TH13928Y - ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (Ehrlichia canis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น(Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) - Google Patents

Abstract

------20/11/2560------(OCR) หน้าที่ 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ ชุดไพรเมอร์(primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (Ehrlichia canis) ด้วยปฎิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชัน (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) แสดงให้เห็นถึงการประดิษฐ์โดยย่อ ดังนี้ 1. เป็นชุดตรวจอย่างง่าย สะดวก และรวดเร็ว ทราบผลในเวลา 1 ชั่วโมง 30 นาที สามารถนำไปใช้ ตรวจภาคสนาม (point-of-care) ได้ 2. มีความจำเพาะ (specificity) สูง 3. มีความแม่นยำสูงสามารถตรวจพบได้ในระดับปริมาณต่ำสุด (limit of detection) ที่ปริมาณดีเอ็นเอ ระดับ พิโคกรัม (picogram, 10'12) ถึง เฟมโตกรัม (femtogram, 10-15) 4. ใช้สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ------------ แก้ไข 11/04/2560 (04/04/2560) ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยปฎิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) แสดงให้เห็นถึงการประดิษฐ์โดยย่อ ดังนี้ 1. เป็นชุดตรวจอย่างง่าย สะดวก และรวดเร็ว ทราบผลในเวลา 1 ชั่วโมง 30 นาที สามารถนำไปใช้ ตรวจภาคสนาม (point-of-care) ได้ 2. มีความจำเพาะ (specificity) สูง 3. มีความแม่นยำสูงสามารถตรวจพบได้ในระดับปริมาณต่ำสุด (limit of detection) ที่ปริมาณดีเอ็นเอ ระดับ พิโคกรัม (picogram, 10-12) ถึง เฟมโตกรัม (femtogram, 10-15) 4. ใช้สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) -------------------------------------------------------------------------- แก้ไข 24/8/2559 ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) แสดงให้เห็นถึงการประดิษฐ์โดยย่อ ดังนี้ 1. เป็นชุดตรวจอย่างง่าย สะดวก และรวดเร็ว ทราบผลในเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง 30 นาที สามารถนำไปใช้ ตรวจภาคสนาม (point-of-care) ได้ 2. มีความจำเพาะ (specificity) สูง 3. มีความแม่นยำสูงสามารถตรวจพบได้ในระดับปริมาณต่ำสุด (limit of detection) ที่ปริมาณดีเอ็นเอ ระดับ พิโคกรัม (pictogram, 10-12 ) ถึง เฟมโตกรัม (femtogram, 10-15 ) 4. ใช้สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ------------------------------------------------------ แก้ไขบทสรุปการประดิษฐ์ 24/03/2559 ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยปฏิกิริยาลูปไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟอเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) แสดงให้เห็นถึงการประดิษฐ์โดยย่อ ดังนี้ 1. เป็นชุดตรวจอย่างง่าย สะดวก และรวดเร็ว ทราบผลในเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง 30 นาที สามารถ นำไปใช้ตรวจภาคสนาม (point-of-care) ได้ 2. มีความจำเพาะ (specificity) สูง 3. มีความแม่นยำสูงสามารถตรวจพบได้ในระดับปริมาณต่ำสุด (limit of detection) ที่ปริมาณดีเอ็นเอ ระดับประมาณพิโคกรัม (pictogram, 10-12) ถึง เฟมโตกรัม (femtogram, 10-15) 4. ใช้สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ------------------------------------------------- คำขอใหม่ปรับปรุง 29/08/2559 ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับสำเร็จรูป (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อ Ehrlichia canis ด้วยปฏิกิริยา Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) ผนวกกับการตรวจวัดด้วยวิธี Gold nano- DNA complex มีบทสรุปดังนี้ 1. เป็นชุดตรวจอย่างง่าย สะดวก และรวดเร็ว ทราบผลในเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง 30 นาที สามารถ นำไปใช้ตรวจภาคสนาม (point-of-care) ได้ 2. มีความจำเพาะ (specificity) สูง 3. มีความแม่นยำสูงสามารถตรวจพบได้ในระดับปริมาณต่ำสุด (limit of detection) ที่ปริมาณดีเอ็นเอ ระดับประมาณ พิโคกรัม (pictogram, 10-12) ถึง เฟมโตกรัม (femtogram, 10-15) 4. ใช้สำหรับตรวจเชื้อ E. canis

Claims (7)

------20/11/2560------(OCR) หน้าที่ 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิ 1. ชุดไพรเบอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (Ehrlichiacanis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเตดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชัน (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 เส้น ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ถึง 6 ตำแหน่ง และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (Ehrlichia canis) ดังนี้ ไพรเมอร์ อีแคนิส-เอฟ3อี (Ecanis-F3E) ลำดับเบส (5’-3’) TGCTGCATGGTTGTCGTC ไพรเมอร์อีแคนิส-บี3อี (Ecanis-B3E) ลำดับเบส (5’-3’) TAAACCTTGCGGTCTCGC ไพรเมอร์ อีแคนิส-เอฟไอพีอี (Ecanis-FIPE) ลำดับเบส (5’-3’) TGCCCAGCATTACCTGTTGGTAGCTCGTGTCGTGAGATGT ไพรเมอร์ อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis-BIPE) ลำดับเบส (5’-3’) AACTGGAGGAAGGTGGGGATGATTGTAGCACGTGTGTAGCC ตัวตรวจจับ อีแคนิส-โพรบ (Ecanis-probe) ลำดับเบส (5’-3’) Thiol -TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA 2. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) ลำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิคชัน (Loop-mediated isothennal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Goldnanoprobe DNA biosensor) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) มี ลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 60-70 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 20-50 นาที แล้ว ตรวจผลผลิตดีเอีนเอเป้าหมายโดยเทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) 3. ชุดไพรเมอร์ (primer) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (Ehrlichiacanis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ตามข้อถือสิทธิ 1 ในที่ซึ่งตัวตรวจจับสำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (Ehrlichia canis) มี กรรมวิธีการออกแบบตัวตรวจจับ (DNA probe) ในการตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (Ehrlichiacams) ด้วย หน้าที่ 2 ของจำนวน 2 หน้า เทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) มีลักษณะเฉพาะ คือ ตัวตรวจจับติดฉลากไทออล (thiol) ที่ปลายด้าน 5’ ของสายดีเอ็นเอสั้นๆ (oligonucleotide) เพื่อการตรวจ ผลผลิตจากแลมป์ (LAMP) มีลำดับเบสดังนี้ Thol-5’- TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA -3’ 4. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) ลำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. cams) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 ประกอบด้วยส่วนประกอบหลักสำหรับใช้ในปฏิกิริยาดังนี้ ไพรเมอร์คู่ใน (inner primers) อีแคนิส-เอฟไอพีอี (Ecanis-FIPE) และ อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis-BIPE) อย่าง ละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ (pM), ไพรเมอร์คู่นอก (outer primers) อีแคนิส-เอฟ3อี (Ecanis-F3E) และ อีแคนิส- บี3อี (Ecanis-B3E) อย่างละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์(pM), ดีออกซีนิวคลีโอไทด์ไตรฟอสเฟต (Deoxynucleotide triphosphate, dNTPs) 0.5-3 มิลลิโมลาร์ (mM) ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.1-3 โมลาร์ (M), สาร แมกนีเซียมซัลเฟส (MgS04) 2-6มิลลิโมลาร์ (mM), เอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (Bts/DNA polymerase) 1 ยูนิต (unit, U) และบัฟเฟอร์ลำหรับเอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (supplied buffer) 1 X 5. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNAprobe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส {Ehrlichia cams) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะ คือ ไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR) 6. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNAprobe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส {Ehrlichiacanis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 สำหรับการตรวจวินิจฉัยเชื้อเออร์ลิเชีย แค นิส {E. cams) ในตัวอย่างเลือดสุนัข ------------ แก้ไข 11/04/2560 (04/04/2560) 1. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 เส้น ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ถึง 6 ตำแหน่ง และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ดังนี้ ไพรเมอร์ อีแคนิส-เอฟ3อี (Ecanis-F3E) ลำดับเบส (5’-3’) TGCTGCATGGTTGTCGTC ไพรเมอร์ อีแคนิส-บี3อี (Ecanis-B3E) ลำดับเบส (5’-3’) TAAACCTTGCGGTCTCGC ไพรเมอร์ อีแคนิส-เอฟไอพีอี (Ecanis-FIPE) ลำดับเบส (5’-3’) TGCCCAGCATTACCTGTTGGTAGCTCGTGTCGTGAGATGT ไพรเมอร์ อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis-BIPE) ลำดับเบส (5’-3’) AACTGGAGGAAGGTGGGGATGATTGTAGCACGTGTGTAGCC ตัวตรวจจับ อีแคนิส-โพรบ (Ecanis-probe) ลำดับเบส (5’-3’) SH-C6 -TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA 2. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) มี ลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 60-70 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 20-50 นาที แล้ว ตรวจผลผลิตดีเอ็นเอเป้าหมายโดยเทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) 3. ชุดไพรเมอร์ (primer) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ตามข้อถือสิทธิ 1 ในที่ซึ่งตัวตรวจจับสำเร็จรูปสำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) มีกรรมวิธีการ ออกแบบตัวตรวจจับ (DNA probe) ในการตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคการใช้ตัว ตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) มีลักษณะเฉพาะคือ ตัวตรวจจับ ติดฉลากไทออล (thiol) ที่ปลายด้าน 5’ของสายดีเอ็นเอสั้นๆ (oligonucleotide) เพื่อการตรวจผลผลิตจาก แลมป์ (LAMP) มีลำดับเบสดังนี้ SH-C6-5’- TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA -3’ 4. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 ประกอบด้วยส่วนประกอบหลักสำหรับใช้ในปฏิกิริยาดังนี้ ไพรเมอร์คู่ใน (inner primers) อีแคนิส-เอฟไอพีอี (Ecanis-FIPE) และ อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis-BIPE) อย่าง ละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ไพรเมอร์คู่นอก (outer primers) อีแคนิส-เอฟ3อี (Ecanis-F3E) และ อีแคนิส- บี3อี (Ecanis-B3E) อย่างละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ดีออกซีนิวคลีโอไทด์ไตรฟอสเฟต (Deoxynucleotide triphosphate, dNTPs) 0.5-3 มิลลิโมลาร์ (mM) ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.1-3 โมลาร์ (M), สาร แมกนีเซียมซัลเฟส (MgSO4) 2-6 มิลลิโมลาร์ (mM), เอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (Bst DNA polymerase) 1 ยูนิต (unit, U) และบัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (supplied buffer) 1 X 5. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะ คือ ไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR) 6. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 สำหรับการตรวจวินิจฉัยเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ใน ตัวอย่างเลือดสุนัข -------------------------------------------------------------------------- แก้ไข 24/8/2559 1. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ถึง 6 ตำแหน่ง และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ดังนี้ ไพรเมอร์ อีแคนิส-เอฟ3อี (Ecanis -F3E) ลำดับเบส (5’ -3’) TGCTGCATGGTTGTCGTC ไพรเมอร์ อีแคนิส-บี3อี (Ecanis -B3E) ลำดับเบส (5’ -3’) TAAACCTTGCGGTCTCGC ไพรเมอร์ อีแคนิส-เอฟไอพีอี (Ecanis –FIPE) ลำดับเบส (5’ -3’) TGCCCAGCATTACCTGTTGGTAGCTCGTGTCGTGAGATGT ไพรเมอร์ อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis -BIPE) ลำดับเบส (5’ -3’) AACTGGAGGAAGGTGGGGATGATTGTAGCACGTGTGTAGCC ตัวตรวจจับ อีแคนิส-โพรบ (Ecanis-probe) ลำดับเบส (5’ -3’) Thiol-TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA 2. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ด้วยปฏิกิริยาลูป-มีเดียเต็ดไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) มี ลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 60-70 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 20-50 นาที แล้ว ตรวจผลผลิตดีเอ็นเอเป้าหมายโดยเทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) 3. ชุดไพรเมอร์ (primer) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ตามข้อถือสิทธิ 1 ในที่ซึ่งตรวจสอบจับสำเร็จรูปสำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) มีกรรมวิธีการ ออกแบบตัวตรวจจับ (DNA probe) ในการตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ด้วยเทคนิคการใช้ตัว ตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) มีลักษณะเฉพาะคือ ตัวตรวจจับ ติดฉลากไทออล (thiol) ที่ปลายด้าน 5’ ของสายดีเอ็นเอสั้นๆ (oligonucleotide) เพื่อการตรวจผลผลิตจาก แลมป์ (LAMP) มีลำดับเบสดังนี้ Thiol-5’ – TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA-3’ 4. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 ประกอบด้วยส่วนประกอบหลักสำหรับใช้ในปฏิกิริยาดังนี้ ไพรเมอร์คู่ใน (inner primers) อีแคนิส-เอฟไอพีอี (Ecanis –FIPE) และ อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis -BIPE) อย่าง ละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ (uM), ไพรเมอร์คู่นอก (outer primers) อีแคนิส-เอฟ3อี (Ecanis -F3E) และ อีแคนิส- บี3อี (Ecanis -B3E) อย่างละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ (uM), ดีออกซีนิวคลีโอไทด์ ไตรฟอสเฟส (Deoxynucleotide triphodphate, dNTPs) 0.5-3 มิลลิโมลาร์ (mM), ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.1-3 โมลาร์ (M), สาร แมกนีเซียมซัลเฟต (MgSO4) 2-6 มิลลิโมลาร์ (mM), เอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (Bst DNA polymerase) 1 ยูนิต (unit, U) และบัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (supplied buffer)1 เท่า (1 X) 5. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะ คือ ไม่ต้องใช้เครื่อง PCR 6. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 สำหรับการตรวจวินิจฉัยเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E.canis) ใน ตัวอย่างเลือดสุนัข ------------------------------------------------------ แก้ไข 24/03/2559 1. ชุดไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย คิส (E. canis) ด้วยปฏิกิริยาลูปไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amolifcation) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ถึง 6 ตำแหน่ง และ ตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ดังนี้ ไพรเมอร์ อีแคนิส-เอฟ3อี (Ecanis-F3E) ลำดับเบส (5’-3’) TGCTGCATGGTTGTCGTC ไพรเมอร์ อีแคนิส-บี3อี (Ecanis-B3E) ลำดับเบส (5’-3’) TAAACCTTGCGGTCTCGC ไพรเมอร์ อีแคนิส-เอฟไอพีอี (Ecanis-FIPE) ลำดับเบส (5’-3’) TGCCCAGCATTACCTGTTGGTAGCTCGTGTCGTGAGATGT ไพรเมอร์ อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis-BIPE) ลำดับเบส (5’-3’) AACTGGAGGAAGGTGGGGATGATTGTAGCACGTGTGTAGCC ตัวตรวจจับ อีแคนิส-โพรบ (Ecanis-probe) ลำดับเบส (5’-3’) TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA 2. ไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยปฏิกิริยาลูปไอโซเธอร์มอลแอมปลิฟิเคชั่น (Loop-mediated isothermal amplification) หรือ แลมป์ (LAMP) ผนวกกับการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) มีลักษณะเฉพาะ คือ ทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 60-65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 45-60 นาที แล้วตรวจผลผลิตดีเอ็น เอเป้าหมายโดยเทคนิคการใช้ตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) 3. ไพรเมอร์ (primer) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ตาม ข้อถือสิทธิ 1 ในที่ซึ่งตัวตรวจจับสำเร็จรูปสำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) มีกรรมวิธีการ ออกแบบตัวตรวจจับ (DNA probe) ในการตรวจเชื้อเออร์ลีเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคการใช้ตัว ตรวจสอบที่ติดฉลากด้วยอนุภาคทองคำ (Gold nanoprobe DNA biosensor) มีลักษณะเฉพาะคือ ตัวตรวจจับ ติดฉลากไทออล (thiol) ที่ปลายด้าน 5’ ของสายดีเอ็นเอสั้นๆ (oilgonucleotide) เพื่อการตรวจผลผลิตจาก แลมป์ (LAMP) มีลำดับเบสดังนี้ Thiol-5’-TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA-3’ 4. ไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 ประกอบด้วยส่วนประกอบหลักสำหรับใช้ในปฏิกิริยาดังนี้ ไพรเมอร์คู่ใย (inner primers) อีแคนิส-เอฟไอพีอี (Ecanis-FIPE) และ อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis-BIPE) อย่าง ละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ไพรเมอร์คู่นอก (outer primers) อีแคนิส-บีไอพีอี (Ecanis-BIPE) อย่าง ละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ไพรเมอร์คู่นอก (outer primers) อีแคนิส-เอฟ3อี (Ecanis-F3E) และ อีแคนิส- บี3อี (Ecanis-B3E) อย่างละ 0.5-3 ไมโครโมลาร์ ((สูตร)M), ดีออกซีนิวคลีโอไทด์ไตรฟอสเฟต (Deoxynucleotide triphosphate, dNTPs) 0.5-3 มิลลิโมลาร์ (mM) ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.1-3 โมลาร์ (M), สาร แมกนีเซียมซัลเฟส (MgSO4) 2-6 มิลลิโมลาร์ (mM), เอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (Bst DNA polymerase) 1 ยูนิต (unit, U) และบัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์บีเอสที ดีเอ็นเอ พอลิเมอร์เรส (supplied buffer) 1 เท่า (1X) 5. ไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ ไม่ต้องใช้เครื่อง PCR 7. ไพรเมอร์ (primer) และตัวตรวจจับ (DNA probe) สำหรับตรวจเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ด้วยเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในข้อถือสิทธิที่ 1 สำหรับการตรวจวินิจฉัยเชื้อเออร์ลิเชีย แคนิส (E. canis) ใน ตัวอย่างเลือดสุนัข ----------------------------------------------------- คำขอใหม่ปรับปรุง 29/08/2559

1. ไพรเมอร์และตัวตรวจจับสำเร็จรูป (probe) สำหรับตรวจเชื้อ E. canis ด้วยปฏิกิริยา Loop- mediated isothermal amplification (LAMP)

2. ไพรเมอร์และตัวตรวจจับสำเร็จรูปสำหรับตรวจเชื้อ E. canis ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสภาวะที่ เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากปฏิกิริยา LAMP มีลักษณะเฉพาะคือ ทำปฏิกิริยา LAMP ที่อุณหภูมิ ประมาณ 65 องศาเซลเซียส เป็นเวลาประมาณ 45 นาที แล้วตรวจผลผลิตดีเอ็นเอเป้าหมายได้บนแผ่นเจลอา กาโรส หรือ ชุดตรวจ gold-nanoparticle DNA biosensor

3. ตัวตรวจสำเร็จรูปสำหรับตรวจเชื้อ E. canis ด้วยเทคนิค LAMP ในข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง กรรมวิธีการออกแบบตัวตรวจจับ (probe) ในการตรวจเชื้อ E. canis บนแผ่น dipstick มีลักษณะเฉพาะคือ ตัว ตรวจจับติดฉลาก Thiol ที่ปลายด้าน 5' เพื่อการตรวจผลผลิตจาก LAMP บนชุดตรวจ gold-nanoparticle DNA biosensor มีลำดับเบสดังนี้ Thiol-5'-TGCGCTCGTTGCGGGACTTAA-3'

4. ไพรเมอร์และตัวตรวจจับสำเร็จรูปสำหรับตรวจเชื้อ E. canis ด้วยเทคนิค LAMP ในข้อถือสิทธิที่ 1 ประกอบด้วยส่วนประกอบหลักสำหรับใช้ในปฏิกิริยาดังนี้ inner primers Ecanis-FIPE และ Ecanis-BIPE อย่างละ 2 (สูตร)M, outer primers Ecanis-F3E และ Ecanis-B3E อย่างละ 0.2 (สูตร)M, dNTPs 1.6 mM ผสมด้วย สารเบตาอีน (betaine) 0.5 M สารแมกนีเซียมซัลเฟส (MgSO4) 6 mM เอ็นไซม์ Bst DNA polymerase 1U และ supplied buffer 1X

5. ไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยา LAMP ในข้อถือสิทธิที่ 4 ประกอบด้วยไพรเมอร์ 4 ตัว ที่จำเพาะต่อ ลำดับเบสของเชื้อ E. canis ถึง 6 ตำแหน่ง ดังนี้ ไพรเมอร์ Ecanis-F3E ลำดับเบส (5'-3') TGCTGCATGGTTGTCGTC ไพรเมอร์ Ecanis-B3E ลำดับเบส (5'-3') TAAACCTTGCGGTCTCGC ไพรเมอร์ Ecanis-FIPE ลำดับเบส (5'-3') TGCCCAGCATTACCTGTTGGTAGCTCGTGTCGTGAGATGT ไพรเมอร์ Ecanis-BIPE ลำดับเบส (5'-3') AACTGGAGGAAGGTGGGGATGATTGTAGCACGTGTGTAGCC

6. ไพรเมอร์และตัวตรวจจับสำเร็จรูปสำหรับตรวจเชื้อ E. canis ด้วยเทคนิค LAMP ในข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะ คือ ไม่ต้องใช้เครื่อง PCR

7. ไพรเมอร์และตัวตรวจจับสำเร็จรูปสำหรับตรวจเชื้อ E. canis ด้วยเทคนิค LAMP สำหรับการ ตรวจวินิจฉัยเชื้อ E. canis ในตัวอย่างเลือดสุนัข