SU997640A1

SU997640A1 - Способ размораживани биологических объектов

Info

Publication number: SU997640A1
Application number: SU792832965A
Authority: SU
Inventors: Николай Сидорович Пушкарь; Валентин Иосифович Вишневский; Алексей Григорьевич Душейко
Original assignee: Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР
Priority date: 1979-10-30
Filing date: 1979-10-30
Publication date: 1983-02-23

Description

(54Х СПОСОБ РАЗМОРАЖИВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ

ОБЪЕКТОВ

1

Изобретение относитс к криобиологии, а именно к способам разморажийани биологических материалов.

Известен способ размораживани спермы быков в ампулах объемом. 1-1,5 мл путем погружени их в воду с температурой 5 30-40 С на 1 -1,5 мин и выдерживани в ней до тех пор, пока в ампулах останетс тонкий стержень льда. Дальнейшее оттаивание проводитс при комнатной температуре 1.10

Известен способ размораживани биологических объектов в вод ной бане при воздействии колебаний (механических) 2.

Недостатками известных способов вл етс низка выживаемость i клеток, обусловленна неравномерностью распределе- 15 ни температуры по объему контейнера и длительностью процесса размораживани .

Целью изобретени вл етс повышение выживаемости клеток.

Поставленна цель достигаетс тем, что 2о согласно способу размораживани биологических объектов в вод ной бане при воздействии колебаний, колебани производ т ультразвуком интенсивностью -3 Вт/см и частотой 20-2640 кГц.

Способ осуществл ют .,следуюш,им образом .

Замороженный в ампулах или в контейнерах биологический материал погружают в теплую воду (вод ную баню) с температурой 40-45°С. Одновременно через воду пропускают ультразвуковые колебани интенсивностью 1-3 Вт/см и частотой 20- 2640 кГц. Оттаивание длитс до тех пор, пока температура клеток не достигнет 5- 10°С. После чего ампулы или контейнеры с биологическим материалом вынимают из ванны и прекраш,ают воздействие ультразвуковыми колебани ми.

Пример 1. Контейнеры с костным мозгом , замороженным до -196°С с 15% ПЭО-400, опускают в вод ную баню с температурой 40°С. Одновременно с этим головку преобразовател ультразвуковых колебаний ввод т в акустический контакт с баней. Интенсивность УЗ-колебаний составила 1,0 Вт/см, а частота 20 кГц. После того, как температура отта вшего костного мозга достигла 37°С, контейнер вынимают из бани, а УЗ-колебани отключают. Выживает в среднем 92,2±3,57оклеток.

Пример 2. Контейнер с костным мозгом, замороженным до - 196°С с 15% ПЭО-400, опускают в вод ную баню с температурой 40°С. Включают источник УЗ-колебаний, наход щийс в акустическом контакте с баней. Интенсивность УЗ-колебаний 3.5 Вт/см , частота 3500 кЦ. После того, как температура отта вшего костного мозга составила 3°С, контейнер вынимают из бани, а источник УЗ-колебаний отключают . Выживает 93,9 ± 3,9% клеток.

Пример 3. Контейнер с костным мозгом , замороженным до -196°С с 15% ПЭО-400, опускают в вод ную баню с температурой 40°С, включают источник УЗ-колебаний с интенсивностью 0,8 Вт/см, частотой 15 кГц. После того, как температура отта вшего костного мозга составит 37°С, контейнер вынимают из бани, источник УЗ-колебаний выключают. Выживает 83,0 ± 4,5% клеток.

Пример 4. Контейнер с костным мозгом, замороженным до - Юб с -15% ПЭО-400, опускают в вод ную баню с температурой 40°С одновременно включают источник УЗ-колебаний, интенсивность колебаний 3,5 Вт/см , частота 3500 кГц. После того, как температура отта вшего мозга составила 37°С, контейнер вынимают из вод ной бани, а источник УЗ-колебаний отключают Выживает 84,5 ±4,0% клеток.

Приведенные примеры показывают, что сочетание действи нагрева и УЗ-колебаний способствует повышению сохранности живых клеток в среднем на 20-25% в диапазоне частот 20-2640 кГц и интенсивности колебаний 1-3 Вт/см. При выходе

характеристик УЗ-колебаний за указанные пределы выживаемость клеток резко снижаетс .

Сочетание действи нагрева и УЗ-колебаний ускор ет теплообмен между стенками контейнера и теплой водой с одной стороны и между нагреваемыми стенками и содержимым контейнера с другой стороны. Ускорение теплообмена происходит с одновременным увеличением равномерности распреде4 1ени температур в ванне и размораживаемой жидкости, что устран ет опасные градиенты температур и способствует выживаемости клеток на 20-25%.

Claims

1.Осташко Ф. И др. Рекомендации по замораживанию и хранению спермы быков

при температуре - 196°С. Харьков. «Прапор 1963,

2.Виноград-Финкель Ф. Р. и др. Методы долгосрочного хранени в замороженном состо нии эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов , предназначенных дл трансфузий . Методическое письмо. М., 1969 (прототип ).