SU588905A3 - Способ получени липосом - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМ

фнльные группы X которого направлены внутрь глобул, которые заполнены водной жидкостью; гидрофобные группы У наоборот направлены к внешней части глобул, котора  состоит из неводной фазы.

Втора  стади  способа состоит в образовании чистых липосом. Это образование происходит потому, что, проход  через мономолекул рный слой соединени  формулы X -У, который находитс  на поверхности раздела фаз между слоем верхней неводной жидкости и слоем нижней водной жидкости, каждый предшественник липосом (глобула) вовлекает в себЯчасть этого сло , который объедин етс  с мономолекул рным слоем соединени  Х-У, который его ограничивает , образу  биомолекул рныйслой этого соединени , характеризуюший линосомы.

В качестве соединени  формулы Х-У используют , например, соединение, в котором гидрофильна  группа X представл ет собой фосфатную , карбоксильную, сульфатную, аминную, гидроксильную или холинную группу, а гидрофобна  группа У представл ет собой насыщенную или ненасыщенную алифатическую углеводородную группу, например алкил или алкилен, алифатическую углеводородную, замещенную по крайней мере одним ароматическим или циклоалифатическим радикалом группу.

Предпочтительно в качестве соединени  формулы Х-У используют фосфолипид или вещество , близкое фосфолипидам, а именно лецитин , фосфатидилэтаноламин, лизолецитин, лизофосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозит, сфингамиэлин. кардиолинин , фоефолипоидную кислоту и цереброзид.

В качестве соединени  формулы Х-У можно также использовать смесь, по крайней мере одного фосфолипида и по крайней мере одного липида, принадлежащего к друго.му классу, чем фосфолипид, например стеариламин, дицетилфосфат , холестерин и токоферол.

В качестве жидкости, слаборастворимой или нерастворимой в воде с меньшей плотностью, чем у воды используют бензол, галоид- или алкилпроизводные бензола, простой эфир алкиленоксида . алифатический кетон, алифатический альдегид, сложный алифатический 1)ир алифатический углеводород или циклоалифатический углеводород,или смесь нескольких соединений , имеющую плотность ниже, чем у воды.

Предпочтительно использовать в качестве водной жидкости раствор по крайней мере одного биологически активного вещества, а именно энзима, лекарства типа антибиотика.

В качестве второй водной жидкости используют чистую воду или любую другую подход щую водную жидкость.

Предпочтительно используют водный раствор .хлористого натри . Можно использовать водный раствор хлористого натри , так называемый физиологический раствор, и.меющий концентрацию 0,15 мол  на 1 л (0,9 вес./о) с целью непосредственного получени  во врем  второй стадии сюсоба дисперсии липосом в среде дл  инъекции в человеческий организм.

Выделить липосомы из второй водной жидкости .можно любым из известных способов, например гель-хро.матографией.

Пример 1. Заключают в капсулы водный раствор амилоглюкозидазы, содержащий 10 мг амилоглюкозы в 1 мл раствора, в водном растворе хлористого натри  концентрации 0,15 моль/л.

Сначала добавл ют 54 мг лецитина и 0,1 .мл указанного водного раствора амилоглюкозидозы к 3 мл дибутилового эфира и подвергают полученную таким образом гетерогенную с.месь обработке ультразвуком в течение 2 мин, поддержива  те.мпературу ниже 30° С с помощью охлаждающей бани.

Получают прозрачную голеогенную жидкость , котора  имеет синеватый отблеск. Осаждают слой этой жидкости в пробирке дл  центрифугировани  на слой от 1,5 мл водного раствора хлористого натри  концентрации до 0,15 моль/л. Получают двухфазную смесь, состо щую из нижнего сло  водной фазы (раствор хлористого натри ) и верхнего сло  органической фазы, полученной обработкой ультразвуком из смеси дибутилового эфира, лецитина и раствора а.чилоглюкозидозы.

.Подвергают эту двухфазную с.месь центрифугированию со скоростью 30 000 об/мин в течение 30 .мин, после чего выдел ют верхний слой (органическа  фаза) и подвергают нижний слой (водна  фаза) новому центрифугированию со скоростью 30000 об/мин в течение 30 мин. Получают проз) жидкость, слегка окрашенную в син(;| iju-r «Налет незначительного объема, образованную недиспергированным липидо.м (лецитином), который удал ют . Эта прозрачна  жидкость представл ет собой суспензию липосо.м, и.меющих коллоидные размеры, содержащую в себе водный раствор амилоглюкозидазы в 0,5 М водном растворе хлористого натри , а также - небольшое количество а.милоглюкозидазы, не заключенной в

капсулы.

В зависимости от при.менени  .можно исно .пьзовать эту суспензию как она есть, или после удалени  не заключенной в капсулы амилоглюкозидазы , хроматографией на геле (напри .мер с по.мощью гел  сефарозы).

Пример 2. Опыт провод т по примеру 1, но используют в качестве раствора, заключае.могр в капсулы, 0,05 .мл водного буферного раствора (фосфатный буфер 10 ммолей рН 7,2), содержащего 100 .мг/мл пенициламина, растворенного в 0,15 мл водного раствора хлористого натри  и используют дл  образовани  органической фазы, подвергаемой обработке ультразвуком , 27 мг лецитина и смесь 2,4 мл дибутилового эфира и 0,6 мл .хлорофор.ма.

Пример 3. Опыт провод т по при.меру 1, но используют в качестве раствора, заключаемого в капсулы, 0,1 мл раствора имипрамина концентрации 300 мг/мл в 0,15 М водно.м растворе хлористого натри  и примен ют дл  образовани  органической фазы, подвергае.мой обработке ультразвуком, смесь 25 мг лецитина и 40 мг холестерина и 3 мл дибутилового эфира.

Пример 4. Опыт провод т по примеру 1, но используют в качестве раствора, заключаемого в капсулы, 0,05 мл раствора динатрийфосфатбента-метазона с концентрацией 150 мг/мл в 0,15 М водном растворе хлористого натри  и примен ют дл  образовани  органической фазы, подвергаемой обработке ультразвуком, смесь 15 мг лецитина и 12 мг фосфаттидилэтаноламина ,и смесь 2,5 мл дибутилового эфира и 0,5 мл хлороформа.

При осуществлении предлагаемого способа становитс  возможным устранить операции выделени  очистки и повторной подгонки концентрации жидкости, заключаемой в капсулы, позвол   тем самым использовать способ в промышленном масштабе.

Claims (1)

1. J. BiochemistfY Society 2/61, 1974, р 1275.