TH67559B - วิธีการสำหรับการเตรียมองค์ประกอบแขวนลอยเซลล์ เพื่อการตรวจวิเคราะห์ความเป็นพิษของตัวอย่างต่อเซลล์ด้วยวิธีไดอิเล็กโตรโฟเรซีส (dielectrophoresis) - Google Patents

Abstract

------28/06/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ การตรวจวัดความเป็นพิษของตัวอย่างด้วยเทคนิควิธีไดอิเล็กโตรโฟเรซีสโดยใช้แบบจำลอง เซลล์ที่ได้จากมนุษย์ในการศึกษาการตอบสนองต่อสารพิษ (in vitro testing) ถือได้ว่าเป็นวิธีที่รวดเร็ว, มีความไวในการตรวจวัดสูงกว่าวิธีการปกติทั่วไป และมีขันตอนการเตรียมตัวอย่างที่สะดวก จุดประสงค์ของการใช้เทคนิควิธีไดอิเล็กโตรโฟเรซีส เพื่อการตรวจหาความเป็นพิษอย่างคร่าวๆ (screening test) ของตัวอย่างก่อนที่จะถูกทดสอบทางพิษวิทยาโดยละเอียดต่อไป หลักการการตรวจวัด ความเป็นพิษด้วยไดอิเล็กโตรโฟเรซีสอาศัยการเปลี่ยนแปลงคุณสมบัติทางไดอิเล็กติก คือ ค่าการเก็บ ประจุไฟฟ้า (capacitance) และค่าการนำไฟฟ้า (conductivity) ของเยื่อทุ้มเซลล์เมื่อได้รับอิทธิพลของ สารพิษเปรียบเทียบกับเซลล์ควบคุม ฉะนันจะเห็นได้ว่าขันตอนในการเตรียมตัวอย่างที่คาดว่าจะเป็น อันตรายต่อมนุษย์มีความสำคัญอย่างมากต่อการวิเคราะ หํไดอิเล็กโตรโฟเรซีส ดังบันการปร ะดิษฐ์นี้จึง ได้ออกแบบวิธีการเตรียมเซลล์ที่มีความสะดวก, รวดเร็ว และเที่ยงตรงสำหรับการวิเคราะห์ด้วยเทคนิค วิธีไดอิเล็กโตรโฟเรซีส ------------ การตรวจวัดความเป็นพิษของตัวอย่างด้วยเทคนิควิธีไดอิเล็กทรอโฟรีซีซโดยใช้แบบจำลอง เซลล์ที่ได้จากมนุษย์ในการศึกษาการตอบสนองต่อสารพิษ (in vitro testing)ถือได้ว่าเป็นวิธีที่รวดเร็ว, มีความไวในการตรวจวัดสูงกว่าวิธีการปกติทั่วไป และมีขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างที่สะดวก จุดประสงค์ของการใช้เทคนิควิธีไดอิเล็กทรอโฟรีซีซ เพื่อการตรวจหาความเป็นพิษอย่างคร่าวๆ (screening test) ของตัวอย่างก่อนที่จะถูกทดสอบทางพิษวิทยาโดยละเอียดต่อไป หลักการการตรวจวัด ความเป็นพิษด้วยไดอิเล็กทรอโฟรีซีซอาศัยการเปลี่ยนแปลงคุณสมบัติทางไดอิเล็กติก (capacitance และ conductivity) ของเยื่อหุ้มเซลล์เมื่อได้รับอิทธิพลของสารพิษเปรียบเทียบกับเซลล์ควบคุม ฉะนั้น จะเห็นได้ว่าขั้นตอนในการเตรียมตัวอย่างที่คาดว่าจะเป็นอันตรายต่อมนุษย์มีความสำคัญอย่างมากต่อ การวิเคราะห์ไดอิเล็กทรอโฟรีซีซ ดังนั้นการประดิษฐ์นี้จึงได้ออกแบบวิธีการเตรียมเซลล์ที่มีความ สะดวก, รวดเร็ว และเที่ยงตรงสำหรับการวิเคราะห์ด้วยเทคนิควิธีไดอิเล็กทรอโฟรีซีซ

Claims (1)

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :------28/06/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 3 หน้า ข้อถือสิทธิ 1. วิธีการเตรียมองค์ประกอบแขวนลอยเซลล์เพื่อการตรวจวัดความเป็นพิษของตัวอย่างด้วย เทคนิควิธีไดอิเล็กโตรโฟเรซีส ขันตอนการเตรียมเริ่มด้นโดยการผสมเซลล์กับตัวอย่างที่ต้อง การวิเคราะห์ แล้วทำการบ่มของผสมดังกล่าวเพื่อการตอบสนองของเซลล์ต่อสารพิษที่มีในตัวอย่าง จากนั้นทำการแยกเซลล์ออกจากของผสมในการบ่มเซลล์ ซึ่งจะได้เซลล์ที่พร้อมนำไปใช้ใน การวิเคราะห์ด้วยเทคนิควิธีไดอิเล็กโตรโฟเรซีสต่อไป 2. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยสารละลายที่ใช้เพื่อ การแขวนลอยเซลล์ ได้แก่สารละลายที่ช่วยรักษาสภาพเซลล์ไม่ให้เซลล์บวมหรือเหี่ยว (isotonic) ขณะ ทำการชะหรือแขวนลอยเซลล์ โดยที่สารละลายนีอาจใช้เป็นบัฟเฟอร์เพื่อการวิเคราะห์ไดอิเล็กโตร โฟเรซีสด้วยก็ได้ สารละลายตังกล่าวนี้ประกอบไปด้วย นี้าตาลซูโครส (sucrose) 8.5% (นำหนักต่อ ปริมาตร) และ นำตาลเด็ซ\'โตรส (dextrose) 0.3% (นำหนักต,อปริมาตร) ละลายด้วยนำบริสุ\'ทธ คุณภาพสูง (ultrapure grade) และมค่าออสโมลาริต (osmolarity) เปน 300 mOs 3. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งเซลล์ที่กล่าวถึงเป็นเซลล์ที่ได้จากสัตว์เลียงลูกด้วยนม และ ถูกนำมาเลียงในภาชนะเลียงเซลล์ที่ทำการควบคุมสภาพแวดล้อมอย่างเหมาะสมเพื่อให้เซลล์มี การเจริญเติบโตและแบ่งเชลล์ตามวงจรชีวิตของเซลล์ 4. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยสารละลายเสริมประสิทธิภาพ เซลล์ ได้แก่สารละลายที่ช่วยให้เซลล์มีการตอบสนองต่อสารพิษได้ดีขึ้น ซึ่งประกอบรวมด้วย ส่วนประกอบอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยองค์ประกอบอิออนและเกลือแร,; ตัวกำหนดพีเอช; องค์ประกอบที่ใช้ตัดสินค่าคงที่ไดอิเล็กติก (dielectric); องค์ประกอบทาง โภชนาการ; องค์ประกอบสารช่วยการเจริญและองค์ประกอบสารช่วยการส่งสัญญาณ (growth and signaling factor components); โปรออกซิแดนทและแอนติออกซแดนท (pro- and antioxidant) และ องคประกอบรดอกซ (redox components); โปรไบโอตก (probiotic), แอนทิไบโอตก (antibiotic), แอนทีมัยโคติก (antimycotic), และองค์ประกอบทางการบำบัดอื่น ๆ (other therapeutic components); องค์ประกอบที่ซึมผ่านเมมเบรนได้ และองค์ประกอบเปลี่ยนแปลงแชนเนลของเยื่อทุ้มเซลล์ (membrane permeability and membrane channel modulator components); องคประกอบเอนไชม; องคประกอบของตัวเปลยนแปลงประจุเยอทุ้มเซลล (membrane charge modifier components); องคประกอบของตัวเปลยนแปลงไขมันเยือทุ้มเซลล (membrane lipid modifier components); องคประกอบออนโคติกและองคประกอบออสโมติก (oncotic and osmotic components); และ, หน้า 2 ของจำนวน 3 หน้า องค์ประกอบทางภูมิคุ้มกันและเอ็นทิบอดี (immune and antibody components) องค์ประกอบเหล่านี จะถูกผสมรวมเข้ากับของผสมในการบ่ม (incubation mixture) ในสัดส่วนไม่เกิน 1% โดยปริมาตร 5. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยความเป็นพิษต่อเซลล์ซึ่งเป็น ผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางด้านองค์ประกอบและพื้นที่ของเยื้อหุ้มเซลล์ที่เป็นผลมาจากสารพิษ แล้วทำให้ค่าการเก็บประจุไฟฟ้า (capacitance) (Cmem) และความนำไฟฟ้า (conductance) (Gme11) ของ เยื่อหุ้มเซลล์เปลี่ยนไปจากที่เป็นอยู่ของเซลล์ปกติ 6. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยตัวอย่างที่ด้องการทดสอบ ซึ่ง อยู่ในสภาพของเหลว หรือของแข็งที่ถูกทำให้ละลายในตัวทำละลาย โดยอาจเป็นตัวอย่างที่ได้จาก สิ่งแวดล้อมโดยตรงหรือได้จากการผสมหรือละลายสารเคมีหรือยาด้วยตัวทำละลายที่เหมาะสม 7. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยองค์ประกอบของสารละลาย อาหารเลี้ยงเซลล์เข้มข้นคืออาหารเลี้ยงเชลล์ 10.4 กรัม ของ RPMI 1640 ละลายในนาบริสุทธ คุณภาพสูงจำนวน 100มิลลิลิตรเพิ่มเติมด้วย 10%โดยปริมาตรของซีรัมของตัวอ่อนลูกวัว (fetal bovine), 0.2 Mo l.L 1 L-กลูตามีน (L-glutamine), 0.02 Mo l.L1 HEPES และ 0.4% โดยปริมาตรของ เจนทามัยชิน ซัลเฟต (Gentamicin sulfate) แล้ว องค์ประกอบทังหมดถูกทำให้อยู่ในสภาพปลอดเชือ 8. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยขันตอนในการเตรียมตัวอย่าง ก่อนการผสมเซลล์ ด้วยการผสมตัวอย่างกับสารละลายอาหารเลียงเซลล์เข้มข้นในอัตราส่วนตัวอย่าง 90% โดยปริมาตรต่อสารละลายอาหารเลี้ยงเซลล์เข้มข้น 10% โดยปริมาตร จากนั้นทำการกรอง ของผสมดังกล่าวเพื่อคัดแยกอนุภาคที่ไม่ต้องการออก และทำให้อยู่ในสภาพปลอดเชื้อ การกรอง ดังกล่าวจะกระทำก่อนหรือหลังการผสมตัวอย่างกับสารละลายอาหารเลียงเซลล์เข้มข้นก็ได้ 9. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 8 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยการกรองด้วยตัวกรองขนาด 0.2 ไมโครเมตร 1 0. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยการผสมเซลล์ที่กล่าวไว้ใน ข้อถือสิทธิข้อที่ 3 กับของผสมดังกล่าวในข้อถือสิทธิข้อที่ 8 เพื่อให้ได้ของผสมในการบ่ม ที่อยู่ใน สภาพพร้อมสำหรับการบ่มเซลล์โดยมีสัดส่วน1ในการผสมตังนี ปริมาตรเซลล์ที่ผสมกับตัวอย่างตาม ข้อถือสิทธิข้อ 8 ไม่เกิน 30% โดยปริมาตรรวม 1 1. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยการบ่มของผสมในการบ่มเซลล์ เพื่อการตอบสนองของเซลล์ต่อสารพิษในตัวอย่าง โดยจัดให้เซลล์อยู่ในสภาวะที่กำหนดคือ ที่ หน้า 3 ของจำนวน 3 หน้า อุณหภูมิในช่วง 36 ถึง 38 องศาเซลเซียส ซึ่งที่ควรใช้ คือ 37 องศาเซลเซียส, ส่วนผสมของอากาศต่อ คาร์บอนไดออกไซด์เป็น 95%:5% ใช้เวลาในการบ่มนาน 30 ถึง 150 นาที 1 2. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยการแยกเซลล์ออกจากของผสม ในการบ่มด้วยการปีนเหวี่ยงของผสมในการบ่มดังกล่าวที่ความเร็วรอบในช่วง 1400 ถึง 1600 รอบต่อ นาที (rpm) ซึ่งที่ควรใช้คือ 1500 rpm เป็นเวลานาน 10 นาที แล้วรินส่วนที่ใสเหนือตะกอนเซลล์ทิงไป แต่เก็บตะกอนเซลล์ไว้ 1 3. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 12 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยการแยกเซลล์ออกจากของผสม ในการบ่มด้วยการกรองด้วยตัวกรองปลอดเชือขนาด 0.2 ไมโครเมตร (เป็นอีกทางเลือกนอกเหนือจาก การปีนเหวี่ยง) 1 4. วิธีการของข้อลือสิทธิข้อ 12 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยการทำให้เชลล์กลับมาอยู่ใน สภาพแขวนลอยด้วยสารละลายตามที่กล่าวถึงในข้อถือสิทธิข้อ 2 โดยการเติมสารละลายดังกล่าว ปริมาตร 1 มิลลิลิตร ลงในตะกอนเซลล์ตามข้อลือสิทธิข้อที่ 12 แล้วทำการผสมให้ตะกอนเซลล์ แขวนลอย แล้วทำการปรับค่าการนำไฟฟ้า (conductivity) ให้ เป็น 30 mS.m"1 ด้วยสารละลายฟอสเฟต บัฟเฟอร์ (phosphate buffer solution) (PBS) โดยการอ่านค่าด้วยเครื่องวัดค่าการนำไฟฟ้า 1 5. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 14 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยส่วนประกอบของสารละลาย PBS โดยการละลาย 0.8% (น,\'ไหนักต่อปริมาตร) ของ NaCl, 0.02% (นำหนักต่อปริมาตร) ของ KC1, 0.12% (นํ้าหนักต\'อปริมาตร) ของ NajHPO,, และ 0.02% (นํ้าหนักต่อปริมาตร) ของ KH2P04 ในนำ บริสุทธิ"คุณภาพสูง 1 6. วิธีการของข้อถือสิทธิข้อ 13 ซึ่งประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยการทำให้เซลล์กลับมาอยู่ใน สภาพแขวนลอยด้วยสารละลายตามที่กล่าวถึงในข้อถือสิทธิข้อ 2 โดยการชะเซลล์ที่ติดอยู่บนตัวกรอง ออกสู่ภาชนะเก็บเซลล์แล้วทำให้เซลล์แขวนลอยด้วยสารละลายตามที่กล่าวถึงในข้อถือสิทธิข้อ 2 ปริมาตร 1 มิลลิลิตร ------------

1. วิธีการเตรียมองค์ประกอบแขวนลอยเซลล์เพื่อการตรวจวัดความเป็นพิษของตัวอย่างด้วย เทคนิควิธีไดอิเล็กทรอโฟรีซีซ ขั้นตอนการเตรียมเริ่มต้นโดยการผสมเซลล์กับตัวอย่างที่ต้องการ วิเคราะห์ แล้วทำการบ่มของผสมดังกล่าวเพื่อการตอบสนองของเซลล์ต่อสารพิษที่มีในตัวอย่าง จาก นั้นทำการแยกเซลล์ออกจากของผสมในการบ่มเซลล์ ซึ่งจะได้เซลล์ที่พร้อมนำไปใช้ในการวิเคราะห์ ด้วยเทคนิควิธีไดอิเล็กทรอโฟรีซีซต่อไป