SU905281A1 - Способ хранени культур клеток животных и человека - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к клеточной биологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии дл  длительного переживани  и сохранени  in vHro клеток млекопитающих.

Известен способ хранени  культур животных и человека в поддерживающей среде. Поддерживающа  среда содержит 4О% человеческой сыворотки и 00% раствора Хенса. Перед помещением клеток в .поддерживающую среду их предва- рительно пассируют ll .

Способ характеризуетс  недостаточной длительностью переживани  культуры клеток животных и человека, обусловленной резким падением рН, что неблагопри тно вли ет на переживание клеток.

Цель изобретени  - увеличение длительности переживани  клеток.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в способе хранени  культур клеток животных и человека в поддерживающей среде, в качестве поддерживающей среды используют ультрафильтрат сывороточной

ростовой среды, содержащей компоненты с молекул рным весом до 14 тыс. дальтон .

Ультрафильтрацией свежей сьтороточ- ной ростовой среды удал ют компоненты сыворотки крови, имеющие молекул рный вес более 14 тыс, дальтон, которые стимулируют рост клеток. При этом сохран ютс  все компоненты сыворотки, которые необходимы дл  поддержани  .

10 жизнеспособности клеток. Этим достигаетс  наибольша  близость вещественных составов ростовой и поддерживающей сред.

В таблице приведены данные о про15 верке жизнеспособности клеток после хранени  с указанием процента живых клеток по сравнению с исходным количеством в предлагаемом и известном способах.

20

Пример. Ростовую питательную среду Игла, содержащую .10% сыворотки крови крупного рогатого скота, пропускают через стерильный мембранный фильтр с диаметром пор 20 нм, В результате получают ультрафильтрат с мол, весом компонентов до 1.4 тыс. Дальтон.

Клетки переживаемой культуры фиб- робластов ВНК-21 в количестве 150 тыс на 1 мл помещают в ростовую питатель- 1ую среду Игла с 10% сыворотки круп ного рогатого скота (общий объем 7,5мл Через 2 дн  ростовую среду мен ют на поддерживающую, в качестве которой используют ультрафильтрат ростовой среды и инкубируют при . При еже .недельной смене среды срок переживани  достигал 40 сут. Жизнеспособность клеток определ ют с помощью раствора трипанового синего, а также по интенсивности клеточного роста после консервации. Количество клеток подсч тывают с помощью камеры Гор ева.

Пример 2. Клетки первичной культуры, полученные трипсинизацией почечного эпители  эмбриона человека, в количестве ЗОО тыс. клеток на 1 мл

помещают в ростовую среду 199 с добавлением 1О%-ной сыворотки крупного рогатого скота (общий объем 7,5 мл). Через 2 дн  ростовую среду мен ют

на поддерживающую, в качестве которой используют ультрафильтрат ростовой среды с мол. весом компонентов до 14 тыс. дельтой и выдерживают при 37°С. Ультрафильтрат ростовой среды получают

способом, описанным в примере 1. Определение жизнеспособности клеток осуществл ют так же, как в примере 1. При еженедельной смене среды срок переживани  клеток культуры достиг 45 сут.

Использование предлагаемого способа позвол ет увеличить длительность переживани  культуры клеток животных и человека в 1,3 1,5 раза с сохранением большого процента жизнеспособных клеток, Крома того, способ  вл етс  простым, перед хранением не требует длительной предварительной подготовки культуры клеток.

ВНК-21

Первична  культура почечного эпители 

Claims (1)

1. эмбриона человека Формула изобретени  Способ хранени  культур клеток raiвотных и человека в поддерживающей среде, отличающийс  тем, что, с целью увеличени  длительности переживани  клеток, в качестве поддер швающей среды используют ультрафильт сывороточной ростовой ереды, содержа50

   50

   34 щей компоненты с молекул рным весом до 14 тыс. дальтон. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Авджапаридзе О. Г. и др. Культура ткани в вирусологических исследовани х . М., Изд. медицинской литературы , 1962, с. 101 - 102.