TH3287B - วิธีใช้เยื่อเพื่อการสังเคราะห์และแยกเพพไทด์ซึ่งเกี่ยวข้องกับเอนไซม์ - Google Patents

Abstract

การประดิษฐ์นี้เอาชนะปัญหาการตกตะกอนของสารเชิงซ้อนที่อยู่ระหว่างกลาง และ/หรือการเสื่อมฤทธิ์อย่างรวดเร็วของเอนไซม์ด้วยวิธีที่รู้จัก การประดิษฐ์นี้ให้วิธีใช้เยื่อสำหรับการสังเคราะห์เพพไทด์โดยใช้เอนไซม์ซึ่งทำสำเร็จโดยการเคลื่อนสมดุลเคมีในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาระหว่างอะมิโน แอซิดที่ทำปฏิกิริยาซึ่งประจุหรือแตกตัวเป็นไอออนและผลิตภัณฑ์เพพไทด์ซึ่งไม่มีประจุหรือไม่แตกตัวเป็นไอออน เมื่อมีโพรทิโอลิทิค เอนไซม์เช่นเทอร์โมไลน์ปนอยู่ สมดุลนั้นเคลื่อนไปโดยการแพร่ของผลิตภัณฑ์เพพไทด์ซึ่งไม่มีประจุผ่านเยื่อซึ่งไม่ยอมให้ไอออนผ่าน ซึ่งจะกำจัดเพพไทด์ที่ไม่มีประจุอย่างรวดเร็ว ซึ่งไม่สามารถแพร่กลับเข้าไปในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยานั้นอีกเพื่อว่าเพพไทด์ที่ไม่มีประจุจะได้รับการ "ดึง" ผ่านเยื่อนั้นอย่างมีประสิทธิภาพ การเปลี่ยนสปีซีซึ่งไม่มีประจุโดยใช้เอนไซม์ เอสเทอเรส เช่นอะมิโนแอซิเลส I นั้นได้เปิดเผยไว้สารเข้าทำปฏิกิริยาที่ซึมผ่านไปด้วยกันสามารถแยกออกจากสารผสมผลิตภัณฑ์และกลับคืนไปยังสารผสมที่เกิดปฏิกิริยานั้น เช่นเดียวกัน เยื่อซึ่งไอออนผ่านไม่ได้นั้นสามารถนำมาใช้แยกอิแนนซิโอเมอร์ของคาร์บอกซิลิค แอซิดที่เป็นราซิมิคซึ่งประกอบด้วย D,L -อะมิโน แอซิดได้ด้วย

Claims (4)

1.วิธีสังเคราะห์เพพไทด์โดยใช้เอนไซม์ ซึ่งประกอบด้วยขั้น การรวมตัว N-แอซิล-B-ซับสทิทิวเทด-L-แอสพาร์ทิค แอซิด ซึ่งมีหมู่ (สัญลักษณ์)-คาร์บอกซิเลทเข้ากับเฟนิลอาแลมีน แอลคิล เอสเทอร์ขนาดเล็กที่มีหมู่ (สัญลักษณ์)-แอมโมเนียม ในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำ ซึ่งประกอบด้วยเอนไซม์ที่ใช้ในการรวมตัวเพื่อให้เกิด N-แอซิล-L-แอสพาร์ทิล-(B-ซับสทิทิวเทด)-L-เฟนิลอาแลนีน แอลคิล เอสเทอร์ขนาดเล็ก) ซึ่งเป็นเพพไทด์ที่ไม่มีประจุ และ การขนส่งเพพไทด์ซึ่งไม่มีประจุจากสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำผ่านเยื่อซึ่งไม่ยอมให้ไอออนผ่านไปยังสารผสมผลิตภัณฑ์ 2. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งเอนไซม์ที่ใช้ในการรวมตัวคือโปรทีเอสซึ่งใช้สร้างเพพไทด์ที่มีฤทธิ์ในช่วงพีเอชประมาณ 4.0 ถึง 9.0 3.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 2 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการเปลี่ยนเพพไทด์ซึ่งไม่มีประจุในสารผสมผลิตภัณฑ์นั้นไปเป็นสปีซีซึ่งไม่สามารถแพร่กลับผ่านเยื่อนั้น 4.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 3 ซึ่งได้เปลี่ยนเพพไทด์ที่ไม่มีประจุนั้นไปเป็นสปีซีที่มีประจุโดยการทำให้แตกออกด้วยเอนไซม์เอสเซอเรส 5.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 4 ซึ่งเอนไซม์เอสเทอเรสนั้นมีฤทธิ์ในช่วงพีเอชประมาณ 6.0 ถึง 7.0 6.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 4 ซึ่งเอนไซม์เอสเทอเรสนั้นคัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบด้วยอะมิโนแอซิเลส I, (สูตร) -ไดโมทริพซินและซับทิลิซิน A 7.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 4 ซึ่งเอนไซม์ เอสเทอเรสนั้นคืออะมิโนแอซิเลส I และพีเอชของสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยานั้นคือประมาณ 7.0 8.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 3 ซึ่งเยื่อนั้นประกอบด้วยของเหลวอินทรีย์ซึ่งไม่ผสมเป็นเนื้อเดียวกันกับน้ำที่อิมโมบิไลซ์ด้วยการซึมตามรูเล็กในรูในแผ่นไมโครพอรัสของเหลวอินทรีย์นั้นคือตัวทำละลายสำหรับเพพไทด์ซึ่งไม่มีประจุ 9.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 8 นั้นซึ่งแผ่นไมโครทอรัลนั้นทำมาจากวัสดุที่คัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบด้วยโพลิเททราฟลออโรเอธิลีนและโพลิโพรพิลีนและตัวทำละลายซึ่งประกอบด้วยสารประกอบอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่คัดเลือกจากหมู่ที่ประกอบด้วย n-1-เดคานอล,n-เฮกซาเดคานอล,n-โดเดคานอล,N,N-ไดเอธิล-โดเดคาแนมีด,โดเดเคน,2-อุนเดคาโนนและสารผสมของสารเหล่านั้น 1 0. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 8 ซึ่งแผ่นไมโครพอรัสนั้นประกอบด้วยเส้นใยโพลิโพรพิลีนที่มีโพรงและตัวทำละลายนั้นประกอบด้วย N,N-ไดเอธิล-โดเดคาแนมีด และโดเดเคน 1 1. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 8 ซึ่งเยื่อนั้นคือเบนด์, ไทพ์ 2 ฮอลโลว์ ไฟเบอร์ ซีเลคทิฟ ไดแอลลิซิส เมมเบรน 1 2. วิธีตามข้อถือสิทธิข้อ 3 ซึ่งสารประกอบแรกคือ D,L-เฟนิลอาแลนีน เมธิลเฮเทอร์ และสารประกอบที่สองคือ N-แอซิล-E-ซับสทิทิวเทด-L-แอสพาร์ทิค แอซิดที่มีหมู่ (สูตรเคมี)-คาร์บอกซิเลท 1 3. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 12 ซึ่งหมู่ N-แอซิล คัดเลือกมาจากหมู่ซึ่งประกอบด้วย (สูตรเคมี)CH2OCO-,-CH=O และ (สูตรเคมี) CH2CO- และหมู่แทนที่ที่ตำแหน่ง B คัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบด้วย (สูตร)CH2O-, เทอร์ BuO-,CH3O-,NH2- 1 4. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 3 ซึ่งเอนไซม์ที่ใช้ในการรวมตัวนั้นได้ฮิมโมบิไลซ์ไว้ 1 5. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 14 ซึ่งเอนไซม์สำหรับการรวมตัวนั้นคือเทอร์โมไลซินและพีเอชของสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยานั้นคือประมาณ 7.0 1 6. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 14 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการปรับพีเอชของสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยานั้นใหม่ให้ได้พีเอชประมาณ 5.0 ก่อนการขนส่งเพพไทด์ที่ไม่มีประจุนั้นจากสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาผ่านเยื่อที่ไม่ยอมให้ไอออนผ่าน 1 7. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 3 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการแยก N-แอซิล-C-ซับสทิทิวเทด-L-แอสพาร์ค แอซิด ซึ่งซึมผ่านเยื่อที่ไม่ยอมให้ไอออนผ่านนั้นปนออกมาในสารผสมผลิตภัณฑ์นั้นด้วย 1 8. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 3 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการแยกเฟนิลอาแลมีน เอสเทอร์ขนาดเล็กซึ่งซึมผ่านเยื่อที่ไม่ยอมให้ไอออนผ่านขึ้นปนออกมาในสารผสมผลิตภัณฑ์นั้นด้วย 1 9. วิธีสังเคราะห์เพพไทด์โดยใช้เอนไซม์ ซึ่งประกอบด้วยขั้นของ การรวมตัว N-แอซิล-B-ซับสทิทิวเทด-L-แอสพาร์ทิค แอซิด ซึ่งมีหมู่ (สัญลักษณ์)-คาร์บอกซิเลทเข้ากับเฟนิลอาแลมีน แอลคิล เอสเทอร์ขนาดเล็กที่มีหมู่ (สัญลักษณ์)-แอมโมเนียม ในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำ ซึ่งประกอบด้วยเอนไซม์ที่ใช้ในการรวมตัวเพื่อให้เกิด N-แอซิล-L-แอสพาร์ทิล-(B-ซับสทิทิวเทด)-L-เฟนิลอาแลนีน แอลคิล เอสเทอร์ขนาดเล็ก) ซึ่งเป็นเพพไทด์ที่ไม่มีประจุ และ การขนส่งเพพไทด์ซึ่งไม่มีประจุจากสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำผ่านเยื่อซึ่งไม่ยอมให้ไอออนผ่านไปยังสารผสมผลิตภัณฑ์ การเปลี่ยนเพพไทด์ซึ่งไม่มีประจุในสารผสมผลิตภัณฑ์นั้นไปเป็นสปีซีซึ่งไม่สามารถแพร่กลับผ่านเยื่อนั้น และ การกำจัดสปีซีซึ่งไม่สามารถแพร่กลับย่านเยื่อนั้นจากสารผสมผลิตภัณฑ์นั้น 2 0. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 19 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการแยก N-แอซิล-B-ซับสทิทิวเทด-L-แอสพาร์คทิค แอซิด ซึ่งซึมผ่านเยื่อที่ไม่ยอมให้ไอออนผ่านนั้นปนออกมาในสารผสมผลิตภัณฑ์นั้นด้วย 2 1. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อ 20 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการแยกเฟนิลอาแลทีน แอลคิล เอสเทอร์ขนาดเล็ก ซึ่งซึมผ่านเยื่อที่ไม่ยอมให้ไอออนผ่านนั้นปนออกมาในสารผสมผลิตภัณฑ์นั้นด้วย 2 2. วิธีสังเคราะห์เพพไทด์โดยใช้เอนไซม์ซึ่งประกอบด้วยขั้นของ การรวมตัวของสารประกอบอะมิโน แอซิดชนิดแรกและที่สองโดยใช้เอนไซม์ในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนเริ่มต้นเพื่อให้เกิดสารประกอบซึ่งไม่มีประจุ การขนส่งสารประกอบซึ่งไม่มีประจุเข้าไปในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนที่สองผ่านเยื่อซึ่งจะไม่ขนส่งสารประกอบอะมิโนแอซิดนั้นปริมาณมาก ๆ การเปลี่ยนสารประกอบซึ่งไม่มีประจุที่ขนส่งไปแล้วให้อยู่ในรูปซึ่งไม่สามารถขนส่งกลับผ่านเยื่อนั้นไปยังสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาตอนเริ่มต้นนั้น, และ การกำจัดสารประกอบนั้นในรูปซึ่งไม่สามารถขนส่งกลับผ่านเยื่อนั้นไปยังสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาตอนเริ่มต้นนั้น 2 3. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 22 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการแยกสารประกอบอะมิโน แอซิดชนิดแรกซึ่งซึมผ่านเยื่อนั้นปนออกมากับสารประกอบซึ่งไม่มีประจุเข้าไปในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนที่สองออกจากสารผสมที่ ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนที่สองนั้น 2 4. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 22 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการแยกสารประกอบอะมิโน แอซิดชนิดที่สองซึ่งซึมผ่านเยื่อนั้นปนออกมากับสารประกอบซึ่งไม่มีประจุเข้าไปในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนที่สองออกจากสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนที่สองนั้น 2 5. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 23 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการย้อมกลับของสารประกอบอะมิโนชนิดที่หนึ่งซึ่งซึมผ่านเยื่อนั้นปนออกมากับสารประกอบที่ไม่มีประจุไปยังสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนเริ่มต้น 2 6. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 23 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการย้อนกลับของสารประกอบอะมิโน แอซิดชนิดที่สอง ซึ่งซึมผ่านเยื่อนั้นปนออกมากับสารประกอบที่ไม่มีประจุไปยังสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนเริ่มต้นนั้น 2 7. วิธีการแยกสารประกอบราซิมิคของคาร์บอกซิลิค แอซิด โดยใช้เอนไซม์ซึ่งประกอบด้วยขั้นของ การไฮโดรไลส์สารประกอบคาร์บอกซิลิค แอซิด เอสเทอร์ที่เป็นราซิมิคในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำซึ่งประกอบด้วยเอนไซม์สำหรับไฮโดรไลส์เพื่อให้เกิดสารประกอบอิแนนซิโอเมอร์ที่มีประจุและสารประกอบอิแนนซิโอเมอริค เอสเทอร์ที่ไม่ มีประจุในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำนั้น และ การขนส่งสารประกอบอิแนนซิโอเมอริค เอสเทอร์ที่ไม่มีประจุจากสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำนั้นผ่านเยื่อที่ไม่ยอมให้ไอออนผ่านไปยังสารผสมผลิตภัณฑ์นั้น 2 8. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 27 ซึ่ง สารประกอบคาร์บอกซิลิค แอซิด เอสเทอร์ที่เป็นราซิมิคนั้นคือสารประกอบ D,L-อะมิโน แอซิด เอสเทอร์ สารประกอบอิแนนซิโอเมอร์ที่มีประจุนั้นคือสารประกอบ L-อะมิโน แอซิด และ สารประกอบอิแนนซิโอเมอร์ที่ไม่มีประจุนั้นคือสารประกอบ D-อะมิโน แอซิดเอสเทอร์ 2 9.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 8 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการเปลี่ยนสารประกอบ D-อะมิโน แอซิด เอสเทอร์ที่ไม่มีประจุในสารผสมผลิตภัณฑ์นั้นไปเป็น สปีชีซึ่งไม่สามารถแพร่กลับผ่านเยื่อนั้น 3 0.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 29 ซึ่งขั้นของการเปลี่ยนคือ การปรับพีเอชของสารผสมผลิตภัณฑ์นั้นให้มีพีเอชประมาณ 2.0 3 1.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 29 ซึ่งเอนไซม์สำหรับไฮโดรไลส์ คัดเลือก 15 มาจากหมู่ซึ่งประกอบด้วยอะมิโนแอซิเลส I,(สูตร)-ไดโมทริพชินและซับทิลิลซิน A 3 2. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 29 ซึ่งเอนไซม์สำหรับไฮโดรไลส์นั้นได้อิมโมบิไลซ์ไว้ 3 3. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 29 ซึ่งเยื่อนั้นประกอบด้วยของเหลวอินทรีย์ซึ่งไม่ผสมเป็นเนื้อเดียวกันกับน้ำหี่อิมโมบิสไลซ์ไว้โดยการซึมตามรูเล็กในรูปในแผ่นไมโคร พอรัส ของเหลวอินทรีย์นั้นคือตัวทำละลายสำหรับเพพไทด์ที่ไม่ประจุ 3 4. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 33 ซึ่งแผ่นไมโครพอรัสนั้นทำจากวัสดุที่คัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบด้วยโพลิเททราฟลูออโรเอธิลีนและโพลิโพรพิลีนและตัวทำละลายนั้นประกอบด้วยสารประกอบอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่คัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบ ด้วย D-1-เดคานอล,n-เฮกซาเดคานอล,n-โดเดคานอล,N,N-ไดเอธิล-โดเดคาแนมีด,โดเดเดน,2-อุนเดคาโนน และสารผสมของสารเหล่านี้ 3 5. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 33 ซึ่งแผ่นไมโครพอรัสประกอบด้วยเส้นใยโพลิโพรพิลีนที่มีโพรงและตัวทำละลายนั้นประกอบด้วย N,N-ไดเอธิล-โดเดคาแนมีด และโดเดเคน 3 6. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 33 ซึ่งเยื่อนั้นคือเบนด์,ไทพ 2 ฮอลโลว์ไฟเบอร์ ซีเลคทิฟ ไดแอลิซิส เมมเบรน 3 7. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 29 ซึ่งสารประกอบ D,L-อะมิโน แอซิด เอสเทอร์ คือ D,L-เฟนิลอาแลนีน แอลคิล เอสเทอร์ขนาดเล็กที่มีหมู่ (สูตร)-แอมโมเนียม 3 8. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 37 ซึ่ง D,L-เฟนิลอาแลนีน แอลคิลเอสเทอร์ขนาดเล็กคือ D,L-เฟนิลอาแลนีน เมธิล เอสเทอร์ 3 9. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 29 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของ การรวมตัวของสารประกอบ L-อะมิโน แอซิดที่มีประจุนั้นกับสารประกอบอะมิโน แอซิดชนิดที่สองโดยใช้เอนไซม์ในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำ ตอนเริ่มต้นเพื่อให้ได้สารประกอบที่ไม่มีประจุ การขนส่งสารประกอบซึ่งไม่มีประจุเข้าในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนที่สองผ่านเยื่อซึ่งจะไม่ขนส่งสารประกอบอะมิโน แอซิดนั้นจำนวนมาก, และ การเปลี่ยนสารประกอบซึ่งไม่มีประจุขนส่งแล้วให้อยู่ในรูปซึ่งไม่สามารถขนส่งผ่านเยื่อนั้นไปยังสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาตอนเริ่มต้นนั้นได้อีก 4 0. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 39 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการแยกสารประกอบอะมิโน แอซิดซึ่งซึมผ่านเยื่อนั้นปนออกมาและเข้าไปในสารผสมที่ได้จากปฏิกริยาในน้ำตอนที่สองนั้น 4 1. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 1 ซึ่งต่อมาประกอบด้วยขั้นของการเปลี่ยนเพพไทด์ซึ่งไม่มีประจุในสารผสมผลิตภัณฑ์ไปเป็นสปีซีซึ่งไม่สามารถแพร่กลับผ่านเยื่อนั้น 4 2. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 41 ซึ่งเปลี่ยนเพพไทด์ที่ไม่มีประจุนั้นไปเป็นสปีซีที่มีประจุโดยทำให้แตกออกด้วยเอนไซม์ เอสเทอเรส 4 3. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 41 ซึ่งเอนไซม์ที่ใช้ในการรวมตัวนั้น คือ โปรทีเอสที่เป็นกรดหรือเป็นกลางซึ่งใช้สร้างเพพไทด์ที่มีฤทธิ์ในช่วงพีเอชประมาณ 4.0 ถึง 8.0 4 4. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 41 ซึ่งเอนไซม์ที่ใช้ในการรวมตัวนั้นคือโปรทีเอสซึ่งคัดเลือกมาจากหมู่ซึ่งประกอบด้วยเซรีน โปรทีเนส ไธออล โปรทีเนส, คาร์บอกซิล โปรทีเนสและเมทัลโลโปรทีเนส 4 5. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 41 ซึ่งเอนไซม์ที่ใช้ในการรวมตัวนั้นคัดเลือกมาจากหมู่ซึ่งประกอบด้วยไดโมทริพซิน,ทริพซิน,ซัลทิลิซิน BMP\',Achromobacter โปรทีเอส,แพเพน,เพพซิน เทอร์โมไลซิน และโทรลิซิน,และพีเอชของสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยานั้นอยู่ระหว่างประมาณ 4.0 ถึง 8.0 4 6.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 41 ซึ่งเอนไซม์ที่ใช้ในการรวมตัวนั้นคือเทอร์โมไลซินและพีเอชของสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยานั้นคือประมาณ 5.5 4 7.วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 45 ซึ่งเยื่อนั้นประกอบด้วยของเหลวอินทรีย์ซึ่งมีผสมเป็นเนื้อเดียวกันกับน้ำที่อิมโมบิไลซ์ไว้ด้วยการซึมตามรูเล็กในรูในแผ่นไมโครพอรัสของเหลวอินทรีย์นั้นคือตัวทำละลายสำหรับเพพอไทด์ซึ่งไม่มีประจุนั้น 4 8. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 47 ซึ่งแผ่นไมโครพอรัสทำมาจากวัสดุที่คัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบด้วยโพลิเททราฟลูออโรเอธิลีนและโพลิโพรพิลีนและตัวทำละลายนั้นประกอบด้วยสารประกอบอย่างน้อยหนึ่งชนิดซึ่งคัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบด้วย n-1-เดคานอล,n-เฮกซาเดคานอล,n-โดเดคานอลและสารผสมของสารเหล่านี้ 4 9. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 47 ซึ่งเยื่อนั้นคือเบนด์, ไทพ์ 1 ฮอลโลว์ ไฟเบอร์ ซีเลคทิฟ ไดแอลิซิส เมมเบรน 5 0. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 44 ซึ่งพีเอชของสารละลายในน้ำนั้นอยู่ระหว่างประมาณ 4.0 และ 6.0 5

1. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 45 ซึ่งพีเอชของสารละลายในน้ำนั้นอยู่ระหว่างพีเอชประมาณ 4.0 และ 6.0 5

2. วิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 46 ซึ่งสารประกอบแรกคือ D,L-เฟนิลอาแลนีน เมธิล เอสเทอร์, และสารประกอบชนิดที่สองนั้นคือ N-แอซิล-B-ซับสทิทิวเทด-L-แอสพาร์ทิด แอซิดที่มีหมู่ (สูตร)-คาร์บอกซิเลท 5

3. กรรมวิธีตามที่ระบุไว้ในข้อถือสิทธิข้อ 52 ซึ่งหมู่ N-แอซิล นั้นคัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบด้วย (สูตร)CH2OCO-,-CH=O และ (สูตร) CH2CO-1 และหมู่แทนที่ตำแหน่ง B นั้นคัดเลือกจากหมู่ซึ่งประกอบด้วย (สูตร) CH2O-,เทอร์ BuO-,CH30-,NH2- 5

4. วิธีสำหรับสังเคราะห์เพพไทด์โดยใช้เอนไซม์ซึ่งประกอบด้วยขั้นของ การรวมตัวของสารประกอบอะมิโน แอซิดชนิดแรกและชนิดที่สองในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนเริ่มต้นเพื่อให้เกิดสารประกอบซึ่งไม่มีประจุ การขนส่งสารประกอบซึ่งไม่มีประจุเข้าไปในสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในน้ำตอนที่สองผ่านเยื่อซึ่งจะไม่ขนส่งสารประกอบอะมิโน แอซิด จำนวนมาก และ การเปลี่ยนสารประกอบซึ่งไม่มีประจุที่ขนส่งมาแล้วให้อยู่ในรูปซึ่งไม่สามารถขนส่งผ่านเยื่อไปยังสารผสมที่ได้จากปฏิกิริยาในตอนเริ่มต้นได้อีก