Вариант 1. Вреакторе с машалкой готов т 5-20%--ную, преимущественно 15%-ную, водную суспензию пшеничных отрубей.. При посто нном перемешивании гидролизуют ее собственными ферментами при в течение 18- 24 ч. Отдел ют экстракт от шелухи.. Вариант 2. Готов т 15-20% ную водную суспензию пшеничных отрубей, добавл ют 0,5% (от объема суспензии) ферментного препарата протосубтилина ГЗк и провод т гидролиз в течение 6-12 ч при 45-48° С и рН 7,2-7,4 (при необходимости регулируют рН добавлением ;аммиачной воды) . Экстракт отдел ют от шелухи„ Вариант 3. 5-15%-ную водную суспе зию отрубей подвергают термической обработке при 0,5-1,0 ати в течение 40-60 мин и отдел ют экстракт от шелухи , Вариант 4. Готов т 20%-ну1о суспен зию отрубей в 3%-ной сол ной кислоте и гидролизуют при 1,5 ати в течение 2 ч и отдел ют экстракт от шелухи. Полученный экстракт отрубей вл етс богатым источником веществ,спо . собствующих интенсификации биосинте|3а и увеличению выхода продуктов. Экстракт отрубей содержит (от.содержани сухих веществ) is редуцирующие вещества 11-78, азот 11-17, калий 3,6, ФОСФОР 0,7, аминокислоты 0,6-1,7, тиамин 400-1500 мкг%, биотин 20-50мкг%. Сущность способа заключаетс в следующем. , готов т жидкую питательную среду, в состав которой входит- источник углерода , например меласса или сахара, источник азота, например сернокислый или мочевина, и в качест , ве биостимул тора экстракт от рубей, полученный по одному из вариантов. Среду перемешивают, устанавливают рН (6,8-6,9 и стерилизуют,. После стерили зации среду направл ют в стерильный, ферментатор. Культивирование продуцентов L-лизина и L-глутаминовой кис лбты из рода Brevibacterium и Micrococcus на полученной среде ведут известным способом. П ример1.К40г отрубей .до 270 млдобавл ют водопроводную воду, перемешивают при в течение 24 ч, фильтруют, перенос т экстракт В ферментатор (рабоча емкость 2 л) добавл ют 600 г мелассы (50% РВ) и 70 г сернокислого аммони , доЪавотют водопроводную воду до 2 л и перемешивают, Добавл ют 20 мл 4 н NaOH до рН 6,9 и 0,6 г пеногасител подсолнечного масла, стерилизуют при 1,2 эти- в течение 1 ч и охлаждают до 30°С. 200 мл 24-Ч посевной культуры Brevibacterium flavnm RC-11 предварительно выращенной на качалке «а жидкой питательной среде аналогич ного состава, вносит в среду, культи вируют в аэробных услови х поддержива давление О 0,1 атм в течение первых 24 ч и 0,05 атм в течение последующих часов, рН 7,3-7,8 и температуру 31-33°С. Культивирование продолжают до практически полного использовани редуцирующих веществ. После культивировани культуральна жидкость содержит: L-лизин монохлоргидрат 55,0 г/л, биомасса 17,0 г/л, остаточные сахара 0,5%, сухие вещества 15%. Пример2. К 20 г отрубей до 100 лл добавл ют .водопроводную воду и 0,5 г ферментного препарата протосубтилина ГЗх, перемешивают 6 ч при , добавл ют 4 н. NaOHi до рН 7,3 фильтруют, перенос т экстракт в ферментатор , добавл ют 600 г мелассы (50% РВ), 70 г сернокислого аммони и водопроводную воду до 2 л, В качестве .пеногасител используют подсолнечное масло. Устанавливают рН 6,9 добавлением 4 н. NaQH.стерилизуют при 1,2 ати в течение 1 ч и охлаждают до 30° С. Затем провод т опыт, как в примере 1. Культуральна жидкость содержит: L-лизин.монохлоргидрат 48,2 г/л, биомасса 16,7 г/л, остаточные сахара 0,7%, сухие вещества 18,0%. Примерз. Суспензию 60 г отрубей в 400 мл водопроводной воды подвергают термической обработке при 0,5 ати в течение 60 мин, фильтруют, охлаждают до 30°С, перенос т- в фермеь татор, добавл ют 600 г мелассы, 70 г сернокислого аммони , воды до 2 л и 0,6 г подсолнечного масла и провод т опыт аналогично примеру 1. Культуральна жидкость содержит: L-лизин монохлоргидрат 53,7 г/л, биомасса 20,4 г/л, остаточные сахара 0,7%, сухие вещества 20,3%. П р и м е р 4, 40 г отрубей гидролизуют в 3%-ной сол ной кислоте (до 200 мл) при 1,5 ати в,течение 2 ч, фильтруют и нейтрализуют NHji ОН до рН 7,0. В ферментаторе к экстракту добавл ют 600 г мелассы, 70 г сернокислого аммони , 0,6 г пеногасител и воду до 2 л. Провод т опыт аналогично- примеру 1, Культуральна жидкость содержит : L-лизин 48,7 г/л, биомасса 18,3 г/л, остаточные сахара 0,7%, сушие вещества 19,3%. Пример 5. Получают экстракт отрубей как в примере 1, 20 мл его перенос т в ферментатор (рабоча емкость 2 л) и добавл ют, г: сахароза 200, , К,НРО)2, MgSO 7Н. О 1, MnSO 4Н„О 0,2, вода до 1,9 л. Пеногаситель синтетический. Среду стерилизуют при 0,8 ати в течение 30 мин о 30 г мочевины в виде 40%-ного водного раствора стерилизуют отдельно и добавл ют к среде после стерилизации . 100 г культуры MiQprococcus glu- tamicus 541 Р, предварительно выращенной на аналогичной среде, внос т в среду и культивируют при рН 6,8 7,8, температуре 30il°C и аэрации срецы{давление 0 20-40% насыщени ).Культивирование провод т до практически полного использовани сахара. После 68 ч культивировани культурашьна жидкость содержит s L-.глутаминова кислота 47,5 г/л, биомасса 9,2 г/л, сахар 0,5%.Option 1. A 5–20%, mainly 15%, aqueous suspension of wheat bran is prepared in a mashorka reactor. With constant stirring, it is hydrolyzed with its own enzymes for 18-24 hours. The extract is separated from the husk. Option 2. Prepare a 15-20% aqueous suspension of wheat bran, add 0.5% (by volume of the suspension) of the enzyme preparation of protosubtilin GZK and carry out hydrolysis for 6-12 hours at 45-48 ° C and pH 7 , 2-7.4 (if necessary, adjust the pH by addition; ammonia water). The extract is separated from the husk. Option 3. A 5-15% aqueous suspension of bran is heat treated at 0.5-1.0 atm for 40-60 minutes and the extract is separated from the husk, Option 4. Prepare 20 % suspension of bran in 3% hydrochloric acid and hydrolyzed at 1.5 ata for 2 h and the extract is separated from the husk. The obtained bran extract is a rich source of substances, spo. own intensification of biosynthesis | 3a and increase in the yield of products. The bran extract contains (from the dry matter content) is reducing substances 11-78, nitrogen 11-17, potassium 3.6, phosphorus 0.7, amino acids 0.6-1.7, thiamine 400-1500 µg%, biotin 20 -50µg% The essence of the method is as follows. , a liquid nutrient medium is prepared, which includes a source of carbon, for example molasses or sugar, a source of nitrogen, for example, sulphate or urea, and an extract from rubi, obtained according to one of the options, as a biostimulant. The medium is stirred, the pH is adjusted (6.8-6.9 and sterilized. After sterilization, the medium is sent to a sterile fermenter. The cultivation of the producers of L-lysine and L-glutamic acid from the genus Brevibacterium and Micrococcus on the resulting medium is carried out in a known manner Example: K40g bran. Up to 270 ml of tap water is added, stirred for 24 hours, filtered, the extract is transferred. To the fermenter (2 l working capacity) 600 g of molasses (50% PB) and 70 g of ammonium sulphate are added. Add tap water to 2 liters and mix. Add 20 ml of 4 N NaOH to r 6.9 and 0.6 g of sunflower oil defoaming agent, sterilized at 1.2 of these for 1 h and cooled to 30 ° C. 200 ml of 24-H sowing culture of Brevibacterium flavnm RC-11 pre-grown on a rocking chair a medium of a similar composition, contributes to the medium, the stump is violated under aerobic conditions, maintaining a pressure of 0.1 atm for the first 24 hours and 0.05 atm for the next hours, pH 7.3-7.8 and temperature 31-33 ° s Cultivation is continued until the use of reducing substances is almost complete. After cultivation, the culture fluid contains: L-lysine monochlorohydrate 55.0 g / l, biomass 17.0 g / l, residual sugars 0.5%, solids 15%. Example2. To 20 g of bran to 100 l is added. Tap water and 0.5 g of the enzyme preparation of protosubtilin GZh, stirred for 6 h at 4 g. NaOHi is filtered to pH 7.3, the extract is transferred to a fermenter, 600 g of molasses (50% PB), 70 g of ammonium sulphate and tap water up to 2 liters are added. Sunflower oil is used as antifoam. The pH is adjusted to 6.9 by the addition of 4 n. NaQH is sterilized at 1.2 ati for 1 h and cooled to 30 ° C. Then the experiment is carried out as in example 1. The culture fluid contains: L-lysine monohydrochloride 48.2 g / l, biomass 16.7 g / l, residual sugar 0.7%, dry substances 18.0%. Froze A suspension of 60 g of bran in 400 ml of tap water is subjected to heat treatment at 0.5 MPa for 60 minutes, filtered, cooled to 30 ° C, transferred to a farmer, 600 g of molasses, 70 g of ammonium sulphate, water are added 2 l and 0.6 g of sunflower oil and carried out the experiment as in example 1. The culture fluid contains: L-lysine monochlorohydrate 53.7 g / l, biomass 20.4 g / l, residual sugars 0.7%, dry substances 20 3%. Example 4, 40 g of bran is hydrolyzed in 3% hydrochloric acid (up to 200 ml) at 1.5 atm. For 2 hours, filtered and the NHji OH is neutralized to a pH of 7.0. In the fermenter, 600 g of molasses, 70 g of ammonium sulphate, 0.6 g of antifoam agent and water up to 2 liters are added to the extract. The experiment was carried out in a similar way to Example 1, The culture fluid contains: L-lysine 48.7 g / l, biomass 18.3 g / l, residual sugars 0.7%, and total substances 19.3%. Example 5. A bran extract is obtained as in Example 1, 20 ml of it is transferred to a fermenter (2 l working capacity) and g, sucrose 200, K, HPO) 2, MgSO 7H is added. O 1, MnSO 4H “O 0.2, water up to 1.9 l. Synthetic defoamer. The medium is sterilized at 0.8 abi for 30 minutes. About 30 g of urea in the form of a 40% aqueous solution is sterilized separately and added to the medium after sterilization. 100 g of MiQprococcus glutamicus 541 P culture, previously grown on the same medium, are introduced into the medium and cultured at pH 6.8 7.8, temperature 30il ° C and aeration of scrubs {pressure 0 20-40% of saturation). Cultivation wire t until almost complete use of sugar. After 68 hours cultivation, the cultured liquid contains s L-glutamic acid 47.5 g / l, biomass 9.2 g / l, sugar 0.5%.
Предложенный способ- приготовлени питательной среды дл культивировани продуцентов L-лизина- и L-глутаминовой кислоты позвол ет получить стерильные питательные среды при обычных режимах -стерилизации, способствует интенсификации массообмена по кислороду и тем самым ускорению .биосинтеза (продолжительность биосинтеза сокращаетс на 20%), вследствие чего увеличиваетс коэффициент использовани аппаратуры, а также увеличению выхода целевых продуктов (выход L-лизина увеличиваетс на 29-68%).The proposed method of preparing a nutrient medium for cultivating the producers of L-lysine and L-glutamic acid makes it possible to obtain sterile nutrient mediums under conventional sterilization regimes, contributes to the intensification of oxygen mass transfer and thereby accelerating the biosynthesis (the biosynthesis duration is reduced by 20%) as a result, the utilization rate of the equipment increases, as well as the increase in the yield of the target products (the yield of L-lysine increases by 29-68%).