SU977463A1 - Иммобилизованные на полимерной матрице @ и @ -амидные производные нуклеозид-51-ди или трифосфатов в качестве сорбентов дл афинной хроматографии и способ их получени - Google Patents
Иммобилизованные на полимерной матрице @ и @ -амидные производные нуклеозид-51-ди или трифосфатов в качестве сорбентов дл афинной хроматографии и способ их получени Download PDFInfo
- Publication number
- SU977463A1 SU977463A1 SU802868371A SU2868371A SU977463A1 SU 977463 A1 SU977463 A1 SU 977463A1 SU 802868371 A SU802868371 A SU 802868371A SU 2868371 A SU2868371 A SU 2868371A SU 977463 A1 SU977463 A1 SU 977463A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- immobilized
- nucleoside
- polymer matrix
- sorbents
- triphosphate
- Prior art date
Links
Description
тиДрёдуктазы из экстракта E.coli, индуцированной фагом Т4 31. Однако получение указанных-сорб тов вл етс процессом трудоемким многостадийным, включающим три дос таточно трудоемких стадии синтеза лара-нитрофениловых эфироэ АТФ в .абсолютных растворител х, а также ионообменную хроматографию, хроматографию на силикагелевых пластинах , центрифугирование. Следующа стади - получение пара-аминофенило вого эфира АТФ над палладием, затем снова хроматографи на ДЭЛЭ-сефаде се А-25 и обработка пара-аминофенилового эфира АТФ активированной бро циансефарозой. Метод иммобилизации описан только дл АТФ и dATФ, дл остальных нуклеозид-5 -ди- трифос фатов не описан. Цель изобретени - получение новых высокоэффективных сорбентов дл афинной хроматографии, сохран ющих максимальное сродство лиганда к ферменту. Доставленна цель достигаетс путем, получени новых иммобилизованных на полимерной матрице ъ - и у -амидннх производных нуклеозид-ди- -или трифосфатов.общей формулы / Ч . -KHf-P-0 + ЙНг. А 1 У rN -° - kj/t -2 или 3; де п R X А -полимерна матрица/ -Н или ОН; -природное основание. Присоединение производных нуклеозид-5 -ди- или трифосфатов по (Ь - или у -фосфатной группе позвол ет не затрагивать наиболее специфичные части молекул нуклеозид-5-дии . трифосфатов. соединени формулы (i; получают путем взаимодействи нуклеозид-5 -ди- или трифосфатов общей формулы где п , X и А - приведенные выше значени , шэдверрают взаимодействию с 10-15кратным избытком карбодиимида в водной среде при рН 5-6 и 10-15 с с добавлением в реакционную смесь полимерной матрицы,содержащей свободные аминогруппы. Способ получени , например Г -амидных производных нуклеозид 5 -трифосфатов описываетчс следующей схемой
/О
/-ч@ f Z
:о4--1 -о4- toz ( VlT CjK-cJzH N (о
U
Lс}нг сГНг
Ч-г
шЬн
енг-%
11,
(
4.f vi ли
он он нуклеозид-5 -трифосфат; водорастворимый карбодиимид , циклический нуклеозид-5 -триметафосфат (активное промежуточное соединение); полимерна матрица со свободными NHij- группами; -уамидное производное нуклеозид-5-трифосфата (целевой продук).6
g
окон Известен способ получени иммобилизованных ферментов с помощью водорастворимого карбодиимида, атакующего первичные аминогруппы белкаС4. И хот водорастворимый карбодиимид используетс в данном способе дл иммобилизсщии субстратов нуклеозид-5 -ди- и трифосфатов в качестве конденсирующего йгента, так же как и в случае иммобилизации ферментов, он
осуществл ет другую реакцию. Реакци идет через активацию фосфорильных групп субстратов - циклический нуклеозйд-5 -триметафосфат (активное промежуточное соединение) и конечным (целевым) продуктом реакции вл етс иммобилизованный нуклеозид-5 -трифосфат, который вл сь афинным аналогом субстрата, легко узнаетс соответствующим ферментом. А это позвол ет в свою очередь использовать афинные аналоги субстратов (афинные сорбенты) дл получени высокоочищенных ферментов.
Осуществление процесса в определенных параметрах позвол ет осуществить процесс без затрачивани наиболее специфичных частей нукле .озид-5 -ди- или трифосфатов.
Способ осуществл етс следующим образом4
Взаимодействие нуклеозид-5 -диили трифосфатов с карбодиимидом идет через образование активного проме .жуточного соединени , которое обладает способностью вступать во взаимодействие с нуклеофилами-, представл юJBIHMH собой полимерную матрицу со свободными с1миногруппами. За реакцией образовани активного промежуточного соединени след т по расходу кислоты , : необходимой Дл поддержани пб сто йнога значени . рН реакционной сйеси, равного 5-6. Процесс ведут при 1015 с. После достижени максимальной концентрации активного промежуточного соединени в реакционную добавл ют соответствующую нерастворимую полимерную матрицу.
Выход целевого продукта составл ет по исходному нуклеозид-ди- или трифосфату. Полученный продукт анализироваши путем проведени
кислотного гидролиза, хроматографии на бумаге, сн ти УФ-спектров. Определение емкости сорбента проводили по количеству иммобилизованных нуклеозид-5 гди- или трифосфатных
остатков на 1 г сорбента.
На основании предлагаемого способа синтезированы сорбенты, дл получени которых использовсшись следующие нуклеозид-5 -ди- или трифосфатй:
аденозин-5-дифосфат и -трифосфат/ дезоксиаденозин-5 -трифосфат t гуанозин-5-дифосфат и -трифосфат уридин-з-трифосфат; цитизин-5-три фосфат.
; В качестве полимерных матриц даспользованы:
Аминоэтилцеллюлоза (АЕ-целлюлоза)
1|-с Нг-с Нг-ЗШг .
Гидразид карбоксиметилцеллюлозы
(КМа-гидразидОQ
g-ciHz-ci
3NH- КНг
Аминоэтилированное производное полиакриламида (АЕ-биогель)
Х
Я
NH-CtiHzl JfHiz
Гексаметилендиаминсефароза (АНсефароза 4В)
-Лн((}Нг)
35
Данные по синтезированным иммобилизованным на полимерных матрицах
нуклеji - и 1 -амидным.производным озид- 5 -ди- и трифосфатам -т. представлены в табл.1.
о о t-i I о
00
о о
О
00
I о
N
1Л
о 1Л т-( о СЧ го ГГ N гН тН
} «Ь
1 РМ А &1 f
ft Л П. п. к RI Pi
г г JT Jfc Л
1 Т f Т
ллл-х
§
СО О
О Г N -1 Пример. Синтез аминоэтилцеллкшозных аналогов нуклеозид-З -ди- и трифосфатов провод т в термостатированной кювете при 10-15°С. 45 мкмоль нуклеозид-5 -ди- или трифосфата (аденоэин-5-ди- или трифосфата; гуанозин-5-ди- или трифо фата,- цитидин-5 -ди- или трифосфата/ уридин-5-трифосфата) раствор ют в 15 мл воды рН довод т до 5,6. При непрерывном перемешивании добавл ют 380 мг водорастворимого карбодиимида. Посто нное значение рН поддерживают при непрерывном под титровывании 0,5 N сол ной кислотой контролиру рН с помощью потенциометра ЛПУ-.01. Через 30 мин добавл ют 1 аминоэтил-целлюлозы. Реакционную смесь нанос т на с1екл нный фильтр, промывают М,КС1.до исчезновени оптической плотности, затем - водой. Синтезированный продукт анализируют проведением кислот ного гидролиза. Хроматографией на бумаге и сн тием УФ-спектра. Пример 2. Синтез гидразид карбоксиметилцеллюлозного аналога ещенозин-Б -трифосфата (АТФ) шровод т при сохранении всех параметров и условий, указанных в примере 1. Полимерную матрицу - гидразид карбоксиметилцеллюлозу добавл ют в количестве 0,5г. Пример 3. Синтез аминоэтили рованного производного полиакриламида с ковалентно свйзанным аденоэин- и гуанозингЗ -трифосфатами про вод т при сохранении всех параметро и условий процесса, указанных в при мере 1. Полимерную матрицу - аминоэтилированное производное полиакрил амида добавл ют в реакционную смесь в количестве 0,5г. П р и м ё р 4. Синтез гексаметил диаминсефарозного производного аден зин- и гуанозин-5 -ди- и трифосфато провод т при сохранении всех параме ров и .условий процесса, указанных в
Аминоэтилцеллюло3ный аналог нуклеозид 5 -диили трифосфата после кислотного гидролиза
-РРА
-PPG -РРРА
227
230
259
230 228 224
258
252 227 230
259 примере 1. Полимерную матрицу - гекСс1метилендиаминсефарозу добавл ют в реакционную смесь в количестве 1 г. При проведении повторных реакций с синтезированным сорбентом можно достичь дополнительной иммобилизации производных нуклеозид-З -ди- или трифосфатов , что позвол ет получать сорбенты заданной емкости. Кислотный гидролиз синтезированных продуктов дл количественного определени амина и нуклеотиднрго материала провод т в 1 hJHCI в течение 2-х ч при 40°С. Затем гидролизат нейтрализуют, нанос т на стекл нный фильтр. Нуклеотидный материал заме р ют на спектрофотометре. В результате кислотного гидролиза происходит разрыв фосфоамидной св зи -N-P и в реакционной смеси получают исходный соответствующий нуклеОзид-5 -ди- или трифосфат и полимерную матрицу, несущую свободную аглнногруппу . Нуклеозид-5 -ди- или трифосфат, предварительно отделенный от полимерной матрицы (на стекл нном фильтре, анализируют методом бумажной хроматографии дл определени R и доказательства индивидуальности продукта в системах растворителей; (А )этанол : 1 М ацетат аммони , 7 s 3 по объему, рН 7,5,- (В) 1Изомасл на кислота : конц. аммиак : вода, 6б51:33, рН 3,7. УФ-спектры снимают на автоматическом регистрирующем спектрофотометре при р11 1,2,7,11 и концентрации 0,75 по нуклеотидному материалу. Таким образом, анализ синтезированных новых химических соединений, иммобилизованных на полимерной матрице производн лх fj-H у-амидов нуклеозид-Б -дн- и трифосфатов показал , что соединени химически чисты , строение их доказано и данные анализа приведены в табл.2. Таблица 2
Гидролиз карбоксиметилцеллюло з ный аналог аденозин- -трифосфата после кисшотного гидролиза
-РРРА
0,20
0,04
Аминоэтилированное производное полиакриламида с крвалентно св ванными аденозини гуанозин-5-триосфатами посе кислотного гидролиза
0,20
0,04
-РРА 0,03
-PPG 0,05
-. Гексаметилендй-аминсефароэное производное аденозин- и гуанизин-5-ди- и трифосфатов
-PPG
0,06 0,09 0,04 0,20
-РРРА
-PPPG 0,03 0,05 Во всех синтезированных . 7 амидных производных нуклеозид-5 -ди- и трифосфатов, иммобилизованны на полимерных матрицах, фосфоаьшдна св зь стабильна в диапазоне рН от б до 11 и температура от О до 50®С при указанных рН, Синтезированные сорбенты обладают высоким сродством лиганда к специфическим взаимодействи м с ферментами , и могут быть использованы в качестве афинных сорбентов дл выделени , очистки и разделени биологичес ки активных компонентов.
Продолжение табл. 2
257 259
230 227
259
230
227
258 252 228 223
230
252
258
228
224
230
259 230 227 252 228
258 224
230 П р и м е р 5. Афинна хроматографи . Испытани провод т на следующих сорбентах: аминоэтилцеллкшозный аналог гуанозин-5 -дифосфата; аминоэтилцеллюлоэный аналог гуанозин-5-трифосфата; аминоэтилированное производное полиакриламида с ковалентно св занным гуанозин-5-трифосфатом; гексаметилендиаминосефарозное производное гуанозин-5 -дифосфата; гексаметилендиаминосёфарозное производное гуанозин-5 -трифосфата. Клетки E.coli MRE 600 разрушают помощью звукового генератора УЗДН iy4 ,2,(22 кГц, 3 0,5-0,6 ампер). Белковый осадок, полученный из 10500.0 xg супернатанта насьпдением сульфата аммони между 37% и 67%, раствор ют в буфере 1, содержащем 2тМ трис-НС1, ,0, 10 тМ ацетата магни , 2mMDTT, 0,35 М НС1, 5тМ ЭДТА,-и провод т диализ против этого же буфера. 1 г влажного аминоэтилированного производного полиакриламида с ковалентно св занным гуанозин-5-трифосфатом (ГТФ-АЕ-биогель) перемешивают с белком (20 о.е. Л 280 нм) в течение 3-4 ч при 4°С. Смесь внос т в колонку и элюируют сначала бу ром 1 до исчезновени оптической плотности белка ( Л 280 нм ), затем буфером II, содержащем дополнительно к составу буфера I 100уи.МГТФ. фракции белка, содержащие EF-Tu активность, концентрируют и провод т дисшиз против 10 тМ натрий фосфатного буфера (,0),содержащего 0,1% SDS и 0,1% fb-меркаптоэтанола . Электрофорез белков провод т в полиакриламидном геле с SDS, Бело элюированный с афинной колонки, по данным электрофоретического анализа получен в индивидуальном состо НИИ с молекул рным весом 4200044€00 . Сходные результаты были полу чены и с другими сорбентами. В результате испытани установлено , что синтезированные соединени могут быть использованы в каче ве эффективных сорбентов дл афинной хроматографии биологически активных компонентов, имеющих сродст ( афинность) к нуклеозид-З -ди- и трифосфатом, таких как белковые фа торы элонгации и другие. Способ получени сорбентов экспериментально прост, а их использо вание дл выделени и очистки ферм тов дает возможность сократить это многостадийный процесс практически до одной стадии. Сорбент легко рег нерируетс и может быть использова многократно. Примере. Афинна хроматог фи . Испытани провод т на следуквдих сорбентах: аминоэтилцеллюлозный аналог аденозин-5 -дифосфата; амин этилцеллюлозный аналог аденозин-З -трифосфата; аминоэтилированное про водное полиакриламида с ковалентно св занным аденозин-5 -трифосфатом; гидразидкарбоксиметилцеллюлозный ан лог аденозин-5 -трифосфата; гексаме тилендиаминсефарозное производное аденозин-5-трифосфата; аминоэтилцеллюлоэный аналог цитидин-Б -трифо , фата; аминоэтилцеллюлозный аналог ури-. дин-5-трифосфата. Все четыре субстрата (АТР, ГТР, УТР, ЦТР), иммобилизованные на нерастворимых матрицах, способны образовывать специфический комплекс с ферментами: 1)Креатинкиназу КФ 2.7.32.АТР: креатинфосфотрансфераза из мышц кролика вьщел ют по методу Кьюби. В случае применени афинных сорбентов ткань мышц кролика разрушают., экстрагируют 0,3 М КС1 в буфере, содержащем 10 мМ трис-НС1 рН 85, 5 мМ уксуснокислый магний, 100 мМ уксуснокислый натрий, 1 мМ (-меркаптоэтанол , 10 мМ ЭДТА и провод т диализ против того же буфера А. 1 г влажного аминоэтилцеллюлоэного производного аденозин-5-трифосфата перемешивают с белком 50ос. 280 нм ) в течение 4-5 ч при 4°С. . Смесь внос т в колонку и элюируют буфером А до исчезновени оптической плотности белка{А 280 нм ). Затем буфером Б (к буферу А добавл ют АТР в конечной концентрации 100 мкМ) , элюировали белок, который образовывает специфичный комплекс с сорбентом . До 70% исходной активности креатинкиназы определ ютво фракции, полученной при элюировании афинной колонки буфером Б (активность креатинкиназы измер ют потенциометрически ,использу рН-метр марки рН-340). Эти данные свидетельствуют о том, что креатинкиназа образует достаточно прочный комплекс с афинным сорбентом, что хорошо согласуетс с константой ингибировани Ki, равной 4, ПО отношению к АГР дл афинного реагента креатйнкиназы JT -амидного прЬизводного АТР. 2)Пиру ватки назу (КФ 2.7.1.40, АТР; фосфотрансфераза) выдел ют из бактериальной массы E.coli iMRIi-600. Клетки E.coli обрабатывают, как указано в примере 5. Белковой осадок, содержащий большую часть ферментов клетки, полученный из 105000 хд супернатанта фракционированием сульфатом аммони , раствор ют в буфере I, содержаи ем 10 мМ трис-НС1, рН 7.2, 10 мМ магний ацетат, 1 мМ (ъ-меркаптоэтанол , 5 мМ ЭДТА. После каждого фракционировани сульфатом аммони осадки белка диализуют против того же буфера. Поскольку дл пируваткиназы донором кроме аденозин-5 -трифосфата (АТР) могут служить уридин-5 -трифосфат (УТР), цетозин-5-три фосфат (ЦТР) и деэоксиаденозин-5-трифосфат (ДАТР), то в качестве афинного сорбента используют амнноэтилцеллюлозное производное АТР или УТР, или ЦТР по 0,5 г каждого влажно
го сорбента смешивалось с 10 iA а 280 им белка.
И второй вариант, когда три сорбента (аминрэтилцеллкшоэное производное АТР, УТР и ЦТР) смешивают, в эквивалентных количествах, паремешивают в течение 3-4 ч при С с 30 А 280 белка и затем смесь внос т в колонку. Как в первом варианте так и во втором, афинна колонка элюировалась буфером I дл удалени всех балластных белков (до исчезновени оптической плотности белка А 280), Буфером 11(буфер 1 с до авлениём соответству1а1цего субстрата до 100 мкм концентрации eroj элюировали белок, образующий специфический комплекс с афинным.сорбентом. Об образовании комплекса в каждом случае суд т по количеству белка, вы1иываемого с афииной колонки бУФвром I и буфером II с определением в каждой фракции пируваткинаэной активности .
В результате испытани установлено , что ируваткиназа образует комплеке с афинными сорбентами, причем
более прочный комплекс (почти в 2 раза ) образуетс и случае испытани трех сорбентов одновременно.
Таким образом, данные .сорбенты обладают высоким сродством лиганда к специфическому взгшмодействию фермента, которое позвол ет многостадийные трудоемкие процессы выделени и очистки ферментов сократить практически .до одной стадии, получа индивидуальньй) белок; сорбенты стойки, стабильны в диапазоне рН от 6 до 11 при температуре от О до , гидрофильны, имеют большую удельную поверхность, механически прочны, имеют однородную форму. Ввиду легкой регенергщии-и возможности длительного хранени синтезированные сорбенты могут быть многократйо использованы дл выделени и очистки индивидуальных белков.
Данные по использованию получен-. ных новых соединений в качестве афинных сорбентов дл афинной хроматографии , а также данные-ПОрегенерированию и хранению афинных сорбентов представлены .3.
Claims (4)
1.Иммобилизованные на полимерной матрице п - и г-амидные производные нуклеозид-5 -ди- или трифос ато
Ьбщей формулы
/9 Л
R-NH-f-F-O-bdHz А
-° iCJ
онх
где п - 2 или 3;
R - полимерна матрица;
X - Н или ОН;
А - природное основание, в качестве сорбентов дл афинной хроматографии.
2.Способ получени иммобилизованных на полимерной матрице /S - и
У -амидных производных нуклеозид-з -ди- или трифосфатов общей формулы
Ч
i«.
Л
Jn
Q
ОНХ
2 или 3)
полимерна Матрица;
Н или ОН;
природное основание,
35
чающийс
тем, что
нуклеозид-5 -ди- или трифосфат общей формулыg,
of-P-o4-ciH, Л U Jn Ч
Чт
онх
где п, X и А - приведенные выше значени , подвергают
взаимодействию с 10-15-кратным избытком карбодиимида в водной среде при рН 5-6 и 10-15 С с добавлением в реакционную смесь полимерной матрицы, содержащей свободные аминогруппы.
Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе
1. Тгауег I.P., Тгауег R. Affinity Chromatography of Nicotinamid Nucleotide-Dependent Dehydrogenases on Immobilized Nucleotide Derivatives gj .ochemical Journal, 1974, 141, 775779 .
. Kapnjayer H. , Lappi D.A., Kaplan N.O. The synthesis of 8-(6-aminoliexy )-amino-GTF and GDP and their application as Ligands in affinity chroraatography. - Analytical Biochem 1979, 99, 189-199.
3.Labow R.S., Layne D.S., The formation of Glucosides of Isoflavones and of some other .phenols by
.Rabbit Liver Microsomal Fraction. Biochemical Journal, 1972, 28.45f-498
4.Иммобилизованные ферменты.
Под ред. И.В.Березина, т.1, М., 1976 с. 170-171.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU802868371A SU977463A1 (ru) | 1980-01-10 | 1980-01-10 | Иммобилизованные на полимерной матрице @ и @ -амидные производные нуклеозид-51-ди или трифосфатов в качестве сорбентов дл афинной хроматографии и способ их получени |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU802868371A SU977463A1 (ru) | 1980-01-10 | 1980-01-10 | Иммобилизованные на полимерной матрице @ и @ -амидные производные нуклеозид-51-ди или трифосфатов в качестве сорбентов дл афинной хроматографии и способ их получени |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU977463A1 true SU977463A1 (ru) | 1982-11-30 |
Family
ID=20871665
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU802868371A SU977463A1 (ru) | 1980-01-10 | 1980-01-10 | Иммобилизованные на полимерной матрице @ и @ -амидные производные нуклеозид-51-ди или трифосфатов в качестве сорбентов дл афинной хроматографии и способ их получени |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU977463A1 (ru) |
-
1980
- 1980-01-10 SU SU802868371A patent/SU977463A1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP1003762B1 (en) | Base analogues | |
LINDBERC et al. | Preparation of analogues of ATP, ADP and AMP suitable for binding to matrices and the enzymic interconversion of ATP and ADP in solid phase | |
JPH032560A (ja) | 新規なクロマトグラフィー用固定担体 | |
Coletti-Previero et al. | Alumina-phosphate complexes for immobilization of biomolecules | |
JPH03502836A (ja) | 固定人工膜 | |
JP2562862B2 (ja) | 鋳型依存性酵素的核酸合成用プライマーとしてのオリゴヌクレオチド同時合成および直接標識化のための機能性担体 | |
Kariko et al. | Phosphorothioate analogs of 2', 5'-oligoadenylate. Activation of 2', 5'-oligoadenylate-dependent endoribonuclease by 2', 5'-phosphorothioate cores and 5'-monophosphates | |
DK1577324T3 (en) | Three-branched sugar chain asparagine derivatives, sugar chain asparagines, sugar chains and processes for their preparation | |
Mehler | Induced Activation of Amino Acid Activating Enzymes by Amino Acids and† RNA | |
Sigrist et al. | Light–dependent, covalent immobilization of biomolecules on ‘inert’surfaces | |
Miller et al. | Oligothymidylate analogs having stereoregular, alternating methylphosphonate/phosphodiester backbones as primers for DNA polymerase | |
EP0153763B1 (en) | Affinity chromatography matrix with built-in reaction indicator | |
Fleming et al. | Effects of chronic ethanol ingestion on brain aminoacyl‐tRNA synthetases and tRNA | |
Profy et al. | Stereoselective aminoacylation of a dinucleoside monophosphate by the imidazolides of dl-alanine and N-(tert-butoxycarbonyl)-dl-alanine | |
XIAO et al. | Synthesis and Characterization of Composite Nucleic Acids Containing 2‵, 5‵-Oligoriboadenylate Linked to Antisense DNA | |
SU977463A1 (ru) | Иммобилизованные на полимерной матрице @ и @ -амидные производные нуклеозид-51-ди или трифосфатов в качестве сорбентов дл афинной хроматографии и способ их получени | |
Lührmann et al. | Identification of the 30‐S Ribosomal Proteins at the Decoding Site by Affinity Labelling with a Reactive Oligonucleotide | |
Stender et al. | The Modification of DNA‐Dependent RNA Polymerase from Escherichia coli by an Alkylating Derivative of Rifamycin SV | |
EP0075262A2 (de) | Verfahren zur Herstellung von 5'-Ribonucleotiden | |
Berglund et al. | [18] ATP-and dATP-substituted agaroses and the purification of ribonucleotide reductases | |
JPS6350359B2 (ru) | ||
JP2003502013A (ja) | モルホリノ−ヌクレオチドの製造方法、並びに核酸配列の分析およびラベリングのためのその使用 | |
EP0721372B1 (de) | Nukleosidhaltiges sorbens für die affinitätschromatographie | |
Johnston et al. | Immunochemical analysis of the structure of 2', 5'-oligoadenylate | |
Spiegel | [25] Fluorescent gangliosides |