TH7609A3 - วิธีการตรวจหาไวรัสเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส (Hepatopancreatic Parvo-like Virus, HPV) และชุดตรวจหาไวรัสดังกล่าว - Google Patents
วิธีการตรวจหาไวรัสเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส (Hepatopancreatic Parvo-like Virus, HPV) และชุดตรวจหาไวรัสดังกล่าวInfo
- Publication number
- TH7609A3 TH7609A3 TH803000210U TH0803000210U TH7609A3 TH 7609 A3 TH7609 A3 TH 7609A3 TH 803000210 U TH803000210 U TH 803000210U TH 0803000210 U TH0803000210 U TH 0803000210U TH 7609 A3 TH7609 A3 TH 7609A3
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- mul
- pcr
- hepato
- pavovirus
- primer
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract 22
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title abstract 3
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims abstract 11
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract 6
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 claims abstract 6
- 210000000514 hepatopancreas Anatomy 0.000 claims abstract 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims abstract 2
- 241000287882 Pavo Species 0.000 claims abstract 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims 3
- 241000238552 Penaeus monodon Species 0.000 claims 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 claims 2
- -1 10 mM dNTP Substances 0.000 claims 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 claims 1
- 241000238553 Litopenaeus vannamei Species 0.000 claims 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims 1
- 241000143060 Americamysis bahia Species 0.000 abstract 2
- 238000009313 farming Methods 0.000 abstract 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 2
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000000956 alloy Substances 0.000 abstract 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract 1
Abstract
DC60 (21/09/55) การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการตรวจหาไวรัสเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส (Hepatopancreatic Parvo-like Virus) ซึ่งเป็นไวรัสที่ทำให้กุ้งโตช้า แคระแกรน และตายได้ โดยการ ประดิษฐ์นี้ได้จัด ให้มีการสร้างไพร์เมอร์ใหม่จำนวน 2 คู่ที่มีความจำเพาะต่อไวรัสเฮปาโตแพนเครียอิติด พาโวไวรัส และนำมาใช้ในการตรวจหาไวรัสดังกล่าวด้วยเทคนิควิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอน แบบใช้หลอดพีซี อาร์หลอดเดียว (single tube nested PCR technique) ซึ่งสามารถเพิ่มความไว ความ แม่นยำของการ ตรวจได้มากขึ้น และลดโอกาสการปนเปื้อนเชื้ออื่นให้น้อยลง โดยการใช้เวลาน้อยกว่า การใช้วิธีพีซีอาร์ ขั้นตอนเดียว (single PCR) หรือ วิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอนแบบใช้หลอดพีซีอาร์ 2 หลอด (two tube nested PCR technique) นอกจากนี้ยังได้ผลิต ชุดตรวจหาไวรัสเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส ขึ้นเพื่อความ สะดวก รวดเร็วในการตรวจสอบ และมีราคาถูก ซึ่งการตรวจหาไวรัสเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัสมี ความสำคัญและจำเป็น ต่อระบบการผลิตพ่อแม่พันธุ์กุ้ง การเลี้ยงกุ้ง ตลอดจนการตรวจสอบยืนยัน ผลิตภัณฑ์กุ้งที่นำเข้า และส่งออกไปต่างประเทศ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการตรวจวินิจฉัยโรคเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส (Hepatopancreatic Parvo-like Virus) ซึ่งเป็นโรคที่ทำให้กุ้งโตช้า แคระแกรน และตายได้ โดยจัด ให้มีการสร้างไพร์เมอร์ของเฮปาโตแพนเครียอิติด พาโวไวรัส และนำมาใช้กับวิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอน แบบใช้หลอดพีซีอาร์หลอดเดียว (single tube nested PCR technique) ซึ่งมีความไว ความ แม่นยำมากชึ้น และใช้เวลาน้อยกว่า การใช้วิธีพีชีอาร์ขั้นตอนเดียว (single PCR) หรือ วิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอนแบบใช้หลอดพีซีอาร์ 2 หลอด (two tube nested PCR technique) นอกจากนึ้ยังได้ผลิต ชุดตรวจวินิจฉัยเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส ขึ้นเพื่อความสะดวก รวดเร็วในการตรวจสอบ และราคาถูก โดยการตรวจวินิจฉัยโรคเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัสมีความสำคัญและจำเป็น ต่อระบบการผลิตพ่อแม่พันธุ์กุ้ง การเลี้ยงกุ้ง ตลอดจนการตรวจสอบยืนยันผลิตภัณฑ์กุ้งที่นำเข้า และส่งออกไปต่างประเทศ
Claims (9)
1.1.-TCTTCTTGTTCTAATGCTGGAAA-3
2. การตรวจวินิจฉัยเฉปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส ด้วยวิธีพีซีอาร์ 2 ขั้นตอนแบบใช้หลอดพีชีอาร์ หลอดเดียว (single tube nested PCR technique) โดยใช้โฟร์เมอร์จากข้อถือสิทธิที่ 1 มีขั้นตอนดังนี้ 2.1 เตรียมตัวอย่างกุ้งที่ต้องการตรวจเฮปาโตแพนเครียอิติด พาโวไวรัส มาสกัดอีเอ็นเอ 2.2 นำดีเอ็นเอจากข้อ 2.1 มาตรวจหาไวรัสโดยผ่านกระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่หนึ่ง (First step PCR) 2.3 นำผลผลิตที่ได้จากกระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่หนึ่งในข้อ 2.2 มาทำปฎิกิริยาต่อในกระบวนการ พีซีอาร์ขั้นตอนที่สอง (Nested step PCR) 2.4 นำผลผลิตพีซีอาร์ที่ได้จากข้อ 2.3 มาตรวจสอบขนาดโดยใช้เทคนิคเจลอิเล็คโทรโฟรีซิส
3. การตรวจวินิจฉัยเฮปาโตแพนเครียอิติด พาโวไวรัส ตามข้อถือสิทธิที่ 2 ที่ซึ่ง การทำปฎิกิริยา กระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่หนึ่ง มีส่วนประกอบของปฎิกิริยา คือ 10 x PCR buffer 2.5 ไมโครลิตร (มิวL) 50mM MgCl2 3.0 ไมโครลิตร (มิวL) 10mM dNTPs 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM HF1 primer 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM HR1 primer 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM ICF primer 0.2 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM ICR primer 0.2 ไมโครลิตร (มิวL) Taq DNA Polymerase 0.25 ไมโครลิตร (มิวL) Template 2.0 ไมโครลิตร (มิวL) น้ำกลั่น (DDW) 5.35 ไมโครลิตร (มิวL) รวม 15.0 ไมโครลิตร (มิวL) ปฎิกิริยาพีซีอาร์ ที่ใช้คือ 94 ํซ. 2 นาที 94 ํซ. 20 วินาที 56 ํซ. 30 วินาที 30 รอบ (cycles) 72 ํซ. 30 วินาที่ 72 ํฃ. 2 นาที 20 ํฃ. oc
4. การตรวจวินิจฉัยเฮปาโตแพนเครียอิติด พาโวไวรัส ตามข้อถือสิทธิที่ 2 ที่ซึ่ง การทำปฎิกิริยา กระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่สอง มีส่วนประกอบของปฎิกิริยา คือ 10 x PCR buffer 2.5 ไมโครลิตร (มิวL) 50mM MgCl2 3.0 ไมโครลิตร (มิวL) 10mM dNTPs 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM HF2 primer 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM HR2 primer 0.5 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM ICF primer 0.2 ไมโครลิตร (มิวL) 10 มิวM ICR primer 0.2 ไมโครลิตร (มิวL) Taq DNA Polymerase 0.25 ไมโครลิตร (มิวL) น้ำกลั่น (DDW) 7.35 ไมโครลิตร (มิวL) First step PCR 15.0 ไมโครลิตร (มิวL) รวม 30.0 ไมโครลิตร (มิวL) ปฎิกิริยาพีซีอาร์ ที่ใช้คือ 94 ํฃ. 2 นาที 94 ํฃ. 20 วินาที 56 ํฃ. 30 วินาที 30 รอบ (cycles) 72 ํฃ. 30 วินาที่ 72 ํฃ. 2 นาที 20 ํฃ. oc
5. การตรวจวินิจฉัยเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส ตามข้อถือสิทธิที่ 2 - 4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ผลิตผล ที่ได้จากกระบวนการพีซีอาร์ กรณีกุ้งติดเชื้อเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส แบบรุนแรง จะพบ ผลิตผลทั้งในกระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่หนึ่ง และกระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่สอง
6. การตรวจวินิจฉัยเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส ตามข้อถือสิทธิที่ 2 -4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ผลิตผลที่ ได้จากกระบวนการพีซีอาร์ กรณีกุ้งติดเชื้อเฮปาโตแพนเครียอิติด พาโวไวรัส แบบไม่รุนแรง จะพบ ผลิตผลในกระบวนการพีซีอาร์ขั้นตอนที่สองเท่านั้น
7. การตรวจวินิจฉัยเฮปาโตแพนเครียอิติด พาโวไวรัส ตามข้อถือสิทธิที่ 2 - 6 ข้อใดข้อหนึ่ง ใช้กับกุ้ง ทะเล ได้แก่ กุ้งขาวแวนนาไม (Penaeus vannamei) และ กุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon)
8. การตรวจวินิจฉัยเฮปาโตแพนเครียอิติด พาโวไวรัส ตามข้อถือสิทธิที่ 2 - 6 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สามารถนำไปใช้ได้กับสัตว์ในกลุ่มครัสเตเชี่ยน อื่นๆ ได้แก่ กั้ง ปู
9. ชุดตรวจวินิจฉัยเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส ด้วยวิธีตามข้อถือสิทธิที่ 2-4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ ประกอบด้วยแต่มิได้จำกัดเฉพาะ ดังนี้ 10 มิวM ของ ไพร์เมอร์ HF1, ไพร์เมอร์ HR1, ไพร์เมอร์ HF2, ไพร์เมอร์ HR2 ไพร์เมอร์, 1.5 mM MgCl2, 10 mM dNTP และ ตัวควบคุมบวก (positive control)
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH7609C3 TH7609C3 (th) | 2012-11-15 |
| TH7609A3 true TH7609A3 (th) | 2012-11-15 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Nucleic acid amplification free biosensors for pathogen detection | |
| Zhu et al. | Multiplex and visual detection of African Swine Fever Virus (ASFV) based on Hive-Chip and direct loop-mediated isothermal amplification | |
| CN103614489B (zh) | 一种登革热病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法 | |
| CN103397105B (zh) | 一种检测gii型诺如病毒的试剂盒及其用途 | |
| RU2445370C1 (ru) | Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции | |
| CN106520984A (zh) | 一种铜绿假单胞菌核酸荧光pcr检测试剂盒及检测方法 | |
| CN101008037A (zh) | 用环介导等温扩增方法检测副溶血弧菌的试剂盒及方法 | |
| CN105018485A (zh) | 一种应用rpa技术检测小反刍兽疫病毒的引物和探针 | |
| CN101696453B (zh) | 检测牛病毒性腹泻病毒逆转录环介导等温扩增反应试剂盒的制备方法 | |
| CN105803045A (zh) | 一种荧光等温核酸扩增方法 | |
| CN102952896A (zh) | 一种检测甲型流感病毒的环介导等温扩增通用试剂盒及其应用 | |
| JP7503539B2 (ja) | 等温増幅および相対存在比を使用した宿主ｒｎａの評価 | |
| CN103184295B (zh) | 一种乙型肝炎病毒核酸定量检测方法与试剂盒 | |
| CN102108402B (zh) | 一种检测哈维氏弧菌的试剂盒及检测方法 | |
| CN105087826B (zh) | 人类免疫缺陷病毒hiv‑1的定量检测试剂盒 | |
| CN100460519C (zh) | 检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的试剂盒及方法 | |
| TH7609A3 (th) | วิธีการตรวจหาไวรัสเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส (Hepatopancreatic Parvo-like Virus, HPV) และชุดตรวจหาไวรัสดังกล่าว | |
| TH7609C3 (th) | วิธีการตรวจหาไวรัสเฮปาโตแพนเครียอิติค พาโวไวรัส (Hepatopancreatic Parvo-like Virus, HPV) และชุดตรวจหาไวรัสดังกล่าว | |
| CN101781677A (zh) | 检测白血病广谱标记物WT1基因mRNA表达的试剂盒 | |
| CN104328216A (zh) | 一种埃博拉病毒快速分型鉴别检测试剂盒 | |
| CN101245395B (zh) | 大菱鲆红体病虹彩病毒环介导等温扩增检测方法 | |
| CN107022615A (zh) | 用于检测松材线虫的lamp引物组、试剂盒及检测方法 | |
| CN101921869B (zh) | 焦磷酸测序技术鉴别新城疫病毒强毒株与弱毒株的方法 | |
| CN104164511A (zh) | 一种曲霉菌定量检测荧光pcr试剂盒 | |
| CN104087655A (zh) | 基于滚环扩增的限制性核酸内切酶单链切割的分析方法 |