TH7611A3 - วิธีการตรวจหาไวรัสตัวแดงดวงขาว (White Spot Syndrome Virus, WSSV) และชุดตรวจหาไวรัสดังกล่าว - Google Patents
วิธีการตรวจหาไวรัสตัวแดงดวงขาว (White Spot Syndrome Virus, WSSV) และชุดตรวจหาไวรัสดังกล่าวInfo
- Publication number
- TH7611A3 TH7611A3 TH803000207U TH0803000207U TH7611A3 TH 7611 A3 TH7611 A3 TH 7611A3 TH 803000207 U TH803000207 U TH 803000207U TH 0803000207 U TH0803000207 U TH 0803000207U TH 7611 A3 TH7611 A3 TH 7611A3
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- virus
- white
- red
- shrimp
- cycles
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract 23
- 241000032989 Ipomoea lacunosa Species 0.000 title claims 2
- 241000696962 White spot syndrome virus Species 0.000 title abstract 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title abstract 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims abstract 12
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract 10
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 claims abstract 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 241000238552 Penaeus monodon Species 0.000 claims 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 claims 2
- 241000238017 Astacoidea Species 0.000 claims 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 claims 1
- 241000530454 Litopenaeus schmitti Species 0.000 claims 1
- 241000238553 Litopenaeus vannamei Species 0.000 claims 1
- 229910020101 MgC2 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 abstract 4
- 241000143060 Americamysis bahia Species 0.000 abstract 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 abstract 1
Abstract
DC60 (21/09/55) การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการตรวจหาไวรัสตัวแดงดวงขาว (White Spot Syndrome Virus, WSSV) ซึ่งเป็นไวรัสที่ทำให้กุ้งป่วยและตายได้ภายในเวลาไม่นานหลังจากติดเชื้อไวรัส และสามารถแพร่ ระบาดไปยังพื้นที่ใกล้เคียงได้อย่างรวดเร็ว จัดเป็นไวรัสที่ก่อความเสียหายให้แก่อุตสาหกรรมการ เพาะเลี้ยงกุ้งอย่างมาก โดยการประดิษฐ์นี้ได้จัดให้มีการสร้างไพรเมอร์ใหม่จำนวน 2 คู่ที่มีความจำเพาะ ต่อไวรัสตัวแดงดวงขาว และนำมาใช้ในการตรวจหาไวรัสดังกล่าวด้วยเทคนิควิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอน แบบ ใช้หลอดพีซีอาร์หลอดเดียว (single tube nested PCR technique) ซึ่งสามารถเพิ่มความไว ความ แม่นยำของการตรวจได้มากขึ้น และลดโอกาสการปนเปื้อนเชื้ออื่นให้น้อยลง โดยใช้เวลาน้อยกว่า การใช้ วิธีพีซีอาร์ขั้นตอนเดียว (single PCR) หรือวิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอน แบบใช้หลอดพีซีอาร์ 2 หลอด (two tube nested PCR technique) นอกจากนี้ยังได้ผลิตชุดตรวจหาไวรัสตัวแดงดวงขาวขึ้นเพื่อความสะดวก รวดเร็วในการตรวจสอบ และมีราคาถูก ซึ่งการตรวจหาไวรัสตัวแดงดวงขาวมีความสำคัญและจำเป็นต่อ ระบบการผลิตพ่อแม่พันธุ์กุ้ง การเลี้ยงกุ้ง ตลอดจนการตรวจสอบยืนยันผลิตภัณฑ์กุ้งที่นำเข้าและส่งออก ไปต่างประเทศ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาว (White Spot Syndrome Virus, WSSV) ซึ่งเป็นไวรัสที่ทำให้กุ้งป่วยและตายได้ภายในเวลาไม่นานหลังจากติดเชื้อไวรัส อีกทั้งการ ระบาดของไวรัสดังกล่าวสามารถแพร่ไปยังพื้นที่เลี้ยงกุ้งบริเวณใกล้เคียงได้อย่างรวดเร็ว จัดเป็นไวรัสที่ก่อ ความเสียหายให้แก่อุตสาหกรรมการเพาะเลี้ยงกุ้งอย่างมาก โดยการประดิษฐ์นี้ได้จัดให้มีการสร้างไพร์ เมอร์ของไวรัสตัวแดงดวงขาว และนำมาใช้กับวิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอน แบบใช้หลอดพีซีอาร์หลอดเดียว (single tube nested PCR technique) ซึ่งมีความสะดวกในการนำไปใช้ อีกทั้งยังมีความไว ความ แม่นยำมากขึ้น และใช้เวลาน้อยกว่า การใช้วิธีพีซีอาร์ขั้นตอนเดียว (single PCR) หรือวิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอน แบบใช้หลอดพีซีอาร์ 2 หลอด (two tube nested PCR technique) นอกจากนี้ยังได้ผลิตชุด ตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาวขึ้นเพื่อความสะดวก รวดเร็วในการตรวจสอบ และราคาถูก โดยการ ตรวจวินัจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาวมีความสำคัญและจำเป็นต่อระบบการผลิตพ่อแม่พันธุ์กุ้ง การเลี้ยงกุ้ง ตลอดจนการตรวจสอบยืนยันผลิตภัรฑ์กุ้งที่นำเข้าและส่งออกไปต่างประเทศ
Claims (9)
1.1.-TCATGGCTTCTGAGATGAGG-3\'
2. การตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาว ด้วยวิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอน แบบใช้หลอดพีซีอาร์หลอดเดียว (single tube nested PCR technique) โดยใช้ไพร์เมอร์จากข้อถือสิทธิที่ 1 มีขั้นตอนดังนี้ 2.1 เตรียมตัวอย่างกุ้งที่ต้องการตรวจไวรัสตัวแดงดวงขาวมาสกัดดีเอ็นเอ 2.2 นำดีเอ็นเอจากข้อ 2.1 มาตรวจหาไวรัสโดยผ่านกระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่หนึ่ง (First step PCR) 2.3 นำผลผลิตที่ได้จากกระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่หนึ่งในข้อ 2.2 มาทำปฏิกิริยาต่อใน กระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่สอง (Nested step PCR) 2.4 นำผลผลิตพีซีอาร์ที่ได้จากข้อ 2.3 มาตรวจสอบขนาดโดยใช้เทคนิคเจลอิเล็คโทรโฟรีซิส
3. การตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาว ตามข้อถือสิทธิที่ 2 ที่ซึ่ง การทำปฏิกิริยากระบวนการพีซี อาร์ ขั้นตอนที่หนึ่ง มีส่วนประกอบของปฏิกิริยา คือ 10 x PCR buffer 2.5 ไมโครลิตร (มิวL) 50mM MgC2 3.0 ไมโครลิตร (มิวL) 10 mM dNTPs 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM WF1 primer 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM WR1 primer 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM ICF primer 0.2 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM ICR primer 0.2 ไมโครลิตร (มิวL) Taq DNA Polymerase 0.25 ไมโครลิตร (มิวL) Template 2.0 ไมโครลิตร (มิวL) น้ำกลั่น (DDW) 5.35 ไมโครลิตร (มิวL) รวม 15.0 ไมโครลิตร (มิวL) ปฏิกิริยาพีซีอาร์ ที่ใช้คือ 94 ํซ. 2 นาที 94 ํซ. 20 นาที 30 รอบ (cycles) 60 ํซ. 30 นาที 30 รอบ (cycles) 72 ํซ. 30 นาที 30 รอบ (cycles) 72 ํซ. 2 นาที 20 ํซ (สัญลักษณ์)
4. การตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาว ตามข้อถือสิทธิที่ 2 ที่ซึ่ง การทำปฏิกิริยากระบวนการพีซี อาร์ ขั้นตอนที่สอง มีส่วนประกอบของปฏิกิริยาคือ 10 x PCR buffer 2.5 ไมโครลิตร (มิวL) 50mM MgCI2 3.0 ไมโครลิตร (มิวL) 10 mM dNTPs 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM WF2 primer 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM WR2 primer 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM ICF primer 0.2 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM ICR primer 0.2 ไมโครลิตร (มิวL) Taq DNA Polymerase 0.25 ไมโครลิตร (มิวL) น้ำกลั่น (DDW) 7.35 ไมโครลิตร (มิวL) First step PCR 15.0 ไมโครลิตร (มิวL) รวม 30.0 ไมโครลิตร (มิวL) ปฏิกิริยาพีซีอาร์ ที่ใช้คือ 94 ํซ. 2 นาที 94 ํซ. 20 นาที 30 รอบ (cycles) 55 ํซ. 30 นาที 30 รอบ (cycles) 72 ํซ. 30 นาที 30 รอบ (cycles) 72 ํซ. 2 นาที 20 ํซ (สัญลักษณ์)
5. การตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาว ตามข้อถือสิทธิที่ 2 - 4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ผลิตผลที่ได้จาก กระบวนการพีซีอาร์ กรณีกุ้งติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวแบบรุนแรง จะพบผลิตผลทั้งใน กระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่หนึ่ง และกระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่สอง
6. การตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาว ตามข้อถือสิทธิที่ 2 - 4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ผลิตผลที่ได้จาก กระบวนการพีซีอาร์ กรณีกุ้งติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวแบบรุนแรง จะพบผลิตผลใน กระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่สองเท่านั้น
7. การตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดาวขาว ตามข้อถือสิทธิที่ 2-6 ข้อใดข้อหนึ่ง ใช้กับกุ้งทะเล ได้แก่ กุ้งขาวแวนนาไม (Penaeus vannamei) และ กุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon)
8. การตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาว ตามข้อถือสิทธิที่ 2 - 6 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สามารถนำไปใช้ ได้กับสัตว์ในกลุ่มครัสเตเชี่ยนอื่นๆ ได้แก่ กั้ง ปู
9. ชุดตรวจวินิจฉัยไวรัสตัวแดงดวงขาว ที่ประกอบด้วยแต่ไม่จำกัดเฉพาะ 10 มิวM ของไพร์เมอร์ WF1, ไพร์เมอร์ WR1, ไพร์เมอร์ WF2, ไพร์เมอร์ WR2, 1.5 mM MgCI2, 10mM dNTP และตัว ควบคุมบวก (positive control)
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH7611A3 true TH7611A3 (th) | 2012-11-15 |
| TH7611C3 TH7611C3 (th) | 2012-11-15 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Cas12aFDet: A CRISPR/Cas12a-based fluorescence platform for sensitive and specific detection of Listeria monocytogenes serotype 4c | |
| Su et al. | Multiplexed lateral flow assay integrated with orthogonal CRISPR-Cas system for SARS-CoV-2 detection | |
| Lopez-Jimena et al. | Development and validation of four one-step real-time RT-LAMP assays for specific detection of each dengue virus serotype | |
| Wang et al. | Rapid detection of multiple respiratory viruses based on microfluidic isothermal amplification and a real-time colorimetric method | |
| Ge et al. | Rapid and sensitive detection of novel avian-origin influenza A (H7N9) virus by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification combined with a lateral-flow device | |
| Hamza et al. | Critical issues in application of molecular methods to environmental virology | |
| CN102618655B (zh) | 一种检测肺炎支原体的lamp试剂盒 | |
| Zhang et al. | Comparison of conventional RT-PCR, reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification, and SYBR green I-based real-time RT-PCR in the rapid detection of bovine viral diarrhea virus nucleotide in contaminated commercial bovine sera batches | |
| BR112014012773A2 (pt) | ensaio de polimorfismo de nucleotídeo único de alto rendimento | |
| Nimsamer et al. | Comparative performance of CRISPR-Cas12a assays for SARS-CoV-2 detection tested with RNA extracted from clinical specimens | |
| WO2015023616A3 (en) | Method for comprehensive, quantitative, and highly sensitive discrimination of nucleic acid sequences in homogeneous and heterogeneous populations | |
| CN101008037A (zh) | 用环介导等温扩增方法检测副溶血弧菌的试剂盒及方法 | |
| Liu et al. | Development and validation of one-step SYBR green real-time RT-PCR for the rapid detection of newly emerged duck Tembusu virus | |
| CN103740863B (zh) | 检测禽流感病毒h7n9亚型的rt-lamp试剂盒 | |
| CN103937884A (zh) | 一种用于结核分枝杆菌检测的环介导等温扩增试剂盒及其使用方法 | |
| Zuo et al. | Development and characterization of a digital CRISPR/Cas13a based assay for rapid and sensitive diagnosis of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus | |
| CN111676302A (zh) | 一种创伤弧菌rpa-lfs快速检测方法的建立及应用 | |
| Gou et al. | A novel linear displacement isothermal amplification with strand displacement probes (LDIA-SD) in a pocket-size device for point-of-care testing of infectious diseases | |
| CN103614466A (zh) | 用于创伤弧菌的lamp-lfd检测的引物和探针序列 | |
| EP3342876A3 (en) | Methods for detecting gastrointestinal pathogen nucleic acid | |
| CN106399515A (zh) | 弓形虫核酸的快速检测方法及其快速检测试剂盒 | |
| TH7611A3 (th) | วิธีการตรวจหาไวรัสตัวแดงดวงขาว (White Spot Syndrome Virus, WSSV) และชุดตรวจหาไวรัสดังกล่าว | |
| TH7611C3 (th) | วิธีการตรวจหาไวรัสตัวแดงดวงขาว (White Spot Syndrome Virus, WSSV) และชุดตรวจหาไวรัสดังกล่าว | |
| CN106222301A (zh) | 一种精确定量检测诺如病毒ⅱ型的试剂盒及检测方法 | |
| CN102071247B8 (zh) | 一种区分非嗜肺与嗜肺军团菌的检测方法及试剂盒 |