ES2683208T3

ES2683208T3 - Procedimiento para la producción de fructosa

Info

Publication number: ES2683208T3
Application number: ES14703332.8T
Authority: ES
Inventors: Ortwin Ertl; Marta SUT; Martina BRANDNER
Original assignee: Annikki GmbH
Current assignee: Annikki GmbH
Priority date: 2013-02-06
Filing date: 2014-02-05
Publication date: 2018-09-25
Anticipated expiration: 2034-02-05
Also published as: HRP20181223T1; EP2954062A1; CA2900310C; AU2014214038B2; DK2954062T3; HUE038656T2; CA2900310A1; AU2014214038A1; RS57530B1; EP2954062B1; US20150353978A1; AT513928A1; TR201810706T4; AT513928B1; PL2954062T3; WO2014122167A1; US10113192B2

Abstract

Procedimiento para la producción de D-fructosa a partir de D-glucosa, caracterizado porque en una reacción en un solo recipiente a) se oxida D-glucosa con una piranosa-2-oxidasa enzimáticamente para dar D-glucosona, y b) se reduce D-glucosona con una reductasa enzimáticamente para dar D-fructosa, utilizándose en particular en la etapa b) un cofactor redox.

Description

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DESCRIPCION

Procedimiento para la produccion de fructosa

La presente invencion se refiere a un procedimiento para la produccion de D-fructosa a partir de D-glucosa.

Para la produccion industrial de D-fructosa se emplea hasta la fecha convencionalmente un procedimiento en dos etapas, en el que se produce D-glucosa mediante la hidrolisis de polisacaridos, tal como por ejemplo almidon, y a continuacion se realiza la isomerizacion de la D-glucosa obtenida de esta manera para dar D-fructosa. Mediante la isomerizacion de D-glucosa pueden obtenerse un 42% de D-fructosa, un 50% de D-glucosa y aproximadamente un 8% de polisacaridos restantes. A este respecto, un problema es que el aislamiento de D-fructosa pura a partir de esta mezcla requiere el empleo de tecnicas de purificacion laboriosas y costosas.

Una alternativa para la produccion de D-fructosa mediante la isomerizacion de D-glucosa es un metodo en el que en una etapa enzimatica y una qmmica se transforma D-glucosa en D-fructosa.

En general se conoce un gran numero de diferentes metodos para la produccion de D-fructosa a partir de D-glucosa.

Asf se conoce por ejemplo una reduccion de D-glucosona para dar D-fructosa, que en la mayona de los casos se realizaba por via qmmica, tal como se describe por ejemplo en el documento EP1048672. En este procedimiento se produce la D-fructosa mediante la hidrogenacion catalttica de una disolucion de glucosona con un alto contenido en materia seca utilizando condiciones de presion y de temperatura especiales.

En el documento US4321324 se describe la produccion de D-glucosona a partir de D-glucosa en una etapa enzimatica, en la que se oxida la D-glucosa mediante una piranosa-2-oxidasa para dar D-glucosona y el peroxido de hidrogeno generado se separa mediante una membrana semipermeable.

La reduccion de D-glucosona para dar D-fructosa por via enzimatica con ayuda de una reductasa se propuso por ejemplo en el libro “Microbial Transformation of non-steroid cyclic compounds” de Kieslich, Georg Thieme Publishers, Stuttgart 1976 y en Biochem J., 15 de septiembre de 1997; 326 683-92, se describio que una xilosa-reductasa de Candida tenuis puede reducir D-glucosona para dar D-fructosa.

La produccion de D-fructosa mediante la isomerizacion de D-glucosa en dos etapas (enzimatica y qmmicamente) se describio por ejemplo en el documento US4246347. Segun el procedimiento descrito en el mismo, se transformo D- glucosa en primer lugar enzimaticamente usando una piranosa-2-oxidasa para dar D-glucosona. El peroxido de hidrogeno que se genera a este respecto se separo y se reutilizo, o se degrado mediante una catalasa. En una segunda etapa se hizo reaccionar mediante hidrogenacion la D-glucosona generada para dar D-fructosa. En este procedimiento se utilizo un 2% de glucosa y las dos etapas se realizaron por separado. Los problemas en los procedimientos son la alta presion y las altas temperaturas asf como tambien las bajas concentraciones de los sustratos utilizados.

Los procedimientos conocidos para la produccion/isomerizacion de D-fructosa a partir de D-glucosa presentan en la mayona de los casos diferentes desventajas. Asf, por ejemplo, una conversion eficiente del sustrato con alta selectividad es posible en la mayona de los casos solo utilizando altas presiones y temperaturas y no puede evitarse facilmente la formacion de subproductos contaminantes, que son diffciles de separar.

Se encontro ahora sorprendentemente un procedimiento que posibilita una conversion eficiente del sustrato con alta selectividad y sin la utilizacion de altas presiones y temperaturas, pudiendo evitarse en su mayor parte la formacion de subproductos contaminantes, de modo que no es necesaria la separacion del sustrato del producto y puede prescindirse de la utilizacion de tecnicas de purificacion laboriosas y costosas.

En un aspecto, la presente invencion pone a disposicion un procedimiento para la produccion de D-fructosa a partir de D-glucosa que esta caracterizado porque en una reaccion en un solo recipiente

a) se oxida D-glucosa con una piranosa-2-oxidasa enzimaticamente para dar D-glucosona, y

b) se reduce D-glucosona con una reductasa enzimaticamente para dar D-fructosa, utilizandose en particular en la etapa b) un cofactor redox.

Un procedimiento, que se proporciona mediante la presente invencion, se denomina en este caso tambien procedimiento de acuerdo con/segun la presente invencion.

Es decir, la presente invencion se refiere a un procedimiento para la produccion de D-fructosa a partir de D-glucosa en una reaccion en un solo recipiente en dos etapas enzimaticas:

Una oxidacion enzimatica de D-glucosa para dar D-glucosona, seguida de una reduccion enzimatica de D-glucosona para dar D-fructosa, que transcurre segun el siguiente esquema de reaccion 1:

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H

HD

H

-OH -H OH ■OH GHjOH E-glucosa

Esquemiade reaccion 1

HO-

H-

1=0

■H -OH OH

ch2oh

HO-

H-

k: =□ u

_: —n Al

—: LFI -------A

CH2OH

D-glucosona

D-fruictosa

Un procedimiento de acuerdo con la presente invencion ofrece una nueva posibilidad enzimatica para la produccion de D-fructosa, sin la necesidad de separar y purificar la D-glucosa restante. A este respecto, con respecto a las tecnicas empleadas actualmente, la presente invencion representa una mejora esencial de los procedimientos para la produccion de D-fructosa a partir de D-glucosa. A diferencia de los procedimientos existentes, los compuestos tanto se oxidan enzimaticamente como se reducen enzimaticamente, sin tener que aislar un producto intermedio. Al mismo tiempo pueden utilizarse concentraciones de sustrato esencialmente mayores y tambien conseguirse una mayor conversion que lo que era posible en los procedimientos empleados hasta la fecha.

Fuentes adecuadas de D-glucosa en un procedimiento segun la presente descripcion son, por ejemplo, hidrolizados enzimaticos o no enzimaticos de almidon, en particular almidon de ir^z, hidrolizados enzimaticos o no enzimaticos de sacarosa o hidrolizados enzimaticos o no enzimaticos de celulosa. La celulosa, que puede usarse en un procedimiento segun la presente invencion, puede obtenerse por ejemplo a partir de biomasa, preferiblemente a partir de biomasa lignocelulosica, como por ejemplo madera, paja, como paja de trigo, paja de mafz, bagazo, sisal, hierbas con fines energeticos. Para la hidrolisis enzimatica de almidon de mafz pueden utilizarse, por ejemplo, amilasas. Para la escision enzimatica de sacarosa son adecuadas, por ejemplo, las invertasas. Para la escision enzimatica de celulosa pueden utilizarse, por ejemplo, celulasas. Para la escision no enzimatica de dichos azucares multiples es adecuada, por ejemplo, una escision catalizada por acido.

Un procedimiento segun la presente descripcion se realiza preferiblemente en un sistema acuoso. Al sistema acuoso tambien se le puede anadir un (sistema de) tampon. Se conocen tampones (sistemas de tampon) adecuados e incluyen los tampones (sistemas de tampon) habituales, por ejemplo tampon acetato, fosfato de potasio, Tris-HCl y glicina. Preferiblemente, un tampon que se utiliza en un procedimiento de acuerdo con la presente invencion presenta un valor de pH de desde 5 hasta 10,5, preferiblemente desde 6 hasta 9,5. Al sistema acuoso, para la estabilizacion de las enzimas, se le pueden anadir estabilizadores, por ejemplo estabilizadores habituales, como por ejemplo iones, por ejemplo Mg2+, u otros aditivos, por ejemplo aditivos habituales, como por ejemplo glicerina.

En un procedimiento segun la presente descripcion se requiere oxfgeno para la oxidacion de D-glucosa para dar D- glucosona. Este oxfgeno puede incorporarse tal como habitualmente y ponerse a disposicion por ejemplo mediante el contacto con el aire del entorno o mediante un suministro de oxfgeno aumentado, por ejemplo mediante aire comprimido o la introduccion de oxfgeno puro.

Un procedimiento de acuerdo con la presente descripcion se realiza a temperaturas adecuadas, que pueden depender, por ejemplo, de las enzimas usadas. Las temperaturas adecuadas incluyen de 10°C a 70°C, preferiblemente de 20°C a 50°C, por ejemplo de 20°C a 45°C.

Como “reaccion en un recipiente” se denomina en este caso un procedimiento, en el que la reaccion de oxidacion y la reaccion de reduccion se realizan en la misma mezcla basica de reaccion sin aislamiento de productos intermedios, en particular en el que dos reacciones redox enzimaticas implicadas en la formacion de producto y un sistema enzimatico para la regeneracion del cofactor se realizan en una mezcla basica de reaccion, sin aislar un producto intermedio. A este respecto, o bien pueden anadirse todas las enzimas implicadas al mismo tiempo o bien se anade en primer lugar una parte de las enzimas, por ejemplo la(s) enzima(s) para la etapa a) y con un retardo de tiempo otra parte de las enzimas, por ejemplo la(s) enzima(s) para la etapa b). Antes de la adicion de la segunda parte de las enzimas pueden inactivarse por ejemplo las enzimas ya presentes en la mezcla basica de reaccion, por ejemplo con un procedimiento habitual, tal como por ejemplo aumento de la temperatura, por ejemplo hasta 65°C durante 10 min.

En un aspecto especial, un procedimiento de acuerdo con la presente invencion esta caracterizado porque el procedimiento tiene lugar sin aislamiento de productos intermedios.

La oxidacion de D-glucosa para dar D-glucosona en un procedimiento de acuerdo con la presente descripcion tiene lugar enzimaticamente, concretamente mediante catalisis enzimatica, y puede realizarse de acuerdo con un procedimiento conocido. La etapa de oxidacion segun la invencion tiene lugar mediante catalisis con una piranosa-2- oxidasa. Las piranosa-2-oxidasas pueden obtenerse, por ejemplo, a partir de Coriolus sp., Aspergillus sp. o

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Polyporus obtusus.

Durante la reaccion de la piranosa-2-oxidasa se genera H2O2, que se elimina de la mezcla de reaccion. La eliminacion de H2O2 puede tener lugar segun metodos habituales y preferiblemente tiene lugar enzimaticamente, por ejemplo con ayuda de una catalasa. Por ejemplo se anade una catalasa a la mezcla de reaccion.

Una forma de realizacion especial del procedimiento segun la presente invencion esta caracterizada porque el H2O2 que se genera se elimina con ayuda de una catalasa.

Se conocen catalasas adecuadas y por ejemplo pueden obtenerse a partir de Aspergillus sp., Corynebacterium glutamicum o de tugado de ternera.

La reduccion enzimatica de D-glucosona para dar D-fructosa en un procedimiento de acuerdo con la presente descripcion puede tener lugar segun un procedimiento adecuado, por ejemplo segun un procedimiento habitual, o tal como se describe en el presente documento. Como enzima para la reduccion pueden utilizarse enzimas adecuadas, por ejemplo habituales, que son adecuadas para la reduccion de sustratos. Las enzimas adecuadas comprenden por ejemplo reductasas, en particular xilosa-reductasas. Se conocen xilosa-reductasas adecuadas y pueden obtenerse por ejemplo a partir de Candida tropicalis, Candida parapsilosis o Debariomyces hansenii.

Una forma de realizacion especial del procedimiento segun la presente invencion esta caracterizada porque para la reduccion de D-glucosona para dar D-fructosa se utiliza una xilosa-reductasa.

En un procedimiento segun la presente invencion se utiliza un cofactor redox, en particular NAD(P)H/NAD(P)+, en particular durante la reduccion de la D-glucosona para dar D-fructosa se utiliza NAD(P)H como cofactor redox. A este respecto, NAD+ designa la forma oxidada y nAdH la forma reducida de dinucleotido de nicotinamida-adenina, mientras que NADP+ designa la forma oxidada y NADPH designa la forma reducida de dinucleotido fosfato de nicotinamida-adenina. Mediante el uso de un lisado celular del microorganismo que expresa las enzimas implicadas, por ejemplo E. coli, tal como por ejemplo E. coli BL21 (DE 3), en el que esta contenido el NAD(P) necesario, puede suprimirse eventualmente la costosa adicion de este cofactor. En el caso de que los cofactores redox NAD(P)+ y/o NAD(P)H se anadan durante la conversion de D-glucosa para dar D-fructosa, la concentracion anadida en un procedimiento de acuerdo con la presente invencion asciende habitualmente a desde 0,001 mM hasta 10 mM, preferiblemente desde 0,01 mM hasta 1 mM.

Una forma de realizacion especial del procedimiento segun la presente invencion esta caracterizada porque, en particular durante la reduccion de D-glucosona, se utilizan cofactores redox, en particular NAD(P)H, en particular porque la enzima que se usa en la etapa b) depende de NADP(H).

Los cofactores redox pueden regenerarse mediante un sistema de regeneracion de cofactores adecuado, concretamente se someten a un reciclado, transformandose los cofactores de nuevo en la forma utilizada originariamente.

Una forma de realizacion especial del procedimiento segun la presente invencion esta caracterizada porque los cofactores redox utilizados se someten a un reciclado, en particular mediante un sistema de regeneracion de cofactores adecuado.

La regeneracion de cofactores redox requiere en general la presencia de un cosustrato adecuado, que se consume durante la regeneracion de los cofactores redox. Los cosustratos que pueden usarse por ejemplo en el caso de usar los cofactores NAD(P)H/NAD(P)+ incluyen por ejemplo alcoholes, como por ejemplo alcohol isopropflico (2-propanol, IPA), acido lactico y sus sales, acido piruvico y sus sales, oxfgeno, hidrogeno y/o acido formico y sus sales.

En un aspecto especial, un procedimiento de la presente invencion esta caracterizado porque se regenera el cofactor redox durante el uso de los cofactores NAD(P)H/NAD(P)+, en particular durante la reduccion de D- glucosona, consumiendo un cosustrato, en particular seleccionado de un alcohol, acido lactico y sus sales, acido piruvico y sus sales, oxfgeno, hidrogeno y/o acido formico y sus sales.

Una forma de realizacion especial de un procedimiento segun la presente invencion esta caracterizada porque durante la regeneracion de los cofactores redox, en particular durante la reduccion de D-glucosona para dar D- fructosa, se utilizan cosustratos.

En la regeneracion de cofactores redox se utiliza una enzima redox. Las enzimas redox, que se tienen en cuenta en el caso de usar NAD(P)H/NAD(P)+ como cofactores redox, incluyen por ejemplo deshidrogenasas, por ejemplo alcohol deshidrogenasas, lactato deshidrogenasas, formiato deshidrogenasas, preferiblemente alcohol deshidrogenasas. Se conocen alcohol deshidrogenasas adecuadas e incluyen por ejemplo una alcohol deshidrogenasa que puede obtenerse a partir de Lactobacillus kefir.

En una forma de realizacion especial adicional del procedimiento segun la presente invencion, el cofactor redox se regenera mediante una enzima redox, en particular mediante una alcohol deshidrogenasa.

Las enzimas pueden usarse en un procedimiento de acuerdo con la presente invencion como tales, dado el caso en

forma de lisados celulares, dado el caso como protemas sobreexpresadas de manera recombinante, por ejemplo como protemas sobreexpresadas de manera recombinante en E. coli, pudiendo utilizarse preferiblemente los lisados celulares correspondientes sin purificacion adicional. Segun la enzima que debe producirse pueden utilizarse tambien otros microorganismos para su expresion, por ejemplo microorganismos que conoce el experto en la 5 tecnica. Los componentes solidos de los respectivos microorganismos o bien pueden separarse en un procedimiento de acuerdo con la presente invencion o bien utilizarse conjuntamente en la reaccion (por ejemplo biocatalizadores de celulas completas). Tambien pueden utilizarse sobrenadantes de cultivo o lisados de microorganismos, que sin la tecnologfa de ADN recombinante ya presentan actividades enzimaticas suficientes. A este respecto, la unidad enzimatica 1 U corresponde a aquella cantidad de enzima que se necesita para convertir 1 |imol de sustrato por min.

10 En un procedimiento de acuerdo con la presente invencion pueden utilizarse tanto una o varias enzimas, como uno o varios cofactores redox en la transformacion de D-glucosa en D-fructosa, ya sea en forma soluble o inmovilizada en vehmulos (solidos).

En un aspecto adicional, un procedimiento de acuerdo con la presente invencion esta caracterizado porque transcurre segun el siguiente esquema de reaccion 2

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en el que LkADH significa una alcohol deshidrogenasa, en particular una alcohol deshidrogenasa de Lactobacillus kefir, que depende de NADP(H).

La D-fructosa, que se obtuvo de acuerdo con la presente invencion, puede aislarse de la mezcla de reaccion, por ejemplo segun un procedimiento habitual, por ejemplo por medio de cristalizacion.

20 La D-fructosa representa un material de partida importante para el procesamiento adicional en la industria qmmica. Por ejemplo, puede procesarse adicionalmente la D-fructosa de manera conocida en derivados de furano, tal como por ejemplo hidroximetilfurfural (HMF) de formula

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El hidroximetilfurfural es de manera conocida un producto de partida para la produccion de acido 2,525 furanodicarboxflico (FDCA) de formula

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que es adecuado de manera conocida como monomero para la produccion de polfmeros, tal como por ejemplo

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poli(furanoato de etileno) (PEF). El PEF puede utilizarse de manera similar como el poli(tereftalato de etileno) (PET), por ejemplo para la produccion de cuerpos huecos, en particular botellas, tal como por ejemplo botellas de bebida, botellas para cosmeticos o botellas para productos de limpieza. Con el uso simultaneo de etilenglicol de fuentes regenerativas y FDCA, que puede obtenerse a partir de HMF, que se produce en un procedimiento de acuerdo con la presente invencion, puede obtenerse PEF, que consiste completamente en materias primas renovables.

En una forma de realizacion especial del procedimiento de acuerdo con la presente descripcion se convierte la fructosa producida adicionalmente en derivados de furano, tal como por ejemplo hidroximetilfurfural (HMF) de formula

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En los siguientes ejemplos, todos los datos de temperatura estan en grados Celsius (°C). A este respecto, la unidad enzimatica “1 U” corresponde a aquella cantidad de enzima que se necesita para convertir 1 |imol de sustrato por min.

Se usan las siguientes abreviaturas: h hora(s)

min minuto(s)

Ejemplo 1

Bioconversion de D-glucosa para dar D-glucosona mediante piranosa-oxidasa usando catalasa para eliminar el H2O2 formado a este respecto

Una mezcla basica de 0,5 ml contiene un 2,5% (p/v) de D-glucosa y 1 U de piranosa-2-oxidasa (Sigma Aldrich). Para convertir el H2O2 formado en esta reaccion se utilizan 50 U de catalasa (Sigma Aldrich), que convierte el H2O2 generado en H2O + A O2. La reaccion se realiza en un tampon Tris-HCl (50 mM, pH 7,0) a 30°C con agitacion continua (850 rpm). Se usa un sistema abierto para conseguir un suministro de oxfgeno suficiente. Tras 48 h se habfa convertido el 99% de la D-glucosa en D-glucosona.

Ejemplo 2

Bioconversion de D-glucosona para dar D-fructosa mediante xilosa-reductasa usando un sistema de regeneracion de cofactores dependiente de alcohol deshidrogenasa

Una mezcla basica de 0,5 ml contiene un 2,5% (p/v) de D-glucosona y 10 U de la xilosa-reductasa recombinante de Candida tropicalis (sobreexpresada en E. coli bL21 (DE3)). Para la regeneracion de NADPH se utilizan 10 U de la alcohol deshidrogenasa recombinante de Lactobacillus kefir (sobreexpresada en E. coli BL21 (DE3)) e inicialmente un 5% (p/v) de 2-propanol. La reaccion se realiza sin adicion de NADPH. El cofactor esta disponible del extractor celular del E. coli BL21 (DE3) usado para la expresion de la xilosa-reductasa y de la alcohol deshidrogenasa. La reaccion se realiza en un tampon Tris-HCl (50 mM, pH 7,0) a 30°C y con agitacion continua (850 rpm). Se usa un sistema abierto para posibilitar la evaporacion de la acetona y desplazar la reaccion en el sentido de la D-fructosa. Se dosifican posteriormente un 2,5% (p/v) de IPA tras 6 h, un 5% de IPA (p/v) tras 18 h y un 2,5% (p/v) de IPA tras 24 h. Tras 48 h se habfa convertido ~90% de la D-glucosona en D-fructosa.

Ejemplo 3

Byconversion de D-glucosa para dar D-glucosona y ademas para dar D-fructosa en una reaccion de un recipiente (dos etapas sucesivas sin aislamiento del producto intermedio) usando un sistema de regeneracion de cofactores dependiente de alcohol deshidrogenasa

Una mezcla basica de 0,5 ml contiene un 2,5% (p/v) de D-glucosa y 1 U de piranosa-2-oxidasa (Sigma Aldrich). Para convertir el H2O2 formado en esta reaccion se utilizan 50 U de catalasa, que convierte el H2O2 generado en H2O + A O2. La reaccion se realiza en un tampon Tris-HCl (50 mM, pH 7,0) a 30°C con agitacion continua (850 rpm). Por lo demas, se usa un sistema abierto para conseguir un suministro de oxfgeno suficiente. Tras 24 h se calienta la mezcla de reaccion durante 10 minutos hasta 65°C, para desactivar las enzimas. A continuacion se anaden a la mezcla de reaccion 10 U de la xilosa-reductasa recombinante de Candida tropicalis (sobreexpresada en E. coli BL21 (DE3)). Para la regeneracion de NADPH se utilizan 10 U de la alcohol deshidrogenasa recombinante de Lactobacillus kefir (sobreexpresada en E. coli BL21 (DE3)) e inicialmente un 5% (p/v) de 2-propanol. La reaccion se realiza sin adicion de NADPH. El cofactor esta disponible del extracto celular del E. coli BL21 (DE3) usado para la expresion de la xilosa-reductasa recombinante y de la alcohol deshidrogenasa recombinante. La reaccion se realiza

a 30°C y con agitacion continua (850 rpm). Se usa un sistema abierto para posibilitar la evaporacion de la acetona y desplazar la reaccion en el sentido de la D-fructosa. Se dosifican posteriormente un 2,5% (p/v) de IPA tras 6 h, un 5% (p/v) de IPA tras 18 h y un 2,5% (p/v) de IPA tras 24 h. Tras 48 h se habfa convertido el 9l% de la D-glucosa utilizada en D-fructosa.

Claims

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REIVINDICACIONES

1. Procedimiento para la produccion de D-fructosa a partir de D-glucosa, caracterizado porque en una reaccion en un solo recipiente

2. Procedimiento segun la reivindicacion 1, caracterizado porque el procedimiento tiene lugar sin aislamiento de productos intermedios.

3. Procedimiento segun la reivindicacion 1, caracterizado porque el H2O2 generado se elimina con ayuda de una catalasa.

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5.

6.

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8.

9.

10.

Procedimiento segun una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque para la reduccion de D- glucosona para dar D-fructosa se utiliza una xilosa-reductasa.

Procedimiento segun una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque, en particular durante la reduccion de D-glucosona para dar D-fructosa, se utilizan cofactores redox, en particular NAD(P)H, en particular porque la enzima que se usa en la etapa b) depende de NADP(H).

Procedimiento segun una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque se anaden los cofactores redox NAD(P)+ y/o NAD(P)H durante la conversion de D-glucosa en D-fructosa.

Procedimiento segun una de las reivindicaciones 5 o 6, caracterizado porque los cofactores redox utilizados se someten a un reciclado, en particular mediante un sistema de regeneracion de cofactores adecuado.

Procedimiento segun una de las reivindicaciones 5 a 7, caracterizado porque el cofactor redox se regenera durante el uso de los cofactores NAD(P)H/NAD(P)+, en particular durante la reduccion de D-glucosona para dar D-fructosa, consumiendo un cosustrato, en particular seleccionado de un alcohol, acido lactico y sus sales, acido piruvico y sus sales, oxfgeno, hidrogeno y/o acido formico y sus sales.

Procedimiento segun una de las reivindicaciones 5 a 8, en el que el cofactor redox se regenera mediante una enzima redox, en particular mediante una alcohol deshidrogenasa.

Procedimiento segun una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque transcurre segun el siguiente esquema de reaccion 2

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11. Procedimiento segun una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque la D-fructosa producida se convierte adicionalmente para dar derivados de furano.