TN2012000409A1 - Developpement d'un systeme de criblage des inhibiteurs de tyrosine kinase a partir de l'expression de gst-egfr chez e.coli. - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l'expression hétérologue du récepteur de facteur de croissance epidermique (EGFR) et son domaine intracellulaire en fusion avec la GST chez la bactérie E.coli afin de tester son activité tyrosine kinase recombinante. Nous avons pu solubiliser les protéines recombinantes grâce à l'utilisation du sarkosyl lors de l'extraction. Le test de dimérisation de GST a montré que nos protéines de fusion à base d'EGFR subissent la dimérisation aussi. Cette dimérisation a permis de réussir l'activation du domaine tyrosine kinase d'EGFR produit chez E.coli en présence de l'ATP (y-32P). le test d'activité a révélé, en plus, la présence d'une cible protéique de grande taille d'E.coli à la tyrosine kinase recombinante. Nous avons détecté aussi le produit d'autophosphorylation de nos protéines, en plus de la protéine qui est rencontrée malgré l'utilisation du gluthation sépharose qui fixe sélectivement les protéines de fusion avec la GST. Ceci suggère que cette protéine cible est de type chaperon associée aux protéines hétérologues. L'utilisation d'un inhibiteur de tyrosine kinase qui est la génistéine bloque ou diminue cette réaction de phosphorylation aussi bien de la protéine cible endogène que l'autophosphorylation. C'est ainsi que nous pouvons cribler les molécules naturelles ou de synthèse pour leur pouvoir inhibiteur de tyrosine kinase en cancer.