TH13934U - ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (Dirofilaria immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ด ไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) - Google Patents

Abstract

แก้ไข 24/8/2559 ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (Dirofilaria immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ด ไอโซเธอร์มอล แอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) แสดงให้เห็นถึงการประดิษฐ์ โดยย่อ ดังนี้ 1. เป็นชุดตรวจอย่างง่าย สะดวก และรวดเร็ว ทราบผลในเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง 30 นาที สามารถนำไปใช้ ตรวจภาคสนาม (point-of-care) ได้ 2. มีความจำเพาะ (specificity) สูง 3. มีความแม่นยำสูงสามารถตรวจพบได้ในระดับปริมาณต่ำสุด (limit of detection) ที่ปริมาณดีเอ็นเอ ระดับประมาณพิโคกรัม (pictogram, 10-9 ) ถึง เฟมโตกรัม (femtogram, 10-12 ) 4. ใช้สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ---------------------------------------------------- ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (Dirofilaria immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูปไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothrmal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) แสดงให้เห็นถึงการประดิษฐ์โดยย่อ ดังนี้ 1. เป็นชุดตรวจอย่างง่าย สะดวก และรวดเร็ว ทราบผลในเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง 30 นาที สามารถ นำไปใช้ตรวจภาคสนาม (point-of-care) ได้ 2. มีความจำเพราะ (specificity) สูง 3. มีความแม่นยำสูงสามารถตรวจพบได้ในระดับปริมาณต่ำสุด (limit of detdction) ที่ปริมาณดีเอ็นเอ ระดับประมาณนาโนกรัม (nanogram, 109) ถึงเฟมโตกรัม (femtogram, 10-15) 4. ใช้สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis)

Claims (7)

แก้ไข 30 มิ.ย. 2560 1. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (Dirofilaria immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ด ไอโซเธอร์มอล แอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ถึง 6 ตำแหน่ง และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ดังนี้ ไพรเมอร์ ดีไอ-เอฟ3 (Di -F3) ลำดับเบส (5’ -3’) TGGTAATTGGATGTTGCCT ไพรเมอร์ ดีไอ-บี3 (Di -B3) ลำดับเบส (5’ -3’) ATCCAAAGATAACTCAGGCT ไพรเมอร์ ดีไอ-เอฟไอพี (Di -FIP) ลำดับเบส (5’ -3’) TCAACAACGCAACAAAAGTAATCCATTTTCCCTGAAATGGCTTTTCC ไพรเมอร์ ดีไอ-บีไอพี (Di -BIP) ลำดับเบส (5’ -3’) TCAATCTTTTTTTATTGGGGGGGGTTTTCTCTACACTCAAAGGAGGAT ตัวตรวจจับ ดีไอ-โพรบ (Di-probe) ลำดับเบส (5’ -3’) AAGCATTAACACGAGG 2. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ด ไอโซเธอร์มอล แอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากปฏิกิริยา แลมป์ (LAMP product) มีลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 60-65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 45-60 นาที แล้วตรวจผลผลิตดีเอ็นเอเป้าหมายโดยเทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วย อนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) 3. ชุดไพรเมอร์ (primer) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ตามข้อถือสิทธิ 1 ในที่ซึ่งตัวตรวจจับสำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) มีกรรมวิธี การออกแบบตัวตรวจจับ (DNA probe) ในการตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคการใช้ ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) มีลักษณะเฉพาะคือ ตัว ตรวจจับติดฉลากไทออล (thiol) ที่ปลายด้าน 5’ ของสายดีเอ็นเอสั้นๆ (oligonucleotide) เพื่อการตรวจผลผลิต จากแลมป์ (LAMP product) มีลำดับเบสดังนี้ Thiol-5’ – AAGCATTAACACGAGG-3’ 4. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 ประกอบด้วยส่วนประกอบหลักสำหรับใช้ใน ปฏิกิริยาดังนี้ ไพรเมอร์คู่ใน (inner primers) ดีไอ-เอฟไอพี (Di -FIP) และ ดีไอ-บีไอพี (Di-BIP) อย่างละ 0.5- 3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ไพรเมอร์คู่นอก (outer primers) ดีไอ-เอฟ3 (Di-F3) และ ดีไอ-บี3 (Di -B3) อย่างละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟส (Deoxynucleotide triphosphate, dNTPs) 0.5- 3 มิลลิโมลาร์ (mM) ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.1-3 โมลาร์ (M), สารแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSO4) 2-6 มิลลิโมลาร์ (mM), เอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (Bst DNA polymerase) 1 ยูนิต (unit, U) และ บัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (supplied buffer) 1 เท่า (1 X) 5. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะ คือ ไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR) 6. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 สำหรับการตรวจวินิจฉัยหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) แก้ไข 24/8/2559

1. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (Dirofilaria immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ด ไอโซเธอร์มอล แอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ถึง 6 ตำแหน่ง และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจ หนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ดังนี้ ไพรเมอร์ ดีไอ-เอฟ3 (Di -F3) ลำดับเบส (5’ -3’) TGGTAATTGATGTGCCT ไพรเมอร์ ดีไอ-บี3 (Di -B3) ลำดับเบส (5’ -3’) ATCCAAAGATAACTCAGGCT ไพรเมอร์ ดีไอ-เอฟไอพี (Di -FIP) ลำดับเบส (5’ -3’) TCAACAACGCAACAAAAGTAATCCATTTTCCCTGAAATGGCTTTTCC ไพรเมอร์ ดีไอ-บีไอพี (Di -BIP) ลำดับเบส (5’ -3’) TCAATCTTTTTTTATTGGGGGGTTTTCTCTACACTCAAAGGAGGAT ตัวตรวจจับ ดีไอ-โพรบ (Di-probe) ลำดับเบส (5’ -3’) AAGCATTAACACGAGG

2. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ด ไอโซเธอร์มอล แอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากปฏิกิริยา แลมป์ (LAMP) มีลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 60-65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 45-60 นาที แล้วตรวจผลผลิตดีเอ็นเอเป้าหมายโดยเทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วย อนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor)

3. ชุดไพรเมอร์ (primer) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ตามข้อถือสิทธิ 1 ในที่ซึ่งตัวตรวจจับสำเร็จรูปสำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) มี กรรมวิธีการออกแบบตัวตรวจจับ (DNA probe) ในการตรวจเชื้อหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วย เทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) มีลักษณะเฉพาะ คือ ตัวตรวจจับติดฉลากไทออล (thiol) ที่ปลายด้าน 5’ ของสายดีเอ็นเอสั้นๆ (oligonucleotide) เพื่อการตรวจ ผลผลิตจากแลมป์ (LAMP) มีลำดับเบสดังนี้ Thiol -5’ – AAGCATTAACACGAGG-3’

4. . ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 ประกอบด้วยส่วนประกอบหลักสำหรับใช้ใน ปฏิกิริยาดังนี้ ไพรเมอร์คู่ใน (inner primers) ดีไอ-เอฟไอพี (Di -FIP) และ ดีไอ-บีไอพี (Di -BIP) อย่างละ 0.5- 3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ไพรเมอร์คู่นอก (outer primers) ดีไอ-เอฟ3 (Di -F3) และ ดีไอ-บี3 (Di -B3) อย่างละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟส (Deoxynucleotide triphodphate, dNTPs) 0.5- 3 มิลลิโมลาร์ (mM) ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.1-3 โมลาร์ (M), สารแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSO4) 2-6 มิลลิโมลาร์ (mM), เอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (Bst DNApolymerase) 1 ยูนิต (unit, U) และ บัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (supplied buffer)1เท่า (1 X)

5. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ ไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR)

6. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 สำหรับการตรวจวินิจฉัยหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ในตัวอย่างเลือดสุนัข ------------------------------------------------------ 1. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (Dirofilaria immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูปไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothrmal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของหนอนพาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ถึง 6 ตำแหน่ง และตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ดังนี้ ไพรเมอร์ ดีไอ-เอฟ3 (Di-F3) ลำดับเบส (5'-3') TGGTAATTGGATGTTGCCT ไพรเทอร์ ดีไอ-บี3 (Di-B3) ลำดับเบส (5'-3') ATCCAAAGATAACTCAGGCT ไพรเมอร์ ดีไอ-เอฟไอพี (Di-FIP) ลำดับเบส (5'-3') TCAACAACGCAACAAAAGTAATCCATTTTCCCTGAAATGGCTTTTCC ไพรเมอร์ ดีไอ-บีไอพี (Di-BIP) ลำดับเบส (5'-3') TCAATCTTTTTTTATTGGGGGGGGTTTTCTCTACACTCAAAGGAGGAT ตัวตรวจจับ ดีไอ-โพรบ (Di-probe) ลำดับเบส (5'-3') AAGCATTAACACGAGG 2. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข(D. immitis) ด้วยปฏิกิริยาลูปไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothrmal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Goldnanoprobe DNA biosensor)ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP product) มีลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 60-65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 45-60 นาที แล้วตรวจผลผลิตดีเอ็นเอเป้าหมายโดยเทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) 3. ชุดไพรเมอร์ (primer) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ในที่ซึ่งตัวตรวจจับสำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) มี กรรมวิธีการออกแบบตัวตรวจจับ (DNA probe) ในการตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วย เทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) มีลักษณะเฉพาะ คือ ตัวตรวจจับติดฉลากไทออล (thiol) ที่ปลายด้วย 5' ของสายดีเอ็นเอสั้นๆ (oilgonucleotide) เพื่อตรวจ ผลผลิตจากแลมป์ (LAMP product) มีลำดับเบสดังนี้ Thiol-5'-AAGCATTAACACGAGG-3' 4. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 ประกอบด้วยส่วนประกอบหลักสำหรับใช้ใน ปฏิกิริยาดังนี้ ไพรเมอร์คู่ใน (inner primers) ดีไอ-เอฟไอพี (Di-FIP) และ ดีไอ-บีไอพี (Di-BIP) อย่างละ 0.5- 3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ไพรเมอร์คู่นอก (outer primers) ดีไอ-เอฟ3 (Di-F3) และ ดีไอ-บี3 (Di-B3) อย่างละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟต (Deoxynucleotide triphate, dNTPs) 0.5- 3 มิลลิโมลาร์ (mM)ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.1-3 โมลาร์ (M), สารแมกนีเซียมซัลเฟส (MgSO4) 2-6 มิลลิโมลาร์ (mM),เอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (Bst DNA polymerase) 1 ยูนิต (unit, U) และ บัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (supplied buffer) 1 เท่า (1 X) 5. ไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis)ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ ไม่ใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR)

7. ไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis)ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 สำหรับการตรวจวินิจฉัยหนอนพยาธิหัวใจสุนัข (D. immitis) ในตัวอย่างเลือดสุนัข