TR201810706T4 - Fruktoz üretimine yönelik yöntem. - Google Patents

Abstract

Mevcut buluş, D-glukozdan D-fruktoz üretme yöntemi ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME FRUKTOZ ÜRETIMINE YÖNELIK YÖNTEM Mevcut bulus, D-glukozdan D-fruktoz üretme yöntemi ile ilgilidir.

D-fruktozun endüstriyel üretimi için geleneksel olarak iki adimdan olusan bir yöntem kullanilmis olup, burada D-glukoz, örnegin nisasta gibi polisakkaritlerin hidrolizi ile üretilmekte ve daha sonra bu sekilde elde edilen D-glukozun izomerizasyonu ile D-fruktoza dönüsüm gerçeklestirilmektedir.

D-glukozun izomerizasyonu yolu ile %42 D-fruktoz, %50 D-glukoz ve yaklasik %8 artik polisakkaritler elde edilebilmektedir. Bu, saf D-fruktozun bu karisimdan izolasyonunun ayrintili ve pahali saflastirma tekniklerinin uygulanmasini gerektirmesi problemini beraberinde getirmektedir.

D-glukozun izomerizasyonu ile D-fruktoz üretimine bir alternatif, D-glukozun bir enzimatik adimda ve bir kimyasal adimda D-fruktoza dönüstürüldügü bir yöntemdir.

Genel olarak, D-glukozdan D-fruktoz üretmek için çok sayida farkli yöntem bilinmektedir. Örnek olarak, EP1048672 örneginde tarif edildigi gibi D-glukozonun D-fruktoza indirgenmesi çogu durumda kimyasal bir yolla gerçeklestirilmektedir. Sözü edilen yöntemde, D-fruktoz, yüksek bir kuru madde içerigi olan bir glukozon çözeltisinin katalitik hidrojenasyonu yoluyla, özel basinç ve sicaklik kosullari altinda üretilmektedir.

US4321324'te, D-glukozdan D-glukozonun bir enzimatik adimda üretilmesi tarif edilmektedir.

Burada D-glukoz, bir piranoz-2-oksidaz yardimiyla D-glukozona oksitlenmekte ve ortaya çikan hidrojen peroksit, yari geçirgen bir zar üzerinden ayrilmaktadir.

Bir redüktaz vasitasiyla D-glukozonun D-fruktoza enzimatik bir sekilde indirgenmesi, örnegin Kieslich'in "Steroid olmayan siklik bilesiklerin Mikrobiyel Transformasyonu" adli kitabinda (Georg Candida tenuis'den elde edilen bir ksiloz redüktazin D-glukozonu D-fruktoza indirgeyebilecegi tarif edilmistir.

D-glukozun iki adimda (enzimatik ve kimyasal) izomerizasyonu yolu ile D-fruktoz üretimi, örnegin US4246347'de tarif edilmistir. Burada açiklanan yönteme göre, D-glukoz, baslangiçta bir piranoz- 2-0ksidaz kullanilarak enzimatik olarak D-glukozona dönüstürülmüstür. Proseste meydana gelen hidrojen peroksit ayrilmis ve yeniden kullanilmis veya bir katalaz tarafindan bozulmustur. Ikinci bir adimda, olusan D-glukozon, hidrojenasyon ile D-fruktoza dönüstürülmüstür. Söz konusu proseste, %2'Iik glukoz kullanilmis ve iki adim ayri ayri gerçeklestirilmistir. Yöntemlerle iliskili problemler, kullanilan substratlarin düsük konsantrasyonlarinin yani sira yüksek basinç ve yüksek sicakliktir.

D-glukozdan D-fruktoz üretimi / izomerizasyonu için bilinen yöntemler, genellikle farkli dezavantajlara sahiptirler. Örnegin, substratin yüksek bir seçicilikle etkili bir sekilde dönüsümü, çogu durumda, ancak yüksek basinçlar ve sicakliklar uygulandiginda mümkündür ve ayrilmasi zor olan kirletici yari ürünlerin olusumu kolayca önlenememektedir.

Sasirtici bir sekilde, substratin yüksek bir seçicilikle ve yüksek basinç ve sicakliklarin kullanilmasina gerek kalmadan etkili bir sekilde dönüstürülmesini mümkün kilan bir yöntem bulunmus olup, burada, kirletici yan ürünlerin olusumu büyük ölçüde önlenebilmekte ve bu sekilde substratin üründen ayrilmasina gerek kalmamakta ve ayrintili ve pahali aritma tekniklerinin uygulanmasi engellenebilmektedir.

Bir yönüyle mevcut bulus, D-glukozdan D-fruktoz üretmeye yönelik olarak bir tek kap sentezi ile karakterize edilen bir yöntem saglamaktadir. a) D-glukoz, bir piranoz-2-0ksidaz kullanilarak D-glukozona enzimatik olarak oksitlenir, ve b) D-glukozonun, bir redüktaz kullanilarak D-fruktoza enzimatik olarak indirgenmesi, burada özellikle b) adiminda, bir redoks kofaktörünün kullanilmasidir.

Mevcut bulus tarafindan saglanan bir yöntem, burada ayricai mevcut bulusa göre / mevcut bulusun yöntemi olarak belirtilmektedir.

Dolayisiyla, mevcut bulus, iki enzimatik adimda bir tek kap sentezi ile D-glukozdan D-fruktoz üretmeye yönelik bir yöntem ile ilgilidir: D-glukozun D-glukozona enzimatik bir oksidasyonu ve ardindan asagidaki Reaksiyon Semasi 1'e göre ilerleyen D-glukozonun D-fruktoza enzimatik olarak indirgenmesi: Reaksiyon Semasi 1 N? “Vif CHZOH CHiûl-l CH:OH CH:OH Mevcut bulusa uygun bir yöntem, D-fruktozun artik D-glukozu ayirma ve saflastirmaya gerek kalmadan üretilmesine yönelik yeni bir enzimatik olasilik saglamaktadir. Halihazirda kullanilan tekniklere kiyasla, mevcut bulus, D-glukozdan D-fruktoz üretmeye yönelik yöntemler için önemli seviyede bir gelistirme sunmaktadir. Mevcut yöntemlerin aksine, bilesikler, bir ara ürünü izole etmeksizin hem enzimatik olarak oksitlenmekte hem de enzimatik olarak indirgenmektedir. Ayni zamanda, önemli oranda yüksek substrat konsantrasyonlari kullanilabilmekte ve ayrica, daha önce kullanilan yöntemlerde mümkün olana kiyasla daha yüksek bir miktar elde edilebilmektedir.

Mevcut tarifnameye uygun bir yöntemde uygun D-glukoz kaynaklari; örnegin nisastanin, özellikle de misir nisastasinin enzimatik veya enzimatik olmayan hidrolizatlari, sakarozun enzimatik veya enzimatik olmayan hidrolizatlari veya selülozun enzimatik veya enzimatik olmayan hidrolizatlaridir. Mevcut bulusa uygun bir yöntemde kullanilabilen selüloz, örnegin bir biyokütle, tercihen de odun, bugday sapi gibi saman, misir sapi, küspe, sisal, enerji otlari gibi bir lignoselülozik biyokütleden elde edilebilmektedir. Örnek olarak, misir nisastasinin enzimatik olarak hidrolizi için amilazlar kullanilabilmektedir. Örnek olarak, sakarozun enzimatik olarak bölünmesi için invertazlar uygundur. Örnek olarak, selülozun enzimatik olarak bölünmesi için selülazlar kullanilabilmektedir. Örnegin bir asit katalizli ayirma, söz konusu çoklu sekerlerin enzimatik olmayan ayrim islemi için uygundur.

Mevcut tarifnameye uygun bir yöntem, tercihen sulu bir sistem içinde gerçeklestirilmektedir. Sulu sisteme bir tampon (sistemi) da eklenebilmektedir. Uygun tampon (sistemleri) bilinmektedir ve örnek olarak, asetat, potasyum fosfat, Tris-HCI ve glisin tamponlari gibi geleneksel tamponlari (sistemleri) içermektedir. Mevcut bulusa uygun bir yöntemde kullanilan bir tampon, tercihen 5 ila ,5, tercihen 6 ile 9,5 arasinda bir pH degerine sahiptir. Enzimlerin stabilize edilmesi için; stabilizatörler, örnek olarak da Mg2+ benzeri iyonlar gibi yaygin stabilizatörler ya da diger katki maddeleri, örnek olarak da gliserol gibi yaygin katki maddeleri sulu sisteme ilave edilebilmektedir.

Mevcut tarifnameye uygun bir yöntemde, D-glukozun D-glukozona oksidasyonu için oksijen gerekmektedir. Bahsedilen oksijen, her zamanki gibi dahil edilebilmekte ve örnek olarak ortam havasi ile temas ile ya da basinçli hava veya saf oksijen enjeksiyonu gibi artirilmis bir oksijen kaynagi üzerinden erisilebilir hale getirilebilmektedir.

Mevcut tarifnameye uygun bir yöntem, örnegin kullanilan enzimlere bagli olabilen uygun sicakliklarda gerçeklestirilmektedir. Uygun sicakliklar arasinda; 10 “C ile 70 °C, tercihen 20 °C ila 50 °C, örnek olarak da 20 °C ila 45 °C araliklari bulunmaktadir.

Oksidasyon reaksiyonu ile indirgeme reaksiyonunun, ara ürünlerin uzaklastirilmasi olmaksizin ayni reaksiyon partisinde gerçeklestirildigi, özellikle de ürün olusumunda yer alan iki enzimatik redoks reaksiyonunun ve kofaktörün yeniden kazanilmasi için bir enzimatik sistemin, bir reaksiyon partisinde, bir ara ürünün uzaklastirilmasi olmaksizin yürütüldügü bir yöntem, burada eklenebilmekte veya ilk önce enzimlerin bir kismi, örnek olarak da a) adimindaki enzim (enzimler) ve bir günlük gecikmeden sonra enzimlerin baska bir kismi, örnek olarak da b) adimindaki enzim (enzimler) ilave edilebilmektedir. Enzimlerin ikinci kismi ilave edilmeden önce, reaksiyon partisinde halihazirda mevcut olan enzimler, örnegin, 10 dakikada 65 °C'ye ulasilmasi gibi bir sicaklik artisi gibi geleneksel bir yöntemle aktive edilmektedirler.

Mevcut bulusa uygun bir yöntem, özel bir yönüyle, ara ürünler ortamdan uzaklastirilmadan gerçeklestirilmesiyle karakterize edilmektedir.

Bu tarifnameye uygun bir yöntemde D-glukozun D-glukozona oksidasyonu enzimatik olarak, yani enzimatik kataliz ile gerçeklesmektedir ve bilinen bir yönteme göre gerçeklestirilebilmektedir.

Bulusa uygun oksidasyon adimi, bir piranoz-2-0ksidaz ile kataliz yoluyla gerçeklestirilmektedir.

Piranoz-2-oksidazlar; örnek olarak Coriolus sp., Aspergillus sp. veya Polyporus obtusus'tan elde edilebilmektedir.

Piranoz-2-oksidazin reaksiyonu sirasinda, reaksiyon karisimindan uzaklastirilan H202 ortaya çikmaktadir. HzOz'nin uzaklastirilmasi, geleneksel yöntemlere uygun olarak meydana gelebilmekte ve tercihen enzimatik olarak, örnegin bir katalaz yardimiyla gerçeklesmektedir. Örnegin, reaksiyon karisimina bir katalaz eklenmektedir.

Mevcut bulusa uygun yöntemin özel bir yapilanmasi, ortaya çikan H202'nin bir katalaz yardimiyla çikarilmasi ile karakterize edilmektedir.

Uygun katalazlar, bilinmekte ve örnek olarak Aspergi'llus sp., Corynebacterium g/utamicum veya sigir karacigerinden elde edilebilmektedir.

Mevcut tarifnameye uygun bir yöntemde D-glukozonun D-fruktoza enzimatik olarak indirgenmesi, örnegin geleneksel bir yönteme göre veya burada tarif edildigi gibi uygun bir yönteme göre meydana gelebilmektedir. Substratlarin indirgenmesi Için elverisli bulunan uygun, örnek olarak da genel enzimler, indirgemeye yönelik enzimler olarak kullanilabilmektedir. Uygun enzimler, örnek olarak redüktazlari, özellikle de ksiloz redüktazlarini içermektedir.

Uygun ksiloz red üktazlar bilinmekte ve örnek olarak Cand/da trop/cali's, Candida parapsi'losis veya Debariomyces hansenii'den elde edilebilmektedir.

Mevcut bulusa uygun yöntemin özel bir yapilanmasi, D-glukozonun D-fruktoza indirgenmesine yönelik olarak bir ksiloz redüktazin kullanilmasi ile karakterize edilmektedir.

Mevcut bulusa uygun bir yöntemde, bir redoks kofaktörü, özellikle de NAD(P)H/NAD(P)+ kullanilmaktadir. Özel olarak, NAD(P)H, D-glukozonun D-fruktoza indirgenmesi için bir redoks kofaktörü olarak kullanilmaktadir. Bu baglamda NAD*, oksitlenmis formu göstermekte ve NADH, indirgenmis nikotinamid adenin dinükleotid formunu belirtirken, NADP*, oksitlenmis formu göstermekte ve NADPH, indirgenmis nikotinamid adenin dinükleotid fosfat sekline isaret etmektedir. Söz konusu olan enzimleri eksprese eden, gerekli olan NAD(P)'nin barindigi E. coli (örnek olarak E. coli BL21 (DE 3)) gibi bir mikroorganizmanin bir hücre lizati kullanilarak, söz konusu kofaktörün pahali olabilecek ilavesi bazi durumlarda ihmal edilebilmektedir. Mevcut bulusa uygun bir yöntemde, NAD(P)+ ve/veya NAD(P)H redoks kofaktörleri, D-glukozun D- fruktoza dönüstürülmesi sirasinda eklendiginde, ilave edilen konsantrasyon, genel olarak; 0,001 mM ila 10 mM araliginda, tercihen 0,01 mM ila 1 mM arasinda degismektedir.

Mevcut bulusa uygun olan yöntemin özel bir yapilanmasi, özellikle D-glukozonun indirgenmesi sirasinda redoks kofaktörlerinin, özellikle de NAD(P)H'nin kullanilmasi ve özellikle b) adiminda kullanilan enzimin NADP(H)'a dayali olmasi ile karakterize edilmektedir.

Redoks kofaktörleri, uygun bir kofaktör yeniden kazanim sistemi ile yeniden üretilebilmekte, yani bunlar, geri dönüsüm islemine tabi tutulabilmektedirler. Burada kofaktörler, orijinal olarak kullanilan sekilde yeniden dönüstürülürler.

Mevcut bulusa uygun olan yöntemin özel bir yapilanmasi, kullanilan redoks kofaktörlerinin, özellikle uygun bir kofaktör yeniden kazanim sistemi ile geri dönüsüme tabi tutulmasiyla karakterize edilmektedir.

Redoks kofaktörlerinin yeniden kazanimi, genellikle, redoks kofaktörlerinin yeniden kazanimi sirasinda kullanilan uygun bir ko-substratin varligini gerektirmektedir. Örnegin, NAD(P)H/NAD(P)+ kofaktörlerinin kullanilmasi halinde kullanilabilecek olan ko-substratlar, örnek olarak, izopropil alkol (2-propanol, IPA) gibi alkoller, Iaktik asit ve tuzlarini, pirüvik asit ve tuzlarini, oksijen, hidrojen ve/veya formik asit ve tuzlarini ihtiva etmektedir.

Mevcut bulusa ait bir yöntem, özel bir yönüyle; özellikle, bir alkol, Iaktik asit ve tuzlari, pirüvik asit ve tuzlari, oksijen, hidrojen ve/veya formik asit ve tuzlari arasindan seçilen bir ko-substrati tüketen, D-glukozonun indirgenmesi için NAD(P)H/NAD(P)+ redoks kofaktörlerinin kullanilmasi halinde redoks kofaktörünün yeniden kazanilmasi ile karakterize edilmektedir.

Mevcut bulusa uygun olan bir yöntemin özel bir yapilanmasi, özellikle D-glukozonun D-fruktoza indirgenmesi için redoks kofaktörlerinin yeniden kazanilmasi için ko-substratlarin kullanilmasi ile karakterize edilmektedir.

Redoks kofaktörlerinin yeniden kazanimi için bir redoks enzimi kullanilmaktadir. NAD(P)H/ NAD(P)+ kullanildiginda redoks kofaktörleri olarak dikkate alinan redoks enzimleri; örnegin, dehidrojenazlar, örnek olarak da alkol dehidrojenazlari, laktat dehidrojenazlari, format dehidrojenazlari, tercihen de alkol dehidrojenazlarini ihtiva etmektedir. Uygun alkol dehidrojenazlari bilinmekte ve örnek olarak Lactobaci/Ius kefifden elde edilebilen bir alkol dehidrojenazini içermektedir.

Mevcut bulusa uygun olan yöntemin bir baska özel yapilanmasinda, redoks kofaktörü, bir redoks enzimi, özellikle de bir alkol dehidrojenazi ile yeniden kazanilmaktadir.

Mevcut bulusa uygun bir yöntemde, enzimler; istege bagli olarak hücre lizatlari biçiminde, istege bagli olarak rekombinant olarak asiri bir sekilde eksprese edilmis proteinler olarak, örnegin E. colfde rekombinant olarak asiri bir sekilde eksprese edilmis proteinler olarak kullanilabilmektedir.

Burada uygun hücre lizatlari, tercihen daha fazla saflastirilmaya gerek kalmadan kullanilmaktadir. Üretilecek olan enzime bagli olarak, örnegin, teknikte uzman kisiler tarafindan bilinen mikroorganizmalar gibi mikroorganizmalar da ekspresyon için kullanilabilmektedir. Mevcut bulusa uygun bir yöntemde, ilgili mikroorganizmalarin kati bilesenleri de (örnegin, tüm-hücre biyokatalizörleri) reaksiyonda ayrilabilmekte veya kullanilabilmektedir. Rekombinant DNA teknolojisi olmadan zaten yeterli enzim aktivitesi sergileyen mikroorganizmalardan elde edilen kültür süpernatanlari veya lizatlari da kullanilabilmektedir. Böylece, 1 U enzim ünitesi, dakikada 1 umol substrati reaksiyona sokmak için gerekli olan enzim miktarina karsilik gelmektedir.

Mevcut bulusa uygun bir yöntemde, hem bir veya birkaç enzim hem de bir veya birkaç redoks kofaktörü. D-glukozun D-fruktoza dönüstürülmesinde ya çözünebilir bir formda ya da tasiyicilar (katilar) üzerinde hareketsiz halde iken kullanilabilmektedir.

Mevcut bulusa uygun bir yöntem, baska bir yönüyle, asagidaki Reaksiyon Semasi 2'ye göre ilerlemesiyle karakterize edilmektedir.

D-Slui.oz D-Glukozon D-Fruktci: 4;:) ,5;;3 OH Katala: bH izopropanoi âseton burada LkADH; bir alkol dehidrojenazini, özellikle de Lactobaci'llus kefifden elde edilen NADP(H)'a dayali bir alkol dehidrojenazini belirtmektedir.

Mevcut bulusa göre elde edilen D-Fruktoz, örnegin, kristalizasyon kullanimi gibi geleneksel bir yönteme göre reaksiyon karisimindan izole edilebilmektedir.

Kimya endüstrisinde, D-fruktoz, ileriki bir isleme için önemli bir baslangiç malzemesini temsil etmektedir. Örnek olarak, D-fruktozun, örnegin asagidaki formülde hidroksimetilfurfural (HMF) gibi furan türevlerine degin islenebilecegi bilinmektedir.

Hidroksimetilfurfural (HMF) Hidroksimetilfurfuralin, asagidaki formülde üretimi için bir baslangiç ürünü oldugu bilinmektedir. bunun, polietilen furanoat (PEF) gibi polimerlerin üretimi için bir monomer olarak uygun oldugu bilinmektedir. PEF; örnegin içecek siseleri, kozmetik siseleri veya temizlik maddeleri için siseler gibi içi bos nesnelerin üretimi için polietilen tereftalata (PET) benzer sekilde kullanilabilmektedir.

Mevcut bulusa uygun bir yöntemle üretilen HMF'den elde edilebilen FDCA ile rejeneratif kaynaklardan gelen etilen glikol eszamanli olarak kullanildiginda, tamamen yenilenebilir hammaddelerden olusan PEF elde edilebilmektedir.

Mevcut tarifnameye uygun yöntemin özel bir yapilanmasinda, üretilen fruktoz, örnegin, asagidaki formülde hidroksimetilfurfural (HMF) gibi furan türevlerine dönüstürülmektedir.

Asagidaki örneklerde, tüm sicaklik verileri Santigrat derece (°C) olarak verilmistir. "1 U" enzim ünitesi, dakikada 1 pmol substrati reaksiyona sokmak için gerekli olan enzim miktarina karsilik gelmektedir.

Asagidaki kisaltmalar kullanilmaktadir: 3 saat (saatler) dak dakika (dakikalar) Olusan H202'nin uzaklastirilmalî için katalazin kullanilmaH ile D-glukozun piranoz oki idaz yoluyla D-glukozona biyolojik olarak dönüstürülme i 0,5 ml'lik bir parti, %2,5 (agirlik/ hacim) D-glukoz ve 1 U piranoz-2-0ksidaz (Sigma Aldrich) ihtiva ( içinde gerçeklestirilmektedir. Yeterli miktarda oksijen elde etmek için açik bir sistem kullanilmaktadir. 48 s sonra, D-glukozun %99'u D-glukozona dönüstürülmüstür.

Alkol dehdrojenazina dayali bm kofaktör yenLden kazanim LIJ_tem_ kullanilarak D- glukozonun kümoz redüktaz yardimiyla D-fruktoza dönüstürülmeüü 0,5 ml'lik bir parti, %2,5 (agirlik / hacim) D-glukozon ve Candida tropicali's'den (E. coli BL21 (DE3) içinde asiri eksprese edilen) elde edilen 10 U rekombinant ksiloz redüktaz içermektedir.

NADPH'in yeniden kazanimi için, Lactobacillus kefifden (E. coli' BL21 (DE3) içinde asiri eksprese edilen) elde edilen 10 U rekombinant alkol dehidrogenazi ve baslangiçta %5 (agirlik / hacim) 2- propanol kullanilmaktadir. Reaksiyon, NADPH ilavesi olmadan gerçeklestirilmektedir. Kofaktör, ksiloz redüktaz ve alkol dehidrojenazinin ekspresyonu için kullanilan E. coli BL21'in (DE3) hücre ekstresi tarafindan saglanmaktadir. Reaksiyon, sürekli çalkalama (850 rpm) altinda 30 °C'de Tris- HCI tamponu (50 mM, pH 7,0) içinde gerçeklestirilmektedir. Asetonun buharlasmasini saglamak ve reaksiyonu D-fruktoza dogru kaydirmak için açik bir sistem kullanilmaktadir. Ilave olarak 6 s sonra % IPA ve 24 saat sonra %2,5 (agirlik / hacim) IPA dozlanmaktadir. 48 s sonra, D-glukozonun ~%90'i D-fruktoza dönüstürülmüstür.

Alkol dehmlrojenazina dayali bI kofaktör yenmen kazanim Dmlemükullanilarak bi tek kap Entez nde D-glukozun D-glukozona ve ardindan D-fruktoza blyolojlk olarak dönüstürülmeIT(ara ürün uzaklastirilmadan ardisik kîadim) °C'de Tris-HCI tamponu (50 mM, pH 7,0) içinde gerçeklestirilmektedir. Ayrica, yeterli miktarda oksijen elde etmek için açik bir sistem kullanilmaktadir. 24 s sonra, reaksiyon karisimi, enzimlerin aktivitesini sonlandirmak için 10 dakika boyunca 65 °C'ye isitilmaktadir. Ardindan, Candida tropica/is'ten (E. elde edilen 10 U rekombinant ksiloz redüktaz, reaksiyon karisimina eklenmektedir. NADPH'in yeniden kazanimi için, Lactobaci'llus kefifden (E. coi'i BL21 (DE3) içinde asiri eksprese edilen) elde edilen 10 U rekombinant alkol dehidrogenazi ve baslangiçta %5 (agirlik / hacim) 2-propanol kullanilmaktadir. Reaksiyon, NADPH ilavesi olmadan gerçeklestirilmektedir. Kofaktör, rekombinant ksiloz redüktaz ve rekombinant alkol dehidrojenazinin ekspresyonu için kullanilan E. coli' BL21'in (DES) hücre ekstresi tarafindan saglanmaktadir. Reaksiyon, 30 °C'de ve sürekli çalkalama (850 rpm) altinda yürütülmektedir. Asetonun buharlasmasini saglamak ve reaksiyonu D-fruktoza dogru kaydirmak için açik bir sistem kullanilmaktadir. Ilave olarak 6 s sonra %2,5 (agirlik / hacim) IPA, 18 saat sonra %5 (agirlik / hacim) IPA ve 24 saat sonra %2,5 (agirlik / hacim) IPA dozlanmaktadir. 48 s sonra, kullanilan D-glukozun %91'i D-fruktoza dönüstürülmüstür.

Claims (1)

1. ISTEMLER D-glukozdan D-fruktoz üretmeye yönelik bir yöntem olup, özelligi; bir tek kap sentezinde, a) D-glukozun, bir piranoz-2-oksidaz kullanilarak D-glukozona enzimatik olarak oksitlenmesi, ve b) D-glukozonun, bir redüktaz kullanilarak D-fruktoza enzimatik olarak indirgenmesi, burada özellikle b) adiminda, bir redoks kofaktörünün kullanilmasidir. Istem 1'e uygun bir yöntem olup, özelligi; yöntemin, ara ürünler ortamdan uzaklastirilmadan gerçeklestirilmesidir. istem 1'e uygun bir yöntem olup, özelligi; ortaya çikan HzOz'nin bir katalaz yardimiyla uzaklastirilmasidir. Istemler 1 - 3'ten herhangi birine uygun bir yöntem olup, özelligi; D-glukozonun D-fruktoza indirgenmesi için bir ksiloz redüktazin kullanilmasidir. Istemler 1 - 4'ten herhangi birine uygun bir yöntem olup, özelligi; özellikle D-glukozonun D- fruktoza indirgenmesi sirasinda redoks kofaktörlerinin, özellikle de NAD(P)H'nin kullanilmasi ve özellikle b) adiminda kullanilan enzimin NADP(H)'a dayali olmasidir. Istemler 1 - 5'ten herhangi birine uygun bir yöntem olup, özelligi; D-glukozun D-fruktoza reaksiyonunda NAD(P)+ ve/veya NAD(P)H redoks kofaktörlerinin eklenmesidir. Istemler 5 veya 6'dan herhangi birine uygun bir yöntem olup, özelligi; kullanilan redoks kofaktörlerinin, özellikle uygun bir kofaktör yeniden kazanim sistemi ile geri dönüsüme tabi tutulmasidir. Istemler 5 - 7'den herhangi birine uygun bir yöntem olup, özelligi; özellikle, bir alkol, Iaktik asit ve tuzlari, pirüvik asit ve tuzlari, oksijen, hidrojen ve/veya formik asit ve tuzlari arasindan seçilen bir ko-substrati tüketen, D-glukozonun d-fruktoza indirgenmesi için NAD(P)H/NAD(P)+ redoks kofaktörlerinin kullanilmasi halinde redoks kofaktörünün yeniden kazanilmasidir. Istemler 5 - 8'den herhangi birine uygun bir yöntem olup, özelligi; redoks kofaktörünün, bir redoks enzimi, özellikle de bir alkol dehidrojenazi ile yeniden kazanilmasidir. Istemler 1 - 9'dan herhangi birine uygun bir yöntem olup, özelligi; asagidaki Reaksiyon Semasi 2'ye göre ilerlemesidir: D-Gium: D-Glukozon D-Frulûo: burada LkADH; bir alkol dehidrojenazini, özellikle de Lactobacillus kefir'den elde edilen NADP(H)'a dayali bir alkol dehidrojenazini belirtmektedir. 11. Istemler 1 - 10'dan herhangi birine uygun bir yöntem olup, özelligi; üretilen D-fruktozun, ilaveten furan türevlerine dönüstürülmesidir.