TH17509Y - กรรมวิธีการสังเคราะห์ยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว - Google Patents

Abstract

------02/09/2563------(OCR) กรรมวิธีการสังเคราะห์ยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว ตามการประดิษฐ์นี้เป็นการสังเคราะห์และเพิ่มปริมาณของยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว โดยการต่อสายนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์ที่มีลำดับเบสตรงกับลำดับเบสของยีน โดยชิ้นแรกจะมีลำดับเบสตรงกับสายเซนส์ของยีน ชิ้นที่สองจะมีลำดับเบสต่อไปตรงกับสายแอนตี้เซนส์ของยีน ชิ้นที่สามจะมีลำดับเบสต่อไปตรงกับสายเซนส์ของยีน เช่นนี้สลับกันไปจนกว่าจะคลุมทั่วลำดับเบสทั้งความยาวของยีน นำมาผสมกับชิ้นนิวคลีโอไทด์สายเดี่ยวขนาดเล็กสองชิ้นในหลอดเดียวกันที่มีบัฟเฟอร์แมกนีเซียม และดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟต (deoxynucleotide triphosphates) สำหรับปฏิกิริยาพอลิเมอไรเซชันด้วยเอนไซม์แทคพอลิเมอเรส (Taq polymerase) ------------ ------11/06/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ กรรมวิธีการสังเคราะห์ยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว ตามการประดิษฐ์นี้เป็นการสังเคราะห์และเพิ่ม ปริมาณของยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว โดยการต่อสายนิวคลีโอใทด์สังเคราะห์ที่มีลำดับเบสตรงกับลำดับเบส ของยีน โดยชิ้นแรกจะมีลำดับเบสตรงกับสายเซนส์ของยีน ชิ้นที่สองจะมีลำดับเบสต่อไปตรงกับสายแอนตี้เซนส์ ของยีน ชิ้นที่สามจะมีลำดับเบสต่อไปตรงกับสายเซนส์ของยีน เช่นนี้สลับกับไปจนกว่าจะคลุมทั่วลำดับเบสทั้ง ความยาวของยีน นำมาผสมกับชิ้นนิวคลีโอไทด์สายเดี่ยวขนาดเล็กสองชิ้นในหลอดเดียวกันที่มีบัฟเฟอร์ แมกนีเซียม และดีออกซี่นิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟต (deoxynucleotide triphosphates) สำหรับปฏิกิริยา พอลีเมอไรเซชันด้วยเอนไซม์แทคพอลีเมอเรส (Taq polymerase) ------------ การสังเคราะห์ยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว เป็นเทคนิควิธีการสังเคราะหฺยีนขนาดเล็ก มีวิธีการดังนี้ (1) ใช้ชิ้นนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์ที่มีขนาดยาวขึ้น คือระหว่าง 80-99 เบส (mers) โดยชิ้นนิวคลีโอไทด์นั้นมี ลำดับเบสที่ตรงกับสายเซนส์ (sense strand) และสายแอนตี้เซนส์ (anti-sense strand) ของยีนที่ต้องการ สังเคราห็ในลักษณะสลับกันไปในจำนวนชิ้นรวมที่เป้นเลขคุ่ เช่น 4 หรือ 6 หรือ 8 หรือ 10 เป็นต้น มีชิ้นนิ วคลีโอไทด์ขนาดเล็กสองสาย ขนาดไม่เกิด 30เบส โดยสายหนึ่งมีส่วนของลำดีบเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับ เบสของสานเซนส์ตั้งแต่เบสแรกของยีนเป้นต้นไป ในลักษณะเดียวกับฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) ส่วนอีกสายหนึ่งมีส่วนลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับเบสของสายแอนตี้เวนส์ ในลักษณะเดียวกับรีเวิร์สไพร เมอร์ (reverse primer) ผสมนิวคลีโอไทด์ทั้งหมดลงในหลอดเดียวกันสำหรับสังเคราะห์ยีนด้วยเอนไซม์ Taq polymerase

Claims (1)

------02/09/2563------(OCR) 1. กรรมวิธีการสังเคราะห์ยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว มีขั้นตอนดังนี้ ก) องค์ประกอบที่หนึ่ง ชิ้นนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์สายเดี่ยว (synthetic oligonucleotides) ที่มีขนาดยาวระหว่าง 80-99 เบส (mers) ซึ่งมีลำดับเบสที่ตรงกับสายเซนส์ (sense strand) และสายแอนตี้เซนส์(anti-sense strand) ของยีนที่ต้องการสังเคราะห์ในลักษณะสลับกันไป โดยชิ้นแรกมีลำดับตรงกับสายเซนส์ ชิ้นที่สองมีลำดับตรงกับสายแอนตี้เซนส์ ชิ้นที่สามมีลำดับตรงกับสายเซนส์ เช่นนี้จนครอบคลุมตลอดทั้งความยาวของยีน และชิ้นที่อยู่ต่อกันจะต้องออกแบบให้ปลายด้านที่ต่อกันนี้มีเบสที่เป็นคู่สม (complementary) ที่ไฮบริไดซ์กันได้ เรียกบริเวณนี้ว่าบริเวณที่คาบเกี่ยวกัน (overlapping region) โดยบริเวณนี้จะยาว 20 - 30 เบส ในการออกแบบต้องทำให้จำนวนชิ้นนิวคลีโอไทด์ดังกล่าวทั้งหมดรวมกันแล้วเป็นเลขคู่ คือ 4 หรือ 6 หรือ 8 หรือ 10 ข) องค์ประกอบที่สอง คือ ชิ้นนิวคลีโอไทด์สายเดี่ยวขนาดเล็กสองชิ้น ขนาดแต่ละชิ้นยาว 20 - 30 เบสโดยชิ้นที่หนึ่งมีส่วนของลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับเบสของชิ้นนิวคลีโอไทด์ชิ้นแรกในองค์ประกอบที่หนึ่งตั้งแต่เบสแรกของยีน ชิ้นนิวคลีโอไทด์ขนาดเล็กชิ้นที่หนึ่งนี้มีลักษณะเดียวกับการออกแบบฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์(forward primer) ในปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR, Polymerase Chain Reaction) ส่วนชิ้นนิวคลีโอไทด์ขนาดเล็กชิ้นที่สองจะออกแบบให้มีส่วนลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับเบสของชิ้นนิวคลีโอไทด์ชิ้นสุดท้าย(ซึ่งเป็นสายแอนตี้เซนส์) ในองค์ประกอบที่หนึ่ง การออกแบบทำในลักษณะเดียวกันกับการออกแบบรีเวิร์สไพรเมอร์ (reverse primer) ที่ปลาย 5' ของชิ้นนิวคลีโอไทด์ขนาดเล็กทั้งสองชิ้นนี้อาจมีลำดับเบสเพิ่มเติมที่ออกแบบเพื่อประโยชน์ในการนำยีนไปใช้ในขั้นต่อไป ค) ขั้นตอนการสังเคราะห์ ผสมชิ้นของสายนิวคลีโอไทด์ทั้งหมดจากองค์ประกอบที่หนึ่งและสองลงในหลอดเดียวกัน ที่มีบัฟเฟอร์ แมกนีเซียม และดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟต (deoxynucleotidetriphosphates) สำหรับปฏิกิริยาพอลิเมอไรเซชันด้วยเอนไซม์แทคพอลิเมอเรส (Taq polymerase) ------------ ------11/06/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า ข้อถือสิทธิ 1. กรรมวิธีการสังเคราะห์ยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว มีขั้นตอนดังนี้ ก) องค์ประกอบที่หนึ่ง ชิ้นนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์สายเดี่ยว (synthetic oligonucleotides) ที่มีขนาด ยาวระหว่าง 80-99 เบส (mers) ซึ่งมีลำดับเบสที่ตรงกับสายเซนส์ (sense strand) และสายแอนตี้เซนส์ (anti-sense strand) ของยีนที่ต้องการสังเคราะห์ในลักษณะสลับกันไป โดยขั้นแรกมีลำดับตรงกับสายเซนส์ ขั้นที่ สองมีลำดับตรงกับสายแอนตี้เซนส์ ขั้นที่สามมีลำดับตรงกับสายเซนส์ เซ่นนี้จนครอบคลุมตลอดทั้งความยาวของ ยีน และชิ้นที่อยู่ต่อกันจะต้องออกแบบให้ปลายด้านที่ต่อกันนี้มีเบสที่เป็นคู่สม (complementary) ที่ไฮบริไดซ์กัน ไต้ เรียกบริเวณนี้ว่าบริเวณที่คาบเกี่ยวกัน (overlapping region) โดยบริเวณนี้จะยาว 20 - 30 เบส ในการ ออกแบบต้องทำให้จำนวนขั้นนิวคลีโอไทด์ดังกล่าวทั้งหมดรวมกันแล้วเป็นเลขคู่ เช่น 4 หรือ 6 หรือ 8 หรือ 10 ข) องค์ประกอบที่สอง คือ ชิ้นนิวคลีโอไทค์สายเดี่ยวขนาดเล็กสองชิ้น ขนาดแต่ละขั้นยาว 20 - 30 เบส โดยชิ้นที่หนึ่งมีส่วนของลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับเบสของชิ้นนิวคลีโอไทด์ชิ้นแรกในองค์ประกอบที่หนึ่ง ตั้งแต่เบสแรกของยีน ชิ้นนิวคลีโอไทด์ขนาดเล็กชิ้นที่หนึ่งนี้มีลักษณะเดียวกับการออกแบบฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) ในปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอร์เรส (PCR, Polymerase Chain Reaction) ส่วนชิ้นนิวคลีโอใทค์ ขนาดเล็กชิ้นที่สองจะออกแบบให้มีส่วนลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับเบสของชิ้น นิวคลีโอไทด์ชิ้นสุดท้าย (ซึ่งเป็นสายแอนตี้เซนส์) ในองค์ประกอบที่หนึ่ง การออกแบบทำในลักษณะเดียวกันกับการออกแบบรีเวิร์สไพร เมอร์ (reverse primer) ที่ปลาย 5' ของชิ้นนิวคลีโอไทค์ขนาดเล็กทั้งสองชิ้นนี้อาจมีลำดับเบสเพิ่มเติมที่ออกแบบ เพื่อประโยชน์ในการนำยีนไปใช้ในขั้นต่อโป ค) ขั้นตอนการสังเคราะห์ ผสมชิ้นของสายนิวคลีโอไทด์ทั้งหมดจากองค์ประกอบที่หนึ่งและสองลงใน หลอดเดียวกัน ที่มีบัฟเฟอร์ แมกนีเซียม และดีออกซี่นิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟต (deoxynucleotide triphosphates) สำหรับปฏิกิริยาพอลีเมอไรเซชันด้วยเอนไซม์แทคพอลีเมอเรส (Taq polymerase) ------------ แก้ไขใหม่ 15/5/2560 1.การสังเคราะห์ยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว มีวิธีการดังนี้ ก) องค์ประกอบที่หนึ่ง ชิ้นนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์สายเดี่ยว (synthetic oligonucleotides) ที่มีขนาด ยาวระหว่าง 80-99 เบส (mers) ซึ่งมีลำดับเบสที่ตรงกับสายเซนส์ (sense strand) และสายแอนตี้เซนส์ (anti-sense strand) ของยีนที่ต้องการสังเคราะห์ในลักษณะสลับกับไป โดยชิ้นแรกมีลำดับตรงกับสายเซนส์ ชิ้นที่ สองมีลำดับตรงกับสายแอนตี้เซนส์ ชิ้นที่สามมีลำดับตรงกับสายเซนส์ เช่นนี้จนครอบคลุมตลอดทั้งความยาวของ ยีน และชิ้นที่อยู่ต่อกันจะต้องออกแบบให้ปลายด้านที่ต่อกันนี้มีเบสที่เป็นคู่สม (complementary) ที่ไฮบริไดซ์กัน ได้ เรียกบริเวณนี้ว่าบริเวณที่คาบเกี่ยวกัน (overlapping region) โดยบริเวณนี้จะยาว 20 - 30 เบส ในการ ออกแบบต้องทำให้จำนวนชิ้นนิวคลีโอไทด์ดังกล่าวทั้งหมดรวมกันแล้วเป็นเลขคู่ เช่น 4 หรือ 6 หรือ 8 หรือ 10 เป็นต้น ข) องค์ประกอบที่สอง ชิ้นนิวคลีโอไทด์สายเดี่ยวขนาดเล็กสองชิ้น แต่ละชิ้นมีขนาด 20 - 30 เบส โดยสาย หนึ่งมีส่วนลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับเบสของสายเซนส์ตั้งแต่เบสแรกของยีนเป็นต้นไป ในลักษณะ เดียวกับฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) ส่วนอีกสายหนึ่งมีส่วนลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับเบสของ สายแอนตี้เซนส์ ในลักษณะเดียวกับรีเวิร์สไพรเมอร์ (reverse primer) ที่ปลาย 5' ของทั้งสองสายอาจมีลำดับเบส ที่ออกแบบเพื่อประโยนช์ในการนำยีนไปใช้ในขั้นต่อไป ค) ขั้นตอนการสังเคราะห์ ผสมชิ้นของสารนิวคลีโอไทด์ทั้งหมดจากองค์ประกอบที่หนึ่งและสองลงใน หลอดเดียวกัน ที่มีบัฟเฟอร์ แมกนีเซียม และดีออกซี่นิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟต (deoxynucleotide triphosphates) สำหรับปฏิกิริยาพอลีเมอไรเซชันด้วยเอนไซม์แทคพอลีเมอเรส (Taq polymerase) (แก้ไขเดิม)

1. การสังเคราะห์ยีนขนาดเล็กในขั้นตอนเดียว มีวิธีการดังนี้ ก) ใช้ชิ้นนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์ (synthetic oligonucleotides) ที่มีขนาดยาวขึ้น คือระหว่าง 80-99 เบส (mers) วึ่งมีลำดับเบสที่ตรงกับสายเซนส์ (sense strand) และสายแอนตี้เซนส์ (anti-sense strand) ของยีน ที่ต้องการสังเคราะห์ในลักษณะสลับกันไป โดยชิ้นแรกมีลำดับตรงกับสายเซนส์ ชิ้นที่สองมีลำดับตรงกับสารแอนตี้ เซนส์ ชิ้นที่สามมีลำดับตรงกับสายเซนส์ เช่นนี้จนครอบคลุมตลอดทั้งความยาวของยีน และชิ้นที่อยุ่ต่อกันจะต้อง ออกแบบให้ปลายด้านที่ต่อกันมีเบสที่จับกันได้ (anneal) เรียกว่าบริเวณที่คาบเกี่ยวกัน (overlapping region) โดยบริเวณนี้จะยาว 20 - 30 เบส ในการออกแบบต้องทำให้จำนวนชิ้นนิวคลีโอไทด์ดังกล่าวรวมกันแล้วเป็นเลขคู่ เช่น 4 หรือ 6 หรือ 8 หรือ 10 เป็นต้น ข) มีชิ้นนิวคลีโอไทด์ขนาดเล็กสองสาย ขนาดไม่เกิด 30เบส โดยสายหนึ่งมีส่วนของลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงกับลำดับเบสของสายเซนส์ตั้งแต่เบสแรกของยีนเป็นต้นไป ในลักษณะเดียวกับฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) ส่วนอีกสายหนึ่งมีส่วนลำดับเบสที่ปลาย 3' ตรงลำดับเบสของสายแอนตี้เซนส์ ในลักษณะเดียวกับรีเวิร์ สไพรเมอร์ (reverse primer) ที่ปลาย 5' ของทั้งสองสายอาจมีลำดับเบสอื่นๆที่ออกแบบเพื่อประโยชน์การนำ ยีนไปใช้ในขั้นต่อไป ค) ผสมชิ้นของสายนิวคลีโอไทด์ทั้งหมดทีเดียวในหลอดเดียวกัน ที่มีบัฟเฟอร์ แมกนีเซียม และดีออกซีนิว คลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟต (deoxynueotide triphosphates) สำหรับปฎิกิริยาดพลีเมอไรเวซันด้วยเอนไซม์แท คโพลีเมอเรส (Taq polymerase)