TH7642A3

TH7642A3 - กรรมวิธีการเตรียมไลโปโซมกระเจี๊ยบแดง

Info

Publication number: TH7642A3
Application number: TH903000459U
Authority: TH
Inventors: ดร.อรุณพร อิฐรัตน์ รองศาสตราจารย์; ดร.สิริรัศมิ์ ปิ่นสุวรรณ ผู้ช่วยศาสตราจารย์; ดร.สุวิภา อึ้งไพบูลย์ รองศาสตราจารย์; อำนวยกิจ ดร.ธนพร
Filing date: 2009-05-18
Publication date: 2012-11-27

Abstract

DC60 (27/09/55) กรรมวิธีการเตรียมไลโปโซมกระเจี๊ยบแดง ประกอบด้วยขั้นตอน การสกัดสารสกัดจากกระเจี๊ยบ แดง ด้วยตัวทำละลายด้วย เอทธานอล 95% ภายใต้ภาวะที่เหมาะสมคืออุณหภูมิ 27-35 องศาเซลเซียส นาน ครั้งละ 72 ชั่วโมงกรอง และ ทำซ้ำ 2 ครั้ง และระเหยให้แห้งภายใต้ความดัน และอุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส หลังจากนั้นนำมาเตรียมให้อยู่ในรูป ไลโปโซม โดยการเตรียม นำสารเคมีที่เป็นชั้นของน้ำมัน ที่ประกอบด้วย SPC Tween 80: DA ในอัตราส่วน 84:16:2.5 ใส่เอทธานอลเพื่อละลายชั้นน้ำมัน ทำในขวดก้นกลมสำหรับ ระเหยแห้ง (evaporating flask ) ส่วนชั้นน้ำ มีสารสกัดกระเจี๊ยบแดง เอทธานอล น้ำ ที่มี buffer pH4.5 นำชั้น น้ำและชั้นน้ำมันมา ผสมภายใต้คลื่นความถี่สูง (sonicate) เพื่อให้มีการละลายในน้ำมันและอนุภาค ขนาด เล็ก โดยการใช้อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียส และเทชั้นน้ำลงในชั้นน้ำมัน พร้อมระเหยให้เอทธานอลออกด้วยการ ระเหยด้วยความดันระบบสุญญากาศ ที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียส และสิ่งประดิษฐ์นี้จะต้องมีขนาดอานุภาค 300-400 นาโนเมตร ร้อยละของการเก็บกักสารสกัดกระเจี๊ยบแดงได้ 80-90% ไลโปโซมกระเจี๊ยบแดงเป็น กรรมวิธีการผลิตเพื่อนำมาเป็นวัตถุดิบในการเตรียมเครื่องสำอางชะลอความแก่ที่ต้องการสารด้านอนุมูลอิสระ จากสารสกัดกระเจี๊ยบแดง โดยไลโปโซม จากสารสกัดกระเจี๊ยบแดงสามารถซึมผ่านผิวดีและจะลดอาการ ระคายเคืองที่เกิดจากความเป็นกรดของสารสกัดกระเจี๊ยบแดงโดยตรง การประดิษฐ์นี้ เกี่ยวกับกรรมวิธีการสกัดสารสกัดจากกลีบเลี้ยงกระเจี๊ยบแดง ด้วยตัวทำละลาย ด้วย เอทธานอล 95% ภายใต้ภาวะที่เหมาะสมคืออุณหภูมิ 25-30 องศาเซลเซียส นานครั้งละ 72 ชั่วโมงกรอง และ ทำซ้ำ 2 ครั้ง และระเหยให้แห้งภายใต้ความดัน และอุณหภูมิไม่เกิน 60 องศาเซลเซียส หลังจากนั้นนำมา เตรียมให้อยู่ในรูป ไลโบโซม โดยการเตรียม นำสารเคมีที่เป็นวัตภาคของนำมันหรือไขมัน ที่ประกอบด้วย SPC: Tween 80: DA ในอัตราส่วน 84:16:2.5 ใส่ เอทธานอลเพื่อละลายไขมัน ทำใน evaporating flask ส่วนวัต ภาค น้ำ มีสารสกัดกระเจี๊ยบแดง เอทธานอล น้ำ ที่มี buffer pH4.5 นำวัตภาคน้ำและน้ำมันมา sonicate เพื่อให้มีการละลายในไขมันและอนุภาค ขนาดเล็ก โดย sonicate และการใช้อุณหภูมิไม่เกิน 60 องศาเซลเซียส และเทวัตภาคน้ำลงในวัตภาคน้ำมัน พร้อมระเหยให้เอทธานอลออกด้วยการระเหยด้วยความดันระบบ สุญญากาศ ที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียส และสิ่งประดิษฐนี้จะต้องมีขนาดอานุภาคน้อยกว่า 400 นาโนเมตร ร้อยละของการเก็บกักสารสกัดกระเจี๊ยบแดงได้ไม่น้อยกว่า 80% ไลไบโซมกระเจี๊ยบแดงเป็นกรรมวิธีการผลิต เพื่อนำมาเป็นวัตถุดิบในการเตรียมเครื่องสำอางชะลอความแก่ที่ต้องการสารต้านอนุมูลอิสระจากกระเจี๊ยบแดง ดังนั้นจึงเตรียมในรูปโลชั่นไลโบโซม กระเจี๊ยบแดงเพื่อให้การซึมผ่านผิวดีลดอาการระคายเคืองที่ได้จากสาร สกัดกระเจี๊ยบโดยตรง: สิทธิบัตรยา

Claims

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :1 กรรมวิธีการเตรียม ไลโบโซม จากสารสกัดกระเจี๊ยบแดงด้วยวิธีหมัก 95% Ethanol ประกอบด้วยขั้นตอน ดังนี้ ก. นำกลีบเลี้ยงกระเจี๊ยบแดงสด มาแกะแยกเนื้อและเมล็ด นำเนื้อไปอบแห้งในตู้อบลมร้อน ที่อุณหภูมิ 50 องซาเซลเซียส เป็นเวลา 48 ชั่วโมง นำดอกกระเจี๊ยบแห้ง มาแช่ด้วยเอทานอล อัตราส่วน 1 ต่อ 3 นาน 72 ชั่วโมง (แข่ 2 รอบ) กรองแล้วนำส่วนน้ำไประเหยสารละลายออกให้หมด ด้วยเครื่องระเหยภายใต้สภาวะ สุญญากาศ อุณหภูมิไม่เกิน 60 องศาเซลเซียส ข. สูตรไลโบโซมกระเจี๊ยบแดงประกอบด้วย ชั้น oil Phosphatidylcholine from soybean (SPC) 2.747 g Tween80 0.52 g Deoxycholic acid (DA) 0.082 g Absolute Ethanol 15 ml Vitamin E 0.031 g ชั้นนำ สารสกัดกระเจี๊ยบแดงชั้นเอทานอล 1.5 g น้ำ (pH 4.5) 15 ml Absolute Ethanol 15 ml Buffer CH3COONa.3H2O 2.72 ml น้ำ 50 ml ค. ขั้นตอนการเตรียมไลโปโซมที่บรรจุสารสกัดกระเจี๊ยบแดง 1. ชั่ง phase ไมัน(SPC, Tween 80, DA) ใส่ในบีกเกอร์ เติม vitamin E และ เติม ethanol เพื่อละลายไขมัน 2. ชั่ง phase น้ำ ประกอบด้วย สารสกัดกระเจี๊ยบแดง เอทานอล และ เติม CH3COONa buffer pH 4.5 (เตรียม buffer 100 mL โดยชั่ง CH3COONa 5.44 g ละลายน้ำ และปรับ pH ให้ได้ 4.5 ด้วย con c. HCI ปรับ ปริมาตรน้ำให้ครบ 100 mL) 3. นำสารในข้อ1 และ 2 ไป sonicate จนไขมันละลาย (ถ้าละลายไม่หมดให้หมดให้นำไปละลายที่อุรหภูมิ 60 ํC) 4. นำphase ไขมันเทใส่ใน evaporation flask 5. นำphase ไขมันและphase น้ำไป heat ที่ 60 ํC เวลา 5 นาที 6. เท phase น้ำ ลงใน phase ไขมัน แล้ว swirl บน water bath ที่อุณหภูมิ 60 ํC เป็นเวลา 1 นาที 7. ระเหย ethanol ออกให้หมดด้วยเครื่อง rotary evaporator (ตั้ง อุณหภูมิ น้ำที่ 60 ํC) 2 กรรมวิธีการสกัดสารสกัด กระเจี๊ยบแดงที่เลือกใช้ ชั้น เอทธานอล 95% ตามข้อถือสิทธิ 1 มาทำ ไลโบโซม กระเจี๊ยบแดง ที่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของกระเจี๊ยบแดงด้วยวิธี Lipid peroxidation มี EC 50 ค่าน้อย กว่า 0.07 mg/ml และค่า EC 50 ค่าน้อยกว่า 0.04mg/ml เมื่อทดสอบด้วยวิธี DPPH และเมื่อเพิ่มความ เข้มข้นของสารสกัดกระเจี๊ยบแดง จาก 0.002-0.2 % จะทำให้ความสูงของ peak ESR ณ ตำแหน่งของ free radicals ทั้ง3 ขนิด คือ hydroxyl, superoxide anion และ methyl free radicals ลดลง ซึ่งแสดงถึง ความสามารถในการของสารสกัดกระเจี๊ยบแดง ในการลดปริมาณของ free radical ได้ทั้ง 3 ชนิด การสกัด ด้วย 95% ethanol ตามข้อถือสิทธิข้อ 1 จะต้องหมักโดยใช้อุณหภูมิ 27-35 ํ C 3 กรรมวิธีการเตรียมไลโบโซม ด้วยอัตราส่วนของชั้นไขมันเป็น SPC: Tween 80: DA ในอัตราส่วน 84:16:2.5 4 กรรมวิธีการระเหยสารสกัดกระเจี๊ยบตามข้อถือสิทธิที่ 1 ต้องไม่เกิน 60 ํ C กรรมวิธีการเตรียม สารสกัด ต่อ1 รอบสกัดใช้เวลา 72 ชั่วโมง ตามข้อถือสิทธิ์ข้อ 1 5 กรรมวิธีการเตรียม สารสกัด ตามข้อถือสิทธิ์ข้อ 1 จะต้องหมักด้วย 95% ethanol ในอัตราส่วนของ กระเจี๊ยบแดง ต่อ เอทธานอล 1:3 ได้ % yield ไม่น้อยกว่า 20% 6 กรรมวิธีการผลิตไลโบโซมตามข้อถือสิทธิ์ข้อ 1 จะต้องใช้อุณหภูมิต้องไม่เกิน 60 ํ C 7 ผลผลิตของไลโบโซม กระเจี๊ยบแดงตามขอถือสิทธิ ข้อ 1 จะต้องมีคุณสมบัติ ดังนี้ จะต้องมีขนาดอนุภาค น้อยกว่า 400 นาโนเมตร ร้อยละของการเก็บกัดสารได้ไม่น้อยกว่า 80% 8 ผลิตภัณฑ์จากไลโบโซมมีข้อถือสิทธิ์ ของผลิตภัณฑ์ โลชั่นไลโบโซม กระเจี๊ยบแดงมีดังนี้ ก. วิธีการเตรียมไลโบโซมกระเจี๊ยบแดงตามข้อ 1 และสูตรในการเตรียม โลชั่น กระเจี๊ยบแดง สูตรตำรับโลชั่นกระเจี๊ยบ 100 กรัม ชั้น oil Cremophore A6 2-3 กรัม Cremophore A25 2-3 กรัม Cetyl alcohol 1-2 กรัม GMS, SE 2-3 กรัม Petrolatum 1 กรัม Mineral oil 1 กรัม Isopropyl myristate 1-2 กรัม ชั้นน้ำ Glycerine 5 กรัม Propylene glycol 5 กรัม Sepigel 1.5 กรัม Uniphen 0.5 กรัม Sodium EDTA 0.1 กรัม Water qs to 100 กรัม สารสำคัญ อัลฟา-tocopherol (Vit E) 0.5 กรัม Liposome กระเจี๊ยบแดง 0.5-1 กรัม ข. วิธีการเตรียมโลชั่นไลโบโซมกระเจี๊ยบแดง ชั้นน้ำ 1. ชั่ง Sepigel เตรียมไว้ในบีกเกอร์ 2. ชั่ง Sodium EDTA ใส่ลงในน้ำ คนจน Sodium EDTA ละลายหมด 3. หลังจากนั้นเติม Propylene glycol คนจนสารละลายหมด 4. เติม Glycerine คนจนสารละลายหมด 5. นำข้อ 2-4 ค่อยๆ ใส่ใน Sepigle ที่เตรียมไว้ในข้อ 1 แล้วค่อยๆ คน ใส่ลงไปทีละนิด Sepigle จะดูด น้ำ พอน้ำแห้งก็ค่อยๆ เติมข้อ 2-4 ลงไป ต้องคนให้เป็นเนื้อเดียวกันและต้องคนไปในทางเดียวกันด้วย 6. ใส่ Uniphen ลงในชั้นน้ำ หลังจากนั้นคนให้เข้ากันแล้วนำไปต้มจนอุณหภูมิถึง 70 ํC แล้วค่อยยก ออก ชั้น oil

1. ชั่ง Mineral oil

2. ชั่ง Isopropyl myristate

3. ชั่ง Petrolatum

4. ชั่ง GME, SE (Glyceryl monostearate SE)

5. ชั่ง Cetyl alcohol

6. ชั่ง Cremphore A25

7. ชั่ง Cremphore A6

8. นำข้อ 1-7 ไปต้มจนอุณหภูมิถึง 70 ํC แล้วค่อยยกออก หลังจากเตรียมสารชั้นน้ำและชั้น oil แล้ว (อุณหภูมิ 70 ํC) แล้วค่อยๆ เทชั้นน้ำลงในชั้น oil แล้วค่อยๆ คนไปด้วย คนให้เข้ากัน คนจนอุณหภูมิลดลง (ถ้าอุณหภูมิลดลงจะทำให้เนื้อโลชันข้นขึ้น) เมื่อโลชันเย็นแล้ว เติม อัลฟา-tocopherol (Vit E) คนให้เข้ากัน เติม liposome 10% Roselle คนให้เข้ากัน 9 สูตรโลชั้นไลโบโซม กระเจี๊ยบแดง ที่มีฤทธิ์ ต้านอนุมูลอิสระและซึมผ่านผิว ดีตามข้อถือสิทธิ์ที่ 7