組合治療組之間，對參與能量及脂質代謝之所選基因的基因表現值進行比較。處理肝樣品用於在結束時藉由RNAseq進行總轉錄本分析。圓點表示表現值相對於DIO-GAN媒劑對照組的平均倍數變化(n=10隻小鼠/組)。紅色及藍色表示DIO-GAN媒劑對照組與低脂肪對照組之間的變化方向(紅色 = 表現增加；藍色 = 表現減少)。點線表示標識線。藉由對高化合物2治療組及高組合治療組中之所選基因之表現值的倍數變化進行線性回歸分析來產生實線。選擇參與能量及脂質代謝的基因。角鯊烯環氧酶(Sqle)、7-脫氫膽固醇(Dhcr7)、羥甲基戊二醯基輔酶A合酶(Hmgcs1)及硬脂醯基輔酶A脫飽和酶(Scd1)。

圖61A、圖61B、圖61C及圖61D顯示參與能量及脂質代謝之所選基因的表現。參與能量及脂質代謝之基因的肝表現。處理肝樣品用於在結束時藉由RNAseq進行總轉錄本分析。條柱表示所示參與能量及脂質代謝之所選基因的平均(SD)表現(FPKM)值。角鯊烯環氧酶(Sqle，圖61A)、7-脫氫膽固醇(Dhcr7，圖61B)、羥甲基戊二醯基輔酶A合酶(Hmgcs1，圖61C)及硬脂醯基輔酶A脫飽和酶(Scd1，圖61D)。低脂肪，白色(最左側的條柱)；DIO-GAN媒劑對照組，灰色(左側第二個)；化合物3，藍色(左側第三個)；低化合物2，淺橙色(左側第四個)；中化合物2，橙色(左側第五個)；高化合物2，深橙色(右側第四側)；低組合，淺紫色(右側第三個)；中組合，紫色(右側第二個)；高組合，深紫色(最右側的條柱)。所示為個別治療組相對於DIO-GAN媒劑對照組的統計學比較，*p ＜0.05，**p ＜0.01，***p ＜0.001，****p ＜0.0001。組合治療組另外與化合物3 (+p＜0.05，++p＜0.01，+++p＜0.0001，++++p＜0.00001)或其各別化合物2單一藥劑治療組進行比較(亦即，低化合物2相對於低組合)；#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.0001，####p＜0.00001。

圖62顯示參與纖維化及炎症之基因的表現。參與纖維化及炎症之基因的肝表現。處理肝樣品用於在結束時藉由RNAseq進行總轉錄本分析。條柱表示參與纖維化及炎症之所選基因的平均(SD)表現(FPKM)值。I型膠原蛋白α1 (Col1a1)、肌動蛋白α2光滑肌動蛋白(Acta2)、半乳糖凝集素3 (Lgals3)及黑色素瘤細胞黏附分子(CD146)。低脂肪，白色(最左側的條柱)；DIO-GAN媒劑對照組，灰色(左側第二個)；化合物3，藍色(左側第三個)；低化合物2，淺橙色(左側第四個)；中化合物2，橙色(左側第五個)；高化合物2，深橙色(右側第四側)；低組合，淺紫色(右側第三個)；中組合，紫色(右側第二個)；高組合，深紫色(最右側的條柱)。所示為個別治療組相對於DIO-GAN媒劑對照組的統計學比較，*p ＜0.05，**p ＜0.01，***p ＜0.001，****p ＜0.0001。

Claims

一種治療有需要患者之非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)的方法，其包含將SSAO抑制劑及THR-β促效劑投與該患者，其中該SSAO抑制劑為式(1)化合物： (1) 或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之方法，其中該SSAO抑制劑為該式(1)化合物之甲苯磺酸鹽。
如請求項1或2之方法，其中該THR-β促效劑為式(II)化合物 (II) 其中： R ₁係選自由以下組成之群：氫、氰基、經取代或未經取代之C _1-6烷基及經取代或未經取代之C _3-6環烷基，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群； R ₂及R ₃各自獨立地選自由鹵素原子及經取代或未經取代之C _1-6烷基組成之群，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群；環A為經取代或未經取代之飽和或不飽和C _5-10脂族環，或經取代或未經取代之C _5-10芳族環，取代基為一或多種選自由以下組成之群的物質：氫、鹵素原子、羥基、-OCF ₃、-NH ₂、-NHC _1-4烷基、-N(C _1-4烷基) ₂、-CONH ₂、-CONHC _1-4烷基、-CON(C _1-4烷基) ₂、-NHCOC _1-4烷基、C _1-6烷基、C _1-6烷氧基及C _3-6環烷基，且當含有兩個取代基時，該兩個取代基可與其所連接的碳一起形成環結構；以及該等鹵素原子選自由F、Cl及Br組成之群，或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之方法，其中該THR-β促效劑為式(IIa)化合物 (IIa) 其中： R ₁至R ₃如請求項10中所述加以定義； R ₄係選自由以下組成之群：氫、鹵素原子、羥基、-OCF ₃、-NH ₂、-NHC _1-4烷基、-N(C _1-4烷基) ₂、-CONH ₂、-CONHC _1-4烷基、-CON(C _1-4烷基) ₂、-NHCOC _1-4烷基、C _1-6烷基、C _1-6烷氧基及C _3-6環烷基； m為1至4範圍內之整數；以及該等鹵素原子選自由F、Cl及Br組成之群，或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項3或4之方法，其中R ₄係選自由以下組成之群：氫、鹵素原子、羥基、-OCF ₃、C _1-6烷基、C _1-6烷氧基及C _3-6環烷基；以及 m為1至3範圍內之整數。
如請求項3至5中任一項之方法，其中R ₁係選自由以下組成之群：氫、氰基及經取代或未經取代之C _1-6烷基，取代基選自由鹵素原子、羥基及C _1-6烷氧基組成之群；以及該等鹵素原子選自由F、Cl及Br組成之群。
如請求項1至6中任一項之方法，其中該THR-β促效劑為式(2)化合物： (2) 或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項7之方法，其中該THR-β促效劑為該式(2)化合物之鉀鹽。
如請求項1至8中任一項之方法，其中該SSAO抑制劑與該THR-β促效劑同時投與。
如請求項1至8中任一項之方法，其中該SSAO抑制劑與該THR-β促效劑依序投與。
如請求項1至10中任一項之方法，其中該患者患有肝纖維化。
如請求項1至11中任一項之方法，其中該患者亦患有糖尿病。
如請求項1至12中任一項之方法，其中該患者亦患有心血管病症。
如請求項1至13中任一項之方法，其中治療期為該患者之剩餘壽命。
如請求項1至14中任一項之方法，其中該SSAO抑制劑每日投與一次。
如請求項15之方法，其中該SSAO抑制劑係以每日約1 mg至約40 mg之劑量投與該患者。
如請求項1至16中任一項之方法，其中該THR-β促效劑每日投與一次。
如請求項17之方法，其中該THR-β促效劑係以每日約0.5 mg至約90 mg的劑量投與，其中該THR-β促效劑為該式(2)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至18中任一項之方法，其中該SSAO抑制劑係以每日約1 mg至約40 mg的劑量投與且該THR-β促效劑係以每日約0.5 mg至約90 mg的劑量投與，其中該SSAO抑制劑為該式(1)化合物之甲苯磺酸鹽且該THR-β促效劑為該式(2)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至19中任一項之方法，其中該投與包含在一或多週之治療期每日投與該SSAO抑制劑。
如請求項1至20中任一項之方法，其中該投與包含在一或多週之治療期每日投與該THR-β促效劑。
如請求項1至21中任一項之方法，其中該投與與該SSAO抑制劑或該THR-β促效劑之單一療法投與相比，使脂肪變性、肝炎或肝纖維化中的至少一者減少。
如請求項22之方法，其中該投與與該SSAO抑制劑或該THR-β促效劑之單一療法投與相比，減少脂肪變性。
如請求項22之方法，其中該投與與該SSAO抑制劑或該THR-β促效劑之單一療法投與相比，減少肝炎。
如請求項22之方法，其中該投與與該SSAO抑制劑或該THR-β促效劑之單一療法投與相比，減少肝纖維化。
一種減少有需要患者之肝炎的方法，其包含將治療有效量之SSAO抑制劑及治療有效量之THR-β促效劑投與該患者，其中該SSAO抑制劑為式(1)化合物： (1) 或其醫藥學上可接受之鹽，且該THR-β促效劑為式(2)化合物： (2) 或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項26之方法，其中該SSAO抑制劑為該式(1)化合物之甲苯磺酸鹽且該THR-β促效劑為該式(2)化合物之鉀鹽。
如請求項26或27之方法，其中該式(1)化合物或其醫藥鹽及該式(2)化合物或其醫藥鹽各自每日投與該患者一次。
一種減少有需要患者之肝炎而不提高該患者之LDL-c含量的方法，該方法包含將治療有效量之SSAO抑制劑及治療有效量之THR-β促效劑投與該患者，其中該SSAO抑制劑為式(1)化合物： (1) 或其醫藥學上可接受之鹽，且該THR-β促效劑為式(2)化合物： (2) 或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項29之方法，其中該方法亦減少肝脂肪變性。
如請求項29或30之方法，其中該方法降低該患者的LDL-c含量。
如請求項29至31中任一項之方法，其中該SSAO抑制劑為該式(1)化合物之甲苯磺酸鹽且該THR-β促效劑為該式(2)化合物之鉀鹽。
如請求項29至32中任一項之方法，其中該式(1)化合物或其醫藥鹽及該式(2)化合物或其醫藥鹽各自每日投與該患者一次。
一種用於經口投與的固定劑量醫藥組成物，其包含式(1)化合物： (1) 或其醫藥學上可接受之鹽，及式(2)化合物： (2) 或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項34之固定劑量醫藥組合，其中該SSAO抑制劑為該式(1)化合物之甲苯磺酸鹽且該THR-β促效劑為該式(2)化合物之鉀鹽。
如請求項33或34之固定劑量醫藥組成物，其中該組成物包含約1 mg至約40 mg的該式(1)化合物或其醫藥鹽，及約0.5 mg至約30 mg的該式(2)化合物或其醫藥鹽。
如請求項33或34之固定劑量醫藥組成物，其中該組成物包含約1 mg至約40 mg的該式(1)化合物或其醫藥鹽，及約5 mg至約20 mg的該式(2)化合物或其醫藥鹽。