TR2021012577A2 - Mi̇kroparçacik ve hücreleri̇n özkütleleri̇ne bağli ayriştirilmasi i̇çi̇n vakumla entegre edi̇lmi̇ş santri̇füjlenebi̇len mi̇kroakişkan yonga - Google Patents

Abstract

Buluş, özkütleleri birbirine yakın hücre veya mikropartiküllerin santrifüj ile ayrıştırılması için geliştirilmiş bir mikroakışkan platform ile ilgilidir. Buluş mikroakışkan platform; numune haznesi (1), akış haznesi 1 (2), akış haznesi 2 (3) ve kontrol kanalı (4) içeren PDMS bazlı mikroakışkan çip (7), numune haznesi (1)?ne yerleştirilen solüsyon ve numunelerin, akış haznesi 1 (2) ve akış haznesi 2 (3)?ye doldurulmasını sağlayan ve PDMS bazlı mikroakışkan çipe (7) bağlantılı (5) vakum cihazı (6) içermektedir.

Description

TARIFNAME MIKROPARÇACIK VE HÜCRELERIN ÖZKÜTLELERINE BAGLI AYRlSTIRlLMASl IÇIN VAKUMLA ENTEGRE EDILMIS SANTRIFÜJLENEBILEN MIKROAKISKAN YONCA Bulusun Ilgili Oldugu Teknik Alan Bulus, birbirine yakin özkütleli hücre veya mikroparçaciklarin santrifüj ile ayrlstirîllrnasî için gelistirilmis bir mikroaklskan platform ile ilgilidir. Bulus mikroaklskan platform biyomedikal arast Binalar, klinik çal Islmalar, hasta tan Eve takibinde kullan Iabilme potansiyeline sahiptir. Bulusla Ilgili Teknigin Bilinen Durumu (Önceki Teknik) Hücre ayrgtmma amacgrla kullanüan teknikte bilinen yöntemlerde, Falkon tüpü içerisinde özkütle gradyanlEsolüsyon kullanüarak hücreler bu solüsyon içerisinde sEalanmaktadE. Bu yöntem, hücre ayrgtima için stklüîla kullanilan, verimli bir yöntem olmas Eta ragmen uzun süre gerektiren, hücre canllgnjetkileyecek düzeyde yüksek stres uygulamay Jgerektiren ve birbirine yak ri özkütleli hücrelerde iyi ayrlm görmeyi zorlastlran bir yöntemdir. Teknikte bilinen yöntemlerde özkütle gradyanl \ solüsyon kullan larak hücre ayrtslmast saglamak için çok miktarda kan örnegi gerekmekte olup özkütle gradyanlH katmanTl olusturmak için yetkin kisilere ihtiyaç duyulmaktad E. Ayrßa bu yöntemlerde hücre canlEIEgEiE etkileyecek seviyede yüksek stres uygulanmakta olup birbirine yaki özkütleli hücre ayr Etimada iyi bir ayrüi görmek zordur. Mikroak @kan platformlarda gerçeklestirilen özkütle gradyanljhücre ayrßtnma yöntemleri numune yüklemesi için karmastk cihazlar kullanmayü gerektiren yöntemler olup yalnâca birbirinden oldukça farklü yogunluklara sahip mikroparçactklarîi ayrgrnasEiîsaglayabilmektedir. Tomoki Morijiri vd. yapmts oldugu çal sma ("sügtsttrümts akLs fraksiyonasyonu (PFF)" olarak adland 11 1311 teknik) boyuta dayalt [bir parçac k aytnna yönteminde sedimentasyonu kullanan bir yöntem ile ilgilidir. Çalismada kullan lan ve hesaplanan kuvvetler çok çesitli olup her biri ayrgma teknigini etkileyen kompleks hesaplamalar gerektirmektedir. Akßa baglîbir teknik oldugu için teknikte ikinci akß etkisi olan Dean akü etkisinden bahsedilmekte olup, yüksek akgl hßjkosullarmda egimli kanallarda sedimentasyon etkisini engelleyebildiginden söz edilmistir. Bu da, çal Smada yer alan teknikte akg hüßß ve optimizasyonunun büyük önem tasElgîljve ekstra basamak olarak yer aldEgEiEgöstermektedir. Çalßmada kullan [[an parçacEk boyutlar33 pm ve 5 um olarak ve kullan Ian mikroparçack yogunluklarDlD g/mL ve 2.0 g/mL olarak bahsedilmistir. Bu nedenle kullanLlan parçac klar aras Lyogunluk farkLoldukça fazlad n. Ayrlca bahsedilen teknik s nas nda slvl dökülmesini önlemek için mikroaklskan sistemin giris ve ç k slar lPolidimetilsiloksan (PDMS) membran ile kapatllmaktadlr., bu durum kullanîh açßîtdan ekstra islem ve zorluk katmaktad E. Polisakkarit kullanllan bir mikroaklSkan özkütle gradyanll l santrifüj prensibinde, düsük yogunluklu polistiren boncuklarlîi (1,02 g/ml) ve yüksek yogunluklu silikon dioksit boncuklarîl (2,2 g/ml) ayrßmasü% 99 verim ile saglanmgtm Özkütleye baglEayrStEma saglayan mikroak @kan platform çal @mas Elda, yogunluklarEbirbirinden oldukça farkl Eblan iki boncugun verimli bir sekilde birbirinden ayrgtfgügörülmüstür [1]. Bu çalßmada, kanal boyutlarîlm, giris ve çkg deliklerinin konumunun üzerinde durularak akß kuvvetlerine odaklanhnßti Sistem, kapalüuçlu bir tasarim olmadfgü numune akßEiçin giris ve çEkEi delikleri içeren bir sistem oldugu için literatürde yer alan çal Smalara kars Dbir yenilik ortaya koymamLýtJi Stokes denklemine dayalLgelistirilen mikroakLskan çipte özkütle bazlLaersma ile ayrlslma saglanmls, ancak yüksek mikroparçaclk konsantrasyonlarlnda, yükleme kanallar nda tkanma meydana gelmistir [2]. Stokes denklemine bagll olarak tasarlanan bu çipte parçacflllarrl ayrßmasî akis hîzma baglFolan kalma süresi ile yanal yer degistirme kullan Jlarak saglanmßtm. AyrEmanît akß hüîta baglü olmasÇ farklj hücre/parçacEk konsantrasyonlar Eda yeni optimizasyon gerektirerek deneylerin tekrarlanabilirligi konusunda problem yaratabilir. Bir diger çalßmada, kandan %95,15 lökosit ekstraksiyonu mikroakßkan platformda santrifüj ile gerçeklestirilmistir [3]. Mikroakßkan platformun CD seklinde plastik yap Ela olmas: sebebiyle, ayrgma sonucunda yalnîca fiziksel olarak (fenotipe baglü bir analize olanak saglamaktad Ji Ileri asama analizler için aersan bu hücrelerin, platformdan aerULp toplanarak incelenmesine uygun bir sistem degildir. Bu cihazlara numune yüklemesi için pompalar ve/veya valflerle karmaslk, hassas ve zorlu bir islem gerektiginden, bu cihazlarin kullanimlarl l limitli oldugu gibi geleneksel yöntemlere inovatif bir bak& açTsFsunmamaktad E. Ada Lee vd. yapmß oldugu çal Ema ise CTC'leri kßa bir süre içinde izole edebilen merkezkaç kuvvetine dayaljboyut seçici bir CTC izolasyon platformu ile ilgilidir. Disk seklindeki tasarii çok fazla katman gerektirdigi için fabrikasyonu çok sayEla asamaya ihtiyaç duymaktadi Çok katman gerektiren bu teknikte ayrgma sonrasi analizini saglamak da oldukça zordur. Çalßmada kullanman teknik, filtrasyon ünitesi, yükleme haznesi, filtrasyon haznesi, atJEL haznesi, havalandEma haznesi gibi karmasüî bölümler içermekte ve CNC gibi pahal :lve kompleks bir sistemin kullan îhßa ihtiyaç duymaktad E. KaacasLl yakn özkütleli hücre veya mikroparçacüglaru aerstLrabilecek hassasiyette, uygulamas l ve kurulumu kolay mikroak skan platfomlarlnln gelistirilmesi ihtiyacl duyulmaktadn. Bulusun K Ea Aç llamas Eve Amaçlar D Mevcut bulus, yukarda bahsedilen gereksinimleri kars `Dayan, dezavantajlar`brtadan kaldîan ve ilave bazüavantajlar getiren, mikroakISlkan platform üzerinde yakEl özkütleli hücre veya mikroparçac [lilar Il ayr Et E Bnas Eile ilgilidir. Bulusun öncelikli amaci birbirine yakEi özkütleli hücre veya mikroparçacüîlarß ayrgtiünasîljsaglayan bir mikroakßkan platform gelistirilmesidir. Bulusta mikroakßkan çip ile birbirine daha yakit özkütlede (l.02-1.09 g/mL) mikroparçacEklar ayrStEJhbilmektedir. Bulusun amacL, yüksek miktarda numune veya solüsyona ihtiyaç duymadan düsük miktarda numune ve solüsyon ile mikroparçaclk ve hücre ayrlSmas 11 | saglamaktln. Geleneksel yöntemler ile ayrlstliima saglanmasl liçin santritüj tüplerinde yüksek hacimde numune ve solüsyon kullanilmaktadü fakat bu bulusta mikroak @kan çip içinde düsük hacimli kanallar kullanarak düsük hacimli numunelerle çalEJhbilmektedir. Bulus mikroakgkan platformunun bir versiyonunda, 250 uL özkütle-gradyanlüsolüsyon ve 250 i.iL numune alabilen 500 uLilik sîljkapasiyeli mikroakßkan çip kullantünßtü. Bulusta düsük miktarda numune ve solüsyon PDMS membran& gaz geçirgenligi kullan Jiarak kanallara yüklenmektedir. Bulusun bir diger amacü önceki teknikte görüldügü gibi mikroakskan platformlarda uygulanan yöntemlerde santritüj smas @da numune dökülmesini önlemek için kanali bloke edilmesine gerek kalmadan santrifüjlenebilmesidir. Mikroakßkan sistemlere uygulanan geleneksel yöntemlerde sEßga pompasE vs. kullanÜJdEgD için çip ve sßhga pompasE baglantshjdsaglamak amacgrla çipe giris ve çks delikleri açLlhraktadLn. Bu sistemlerde santrifüj yapabilmek için bu deliklerin kapatllmasl gerekmektedir. Aksi durumda çip içerisindeki slv lsantrifüj slIiaslIida bu deliklerden slzmaktadlri. Fakat bulus mikroaklskan platformunda sadece giris bölmesi bulunup çFkG deligi bulunmamaktad E. Çip üstündeki aer bir kontrol kanaliia uygulanan vakum ile çip malzemesi olan PDMS°in hava geçiren özelligi sayesinde çip içine giris bölmesinden SBJEdoldurulmaktad m. Doldurulan sil'jçipin çk& deligi olmadgjiçin çip içinde hapsolmakta ve böylelikle santitüj sßasßda sEzEiEi dökülmesi engellenmektedir. Bulusta çip içine kontrol kanaandan vakum uygulanarak önce özkütle-gradyanlLsolüsyon doldurulmakta (tercihen polisakkarit solüsyonu) arkas ndan örnek doldurulmaktadlr. Daha sonra mikroaklskan çip bir santrifüj tüpüne yerlestirilerek santritüjlenmekte ve böylece büyük ve küçük özkütleli mikroparçaçklar ve hücrelerin birbirinden aerstEllmas Tsaglanmaktad ü. Söyle ki, özkütle-gradyanll lsolüsyonun özkütlesinden büyük mikroparçaclklar veya hücreler çip girisinden en uzak kslmlîida toplanliken, diger düsük özkütleli mikroparçacklar veya hücreler çipin giris kIsJm Ela yaki toplanmaktad E. Mikroakgslkan çip üstünde bulunan kanal& tek girisli yap Ela olmas :yani çlkßülm olmamasi nedeni ile ayrgt ima için kullan Jhn santriiüj sîlas Iida örnek dökülmelerini önlenmektedir. Mikroakskan çip üstünde ayrßtmlan hücreler ve mikroparçac [klar mikroak Ekan çip üstünde mikroskop yardßijle gözlemlenebilmektedir. Mikroakgkan çip elastik bir malzeme olan PDMS'ten üretildigi için, ayr Etigihn hücreler veya mikroparçac klar kanala batmtlacak bir sLanga vas Ltas Lile çekilebilmektedir. Bulusta birbirine yakin yogunlukta partiküller kullanilacagl zaman, polisakkarit solüsyon yogunlugu bu partiküllere göre ayarlanarak yakln yogunluktaki partiküllerin ayrlSmaslna izin vermektedir. Polisakkarit solüsyonu yogunlugu, ayrFstEfimak istenen mikroparçacfk veya hücreleri içeren solüsyonun yogunlugu arasmda olacak sekilde ayarlanmaktadm. Örnegin ayrEtIJJInak istenen mikroparçacüg veya hücreleri içeren solüsyonun yogunluklarE1.02 ve 1.09 g/mL oldugunda polisakkarit solüsyonun yogunlugu 1.065 g/mL'ye olarak ayarlanmaktad i. Bulusii Aç klayan Sekillerin Tan mlarl l Sekil 1: PDMS mikroakßkan çip tasarEh] Sekil 2: PDMS mikroakLslkan çipin iç yapLsL', akLskan kanaldile kontrol kanaldarasmdaki mesafe 1 mm olarak ayarlanmISt n. Sekil 3: Mikroak slkan çip üstünde 1,09 g/mL özkütleli mikroparçaclklarln 1,02 g/mL özkütleli mikroparçac klardan santrifüj sonrasTayrEtlülirnasî Sekil 4: 2000 rpm santifuj hâilda farki: santifüj sürelerinde 1,09 g/mL özkütleli mikroparçacîgîi 1.02 g/mL mikroparçac [Etan ayrßma verimi ve sailEk. yüzdesi. Bulusu Olusturan Unsurlar m/K Enlar îi/Parçalar m Tan înlar 3 Bu bulusla gelistirilen mikroaktsikan platformun daha iyi açtklanabilmesi için hazirlanan sekillerde yer alan parçalar/ki slmlar/unsurlar asagtda belirtilmektedir. 1: Numune haznesi 2: Akîsl haznesi 1 3: Akîsl haznesi 2 4: Kontrol kanalü : Vakum baglant E 3 6: Vakum pompas 3 7: Polidimetilsiloksan (PDMS) bazlîinikroak @kan çip 8: Cam yüzey Bulusun Ayr ntllH Açtklamas \ Yogunluklarjairbirine yaki hücre veya mikropartikülleri ayEabilen mikroakßkan platformu Sekil 1`de gösterildigi gibi numune haznesi (l), akls haznesi 1 (2), aksJ haznesi 2 (3), kontrol kanalJ(4) içeren Polidimetilsiloksan bazlLlmikroakLskan çip (7) ve numune haznesi (1)`ne yerlestirilen solüsyon ve numunelerin, ak sl haznesi l (2) ve ak S haznesi 2 (3)"ye doldurulmasînî Saglayan ve Polidimetilsiloksan bazll mikroaktskan çipe (7) baglanttlîl vakum pompas _(6) içermektedir. Numune haznesi (1), solüsyon ve numunenin yerlestirildigi bölümdür. Numune haznesi (l) uL`den az sütEkapasitesine sahiptir. AkIsJ haznesi 1 (2) ve ak& haznesi 2 (3), yerlestirilen solüsyonun ilerledigi ve ayrßmanß gerçeklestigi bölümlerdir. Kontrol kanalE(4), vakum pompasü(6) vakum baglantîsljö) ile baglanarak solüsyon ve numunenin PDMS°in gaz geçirgenligi özelligi sayesinde numune haznesinden (1) aks haznesi 1 (2) ve akLsJ haznesi 2 (3)Sye dogru çekilmesini saglar. Bulus yogunluklar :birbirine yakîi hücre veya mikroparçac klarEbirbirinden ay @ma yöntemi; o Cam yüzeyin (8), oksijen plazma ile aktiflestirilmesi ve Polidimetilsiloksan bazlj mikroak Ekan çipin (7) cam yüzeye (8) tutturulmasj - Polidimetilsiloksan bazlEmikroakEkan çipin (7) numune haznesine (l) polisakkarit solüsyonu verilmesi ve ardüidan vakum pompasT(6) ile kontrol kanalF(4) arasüada vakum baglantßîö) saglanarak polisakkarit solüsyonunun akß haznesi 1 (2)"e çekilerek doldurulmas 3 o Numune haznesine (l) ayr Etülmak istenen parçac 11 veya hücreleri içeren solüsyonun verilmesi ve vakum baglant s (5) saglanarak parçaclklarln akls haznesi 1 (2)"e dogru çekilmesi, o Vakum baglantlsl (5)"nln ç kart larak, Polidimetilsiloksan bazll mikroak skan çipin (7) santrifüj cihaz na yerlestirilerek santrifîijlenmesi, o Santriiîij sîlas îida, yüksek özkütleli mikroparçac [klarEi veya hücrelerin akßi haznesi 2 (3)'nin sonunda toplanßken, düsük özkütleli mikroparçac klarîl veya hücrelerin akß haznesi 1 (2),de kalmasü Islem ad mlar n içermektedir. Bulusta yer alan Polidimetilsiloksan bazll mikroakls'kan çip (7) yumusak litografi teknigi ile üretilmistir. Mikroak @kan çip kallî) bilgisayar destekli tasarTn ile tasarlanîi, 3 boyutlu yazBIla baslmßtm. PDMS, 10: l oranmda elastomer ve sertlestirme ajanEkarEiiîolarak haz Illanî› ardEidan PDMS kargühüiüi gaz Elgiderilmis ve bir kalfba dökülmüs, daha sonra 65 ° C'de 24 saat kürlenmistir. Daha sonra kürlenmis PDMS, kal îttan çkartJInIsl ve 2 dakika süreyle 100 W ve 0.5 mbar'da oksijen plazma muamelesi ile temiz cam (8) üzerine yap Stiüngtü PDMS çip yapßügeregi seffaf oldugu için ayrßtîma sonras Eida mikroskop altida görüntü almamîa izin vermektedir. Porlu bir yap Sia sahip oldugu için hava geçirgenligi sayesinde sistemin temelini olusturan vakum ile sîlîdoldurmaya izin vermektedir. Mikroak skan çip (7) 500 uL hacime sahip olarak tasarlanm Stlrt Slraslyla özkütle-gradyanll polisakkarit solüsyon ortam Il (tercihen Ficoll 400) ve mikroparçac klar yüklemek için elmas seklinde iki aks haznesi (2) (3) içermektedir (Sekil 1). S W lve kontrol kanallarl laraslndaki mesafe (9) (bu mesafe Ak& haznesi 2 (3) ve Kontrol kanalü(4) arasmdaki mesafedir.) 1 mm'ye ayarlanmßt& (Sekil 2). Çünkü 1mm°den yüksek mesafelerde çekim süreleri artmaktadi verilip, vakum kanalEiEi girisi -0.88 bar vakum bas Ele Elle vakum pompas Eta (6) baglanarak solüsyon birinci elmas seklindeki akskan haznesi 1"in (2) ucuna çekilmistir. Bu Ficoll solüsyonun özkütlesi ayrlstlrllmasl istenen hücreye veya mikroparçac ga göre ayarlanabilmektedir. Kullanlan mikroparçac klarln yogunlugu Ficoll solüsyonunun yogunlugundan daha yogun olani mikroak`slkan çipin en ucuna çökecegi, yogunlugu daha az olanlîl ise mikroakßkan çipin numune haznesine (1) yakln bölgelerinde kalacak sekilde ayarlanmlst 11. Daha sonra, mikroparçaçßk veya hücre kargîhrolan yerlestirilip kontrol kanalE(4) ile vakum pompasj(6) saglanarak vakum altmda çekilmistir. ArdEidan, mikroak @kan çip bir santriiüj tüpüne yerlestirilerek santrifüjlenmistir. Santrifüj sEas &da daha yogun olan parçacEklar akß haznesi 2 (3)°nin sonuna dogru ilerlerken, daha az yogun olan parçac klar akü haznesi 1 (2),de yer almgt E. Bilinen tekniklerde numune kanala sEiEpompasü ile verildigi için mikroakßkan çipe giris-çtkß delikleri aç [[maktadî. Santriiiij sEas &da 5311& bu deliklerden sâmamas Elçin deliklerin bloklanmas Eta ihtiyaç duyulmaktad E. Bulusta solüsyon ve numune yüklemesi kapalLuçlu bir mikroakksikan çipe (7), çip malzemesinin gaz geçirgenligi özelligi sayesinde vakum pompas (6) baglanarak gerçeklestirildigi için santrifüj s lias nda s amaya izin vermemektedir. Akis haznesi 27nin (3) son % 15'lik klsml çipin aylrma bölgesi olarak kullanühilgtlî (Sekil 3). Bu bölgede Ficoll solüsyonunun özkütlesinden büyük olan mikroparçaçüîlar/hücreler toplanî› diger küçük özkütleli mikroparçaç[klar/hücrelerden ayrgtîmngtîl ve mikroskop altüida alman görüntüler üzerinde verim ve sailEk yüzdeleri hesaplanmgti (Sekil 4). Bu asamada burada toplanan hücreler/mikroparçaç[klar, PDMS'in yumusak dokusundan dolay :igne ile girilip hücreler buradan çekilebilmekte ve baska analiz basamaklar Ilda kullan Jlnaktad E. Mikroak Ekan çipin iki hazneli olmas :yogunlugu fazla olan parçac klari alt haznede, daha az yogunluga sahip olan parçacklari üst haznede toplang ayr sthnms na izin vermektedir. Kaynaklar: isolation 01" particles and cells," Bioengineering, vol. 4(4), 2017. separates whole blood samples into multiple removable fractions due to several discrete but continuous density gradient sections," PLOS One, vol. 11(4), 2016. 0 1.09 g/mL Zaman (dakika) TR TR TR TR

Claims (7)

ISTEMLER

1. Yogunluklarj birbirine yakm hücre veya mikroparçac [klarü ay Babilen mikroak @kan platform olup özelligi; - Numune haznesi (1), akß haznesi 1 (2), akß haznesi 2 (3) ve kontrol kanal: (4) içeren Polidimetilsiloksan bazllnikroak @kan çip (7), - Numune haznesi (1)7ne yerlestirilen solüsyon ve numunelerin, aksJ haznesi 1 (2) ve aks haznesi 2 (3)*ye doldurulmas Il lsaglayan ve Polidimetilsiloksan bazl înikroak @kan çipe (7) baglant llîzakum pompas 76), içermesidir.

2. Istem 1”e uygun mikroakîslkan platform olup özelligi; numune haznesinin (1) 500 uL uL”den az s 5! Ekapasitesine sahip olmas EE.

3. Istem 1”e uygun mikroakgkan platform olup özelligi; giris bölmesi içermesi ancak çEkEi deligi içermemesidir.

4. Istem l”e uygun mikroakls'kan platform ile yogunluklar lbirbirine yakin hücre veya mikroparçac [Elar Jairbirinden ay @ma yöntemi olup özelligi; 0 Cam yüzeyin (8), oksijen plazma ile aktiflestirilmesi ve Polidimetilsiloksan mikroak skan çipin (7) cam yüzeye (8) tutturulmas ,l i Polidimetilsiloksan bazlE mikroakgkan çipin (7) numune haznesine (1) polisakkarit solüsyonu verilmesi ve ardEidan vakum baglantElD(5) saglanarak polisakkarit akg haznesi 1 (2)”e doldurulmasü o Numune haznesine (1) ayrStEEmak istenen mikroparçack veya hücreleri içeren solüsyonun verilmesi ve vakum baglantßEÖ) saglanarak parçac [klarEi akg haznesi 1 (2)`e dogru çekilmesi, o Vakum baglant E :(5) ,11 Il ç [Kart [Barak, Polidimetilsiloksan bazl Dmikroak Skan çipin (7) santrifîij cihaz Ela yerlestirilerek santrifüjlenmesi, - Santrifüj slnaslnda, yüksek özkütleli mikroparçac klar 11 veya hücrelerin akls haznesi 2 (3),nin sonunda toplanlilken, düsük özkütleli mikroparçaclklarln veya hücrelerin ak sJ haznesi 1 (2)”de kalmasi Islem ad Bilar Il Ilçermesidir.

5. Istem 4”e uygun yöntem olup özelligi; polisakkarit solüsyonu yogunlugunun ayrgtihnak istenen ayrßtmülnak istenen mikroparçacüî veya hücreleri içeren solüsyonun yogunlugu aras Eda olacak sekilde ayarlanmas EE.

6. Istern 5°e uygun yöntem olup özelligi; ayrßtEEmak istenen mikroparçaclk veya hücreleri içeren solüsyonun yogunluklarîiîi 1.02 ve 1.09 g/mL oldugunda polisakkarit solüsyonun yogunlugunun 1.065 g/mL”ye ayarlanmaSUIii

7. Istem 4,e uygun yöntem olup özelligi; ayr slt 11 lan mikroparçaclk veya hücrelerin s iilnga vas tas yla toplanmasldlr.