TH11485C3

TH11485C3 - กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนสุนัขและแมว

Info

Publication number: TH11485C3
Application number: TH1403001511U
Authority: TH
Inventors: สุขรุ่ง ผศดรนิทัศน์; ตั้งตรงจิตร รศพญอัญชลี; ชัยคำภา ศดรวันเพ็ญ; บุนนาค ศพญฉวีวรรณ
Original assignee: นางสาวพลอยพรรณ จิตรแจ้ง; มหาวิทยาลัยมหิดล
Filing date: 2014-11-18
Publication date: 2016-05-13

Abstract

DC60 (18/11/57) กรรมวิธีวิธีการผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนสุนัขและแมวเพื่อใช้ในการทดสอบ และประเมินสภาวะภูมิแพ้ขนสุนัขและแมว หรือใช้เป็นส่วนประกอบของวัคซีนโรคภูมิแพ้ขนสุนัข และแมวที่ใช้ในการรักษาผู้ป่วยที่แพ้ขนสุนัขและแมว ประกอบด้วยขั้นตอนของการเตรียมวัตถุดิบ และสารเคมีที่ใช้, ขั้นตอนของกรรมวิธีสกัดสารสกัดหยาบจากขนของสุนัขและแมว และขั้นตอน ของการวัดปริมาณโปรตีน โดยการนำไปใช้หลักจากที่มีการวัดปริมาณ โปรตีนแล้วจะมีการเตรียม เพื่อการนำไปใช้อย่างเหมาะสมด้วยการเติมสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ซาลีน (PBS) ที่ผสมหรือไม่ ผสมฟีนอล (Phenol) ก็ได้ กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนสุนัขและแมว เพื่อใช้ในการทดสอบ และประเมินสภาวะภูมิแพ้ขนสุนัขและแมว หรือใช้เป็นส่วนประกอบของวัคซีนโรคภูมิแพ้ขนสุนัข และแมวที่ใช้ในการรักษาผู้ป่วยที่แพ้ขนสุนัขและแมว ประกอบด้วยขั้นตอนของการเตรียมวัตถุดิบ และสารเคมีที่ใช้ ขั้นตอนของกรรมวิธีสกัดสารสกัดหยาบจากขนของสุนัขและแมว และขั้นตอน ของการวัดปริมาณโปรตีน โดยการนำไปใช้หลักจากที่มีการวัดปริมาณ โปรตีนแล้วจะมีการเตรียม เพื่อการนำไปใช้อย่างเหมาะสมด้วยการเติมสารละลายฟอสเฟตบับเฟอร์ซาลีน (PBS) ที่ผสมหรือไม่ ผสมปีนอล (Phenol) ก็ได้

Claims

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :แก้ไข 10/04/58 1. กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนของสุนัขและแมว เพื่อใช้เตรียมสาร ก่อภูมิแพ้มาตรฐานที่ใช้ในการทดสอบและประเมินสภาวะภูมิแพ้และใช้เป็นส่วนประกอบของ วัคซีนโรคภูมิแพ้ขนของสุนัขและแมวที่ใช้ในการรักษาผู้ป่วยที่แพ้ขนของสุนัขและแมว ประกอบด้วยขั้นตอนของ - ขั้นตอนการเตรียมวัตถุดิบที่ใช้ ได้แก่ ขนของสุนัขและแมวและสารเคมีที่ใช้ - ขั้นตอนการสกัดสารก่อภูมิแพ้จากขนของสุนัขและแมว - ขั้นตอนการวิเคราะห์ปริมาณ โปรตีนในสารสกัดหยาบที่ได้ มีลักษณะพิเศษคือ เป็นกรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้ขนของสุนัขและแมวที่ ได้จากการโกนขนของสุนัขหรือแมวที่สุขภาพดี โดยการโกนให้ผิวหนังส่วนหนังกำพร้าติดมาด้วย แล้วนำตัวอย่างขนของสุนัขหรือแมวมาสกัดเอาโปรตีนทั้งหมด 2. กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนของสุนัขและแมวตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ ซึ่ง ขั้นตอนการเตรียมวัตถุดิบที่ใช้ ประกอบด้วยขั้นตอนของ - ทำการโกนขนของสุนัขหรือแมวที่สุขภาพดีโดยสัตว์แพทย์ โดยการโกนให้ผิวหนัง ส่วนหนังกำพร้าติดมาด้วย - นำตัวอย่างขนของสุนัขหรือแมวมาสกัดเอาโปรตีนทั้งหมด ด้วยสารละลายฟอสเฟต บัฟเฟอร์ซาลีน (Phoshate buffer saline, PBS) pH 7.4 ที่มีเกลือโซเดียมคลอไรด์ (Sodium Chloride) และทวีน-20 (Tween-20) ผสมอยู่ ร้อยละ 0.9 และ 0.1 ตามลำดับ (การเตรียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ซาลีน(PBS buffer) ใช้น้ำกลั่นบริสุทธิ์ที่ปลอดสารเอน โดทอกซิน (Endotoxin-free)) เรียกสารละลายบัฟเฟอร์นี้ว่า พีบีเอสที (PBST buffer) โดยใช้ขนสัตว์ปริมาณ 1 กรัม ต่อบัฟเฟอร์พีบีเอสที (PBST buffer) 40 มิลลิลิตร (อัตราส่วน 1 ต่อ 40 ของน้ำหนักต่อปริมาตร) แล้วนำไปหมุนที่อุณหภูมิ 4 ถึง 8 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 ชั่วโมง 3. กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนของสุนัขและแมวตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการสกัดสารก่อภูมิแพ้จากขนของสุนัขและแมว ประกอบด้วยขั้นตอนของ - เก็บแยกเอาขนสุนัขหรือแมวออกโดยการบีบขนด้วยมือขั้นตอนของ - นำส่วนของเหลวไปปั่นแยกเศษขนและสารแขวนลอยบางส่วนที่ยังเหลืออยู่ออกที่ ความเร็ว 1,000 จี (g) ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 10 นาที - เก็บเฉพาะส่วนของเหลว (เรียกว่า สารสกัดหยาบ) - นำสารสกัดหยาบไปไดอะไลซ์ (Dialyze) ด้วยน้ำกลั่นปลอดสารเอนโดทอกซิน (Endotoxin-free) ที่อุณหภูมิ 4-8 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16-24 ชั่วโมง โดยใช้ เมมเบรนรีเจนเนอเรทเซลลูโลสสเปคตราพอร์ 6 (Spectra/Por? 6 regenerated cellulose dialysis membrane) ในอัตราส่วน 3.3 มิลลิเมตร ต่อ 1 มิลลิลิตร โดยทำการ เปลี่ยนน้ำกลั่นอีกอย่างน้อย 2 ครั้ง ทุกๆ 3 ชั่วโมง - นำสารสกัดที่ไดอะไลซ์ (Dialyze) แล้ว ออกจากถุง แล้วทำให้ปลอดเชื้อด้วยการ กรองผ่านเยื่อปลอดเชื้อที่รูขนาด 0.22 ไมโครเมตร - แบ่งใส่ลงในหลอดปั่นพลาสติกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว ขนาด 50 มิลลิลิตร หลอดละ ประมาณ 10 ถึง 20 มิลลิลิตร วงหลอดในแนวนอนให้หลอดเอียงเล็กน้อย แล้วนำไปแช่เข็งที่ -80 องศาเซลเซียส จนสารสกัดหยาบจะแข็งตัวเป็นแสลนท์ (Slant) ทั้งหมด - นำสารสกัดที่แช่แข็งแล้วนำไปไลโอฟิไลซ์ (Lyophilized) ให้แห้ง 4. กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมแพ้จากขนของสุนัขและแมวตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งการวิเคราะห์ปริมาณ โปรตีนของสารสกัดหยาบ ใช้วิธีแบรดฟอร์ด (Bradford Protein Assay) หรือวิธีอื่นใดก็ได้ในหน่วยของการวัดไนโตรเจนในโปรตีน (Protein nitrogen unit : PNU) ----------------------------------------------------------------

1. กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนสุนัขและแมว เพื่อใช้เตรียมสาร ก่อภูมิแพ้มาตรฐานที่ใช้ในการทดสอบและประเมินสภาวะภูมิแพ้และใช้เป็นส่วนประกอบของ วัคซีนโรคภูมิแพ้ขนของสุนัขและแมวที่ใช้ในการรักษาผู้ป่วยที่แพ้ขนของสุนัขและแมว ประกอบด้วย ขั้นตอนของ -ขั้นตอนการเตรียมวัตถุดิบที่ใช้ ได้แก่ ขนของสุนัขและแมวและสารเคมีที่ใช้ -ขั้นตอนการสกัดสารก่อภูมิแพ้จากขนของสุนัขและแมว -ขั้นตอนการวิเคราะห์ปริมาณโปรตีนในสารสกัดหยาบที่ได้ มีลักษณะพิเศษคือ เป็นกรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้ขนของสุนัขและแมวที่ ได้จากการโกนของสุนัขหรือแมวที่สุขภาพดี โดยการโกนให้ผิวหนังส่วนหนังกำพร้าติดมาด้วย และนำตัวอย่างขนของสุนัขหรือแมวมาสกัดเอาโปรตีนทั้งหมด

2. กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนสุนัขและแมวตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ ซึ่ง ขั้นตอนการเตรียมวัตถุดิบที่ใช้ ประกอบด้วยขั้นตอนของ - ทำการโกนขนของสุนัขหรือแมวที่สุขภาคดีโดยสัตว์แพทย์ โดยการโกนให้ผิวหนัง ส่วนหนังกำพร้าติดมาด้วย - นำตัวอย่างขนของสุนัขหรือแมวมาสกัดเอาโปรตีนทั้งหมด ด้วยสารละลายฟอสเฟต บัฟเฟอร์ซาลีน (Phosphate buffer saline, PBS) pH7.4 ที่มีเกลือโซเดียมคลอไรด์ (Sodium Chloride) และทวีน-20 (Tween-20) ผสมอยู่ร้อยละ 0.9 และ 0.1 ตามลำดับ (การเตรียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ซาลีน (PBS buffer) ใช้น้ำกลั่นบริสุทธิ์ที่ปลอดสารเอน โดทอกซิน (Endotoxin-free)) เรียกสารละลายบัฟเฟอร์นี้ว่า พีบีเอสที (PBST buffer) โดยใช้ขนสัตว์ปริมาณ 1 กรัม ต่อบัฟเฟอร์พีบีเอสที (PBST buffer) 40 มิลลิลิตร (อัตราส่วน 1 ต่อ 40 ของน้ำหนักต่อปริมาตร) แล้วนำไปหมุนที่อุณหภูมิ 4 ถึง 8 องสาเซลเซียยส เป็นเวลา 2 ชั่วโมง

3. กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนสุนัขและแมวตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ ซึ่ง ขั้นตอนการสกัดสารก่อภูมิแพ้จากขนของสุนัขและแมว ประกอบด้วยขั้นตอนของ - เก็บแยกเอาขนสุนัขหรือแมวออกโดยการบีบขนด้วยมือที่สวมถุงมือ - นำส่วนของเหลวไปปั่นแยกเศษขนและสารแขวนลอยบางส่วนที่ยังเหลืออยู่ออกที่ ความเร็ว 1,000 (g) ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 10 นาที - เก็บเฉพาะส่วนของเหลว (เรียกว่า สารสกัดหยาบ) - นำสาร สกัดหยาบไปไดอะไลซ์ (Dialyze) ด้วยน้ำกลั่นปลอดสารเอนโดทอกซิน (Endotoxin-free) ที่อุณหภูมิ 4-8 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16-24 ชั่วโมง โดยใช้ เมมเบรนรีเจนเนอเรทเซลลูโลสสเปคตราพร์ 6 (Spectra/Por R 6 regenerated Cellulose dialysis membrane) ในอัตราส่วน 3.3 มิลลิเมตร ต่อ 1 มิลลิลิตร โดยทำการ เปลี่ยนน้ำกลั่นอีกอย่างน้อย 2 ครั้ง ทุกๆ 3 ชั่วโมง - นำสารสกัดที่ไดอะไลซ์ (Dialyze) แล้ว ออกจากถุง แล้วทำให้ปลอดเชื้อด้วยการ กรองผ่านเยื่อปลอดเชื้อที่มีรูขนาด 0.22 ไมโครเมตร - แบ่งใส่ลงในหลอดปั่นพลาสติกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว ขนาด 50 มิลลิลิตร หลอดละ ประมาณ 10 ถึง 20 มิลลิลิตร วางหลอดในแนวนอนให้หลอดเอียงเล็กน้อย แล้วนำไปแช่แข็งที่ -80 องศาเซลเซียส จนสารสกัดหยาบจะแข็งตัวเป็นแสลนท์ (Slant) ทั้งหมด - นำสารสกัดที่แช่แข็งแล้วนำไปไลโอฟิไลซ์ (Lyophilized) ให้แห้ง

4. กรรมวิธีผลิตน้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้จากขนสุนัขและแมวตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง การวิเคราะห์ปริมาณ โปรตีนของสารสกัดหยาบ ใช้วิธีแบรดฟอร์ด (Bradford Protein Assay) หรือวิธีอื่นใดก็ได้ในหน่วยของการวัดไนโตรเจนในโปรตีน (Protein nitrogen unit : PNU)