SU720011A1 - Способ получени коэнзима а из дрожжей - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЭ.ЕНЗИМА А ИЗ ДРОЖЖЕП

1

Изобретение относитс  к области микробиологии и касаетс  способов получени  коэнзима А.

Известен способ получени  коэнзима А из дрожжей путем их суспендировани  с последующим выделением целевого продукта гор чей экстракцией, отделением экстракта и его очисткой 11 j .

Однако известный способ не обеспечивает получение высокоактивного коэнзима А. Активность коэнзима А составл ет 30000 ед/кг дрожжей.

Целью изобретени   вл етс  повышение активности коэнзима А.

Эта цель достигаетс  тем, что дрожжи суспендируют в растворе, содержащем KHj РО , К ПРО и MgSO, 7Нг затем суспензию дезинтегрируют ультразвуком, к дезинтеграту добавл ют раствор, содержащий 1,42 ,75 вес.% смеси аденозин-5 -трифосфата (АТФ), пантотената кальци  и циотеина при их соотношении 1:(0,7-1 ,7) : (0,3-0,4) и 5,5-6,5 вес.% глюкозы, далее полученную суспензию дезинтеграта инкубируют и экстрагируют целевой продукт.

Способ иллюстрируе тс  след «огцигда примерами.

Пример. В качестве исходного сырь  используют биомассу хлебопекарных дрожжей Sacc.haromyces cerevi- siae. Активность коэнзима 18500 ед/кг биомассы дрожжей.

20 г данной биомассы суспендиру т в 100 мл водного раствора, содержащего 2,7 г KHgPO, 3,5 г KHPQj и 0,3 г MgSO 7Н2О.

0

Полученную суспензию дезинтегрируют на ультразвуковом дезинтеграторе при-силе тока 0,4 А, частоте ультразвуковой волны 20 кгц, рН 6,5-7,0 и температуре +5 ±2°С в

5 течение 15- мин получают 110 мл дезинтеграта , содержащего клеточные оболочки , органеллы, отдельные клетки.

К дезинтеграту добавл ют 6,5 г глюкозы, 1,5 г пантотената кальци ,

0 0,85 г АТФ, 0,4 г цистеина. Реакционную смесь инкубируют анаэробно при 37+2°С и рН 6,5-7,0 24 час, после чего коэнзим А экстрагируют, подогрева  реакционную смесь до

5 95+2°С ивыдерживают при этой температуре 5 мин.

Реакционную смесь раздел ют центрифугированием .

Активность коэнзима А составл ет 172000 ед/кг дрожжей.

0

Пример 2 в качестве исходыого сырь  примен ют спиртовые Saccharomyces cerevisiae. Активнрсть коэнз ма А 27000 ед/кг биомассы дрожжей.

20 г данной биомассы суспендируют в 100 мл водного раствора, содержащего 2,7 г , 3,5 г KgHPO H 0,3 г MgSO4-7H о.

Полученную суспензию дезинтегрируют на ультразвуковом дезинтеграторе MSE--50G при силе тока 0.4 А, частоте ультразвуковой волны 20 кГц# рН 6,5-7,0 и температуре +5 в течение 5 мин. Получают 100 мл де зинтеграта, содержащего клеточные оболочки, органеллы, отдельные клетки.

К дезинтегратору добавл ют 6.г глюкозы, 1,02 пантотената кальци , г АТФ и 0,3 цистеина. Реакционную смесь инкубируют анаэробно при 37х2°С и рН ,0 24 час, пдсле чего коэнзим А экстрагируют подогрева  реакционную смесь до 95 ± 2°С, и выдерживают при этой температуре 5 мин,

Реакционную смесь раздел ют центрифугированием .

Активность коэнзима Л составл ет 184000 ед/кг дрожжей.

Использование изобретени  позволит получить высокоактивный коэнзим А,

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  коэнзима А из дрожжей путем их суспендировани  с пocлeдi/ющим выделением целевого

   продукта гор чей экстракцией, отделением экстракта и его очисткой, отличающийс  тем, что, с целью повышени  активностн коэнзима А, дрожжи суспендируют Б растворе , содержащем КН Р(,

   МдЗОд-7Н2 О, затем суспензию дезинтегрируют ультразвуком,к дезинтегра-ту добавл ют раствор, содержащий 1,7 4-2 р 75 вес, смеси аденозин-5 Трифосфата, пантотената кальци 

   и дистеина при их соотношении 1; (0,7-1,7): (0,3-0,4) и 5,56 ,5 вес.% глюкозы,- далее полученнук суспензию дезинтеграта инкубируют и экстрагируют целевой продукт.

   Источники информации,

   прин тые БО внимание при. экспертизе

   1„ Methods in Enzymol, 1957, vol.Ill, p,907, Acad, Press N.Y,