SU753897A1 - Штамм т-1,N464-продуцент глюкоамилазы, используемый дл осахаривани крахмалистого сырь - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, а именно к получению нового штамма с высокой активностью глюкоамилазы, и может быть использовано в спиртовой и крахмалопаточной промышленности.

В насто щее врем  дл  осахаривани  примен ют культуру плесневых грибов Aspergillus batatae, обладающую сравнительно невысокой глюкоамилазной активностью от 5 до 20 ед/мл к.ж., что не позвол ет интенсифицировать процесс спиртового производства 1}.

Наиболее близким к изобретению  вл етс  штамм Asperg i 1 1 us awamori 2.1

Известный штамм обладает невысокой активностью глюкоамилазы и длител1 ным сроком культивировани .

Целью изобретени   вл етс  получе-20 ние нового штамма со стойкими биохимическими свойствами, обладающего высокой способностью к образованию глюкоамилазы и позвол ющего интенсифицировать процесс гидролиза крахма- 25

ла.

Полученный штамм Aspergillus awamo rl Т-1 W 464-продуцент глюкоамилазы: имеет следующие морфологические, физиологические характеристики. 30

На сусло-агаре образует мицелий размером 2,0-4,0 х 5,0-20,0 ммк. Мицелий ветвистый. Форма клеток выт нута , иногда вздута . Конидии круглые, без шипов.

Жидкие питательные среды

Солодовое сусло. Через 5-7 дней при 40°С образуетс  толста  складчата  пленка темно-коричневого цвета. Без взбалтывани  среда прозрачна . Запах типичный грибной.

Видоизмененна  среда Чапека с крахмалом и выт жкой из солодовых ростков . Пленка образуетс  на 6-8 сутки при 40®С. Пленка складчата , толста , коричневого цвета. Ёеи взбалтывани  среда прозрачна .

Твердые среды

На сусло-агаре посев штрихом рост хороший, поверхность бела , плотна . На 2 сутки роста поверхность становитс  коричневатой, а на 5. сутки - темно-коричневой. Вс  поверхность культуры очень складчата , край штриха волнистый.

На солодовом агаре

Посев уколом - рост на поверхности обильный. По уколу - очень слабмй.

Гигантска  колони  на среде Чапека с различными источниками углерода на 5 сутки роста имеет следующее строение:

ка глюкозе - колони  кругла , складчата  , центр светло-коричневый, приподн тый. Обильное конидиеобразование в центре. Размер колонии 20- 21 мм. В центре колонии с обратной стороны образуетс  пигмент коричневокрасного оттенка;

на мальтозе - характеристика колонии аналогична предыду1цей. Размер колонии 23-25 мм;

на сахарозе - колони  кругла , складчата , образование конидий слабее , чем на глюкозе и мальтозе. Центр колонии выпуклый, желтовато-коричневого цвета. Пигмент образует слабо. Размер колонии 17-19 мм;

на крахмале - гигантска  колони  пушиста , не образует складок, плоска . Образование конидий в центре. Центральна  часть колонии темно-оливкового цвета, с обратной стороны колонии образуетс  пигмент с коричневато-бордовым оттенком. Размер колонии 24-25 мм. Вокруг колонии наблюдаетс  зона гидролиза крахмала.

Отношение к источникам углерода Культура гидролизует крахмал, декстрины , паннозу, изомальтозу,- мальтозу с .образованием глюкозы. Потребл ет без выделени  газа сахарозу, глюкозу, маннит, сорбит. Слабо растет на лактозе и ксилозе.

Отношение к источникам азота Хорошо ассимилирует аммонийные соли неорганических кислот. Потребл ет пептон, казеин, гидролизат казеина , аминокислоты. Пептонизирует молоко .

Температурный оптимум роста 40- 42°С, рН 5,5-7,5, аэроб. Не обладает токсическими свойствами.

Штамм Asperillus awamori Т-1, № 464-продуцент глюкоамилазы получен в результате 4-ступенчатой селекции. В результате-3-кратной обработки конидий Aspergillus awamori на первой ступени УФ-лучами и этиленимином(ЭИ) на второй - УФ-лучами и ЭЙ; на третьей - высокой температурой 100°С получен активный мутант - продуцент глюкоамилазы.

На четвертом этапе применен метод поддерживающей селекции с целью выбора и сохранени  наиболее активного продуцента - Aspergillus awamori Т-1, № 464.

Основное отличие нового штамма состоит в том, что его продуцирующа  способность в 1,5 раза выше, чем у исходного штамма. Штамм обладает повышенной в 1,5-2,0 раза активностью глюкоамилазы -и  вл етс  термостабильным . .

Пример использовани  предлагаемог

Дл  глубинного культивировани  штам1 а примен ют питательную среду следующего состава;Растворимый крахмал 6,0% NaHO0,91%

г KCI 0,05%

,05%

KHjPO,0,1%

FeS04 .0,001%

Солодовые ростки 1,0% Выращивание провод т при 40°С в колбах на качалке с 180-210 об/мин. Максимальное накопление фермента наблюдаетс  на третьи сутки и составл ет 45-50 ед/мл, т.е. выше на 40-50% по сравнению с исходной культурой. 5 Дл  осахаривани  используют выраш ,енную культуру из расчета б ед ГлА на 1 г крахмала сырь .

Активность глюкоамилазы определ ли по методу определени  ГлС(ГОСТ 202640 64, 4-74, с. 7) с использованием фёрроцианида кали , основанному на определении глюкозы, образующейс  при гидролизе растворимого крахмала ферментом глюкоамилазой. Активность фермента выражали в микромол х глюкозы,, освобожденной за 1 мин при 50°С.

Штамм сохран ет высокую активность глюкоамилазы более двух лет, т. е.  вл етс  стабильным по отношению к Q синтезу фермента.

Таким образом, штамм Aspergillus awamori Т-1, 464 представл ет собой культуру со стойкими биохимическими и морфологическими свойствами, про вл ющимис  в повышенной способности

к образованию глюкоамилазы. Активность глюкоамилазы нового штамма при выращивании его на видоизмененной среде Чапека с солодовыми ростками на 4050% выше активности исходного штамма 0 и составл ет 50-52 ед/мл.

Claims (2)

1. Формула изобретени 

   Штамм Aspergi.llus awamori Т-1, 5 № 464-продуцент глюкоамилазы, используемый дл  осахаривани  крахмалистого, сырь , хранитс  в коллекции музе  чистых культур Всесоюзного научноисследовательского института продукQ тов брожени .

   Морфологические признаки

   На сусло-агаре образует мицелий размером клеток 2,0-4,0 х 5,0-20,0 ммк. Мицелий ветвистый. Форма клеток выт нута , иногда вздута . Конидии круглые , без шипов.

   Физиологические признаки

   Жидкие питательные среды

   Солодовое сусло. Через 5-7 дней при 40°С образуетс  толста  складчата  пленка темно-коричневого цвета. Без взбалтывани  среда прозрачна . Запах типичный грибной.

   Видоизмененна  среда Чапека с крахмалом и выт жкой из солодовых 5 ростков. Пленка образуетс  на 6-8 сут кипри 40°С. Пленка складчата , толс та , коричневого цвета. Без вэбалты вани  среда прозрачна . Твердые среды На сусло-агаре посев штрихом - рост хороший, поверхность бела , пло на . На 2 сутки роста поверхность ст новитс  коричневатой, а на 5 сутки - темно-коричневой. Вс  поверхность культуры очень складчата , край штри волнистый. На солодовом агаре Посев уколом - рост на поверхност обильный. По уколу - очень слабый. Гигантска  колони  на среде Чапека с различными источниками углерода на 5 сутки роста имеет следующее строение: на глюкозе - колони  кругла , складчата ,центр светло-коричневый, приподн тый. Сильное конидиеобразование в центре.Размер колонии 20-21 мм В центре колонии с обЕ атной стороны образуетс  пигмзнт коричнево-красного оттенка; на мальтозе - характеристика д олонии аналогична предыдущей. Размер колонии 23-25 мм; на сахарозе - колони  кругла , складчата , образование конидий слабее, чем на глюкозе и мальтозе. Центр колонии выпуклый, желтовато-коричневого цвета. Пигмент образует слабо. Размер колонии 17 19 мм; на крахмале - гигантска  колони  пушиста , не образует складок, плоска . Образование конидий в центре. Центральна  часть колонии темно-оливкового цвета, с обратной стороны колонии образуетс  пигмент с коричневато-бордовым оттенком. Размер колонии 24-25 мм. Вокруг колонии наблюдаетс  зона гидролиза крахмала,. Отношение к источникам углерода Культура гидролизует крахмал декстрины , паннозу, изомальтозу, мальтозу с образованием глюкозы. Потребл ет без выделени  газа сахарозу, глюкозу, маннит, сорбит. Слабо растет на лактозе и ксилозе. Отношение к источникам азота: хорошо ассимилирует аммонийные соли неорганических кислот. Потребл ет пептон, казеин, гидролизат казеина, аминокислоты. Пептонизирует молоко. Температурный оптимум роста 40 - 420с, рН 5,5-7,5 аэроб. Не обладает токсическими свойствами. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1.Патент СССР 355217, кл. С 12 К 1/02, 1972.
2. 2.Авторское свидетельство СССР 488858, кл. С 12 К 3/00, 1974 прототип).