TR2022015122A2 - Hyaluroni̇k asi̇t ve seti̇l mi̇ri̇stoleat i̇çeren i̇n-si̇tu jel formülasyonu ve bu formülasyonun osteoartri̇t tedavi̇si̇nde kullanimi - Google Patents

Abstract

Buluş, osteoartrit tedavisinde kullanılmak üzere etkinlik süresi uzun olan, tekrarlayan enjeksiyonları gerektirmeyen ve düşük maliyetli in-situ jel formülasyonu, bu formülasyonun hazırlama yöntemi ve osteoartrit tedavisinde kullanımı ile ilgilidir.

Description

TARFNAME HYALURONIK ASIT VE SETIL MIRISTOLEAT IÇEREN IN-SITU JEL FORMÜLASYONU VE BU FORMÜLASYONUN OSTEOARTRIT TEDAVISINDE KULLANIMI Bulusun Ilgili Oldugu Teknik Alan Bulus, osteoartrit tedavisinde kullanilmak üzere etkinlik süresi uzun olan, tekrarlayan enjeksiyonlari gerektirmeyen ve düsük maliyetli in situ jel formülasyonlari, bu formülasyonlarin hazirlama yöntemi ve osteoartrit tedavisinde kullanimi ile ilgilidir.

Teknigin Bilinen Durumu Vücutta bulunan eklemlerde her kemigin ucunu kaplayan ve oldukça saglam bir yapi olan kikirdak bulunur. Eklemlerde bulunan kikirdak yapisi, eklemlerin rahat hareket edebilmesi için yumusak ve kaygan bir yüzey olusturarak kemikler arasinda adeta bir yastik görevi görür. Kireçlenme ise kaygan bir zemin olusturan kikirdagin zedelenmesi sonucu olusur. Bu zedelenme agriya neden olur. Ayni zamanda eklemlerde sisme ve rahat hareket edememe gibi problemler olusturur. Eger osteoartritin önüne geçilmezse zaman içerisinde hasar ilerler ve kikirdak yapilar parçalanarak eklemlerde kikirdak parçaciklari birikebilir. Bu durum ise iltihaplanmaya ve daha fazla hasara neden olabilir Osteoartrit, sikligi yasla artan, özellikle yük tasiyan eklemlerde hasar yapan kronik seyirli bir hastaliktir.

Farkli etyopatolojik nedenlerle gelisen ve ilerleyici bir hastalik olan osteoartiritin tedavisinde amaç; agriyi azaltmak, eklem hareket açikligini artirmak ve fonksiyonel bozuklugu gidermektir.

Osteoartirit bölgesel bir hastalik oldugu için ilaçlarin intraartiküler uygulanmasi tedavinin daha etkili olmasini saglamaktadir. Hyaluronik asit (HA), saglikli eklemlerde bulunan ancak osteoartritte azalmis olan dogal bir biyomateryal olup, klinikte de siklikla güvenle tercih edilen bir etkin maddedir. Ancak etkinlik süresinin yeterince uzun olmamasi tekrarlayan enjeksiyonlari gerektirmektedir.

Yukarida da bahsedildigi gibi, hyaluronik asit, eklem kikirdaklarinda ve eklem sivisinda bulunan ve eklemin kayganligini saglayan özel bir proteindir. Kireçlenmelerde, eklemdeki miktari azaldigindan zamanla kikirdak kaybi, kemiklerde sürtünmeler ve bunlarin sonucunda da agri ve hareket kisitliligi gelisir.

Setil miristoleat, bir setillenmis yag asididir. Miristoleik asidin setil esteridir. özellikle dejeneratif osteoartiritin etkili tedavisini saglamak için aktif bilesen olarak hidrofilize sülfasalazin ve hyaluronik asit içeren bir bilesimi açiklanmaktadir. semptomlarin giderilmesi için bahsi geçen bilesimin kullanimini ve bilesimin hazirlanmasi için kullanilan bir yöntemi açiklamaktadir.

Bilinen teknikte yer alan ve osteoartirit tedavisinde veya semptomlarinin giderilmesinde kullanilan formülasyonlarin genel problemi çözelti formunda olmalari ve bu sebeple uygulama sonrasinda hizli bir sekilde eklemden ayrilmasi ve dolayisiyla çok sik uygulama gerektirmesidir. Bu uygulamanin agrili bir uygulama olmasi nedeniyle, sik tekrar gerektirmesi hastalarin tedaviye uyumunu zorlastirmaktadir.

Bulus sahipleri hasta uyuncunu arttiran, enjeksiyon sayisini azaltan, yüksek etkinlige sahip hyaluronik asit formülasyonlari hazirlamayi amaçlamaktadir.

Bulus sahipleri bu dogrultuda yaptiklari çalismalar neticesinde intraartiküler yol ile kullanilabilecek, etkin madde olarak hyaluronik asit ve setil miristoleat içeren in situ jel formülasyonlari gelistirmistir. Bu sekilde hem daha az uygulama gerektiren bir in-situ jel formülasyonu elde edilmis hem de hyaluronik asit ve setil miristoleat sinerjik etkisiyle daha yüksek etki elde edilmistir.

Bulusun Kisa Açiklamasi ve Amaçlari Bulus, yukarida da bahsedildigi gibi etkin madde olarak hyaluronik asit ve setil miristoleat içeren in-situ jel formülasyonlarina, bu formülasyonlarin osteoartrit tedavisinde kullanimina ve bu formülasyonlarin hazirlanma yöntemlerine iliskindir.

Bulusta, eklemlerdeki asinma ve yipranma sonucu gelisen osteoartritin tedavisinde eklem kikirdaklarinda ve eklem sivisinda bulunan ve eklemin kayganligini saglayan özel bir protein olan hyaluronik asit ve eklemleri ve kaslari yaglamaya, dokulari yumusatmaya ve esnekligi artirmaya yardimci olan setil miristoleat bilesenleri kullanilmaktadir. Böylece, hyaluronik asit ve setil miristoleat bilesenlerinin bir arada kullanilmasiyla osteoartrit tedavisinde etkinligi yüksek bir formülasyon saglanmaktadir.

Bulusun bir diger amaci, osteoartrit tedavisinde sürekli ve tekrarlayan enjeksiyon uygulamalari gerektirmeyen in-situ jel formülasyonu ortaya koymaktir. Hyaluronik asit ve setil miristoleat bilesenlerinin bir arada kullanilmasiyla osteoartrit tedavisinde etkinligi yüksek bir formülasyon elde edilmistir; böylece tekrarlayan uygulamalar gerekmemektedir.

Sekillerin Kisa AçiklamasiFigür 1: Bulusa uygun in-situ jel formülasyonlar ve referans ürünlerle yapilan in vivo çalisma sonuçlarindan yola çikarak elde edilen Mankin skorlamasi grafik formunda gösterilmektedir. Figürde yer alan kisaltmalar asagida açiklanmaktadir.

OA kontrol: Osteoartrit olusturulan ve 0,1 mL serum fizyolojik uygulanan grup HA in situ: HA+SM in situ: 0,1 mL hyaluronik asit ve setil miristoleat içeren in situ jel uygulanan Piyasa: 0,1 mL AdantT'VI uygulanan grup SM: uygulanan grup Bulusun Ayrintili Açiklanmasi Bulus, osteoartrit tedavisinde kullanilmak üzere etkinlik süresi uzun olan, tekrarlayan enjeksiyonlari gerektirmeyen ve düsük maliyetli hyaluronik asit ve setil miristoleat içeren in-situ jel formülasyonu ile bu formülasyonun hazirlama yöntemi ve osteoartrit tedavisinde kullanimi ile ilgilidir.

Setil miristoleat, Hyaluronik asit ile sinerjik etki olusturmaktadir. Hyaluronik asit ve setil miristoleatin birlikte kullanilmasi artiküler yüzey dejenerasyonunu hyaluronik asitin veya setil miristoleatin tek baslarina kullanilmasina göre daha fazla azaltmaktadir.

Hyaluronik asit ile setil miristoleatin birlikte kullanilmasi, bir tasiyici sistem içerisinde osteoartrite karsi makroskobik ve histolojik açidan etkinlik göstermektedir. Dolayisiyla, ilacin uygulama sayisi veya dozunun düsürülmesini saglanmakta; hasta uyumu arttirilmaktadir.

Bulusun bir uygulamasi, bulusa konu hyaluronik asit ve setil miristoleat içeren in-situ jel formülasyonuna yönelik olup, söz konusu formülasyon bu etkin maddelere ek olarak en az bir farmasötik olarak kabul edilebilir yardimci madde içerir. Burada bahsi geçen farmasötik olarak kabul edilebilir yardimci madde, herhangi bir terapötik aktivitesi olmayan, etkin maddelerin istenilen sekilde formüle edilmesini saglayan maddeleri ifade etmektedir.

Bulus kapsaminda kullanilan “in-situ jel” ifadesi polimerlerden olusan ve uygulandigi bölge içerisinde sividan jele dönüsen (sol-jel özelligine sahip olan) formülasyonlari ifade etmektedir. Bir diger deyisle bulusa konu in-situ jel formülasyonlari, uygulama öncesinde ve esnasinda sivi formda iken intraartiküler uygulama sonrasinda jel formuna geçmekte ve bu sekilde uygulama alaninda daha uzun süre kalmaktadir.

Bulusa konu bu formülasyonlar, uygulama öncesinde oda sicakliginda veya daha düsük sicakliklarda tutulur ve intraartiküler uygulama sonrasinda vücut isisi ile temas ettiklerinde jel formuna dönüsürler.

Bulusa uygun in-situ jel formülasyonu etken madde olarak hyaluronik asit ve setil miristoleat ve yardimci madde olarak ise poloxamer 407 ve poloksamer 188 ve istege bagli olarak baska farmasötik olarak kabul edilebilir yardimci maddeler içerir.

Bulus kapsaminda kullanilan poloksamer 407 ve poloksamer 188 polietilen glikol- polipropilen glikol-polietilen glikol'den olusan üç bloklu kopolimeri ifade etmekte olup, polosamer 407'de polietilen glikol bloklari 101 adet etilen glikol ünitesi ve 56 adet propilen glikol ünitesi bulunurken, poloksamer 188'de 79-80 adet etilen glikol ünitesi ve 27-28 adet propilen glikol ünitesi bulunur. Poloksamer 188'in yapisi örnegin Tian, J., L., et al. “Synthesis and Characterization of Poloxamer 188-grafted heparin Emanuele, M., “Differential Effects of Commercial-Grade and Purified Poloxamer 188 sekildedir.

Bulusun tercih edilen bir uygulamasinda poloksamer 407 ve poloksamer 188 oraninda, özellikle tercihen 1:4 ile 1:1 oraninda, örnegin; agirlikça 1:4 veya 1:2 veya 3:4 veya 1:1 oraninda kullanilir. Bu oranlarda, özellikle 1:1 oraninda kullanilan poloksamer 407 ve poloksamer 188 varliginda hazirlanan hyaluronik asit ve setil miristoleat içeren farmasötik bilesimlerin etkin bir sekilde in-situ jel formunu aldigi tespit edilmistir.

Bulusa uygun formülasyonlar, farmasötik olarak kabul edilebilir yardimci madde olarak ayrica su veya sulu çözelti içerebilir.

Bulusun tercih edilen bir uygulamasinda bulusa uygun formülasyonlar; saf su veya veya %10 oraninda, tercihen % 0,9 oraninda MgCl2, CaCl2, NaCl veya KCI tuzlari içeren sulu çözelti içerebilir. Bulusun özellikle tercih edilen bir uygulamasinda formülasyon olarak agirlikça %0,9 oraninda NaCl içeren sulu çözelti kullanilir.

Bulusun tercih edilen bir uygulamasinda bulusa uygun in-situ jel formülasyonunda etken madde olarak kullanilan hyaluronik asit ve setil miristoleata ilaveten agirlikça 1:4 poloksamer 407 ve poloksamer 188 ve %0,9 oraninda NaCl içeren sulu çözelti kullanilir.

Bu dogrultuda bulusa uygun in-situ jel formülasyonu; - 1-30 g poloksamer 407 - 1-30 g poloksamer 188 - 1-10 mg/ml hyaluronik asit - 1-10 mg/ml setil miristoleat ve - %0,01-%10 oraninda NaCl, KCI, MgCl2, CaCl2 NaCl, tercihen %0.9 NaCl içeren içeren sulu çözelti içerir.

Bulusa uygun formülasyonda %0.9 NaCl içeren sulu çözelti kullanilan poloksamer 407 ve poloksamer 188 oranlarini toplam 100 grama tamamlayacak miktarda kullanilir.

Bulusa uygun in-situ jel formülasyonu örnegin; 1-30 g araliginda miktarda poloksamer NaCl içeren sulu çözelti ile 100 g agirliga tamamlanmasi ve formülasyona 1-10 mg/ml oraninda hyaluronik asit ve 1-10 mg/ml oraninda setil miristoleat eklenmesiyle elde edilebilir.

Bulusun bir diger unsuru, bulusa uygun in-situ jel formülasyonunun hazirlanmasi için bir yönteme iliskin olup söz konusu yöntem, i. Poloksamer 407 ve poloksamer 188'in tartilmasi ii. Elde edilen karisima (ölçülü sekilde damla damla) %0,01-%10 oraninda NaCl, KCI, MgCl2, CaCl2 NaCl, tercihen %0.9 NaCl içeren sulu çözelti ilave edilmesi, iii. Karisima 1-10 mg/ml hyaluronik asit ve 1-10 mg/ml setil miristoleat eklenmesi, adimlarini içermektedir.

Bulus bir diger açidan osteoartrit tedavisinde ilaç olarak kullanim için etken madde olarak hyaluronik asit ve setil miristoleat içeren bulusa uygun in-situ jel formülasyonlarina iliskindir.

Bulus bir diger açidan osteoartrit tedavisinde ilaç olarak kullanim için etkin madde olarak hyaluronik asit ve setil miristoleat ve yardimci madde olarak Poloksamer 407 ve NaCl içeren sulu çözelti içeren formülasyonlara iliskindir.

Bu basvuru kapsaminda yer alan “ilaç olarak kullanim” ifadesi hastaligin sebep oldugu semptomlarin veya hastaligin varligina isaret eden bulgularin giderilmesi veya azaltilmasi veya hafifletilmesi veya hastaligin ilerlemesinin önlenmesi veya hastaligin ilerlemesinin yavaslatilmasi veya hastaligin iyilestirilmesini ifade etmektedir.

Simdi bulus örneklerle açiklanacaktir. Bulus kapsami örneklerle kisitlanmamaktadir. Örnekler: Örnek 1: Bulusa uygun formülasyonlarin hazirlanmasi ve in vivo deney çalismalari g % 0.9'Iuk NaCI çözeltisine 10 mg/ml hyaluronik asit ve 10 mg/ml setil miristoleat eklenmesiyle elde edilir.

Hazirlanan formülasyonlarin etkilerini gözlemlemek için 6 deney grubu asagidaki sekilde olusturulmustur: 1. Saglikli kontrol grubu: 2. OA kontrol grubu: Osteoartrit olusturulan ve 0,1 mL serum fizyolojik uygulanan 3. HA in-situ: 4. HA+SM in-situ: setil miristoleat içeren in-situ jel uygulanan grup, . Piyasa: 0,1 mL piyasada osteoartirit için endike olan Adant uygulanan grup (ADANT 25mg/2.5 ml kullanima hazir 1 siringa). 6. SM: uygulanan grup Etkin madde verilen siçanlarda piyasa preparati olan AdantTiVI isimli ilacin 10 mg/mL dozuna sadik kalmak amaciyla 10 mg/mL hyaluronik asit ve/veya 10 mg/mL setil miristoleat kullanilmistir.

Toplam 6 grup olacak sekilde (n=6) 36 siçan ile çalisilmistir ve sag diz eklemlerinde asagida bahsedildigi gibi osteoartrit olusturulduktan sonra intraartiküler olarak her gruba yukarida bahsedilen miktarlarda ve içerikte uygulama yapilmistir. Hayvanlardaki sol diz eklemi ise kontrol olarak kullanilmis ve hiçbir islem yapilmamistir. Bu grup, saglikli kontrol olarak isimlendirilmistir.

Uygulama öncesinde, her bir grupta yer alan siçanlarin sag dizlerine lateral parapatellar cilt kesisi yaklasimi ile ön çapraz bag hasari ve mediyal menisektomi hasari ile osteoartrit olusturulmustur. Osteoartrit olusmasi için siçanlarin 4 hafta süreyle herhangi bir islem yapilmadan bakimlari yapilmistir. 4. hafta sonunda osteoartrit olusumunu degerlendirmek amaciyla rastgele seçilen birkaç hayvanin sag ve sol dizleri çikartilarak incelenmistir. Osteoartrit olustururken hayvanlarin sadece sag dizinde osteoartrit olusturma islemi yapilmistir. Bu sebeple hayvanlarin sol dizinde herhangi bir islem yapilmamistir. Örnek olarak seçilen hayvanlarin sol dizleri incelenmis ve sol dizlerinde herhangi bir osteoartrit olusumuna rastlanmamistir.

Histopatolojik degerlendirme için sag diz eklemlerinin hematoksilen-eozin (H&E) boyanan kesitleri incelendiginde saglikli kontrol grubunda kikirdak dokusunun artiküler yüzeylerinin düzgün morfolojiye sahip oldugu görülmüstür. Kikirdagin kalsifiye olmamis bölgesinde yüzeyin hemen altinda bulunan tegetsel zonda, kondrositlerin yassi ve tansizyonel, radyal zonda bulunan kondrositlerin ise yuvarlak ve büyük morfolojiye sahip oldugu görülmüstür. Büyük, yuvarlak kondrositlerin bir kisminin kikirdagin kalsifiye olmus kismina yakin bölgede, kalsifiye olmamis zon ile sinir bölgesinde kümeler olusturdugu görülmüstür. OA kontrol grubunda artiküler yüzeyde düzensizlik ve kondrosit organizasyonunda bozulmalar görülmüstür. OA kontrol grubu ile kiyaslandiginda, HA+SM in-situ uygulamasinin, HA in-situ ve piyasa uygulamasina göre artiküler yüzey dejenerasyonunu daha fazla azalttigi görülmüstür. Ayrica kondrosit sayisinda artisin bu gruplarda daha fazla oldugu ve kondrosit organizasyonun saglikli kontrol grubuna benzer morfolojiye sahip oldugu görülmüstür.

Piyasa uygulamasinin HA+SM in-situ uygulamasina morfolojik olarak benzedigi görülmüstür. SM grubunda, artiküler yüzey dejenerasyonun ve kondrosit organizasyon düzensizliginin OA kontrol grubuna benzedigi saptanmistir.

Mankin skorlamasina göre OA kontrol grubu ile karsilastirildiginda HA+SM in-situ uygulamasi Mankin skorlamasini en fazla düsüren uygulamadir. HA in-situ ve piyasa uygulamalari da Mankin skorlamasini anlamli derecede düsürmüstür (Figür 1).

Figür 1 incelendiginde ve tek basina hyaluronik asit veya tek basina setil miristoleat uygulamalarinin sonuçlari göz önüne alindiginda, hyaluronik asit ve setil miristoleatin birlikte uygulanmasi durumunda çok daha üstün terapötik fayda saglandigi görülmektedir, bu da hyaluronik asit ile setil miristoleatin bir arada kullaniminin sagladigi sinerjik terapötik faydanin varligina isaret etmektedir.

Safranin O-fast green boyamasi ile kikirdak dokusunun boyanma yogunlugu skorlanmistir. Bu skorlamaya göre saglikli kontrol grubundaki diz eklemlerinde bulunan artiküler kikirdak dokusundaki kondrositlerin çekirdeklerinin koyu kirmizi boyandigi sitoplazmalarinin ise parlak kirmizi renkte boyandigi görülmüstür. Ancak OA kontrol grubundaki artiküler kikirdak dokusunda dejenerasyon ve denatürasyon sonucunda kondrosit sitoplazma boyanmasinda azalma oldugu görülmüstür. HA+SM in-situ uygulanan grupta iyilesme sonucunda saglikli kontrol grubuna benzer boyanma yogunlugu oldugu, HA in-situ grubunda da iyilesme sonucunda boyanma yogunlugunun arttigi ancak HA+SM in-situ uygulama gruplarina oranla daha az boyanma yogunlugu oldugu saptanmistir. Piyasa grubunda da boyanma yogunlugunda artis görülmüs ancak bu artisin HA in-situ ve HA+SM in-situ gruplarina oranla daha az oldugu görülmüstür. SM grubunda boyanma yogunlugunda fazla bir artis görülmemistir.

Sonuç olarak, bulusa uygun ve etken madde olarak hyaluronik asit ve setil miristoleat içeren in-situ jel formülasyonu sayesinde etkinlik süresi uzun olan, tekrarlayan enjeksiyonlari gerektirmeyen ve düsük maliyetli intraartiküler osteoartrit tedavisi saglanmaktadir.

Claims (1)

1. STEMLER . Etkin madde olarak hyalüronik asit ve setil miristoleat içeren ve yardimci madde olarak poloxamer 407 ve poloksamer 188 ve istege bagli olarak baska farmasötik olarak kabul edilebilir yardimci madde içeren in-situ jel formülasyonlari. . Istem 1'e göre bir formülasyon olup özelligi formülasyon içerisinde poloxamer oraninda, özellikle tercihen 1:4 ile 1:1 oraninda bulunmasidir. . Istem 2'ye göre bir formülasyon olup özelligi formülasyon içerisinde poloxamer 407 ve poloksamer188'in agirlikça 1:1 oraninda bulunmasidir. . Istem 1-3'ten herhangi birine göre birformülasyon olup özelligi farmasötik olarak kabul edilebilir yardimci madde olarak su veya sulu çözelti içermesidir. . Istem 4'e göre bir formülasyon olup özelligi, farmasötik olarak kabul edilebilir yardimci madde olarak saf su veya agirlikça %0,01-%10 oraninda NaCl, KCI, MgCl2, CaCl2tuzlarindan herhangi birini içeren sulu çözelti içermesidir. . Istem 5'e göre bir formülasyon olup özelligi % 0.9 oraninda NaCl içeren sulu çözelti içermesidir. . Istem 1-6'dan herhangi birine göre bir formülasyon olup özelligi; 1-30 g mg/ml setil miristoleat, %0,01-%10 oraninda NaCl, KCI, MgCl2, CaCl2 NaCl, tercihen %0.9 NaCl içeren sulu çözelti içermesidir. . Istem 1-7'den herhangi birine göre bir formülasyonun hazirlanmasinda kullanilacak bir yöntem olup özelligi; Poloksamer 407 ve poloksamer 188'in tartilmasi ii. Elde edilen karisima (ölçülü sekilde damla damla) %0,01-%10 oraninda NaCl, KCI, MgCl2, CaCl2 NaCl, tercihen %0.9 NaCl içeren sulu çözelti ilave edilmesi, iii. Karisima 1-10 mg/ml hyaluronik asit ve 1-10 mg/ml setil miristoleat 5 eklenmesi, adimlarini içermesidir. 9. Osteoartirit tedavisinde ilaç olarak kullanim için Istem 1-7'den herhangi birine göre in-situ jel formülasyonu.