TW200300170A - Type 2 cytokine receptor and nucleic acids encoding same - Google Patents

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TW200300170A
TW200300170A TW091133063A TW91133063A TW200300170A TW 200300170 A TW200300170 A TW 200300170A TW 091133063 A TW091133063 A TW 091133063A TW 91133063 A TW91133063 A TW 91133063A TW 200300170 A TW200300170 A TW 200300170A
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Vikki Spaulding
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Description

200300170 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本發明一般而言係關於核酸及多肽，更明確的說’是 關於編碼第π型細胞素受體之核酸及多肽、與載體 '宿 主細胞、抗體以及產生多肽及多核苷酸的重組方法。 發明背景 細胞素例如干擾素是可溶性蛋白質，其可影響許多型 細胞之生長及分化。細胞素係經由位於細胞表面可與細胞 素反應之細胞素受體展現其效應。細胞素受體是由一種或 多種完整型膜蛋白組成，其可以高親和性結合細胞素，並 經由細胞質部份的受體次單體將此結合事件轉導至細胞。 細胞素受體可依其細胞外配體結合結構區分成數類。 例如，結合及/或轉導干擾素效應之細胞素受體鏈係歸類 成第II型細胞素受體家族（CRF2)，其特徵爲200-250個殘 基的細胞外結構區。 CRF2家族成員爲各種細胞素之受體，包括：干擾素α 、干擾素；S、干擾素 r、IL-10、IL-20、及 IL-22。 最近確認之CRF2家族成員其候選配體爲類似IL-10 之 IL-19 分子、AK155 以及 mda-7。 此類干擾素之活體內活性顯示其它細胞素、細胞素促 效劑、及細胞素拮抗劑在臨床上的潛力及需求。 本發明槪要 本發明係基於（部份地）發現編碼新穎的CRF2家族之 CRF2-13的聚核苷酸序列。 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） ---------^-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -5- 200300170 A7 ___B7_ 五、發明説明（2) 據此，本發明的特色之一係提供分離的核酸分子，該 核酸分子包括序列確認號碼：1，或其斷片、同質物、類 似物或衍生物之序列。該核酸包括，例如：編碼與序列確 認號碼：2之胺基酸序列至少有70%、例如、80%、85%、 90%、95%、98%或即使99%或更多相同之多肽的核酸序列 。該核酸可爲例如：基因體去氧核糖核酸斷片、或cDNA 分子。 本發明中亦包括編碼包括序列確認號碼：2中胺基酸 序列2 1 - 5 20之多肽的核酸，例如序列確認號碼：丨中6 1 -1 5 60之核酸。該核酸分子之實施例爲編碼序列確認號碼 :2胺基酸序列之多肽。 本發明亦包括內含本文描述之一種或多種核酸之載體 ，及內含本文描述之載體或核酸的細胞。 本發明亦關於使用包含任何上述核酸分子載體轉形的 宿主細胞。 在另一特色中，本發明包括（包括）CRF2-13核酸以及 藥學上可接受的載體或稀釋劑之藥學組成物。 在進一步的特色中，本發明包括相當純的CRF2-13多 肽，例如CRF2-1 3核酸、以及其斷片、同質物、類似物、 以及衍生物編碼之任何CRF2-13多肽。本發明亦包括（包 括）CRF2-13多肽以及藥學上可接受的載體或稀釋劑之藥 學組成物。 在更進一步的特色中，本發明提供專一地結合至 CRF2-1 3多肽的抗體。這些抗體可爲例如：單株的或多株 張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X 297公釐） ~ -6 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200300170 A7 B7 五、發明説明（3 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 抗體、及其斷片、同質物、類似物、及衍生物。本發明亦 包括（包括）CRF2-1 3抗體以及藥學上可接受的載體或稀釋 劑之藥學組成物。本發明亦關於結合至任何上述核酸分子 編碼之多肽的抗原決定部位之分離的抗體。 本發明亦包括包含任何上述藥學組成物之組套。 本發明進一步的提供產生CRF2-13多肽之方法，其係 提供內含CRF2-13核酸（例如包括CRF2_13核酸之載體）的 細胞，在培養細胞之條件下充分的表現該核酸編碼之 CRF2-13多肽。然後自細胞中收回表現的CRF2-13多肽。 較佳者，該細胞只產生少量或無內生性之CRF2-1 3多肽。 細胞可爲例如原核細胞或真核細胞。 本發明亦關於確認樣品中CRF2-13多肽或核酸之方法 ，該方法係將樣品與專一地結合至多肽或核酸之化合物接 觸，並偵測是否有複合體形成。 本發明進一步的提供確認調控CRF2-1 3多肽活性之化 合物的方法，該方法係將CRF2-13多肽與化合物接觸，並 決定CRF2-1 3多肽活性是否被修飾。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明亦關於確認調控CRF2-1 3多肽活性之化合物的 方法，該方法係將CRF2-13多肽與化合物接觸，並決定化 合物是否可修飾CRF2-13多肽之活性、結合至CRF2-13多 肽、或結合至編碼CRF2-13多肽之核酸分子。 在另一特色中，本發明係提供一種測定患者身上是否 有與C R F 2 -1 3存在或遺傳傾向相關的病症之方法。該方法 包括提供取自患者之檢體並在患者之檢體中測量CRF2-13 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X 297公釐） -7- 200300170 A7 B7 五、發明説明（4) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 多肽之含量。然後將患者之檢體中CRF2-13多肽之含量與 對照試樣中CRF2-13多肽之含量It較°相對於對照蛋白質 試樣中CRF2-13多肽之含量，患者蛋白質樣品中CRF2-13 多肽含量之變化意指患者具有與組·織增殖相關的症狀°較 佳之對照試樣係取自相當的個體’即年齡、性別、或其它 一般的條件均相似、但不具有與組織增殖-相關的症狀之 個體。此外，對照試樣可來自患者未患有與組織增殖-相 關的症狀時之樣品。在某些具體實施例中，其係使用 CRF2-13 抗體偵測 CRF2-13。 經濟部智慧財/£局員工消黄合作社印製 在進一步的特色中，本發明提供在患者身上決定與 CRF2-13相關的病症是否存在或是否具有與CRF2-13相關 的病症之遺傳傾向的方法。該方法包括提供患者之核酸樣 品，例如：RNA或去氧核糖核酸、或二者，並在患者之 核酸樣品中測量CRF2-13核酸之含量。然後將患者之檢體 中CRF2-13核酸樣品之含量與對照試樣中CRF2-13核酸之 含量相比較。相對於對照試樣中C R F 2 · 1 3之含量，患者之 檢體中CRF2-13核酸含量之變異意指患者具有與組織增殖 相關的症狀。 在更進一步的特色中，本發明提供治療或預防或延緩 與CRF2-1 3相關的病症之方法。該方法包括對患者投用足 以充分治療或預防或延遲與組織增殖相關的症狀所要求的 CRF2-13核酸、CRF2-13多肽、或CRF2-13抗體劑量。該 病症之實施例包括類風濕性關節炎及多發性硬化。 除非另行定義，本文中的所有技藝及科學術語，與一 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2]0χ$7公| ) "" - -8- 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 200300170 A7 ___B7 ___ 五、發明説明（5 ) 般熟悉此技藝的專業人士所瞭解相同。雖然本發明亦可用 與本所文描述的相似或相當之方法以及材料施行或測試， 但適當的方法及材料描述如下。本文提及之所有出版物、 專利申請案、專利、及其它參考文獻，全文在此并入參考 文獻。當有所衝突時以本說明書，包括其定義爲準。此外 ，材料、方法、及實施例僅用以說明而不限於本發明。 本發明之其它特色及優點將詳細描述於下文及申請專 利範圍。 圖形簡述 圖1爲與依據本發明CRF2-13多肽相關之多肽序列的 系譜圖。 發明之詳細描述 本發明（部份地）係建立在發現新穎編碼與CRF2多胜 肽同源的多肽之核酸序列的基礎上。在本發明中包括 15 63個核苷酸之序列（序列確認號碼：丨），展示於表！。 序列確認號碼：1之核苷酸1 - 1 560，編碼520胺基酸之類 CRF2多肽。編碼之多肽的胺基酸序列展示於表2(序列確 認號碼：2)。展示於表丨，具有5,未轉譯區域的部份及編 碼序列部份之核酸係確認自人類胎盤的cDNA庫。 尽紙張·尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2]〇X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-9- 200300170 A7 B7 五、發明説明（6 ) 表 1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ATGGCGGGGCCCGAGCGCTGGGGCCCCCTGCTCCTGTGCCTGCTGCAGGCCGCTCCAGGGAGGCCCCGTCTGGCCCCT CCCCAGAATGTGACGCTGCTCTCCCAGAACTTCAGCGTGTACCTGACATGGCTCCCAGGGCTTGGCAACCCCCAGGAT GTGACCTATTTTGTGGCCTATCAGAGCTCTCCCACCCGTAGACGGTGGCGCGAAGTGGAAGAGTGTGCGGGAACCAAG GAGCTGCTATGTTCTATGATGTGCCTGAAGAAACAGGACCTGTACAACAAGTTCAAGGGACGCGTGCGGACGGTTTCT CCCAGCTCCAAGTCCCCCTGGGTGGAGTCCGAATACCTGGATTACCTTTTTGAAGTGGAGCCGGCCCCACCTGTCCTG GTGCTCACCCAGACGGAGGAGATCCTGAGTGCCAATGCCACGTACCAGCTGCCCCCCTGCATGCCCCCACTGGATCTG AAGTATGAGGTGGCATTCTGGAAGGAGGGGGCCGGAAACAAGACCCTATTTCCAGTCACTCCCCATGGCCAGCCAGTC CAGATCACTCTCCAGCCAGCTGCCAGCGAACACCACTGCCTCAGTGCCAGAACCATCTACACGTTCAGTGTCCCGAAA TACAGCAAGTTCTCTAAGCCCACCTGCTTCTTGCTGGAGGTCCCAGAAGCCAACTGGGCTTTCCTGGTGCTGCCATCG CTTCTGATACTGCTGTTAGTAATTGCCGCAGGGGGTGTGATCTGGAAGACCCTCATGGGGAACCCCTGGTTTCAGCGG GCAAAGATGCCACGGGCCCTGGACTTTTCTGGACACACACACCCTGTGGCAACCTTTCAGCCCAGCAGACCAGAGTCC GTGAATGACTTGTTCCTCTGTCCCCAAAAGGAACTGACCAGAGGGGTCAGGCCGACGCCTCGAGTCAGGGCCCCAGCC ACCCAACAGACAAGATGGAAGAAGGACCTTGCAGAGGACGAAGAGGAGGAGGATGAGGAGGACACAGAAGATGGCGTC AGCTTCCAGCCCTACATTGAACCACCTTCTTTCCTGGGGCAAGAGCACCAGGCTCCAGGGCACTCGGAGGCTGGTGGG GTGGACTCAGGGAGGCCCAGGGCTCCTCTGGTCCCAAGCGAAGGCTCCTCTGCTTGGGATTCTTCAGACAGAAGCTGG GCCAGCACTGTGGACTCCTCCTGGGACAGGGCTGGGTCCTCTGGCTATTTGGCTGAGAAGGGGCCAGGCCAAGGGCCG GGTGGGGATGGGCACCAAGAATCTCTCCCACCACCTGAATTCTCCAAGGACTCGGGTTTCCTGGAAGAGCTCCCAGAA GATAACCTCTCCTCCTGGGCCACCTGGGGCACCTTACCACCGGAGCCGAATCTGGTCCCTGGGGGACCCCCAGTTTCT CTTCAGACACTGACCTTCTGCTGGGAAAGCAGCCCTGAGGAGGAAGAGGAGGCGAGGGAATCAGAAATTGAGGACAGC GATGCGGGCAGCTGGGGGGCTGAGAGCACCCAGAGGACCGAGGACAGGGGCCGGACATTGGGGCATTACATGGCCAGG TGA (SEQ ID NO：1) 表2
MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS ；LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA I TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW I astvdsswdragssgylaekgpgqgpggdghqeslpppefskdsgfleelpednlsswatwgtlppepmlvpggppvs LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO：2) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 表1之核酸編碼520個胺基酸之序列（序列確認號碼 :2)，展示於表2。信號P以及預測蛋白質在細胞中所存 在的位置的結果推測CRF2-1 3蛋白質含有信號肽，且位於 細胞膜之必然性爲0.460。CRF2-13多肽最可能的切除位 點是介於胺基酸246及247之間的AGG-VI位點。 CRF2-13胺基酸序列與先前描述的介白素結合蛋白質 相關。其關係圖如圖1。在序列確認號碼：2之CRF2-1 3 胺基酸序列的1 1 1個胺基酸殘基中有40個胺基酸殘基 (36%)相同於、以及56個胺基酸殘基（50%)相似於人類介 白素22結合蛋白質CRF2-10(gi | 15212826 | )的231個胺 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -10- 200300170 A7 B7 五、發明説明（7 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 基酸殘基。同樣地，CRF2-13胺基酸序列的86個胺基酸 殘基中有32個胺基酸殘基（37%)相同於，以及43個胺基 酸殘基（49%)相似於人類介白素22-結合蛋白質CRI^-iOSUi 丨 1 5212830 | )的 130 個胺基 酸殘基 。此 外， CRF2-13胺基酸序列之142個胺基酸殘基中有41個胺基酸殘基 (28%)相同於，以及58個胺基酸殘基（39%)相似於人類介 白素 22-結合蛋白質 CRF2-10L(gi | 152128281 )之 130 個 胺基酸殘基。 在表3A的BLASTP的數據中，亦顯示與CRF2-13多 肽同源之胺基酸序列。同源之計算係依據Altschul及其同 事發展之方法（Nucleic Acids Res· 25 : 33 89-3402，1997)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本文中所有BLAST校整之” E-値”或”期望”値是 用數字指出調準序列與BLAST之詢問序列在搜尋的資料 庫中偶然達成相似性之或然率。例如，下載自Π τ B L A S T 分析之”資料庫序列”，純萃是與詢問之IIT序列偶然 性相配的或然率即爲E値。期望値（E)是當搜尋特定大小 的資料庫，描述”期望”之點擊數僅爲偶然性之參數。此 參數與指定二種序列之間相符合的分數（S)呈指數地反比 。本質上，E値係描述存在於配對序列之間的隨機背景 雜訊。於公共核苷酸資料庫，例如基因資料庫及Geneseq 專利資料庫進行搜尋比對。例如，對公共蛋白質資料庫， 包括基因資料庫、SwissPort、PDB及PIR進行BLASTX搜 尋。 使用期望値是一種合宜的方法以產生報告結果顯著的 本^尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210 X 2^公楚) --- -11 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（8) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 閾値。搜尋比對之預設値一般設在0.0001。在BLAST 2.0 中，亦用期望値取代P値（或然率）以報告顯著之配對。例 如，點擊指定之E値可解釋成在現行大小的資料庫中預 期偶的然發現相似分數配對的機會。E値爲零是指不預 期會偶然的發現相似分數之配對。參閱，例如：http : "www.ncbi.nlm.nih.gov/Education/BLASTinfo/ 〇 表 3A. NOV10 之 BLAST 結果 基因指數/識別符號 蛋白質/生物體 長度 (aa) 特性(％) 正性(％) 預期 gi | 15212826 ! gb | AAK85714.1 | (AY040566) 介白素22-結合蛋白質CRF2-10 [人類] 231 40/111(36%) 56/111(50%) 2e-08 gi | 15212830 | gb | AAK85716.1 | (AY040568) 介白素22-結合蛋白質CRF2-10S [人類] 130 32/86(37%) 43/86(49%) 2e-0$ gi | 15212828 | gb | AAKB5715.1 | (AY040567) 介白素22-結合蛋白質 CRF2-10L [AM] 263 41/142(28%) 58/142(39%) 3e-05 gi I 432 丨 emb | CAA48484.] ! (X68443) 第1型千擾素受體[歐洲牛] 560 40/170(23¾) 75/170(43%) 0.001 gi 1 163188 1 gh 1 AAA02571.1 | α〇6320) α-千擾素受體[歐洲牛] 560 0/170(23%) 75/170(43%) 0.001 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 此類序列之同源現象係用ClustalW分析圖式化地描 述於表3 B。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -12- 200300170 A7 B7 五、發明説明（9 ) 表3B。CRF2-13蛋白質之ClustalW分析 1) CFR2-13-EX(序列確認號碼：2) 2) gl丨15212826丨介白素22-結合蛋白質CRF2-10[人 類](序列確認號碼：XX) 3) gi| 15212830 1介白素22-結合蛋白質CRF2-10S [人 類](序列確認號碼：XX) 4) gi丨1 52 1 2 828丨介白素22-結合蛋白質CRF2-10L [人 類](序列確認號碼：XX) 5) gi | 432 |第1型干擾素受體[歐洲牛](序列確認號 碼：XX) 6) gi| 1 63 1 881 α-干擾素受體[歐洲牛](序列確認號 碼：XX) 1 10 20 30 40 50
CRF2-13 -EX - - -MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPgQNVT|lLSQNFSVYijBWLPgL
gi I 1521282 ---------------------------ΜΜ0ΚΗCF[1gFLIS-BBB0GVA^T
gi I 1521283 ---------------------------MMgKHCFgGFLIS-g35jGVA@T
gi I 1521282 ---------------------------MM^KHCF0GFLIS-laiaM^IGVAg.T
gi 1432 I MLALLGATTLMLVAGRWVLPAASGEMLKgEMVEIHIIDDMSliKWNSSS
gi11631 88 | MLALLGMTLMLVAGRWVLPAASGEANLKgENVEIHIIDDN01gKWNSSS 60 7 0 80 90 100
CRF2-13-EX GNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGT|gELLCSMMCLKKQDLYNKFK
qil 1521282 QgTH-----------------------ESLgPQRVQ§Q@RNFHlSlLQWQP
gil 1521283 Q§TH-----------------------ESLEPQRVQ@Q@RNFHiJllLQViQP
gi. ! 1521282 QgTH-----------------------ESLgPQRVQgQ目RNFHUjlLQWQP
gi M32 ! EgVKNVTFSADYQILGTDN-WKKLSGCQHITSTKCM@S§VELE[5JVFEKIE
gi I 163188 | E§VKNVTFSADYQILGTDN-WKKLSGCQHITSTKCNgS@VELEgJVFEKIE 本纸張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工涓費合作社印製
-13- 200300170 A7 B7 五、發明説明（10) 110 120 130 140 150 CRF2-13-EX gi|1521282 gi 11521283 gil1521282 gi丨4321 gi 1163188|
….丨·，·.| .…丨....1 ...·| .…丨.…丨.…丨.…丨.…丨 gRVgTVSPSgKSPWVESEYLDQLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSAN----- 因---------20§vqyk0---------------------- 因--EElt^JEs---------BE0vQykQ---------------------- g--函 LT0J@S---------BH3VQYKQM-----FSCSMKSSHQKPSGCW lri0See@J|isitstwyevepfBp|3leaqHgppdvhleaedkaiilsisppg LRlggEEgJjNTSTWYEVEPFjjpgLEAQgGPPDVHLEAEDKAIILSISPPG
160 17 0 180 190 200 -...1 ....1 ....1 ....1 .…丨....1 ….丨….I ….1 ....I CRF2-13 -EX ATYQLPPCMPPLDLKQEVAF^EEGAG----NKTLFPVTPHG--------- gi I 1521282 ---------------QGQRQ03S-------K回DCWGTQELS--------- gi I 1521283 ---------------WgOROSM-------K回DCWGTQELS--------- gi I 1521282 OHISCNFPGCRTLAKWGOROiTOi-------K回DCWGTQELS--------- gi I 432 I TKDSIMWAMDRSSFR0SVVlg0J]SSSLEERT回TVYPEDKIYKLSPEITYC gi I 163188 | TKDSIMWAMDRSSFRQsVVlgjgJ]SSSLEERT@TVYPEDKIYKLSPEITYC (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·«裝· 210 220 23 0 240 250
..··丨….1 .…丨.…丨-...1.…丨….1 ....1 ....1….丨 CRF2-13-EX -----QPVQITLQPAASEHHgLSARTIYTFSVgKYSKFSKPTCFLLEVPE gi I 1521282 gDL0S[|TSDIQEg----------------- gi I 1521283 gDLgsgTSDIQEg----------------- gi I 1521282 gDLBs^TSDIQEg----------------- giI 4 32 I LKVKAELRLQSRVGCYSPVYglNQTjgRHKVPSgENIQINADNQIYVLKWD giI 163188 I LKVKAELRLQSRVGCYSPVVglN0TlgRHKVPSSENIQINADNQIYVLKWD 260 270 280 2S0 ....1....1.…丨….1....1 ....1....1....1.... ANWAFLVLPSLLILLLVIAAGG-------------VIWKTLMG-
300 ••I 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
CRF2-13-EX giI 1521282 -------------------------------------------------- giI 1521283 -------------------------------------------------- gi丨1521282 -------------------------------------------------- 9i I ^32 I YPYENATFQAQWLRAFFKKIPGNHSDKWKQIPNCENVTSTHCVFPREVSS giI 163188 | YPYENATFQAQWLRAFFKKIPGNHSDKWKQIPNCENVTSTHCVFPREVSS
310 320 330 340 350 ….I ….I.... I. . . j .... I ·…I …·丨....丨.…I.. . I CRF2-13 -EX -NPWFQf3AKMPRgLDF@GHTHPVATBQgSRPESVlSIDLFLC0QKELTRGVR gi I 1521282 ——ggG函^AS^GSY目E函M-TPR@TgWWEj5Kg----[)g团MMITQ0NG 本紙張尺度適用中國國家標準（CNs ) A4規格（210X 297公釐） -14- 200300170 A7 B7 五、發明説明（11)
gi I 1521283 ——SΥ@Ε0|Μ-TPR@T@WWER------------------ gi I 1521282 ——SΥ§Ε®Μ-TPR@TgWWΕ0Κ0----Di3sTOMNIT〇B8NG gi I 432 i RGlggV团EgSNGNGT@FggE-EKE@MTEMK0I0----Ff3羽ISVKSfflTD gi 1163188 I RGIQ0V0ESsNGNGT@F|EE-ΕΚΕ@ΝΤΕΜΚ0Ι0----FgBQlSVKS四TD 360 370 380 390 400 • ...I 丨….1.…I .··.丨….1 .…丨...·| ....I ....I CRF2-13-EX PTPRVRAPATQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQE gi I 1521282 SLjJviLHAPNLPYRYQ------KEKjJ[v@IEDY0E0lBr2F11NgjSLEK@Q gi I 1521283 -------AKGL--------------------------------------- gi I 152 1282 SLjJVILHAPNLPYRYQ------KEKjJ|V@IEDYBE0LQR0FIIN[S1SLEK@Q gi I 432 I DS0HVSVGASE-----------ESEjJjM回VNQL0pBi0eBiFWE：E]TS1SIA国R gi I 163188 | DS0HVSVGASE-----------ESE|SM@VNQL0P0lBEBlFWEjJjTSNA§R 410 420 430 440 450 …·丨.…丨…·| .…丨.…丨.…丨.…丨…·丨….1 ....1 CRF2-13-EX HQAPGHSEAGGVDSGRgRAPLVPSEGSSAWDSSDRSWASTVDSSWDR—— gi | 1521282 l^?Yi5lGAHRAVEIΕΆΪΙτΪ3Η8SP^VSEIYOP-------------------- gi 11521283 -------------------------------------------------- gi|1521282 gi|432| gil16318BI
SjjY|GAH RAVE IEA0T0HS SBSBvgEI YQP · 5S0EBiv
[SiL回KRTN- FIFPDgKSLTVtSgjjKSRALIENDRRNKGSSFSDTVCEKTKP 团jl§KRTN - FIFP DtlKf3LTVggSTOKfSRALIENDRRNKGS SVSDTVCEKTKP 460 470 480 490 500 .…丨….丨....I ·…丨.…丨.…I….丨·…I….丨·…丨 CRF2-13-EX AGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSVJAT 9iI 1521282 -------------------------------------------------- giI 1521283 -------------------------------------------------- gi11521282 -------------------------------------------------- 9i I 432 I GNTSKTWLIVGTCTALFSIPWIYVVSVFLRCVKYVFFPSSKPPSSVDEY gi I 163188 I GNTSKTWLIVGTCTALFSIPWIYVVSVFLRCVKYVFFPSSKPPSSVDEY 衣--(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂------ 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 CRF2-13-EX 9iI 1521282 Si|1521283 9i|l52l282 gi i 432 I 911163188!
510 520 530 540 550 ....1 .…丨….丨…·丨…·丨…·| .…丨.…丨....1....1 WGTLPPEPNgVPGGPPVSLQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWG --------MgDRRgQRSEj32gVEEP------------------------- .......-MgDRR@QRSE02BVE0P------------------------- FSDQPLRNL[*LST|EEQTl33gFlj3ENASIITEIEETDEIDEVHKKYSSQT FSDQPLRNLBLST@EEQTg0gFI0ENASIITEIEETDEIDEVHKKYSSQT 本紙張I度適用 (〇奶）六4規格（210乂 297公釐） -15- 200300170 A7 B7 五、發明説明（12) 560 570 CRF2-13-EX AESTQRTEDRGRTLGHYMAR-------- gi|1521282 ---------------------------- gi I 1521283 ---------------------------- gi I 1521282 ----------------------------
gi 丨 432 I SQDSGNYSNEDENSGSKISEEFPQQDSV giI 163188 I SQDSGNYSNEDENSGSKISEEFPQQDSV 在此揭示中蛋白質內存在之可確認的結構區係使用算 則，例如：PROSITE、Blocks、Pfam、ProDomain、Prints ，搜尋測定，然後再使用Interpro網站（http : www.ebi.ac.uk/in ter pro/)或 Pi. oDom 資料庫（http · //www.bioc hem .ucl_ac.uk/bs m/dbbrowser/jj/prodomsrchjj.ht ml)以跨結構區之符合（或數目）決定ProDom或Interpro數
目。表3C-3E表列出使用Pfam(表3C)及前結構區（表3D 以及3E)分析CRF2-13多肽結構區之結果。此結果顯示 CRF2_1；3蛋白質序歹丨J與習知的含有此類結構區之其它蛋白 質性質相似。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝. 經濟部智葸財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 29<7公釐） -16- 200300170 A7 B7 五、發明説明（13) 表3C。CRF2-13蛋白質之結構區分析 gnl | Pfam丨pfani01108，組織一fac，組織因子（序列確 認號碼：XX)CD長度=293個殘基，61.1%調準分數=37.0 點（84)，期望値=〇·〇〇3
Query： 9 PLLL--CLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRR 66
III 111 l·! Ml III 卜 I I I I
Sbjct ： 19 ΊΤίΊ^Ι)〇Ν：ϋΙ)Α(2νΑαΑΑσΤΤΕΚΑΥΝΙ1ΤνίΚ3ΤΝΡΚΤΙΙ_ιΕνίΕΡ---ΚΡΙΝΗνΥΤν--(3Ι3ΤΡί30 73
Query ： 67 RWREVEECAGTKELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRV--------RTVSPSSKSPWVES-EYL 117 I+ +1 I + I + -卜丨 + + I I +1 + I+ I I+
Sbjct ： 74 NWK--NKCFYTTDTECDLTDEIVICDVTQTYLARVLSYPARNDQTTGSGEEPPFTNSPEFT 131
Query： 118 DYL-----------FEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDLKYEVAFWK-E 165 || 11 ++ ++ ||+ + II I + +11
Sbjct： 132 PYLDTNLGQPTIQSFEQVGTKLNVTVQDARTLVRRNGTFLSLRDVFGKDLNYTLYYWKAS 191
Query： 166 GAGNKT 171
i II
Sbjct： 192 STGKKT 197 表3D。CRF2-13蛋白質之結構區分析 PD338678(Q9UHF4_人類36-246)凝血作用因子III棕 櫚酸鹽組織脂蛋白信號糖蛋白質橫越細胞膜之前驅物（序 列確認號碼：XX)分數=101(43.3點），期望値= 0.003相同 性=33/118(27%)，正性=50/118(41%)
Query: 24 LAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLG-NPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTKELLC 82
I I l·! II I I I I I III I I …丨 II I
Sbjct ： 37 LPKPANITFLSINMKNVLQWTPPEGLQGVKVTYTVQYFIY-GQKKWLNKSECRNINRTYC 95
Query： 83 SMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILS 140 + + I +1+ + + till I + 11 + II i + +1
Sbjct ： 96 DLSA-ETSDYEHQYYAKVKAIV7GTKCSKWAESGRFYPFLETQIGPPEVALTTDEKSIS 152 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 f 經濟部智慧財產47員工消費合作社印製 -17- 200300170 A7 五、發明説明（14) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 表3E CRF2-13蛋白質之結構區分析 ?〇0085 5 5 (川1^1_小鼠19-216)受體橫越細胞膜之糖蛋 白質前驅物鏈信號干擾素· α /石干擾素-a -REC(序列確認 號碼：XX)分數=9 8(42.1點），期望値=0.007相同性 = 46/207(22%)，正性=88/207(42%)
Query： 14 LLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEE 73
+ 1+11 III··卜 + + + II + 11+ 丨++ +1 +1 I
Sbjct： 19 VLPSAAGGENLKPPENIDVYIIDDNYTLKWSSHGESMGSVTFSAEYRTK-DEAKWLKVPE 77
Query： 74 CAGTKELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLT 33
II I I ㈠丨卜 III +1 I I I + + 川 + I
Sbjct： 78 CQHTTTTKCEFSLLDT-NVYIKTQFRVRAEEGNSTSSWNEVDPFIPFYTAHMSPPEVRLE 36
Query： 134 QTEEILSANATYQLPP-------CMPPLDLKYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITL 86
+ ++ ++ || + I + I++ + +1 I + + + I
Sbjct ： 13 7 ΑΕ0ΚΑΙ：ΙινΗΙ3 —— ΡΡσ(^3ΝΜν7Α]：ιΕΚΡ3Ρ3ΥΤΙΡίΐν^Κ^30ΚΚΤΙΝ3ΤΥΥνΕΚΙΡ-ΕΙ^192
Query： 187 QPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFS 213 I + +11 +1+ l+l+l+l
Sbjct: 193 LPETT--YCLEVKAIHP-SLKKHSNYS 216 經濟部智慧財產局員工消#合作社印製 結合至細胞表面受體之蛋白質生長因子，其初級結果 是活化細胞的增殖及/或分化。細胞素（例如淋巴素；介白 素及干擾素）是獨特的生長因子家族。許多淋巴素、造血 性生長因子及相關的生長激素分子之受體共享共同的結構 區’且可分成數個家族。第二類細胞素受體家族包括介白 素-1 0受體；干擾素-r受體；干擾素-α //?受體；以及組 織因子（Konigsberg et al·，Nature 380:41-46，1996)。CRF2-1 3多肽中存在一段區域，彼與組織因子及凝血作用因子 III棕櫚酸鹽組織脂蛋白信號糖蛋白質橫越細胞膜之前驅 物中發現結構區相關，彼與CRF2-13多肽定域至細胞膜具 +，氏張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（训乂297公楚） -18- 200300170 A7 B7 五、發明説明（15) 有一致性，所以將CRF2-1 3多肽分類成細胞素受體超級家 族。CRF2-13多肽中存在一段區域，彼與千擾素1受體橫 越細胞膜之糖蛋白質前驅物信號鏈干擾素α /石干擾素-α 受體相關，因此更顯示此指派的合理性。 展示於表1之核苷酸序列係經確認爲展示於表4之基 因體DNA序列的一部份： 表4
1 GAAAGAGAGA GAAAAAAGAA GGAAGGAAGG AAGGAAGGAA GGAAGGAAGG 51 AAGGAAAGAA AGAAAGAAAG AAAGAAAGAA AGAAAGAAAG AAAGAAAGAA 101 AGAGAGAGAA AGGAAGGAAG GAAGGAGAAA AGAAAGTCAA CAGTCAACAT 151 TTCAGAGATC CCAAGATACC AACACTGACC GTGCCTGCTG CTCTTCCATC 201 CTCCTCCACC CTGCGCCTTT GAGGTGGAAT TGCGTCCTCT GTGAGCAGGG 251 CTTTGTTAAG AGATCCTAAT TAAGGCCAGG CACAGTGGCT CATGCCTGTA 301 ATCCCAGCAC TTTGGGAGGC TGAGGTCACC TGAGGTCAGG AGTTCAAGAC 351 CAGCCTGCCC AACATGGTGA AACCCCATCT CTACAAAAAT TAGCTGAGCA 401 TGATGGCAGG TGCCTGTAAT CCCAACTACT TGGGAGGCTG AAGTGAGAAA 451 ATAGCTTGAA CCCAGGAGGC GGGGTTGCAG TGAGCCAAGA TCACACTATT 501 GCATTCCAGC CTGGGCGACA GAGCTTTTGT CTAAAAAAAA AAAAAGAAAA 551 AAAATCCTGA TTAA.GCAGAA GCCTTGATGC TAGTCCCAGA AGCATCCTGA 601 AATTTCCA^J\ AGAAATTTCC CCCGCGGTTA AACTCAGAGC AACTTTTGGA 651 CCCACCAAGC TCTGTGAAAA TCATTTTCTC TTCCAAAAAC TGATGGGACC 701 AAAGCTGATC CCAGTTTCAA ATAATTATCA AAAAATTGGA AACGAAATAT 751 GATCAGAAAA GAAGAAAGTT GAAAAAGAAA ATCCTTATCA CCCAAAGACA 801 ACAACCATTA ATATTTTGGT AATTATTATT ACAAATATCT TTCTATGCAT (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 、-='口 經濟部智慧財產局員Η消t合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -19- 200300170 A7 B7 五、發明説明（16) 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 851 901 951 1001 1051 1101 1151 1201 1251 1301 1351 1401 1451 1501 1551 1601 1651 1701 17 51 1801 1851 1901 1951 2001 2051 2101 2151 2201 2251 2301 2351 2401 2451 2501 2551 2601 2651 2 7 01 2 7 51 2801 2851 2901 2951 3001 3051 3101 3151 3201 3251
ACAGACAGAC TTTTTTTTGA CGCGATCTCG CTGCCTCAGC CGGCTGATTT AGGCTTGTCT CAAAGTGCTG CTTTTTTAAT GTTGCAAACA AGGGCCGCAT TGCTGTCCAG CCAGAACAAG GTACGTGGAG AGGGAATCGC GCTCGGATCC ACTCTCCCTA GTGGGTTATT GTGCACGGAT AAGTGCAGAT GCGCTCCCCC CAGTGAATCC CTGCCGACTG GGCGGGAGGC CATGGCGGGG CCGCTCCAGG CCCGGGCCGG CGGGGTCCGC CCCCAGTTTG CTCTCCCGCA AACTGGAGAA AGTGCTTTTT ACACTTGACC CCCTTCCCGT TGCCCTGCTT GTTGTTGTTT ATGAGTAAGG AACCTCACCG ATCGCCCCCA TAAAGGTCCC GCAACTTCTT GCCATCCTAG GGCTCAGAGC ACACAGAAGA CAGGGTAGGC CCAGGGATGC TGAGGGACCG CTTTCACTGT AATATACACA AGATCTAAGT
TCACACACAC AACTGAGTTT GCTCACTGCA CTCCCTGATA TCTGTATTTT CCAACTCCTG GGATTACAGG GGGCCTATGT CCTCGGTGTC AATATTGCGC GTGAACACCA CACCTGAAGC AAGGGCAGCA GTGTGTAAGG CGCCAATGGC ATCCTGCCAA GATCATCAGC TTACTGATTT GAAGCAGAGG CCCCCTCCCC TAGGCGGCAG CGTCACCTGC GGGGACCTGG CCCGAGCGCT TAAGGGCGCG GCCGCGCCTA AGCCACCCGA CTTCTTCCCA GGAAACGAAT AAAAGACAGC AATGTTTCCT CTAAAGTGTG TCCTGCCAGG TCTAACAAGA TGTTGTTGTT TGTCAGGTAC CCCACGACTC GGATATTTTC TGGGCATAAT TGTGCCAGGC GAGGTAGATA AATTCAGGGA GAGAAGAGGG ACGTGGGACA TCCAGCCCCC TGTACCTGTG CAAGCCCAGA ACACTAACTA TCAAATACTG
ACACACACAC CACTCTGTCG ACCTCCGCCT GCTGGGATTA TAGTAGAGAC ACCTCAGGCG CGTGAGCCAC TTTAGCACTC GATACACACC GTCGTGGCGT CAGCCTTCGG TCTGGGGCCT CGGATCCGCC CGCGGAGCTC ATTGAGGCCG AATGGCCCGT CGGTTTCTTC TTTTTTCCGG TACGGGCGAG CCGCGGCGGG GGACGGGCCC CCGCGGTGGG GTCCGGGCGG GGGGCCCCCT GGGCCGCGGG CCCTCGGACC GCCGGGTGCG GGACTGAACA CCAGTTTCCT GGCAGTTTGA AAAGAAAGCA GACAGCAGGG CCTCTGGTGG CGGCTTTCTT GTTGTTGTTG AAAATTCCTC CAACCGAAGC CTAGTCTTGG CCAATCATCA ACCGCATTAT TTATTTTTAC ATTCCTCAAG GCTAAAGCAA GGCTGTCCAT AGTGCCCACA TGTGGAGGGA CCTTCTTGTA TGGTGTGATG GCTCCCACAC
ACACACACAC CCCAGGCTGG CCTGGGTTCA CAGGTGAATG GGGGTTTCAC ATCCACCCGC CGCGCCCGGC GCTTTTCTGT ATTCGGCAAC GTGCCTTACT GGTCAGAAAG GCCGCTCCCC GGGATCCCCG AGCATCCGGC CGTAGCCAAA CCTGGAGCAC CCCTCCCCTG GAATTGAGTA TTTCGAGCGC GCTGTCCCCA GCGGCTCTGC CTAGGAGACG GGACGCCGCG GCTCCTGTGC AGGGAGGGGG CAGAGCTCCT AATCGGCCCT GAACCGGGTC AATGCTTCCA TACTGCATAT CTGATCCCTG AAAGTGGGAC GACGGAGCTC TTGGTGGTGG TTGTTTTCCC GCCGTAGGAC AGGGAAGAGA ACTCACAGTT TAAAAGCCTA TCTGGAAGCC TTTTCCGATG AAGGACGGCA GCCTGGCTAG CCACTGGGTC GCAGCGTTCT GGGTGGGGTC CTTTCACCTG ATTTAGGAGT AAACTGACTG
ACTTTTTTTT AGTGCAGTGG AGCGATTCTC CCACCACGCC CATGTTGGCC CTCACCCTCC TACACACACA TTCTCAGTGT GTCCTCCTAA GGGAAGCTAC ACAGCTTTCC GGGTAGAGAA GGGGCATTAA TCAGAAACGC CCGGCCTTGA TGGACTGGCC CCCTTCCCCC AAACAAAACT GGGGACCGGC GGGACCTTCT GGGCCATTGG GGAGGCGGGA GCAGGAAGGC CTGCTGCAGG AAGAGGGCTC GGGACAGGCA GCCTACGCGC TTTGATATTC GCTTCAGGAG ΤΤΤΤΤΑΑΤΑΆ CGTGAAAACC CGATTGATGT TGGTCGCCTG TTGTTGTTTT ACCTCTACTG CCAACCACCA AGGTCCAGAA TAAAGAGCTG TATTTATTCA TCACGACCCA GGAAAACTGA GAGGTGAGGC CTTTTGCCTC ACTAGGCCAG CTGTGGCTGA TTCTGTTCCC ATAAGTATTT AAGTACAGCC TGTAGCCTCA (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -20- 200300170 A7 B7 五、發明説明（17) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局K工消費合作社印製
3301 GGCAAGTTAG TTAGCATCTG TCTCTGAGCC TAGCGCCCTT TCCATGGAAG 3351 CAGAATGAAT GACACCTACC CCATAGGGTG GTCTGTCCCA AGGGTGATTG 3401 AGGTTTTACA TGTAAAGAGC CAAACTAGTG CCTGGCATCC TTTGAAGGCT 3451 TCATAGAGGA AAGTTGCTCT AGCTGCTGTT TTTCTCATGT GACCTAGCTC 3501 GAATCTGGGG ACTGTCCTGC CCATAGGATA CCTTACAAGT GGCTTGCAGA 3551 CAGCCTGGTC TCCTGCTGGT CACCCGTTAG GAAGTCCAGA AGCTGGGAGT 3601 AGTAATAGCA CTAGCCTCGT GGTGATACAG TCCCAGCTAG AGGACACAGG 3651 ATGAGGTGGA AGCAGGCACC CACTTTTGGG TCTAAAAGGT GATGGGTAGG 3701 CAGCCGAGGC TGGGGACAGC CATCCACAGA ACTGGACCCT CCCTCCCTGA 3751 TGCCATTTTG CAACCCGTAT GGATTTCCAT CATGGCACAT GGGACACTTC 3801 AGGACCCTGA ATTCTCCATG GGACCATGAG CTCCTATAGG GCAGGAATGA 3851 AGTTGTGTTC TTCTTTGAAA CCCCTGGCAC ACCGTGGTCA ACAGATCTTG 3901 TTTGACTCGT AGTGGTCAAT AGATGGAATA GTTGGAATCA TAAAGCTCAA 3951 TAGACCCCAT GAGAACCTAG AAGACAAAGT ACAGTCAAGA GCTCGGACTT 4001 TGGAGTTGGC TAGGCCTGGA CTGAATCTGA TTCTACAACT TAATAGCTGA 4051 GAGGGCCTTG GTTTTCCCAT CTGTAAAGAT TATAATTATT ATAATGAATA 4101 CCTACCTCCT AGGGATGTAA TGAGGATTAA AAGAGAAAGT GCAGGTAAAC 4151 TGTTTAACAC AGAACCTGGC TCATAGAACA CAATACACAT TAGCTGCTAT 4201 TATTATTATT ATTATTTTAT TTATTTATTT TGAGACAGAG TCTCACTCTG 4251 TCACCCAGGC TGGAGTGCAG TGGCGCAATC TCGGCTCACT GCAACCTCCA 4301 CCTATCGGGT TCAAGCAATT CTCGTGTCTC AGCCTCCCAA GTAGCTGAGA 4351 TGACAGGCGT GTGCCACCAT GCCCAACTAA TTTTTGTATT TTTAGAAGAG 4401 ACGTGGTTTC ACCATGTTGG CCAGGCTGGT CTCAAACTCC TGACCTCAGG 4451 TGATTTGCCT ACCTCTGCCT CCCAAAATGC TGGGATCACA GGGGTGAGTT 4501 ACCATGCCCG GCCTTAGCTG CTATTATTAT CATCATCGTT ATCATCATCA 4551 TCATCACCTC GTAGATATGT CAAGGAAGAT TCCCTGGAGG AAGTGACATT 4601 TGAATCAAGT ATTTCAAAGA CTAGATGGTG AATACCAGGC AGTCAAAGAC 4651 ACCTGGGTTT AAAAACATCC AGAAGAATGC AGTGGCTTGG CAACATCGAG 4701 CAGGAAGATT GCCTGATGAG CCTGTAGGGT AGCTGTTGGG GAGAGAGCAG 4751 CAAGACGGCC TGGCCAGGCC AGGCCAGGCC ACGTCAGGCA GGGCCTCACA 4801 AACCTCAATA ACAAATGTGG ACTTTATTCT GAGGCCAAGG AAAGGGCATG 4851 AAACTGGGGA GTGGTGTAAT CAGATGCGTA TTTCAGAAGA TGAAGATTAA 4901 CAGTGAGAAG GAAAATGTGC CACAGAGGGG AATAGAGGTC AGTTAAAGGG 4951 AGTCAGGGAA AGTGTCCTCG AGACAGTGAC ATCAAAGGAA TGTGAAAACA 5001 GCAAAGGAGT GAGCCAGGTG GATATCCAGG GGCAGAACTG TTAAGGCAGA 5051 GGGAACAGCA TGAGGGAACA GCGTGTGCAA AGGCCTGGAG TTGGGAGTGT 5101 GGCTGGGGTG CTCCAGG7\AG GGCAAAAAGT CCTGTGTGGA TGGAGATATG 5151 GGAGCAAGGG AGGAGTGGTG GGTCAGATTG GGTAGGGCCT TGGTGGTGAT 5201 TGTAAAGACT TTGGAGTTTA GACCAGGCAC AGTGGCTCAG GCCTGTAATC 5251 CCAGCACTTT GAGAGGCCAA GGTGGGCGGA TCACCTGAGG TCAGGAGTTC 5301 GAGACCAGCC TGTAATCCCA GCTACTCTGG AGGCTGAGGC AGGAGAATCG 5351 CTTGAACCCG GAAGGTGc^AG GTTGCAGTGA GCTGAGATTG TGCCACTGTA 5401 CTCCAGCCTG GGTGGCAGCA TAAGACTCTG CCTCAAAATA ΑΑΑΤΑΑΑΆΑΤ 5451 AATAAAGACT TTTGAGTTTC CCTGGAGTGA GAGGAAAGCC TTAGAGGGCT 5501 TTAGCAGAAG ATGAACATGA TCTGATTTTC ATTTTTAATC CTTCCCTGCT 5551 AATGTGGAGA ATGGACTGAA GGCAAGGTGT TTTGTATATT TGTCTGTTTC 5601 GTAGAGACAG GGTCTTGCTC TGTTGGCCAG ACTGAAGTGC AGTGGCACAA 5651 TCACGGCAGC CTTGAACTCC TGGGCTCAGG CGAAACTCCC ACCTCAGCCT 5701 CCTTACTCTC ACCATTGTGC CCTGCTAATT TTTTAAAAAA TTTATTTTGT 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】〇X 297公釐） -21 - 200300170 經濟部智慈財產苟員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（18)
5751 AGAGATGTGG TCTCACTATG TTGCCTAGGC AAGTCTTAAA TTCCTGGTCT 5801 CAAATGATTC TCCTGCCTCG ATGTCCCAAA GTGCTGGGAT TACAGGTGTC 5851 AGCTGCCATG CCCGACCTGT ATTTTTTTTT TTAATGGGGA AAAAGCCTTT 5901 TAATAGTATG AGGTGTTTTC TGGTGTTTCT ACCATAAAGC TCTTCTGTAA 5951 ATCAAAATGA GAATGTAATT ATTGATAGAG CAATGACCTT AGACTACAGT 6001 GCAGACTTTT CATCTTACAT TTGGGCTCAT GAATTTTAGT ATAACTGATT 6051 ATGACAGTGT TTTTTACATA GTTATGATCT AGAGCAGAAC TGAAAACAAA 6101 ATAACACATA CTCTACATCA ATATATTCGT TCAGTAATAT CTGGGCTTGG 6151 ATGAACCTGC AGAAGTAGGT AAAGCTGTCA GATATTTTCT TAAACCAACA 6201 GAAAAGAAAT GTATATGACA GATGTTGTGT TTACTTACTT ATTTATTTAT 6251 TTATTTATTT ATTTGAGATG GAGTCTCACT GTGTCACCAG GCTGGAGTAC 6301 AGTGGTGTGA TCTCTGCTCA CTGCAACCTC CACCTCCCGG ATTCAAGCGA 6351 TTCTCCTGCC TCAGCCTCCT GAGTAGCTGG GATTACAGGC GTGCACCACC 6401 ACGCCTGGCT AATTTTTGTG TTTTTAGTAG AGACAGGGTT TCACCATGTT 6451 GGTCAGGCTG GTCTCGAACT CCTGACCTCG GGATCTGCCC ACATCAGCCT 6501 CCCAAAGTAC TGGGATTACA GGCATGAACC ACCACGCCCA GCCTGTATTT 6551 ATTTTTTTAC CACTATGGAG TCCAATATGA AATTCTCACA ACTATGCATA 6601 TACATTATTA ACATGTAAGC ACACCTAGGT ATAAATATGC ACATAGTCCA 6651 TTAATTACAT CAGGGGAATT AAAAACATAC TTTCAAGTTA AAATGAATTT 67 01 TCAGGAAAAA AACTGCATTC ACAAATCTGA AATGTGAATA CAAAAATGAA 6751 ATTGTGAAAT AAATAATGAA TATAGGTGTC ACCTAAACTT CCATAGTAAC 6801 ATGCCTCCAA ATGTGGATTT AGTGATCATC CACCTTGGGA CAAGGGCTTT 6851 TGAGAGCCTC CAGCTAAATT AGGGTTCCAG TAGCAGAGTG GCTGGCAAGC 6901 CTGCCCTAAT GAATAATGCC AGCGAGCTGG GCGTGGGTAC TTACAGTGTG 6951 CCCTTCATGG AATACTTTTT TTTTTTTTTT TGGAATGGAG TCTCGCCCTG 7001 TTGCCCAGGC TGGAATGCAG TGGCACAATC TCAGCTCACT GCAACCTCGT 7051 CCTCCTGGGT TCAAGCAATT CTCGTGCCTC AGCCTCCCAG GTAGCTGAGA 7101 CTACAGCCCT GTGCCATCAT GTTCTGCTAA TTTTTGCATT TTTAGTAGAG 7151 ACGAGGTTTC ACCAAGTTGG CCAAGACTGG TCTTGAATTC CTGACCTCAG 7201 GTGATCTGCC CACCTTGACC TCCCAAAGTG CTGGGATTAC AGGCTTGAGC 7251 CACTGCGCCC GGCCCATGAA ATACTTCTTA CCTGGCGGAC AGCCTAATAG 7301 CCTAGCTGTC TAACCCATGG CTGGGGGTCC TTCACACTTG TTTATACTGG 7351 CAGACGTCCC TGTGACTCTT GTCTGATCCA TGTCCAAGTT TATGCCTGTC 7401 TGACCATTGC TCTGGCGCTG GGAGCCAGAC TGTGTTCCCA GCAACCCAGG 7451 GAAAACCAGG CCTGGGCTGG GCCTGGGTTC CTGAGATGGA AGGTGCAAAT 7501 TCAGTACACC ACCTCAATGC AAAACAAGTT CAAAGGCTTA TTACTTACAG 7551 ATCCTGAGCA GGGAAGGTGC AATGAGTAGG GAGGGTCATC CTCCATCCTG 7601 GGCTACATGA AGCGGGAATG AAGAGTCAGG CAAAAAGAAA GTGAGAGCTT 7651 GTGGCAATGA GAAGTATATT ATGTAAGGGA CTAGGGTGTG GGTCAGGTTA 7701 AGTTTGAGGG CAAATGCTTG AATGATCCCT TTAAAGGAAT GGGTGGGAAG 7751 TGGGGAGCCC AGTTTGCCGG GAGGGAGAGA TGCCTCGAAG TTCTTATCTC 7801 TGGCCACTGG CTTGGGCCAT CTGAGTGTGG CATCTACTTC TAATGCCTAG 7851 GCAGCAACCT TTGCTGTGTC ATCTCCCTTA CACAAGGTTG GAAGCAGGGA 7901 GACCGGTCAG GAAGCCTTTG GTGTAACCCA TGTTATTGTA ATATTCATTC 7951 ATTTACTCAA CAGATGTTTA TTGTGCACCT ACTATGTGCT GAGGCCATGG 8001 CAGGCAGGCT CTGGGGATGT GGCTGAGAAC AGGACAGAGC CCCTGGTCCT 8051 TGATATCCTC AAGGATGCTC CCTCCTGGAG GCCATTAGGT TCCTGTTCCA 8101 TGGTGTTCTG CTGGAACCCT CCGGTCCCAG AGTGTGCAGG AGCCTCCCCT 8151 CCTGGCAAAG GGTCTTCTCT CATGGCACAA GGGCTGCAGT ACAGCCAGTC 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-22- 200300170 A7 B7 五、發明説明（19) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
8201 AGTGGCTCCT GGTTCCTCAA ACTCAGTGAG CACTTGCCTG CCCTTCGTGC 8251 TGCCCCTCAG CTTGGGATGG CCTGAGTCAA GACCAGCCAG GAGCTCCAGG 8301 CTTCATGACC CCTTTCTTTC CCCCAGGGAG GCCCCGTCTG GCCCCTCCCC 8351 AGAATGTGAC GCTGCTCTCC CAGAACTTCA GCGTGTACCT GACATGGCTC 8401 CCAGGGCTTG GCAACCCCCA GGATGTGACC TATTTTGTGG CCTATCAGAG 8451 GTAGAGGAGA CTCTCTCGGC TGGTGGATGG GAAGACTGAG GGGGTGGGTG 8501 GGGGCTTGGA GGGGCTTCTC TGGGACAGCT GCACCCAGTG TGGGCAGCAC 8551 TGGCTAGCTC TCTGGGCCCT ACGGGAGATG GCATGTGGCC GGCATTTGGA 8601 GAGGGGCTTT TGATAAAGGT CTGGAGGTGG GGAAGATGTT GAATGAAGAG 8651 CAGTGTACAG GTGACCAGTC TGCCGGGGCG GGGGTAAGTC TTTGAGGAAA 8701 GTTGGTGTGG GGCATGGATG TAGCTGTGGG GGCCAGAGGA TGAAATTCTC 8751 AAGTGGCTGG ATGAGGTGCT TGGAGCTGTC CCAGCTGATC AGTGAGGCAA 8801 CTAGGTACAC GGCAGAGGAG CTGTTACCTG GGCAATTAGG CATCCCTCAA 8851 TGATCACACT TTTTTTCTCT TTTTTTTTTT TTTTTGAGAC AGAGTCTTGG 8901 TCTGTCACCC AAGCTGGAGT GCAGTGGCTT GATCTCGGCT CACTGCAACC 8951 TCCACCTCCT GGGTTCAAGT GATTCTCCTG CCTCAGCCTC CAGAGTAGCT 9001 GGGATTACAG GCATATGCCA CCACATCTGG CTAATTTTTG TATTTTTAAT 9051 ACAGACGAGG TTTCTCCATG TTGCCCACGC TGGTCTCGAA CTCCTGAGCT 9101 CAGGTGATCC ACCCACCTCA GCCTCCCAAA GTGTTGGGAT TACAGGCGTA 9151 AGCCACCGCG CTTGGCCAAA TGGTCACACT TTTCCCGATG GGATCATTCT 9201 CAATTTGGAA GCCCAGGCAG CCACAGCGAA TCCAGAGAAA TCTGACAATG 9251 GAAGCAGATC CACCATCTTC GAACATAGAT GGGAATCGTT CAGAGTTCTT 9301 TAGCAGGACA GTGAGATGAT AGAAGCAGAA GCTCGGGAGG ATTCACCTGG 9351 AGTTGGTGAG GAGGGGAAAG CAGGAAGAGG AGGGGACCCA CCGTGTCCTC 9401 AGGACCCGTC CTGTGCCAGG CCAAGTGCTA AGGGCCCTAC GTGAATATTT 9451 CACTTCCTTC TCCCAATGTG ACCAGGCAGG CTCTGTGTTT TCCCCATTCT 9501 AGAGGTGAGG GGGATTGAGC ACTGTGTCAA CACATGTAAT GAACTTAATC 9551 TCACAGCAGC TCTCTGAGGA CAAGTTCAGT ACGCCTCTTT ACAGAGGAGG 9601 AGACTGAAGC ACCAAGGGTG CATGTTGCTC AAAGTCACAC AGCTGGGCGT 9651 AGTATGGCTG GAATAAATTT ATTAAGGAGT TGAAAGTCTA TCCTCTAGGA 9701 CCAAGCATGG TGGCTTACAT CTGTAATCCC AGCACTTTGG GAGGCCGAGG 9751 TGGGTGGGGA GATTGCTTGA GTCCAAGAGT TCCACACCAT CCTGGGTAAC 9801 ATGGTGAAAC CCTGTCTCTA CAAAAAAAAA AAATACAAAA AATTAGTGAA 9851 GTGTAGTAGC ATGTGCCTGT GTTCCCAGCT ACTTGGGAGG CTGAGGTGGG 9901 AAGGATCACT TGAGCCCAGG AGATGGAGGT TGCAGTAACA AAGATCACAC 9951 CACTGCACTC CAACATAACA ACAGAGCAAG ATCAAAAGGG TTTTTAGCTC 10001 CCACTGAACG CCNCGTCATA NCCTTAGGTN NNNNNKNNNN NNNNNNNNNN 10 051 ΝΝΝΝΝΝΝΝΝΝ ΝΝΝΝΝΝΝΝΝΜ ΝΝΝΝΝΝΝΝΝΝ ΝΝΝΝΝΝΝΝΝΝ NNNNNNNNNN 10101 NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN ISMnINNNNNNG AACAACAGAG CAAGATCCTA 10151 AAAAGAAAGA AAGTCTATCC TCTGAACTTC TATGATATTT TTCATGTCTT 10201 TTATACATTA GAATGGTGAT ATTCTAATTA TATAATTTTT TTCATTTGTT 10251 AGTTGGAATT ATTTTATAAA GAGATGTATC CTCTCATCTG GTATTTGATA 10301 TCCAGTCATA CTATTCAAAT AGGCAAGAGA GGATAAATGC TTAATTTTTT 10351 TCCTTTATCA ATTTTCAAGA TAATGAATTG GTTCCTTATC ATCTCCCAAA 10401 GGTGATTGCT AGTTTATTAT TATCATTATG AACTCAGGCA TTTAAACACA 10451 TTTGGTGGTT TCAGTCTATT GCGACGTACT CTGCTCATTG AAGCTTGAAT 10501 TGCCTCATCT CTGTCCAGTG GGAGTCTCAT CAAGTTTGCT CCTGAGTCCT 10551 TTTAACTTGA CCCTAGTGGT CAAGTTAAAT CTTTCCAGAT TTAACAGATA 10601 CCTTTCCAGC TGTCCATTAC GACAAGATGT TCCAGGTCCC TCTGGTACAA 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -23- 經濟部智慧財產^?g£消費合作社印製 200300170 - A7 _______ B7 五、發明説明（20)
10651 TTCCTGACCT AAAACCTGCA GTCAGCCATT TCTCCATTTA GTAAGA^TG 10701 GTTATAAAGA CTATAATCTG CATGCTAGCT ATGCTGATCA CTACTTAGCT 10751 ATTGCTTTTG GTGTTTTCAG TGAACAGAGT GATGTGTGTA TACCACATAG 10801 ACACACACAT GTACATACTT TTTTTTTTTA GACAGAGCTT CACTCTGTCA 10851 CCCAGGCCAG AGTGCAGTGG CATGATCTCG GCTCACTGCA ACCTCCACCT 10901 CCTGGGTTCA AGAGATTATC CTGCCTCAGC CTACTAAGTA GTTGGGATTA 10951 CAGGCGCCCA CCACCATACC CGGCTAATTT TTGTATTTTT AGTAGAGACG 11001 GGGTTTCACC ATGTTGGCCA GGCTGGTGTC GAACTCCTGA CCTCAAGTGA 11051 TCTGCCCCCC TCGGCCTCCC AAAATGCTGG GATTACAGGC ATGAGCCATC 11101 GCACCCAGCC TACATGTACA TAATTTTTAA GATAAAATGC CTAATGAGTT 11151 ATACGGGTGC TTCCCATCTA AATTTAGTTC CTTAGGATTT TTACCTGACT 11201 TCTATGGTAC ATCTATATTT TCTTTCTTTC ACACTGAGAA TCCTGTTTCT 11251 CAAGGACAGG GGACATGATA GAACTAGAAT GACCCATAAT TACTCATTTT 11301 CTTTATCCCA AAACATACAT ACTTGCCTCT TAATAGTTTC TTGCTCTTTT 11351 CGCCCAAAGG GTTTGTGATG GTCAATATTA GGTGTCAACT TAATTGGGTT 11401 GAAGGATGCC TAGATGGCTG TTAAAGTTTT GTTTCTGGGG GTGTCTGTGA 11451 GGGTGTTGCC AGAGGAGACT GACATTTGAG TCAGTGGACT GGGAATGGAA 11501 GACTCGTCCT CACTCAGTGT GGGTGGGCAC AACCCAACTG GCTGCCAGGC 11551 TGGCTGGAAA GCAGGTGGCA GATGGTGGGA TAGCTTCACT TGCTGGGTCT 11601 TCCAGCTTCC TTCTTTCTCC CGTGCGGGAT GCTTCCTTCT GCTCCTCCTG 11651 CCCTTGAACA TCACACTCCG GGTTTTTTGG CCTTTAGACT CTTGGACTTA 11701 AGTTAGTGGT TTGCTGGGGG CTCTCGGATC TTTGGTCACA GACTGAAGGC 11751 TGCACTTTCA GCTTCCCTGG TTTTGAGGGT TTCAGATTCG GACTGAGTCA 11801 CTATGGCTTC TTTCTTTCCC ACCTTGCTGA CGGCCTATCG TGGGACTTCG 11851 CCTTGTGATC GTGTGAGCCA ATTCTCCTTA ATAAACTCCC TTTCATATAT 11901 ACGTATAACC TATTAGTTCT GTTCCTCTGG AGAACCCTGA CTAATAAAGG 11951 GTTGTTGCTT TTTCTTTAAA ATCTAGTAAT TTTATTTGAC TGTGTGTTGG 12001 TATTGCTCAT TCATTCTGAG TTGATATTTT TAGGCACTCA ATATTCTCAC 12051 TTAATACATG GTTCCAAGGC ATTTTTATTT TAGGAAGGTT TTCTTAAATT 12101 ATAGTTTTAG TATTTGTTCT ATTCTCTTGT TTTGATTTTC TTCTTTAGGG 12151 ACTCATATCA CTTGTATGTT GGATCTTCTT TTTCTGTGTT CAGTATTTGT 12201 CTTTTGGGCA CAGAGACTCA CACCTATAAT TCCAAGACTT TGTGAGGCAT 12251 AGGTAGGAGG ATCGCTTGAG CCCAGGAGTT TGAGACCAGC CTGGGCAACA 12301 TGGTGAGGCC CTGTCTCA?^A TTAAAGAAAA AGGAGAGAAT ACTTGTCTTT 12351 TTCTTTCAAA TGCCTTTTAT CTGTCTGTCT ATCTACTATT CTGCTCTCTA 12401 AATGAAATAG GTTTCACTCT TGAGTTTTTA AAAAACTGTG TGCTTCCATG 12451 TGTGAGATTA TTCAACATCT TATTTGTAAT CTTTCTCTTG GTTACATTTA 12501 TTTTTCCTGA AAACTCTAGT CTGCTTTTAG CTGACATGTT TGTAGCTAAG 12551 AGCGCACATT TCTTATCATA GCTTGCCGTG CTGAATTAAT TCCAATTTTC 12601 TTTTAAAACC AACATTATTG AGTTAAAATG TATATAGAAT AAACTGTTCC 12651 CATTTTAAAG TATACAATTT GATGAGTTTT GACAAAAGTG GGCACCCACG 12701 TACCCACCAC CACAATCAAG ATGTAAGACG TTCTCTATCA CCCCAGAAAG 12751 TTCCCTCATC CACTTTGCAT TCAGGCCTCC AGATCTAGGC AACCACAGAT 12801 CTGCTTTCTG ACACTGTGGA TTAAACTTTG CCTGTTCCAG AATTTCATAT 12851 AAATGGATGT GTATAGTATG TACCCTTTCG TGTCTGGCTC CTTTCCCTCA 12901 GCATAATGTT TCTGAAATTC ACCCACATTG TTACATGTAT CAGTAGTTAA 12951 TTCCTTTTTA TTGCTGAGTA GTAATGCCAT TGTATGACTA TGTATGACAT 13001 TTGTTAATCC ATTTTCCCGT CAGTGGATAT TTGGGTTGCT TCCAGTTCTG 13051 GGCAGGTATT CATTTGCTAG GGCTGCCATA TGCTTGCCCT CTGGCCTCCC 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2]0X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-24- 200300170 A7 B7 五、發明説明（21) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 13101 13151 13201 13251 13301 13351 13401 13451 13501 13551 13601 13651 13701 137 51 13801 13851 13901 13951 14001 14051 14101 14151 14201 14251 14301 14351 14401 14451 14501 14551 14601 14651 14701 14751 14801 14851 14901 14951 15001 15051 15101 15151 15201 15251 15301 15351 15401 15451 15501
AAAATTTGTG CCCCAAAACT TGCCCAAGCT CTCCCGGGTT TACAGGCATG ATGGGGTTTC TGATCCGCCT ACTGCACCTG AAGTCCAAAG TCATCCTGAG GGTTATGTGC CCCATTCCAA AGCAAGTCTA GAATAGCCCT CAGCCCTATC TTAGCAGCAG AGGTCTTTGG GAAATTTTTC TCCAGCTCTT TCATTCTGTC CTGGTATAAT GTCTATGAGT AACCTTAGTG GTGGATAGGC TTACCAATTC AAGAAGAAAC CTAAGCATCC ATATTATCAT CTGCA^AACA AGGATCACCT AGACCTCACC TTAAGGCAAT ACCCATTATG CTCAGCACCT CCATAACAAA AAATTCTGGA CTCCTGAAGC CCTCACGTGG TCTTACAAGT CATTTAACCA ACTGGGGATG CATAATAGGG CTTTGTGTGG AGCCTGGGCA AGCCAGGCAT GGTGGGAGGA TTGCACCACT AAAAAAGAGA AGGGAGGGAG
TCCTTTTCAT CTCTTTTTTT GGAGTGCAAT CAAGAGATTC CGCCACCACG ACCGTGTTAG GCCTTGGCCT GCTAGCCCCA TCTCATCTAA GCC. TTT' AAGAGAAAAA AAACCTCGCA CTTTGGCTCA CCCTTTGCCC CCTAGCCTGC TGGCAGTGAC CCTATACTTG GTCCCTTTCT CCATCTCTGT CCCATCAGTA TGCACCTCTG TCCTCCCCAG TGAAAATTTT TTTTCATATA CAGGTTGTAC AAGTTTATGT TTTTGAGATG CTAGAAGACA TTCCTCCAGT AGAATCACCT ATAGGCTTTC CAATTCCAAA CATTTCTGGT GTACGACAGT GGTTGGAAGT CTCTCTCCTT CTTTTTCTCT ACACCAGTCC TAATTACCTC AGGTCTTCAA CTATTATGAA ATATGTTTTC ACATAGTGAG GGTGGCGTAC TCCCTTGAGC GCACCCCAGC GAGAGGGGAG GGAGGGAGAA ：AAATTCC ΓΘΑΑΑΆΤΑ
ATGCAAAATA TTTTTTTTTG GGTGTGATCT TCCTGCCTCA CCTGGCTAAT CCAGGCTGGT CCCAAAGGGC AAACTCTTAA ATCAGGTATG TCTCCACTTA AAGTGATGGG TAGGAAAGAA GGGCAAATTC GTGCTCTGCC TGGGTGGTGA TGAAACTAAG AACCCTGCTG AAGGATATTG TTAGAATCCC CCCCTTTAGT TGTCTAATTT ATCTCTTTAT AACATGCTTT CCAAAGCTTC TCTCTTCTCT CTTCAGCACT CTTTTAAATT GCTAGCCAAT ATTCAACCAG TTCCAATAAC TTAATGTCTA TCTAACATGC GCCACTTCCA GCCCAAATCT CTGGGTAAAC CCAAGGTCAA GGCTAGCAGA GTGTGTGTTC TACTGGATTA TTTAAAGCTC CATATGAATT TTAAGCTGCT ATTTCTCTTA ACCCCATCTT ACCTGTAGCC CCAGGGGTTT CTGGGTGACA GAAGGAAAGA GAAAAATGGA
CATTCACCCC AAACAGAGTT CGGCTCACTG GCCTCCTGAG TTTTTATATT CTTGAACTCC TGGGATTACA CCCATTTCAG GGTGTGACTG TGAACCTGTG ACATGCATGG GGAAAGAGTG CATTAGATTT CTTTGGGCCC CCCTACCCTC GAGGGGACAG ATCTCTGAAT CGTGTTCACA AGAAGTCCAA CAAAGCTGGA CTGCTTAAAT CAAAAGGTTG CTCATTTTTT AAGTTCTAGT CACATTTTAC TTGCTTAGAA ATCTTTTTGT GATCTTTTAA TTCTTTGCCA ACATTCCTCT TATTCCTACC ACTTCAAACT CATTTTTAGG GCACTGGTTT AACAGAATTT GGCGTTGCTA TGGCTGCCTT ACTCTGGTAT GGGCCCCAGC TTATCTCAAA TTGGGGGAAC GTGAACATTC GATAAAGATC TACAAAAAAT CTGCCATCTC TAGACTGCAG GAGTGAGACT AGAAAGAGAG TCTAGGGTTA
CTCCCAACAG TTGCTCTTGT CAACCTCTGC TAGCTGGGAT TTTAGTAGAA TGACCTCAGG GGCATGAGCT CATCTACTCT GAGGTGTTAC AAACCAGACA GATAGACTTT ACAGGTCCCA TAAGTTTCAA ACTGGGGCGG GAGTCACTGG TGTTGCCTCC CATCTTCCAG GCCAAATAGC CAGCCTTCCT AGTGCCTCTG GGCTGATTAA TTCTAGCCAC TTTTTGCAAT TCCTTTTGGC TATAAGCAGT ATCTCTTCTG TATTTATTTT CTTCTAATTT CTTTATAACA TTTCCACCTG AATAGTCTTT TCAAGATTCT TATTGATTAC GCTAGGGCTG TATTTTCTCA GGTTTAGTTT CTTGCTGTGT CTCTTCCTCT CTTATTACTT ACACAATACC TCAATTCGTC ATGTACAAGT TAGGAGTATC TTTCAAAATT AGGAGGCTGA TGAACTATGA CTGTCTCTAA GGAGGGAAGG AGATTTAGGA (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -25- 200300170 A7 B7 五、發明説明（22) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局Μ工消費合作社印製
15551 GATTAGGTAA TGAATGTGTA CTATTACAGG GAACTGTCGA GCTGTTTCCA 15601 AAGTGACTGT ACCATTGTTC ATTGCCACCA ACAATACATG AGAGTTCTAG 15651 TTACTCCATG TGCTTGTTAC ACTTAGTATT ATCAGTCTTT TTCATTTTAA 15701 CCATTCTAGT GAGTATGTAG TAGTATTTTA TTATGGCTTT AATTTACAAC 15751 TCCCTAATGA TGAATGATGT TGAACATCTT TTCATGTGCT TATTGGCCAT 15801 TCATATATCT TTTGTGAAGT GACTATTCAA ATATTTTTCC ACTTTTTATT 15851 AGGTCATTTA TTTTCTTATT ATTGAGTTAT CTATGAATAC AAATCCTTTA 15901 TCAGTGTATG TATTGTGATT TTTTTCCCCA GTGGCTGGCC TTTTCATTTT 15951 CGTTAGGCTT TTTTGGTGGG ΤΤΤΤΤΤΤΊΤΤ TTTTTTTGGA AGAGAAAAAT 16001 ATTTTAATTT GATAAAATCC AGTATATCAG GTGTTATAGA CTGAATTATA 16051 CTCTACCCCA CAAATTCATA TGTTGAAGCC CTAACCTCTA AGTGACTATT 16101 TGGAGATGAG CCTTTAAGGA GGTAATTAAA GTAAAATGAG ATCATAAGGG 16151 TGGGCCCTAA TCTAATAGGA CTGGTGTCTT TATAAGAAGA GGAAGACACC 16201 AAGAGCGCAT GCACACAGAA GAACGGCCTT GTGAGGACAC AGCAAGATGA 16251 CGGCCATCTG CAAGCCAAGG AGAGAGGCCT CAGTAGA7VAC CAAACCTGCT 16301 GATGCCTTGA TCTTGGACTT CCAGCCTCCA GATTTCTGTT GCTGAAGCCA 16351 CCCTGCCTGT GGTGTCTTAC CATGGCAGCC CTCACAGACT AATATATCAG 16401 ATTTTTTTCC TTCAACAGTT AACGCTTTTG GTGTCCTAAG CAATATTCGC 16451 CTGACCCAGG GTCATGAAGA TTTTTCTTCT ATGCTTTCTT CTGGAAGTTC 16501 TATAATTTTA GCTTTTACAT ATTTTTTTAA CTTTCCTTCT TCTTGCCTTC 16551 TGTTTCTTTT AAGGCATCAT CTATTGTGTT AATTTGTTCT TGTATTCCTT 16601 CTGATTTATT CTTCACTTCT GAAATGAATT TTGCTTTTTA AAAATATATA 16651 TAATTCTTTT CTGTGTCTGA GTTTTTCTAA TTAGGTTTTA TGTGGTTTTT 16701 TCTTGTCCTG CATCACTTTT TACTGTCTTT TGCCCATTTT GAAGTATCAG 16751 GTTCCAGTTT TGATCTGTTC ATGGATATGT TTTTGTGACA TGTTTCTTCT 16801 GGCTTCTTAT CATTTATTGC TTAGCTTATT AATTTCTATT CTTTCTTATT 16851 TTCTATTATA AGTATTTAAA GCTATATGTT TTCCTCTAAG TATTACTTAG 16901 CTGTCTTATA CGTTTTCATT TGTGTTATTT GGTGATCATT CACTTTCAGC 16951 TATTTATTAA TTTCCATTAT AATTCTTTCA TCTATGGGTT GTTTTAAAAA 17001 ATATTTTTAA GGCCAGGTGT GGTGACTCAC ATCTGTAATC ACAGCACTTA 17051 GGGAGGCTGA GGTGGGAGGA TTGCTTGAGG CCAGAAGTTT GAGACCGGCC 17101 TAGGCAACAA AGTGAGACCC CCTCTCTACA GAATATTTTT TTAAAATTAG 17151 CTGGGCCAGG CGTGGTGGCT CATCCCAGCA CCTGTAATAC CAGCACTTTG 17201 GGAGGCCAAG GCAGATGGAT CACCTGAGGT CAGGAGTTCG AGACCAGCCT 172 51 GGGCAACATG GTAAAACCCC ATCTCTACTA ΑΆΑΤΑΤΑΑΑΑ ATTAGCCAGG 17301 TGTGGTGATA GGTGCCTGTA ATCCCAGCTA CTTGGGAGGC TGAGGCAGGA 17351 GAATTCTTTG AACCCAGGAG GAGGAGTTTG CAGTGAGCCG AGATTGCACC 17401 ACTGCACTCC AGCCTGGATG ACAGAGCGAG ACTCTGTCTC ΑΆΑΆΑΑΑΑΑΑ 17451 AGAAAAGAAA ATTAGCTGGG TGTAGTGGCA GGTACCTGTG GTCCCAGTGA 17501 CTCAGAGACT GAGGCAGGAG GATCACCTGA GCCCAGGAGT AGAGGCTGCA 175SI GTGAGCTATG TTTGTGCCAC TGCACTCCAG CCTGTGCAAC AGAGCAAGAC 17601 GCTGTCTCAA AAAATATATA TTTTTTTAAA TTTTCAAACT TCCTTTAGTT 17651 CTCTTTTTGT TATTAACTTT TAACTGAATG TTTTGCAATC AGAAGAAATA 17701 CTTTATGAGA TACCTATTCT TTAAAATTTC TTAAGAATTG CTTTGTGTTA 17751 ATATTTTGTT AATAGTTCAC ATGTGGTTCA ACCAATTTGT TTAGTTAGTT 17801 CTGTATATGT TCATTAGACC AACTTGATAA CTGTGTTGTT CTTTATTTAT 17851 TTATGTATTT ATTTTTCTTT GTCTATTCAT CAATTGCTGG GTGAGATGTA 17901 TTAAAATTTC TTGTTGTAAG TGTGGCTGTT CACTTTCTAC CTGTAGTTTG 17951 TCTGTTTGCT TTATAGAGGG TGAAGTTGTT TAGTAGGCAC ACATAAGTTA 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -26- 200300170 A7 B7 五、發明説明（23) 經濟部智憨財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
18001 GAATTTTTCT GTCTTCCTGG 18051 TCTTTTCATC TTTAGTATTG 18101 CTGTTAATAT AACTACACTG 18151 AACATTTTCC ATGAAGAAAC 18201 CTGATCTTTG TGTCAGCCCC 18251 ACTCCCCAAA CCCAGGAGCA 18301 CATCCAATCC GTTAGCAAGT 18351 GATATTGAAT CCAGCCCTTT 18401 ATCCCTACCA TGGCCTCCTT 18451 ATGTTAGGCC AGGCACGGTG 18501 GGCCAAGCGG GTGGGTCACC 18551 GACATGGTGA AACCCTGTCT 18601 GTTATGCTGG CCTGTAATCC 18651 CACTTGAACC CAGGAGGCGG 18701 CACCCCAGCC TGGGGAACAG 18 751 AAAATAAAAT GTTAGGCTCC 18801 CTTTAACAAA ATACCTTAGA 18851 AATAATAGCA ATTAATAAAT 18901 GCTGGGAAGT TCAGGGTCAA 18951 GGCTCTCTGC TTCCAAGATG 19001 AAGGGCAAAC ACTGTGTCCT 19051 AGCTCTCTGA AGTATCCAGG 19101 GACATCCACA GAGTACCTAT 19151 TAAACGCCTG AATGAACAAA 19201 AGCAGCCACC GCAACAGTCC 19251 GAGGTTTAGG GGCAAGGACC 19301 GGGCTGGGAT TCCCACTCCC 19351 ACCAGGCTGT TCTTATCCTG 19401 TGGACCTAAA GTCAGTCCAG 19451 TCTAAGTTCC CTGACCCGGA 19501 TCTCCTCCCC CAGCTCTCCC 19551 TGTGCGGGAA CCAAGGAGCT 19601 GGACCTGTAC AACAAGTTCA 19651 CCAAGTCCCC CTGGGTGGAG 19701 AGGTCTGTGG GTAAGGGACT 19751 CTGTGCTCAG TGCTCAGTGG 19801 TCCCCAAAGC AGAGGGCAGC 19851 TGGGACCAGC AACAGCGAGG 19901 GGGGAGCTCC AGCCAGCACC 19951 TGTTCATTAT TTTCAGTTGA 20001 ACTTTATATG CTTATTCCTA 20051 ACAATGTTTA AAACCAATTC 20101 TCCCAGCACT TTGGGAGGCC 20151 TTGAGACCAC CCTGGCCAAC 20201 AAAAATTAGC CAGGCTTGGT 20251 AGGCTGAGGC AGGAGAATCG 20301 GCCAAGATCA CGCCCCTGCA 20351 GAAAAAAATT AATAAACAAA 20401 ATTTTCTATA CACTGTAGAA
TGAATGGAAT CATTTATCAT TATCTAATGT CTTTGGACTT GGAAGTCTGT ATTTTGTCTC GTTCCTTTGG TGTGAATATT TGCATAGTAT AAAACAGAGG AATTGGTTCT TTCTCAAAAT CATCTCAGCC TTCTCCATTC ATCCTTGGTC ATCCTTGATT CTCCTTTTCC CCACATTCTA TCTATTAGTT CTATTATTAC CTCCAAAATA CTCACTGTCT CCACCATCAT CCTGTCTCAC GCTGGTTGAC CAGAGTGATC TTGTAAAAAC GCTCCTGCCT GTAATCCCAA CACTTTGGGA TGAGGTCAGG AGTTGGAGAC CAGCCTGGCC CTACTAAAAA TACAAAATTA GCCAGGTGTG CATCTACTCG GGAGGCTGAG GCAGGAGAAT AGGTTGCAGT GAGCCAAGAT CATGCCACTG AACAAGACTC CATCTCAAAA AATAAAAATT CTGGGTCTCT GGCTTAGTCC ATTTGTACTG ATGGTGTAAT TCTAATAATT GCTATTAATA AATAGCAATT TCCTTCTCAC AGTTCTAGAG GGTGGCACCT GACTCCGTTC TGGTAAGGGC GTGCCTTCTC GCTGCGTCTT CGCATAGCGG CACGTGGCAG AAGAGATAGA AGGGCCAGGC TTGGAGTCAT GGACCTGCAT GTTCCCCTCT CATGGTCCTT GGCATGCAGC AGGTGGCCCA CATATAGTAA TGGTCGCTAG TACTAGGAAT TGTGAGGGAG GCATTACAGA TGAGGAAACT TGCCCATGGT CCCAAAGCTA GGGAGGGACA ATCCATCTGG CTCCAGAACC TGAGCTCCTG TCTCAGCCAG TGGCTGCCTG TCTGGACGGA CCAAACAGAG GGAAGCATGA TCAACTGTTC GAGGCTGAGT CCATGGCCCA AGCTGTCCTC ACCCGTAGAC GGTGGCGCGA AGTGGAAGAG GCTATGTTCT ATGATGTGCC TGAAGAAACA AGGGACGCGT GCGGACGGTT TCTCCCAGCT TCCGAATACC TGGATTACCT TTTTGAAGGT GAGTGGAAGG CTGTCCATCC CATCGGGGAG TTCTGTTCTC CTGACCATCT GTCTCCCACT TCCCTGGGCC AGGCCCTTTG AGATGGGGTG GACCATGTCT GGTAGCCTGT CAGGGAGTTA AGCAATCTCA CGTGCACCCT CTGCTAACAA GCACCATTTT GGTCATGGAC TACACAAGGC TTTTTTTATG TTCAGCTTCT CTCCTTAAAA TGGGCCAGGC GTGGTGGCTC ACGCCTGTAA AAGGCAGGTG GATCACCTGA GGTCAGGAGT ATGGCAAAAC CCCGTCTTTA CTAAAAATAC GGCAGGCACC TGTAATCCCA GCTACTCGGG CTTGAACCCA GGAGGCGGAG GTTGCAGTGA CTCCAGCCTG GGCGACAGAG CGTCTCAAAA GAAAAAAAAA CAAATTCTGT TTGCAAAAGT ATTTGTGGGG TGTGGGGGGG TAAAGATGAT 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -27- 200300170 A7 B7 五、發明説明（24) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20451 20501 20551 20601 20651 20701 20751 20801 20851 20901 20951 21001 21051 21101 21151 21201 21251 21301 21351 21401 21451 21501 21551 21601 21651 21701 21751 21801 21851 21901 21951 22001 22051 22101 22151 22201 22251 22301 22351 22401 22451 22501 22551 22601 22651 22701 22 7 51 22801 22851
AGAAAAAAAA GGTGAGGAGG AACTTGTGAG CTTGATACCG CATAGATGTG GGGAGGATAA TGCTGCCCGG AGAAGAGGGA GAAGAAGAGA AGAAGGGAAG GGAGGAAGCA ATGCCTATTA GTATGTTAGT GATACACTAA CAGCACTTTA ACCATCCTGG AAAATTAGTT GGCTAAGGCA CTGAGATCGT CTCAAAATAA CACCTGTAAT ATCAGGAGTT TAAAAATACA CTACTCAGGA TTGCAGTGAG AAGACTTTGT GGGAATTGGC TCATGGGCTG GAAGGCCCAA AGGCCCGACA CGGAGAACAG GCTCAGGAAG TCTTTGGGCC AGATCATCAC CCTCACAGAT TTAGTGCAGC GTGGCTCACA CCTTTGAGGA GCCTAGGCAA AATTCGCTGG CCAAGGTAGG ATGATTGTTC TAAAGAAAGA GGGTGGATGA AGGCAGGGAA GAGAGACAAG GGATGTATGG AAAAGGTGAG AAAATATTGG
ATGTCCCATG GCACTTTTTT GTTCATTTCC CTAGTAACCA AACTGGATCT ATGCCCAGAC GCTTCTCACA CAGACTGATT TGATTCGTGT GACAGATGGG ATGGAAAAAT GGAAGGAAAT CAAGGTTCTC GAGGAGGCCA GGAGGCCGAG CTAACACAGT GGGCGTGATG GGAGGATGGC GCCACTGCAC ATAAATAAAT CTGAGCACTT CAAGACCAGC AAAGTTACCC GGCTGAGGCA CTGAGATCAC CTCAAAAAAA TCATGCAATC GACAACCAGG GGCCAGGGGA ATCAGAGGGG GAAGCTCCAA AGAGAATGTG GTCAGTGGAT CAAATCTGCC GGGCCCAGAA TAAATTGACA CCTGTAATCC TGAGGTAGGC CATAGGGAGA GTACGGTGGT AGGATGACTT CATTGAATTC AAAAATTTAA GATGGGTGGG GGAAGGGCTG AAGGAAGGAT GAAGAATGGA AAGTATAAAT TTAGAAAGGA
CTTACTGGCA TTTTTCAGTC ATCAACCTGA GTGGACTTGA TTCTGACCTC AGTGTCCTCA GTGTTCAAGG GCAGGGCAGC GGAAAGAAGC TAAGAAGAAA GGGAAGGAAG ATGTGTGGAT CAGAGAAACT GCCGGGCGCG GCGGGCGGAT GAAACCCCGA ATGTGCGCCT GTGAACCCAG TTCAGCCTGG AAATAAAAAG TGGGAGGCCG CTGGCCAACA GTGTGTGGTG GGAGAATTGC GACACTGCAC AAAAATTTAT ACAGACACAA AAAGCTTGTG GCAGTGGTGT CCACTGATAT CGTCCAAGGA AATGTGCCAT TGGATGATGC GATTAAAATG ATAATGTTTT CATAAACTTA CATCACTTTG AGATCACTTG CCTCGTCTCT GGGCACCTGT GAGCCCAGGA CAGCCTCGGT CCATCACAGA TAGATAGTAT GAGCGAAGGA GTGTAGAAAG TGAGTAGGTT GAATAATAAG TGATTGAGAA
GAAATCATGT TATTTTTAAT GACTCACAGA TACCGCTAGT GGGCAGGGCC GAGAGCTGAG ACAAAATAAG AGGAAGAGAT TGGCTCGGTG GGGAGGATGG GAGGTTGGAT AGAGAGATGG GAACCAATAG GTGGCTCAAG CACGAGGTCA CTCTACTAAA GTAGTCCCAG GAGGCAGAGC GTGACAGAGC AGGCCAGCCA AGGCGGATGG TGGTGAAACC GCACACACCT TTGAACTTGG TCCAGCCTGG AATAAGAGGA AAATGTCCCC GTGTGATTCT AACCCCCAGT AAGTCCCAGA CAGGAGAAGT TCCTCCTCCA CTGCCCACAC TTAATCTCTT ACTGTCTACC ACCATCACAG GGAGGCCAAG AGCCTAGGAG ACAAAAAAAA GGTCCCAGCT GGTCAAGGCT GACAGAGCAA AGGCAGAAGA AGAAGAAAAG GAAGCAAGGA GTGGAAGAGA AGAAGGCTCA AAAGGAGGCA GAAAGGGTGG
ATTGACATTG CTTCACAGCA AGCTAAGAAA AACCGGTGGA GGGTAACAAG AGCTGTAACT GCTTTAAGAG GGTAGAGAAG GATGGATAAA AGGGGATGGA GGAAGGATAG AGGATAGGAA GATATATACA CTTGTAATCC GGAGATCAAG AATACAAAAA CTGCTGGGGA TTGCAGTGAG AAGACTCCGT TGGTGGCTCA ATCATTTGAG CTGTCTCTAC GTAGTCCCAG GAAGCAGAGG GTGACAGAGC GATTTATTAT CAGCATGCAG GTCTGAGTCT CCGAGGCCAC GTCCAAATGC TGATGTGCCA TTTTTTGTTC TGGTGAGGAC CTGGAAAAAT TGGGTATCCC GCCAGGCACT GTGGGAAGAT TTCAAGACCA AAAAAATTTA ATCTGGGAGG GCAGTGAGCC CACCCTGTCT AAAGGCAGAT CGGGACATCC AGGAAGGAAG AAAGAAGAAT CTGGCTAGAT TAGGAAGAAA TTGGGAAGGA (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -28- 200300170 A7 B7 五、發明説明（25) 22901 22951 23001 23051 23101 23151 23201 23251 23301 23351 23401 23451 23501 23551 23601 23651 23701 23751 23801 23851 23901 23951 24001 24051 24101 24151 24201 24251 24301 24351 24401 24451 24501 24551 24601 24651 24 701 24751 24801 24851 24901 24951 25001 25051 25101 25151 25201 25251 25301 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
AGGAAGGAAG
TAAGAAGGCA
ACAATAATTG
AGACACAAAG
AATTTCTCCT
TGCCTTTACA
CACTTTCTTT
CTGAAGGTCA
CTTCCTGAAG
TGTAAGTAAT
ACAGGGCAAA
AGGGAAGGCT
GTGTATTTAG
CATCTTCAAG
AGGAATGTGG
TTAGAGAAAA
CCTGTTAGTA
ACGTGTAATT
AAAGCTTAGC
AATGATGAAT
AGGCACGGCC
GAGAGAAAAT
TTTGGGAGGT
GCTGGGCACA
GCGAGCAGAT
GGGAAACTCC
GGGCACCTGT
GAACCCAAGA
CAGCCTGGGT
AAGAGATTGC
TATACCAAAC
GGCTCTTTGA
CAGGGGACTT
GGAGCCAAAA
GCTTTTATCT
CGTAAAGTTC
TAAATGGAAC
GTTTCTACTG
TGCTACCTTT
TCAAAGGGCA
CTAATGGAGT
GATTGTCCCT
ATCCTGTGCC
GCTGGCCCAC
ACTATGCCCA
ATTTGAGTTG
AGTGAATGGA
CACACCTGTA
AGGTCGGCAG
GATGGATGGA
GACAGGAAGG
CTGAATGGGT ΑΤΑΤΤΤΑΆΑΑ
GATTCTTCAG
CTCCCTCCAC
TGGTAGTTTG
GGATACAAGG
CTTGATACCT
GACATCATGA
GGTGACTAGT
GCATGGAAGA
TTTTCTCTGG
CCACTGGGCA
AAGTTGAAGA
GCTAAATCCC
GACGCACTAA
GAAAACTTGA
AGAATTGTGT
TTGAATGCTT
TGGTTTCTTC
GAGGGAAGAA
TCTCAACCTA
GTGGCTCATG
CACCTGAGGT
GTCTCTACTA
AATCCCAGCT
GGCGGAGGTT
GGGTGACAGA
TCCCAAAAGT
TTCAGGAAGA
AGAGATTAAG
CTAGGAAGCT
GTAGAGAAGG
AATAATGCAG
CTGAGACGTT
ACAGAGAGTA
TTGAGATGCA
AGTGAAAAGG
GTGCTAAGAG
TTTCTTGGCT
TTCATGTCCC
TGTCCCACAT
AGATAGAGAG
GAGTCTATTT
ATGCTGTAAT
TTTTGCATTT
ATCCCAGCAC
TTCGAGACCA
TGGATGGATG
CTCTCTGGCT
AGGAATAAGA
TGTTTTCATT
CCCCACATCC
ACTTTTTCTG
CATATTTCAT
AGGCCTCATC
AGTCAGTACC
AGAAGCCACA
GTGGTCAGAG
AGTGGCATTT
CTGCCATATT
AGGCTAGAAG
CTCAGAGTGC
CTCCAAGAAT
CACTCAAGGC
GAAAGGAAGA
CCTGCAGTCA
ATCCGAGAAG
CTGCCTCTTA
CTTAAACAGA
TGCAAAAAAC
CCTGTAATCC
CAGGAGTTTG
AAAATACAAA
ACTCAGGAGG
GCAGTGAGCC
GCAAGACTCC
GTGACATAGA
TAAAAGATCA
ATTATAACTC
GAACAGCATT
GCTTATCTGA
TGGATTCCCC
TACATCCACA
TGAAATCAAA
GACTGGTAAA
AAGGATATCT
CGAAAGAGAA
GGATTTTCAA
CATGCTTGAG
TTTATGTTGG
AAACTGTACC
GACTCTGACT
GAGATGAGAC
GAAAGAGATG
TTTGGGAGGC
GCCTGACCAC
GATGGGAAGG
AGAAGAATGG
CATTAGAAGA
AATTTTTTGC
CAAGCCAGGG
CTCTCATATG
TTACCCCAAA
TCCGCATTCC
CAGTGGATGT
TGTTTACCTT
ATCCCTGCTG
TAGTTAGAAC
CCTTGTCACA
GCCCTCAACA
AGAAAGAAAC
ACCTCAATCA
ACTGCTTCAC
AACTTGTTCT
TATGGGACAC
GTTTCCAAAT
TAGTAAAATG
AAGGAACCAG
AATAAAATTA
CAGCACTTTG
AGACCAGCCT
AATTAGCTGG
CTGAGGTGGG
AAGATCATGC
ATCTCAAAAA
GAAACAGCCA
AAGTACTCAG
ACAGTCCCCT
GTCCCTCAGC
AAAAAGGATC
CATGACATCC
GAAACACTGT
GAAGGCTGTT
ACTACTTAGC
CAGACGGTGA
TTCTTCCCAG
ACTGCATTGG
CCAGATTGTC
GAGCAGAAAA
CCGAGAGTTG
TAGATACTGT
TTTGGGGGAC
TGGGTTGGGT
CGAGGCAGGC
CATGGAGAAA
AAAGGAAGGA
CAGACAAACC
ATAAAGGGAA
CTCCTCCCTG
TGATCCTTCC
TGGCCGTGGT
CTTTCAGCTC
CCTCAGCTCC
TTCCTAAACA
GACCACAAAC
GCTGGGAATC
TTGAAAGGTG
TTGCCCTCTC
GACTATCGGT
AAGTAGCATT
TCGTGAAGAG
AAGGTAAGGA
GTACTGGCAG
AGAGCTTGTA
AAAATGTGGA
CAAGAGGAGA
GACTTGATGA
AGAGATTGTA
AGAGTCCGAG
GGCCAATGTG
GTGTGGTGGC
AGGATCACTT
CACTGCACTC ΑΑΑΑΑΑΑΑΛΑ
AGTATGTGAT
TCGCTCAAAA
TCAATCAAAC
CATATCAGCT
TGTGGACCTG
ATAGGAGACC
TAGCTTGGAT
GGACTCTCCA
TGCAAACACC
AACCAGAAGC
GCCTTGAAAC
ACCATGACCT
TGCAACTGTT
CTTTAGTTTT
TACTGACTGG
TGATTTGGGA
ATTGGGATGG
AATCCTAGCC
AGATCACCTG
CCCCATCTCT 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -29- 200300170 ΑΊ Β7 五、發明説明（26) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產苟員工消費合作社印製
25351 ACTAAAAATA CAAAATTAGC CAAGCATGGT AGCACATGCC TATAATCCCA 25401 GCTACTCGGG AGGCTGAGGC AGTAGAATCG CTTGAACCCG GGAGGCAGAG 25451 GTTGCGGTGA GCCGAGATCA CGCCATTGCA CTCCAGCCTG GGCAACAAGA 25501 GTGAAACTCC ATCTAAAAAA AAAAAAAAAG AAAGAAAGAG ATGTGGATTT 25551 TGGGTGGGGG ACAGAGGGAA GACCATGGTA GGCAGAATGA TCCTCTAAAG 25601 GTGCTCTGCC CTAATCCCCA GAAGCTAAGA ATATGTTAGA TGTCAGTATT 25651 GCGTGGCAGT AGGAATCTTA ATTAACGTTA TAGACTGTTA TGGTTTGAAT 25701 GTCCCCTCTA AAACTCCTGT TGACATTTAA TCATCATTGT GATTGCATTA 25751 AGAAGTGGCC CTGTTAAAAG GTGATTTAGT CCTTAAGAAC GCTGCCCCCG 25801 TGAATAGATT AAGGTCAGTC TTGCGGGAGT GTGTTTATCA AGAATGGATT 25851 GTTAAAAAGT GAGTTCTGGC CAGGGGCAGT GGCTTATGCC ACTCAGCACT 25901 TTGCGGGGCC AAGACTTGAA GTCAGTTGTT TGAGACCAGC CTGGCCAACA 25951 TGGTGAAAGT CTGTCTCTAC TAAAAAATAC AAAAAGTGTC CGGGAGTGGT 26001 GGCGGGCGCC TGTAATCCCA GCTGCTCAGG AGGCCGAAGC AGGAGGATCG 26051 CATGAATCCG GGAGGCAGAG GTTGCAGTGA GCTGAGATCG CCCCGTTGCA 26101 CTCCAGCCTG GGTGATAGAG CAAGACTCTG TCTCAAAAAA ANNNNNNNNN 26151 NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NAAAGAAAGA 26201 AAGAAAAGAA AAGAAAAGTG AGTTCTGCCC TCTCTTGCTG GCTTACTCTC 26251 ACCCTCTCTT GCCCTTCCAC CTGCCACCAT GGGATGACAC AGCACAAAGG 26301 CCCTCACCAG ATGCCAGTGC CATGCTCTTG GACTTCCAAG TCTCCAGAAA 26351 CATGAGCCAA ATACACTTCT GTTCATTATA AATTACCCAG CCTGTGATAT 26401 TCTGTAATAA CAACACAAAA TAGACTGAGA CATAGATCTT CAAATAGTGA 26451 GGTTATCCTG GATAATCCAG ATGGGCCCAA TCTAATCCCA TGAGCCTTTA 26501 AAACTTTCTC CAGATGGAGG CAGAAGAGAA GTGGCAGAAG GGGAAGTCAG 26551 AGAGATTTGA AGCATAAACA GGACTCCATG GTGCCGTTTC TGGTTTGACG 26601 ATGGAGTGGT AACGTGATGA AAAATGTGGG TGCCTTCCGG AGCTGAGAGG 26651 CTCCCACTAA CAATCGGCCA GGAAACAGGG ACCACAGCCC TACAGCCACA 26701 AAGAACTAAG TTTTGCTGAC AACCCAAGGG GGCTTGGAAG TGTCTTCTCC 26751 CCCATCGGTT CCAGATGTGA GACCCAGAGC GAAGGAACCA GCTGAGCCCA 26801 CCTGGACTTC TGACCTAGAG AACTGTGAGA TAATAAGTTT GTATCATTTT 26851 TAAGGCACTG TGTGTGTGGT AATTTGTTAT GACAGCAATA GAAAA.TGAAT 26901 CCAGATGGGC AGGATCTGCC AGGCCAGTGA CATGTGGAGG GCACCCAGGC 26951 GGATGGGATG GCATGAGAGA AGGCAGGTCA GCAATGAGCT TGCCCAGGTC 27001 ACCTCTCCTC TCTAAGCCTC AGTTTTCCTC TCTATGAAAT GAGAGTAGTG 27051 ATATCTCCCT CCCAGGGTCA GTGGAAGGCT GAAATAACAG ATTATAAGGT 27101 GCTAGGTGCA CAAGAAGTGT TTGAAACATG CTAGTTGCTT TTCCATTTCC 27151 AAGAGAGCTC TCTGGTCTTG GGGGATGGAG GCAGTGCGGC CCCTCGGGAT 27201 TACTGACAGG TCCTGCTCTG TTTCTGCAGT GGAGCCGGCC CCACCTGTCC 27251 TGGTGCTCAC CCAGACGGAG GAGATCCTGA GTGCCAATGC CACGTACCAG 27301 CTGCCCCCCT GCATGCCCCC ACTGGATCTG AAGTATGAGG TGGCATTCTG 27351 GAAGGAGGGG GCCGGAAACA AGGTGGGAAG CTCCTTTCCT GCCCCCAGGC 27401 TAGGCCCGCT CCTCCACCCC TTCTTACTCA GGTTCTTCTC ACCCTCCCAG 27451 CCTGCTCCTG CACCCCTCCT CCAGGAAGTC TTCCCTGTAC ACTCCTGACT 27501 TCTGGCAGTC AGCCCTAATA AAATCTGATC AAAGTATGAT GACCTACAGG 27551 AGGCCTGCTT GCCAAGTCAA CAGATTCAGT ACAGAAAAAC TGAAAAATAC 276 01 AGATAAGCTC TAAGAAGCAG ACCAAAAGTA CCCAGAGATG ACCGCACATC 27651 ACTCTGGTGT ATATCCAATT TCAGATTTGT TTTCTGTGTA TGCATGTGTG 27701 TATAGCTGCA TTTATTTATG GCAAGGGCTG GCAGACTTTC CCGAAGAAGG 27751 CCAGATAGTC GATATGTTTG GCTTCATGGG CCGTATGTTC GCTCAGGACT 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -30- 200300170 A7 B7 五、發明説明（27) 經濟部智慧財產^員工消費合作社印製 27 801 27851 27901 27951 28001 28051 28101 28151 28201 28251 28301 28351 28401 28451 28501 28551 28601 28651 28 701 28751 28801 28851 28901 28951 29001 29051 29101 29151 29201 29251 29301 29351 29401 29451 29501 29551 29601 29651 297 01 297 51 29801 29851 29S01 29951 30001 30051 30101 30151 30201
ACTCAACGCT
GAATGGGCAT
GGCTCATGCC
TTACCTTAGC
TATCCCTACA
CCCAGCTGCT
AAGGCCACAG
GAGTGAGACC
CAAGTGGCCA
GCTTCCACTA
CTGGGGAATA
ACAAATATTC
CACATGTGCA
GTAAATCGAA
ATTTCAATGA
ACTACGTCTT
TGTGGACCAG
TTCCATACCA
GACTAGGAGA
GGGACCTTAA
TTGAACCATG
AGTCTTGGGA
TAGAAAGTTC
CCAGCCTGGG
AATTACCCAG
GCTGAGGTAG
TGTGATCACA
CCCTACAAAA
TGCCAACCCC
CTGCCACTCT
CATGGCCAGC
CTGCCTCAGT
AGTTCTCTAA
GTGGTQCAGA
CAGTGGTTAA
CACTCATTGT
TGCACAGTCT
GTATGTGAAG
TTTCTCTCAT
GTGCTGCCAT
GATCTGGAAG
CACGGGCCCT
TTGAGAGTAA
CAAGATGGTC
TCCACCATTA
CCCTGGAGGG
CTGCTAAGGA
CAGGAGAGAC
TAAAAGAGTT
GCAGTTATAG
CGCTGGGTTC
TGTAATCTCA
CCAGGAGTTC ΑΑΑΆΑΑΑΑΑΑ
TGGGATGCTG
TGAGCCATGA
TTGTCTCAAA
ACCAGACTTG
AAGTAACATT
TAGATCCGAA
TAGACCAGCA
GTTTTAAGTG
TTTTAATAAC
GCAATTCTGA
TAAAATCTGA
ATGCATTTCA
CACAGTGCAG
CCCCAAGATG
TGGGGTGCAC
GCTATCCCTA
AGTGCTTCCT
AGGCAAGGAG
CAACAGCAAG
GTATGGTGGT
GAGGATCGCT
CCACTGCACT
AAACAAAAAA
ACTCTGTCCT
CTGCTTCTTT
CAGTCCAGAT
GCCAGAACCA
GCCCACCTGC
AGGAGAAACT
GAACATGAGC
GTGTCTTTGG
GCAGGATGGG
CACTCGGCAC
TGTTATTTTT
CGCTTCTGAT
ACCCTCATGG
GGTATAGCAA
GGGAGTGGGG
CAGACTCTTG
GTAATGCATT
AGCAGTGCCT
TGTGTCAGCT
ACTCAAAAGG
CCAATTTTTA
CACAAAAGGA
CAGTAAAACT
GTACTTTGGG
AAGACCAGCC
AAGCTGGGTG
AGGCAGGAGG
TCGCACCACT
AAAAACAAAA
GTCCCTGGGC
CACACTCCCG
TCCAGCGTGG
CTGCCCAATA
TTCCATGTTA
AGATTTTACT
TAGTGATTGA
TGTGTGTTTT
CATACTCAGT
CATCTGTAGA
GAAAGCCTGA
GCCAGGGCGA
CCTCTAGACT
CAATGCTTAA
GGAGGATCAC
ACCTTGCCTA
GTGGATCTGT
TGAGCCCAGG
TTGGCCTGGG
AAAAAACAAA
GGCTGTGTGA
TCCAAACAGA
CACTCTCCAG
TCTACACGTT
TTCTTGCTGG
TTCCCTCTGQ
CTAGAGATAG
GCAGCTTACA
TTTATTCTTG
AGGTGCAGTT
CCTTCCTTAG
ACTGCTGTTA
GGAACCCCTG
ATCTGGGGGT
CTGGAGCTAT
GACCAAAACA
CATTTAGTCC
TAAGTTCCTT
GCTGAGAGCA
GGAGGAGAGG
GTTCACACTT
GCCGTAGCCT
GTTTACAGGC
AGGCCGAGGT
TGGGGAACAT
TGGTGATGCA
ATCGCTCGAG
GCACTTTAGT
AATAAAACTT
CTCTGCTCTT
ATTTTTGCAT
TTCCTGCCTT
GAAAGAAATA
AATTAAGTAA
TCATCCAATT
GATCTTTTAC
GTACTTGGAA
AGTCACGCGT
GGTTTCCTCC
AGAATCTGCT
CCCCAAGTGG
CAGCTGAAAA
ACTTTAATGC
TTGAGGCTGG
TACAAAAAAT
AGTCCCTAGT
AGTTTGAGGC
TGACAGAACC
AAAAAACACC
AACCAGTCCC
CCCTATTTCC
CCAGCTGCCA
CAGTGTCCCG
AGGTCCCAGG
GCCTTGGGAG
ACTCGCCTGG
TAATGCCCCG
TGAGGATTAA
GTAGACAAGA
AAGCCAACTG
GTAATTGCCG
GTTTCAGCGG
GTGCGGCAGG
GAGTTGTTCA
TCTATCTTTG
TGAATAAAAT
TGAGATAAAT
GAGCCCCTGG
AGGCACCAAA
TAACCCAGGA
ATACGTAAAT
CAGGTGCGGT
GGTGGGAGGA
GGTGAAACAT
TGCTTGTGGT
CCCAGGAAGC
CTGGGCAACA
TTTACATAAA
GAATGTTCTT
ACTCTGGGTT
CAAGAACCTC
TAATGCAAGC
AAAGAGACGG
GAATGGTATC
ATTCTTTTTC
CACTTCTCAG
GGCCAGTGCC
ACTGCTGATA
CCTTGAAGTA
TAGGCTGCTT
GAACTCAGGT
AGGAAAAGAA
GAGTTCGAGA
AATTTTAAAA
TACTTGGAGA
TGCAGTGAGC
AAACCCTATC
CTACCATGTC
CACAGCAGCT
AGTCACTCCC
GCGAACACCA
AAATACAGCA
TGGGTATCAA
CTTCGTGACA
ATTAAAACCA
AACCTTGGTT
ATAGGGTCAT
GCCATTGTTG
GGCTTTCCTG
CAGGGGGTGT
GCAAAGATGC
TGGGGAGGGG
GATAGAATAT
TGTCTGAATT
GGCAAACAGG
AACTTCACCT
CCTTGGACCT
GGGGACATCT
TAAGCTGTGT 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-31 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（28) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慈財產咼員工消費合作社印製
30251 CCTGGCTGAC CTTGGAGTTT CTTCCCTGGT CTGCTGGGTC TCTCCCTTAG 30301 AACCTAGGGG CGAGCTGGGG CAGGGGAAGC CCAGGAGGTG ATATAGGTCG 30351 GCCCTGTTCA GATGAGGGCT GGCAGGGGCA GCTTGGGCAT ATGCGAGGCT 30401 CCGATGGGCA TGGGGGCTTT GAGGATGGAT TCTGAGTGTC CCTGCATCGT 30451 GGCAGGGTGG CAAAGGGAGC ATTTCCAAAT TTCCTGGCTC CAGGATCTGT 30501 GGGAGAATCC CACTAACTGT CAGGGTGACA ACCTCGGGTA GACATGTCTG 30551 TGCCCTGCCC CGTGCCCTCA GCCTTCCTGT TAAGAGCACA CCAGCTGGAT 30601 TTGCAACTCC CAGCGCCTGC ACCCAATGGG CTTTCTCTGG CCTCTGGAGC 30651 CCACATTGCC CCTGCATGTG GCAGGCTGCA AGTGTCACAG CCACCAGCTC 30701 TTCCATTCCT CAACAATGAC TGTGGGTAAA TAGCCCAGGA GCGTCCCCCT 30751 CCTGGGATGG TTCTGAGGTG CGTGTGCCCA GTGGCTCCCT GAGTTGCCAG 30801 CAGGATTAAG TGCCAGTAGC CCTAGTGGTC AGCTGCTTGA TAACACCCTG 30851 CTTCCTGGCT GCTCCCCCAG TCCCATCTGG TGTGTTCTGG GATCATCTCC 30901 CAAAGAAACT GCTTACACTT GAAGCCTTGT CTGAGGTCTG TTTCTAGGGG 30951 AATTCAGATG ACGATAATTA TGCTTCAGGA AAGCCTAAAT TTTCTGCTTT 31001 TCTCTCCCCT ACCCAAATCA GGACTTTTCT GGACACACAC ACCCTGTGGC 31051 AACCTTTCAG CCCAGCAGAC CAGAGTCCGT GAATGACTTG TTCCTCTGTC 31101 CCCAAAAGGA ACTGACCAGA GGGGTCAGGC CGACGCCTCG AGTCAGGGCC 31151 CCAGCCACCC AACAGACAAG ATGGAAGAAG GACCTTGCAG AGGACGAAGA 31201 GGAGGAGGAT GAGGAGGACA CAGAAGATGG CGTCAGCTTC CAGCCCTACA 31251 TTGAACCACC TTCTTTCCTG GGGCAAGAGC ACCAGGCTCC AGGGCACTCG 31301 GAGGCTGGTG GGGTGGACTC AGGGAGGCCC AGGGCTCCTC TGGTCCCAAG 31351 CGAAGGCTCC TCTGCTTGGG ATTCTTCAGA CAGAAGCTGG GCCAGCACTG 31401 TGGACTCCTC CTGGGACAGG GCTGGGTCCT CTGGCTATTT GGCTGAGAAG 31451 GGGCCAGGCC AAGGGCCGGG TGGGGATGGG CACCAAGAAT CTCTCCCACC 31501 ACCTGAATTC TCCAAGGACT CGGGTTTCCT GGAAGAGCTC CCAGAAGATA 31551 ACCTCTCCTC CTGGGCCACC TGGGGCACCT TACCACCGGA GCCGAATCTG 31601 GTCCCTGGGG GACCCCCAGT TTCTCTTCAG ACACTGACCT TCTGCTGGGA 31651 AAGCAGCCCT GAGGAGGAAG AGGAGGCGAG GGAATCAGAA ATTGAGGACA 31701 GCGATGCGGG CAGCTGGGGG GCTGAGAGCA CCCAGAGGAC CGAGGACAGG 31751 GGCCGGACAT TGGGGCATTA CATGGCCAGG TGAGCTGTCC CCCGACATCC 31801 CACCGAATCT GATGCTGCTG CTGCCTTTGC AAGGACTACT GGGCTTCCCA 31851 AGAAACTCAA GAGCCTCCGT ACCTCCCCTG GGCGGCGGAG GGGCATTGCA 31901 CTTCCGGGAA GCCCACCTAG CQGCTGTTTG CCTGTCGGGC TGAGCAATAA 31951 GATGCCCCTC CCTCCTGTGA CCCGCCCTCT TTAGGCTGAG CTATAAGAGG 32001 GGTGGACACA GGGTGGGCTG AGGTCAGAGG TTGGTGGGGT GTCATCACCC 32051 CCATTGTCCC TAGGGTGACA GGCCAGGGGG AAAAATTATC CCCGGACAAC 32101 ATGAAACAGG TGAGGTCAGG TCACTGCGGA CATCAAGGGC GGACACCACC 32151 AAGGGGCCCT CTGGAACTTG AGACCACTGG AGGCACACCT GCTATACCTC 32201 ATGCCTTTCC CAGCAGCCAC TGAACTCCCC CATCCCAGGG CTCAGCCTCC 32251 TGATTCATGG GTCCCCTAGT TAGGCCCAGA TAAAAATCCA GTTGGCTGAG 32301 GGTTTTGGAT GGGAAGGGAA GGGTGGCTGT CCTCAAATCC TGGTCTTTGG 32351 AGTCATGGCA CTGTACGGTT TTAGTGTCAG ACAGACCGGG GTTCAAATCC 32401 CAGCTCTGCT CTTCACTGGT TGTATGATCT TGGGGAAGAC ATCTTCCTTC 32451 TCTGCCTCGG CTTCCTCATC TGCAGCTACG CCTGGGTGTG GTGAGGGTTC 32501 TAGGGGATCT CAGATGTGTG TAGCACGGAG CCTGCTGTGT CCTGGGTGCT 32551 CTCTACGTGG TGGCCGGTAG AATTCTCCAT CTATCCAGGC TCCAGGAGAC 32601 CCCTGGGCAT CTCCCACCTG TGGCCCCTAA ACCCAGAGTG ACTGAGAGCA 32651 CTTACCATTC AGCTTGTCTC ATCCCCAGTC TACCTCCTTC CTTCTACCCT 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2] 0X297公釐） - 32- 200300170 A7 B7 五、發明説明（29) 32701 32 7 51 32801 32851 32901 32951 33001 33051 33101 33151 33201 33251 33301 33351 33401 33451 33501 33551 33601 33651 33 7 01 33 751 33801 33851 33901 33951 3 4 0 01 34051 34101 34151 34201 34251 34301 34351 344 01
CACTGCCTCC
AAGGGGACCC
CCAGGGGAGG
TAGGACAGTA
TGGATGGCAC
ATTCTCCCTT
ATCCTTACCT
AATATAGATG
TGGTGGAGTA
ACTAACATTT
ACAGAGCTGT
AGAACTGGAA
GTCCCCCAGA
GGAGCCTCCC
CTGTGGCTTT
AAAGTTAGCA
GCAAAGGCAC
GCACATCCCC
CTGACCCCTT
TAAGGGTCAG
TACACACATA
GAGGCTTGTC
GGAGCTGGGG
ACCTGTACCG
ACTTCAAAAA
ATAACCACTC
TTTTTTTGAG
TGCGATCTCG
CTGCCTCAGC
TGGCTAATTT
CAGGCTGGTC
CCAAAGTGCT
CTATTTTTTT
GTTTTCCAGT
ACAAAAAGCC
CAGTCAGGAG
TGGTCTCTCC
AACCAACTGC
ACATGGCAGG
GTTAGACTCT
CCAGTTATGA
GGGGGTGCTG
AGCGTAGCTG
TCTGAACAAC
CTGGATTTGT
GTTGCTTTAA
AAGCTTCTTA
GGCCTTGGGC
ACTTTCACCA
CCACGTGAGG
AACCACTCCT
TTGTCCAAGG
AAGGGTAAGA
GTCCATGTCA
GAGGCCTTCA
CGACACACAC
CAGATGATTG
AGGGCTGTGG
ATGTTCTCTC
AGTAAAAGCT
CGTTTCTATT
TCGGAGTTTT
GCTCACTGCA
CTCCCAAGTA
TTTTGTATTT
TCGAACTCCT
GGGATTACAG
AAAGAATTTT
AACTCTAAAC
AGGAGAAGCA
AGTGAGCTCT
GCCTTCACCT
TCCACCTTCT
AATCGGACTT
TGGTTGACCG
GAAACCAATG
ATGCATCCTC
AGTTTTCACC
CTTGGCTCTG
GAAGAAGGGA
AGCCACCACA
GGGCATCTCA
TGCAGTTGCA
GAGCAGCCTC
TTTTGTTTAG
TTTGTTGCAA
TCGCCCAGCA
GCTTCGATCT
GTAAAATATG
CCGCTGCTGG
CTGTGTCTCC
AGCCCAGGAG
CTTGGGGCCA
TGGCACCAGC
ATCATCAGCA
CTTAAACCTT
GTTCTTGTTG
ACCTCCACCT
GCTGGGATTA
TTAGTAGAGA
GACCTCAGGT
GCGTGAGCCA
TTCCAGAGTT
TCCATCTCCT
TTTGGAAAGG
CAGAAGCCAG
AGCAATGGGA
AGGGACCCAG
CTGGGCCTGT
TTGTGGTCCT
CCTTCTAGAT
AGTTAACCTA
CGTAGGACCG
TGGCCATTCA
TCTTCAAAGC
AGGGTACAGC
TCCAGGGATT
GGGGGCGCCA
ACTGTGCCCT
AGGGATCCAC
AGGAGCTGAG
GTGCTGCTCT
CTGCACAGCC
AAGGTCACAG
GGCACACACA
CCAGGGGTTT
AGGAAGAACA
GCTCCCAGGG
CGAGCTGCTT
TCATCTTAGA
ACCATTTTTG
CCTAGGCTGG
CCCGGGTTCA
CAGGCACCCG
TGGGGTTTCA
GATCCGCCCG
CCGCGCCCAG
TAATTTCTGA
TTATCGTCAT
GCATGATAAT
AGCCCCACCC
ACCCTGCTTC
TTTGTTGGAG
AATCCCAGTT
TAGAAGTCCC
TCAGGTGACT
CACCCACCTG
AAGTGTTTTG
ACCTGCCAGG
CATTGAACCC
ATTAAATGGC
CTCAAACCAT
TGGGGCTATA
GATTCACACA
TACTCAAGAA
GTCAAGGGTG
GATGACTTGT
GGGCCAACCT
CCAGGATTTC
CACACATGCA
TCCCTGCAGT
AACAAACTAC
AAATTCCCAG
CGTGGAGGTA
CTTGTATGAA
TTTTGTTTTG
AGTGCAGTGG AGTGATTCTC.
CCACCACACC
CCATGTTGGC
CCTCGGCCTC
CCAAACCTTA
CATAGCTTAA
TAAGTCATTC
CAGTATAATA (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工湞費合作社印製 (序列確認號碼：3) 表5顯示展示於表4的基因序列與展示於表1的 cDNA之間相關的對應區域位置。 ^^尺度適用中國國家標準（<：]^)六4規格（210/ 297公釐） 33- 200300170
A
7 B 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（30) 表5 基因序列 的區域 序列屬性 長度 cDNA序歹[J 對應的區域 1-2001 5’序列 2001 2002-2059 外子#1 58 1-58 2060-8326 內子#1 6267 _ 8327-8450 外子#2 124 59-182 8251-19513 內子#2 11263 一 19514-19698 外子#3 185 183-367 19699-27229 內子#3 7 531 • 27230-27372 外子#4 143 368-510 27373-29279 內子#4 1907 29280-29439 外子#5 160 511-670 29440-29730 內子#5 291 29731-29861 外子# 6 131 671-801 29862-31021 內子#6 1160 31022-31780 外子#7 75 9 802-1560 31781-31783 停止 3 1561-1563 31784-34450 3’-序列 2667 展示於表4之序列中已確認許多序列多型現象。 此類現象總結於表6 : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） - 34- 200300170
7 7 A B 五、發明説明（31) 表6 SNP 位置 SNP 改: 變 一 --- 織 欠 異 30962 對 偶 基 因= “ A” 對 偶 基 因= “ G” 變 異 30655 對 偶 基 因= “ A” 對 偶 基 因= “ G” 變 異 28744 對 偶 基 因= “ A” 對 偶 基 因= “ G” 變 異 28448 對 偶 基 因= “ C” 對 偶 基 因= “ Τ'，， 變 異 9426 對 偶 基 因= “ A” 對 偶 基 因= “ G” 變 異 9162 對 偶 基 因= “ A” 對 偶 基 因= “ G” 緯糸 欠 異 8811 對 偶 基 因= “ C” 對 偶 基 因= “ τ，， 編碼CRF2之核酸亦存在於展示於表7的基因核酸序 列： 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -35- 200300170
A7 _B7^____五、發明説明（32)表7 AGGAAGGAAGGAAGGAAGGAAGGAAGGAAGGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGA AAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAGAAAGGAAGGAAGGAAGGAGAAAA GAAAGTCAACAGTCAACATTTCAGAGATCCCAAGATACCAACACTGACCGTGCCTGCTGC TCTTCCATCCTCCTCCACCCTGCGCCTTTGAGGTGGAATTGCGTCCTCTGTGAGCAGGGC TTTGTTAAGAGATCCTAATTAAGGCCAGGCACAGTGGCTCATGCCTGTAATCCCAGCACT TTGGGAGGCTGAGGTCACCTGAGGTCAGGAGTTCAAGACCAGCCTGCCCAACATGGTGAA ACCCCATCTCTACAAAAATTAGCTGAGCATGATGGCAGGTGCCTGTAATCCCAACTACTT GGGAGGCTGAAGTGAGAAAATAGCTTGAACCCAGGAGGCGGGGTTGCAGTGAGCCAAGAT CACACTATTGCATTCCAGCCTGGGCGACAGAGCTTTTGTCTAAAAAAAAAAAAAGAAAAA AAATCCTGATTAAGCAGAAGCCTTGATGCTAGTCCCAGT^AGCATCCTGAAATTTCCAAAA GAAATTTCCCCCGCGGTTAAACTCAGAGCAACTTTTGGACCCACCAAGCTCTGTGAAAAT CATTTTCTCTTCCAAAAACTGATGGGACCAAAGCTGATCCCAGTTTCAAATAATTATCAA AAAATTGGAAACGAAATATGATCAGAAAAGAAGAAAGTTGAAAAAGAiAATCCTCATCAC CCAAAGACAACAACCATTAATATTTTGGTAATTATTATTCCAAATATCTTTCTATGCATA CAGACAGACTGACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACTTTTTTTTT TTTTTTGAAACTGAGTTTCACTCTGTCGCCCAGGCTGGAGTGCAGTGGCGCGATCTCGGC TCACTGCAACCTCCGCCTCCTGGGTTCAAGCGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCTGATAGC TGGGATT7\CAGGTGAATGCCACCACGCCCGGCTGATTTTCTGTATTTTTAGTAGAGACGG GGTTTCACCATGTTGGCCAGGCTTGTCTCCAACTCCTGACCTCAGGCGATCCACCCGCCT 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（2】0X 297公楚） -36 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
200300170 ΑΊ 五、發明説明（33)
CACCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCGTGAGCCACCGCGCCCGGCTACACACACACT
TTTTTAATGGGCCTATGTTTTAGCACTCGCTTTTCTGTTTCTCAGTGTGTTGCAAACACC
TCGGTGTCGATACACACCATTCGGCAACGTCCTCCTAAAGGGCCGCATAATATTGCGCGT
CGTGGCGTGTGCCTTACTGGGAAGCTACTGCTGTCCAGGTGAACACCACAGCCTTCGGGG
TCAGAAAGACAGCTTTCCCCAGAACAAGCACCTGAAGCTCTGGGGCCTGCCGCTCCCCGG
GAGAGAAGTACGTGGAGAAGGGCAGCACGGATCCGCCGGGATCCCCGGGGGCATTAAAGG
GAATCGCGTGTGTAAGGCGCGGAGCTCAGCATCCGGCTCAGAAACGCGCTCGGATCCCGC
CAATGGCATTGAGGCCGCGTAGCCAAACCGGCCTTGAACTCTCCCTAATCCTGCCAAAAT
GGCCCGTCCTGGAGCACTGGACTGGCCGTGGGTTATTGATCATCAGCCGGTTTCTTCCCC
TCCCCTGCCCTTCCCCCGTGCACGGATTTACTGATTTTTTTTTCCGGGAATTGAGTAAAA
CAAAACTAAGTGCAGATGAAGCAGAGGTACGGGCGAGTTTCGAGCGCGGGGACCGGCGCG
CTCCCCCCCCCCCCTCCCCCCGCGGCGGGGCTGTCCCCAGGGACCTTCTCAGTGAATCCT
AGGCGGCAGGGACGGGCCCGCGGCTCTGCGGGCCATTGGCTGCCGACTGCGTCACCTGCC
CGCGGTGGGCTAGGAGACGGGAGGCGGGAGGCGGGAGGCGGGGACCTGGGTCCGGGCGGG
GACGCCGCGGCAGGAAGGCCATGGCGGGGCCCGAGCGCTGGGGCCCCCTGCTCCTGTGCC
TGCTGCAGGCCGCTCCAGGTAAGGGCGCGGGGCCGCGGGAGGGAGGGGGAAGAGGGCTCC
CCGGGCCGGGCCGCGCCTACCCTCGGACCCGGAGCTCCTGGGACAGGCACGGGGTCCGCA
GCCACCCGAGCCGGGTGCGAATCGGCCCTGCCTACGCGCCCCCAGTTTGCTTCTTCCCAG
GACTGAACAGAACCGGGTCTTTGATATTCCTCTCCCGCAGGAAACGAATCCAGTTTCCTA
ATGCTTCCAGCTTCAGGAGAACTGGAGAAAAAAGACAGCGGCAGTTTGATACTGCATATT
TTTTAATAAAGTGCTTTTTAATGTTTCCTAAAGAAAGCACTGATCCCTGCGTGAAAACCA
CACTTGACCCTAAAGTGTGGACAGCAGGGAAAGTGGGACCGATTGATGTCCCTTCCCGTT
CCTGCCAGGCCTCTGGTGGGACGGAGCTCTGGTCGCCTGTGCCCTGCTTTCTAACAAGAC
GGCTTTCTTTTGGTGGTGGTTGTTGTTTTGTTGTTGTTTTGTTGTTGTTGTTGTTGTTGT
TGTTTTCCCACCTCTACTGATGAGTAAGGTGTCAGGTACAAAATTCCTCGCCGTAGGACC
CAACCACCAAACCTCACCGCCCACGACTCCAACCGAAGCAGGGAAGAGAAGGTCCAGAAA
TCGCCCCCAGGATATTTTCCTAGTCTTGGACTCACAGTTTAAAGAGCTGTAAAGGTCCCT
GGGCATAATCC；vATCATCATAAAAGCCTATATTTATTCAGCAACTTCTTTGTGCCAGGCA
CCGCATTATTCTGGAAGCCTCACGACCCAGCCATCCTAGGAGGTAGATATTATTTTTACT
TTTCCGATGGGAAAACTGAGGCTCAGAGCAATTCAGGGAATTCCTCAAGAAGGACGGCAG 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
-37- 200300170 經濟部智%財凌^資£消費合作'社印製 A7 B7 五、發明説明（3$
AGGTGAGGCACACAGAAGAGAGAAGAGGGGCTAAAGCAAGCCTGGCTAGCTTTTGCCTCC
AGGGTAGGCACGTGGGACAGGCTGTCCATCCACTGGGTCACTAGGCCAGCCAGGGATGCT
CCAGCCCCCAGTGCCCACAGCAGCGTTCTCTGTGGCTGATGAGGGACCGTGTACCTGTGT
GTGGAGGGAGGGTGGGGTCTTCTGTTCCCCTTTCACTGTCAAGCCCAGACCTTCTTGTAC
TTTCACCTGATAAGTATTTAATATACACAACACTAACTATGGTGTGATGATTTAGGAGTA
AGTACAGCCAGATCTAAGTTC7VAATACTGGCTCCCACACAAACTGACTGTGTAGCCTCAG
GCAAGTTAGTTAGCATCTGTCTCTGAGCCTAGCGCCCTTTCCATGGAAGCAGAATGAATG
ACACCTACCCCATAGGGTGGTCTGTCCCAAGGGTGATTGAGGTTTTACATGTAAAGAGCC
AAACTAGTGCCTGGCATCCTTTGAAGGCTTCATAGAGGAAAGTTGCTCTAGCTGCTGTTT
TTCTCATGTGACCTAGCTCGAATCTGGGGACTGTCCTGCCCATAGGATACCTTACAAGTG
GCTTGCAGACAGCCTGGTCTCCTGCTGGTCACCCGTTAGGAAGTCCAGAAGCTGGGAGTA
GTAATAGCACTAGCCTCGTGGTGATACAGTCCCAGCTAGAGGACACAGGATGAGGTGGAA
GCAGGCACCCACTTTTGGGTCTAAAAGGTGATGGGTAGGCAGCCGAGGCTGGGGACAGCC
ATCCACAGAACTGGACCCTCCCTCCCTGATGCCATTTTGCAACCCGTATGGATTTCCATC
ATGGCACATGGGACACTTCAGGACCCTGAATTCTCCATGGGACCATGAGCTCCTATAGGG
CAGGAATGAAGTTGTGTTCTTCTTTGAAACCCCTGGCACACCGTGGTCAACAGATCTTGT
TTGACTCGTAGTGGTCAATAGATGGAATAGTTGGAATCATAAAGCTCAATAGACCCCATG
AGAACCTAGAAGAC7^AAGTACAGTCAAGAGCTCGGACTTTGGAGTTGGCTAGGCCTGGAC
TGAATCTGATTCTACAACTTAATAGCTGAGAGGGCCTTGGTTTTCCCATCTGTAAAGATT
ATAATTATTATAATGAATACCTACCTCCTAGGGATGTAATGAGGATTAAAAGAGAAAGTG
CAGGTAAACTGTTTAACACAGAACCTGGCTCATAGAACACAATACACATTAGCTGCTATT
ATTATTATTATTATTTTATTTATTTATTTTGAGACAGAGTCTCACTCTGTCACCCAGGCT
GGAGTGCAGTGGCGCAATCTCGGCTCACTGCAACCTCCACCTATCGGGTTCAAGCAATTC
TCGTGTCTCAGCCTCCCAAGTAGCTGAGATGACAGGCGTGTGCCACCATGCCCAACTAAT
TTTTGTATTTTTAGAAGAGACGTGGTTTCACCATGTTGGCCAGGCTGGTCTCAAACTCCT
GACCTCAGGTGATTTGCCTACCTCTGCCTCCCAAAATGCTGGGATCACAGGGGTGAGTTA
CCATGCCCGGCCTTAGCTGCTATTATTATCATCATCGTTATCATCATCATCATCACCTCG
TAGATATGTCAAGGAAGATTCCCTGGAGGAAGTGACATTTGAATCAAGTATTTCAAAGAC
TAGATGGTGAATACCAGGCAGTCAAAGACACCTGGGTTTAAAAACATCCAGAAGAATGCA
GTGGCTTGGCAACATCGAGCAGGAAGATTGCCTGATGAGCCTGTAGGGTAGCTGTTGGGG 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-38- 200300170 A7 B7 五、發明説明（3冷
AGAGAGCAGCAAGACGGCCTGGCCAGGCCAGGCCAGGCCACGTCAGGCAGGGCCTCACAA
ACCTCAATAACAAATGTGGACTTTATTCTGAGGCCAAGGAAAGGGCATGAAACTGGGGAG
TGGTGTAATCAGATGCGTATTTCAGAAGATGAAGATTAACAGTGAGAAGGAAAATGTGCC (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
ACAGAGGGGAATAGAGGTCAGTTAAAGGGAGTCAGGGAAAGTGTCCTCGAGACAGTGACA
TCAAAGGAATGTGAAAACAGCAAAGGAGTGAGCCAGGTGGATATCCAGGGGCAGAACTGT
TAAGGCAGAGGGAACAGCATGAGGGAACAGCGTGTGCAAAGGCCTGGAGTTGGGAGTGTG
GCTGGGGTGCTCCAGGAAGGGCAAAAAGTCCTGTGTGGATGGAGATATGGGAGCAAGGGA
GGAGTGGTGGGTCAGATTGGGTAGGGCCTTGGTGGTGATTGTAAAGACTCTGGAGTTTAG
ACCAGGCACAGTGGCTCAGGCCTGTAATCCCAGCACTTTGAGAGGCCAAGGTGGGCGGAT
CACCTGAGGTCAGGAGTTCGAGACCAGCCTAGCCAACATGGTGAAACCTCGTCTCAACTA
AAAATACCCAAATTAACCAGGTGTGGTGGCACAAACCTGTAATCCCAGCTACTCTGGAGG
CTGAGGCAGGAGAATCGCTTGAACCCGGAAGGTGGAGGTTGCAGTGAGCTGAGATTGTGC
CACTGTACTCCAGCCTGGGTGGCAGCATAAGACTCTGCCTCAAAATAAAATAAAAATAAT
AAAGACTTTTGAGTTTCCCTGGAGTGAGAGGAAAGCCTTAGAGGGCTTTAGCAGGAGATG
AACATGATCTGATTTTCATTTTTAATCCTTCCTGCTATGTGGAGAATGGACTGAAGGCAA
GGTGTTTTGTATATTTGTCTGTTTCGTAGAGACAGGGTCTTGCTCTGTTGGCCAGACTGA
AGTGCAGTGGCACAATCACGGCAGCCTTGAACTCCTGGGCTCAGGCGAAACTCCCACCTC
AGCCTCCTTACTCTCACCATTGTGCCCTGCTAATTTTTTAAAAAATTTATTTTGTAGAGA
TGTGGTCTCACTATGTTGCCTAGGCAAGTCTTAAATTCCTGGTCTCAAATGATTCTCCTG
CCTCGATGTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGTGTCAGCTGCCATGCCCGACCTGTATTTT
TTTTTTTAATGGGGAAAAAGCCTTTTAATAGTATGAGGTGTTTTCTGGTGTTTCTACCAT
AAAGCTCTTCTGTAAATCAAAATGAGAATGTAATTATTGATAGAGCAATGACCTTAGACT 經濟部智慧財產苟員工消費合作社印製
ACAGTGCAGACTTTTCATCTTACATTTGGGCTCATGAATTTTAGTATAACTGATTATGAC
AGTGTTTTTTACATAGTTATGATCTAGAGCAGAACTGAAAACAAAATAACACATACTCTA
CATCAATATATTCGTTCAGTAATATCTGGGCTTGGATGAACCTGCAGAAGTAGGTAAAGC
TGTCAGATATTTTCTTAAACCAACAGAAAAGAAATGTATATGACAGATGTTGTGTTTACT
TACTTATTTATTTATTTATTTATTTATTTGAGATGGAGTCTCACTGTGTCACCAGGCTGG
AGTACAGTGGTGTGATCTCTGCTCACTGCAACCTCCACCTCCCGGATTCAAGCGATTCTC
CTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGATTACAGGCGTGCACCACCACGCCTGGCTAATTT
TTGTGTTTTTAGTAGAGACAGGGTTTCACCATGTTGGTCAGGCTGGTCTCGAACTCCTGA 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X；297公釐） -39» 200300170 A7 B7 五、發明説明（
CCTCGGGATCTGCCCACATCAGCCTCCCAAAGTACTGGGATTACAGGCATGAACCACCAC
GCCCAGCCTGTATTTATTTTTTTACCACTATGGAGTCCAATATGAA.ATTCTCACAACTAT
GCATATACATTATTAACATGTAAGCACACCTAGGTATAAATATGCACATAGTCCATTAAT
TACATCAGGGGAATTAAAAACATACTTTCAAGTTAAAATGAATTTTCAGGAAAAAAACTG
CATTCACAAATCTGAAATGTGAATACAAAAATGAAATTGTGAAATAAATAATGAATATAG
GTGTCACCTAAACTTCCATAGTAACATGCCTCCAAATGTGGATTTAGTGATCATCCACCT
TGGGACAAGGGCTTTTGAGAGCCTCCAGCTAAATTAGGGTTCCAGTAGCAGAGTGGCTGG
CAAGCCTGCCCTAATGAATAATGCCAGCGAGCTGGGCGTGGGTACTTACAGTGTGCCCTT
CATGGAATACTTTTTTTTTTTTTTTTGGAATGGAGTCTCGCCCTGTTGCCCAGGCTGGAA
TGCAGTGGCACAATCTCAGCTCACTGCAACCTCGTCCTCCTGGGTTCAAGCAATTCTCGT
GCCTCAGCCTCCCAGGTAGCTGAGACTACAGCCCTGTGCCATCATGTTCTGCTAATTTTT
GCATTTTTAGTAGAGACGAGGTTTCACCAAGTTGGCCAAGACTGGTCTTGAATTCCTGAC
CTCAGGTGATCTGCCCACCTTGACCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCTTGAGCCACTG
CGCCCGGCCCATGAAATACTTCTTACCTGGCGGACAGCCTAATAGCCTAGCTGTCTAACC
CATGGCTGGGGGTCCTTCACACTTGTTTATACTGGCAGACGTCCCTGTGACTCTTGTCTG
ATCCATGTCCAAGTTTATGCCTGTCTGACCATTGCTCTGGCGCTGGGAGCCAGACTGTGT
TCCCAGCAACCCAGGGAAAACCAGGCCTGGGCTGGGCCTGGGTTCCTGAGATGGAAGGTG
CAAATTCAGTACACCACCTCAATGCAAAACAAGTTCAAAGGCTTATTACTTACAGATCCT
GAGCAGGGAAGGTGCAATGAGTAGGGAGGGTCATCCTCCATCCTGGGCTACATGAAGCGG
GAATGAAGAGTCAGGCAAAAAGAAAGTGAGAGCTTGTGGCAATGAGAAGTATATTATGTA
AGGGACTAGGGTGTGGGTCAGGTTAAGTTTGAGGGCAAATGCTTGAATGATCCCTTTAAA
GGAATGGGTGGGAAGTGGGGAGCCCAGTTTGCCGGGAGGGAGAGATGCCTCGAAGTTCTT
ATCTCTGGCCACTGGCTTGGACCATCTGAGTGTGGCATCTACTTCTAATGCCTAGGCAGC
AACCTTTGCTGTGTCATCTCCCTTACACAAGGTTGGAAGCAAGGAGACCGGTCAGGAAGC
CTTTGGTGTAACCCATGTTATTGTAATATTCATTCATTTACTCAACAGATGTTTATTGTG
CACCTACTATGTGCTGAGGCCATGGCAGGCAGGCTCTGGGGATGTGGCTGAGAACAGGAC
AGAGCCCCTGGTCCTTGATATCCTCAAGGATGCTCCCTCCTGGAGGCCATTAGGTTCCTG
TTCCATGGTGTTCTGCTGGAACCCTCCGGTCCCAGAGTGTGCAGGAGCCTCCCCTCCTGG
CAAAGGGTCTTCTCTCATGGCACAAGGGCTGCAGTACAGCCAGTCAGTGGCTCCTGGTTC
CTCAAACTCAGTGAGCACTTGCCTGCCCTTCGTGCTGCCCCTCAGCTTGGGATGGCCTGA 本紙張尺度適用中國國家標準·（ CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -40- 經濟部智慧財產¾員工消費合作社印製 200300170 - A7 B7 五、發明説明（37)
GTCAAGACCAGCCAGGAGCTCCAGGCTTCATGACCCCTTTCTTTCCCCCAGGGAGGCCCC
GTCTGGCCCCTCCCCAGAATGTGACGCTGCTCTCCCAGAACTTCAGCGTGTACCTGACAT
GGCTCCCAGGGCTTGGCAACCCCCAGGATGTGACCTATTTTGTGGCCTATCAGAGGTAGA
GGGGACTCTCTCGGCTGGTGGATGGGAAGACTGAGGGGGTGGGTGGGGGCTGGAGGGGCT
TCTCTGGGACAGCTGCACCCAGTGTGGGCAGCACTGGCTAGCTCTCTGGGCCCTACGGGA
GATGGCATGTGGCCGGCATTTGGAGAGGGGCTTTTGATAAAGGTCTGGAGGTGGGGAAGA
TGTTGAATGAAGAGCAGTGTACAGGTGACCAGTCTGCCGGGGCGGGGGTAAGTCTTTGAG
GAAAGTTGGTGTGGGGCATGGATGTAGCTGTGGGGGCCAGAGGATGAAATTCTCAAGTGG
CTGGATGAGGTGCTTGGAGCTGTCCCAGCTGATCAGTGAGGCAACTAGGTACACGGCAGA
GGAGCTGTTACCTGGGCAATTAGGCATCCCTCAATGATCACACTTTTTTTCTCTTTTTTT
TTTTTTTTTGAGACAGAGTCTTGGTCTGTCACCCAAGCTGGAGTGCAGTGGCTTGATCTC
GGCTCACTGCAACCTCCACCTCCTGGGTTCAAGTGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCAGAGT
AGCTGGGATTACAGGCATATGCCACCACATCTGGCTAATTTTTGTATTTTTAATACAGAC
GAGGTTTCTCCATGTTGCCCACGCTGGTCTCGAACTCCTGAGCTCAGGTGATCCACCCAC
CTCAGCCTCCCAAAGTGTTGGGATTACAGGCGTAAGCCACCGCGCTTGGCCAAATGGTCA
CACTTTTCCCGATGGGATCATTCTCAATTTGGAAGCCCAGGCAGCCACAGCGAATCCAGA
GAAATCTGACAATGGAAGCAGATCCACCATCTTCGAACATAGATGGGAATCGTTCAGAGT
TCTTTAGCAGGACAGTGAGATGATAGAAGCAGAAGCTCGGGAGGATTCACCTGGAGTTGG
TGAGGAGGGGAAAGCAGGAAGAGGAGGGGACCACCGTGTCCTCAGGACCCGTCCTGTGCC
AGGCCAAGTGCTAAGGGCCCTACGTGAATATTTCACTTCCTTCTCCCAATGTGACCAGGC
AGGCTCTGTGTTTTCCCCATTCTAGAGGTGAGGGGATTGAGCTCAGAGGGTGCTGTGTCT
TGTCTGAGGAAGGACGTCATGGAGCCAGAAGGGGAACTCGGGTCCGACTCCAACATTTGT
GCCCTTCCTGTTGCATCACGTCATCCTTCCATGTGTGGAATCCACATGTGAGTGATGGGA
GCCTGGCTTGAGCAGGGACAGACTGCAAGAGAGCTTTCAAAAGCAAGAGCGTTATCAGGT
GCCAGAAAACACCT7VATATTTACTGTGTGGCTGGCACTGTGTCAACACATGTAATGAACT
TAATCTCACAGCAGCTCTCTGAGGACAAGTTCAGTACGCCTCTTTACAGAGGAGGAGACT
GAAGCACCAAGGGTGCATGTTGCTCAAAGTCACACAGCTGGGCGTAGTATGGCTGGAATA
AATTTATTAAGGAGTTGAAAGTCTATCCTCTAGGACCAAGCATGGTGGCTTACATCTGTA
ATCCCAGCACTTTGGGAGGCCGAGGTGGGTGGGGAGATTGCTTGAGTCCAAGAGTTCGAG
ACCAGCCTGGGTAACATGGTGAAACCCTGTCTCTACAAAAAAAAAAAATACAAAAAATTA 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-41 200300170 A7 B7 五、發明説明（3冷
GTGAAGTGTAGTAGCATGTGCCTGTGTTCCCAGCTACTTGGGAGGCTGAGGTGGGGAGGA
TCACTTGAGCCCAGGAGATGGAGGTTGCAGTGAGCTGAGATCACACCACTGCACTCCAAC
CTGAACAACAGAGCAAGATCCTAAAAAGAAAGAAAATCTATCCTCTGAACTTCTATGATA
TTTTTCATGTCTTTTATACATTAGAATGGTGATATTCTAATTATATAATTTTTTTCATTT
GTTAGTTGGAATTATTTTATAAAGAGATGTATCCTCTCATCTGGTATTTGATATCCAGTC
ATACTATTCAAATAGGCAAGAGAGGATAAATGCTTAATTTTTTTCCTTTATCAATTTTCA
AGATAATGAATTGGTTCCTTATCATCTCCCAAAGGTGATTGCTAGTTTATTATTATCATT
ATGAACTCAGGCATTTAAACACATTTGGTGGTTTCAGTCTATTGCGACGTACTCTGCTCA
TTGAAGCTTGAATTGCCTCATCTCTGTCCAGTGGGAGTCTCATCAAGTTTGCTCCTGAGT
CCTTTTAACTTGACCCTAGTGGTCAAGTTAAATCTTTCCAGATTTAACAGATACCTTTCC
AGCTGTCCATTACGACAAGATGTTCCAGGTCCCTCTGGTACAATTCCTGACCTAAAACCT
GCAGTCAGCCATTTCTCCATTTAGTAAGAAATGGTTATAAAGACTATAATCTGCATGCTA
GCTATGCTGATCACTACTTAGCTATTGCTTTTGGTGTTTTCAGTGAACAGAGTGATGTGT
GTATACCACATAGACACACACATGTACATACTTTTTTTTTTTAGACAGAGCTTCACTCTG
TCACCCAGGCCAGAGTGCAGTGGCATGATCTCGGCTCACTGCAACCTCCACCTCCTGGGT
TCAAGAGATTATCCTGCCTCAGCCTACTAAGTAGTTGGGATTACAGGCGCCCACCACCAT
ACCCGGCTAATTTTTGTATTTTTAGTAGAGACGGGGTTTCACCATGTTGGCCAGGCTGGT
GTCGAACTCCTGACCTCAAGTGATCTGCCCCCCTCGGCCTCCCAAAATGCTGGGATTACA
GGCATGAGCCATCGCACCCAGCCTACATGTACATAATTTTTAAGATAAAATGCCTAATGA
GTTATACGGGTGCTTCCCATCTAA.^TTTAGTTCCTTAGGATTTTTACCTGACTTCTATGG
TACATCTATATTTTCTTTCTTTCACACTGAGAATCCTGTTTCTCAAGGACAGGGGACATG
ATAGAACTAGAATGACCCATAATTACTCATTTTCTTTATCCCAAAACATACATACTTGCC
TCTTAATAGTTTCTTGCTCTTTTCGCCCAAAGGGTTTGTGATGGTCAATATTAGGTGTCA
ACTTAATTGGGTTGAAGGATGCCTAGATGGCTGTTAAAGTTTTGTTTCTGGGGGTGTCTG
TGAGGGTGTTGCCAGAGGAGACTGACATTTGAGTCAGTGGACTGGGAATGGAAGACTCGT
CCTCACTCAGTGTGGGTGGGCACAACCCAACTGGCTGCCAGGCTGGCTGGAAAGCAGGTG
GCAGATGGTGGGATAGCTTCGCTTGCTGGGTCTTCCAGCTTCCTTCTTTCTCCCGTGCGG
GATGCTTCCTTCTGCTCCTCCTGCCCTTGAACATCACACTCCGGGTTTTTTGGCCTTTAG
ACTCTTGQACTTAAGTTAGTGGTTTGCTGGGGGCTCTCGGATCTTTGGTCACAGACTGAA
GGCTGCACTTTCAGCTTCCCTGGTTTTGAGGGTTTCAGATTCGGACTGAGTCACTATGGC 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製
-42- 200300170 kl B7 五、發明説明（3令
TTCTTTCTTTCCCACCTTGCTGACGGCCTATCGTGGGACTTCGCCTTGTGATCGTGTGAG
CCAATTCTCCTTAATAAACTCCCTTTCATATATACGTATAACCTATTAGTTCTGTTCCTC
TGGAGAACCCTGACTAATAAAGGGTTGTTGCTTTTTCTTTAAAATCTAGTAATTTTATTT
GACTGTGTGTTGGTATTGCTCATTCATTCTGAGTTGATATTTTTAGGCACTCAATATTCT
CACTTAATACATGGTTCCAAGGCATTTTTATTTTAGGAAGGTTTTCTTAAATTATAGTTT
TAGTATTTGTTCTATTCTCTTGTTTTGATTTTCTTCTTTAGGGACTCATATCACTTGTAT
GTTGGATCTTCTTTTTCTGTGTTCAGTATTTGTCTTTTGGGCACAGAGACTCACACCTAT
AATTCCAAGACTTTGTGAGGCATAGGTAGGAGGATCGCTTGAGCCCAGGAGTTTGAGACC
AGCCTGGGCAACATGGTGAGGCCCTGTCTCAAATTAAAGAAAAAGGAGAGAATACTTGTC
TTTTTCTTTCAAATGCCTTTTATCTGTCTGTCTATCTACTATTCTGCTCTCTAAATGAAA
TAGGTTTCACTCTTGAGTTTTTAAAA?VACTGTGTGCTTCCATGTGTGAGATTATTCAACA
TCTTATTTGTAATCTTTCTCTTGGTTACATTTATTTTTCCTGAAACTCTAGTCTGCTTTT
AGCTGACATGTTTGTAGCTAAGAGCGCACATTTCTTATCATAGCTTGCCGTGCTGAATTA
ATTCCAATTTTCTTTTAAAACCAACATTATTGAGTTAAAATGTATATAGAATAAACTGTT
CCCATTTTAAAGTATACAATTTGATGAGTTTTGACAAAAGTGGGCACCCACGTACCCACC
ACCACAATC71AGATGTAAGACGTTCTCTATCACCCCAGAAAGTTCCCTCATCCACTTTGC
ATTCAGGCCTCCAGATCTAGGCAACCACAGATCTGCTTTCTGACACTGTGGATTAAACTT
TGCCTGTTCCAGAATTTCATATAAATGGATGTGTATAGTATGTACCCTTTCGTGTCTGGC
TCCTTTCCCTCAGCATAATGTTTCTGAAATTCACCCACATTGTTACATGTATCAGTAGTT
AATTCCTTTTTATTGCTGAGTAGTAATGCCATTGTATGACTATGTATGACATTTGTTAAT
CCATTTTCCCGTCAGTGGATATTTGGGTTGCTTCCAGTTCTGGGCAGGTATTCATTTGCT
AGGGCTGCCATATGCTTGCCCTCTGGCCTCCCAAAATTTGTGTCCTTTTCATATGCAAAA
TACATTCACCCCCTCCCAACAGCCCCAAAACTCTCTTTTTTTTTTTTTTTTGAAACAGAG
TTTTGCTCTTGTTGCCCAAGCTGGAGTGCAATGGTGTGATCTCGGCTCACTGCAACCTCT
GCCTCCCGGGTTCAAGAGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGATTACAGGCA
TGCGCCACCACGCCTGGCTAATTTTTTATATTTTTAGTAGAAATGGGGTTTCACCGTGTT
AGCCAGGCTGGTCTTGAACTCCTGACCTCAGGTGATCCGCCTGCCTTGGCCTCCCAAAGG
GCTGGGATTACAGGCATGAGCTACTGCACCTGGCTAGCCCCAAAACTCTTAACCCATTTC
AGCATCTACTCTAAGTCCAAAGTCTCATCTAAATCAGGTATGGGTGTGACTGGAGGTGTT
ACTCATCCTGAGGCCAAATTCCTCTCCACTTATGA?\CCTGTGAAACCAGACAGGTTATGT 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
-43- 200300170 kl _B7 五、發明説明（
GCTTTGAAAATAAAGTGATGGGACATGCATGGGATAGACTTTCCCATTCCAAAAGAGAAA
AATAGGAAAGAAGGAAAGAGTGACAGGTCCCAAGCAAGTCTAAAACCTCGCAGGGCAAAT
TCCATTAGATTTTAAGTTTCAAGAATAGCCCTCTTTGGCTCAGTGCTCTGCCCTTTGGGC
CCACTGGGGCGGCAGCCCTATCCCCTTTGCCCTGGGTGGTGACCCTACCCTCGAGTCACT
GGTTAGCAGCAGCCTAGCCTGCTGAAACTAAGGAGGGGACAGTGTTGCCTCCAGGTCTTT
GGTGGCAGTGACAACCCTGCTGATCTCTGAATCATCTTCCAGGAAATTTTTCCCTATACT
TGAAGGATATTGCGTGTTCACAGCCAAATAGCTCCAGCTCTTGTCCCTTTCTTTAGAATC
CCAGAAGTCCAACAGCCTTCCTTCATTCTGTCCCATCTCTGTCCCCTTTAGTCAAAGCTG
GAAGTGCCTCTGCTGGTATAATCCCATCAGTATGTCTAATTTCTGCTTAAATGGCTGATT
AAGTCTATGAGTTGCACCTCTGATCTCTTTATCAAAAGGTTGTTCTAGCCACAACCTTAG
TGTCCTCCCCAGAACATGCTTTCTCATTTTTTTTTTTGCAATGTGGATAGGCTGAAAATT
TTCCAAAGCTTCAAGTTCTAGTTCCTTTTGGCTTACCAATTCTTTTCATATATCTCTTCT
CTCACATTTTACTATAAGCAGTAAGAAGAAACCAGGTTGTACCTTCAGCACTTTGCTTAG
AAATCTCTTCTGCTAAGCATCCAAGTTTATGTCTTTTAAATTATCTTTTTGTTATTTATT
TTATATTATCATTTTTGAGATGGCTAGCCAATGATCTTTTAACTTCTAATTTCTGCAAAA
CACTAGAAGACAATTCAACCAGTTCTTTGCCACTTTATAACAAGGATCACCTTTCCTCCA
GTTTCCAATAACACATTCCTCTTTTCCACCTGAGACCTCACCAGAATCACCTTTAATGTC
TATATTCCTACCAATAGTCTTTTTAAGGCAATATAGGCTTTCTCTAACATGCACTTCAAA
CTTCAAGATTCTACCCATTATGCAATTCCAAAGCCACTTCCACATTTTTAGGTATTGATT
ACCTCAGCACCTCATTTCTGGTGCCCAAATCTGCACTGGTTTGCTAGGGCTGCCATAACA
AAGTACGACAGTCTGGGTAAACAACAGAATTTTATTTTCTCAAAATTCTGGAGGTTGGAA
GTCCAAGGTCAAGGCGTTGCTAGGTTTAGTTTCTCCTGAAGCCTCTCTCCTTGGCTAGCA
GATGGCTGCCTTCTTGCTGTGTCCTCACGTGGCTTTTTCTCTGTGTGTGTTCACTCTGGT
ATCTCTTCCTCTTCTTACAAGTACACCAGTCCTACTGGATTAGGGCCCCAGCCTTATTAC
TTCATTTAACCATAATTACCTCTTTAAAGCTCTTATCTCAAAACACAATACCACTGGGGA
TGAGGTCTTCAACATATGAATTTTGGGGGAACTCAATTCGTCCATAATAGGGCTATTATG
AATTAAGCTGCTGTGAACATTCATGTACAAGTCTTTGTGTGGATATGTTTTCATTTCTCT
TAGATAAAGATCTAGGAGTATCAGCCTGGGCAACATAGTGAGACCCCATCTTTACAAAAA
ATTTTCAAAATTAGCCAGGCATGGTGGCGTACACCTGTAGCCCTGCCATCTCAGGAGGCT
GAGGTGGGAGGATCCCTTGAGCCCAGGGGTTTTAGACTGCAGTGAACTATGATTGCACCA 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝 訂 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 -44 _ 200300170 A7 _B7_ 五、發明説明（4》
CTGCACCCCAGCCTGGGTGACAGAGTGAGACTCTGTCTCTAAAAAAAAGAGAGAGAGGGG
AGGAAGGAAAGAAGAAAGAGAGGGAGGGAAGGAGGGAGGGAGGGAGGGAGAAGAAAAATG
GATCTAGGGTTAAGATTTAGGAGATTAGGTAATGAATGTGTACTATTACAGGGAACTGTC
GAGCTGTTTCCAAAGTGACTGTACCATTGTTCATTGCCACCAACAATACATGAGAGTTCT
AGTTACTCCATGTGCTTGTTACACTTAGTATTATCAGTCTTTTTCATTTTAACCATTCTA
GTGAGTATGTAGTAGTATTTTATTATGGCTTTAATTTACAACTCCCTAATGATGAATGAT
GTTGAACATCTTTTCATGTGCTTATTGGCCATTCATATATCTTTTGTGAAGTGACTATTC
AAATATTTTTCCACTTTTTATTAGGTCATTTATTTTCTTATTATTGAGTTATCTATGAAT
ACAAATCCTTTATCAGTGTATGTATTGTGATTTTTTTCCCCAGTGGCTGGCCTTTTCATT
TTCGTTAGGCTTTTTTGGTGGGTTTTTTTTTTTTTTTTTGGAAGAGAAAAATATTTTAAT
TTGATAAAATCCAGTATATCAGGTGTTATAGACTGAATTATACTCTACCCCACAAATTCA
TATGTTGAAGCCCTAACCTCTAAGTGACTATTTGGAGATGAGCCTTTAAGGAGGTAATTA
AAGTAAAATGAGATCATAAGGGTGGGCCCTAATCTAATAGGACTGGTGTCTTTATAAGAA
GAGGAAGACACCAAGAGCGCATGCACACAGAAGAACGGCCTTGTGAGGACACAGCAAGAT
GACGGCCATCTGCAAGCCAAGGAGAGAGGCCTCAGTAGAAACCAAACCTGCTGATGCCTT
GATCTTGGACTTCCAGCCTCCAGATTTCTGTTGCTGAAGCCACCCTGCCTGTGGTGTCTT
ACCATGGCAGCCCTCACAGACTAATATATCAGATTTTTTTCCTTCAACAGTTAACGCTTT
TGGTGTCCTAAGCAATATTCGCCTGACCCAGGGTCATGAAGATTTTTCTTCTATGCTTTC
TTCTGGAAGTTCTATAATTTTAGCTTTTACATATTTTTTTAACTTTCCTTCTTCTTGCCT
TCTGTTTCTTTTAAGGCATCATCTATTGTGTTAATTTGTTCTTGTATTCCTTCTGATTTA
TTCTTCACTTCTGAAATGAATTTTGCTTTTTAAAAATATATATAATTCTTTTCTGTGTCT
GAGTTTTTCTAATTAGGTTTTATGTGGTTTTTTCTTGTCCTGCATCACTTTTTACTGTCT
TTTGCCCATTTTGAAGTATCAGGTTCCAGTTTTGATCTGTTCATGGATATGTTTTTGTGA
CATGTTTCTTCTGGCTTCTTATCATTTATTGCTTAGCTTATTAATTTCTATTCTTTCTTA
TTTTCTATTATAAGTATTTAAAGCTATATGTTTTCCTCTAAGTATTACTTAGCTGTCTTA
TACGTTTTCATTTGTGTTATTTGGTGATCATTCACTTTCAGCTATTTATTAATTTCCATT
ATAATTCTTTCATCTATGGGTTGTTTTAAAAAATATTTTTAAGGCCAGGTGTGGTGACTC
ACATCTGTAATCACAGCACTTAGGGAGGCTGAGGTGGGAGGATTGCTTGAGGCCAGAAGT
TTGAGACCGGCCTAGGCAACAAAGTGAGACCCCCTCTCTACAGAATATTTTTTTAAAATT
AGCTGGGCCAGGCGTGGTGGCTCATCCCAGCACCTGTAATACCAGCACTTTGGGAGGCCA 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝
、1T 經濟部智慧財產局D貝工消費合作社印製 - 45- 200300170 A7 B7 五、發明説明（θ
AGGCAGATGGATCACCTGAGGTCAGGAGTTCGAGACCACCCTGGGCAACATGGTAAAACC
CCATCTCTACTAAAATATAAAAATTAGCCAGGTGTGGTGATAGGTGCCTGTAATCCCAGC 裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
TACTTGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATTCTTTGAACCCAGGAGGAGGAGTTTGCAGTGAGC
CGAGATTGCACCACTGCACTCCAGCCTGGATGACAGAGCGAGACTCTGTCTCAAAAAAAA
AAAGAAAAGAAAATTAGCTGGGTGTAGTGGCAGGTACCTGTGGTCCCAGTGACTCAGAGA
CTGAGGCAGGAGGATCACCTGAGCCCAGGAGTAGAGGCTGCAGTGAGCTATGTTTGTGCC
ACTGCACTCCAGCCTGTGCAACAGAGCAAGACGCTGTCTCAAAAAATATATATTTTTTTA
AATTTTCAAACTTCCTTTAGTTCTCTTTTTGTTATTAACTTTTAACTGAATGTTTTGCAA
TCAGAAGAAATACTTTATGAGATACCTATTCTTTAAAATTTCTTAAGAATTGCTTTGTGT
TAATATTTTGTTAATAGTTCACATGTGGTTCAACCAATTTGTTTAGTTAGTTCTGTATAT
GTTCATTAGACCAACTTGATAACTGTGTTGTTCTTTATTTATTTATGTATTTATTTTTCT
TTGTCTATTCATCAATTGCTGGGTGAGATGTATTAAAATTTCTTGTTGTAAGTGTGGCTG
TTCACTTTCTACCTGTAGTTTGTCTGTTTGCTTTATAGAGGGTGAAGTTGTTTAGTAGGC
ACACATAAGTTAGAATTTTTCTGTCTTCCTGGTGAATGGAATCATTTATCATTATCTAAT
GTTCTTTTCATCTTTAGTATTGCTTTGGACTTGG7^AGTCTGTATTTTGTCTCCTGTTAAT
ATAACTACACTGGTTCCTTTGGTGTGAATATTTGCATAGTATAACATTTTCCATGAAGAA
ACAAAACAGAGGAATTGGTTCTTTCTCAAAATCTGATCTTTGTGTCAGCCCCCATCTCAG CCTTCTCCATTCATCCTTGGTCACTCCCCAAACCCAGGAGCAATCCTTGATTCTCCTTrr
CCCCACATTCTACATCC7VATCCGTTAGCAAGTTCTATTAGTTCTATTATTACCTCCAAAA
TAGATATTGAATCCAGCCCTTTCTCACTGTCTCCACCATCATCCTGTCTCACATCCCTAC
CATGGCCTCCTTGCTGGTTGACCAGAGTGATCTTGTAAAAACATGTTAGGCCAGGCACGG
TGGCTCCTGCCTGTAATCCCAACACTTTGGGAGGCCAAGCGGGTGGGTCACCTGAGGTCA
GGAGTTGGAGACCAGCCTGGCCGACATGGTGAAACCCTGTCTCTACTAAAAATACAAAAT 經濟部智慧財產苟S工消費合作社印製
TAGCCAGGTGTGGTTACGCTGGCCTGTAATCCCATCTACTCGGGAGGCTGAGGCAGGAGA
ATCACTTGAACCCAGGAGGCGGAGGTTGCAGTGAGCCAAGATCATGCCACTGCACCCCAG
CCTGGGCAACAGAACAAGACTCCATCTCAAAAAATAAAAATTAAAATAAAATGTTAGGCT
CCCTGGGTCTCTGGCTTAGTCCATTTGTACTGCTTTAACAAAATACCTTAGAATGGTGTA
ATTCTAATAATTGCTATTAATAAATAATAGCAATTAATAAATAATAGCAATTTCCTTCTC
ACAGTTCTAGAGGCTGGGAAGTTCAGGGTCAAGGTGGCACCTGACTCCGTTCTGGTAAGG
GCGGCTCTCTGCTTCCAAGATGGTGCCTTCTCGCTGCGTCTTCGCATAGCGGAAGGGCAA 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） -46- 200300170 A7 B7 五、發明説明（4$
ACACTGTGTCCTCACGTGGCAGAAGAGATAGAAGGGCCAGGCAGCTCTCTGAAGTATCCA
GGTTGGAGTCATGGACCTGCATGTTCCCCTCTGACATCCACAGAGTACCTATCATGGTCC
TTGGCATGCAGCAGGTGGCCCATAAACGCCTGAATGAACAAACATATAGTAATGGTCGCT
AGTACTAGGAATAGCAGCCACCGCAACAGTCCTGTGAGGGAGGCATTACAGATGAGGAAA
CTGAGGTTTAGGGGCAAGGACCTGCCCATGGTCCCAAAGCTAGGGAGGGACAGGGCTGGG
ATTCCCACTCCCATCCATCTGGCTCCAGAACCTGAGCTCCTGACCAGGCTGTTCTTATCC
TGTCTCAGCCAGTGGCTGCCTGTCTGGACGGATGGACCTAAAGTCAGTCCAGCCAAACAG
AGGGAAGCATGATCAACTGTTCTCTAAGTTCCCTGACCCGGAGAGGCTGAGTCCATGGCC
CAAGCTCTCCTCTCTCCTCCCCCAGCTCTCCCACCCGTAGACGGTGGCGCGAAGTGGAAG
AGTGTGCGGGAACCAAGGAGCTGCTATGTTCTATGATGTGCCTGAAGAAACAGGACCTGT
ACAACAAGTTCAAGGGACGCGTGCGGACGGTTTCTCCCAGCTCCAAGTCCCCCTGGGTGG
AGTCCGAATACCTGGATTACCTTTTTGAAGGTAGGTCTGTGGGTAAGGGACTGAGTGGAA
GGCTGTCCATCCCATCGGGGAGCTGTGCTCAGTGCTCAGTGGTTCTGTTCTCCTGACCAT
CTGTCTCCCACTTCCCCAAAGCAGAGGGCAGCTCCCTGGGCCAGGCCCTTTGAGATGGGG
TGTGGGACCAGCAACAGCGAGGGACCATGTCTGGCAGCCTGTCAGGGAGTTAGGGGAGCT
CCAGCCAGCACCAGCAATCTCACGTGCACCCTCTGCTAACAATGTTCATTATTTTCAGTT
GAGCACCATTTTGGTCATGGACTACACAAGGCACTTTATATGCTTATTCCTATTTTTTTA
TGTTCAGCTTCTCTCCTTAAAAACAATGTTTAAAACCAATTCTGGGCCAGGCGTGGTGGC
TCACGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCCAAGGCAGGTGGATCACCTGAGGTCAGGA
GTTTGAGACCACCCTGGCCAACATGGCAAAACCCCGTCTTTACTAAAAATACAAAAATTA
GCCAGGCTTGGTGGCAGGCACCTGTAATCCCAGCTACTCGGGAGGCTGAGGCAGGAGAAT
CGCTTGAACCCAGGAGGCGGAGGTTGCAGTGAGCCAAGATCACGCCCCTGCACTCCAGCC
TGGGCGACAGAGCGTCTCAAAAGAAAAAAATTAATAAACAAAGAAAAAAAAACAAATTCT
GTTTGCAAAAGTATTTTCTATACACTGTAGAAATTTGTGGGGTGTGGGGGGGTAAAGATG
ATAGAAAAAAAAATGTCCCATGCTTACTGGCAGAAATCATGTATTGACATTGGGTGAGGA
GGGCACTTTTTTTTTTTCAGTCTATTTTTAATCTTCACAGCAAACTTGTGAGGTTCATTT
CCATCAACCTGAGACTCACAGAAGCTAAGAAACTTGATACCGCTAGTAACCAGTGGACTT
GATACCGCTAGTAACCGGTGGACATAGATGTGAACTGGATCTTTCTGACCTCGGGCAGGG
CCGGGTAACAAGGGGAGGATAAATGCCCAGACAGTGTCCTCAGAGAGCTGAGAGCTGTAA
CTTGCTGCCCGGGCTTCTCACAGTGTTCAAGGACAAAATAAGGCTTTAAGAGAGAAGAGG 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
-47- 200300170 A7 B7 五、發明説明（
GACAGACTGATTGCAGGGCAGCAGGAAGAGATGGTAGAGAAGGAAGAAGAGATGATTCGT
GTGGAAAGAAGCTGGCTCGGTGGATGGATAAAAGAAGGGAAGGACAGATGGGTAAGAAGA
AAGGGAGGATGGAGGGGATGGAGGAGGAAGCAATGGAAAAATGGGAAGGAAGGAGGTTGG
ATGGAAGGATAGATGCCTATTAGGAAGGAAATATGTGTGGATAGAGAGATGGAGGATAGG
AAGTATGTTAGTCAAGGTTCTCCAGAGAAACTGAACCAATAGGATATATACAGATACACT
AAGAGGAGGCCAGCCGGGCGCGGTGGCTCAAGCTTGTAATCCCAGCACTTTAGGAGGCCG
AGGCGGGCGGATCACGAGGTCAGGAGATCAAGACCATCCTGGCTAACACAGTGAAACCCC
GACTCTACTAAAAATACAAAAAAAAATTAGTTGGGCGTGATGATGTGCGCCTGTAGTCCC
AGCTGCTGGGGAGGCTAAGGCAGGAGGATGGCGTGAACCCAGGAGGCAGAGCTTGCAGTG
AGCTGAGATCGTGCCACTGCACTTCAGCCTGGGTGACAGAGCAAGACTCCGTCTCAAAAT
AAATAAATAAATAAATAAAAAGAGGCCAGCCATGGTGGCTCACACCTGTAATCTGAGCAC
TTTGGGAGGCCGAGGCGGATGGATCATTTGAGATCAGGAGTTCAAGACCAGCCTGGCCAA
CATGGTGAAACCCTGTCTCTACTAAAAATACAAAAGTTACCCGTGTGTGGTGGCACACAC
CTGTAGTCCCAGCTACTCAGGAGGCTGAGGCAGGAGAATTGCTTGAACTTGGGAAGCAGA
GGTTGCAGTGAGCTGAGATCACGACACTGCACTCCAGCCTGGGTGACAGAGCAAGACTTT
GTCTCAAAAAAAAAAAATTTATAATAAGAGGAGATTTATTATGGGAATTGGCTCATGCAA
TCACAGACACAAAAATGTCCCCCAGCATGCAGTCATGGGCTGGACAACCAGGAAAGCTTG
TGGTGTGATTCTGTCTGAGTCTGAAGGCCCAAGGCCAGGGGAGCAGTGGTGTAACCCCCA
GTCCGAGGCCACAGGCCCGACAATCAGAGGGGCCACTGATATAAGTCCCAGAGTCCAAAT
GCCGGAGAACAGGAAGCTCCAACGTCCAAGGACAGGAGAAGTTGATGTGCCAGCTCAGGA
AGAGAGAATGTGAATGTGCCATTCCTCCTCCATTTTTTGTTCTCTTTGGGCCGTCAGTGG
ATTGGATGATGCCTGCCCACACTGGTGAGGACAGATCATCACCAAATCTGCCGATTAAAA
TGTTAATCTCTTCTGGAAAAATCCTCACAGATGGGCCCAGAAATAATGTTTTACTGTCTA
CCTGGGTATCCCTTAGTGCAGCTAAATTGACACATAAACTTAACCATCACAGGCCAGGCA
CTGTGGCTCACACCTGTAATCCCATCACTTTGGGAGGCCAAGGTGGGAAGATCCTTTGAG
GATGAGGTAGGCAGATCACTTGAGCCTAGGAGTTCAAGACCAGCCTAGGCAACATAGGGA
GACCTCGTCTCTACAAAAAAAAAAAAAATTTAAATTCGCTGGGTACGGTGGTGGGCACCT
GTGGTCCCAGCTATCTGGGAGGCCAAGGTAGGAGGATGACTTGAGCCCAGGAGGTCAAGG
CTGCAGTGAGCCATGATTGTTCCATTGAATTCCAGCCTCGGTGACAGAGCAACACCCTGT
CTTAAAGAAAGAAAAAATTTAACCATCACAGAAGGCAGAAGAAAAGGCAGATGGGTGGAT 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
-48- 200300170 A7 B7 五、發明説明（4弓
GAGATGGGTGGGTAGATAGTATAGAAGAAAAGCGGGACATCCAGGCAGGGAAGGAAGGGC
TGGAGCGAAGGAGT^AGCAAGGAAGGAAGGAAGGAGAGACAAGAAGGAAGGATGTGTAGAA
AGGTGGAAGAGAAAAGAAGAATGGATGTATGGGAAGAATGGATGAGTAGGTTAGAAGGCT
CACTGGCTAGATAAAAGGTGAGAAGTATAAATGAATAATAAGAAAGGAGGCATAGGAAGA
AAAAAATATTGGTTAGAAAGGATGATTGAGAAGAAAGGGTGGTTGGGAAGGAAGGAAGGA
AGGATGGATGGATGGATGGATGGATGGGAAGGAAAGGAAGGATAAGAAGGCAGACAGGAA
GGCTCTCTGGCTAGAAGAATGGCAGACAAACCACAATAATTGCTGAATGGGTAGGAATAA
GACATTAGAAGAATAAAGGGAAAGACACAAAGATATTTAAAATGTTTTCATTAATTTTTT
GCCTCCTCCCTGAATTTCTCCTGATTCTTCAGCCCCACATCCCAAGCCAGGGTGATCCTT
CCTGCCTTTACACTCCCTCCACACTTTTTCTGCTCTCATATGTGGCCGTGGTCACTTTCT
TTTGGTAGTTTGCATATTTCATTTACCCCAAACTTTCAGCTCCTGAAGGTCAGGATACAA
GGAGGCCTCATCTCCGCATTCCCCTCAGCTCCCTTCCTGAAGCTTGATACCTAGTCAGTA
CCCAGTGGATGTTTCCTAAACATGTAAGTAATGACATCATGAAGAAGCCACATGTTTACC
TTGACCACAAACACAGGGCAAAGGTGACTAGTGTGGTCAGAGATCCCTGCTGGCTGGGAA
TCAGGGAAGGCTGCATGGAAGAAGTGGCATTTTAGTTAGAACTTGAAAGGTGGTGTATTT
AGTTTTCTCTGGCTGCCATATTCCTTGTCACATTGCCCTCTCCATCTTCAAGCCACTGGG
CAAGGCTAGAAGGCCCTCAACAGACTATCGGTAGGAATGTGGAAGTTGAAGACTCAGAGT
GCAGAAAGAAACAAGTAGCATTTTAGAGAAAAGCTAAATCCCCTCCAAGAATACCTCAAT
CATCGTGAAGAGCCTGTTAGTAGACGCACTAACACTCAAGGCACTGCTTCACAAGGTAAG
GAACGTGTAATTGAAAACTTGAGAAAGGAAGAAACTTGTTCTGTACTGGCAGAAAGCTTA
GCAGAATTGTGTCCTGCAGTCATATGGGACACAGAGCTTGTAAATGATGAATTTGAATGC
TTATCCGAGAAGGTTTCCAAATAAAATGTGGAAGGCACGGCCTGGTTTCTTCCTGCCTCT
TATAGTAAAATGCAAGAGGAGAGAGAGAAAATGAGGGAAGAACTTAAACAGAAAGGAACC
AGGACTTGATGATTTGGGAGGTTCTCAACCTATGCAAAAAACAATAAAATTAAGAGATTG
TAGCTGGGCACAGTGGCTCATGCCTGTAATCCCAGCACTTTGAGAGTCCGAGGCGAGCAG
ATCACCTGAGGTCAGGAGTTTGAGACCAGCCTGGCCAATGTGGGGAAACTCCGTCTCTAC
TAAAAATACAAAAATTAGCTGGGTGTGGTGGCGGGCACCTGTAATCCCAGCTACTCAGGA
GGCTGAGGTGGGAGGATCACTTGAACCCAAGAGGCGGAGGTTGCAGTGAGCCAAGATCAT
GCCACTGCACTCCAGCCTGGGTGGGTGACAGAGCAAGACTCCATCTCAAAAAAAAAAAAA
AAAAGAGATTGCTCCCAAAAGTGTGACATAGAGAAACAGCCAAGTATGTGATTATACCAA 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局資工消費合作社印製
-49- 200300170 A7 B7 五、發明説明（驹
ACTTCAGGAAGATAAAAGATCAAAGTACTCAGTCGCTCAAAAGGCTCTTTGAAGAGATTA
AGATTATAACTCACAGTCCCCTTCAATCAAACCAGGGGACTTCTAGGAAGCTGAACAGCA
TTGTCCCTCAGCCATATCAGCTGGAGCCAAAAGTAGAGAAGGGCTTATCTGAAAAAAGGA
TCTGTGGACCTGGCTTTTATCTAATAATGCAGTGGATTCCCCCATGACATCCATAGGAGA
CCCGTAAAGTTCCTGAGACGTTTACATCCACAGAAACACTGTTAGCTTGGATTAAATGGA
ACACAGAGAGTATGAAATCA7y\GAAGGCTGTTGGACTCTCCAGTTTCTACTGTTGAGATG
CAGACTGGTAAAACTACTTAGCTGCAAACACCTGCTACCTTTAGTGAAAAGGAAGGATAT
CTCAGACGGTGAAACCAGAAGCTCAAAGGGCAGTGCTAAGAGCGAAAGAGAATTCTTCCC
AGGCCTTGAAACCTAATGGAGTTTTCTTGGCTGGATTTTCAAACTGCATTGGACCATGAC
CTGATTGTCCCTTTCATGTCCCCATGCTTGAGCCAGATTGTCTGCAACTGTTATCCTGTG
CCTGTCCCACATTTTATGTTGGGAGCAGAAAACTTTAGTTTTGCTGGCCCACAGATAGAG
AGAAACTGTACCCCGAGAGTTGTACTGACTGGACTATGCCCAGAGTCTATTTGACTCTGA
CTTAGATACTGTTGATTTGGGAATTTGAGTTGATGCTGTAATGAGATGAGACTTTGGGGG
ACATTGGGATGGAGTGAATGGATTTTGCATTTGAAAGAGATGTGGGTTGGGTAATCCTAG
CCCACACCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCCGAGGCAGGCAGATCACCTGAGGTCGGC
AGTTCGAGACCAGCCTGACCACCATGGAGAAACCCCATCTCTACTAAAAATACAAAATTA
GCCAAGCATGGTAGCACATGCCTATAATCCCAGCTACTCGGGAGGCTGAGGCAGTAGAAT
CGCTTGAACCCGGGAGGCAGAGGTTGCGGTGAGCCGAGATCACGCCATTGCACTCCAGCC
TGGGCAACAAGAGTGAAACTCCATCTAAAAAAAAAAAAAAAGAAAGAAAGAGATGTGGAT
TTTGGGTGGGGGACAGAGGGAAGACCATGGTAGGCAGAATGATCCTCTAAAGGTGCTCTG
CCCTAATCCCCAGAAGCTAAGAATATGTTAGATGTCAGTATTGCGTGGCAGTAGGAATCT
TAATTAACGTTATAGAGTGTTATGGTTTGAATGTCCCCTCTAAAACTCCTGTTGACATTT
AATCATCATTGTGATTGCATT/^AGAAGTGGCCCTGTTAAAAGGTGATTTAGTCCTTAAGA
ACGCTGCCCCCGTGAATAGATTAAGGTCAGTCTTGCGGGAGTGTGTTTATCAAGAATGGA
TTGTTAAAAAGTGAGTTCTGGCCAGGGGCAGTGGCTTATGCCACTCAGCACTTTGCGGGG
CCAAGACTTGAAGTCAGTTGTTTGAGACCAGCCTGGCCAACATGGTGAAAGTCTGTCTCT
ACTAAAAAATACAAAAAGTGTCCGGGAGTGGTGGCGGGCGCCTGTAATCCCAGCTGCTCA
GGAGGCCGAAGCAGGAGGATCGCATGAATCCGGGAGGCAGAGGTTGCAGTGAGCTGAGAT
CGCCCCGTTGCACTCCAGCCTGGGTGATAGAGCAAGACTCTGTCTCAAAAAAAAAAAAAA
AAGAGGAAAGAAAGAAGAA/iGAAAGAGAAAGAAAGAAAAGAAAGAAAAGGAAGGAAGGAA 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-50- 200300170 , A7 B7 五、發明説明（4》
GGAAGGAAGGAAGGAAGGAAGGAAGGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAA
AGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAAGAAAGAAGAAAAAAAGAAAGAAAAAAGAAA
GAAAGAAAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAGAAAAGAAAAGAAA
AGTGAGTTCTGCCCTCTCTTGCTGGCTTACTCTCACCCTCTCTTGCCCTTCCACCTGCCA
CCATGGGATGACACAGCACAAAGGCCCTCACCAGATGCCAGTGCCATGCTCTTGGACTTC
CAAGTCTCCAGAAACATGAGCCAAATACACTTCTGTTCATTATAAATTACCCAGCCTGTG
ATATTCTGTAATAACAACACAAAATAGACTGAGACATAGATCTTCAAATAGTGAGGTTAT
CCTGGATAATCCAGATGGGCCCAATCTAATCCCATGAGCCTTTAAAACTTTCTCCAGATG
GAGGCAGAAGAGAAGTGGCAGAAGGGGAAGTCAGAGAGATTTGAAGCATAAACAGGACTC
CATGGTGCCGTTTCTGGTTTGACGATGGAGTGGTAACGTGATGAAAAATGTGGGTGCCTT
CCGGAGCTGAGAGGCTCCCACTAACAATCGGCCAGGAAACAGGGACCACAGCCCTACAGC
CACAAAGAACTAAGTTTTGCTGACAACCCAAGGGGGCTTGGAAGTGTCTTCTCCCCCATC
GGTTCCAGATGTGAGACCCAGAGCGAAGGAACCAGCTGAGCCCACCTGGACTTCTGACCT
AGAGAACTGTGAGATAATAAGTTTGTATCATTTTTAAGGCACTGTGTGTGTGGTAATTTG
TTATGACAGCAATAGAAAATGAATCCAGATGGGCAGGATCTGCCAGGCCAGTGACATGTG
GAGGGCACCCAGGCGGATGGGATGGCATGAGAGAAGGCAGGTCAGCAATGAGCTTGCCCA
GGTCACCTCTCCTCTCTAAGCCTCAGTTTTCCTCTCTATGAAATGAGAGTAGTGATATCT
CCCTCCCAGGGTCAGTGCAAGGCTGAAATAACAGATTATAAGGTGCTAGGTGCACAAGAA
GTGTTTGAAACATGCTAGTTGCTTTTCCATTTCCAAGAGAGCTCTCTGGTCTTGGGGGAT
GGAGGCAGTGCGGCCCCTCGGGATTACTGACAGGTCCTGCTCTGTTTCTGCAGTGGAGCC
GGCCCCACCTGTCCTGGTGCTCACCCAGACGGAGGAGATCCTGAGTGCCAATGCCACGTA
CCAGCTGCCCCCCTGCATGCCCCCACTGGATCTGAAGTATGAGGTGGCATTCTGGAAGGA
GGGGGCCGGAAACAAGGTGGGAAGCTCCTTTCCTGCCCCCAGGCTAGGCCCGCTCCTCCA
CCCCTTCTTACTCAGGTTCTTCTCACCCTCCCAGCCTGCTCCTGCACCCCTCCTCCAGGA
AGTCTTCCCTGTACACTCCTGACTTCTGGCAGTCAGCCCTAATAAAATCTGATCAAAGTA
TGATGACCTACAGGAGGCCTGCTTGCCAAGTCAACAGATTCAGTACAGAAAAACTGAAAA
ATACAGATAAGCTCTAAGAAGCAGACCAAAAGTACCCAGAGATGACCGCACATCACTCTG
GTGTATATCCAATTTCAGATTTGTTTTCTGTGTATGCATGTGTGTATAGCTGCATTTATT
TATGGCAAGGGCTGGCAGACTTTCCCGAAGAAGGCCAGATAGTCGATATGTTTGGCTTCA
TGGGCCGTATGTTCGCTCAGGACTACTCAACGCTGCAGTTATAGCACAAAAGGAGCCGTA 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慈財產^g(工消費合作社印製
-51 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（
GCCTATACGTAAATGAATGGGCATCGCTGGGTTCCAGTAAAACTGTTTACAGGCCAGGTG
CGGTGGCTCATGCCTGTAATCTCAGTACTTTGGGAGGCCGAGGTGGTGGGAGGATTACCT
TAGCCCAGGAGTTCAAGACCAGCCTGGGGAACATGGTGAAACATTATCCCTACAAAAAAA
AAAAAAGCTGGGTGTGGTGATGCATGCTTGTGGTCCCAGCTGCTTGGGATGCTGAGGCAG
GAGGATCGCTCGAGCCCAGGAAGCAAGGCCACAGTGAGCCATGATCGCACCACTGCACTT
TAGTCTGGGCAACAGAGTGAGACCTTGTCTCAAAAAAAACAAAAAATAAAACTTTTTACA
TAAACAAGTGGCCAACCAGACTTGGTCCCTGGGCCTCTGCTCTTGAATGTTCTTGCTTCC
ACTAAAGTAACATTCACACTCCCGATTTTTGCATACTCTGGGTTCTGGGGAATATAGATC
CGAATCCAGCGTGGTTCCTGCCTTCAAGAACCTCACAAATATTCTAGACCAGCACTGCCC
AATAGAAAGAAATATAATGCAAGCCACATGTGCAGTTTTAAGTGTTCCATGTTAAATTAA
GTAAAAAGAGACGGGTTU^ATCGAATTTTAATAACAGATTTTACTTCATCCAATTGAATGG
TATCATTTCAATGAGCAATTCTGATAGTGATTGAGATCTTTTACATTCTTTTTCACTACG
TCTTTAAAATCTGATGTGTGTTTTGTACTTGGAACACTTCTCAGTGTGGACCAGATGCAT
TTCACATACTCAGTAGTCACGCGTGGCCAGTGCCTTCCATACCACACAGTGCAGCATCTG
TAGAGGTTTCCTCCACTGCTGATAGACTAGGAGACCCCAAGATGGAAAGCCTGAAGAATC
TGCTCCTCGAAGTAGGGACCTTAATGGGGTGCACGCCAGGGCGACCCCAAGTGGTAGGGT
GCTTTTGAACCATGGCTATCCCTACCTCTAGACTCAGCTGAAAAGAACTCAGGTAGTCTT
GGGAAGTGCTTCCTCAATGCTTAAACTTTAATGCAGGAAAAGAATAGAAAGTTCAGGCAA
GGAGGGAGGATCACTTGAGGCTGGGAGTTCGAGACCAGCCTGGGCAACAGCAAGACCTTG
CCTATACAAAAT^ATAATTTTAAAAAATTACCCAGGTATGGTGGTGTGGATCTGTAGTCCC
TAGTTACTTGGAGAGCTGAGGTAGGAGGATCGCTTGAGCCCAGGAGTTTGAGGCTGCAGT
GAGCTGTGATCACACCACTGCACTTTGGCCTGGGTGACAGAACCAAACCCTATCCCCTAC
AAAAAAACAAAAAAAAAAAACAAAAAAAAACACCCTACCATGTCTGCCAACCCCACTCTG
TCCTGGCTGTGTGAAACCAGTCCCCACAGCAGCTCTGCCACTCTCTGCTTCTTTTCCAAA
CAGACCCTATTTCCAGTCACTCCCCATGGCCAGCCAGTCCAGATCACTCTCCAGCCAGCT
GCCAGCGAACACCACTGCCTCAGTGCCAGAACCATCTACACGTTCAGTGTCCCGAAATAC
AGCAAGTTCTCTAAGCCCACCTGCTTCTTGCTGGAGGTCCCAGGTGGGTATCAAGTGGTG
CAGAAGGAGAAACTTTCCCTCTGGGCCTTGGGAGCTTCGTGACACAGTGGTTAAGAACAT
GAGCCTAGAGATAGACTCGCCTGGATTAAAACCACACTCATTGTGTGTCTTTGGGCAGCT
TACATAATGCCCCGAACCTTGGTTTGCACAGTCTGCAGGATGGGTTTATTCTTGTGAGGA 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -52- 經濟部智慧財產局工消費合作社印製 200300170 A7 B7 五、發明説明（4点
TTAAATAGGGTCATGTATGTGAAGCACTCGGCACAGGTGCAGTTGTAGACAAGAGCCATT
GTTGTTTCTCTCATTGTTATTTTTCCTTCCTTAGAAGCCAACTGGGCTTTCCTGGTGCTG
CCATCGCTTCTGATACTGCTGTTAGTAATTGCCGCAGGGGGTGTGATCTGGAAGACCCTC
ATGGGGAACCCCTGGTTTCAGCGGGCAAAGATGCCACGGGCCCTGGTATAGCAAATCTGG
GGGTGTGCGGCAGGTGGGGAGGGGTTGAGAGTAAGGGAGTGGGGCTGGAGCTATGAGTTG
TTCAGATAGAATATCAAGATGGTCCAGACTCTTGGACCAAAACATCTATCTTTGTGTCTG
AATTTCCACCATTAGTAATGCATTCATTTAGTCCTGAATAAAATGGCAAACAGGCCCTGG
AGGGAGCAGTGCCTTAAGTTCCTTTGAGATAAATAACTTCACCTCTGCTAAGGATGTGTC
AGCTGCTGAGAGCAGAGCCCCTGGCCTTGGACCTCAGGAGAGACACTCAAAAGGGGAGGA
GAGGAGGCACCAAAGGGGACATCTTAAAAGAGTTCCAATTTTTAGTTCACACTTTAACCC
AGGATAAGCTGTGTCCTGGCTGACCTTGGAGTTTCTTCCCTGGTCTGCTGGGTCTCTCCC
TTAGAACCTAGGGGCGAGCTGGGGCAGGGGT^AGCCCAGGAGGTGATATAGGTCGGCCCTG
TTCAGATGAGGGCTGGCAGGGGCAGCTTGGGCATATGCGAGGCTCCGATGGGCATGGGGG
CTTTGAGGATGGATTCTGAGTGTCCCTGCATCGTGGCAGGGTGGCAAAGGGAGCATTTCC
AAATTTCCTGGCTCCAGGATCTGTGGGAGAATCCCACTAACTGTCAGGGTGACAACCTCG
GGTAGACATGTCTGTGCCCTGCCCCGTGCCCTCAGCCTTCCTGTTAAGAGCACACCAGCT
GGATTTGCAACTCCCAGCGCCTGCACCC/^ATGGGCTTTCTCTGGCCTCTGGAGCCCACAT
TGCCCCTGCATGTGGCAGGCTGCAAGTGTCACAGCCACCAGCTCTTCCATTCCTCAACAA
TGACTGTGGGTAAATAGCCCAGGAGCGTCCCCCTCCTGGGATGGTTCTGAGGTGCGTGTG
CCCAGTGGCTCCCTGAGTTGCCAGCAGGATTAAGTGCCAGTAGCCCTAGTGGTCAGCTGC
TTGATAACACCCTGCTTCCTGGCTGCTCCCCCAGTCCCATCTGGTGTGTTCTGGGATCAT
CTCCCAAAGAAACTGCTTACACTTGAAGCCTTGTCTGAGGTCTGTTTCTAGGGGAATTCA
GATGACGATAATTATGCTTCAGGAAAGCCTAAATTTTCTGCTTTTCTCTCCCCTACCCAA
ATCAGGACTTTTCTGGACACACACACCCTGTGGCAACCTTTCAGCCCAGCAGACCAGAGT
CCGTGAATGACTTGTTCCTCTGTCCCCAAAAGGAACTGACCAGAGGGGTCAGGCCGACGC
CTCGAGTCAGGGCCCCAGCCACCCAACAGACAAGATGGAAGA^,GGACCTTGCAGAGGACG
AAGAGGAGGAGGATGAGGAGGACACAGAAGATGGCGTCAGCTTCCAGCCCTACATTGAAC
CACCTTCTTTCCTGGGGCAAGAGCACCAGGCTCCAGGGCACTCGGAGGCTGGTGGGGTGG
ACTCAGGGAGGCCCAGGGCTCCTCTGGTCCCAAGCGAAGGCTCCTCTGCTTGGGATTCTT
CAGACAGAAGCTGGGCCAGCACTGTGGACTCCTCCTGGGACAGGGCTGGGTCCTCTGGCT 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事碩再填寫本頁)
-53- 200300170 經濟部智結財產局員工消費合作社印製
A7 B7五、發明説明（5() ATTTGGCTGAGAAGGGGCCAGGCCAAGGGCCGGGTGGGGATGGGCACCAAGAATCTCTCC CACCACCTGAATTCTCCAAGGACTCGGGTTTCCTGGAAGAGCTCCCAGAAGATAACCTCT CCTCCTGGGCCACCTGGGGCACCTTACCACCGGAGCCGAATCTGGTCCCTGGGGGACCCC CAGTTTCTCTTCAGACACTGACCTTCTGCTGGGAAAGCAGCCCTGAGGAGGAAGAGGAGG CGAGGGAATCAGAAATTGAGGACAGCGATGCGGGCAGCTGGGGGGCTGAGAGCACCCAGA GGACCGAGGACAGGGGCCGGACATTGGGGCATTACATGGCCAGGTGAGCTGTCCCCCGAC ATCCCACCGAATCTGATGCTGCTGCTGCCTTTGCAAGGACTACTGGGCTTCCCAAGAAAC TCAAGAGCCTCCGTACCTCCCCTGGGCGGCGGAGGGGCATTGCACTTCCGGGAAGCCCAC CTAGCGGCTGTTTGCCTGTCGGGCTGAGCAATAAGATGCCCCTCCCTCCTGTGACCCGCC CTCTTTAGGCTGAGCTATAAGAGGGGTGGACACAGGGTGGGCTGAGGTCAGAGGTTGGTG GGGTGTCATCACCCCCATTGTCCCTAGGGTGACAGGCCAGGGGGAAAAATTATCCCCGGA CAACATGAAACAGGTGAGGTCAGGTCACTGCGGACATCAAGGGCGGACACCACCAAGGGG CCCTCTGGAACTTGAGACCACTGGAGGCACACCTGCTATACCTCATGCCTTTCCCAGCAG CCACTGAACTCCCCCATCCCAGGGCTCAGCCTCCTGATTCATGGGTCCCCTAGTTAGGCC CAGATAAAAATCCAGTTGGCTGAGGGTTTTGGATGGGAAGGGAAGGGTGGCTGTCCTCAA ATCCTGGTCTTTGGAGTCATGGCACTGTACGGTTTTAGTGTCAGACAGACCGGGGTTCAA ATCCCAGCTCTGCTCTTCACTGGTTGTATGATCTTGGGGAAGACATCTTCCTTCTCTGCC TCGGCTTCCTCATCTGCAGCTACGCCTGGGTGTGGTGAGGGTTCTAGGGGATCTCAGATG TGTGTAGCACGGAGCCTGCTGTGTCCTGGGTGCTCTCTACGTGGTGGCCGGTAGAATTCT CCATCTATCCAGGCTCCAGGAGACCCCTGGGCATCTCCCACCTGTGGCCCCTAAACCCAG AGTGACTGAGAGCACTTACCATTCAGCTTGTCTCATCCCCAGTCTACCTCCTTCCTTCTA CCCTCACTGCCTCCCAGTCAGGAGAGTGAGCTCTCAGAAGCCAGAGCCCCACCCAAGGGG ACCCTGGTCTCTCCGCCTTCACCTAGCAATGGGAACCCTGCTTCCCAGGGGAGGAACCAA CTGCTCCACCTTCTAGGGACCCAGTTTGTTGGAGTAGGACAGTAACATGGCAGGAATCGG ACTTCTGGGCCTGTAATCCCAGTTTGGATGGCACGTTAGACTCTTGGTTGACCGTTGTGG TCCTTAGAAGTCCCATTCTCCCTTCCAGTTATGAGAAACCAATGCCTTCTAGATTCAGGT GACTATCCTTACCTGGGGGTGCTGATGCATCCTCAGTTAACCTACACCCACCTGAATATA GATGAGCGTAGCTGAGTTTTCACCCGTAGGACCGAAC-TGTTTTGTGGTGGAGTATCTGAA CAACCTTGGCTCTGTGGCCATTCAACCTGCCAGGACTAACATTTCTGGATTTGTGAAGAA GGGATCTTCAAAGCCATTGAACCCACAGAGCTGTGTTGCTTTAAAGCCACCACAAGGGTA (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 訂 f 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -54- 200300170 A7 B7 五、發明説明（51) CAGCATTAAATGGCAGAACTGGAAAAGCTTCTTAGGGCATCTCATCCAGGGATTCTCAAA CCATGTCCCCCAGAGGCCTTGGGCTGCAGTTGCAGGGGGCGCCATGGGGCTATAGGAGCC TCCCACTTTCACCAGAGCAGCCTCACTGTGCCCTGATTCACACACTGTGGCTTTCCACGT GAGGTTTTGTTTAGAGGGATCCACTACTCAAGAAAAAGTTAGCAAACCACTCCTTTTGTT GCAAAGGAGCTGAGGTCAAGGGTGGCAAAGGCACTTGTCCAAGGTCGCCCAGCAGTGCTG CTCTGATGACTTGTGCACATCCCCAAGGGTAAGAGCTTCGATCTCTGCACAGCCGGGCCA ACCTCTGACCCCTTGTCCATGTCAGTAAAATATGAAGGTCACAGCCAGGATTTCTAAGGG TCAGGAGGCCTTCACCGCTGCTGGGGCACACACACACACATGCATACACACATACGACAC ACACCTGTGTCTCCCCAGGGGTTTTCCCTGCAGTGAGGCTTGTCCAGATGATTGAGCCCA GGAGAGGAAGAACAAACAAACTACGGAGCTGGGGAGGGCTGTGGCTTGGGGCCAGCTCCC AGGGAAATTCCCAGACCTGTACCGATGTTCTCTCTGGCACCAGCCGAGCTGCTTCGTGGA GGTAACTTCAAAAAAGTAAAAGCTATCATCAGCATCATCTTAGACTTGTATGAAATAACC ACTCCGTTTCTATTCTTAAACCTTACCATTTTTGTTTTGTTTTGTTTTTTTGAGTCGGAG TTTTGTTCTTGTTGCCTAGGCTGGAGTGCAGTGGTGCGATCTCGGCTCACTGCAACCTCC ACCTCCCGGGTTCAAGTGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCAAGTAGCTGGGATTACAGGCA CCCGCCACCACACCTGGCTAATTTTTTTGTATTTTTAGTAGAGATGGGGTTTCACCATGT TGGCCAGGCTGGTCTCGAACTCCTGACCTCAGGTGATCCGCCCGCCTCGGCCTCCCAAAG TGCTGGGATTACAGGCGTGAGCCACCGCGCCCAGCCAAACCTTACTATTTTTTTAAAGAA TTTTTTCCAGAGTTTAATTTCTGACATAGCTTAAGTTTTCCAGTAACTCTAAACTCCATC TCCTTTATCGTCATTAAGTCATTCACAAAAAGCCAGGAGAAGCATTTGGAAAGGGCATGA T AAT C AG T AT ΑΛΤ AAT T (SEQ ID NO： 22) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 訂 經濟部智慧財產芍員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!0X 297公釐） -55 - 200300170 A7 7 Β 五、發明説明（θ 表8顯示表7的基因序列與表1的cDNA之間的相關 對應區域位置。 表8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 基因序列的區 域 序列屬性 長度 cDNA序歹U 對應的區域 1-2000 5’序列 2000 • 2001-2058 外子#1 58 1-58 2059-8391 內子#1 63 3 3 8392-8515 外子#2 124 59-182 8516-19645 內子#2 1113 0 19646-19830 外子#3 185 183-367 19831-27533 內子#3 7703 27534-27676 外子#4 143 368-510 27677-29583 內子#4 1907 29584-29743 外子#5 160 511-670 29744-30034 內子#5 291 • 30035-30165 外子#6 131 671-801 30166-31325 內子#6 1160 • 31326-32084 外子#7 75 9 802-1560 32085-32087 停止 3 1561-1563 32088-34757 3’-序列 2667 • (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -56- 200300170 A7 B7 五、發明説明（53 展示於表7之序列中已確認許多序列多型現象。此類 現象總結於表9 : 表9 SNP 位置 SNP 改變 變 異 32959 對 偶 基 因= “ C” 對偶 基 因= “ A” 變 異 31266 對 偶 基 因= “ C” 對偶 基 因二 “ T，， 異 30960 對 偶 基 因= “ τ，， 對偶 基 因= “ C” 變 異 29048 對 偶 基 因= “ C” 對偶 基 因= “ rp，， 變 異 2 87 5 3 對 偶 基 因= “ G” 對偶 基 因= “A” 變 異 2 3 8 3 0 對 偶 基 因= “ G ” 對偶 基 因= “A” 變 異 8811 對 偶 基 因= “ C” 對偶 基 因= “ 丁，， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 類CRF2核酸及本發明多胜肽（包括那些展示於表1者） 在本文中稱爲” CRF2-13”核酸及多胜肽。 依據本發明之CRF2-13核酸、及編碼之多肽有各種用 途。例如，序列比對顯示揭示的CRF2-13核酸（表1)編碼 第Π型細胞素受體。其中的一個或多個分泌的受體鏈可 聯結、及/或調控另一膜結合型CRF2成員、或另一膜結合 的受體家族之活性。此外，受體鏈揭示於此之可單獨或結 合另一可溶性受體進行作用。在作用上此此受體亦可爲配 體。 本發明可溶性CRF2-1 3多肽（例如，包括胺基酸2 1 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 57- 200300170 A7 B7 五、發明説明（54 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 230之多肽，序列確認號碼：2之胺基酸）可另外作爲可溶 性受體拮抗劑。在技藝上已知可溶性受體拮抗劑可阻斷特 定細胞素（例如TNF)之活性。本發明之可溶性CRF2-13多 肽同樣可經由CRF2成員之作用阻斷細胞素活性。該多胜 肽之實施例包括：IL-10、IL-19、IL-20、IL-22、AM 55、 m d a - 7或干擾素，例如：干擾素α、干擾素万、或干擾素τ 。具體實施例之一中，本發明可溶性CRF2-13多肽可用以 拮抗IL-22之功能。IL-22與IL-10之序列有疏遠的相關， 其係由活化的Τ細胞所製作。IL-22可經由其受體鏈il_ 22R及CRF2-4(均爲CRF2家族成員）的調節將信號送入細 胞。原始的報導指出CRF2-4受體是IL-10信號的第二個 成份。IL-22可抑制人類Th2T細胞產生IL-4並可在小鼠 肝臟誘發急性相蛋白質。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 依據本發明之CRF2_ 13核酸及多胜肽可額外地被製備 或結合至一群細胞，並用以確認細胞型態。CRF2-1 3核酸 及多胜肽亦可用於免疫調控、發炎、免疫抑制、過敏症、 氣喘、自體免疫性（包括類風濕性關節炎以及多發性硬化） 、於血管損傷或疾病之後修護血管的平滑肌細胞、移植以 及基於配體聯結至此可溶解受體的相關癌症、單獨或聯結 另一受體、以及影響此配體之上述機制及/或病狀。 例如，CRF2-13多肽及/或本發明可溶性CRF2_13多 肽可展現一種或多種以下之活性：（1)調控，例如彼可拮 抗細胞素（例如：IL-10或IL-22)調節的訊息傳遞路徑；（2) 調控細胞素之產生及/或分泌（例如：產生及/或分泌前$ 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐） -58- 200300170 A7 B7 五、發明説明（5台 炎性的細胞素）；（3)調控淋巴素之產生及/或分泌；（4：)目 控細胞核的轉錄因子之表現或活性（5)競爭細胞素受II $ 細胞素配體；（6)調控細胞增殖、發生或分化，例如：細 胞素刺激的（例如：IL-10或IL-22)產生、發生、或分化； (7)調控細胞的免疫反應；調控細胞素中介的前發炎性的 作用；及/或增進及/或增強免疫反應。 本發明之CRF2-13多肽可藉由直接與膜結合型受體結 合、或間接與可溶性配體結合而影響或作用於一種或多種 下列細胞類型：循環性或組織相關性細胞：T細胞、B ,細 胞、NK細胞、NKT細胞、樹枝狀細胞、巨噬細胞、單核 白血球、嗜中性白血球、肥大細胞、嗜鹼細胞、嗜伊白血 球、呼吸道、胰臟、腎臟、肝、小腸及大腸細胞。本發明 之CRF213多肽可另外向上調節體液免疫反應及經細胞調 節的免疫反應；調控前發炎性細胞素以及化學激素合成； 以及調控與損傷、敗毒病、胃腸以及心血管疾病、或與外 科手術後相關的發炎反應。 在高效率生產蛋白質時，宜將CRF2-1 3序列置於能在 所要求的宿主中最佳化表現之表現控制序列的控制下進行 表現。例如，該控制序列可包括最佳化轉錄及/或轉譯的 調控序列（例如改變的Kozak序列）。此外，成熟CRF2-1 3 蛋白質的胺基端可操作性聯結至根據假設推論或實驗測得 之非CRF2-1 3蛋白質的成熟胺基端的信號序列。 CRF2、13融合型蛋白可使用技藝上已知的測定方法以 確認及測定其結合伙伴。此類測定方法包括，例如：組織 本紙張尺度適用中國國家標準（CN’S ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、" 經濟部智¾財4局員工消費合作社印製 -59- 200300170 A7 B7___ 五、發明説明（5合 學、免疫化學、BIACORE或細胞生物學測定方法。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 亦可進行測定以測試本發明之CRF2-1 3蛋白質是否與 已表現其它CRF2家族成員之細胞類型相關。亦可檢查本 發明之CRF2-1 3對於調控習知的或新穎的細胞素活性之能 力（例如經由抑制或拮抗細胞素功能）。 例如，許多新穎的類IL-10分子已經選殖出。IL-22 爲此類分子中的一份子。硏究報導曾指出此分子阻斷Th2 細胞（人類）產生IL-4，並啓動急性相反應（小鼠）。據發現 CRF2-13可結合至IL-22(或其它類IL-10)並予以抑制，此 意指本發明之CRF2-13可用於治療或預防與高含量IL-22 多肽相關的疾病。 本發明之CRF2-13多肽可與CRF2家族內其它受體及/ 或其相關的細胞素相結合。例如本發明之CRF2-1 3可與 IL-2 2R之各鏈相結合並影響受體或il· 22配體之功能。 CRF2-1核酸 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 本發明之核酸包括編碼CRF2-13多肽或蛋白質之核酸 。本文中多肽及蛋白質可互爲通用。 在某些具體實施例中，CRF2-13核酸編碼成熟CRF2-1 3多肽。本文中”成熟”型式的多肽或蛋白質，係描述 關於天然多肽或前驅物型式或前蛋白之產物。編碼CRF2-1 3多肽成熟型式的C R F 2 -1 3核酸之實施例是序列確認號 碼：2編碼胺基酸2 1 -520之核苷酸序列（例如序列確認號 碼：1之核苷酸61-1 5 60)。天然多肽、前驅物或前蛋白包 本纸張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公楚） -60- 200300170 Α7 Β7 五、發明説明（57) 括（不限於）全長基因產物，其係由對應的基因編碼。此外 ，彼可定義爲由在此描述之開放編閱架構編碼之多肽、前 C請先閱讀背面之注意事項存填寫本買) 驅物或前蛋白。”成熟”型式產物是指（不限於）在能產生 基因產物之細胞中進行一道或多道天然加工步驟後所造成 的結果。產生”成熟”型式多肽或蛋白質之該種加工步驟 的實施例包括：切除開放編閱架構中起始密碼子編碼之 N-端甲硫胺酸殘基，或將蛋白質水解切除信號肽或前導序 列。如此一個具有殘基1至N之前驅物多肽或蛋白質（殘 基1爲N-端甲硫胺酸）在去除N-端甲硫胺酸後將成爲具有 殘基2至N的成熟型式。此外，從殘基1至N的前驅物 多肽中將N-端信號序列的殘基1至Μ分解後會產生具有 殘基Μ+ 1至Ν的成熟型式蛋白質。除了蛋白質水解切除 方式之外，本文之其它多肽或蛋白質”成熟”型式亦可取 自後轉譯的修飾步驟。該其它方法包括（而不限於）：糖基 化作用、肉豆蔻醯基化或磷酸化。一般而言，成熟多肽或 蛋白質可由單獨一種此類方法、或彼之任何組合進行產生 〇 經濟部智慧財產苟資工消費合作社印製 在本發明之CRF2-13核酸，包含序列確認號碼：1之 核苷酸1 - 1 5 60的核酸序列、序列確認號碼：1本身、或此 類序列斷片之一的序列。此外，本發明包括序列確認號碼 :1之突變或變體核酸、或其斷片，可從展示於序列確認 號碼：1對應的鹼基改變任何鹼基，而仍編碼維持至少一 個類CRF2-13活性及生理功能（即調控血管生成作用、神 經元的發生）蛋白質之核酸序列。本發明進一步的包括序 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -61 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（ (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 列確認號碼：1核酸序列之互補體，包括其斷片、衍生物 、類似物以及同質物。本發明額外地包括核酸或核酸斷片 、或其補體，其構造亦包括經化學修飾後的構造。 本發明特色之一係關於分離的核酸分子，其係編碼 CRF213蛋白質或其具生物活性的部份。亦包括足以作爲 雜交探針以確認CRF2-13-編碼核酸（例如CRF2-13傳訊 RNA)之核酸斷片以及可作爲聚合酶連鎖反應（PCR)引子以 放大或突變CRF2-13核酸分子的斷片。本文中之”核酸分 子”包括去氧核糖核酸分子（例如：cDNA或基因體去氧核 糖核酸）、RNA分子（例如傳訊RNA)、使用核苷酸類似物 產生之去氧核糖核酸或RNA類似物、以及其衍生物、斷 片以及同質物。核酸分子可爲單股或雙股核酸分子，但較 佳者爲雙股去氧核糖核酸。 經濟部智慧財產局肖工消費合作社印製 “探針”意指各種長度之核酸序列，視其用途而定， 較佳者介於至少約10個核苷酸（nt)、100 nt、或多至約（例 如）6,000 nt。探針是用於偵測相同、相似的、或互補的核 酸序列。較長的探針通常是取自天然或重組來源，具有高 度專一性，且其雜交速度遠比寡聚物慢。探針可爲單股_ 或雙股的探針，並經設計使其具有PCR、膜雜交技藝、或 類酵素聯結免疫抗體檢測技藝之專一性。 “分離”的核酸分子係分離自天然來源核酸的其它核 酸分子。分離的核酸分子之實施例包括（但非限於）：內含 於載體之重組型去氧核糖核酸分子、異性的宿主細胞內維 持之重組型去氧核糖核酸分子、部份或相當純的核酸分子 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】〇X 297公楚） ' ' -62- 200300170 A7 B7 五、發明説明（ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、及合成的去氧核糖核酸或RNA分子。較佳之”分離的” 核酸不含源自該核酸的生物基因體去氧核糖核酸之天然鄰 接的核酸序列（即位於核酸5’及3’端之序列）。例如在各 種具體實施例中，分離的CRF2-13核酸分子所含之核苷酸 序列（係與取得該核酸的細胞基因體中去氧核糖核酸之核 酸分子自然相鄰）少於約5 0仟驗基、2 5仟鹼基、5仟驗基 、4仟鹼基、3仟鹼基、2仟鹼基、1仟鹼基、0.5仟鹼基 或〇· 1仟鹼基。此外，”分離的”核酸分子，例如cDNA 分子’當由重組技藝製作時，實質上並不含其他細胞材料 或培養基，或當以化學合成時不含化學前驅物或其它化學 樂品。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明之核酸分子，例如具有序列確認號碼：1之核 苷酸序列之核酸分子，或其補體，可使用分子生物學標準 技藝及在此提供之序列資料分離。使用所有或部份序列確 認號碼：1的核酸序列作爲雜交探針，可使用標準雜交及 選殖技藝分離CRF2-13核酸序列（例如描述於Sambrook et al·，eds·，MOLECULAR CLONING : A LABORATORY MANUAL 2nd Ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,
Cold Spring Harbor, NY，1989，及 Ausubel，et al·, eds·， CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons，New York，NY，1 993)。 本發明之核酸可使用cDNA、傳訊RNA或基因體去氧 核糖核酸作爲模版而與適當寡核苷酸引子依據標準PCR 放大技藝予以放大。放大的核酸可選殖入適當載體中進行 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -63- 200300170 Α7 Β7 五、發明説明（6d (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 去氧核糖核酸序列分析。此外，可用標準的合成技藝製備 對應至CRF2-13核苷酸序列之寡核苷酸，例如使用自動化 去氧核糖核酸合成儀。 本文中之”寡核苷酸”意指一系列聯結的核苷酸殘基 ，其寡核苷酸之核苷酸鹼基數目足供PCR反應使用。短 寡核苷酸序列可根據基因或cDNA序列而設計，並用以進 行放大、證實、或透露特定細胞或組織中相同、相似的 cDN A或RN A之存在。包含部份核酸序列之寡核苷酸長度 約 10 nt、50 nt、或 100 nt，較佳者約 15 nt 至 30 lit。具 體實施例之一中，包含少於1 00 nt長度之核酸分子的寡 核苷酸，將進一步的包含至少6個序列確認號碼：1、或 其補體鄰近的核苷酸。寡核苷酸可爲化學合成的寡核苷酸 ，並可作爲探針。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在另一具體實施例中，本發明分離的核酸分子包含序 列確認號碼：1的互補核苷酸序列，或此核苷酸序列部份 之核酸分子。互補至序列確認號碼：1之核苷酸序列的核 酸分子，爲可充分互補至序列確認號碼：1之核苷酸序列 ，可與序列確認號碼：1之核苷酸序列形成少有或無配對 錯誤之氫鍵，從而形成穩定的雙鏈體。 此本之”互補的”意指核酸分子之核苷酸單位間之 W a t s ο η - C r i c k或Η ο 〇 g s t e e η鹼基配對，本文中之”結合” 係指二種多胜肽或化合物或相關的多胜肽或化合物或其組 合間之物理或化學的交互作用。結合作用包括離子性 '非 離子性、凡得瓦性、忌水性交互作用等。物理交互作用可 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -64 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（61) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 爲直接或間接旳交互作用。間接的交互作用可爲經由或透 過另一多肽或化合物之效應。直接結合意指不經由或透過 另一多肽或化合物發生之效應，且無其它實質上的化學物 中介之交互作用。 此外’本發明之核酸分子可僅包含序列確認號碼：1 之核酸序列的一部份，例如可作爲探針或引子之斷片，或 編碼CRF2-13生物活性部份的斷片。本文中斷片之定義當 爲核酸時則爲長度足以允許專一雜交的至少6個（鄰近的） 核酸或當爲肢基酸時則爲長度足以允許專一的辨視抗原決 定部位之至少4個（鄰近的）胺基酸之序列，並少於全長之 序列。斷片可源自所選用之核酸或胺基酸序列上之任何鄰 近部份。衍生物係直接由天然化合物形成或爲經過修改或 部份取代後而形成之核酸序列或胺基酸序列。類似物爲具 有與天然化合物相似、但不完全相同結構之核酸序列或胺 基酸序列，其差異處爲某些成份或側鏈。類似物可爲合成 的或源自不同進化起源，且其代謝活性可類似於野生型或 與其相反。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 若衍生物或類似物含有如下述經修飾之核酸或胺基酸 ，則衍生物及類似物可涵蓋全長或非涵蓋全長。本發明之 核酸或蛋白質衍生物或類似物包括（但非限於）：包含實質 上同源於本發明核酸或蛋白質區域之分子，在各具體實施 例中，至少約有相同大小之核酸或胺基酸序列或當相較於 經技藝上已知的電腦同源現象程式校整的調準序列之70% 、80%、85%、90%、95%、98%、或甚至 99%之相似性（較 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX 297公釐） -65- 200300170 A7 B7 五、發明説明（62) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 佳之相似性爲80-99%)，或其編碼核酸能在迫切的、中度 迫切的、或低迫切條件下雜交至編碼上述蛋白質的互補序 歹U 。參閱仿!J 如 Ausubel，et al·，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, New York, NY? 1 99 3，以及下文。通常使用的程式爲Gap程式（Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for UNIX, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison, WI)之 預設値，其係使用S m i t h及W a t e r m a n算則（A d v · A p p 1. Math·，1981，2: 482-489，全文在此倂入參考文獻）。 經濟部智慧財產局資工消費合作社印製 “同源的核酸序列”或”同源的胺基酸序列”、或其 變異意指其特徵在於以上討論之核苷酸或胺基酸層次上之 同源現象的序列。同源的核苷酸序列係編碼CRF2-13多肽 異構型式之編碼序列。異構型式可爲表現於相同生物體之 不同組織的結果，例如，可變式剪接的RNA。此外，異 構型式可爲不同基因之編碼型式。在本發明中，同源的核 苷酸序列包括編碼人類之外，包括（但非限於）哺乳動物之 CRF2-1 3多肽的核苷酸序列，如此可包括例如：小鼠、大 白鼠、兔子、狗、貓、牛、馬、及其它生物體。同源的核 苷酸序列亦包括（但非限於）：天然對偶基因的變異及本文 之核苷酸序列的突變。同源的核苷酸序列不包括編碼人類 CRF2-13蛋白質之核苷酸序列。同源的核酸序列包括那些 編碼序列確認號碼：2中保留性胺基酸取代（參閱下文）， 與具有CRF2-13活性之多肽的核酸序列。CRF2-13蛋白質 的生物活性描述如下。同源的胺基酸序列不編碼人類 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -66- 200300170 A7 B7 五、發明説明（6分 CRF2-13多肽之胺基酸序列。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 從選殖人類CRF2-13基因測定之核苷酸序列可產生探 針及設計引子，應用於確認及/或選殖其他細胞型態（例如 從其它組織）之CRF2-13同系物，與從其它哺乳動物確認 及/或選殖CRF2-13同系物。探針/引子典型地包含相當純 的寡核苷酸。寡核苷酸典型地包含在迫切的條件下雜交至 至少約 12、25、50、100、150、200、250、300、350 或 400或更多連續不斷的序列確認號碼：1之同義股核苷酸 序列；或序列確認號碼：1 ;反義股核苷酸序列或序列確 認號碼：1天然突變的核苷酸序列區域。 經濟部智慧財產局员工消費合作社印製 針對人類CRF2-13核苷酸序列而設計之探針可用以偵 測轉錄產物或編碼相同或同源蛋白質的基因序列。在各種 具體貫施例中’探針可進一步的包含附著的標記基團，例 如可爲放射性同位素、螢光化合物、酵素、或酵素輔助因 子的標記基團。該探針可爲確認細胞或組織錯誤表現 C R F 2 -1 3蛋白質之診斷檢驗組套的一部份，例如從患者細 胞樣品中測量編碼C R F 2 -1 3核酸之水準，例如偵測C R F 2 -13之傳訊RNA含量或決定CRF2-13基因是否已發生突變 或刪除。 ‘‘ CRF2-1 3多肽具有生物活性的部份”意指展現相似 (但不必然地相同）活性的多胜肽，本發明多肽（包括成熟 型式）之活性，可用特定的生物檢定方法測定，彼具有或 不具有劑量依存性。編碼” CRF2-1 3生物活性部份，，的核 酸斷片其製備方法係分離編碼其具有CRF2-1 3生物的活性 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐1 " 一 " -67- 200300170 Μ Β7 五、發明説明（6$ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 多肽的序列確認號碼：1之一部份（CRF2-13蛋白質的生物 活性描述如下）、表現CRF2-1 3蛋白質編碼之部份（例如活 體外重組表現）並評估CRF2-13蛋白質編碼部份之活性。 例如，編碼CRF2-1 3生物活性部份的核酸斷片可視需要包 括：細胞素-結合結構區。在另一具體實施例中，編碼 CRF2-1 3生物活性部份的核酸斷片包括一個或多個區域。 在CRF2-13相關序列中之多型現象 本發明亦提供CRF2-13核酸序列的多形型式與在 CRF2-1 3序列中偵測多形序列的方法。多形型式包括對應 至外子及/或內子與CRF213基因相關的序列。多型現象可 提供於各種分離的CRF2-1 3核酸。例如，多形性可提供於 包含序列確認號碼：3個與至少1 0個鄰近核苷酸之分離 的多核苷酸，該多形序列展示於表6。此外，多形性可提 供於包含序列確認號碼：2與至少1 0個核苷酸之分離的 多核苷酸，包括另一型式之多形序列，展示於表9。 經濟部智慧財4^員工消費合作社印製 例如，分離的CRF2-1 3多形序列可包括序列確認號石馬 :3中之核苷酸3 095 7至核苷酸30967，其限制條件爲位 置3 0962爲“ Α或” G” 。在第二個實施例中，分離的 CRF2-13多形序列可包括序列確認號碼：3中從核苷酸 3 0650至核苷酸30660及至少10個鄰近的核苷酸，其限制 條件爲位置3065 5爲“ A”或” G” 。在其它實施例中’ 分離的CRF2-1 3核酸序列包括序列確認號碼：3中從核音 酸2 8 7 3 9至核苷酸2874 9及至少10個鄰近的核苷酸，其 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -68- 200300170 A7 _____B7
五、發明説明（W 中位置28744爲“ A”或” g” ；序列確認號碼：3中從核 苷酸28442至2 8452及至少1〇個鄰近的核苷酸，其中位 置28448爲‘‘ C”或” T” ；在其它實施例中，包括分離 的多核苷酸，其係包含序列確認號碼：3中從核苷酸942 1 至943 1及至少1 〇個鄰近的核苷酸，其中多核苷酸之位置 9426爲” A”或” G” ，或分離的多核苷酸，其係包含序 列確認號碼：3中從8806至8816及至少10個鄰近的核苷 酸，其中多核苷酸之位置8 811爲” C或” T” 。 此外，分離的CRF2-1 3多形序列可包括序列確認號碼 :22中之核苷酸3 29 54至核苷酸32964，其限制條件爲位 置3 0962爲“ C”或” A” 。此外，多形序列可包括序列 確認號碼：22之核苷酸3 1 262至3 1 272，其限制條件爲位 置3 1266爲“ C”或” T” ，·或序列確認號碼：22之核苷 酸3 09 5 5至20965，其限制條件爲核苷酸30960爲“ T”或 ” C” ；或序列確認號碼：22之核苷酸29043至29053， 其限制條件爲核苷酸29048爲“C”或” T” ；或序列確 認號碼：22之核苷酸2 874 8至2 87 5 8，其限制條件爲核苷 酸2 87 5 3爲“ G”或” A” ；或序列確認號碼：22之核苷 酸2 3 8 2 5至23 8 3 5，其限制條件爲核苷酸23830爲“ G” 或” A，，。 在其它具體實施例中，多形的核酸包括序列確認號碼 :3 鄰近的至少 15、20、25、50、75、100、150、250、 500、750、或1 000或更多個核苷酸。在某些具體實施例 中，多形的核苷酸序列之長度爲1 〇 -1 〇⑼個核苷酸。例如 本纸張尺度適用中國國家標举（CNS ) A4規格（2丨〇Χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) C. 訂 經濟部智慈財產局8工消費合作社印製 -69- 200300170 A7 B7 五、發明説明（ ，多形的核苷酸序列其長度可爲20-750核苷酸、50-625 核苷酸、75-500核苷酸、1 00-250核苷酸。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明中個人攜帶的多形對偶基因，可使用各種技藝 上已知的技藝在去氧核糖核酸、RNA、或蛋白質的層次上 偵測。鑑定及偵測之策略描述於例如：EP 7 30,663、EP 717,113、及PCT US 97/02 102。本發明方法通常使用預先 特徵化的多型現象。即，多形型式的基因所在之位置及其 本質已先行測定得知。得到此資料後可設計出鑑定習知的 多形型式的專一探針。 以下描述之許多方法需要從目標樣品中放大去氧核糖 核酸。此可例如經PCR.( 1 9 89)，B.完成以偵測多型現象。 參閱 PCR Technology : Principles and Applications for DNA Amplification(ed. H.A. Erlich, Freeman Press, NY, NY, 1992) ； PCR Protocols · A Guide to Methods and Applications(eds. Innis, et al.5 Academic Press, San Diego, CA; 1 990) ； Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19, 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 4967(1991) i Eckert et al., PCR Methods and Applications 1, 17(1991) » PCR(eds. McPherson el al., IRL Press, Oxford) ;及美國專利第4,683,202號。 診斷用之基因體去氧核糖核酸可得自任何體內之有核 細胞’例如存在於周邊血液、尿液、唾液、口頰的樣品、 外科檢體、及屍體解剖檢體。可直接使用去氧核糖核酸分 析突變或可經由PCR在活體外酵素地放大（Saild et al. Science 239 :487-49 1 ( 1 98 8))或可先使用其它活體外放大方 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -70- 200300170 A7 B7 五、發明説明（67) 法例如連接酶連鎖反應（L C R) ( W u a n d W a 11 a c e G e η 〇 m i c s 4:560-569( 1 989))、股置換放大（SDA)(WaIker et al. Proc. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
Natl. Acad· Sci. USA，89: 392-396(1992))、自主序歹!J 複製 (3SR)( Fahy et al. PCR Methods P&J& 1:25- 3 3 ( 1 992))後再 分析突變。 特定去氧核糖核酸序列中之多型現象可用各種方法偵 測，包括（但非限於）：根據對偶基因專一的限制核酸內切 酶切除進行之限制斷片長度多形性偵測（Kan and Dozy Lancet ii: 9 1 0-9 1 2( 1978))、與對偶基因專一的寡核苷酸探 針雜交（Wallace et al. Nucl· Acids Res. 6:3543-3 557 ( 1 97 8)) ，包括固定化寡核苷酸（Saiki et al. Proc. Natl. Acad. SCI. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 US A，86 : 6230-6234( 1 969))或寡核苷酸陣歹[J (Maskos and Southern Nucl. Acids Res 2 1:2269-2270( 1 99 3))、對偶基因-專一的 PCR(Newtonetal.NuclAcidsResl7:2503-2 5 1 6 ( 1 9 8 9))、錯配修復偵測（M R D) (F a h a m a n d C o x G e η o in e Res 5:474-482(199 5))、與 MutS 蛋白質之結合（Wagnei· et al· Nucl Acids Res 23:3 944-3 948( 1 995)、變性梯度膠體電泳 (DGGE)( Fisher and Lerman et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:1 579 - 1 5 83 ( 1 9 83))、單股-構像-多形性偵測（Orita et al. Genomics 5:874- 879( 1 983))、配對錯誤鹼基對之 RNAse 切除反應（Myers et al· Science 230:1242(1985))、 化學（Cotton ei al. Proc· Natl, w Sci· U.S.A，8Z4397- 440 1 ( 1 988))或酵素的切除異源雙鏈體去氧核糖核酸（Youil et al. Proc· Natl. Acad. Sci· U.S.A. 92:87-91(1995))、基於 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） -71 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 對偶基因專一的引子之延伸方法（S y v a n e n e t a 1. G e η 〇 m i c s 8:684-692(1990))、遺傳位元分析法（GBA)( Nikiforov et al. & & I A c i d s 2 2 : 4 1 6 7 - 4 1 7 5 ( 1 9 9 4))、寡核苷酸-聯結測定 (〇LA)( Landegren et al· Science 24 1:1 077( 1 9 8 8))、對偶基 因專一的聯結連鎖反應（LCR)( Barrany Proc. Natl. Acad. Sci· U.S· A· 88:1 89- 1 93( 1 99 1 ))、間隙- LCR(Abimy a et al. Nucl Acids Res 23 :675-682( 1 995))、使用技藝上已知的標 準程序之放射性及/或螢光去氧核糖核酸定序、以及肽核 酸（PNA)測定（Orum et al·，Nucl. Acids Res，21:5332-5356( 1 993) ； Thiede et al., Nucl. Acids Res. 24:983-984(1996))。 CRF2-13 變型 經濟部智慧財產¾¾工消費合作社印製 本發明進一步的包含序列確認號碼：1之核酸分子經 遺傳密碼退化現象而產生之不同核苷酸序列。此類核酸與 序列確認號碼：1展示之核苷酸序列編碼相同之CRF2-1 3 蛋白質，例如，序列確認號碼：2之多肽。在另一具體實 施例中，本發明之分離的核酸分子具有編碼展示於序列確 認號碼：2之胺基酸序列蛋白質的核苷酸序列。 除了序列確認號碼：1之人類CRF2-13核苷酸序列以 外，熟悉此技藝的專業人士將認知去氧核糖核酸序列多型 現象導致之CRF2.· 13胺基酸序列的改變可存在於族群之內 (例如人類族群）。由於天然對偶基因的變異，該CRF2-13 基因之遺傳多型性可存在於族群之個人中。本文中之”基 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2〗0X 297公釐） -72- 200300170 A7 B7 五、發明説明（69) 因”及”重組型基因”意指包含編碼CRF2-1 3蛋白質開放 編閱架構之核酸分子，較佳者爲哺乳動物的CRF2-13蛋白 質。該天然對偶基因的變異通常會導致CRF2-13基因中核 苷酸序列1 - 5 %之變異。因天然對偶基因的變異所產生之 任何及所有該核苷酸變異以及不改變C R F 2 -1 3的活性功能 之CRF2-13胺基酸多型現象均屬於本發明範圍。 此外，其它物種編碼CRF2-13蛋白質之核酸分子，均 係具有不同於人類之序列確認號碼：1的核苷酸序列，亦 屬於本發明之範圍。對應至天然對偶基因的變型以及本發 明CRF2-13cDNA同系物之核酸分子，可基於與揭示於此 之人類CRF2-13核酸的同源現象，使用人類CDNA(或其部 份）作爲雜交探針依據，標準雜交技藝在迫切的雜交條件 下加以分離。例如，可基於人類膜結合型CRF2-13之同源 現象分離可溶性人類CRF2-13cDNA。同樣地，可基於可 溶性人類CRF2-13之同源現象分離膜結合型人類CRF2-13cDNA 〇 據此，在另一具體實施例中，本發明分離之核酸分子 長度至少爲6個核苷酸，且可在迫切的條件下雜交至包含 序列確認號碼：1核苷酸序列之核酸分子。在另一具體實 施例中，核酸長度至少爲10、25、50、100、250、500或 7 50個核苷酸。在另一具體實施例中，本發明分離的核酸 分子可雜交至編碼區。本文中之“在迫切的條件下雜交” 描述之雜交及淸洗條件爲至少60%同源的核苷酸序列可保 持相互雜交的條件。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產苟員工消費合作社印製 -73- 200300170 Α7 Β7 五、發明説明（70) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 以所有或部份之特定人類序列作爲探針，使用技藝上 已知的核酸雜化作用及選殖方法進行低、中度或高迫切雜 交，即可得到同質物（即人類以外之物種編碼CRF2-1 3蛋 白質的核酸）或其它相關的序列（例如副同源體）。 經濟部智慧財4^7員工消費合作社印製 本文之片語“迫切的雜交條件”意指探針、引子或寡 核苷酸將雜交至目標序列，而非其它序列。迫切的條件具 有序列依存性，在不同情況下將爲不同。與較短的序列相 比較，較長的序列在較高的溫度下具有雜交的專一性。一 般而言，迫切的條件的選擇約爲特定的序列在定義的離子 強度及酸鹼度下低於其熱熔點（Tm) 5 °C。Tm是指平衡時（ 在定義的離子強度、酸鹼度及核酸濃度下），50%互補至目 標序列之探針雜交至目標序列的溫度。一般而言由於目標 序列均爲過量，在Tm下、平衡時有50%之探針與至目標 序列結合。典型的迫切條件爲，鹽濃度少於約1 .〇莫耳濃 度鈉離子，通常約0.01至1·0莫耳濃度鈉離子（或其它鹽 類），酸鹼度爲7.0至8.3，使用探針、引子或寡核苷酸（ 例如：10 nt至50 nt)時溫度至少約30°C以及使用較長的 探針、引子以及寡核苷酸時溫度至少約60t。加入去安 定劑例如甲醯胺亦可達成迫切的條件。 迫切的條件爲熟悉此技藝的專業人士所習知並可參見 CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY ' John Wiley & Sons、Ν·Υ·( 1 989)、6.3.1-6.3.6。較佳之條件中至 少約 6 5%、70%、75%、85%、9 0 %、9 5 %、9 8 %、或 9 9 % 同 源的序列可保持相互地雜交。迫切的雜交條件之非限制的 本紙張尺度適用中國國家標隼（CMS ) Α4規格（210Χ 297公釐） -74- 200300170 A7 B7 五、發明説明（71) 實施例是在包含6X SSC、50毫莫耳濃度 Tris-HCl(酸鹼 度 7.5)、1毫莫耳濃度乙二氨四醋酸、0.02 %PVP、 0.〇2%Ficoll、0.02%BSA、以及500毫克/毫升變性的鮭魚 精子去氧核糖核酸之高鹽緩衝溶液中、65 t下進行雜交 。雜交後以0.2X SSC、0.01%BSA在50°C下淸洗一次或多 次。本發明分離的核酸分子在迫切的條件可與序列確認號 碼：1之序列（相當於天然核酸分子）雑交。本文之”天然 發生的”核酸分子意指RNA或去氧核糖核酸分子，其具 有天然之核苷酸序列（例如編碼天然的蛋白質）。 在第二個具體實施例中，提供可與包含序列確認號碼 :1之核苷酸序列、或斷片、類似物或衍生物在中度迫切 之條件下雜交的核酸序列。中度迫切雜交條件之非限制的 實施例是在6X SSC、5X Denhardt's溶液、0.5%SDS以及 1 00毫克/毫升變性的鮭魚精子去氧核糖核酸、5 5 °C中雜 交，接著用用1XSSC、0.1%SDS在37°C下淸洗一次或多 次。可使用技藝上已知的其他中度迫切條件。參閱例如 Ausubel et al.(eds.), 1 993, CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, NY, and Kriegler, 1 990, GENE TRANSFER AND EXPRESSION, A LABORATORY MANUAL，Stockton Press，NY。 在第三個具體實施例中，提供可與包含序列確認號碼 :1之核苷酸序列、或斷片、類似物或衍生物在低迫切之 條件下雜交的核酸序列。低迫切雜交條件之非限制的實施 例是在35%甲醯胺、5X SSC、50毫莫耳濃度Tris-HCl (酸 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（2】0X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁〕 -、·1Τ 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製 -75- 200300170 A7 B7 五、發明説明（72) 鹼度7.5)、5毫莫耳濃度乙二氨四醋酸、0.02 % PVP、 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ◦ •02%FicoU、0.2%BSA、100毫克/毫升變性的鮭魚精子去 氧核糖核酸、10%(wt/vol)右旋聚醣硫酸酯、40°C中雜交， 接著用2X SSC、25毫莫耳濃度Ti.is-HCl(酸鹼度7.4)、5 毫莫耳濃度乙二氨四醋酸、以及0.1 %SDS在50t下淸洗 一次或多次。可使用技藝上已知的其他低迫切（例如使用 跨種間之雜交）條件。參閱例如A u s u b e 1 e t a 1. (e d s.)，i 9 9 3， CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, NY, and Kriegler, 1 990, GENE TRANSFER AND EXPRESSION, A LABORATORY MANUAL, Stockton Press, NY ； Shilo and Weinberg, 1981, Proc Natl Acad Sci USA 78 : 6789-6792。 保留性突變 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印災 除了存在於族群中之CRF2-13序列天然的對偶基因的 變型之外，熟悉此技藝之專業人士將進一步的認知，在序 列確認號碼：1中引入突變可改變核苷酸序列，從而改變 編碼之CRF2-13蛋白質的胺基酸序列，而不改變CRF2-13 蛋白質之功能。例如，可在序列確認號碼：1之序列的” 非本質上的”胺基酸殘基上進行核苷酸取代導致胺基酸取 代。“非本質上的”胺基酸殘基，是指可在野生型CRF2-1 3序列上進行改變而不會改變生物活性的殘基，”本質 上的”胺基酸殘基則是具有生物活性所必需之殘基。例如 ，本發明CRF2-1 3蛋白質中守恆之胺基酸殘基則是被預測 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -76 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（73) 爲不可改變之殘基。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之另一特色係關於含有改變本質上非活性所必 需之非本質上的胺基酸殘基之編碼CRF2-13蛋白質的核酸 分子。該CRF2-13蛋白質不同於序列確認號碼：2之胺基 酸序列，但仍保有生物的活性。在具體實施例之一中，分 離的核酸分子包含編碼蛋白質之核苷酸序列，其中該蛋白 質包含與序列確認號碼：2之胺基酸序列至少約有7 5 %同 源的胺基酸序列。較佳者，核酸編碼之蛋白質與序列確認 號碼：2至少約有8 0 %的同源性，更佳者與序列確認號碼 :2至少約有90%、95%、98%、最佳者至少約有99%的同 源性。 在序列確認號碼·· 1之核苷酸序列中進行一種或多種 核苷酸取代、添加或刪除作用，可產生一種或多種胺基酸 取代、添加或刪除之編碼蛋白質，可創造出與序列確認號 碼·· 2同源的編碼CRF2-13蛋白質之核酸分子。 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 可用標準技藝，例如：定點突變及PCR-調節的誘變 在序列確認號碼：1之核苷酸序列中引入突變。較佳者是 在一個或多個預測之非必需胺基酸殘基進行保留性胺基酸 取代。”保留性胺基酸取代”是用具有相似側鏈的胺基酸 殘基取代現行的胺基酸殘基。在此技藝中已對具有相似側 鏈的胺基酸殘基族作出定義。此類家族的胺基酸包括鹼性 側鏈（例如：離胺酸、精胺酸、組織胺酸）、酸性的側鏈（ 例如：天門冬胺酸、麩胺酸）、未帶電價的極性側鏈（例如 :甘胺酸、天門冬醯胺酸、麩胺醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） •77- 200300170 A7 B7 五、發明説明（74) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、酪胺酸、半胱胺酸）、非極性側鏈（例如··丙胺酸、纈胺 酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、 色胺酸）、/?-分支的側鏈（例如：蘇胺酸、纈胺酸、異白 胺酸）以及芳香族側鏈（例如：酪胺酸、苯丙胺酸、色胺 酸、組織胺酸）。因此’在CRF2-13中預定的非必需胺基 酸殘基可爲另一具有相同側鏈家族之胺基酸殘基取代。此 外，在另一具體實施例中’可沿著所有或部份之CRF2-13 編碼序列隨機地引入突變’例如：經飽和誘變，並在產生 的突變體中篩選CRF2-13的生物活性以確認突變體仍保留 活性。序列確認號碼：1誘變後，編碼之蛋白質可用任何 技藝上已知的重組技藝表現，且可測定蛋白質活性。 經濟部智慧財產咼員工消費合作社印製 在具體實施例之一中，可測定突變CRF2-13蛋白質之 (1)與其它CRF2-13蛋白質、其他細胞表面蛋白質、或其 生物活性的部份形成蛋白質：蛋白質交互作用之能力、（2) 突變CRF2-13蛋白質及CRF2-13受體之間形成複合體之能 力；（3)突變CRF2-13蛋白質結合至細胞內的目標蛋白質 或其生物活性的部份；（例如：卵白素蛋白質）之能力；（4) 結合CRF2-13蛋白質之能力；或（5)特別地結合抗- CRF2-1 3蛋白質抗體之能力。 反股CRF2-13核酸 本發明之另一特色係關於分離的反股核酸分子，其係 可雜交或互補至包含序列確認號碼：1、或斷片、類似物 或其衍生物的核苷酸序列之核酸分子。”反股”核酸包含 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -78- 200300170 A7 B7 五、發明説明（75) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 互補的至編碼蛋白質”正股”核酸之核苷酸序列，例如互 補的至雙股c D N A分子的密碼股或互補至傳訊R N A序列 。在特定的特色中，反股核酸分子其限制條件爲互補至包 含全部的CRF2-1 3密碼股’或僅爲其部份的至少約1 0、 25、50、1〇〇、250或500個核苷酸之序列。本發明額外地 提供編碼序列確認號碼：2之CRF2-13蛋白質的斷片、同 質物、衍生物以及類似物的核酸分子，或互補至CRF2-13 序列確認號碼：1之核酸序列的反股核酸。 在具體實施例之一中，反股核酸分子是與編碼CRF2-1 3核苷酸序列的密碼股之”編碼區”反義。本文中之” 編碼區”意指包含轉譯成胺基酸殘基（例如：相當於序列 確認號碼：2之人類CRF2-13的蛋白質編碼區）的密碼子 之核苷酸序列的區域。在另一具體實施例中，反股核酸分 子是與編碼CRF2-1 3核苷酸序列密碼股之”非編碼區”反 義。本文中之“非編碼區”意指鄰接編碼區不轉譯成胺基 酸（即亦稱爲5’及3’未轉譯區域）之5’以及3’序列。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 給定的編碼CRF2-1 3之密碼股序列揭示於此（例如： 序列確認號碼：1)，可依據W a t s ο η及C1· i c k或Η ο 〇 g s t e e η 鹼基配對法則設計本發明之反股核酸。反股核酸分子可互 補至CRF2-]3傳訊RNA全部的編碼區，但更佳之反股核 酸是僅互補至CRF2-13傳訊RNA部份編碼或非編碼區之 寡核苷酸。例如，反股寡核苷酸可互補至CRF2-13傳訊 RNA轉譯作用起始位點周圍的區域。反股寡核苷酸可（例 如）約 5、1〇、15、20、25、3〇、35、40、45 或 50 個核苷 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -79- 200300170 A7 B7 五、發明説明（76) 酸長。本發明之反股核酸可使用技藝上已知的程序以化學 的合成或酵素的聯結反應加以構築。例如，化學地合成反 股核酸（例如反股寡核苷酸）時可使用天然核苷酸或各種經 修飾之核苷酸（例如：偶磷基硫代酸酯衍生物及經吖啶取 代的核苷酸）以增加分子生物的穩定性或增加反股及正股 核酸之間雙鏈體形成之理穩定性。 用以產生反股核酸之經修飾的核苷酸實施例可包括： 5 -氟尿嘧啶、5 ·溴尿嘧啶、5 -氯尿嘧啶、5 ·碘尿嘧D定、次 黃嘌D令、黃嘌啥、4 -乙醯基胞D密D定、5 -(竣基經甲基）尿口密 啶、5 -羧曱基胺甲基-2 -硫尿苷、5 -羧甲基胺甲基尿嘧啶、 —•氨尿1:1密D定、/5 - D -半乳糖基庫辛（q u 〇 s i n e)、肌若、N 6 -異 戊烯基腺嘌呤、1 -甲基鳥糞嘌呤、1 -甲基肌苷、2，2 ·二甲 基鳥糞嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥糞嘌呤、3-甲基胞 嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鳥糞嘌呤、5-甲 胺基甲基尿嘧啶、5-甲氧基胺甲基-2-硫尿嘧啶、冷-D-甘 露糖基庫辛（quosine)、5’ -甲氧基錢甲基尿P密π定、5 -甲氧基 尿嘧啶、2-甲硫基-N6-異戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙 酸（v)、韋布速辛（w y b u ί 〇 s 〇 s i n e)、僞尿嘧啶、庫辛（g u 〇 s i n e) 、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、硫尿 嘧啶、5 -甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5 -氧基乙酸甲基酯、尿嘧 啶-5-氧基乙酸（ν)、5 -甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-胺基-3-Ν-2-羧丙基）尿嘧啶、Ucp3)w、及2,6·二胺基嘌呤。此外，反 股核酸可用次選殖反股方向（即轉錄以反股方向插入目標 核酸，將於下一小節描述）之表現載體生物地製作。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -80- 200300170 A7 ___ 五、發明説明（77) 本發明之反股核酸分子通常投用於患者或可在患者身 上原位產生，彼可雜交或結合至細胞的傳訊RNA及/或編 碼C R F 2 -1 3蛋白質之基因體去氧核糖核酸，從而抑制蛋白 質之表現，例如：抑制轉錄及/或轉譯作用。雜交可爲習 見的核苷酸互補以形成穩定的雙鏈體，或例如經由雙螺旋 主要溝槽特定的交互作使反股核酸分子結合至去氧核糖核 酸雙鏈體。本發明反股核酸分子投藥路徑之實施例包括直 接在組織位點注射。此外，反股核酸分子可經修飾以標定 選擇的細胞後全身性的投用。例如，全身性投藥時，反股 分子可經修飾，使彼可專一地結合至選擇細胞表面表現的 受體或抗原的，例如將反股核酸分子聯結至可結合至細胞 表面受體或抗原之肽類或抗體。反股核酸分子亦可使用在 此描述之載體運送至細胞。爲了達成反股分子在細胞內充 分的濃度，較佳的載體構築體中反股核酸分子係置於強烈 的pol II或pol III啓動子的控制之下。 在另一具體實施例中，本發明之反股核酸分子是α -變旋異構的核酸分子。α -變旋異構的核酸分子是與互補 RNA形成雙股雜交的特定型式，與一般的/5 -單位相反， 各股相互平行（Gaultier et al.(1987)Nucleic Acids Res 15 : 6625 _ 664 1 )。反股核酸分子亦可包含2’-鄰甲基核糖核苷酸 (Inoue et al.( 1 987)Nucleic Acids Res 15 : 6131-6148)或嵌 合的R N A -去氧核糖核酸類似物（模擬）（I η ο u e e t al.( 1 9 87)FEBS Lett 215 ·* 3 27 - 3 30)。 該修飾包括（非限制之實施例）：修飾鹼基、以及核酸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公釐） (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· 、-5口 經濟部智悲財產局員工消費合作社印製 -81 - 200300170 Μ Β7 五、發明説明（78) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ，將其糖磷酸鹽骨幹修飾或衍生化。此類修飾至少可部份 地增進經修飾之核酸的化學穩定性，使彼可作爲例如反股 結合核酸用於治療患者。 CRF2-13核糖酶及ΡΝΑ部份 經濟部智慧財產局負工消費合作社印製 在另一個具體實施例中，本發明之反股核酸是核糖酶 。核糖酶是具有核糖核酸酶活性之催化性RNA分子，其 能切斷具有互補區域的單股核酸，例如傳訊RNA。因此 ，核糖酶（例如鍵頭核糖酶，描述於H a s e 1 h 〇 f f a n d Gerlach( 1 988)Nature 334:5 85 -591)可用以催化分解 CRF2-13 傳訊RNA轉錄本，從而抑制CRF2-13傳訊RNA之轉譯作 用。可根據揭示於此之CRF2· 13去氧核糖核酸的核苷酸序 歹ϋ (即序列確認號碼：1)設計CRF2-13專一的核糖酶之編 碼核酸。例如，可構築四膜蟲屬之L-19 IVS RNA衍生物 ，其活性部位之核苷酸序列係互補至編碼CRF2-1 3傳訊 RNA中被分解之核苷酸序列。參閱例如：Cech et al.之美 國專利第4,987,07 1號；以及Cech et al.之美國專利第 5，1 1 6,742號。此外，可使用CRF2-13之傳訊RNA從一群 RNA分子中選擇岔具有專一核糖核酸酶活性之催化的 R N A。參閱例如：631七1〇121.，（ 1 993)8(^611。€261:1411-1 4 1 8 0 此外，標定核苷酸序列互補至CRF2-1 3的調控區域（ 例如CRF2-13啓動子及/或增強子）可形成三倍的螺旋狀的 構造以預防標的細胞中CRF2-1 3基因之轉錄，可抑制 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X 297公釐） ' -82- 200300170 A7 B7 五、發明説明（79) ----------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} CRF2-13 基因的表現。參閱 Helene.(199i)Anticancei. Drug Des. 6 ： 569-84 ； Helene, et al.(l992)Ann. N.Y. Acad. Sci. 660:27-36;以及 Mahei‘（ 1992)Bioassays 1 4: 807- 1 5。 在各種具體實施例中，CRF2-13核酸可在鹼基部份、 醣側鍵或磷酸鹽骨幹修飾，以改良（例如）分子之穩定性、 雜交、或溶解度。例如，核酸之去氧核醣磷酸鹽骨幹可經 修飾產生肽核酸（參閱 Hyrup et al.(1996)Bioorg Med Chem 4 : 5-23)。本文中之”肽核酸”或” PNAs”意指核酸模仿 劑，例如去氧核糖核酸模仿劑，其中去氧核醣磷酸鹽骨幹 經僞肽骨幹取代，只保留四稱天然的鹼基。PNA的中性骨 幹可允許去氧核糖核酸及RN A在低離子強度下進行特定 的雜交。可使用標準固相肽合成準則合成PNA寡聚物， 其進行描述於以上之 Hyrup et al.( 1996) ; Perry-O’Keefe et al.( 1 996)PNAS 93 : 14670-675。 #1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 CRF2-1 3之PNA可用於治療及診斷。例如PNA可作 爲反股或抗原劑進行序列專一的調控基因表現，例如：誘 導轉錄或轉譯作用，遏止或抑制複製。亦可用CRF2-13之 P N A，例如分析基因中單一的鹼基對突變，例如：作爲 PNA定向的PCR鉗；結合其它酵素（例：S1核酸酶）作爲 人造的限制酶（以上之Hyrup Β·( 1 996));或作爲去氧核糖 核酸序列之探針或引子以進行雜交（以上之Hyrup et al.( 1 996);以上之 Pen-y-〇’Keefe( 1 996))。 另一具體實施例中，CRF2-13之PNA可經修飾，例如 :附著在親脂性或其它PNA之輔助基團、形成PNA-去氧 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A.4規格（210><297公釐） -83- 200300170 A7 _ B7 五、發明説明（80) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 核糖核酸嵌合體、或使用脂球體或其它技藝上已知的藥物 傳輸技藝，以增進其穩定性或細胞的攝入。例如，CRF2_ 13之PNA-去氧核糖核酸嵌合體可具有PNA及去氧核糖核 酸的有利性質。該嵌合體允許去氧核糖核酸辨視酵素，例 如：R N a s e Η以及去氧核糖核酸聚合酶，與去氧核糖核酸 部份交互作用時ΡΝΑ部份將提供高結合親和力及特異性 。PNA·去氧核糖核酸嵌合體可考量鹼基堆疊、鹼基間之 鍵結數目、及方向，選擇適當長度的連結子加以聯結（以 上之Hyrup( 1 996))。合成PNA-去氧核糖核酸嵌合體係描 述於以上之 Hyrup(1996)及 Finn et al.(1996)Nucl Acids Res 24 : 3 3 5 7 - 6 3。例如，可在固體支持物上使用標準胺磷酸 偶合化學，及經修飾之核苷類似物，例如·· 甲氧基 三苯甲基）胺基'V去氧基-胸腺嘧啶胺磷酸，在PNA及5’ 經濟部智^財產^貝工消費合作社印製 端之去氧核糖核酸之間合成去氧核糖核酸鏈（Mag et al.( 1 989)Nucl Acids Res 1 7 : 5973- 8 8)。然後將 PNA 單體 逐步的耦合產生具有5’PNA片段及3’去氧核糖核酸片段的 嵌合分子（以上之Finnetal.(1996))。此外，嵌合的分子可 用5f去氧核糖核酸片段及3’PNA片段合成。參閱
Petersen el al.(1975)Bioorg Med Chem Lett 5 ： 1119-11124 〇 在其它具體實施例中，寡核苷酸可包括其它附加的基 團例如肽類（例如可在活體內導向宿主細胞受體），或促進 運輸通過細胞膜（參閱例如：L e t s i n g e 1· e 1 a 1 ·，1 9 8 9，P1· 〇 c . Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:6553-6556 » Lem ait re et al., 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -84- 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製 200300170 Μ Β7 五、發明説明（81) 1 9 87, Proc. Nat!. Acad. Sci. 84··648- 65 2 ; PCT 公布號碼 W088/09 8 1 0)或血腦屏障（參閱例如：PCT公布號碼 W089/ 1 0 1 34)之藥劑。此外，寡核苷酸可經雜交觸發之切 除劑（參閱例如：Krol et al·，1 9 8 8，BioTechniques 6:95 8-976))或插入劑（參閱例如：Zon，1 98 8, Pham. Res. 5 : 539-5 4 9)加以修飾。此時寡核苷酸可聯結至另一分子，例如： 肽、雜交觸發之交聯劑、運輸劑、雜交觸發之切除劑等。 CRF2-13多胜肽 本發明之CRF2-13多肽包括類CRF2-13蛋白質其序列 提供於序列確認號碼：2。在某些具體實施例中，CRF2-13 多肽包括序列確認號碼：2之胺基酸序列2 1 -520、胺基酸 2卜230，序列確認號碼：2之胺基酸2 1 -246、序列確認號 碼：2之胺基酸23 1 - 5 20 : 2、序列確認號碼：2之胺基酸 247-5 20。本發明亦包括揭示於CRF2-13多肽之突變或變 種型式，或揭示於CRF2-13多肽序列之任何斷片。 因此，C R F 2 -1 3多肽所包括之編碼蛋白質其任何殘基 可改變自序列確認號碼：2對應的殘基而仍維持其類 CRF2-13活性及生理功能，或其功能性的斷片。在某些具 體實施例中，突變或變種蛋白質有多至2 0 %或更多之殘基 可加以改變。在某些具體實施例中，依據本發明之CRF2-1 3多肽爲成熟多肽。 —*般而§類保存類CRF2-13功能之CRF2-13變種包^舌 序列中特定位置的殘基已經其它胺基酸取代的任何變種， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐1 ~ ' -- -85- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 、訂 200300170 A7 B7 五、發明説明（82) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 以及進一步的包括插入額外的殘基或在母（體）蛋白質的二 個殘基之間插入殘基的可能性與從母（體）的序列刪除一個 或多個殘基的可能性。本發明包含任何胺基酸之取代、插 入、或刪除。在有利的情況下，取代是定義如上之保留性 取代。 本發明特色之一係關於分離的CRF2-13蛋白質，以及 其生物活性的部份、或其衍生物、斷片、類似物或同質物 。本發明亦提供適用於作爲免疫原產生抗_CRF2-13抗體 之多肽斷片。在具體實施例中，天然的CRF2-1 3蛋白質可 使用標準蛋白質純化技藝經適當的純化流程分離自細胞或 組織。在另一具體實施例中可用重組去氧核糖核酸技藝製 作CRF2-13蛋白質。重組表現之外，可使用標準肽合成技 藝化學地合成CRF2-13蛋白質或多肽。 經濟部智慈財產苟員工消費合作社印製 “純化的”蛋白質或其生物活性部份實質上不含細胞 的材料或CRF2-13蛋白質來源細胞或組織之其它雜質蛋白 質’或當化學地合成時實質上不含化學前驅物或其它化學 藥品。”實質上不含細胞的材料”包括CRF2-13蛋白質製 劑’其中蛋白質係分離自分離的或重組製成之細胞的細胞 成份。在具體實施例中，”實質上不含細胞的材料，，包括 CRF2 -1 3蛋白質製劑，其係具有少於約3 0 % (乾重）之非 CRF2-13蛋白質（亦稱爲”雜質蛋白質”），較佳者少於約 20%之非CRF2-13蛋白質，更佳者少於約10%之非CRF2. 13蛋白質，最佳者少於約5%之非CRF2-13蛋白質。當 CRF2-1 3蛋白質或其生物活性部份係經重組製作時，較伴 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -86- 200300170 Μ Β7 五、發明説明（83) 者實質上亦不含培養基，即蛋白質製劑中少於約20%，更 佳者少於約1 0 %，最佳者少於約5 %之培養基體積。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) “實質上不含化學前驅物或其它化學藥品”包括 CRF2-13蛋白質製劑，其中蛋白質係分離自涉及蛋白質合 成之化學前驅物或其它化學藥品。在具體實施例中，“實 質上不含化學前驅物或其它化學藥品”包括CRF2-13蛋白 質製劑，其係具有少於約30%(乾重）之化學前驅物或非 CRF2-13之化學藥品，更佳者少於約20%的化學前驅物或 非CRF2-13之化學藥品，再更佳者少於約10%的化學前驅 物或非CRF2-13之化學藥品，最佳者少於約5%的化學前 驅物或非CRF2-13之化學藥品。 經濟部智慧財產局員工涓費合作社印製 CRF2-1 3蛋白質生物活性咅(Η分包括包含胺基酸序歹U充 分的同源的至或源自CRF2 1 3蛋白質之胺基酸序列的肽類 ，例如包括較展示於序列確認號碼：2全長CRF2-1 3蛋白 質之胺基酸序列少幾個胺基酸，並展現至少一個CRF2-13 蛋白質活性之序列。典型的生物活性部份包含至少一個 CRF2-13蛋白質活性之結構區或基元。CRF2-13蛋白質生 物活性部份可爲例如1 0、25、50、1 00或更多個胺基酸長 度之多 。 本發明之CRF2-13蛋白質生物活性部份可含有至少〜 個CRF2-1 3蛋白質之間上述確認之守恆結構區。此外，刪 除蛋白質其它區域之其它生物活性部份，可用重組技藝製 備並評估其一種或多種天然的CRF2-13蛋白質功能的活性 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2】0Χ 297公釐） -87- 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（84) 在具體實施例中，CRF2-13蛋白質具有展示於序列確 認號碼：2之胺基酸序列。在其它具體實施例中，CRF2-1 3蛋白質係由於天然的對偶基因的變異或誘變（詳細描述 於下）產生之不同的胺基酸序列而實質上同源至序列確認 號碼：2以及保留序列確認號碼·· 2蛋白質的功能活性。 據此在另一具體實施例中CRF2-13蛋白質是包含至少約 45%同源至序列確認號碼：2胺基酸序列之胺基酸序列以 及保留序列確認號碼：2之CRF2-1 3蛋白質的功能活性之 蛋白質。 決定介於兩種或多種序列之間的同源現象 爲了測定二種胺基酸序列或二種核酸之同源現象百分 比，其係將序列以最理想的比對加以調準（例如可在比較 之序列引入間隙進行序列之間最理想的校整）。然後比較 對應的胺基酸位置或核苷酸位置之胺基酸殘基或核苷酸。 當第一序列位置佔據第二序列中對應位置的相同胺基酸殘 基或核苷酸時，則代表分子在此位置是同源的（即此處之 胺基酸或核酸是”同源的”等於胺基酸或核酸是”相同的 ，，）° 核酸序列同源現象可用二種序列之間的相同程度測定 。同源現象可使用技藝上已知的計算機程序測定，例如 GCG套裝程序提供之GAP軟體。參閱Nee diem a n and Wunsch 1 97 0 J Mol Biol 48 : 443-453。使用 GCG GAP 軟 體及下列之核酸序列比對設定：GAP創造處罰爲5.0以及 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣.
、1T #1 -88- 200300170 A7 B7 五、發明説明（85) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) GAP延伸處罰爲0.3，上數之同功的核酸序列之編碼區較 佳者與序列確認號碼：1之DNA序列的CDS(編碼）部份展 現至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、或 99% 之程度的相同性。 本文中之“序列相似性”意指二種多核苷酸或多肽序 列在特定的區域經殘基-至-殘基比對後之相同的程度。本 文中之”序列相似性百分比”其計算係在比對區域比較二 種最理想的調準序列，決定此二序列在相同核酸鹼基（以 核酸例，例如：A、T、C、G、U、或I)位置之數目，產生 相配位置之數目，將相配位置之數目除以比對區域位置之 總數（即視窗大小），以及將結果乘以1 〇〇即產生序列相似 性之百分比。本文中之“實質上相同“係表示聚核苷酸序 列之特性，其中多核苷酸包含之序列當相較於參考序列之 比對區域具有至少有百分之80的序列相似性，較佳者至 少有百分之85的序列相似性以及常見的百分之90至95 的序列相似性，更常見的至少百分之99的序列相似性。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本文中之“正性殘基百分比”其計算係在比對區域比較二 種最理想的調準序列，決定此二序列在相同及保留性胺基 酸取代（定義如上）位置之數目，產生相配位置之數目，將 相配位置之數目除以比對區域位置之總數（即即視窗大小） ，以及將結果乘以1 00即產生正性殘基之百分比。 嵌合型及融合型蛋白 本發明亦提供CRF2-13嵌合型或融合型蛋白。本文之 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -89- 200300170 A7 B7 五、發明説明（_ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) CRF2-13”嵌合型蛋白質”或”融合型蛋白”包含操作性 聯結至非CRF2-13多肽之CRF2-13多肽CRF2-13多肽 ”意指具有對應至CRF2· 1 3胺基酸序列之多肽，而“非 CRF2-13多肽”意指具有對應至非實質上同源至CRF2-13 蛋白質的胺基酸序列之多肽’例如源自相同或不同生物體 ，不同於CRF2-13之蛋白質。CRF213融合型蛋白內 CRF2-13多肽可相應至CRF2-13蛋白質之全體或部份。 CRF2-1 3融合型多肽實施例之一是包括序列確認號碼：2 之胺基酸2卜230(例如包括序列確認號碼：2胺基酸1-246 或胺基酸2 1 -246之多肽）。在具體實施例中，CRF2-13融 合型蛋白包含至少一個CRF2-13蛋白質生物活性部份。另 一具體實施例中，CRF2-13融合型蛋白包含至少二個 CRF2-13蛋白質生物活性部份。融合型蛋白中，本文中之 “操作性聯結”意指CRF2-13多肽以及非CRF2-13多肽相 互融合在同架構上。非CRF213多肽可融合至CRF2-13多 肽的N -端或C -端。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 例如，具體實施例中CRF2-1 3融合型蛋白包含操作性 聯結至第二個蛋白質（即非CRF2-13蛋白質）細胞外的結構 區，或第二個蛋白質橫越細胞膜及細胞內的結構區（即非-CRF2-13蛋白質）之CRF2-13多肽。該融合型蛋白可進一 步的用於篩選測定法調控CRF2-1 3活性之化合物（例如詳 細描述於下文）。 另一具體實施例中，融合型蛋白是GST-CRF2-13融 合型蛋白，其中CRF2-13序列係融合至GST(即谷胱甘肽 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -90- 200300170 A7 B7 五、發明説明（87) S-轉移酶）序列C-端。該融合型蛋白可增進重組CRF2-13 之純化。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 另一具體實施例中，融合型蛋白是CRF2-13-免疫球 蛋白融合型蛋白，其中包含一個或多個結構區之CRF2-13 序列係融合至源自免疫球蛋白蛋白質家族之序列。 本發明之CFR2-13融合型蛋白（例如CRF2-13-免疫球 蛋白融合型蛋白）可倂入藥學組成物並投用於患者以抑制 或增大細胞表面受體及其配體間之交互作用。此現象發生 係因爲1)結合在及去除受體可得到的配體（Fc調節下的淸 除配體影響之生物效性）；2)結合至配體以及阻斷其結合 至細胞受體之能力（拮抗或中和）；3)與另一 CRF家族成員 結合以及從而調控（例如抑制）下游訊息傳遞之串聯反應； 4)與配體或另一 CRF結合以及促進配體活性。經由所有 此類機制，CRF2-13蛋白質可用於調控CRF2受體及其同 源配體間之交互作用（例如IL-10及IL-10受體間之交互作 用以及IL-22以及IL-22受體間之交互作用）。 經濟部智慧財產咼員工消費合作祛印製 抑制CRF2-13配體/CRF2-13間之交互作用可用於治 療增殖性以及分化性之病症，例如：癌症、調控（例如促 進或抑制）細胞倖存與免疫調控之病症、自體免疫性病症 '移植、及改變細胞激動素及化學激素串聯反應機制之發 炎病症。此外，本發明之CRF2· 13-免疫球蛋白融合型蛋 白可作爲免疫原在患者身上產生抗-CRF2-13抗體，純化 CRF2-13配體、以及在篩選測定法中確認抑制CRF2-13與 CRF2-13配體交互作用之分子。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） - 91 - 200300170 A7 ___ B7 五、發明説明（88) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明的CRF2-13嵌合或融合型蛋白可用標準重組去 氧核糖核酸技藝製作。例如將編碼不同多肽序列之去氧核 糖核酸斷片依據習見的技藝共同連結在同架構上，例如使 用鈍端的或交錯端進行聯結，以限制酶水解提供適當的端 點’適當的話可將黏性端充塡補滿，以鹼性磷酯酶處理避 開不令人滿意的聯結，以及進行酵素的聯結。在另一具體 實施例中，融合基因可用習見的技藝合成，包括自動化去 氧核糖核酸合成儀。此外，可使用互補至二個連續基因斷 片之間突出部份的錨狀引子以PCR放大基因斷片，接著 可進行退火及再放大以產生嵌合的基因序列（參閱例如： Ausubel et al. (eds.)CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BI〇L〇G Y，J o h n W i 1 e y & S ο n s，1 9 9 2)。此夕t ，言午多編碼融 合部份（例如GST多肽）之表現載體可市售得之。編碼 CRF2-13的核酸可選殖入該表現載體，其中該融合部份與 CRF2-13蛋白質係聯結在同架構上。 多肽基因庫 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 此外，CRF2-13蛋白質斷片編碼序列之基因庫可用以 產生各種群體之CRF2-13斷片以篩選並於之後選擇CRF2-1 3蛋白質變種。在具體實施例之一中，產生編碼序列斷 片之基因庫的方法是在每分子僅約發生一個缺口之條件下 將一段CRF2-1 3編碼序列之雙股PCR斷片以核酸酶反應 ，將雙股DN A變性，使DN A回復本性以形成雙股的 DN A(其可包括來自不同缺口的產物之正股/反股對），將再 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -92- 200300170 A7 B7 五、發明説明（89) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 所形成之雙股體用S 1核酸酶處理以去除單股部份，再將 所產生的斷片基因庫聯結於表現載體。藉由此方法可產生 表現型基因庫，其可編碼CRF2-13蛋白質之N-端及內部 各種大小斷片。 在此領域中有許多已知的技術可舖選由點突變或截斷 法製作的組合基因庫的基因產物，及篩選互補DNA基因 庫中具有所需性質的基因產物。該技藝可快速篩選由 CRF2-13蛋白質經組合誘變所產生的基因庫。篩選龐大基 因庫最常用的技藝（能進行高效能之分析）一般包括：將基 因庫選殖入可複製的表現載體止、將載體產生的基因庫轉 形入適當的細胞、以及在能測出對分離編碼偵測產物的基 因之載體有助益的活性之條件下表現組合基因。遞迴合作 誘變（一種基因庫中功能性突變體頻率的新技術）可與篩選 測定法結合來確認CRF2-13變體（Arkin and Yourvan( 1 992)PNAS 89:7 8 1 1 -7 8 1 5 ； Delgrave et al.(1993)Protein Engineering 6:327-331) o 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 CRF2]3抗體 本發明亦包括CRF2-13蛋白質、或CRF2-13蛋白質斷 片之抗體。本文中之“抗體”意指免疫球蛋白分子以及免疫 球蛋白（Ig)分子的免疫活性部份，即含有能與抗原專一結 合（免疫反應）之抗原結合部位的分子。該抗體包括（但非 限於）：多株的、單株的、嵌合的、單鏈、Fab、Fab’及 F(ab’）2斷片、及Fab表現型基因庫。一般而言，抗體分子 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' -93- 200300170 Α7 Β7 五、發明説明（9() (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 係源自相關於人類的任何種類：免疫球蛋白G、免疫球蛋 白M、免疫球蛋白A、免疫球蛋白E及免疫球蛋白D，其 分子重鏈的本質彼此不同。某些分類具有次分類，例如免 疫球蛋白G1、免疫球蛋白G2、及其它免疫球蛋白。此外 ，在人類的輕鏈可爲κ鏈或λ鏈。本文之抗體包括所有人 類抗體品糸之種類、次分類及型態。 經濟部智慧財1¾員工消費合作社印製 本發明中與CRF2-13相關之分離的蛋白質預期可作爲 抗原，或其部份或斷片，並可藉由製備多株及單株抗體的 標準技藝，作爲免疫原而產生可免疫專一性結合於抗原之 抗體。可使用全長蛋白質，或者以本發明提供的抗原之免 疫肽斷片作爲免疫原。抗原性肽斷片包含全長蛋白質之胺 基酸序列（例如展示於序列確認號碼：2之胺基酸序列）上 至少6個胺基酸殘基，並包含可與全長蛋白質或任何含有 抗原決定部位之斷片形成專一的免疫複合體的抗體之肽類 的抗原決定部位。較佳者，抗原性肽類包含至少1 0個胺 基酸殘基，或至少1 5個胺基酸殘基，或至少20個胺基酸 殘基，或至少30個胺基酸殘基。較佳者，抗原性的肽類 包含至少1 0個胺基酸殘基，或至少1 5個胺基酸殘基，或 至少20個胺基酸殘基，或至少30個胺基酸殘基。較佳的 抗原決定部位包含位於蛋白質表面區域之抗原性的肽；通 常此類區域爲親水性的區域。 在本發明某些具體實施例中，至少一個抗原決定部位 包含位於CRF2-1 3相關蛋白質的蛋白質表面區域（例如親 水性的區域）之抗原性肽。人類的相關CRF2-1 3蛋白質序 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） >94- 200300170 A7 ___B7 五、發明説明（9》 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 列之拒水性分析，將可指出在相關的CRF2-1 3蛋白質中的 親水性區域，因此可用此區域編碼表面殘基用於生產抗體 。作爲標定生產抗體的方法，可用任何技藝上已知的方法 ’包括例如：含或不含傅里葉變換之Kyte Doolittle或 Hopp Woods方法，產生顯示親水性及拒水性之拒水性點 圖。參閱例如：Hopp and Woods，1981，Proc. Nat. Acad. Sci. USA 7 8:3 8243 828 ； Kyte and Doolittle 1 982, J. Mol. Biol· 1 57 : 1 05- 142，全文在此倂入參考文獻。在此亦提 供抗原性的蛋白質、或衍生物、斷片、類似物或其同質物 內一個或多個結構區之專一性的抗體。 本發明之蛋白質、或其衍生物、斷片、類似物、同質 物或異物種同源基因產物，可作爲產生免疫專一地結合此 類蛋白質成份的抗體之抗原。 經濟部智慈ST產局資工消費合作社印製 可使用此技藝中各種習知的方法產生多株或單株抗體 以直接對抗本發明蛋白質、或對抗其衍生物、斷片、類似 物同質物或正同源體。（參閱例如：Antibodies : A Laboratory Manual, Harlow E, and Lane D, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, incorporated herein by reference)。某些此類抗體將討論於 下。 多株抗體 在產生多株抗體時，可對各種適當的宿主動物（例$口 :兔子、山羊、小鼠或其它哺乳動物）注射一種或多種天 ^氏張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X2W公釐） ~ -95- 200300170 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（θ 然蛋白質、其合成的變體、或前述的衍生物進行免疫。可 產生免疫性的適當製劑含有，例如：天然產生免疫性的蛋 白質、代表產生免疫性的蛋白質之化學地合成的多肽，或 重組表現之產生免疫性的蛋白質。此外，蛋白質可聯結至 第二個在接受免疫的哺乳動物身上可產生免疫性的習知蛋 白質。該產生免疫性的蛋白質之實施例包括（但非限於）鑰 孔帽貝血藍蛋白、血淸白蛋白、牛甲狀腺球蛋白、及大豆 胰蛋白抑制因子。製劑中可進一步的包括佐劑。用以增加 免疫反應的各種佐劑包括（但非限於）：Freund’s(完全以及 不完全的）、礦物質凝膠（例如氫氧化鋁）、表面活性物質（ 例如：溶血卵磷脂、聚醣醛酸多元醇、多元陰離子、肽類 、油乳狀液、二硝基酚等）、可用於人類的佐劑，例如卡 介苗及短小棒狀桿菌、或相似的免疫刺激劑。可使用之佐 劑的其它實施例包括MPL-TDM佐劑（單磷醯基脂質A、合 成的海藻糖雙棒狀黴菌酸酯）。 直接對抗產生免疫性的蛋白質之多株抗體分子可分離 自哺乳動物（例如從血液）再用已知的技藝進一步純化，例 如：使用蛋白質A或蛋白質G(其主要係提供免疫血淸之 免疫球蛋白G溶析份）之親和層析法。其後，或此外，可 將專一性免疫球蛋白之目標抗原，或其抗原決定部位，固 定在管柱上進行免疫親和層析法以純化免疫專一性抗體。 純化免疫球蛋白之討論例如：D. Wilkin son (The Scientist， published by The Scientist, Inc., Philadelphia PA, Vol. 14， N〇· 8(April 1 7, 2000)，pp· 25-28)。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 29*7公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 訂 t - 96- 200300170 A7 B7 五、發明説明（9含 單株抗體 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本文中之”單株抗體”（MAb)或”單株抗體組成物”意指 僅含有一種分子之抗體分子之抗體分子族群，其係由獨特 的輕鏈基因產物及獨特的重鏈基因產物組成。特定言之， 在所有分子族群中，單株抗體之互補性決定區域（CDRs)均 相同。如此M A b含有之抗原結合部位能與抗原的特定抗 原決定部位經由獨特的結合親和力進行免疫反應。 可使用融合瘤方法製備單株抗體，例如描述於以1141· and Milstein，Nature, 256:495(1975)。在融合瘤之方法中， 一般係將小鼠、倉鼠、或其它適當的宿主動物用免疫藥劑 進行免疫以引起淋巴細胞產生或使之能產生專一結合至免 疫藥劑之抗體。此外，淋巴細胞亦可在活體外進行免疫。 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 免疫藥劑通常包括：蛋白質抗原、其斷片或其融合型 蛋白。一般而言，若所要求的細胞爲人類細胞時，可使用 周邊血液淋巴細胞，或若所要求的細胞爲非人類之哺乳動 物細胞時，可使用脾臟細胞或淋巴結細胞。然後將淋巴細 胞使用適當的藥劑，例如聚乙二醇與永生細胞株融合，以 形成融合瘤細胞（〇0(1丨1]£，14〇110(：1〇1121人1：11丨130(3165··
Principles and Practice，Academic Press，（1986)pp. 59- 1 03) 〇 永生細胞株通常是轉形的哺乳動物細胞，尤其是齧齒 動物、牛及源自人類的骨髓癌細胞。通常使用老鼠或小鼠 的骨髓癌細胞株。融合瘤細胞可在適當的培養基中培養’ 較佳者含有一種或多種可抑制未融合的、永生的細胞生長 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -97- 200300170 A7 B7 五、發明説明（以 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 或倖存之物質。例如，若親代細胞缺少酵素次黃嘌呤鳥糞 嘌呤磷酸核糖基轉移酶（HGPRT或HPRT)，則融合瘤之培 養基中通常將包括次黃嘌呤、胺基蝶呤、及胸腺嘧啶 CHAT培養液，，），該物質可預防缺乏HGPRT細胞的生長。 較佳的永生細胞株係可有效地融合、在選擇的產生抗 體細胞中支持抗體穩定、高水準的表現、及對培養液例： HAT培養液具敏感性。更佳的永生細胞株是鼠科動物的 骨髓癌細胞株，其可取自例如：Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California 以及 American Type Culture Collection，Manassas，Virginia。人類骨髓癌 及小鼠-人類之異骨髓癌細胞株亦曾被提及可產生人類單 株抗體（K 〇 z b ο 1·，J. I m m u η ο 1 ·，1 3 3 : 3 0 0 1 ( 19 8 4) ; B1· 〇 d e u 1· e t al.， Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc.5 New York,( 1 987)pp. 51-63) ° 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 然後可測定在培養融合瘤細胞之培養液中是否有可直 接對抗抗原的單株抗體。較佳者，係用免疫沈澱或活體外 之結合測定法，例如：放射免疫分析法（RIA)或酵素聯結 免疫抗體檢測法（ELISA酵素聯結免疫抗體檢測法）測定融 合瘤細胞製作之單株抗體的結合特異性。該技藝及測定爲 已知的技藝。測定單株抗體結合親和力之方法可參見，例 · Scale hard analysis of Munson and Pollard, Anal.
Biochern., 1 07:220( 1 980)。較佳者，抗體對分離之目標抗原 具有高度專一性及高結合親和力。 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） -98- 200300170 A7 B7 五、發明説明（Μ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 於確認所要求的融合瘤細胞之後，細胞可用限制稀釋 程序進行次選殖並以標準的方法生長。此目的之適當細胞 培養液爲包括，例如：Dulbecco’s經修飾之Eagle’s培養 液及RPMI- 1640培養液。此外，融合瘤細胞可在哺乳動物 之活體中於腹水內生長。 次選殖細胞分泌的單株抗體可自培養液或腹水中以習 見的免疫球蛋白純化方法分離或純化，例如：蛋白質A-瓊脂糖、經基磷灰石色層分析法、膠體電泳、透析、或親 和層析法。 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 單株抗體亦可用重組去氧核糖核酸方法製作，例如描 述於U.S. Patent Ν〇· 4,8 1 6,5 67。編碼本發明單株抗體的去 氧核糖核酸可使用習見的方法（例如：使用能特別地結合 至編碼鼠科動物抗體重及輕鏈基因之寡核苷酸探針）立即 分離及定序。本發明之融合瘤細胞爲該去氧核糖核酸的較 佳來源。一旦分離後，可將去氧核糖核酸置入表現載體， 然後轉Ικ至佰主細胞’例如：猴子C Q S細胞、中國倉鼠 卵巢（CH0)細胞、或不會產生免疫球蛋白蛋白質之骨髓癌 細胞’以便在重組之宿主細胞中取得合成的單株抗體。去 氧核糖核酸亦可經修飾，例如用編碼人類重及輕鏈固定結 構區的序列取代同源的鼠科動物序列（美國專利第 4,8 1 6,5 67 號；Morrison，Nature 368，8 1 2- 1 3( 1 994))或經共 價鍵將所有或部份編碼免疫球蛋白之序列聯結至編碼非免 疫球蛋白多肽之序列。該非免疫球蛋白多肽可經本發明抗 體的固定結構區取代，或可經本發明抗體的一個抗原結合 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS 格（2ΐ〇χ^Ι^---- -99» 200300170 A7 B7 五、發明説明（9έ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 位點之可變的結構區取代，以創造嵌合的雙價抗體。 人類化的抗體 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 直接對抗本發明蛋白質抗原之抗體可進一步的包含人 類化的抗體或人類抗體。此類抗體適用於對人類投藥而不 致於引起人類對所投用之免疫球蛋白產生免疫反應。人類 化的抗體型式乃爲嵌合型免疫球蛋白、其免疫球蛋白鏈或 斷片（例：Fv、Fab、FaV、F(ab’）2或抗體之其它抗原結合 次序列），其主要包含人類免疫球蛋白的序列，以及含有 最小量的源自非人類免疫球蛋白之序列。人類化可依據 Winter 等人之方法進行（了〇1：^8 6131.，1^11111，321:522-5 25(1986) » Riechmann et al., Nature, 332:323-327(1988) ί Verhoeyen et al.5 Science, 239:1 534- 1 5 3 6( 1 9 8 8))，將齧齒 動物之CDR或CDR序列用對應至人類抗體的序列取代。（ 亦可參閱U.S. Patent No. 5,225,539。）在一些實施例中， 將人類免疫球蛋白之Fv架構殘基用對應的非人類殘基取 代。人類化的抗體亦可包含在接受者抗體中及所輸入的 CDR或架構序列中均不存在之殘基。一般而言，人類化 的抗體實質上將包含所有中之至少一個、通常爲二個的可 變結構區，其中所有或實質上所有的CDR區域相應於非 人類免疫球蛋白，且所有或實質上所有架構區域爲人類免 疫球蛋白之保留性序列。最理想的人類化抗體亦通常將包 含人類免疫球蛋白的至少部份之免疫球蛋白恆定區 (Fc)(J〇nes et al., 1 9 86 ： Riechmann et al.5 1 9 8 8 ； and 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 〇X297公釐） -100- 200300170 A7 B7 五、發明説明（9)
Presta，Cun.·〇p. Struct· Biol·，2:593-596(1992))。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 人類抗體 完整的人類抗體是來自人類基因之本質上包括輕鏈及 重鏈（包括CDR)全部序列的抗體分子。該抗體稱爲“人類 抗體”，或”完整的人類抗體”。製備人類單株抗體的技術 包括：三重融合瘤技術；人類B細胞融合瘤技術（參閱 Kozbor, et al., 1 9 83 Immunol Today 4 · 72)以及 EBV 融合 瘤技術以產生人類單株抗體（參閱Cole，et al.，1 985 In : MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R· Uss5 Inc.，pp.77-96)。本發明可使用人類單株抗體並可 使用以人類融合瘤（參閱 Cote，et al·，1 983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030)或 Epstein Barr 病毒轉形之 人類B細胞在活體外製作人類單株抗體（參閱 Cole，et al.， 1 9 85 In:MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss，Inc.，pp. 77-96) o 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製 此外，亦可使用其它技藝，包括噬菌體顯示基因庫製 作人類抗體（Η ο 〇 g e η b ο 〇 m a n d W i n t e r，；ί. Μ ο 1. B i ο 1.， 227:3 8 1 ( 1 99 1 ) ； Marks et al., J. Mol. Biol., 222:58 1 ( 1 99 1 )) 。同樣地，將人類免疫球蛋白基因座引入內生性免疫球蛋 白基因已局邰或完全去活化的基因轉殖動物（例如小鼠）可 製作人類抗體。經刺激後可觀察到人類抗體之生產，從各 種角度而言（包括··基因重組、組裝、及抗體庫）彼與人類 的抗體非常類似。此類方法描述於例如：U.S. Patent Nos. ‘本纸張尺度適用中酬家標準（CNS ) A4規格（210X 297公楚） — -101 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（β (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 5,545,807 ； 5,545,806 ； 5,569,825 ； 5,625,126 ； 5,633,425 ； 5,661，016，以及1\4訂1^6181.(61〇/丁€(：1111〇1〇2¥10，779-783(1992)) ； Lon berg et al.(Nature 368 856-859(1994))； Morrison (Nature 368, 812-13(1994)) ； Fish wild et al,( Nature Biotechnology 14, 845-51(1996)) ； Neuberger(Nature Biotechnology 14，826( 1 996));以及 Lonberg and Huszar(Intern. Rev. Immunol. 13 65-93(1995)) o 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製 此外，使用導入外來基因的非人類動物（其係經修飾 以產生完整的人類抗體而不是動物的內生性抗體）經抗原 刺激產生反應可製作人類抗體。（參閱PCT publication W094/02602)。此內生性基因係編碼使精子獲授胎能力的 非人類宿主免疫球蛋白之重及輕鏈，以及將編碼人類重及 輕鏈之免疫球蛋白活性的基因座插入宿主的基因組。倂入 人類基因，例如可使用內含需要的人類去氧核糖核酸斷片 之人造酵母菌染色體。然後經互補性的雜交育種內含較不 完之整修飾的中間型基因轉殖動物，在後代中得到提供所 有所要求的修飾之動物。該非人類動物較佳的具體實施例 是小鼠，稱爲人源化小鼠Tm，如於PCT公告W0 96/33735 及W0 96/3 4 096揭示。此動物產生之B細胞可分泌完整的 人類免疫球蛋白。於重要的抗原免疫之後抗體可直接得自 動物，例如多株抗體製備物，或此外從源自動物之永生的 B細胞（例如融合瘤）可產生單株抗體。此外，可回收編碼 人類免疫球蛋白變異區基因並加以表現，以直接取得抗體 ’或可進一步的經修飾以取得抗體類似物，例如··單鏈 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -102- 200300170 A7 B7 五、發明説明（β
Fv分子。 產生缺少內生性免疫球蛋白重鏈表現之非人類宿主（ 例如小鼠）的方法之實施例揭示於美國專利第5，9 3 9，5 9 8號 。取得的方法包括從胚胎的幹細胞中刪除至少一個內生性 重鏈基因座之】環節基因以預防基因座之重排作用及預防 重排之免疫球蛋白重鏈基因座轉錄產物之形成’刪除可用 內含編碼可選擇的標識基因之導向載體進行；以及從胚胎 的幹細胞產生其軀體及生殖細胞含有編碼可選擇的標識基 因之導入外來基因的小鼠。 產生重要抗體（例如人類抗體）的方法揭示於美國專利 第 5,916,771 號。 其係包括將含有編碼重鏈核苷酸序列之表現載體引入 培養中的哺乳動物宿主細胞’將內含編碼輕鍵核甘酸序列 之表現載體引另一哺乳動物的宿主細胞，並融合此二種細 胞以形成雜交細胞。雜交細胞可表現內含重鏈及輕鏈的抗 體。 此方法進一步的改良後，在抗原上確認臨床的相關的 抗原決定部位，以及選擇與相關的抗原決定部位具有高親 和性免疫專一性結合之抗體的相關性的方法已揭示於PCT 公告 WO 99/53049。
Fab斷片及單鏈抗體 依據本發明，可適用於產生對本發明抗原性的蛋白質 具專一性之單鏈抗體的技藝（參閱例如美國專利第 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格（210X 297公釐) ~ -103- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· 、\呑 經濟部智慧財4^7員工消費合作社印製 200300170 A7 B7_ 五、發明説明（100 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 4,946,778號）。此外，可適用於構築Fab表現基因庫之方 法（參閱例如：Huse，et al.，1 9 89 Science 246 : 1 275-1281) 以快速而有效的鑑定所要求的蛋白質或衍生物、斷片、類 似物或其同質物之專一性的單株Fab斷片。含有對抗蛋白 質抗原抗之原決定部位的抗體斷片’可用已知的技藝製作 ，包括（但非限於）：（i)用胃蛋白酶水解抗體分子製作 斷片；（ii)還原斷片之雙硫橋產生Fab斷片； (in)用木瓜酶及還原劑處理抗體分子產生Fa斷片以及 (i v) F v 斷片。 雙專一性的抗體 雙專一性的抗體是單株（較佳者爲人類或人類化的）抗 體，其可專一的結合至少二種不同抗原。在本案例中，其 中一個是針對本發明抗原性蛋白質進行的專一性結合。第 二個結合目標是其它抗原，較佳者是細胞-表面蛋白質或 受體或受體次單體。 經濟部智慧財產局負工消費合作社印製 製作雙專一性抗體的方法爲技藝上已知的方法。傳統 上是共同表現二種免疫球蛋白重鏈/輕鏈對，重組產生雙 專一性的抗體，其中二種重鏈具有不同的專一性（Milstein and Cuello，Nature, 30 5:537-5 39(1983))。因爲免疫球蛋白 重鏈及輕鏈之隨機分配，此類四重融合瘤（q u a d ι· 〇 m a s)可能 產生十種不同之抗體分子的混合物，其中僅有一個具有正 確的雙專一性的結構。純化正確的分子通常可藉由親和層 析法步驟加以完成。相似的方法已揭示於W〇93/08829， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -104 - 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（1()l 發表於 1993 年 5 月 13 日，及 Traunecker et al·，1991 EMB〇 J.，10:3 65 5 - 3 65 9。 具有所要求的結合專一性之抗體的可變結構區（抗體_ 抗原結合位點）可與免疫球蛋白固定的結構區序列融合。 較佳者是與包含至少部份之樞紐區域、CH2、及CH3區域 之免疫球蛋白重鏈的固定結構區融合。宜具有第一個重鏈 恆定區（CHI)，其係內含存在至少一個融合輕鏈進行結合 所必須位點。編碼免疫球蛋白融合重鏈（及視需要免疫球 蛋白輕鏈）之去氧核糖核酸，可分別插入表現載體並共同 轉染入適當的宿主生物體。產生雙專一性抗體的進一步細 節可參閱例如：S in· e s h e t a 1.，M e t h 〇 d s i η E n z y m ο 1 〇 g y， 121:210(1986)。 依據另一描述於WO 96/2701 1之方法，可裝入抗體分 子對之間的界面以最適化回收自重組細胞培養液中的雜二 聚物之百分比。較佳的界面包含至少一部份的抗體固定結 構區的CH3區域。在此方法中，從第一抗體分子之界面 用一個或多個小胺基酸側鏈取代較大的側鏈（例如酪胺酸 或色胺酸）。爲了補償”孔洞”，在第二抗體分子界面上用 相同或相似的胺基酸的大側鏈取代較小的側鏈（例如丙胺 酸或蘇胺酸）。此機制可使雜二聚物之產率高於其它有害 的終產物（例如同二聚物）。 雙專一性的抗體可製備成全長抗體或抗體斷片（例如 F(aV)2雙專一性的抗體）。從抗體斷片產生雙專一性抗體 的技藝已描述於文獻。例如雙專一性的抗體可使用化學的 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公釐） -105- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1(h (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 聯結製備。B r e η n a n e t a 1 ·，S c i e n c e 2 2 9 : 8 1 ( 1 9 8 5)描述一種 步驟，其中將完整的抗體經蛋白質水解分解產生Fum斷 片。此類斷片在二硫基複合劑亞砷酸鈉存在下還原，以穩 定鄰接的二硫基並預防分子間二硫化物之形成。然後將產 生之Fab_斷片轉換成硫硝基苯甲酸鹽（TNB)衍生物。然後 將產生之Fab·斷片轉換成硫硝基苯甲酸鹽（TNB)衍生物。 然後將其中一個Fw-TNB衍生物用氫硫基乙胺還原再轉換 成Fab’_硫醇，以及與等莫耳量的其他Fw-TNB衍生物混 合以形成雙專一性的抗體。雙專一性的抗體可作爲選擇性 固定酵素的藥劑。 此外，Fab·斷片可直接自大腸桿菌回收以及化學耦合 至形成雙專一性的抗體。Shalaby et al.，J. Exp. Med. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 75 :2 1 7-225( 1 992)描述生產完全人類化的雙專一性的抗體 之Fum分子之方法。各Fab·斷片係分別分泌自大腸桿菌 以及直接的在活體外化學偶合以形成雙專一性的抗體。如 此形成的雙專一性抗體能結合至過度表現ErbB2受體之細 胞及正常的人類T細胞，並觸發人類細胞毒性的淋巴細 胞之溶解活性以對抗人類乳房腫瘤目標。 直接從重組細胞培養液中製作及分離雙專一性的抗體 斷片的各種技藝亦已被描述。例如已使用白胺酸拉鍊製作 雙專一性的抗體。K 〇 s t e 1 n y e t a 1.，J · I m m u η ο 1 · 148(5):1 547-155 3( 1 992)。將來自Fos及Jun蛋白質之白胺 酸拉鍊肽類經基因融合聯結至二種不同抗體之Fab’部份。 將抗體同二聚物在樞紐區域還原以形成單體，然後再氧化 本纸張尺度適用中國國家標準（CN’S ) A4規格（210X 297公釐） -106- 200300170 A7 B7 經濟部智慈財產局貨工消費合作社印製 五、發明説明（163 以形成抗體雜二聚物。此方法亦可用於產生抗體同二聚物 。“微型雙功能抗體”技藝描述於：Hollingei· et al.，Proc. Natl· Acad· Sci. USA 90:6444-6448( 1 993)，提供製作雙專 一性抗體斷片的另一種機制。該斷片包含經連結子聯結之 重鏈可變的結構區（VH)及輕鏈可變的結構區（VL)，由於該 連結子太短所以可允許同鏈上之二種結構區之間進行配對 。據此，一個斷片之VH及VL結構區被迫與另一斷片之 VL及VH結構區互補，從而形成二種抗原結合位點。亦 已報導製作雙專一性抗體斷片的另一策略是使用單鏈 F v (s F v)的二聚物。參閱 G1· u b e r e t a 1 ·，J. 11· n m u η ο 1. 152:5368(1994)。 亦可考慮二價以上之抗體。例如可製備三專一性的抗 體。 Tutt et al·，J. Immunol· 147:60(1991) 〇 典型的雙專一性的抗體可結合至二種不同抗原決定部 位，至少一個是源自本發明之蛋白質抗原。此外，免疫球 蛋白分子之抗-抗原性手臂可合倂經結合白血球上分子， 例如T細胞受體分子（例如CD2、CD3、CD28、或B7)、或 免疫球蛋白G(Fc r R)之Fc受體，例：Fc r RUCD64)、 Fc r RII(CD3 2)及Fc r RIII(CD16)，後而觸發反應之手臂以 使表現特定抗原的細胞啓動細胞的防衛機制。雙專一性的 抗體可亦作爲表現特定抗原的細胞之直接地細胞毒劑。類 抗體具有抗原-結合臂及結合細胞毒性劑或放射性核素螯 合物，例如·· EOTUBE、DPTA、D0TA、或丁ETA之結合臂 。另一重要的雙專一性的抗體可結合在此描述之蛋白質抗 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -107- 200300170 A7 __ B7 五、發明説明（104 原以及進一步的結合組織因子（TF)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 奉隹共軛聯結抗體 雜共軛聯結抗體亦屬於本發明範圍。雜共軛聯結抗體 是由二種共價鍵相聯的抗體組成。該抗體可（例如）標定免 疫系統細胞至有害的細胞（美國專利第4,676,980號），以 及治療類免疫不全病毒感染（W〇91/00360 ; W〇92/200373 ;EP 03 0 89)。該抗體可考慮使用已知的合成蛋白質化學 方法（包括包含交聯劑之方法）在活體外製備。例如，可使 用二硫化物交換反應或形成硫醚鍵結構築免疫毒素。此目 的之適當試劑的實施例，包括··亞胺基硫羥酸酯以及甲 基-心氫硫基丁醯亞胺酯類，以及揭示於例如：美國專利 第 4,67 6,980 號。 致效劑功能之構建 經.濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明抗體可依致效劑功能加以修飾，以增進例如抗 體治療癌症之療效。本發明抗體可依致效劑功能加以修飾 ，以增進例如抗體治療癌症之療效。例如，可在Fc區域 引入半胱胺酸殘基，從而在此區域形成鏈間之雙硫鍵。例 如，可在Fc區域引入半胱胺酸殘基，從而在此區域形成 鏈間之雙硫鍵。如此產生之同二聚物抗體可改良其攝入能 力及/或增加補體-調節的細胞殺死及抗體依存的細胞的細 胞毒（ADCC)。參閱 Caron et al·，J· Exp Med.，176 : 1191-1 195(1992)and Shopes, J. Immunol., 148 ： 2918-2922(1992) 浪I度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐) ^ -108- 200300170 A7 B7 五、發明説明（165 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 。增強抗腫瘤活性之同二聚物抗體亦可使用雜雙功能交聯 t製備’如描述於：Wolff et al. Cancer Resea 1.ch，53 : 2560-2565(1993)。此外，抗體可構建具有雙Fc區域以及 從而可增強補體溶解及ADCC之能力。參閱Stevenson et al·，Anti-Cancer Drug Design, 3 : 2 1 9-230( 1 989) 0 免疫共㈣結合物 本發明亦關於免疫共軛結合物，其係包含聯結至細胞 毒性劑，例如：化學治療劑、毒素（例如：酵素活化的源 自細菌、真菌、植物、或動物之毒素，或其斷片）、或放 射性同位素（即放射性共軛聯結物）之抗體。 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 用於產生該免疫共軛結合物之化學治療劑已說明如上 。可使用之酵素活化的毒素及其斷片包括··白喉A鏈、 白喉毒素非結合活化的斷片、外毒素A鏈（來自銅綠假單 胞菌）、蓖麻毒蛋白A鏈、雞母珠毒蛋白A鏈、莫迪素a 鏈、α -核醣毒素、油桐蛋白質、戴安西（dianihin)蛋白質 、商陸蛋白質（前列腺酸性磷酸酶I、前列腺酸性磷酸酶工工 、及前列腺酸性磷酸酶-S)、苦瓜抑制劑、麻瘋樹毒素、 巴毒素、鼠尾草（S a p a ο n a r i a 〇 f f i c i n a 1 i s)抑制齊U、白樹素 、RNA分裂毒素（mhogeiiin)、rnA限製水解毒素 “estnctocin)、酚黴素 '依諾黴素、及三可西 (tricothecenes)。各種放射性核素均可用以產生放射性共 車厄結合的抗體。實施例包括212 B i、1311、1311 n、9 ^ γ、及 1 “'Re。 (〇^)八4規格（210'乂 297公釐） -109- 200300170 A7 B7 五、發明説明（ide (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 可使用各種雙功能蛋白質偶合劑製作抗體及細胞毒性 劑之共輕結合物’該偶合劑包括，例如：N -號班醯亞胺 基-3-(2-吡啶基二硫基）丙酸酯（SPDP)、亞胺基硫雜環戊烷 (硫茂烷）（IT)、亞胺基酯類之雙功能衍生物（例如：二甲基 己二醯亞胺酯HCL)、活性的酯類（例如··二琥珀醯亞胺基 軟木酸）、醛（例如戊二醛）、雙-疊氮基化合物（例如：雙（ 對-疊氮基苯曱醯基）己烷二胺）、雙-重氮脎鹽衍生物（例如 :雙-(對-重氮鑰鹽苯甲醯基）-乙二胺）、二異氰酸酯（例如 :苯亞甲基-2，6 -二異氰酸酯）、及雙-活性的氟化合物（例 如：1，5 - 一氯-2,4 - 一硝基苯）。例如蓮麻毒蛋白免疫毒素 之製備方法描述於：Vitetta et al., Science，23 8 : 1 098( 1 9 87)。以碳-14-標記的1-異硫氰基苄基-3-甲基二乙 烯三胺五乙酸（MXDTPA)是聯結放射性核苷酸與抗體之螯 合劑的實施例。參閱W094/1 1026。 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 在另一具體實施例中，抗體可聯結至用於腫瘤前導向 之”受體”（例如抗生蛋白鏈菌素），其中將抗體-受體共軛聯 結物投用至病患，接著用淸除劑去除循環中未結合的共軛 聯結物，以及然後投用可聯結至細胞毒性劑的”配體”（例 如卵白素）。 CRF2-13重組型表現載體及宿主細胞 本發明另一特色係關於載體，較佳者爲內含CRF2-13 蛋白質、或其衍生物、斷片、類似物或同質物核酸編碼之 表現載體。本文中之”載體”意指能運送另一個已聯結的核 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公麓" -110- 200300170 A7 B7 五、發明説明（107 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 酸之核酸分子。載體類型之一是”質體”，其爲可連結額外 DNA斷片的圓形雙股之環形DN A。另一類型之載體是病 毒性載體，其中額外的DN A斷片可連結至病毒基因體。 某些載體（例如具有細菌複製起始點的細菌載體及基因附 體的哺乳動物載體）能在引入彼之宿主細胞中自主的複製 。其它載體（例如非基因附體的哺乳動物載體）在引入宿主 細胞後可插入宿主細胞之基因組，從而隨著宿主基因組一 起複製。此外，某些載體能直接表現操作性聯結地基因。 該載體於本文中稱爲”表現載體”。一般而言，重組DN A 技藝使用之表現載體經常爲質體型式。在本說明書中， ”質體”及”載體”可通用，而質體是最常用的載體。然而， 本發明包括其它型式之表現載體，例如功能適用的病毒性 載體（例如：有複製缺陷的反轉錄病毒、腺病毒及腺病毒 相關的病毒）。 經濟部智慈財產局資工消費合作社印製 本發明之重組表現載體包含適於在宿主細胞中表現之 型式的本發明核酸，即意指重組表現載體包括一種或多種 調控的序列，其係依表現之宿主細胞而選擇，其係操作性 聯結至表現的核酸序列。在重組型表現載體中，”操作性 聯結”係指將重要的核苷酸序列以允許表現核苷酸序列之 方式（例如：活體內轉錄/轉譯作用系統或引入載體之宿主 細胞）聯結於調控的序列。
本文中之”調控的序列”包括啓動子、增強子以及其它 表現控制元件（例如：聚腺嘌呤核苷酸化作用信號）。該調 控的序歹IJ ί苗述於例如：Goeddel，GENE EXPRESSION 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公釐） -111 - 200300170 Α7 Β7 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（1(^8 TECHNOLOGY · METHODS IN ENZYMOLOGY 185? Academic Press，San Diego，Calif.(1990)。調控的序列包括 那些在許多類型之宿主細胞內直接地組成性表現的核苷酸 序列以及那些僅在某些宿主細胞內直接地表現之核苷酸序 歹!J (例如：組織專一的調控序列）。熟悉此技藝的專業人士 均認知設計表現載體之因素取決於：選擇轉形的宿主細胞 、所要求的蛋白質之表現水準等。本發明之表現載體可引 入宿主細胞，從而產生本文描述之核酸編碼的蛋白質或肽 類（包括融合型蛋白或肽類）（例如：CRF2-13蛋白質、突變 型式之CRF2-13、融合型蛋白等）。 本發明之重組表現載體可設計成在原核或真核細胞中 表現CRF2-13蛋白質。例如，可在細菌的細胞（例如大腸 桿菌）、昆蟲細胞（使用桿狀病毒表現載體）、酵母菌細胞 或哺乳動物的細胞中表現的CRF2-1 3蛋白質。適當的宿主 細胞進一步的討論於·· Goeddel，GENE EXPRESSION TECHNOLOGY · METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press，San Diego，Calif.(1990)。此外，重組型表 現載體可於活體外轉錄及轉譯，例如：使用T7啓動子調 控的序列及Τ7聚合酶。 在原核生物中表現蛋白質，大部分是用內含控制融合 或非融合型蛋白表現之組成性或可誘發性啓動子的載體在 大腸桿菌中進行。融合載體通常在重組型蛋白質之胺基端 加上許多胺基酸之編碼。該融合載體一般有三種目的：（】） 增加重組蛋白質之表現；（U)增加重組蛋白質之溶解度； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） -112- 200300170 A7 B7 五、發明説明（ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 以及（iii)作爲親和力純化之配體有助於重組蛋白質之純化 。融合表現載體中經常在融合部份與重組型蛋白質之間的 接合點引入蛋白質水解切除位點，純化融合型蛋白之後可 從融合部份分離重組型蛋白質。該酵素、及其同源的辨視 序列包括因子Xa、凝血酶以及腸激酶。代表性的融合表 現載體包括：p G E X (P h a 1· m a c i a B i 〇 t e c h I n c ; S m i t h a n d Johnson, 1988. Gene 67 : 31-40)、pMAL(New England Biolabs，Beverly，Mass.)以及 pRIT5(Pharmacia, Piscataway, N.J·)，其係分別融合谷胱甘肽S-轉移酶（GST)、麥芽糖 E 結合蛋白質或蛋白質A至重組型蛋白質。 可誘發的適當非融合大腸桿菌表現載體一之實施例包 括 P 丁rc (Amrann et al.，（1988)Gene 69:301-315)以及 pET lld(Studier et al., GENE EXPRESSION TECHNOLOGY ： METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego，Calif.( 1990)60- 89)。 經濟部智慧財產局Μ工消費合作社印製 在大腸桿菌中最適化重組型蛋白質表現的策略之一是 在水解重組型蛋白質的能力損害的宿主細菌中表現蛋白質 。參閱例如：Gottesnian，GENE EXPRESSION TECHNOLOGY ： METHODS IN ENZYMOLOGY 1855 Academic Press，San Diego，Calif.(1990)119-128。另一策 赂是改變插入表現載體的核酸之核酸序列，而使各胺基酸 之密碼子是大腸桿菌優先利用之密碼子（參閱例如：Wada， et al.，1 992. Nucl. Acids Res.20 : 211卜2118)。本發明該核 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） -113- 200300170 Al B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（1)0 酸序列之變異可用標準 DNA合成技藝進行。 另一具體實施例之一中，CRF2-13之表現載體是酵母 菌表現載體。在釀酒酵母菌中表現之載體實施例，包括： pYepSecl(Baldari, et al., 1 987. EMBO J. 6 ·* 229-234)、 pMFa(Kurjan and Herskowitz, 1 982. Cell 30 ·· 933-943)、 pJRY88(Schultz et al.，1987. Gene 54 : 113-123)、 pYES2(Invitrogen Corporation, San Diego, Calif.)、以及 picZ(IηVitrogen Corp, San Diego, Calif·)。 此外，可使用桿狀病毒表現載體在昆蟲細胞中表現 CRF2-13。在培養的昆蟲細胞（例如SF9細胞）中表現蛋白 質之桿狀病毒載體包括：pAc系列（Smith，et al.，1983. 1^〇1.〇6 11.81〇1.3:2 1 56-2 1 6 5)以及？¥1系列（1^(^1〇\¥2以 Summers，1 989. Virology 170 ： 31-39) o 另一具體實施例中，可使用哺乳動物的表現載體在哺 乳動物的細胞中表現本發明之核酸。哺乳動物的表現載體 實施例，包括：pCDM8(Seed，1987. Nature 329 : 840)以及 pMT2PC(Kaufman, et al., 1 987. EMBO J. 6 ·· 1 87- 1 9 5 )。 當使用哺乳動物細胞時，經常由病毒性調控元件提供 控制表現載體之功能。例如，通常使用之啓動子係源自： 多瘤、腺病毒2、巨細胞病毒以及猴子病毒40。其它原核 及真核細胞的適當表現系統可參閱，例如：Sambrook，et al.? MOLECULAR CLONING ： A LABORATORY MANUAL. 2nd ed.，Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. ? 1 9 89 之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -114- 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局資工消費合作社印製 五、發明説明（1)1 第16及17章。 另一具體實施例，重組型哺乳動物的表現載體能優先 在特定細胞類型直接進行核酸表現（例如用於表現核酸之 組織專一的調控元）。組織專一的調控元是技藝上已知的 技藝。適當的組織專一的啓動子的非限制實施例，包括： 白蛋白啓動子（肝專一性；？丨111^1%以^1.，1987.〇61：^〇6¥· 1 : 2 6 8 - 2 7 7 )、淋巴專一的啓動子（Calame and Eaton, 1988. Adv. Immunol. 43 : 23 5-275)、特定的T細胞受體啓動子 (Winoto and Baltimore，1989· EMB〇 J. 8 : 729-733)以及免 疫球蛋白（Banerji，et al·，1983. Cell 33 ·· 729-740 ; Queen a n d. B a It i m ο l· e，1 9 8 3 . C e 11 3 3 : 7 4 1 - 7 4 8)、神經元專一·的啓 動子（例如神經絲狀體啓動子；Byrne and Ruddle，1 989. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 ： 5 47 3-5477)、胰臟專一的 啓動子（Edlund，et al·，1 9 8 5. Science 230 : 9 1 2-9 1 6)、以及 乳腺專一的啓動子（例如牛奶乳淸啓動子，美國專利第 4,87 3,3 1 6號以及歐洲申請案公布號碼第264,1 66號）。亦 包含調控發生地啓動子，例如鼠科動物之hox啓動子 (Kessel and Gruss，1990· Science 249 : 374-379)以及 α -胎 蛋白啓動子（Campes and Tilghman，1989. Genes Dev. 3 : 537-546)。 本發明進一步的提供包含反股方向選殖入本發明 DNA分子之重組型表現載體。即以允許表現（轉錄DNA分 子）CRF2-13傳訊RNA反股的RNA分子的方式操作性聯結 於調控序列的DNA分子。在各種細胞類型中可以反股方 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -115· 200300170 A7 B7 五、發明説明（1)2 向與核酸操作性聯結表現反股RNA分子之調控的序列爲 ，例如：病毒性啓動子及/或增強子，或可選擇直接地組 成性、組織專一性或細胞類型專一性的表現反股RNA的 調控序列。反股表現載體可爲重組型質體、噬菌質體或衰 減病毒的型式，其中反股核酸之製作受高效率調控區域的 控制，細胞引入載體後可測定其活性。使用反義基因調節 基因表現之討論可參閱，例如：W e i n 11· a u b，e t a 1.， "Antisense RNA as a molecular tool for genetic anal：/sis，”Reviews-Ti·ends in Genetics，Vol· 1(1)1986 o 本發明另一特色係關於已引入本發明重組型表現載體 之宿主細胞。本文中之”宿主細胞”以及”重組型宿主細胞” 可相互通用。據瞭解該術語不僅是指特定的細胞，但亦可 爲該細胞之後代或可能的後代。由於突變或環境的影響力 ，某些修飾可發生在後代，事實上該後代可能與母體細胞 不相同，但仍包含本文中之範圍內。 宿主細胞可爲任何的原核或真核細胞。例如，CRF2-1 3蛋白質可表現於細菌的細胞，例如：大腸桿菌、昆蟲 細胞、酵母菌或哺乳動物的細胞（例如中國倉鼠卵巢細胞 (CHO)或COS細胞）。其它適當的宿主細胞爲那些熟悉此 技藝的專業人士所習知。 載體 DNA可經習見的轉形作用或轉染作用技藝引入 原核的或真核細胞。本文中之”轉形作用”及”轉染作用”意 指各種經確認可引入外來的核酸（例如DNA)至宿主細胞的 技藝’包括：磷酸鈣或氯化鈣共沉澱、DEAE-右旋聚醣調 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 、11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -116- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1)3 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 節的轉染作用、轉脂作用或電穿透作用。適當的轉形或轉 染宿主細胞之方法可發現於：Sambrook，et al.(MOLECULAR CLONING ： A LABORATORY MANUAL. 2nd ed.，Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989) ，及其它實驗室用的操作手冊。 爲了穩定的轉染哺乳動物的細胞，目前已知取決於表 現載體以及使用之轉染作用技術，僅一小部份之細胞可將 外來的DNA倂入基因組。爲了確認及選擇倂入之細胞， 一般而言編碼可選擇的標識（例如抗生素抗性）之基因可隨 著重要的基因引入宿主細胞。各種可選擇的標識包括賦予 對藥物（例如：G418、潮黴素以及甲胺蝶呤）抗性之標識。 編碼可選擇標識的核酸可與編碼CRF2-13之載體相同或各 爲分離之載體一起引入宿主細胞。引入核酸穩定轉染地細 胞可用藥物選擇加以確認（例如，倂入可選擇標識基因的 細胞將會生存，而其他細胞將會死亡）。 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 本發明之宿主細胞，例如培養之原核的或真核的宿主 細胞，可用於產生（即表現）CRF2-13蛋白質。據此，本發 明進一步的提供使用本發明宿主細胞產生CRF2-13蛋白質 之方法。在具體實施例之一中，該方法包含在製作CRF2-1 3蛋白質之適當的培養液中培養本發明之宿主細胞（已引 入編碼CRF2-13之重組型表現載體）。另一具體實施例中 ，該方法進一步的包含自培養液或宿主細胞中分離CRF2-13蛋白質。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -117 - 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 導入外來基因的CRF2-13動物 本發明之宿主細胞亦可用以產生非人類之基因轉殖動 物。例如，具體實施例之一中，本發明之宿主細胞是已引 入CRF2-13蛋白質-編碼序列之受精的卵母細胞或胚胎的 幹細胞。然後可用該宿主細胞創造基因組引入外生性 CRF2-13序歹U之非人類基因轉殖動物或已改變內生性 CRF2-13序列之同源重組型動物。該動物可用於硏究 CRF2-13之功會g及/或活性及確認及/或評估CRF2-13活性 之調節劑。本文之”導入外來基因的動物”是非人類動物， 較佳者爲哺乳動物，更佳者爲齧齒動物，例如大白鼠或小 鼠，其中該動物之一種或多種細胞包括導入基因。基因轉 殖動物之其它實施例，包括：非人類靈長類、羊、狗、牛 、山羊、雞、兩棲動物等。導入基因是在細胞基因組插入 外生性D N A，發育成導入外來基因的動物並在成熟動物 中保持此基因組，從而在導入外來基因動物的一種或多種 細胞類型或組織中直接表現編碼之基因產物。本文之”同 源的重組型動物”是非人類之動物，較佳者爲哺乳動物， 更佳者爲老鼠，其中內生性CRF2-13基因經內生性基因與 引入動物細胞（例如在發生成動物之前的動物胚胎細胞）之 外生性DNA分子間之同源重組作用加以改變。 引入編碼CRF2-13之核酸至受精的卵母細胞之雄性前 細胞核（例如：經顯微注射、反病毒感染），並允許卵母細 胞在僞懷孕的雌性養育動物中進行發生，可創造本發明導 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -118- 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（1)5 入外來基因的動物。包括序列確認號碼：1之序列可作爲 導入基因引入非人類動物之基因組。此外，人類CRF2-13 基因之非人類同系物，例如小鼠 CRF2-13基因，可以基 於與人類CRF2-13cDNA之雜交（如上述之進一步的描述） 加以分離並作爲導入基因。導入基因中亦可包括內子的序 列以及聚腺苷酸化作用信號，以增加導入基因表現之效率 。組織專一的調控的序列可操作性聯結於CRF2-1 3導入基 因，以在特定的細胞中直接地表現CRF2-13蛋白質。經胚 胎操作及顯微注射產生基因轉殖動物（尤其是動物，例如 小鼠）之方法是習見的技藝，描述於例如：U.S. Patent Nos· 4,7 3 6,866 ; 4,870,009;以及 and 4,873，191 ; and Hogan， 1 9 8 6. In ： MANIPULATING THE MOUSE EMBRYO, Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harboi·，N.Y。 可用相似的方法產生其它之基因轉殖動物。可在動物組織 或細胞中基於CRF2-13導入基因之存在及/或CRF2-13傳 訊RN A之表現而確認導入外來基因的起始建基動物。然 後可用導入外來基因的起始建基動物培育攜帶額外的導入 基因之動物。此外，攜帶編碼CRF2-13蛋白質導入基因之 基因轉殖動物可進一步的與攜帶其它導入基因之其它基因 轉殖動物交配。 爲了創造同源重組的動物，可製備含有至少一部份之 CRF2-1 3基因經引入刪除、加入或取代，從而改變（例如 破壞功能）CRF2-13基因的載體。CRF2-13基因可爲人類基 因（例如確認號碼：1之去氧核糖核酸序列），但更佳者爲 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公釐) ' —- -119- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（1)6 人類CRF2-1 3基因之非人類同系物。例如人類序列確認號 碼：1之CRF2-1 3基因的小鼠同系物，可用適用於同源重 組作用改變小鼠基因組中內生性 CRF2-13基因之載體加 以建築。具體實施例之一中，設計的同源重組作用載體， 係可功能性的中斷內生性CRF2-1 3基因（即不再編碼功能 性的蛋白質；亦稱爲”去除基因（knock out)”載體）。 此外，設計同源重組作用載體時，係將內生性CRF2-1 3基因突變或作其它改變但仍保留功能性蛋白質的編碼（ 例如：可改變上游調控的區域，從而改變內生性CRF2-1 3 蛋白質之表現）。在同源重組作用之載體中，在CRF2-13 基因改變的部分之5’及3’端可鄰接額外的CRF2-13基因 核酸，以允許載體帶有之外生性CRF2-1 3基因與胚胎幹細 胞的內生性CRF2-13基因之間發生同源重組作用。鄰接 CRF2-13之額外的核酸要有充分的長度以成功的與內生性 基因進行同源重組作用。載體包含之鄰接的DNA(5’及V 端）一般長度爲數個仟鹼基。同源重組作用載體之描述可 參閱例如：Thomas，et al.，1 987. Cell 51 ·· 503。然後將載 體引入胚胎幹細胞株（例如用電穿透作用）以及選擇引入 CRF2-13基因並可與內生性CRF2-13基因同源再結合的細 胞。參閱例如 Li，et al.，1 992. Cell 69 : 915。 然後將選擇的細胞注入動物（例如老鼠）之囊胚以形成 凝集嵌合體。參閱例如Bradley, 1 987. In : TERATOCARCINOMAS AND EMBRYONIC STEM CELLS ： A PRACTICAL APPROACH, Robertson, ed. IRL, Oxford, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2]0X 297公釐） -120- 200300170 A7 B7 五、發明説明（士 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ρρ· 1 1 3-1 52。然後可將嵌合的胚胎植入適當的僞懷孕的雌 性養育動物並進行懷孕生產。可用生殖細胞帶有同源再合 倂之DNA的後代育種產生所有動物細胞均含有同源再合 倂之DNA的導入基因動物之後代。構築同源重組作用載 體及同源的重組型動物之方法進一步的描述於Bradley, 1991· Cun' 〇pin. Biotechnol. 2 ： 823 - 829 ； PCT International Publication Nos. ： WO 90/1 1 354 ； WO 91/01 140 ; W〇 92/0968 ;以及 WO 93/04 1 69。 另一具體實施例中，可製作含有允許調控導入基因表 現之選擇系統的導入外來基因的非人類動物。該系統的實 施例之一是噬菌體P1之cl.e/l〇xp重組酶系統。cre/l〇xp 重組酶系統之描述可參閱，例如：Lakso, et al.，1 992. 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製
Pr o c· Natl· Acad. Sci. USA 89 : 6232-6236。另一重組酶系 統之實施例是釀酒酵母菌之FLP重組酶系統。參閱·· O’Gorman，et al·，1991· Science 25 1:1 3 5 1 - 1 3 5 5。若使用 /1 〇 χΡ重組酶系統調控導入基因之表現，則內含導入基因 之動物須要編碼Cre重組酶以及選擇的蛋白質。例如經 交配內含編碼選擇蛋白質的導入基因與內含編碼重組酶之 導入基因的二種基因轉殖動物後可構築得到”雙”基因轉殖 動物。 在此描述之非人類基因轉殖動物亦可依據描述於 Wilmut，et al·，1 997. Nature 3 85 : 810-813 之方法製作。簡 言之’分離導入外來基因的動物之細胞（例如體細胞），誘 發彼脫離生長週期並進入G。相。然後將此非活動性的細 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -121 - 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局a(工消f合作社印製 五、發明説明（1)8 胞與分離自和非活動性細胞同種動物之除去細胞核的卵母 細胞進行融合（例如經由使用電脈衝）。然後將再構築之卵 母細胞進行培養，發生成桑椹胚或胚細胞，然後轉移至僞 懷孕的雌性養育動物。從雌性養育動物產生的後代之細胞 (例如體細胞）中分離選殖純系。 藥學組成物 本發明之CRF2-13核酸分子、CRF2-13蛋白質、及 抗-CRF2-13抗體（本文中亦稱爲“活性化合物”），以及其衍 生物、斷片、類似物及同質物，可倂入適用於投藥之藥學 組成物。該組成物通常包含核酸分子、蛋白質或抗體以及 藥學上可接受的載體。本文之”藥學上可接受的載體”包括 與藥學投藥相容的任何及所有之溶劑、分散培養液、包覆 劑、抗菌性以及抗真菌的藥劑、等張劑及吸收延緩劑等。 適當的載體描述於本領域之標準參考文獻中最近一版的 Remington’s Pharmaceutical Sciences，該文獻全文在此倂 入參考文獻。該載體或稀釋劑較佳的實施例包括（但非限 於）：水、生理食鹽水、林革氏溶液、葡萄糖溶液、及5 % 人血白蛋白。亦可使用脂球體及非水溶性載劑（例如不易 揮發的油）。藥學上活性物質使用該培養液及藥劑均爲已 知的技藝。除了與活性化合物不相容的範圍之外的任何習 見的培養液或藥劑，均可考慮用於組成物。組成物中亦可 倂入補充的活性化合物。 揭示於此之抗體亦可調製成免疫脂球體。可用技藝上 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X 297公釐） -122- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1)9 已知的方法製備內含抗體之脂球體，例如：描述於 Epstein et ah, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82 ： 3 68 8 ( 1 985) ;Hwang et al.? Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77 * 4030( 1 9 80) ;以及 U.S. Pat. Nos· 4,4 85,045 及 4,544,545。增強循環時 間之脂球體已揭示於U.S. Patent No. 5,01 3,556。 尤其適用的脂球體是經逆相蒸發包含：磷脂醯膽鹼、 膽固醇、及PEG-衍生的磷脂醯乙醇胺（PEG-PE)脂質組成 物所產生。脂球體是經由小孔隙度的濾膜押出以產生所要 求的直徑之脂球體。本發明抗體之Fab’斷片可經二硫化物 互換反應聯結至脂球體，描述於 Martin et al.，Biol.
Chem·，25 7 : 286- 28 8( 1 982)。脂球體內可視需要內含化學 治療劑（例如阿霉素）。參閱G a b i ζ ο n e t a 1.，J. N a t i ο n a 1 Cancer Inst.，8 1 ( 1 9) : 1 484(i 989)。 本發明之藥學組成物可調製成與預期的投藥路徑相容 的組成物。投藥路徑之實施例包括：非經腸，例如：靜脈 內的、皮膚內的、皮下的、口服的（例如吸氣）、經皮的（ 即塗覆的）、經黏膜的以及直腸的投藥。非經腸的、皮膚 內的、或皮下施用之溶液或懸浮液可包括下列成份：滅菌 之稀釋劑，例如：注射之水、生理食鹽水溶液、不易揮發 的油、聚乙二醇 '甘油、丙二醇或其它合成的溶劑，·抗菌 性藥劑，例如：苯甲醇或對氧苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例 如：抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸 (EDTA);緩衝溶液，例如：乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽 ;以及調整滲透壓之藥劑，例如：氯化鈉或右旋糖。酸鹼 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 衣 經濟部智慈財產局员工消費合作社印製 -123- 200300170 Μ _________ Β7 五、發明説明（ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 度可用酸或鹼，例如：鹽酸或氫氧化鈉加以調整。非經腸 的製劑可密封於安瓿、用完即丟棄的注射器或由玻璃或塑 膠製作的多重劑量管形瓶。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 適用於注射之藥學組成物可包括滅菌之水溶液（當爲 水溶性時）或分散液及可用滅菌之注射溶液或分散液即時 製備之滅菌粉末。於靜脈內的投藥時，適當的載體包括生 理鹽水、抑菌水、Cremophoi. ELTM(BASF ; Parsippany，NJ) 或磷酸鹽緩衝的生理食鹽水（PBS)。在所有的案例中，組 成物必須經過滅菌並應爲易於注射之流體。彼在製作及貯 藏的條件下必須是穩定的，且在保存下必須可對抗微生物 (例如細菌及真菌）之污染。載體可爲溶劑或分散培養液， 其可內含例如：水、乙醇、多元醇（例如：甘油、丙二醇 、液體聚乙烯乙二醇等）及其適當的混合物。使用塗敷劑 例如卵磷脂，當分散時可維持須要之粒度以及使用表面活 性劑可維持適當的流動性。預防微生物之作用可各種抗菌 性以及抗真菌的藥劑加以達成，例如：對氧苯甲酸、氯丁 醇、酚、抗壞血酸、局部抗菌劑等。在許多案例中較佳者 在組成物中將包括：等張的藥劑、例如、糖、聚醇類例如 甘露糖醇、山梨糖醇、氯化鈉。組成物包括延遲吸收，例 如：單硬脂酸鋁以及明膠等藥劑可製成長期吸收之注射組 成物。 製備滅菌之注射溶液可在將需要量之活性化合物（例 如：CRF2-13蛋白質或抗-CRF2-13抗體）倂入內含上述歹U 舉成分的一種或一組適當之溶劑，接著過濾滅菌。一般而 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -12心 200300170 A7 B7 五、發明説明（1如 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 言’製備分散液係將活性化合物倂入含有鹼性的分散培養 液及以上列舉之其它成分的滅菌載劑。當製備滅菌之注射 溶液的滅菌粉末時，製作方法是真空乾燥及冷凍乾燥法， 以產生之有效成份的粉末與來自任何額外的所要求的成分 先前滅菌過濾之溶液的粉末。 一般而言，口服組成物可包括惰性稀釋劑或可食用的 載體。彼可密封於明膠膠囊或壓製成藥片。口服投藥治療 時，活性化合物可倂入賦形劑並以藥片、喉片或膠囊的型 式使用。口服的組成物亦可使用流體載體製備，以作爲漱 □劑，其中流體載體中之化合物可口服、吸入及咳入或吞 職施用。組成物中可包括藥學上相容的黏結劑，及/或佐 劑材料。藥片 '藥九、膠囊、喉片及其類似者可含有下列 之任何成分，或本質相似的化合物：結合劑，例如：微晶 粒纖維素、膠特拉加康斯膠樹或明膠；賦形劑，例如： 源粉或乳糖、崩解劑，例如：藻酸、匹莫膠（primogel)、 或玉米澱粉；潤滑劑，例如：硬脂酸鎂或司特羅（Ster0tes) ;滑動劑，例如：膠體的二氧化矽；增甜劑，例如：蔗糖 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 或糖精；或調味劑，例如：薄荷、水楊酸甲酯、或橙色的 橋味劑。 吸氣投藥時，化合物係以氣溶膠的型式從加壓的容器 或含有適當的推進劑，例如氣體（例如二氧化碳）之分藥器 、或噴霧器噴灑運送。 亦司經黏膜的或經皮的裝置進行全身的投藥。經黏膜 或經皮投藥時，調配物中可用適當穿過障礙的穿透劑。一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -125- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1如 般而言該穿透劑是已知技藝，包括例如經黏膜的投藥時之 兩性介面活性劑、膽鹽、及梭鏈孢酸衍生物。經黏膜的投 藥可經由使用鼻噴液或栓劑完成。經皮投藥時活性化合物 可調製成一般技藝上已知的藥膏、軟膏、凝膠或乳膏。 化合物亦可製備成栓劑的型式（例如用習見的栓劑， 例如可可油以及其它甘油酯）或滯留灌腸劑進行直腸的傳 輸。 具體實施例之一中，活性化合物可與保護化合物對抗 身體快速淸除之載體共同製備，該載體爲例如控制釋放之 調配物，包括植入物及微封包的傳輸系統。可使用生物可 降解的、生物相容的聚合物於，例如：乙烯醋酸乙烯酯、 聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚正酯類以及聚乳酸。製備 該調配物之方法爲熟悉此技藝的專業人士所熟知。該材料 亦可巾售得自 Alza Corporatior[及 Nova Pharmaceuticals， Inc °微脂粒的懸浮液（包括用病毒性抗原之單株抗體標定 感染細胞的脂球體）亦可作爲藥學上可接受的載體。被可 依據熟悉此技藝的專業人士習知的方法製備，例如描述於 美國專利第4，5 2 2，8 1 1號。 口服的或非經腸的組成物尤其有利於形成易於投藥及 劑量均勻的劑量單位型式。本文之劑量單位型式意指由物 理上不連接的單位形成之治療用單一劑量，內含預定量之 活性化合物的各單位可與經過計算醫藥上需要的載體產生 所要求的治療效果。本發明劑量單位型式之規格直接取決 於活性化合物獨特的特性及想要達成的特定治療效果，以 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本. 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 -126- 200300170 A7 B7 五、發明説明（ 及治療個體對在此技藝中該活性化合物製劑與生倶來的限 制。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之核酸分子可插入載體並作爲基因療法之載體 。基因療法之載體可運送至患者，例如：經靜脈注射、局 部投藥（參閱例如U · S · P a t e n t N 〇 · 5，3 2 8，4 7 0)或經立體定向 的注射（參閱例如 C h e η，e t a 1.，1 9 9 4 · P1. 〇 c · N a 11. A c a d. S c i. USA 9 1 : 3054- 3 05 7)。基因療法載體之藥學製劑可包括基 因療法之載體與可接受的稀釋劑，或可包含包埋基因傳輸 載劑之緩釋基質。此外，由重組型細胞可製作完整的基因 傳輸載體，例如反轉錄病毒的載體，藥學製劑可包括一種 或多種產生基因傳輸系統之細胞。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 專一結合於本發明蛋白質之抗體與揭不於此之舖選測 定法確認之其它分子，可以藥學組成物的型式投用以治療 各種病症。製備該組成物之相關原理及考慮因素，與成份 選擇之指導，參見例如：Reiningtοn : The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed.(Alfonso R. Geηnaro, et al” editors)Mack Pub. Co., Easton, Pa. · 1995 » Drug Absorption Enhancement Concepts, Possibilities,
Limitations, And Trends, H a r w ο o d Academic Publishers,
La nghorne，Pa.，1994 ;以及 Peptide And Protein Drug Delivery( Advances In Parenteral Sciences，Vol. 4)，1991，M. Dekker，New York。若抗原性蛋白質是細胞內的蛋白質且 整個抗體是作爲抑制劑使用，則以攝入抗體較佳。然而， 亦可用脂球體運送抗體、或抗體斷片進入細胞。當使用抗 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210:<297公釐） -127- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1如 體斷片時’較佳者爲可專一結合於目標蛋白質結合結構區 之最小的抑制斷片。例如，基於抗體的可變區域序列，可 設計仍保有結合目標蛋白質序列能力之肽分子。該肽類可 用化學合成及/或用重組去氧核糖核酸科技製作。參閱例 如：Marasco et al·，1993 Pr oc· Natl. Acad. Sci. USA，90 : 7 8 89-7 893。本文之調配物亦可含有一種以上治療特定適 應症所必須的活性化合物，以其具有互補活性而相互間沒 有不利影響較佳。此外，組成物可包含能提高其功能之藥 劑，例如：細胞毒性藥劑、細胞素、化學治療劑、或生長 抑制劑。該分子係以可有效達到預期目的之適當量存在於 組合物中。有效成分亦可封包於製備完的微膠囊內，例如 經共膠粒堆積技藝或界面聚合，例如分別爲羥基甲基纖維 素或明膠-微膠囊以及聚-(甲基異丁烯酸酯）微膠囊之微膠 囊的膠體藥物傳輸系統（例如：脂球體、白蛋白微球體、 微乳狀液、極微顆粒、及奈米膠囊或微乳狀液。 作爲活體內投藥之調配物必須先行滅菌。此可經由滅 菌之過濾膜過濾加以完成。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 可製備長效釋放型製劑。長效釋放型製劑之適當實施 例，包括內含抗體之厭水性的固體聚合物半滲透基質，該 基貧爲成形的物件，例如：膜、或微膠囊。長效—釋放基 質之*施例’包括：聚酯、水凝膠（例如：聚（2 _羥基乙基_ 異」烯酸酯）、或聚（乙烯基醇））、聚丙內酯（美國專利第 3,773,919號）、L-麩胺酸以及r乙基-^麩胺酸鹽共聚物、 W降‘性乙烯-醋酸乙烯酯 '可降解性乳酸-乙醇酸共聚物 ( CNS ) A4規iHT^_297讀）----- -128- 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局，'貝工消費合作社印製 五、發明説明（1知 ，例如·· LUPRON DEP〇Ttm(可注射微球體’由乳酸-乙醇 酸共聚物以及亮丙瑞林乙酸鹽組成）、以及聚羥基 丁酸。一些聚合物（例如··乙烯-醋酸乙烯酯及乳酸乙醇酸） 超過1 00天仍可釋放出分子，而某些水凝膠釋放蛋白質 的期間則較短。 藥學組成物可與投藥說明書共同置於容器、剝撕式面 膜或分藥器內。 篩選及偵測方法 本發明的分離核酸分子可用以表現CRF2-13蛋白質（ 例如在基因療法中於宿主細胞中經重組型表現載體進行表 現）、可用以偵測CRF2-13傳訊RNA(例如在生物樣品中） 或CRF2-13基因的基因損害、及調控GAVE8活性，並將 描述如下。此外，CRF2-13蛋白質可用以篩選調控CRF2-13活性或表現之藥物或化合物並治療其特徵在於CRF2-13 蛋白質不足或過量之病症，或所產生之CRF2_13蛋白質活 性減低或異常（相較於CRF2-13野生型蛋白質）之病症的藥 物或化合物。此外，本發明之抗-CRF2-13抗體可用以偵 測以及分離CRF2-13蛋白質，並調控CRF2-13活性。例如 ’ CRF2-13之活性包括T-細胞或NK細胞之生長以及分化 、抗體生產、及腫瘤生長。 本發明進一步的係關於在此描述的篩選測定法確認的 新穎藥劑及使用彼進行之上述的治療。 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 本纸張尺度適用中國國家標準（CN'S ) A4規格（210X 297公楚） -129- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1如 篩選測定法 本發明提供一種方法（亦稱爲”筛選測定法”）確認調節 劑’即結合於C R F 2 -1 3蛋白質或具有刺激或抑制c r f 2 -1 3 蛋白質效應（例如：CRF2-13表現或CRF2-13活性）之候選 或測試化合物或藥劑（例如：肽類、擬肽、小分子或其它 樂物）。本發明進一步的亦包含以在此描述之篩選測定法 確認的化合物。 具體實施例之一中，本發明提供一種測定方法，藉以 篩選與膜結合型C R F 2 -1 3蛋白質或多肽或其生物活性部分 結合或可調控其活性的候選或測試化合物。本發明之測試 化合物可使用任何技藝上已知的組合基因庫的方法取得， 包括：生物基因庫；空間定址性平行固相或液相基因庫； 須要解析的合成基因庫方法；” 一圓珠一化合物”之基因庫 方法；以及使用親和層析法選擇之合成基因庫方法。生物 的基因庫只限於肽基因庫，而其他四種基因庫則爲肽、非 肽寡聚物或小分子化合物基因庫。參閱例如：Lam，1 997. A nticancer Drug Design 12 ： 145。 本文之”小分子”意指分子量少於約5 kD之組成物， 最佳者少於約4 kD。小分子可爲，例如：核酸、肽類、 多胜肽、擬肽、碳水化合物、脂質或其它有機或無機分子 。化學物質及/或生物之混合物，例如：真菌、細菌、或 海藻萃取液的基因庫是技藝上已知的基因庫且可用任何本 發明之測定法篩選。 合成分子基因庫之方法的實施例可參見例如：DeWht， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部智慧財產局Μ工消費合作社印製 -130- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1会7 et a 1., 1993. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90 ： 6909; Erb? et al.，1994. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91 : 1 1 422 ； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Z u c k e r m a η n, e t a 1., 1 994. J. Med. C h e m . 37 : 2 6 7 8 » Cho, et a 1., 1 9 9 3. Science 261 : 1303 ; Carr ell，et al·，1994· An gew· Chem. Int. Ed. Engl. 33 · 2059; Car ell, et al., 1994. An gew. Chem· Int· Ed. Engl· 33 ·· 2061;以及 Gallop，et al.，1994. J. Med. Chem. 37 : 1 233 o 化合物基因庫可存在於溶液中（例如Houghten，1 992. Biotechniques 13 : 412-421)，或圓珠（Lam，1991. Nature 3 5 4 : 82-84)，晶片（Fodoi·，1993. Nature. 364 : 555-556)、 細菌（Ladnei·，U.S· Patent No. 5,223,409)、孢子（Ladnei.， U.S· Patent 5,233,409)、質體（Cull，et al.，1 992. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 9 : 1 8 65 - 1 869)或噬菌體（Scott and Smith， 1 9 90. Science 249 ： 3 86- 390 ； Devlin, 1 990. Science 249 : 404-406 ； Cwirla, et al., 1990. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87 : 637 8- 63 8 2 ; Felici, 1991. J· Mol. Biol. 222 : 30 1 -3 1 0 ;Ladner, U.S. Patent No. 5,233,409·) 0 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在具體實施例之一的測定法爲測定細胞，其中係將細 胞表面表現膜-結合型式的CRF2-13蛋白質、或其生物活 性部分之細胞與測試化合物接觸，測出測試化合物結合於 C R F 2 -1 3蛋白質之能力。細胞可爲哺乳動物的細胞或酵母 菌細胞。測試化合物與CRF2-1 3蛋白質之結合能力的測定 方法，係將（例如）測試化合物與放射性同位素或酵素的標 記偶合以偵測複合體中經標記的化合物，以測定測試化合 ^^張尺度適用中國國家標準（〇^)六4規格（210>< 297公釐） ~ ~~^ -131 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（1如 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 物與CRF2-1 3蛋白質或其生物活性部分之結合。例如，測 試化合物可直接或間接標記125ι、35S、14C或3H，且放射 性同位素可直接計數其放射性或以計數其閃爍數偵測。 此外，測試化合物可標記酵素，例如：辣根過氧化酶 、鹼性磷酯酶或虫螢光素酶，且可用適當的受質轉化至產 物偵測標記的酵素。在具體實施例之一中，其測定法包含 將在細胞表面表現膜-結合型式的CRF2-13蛋白質、或其 生物活性部分的細胞與習知能結合CRF2-1 3之化合物接觸 ，以形成測定混合物，再將測定混合物與測試化合物接觸 ，並測出測試化合物與CRF2-13蛋白質交互作用之能力， 其中測試化合物與CRF2-1 3蛋白質交互作用之能力的測定 法包含決定測試化合物對於選擇優先結合至CRF2-1 3蛋白 質或其生物活性部分的能力與習知化合物之比較。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在另一具體實施例中測定法爲測定細胞，其係包含將 在細胞表面表現膜-結合型式的CRF2-13蛋白質、或其生 物活性部分的細胞與測試化合物接觸，決定測試化合物調 控（例如：刺激或抑制）CRF2-1 3蛋白質或其生物活性部分 的活性之能力。決定測試化合物調控CRF2-1 3或其生物活 性部分的活性之能力，係用決定CRF2-13蛋白質與CRF2-1 3目標分子之結合或交互作用之能力完成。本文之”目標 分子”是可與CRF2-13蛋白質結合或交互作用之分子，例 如在細胞表面表現CRF2-13交互作用蛋白質之分子、第二 個細胞表面之分子、細胞外圍環境的分子、與細胞膜內部 表面聯結的分子或細胞質分子。CRF2-1 3目標分子可爲非 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2〗OX 297公釐） -132- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1会9 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) CRF2-13分子或本發明之CRF2-13蛋白質或多肽。在具體 實施例其中之一，其CRF2-13目標分子乃爲一種訊息傳遞 路徑之成份，其可增進細胞外信號（例如：因化合物與膜 結合型CRF2-1 3分子結合而產生的信號）經由細胞膜轉導 進入細胞。例如，目標分子可爲具有催化活性之二級細胞 間的蛋白質或爲可增進下游傳訊分子與CRF2-13相聯之蛋 白質。 可用上述直接結合之方法決定CRF2-13蛋白質結合至 或與CRF2-13目標分子交互作用之能力。在其中一個具體 實施例中，決定CRF2-13蛋白質結合至或與CRF2-13目標 分子交互作用之能力，可由目標分子之活性測定。例如， 可偵測其誘發的目標分子之細胞二級傳訊者（即細胞內的 Ca2+、二醯基甘油及IP3)、偵測目標分子對適當受質的催 化/活性、偵測其誘發的報導基因（包含操作性聯結於編碼 可偵測標識（例如虫螢光素酶）的核苷酸之CRF2-1 3反應性 調控元件）、或偵測細胞的反應（例如細胞存活率、細胞分 化或細胞增殖）以測定目標分子活性。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 另一具體實施例中，本發明之測定法爲非細胞層次的 測定法，其係包含使CRF2-1 3蛋白質或其生物活性部分與 測試化合物接觸，決定測試化合物結合至CRF2-1 3蛋白質 或其生物活性部分的能力。如上述說明，可直接或間接測 測g式化合物與C R F 2 -1 3蛋白質之結合。在此具體實施例 中’該測定包括使CRF2-1 3蛋白質或其生物活性部分與習 知結合CRF2-1 3之化合物接觸以形成測定混合物，使測定 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -133- 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（1知 混合物與測試化合物接觸，決定測試化合物與CRF2-1 3蛋 白質交互作用之能力，其中測試化合物與CRF2-1 3蛋白質 交互作用之能力的決定方法係包含比較測試化合物與習知 化合物對於優先結合至CRF2-13或其生物活性部分的能力 c 在另一具體實施例中，該測定法爲非細胞層次測定， 其係包含使CRF2-1 3蛋白質或其生物活性部分與測試化合 物接觸，並決定測試化合物調控（例如刺激或抑制）CRF2-1 3蛋白質或其生物活性部分的活性之能力。決定測試化 合物調控CRF2-13活性之能力，可採用上述直接結合的方 法，決定CRF2-13蛋白質結合至CRF2-13目標分子之能力 。另一具體實施例中，測試化合物對於調控CRF2-1 3蛋白 質活性之能力可由CRF2-13蛋白質對於進一步調控CRF2-1 3目標分子之能力決定。例如，目標分子對適當受質的 催化/活性可用先前描述之方法測定。 在另一具體實施例中，非細胞測定法包含使CRF2-1 3 蛋白質或其生物活性部分與習知結合CRF2-1 3之化合物接 觸以形成測定混合物，使測定混合物與測試化合物接觸， 決定測試化合物與CRF2-13蛋白質交互作用之能力，其中 測試化合物與CRF2-1 3蛋白質交互作用之能力的決定方法 包含決定CRF2-13蛋白質對於優先結合至或調控CRF2-13 目標分子之活性的能力。 本發明之非細胞層次測定法可使用溶解型或膜結合型 CRF2-13。當使用膜結合型CRF2-13蛋白質進行非細胞層 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公^ — — ' -134- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 200300170 Α7 Β7
五、發明説明（A (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 次測定時，可利用溶解劑使膜結合型CRF2-1 3蛋白質維持 在溶液狀態。該溶解劑之實施例包括非離子性兩性介面活 性劑，例如：η-辛基葡萄糖苷、n-十二烷基葡萄糖苷、n_ 十二烷基麥芽苷、辛醯基甲基蔔萄糖胺、癸醯基-N-甲 基葡萄糖胺、Triton® X-100、Triton X-114、The sit®、異 十三基聚（乙二醇醚）n、N-十二烷基·Ν，Ν-二甲基-3-銨基-1-丙烷磺酸鹽、3-(3-膽醯胺基丙基）二甲基銨基-1-丙烷磺 酸鹽（CHAPS)、或3-(3-膽醯胺基丙基）二甲基銨基-2-羥基-1-丙烷磺酸鹽（CHAPS〇）。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在本發明上述之多種測定方法之具體實施例中，可固 定CRF2-13蛋白質或目標分子以增進複合體分離自一種或 兩種蛋白質的未複合型式，並提供自動化之測定。測試化 合物結合至CRF2-13蛋白質，或CRF2-13蛋白質與目標分 子在候選化合物存在及不存在下之交互作用，可在內含反 應物之任何適用的容器內完成。該容器之實施例包括：微 量測試盤、試管以及微離心管。在具體實施例之一中，融 合型蛋白可提供附加的結構區，可允許一'種或二種蛋白質· 結合至基質。例如，GST-CRF2-13融合型蛋白質或標定 GST之融合型蛋白可吸附在谷胱甘肽瓊脂糖圓珠（Slgma C h e m i c a 1，S t · L 〇 u i s，Μ〇）或以谷胱甘肽衍生的微量測試盤 上，然後彼可合倂測試化合物或測試化合物及非吸附的目 標蛋白質或CRF2-13蛋白質，混合物在進行複合體形成條 件下反應（例如生理狀況下之鹽類及酸鹼度）。反應後，淸 洗圓珠或微量滴定盤孔以去除任何未結合上固定化基質（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -135- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1如 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 圓珠）的成份，直接或間接的測定複合體，例如描述於上 。此外，複合物可離解自基質，並可使用標準技藝測定 CRF2-13蛋白質結合之水準或活性。 其它固定化蛋白質在基質上之技藝亦可用於本發明之 篩選測定法。例如，CRF2-13蛋白質或其目標分子可利用 生物素及抗生蛋白鏈菌素之共軛作用加以固定化。生物素 化的CRF2-13蛋白質或目標分子可使用領域上已知的技藝 (例如生物素化組套，Pierce Chemicals，Rockford, IL)以生 物素-NHS(N-羥基-琥珀醯亞胺）製備，並固定於塗覆抗生 蛋白鏈菌素的96孔測試盤（Pierce Chemicals)。此外，可 與CRF2-13蛋白質或目標分子反應但不干擾CRF2-13蛋白 質結合至目標分子的抗體，可以共軛作用連結至平板的孔 中，以用抗體捕阱孔中未結合的目標或CRF2-13蛋白質。 除了用說明如上之偵測GST-固定化複合物的方法之外， 亦可包括使用與CRF2-13蛋白質或目標分子反應的抗體免 疫偵測複合物、及與CRF2-1 3蛋白質或目標分子活性相關 的酵素聯結測定。 經濟部智慈財產局員工消t合作社印製 另一具體實施例中，可用方法確認CRF2-13蛋白質表 現調節劑，其係將細胞與候選化合物接觸，並測定在細胞 中表現之CRF2-13傳訊RNA或蛋白質。比較在候選化合 物存在下CRF2-13傳訊RNA或蛋白質之表現水準以及缺 少候選化合物時CRF2-13傳訊RNA或蛋白質表現之水準 。然後基於此比對，可確認CRF2-13傳訊RNA或蛋白質 表現調節劑之候選化合物。例如，當候選化合物存在時 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -136- 200300170 A7 B7 五、發明説明（士 CRF2-13傳訊RNA或蛋白質之表現大於（即統計上顯著的 大於）候選化合物不存在時，則可確認此候選化合物是 CRF2-13傳訊RNA或蛋白質表現之刺激劑。此外，當候 選化合物存在時，CRF2-13傳訊RNA或蛋白質之表現小 於（統計上顯著的小於）候選化合物不存在時，則可確認此 候選化合物是CRF2-1 3傳訊RNA或蛋白質表現的抑制劑 。細胞中CRF2-13傳訊RNA或蛋白質表現之水準可用在 此描述之偵測CRF2-13傳訊RNA或蛋白質的方法測定。 在本發明之另一特色中，CRF2-13蛋白質可在二重雜 交測定或三重雜交測定中作爲”餌蛋白質”（參閱例如·· u.s.
Patent No. 5,283,317 ; Zervos，et al·，1993. Cell 72 : 223-232; Madura, et a 1., 1993. J. Biol. Chem. 268 · 1 2046-12054 ； Bartel, et al.5 1993. Biotechniques 14 · 920-924 ； Iwabuchi，et al.5 1 993. Oncogene 8 : 1 693- 1 696 ;以及 Brent W〇94/1 03 00)，以確認結合至或與CRF2-13交互作 用以及調控CRF2-13活性之其它蛋白質（“CRF2-13結合蛋 白質”或” C R F 2 -1 3 - b p ”）。該類C R F 2 -1 3結合蛋白質亦可能 涉及CRF2-13蛋白質信號之傳播，例如爲CRF2-13路徑上 游或下游之元件。 此二重雜交系統是根據大多數轉錄因子之調控本質， 由可分開的去氧核糖核酸結合結構區及活化結構區組成。 簡言之，該測定法是使用二種不同的去氧核糖核酸構築體 。在一個構築體中，將編碼CRF2-1 3之基因與習知的轉錄 因子（例如GAL-4)之去氧核糖核酸結合結構區編碼的基因 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 、11 經濟部智总財產局員工消費合作社印製 -137- 200300170 A7 ___B7 五、發明説明（1含4 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 融合。在另一構築體中，將編碼未確認的蛋白質（“獵物” 或樣本）、來自去氧核糖核酸序列的基因庫與編碼習知 的轉錄因子活化結構區的基因融合。若”餌”及”獵物”蛋白 質能在活體內交互作用，則可形成CRF2-13依存的複合體 ，轉錄因子的去氧核糖核酸結合結構區及活化結構區會因 而被拉近。拉近後轉錄因子開始反應可啓動轉操作性聯結 至轉錄調控位點的錄報導基因（例如LacZ)之轉錄作用。可 偵測報導基因之表現並分離內含功能的轉錄因子之細胞群 洛’以及用以取得編碼可與CRF2-13交互作用之蛋白皙之 選殖的基因。 本發明進一步的係關於以在此描述的上述筛選測定法 確認的新穎藥劑及使用彼之治療或測試。 本發明將用下列非限制的實施例作進一步的說明。 貫ί也例1 °揭不的C R F 2 · 1 3多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 經濟部智慧財產局S工消費合作社印製 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：4。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位直3 0之纈胺酸爲序列確認號碼：4之丙胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNATLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPViFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR(SEQ ID NO：4 ) 本ϋ尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -138- 200300170 Α7 Β7 五、發明説明（1知 實施例2。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基.酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：5。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置39之白胺酸爲序列確認號碼：5之異白胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYITWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFVJKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKICDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO：5) 實施例3。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：6。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置49之天門冬醯胺酸爲序列確認號碼：6之蘇胺酸取 代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGTPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEKHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID ΝΟιβ) 實施例4。揭示的CRF2-1 3多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智总財產局員工消費合作社印Μ. -139- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1知 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：7。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置65之精胺酸爲序列確認號碼：7之離胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTKRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS Ι^ΙΙ^Ι^νίΑΑΟσνίΝΚΤΕΜαΝΡΝΡΟΚΑΚΜΡΙ^ΑΙ^ΡεαΗΤΗΡνΑΤΡΟΡβΗΡΕβνΝΟΙ^Ι^ΡςΚΕΚΓΙ^νΗΡΤΡΗνΚΑΡΑ TQQTRWKKOLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ 工D ΝΟ··7) 實施例5。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：8。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置7 8之離胺酸爲序列確認號碼：8之精胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTR ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKS PWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGKTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO ： 8 ) 實施例6。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：9。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置90之Q {麩胺醯胺酸？ }爲序列確認號碼：9之天門冬 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·裝
、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -140- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1知 醯胺酸。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKNDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS Ι^ΙΙ^ΙΛαΑΑΟανίνίΚΤΙ^ΜΟΝΡν^ΟΗΑΚΜΡΗΑΙ^ΡβΟΗΤΗΡνΑΤΡΟΡβΚΡΕβνΝϋΙ^ΙΧΡΟΚΕΙ/π^νΗΡΤΡΚνίΙΑΡΑ TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO:9 } 實施例7。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：1 0。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置99之精胺酸爲序列確認號碼：1 0之離胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGKVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO：10) 實施例8。揭示的CRF2-1 3多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 經濟部智慧財產局資工消費合作社印製 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：11。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置1 1 2之纈胺酸爲序列確認號碼：丨1之白胺酸取代。 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 200300170 A7 B7 五、發明説明（1会8 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSWLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWLESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO： 11) 實施例9。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：1 2。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置1 1 9之酪胺酸爲序列確認號碼：1 2之苯丙胺酸取代 〇 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEFLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESWDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO： 12) 實施例10。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：1 3。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置1 29之纈胺酸爲序列確認號碼：1 3之異白胺酸取代 本纸張尺度適用中國國家標準（CN’S ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 衣· 經濟部智慧財產局貝工消費合作社印製 -142- 200300170 A7 _B7 五、發明説明（1会9 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ΜΑΟΡΕΚν^ΡΙ^Ι^Ι^ΑΑΡΘΚΡί^ΑΡΡΟΝνΤΚΙ^ΝΡενΥΙ/ΓνϊΙ^Ι^ΝΡζ^νΤΥΡνΑΥζ^ΡΤί^ν^ΕνΕΕΟΑαΤΚ ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPILVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO： 13) 實施例11。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：14。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置1 44之蘇胺酸爲序列確認號碼：1 4之天門冬醯胺酸 取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANANYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ 工D N〇：14) 實施例12。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 經濟部智慈財產局®工消費合作社印製 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：1 5。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置1 54之白胺酸爲序列確認號碼：1 5之丙胺酸取代。 本紙张尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -143- 200300170 經濟部智慈財產局資工消費合作社印製 kl B7 ____五、發明説明（1如 ΜΑΟΡΕί^ΡΙ^ΙΧΙ^ΑΑΡαΚΡΪ^ΑΡΡΟΝνΤΙ^αΝΡδνΥΙ/^Ι^Ι^ΝΡζ^νΤΥΡνΑΥζ^ΡΤΙ^ν^ΕνΕΕεΑΟΤΚ ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPADL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIVJKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS·. LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO：15) 實施例13。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：1 6。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼·· 2之多肽序列 位置170之離胺酸爲序列確認號碼：16之精胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSWLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNRTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESWDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO：16) 實施例14。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼·· 2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：17。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置1 7 5之纈胺酸爲序列確認號碼：1 7之白胺酸取代。 MAGFERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFViKEGAGNKTLFPLTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID N〇：17) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X 297公釐） (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝. 訂
.P -144- 200300170 A7 B7 五、發明説明（ 實施例15。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：1 8。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置1 89之丙胺酸爲序列確認號碼：1 8之纈胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPVASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO：18) 實施例16。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：1 9。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置1 99之精胺酸爲序列確認號碼：1 9之離胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSAKTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO：19) 實施例1 7。揭示的CRF2-1 3多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：20。變體之胺基酸 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝.
、1T 經濟部智^財產局資工消骨合作社印製 -145- 200300170 A7 B7 五、發明説明（1如 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置2 1 2之苯丙胺酸爲序列確認號碼：20之色胺酸取代 〇 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKWSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAR (SEQ ID NO:20) 實施例18。揭示的CRF2-13多肽胺基酸序列（序列確認號 碼：2)之序列變體 與序列確認號碼：2之胺基酸序列有一個胺基酸序列 差異的多肽序列展示於序列確認號碼：2 1。變體之胺基酸 序列用粗體字表示。展示於序列確認號碼：2之多肽序列 位置230之精胺酸爲序列確認號碼：21之離胺酸取代。 MAGPERWGPLLLCLLQAAPGRPRLAPPQNVTLLSQNFSVYLTWLPGLGNPQDVTYFVAYQSSPTRRRWREVEECAGTK ELLCSMMCLKKQDLYNKFKGRVRTVSPSSKSPWVESEYLDYLFEVEPAPPVLVLTQTEEILSANATYQLPPCMPPLDL KYEVAFWKEGAGNKTLFPVTPHGQPVQITLQPAASEHHCLSARTIYTFSVPKYSKFSKPTCFLLEVPEANWAFLVLPS LLILLLVIAAGGVIWKTLMGNPWFQRAKMPRALDFSGHTHPVATFQPSRPESVNDLFLCPQKELTRGVRPTPRVRAPA TQQTRWKKDLAEDEEEEDEEDTEDGVSFQPYIEPPSFLGQEHQAPGHSEAGGVDSGRPRAPLVPSEGSSAWDSSDRSW ASTVDSSWDRAGSSGYLAEKGPGQGPGGDGHQESLPPPEFSKDSGFLEELPEDNLSSWATWGTLPPEPNLVPGGPPVS LQTLTFCWESSPEEEEEARESEIEDSDAGSWGAESTQRTEDRGRTLGHYMAK (SEQ ID N〇：21)
實施例19。在人類胎盤的cDNA庫中確認CRF2-13序列 表1中對應至核苷酸XX至XX[序列確認號碼1之 4 1 - 3 52]的310個核苷酸斷片係經PCR使用Advantage II PCR 組套（BD Biosciences Cion tech，Palo Alto，CA，USA)與 人類CRF2-1 3之5’區域的特定引子確認自人類胎盤的 cDNA 庫（BD Biosciences Cion tech, Palo Alt。，CA，USA) 0 該弓丨子包括 Ax5-1(GCTGCAGGCCGCTCCAGGGAGGCCCCG 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2】0X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •費衣·
、1T 經濟部智慈財產局員工消費合作社印裂 -146- 200300170 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（1如 ;序列確認號碼：23)以及Ax3-1 (CCAGGTATTCGGACTCCACCCAGGGGGAC ;序歹丨J 確認號碼 :24)。使用該引子進行三十八個熱週期之PCR。CRF2-13 核酸產物經凝膠純化及定序。該序列相當於對應至揭示於 表1的CRF2-13序列。 基於此類發現選擇使用Rapid-ScreenTM Arrayed cDNA Library Panel of Human Placenta Sub-Plate 2H(0rigene Technologies，Inc.，Rockville，MD，USA)篩選及分離編碼成 熟蛋白質的CFR2-13選殖菌落。[序列確認號碼1之11-1 5 63]。用PCR証實序列確認號碼1的前10個鹼基是否存 在。先依不同大小-分層分離雙股的cDNA以改良基因庫 品質，然後分別地將彼聯接入載體。將cDNA庫排列於96 孔之微量滴定盤。 由於 Human Placenta Sub-Plate 2H 人類胎盤之 cDNA 係定向選殖入CMV表現載體pCMV6-XL4，故使用源自載 體之5’ PCR引子與基因專一的3’逆轉引子來確認CRF2-13 之選殖株系。在此硏究中，cDNA庫是以PCR爲基礎的步 驟，使用 Advantage II PCR 組套（BD Biosciences Clontech， P a 1 o A11 o 5 C A , U S A)及 A x 5 -1 (序列確認號碼：2 5 及 A x 3 · 2(TTGG丁丁CCCGCACACTCTTCCACTTCG;序歹!J 確言忍號石馬： 26)作爲PCR引子進行篩選。PCR分析是在96孔（每孔50 個菌落）排列板中進行。確認正性PCR之各孔（E2)，接著 稀釋取自該孔之大腸桿菌，塗片並分析產生含全長CRF2-13之選殖菌落。然後用序列分析証實CRF2-13選殖菌落 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -147 - 200300170 A7 B7 五、發明説明（1)4 之特性。 其它具體實施例 本發明已經詳細描述，上述說明之用意係藉以說明而 非限於本發明附加的申請專利範圍之範圍。其它特色、優 點、及修飾均屬於下列申請專利範圍之範圍。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -148-

Claims (1)

  1. 200300170 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 1 1. 一種分離的核酸分子，其編碼的多肽所包含之胺基 酸序列至少有85%係與序列確認號碼：2之胺基酸21-520 相同。 2 · —種載體，其包含如申請專利範圍第1項之核酸分 3 · —種細胞，其包括如申請專利範圍第2項之載體。 4.—種藥學組成物，其包含如申請專利範圍第1項之 核酸分子及藥學上可接受的載體。 5·—種分離的核酸分子，其編碼的多肽所包含之胺基 酸序列至少有90%係與序列確認號碼：2之胺基酸21-520 相同。 6. —種分離的核酸分子，其編碼的多肽所包含之胺基 酸序列至少有95%係與序列確認號碼：2之胺基酸21-520 相同。 7. —種分離的核酸分子，其編碼的多肽所包含之胺基 酸序列至少有98%係與序列確認號碼：2之胺基酸21-520 相同。 8·—種分離的核酸分子，其編碼的多肽所包含之胺基 酸序列至少有99%係與序列確認號碼：2之胺基酸21-520 相同。 9.如申請專利範圍第8項之核酸分子，其中該核酸分 子編碼的多肽之胺基酸序列相較於序列確認號碼：2之胺 基酸2 1 - 5 20的胺基酸序列具有一個或多個取代基。 1 0.如申請專利範圍第9項之核酸分子，其中該分子 本^張尺度適用中國國家標準（CNS ) Ad規格（210X297公釐) _ 1Δ〇~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 、^1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200300170 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 2 在嚴格條件下可雑交至與包含序列確認號碼：1核酸分子 互補之核酸序列。 1 1.如申請專利範圍第9項之核酸分子，其所編碼之 該多肽可專一結合至多肽配體。 12.—種分離的核酸分子，其編碼之多肽包括序列確 認號碼：2胺基酸21-520。 1 3 .如申請專利範圍第1 2項之核酸分子，其所編碼之 該多肽是由序列確認號碼：2胺基酸1 -520組成。 14·如申請專利範圍第12項之核酸分子，其中該分離 的核酸分子包含序列確認號碼：1之核苷酸丨_丨5 63。 15.如申請專利範.圍第12項之核酸分子，其所編碼之 該多肽包括序列確認號碼：2之胺基酸1 - 5 2 0。 16·—種載體’其係包含如申請專利範圍第12項之核 酸分子及藥學上可接受的載體。 1 7 · —種細胞，其內含如申請專利範圍第1 6項之載體 〇 1 8 · —種分離的核酸，其可編碼至少4 9 9個胺基酸之 多肽，其中該核酸在高度嚴格條件下可與序列確認號碼： 1雜交。 19·一種分離的核酸，其係編碼至少499個胺基酸之 多肽，其中該核酸在中度嚴格條件下可與序列確認號碼： 1雜交。 2 0 · —種分離的核酸，其係編碼至少4 9 9個胺基酸之 多肽，其中該核酸在低度嚴格條件下可與序列確認號碼： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） ---------裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、tT 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -150 200300170 ABCD 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 3 1雜交。 2 1 · —種本質上經純化的多肽，其包含之胺基酸序列 至少有85 %係與序列確認號碼·· 2之胺基酸2 1 -520的胺基 酸序列相同。 22·—種藥學組成物，其包含如申請專利範圍第20項 之多肽以及藥學上可接受的載體。 2 3 . —種本質上經純化的多肽，其包含之胺基酸序列 至少有95 %係與序列確認號碼：2中胺基酸2 1 -520的胺基 酸序列相同。 . 24· —種本質上經純化的多肽，其包含之胺基酸序列 至少有99%係與序列確認號碼：2中胺基酸2 1 -520的胺基 酸序列相同。 25 ·如申請專利範圍第24項之本質上經純化的多肽， 其中該多肽與序列確認號碼：2胺基酸2 1 -520的不同處是 在於有一個或多個取代。 26·—種本質上經純化的多肽，其係包含序列確認號 碼：2之胺基酸2 1 -520。 27 ·如申請專利範圍第26項之本質上經純化的多肽， 其中該多肽包含序列確認號碼·· 2之胺基酸序列。 2 8·如申請專利範圍第26項之本質上經純化的多肽， 其中該多肽包含序列確認號碼：2之胺基酸2 1 -520。 29·如申請專利範圍第26項之本質上經純化的多肽， 其中該多肽是由序列確認號碼：2之胺基酸序列組成。 3 0·—種多肽，其與序列確認號碼：2之胺基酸21-23 0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -151 - 200300170 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A8 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 4 至少有85%的同源性。 3 1 ·如申請專利範圍第3 0項之多肽，其中該多肽可專 一的結合至多肽配體。 32·—種多肽，其與序列確認號碼·· 2之胺基酸21-230 至少有95%的同源性。 33·—種多肽，其與序列確認號碼：2之胺基酸21-230 至少有9 8 %的同源性。 34·—種多肽，其與序列確認號碼：2之胺基酸21-230 至少有99%的同源性。 · 3 5 ·如申請專利範圍第34項之多肽，其中該多肽與序 列確認號碼：2胺基酸2 1 -230的不同之處是在於其上係經 一個或多個取代。 36.—種本質上經純化的多肽，其係包含序列確認號 碼：2之胺基酸2 1 - 230。 37·如申請專利範圍第26項之多肽，其中該多肽是由 序列確認號碼：2之胺基酸21 -230組成。 38·—種融合多肽，其包含操作性聯結於非CRF2-13 多肽的如申請專利範圍第1 8項多肽。 .39·如申請專利範圍第38項之融合多肽，其中該非 CRF2-13多肽包含至少一個選自下列之成員：免疫球蛋白 分子之Fc區域或抗原決定部位之標誌、HIS標籤、及 MYC標籤。 4 0 · —種藥學組成物，其包含如申請專利範圍第2 6項 之融合多肽及藥學上可接受的載體。 尽紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -152- ^訂 — (請先閱讀背面之注意事項存填寫本頁) 200300170 8 8 8 8 ABCD 六、申請專利範圍 5 41. 一種融合多肽，其包含操作性聯結於非CRF2-13 多肽之如申請專利範圍第26項之多肽。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 42. 如申請專利範圍第4 1項之融合多肽，其中該非 CRF2-13多肽包含至少一個選自下列之成員：免疫球蛋白 分子之Fc區域或抗原決定部位之標誌、HIS標籤、及 Μ Y C標籤。 43 . —種藥學組成物，其係包含如申請專利範圍第4 1 .項之融合多肽以及藥學上可接受的載體。 44. 一種融合多肽，其係包含操作性聯結於非CRF2-13 多肽之如申請專利範圍第30項多肽。 45. 如申請專利範圍第44項之融合多肽，其中該非 CRF2-13多肽包含至少一個選自下列之成員：免疫球蛋白 分子之Fc區域或抗原決定部位之標誌、HIS標籤、及 Μ Y C標籤。 4 6.—種藥學組成物，其係包含如申請專利範圍第44 項之融合多肽以及藥學上可接受的載體。 47.—種融合多肽，其係包含操作性聯結於非CRF2-13 多肽之如申請專利範圍第36項多肽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 .48.如申請專利範圍第47項之融合多肽，其中該非 CRF2-13多肽包含至少一個選自下列之成員：免疫球蛋白 分子之Fc區域或抗原決定部位之標誌、HIS標籤、及 Μ Y C標籤。 4 9 . 一種藥學組成物，其係包含如申請專利範圍第4 7 項之融合多肽以及藥學上可接受的載體。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -1 53 - 200300170 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 6 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 5 0·—種抗體，其可選擇性結合至如申請專利範圍第1 項之多肽、如申請專利範圍第26項之多肽、如申請專利 範圍第26項之多肽、如申請專利範圍第30項之多肽、如 申請專利範圍第3 6項之多肽、如申請專利範圍第3 8項之 融合多肽、如申請專利範圍第4 1項之融合多肽、如申請 專利範圍第44項之融合多肽、或如申請專利範圍第47項 之融合多肽。 5 1.如申請專利範圍第50項之抗體，其中該抗體可中 和CRF2-13多肽與CRF2-13配體之結合。 52·如申請專利範圍第50項之抗體，其中該抗體是多 株抗體。 5 3 .如申請專利範圍第5 0項之抗體，其中該抗體是單 株抗體。 5 4.如申請專利範圍第5 3項之單株抗體，其中該單 株抗體係選自包括·鼠科動物單株抗體、及人類化早株抗 體。 5 5.如申請專利範圍第54項之抗體，其中該單株抗體 是人類化單株抗體。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 56. —種組套，其係包含一個或多個容器，該容器內 含之化合物係選自：CRF2-13核酸、CRF2-13多肽及 CRF2-13多肽之抗體。 57. 如申請專利範圍第56項之組套，其中該化合物內 含藥學上可接受的載體。 5 8. —種產生CRF2-13多肽之方法，該方法包含培養 -154 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 200300170 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 7 內含如申請專利範圍第1項之核酸分子的細胞，在允許該 核酸分子編碼之多肽表現的條件下培養該細胞。 59. —種產生CRF2-13多肽之方法，該方法包含培養 內含如申請專利範圍第1 2項之核酸分子的細胞，在允許 該核酸分子編碼之多肽表現的條件下培養該細胞。 60. —種在生物樣本中偵測CRF2-13核酸分子是否存 在的方法，該方法包含： 使樣品與核酸探針接觸；以及 若存在，確認結合的探針’， 從而偵測該樣本中CRF2-13核酸分子是否存在。 61. 如申請專利範圍第60項之方法，其中該CRF2-13’ 核酸分子是用PCR反應進行偵測，所使用之引子爲 (GCTGCAGGCCGCTCCAGGGAGGCCCCG ;(序歹ij 確言忍號石馬： 號碼：24)。 62· —種在生物樣本中偵測CRF2-13多肽是否存在的 方法，該方法包含： 在允許該多肽與該化合物形成複合體之條件下，使樣 品與選擇性結合至該多肽之化合物接觸；以及 偵測該複合體（若存在），從而確認該樣本中之該多肽 〇 63·—種調控CRF2-13多肽之活性的方法，該方法包 含使內含該多肽之細胞樣品與一個在與該多肽結合後其數 量足以調控多肽之活性的化合物接觸。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝--- 訂--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -155- 200300170 A8 B8 C8 _ D8 々、申請專利範圍 8 64 ·如申請專利範圍第63項之方法，其中該化合物是 可溶性CRF2-1 3多肽抑制劑。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 65 ·如申請專利範圍第64項之方法，其中該可溶性 CRF2-13抑制劑包括之多肽至少有85%與序列確認號碼： 2之胺基酸21 -260同源。 66·—種篩選對於經細胞素調節的免疫病症之活性或 潛伏期或遺傳傾向的調節劑之方法，該方法包含： 使測試化合物與CRF2-1 3多肽接觸；以及 決定該測試化合物是否可結合至該CRF2-1 3多肽·，其 中該測試化合物結合至該多肽係指測試化合物爲經細胞素 調節的免疫病症之活性或潛伏期或遺傳傾向的調節劑。’ 6 7 . —種舖選經細胞素調節的免疫病症的活性或潛伏 期或遺傳傾向之調節劑的方法，該方法包含： 對患有該免疫病症或增加該免疫病症風險之測試動物 投用測試化合物，其中該測試動物係重組表現CRF2-1 3 ; 測量該測試動物中該多肽活性之表現； 測量重組表現該多肽且未增加該免疫病症風險之對照 組動物中該多肽之活性；以及 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 比較該測試動物及該對照組動物中該多肽之表現， 其中，相較於該對照組動物，該多肽活性在該測試動 物中之變化意指測試化合物爲該免疫病症潛伏期之調節劑 ，且其中該經細胞素-調節的免疫病症係選自：自體免疫 病症、T-淋巴細胞-相關的病症、細胞增殖病症、細胞分 化病症、及免疫缺乏的病症。 -156 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇χ297公釐） 200300170 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 9 68.—種決定CRF2-13多肽含量之變化是否相關於疾 病之存在或遺傳傾向的方法，該方法包含： a) 測量該患者之檢體中該多肽之含量；以及 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) b) 比較步驟（a)中該多肽之含量與對照試樣中所存在 之該多肽含量， 其中相較於對照試樣中該多肽之含量，步驟（a)中該 多肽含量之變異意指該患者身上該疾病之存在或具有該疾 病之遺傳傾向。 69·如申請專利範圍第68項之方法，其中該患者是人 類。 7 0·—種決定CRF2-13核酸分子之含量變化是否相關 於疾病之存在或遺傳傾向之方法，該方法包含： a) 測量該患者之檢體中之核酸含量；以及 b) 比較在步驟（a)中該核酸之含量與在對照試樣中存 在之該核酸含量， 其中，相較於對照試樣中之核酸含量，在步驟（a)中 該核酸含量之變化意指該患者身上該疾病之存在或具有亥 疾病之遺傳傾向。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 7 1.如申請專利範圍第70項之方法，其中該患者是人 類。 7 2 · —種治療或預防與經細胞素調節之病症相關的病 理狀況的方法，該方法包含對患者投用可提高多肽的含量 而足以緩和或預防該患者之病理狀況的藥劑，該藥劑包含 CRF2-1 3多肽之細胞外胺基酸序列。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 200300170 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍1Q 7 3 .如申請專利範圍第7 2項之方法，其中該患者是人 類。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 74.如申請專利範圍第72項之方法，其中該藥劑是一 種包括CRF2-13多肽之細胞外胺基酸序列之多肽。 7 5 .如申請專利範圍第74項之方法，其中該多肽爲一 種融合多肽，其係包含融合至非CRF2-13多肽的CRF2-13 多肽之細胞外胺基酸序列。 76。 如申請專利範圍第72項之方法，其中該藥劑是一 種核酸，其編碼之多肽包括CRF2-1 3多肽之細胞外胺基酸 序歹0。 77. —種治療或預防病理狀況的方法，該方法包含投 用專一結合至CRF2-13多肽而足以緩和或預防病理狀況之 數量的抗體。 78·如申請專利範圍第77項之方法，其中該患者是人 類。 79·—種治療患者類風濕性關節炎之方法，該方法包 含對患者投用能調控該患者CRF2-1 3多肽之含量的藥劑。 80.如申請專利範圍第79項之方法，其中該患者是人 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 類。 8 1 ·如申請專利範圍第79項之方法，其中該藥劑是 CRF2-13核酸或多肽。 8 2 ·如申請專利範圍第7 9項之方法，其中該藥劑可提 高該患者身上該CRF2-13多肽之量。 8 3 ·如申請專利範圍第7 9項之方法，其中該藥劑可降 -158- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4現格（210X297公釐） 200300170 ABCD 六、申請專利範圍 11 低該患者身上該CRF2-13多肽之量。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 84. 如申請專利範圍第79項之方法，其中該藥劑是 抗-CRF2-13抗體。 85. —種治療患者多發性硬化之方法，該方法包含對 患者投用調控該患者CRF2-1 3多肽之量的藥劑。 86. —種調控血管平滑肌細胞增殖之方法，該方法包 含使血管平滑肌細胞與調控該細胞CRF2-13多肽之量的藥 劑接觸。 87. —種治療或預防患者發炎之方法，該方法包含對 該患者投用調控該患者CRF2 1 3多肽之量的藥劑。 8 8. —種分離的多核苷酸，其係包含在序列確認號碼· :3上從核苷酸30957至30967的至少10個鄰近核苷酸， 其限制條件爲該多核苷酸之位置30962爲” A”或” G”。 89. 如申請專利範圍第88項之多核苷酸，其中該序列 之位置30962爲”A”。 90. 如申請專利範圍第8 8項之多核苷酸，其中該序列 之位置30962爲”G”。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 91. 如申請專利範圍第88項之多核苷酸，其中該多核 苷酸包括序列確認號碼：3的至少1 5個鄰近核苷酸。 92·如申請專利範圍第88項之多核苷酸，其中該多核 苷酸包括序列確認號碼：3的至少20個鄰近的核苷酸。 93·如申請專利範圍第88項之多核苷酸，其中該多核 苷酸之長度約爲10至100個核苷酸。 94·如申請專利範圍第88項之多核苷酸，其中該聚核 -159- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 200300170 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A8 B8 C8 D8六、申請專利範圍 12 — 一 苷酸序列之長度約爲1 0至9 0個核苷酸。 95·如申請專利範圍第88項之多核苷酸，其中該聚核 苷酸序列之長度約爲1 〇至7 5個核苷酸。 9 6·如申請專利範圍第88項之多核苷酸，其中該多核 音酸之長度約爲1 0至5 0個鹼基。 9 7 ·如申g靑專利範圍第8 8項之多核苷酸，其中該多核 苷酸之長度約爲10至40個鹼基。 9 8 · —種分離的多核苷酸，其係包含在序列確認號碼 ’· 3上從核苷酸30650至30660的至少10個鄰近核苷酸， 其限制條件爲該多核苷酸之位置30655爲” A”或”G”。 99·如申請專利範圍第98項之多核苷酸，其中在該序 列之位置3065 5上爲”A”。 100·如申請專利範圍第98項之多核苷酸，其中該序 列之位置3065 5爲”G”。 101·—種分離的多核苷酸，其係包含在序列確認號碼 :3上從核苷酸28739至28749的至少10個鄰近核苷酸， 其中該多核苷酸之位置28744爲”A "或”G “。 102. 如申請專利範圍第1〇1項之多核苷酸，其中該序 列之位置28744爲”A”。 103. 如申請專利範圍第1〇1項之多核苷酸，其中該序 列之位置28744爲”G”。 1 04. —種分離的多核苷酸，其係包含在序列確認號碼 :3上從核苷酸28442至2845 2的至少10個鄰近核苷酸， 其中該多核苷酸之位置2844 8爲” C”或”T”。 (請先閱讀背面之注意事項#填寫本頁) _裝· 、1T· -IP 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -160- 200300170 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍13 105·如申請專利範圍第104項之多核苷酸，其中該多 核苷酸之位置28448爲” C”。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 106.如申請專利範圍第104項之多核苷酸，其中該多 核苷酸之位置28448爲” T”。 107·—種分離的多核苷酸，其係包含在序列確認號碼 :3上從核苷酸942 1至943 1的至少10個鄰近核苷酸，其 中該多核苷酸之位置9426爲” A”或” G”。 108. 如申請專利範圍第107項之多核苷酸，其中該多 核苷酸之位置9426爲” A”。 109. 如申請專利範圍第107項之多核苷酸，其中該多 核苷酸之位置9426爲” G”。 1 1 0. —種分離的多核苷酸，其係包含在序列確認號碼 :3上從核苷酸9157至9167的至少10個鄰近核苷酸，其 中該多核苷酸之位置9162爲” A”或” G”。 1 1 1 .如申請專利範圍第1 1 0項之多核苷酸，其中該多 核苷酸之位置9162爲” A”。 1 12.如申請專利範圍第110項之多核苷酸，其中該多 核苷酸之位置9162爲”T”。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 1 3 · —種分離的多核苷酸，其係包含在序列確認號碼 :3上從核苷酸8806至8816的至少10個鄰近核苷酸’其 中該多核苷酸之位置8811爲”C或”T”。 1 14.如申請專利範圍第113項之多核苷酸，其中該多 核苷酸之位置8 8 1 1爲” C”。 1 1 5 .如申請專利範圍第1 1 3項之多核苷酸，其中該多 -161 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（2I0X297公釐） 200300170 A8 B8 C8 D8 「、申請專利範圍14 核苷酸之位置8811爲”Γ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -162-
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